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CN100336830C - 芥菜多糖的提取纯化方法 - Google Patents

芥菜多糖的提取纯化方法 Download PDF

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CN100336830C
CN100336830C CNB2005100405475A CN200510040547A CN100336830C CN 100336830 C CN100336830 C CN 100336830C CN B2005100405475 A CNB2005100405475 A CN B2005100405475A CN 200510040547 A CN200510040547 A CN 200510040547A CN 100336830 C CN100336830 C CN 100336830C
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李夏兰
魏国栋
王昭晶
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Huaqiao University
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Abstract

本发明公开了一种芥菜多糖的提取纯化方法,其以芥菜干品为原料,经提取、醇析、干燥、透析和纯化,得芥菜多糖纯品,所得的芥菜多糖纯品中水溶性总糖可达芥菜干品的15%左右,水溶性多糖可达芥菜干品的9%左右,而蛋白质含量仅芥菜干品的0.2%,脂肪含量仅为芥菜干品的0.4×10-3%。本发明的芥菜多糖的提取纯化方法,可以省下大量的有机溶剂,不仅生产成本较低、环保,而且芥菜多糖能够保持比较完整的结构。且工艺流程简单,省时省力。

Description

芥菜多糖的提取纯化方法
技术领域
本发明涉及一种从芥菜中提取芥菜多糖的方法。
背景技术
芥菜为(Brassica juncea)芸苔属,十字花科植物。近年来的研究发现芥菜提取物具有抗氧化作用,对预防糖尿病有一定疗效,芥菜还具有降血糖和降血脂的作用,这些可能与芥菜多糖有关。包心芥菜价廉易得,可用冬闲农田(晚稻迹地)种植,高产、稳产。该品种定植后75天左右收获,每亩地约有3500公斤的产量。包心芥菜的这些特点对其多糖的开发极为有利。国外还没有芥菜(Brassicajuncea)多糖的研究报道。国内内蒙古民族师院的哈森其木格对曾对芥菜多糖进行过初步研究,但分离纯化过程很粗糙,没有得到芥菜多糖纯品,对芥菜的品种没有说明,也没有后续报道,其提取纯化方法如下:
1、提取:称取芥菜样品100g用石油醚脱脂24h,脱脂后的样品在沸水中提取4小时,过滤,残渣用蒸馏水提取3次,合并三次提取液,过滤,在80℃水浴上浓缩至小体积,加5倍体积的无水乙醇,醇析24小时,将醇析物干燥,得棕色干品。
2、纯化:将步骤1所得的棕色干品用蒸馏水透析48小时,每隔2小时更换一次水,再用正丁醇-三氯甲烷(1∶5)混合液萃取,除去少量蛋白质后,经双氧水缓慢脱色,经减压得白色芥菜多糖。
这种芥菜多糖提取纯化方法的缺点如下:1、使用大量的石油醚,成本高且污染环境;2、正丁醇-三氯甲烷有毒,而且会损失多糖,并可能导致芥菜多糖结构的破坏;3、H2O2容易破坏芥菜多糖的结构;4、使用大量的有毒溶剂,污染环境。
发明内容
本发明的目的是提供一种芥菜多糖的提取纯化方法,其成本较低、环保、且可完整保持芥菜多糖结构。
本发明的技术方案是这样的:芥菜多糖的提取纯化方法,由下列步骤实现:
(1)提取:在芥菜干品中按1∶20~65(W/V)的料液比加入蒸馏水,于89.5~90.5℃下在恒温热水中浸提1.8~2.2h,过滤,弃滤渣,得粗提液;
(2)醇析:将步骤(1)所得的粗提液在65~75℃下浓缩至原体积的1/10~1/8后加入乙醇溶液,使乙醇浓度达到55%,醇析2.5~3.5h,初步去除脂溶性小分子物质和色素,并得到芥菜多糖沉淀物;
(3)干燥:将步骤(2)所得的芥菜多糖沉淀物用无水乙醇洗涤2~3次,再用挥发性溶剂洗涤2~3次,冷冻干燥得粗品;
(4)透析:步骤(3)所得的粗品在适量的蒸馏水中充分溶解,弃不溶物,得上清液,用透析袋将上清液在流水中透析45~51h,再用去离子水中透析22~26h,每7~9h换一次水,进一步去除还原糖、寡糖、无机盐、色素等小分子杂质;
(5)纯化:将经步骤(4)透析后的液体浓缩,加入DEAE-葡聚糖凝胶A-50柱,用0~1.5mol/L的NaCl进行梯度洗脱,分部收集,收集液用苯酚硫酸法检测,合并多糖峰的收集液,浓缩,透析真空干燥,得层析纯芥菜多糖。
上述步骤(1)中芥菜干品与蒸馏水的料液比为1∶40(W/V)。
上述步骤(1)中的恒温水槽中热水的温度为90℃。
上述步骤(3)中的挥发性溶剂为丙酮。
上述步骤(3)中的挥发性溶剂为乙醚。
采用上述技术方案后,所得的芥菜多糖纯品中水溶性总糖可达芥菜干品的15%左右,水溶性多糖可达芥菜干品的9%左右,而蛋白质含量仅芥菜干品的0.2%,脂肪含量仅为芥菜干品的0.4×10-3%。本发明的芥菜多糖的提取纯化方法,可以省下大量的有机溶剂,不仅生产成本较低、环保,而且芥菜多糖能够保持比较完整的结构。且工艺流程简单,省时省力。
具体实施方式
本发明芥菜多糖的提取纯化方法,由下列步骤实现:
(1)提取:称取适量的包心芥菜干品,按1∶40(W/V)的料液比加入蒸馏水,于90℃下在恒温水槽中热水浸提2h,四层纱布过滤,弃滤渣,得粗提液。
(2)醇析:将步骤(1)所得的粗提液用旋转蒸发仪在70℃下浓缩至原体积的1/10后加入无水乙醇,使乙醇浓度达到55%,醇析3h,初步去除脂溶性小分子物质和色素,并得到芥菜多糖沉淀物。
(3)干燥:将步骤(2)所得的芥菜多糖沉淀物用无水乙醇洗涤2~3次,再用丙酮或乙醚洗涤2~3次,冷冻干燥得粗品。
(4)透析:将步骤(3)所得的粗品按1∶15(W/V)的料液比加入蒸馏水中溶解,6000r.p.m离心15min,弃不溶物,得上清液,用截留分子量为1000的透析袋将上清液在流水中透析48h,再用去离子水中透析24h,每8h换一次水,进一步去除还原糖、寡糖、无机盐、色素等小分子杂质。
(5)纯化:将经步骤(4)透析后的液体浓缩到原体积的1/2~2/3,取2.5ml上DEAE-葡聚糖凝胶A-50柱,DEAE-葡聚糖凝胶A-50柱的规格为2.5×42cm,柱床高度为38cm,用0~1.5mol/L的NaCl进行梯度洗脱,洗脱速度为0.75ml/min,分部收集,每管收集3ml,共收集100管,收集液用苯酚硫酸法检测,合并多糖峰的收集液,浓缩,透析真空干燥,得层析纯芥菜多糖。

Claims (5)

1、芥菜多糖的提取纯化方法,其特征在于:由下列步骤实现:
(1)提取:在芥菜干品中按1∶20~65(W/V)的料液比加入蒸馏水,于89.5~90.5℃下在恒温热水中浸提1.8~2.2h,过滤,弃滤渣,得粗提液;
(2)醇析:将步骤(1)所得的粗提液在65~75℃下浓缩至原体积的1/10~1/8后加入乙醇溶液,使乙醇浓度达到55%,醇析2.5~3.5h,初步去除脂溶性小分子物质和色素,并得到芥菜多糖沉淀物;
(3)干燥:将步骤(2)所得的芥菜多糖沉淀物用无水乙醇洗涤2~3次,再用挥发性溶剂洗涤2~3次,冷冻干燥得粗品;
(4)透析:步骤(3)所得的粗品在适量的蒸馏水中充分溶解,弃不溶物,得上清液,用透析袋将上清液在流水中透析45~51h,再用去离子水中透析22~26h,每7~9h换一次水,进一步去除还原糖、寡糖、无机盐、色素等小分子杂质;
(5)纯化:将经步骤(4)透析后的液体浓缩,上DEAE-葡聚糖凝胶A-50柱,用0~1.5mol/L的NaCl进行梯度洗脱,分部收集,收集液用苯酚硫酸法检测,合并多糖峰的收集液,浓缩,透析真空干燥,得层析纯芥菜多糖。
2、根据权利要求1所述的芥菜多糖的提取纯化方法,其特征在于:上述步骤(1)中芥菜干品与蒸馏水的料液比为1∶40(W/V)。
3、根据权利要求1所述的芥菜多糖的提取纯化方法,其特征在于:上述步骤(1)中的恒温水槽中热水的温度为90℃。
4、根据权利要求1所述的芥菜多糖的提取纯化方法,其特征在于:上述步骤(3)中的挥发性溶剂为丙酮。
5、根据权利要求1所述的芥菜多糖的提取纯化方法,其特征在于:上述步骤(3)中的挥发性溶剂为乙醚。
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