CN100417650C - 韧革菌素及其制备方法和在药物上的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种新的具有药用价值的韧革菌素(vibralactone)(式I化合物)，及从韧革菌(Boreostereum vibrans)发酵液中提取本发明化合物的方法，同时提供一种以式I化合物为活性成分的用于治疗和预防高血脂症、糖尿病以及肥胖症的药物组合物，及该化合物及其药物组合物在制备治疗和预防高血脂症、糖尿病以及肥胖症药物方面的应用。

Description

韧革菌素及其制备方法和在药物上的应用

技术领域

本发明涉及韧革菌素(vibralactone)，其制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物，以及该化合物在制备治疗和预防高血脂症、糖尿病以及肥胖症的药物方面的应用。

背景技术

脂代谢通常维持着人体内脂的合成和降解的平衡。此平衡一旦被打破，即发生高血脂症，并引起动脉硬化、高血压、糖尿病等。脂代谢调节剂可用来控制这些紊乱。非胰岛素依赖型糖尿病(non-insulin-dependentdiabetes mellitus，NIDDM)脂解的抑制可降低血糖。在脂肪作为能量的起始阶段是甘油三酯的脂肪酶催化水解，甘油三酯的水解导致血液中甘油和脂肪酸水平的提高。脂肪酶抑制剂可以降低血液中的脂肪酸和糖的水平。肥胖和高胆固醇是由于食物中过高的脂肪摄入。饮食中甘油三酯吸收的关键酶是胰脂肪酶(pancreatic lipase)，抑制胰脂肪酶可导致脂肪吸收的抑制。

迄今，现有技术中没有含有式(I)化合物韧革菌素(vibralactone)作为有效成分在治疗高血脂症、糖尿病以及肥胖症方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的具有药用价值的韧革菌素(vibralactone)。

本发明的另一目的是提供一种从韧革菌(Boreostereum vibrans)发酵液中提取本发明化合物的方法。

本发明的进一步目的是提供一种以式(I)化合物为活性成分的用于治疗和预防高血脂症、糖尿病以及肥胖症的药物组合物，及该化合物和组合物在制备治疗和预防高血脂症、糖尿病以及肥胖症的药物方面的应用。

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

用于治疗和预防高血脂症、糖尿病以及肥胖症的药物，其中含有治疗和预防高血脂症、糖尿病以及肥胖症有效量的式(I)化合物(包括立体异构体和互变异构体)及可药用载体和/或赋形剂。

本发明化合物韧革菌素(vibralactone)可以转化药学上可接受的盐和衍生物，如酯、醚和其它衍生物。酯和醚的形成可采用文献中的方法(用羧酸或氨基酸，氨基酸中的氨基可以保护，酯化后去保护；酯化可在脱水剂DCC存在下进行)。双键可以采用文献方法还原，也可用OsO₄进行羟基化，或氢卤化。还可以通过双键的环氧化以及环外双键氧化成醛、酸或醇引入新的功能基，进一步通过Wittig反应引入4～10个碳的链，引入的链中可携带OR¹(R＝H或1～4个碳的烷基)，NR²R³(R²R³＝H或1～4个碳的烷基)，或F，Cl，Br，I等。

本发明化合物用作药物上时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1～99％，优选为0.5～90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的盐，或对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将所述的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和注射(静注、肌注)两种形式给药。

口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣剂、胶囊、溶液、糖浆、滴丸剂等。

注射可用其固体或液体制剂，如粉针剂、溶液形注射剂等。

为了更好地理解本发明的实质，下面将用本发明的式(I)化合物与药物载体或赋形剂组成的药物的生物活性结果来说明它在医药领域中的应用。

胰脂肪酶活性检测：

胰脂肪酶活性检测采用4-methylumbelliferyl oleate(4-MU oleate)作为底物。25μl DMSO样品液，50μl 0.1mM 4-MU溶液(用缓冲液配制而成：13mM Tris-HCl，150mM NaCl，1.3mM CaCl₂，pH8.0)在96孔微板上混合，加入25μl脂肪酶溶液(50U/ml，用缓冲液配制而成：13mM Tris-HCl，150mM NaCl，1.3mM CaCl₂，pH8.0)。25℃孵化30分钟，加入0.1ml 0.1M柠檬酸钠溶液阻断反应，用荧光酶标仪读脂肪酸酶释放出的4-methylumbelliferone(激发波长355nm，发射波长460nm)。韧革菌素(vibralactone)的脂肪酶抑制活性IC₅₀为0.4μg/ml。

具体实施方式

下面结合实施例进一步对本发明的实质内容进行说明，但本发明的内容并不局限于此。

实施例1：

B.vibrans新鲜子实体2005年8月采于中国云南省哀牢山，标本藏于中国科学院昆明植物研究所。培养基组成：potato(peel off)200g，glucose20g，KH₂PO₄ 3g，MgSO₄ 1.5g，citric acid 0.1g，thiamin hydrochloride 10mg，溶于1升无菌水中.棕色试剂瓶(大小：500ml；培养基体积：300ml).pH调至6.5，灭菌，22℃，140rpm摇床上培养2周。过滤，除去菌丝，滤液(12生)用醋酸乙酯萃取2次，萃取物1.75克进行硅胶柱层析，用CHCl₃/MeOH梯度洗脱。在CHCl₃-MeOH(98∶2)洗脱段得一组分。该组分进一步进行硅胶柱层析(石油醚-醋酸乙酯8∶1洗脱)和Sephadex LH-20柱层析(CHCl₃/MeOH 1∶1)得韧革菌素(vibralactone)纯品65mg。

该方法分离出的化合物韧革菌素(vibralactone)其化学结构式为：

韧革菌素(vibralactone)的结构是基于它的质谱和核磁共振等波谱数据以及计算而确定。

红外光谱数据：IR v^KBr _maxcm^-1：3423(OH)，2971，2915，2860，1816(β-lactone)，1112，1000，836.

质谱数据：MS(ESI⁺)：m/z(％)：231(100)[M+Na]⁺，439(85)[2M+Na]⁺；HR-ESI-MS：m/z：calc.for C₁₂H₁₆O₃Na[M+Na]⁺：231.1004；found：231.0997.

有关核磁共振数据见表1。

该化合物的立体构型通过旋光和¹³C NMR化学位移计算决定(表2和表3)。计算值和实测值非常符合。

Table 1：NMR spectral data for vibralactone(3)in CDCl₃.

^*Weak but significant allyl long-range correlations.

Table 2：The computed energy，optical rotation and ¹³C NMR data for cis-isomer(1R，5S)-1a to f.

Table 3：The computed energy，optical rotation and ¹³C NMR data for cis-isomer(1S，5R)-1a to f.

实施例2：

按实施例1制得化合物，按化合物晶体与赋形剂重量比1∶1的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例3：

按实施例1制得化合物韧革菌素(vibralactone)，按常规胶囊制剂方法制成胶囊。

实施例4：

按实施例1制得化合物韧革菌素(vibralactone)，按化合物晶体与赋形剂重量比1∶2的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例5：

按实施例1制得化合物韧革菌素(vibralactone)，按化合物晶体与赋形剂重量比1∶3的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例6：

片剂：韧革菌素(vibralactone) 100mg

淀粉                         100mg

玉米浆17％                   适量

硬脂酸镁                     适量

实施例7：

胶囊剂：韧革菌素(vibralactone) 100mg

淀粉                           100mg

硬脂酸镁                       适量

制备方法：将韧革菌素(vibralactone)与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊。

实施例8：

安瓿剂：韧革菌素(vibralactone)  50mg

制备方法：将韧革菌素(vibralactone)溶解于2毫升丙二醇中，过滤所得溶液在无菌条件下装入安瓿瓶中。

Claims (4)

1. 下述结构式(I)化合物：

2. 权利要求1化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：

取高等真菌韧革菌(Boreostereum vibrans)菌种，通过液体发酵，用醋酸乙酯溶剂萃取，所得提取物反复用硅胶和Sephedex LH-20柱层析分离，得韧革菌素。

3. 用于治疗和预防高血脂症、糖尿病以及肥胖症的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1化合物和药学上可接受的盐以及载体。

4. 权利要求1的化合物在制备治疗和预防高血脂症、糖尿病以及肥胖症的药物中的应用。