CH674149A5

CH674149A5 -

Info

Publication number: CH674149A5
Application number: CH4117/88A
Authority: CH
Inventors: Valery Veniaminovich Smirnov; Svetlana Nikolaevna Kharchenko; Semen Rafailovich Reznik; Vladimir Petrovich Litvin; Valentina Alexeevn Vjunitskaya
Original assignee: Inst Mikrobiologii Virusologii; Uk Selskokhoz Akademia
Priority date: 1987-02-24
Filing date: 1988-02-24
Publication date: 1990-05-15
Also published as: GB2209343A; JPH01502340A; GB2209343B; DE3790919T1; WO1988006619A1; GB8823554D0

Description

BESCHREIBUNG Technisches Gebiet DESCRIPTION Technical field

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf die Veterinärmedizin und betrifft insbesondere ein Arzneimittel zur Prophylaxe und Behandlung von gastrointestinalen Erkrankungen des Landwirtschaftsviehs. The present invention relates to veterinary medicine and relates in particular to a medicament for the prophylaxis and treatment of gastrointestinal diseases in agricultural cattle.

Stand der Technik In den modernen Viehzuchtkomplexen, wo eine bedeutende Menge vom landwirtschaftlichen Vieh konzentriert ist, entstehen sogar beim Beachten befriedigender hygienischer Bedingungen bei einem wesentlichen Teil der Neugeborenen akute Magen- und Darmerkrankungen. State of the art In modern cattle breeding complexes, where a significant amount of agricultural cattle is concentrated, even in observing satisfactory hygienic conditions, a substantial part of the newborns develop acute stomach and intestinal diseases.

Die Hauptgründe solcher Erkrankungen bestehen darin, dass in den ersten Stunden und Tagen nach der Geburt die Tiere noch keine normale Mikroflora haben, die eine wichtige Rolle im Schutz gegen die Infektionen spielt. Zu dieser Periode können in den Organismen der Tiere aus der Umgebung (aus der Luft, aus Pflegegegenständen, von den kranken Tieren, vom Personal und von anderen Quellen) verschiedene pathogene und fakultativ pathogene Mikroorganismen (enteropathogenes Kolibakterium, Staphylokokkus, Proteus, Klebsiella, Salmonella u. a.) gelangen, die sich im Darm der Neugeborenen praktisch ungehindert vermehren, indem sie bei den Tieren gastrointestinale Erkrankungen von verschiedener Schwere hervorrufen. Die Entwicklung solcher Erkrankungen im früheren Lebensalter führt zur Ab-schwächung der Neugeborenen und zur Herabsetzung des Prozents deren Erhaltung (zum Tod eines Teils der Tiere). The main reasons for such diseases are that in the first hours and days after birth, the animals do not yet have normal microflora, which plays an important role in protecting against the infections. During this period, various pathogenic and facultative pathogenic microorganisms (enteropathogenic coli bacteria, staphylococcus, proteus, Klebsiella, Salmonella, etc.) can be found in the organisms from the environment (from the air, from care items, from the sick animals, from staff and from other sources) ), which reproduce practically unhindered in the intestine of the newborn, causing gastrointestinal diseases of various severity in the animals. The development of such diseases in earlier age leads to the weakening of newborns and a reduction in the percentage of their maintenance (to the death of some of the animals).

Es ist die Anwendung von Antibiotika, Sulfamid- und Nitrofuranpräparaten sowie von Gräserdekokten und anderen Mitteln zur Behandlung akuter gastrointestinaler Erkrankungen breit bekannt. Alle diese Mittel sind jedoch nicht effektiv genug, weil eine Reihe von pathogenen und fakultativ pathogenen Mikroorganismen gegen diese Mittel resistent ist. The use of antibiotics, sulfamide and nitrofuran preparations as well as grass decoctions and other agents for the treatment of acute gastrointestinal diseases is widely known. However, all of these agents are not effective enough because a number of pathogenic and optionally pathogenic microorganisms are resistant to these agents.

Zur Zeit sind die Präparate aus lebendigen Mikrobenkulturen zur Prophylaxe und Behandlung der Magen- und Darmerkrankungen der Tiere aussichtsreicher. Diese Präparate tragen zu einer künstlichen Formung in der früheren 5 Lebensperiode der Tiere in ihrem Magendarmkanal von der Mikroflora bei, die fähig ist, die Vermehrung von pathogenen und fakultativ pathogenen Mikroorganismen darin zu unterdrücken. So ist beispielswiese ein Präparat aus lebendigen Kulturen des Mikroorganismus Streptococcus faecium io Cernelle 68 bekannt (GB, B 1 300 446). At present, preparations from living microbial cultures for the prophylaxis and treatment of gastric and intestinal diseases in animals are more promising. These preparations contribute to the artificial formation in the animals' previous 5 life cycle in their gastrointestinal tract from the microflora, which is able to suppress the multiplication of pathogenic and optionally pathogenic microorganisms therein. For example, a preparation from living cultures of the microorganism Streptococcus faecium io Cernelle 68 is known (GB, B 1 300 446).

Das genannte Präparat sieht nur eine Art des Mikroorganismus vor, was kein breites antagonistisches Wirkungsspektrum bewirkt. Ausserdem übt das genannte Präparat keine stimulierende Wirkung auf die Schutzreaktionen des 15 tierischen Organismus aus (induziert das endogene Interferon nicht, erhöht die Phagozytenaktivität der Blutleukozyten nicht), was dessen Anwendungsgebiet auch begrenzt. The preparation mentioned provides only one type of microorganism, which does not produce a broad spectrum of antagonistic effects. In addition, the preparation mentioned has no stimulating effect on the protective reactions of the animal organism (does not induce endogenous interferon, does not increase the phagocytic activity of the blood leukocytes), which also limits its field of application.

Darstellung der Erfindung 20 Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, durch die Veränderung der Bakterienbiomasse und die Verwendung von neuen Mikroorganismenstämmen ein Arzneimittel zur Prophylaxe und Behandlung von gastrointestinalen Erkrankungen des Landwirtschaftsviehs zu entwickeln, dass eine 25 hohe Wirkungseffektivität besitzt, durch ein breites Wirkungsspektrum in bezug auf die Wachstumshemmung von pathogenen und fakultativ pathogenen Mikroorganismen gekennzeichnet wird, Schutzreaktionen des tierischen Organismus stimuliert, keine Komplikationen hervorruft, keine 30 Nebenwirkung ausübt, in der Anwendung einfach ist, lange aufbewahrt werden kann. PRESENTATION OF THE INVENTION The object of the invention is to develop a medicament for the prophylaxis and treatment of gastrointestinal diseases of agricultural cattle by changing the bacterial biomass and using new microorganism strains, which has a high effectiveness, through a broad spectrum of activity in relation to the inhibition of growth is characterized by pathogenic and facultatively pathogenic microorganisms, stimulates protective reactions of the animal organism, causes no complications, has no side effects, is easy to use, can be stored for a long time.

Die Aufgabe wurde durch das erfmdungsgemässe Arzneimittel zur Prophylaxe und Behandlung der gastrointestinalen Erkrankungen des Landwirtschaftsviehs, das die Bak-35 terienbiomasse vorsieht, gelöst, das erfindungsgemäss als Bakterienbiomasse die Biomasse des Stammes Bacillus subtilis TsMPM- Nr. V-2335 und die Biomasse des Stammes Bacillus licheniformis TsMPM Nr. V-2336 enthält. Diese Stämme wurden aus wilden Kulturen durch die natürliche Aus-40 wähl nach den Merkmalen der höchsten und stabilen antagonistischen Aktivität beim Kultivieren auf künstlichen Nährmedien selektioniert. The object was achieved by the medicament according to the invention for the prophylaxis and treatment of the gastrointestinal diseases of agricultural cattle, which provides for the bacterial biomass of 35, the biomass of the Bacillus subtilis strain TsMPM No. V-2335 and the biomass of the Bacillus strain as bacterial biomass according to the invention licheniformis contains TsMPM No. V-2336. These strains were selected from wild cultures by natural selection according to the characteristics of the highest and most stable antagonistic activity when cultivated on artificial nutrient media.

Ausserdem sind sie im Zentralmuseum für Industriemikroorganismen des Allunions-Forschungsinstituts für Gene-45 tik und Selektion der Industriemikroorganismen VSESOJUZNYNAUCHNO-ISSLEDOVATELSKY INSTITUT GENETIKIISELEKTSIIPROMYSHLEN-NYKH MIKROORGANIZMOV (VNIIGENETIKA) USSR, Moscow, Dorozhny prozed, 1 hinterlegt. Das Hinter-50 legungsdatum ist der 22. Mai 1981. Das Arzneimittel enthält auch einen Füllstoff beim folgenden Verhältnis der Ausgangskomponenten in Masse%: They are also in the Central Museum for Industrial Microorganisms of the All-Union Research Institute for Genetics and Selection of Industrial Microorganisms VSESOJUZNYNAUCHNO-ISSLEDOVATELSKY INSTITUT GENETIKIISELEKTSIIPROMYSHLEN-NYKH MIKROORGANIZMOVA, Voznrigen, Moscow. The filing date is May 22, 1981. The medicinal product also contains a filler with the following ratio of the starting components in mass%:

Biomasse des Stammes Bacillus subtilis TsMPM Nr. V-2335, die 150 bis 55 200 Milliarden Mikrobenzellen je 1 ml enthält, 45—60 Biomass of the strain Bacillus subtilis TsMPM No. V-2335, which contains 150 to 55 200 billion microbial cells per 1 ml, 45-60

Biomasse des Stammes Bacillus licheniformis TsMPM Nr. V-2336, die 150 bis 200 Milliarden Mikrobenzellen je 6o 1 ml enthält, 15—20 Biomass of the strain Bacillus licheniformis TsMPM No. V-2336, which contains 150 to 200 billion microbial cells each 6o 1 ml, 15-20

Füllstoff alles übrige. Filler everything else.

Die Effektivität der Wirkung des erfindungsgemässen Arzneimittels wird durch die Verwendung der genannten Stämme gesichert. The effectiveness of the action of the medicament according to the invention is ensured by the use of the strains mentioned.

65 Der Stamm Bacillus subtilis TsMPM Nr. V-2335 wird durch die Eigenschaft gekennzeichnet, eine bestimmte Zeit in verschiedenen Abschnitten des Verdauungskanals der Tiere aufrechterhalten zu werden, besitzt eine antagonistische Wir 65 The strain Bacillus subtilis TsMPM No. V-2335 is characterized by the property of being maintained for a certain time in different sections of the digestive tract of the animals, has an antagonistic we

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kung in bezug auf pathogene und faktultativ pathogene Bakterien (Pseudomonas aeruginosa, Shigella sonnei, Salmonella Weslaco, Salmonella typhimurium, Salmonella stenley, Salmonella newport, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris und andere), stimuliert Phagozytenaktivität der Blutleukozyten, erhöht die Induktion des endogenen Interferons im tierischen Organismus, beeinflusst die normale Mikroflora nicht. kung in relation to pathogenic and facultative pathogenic bacteria (Pseudomonas aeruginosa, Shigella sonnei, Salmonella Weslaco, Salmonella typhimurium, Salmonella stenley, Salmonella newport, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris and others), stimulates phagocytic activity of the endogenous leukocytes and increases the induction of blood leukocytes Organism, does not affect normal microflora.

Der Stamm Bacillus licheniformis TsMPM Nr. V-2336 wird durch die Eigenschaft gekennzeichnet, eine bestimmte Zeit in verschiedenen Abschnitten des Verdauungskanals der Tiere aufrechterhalten zu werden, besitzt eine antagonistische Wirkung in bezug auf pathogene Bakterien und Pilze (Staphylococcus aureus, Staphylococcus albus, Candida albicans, Aspergillus flânes und andere), stimuliert Phagozytenaktivität der Blutleukozyten der Tiere, beeinflusst die normale Mikroflora nicht, wird durch die fermentative Aktivität gekennzeichnet, die zu den Verdauungsprozessen beiträgt. The strain Bacillus licheniformis TsMPM No. V-2336 is characterized by the property of being maintained for a certain time in different sections of the digestive tract of the animals and has an antagonistic effect with regard to pathogenic bacteria and fungi (Staphylococcus aureus, Staphylococcus albus, Candida albicans , Aspergillus flânes and others), stimulates phagocytic activity of animal blood leukocytes, does not affect normal microflora, is characterized by the fermentative activity that contributes to the digestive processes.

Als Füllstoff enthält das erfmdungsgemässe Arzneimittel vorzugsweise ein Gemisch aus dem Blutserum des Rindviehs oder Gelatine mit Saccharose oder Glukose. As a filler, the medicament according to the invention preferably contains a mixture of the blood serum of cattle or gelatin with sucrose or glucose.

Die Verwendung des Blutserums vom Rindvieh oder der Gelatine trägt zur Stabilisierung biologischer Eigenschaften der Kulturen bei, die zum Arzneimittel gehören. Die Verwendung von Saccharose oder Glukose bewirkt optimale Bedingungen der Lyophilisierung bei der Herstellung des Arzneimittels, indem diese biologische und physikalische Eigenschaften bei der Aufbewahrung und eine gute Mischbarkeit mit dem Lösungsmittel des Präparats während seiner Anwendung aufrechterhält. The use of cattle blood serum or gelatin helps stabilize the biological properties of the cultures belonging to the medicinal product. The use of sucrose or glucose provides optimal conditions for lyophilization in the manufacture of the medicinal product, by maintaining biological and physical properties when stored and good miscibility with the solvent of the preparation during its use.

Bester Weg zur Ausführung der Erfindung Best way to carry out the invention

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel besteht aus der Biomasse der genannten neuen Stämme. Die Stämme Bacillus subtilis TsMPM Nr. V-2335 und Bacillus licheniformis TsMPM Nr. V-2336 sind im Zentralmuseum für Industriemikroorganismen des Allunions-Forschungsinstituts für Genetik und Selektion der Industriemikroorganismen hinterlegt worden. Der Stamm Bacillus subtilis TsMPM Nr. V-2335 wurde aus wilden Kulturen isoliert und im Pro-zess der Untersuchung seiner natürlichen Veränderlichkeit bei der Kultivierung auf künstlichen Nährmedien durch die Auswahl der Varianten selektioniert, die durch die höchste und gleichzeitig stabile (im Laufe von mindestens 50 Passagen) antagonistische Aktivität gekennzeichnet werden. The medicament according to the invention consists of the biomass of the new strains mentioned. The strains Bacillus subtilis TsMPM No. V-2335 and Bacillus licheniformis TsMPM No. V-2336 have been deposited in the Central Museum for Industrial Microorganisms of the All-Union Research Institute for Genetics and Selection of Industrial Microorganisms. The strain Bacillus subtilis TsMPM No. V-2335 was isolated from wild cultures and, in the process of examining its natural variability in cultivation on artificial nutrient media, was selected by selecting the variants which were of the highest and at the same time stable (over the course of at least 50 passages) antagonistic activity.

Der Stamm hat folgende kulturell-morphologische und physiologisch-biochemische Besonderheiten: die Zellen sind von stäbchenartiger Form, im Präparat der «zerdrückte» The strain has the following cultural-morphological and physiological-biochemical peculiarities: the cells are rod-like in shape, in the preparation the «crushed»

oder «hängende» Tropfen beweglich, grampositiv, produzieren Katalase; unter aeroben Bedingungen bildet der Stamm Sporen, die in der Zelle zentral angeordnet sind. Die Kultur wächst reichlich auf den üblich gebräuchlichen Nährmedien (Fleisch-Peptonagar, Würzeagar, Medium nach Gromyko, Kartoffelagar). Auf dem Fleisch-Petonagar bildet Kolonien, die eine unregelmässige Form mit faltiger matter Oberfläche von weissem oder weisslich-cremefarbenem Ton mit zerschnittenen zackigen Rändern haben. Die Kolonien können auch rund, glatt mit glänzender Oberfläche und ebenen Rändern sein. Die beiden Kolonienarten lassen sich vom Agar mit der Öse abnehmen. Beim Wachstum auf der Fleisch-Peptonbouillon bildet die Kultur einen Film. In den Abstrichen der 18 Stunden alten Kultur werden gerade grampositive Zellen von stäbchenartiger Form, von 2,0—2,2 x 0,7—0,85 pm Grösse nachgewiesen, die einzeln oder in Form von Ketten angeordnet sind. Bei der Sporenbildung schwellen die Zellen nicht an, nach dem Wachstum auf dem Glukoseagar werden im Protoplasma keine Einschlüsse von Poly-ß-oxybuttersäure nachgewiesen. Die Kultur fermentiert Glukose, Arabinose, Mannit, Xylose unter Säurebildung ohne Gas. Die Reaktion nach Foges-Prosko-wer ist positiv. Die Kultur bildet kein Gas aus NO3 unter 5 anaeroben Bedingungen, produziert Arginindihydrolase nicht. Die Kultur wächst auf dem Nährmedium, das 7% NaCl enthält, hydrolysiert Stärke, Gelatine, verwertet Zitrat, nutzt Propionat nicht aus, besitzt keine Lezithinasenaktivi-tät, ist für Warmblüter nicht pathogen. or "hanging" drops agile, gram-positive, produce catalase; under aerobic conditions, the stem forms spores that are centrally located in the cell. The culture grows abundantly on the commonly used nutrient media (meat peptone agar, seasoning agar, medium after Gromyko, potato agar). Colonies form on the meat peton agar, which have an irregular shape with a wrinkled matt surface of white or whitish-cream tone with cut jagged edges. The colonies can also be round, smooth with a glossy surface and flat edges. The two types of colonies can be removed from the agar with the eyelet. When growing on the meat peptone broth, the culture forms a film. In the smears of the 18-hour-old culture, gram-positive cells of rod-like shape, 2.0-2.2 x 0.7-0.85 pm in size, are found, which are arranged individually or in the form of chains. When the spores form, the cells do not swell; after growth on the glucose agar, no inclusions of poly-ß-oxybutyric acid are detected in the protoplasm. The culture fermented glucose, arabinose, mannitol, xylose with the formation of acid without gas. The reaction according to Foges-Prosko-wer is positive. The culture does not produce gas from NO3 under 5 anaerobic conditions, does not produce arginine dihydrolase. The culture grows on the nutrient medium containing 7% NaCl, hydrolyzes starch, gelatin, utilizes citrate, does not use propionate, has no lecithinase activity, is not pathogenic for warm-blooded animals.

10 Der Stamm Bacillus licheniformis TsMPM Nr. V-2336 wurde aus wilden Kulturen isoliert und im Prozess der Untersuchung dessen natürlicher Veränderlichkeit bei der Kultivierung auf künstlichen Nährmedien durch die Auswahl der Varianten selektioniert, die durch die höchste und zu-15 gleich stabile (im Laufe von mehr als 45 Passagen) antagonistische Aktivität gekennzeichnet werden. 10 The strain Bacillus licheniformis TsMPM No. V-2336 was isolated from wild cultures and, in the process of examining its natural variability in cultivation on artificial nutrient media, was selected by selecting the variants that were of the highest and -15 equally stable (in the course of antagonistic activity are characterized by more than 45 passages).

Der Stamm hat folgende kulturell-morphologische und physiologisch-biochemische Besonderheiten: die Zellen sind von stäbchenartiger Form, im Präparat der «zerdrückte» 20 oder «hängende» Tropfen beweglich, von 2,4 — 2,7 x 0,5 —0,75 um Grösse, hauptsächlich in Form von Ketten angeordnet. Die Sporen sind oval, in der Zelle zentral angeordnet, quellen die Zelle nicht auf. Nach dem Wachstum auf dem Glukoseagar werden im Protoplasma 25 keine Globula nachgewiesen. The strain has the following cultural-morphological and physiological-biochemical peculiarities: the cells are rod-like in shape, in the preparation the «crushed» 20 or «hanging» drops are mobile, from 2.4 - 2.7 x 0.5 - 0.75 by size, mainly arranged in the form of chains. The spores are oval, arranged centrally in the cell, do not swell the cell. After growth on the glucose agar, no globules are detected in Protoplasma 25.

Auf dem Fleisch-Peptonagar haben die Kolonien eine trübe grobe Oberfläche, sind undurchsichtig. Sie können auch eine glänzende glatte Oberfläche aufweisen. Die beiden Kolonienarten haften an Agar dicht an und lassen sich mit 30 der Öse schwer abnehmen. Nicht selten wird auf der Oberfläche Schleim nachgewiesen. The colonies on the meat peptone agar have a cloudy, rough surface and are opaque. They can also have a shiny smooth surface. The two types of colonies adhere tightly to agar and are difficult to remove with the eyelet. Mucus is often detected on the surface.

Die Kolonien alter Kulturen können eine dunkelbraune Farbe bekommen. Auf dem Fleisch-Peptonagar wird ein faltiger Film manchmal mit cremefarbener Schattierung gebil-35 det. Die Kultur bildet Katalase. Wird durch Fähigkeit gekennzeichnet, auf dem Agar unter anaeroben Bedingungen zu wachsen. Weist eine positive Reaktion nach Foges-Proskower auf, wächst auf einem Nährmedium, das 7% The colonies of old cultures can get a dark brown color. A wrinkled film is sometimes formed on the meat peptone agar with a cream shade. The culture is catalase. Characterized by ability to grow on the agar under anaerobic conditions. Has a positive reaction according to Foges-Proskower, grows on a nutrient medium that is 7%

NaCl enthält, hydrolysiert Stärke, Kasein, hydrolysiert 40 Harnstoff nicht. Verdünnt Gelatine langsam. Beim Wachstum auf der Fleisch-Peptonbouillon bildet Ammoniak, bildet kein Indol, keinen Schwefelwasserstoff. Fermentiert Glukose, Laktose, Mannit unter Säurebildung. Reduziert Nitrate, bildet unter anaeroben Bedingungen Gas aus Nitraten. 45 Die Kultur besitzt keine Koagulasen-, Hyaluronidasen- und Lezithinasenaktivität, ist für Warmblüter nicht pathogen. NaCl contains, hydrolyzes starch, casein, does not hydrolyze 40 urea. Slowly dilute gelatin. When growing on the meat peptone broth, ammonia forms, forms no indole, no hydrogen sulfide. Ferments glucose, lactose, mannitol with acid formation. Reduces nitrates, forms gas from nitrates under anaerobic conditions. 45 The culture has no coagulase, hyaluronidase and lecithinase activity and is not pathogenic for warm-blooded animals.

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel stellt eine poröse kristallisierte trockene wasserunlösliche Masse von hellbraunem Ton dar, bildet in Wasser und Milch eine homogene be-50 ständige Suspension. Der Masseanteil von Wasser beträgt höchstens 5%. Das Präparat wird in Glasampullen mit einem Gehalt an Trockensubstanz von 250 mg (300 bis 400 Mrd Mikrobenzellen) oder in Glasflaschen mit einem Gehalt an Trockensubstanz von 500 mg (600 bis 800 Mrd. 55 Mikrobenzellen) hergestellt. The medicament according to the invention is a porous, crystallized, dry, water-insoluble mass of light brown clay and forms a homogeneous, permanent suspension in water and milk. The mass fraction of water is at most 5%. The preparation is manufactured in glass ampoules with a dry matter content of 250 mg (300 to 400 billion microbial cells) or in glass bottles with a dry matter content of 500 mg (600 to 800 billion 55 microbial cells).

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel kann als Mittel zur Prophylaxe oder Behandlung von akuten gatrointestinalen Erkrankungen des landwirtschaftlichen Jungviehs angewendet werden (Dysbakteriosis, Kollbakteriosis, Salmonellosis, 60 verschiedene andere aktive gastrointestinale Erkrankungen des landwirtschaftlichen Viehs, die durch pathogene und fakultativ pathogene Mikroorganismen hervorgerufen werden). The medicament according to the invention can be used as an agent for the prophylaxis or treatment of acute gatrointestinal diseases in young cattle (dysbacteriosis, collobacteriosis, salmonellosis, 60 different other active gastrointestinal diseases in agricultural cattle, which are caused by pathogenic and optionally pathogenic microorganisms).

Das Verfahren zur Anwendung des Arzneimittels zwecks 65 Prophylaxe besteht in folgendem: der Ampulleninhalt, in welchen 300 bis 400 Mrd. lebensfähige Mikrobenzellen enthalten sind, wird in 11 gekochter und auf eine Temperatur von 25 bis 30 "C abgekühlter Milch oder gekochtem und auf The procedure for using the drug for 65 prophylaxis consists in the following: the ampoule contents, which contain 300 to 400 billion viable microbial cells, are boiled in 11 milk and cooled to a temperature of 25 to 30 "C or boiled and on

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eine Temperatur von 25 bis 30 °C abgekühltem Wasser vermischt und 200 ml Gemisch werden dem neugeborenen Vieh vor der Fütterung mit Kolostralmilch, jedoch spätestens 1 bis 2 Stunden nach der Geburt gegeben; nachher wiederholt man die Prozedur nach 24 und 48 Stunden. a temperature of 25 to 30 ° C cooled water mixed and 200 ml of mixture are given to the newborn cattle before feeding with colostrum, but at the latest 1 to 2 hours after birth; the procedure is then repeated after 24 and 48 hours.

Das Verfahren zur Anwendung des Arzneimittels zum therapeutischen Zweck besteht in folgendem: der Ampulleninhalt, in welchem 300 bis 400 Mrd. lebensfähige Mikrobenzellen enthalten sind, wird in 11 gekochter und auf eine Temperatur von 25 bis 30 °C abgekühlter Milch oder gekochtem und auf eine Temperatur von 20 bis 30 °C abgekühltem Wasser vermischt und je 200 ml Gemisch werden dem kranken Vieh 2 bis 3mal täglich bis zur Genesung gegeben. The procedure for using the drug for therapeutic purposes consists of the following: the ampoule content, which contains 300 to 400 billion viable microbial cells, is boiled in 11 milk or cooled to a temperature of 25 to 30 ° C or boiled and heated to a temperature from 20 to 30 ° C cooled water mixed and 200 ml of mixture are given to sick cattle 2 to 3 times a day until recovery.

Die Anwendung des erfindungsgemässen Arzneimittels zum therapeutischen Ziel schliesst die Verordnung den Tieren anderer Mittel der pathogenetischen Therapie ausser der peroralen Einführung von Antibiotika nicht aus. In den empfohlenen Dosen ruft es keine Komplikationen hervor und übt keine Nebenwirkungen aus. Es gibt keine Kontraindikationen zur Anwendung des erfindungsgemässen Arzneimittels. Die Verwendung des Arzneimittels in der Veterinären Praxis verlangt keine Sicherheitsmassnahmen. The application of the medicament according to the invention to the therapeutic goal does not exclude the regulation of animals from other means of pathogenetic therapy apart from the oral introduction of antibiotics. In the recommended doses, it causes no complications and has no side effects. There are no contraindications to the use of the medicament according to the invention. The use of the drug in veterinary practice does not require any safety measures.

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel wurde zwecks Prophylaxe und Behandlung der gastrointestinalen Erkrankungen des landwirtschaftlichen Jungviehs untersucht. Zum prophylaktischen Ziel wurde das Arzneimittel bei 328 neugeborenen Kälbern verwendet. Die Verwendung des erfindungsgemässen Arzneimittels wurde folgenderweise verwirklicht. Der Ampulleninhalt (300 bis 400 Mrd. Mikrobenzellen) wurde in 11 gekochter und auf eine Temperatur von 25 bis 30 °C abgekühlter Milch oder gekochtem und auf eine Temperatur von 20 bis 30 °C abgekühltem Wasser vermischt und den Tieren individuelll in den ersten 2 bis 3 Stunden nach der Geburt zu je 200 ml, nachher wiederholt am zweiten und dritten Tag ebenso zu je 200 ml gegeben. In einzelnen Fällen wurde das Arzneimittel auch am 4. bis zum 7. Tag gegeben. Parallel wurde der Versuch an Kontrollgruppe der Tiere (185 Köpfe) durchgeführt, wo allgemein übliche prophylaktische Massnahmen getroffen wurden. Die Kälber wurden innerhalb von einem Monat beobachtet. Die Tiere wurden am Geburtstag und 30 Tage nach der Geburt gewogen. The medicament according to the invention was examined for the prophylaxis and treatment of the gastrointestinal diseases of young farm animals. For the prophylactic goal, the drug was used in 328 newborn calves. The use of the medicament according to the invention was realized as follows. The ampoule contents (300 to 400 billion microbial cells) were mixed in 11 boiled milk or boiled water cooled to a temperature of 25 to 30 ° C or boiled and cooled to a temperature of 20 to 30 ° C and the animals individually in the first 2 to 3 hours after birth, 200 ml each, then repeated on the second and third days, also given 200 ml each. In some cases, the drug was given on the 4th to 7th day. At the same time, the test was carried out on the control group of animals (185 heads), where general prophylactic measures were taken. The calves were observed within a month. The animals were weighed on the birthday and 30 days after birth.

Die Ergebnisse der Untersuchung des erfindungsgemässen Arzneimittels zeigten, dass aus 328 neugeborenen Kälbern, die das angebotene Arzneimittel erhielten, 19 davon die Störungen des Magendarmkanals aufwiesen. In der Kontrollgruppe erkrankten von 185 123 Tiere, 4 davon starben. Auf diese Weise wurde die Morbidität dank der Anwendung des angebotenen Arzneimittels um das lOfache herabgesetzt. The results of the examination of the medicament according to the invention showed that out of 328 newborn calves which received the medicament on offer, 19 of them had gastrointestinal disorders. In the control group, 185 of 123 animals fell ill, 4 of them died. In this way, morbidity was reduced tenfold thanks to the use of the drug offered.

Zum therapeutischen Ziel wurde das erfmdungsgemässe Arzneimittel an 284 Kälbern mit verschiedenen gastrointestinalen Erkrankungen angewendet, die durch enteropathoge-ne Stämme von Kolibakterium, durch Staphylokokkus, Proteus, Klebsiella, Salmonella induziert wurden. Das erfmdungsgemässe Arzneimittel wurde folgenderweise verwendet. Der Ampulleninhalt (300 bis 400 Mrd. Mikrobenzellen) wurde in 11 gekochter und auf eine Temperatur von 25 bis 30 °C abgekühlter Milch oder gekochtem und auf eine Temperatur von 25 bis 30 °C abgekühltem Wasser vermischt und den Tieren bis zur Genesung (gewöhnlich innerhalb von 4 bis 5 Tagen) gegeben. Im Ergebnis der Anwendung des angebotenen Arzneimittels zum therapeutischen Ziel überlebten 279 von 284 Tieren. In den Kontrollgruppen aus 134 Tieren, die mit Antibiotika, Chemotherapeutika, Gräserdekokten und anderen Methoden behandelt wurden, gingen 18 Tiere zugrunde. The medicinal product according to the invention was applied to 284 calves with various gastrointestinal diseases, which were induced by enteropathogenic strains of coli bacteria, by staphylococcus, proteus, klebsiella, salmonella. The medicament according to the invention was used as follows. The ampoule contents (300 to 400 billion microbial cells) were mixed in 11 boiled milk or water cooled to a temperature of 25 to 30 ° C or boiled and cooled to a temperature of 25 to 30 ° C and the animals until recovery (usually inside from 4 to 5 days). As a result of the application of the offered drug to the therapeutic target, 279 out of 284 animals survived. In the control groups of 134 animals treated with antibiotics, chemotherapy drugs, grass decoctions and other methods, 18 animals died.

Somit ist das Überleben der Tiere unter Ausnutzung des Thus the survival of the animals is taking advantage of the

Arzneimittels um 12% höher, als unter Ausnutzung der allgemein üblichen Massnahmen. Drug is 12% higher than using the usual measures.

Auf Grund der durchgeführten Untersuchungen wies das erfmdungsgemässe Arzneimittel eine hohe therapeutisch-s prophylaktische Effektivität auf. Das Arzneimittel wird durch ein hohes antagonistisches Wirkungsspektrum in bezug auf verschiedene Arten der Mikroorganismen — der Erreger von gastrointestinalen Erkrankungen des Viehs gekennzeichnet. Das Arzneimittel trägt zur Erhöhung der io Schutzreaktionen des tierischen Organismus bei (die Induktion des endogenen Interferons, die Erhöhung der Phagozy-tenaktivität der Blutleukozyten). Die Anwendung des Arzneimittels ist einfach, es ist unschädlich und ungefährlich, verlangt keine Veränderung der Technologie der Fütterung 15 und Aufzucht des neugeborenen Viehs. On the basis of the investigations carried out, the medicament according to the invention had a high therapeutic-prophylactic effectiveness. The drug is characterized by a high antagonistic spectrum of activity in relation to various types of microorganisms - the causative agent of gastrointestinal diseases in cattle. The drug helps to increase the protective reactions of the animal organism (induction of endogenous interferon, increase in phagocytic activity of blood leukocytes). The application of the drug is simple, it is harmless and harmless, does not require any change in the technology of feeding 15 and rearing of newborn cattle.

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel wird folgenderweise hergestellt. The medicament according to the invention is produced as follows.

Die Kulturen des Stammes Bac. subtilis TsMPM Nr. V-2335 und Bac. licheniformis TsMPM Nr. V-2336 wer-20 den vereinzelt innerhalb von 18 Stunden und 12 Tagen auf dem Würzeagar bei einer Temperatur von 28 °C gezüchtet. Die gewachsenen Biomassen der Kulturen werden mit sterilem Leitungswasser abgewaschen und es werden Suspensionen bereitgestellt, die 150 bis 200 Mrd. Mikrobenzellen in 25 1 ml enthalten. Es werden gleiche Volumina der 12 Tage alten und der 18 Stunden alten Kultur Bac. subtilis TsMPM Nr. V-2335 und besonders gleiche Volumina der 12 Tage alten und 18 Stunden alten Kultur Bac. licheniformis TsMPM Nr. V-2336 vereinigt. Cultures of the Bac strain. subtilis TsMPM No. V-2335 and Bac. licheniformis TsMPM No. V-2336 are individually grown within 18 hours and 12 days on the wort agar at a temperature of 28 ° C. The grown biomass of the cultures are washed off with sterile tap water and suspensions are provided which contain 150 to 200 billion microbial cells in 25 1 ml. Equal volumes of the 12-day-old and the 18-hour-old culture Bac. subtilis TsMPM No. V-2335 and particularly equal volumes of the 12-day and 18-hour-old culture Bac. licheniformis TsMPM No. V-2336 united.

30 Nachher wird das Präparat bei folgenden Komponentenverhältnissen in Gew.% hergestellt: die Biomasse des Stammes Bac. subtilis TsMPM Nr. V-2335 45 bis 60; die Biomasse des Stammes Bac. licheniformis TsMPM Nr. V-2336 15 bis 20; der Füllstoff — alles übrige. 30 Afterwards the preparation is manufactured in the following component ratios in% by weight: the biomass of the Bac strain. subtilis TsMPM No. V-2335 45 to 60; the biomass of the Bac strain. licheniformis TsMPM No. V-2336 15 to 20; the filler - everything else.

35 Als Füllstoff wird ein Gemisch aus Blutserum des Rindviehs oder Gelatine mit Saccharose oder Glukose ausgenutzt. 35 A mixture of blood serum from cattle or gelatin with sucrose or glucose is used as filler.

Das erhaltene Gemisch wird in sterile Ampullen abgefüllt und im Kühlschrank für 24 Stunden bei einer Temperatur 40 von höchstens —20 °C untergebracht. Die Lyophilisierung des Arzneimittels wird innerhalb von mindestens 44 Stunden bei einer Temperatur von —20 °C bis +20 °C durchgeführt. Nach der Lyophilisierung werden die Ampullen zugeschmolzen. The mixture obtained is filled into sterile ampoules and stored in the refrigerator for 24 hours at a temperature 40 of at most -20 ° C. The lyophilization of the drug is carried out within a period of at least 44 hours at a temperature of from -20 ° C to +20 ° C. After the lyophilization, the ampoules are sealed.

45 Das angebotene Arzneimittel hält die Aktivität bei einer längeren Aufbewahrung innerhalb von mindestens 2 Jahren aufrecht. 45 The medicinal product on offer maintains activity for longer periods of time within at least 2 years.

Zum besseren Verständnis der vorliegenden Erfindung werden folgende konkrete Varianten der Zusammensetzung so des angebotenen Arzneimittels, die Prüfung dessen Unschädlichkeit und spezifischer Aktivität angeführt. For a better understanding of the present invention, the following specific variants of the composition of the drug offered, the testing of its harmlessness and specific activity are given.

Beispiel 1. Example 1.

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel folgender Zusam-55 mensetzung in Ma.%: The medicament according to the invention with the following composition in% by mass:

Biomasse des Stammes Bac. subtilis TsMPMP Nr. V-2335 45 Biomass of the Bac strain. subtilis TsMPMP No. V-2335 45

Biomasse des Stammes Bac. licheniformis TsMpM Nr. V-2336 20 60 Blutserum des Rindviehs 32 Saccharose 3 Biomass of the Bac strain. licheniformis TsMpM No. V-2336 20 60 blood serum of cattle 32 sucrose 3

Alle Komponenten werden vermischt, in sterile Ampullen zu je 2 ml abgefüllt, für 24 Stunden bei einer Temperatur von höchstens —20 °C untergebracht und dann innerhalb 65 von mindestens 44 Stunden bei einer Temperatur von —20 bis +20 °C lyophilisiert. Nach der Lyophilisierung werden die Ampullen zugeschmolzen. Es werden die Unschädlichkeit und die spezifische Aktivität des Arzneimittels geprüft. All components are mixed, filled into sterile ampoules of 2 ml each, stored for 24 hours at a temperature of not more than -20 ° C and then lyophilized within 65 of at least 44 hours at a temperature of -20 to +20 ° C. After the lyophilization, the ampoules are sealed. The harmlessness and the specific activity of the drug are checked.

5 5

674 149 674 149

Die Unschädlichkeitsprüfung wird nach folgendem Test durchgeführt: bei der peroralen Einführung der 10%igen wässrigen Arzneimittellösung mindestens 5 Mäusen von 18 bis 22 g Körpergewicht in einer Menge von 5000 mg pro 1 kg lebendige Masse müssen alle Mäuse am Leben und klinisch gesund während 3 Beobachtungstage bleiben. The harmlessness test is carried out according to the following test: when the 10% aqueous pharmaceutical solution is introduced orally, at least 5 mice with a body weight of 18 to 22 g in an amount of 5000 mg per 1 kg of living mass, all mice must remain alive and clinically healthy for 3 days of observation .

Die Prüfung der spezifischen Aktivität wird folgenderweise durchgeführt. Es werden antagonistische Eigenschaften der Assoziation der Mikrobenzellen, die dem Arzneimittel angehören, in bezug auf eine Reihe von Test-Mikroorganismen untersucht (Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Candida tropicalis). The specific activity is checked as follows. Antagonistic properties of the association of the microbial cells belonging to the drug with respect to a number of test microorganisms (Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Candida tropicalis) are examined.

Um die antagonistische Aktivität zu prüfen, wird die Assoziation der Kulturen, die dem Arzneimittel angehören, auf die Petrischale mit dem Nährmedium Nr. 2 nach Gause strichartig dem Durchmesser entlang ausgesäet und nach 48 Stunden langem Wachstum wird bei einer Temperatur von 37 °C parallel zu der aufgewachsenen Assoziation die Suspension der Test-Mikroorganismen, die 200 Millionen Mi-kronemzellen enthält, strichweise aufgetragen. Nach 18 Stunden langem Wachstum bei einer Temperatur von 37 °C müssen die Hemmungszonen des Wachstums der Test-Kultur mindestens 10 bis 15 mm betragen. In order to test the antagonistic activity, the association of the cultures belonging to the drug is sown in a line along the diameter on the Petri dish with the nutrient medium No. 2 according to Gause and after 48 hours of growth at a temperature of 37 ° C. becomes parallel to the grown association, the suspension of the test microorganisms, which contains 200 million micro-kronem cells, plotted in strokes. After 18 hours of growth at a temperature of 37 ° C, the zones of inhibition of growth of the test culture must be at least 10 to 15 mm.

Die Prüfungsergebnisse sind in der Tabelle dargestellt. The test results are shown in the table.

Beispiel 2. Example 2.

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel folgender Zusammensetzung in Ma. % : The medicament according to the invention with the following composition in dimensions. %:

Biomasse des Stammes Bac. subtilis TsMPM Nr. V-2335 60 Biomass of the Bac strain. subtilis TsMPM No. V-2335 60

Biomasse des Stammes Bac. licheniformis TsMPMP Nr. V-2336 20 5%ige Gelatinelösung 15 Glukose 5 Biomass of the Bac strain. licheniformis TsMPMP No. V-2336 20 5% gelatin solution 15 glucose 5

Die Herstellung und die Prüfung des Arzneimittels werden ähnlich mit dem Beispiel 1 durchgeführt. Die Prüfungsergebnisse sind in der Tabelle dargestellt. The preparation and testing of the drug are carried out similarly to Example 1. The test results are shown in the table.

Beispiel 3. Example 3.

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel folgender Zusammensetzung in Ma.%: The medicament according to the invention with the following composition in% by mass:

Biomasse des Stammes Bac. subtilis TsMPM Nr. V-2335 50 Biomass of the Bac strain. subtilis TsMPM No. V-2335 50

Biomasse des Stammes Bac. licheniformis TsMPM Nr. V-2336 15 Blutserum des Rindviehs 32 Saccharose 3 Biomass of the Bac strain. licheniformis TsMPM No. V-2336 15 blood serum from cattle 32 sucrose 3

Beispiel 4. Example 4.

Biomasse des Stammes Bac. subtilis s TsMPM Nr. V-2335 55 Biomasse des Stammes Bac. licheniformis TsMPM Nr. V-2336 20 5%ige Gelatinelösung 21 Saccharose 4 Biomass of the Bac strain. subtilis s TsMPM No. V-2335 55 biomass of the strain Bac. licheniformis TsMPM No.V-2336 20 5% gelatin solution 21 sucrose 4

io Die Herstellung und die Prüfung des Arzneimittels werden ähnlich mit dem Beispiel 1 durchgeführt. Die Prüfungsergebnisse sind in der Tabelle dargestellt. io The preparation and testing of the drug are carried out similarly to Example 1. The test results are shown in the table.

Beispiel 5. Example 5.

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel folgender Zusam- The medicament according to the invention of the following

ls mensetzung in Ma.%: % as a percentage:

Biomasse des Stammes Bac. subtilis TsMPM Nr. V-2335 52 Biomasse des Stammes Bac. licheniformis TsMPM Nr. V-2336 18 20 Blutserum des Rindviehs 25 Glukose 5 Biomass of the Bac strain. subtilis TsMPM No. V-2335 52 biomass of the strain Bac. licheniformis TsMPM No. V-2336 18 20 cattle blood serum 25 glucose 5

Die Herstellung und die Prüfung des Arzneimittels werden ähnlich mit dem Beispiel 1 durchgeführt. Die Prüfungs-ergebnisse sind in der Tabelle dargestellt. The preparation and testing of the drug are carried out similarly to Example 1. The test results are shown in the table.

Beispiel 6. Example 6.

Biomasse des Stammes Bac. subtilis Biomass of the Bac strain. subtilis

TsMPM Nr. V-2335 58 TsMPM No. V-2335 58

30 30th

Biomasse des Stammes Bac. licheniformis TsMPM Nr. V-2336 17 Blutserum des Rindviehs 22 Saccharose 3 Biomass of the Bac strain. licheniformis TsMPM No. V-2336 17 blood serum from cattle 22 sucrose 3

3S Die Herstellung und die Prüfung des Arzneimittels werden ähnlich mit dem Beispiel 1 durchgeführt. Die Prüfungsergebnisse sind in der Tabelle dargestellt. 3S The manufacture and testing of the drug are carried out similarly to Example 1. The test results are shown in the table.

Beispiel 7. Example 7.

4o mensetzung in Ma.%: 4o measurement in%:

Biomasse des Stammes Bac. subtilis TsMPM Nr. V-2335 45 Biomass of the Bac strain. subtilis TsMPM No. V-2335 45

Biomasse des Stammes Bac. licheniformis TsMPM Nr. V-2336 15 45 Blutserum des Rindviehs 37 Glukose 3 Biomass of the Bac strain. licheniformis TsMPM No. V-2336 15 45 blood serum from cattle 37 glucose 3

Tabelle. Ergebnisse der Prüfung des erfindungsgemässen Arzneimittels Table. Results of testing the medicament according to the invention

Präparate des erfindungsgemässen Unschädlichkeit des Antagonistische Aktivität (Ausmass der Hemmungs- Preparations of the harmlessness of the antagonistic activity according to the invention (extent of inhibition

Arzneimittels gemäss Beispielen Arzneimittels Zonen in bezug auf Test-Kulturen in mm) Drug according to examples of drug zones in relation to test cultures in mm)

Salmonella typhimurium Salmonella typhimurium

Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus

Candida tropicalis Candida tropicalis

1 1

unschädlich harmless

10 10th

15 15

12 12

2 2nd

unschädlich harmless

11 11

16 16

13 13

3 3rd

unschädlich harmless

11 11

16 16

13 13

4 4th

unschädlich harmless

11 11

16 16

13 13

5 5

unschädlich harmless

11 11

16 16

13 13

6 6

unschädlich harmless

11 11

16 16

12 12

7 7

unschädlich harmless

10 10th

15 15

12 12

65 65

Gewerbliche Verwertbarkeit Erkrankungen des landwirtschaftlichen Jungviehs Verwen- Commercial usability Diseases of young farm animals

Das erfmdungsgemässe Arzneimittel kann als Mittel zur dung finden. The drug according to the invention can be found as a means of fertilization.

Prophylaxe und Behandlung der akuten gastrointestinalen s Prophylaxis and treatment of acute gastrointestinal s

Claims

674 149

1. Medicament for the prophylaxis and treatment of the ga-strointestinal diseases of agricultural cattle, which the bacterial biomass provides, characterized in that it contains the biomass of the strain Bacillus subtilis TsMPM No. V-2335 and the biomass of the strain Bacillus licheniformis TsMPM as bacterial biomass

No. V-2336 contains and have been deposited in the Central Museum for Industrial Microorganisms of the All-Union Research Institute for Genetics and Selection of Industrial Microorganisms and contains a filler with the following ratio of the starting components in mass%: Biomass of the strain Bacillus subtilis TsMPM No. V-2335, the 150 to 200 billion

Contains microbial cells each 1 ml, 45-60

Biomass of the strain Bacillus licheniformis TsMPM No. V-2336, which contains 150 to 200 billion microbial cells per 1 ml, 15-20 filler everything else

2. Medicament according to claim 1, characterized in that it contains as a filler a mixture of the blood serum of cattle or gelatin with sucrose or glucose.

2nd

PATENT CLAIMS

3. A method for the selection of the strains Bacillus subtilis TsMPM No. V-2335 and Bacillus licheniformis TsMPM No. V-2336 for the medicament according to claim 1 or 2 by natural selection according to the characteristics of the highest and most stable antagonistic activity when cultivated on artificial nutrient media.