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CN101237873A - 用于治疗非小细胞肺癌的星形孢菌素衍生物 - Google Patents

用于治疗非小细胞肺癌的星形孢菌素衍生物 Download PDF

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CN101237873A
CN101237873A CNA2006800292465A CN200680029246A CN101237873A CN 101237873 A CN101237873 A CN 101237873A CN A2006800292465 A CNA2006800292465 A CN A2006800292465A CN 200680029246 A CN200680029246 A CN 200680029246A CN 101237873 A CN101237873 A CN 101237873A
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lung cancer
small cell
cell lung
cancer
bak
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M·舒勒尔
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Johannes Gutenberg Universitaet Mainz
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Johannes Gutenberg Universitaet Mainz
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Abstract

本发明涉及用FLT－3激酶抑制剂如PKC412治疗非小细胞肺癌的方法。本发明还涉及FLT－3激酶抑制剂和线粒体外膜透化作用的活化剂如BAK的活化剂的药物组合。本发明还涉及线粒体外膜透化作用的活化剂和FLT－3激酶抑制剂的药物组合用于治疗非小细胞肺癌的用途，以及此种药物组合物用于制备治疗非小细胞肺癌的药物的用途。

Description

用于治疗非小细胞肺癌的星形孢菌素衍生物
介绍
在过去的几十年中对调节存活、遗传稳定性、代谢活性和增殖的细胞信号转导途径的分子理解极大地增加。因此，在临床前癌模型和肿瘤样本中进行仔细分析导致鉴定到在恶性转化和癌发展期间作为起作用的或甚至是起因因素的这些途径的特定失调(1)。针对这个背景，人们致力于研发调整的针对特定靶的将癌细胞与非恶性细胞区分开的疗法。在BCR-ABL-阳性白血病和胃肠基质肿瘤中激酶抑制剂伊马替尼(imatinib)这一小分子药物的成功的临床应用令人难忘地对此种观念提供了原理上的证实(2)。但是，对未经选择的患者群体，针对显然不太必需的信号转导途径的药学上的抑制剂仅显示极小的临床活性。而且，将细胞毒性药与非抗体抑制剂联用至今为止在肺癌或结肠直肠癌中还未产生改善的临床结果(3-6)。
基于这些观察，我们认为由药学上的激酶抑制剂诱导的癌细胞死亡确实通过不同于那些由标准的细胞毒性抗癌药引起的分子途径发挥作用。作为选择，这两种途径能在信号转导中的共同步骤处汇合，然后这能构成用于突破抗药性的策略性靶。
对患有进展性非小细胞肺癌(NSCLC)的患者进行细胞毒性治疗仅具有中等的临床活性。近年来，表皮生长因子受体信号传导的抑制剂显示在NSCLC患者亚组中有效，并且调节其它的信号传导途径具有明显的前景。需要当前不被现有的抗癌药靶向的靶向分子途径的癌治疗法。
发明概述
我们研究了在NSCLC细胞中蛋白激酶C(PKC)特异的抑制剂星形孢菌素和PKC412诱导的凋亡。令人感兴趣的是，我们发现抗细胞毒性抗癌药的细胞系也保护细胞免受PKC特异的抑制剂的作用。将PKC抑制剂与细胞毒性剂联用产生不同的结果，如增加或降低的细胞毒性。相反，通过条件性表达BAK靶向凋亡的线粒体途径可靠地使抗药的NSCLC对PKC特异的抑制剂敏感。总之，将治疗性靶向BCL-2蛋白质家族与PKC特异的抑制剂如PKC412联合是在治疗癌中提高激酶抑制剂功效的有前景的策略。
附图简述
图1A-1B为显示用细胞毒性抗癌药和PKC特异的抑制剂体外处理NSCLC细胞系的相似抗性模式的图。
图2A-2E为显示将细胞毒性抗癌药和PKC特异的抑制剂联合体外没有导致预期的协同细胞毒性的图。
图3A-3D为显示对PKC特异的抑制剂具抗性的NSCLC细胞系表现出线粒体细胞色素c的延迟释放、维持Δψm、以及不活化胱天蛋白酶的图和照片。
图4A-4D为显示条件性表达BAK使抗药的NSCLC细胞系对凋亡敏感的照片和图。
图5A-5D为显示靶向线粒体BAK使抗药的NSCLC细胞系对PKC412诱导的凋亡敏感的图。
详细描述
在过去的几十年中对调节存活、遗传稳定性、代谢活性和增殖的细胞信号转导途径的分子理解极大地增加。因此，在临床前癌模型和肿瘤样本中进行仔细分析导致鉴定到在恶性转化和癌发展期间作为起作用的或甚至是起因因素的这些途径的特定失调(1)。针对这个背景，人们致力于研发调整的针对特定靶的将癌细胞与非恶性细胞区分开的疗法。
BCL2癌基因(OMIM 151430)在多种条件下作为有效的凋亡抑制物发挥作用。Bcl-2拮抗杀伤因子-1(“BAK1”OMIM 600516)蛋白为Bcl-2同系物，发现其拮抗Bcl-2，促进细胞死亡并抵消由Bcl-2提供的免于凋亡的保护。过量表达BAK诱导去血清培养的成纤维细胞的快速和广泛的凋亡，提示BAK直接参与激活细胞死亡机制。BAK主要增强在合适刺激物刺激后的凋亡性细胞死亡。因此，BAK调节物用于调节凋亡信号转导途径。在BCR-ABL-阳性白血病和胃肠基质肿瘤中激酶抑制剂伊马替尼这一小分子药物的成功的临床应用令人难忘地对此种观念提供了原理上的证实(2)。
但是，对未经选择的患者群体，针对明显不太必需的信号转导途径的药学上的抑制剂仅显示极小的临床活性。而且，将细胞毒性药与非抗体抑制剂联用至今为止在肺癌或结肠直肠癌还未产生改善的临床结果(3-6)。基于这些观察，我们认为由药学上的激酶抑制剂诱导的癌细胞死亡确实通过不同于那些由标准的细胞毒性抗癌药引起的分子途径发挥作用。作为选择，这两种途径能在信号转导中的共同步骤处汇合，然后这能形成用于突破抗药性的策略性靶。
为此目的，我们比较了一组充分表征的NSCLC细胞系对PKC特异的抑制剂星形孢菌素(STS)、其临床应用的衍生物N-苯甲酰星形孢菌素(PKC412，Novartis Pharma)、和常规的细胞毒性抗癌药诱导的细胞死亡的敏感性。基于PKC作为认为是对肿瘤生长和存活至关重要的多个信号转导途径的重要介质而起作用，选择PKC抑制的模型(7，8)。尽管这种潜在的宽的治疗谱，我们发现PKC特异的抑制剂不能诱导对标准的细胞毒性抗癌药也具抗性的NSCLC细胞凋亡。分子解剖揭示在BCL-2家族蛋白质水平的功能缺陷精密地对那些NSCLC中的凋亡抗性起作用。治疗性靶向凋亡信号转导中的线粒体步骤能避免对PKC抑制剂和细胞毒性药的交叉抗性。
在癌发生和肿瘤发展期间，癌细胞获得了多种在肿瘤抑制物途径中的功能缺陷。这通常通过肿瘤抑制基因的突变失活或表达丧失来实现，或通过促进存活或增殖的因子的基因扩增和基因失调来实现。此外，显示外遗传机制对在恶性表型中观察到的异常表达模式有贡献(1)。凋亡是向癌性转化的道路上待征服的主要的肿瘤抑制途径之一。因此，在多种临床前癌模型中显示抑制凋亡促进肿瘤发展(20-22)，以及凋亡信号转导的缺陷通常使人遭遇癌(23，24)。除了促进癌发展外，凋亡缺陷也似乎赋予对常规细胞毒性疗法的抗性(24，25)，其中所述常规细胞毒性疗法仍是临床肿瘤学中癌治疗的中流砥柱。
近来，在癌药物学中导入了新的疗法，旨在通过免疫介导的机制或通过干扰失调的信号转导途径来特异地靶向肿瘤细胞。免疫介导的癌疗法的成功的例子为在对白血病进行造血干细胞移植期间或之后转移T淋巴细胞，对患有乳腺癌或B细胞淋巴瘤的患者施用单克隆抗体如曲妥珠单抗(trastuzumab)或利妥昔单抗(rituximab)，或对患有恶性黑素瘤和高危复发的患者使用α干扰素。证实临床有效的信号转导抑制剂包括对患有慢性髓细胞白血病和胃肠基质肿瘤的患者使用伊马替尼，对患有结肠直肠癌的患者使用贝伐单抗(bevacizumab)和西妥昔单抗(cetuximab)，对患有复发的肺癌的患者使用埃罗替尼(erlotinib)，或对患有转移性肾细胞癌的患者使用索拉菲尼(sorafinib)。这些例子促进了确定大范围的新化合物和治疗策略的确定，其中一些已进入临床开发。
在该领域，是否这些新的形式实际上能治愈对常规的细胞毒性疗法具抗性的癌仍然是一个公开的问题。在同种异体造血干细胞移植的模型中，我们最近显示凋亡信号转导的基因性抑制物可在体外和体内赋予癌细胞对抗原特异的细胞毒性T淋巴细胞具抗性(26)。这正式表明保护癌细胞逃脱标准的细胞毒性疗法的抗性因子也可导致逃脱免疫介导的肿瘤抑制。
在本研究中，我们扩展了对信号转导的药学抑制剂的“交叉抗性”的概念。作为模型，我们使用了NSCLC和PKC的抑制剂。
在西方世界的癌相关死亡中，NSCLC是一种非常普遍的恶性肿瘤和排名靠前的癌。大多数NSCLC在疾病的进展性阶段被诊断出，并因此需要药物和放射治疗。目前对进展性的不可切除的NSCLC的标准疗法仅在少数患者中达到了临床有意义的肿瘤退化。在大的临床试验中受治疗的进展性NSCLC患者的存活中位数范围为10至12个月。由于这种高的医学需要，包括信号转导途径的抑制剂在内的新的疗法在NSCLC中极多地被研究。至今，许多努力集中在通过表皮生长因子受体(EFGR)的信号传导的抑制剂。化合物象吉非替尼(gefitinib)和埃罗替尼显示导致一些临床改善，并且甚至对患有复发的NSCLC的患者产生存活中位数的短的延长(27，28)。但是，当在大量患者组中与标准的细胞毒性药方案联合作为第一线治疗进行研究时，这些化合物中没有一种化合物导致临床的益处(3-5)。发现仅具有某些活化的EGFR突变的患者具有对吉非替尼治疗产生反应的高可能性(29，30)。不幸的是，绝大多数NSCLC患者不呈现此类突变，这对高特异性激酶抑制剂在NSCLC中的广泛临床应用造成问题。
相反，PKC酶家族参与对癌发展起作用的若干信号转导途径。其中所述若干信号转导途径包括通过血小板衍生生长因子(PDGF)受体的促细胞分裂信号传导，在G1和G2期调节细胞周期限制点，以及通过内皮细胞和癌细胞上的血管内皮生长因子(VEGF)受体的信号传导(7)。因此，PKC特异的抑制剂如STS或PKC412诱导癌细胞系的细胞周期停滞或凋亡，并在肺癌的鼠异种移植模型中显示抗肿瘤和抗血管生成作用(8，31，32)。对患有进展性癌的患者进行的I期研究中，经口施用PKC412显示是安全的和可行的(33)。此外，对患有进展性NSCLC的患者进行的I期研究中，建立了PKC412与标准的细胞毒性方案CDDP/吉西他滨联用的安全性(34)。
基于该背景，我们发现PKC特异的抑制剂如STS和PKC412在对标准的细胞毒性抗癌药显示好的反应性的那些NSCLC细胞系中是最有效的。相反，抗药的NSCLC细胞系也对PKC抑制诱导的凋亡较不敏感。不幸的是，这种抗性模式不能通过将细胞毒性抗癌药与PKC抑制剂组合而克服。不像在有限数量的NSCLC细胞系进行的其它研究表明的那样(32，35)，将我们手头的疗法联合通常不产生协同的细胞毒性。出乎意料的是在一些模型中PKC412甚至拮抗细胞毒性药的活性。当在NSCLC以及在其它恶性疾病中设计将PKC抑制剂与细胞毒性抗癌药联合研究临床有效性时，应考虑这些结果。当今，用于此类试验的患者选择通常是基于肿瘤的组织病理学分类。所有用于本研究的细胞系源自NSCLC，这再次显示仅组织病理学是不能发现功能异质性的。而且，TP53肿瘤抑制基因的功能状态以及对多种凋亡调节物的表达分析未能预测体外对细胞毒性抗癌药以及对PKC特异性抑制剂的敏感性。相反，对凋亡信号转导途径的功能分析揭示抗性NSCLC细胞系在MOM透化作用水平存在缺陷。通过条件性表达促凋亡的BAK来治疗性靶向该缺陷可靠地克服了对PKC抑制剂和/或标准的细胞毒性药的抗性。
当然，此类深入的生物化学分析不易于在获自癌患者的肿瘤活组织切片中进行。但是，我们的结果对于解释临床肿瘤学中新化合物的开发策略有若干启示。首先，将激酶抑制剂与标准的细胞毒性方案联合可能不是见多识广的，因为对患有组织病理学分类的癌的异质患者群体而言该联合治疗的结果是不能预测的。在一些患者中该联合的积极效果可能被在另一些患者中的有害效果所抵消，最多导致联合治疗后相似的净结果(3-6)。第二，新的靶向药的功效可被导致细胞毒性抗癌药失败的正好相同的抗性机制牵制。在当前的研究中，显示这是凋亡信号转导中的缺陷。细胞周期调节或可选择的死亡途径中的缺陷可能也是如此。第三，在临床前癌模型中进行的仔细的功能分析可鉴定在若干死亡和存活途径的汇合点处策略性放置的分子靶。
在我们的本研究中，对此种靶的模型治疗性调节设计了BAK的逆病毒基因转移和条件性表达。转化为临床应用很可能需要不同的药学策略，如在BCL-2家族蛋白质的水平作为促凋亡和抗凋亡的变阻器的小分子化合物调节物(36，37)。
本发明涉及用蛋白激酶C抑制剂治疗实体瘤如结肠直肠癌(CRC)和非小细胞肺癌(NSCLC)的方法。本发明也涉及使用FLT-3激酶抑制剂和BAK抑制剂的药物组合来治疗上述疾病或恶性肿瘤，以及此种药物组合物用于制备治疗这些疾病或恶性肿瘤的药物。
现在吃惊地发现FLT-3激酶抑制剂与线粒体外膜通透性的活化剂如BAK的活化剂组合具有治疗特性，使得它们对于治疗如非小细胞肺癌(NSCLC)特别有用。
缩写
ActD-放线菌素D，CDDP-顺铂(cisplatin)，DOX-多西环素，DXR-阿霉素，EGFP-增强的绿色荧光蛋白，EGFR-表皮生长因子受体，MOM-线粒体外膜，NSCLC-非小细胞肺癌，PDGF-血小板衍生生长因子，PKC-蛋白激酶C，PKC412-N-苯甲酰星形孢菌素，STS-星形孢菌素，VEGF-血管内皮生长因子，VP16-依托泊苷(etoposide)。
FLT-3激酶抑制剂
特别有兴趣用于本发明的组合中的FLT-3激酶抑制剂是星形孢菌素衍生物。优选地，FLT-3抑制剂是式I的N-[(9S，10R，11R，13R)-2，3，10，11，12，13-六氢-10-甲氧基-9-甲基-1-氧代-9，13-环氧-1H，9H-二吲哚并[1，2，3-gh：3′，2′，1′-lm]吡咯并[3，4-j][1，7]苯并二吖壬英-11-基]-N-甲基苯甲酰胺：
Figure S2006800292465D00071
或其盐，尤其包括可药用盐。式I的化合物也已知为米哚妥林(MIDOSTAURIN)[国际非专利商标名]或PKC412。PKC412是天然存在的生物碱星形孢菌素的衍生物。
在备选的实施方案中，合适的Flt-3抑制剂包括如WO 03/037347中公开的化合物，如式(II)或(III)的星形孢菌素衍生物：
；或
Figure S2006800292465D00082
其中化合物(III)是化合物(II)的部分氢化衍生物；或者式(IV)或(V)或(VI)或(VII)的星形孢菌素衍生物：
或
Figure S2006800292465D00083
或
Figure S2006800292465D00091
或
Figure S2006800292465D00092
或
Figure S2006800292465D00093
其中R1和R2相互独立地为未取代或取代的烷基、氢、卤素、羟基、醚化或酯化的羟基、氨基、单取代或二取代的氨基、氰基、硝基、巯基、取代的巯基、羧基、酯化的羧基、氨基甲酰基、N-单取代或N，N-二取代的氨基甲酰基、磺基、取代的磺酰基、氨磺酰基或N-单取代或N，N-二取代的氨磺酰基；
n和m相互独立地为从0至4的数，包括0和4；
n’和m’相互独立地为从0至4的数，包括0和4；
R3、R4、R8和R10相互独立地为氢、-O-、具有多至30个碳原子的酰基、在每一情况下具有多至29个碳原子的脂肪族、碳环、或碳环-脂肪族的基团、在每一情况下具有多至20个碳原子和在每一情况下具有多至9个杂原子的杂环或杂环-脂肪族的基团、具有多至30个碳原子的酰基，其中R4也可不存在；
或者如果R3为具有多至30个碳原子的酰基时，R4不为酰基；
如果R4不存在，则P是0，或者如果R3和R4两者均存在并且在每一情况下为上述基团之一，则P是1；
R5是氢、在每一情况下具有多至29个碳原子的脂肪族、碳环、或碳环-脂肪族的基团、在每一情况下具有多至20个碳原子和在每一情况下具有多至9个杂原子的杂环或杂环-脂肪族的基团、或者具有多至30个碳原子的酰基；
R7、R6和R9是酰基或-(低级烷基)-酰基、未取代或取代的烷基、氢、卤素、羟基、醚化或酯化的羟基、氨基、单取代或二取代的氨基、氰基、硝基、巯基、取代的巯基、羧基、羰基、碳酰二氧基、酯化的羧基、氨基甲酰基、N-单取代或N，N-二取代的氨基甲酰基、磺基、取代的磺酰基、氨磺酰基或N-单取代或N，N-二取代的氨磺酰基；
X代表2个氢原子；代表1个氢原子和羟基；代表O；或代表氢和低级烷氧基；
Z代表氢或低级烷基；
并且在环A中用波浪线表征的两个键中的任一键均不存在并被4个氢原子替换，而且在环B中的两条波浪线每一条与各自的平行键一起表示双键；
或者在环B中用波浪线表征的两个键不存在并被总共4个氢原子替换，而且在环A中的两条波浪线每一条与各自的平行键一起表示双键；
或者在环A和在环B中的全部4个波浪键均不存在并被总共8个氢原子替换；
或其盐，如果存在至少一个成盐基团的话。
上文和下文中的一般性术语和定义优选地具有WO 03/037347中提供的对星形孢菌素衍生物的意思，WO 03/037347于本文中以其整体引用作为参考。但是，当WO 03/037347与本公开存在不一致时，以本公开为准。
本质上，本发明的化合物可以可药用盐形式即生理可接受的盐的形式存在，只要它们含有成盐基团。对于分离和纯化，也可使用不可药用盐。对于治疗性用途，仅使用可药用盐，并且这些盐是优选的。
因此，具有游离酸基团如游离的磺基、磷酰基或羧基的式I化合物可以盐存在，优选地与成盐的碱性组分以生理可接受的盐形式存在。这些盐中主要的可以是金属盐或铵盐，如碱金属盐或碱土金属盐，如钠盐、钾盐、镁盐或钙盐，或与氨或合适的有机胺形成的铵盐，其中所述的有机胺尤其是叔单胺和杂环碱，如三乙胺、三-(2-羟乙基)-胺、N-乙基哌啶或N，N′-二甲基哌嗪。
具有碱性特征的本发明化合物也可以加成盐存在，尤其作为与无机酸和有机酸的酸加成盐，也可以季盐存在。因此，例如，具有碱性基团如作为取代基的氨基的化合物可以与常见的酸形成酸加成盐。合适的酸为例如氢卤酸如盐酸和氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸或高氯酸；或脂肪族酸、酯环族酸、芳香族酸或杂环羧酸或磺酸，如甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、延胡索酸、马来酸、羟基马来酸、草酸、丙酮酸、苯基乙酸、苯甲酸、对氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酸、对羟基苯甲酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸、甲磺酸、乙磺酸、羟基乙磺酸、乙基二磺酸、卤代苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸或磺胺酸以及甲硫氨酸、色氨酸、赖氨酸或精氨酸，以及抗坏血酸。
鉴于游离形式和其盐形式的化合物(尤其是式I化合物)以及其溶剂化物之间的密切关系，其中所述的盐形式的化合物包括那些可用作中间体的盐，例如在新化合物纯化或鉴定中的盐，根据需要和方便，任何此前和此后提及的游离化合物理解为也指相应的盐及其溶剂化物如水合物。
星形孢菌素衍生物及其制备方法已特别地在许多现有文献中公开，为本领域技术人员熟知。
式I化合物及其制备方法已特别地在1988年12月21日公开的欧洲专利号0 296 110，以及1992年3月3日公开的美国专利号5；093,330，以及日本专利号2 708 047中描述，每一文献在此引用作为参考。
在每一情况下，当引用专利申请或科学出版物，尤其是对星形孢菌素衍生物化合物引用专利申请或科学出版物时，将这些公开出版物的终产物的主题、药学制备物和权利要求引入本申请作为参考。
通过代码号、属名或商标名确定的活性剂的结构可自权威纲要“TheMerck Index”或自数据库如Patents International(如IMS WorldPublications)的当前版本获得。其相应内容引入本文作为参考。
BAK活化剂
BAK调节物用于调节凋亡信号转导途径。BAK活化剂促进凋亡细胞死亡并抵消BCL2的抗凋亡作用。BAK活化剂包括但不限于BCL-2/BCL-XL抑制剂。Bcl-2/Bcl-XL抑制性化合物的例子包括但不限于抗Bcl-2/Bcl-XL抗体、靶向Bcl-2或Bcl-XL的RNAi构建体、烃固定的(hydrocarbon-stapled)BH3螺旋肽以及化学抑制剂如N-{4-[4-(4′-氯-二苯基-2-基甲基)-哌嗪-1-基]-苯甲酰基}-4-(3-二甲基氨基-1-苯基硫烷基甲基-丙基氨基)-3-硝基-苯磺酰胺(Abbott化合物ABT-737)(36，37)。近来对包括其它BAK活化剂的凋亡疗法进行了综述(40)。
疗法、药物和使用方法
本发明特别地提供了治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的方法，包括施用至需要此种治疗的哺乳动物治疗有效量的FLT-3激酶抑制剂，以游离形式或以可药用盐或前体药物形式施用。优选的FLT-3激酶抑制剂是PKC412。
优选地，本发明提供了用于治疗患有非小细胞肺癌(NSCLC)的哺乳动物尤其是人的方法，包括施用至需要此种治疗的哺乳动物治疗有效量的FLT-3抑制剂、或其可药用盐或前体药物。优选的FLT-3激酶抑制剂是PKC412。
在另一实施方案中，本发明涉及游离形式或可药用盐或前体药物形式的FLT-3激酶抑制剂用于治疗NSCLC的用途。优选的FLT-3激酶抑制剂是PKC412。
在进一步的实施方案中，本发明涉及游离形式或可药用盐或前体药物形式的FLT-3激酶抑制剂用于制备治疗NSCLC的药物组合物的用途。优选的FLT-3激酶抑制剂是PKC412。
用于治疗文中提及的疾病和病症的FLT-3抑制剂和化合物的精确剂量取决于若干因素，包括宿主、被治疗的病症的特性和严重性、施用模式。但是，当FLT-3抑制剂肠胃外施用如腹膜内施用、静脉内施用、肌内施用、皮下施用、肿瘤内施用时、或直肠施用或肠施用如经口施用时，优选地静脉内施用，或者优选地经口施用、静脉内施用，日剂量0.1至10mg/kg体重，优选地1至5mg/kg体重通常获得满意的结果。在人的试验中，总剂量225mg/天推测是最大耐受剂量(MTD)。优选的静脉内日剂量是0.1至10mg/kg体重，或者对大多数较大的灵长类，日剂量为200-300mg。通常的静脉内剂量是3至5mg/kg，一周三至五次。
最优选地，经口施用FLT-3抑制剂，尤其是米哚妥林，以如微乳剂、软凝胶或固体分散剂的剂型施用，剂量多至约250mg/天，特别是225mg/天，每天施用一次、两次或三次。
通常，开始时施用小剂量，然后逐渐增加剂量，直至确定到用于所治疗的宿主的最佳剂量。剂量的上限是由副作用决定的并且可通过对受治疗的宿主进行试验而测定。
联合治疗
在一个方面，本发明也涉及组合，如组合的制备物或药物组合物，其包含(a)FLT-3抑制剂，尤其是上文特别提及的FLT-3抑制剂，特别是那些作为优选的而提及的并用在治疗抗细胞毒性药的NSCLC中；(b)线粒体外膜透化作用的活化剂，如BAK的活化剂；或备选地在治疗对细胞毒性药敏感的NSCLC时的(b’)拓扑异构酶抑制剂；其中有效成分(a)和(b)或(b’)(下文中为“(b或b’)”)在每一情况下以游离形式或以可药用盐形式存在，用于同时地、并行地(concurrent)、分开地或顺序地使用。
术语“组合的制备物”尤其是定义一种“多组份包(kit of parts)”，意思是指如上定义的组合配偶体(partner)(a)和(b或b’)可独立地计量，或通过使用具有不同量组合配偶体(a)和(b或b’)的不同固定组合，即同时地、并行地、分开地或顺序地使用。多组份包的组份然后可以例如同时地或时间上交错地施用，其中所述时间上交错地施用是对多组份包的任一组份在不同的时间点和以相同或不同的时间间隔施用。在组合的制备物中待施用的组合配偶体(a)与组合配偶体(b或b’)的总量的比率可不同，例如目的在于适应待治疗的患者亚群的需要或单个患者的需要，其中不同的需要可源于患者所患的特定疾病、疾病的严重性、年龄、性别、体重等。
合适的临床研究为例如在患有增生性疾病的患者中进行公开标记的、剂量增加的研究。此类研究特别地证实本发明的组合的有效成分的协同性。对NSCLC有益的效果可直接通过这些研究的结果确定，这是为本领域技术人员已知的。此类研究尤其适于比较使用有效成分的单一疗法的效果和使用本发明的组合的效果。优选地，逐步上升药剂(a)的剂量直到达到最大耐受剂量，且药剂(b或b’)以固定的剂量施用。备选地，药剂(a)以固定的剂量施用且药剂(b或b’)是逐步上升的剂量。每一患者每天接受或间歇地接受药剂(a)的剂量。可在此类研究中确定治疗的效果，如在12、18或24周后通过每6周评价症状分值确定。
与仅使用用于本发明的组合中的一种药物有效成分的单一疗法相比，施用本发明的药物组合不仅导致如在减轻、延缓症状发展或抑制症状方面有益的效果，如协同的治疗效果，而且还有更令人吃惊的有益效果，如较少的副作用、提高的生活质量或降低的发病率。
进一步的益处是可以使用本发明的组合中的有效成分的较低剂量，例如不仅往往需要较少的剂量，而且也以较低的频率施用，这可降低发病率或副作用的严重性。这与待治疗的患者的希望和需要相一致。
文中所用的术语“共同施用”或“组合的施用”等是指包括对单一患者施用所选择的多种治疗剂，并且旨在包括治疗方案，其中多种治疗剂不必以相同的施用途径或不必同时施用。
本发明的一个目的是提供包含一定量的药物组合物，其在靶向或防止增生性疾病上是联合地治疗有效的本发明的组合。在该组合物中，药剂(a)和药剂(b或b’)可一起施用，或者一个药剂在另一个药剂之后施用，或在一个组合的单位剂型或在两个分开的单位剂型中分开地施用。单位剂型也可以是固定的组合。
用于分开地施用药剂(a)和药剂(b或b’)的药物组合物或用于以固定的组合施用的药物组合物，即包含至少两种根据本发明的组合配偶体(a)和(b或b’)的单一盖伦制剂组合物(galenical composition)，可以本身已知的方式制备，并且适于经肠如经口或直肠地施用、以及肠胃外地施用于包括人在内的哺乳动物(温血动物)，所述药物组合物可仅包含治疗有效量的至少一种药学活性组合配偶体，如在上文所述的药学活性组合配偶体，或与一种或多种可药用载体或稀释剂组合，尤其适用于经肠或肠胃外应用。
合适的药物组合物含有例如约0.1％至约99.9％，优选地约1％至约60％的有效成分。用于联合治疗的经肠或肠胃外施用的药物制备物如果不另外指出的话为例如那些单位剂型，如糖包衣的片剂、片剂、胶囊剂或栓剂、或安瓿，它们以本身已知的方式制备，例如通过常规的混合、粒化、糖包衣、溶解或冷冻干燥过程。应认识到每一剂型的单个剂量中含有的组合配偶体的单位含量无需本身构成有效量，因为必需的有效量可通过施用多个剂量单位达到。
特别地，本发明的组合的每一组合配偶体的治疗有效量可以同时地或顺序地、以及以任何次序施用，并且组份可以分开地施用或作为固定的组合施用。例如，根据本发明的预防或治疗增生性疾病的方法可包括以联合的治疗有效量、优选地以协同的有效量同时地或以任何次序顺序地(i)施用游离或可药用盐形式的第一药剂(a)，以及(ii)施用游离或可药用盐形式的药剂(b或b’)，例如每天或间歇地施用对应于文中描述的量的剂量。本发明的组合的分别的组合配偶体可以在治疗过程中的不同时间分开地施用，或以分开的组合形式或单一的组合形式并行地施用。而且，术语施用也包含使用组合配偶体的前体药物，其中所述前体药物在体内转化为组合配偶体。本发明因此理解为包括所有此类同时治疗的方案或交替治疗的方案，并且术语″施用″也为相应的解释。
用于本发明组合中的每一组合配偶体的有效剂量可以不同，这取决于所使用的特定化合物或药物组合物、施用模式、所治疗的疾病、所治疗的疾病的严重程度。因此，本发明的组合的剂量方案根据多种因素选择，包括施用途径、以及患者的肾功能和肝功能。普通的临床工作人员或内科医生可以容易地确定并开具出减轻、对抗疾病进展或使疾病进展停滞所需的单一的多种有效成分的有效量。达到有效成分在产生功效且无毒性的范围内的浓度的最佳精度需要基于靶位点可获得有效成分的动力学的方案。
药剂(a)或(b或b’)的日剂量当然将根据多个因素而变化，如所选择的化合物、待治疗的特定疾病和预期效果。但是，一般而言以单次或分开的次数将药剂(a)以日剂量率的数量级为每天约0.03至5mg/kg，特别地每天0.1至5mg/kg，如每天0.1至2.5mg/kg，进行施用获得满意的结果。药剂(a)和药剂(b或b’)可以任一常规的途径施用，特别是如以片剂、胶囊剂、饮料形式经肠地如经口地施用，或如以注射液或悬液形式肠胃外施用。用于经口施用的合适的单位剂型包含从约0.02至50mg的有效成分，通常0.1至30mg如药剂(a)或(b或b’)，以及一种或多种可药用稀释剂或载体。
药剂(b或b’)可以以日剂量范围0.5至1000mg施用至人。用于经口施用的合适的单位剂型包含从约0.1至500mg有效成分，以及一种或多种可药用稀释剂或载体。
与仅使用用于本发明的组合中的一种药物有效成分的单一疗法相比，施用本发明的药物组合不仅导致如在抑制失调的增殖或缓解NSCLC的发展方面的有益效果，如协同的治疗效果，而且还有更令人吃惊的有益效果，如较少的副作用、提高的生活质量或降低的发病率。
进一步的益处是可以使用本发明的组合中有效成分的较低剂量，例如，所需要的剂量不仅通常较小并且以较小的频率使用，或可用于降低副作用的发病率。这与待治疗的患者的希望和需要相一致。
(a)化合物和(b或b’)化合物可与一种或多种可药用载体以及任选地一种或多种其它常规药物辅剂组合，并且以片剂、胶囊剂、膜衣片(caplet)等形式经肠地如经口地施用，或以无菌注射液或悬液形式肠胃外如腹膜内或静脉内施用。肠组合物和肠胃外组合物可通过常规方法制备。
根据本发明的输注液优选地为无菌的。这易于如通过经无菌滤膜的过滤完成。无菌形成任一组合物的液体形式、无菌填充小瓶和/或与合适的稀释剂在无菌条件下组合本发明的药物组合物为本领域技术人员所熟知。
FLT-3抑制剂可制剂为肠的和肠胃外药物组合物，所述组合物含有的有效物质的量对于治疗上文中所称的疾病和病症是有效的，此类组合物为单位剂型并且此类组合物包含可药用载体。
所述的药物组合物包含在饱和的聚烷撑二醇甘油酯中的式I化合物如米哚妥林的溶液或分散体，其中所述的二醇甘油酯是一种或多种C8-C18饱和脂肪酸的甘油酯和聚乙二醇酯的混合物。
优选地，有至少一种有益的效果，如第一种和第二种有效成分作用的相互增强，特别是协同，如超过相加作用；其它的有利的作用；较少的副作用；在第一种和第二种有效成分中的一种或两种否则为无效剂量的联合治疗效果；以及尤其是有效成分的强的协同作用。
用于治疗NSCLC的PKC412的功效通过下列实施例的结果阐述。这些实施例不以限制本发明范围的任何方式阐述了本发明。
实施例
实施例1：细胞系和载体
获得本领域已知的NSCLC细胞系。除非另外指出，将NSCLC细胞生长在补充了10％胎牛血清、葡萄糖、L-谷氨酰胺和青霉素/链霉素的Dulbecco改良的Eagle培养基中，于组织培养皿(BD Falcon)上，在5％CO2的湿的环境下培养。条件性表达转基因BAK的NSCLC细胞使用BDRevTet-On载体系统(BD Clontech)获得。编码全长的人BAK cDNA的BamHI片段通过PCR产生，通过测序证实，并克隆入pRevTRE载体。此前已描述了逆病毒BCL-XL表达载体(26)。在FNX ampho包装细胞系(斯坦福的G.P.Nolan博士惠赠)中通过标准的磷酸钙转染制备复制缺陷型逆病毒的病毒体。使用经过滤的上清进行转导，并在缺乏四环素时使用潮霉素B和嘌呤霉素选择群体，或通过EGFP-阳性细胞的荧光活化细胞分选(Coulter)获得群体。
实施例2：凋亡测试法
用片段化的DNA、活化的胱天蛋白酶、丧失的线粒体跨膜势能来定量细胞，并通过之前描述的流式细胞术(Coulter)测定细胞周期分布(26，38，39)。N-苯甲酰星形孢菌素(PKC412)获自瑞士巴塞尔的NovartisPharma，且zVAD-fmk获自ICN。所有其它药物购自Sigma。
实施例3：免疫印迹
如之前所述使用针对胱天蛋白酶-9(Chemicon)、胱天蛋白酶-3、BCL-XL、细胞色素c(BD Pharmingen)、BAX、BAK、PARP(Upstate)、AKT、磷酸-AKT、GSK-3β、磷酸-GSK3β(Cell Signaling)和肌动蛋白(ICN)的一级抗体进行免疫印迹和细胞分级(38，39)。
实施例4：NSCLC细胞系的抗性
在图1A中，将TP53健全型(TP53-proficient)NCI-H460(空心方框)和A549(实心方框)，TP53突变型(TP53 mutant)NCI-H322(空心三角)和NCI-H23(实心三角)，以及TP53-缺陷型(TP53-deficient)NCI-H1299(空心圆圈)和Calu-6(实心圆圈)NSCLC细胞以所示剂量用依托泊苷处理(左栏)，用顺铂处理(右栏，底部)，或用阿霉素处理(右栏，上部和中部)。48小时后，通过流式细胞术测定具有亚二倍体DNA含量(sub-G1)的细胞百分数，作为凋亡的指示指标。在图1B中，如图1A的同样的NSCLC细胞系用上升剂量的PKC特异的抑制剂PKC412处理。处理48小时后，通过流式细胞术定量具有亚二倍体DNA含量的细胞百分数。给出至少三次独立实验的平均值±标准差(SD)。在图1C中用PKC412(1至10μM)或DMSO预处理药物敏感的NCI-H460细胞和抗药的NCI-H1299细胞2小时，然后用PMA(1μM)刺激10分钟。全细胞提取物使用所示的一级抗体通过免疫印迹进行分析。
实施例5：药物协同分析
TP53-健全型NCI-H460细胞(图2A，黑色条形框)、A549细胞(图2B，白色条形框)、和TP53-缺陷型NCI-H1299细胞(图2C，灰色条形框)同时用25μM依托泊苷和上升剂量的PKC412(0，5，10，50，100μM)处理，并且48小时后定量具有亚二倍体DNA含量的细胞。给出至少三次独立实验的平均值+SD。在图2D显示了用DMSO或50μM PKC 412处理24小时的NCI-H1299的细胞周期分布。在图2E中A549和NCI-H1299细胞首先用25μM依托泊苷处理24小时，然后添加50μM PKC412处理另一个24小时(黑色条形框)。备选地，细胞用50μM PKC412处理24小时，然后添加25μM依托泊苷处理另一个24小时(灰色条形框)。48小时候，通过流式细胞术定量具有亚二倍体DNA含量(sub-G1)的细胞部分。DMSO处理的细胞(白色条形框)用作阴性对照。给出至少三次独立实验的平均值+SD。
实施例6：线粒体功能
在图3A中NCI-H460(空心方框)、A549(实心方框)和NCI-H1299(空心圆圈)NSCLC细胞用所示剂量的PKC412处理。48小时后，细胞用荧光的胱天蛋白酶底物FITC-VAD(Oncogene)染色，通过流式细胞术测定具有活化的胱天蛋白酶的FITC-阳性细胞部分(FITC+)。在图3B中，NCI-H460(空心方框)、A549(实心方框)和NCI-H1299(空心圆圈)NSCLC细胞用所示剂量的PKC412处理。48小时后，将细胞用线粒体染料四甲基罗丹明乙酯(TMRE，Molecular Probes)染色，并通过流式细胞术定量具有保留的线粒体跨膜势能Δψm的TMRE-阳性细胞部分(TMRE+)。给出至少三次独立实验的平均值±SD。在图3C中，NCI-H460和A549 NSCLC细胞用25μM依托泊苷处理，并在所示的时间点获得胞质部分。使用细胞色素c特异的一级抗体通过免疫印迹检测释放入胞质的线粒体细胞色素c。在图3D中，自TP53-健全型A549和NCI-H460、TP53突变型NCI-H23和NCI-H322、以及TP53-缺陷型Calu-6和NCI-H1299 NSCLC细胞制备全细胞提取物。通过免疫印迹检测BAX、BAK和BCL-XL的组成型表达。
实施例7：条件性BAK表达
在图4A中，在缺乏(-)或存在(+)多西环素(DOX)时生长表达在四环素调节的启动子控制下BAK的A549细胞。在DOX诱导后24小时，制备全细胞提取物，并通过免疫印迹分析BAK表达。将自NCI-H460细胞的细胞提取物用作BAK的内源表达水平的对照。在图4B中，在缺乏(白色条形框)或存在(黑色条形框)DOX时生长表达在四环素调节的启动子控制下的BAK的NCI-H460、A549和NCI-H1299 NSCLC细胞，并24小时后通过流式细胞术定量具有亚二倍体DNA含量(sub-G1)的细胞。给出了三次独立实验的平均值+SD。在图4C中，将表达在四环素调节的启动子控制下的BAK的A549细胞在存在DOX时用25μM依托泊苷处理，并在所示的时间点获得全细胞提取物。通过免疫印迹检测BAK的表达；胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-3的切割；以及胱天蛋白酶底物PARP。在图4D中，转导表达在四环素调节的启动子控制下的BAK的A549细胞，以表达BCL-XL(黑色条形框)；或转导与EGFP连接的载体(白色条形框)，并通过荧光激活的细胞分选选择EGFP-阳性群体。通过添加DOX诱导BAK表达，并48小时后通过流式细胞术定量具有亚二倍体DNA含量的细胞部分。给出了三次独立实验的平均值+SD。
实施例8：靶向线粒体BAK
在缺乏(白色条形框)或存在(黑色条形框)DOX时，将表达在四环素调节的启动子控制下的BAK的抗药的A549(图5A)和药物敏感的NCI-H460(图5B)细胞用上升剂量的PKC412处理，以诱导BAK表达。48小时后，通过流式细胞术定量具有亚二倍体DNA含量(sub-G1)的细胞。给出至少三次独立实验的平均值+SD。在图5C中，在缺乏(白色条形框)或存在(黑色条形框)DOX时，将表达在四环素调节的启动子控制下的BAK的抗药的NCI-H1299细胞用上升剂量的PKC412处理，以诱导BAK表达。48小时后，通过TMRE-染色法和流式细胞术定量维持了Δψm的细胞(TMRE+)。给出至少三次独立实验的平均值±SD。在图5D中，在缺乏或存在DOX时，将表达在四环素调节的启动子控制下的BAK的A549细胞用上升剂量的PKC412(1至10μM)处理，以诱导BAK表达。于24小时之时获得全细胞提取物，并通过免疫印迹检测胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-3的切割；以及胱天蛋白酶底物PARP。
实施例9：在NSCLC中对蛋白激酶C特异的抑制剂和细胞毒性抗癌药的相似抗性模式
为了研究核心凋亡机制缺陷对NSCLC中的抗药性的可能的贡献，分析了三对细胞系，它们的TP53肿瘤抑制基因是健全的(A549，NCI-H460)、缺陷的(NCI-H1299，Calu-6)、或突变的(NCI-H23，NCI-H322)。使用了一些临床应用的细胞毒性抗癌药，包括阿霉素(DXR)、顺铂(CDDP)、紫杉醇(paclitaxel)、放线菌素D(actD)和依托泊苷(VP16)，我们发现这些细胞系与分别的细胞毒性剂无关的相似抗性模式(图1A以及未显示的)。这些结果证实在NSCLC中，p53状态对细胞毒性疗法的敏感性而言是一个欠佳的指示指标。
由于生长因子耗竭可通过不同于DNA损伤引发的细胞死亡的机制诱导凋亡，我们推理：生长因子信号传导的抑制剂将能降低癌细胞对此类细胞毒性治疗的抗性。为此目的，将NSCLC细胞系用PKC特异的抑制剂星形孢菌素和其临床应用的衍生物PKC412处理。有趣的是，被保护而免受细胞毒性药诱导的凋亡的细胞系也显示对PKC特异的抑制剂降低的敏感性(图1B以及未显示的)。这不能通过靶分子抑制的不同来解释，因为在抗药的细胞系和药物敏感的细胞系中PKC412均有效地降低PKC信号转导的下游靶的磷酸化作用(9)，所述下游靶如蛋白激酶B/AKT和糖原合成酶激酶3-β(图1C以及未显示的)。因此，由细胞毒性抗癌药和PKC抑制剂诱导的对凋亡的抗性似乎是由在凋亡信号转导途径中共同的缺陷决定的。
实施例10：将PKC412与细胞毒性抗癌药在NSCLC中联用产生不同的结果
为了探索是否是用PKC412和细胞毒性抗癌药联合治疗的协同作用或相加作用能解决NSCLC的抗药性，我们首先测定了在用固定剂量的拓扑异构酶抑制剂VP16和上升剂量的PKC412同时孵育后所诱导的凋亡。在敏感的癌细胞系如NCI-H460，与仅使用VP16相比较，PKC412导致无进一步增加的凋亡(图2A)。令人感兴趣的是，在抗药的NSCLC细胞系中获得了多样化的结果。虽然用PKC412和VP16的联合处理对A549细胞产生相加的细胞毒性(图2B)，用PKC412处理实际上保护了NCI-H1299细胞免于VP16诱导的凋亡(图2C)。为了进一步勾画出应用PKC412和VP16的时间和顺序的影响，将细胞用VP16或PKC412预处理24小时，然后加入两种药中的另一种药处理另外的24小时。用PKC412预处理导致细胞周期停滞在G2/M期，这最可能通过CDK1活性的抑制来解释(10)(图2 D)。令人感兴趣的是，在NCI-H1299细胞中，这种G2/M停滞降低了在PKC412后给的VP16诱导的凋亡量(图2E)。相反，在用PKC412预处理的A549中，发现其凋亡量没有显著不同于用VP16预处理后所观察到的凋亡量(图2E)。
实施例11：在抗PKC412的NSCLC细胞中，胱天蛋白酶活化的线粒体途径缺陷
由DNA损伤剂诱导的凋亡和生长因子撤销诱导的凋亡主要通过胱天蛋白酶活化的线粒体途径进行(11，12)。为了进一步剖析NSCLC细胞系中抗PKC特异的抑制剂的机制，我们分析了该凋亡信号转导途径的若干步骤。在用PKC特异的抑制剂或细胞毒性抗癌药处理后，抗性NSCLC细胞系一致地显示减少的胱天蛋白酶活化和保留的线粒体跨膜势能(“Δψm”)(图3 A，B以及未显示的)。另外，在抗药的NSCLC细胞系中线粒体细胞色素c释放入胞质被延迟和降低(图3C)。这些结果指向在BCL-2家族蛋白质水平的对凋亡信号转导中的阻断。为此目的，我们研究了NSCLC细胞系中必需的促凋亡BH1-2-3蛋白BAX和BAK的组成型表达和抗凋亡蛋白BCL-XL的组成型表达。虽然BAX在所有6种细胞系中一致地表达，BAK和BCL-XL的蛋白质水平显示某种程度的变化(图3D)。但是，这些因素无一能令人信服地解释在NSCLC细胞系中观察到的抗性模式。
实施例12：BAK的诱导型表达使抗性NSCLC细胞对PKC412介导的凋亡敏感
基于我们之前的研究，我们推理出治疗性靶向促凋亡的BCL-2家族蛋白质能排除在抗药的NSCLC细胞系中观察到的胱天蛋白酶活化中的功能性阻断。在该途径中的一个关键步骤是线粒体外膜的透化作用(MOM)，这由促凋亡的BCL-2蛋白质BAX和BAK执行(13)。过量表达研究显示这两种分子均可直接地诱导MOM透化作用和凋亡(14-17)。在生理情况下，BAX和BAK受抗凋亡的BCL-2蛋白质如BCL-XL、MCL-1或BCL-2负调节。BAX和BAK的直接或间接的正调节是通过一组BH3-only蛋白质实施的，其中所述的一组BH3-only蛋白质包括但不限于BID和BIM、或PUMA、NOXA、BAD等(18，19)。
为了研究固有地靶向线粒体的BAK的药学调节，我们制备了能条件性表达人BAK cDNA的逆病毒载体。在该系统中，转基因BAK的表达是在转录水平通过添加多西环素(DOX)而诱导的。使用该逆病毒载体系统的高转导效率允许我们评估NSCLC细胞系的群体。与研究单细胞克隆相比较，这更好地反映肿瘤的药学治疗。而且，在这些群体中转基因BAK的表达水平不超过在一些NSCLC细胞系中观察到的内源BAK的水平(图4A)。
诱导转基因BAK的表达导致抗药的NSCLC细胞系某种程度的凋亡(图4B)。由转基因BAK促进的凋亡伴随着切割和活化胱天蛋白酶和胱天蛋白酶底物(图4C)、丧失Δψm，并且被BCL-XL的表达或广谱的胱天蛋白酶抑制剂zVAD-fmk所抑制(图4D以及未显示的)。这些结果证实转基因BAK在该实验系统中像其生理相应物一样发挥作用。
令人感兴趣的是，条件性表达的BAK有效地使抗药的NSCLC细胞系对由PKC特异的抑制剂或细胞毒性抗癌药诱导的凋亡敏感(图5A，C以及未显示的)。这通过在这些细胞系中于仅存在DOX而不是缺乏DOX时，用PKC特异的抑制剂处理后胱天蛋白酶的活化得以解释(图5D)。相反，在药物敏感的NSCLC细胞中诱导BAK表达仅有限地增加了用PKC特异的抑制剂处理后观察到的凋亡的量(图5B)。
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Claims (25)

1.治疗或预防非小细胞肺癌的方法，所述方法包括施用酪氨酸激酶抑制剂，其中酪氨酸激酶抑制剂包含选自式(II)化合物或式(III)化合物的星形孢菌素衍生物：
或
Figure S2006800292465C00012
其中化合物(III)是化合物(II)的部分氢化的衍生物；或式(IV)或(V)或(VI)或(VII)的星形孢菌素衍生物：
或
Figure S2006800292465C00021
或
Figure S2006800292465C00022
或
Figure S2006800292465C00023
其中R1和R2相互独立地为未取代或取代的烷基、氢、卤素、羟基、醚化或酯化的羟基、氨基、单取代或二取代的氨基、氰基、硝基、巯基、取代的巯基、羧基、酯化的羧基、氨基甲酰基、N-单取代或N，N-二取代的氨基甲酰基、磺基、取代的磺酰基、氨磺酰基或N-单取代或N，N-二取代的氨磺酰基；
n和m相互独立地为从0至4的数，包括0和4；
n’和m’相互独立地为从0至4的数，包括0和4；
R3、R4、R8和R10相互独立地为氢、-O-、具有多至30个碳原子的酰基、在每一情况下具有多至29个碳原子的脂肪族、碳环、或碳环-脂肪族的基团、在每一情况下具有多至20个碳原子和在每一情况下具有多至9个杂原子的杂环或杂环-脂肪族的基团、具有多至30个碳原子的酰基，其中R4也可不存在；
或者如果R3为具有多至30个碳原子的酰基时，R4不为酰基；
如果R4不存在，则P是0，或者如果R3和R4两者均存在并且在每一情况下为上述基团之一，则P是1；
R5是氢、在每一情况下具有多至29个碳原子的脂肪族、碳环、或碳环-脂肪族的基团、在每一情况下具有多至20个碳原子和在每一情况下具有多至9个杂原子的杂环或杂环-脂肪族的基团、或者具有多至30个碳原子的酰基；
R7、R6和R9是酰基或-(低级烷基)-酰基、未取代或取代的烷基、氢、卤素、羟基、醚化或酯化的羟基、氨基、单取代或二取代的氨基、氰基、硝基、巯基、取代的巯基、羧基、羰基、碳酰二氧基、酯化的羧基、氨基甲酰基、N-单取代或N，N-二取代的氨基甲酰基、磺基、取代的磺酰基、氨磺酰基或N-单取代或N，N-二取代的氨磺酰基；
X代表2个氢原子；代表1个氢原子和羟基；代表O；或代表氢和低级烷氧基；
Z代表氢或低级烷基；
并且在环A中用波浪线表征的两个键中的任一键均不存在并被4个氢原子替换，而且在环B中的两条波浪线每一条与各自的平行键一起表示双键；
或者在环B中用波浪线表征的两个键不存在并被总共4个氢原子替换，而且在环A中的两条波浪线每一条与各自的平行键一起表示双键；
或者在环A和在环B中的全部4个波浪键均不存在并被总共8个氢原子替换；
或其盐，如果存在至少一个成盐基团的话，
其中酪氨酸激酶抑制剂治疗或预防非小细胞肺癌。
2.根据权利要求1的方法，其中非小细胞肺癌对细胞毒性抗癌药是敏感的。
3.根据权利要求2的方法，其中治疗还包括施用拓扑异构酶抑制剂。
4.根据权利要求3的方法，其中拓扑异构酶抑制剂是VP16。
5.根据权利要求1的方法，其中非小细胞肺癌对细胞毒性抗癌药具有抗性。
6.根据权利要求5的方法，其中治疗还包括施用BAK活性的调节物。
7.根据权利要求6的方法，其中调节物是BAK活性的活化剂。
8.根据权利要求5的方法，其中治疗还包括施用增强线粒体外膜透化作用的组合物。
9.根据权利要求1的方法，其中非小细胞肺癌与FLT-3突变相关。
10.根据权利要求1的方法，其中酪氨酸激酶抑制剂是式(I)的化合物
Figure S2006800292465C00041
或其可药用盐。
11.式(I)的化合物
Figure S2006800292465C00051
或其可药用盐的用途，用于制备治疗非小细胞肺癌的药物组合物。
12.根据权利要求11的用途，用于治疗非小细胞肺癌。
13.治疗患有非小细胞肺癌的哺乳动物的方法，包括施用至需要此种治疗的哺乳动物酪氨酸激酶抑制量的式(I)化合物
Figure S2006800292465C00052
或其可药用盐。
14.根据权利要求13的方法，其中哺乳动物是人。
15.用于治疗非小细胞肺癌的药物制备物，其包含式(I)的化合物
Figure S2006800292465C00061
或其可药用盐。
16.在哺乳动物中治疗非小细胞肺癌的方法，其包括同时地、并行地、分开地或顺序地用药学有效量的(a)FLT-3抑制剂或其可药用盐或其前体药物和(b)BAK活性的调节物或其可药用盐或其前体药物治疗需要此种治疗的哺乳动物。
17.(a)FLT-3抑制剂或其可药用盐或其前体药物和(b)BAK活性的调节物或其可药用盐或其前体药物的组合的用途，用于治疗非小细胞肺癌。
18.根据权利要求17的用途，用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)。
19.根据权利要求17的用途，其中FLT-3抑制剂是式(I)的N-[(9S，10R，11R，13R)-2，3，10，11，12，13-六氢-10-甲氧基-9-甲基-1-氧代-9，13-环氧-1H，9H-二吲哚并[1，2，3-gh：3′，2′，1′-lm]吡咯并[3，4-j][1，7]苯并二吖壬英-11-基]-N-甲基苯甲酰胺：
或其盐。
20.权利要求17的用途，其中盐是可药用盐。
21.在抗药的癌细胞中诱导药物敏感性的方法，该方法包括在所述癌细胞中诱导凋亡信号转导途径。
22.权利要求21的方法，其中该方法包括施用BAK活性的至少一种活化剂。
23.权利要求21的方法，其中该方法包括施用Bcl-1/Bcl-XL活性的至少一种抑制剂。
24.权利要求21的方法，其中在癌细胞中诱导的敏感性是对包含星形孢菌素衍生物的药物的敏感性。
25.处理抗药的癌细胞的方法，所述方法包括将凋亡诱导剂和星形孢菌素衍生物施用至癌细胞。
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