CN100594900C - 一个生物碱类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体为两个生物碱类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。两个化合物为文殊兰碱和11-O-甲基文殊兰胺，从文殊兰、西南文殊兰或其他植物中提取获得或者用化学合成得到。经实验表明，这两种化合物对人的多种癌细胞均有良好的抑制活性。因此，可用于制备抗肿瘤药物，该药物含有有效治疗量上述两种化合物中的一种或2种，以及药学上可以接受的载体。

Description

一个生物碱类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及两个生物碱类化合物ws-4和11-O-甲基文殊兰胺在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

肿瘤是引起人类死亡的主要原因之一。中国卫生部日前公布2006年城乡居民主要死亡原因。统计显示，恶性肿瘤已成为首要死因。可见肿瘤的预防和治疗十分迫切。药物治疗是肿瘤的主要治疗手段之一。目前，虽然开发出了几十种抗肿瘤药物，有效的延长了患者的生命或者提高了患者的生存质量。其中有些抗肿瘤的药物治疗疗效非常显著，如药物治疗小儿急性白血病等。但肿瘤的药物研究和开发还面临巨大挑战，如抗肿瘤药物多为细胞毒药物，其副作用明显，限制了这些药物疗效的发挥。著名肿瘤病因学家、中国工程院院士程书钧认为：当今医学对于肿瘤的防治依然处于初级阶段。中药有几千年的人体毒性实验的基础，也许中药会在抗肿瘤方面走在世界的前列。从天然产物中寻找高效低毒的抗肿瘤活性的先导化合物一直是新药研究的热点。

石蒜科(Amaryllidaceae)有100多属1200余种，其中文殊兰属(Crinum)是重要的药用植物来源之一，该属在我国仅有两种-西南文殊兰和文殊兰。从文殊兰属分离得到的天然产物石蒜碱，具有抗肿瘤、抗炎活性，在临床上用作吐根代用品；加兰他敏和力可拉敏在临床上作为治疗小儿麻痹后遗症的要药。文殊兰(Crinum Asiaticum L.var.sinicumBaker)为石蒜科(Amaryllidaceae)多年生草本，植株粗壮。常生于海滨地区或河旁沙地，亦栽植于庭院。主要分布于福建、台湾、湖南、广东等地。文殊兰味辛、苦、性凉，有毒。清热解毒，祛瘀止痛。主治热疮肿毒，淋巴结炎，咽喉炎，头痛，痹痛麻木，跌打瘀肿，骨折，毒蛇咬伤。(《中华本草》编委会，《中华本草》，上海科学技术出版社.1999，第8分册，201-202)。

目前从药用植物中分离具有抗肿瘤的活性成分是化学工作者的热点之一。而目前对文殊兰和西南文殊兰的化学成分研究不多，我们对西南文殊兰进行了系统的化学成分研究，从中分离得到几个具有抗肿瘤活性的生物碱类化合物(已申请专利，申请号：200710046506.6)。同时我们也对我国的另一种文殊兰属植物文殊兰进行了系统的化学成分研究，以期从其中分离得到具有良好的抗肿瘤活性的天然产物。

发明内容

本发明的目的在于提出两个生物碱类化合物文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明进一步还提供一组以此生物碱类化合物为活性成分的，用于治疗肿瘤的药物组合物。

本发明所说的文殊兰新碱(Benzo[g]-1，3-benzodioxolo[5，6-a]quinolizinium)、11-O-甲基文殊兰胺(11-O-Methylcrinamine)的结构式为：

文殊兰新碱                        11-O-甲基文殊兰胺

本发明提出的文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺可从文殊兰、西南文殊兰或其他植物中提取，经分离纯化得到，也可以是经化学合成的方法制备得到。

从文殊兰或西南文殊兰中提取上述两种化合物的步骤如下：将文殊兰(CrinumAsiaticum L.var.sinicum Baker)或西南文殊兰的干燥鳞茎50Kg粉碎，以95％乙醇渗漉提取，提取液减压浓缩得浸膏。浸膏均匀分散于水中，分别用石油醚(15L×3)、氯仿(15L×3)、乙酸乙酯(15L×3)、水饱和正丁醇萃取，得到各部位萃取物。氯仿和乙酸乙酯萃取部位经反复硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯、氯仿-甲醇)、Sephadex LH-20凝胶柱层析(氯仿-甲醇、甲醇、水)和C18半制备液相(乙腈-水)对单体成分进行分离纯化，得到文殊兰新碱3.65g和11-O-甲基文殊兰胺0.87g。

文殊兰新碱(Benzo[g]-1，3-benzodioxolo[5，6-a]quinolizinium)为黄色无定形粉末，溶于甲醇；碘化铋钾反应阳性。ESI/MS给出准分子离子峰m/z 336[M+H]⁺，结合碳谱、DEPT谱和氢谱确定分子式为C₂₀H₁₈NO₄。该化合物的光谱数据与文献报道基本一致，故确定其为Benzo[g]-1，3-benzodioxolo[5，6-a]quinolizinium，命名为文殊兰新碱。

11-O-甲基文殊兰胺为白色无定形粉末，溶于氯仿、甲醇；碘化铋钾反应阳性。ESI/MS给出准分子离子峰m/z 316[M+H]⁺，结合碳谱、DEPT谱和氢谱确定分子式为C₁₈H₂₁NO₄。该化合物的光谱数据与文献报道基本一致，故确定其为11-O-Methylcrinamine，命名为11-O-甲基文殊兰胺。

本发明提出的抗肿瘤药物组合物含有治疗有效量两个生物碱类化合物中的一种或两种，以及一种或多种药学上可接受的载体。

所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明可以组合物的形式通过口服，鼻吸入、直肠或者肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

具体实施方式

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1

文殊兰(Crinum Asiaticum L.var.sinicum Baker.)鳞茎5kg，用95％乙醇10升渗漉提取，合并渗漉液，减压浓缩得到浸膏80g，用2升水分散后，以8L氯仿分三次萃取；减压浓缩萃取部位，得到粗品35g。将粗品与70g硅胶混合拌样，加到已装好的硅胶柱顶端，以氯仿∶甲醇(40∶1～10∶1)系统梯度洗脱，TLC跟踪，合并含成分相同的洗脱液，减压浓缩至干，得到11-O-甲基文殊兰胺97mg，文殊兰新碱412mg。

实施例2

文殊兰鳞茎10kg，用70％乙醇40L回流提取3次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩得156g浸膏，用5L水分散后，以石油醚20L分三次萃取后，母液再以20L  酸乙酯分三次萃取，减压浓缩萃取部位得粗品43g。粗品以甲醇溶解后上硅胶柱进行层析，以氯仿-甲醇梯度洗脱，用薄层层析检查洗脱流分，合并具有相同斑点的流分，浓缩，得到11-O-甲基文殊兰胺192mg，文殊兰新碱819mg。

实施例3

活性成分(两种化合物或组合物)        10g

乳糖                                100g

玉米淀粉                            25g

硬脂酸镁                    5g

                            制成1000片

制备方法：将活性成分、乳糖和淀粉混合，用水均匀湿润制成软材，把湿润后的混合物制粒，过20目筛，80℃烘干，加入硬脂酸镁，再过筛，然后将混合物压片，每片重140mg，活性成分含量为10mg。

实施例4

取活性成分(二种化合物或组合物)20g，药用淀粉180g，用90％醇湿法制粒，整粒，装2#胶囊，每粒200mg。其它项目应符合中华人民共和国药典2005年版胶囊剂项下的规定。

实施例5

取活性成分(二种化合物或组合物)2.5g，加入丙二醇和乙醇各200ml，搅拌使溶解，加注射用水稀释至10000ml，过0.22μm的微孔滤膜，灌封，20ml/支，流通蒸汽灭菌30min，检验、包装，得注射液。

实施例6文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺的细胞毒活性实验

1、实验材料

1.1、受试样品

文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成1000μg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用含DMSO的PBS(-)稀释。

1.2、细胞株

A549(人肺癌细胞)

LOVO(人肠癌细胞)

6T-CEM(人T细胞白血病细胞)

HL-60(人原髓细胞白血病细胞)

PANC-1(人胰腺癌细胞)

HepG-2(人肝癌细胞)

1.3、培养液

RPMI1640+15％NBS+双抗

1.4、其他材料

全自动酶标仪：型号：WellscanMK-2，生产厂商：Labsystems

进口96孔培养板等。

2、试验方法

MTT法：96孔板每孔加入浓度为3～4×10⁴个/ml的细胞悬液100μl，置37℃，5％CO₂培养箱内。24h后，加入样品液，10μl/孔，设双复孔，37℃，5％CO₂作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，作用4h后加入溶解液，100μl/孔，置培养箱内，溶解后用MK-2全自动酶标仪测570nm OD值。

3、试验结果

结果见表1，结果显示，文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺对人肺癌细胞，人肠癌细胞，人T细胞白血病细胞，人原髓细胞白血病细胞、人胰腺癌细胞和人肝癌细胞均有较好的抑制活性，表明文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺有很好的抗肿瘤作用，具有良好的开发前景。

实施例7：文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺对小鼠S180肉瘤(实体型)的疗效实验

1、实验材料

1.1受试样品

文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺用少量吐温-80助溶后用0.5％CMC配成溶液。

1.2动物

品系：昆明种小鼠

来源：第二军医大学实验动物中心提供。

合格证号：沪动合证字107号

体重：18-20g

性别：雌性。

1.3移植性肿瘤

小鼠S180肉瘤，由上海医药工业研究院传代维持。

2、实验方法

取生长良好的小鼠S180肉瘤腹水，用生理盐水以1∶4稀释，每只小鼠腋皮下接种0.2ml，随机分组，分为对照组、环磷酰胺组(CTX组，20mg/kg，ip×7)、文殊兰新碱(5mg/kg)、11-O-甲基文殊兰胺(5mg/kg)组，接种后次日起给药，给药体积为0.5ml/20g体重，连续灌胃7天。接种后10日脱颈处死动物，称动物体重后解剖取瘤块，称瘤重。结果判定根据以下公式：

3、实验结果

文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺有显著的抑瘤作用。实验结果见表2。

表2文殊兰新碱和11-O-甲基文殊兰胺对小鼠S180肉瘤的抑制作用

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

Claims (2)

1、一个生物碱类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述化合物为文殊兰新碱，其结构式如下：

文殊兰新碱。

2、一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于含有权利要求1所述的生物碱类化合物，以及药学上可以接受的载体。