Die vorii-e Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von neuen Gluoosideu der allgemeinen Formel I (siehe Formelblatt). worin R für den Propyl- oder den terL-Butylrest steht.
Erfindungsgemäss gelangt man zu den neuen Glucosiden der allgemeinen Formel I. indem man 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ss-D-glucosid (Formel II) mit einem Aldehyd der allgemeinen Formel III. worin R obige Bedeutung hat, in einem trockenen inerten Lösungsmittel in Gegenwart eines Katalysators, der gegebenenfalls wasserbindende Eigenschaften hat, unter Feuthigkeitsausschluss umsetzt. Als Katalysatoren kommen beispielsweise Sulfonsäuren, wie p-Toluosulfonsäure oder getrocknete Kationensustaucher mit Sulfonsäuregruppen in der H+-Form in Frage.
Eine vorzugweise Ausführungsform des Verfahrens Besteht darin, dass man das freie Glucosid in ein trocknes inertes Lösungsmittel, z.B. Nitromethan, gibt und durch Zugabe von Aldehyd und Katalysator gegebenenfalls in N2-Atmosphäre zur Reaktion bringt. Die Kondensation verläuft im allgemeinen bei Temperaturen um 20 und ist nach 0,5 bis 3 Srtuden beendet. Zur Isolierung nimmt man das Reaktionsgemisch, gegebenenfalls nach Abfütrieren des ungelösten Katalysators, in einen mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel. z.B.
Chloroform, auf und schüttelt gegebenenfalls zur Entferung von wasserlöslichen Katalysatoren und Neben produkten mehrmals mit Wasser aus. Die organische Phase wird anschliessend getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand kann entweder durch Digerieren bzw. Macerieren mit Pentan. Petroläther oder Hexan oder direkt durch eine Vorchtomatographie an Kieselgel vom übershüssigen Aldehyd befret werden.
Das rohe Kondensationsprodukt wird dann in bekannter Weise durch Nachchromatographie und/oder Umkristallisieren bzw. Umfällen gereinigt.
Der für die Herstellung der neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I dienende Ausgangsstoff 4'-Demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucosid wird hergestellt, indem man 4'-Demethyl-eipodophyllotoxin (Formel IV) in einem wasserfreien, unter den Reactionsbedingugen inerten organischen Lösungsmittel bei Temperaturen von -20 bis -5 in Gegenwart eines säurebindenden Mittels mit Chlorameisensäure-benzylester zu 4'-Carbobenzoxy-4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin hierauf 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophenyllotoxin mit 2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-ss-D-glucose (Formel VI) in Gegenwart von Botrifluorid-Äthylätherat in eimen,
unter den ReaktionsBedingungen inert organischen Lösungsmittel bei einer Temperatur von unter 0 C kondensiert, hierauf aus dem auf diese Weise erhaltenen Tetra-O-acetyl-4'-ca5rbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucosid (Formel VII) die Carbobenzoxygruppe hydrogenolytisch abspaltet und das so erhaltene Tetra-O-acetyl-4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-Dglucosid (Formel VIII) einer alkoholyse in Gegenwart von wasserfreiem Zinkacetat unterwirft.
Die neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I besitzen in vitro eine hohe cytostatische Wirkung an Mastocytomzellen und Fibroblastenkulturen. Ferner zeichnen sie sich durch eine starke Wirksamkeit gegen über experimentellen Tamoren, insbesondere der Miiuseleukämie L-1210, dem Sarkom 37 der Maus und dem Walker-Carcinom der Ratte aus
Die neunen Verbindungen der allgemeinen Formel I können therapeutisch verwendet werden zur Bekämpfung pathologischer Prozesse, welche mit Zellvermehrung einhergehen,z.B. maligne Neoplasmen.
Die Dosierung der neuen Verbindungen der allge- meinen Formel I variiert ungefähr zwischen 1 und 50 mg pro Tag.
Die neuen Verbindungen können als Arzneimittel allein oder in entsprechenden arzneiformen für orale enterale oder paranterale Verabreichung verwendet werden. Zwecks Herstellung geeigneter Arzneiformen werden diese mit organischen oder anorganischen, pharmakologisch indifferenten Hilfsstoffen evrarbeitet. Als Hilfsstoffe werden verwendet z.B.
für Tabletten und Dragees: Milchzucker, Stärke, Talk,
Stearinsäure usw.
für Sirupe: Rohrzucker-, Invertzucker-, Glucoselösun- genua.
für Injektionspraparate: Wasser, Alkohole, Glycerin, pfanzliche Öle und dgl.
für Suppositorien: natürliche oder gehärtete Öle, Wachse u.a. mehr.
Zudem können die Zubereitungen geeignete Konservicrungs-, Stabilisierrungs-, Netzmittel, Lösungsvermitteler, Süss- und Farbstoffe, usw. enthalen.
In den nachfolgenden Beispielen, welche die Ausführung des Verfahrens erläutern, den Umfang der Erfindung aber in keiner Weise einschränken sollen, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden. Die Schmelzbzw. Zersetzungspunkte sind auf dem Kofler-Block be stimmt.
EMI1.1
EMI2.1
EMI2.2
Beispiel I
4'-Demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-butylidenglucosid
1,5 g trocknes 4'-Demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D -glucosid werden in 60 ml Nitromethan suspendiert.
Hierauf setzt man 1,2 ml n-Butyraldehyd (frisch destilliert) und anschliessend 150 mg p-Toluolsulfonsäure zu.
Die Luft im Kolben wird mit Stickstoff verdrängt und das Reactionsgemisch unter Feuchtigkeitsau:sschluss bei
Raumtemperatur gerührt. Der Verlauf der Kondensa- tion wird dünnschichtromatographisch auf Kieselgelplatten mit a) Chloroform + 6% Methanol, b) Chloro- form-Methanol-Wasser(70:25:5) verfolg. (die Sichtbarmachung der Flechn erfolgt durch Besprühen mit einer 0,2-proz. Cer-(IV)-sulfatlösung in 50-proz. Schwefelsäure und Erwärmen auf 130 ). Nach 21/4 Stunden werden noch 1,2 ml Butyraldehyd zugegeben. Nach 7,5 Stunden verdünnt man die rosagefärbte Suspension mit
500 ml Chloroform und schüttelt fünfmal mit je 25 ml Wasser aus.
Die organ,ische Phase wird nach Trocknen über Natriumsulfat im Vakuum eingedampft und liefert amorphes Material, das an 110 g Kieselgel Merch chromatographiert wird. Als Elutionsmittel dient durchgehend Chloroform + 1% Methanol. Die im Dünnschichtchromatogramm einheitlichen Fraktionen werden vereinigt und in 3 ml heissem Alkohol gelöst. Die Substanz kristallisiert spontan und liefert 4'-Demethyl-epi- podophyllotoxin-ss-D-butyliden-glucosid als farboses Kristallisat vom Smp. 170-176 . [ & D22 = -100,1 (c = 0,754 in Chloroform).
Beispiel 2
4'-Demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-pivalyliden glucosid
1,5 g trockenes 4'-Demethyl-eipodophyllotoxin-ss- -D-glucosid werden in 30 ml Nitromethan suspendiert und anschliessend 1,5 ml Pivalaldehyd und 300 mg p Toluolsulfonsäure zugegeben. Die Utt im Kolben wird mit Stickstoff verdrängt und das Reaktionsgemisch un ter Feuchtigkeitsausschluss gerührt. Der Verlauf der Kondensationsreaktion wird diinnschichtchromatographisch auf Kiesselgelplatten mit Chloroform + 15% Me thanol als Fliessmittel verfolgt. Nach ca. 45 Minuten entsteht eine klare Lösung und der Ansatz wird wie in
Beispiel 2 aufgearbeitet.
Der erhaltene Chloroformex- trakt (mit Wasser neutral gewaschen) wird über Na triurnsulfat getrocknet und eingedampft. Erhalten wird ein Öl das 100 g Kieselgel Merck chromatogra phiert wird. Nach Abtrennung des Pivalaldehyds (Chlo roform-Extrakt) eluiert man die 1testsubstanz mit Chlo roform + 2% Methanol. Man erhält Mischfraktionen und im Dünnschichtchromatogramm einheitliches 4'-De- methyl-epipodophyllotoxin- > pivaly}iden-glucosld. Zur
Analyse wird die Substanz in 2 ml Aceton gelöst und diese Lösung zu 200 ml vorgelegtem Pentan unter Rüh ren zugetropft. Es wird ein farbloses amorphes Pulver vom Doppel-Smp. 162-165 /173-177 erhalten, [ & D20 = -95,5 (c 0 0,0775 in Chloroform).
Der für die Herstellung der nenen Verbindungen der allgemeinen Formel I dienende Ausgangsstoff 4'-Deme thyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucosid wind wie in den, in den folgenden Beispiel 3,4,5,6 und 7 beschriebe nen Verfahren hergestellt.
Beispiel 3
4'-Demethyl-eipodophyllotoxin
2 g 4'-Demethyl-podophyllotoxin werden in 25 ml
Aceton und 15 ml Wasser gelöst und nach Zusatz von
5 ml konz. Salzsäure 2 Stunden unter Rückfluss er wärmt. Danach wird die Säure mit festem Iiariumcar- bonat neutralisiert, filtriert und das Filtrat im Vakuum bei 40 vom Aceton befreit. Das ausgefallene Material wird in Chloroform + 5% Aceton aufgenommen, die Lösung über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der verbleibende Rückstand wird an Kiesegel mit Chloroform + 1% Methanol chromatographiert, wobei man zuerst geringe Mengen Verunreinigungen, dann reines 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin u.
schliesslich unumgesetztes Ausgangsmaterial erhält. Kristallisation der reinen Fraktionen von 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin erfolgt aus Chloroform und Methanol.
Smp. 228-2300, [a]D = -69,8 (c = 0.630 in Chloroform).
Beispiel 4
4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin
60 g staubfein pulverisiertes 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin werden in 1000 ml wasserfreiem Äthylenchlorid suspendiert und nach Versetzen mit 19 ml abs.
Pyridin auf - 100 abgekühlt. Unter Rühren und FeuchmgKeitsausschluss wird bei -10 innert 2,5 Stunden eine Lösung von 34 g Chlorameisensäurebenzylester in 100 ml Äthylenchlorid zugetropft und danach eine weitere halbe Stunde reagieren gelassen. Anschliessend wird die Reaktionslösung mit Wasser gewaschen, die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet, im Vakuum eingedampft und der Rückstand im Hochvakuum bei 70-80 getrocknet. Kristallisation des Rohproduktes aus Aceton Äther und dann zweimal aus Methanol liefert 4'-Carbo- benzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin vom Doppel schmeltzpunkt 117-119 /202-205. Durch Trocknen im Hochvakuum zuerst bei 95-110 und dann bei 130 oder Kristallisation aus Aceton-Äther wird die lösungsmittelfreie Form vom Smp. 201-2040, [ & D21 = 43,90 (c = 0,535) in CHCl3, erhalten.
Beispiel 5 Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4' -demethyl- eipodophyllotoxin-ss-D-glucosid
26,8 g 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin werden unter Erwärmen in 70 ml Äthylenchlorid gelöst. Die Lösung wird auf +15 abgekühlt und unter Rühren 26,0 g 2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-ss-D-glucose zugesetzt. Sdbald sich der überwiegende Teil der Tetraacetyl -ss-D-glucose gelöst hat, wird rasch auf - 11 bis - 120 unter Feuchtigkeitsausschluss gekühlt. Ungeachtet geringer Mengen ungelöster Ausgangsverbindungen tropft man dann bei - 10 bis - 120 Innentemperatur 17,5 ml auf -10 vorgekühltes Bortrifluorid-Äthyllätherat (48% BF3) im Verlauf von 10 Minuten zu und rührt anschliessend noch 40 Minuten bei - 100. Danach wird unter Rühren und Kühlung ein Gemisch von 17,5 ml abs.
Pyridin und 35 ml Äthylenchlorid zugetropft und nach Zusatz von weiteren 200 ml Äthylenchlorid viermal mit je 100 ml Wasser ausgeschüttelt. Die organische Phase wird nach Trocknung über Natriumsulfat im Vakuum eingedampft und der Rückstand im Hochvakuum bei 700 getrocknet. Das Rohprodukt löst man in 125 ml heissem Äthanol, versetzt unter Rühren mit 375 ml Wasser und rührt unter äusserer Kühlung mit Eis-Wasser, bis sich die anfänglich schmierige und klumpige Fällung in ein sandiges Pulver umgewandelt hat. Danach saugt man die Fällung ab, wäscht mit Äthanol-Wasser-Gemisch (1: 3) und trocknet im Hochvakuum bei 700. Dieses Rohprodukt löst man in 300 ml heissem Methanol, fil triert von wenig ungelösten Flocken ab und dampft das Filtrat im Vakuum ein.
Nach Trocknung des Rückstandes im Hochvakuum bei 700 erhält man Tetra-O-acetyl -4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss -glucosid als weissen Schaum. [ & D20 = - 41,70 (CHCIs).
Zur weiteren Reinigung kann aus Benzol-Pentan oder Benzol-Cyclohexan-Gemisch kristallisiert werden. Reinstes Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ss-D-glucosid schmiltz bei 167-169 .[ & D20 = -46,6 (CHCl3).
Beispiel 6
Tetra-O-acetyl-4' -demethyl-epipodophyllotoxin- -ss-D-glucosid
Zur Abspaltung des Carbobenzoxyrestes aus Tetra -O-acetyl-4' -carbobenzoxy -4' - demethyl-epipodophyllo toxin-,B-D-glucosid werden 13,4 g dieser Verbindung in 100 ml Aceton-Äthanol (1: 2) gelöst, mit 0,5 ml Eisessig und 2 g Palladium-Kohle (mit 10% Pd) versetzt und bei 200 hydriert. Danach filtriert man vom Katalysator ab, wäscht diesen mit warmem Aceton-Methanol- Gemisch nach und dampft das Filtrat im Vakuum ein.
Der Rückstand wird mit 100 ml siedend-heissem Äthanol übergossen, kristallisieren gelassen und die Kristalle nach Absaugen und Waschen mit Methanol im Vakuum getrocknet. Reinstes Tetra-O-acetyl-4'-demethyl-eipo dophyllotoxin-lp-D-glucosid kristallisiert in feinen Nadeln vom Smp. 225-227 ,[ & D21 = -64,4 (c = 1,024) in Chloroform.
Beispiel 7
4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ss-D-glucosid
2,0 g des nach Beispiel 6 erhaltenen Tetra-O-acetyl -4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucoskl und 1 g wasserfreies Zinkacetat werden in 30 ml absolutem Methanol 25 Stunden unter Rückfluss erwärmt. Anschliessend wird der entstandene weisse Niederschlag durch Zusatz von wenigen ml Eisessig und leichtem Erwärmen in Lösung gebracht, das Lösungsmittel im Vakuum bei 400 entfernt und der Rückstand in 50 ml Chloroform Butanol (4:1) aufgenommen. Die organische Phase wäscht man zweimal mit je 10 mi Wasser, dampft nach Trocknung über Natriumsulfat im Vakuum ein und chromatographiert den Rückstand an Kieselgel.
Isopropylacetat-Methanol (9:1), wassergesättigt, eluiert zuerst unpolare Anteile, ldann reines 4'-Demethyl-epipodophyl lotoxin- -D-glucosid. Die einzelnen Fraktionen werden im Dünnschichtchromatogramm auf Kieselgeiplatten mit dem Fliessmittel Isopropylacetat-Methanol (4:1), wassergesättigt, untersucht und Glucosidfractionen vereinigt und zweimal aus Methanol kristallisiert. 4'-Demethyl- eipodophyllotoxin-ss-D-glucosid schmilzt bei 2222300, eine andere Modifikation bei 262-264 , c]D21 = - 880 (c = 0,507) in Methanol.
The prior invention relates to a process for the preparation of new gluoosides of the general formula I (see formula sheet). where R stands for the propyl or the terL-butyl radical.
According to the invention, the new glucosides of the general formula I are obtained by mixing 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ss-D-glucoside (formula II) with an aldehyde of the general formula III. wherein R has the above meaning, in a dry inert solvent in the presence of a catalyst which optionally has water-binding properties, with the exclusion of moisture. Suitable catalysts are, for example, sulfonic acids, such as p-toluosulfonic acid or dried cation exchangers with sulfonic acid groups in the H + form.
A preferred embodiment of the method consists in placing the free glucoside in a dry inert solvent, e.g. Nitromethane, and reacts by adding aldehyde and catalyst, if necessary in an N2 atmosphere. The condensation generally takes place at temperatures around 20 and is complete after 0.5 to 3 hours. For isolation, the reaction mixture is taken, if appropriate after the undissolved catalyst has been filtered off, in a water-immiscible solvent. e.g.
Chloroform, and, if necessary, shakes with water several times to remove water-soluble catalysts and by-products. The organic phase is then dried and evaporated in vacuo. The residue can either be digested or macerated with pentane. Petroleum ether or hexane or can be freed from excess aldehyde directly by pre-chromatography on silica gel.
The crude condensation product is then purified in a known manner by post-chromatography and / or recrystallization or reprecipitation.
The starting material 4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucoside used for the production of the new compounds of general formula I is prepared by adding 4'-demethyl-eipodophyllotoxin (formula IV) in an anhydrous organic solvent which is inert under the reaction conditions at temperatures of -20 to -5 in the presence of an acid-binding agent with benzyl chloroformate to give 4'-carbobenzoxy-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin, then 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophenyllotoxin with 2,3 4,6-Tetra-O-acetyl-ss-D-glucose (formula VI) in the presence of botrifluoride ethyl etherate in
condensed under the reaction conditions inert organic solvent at a temperature of below 0 C, then from the tetra-O-acetyl-4'-ca5rbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucoside (formula VII) obtained in this way Carbobenzoxy group is split off hydrogenolytically and the tetra-O-acetyl-4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucoside (formula VIII) obtained in this way is subjected to alcoholysis in the presence of anhydrous zinc acetate.
The new compounds of general formula I have a high cytostatic effect in vitro on mastocytoma cells and fibroblast cultures. Furthermore, they are distinguished by a strong effectiveness against experimental tamors, in particular miiuseleukemia L-1210, sarcoma 37 in mice and Walker's carcinoma in rats
The new compounds of the general formula I can be used therapeutically to control pathological processes which are associated with cell proliferation, e.g. malignant neoplasms.
The dosage of the new compounds of general formula I varies approximately between 1 and 50 mg per day.
The new compounds can be used as medicaments alone or in corresponding medicament forms for oral enteral or paranteral administration. In order to produce suitable drug forms, these are processed with organic or inorganic, pharmacologically indifferent auxiliary substances. The auxiliary materials used are e.g.
for tablets and dragees: lactose, starch, talc,
Stearic acid, etc.
for syrups: cane sugar, invert sugar, glucose solutions, etc.
For injection preparations: water, alcohols, glycerine, vegetable oils and the like.
for suppositories: natural or hydrogenated oils, waxes, etc. more.
In addition, the preparations can contain suitable preservatives, stabilizers, wetting agents, solubilizers, sweeteners and colorants, etc.
In the following examples, which illustrate the implementation of the process but are not intended to restrict the scope of the invention in any way, all temperatures are given in degrees Celsius. The melting or Decomposition points are determined on the Kofler block.
EMI1.1
EMI2.1
EMI2.2
Example I.
4'-Demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-butylidene glucoside
1.5 g of dry 4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D -glucoside are suspended in 60 ml of nitromethane.
1.2 ml of n-butyraldehyde (freshly distilled) and then 150 mg of p-toluenesulfonic acid are then added.
The air in the flask is displaced with nitrogen and the reaction mixture with exclusion of moisture
Room temperature stirred. The course of the condensation is followed by thin layer chromatography on silica gel plates with a) chloroform + 6% methanol, b) chloroform-methanol-water (70: 25: 5). (the flechn is made visible by spraying it with a 0.2 percent cerium (IV) sulfate solution in 50 percent sulfuric acid and heating to 130). After 21/4 hours, 1.2 ml of butyraldehyde are added. After 7.5 hours, the pink-colored suspension is diluted with
500 ml of chloroform and shake out five times with 25 ml of water each time.
After drying over sodium sulfate, the organic phase is evaporated in vacuo and yields amorphous material which is chromatographed on 110 g of Merch silica gel. Chloroform + 1% methanol is used throughout as eluant. The fractions that are uniform in the thin-layer chromatogram are combined and dissolved in 3 ml of hot alcohol. The substance crystallizes spontaneously and gives 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ss-D-butylidene-glucoside as colorless crystals with a melting point of 170-176. [& D22 = -100.1 (c = 0.754 in chloroform).
Example 2
4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-pivalylidene glucoside
1.5 g of dry 4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss- -D-glucoside are suspended in 30 ml of nitromethane and then 1.5 ml of pivalaldehyde and 300 mg of p-toluenesulphonic acid are added. The Utt in the flask is displaced with nitrogen and the reaction mixture is stirred under exclusion of moisture. The course of the condensation reaction is followed by thin-layer chromatography on silica gel plates with chloroform + 15% methanol as the flow agent. After approx. 45 minutes a clear solution results and the approach is as in
Example 2 worked up.
The chloroform extract obtained (washed neutral with water) is dried over sodium sulfate and evaporated. An oil is obtained which is chromatographed on 100 g of Merck silica gel. After the pivalaldehyde has been separated off (chloroform extract), the test substance is eluted with chloroform + 2% methanol. Mixed fractions and 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-> pivaly} iden-glucosld, which is uniform in the thin-layer chromatogram, are obtained. To
Analysis, the substance is dissolved in 2 ml of acetone and this solution is added dropwise to 200 ml of initially charged pentane with stirring. A colorless amorphous powder with a double melting point is obtained. 162-165 / 173-177 obtained, [& D20 = -95.5 (c 0 0.0775 in chloroform).
The starting material 4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucoside used for the preparation of the compounds of general formula I is prepared as in the process described in Examples 3, 4, 5, 6 and 7 below.
Example 3
4'-demethyl-eipodophyllotoxin
2 g of 4'-demethyl-podophyllotoxin are in 25 ml
Acetone and 15 ml of water and dissolved after the addition of
5 ml conc. Hydrochloric acid is heated under reflux for 2 hours. The acid is then neutralized with solid iiarium carbonate, filtered and the filtrate is freed from acetone in vacuo at 40 °. The precipitated material is taken up in chloroform + 5% acetone, the solution is dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo. The remaining residue is chromatographed on silica gel with chloroform + 1% methanol, first small amounts of impurities, then pure 4'-demethyl-epipodophyllotoxin u.
ultimately unreacted starting material is obtained. Crystallization of the pure fractions of 4'-demethyl-epipodophyllotoxin takes place from chloroform and methanol.
M.p. 228-2300, [a] D = -69.8 (c = 0.630 in chloroform).
Example 4
4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin
60 g of powdered 4'-demethyl-epipodophyllotoxin are suspended in 1000 ml of anhydrous ethylene chloride and, after adding 19 ml of abs.
Pyridine cooled to -100. While stirring and excluding moisture, a solution of 34 g of benzyl chloroformate in 100 ml of ethylene chloride is added dropwise at -10 within 2.5 hours and then allowed to react for a further half an hour. The reaction solution is then washed with water, the organic phase is dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo and the residue is dried in a high vacuum at 70-80. Crystallization of the crude product from acetone, ether and then twice from methanol gives 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin with a double melting point of 117-119 / 202-205. Drying in a high vacuum first at 95-110 and then at 130 or crystallization from acetone-ether gives the solvent-free form of melting point 201-2040, [& D21 = 43.90 (c = 0.535) in CHCl3.
Example 5 Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4 '-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucoside
26.8 g of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin are dissolved in 70 ml of ethylene chloride with heating. The solution is cooled to +15 and 26.0 g of 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-ss-D-glucose are added with stirring. As soon as most of the tetraacetyl -ss-D-glucose has dissolved, it is quickly cooled to - 11 to - 120 with exclusion of moisture. Irrespective of small amounts of undissolved starting compounds, 17.5 ml to -10 precooled boron trifluoride ethyl etherate (48% BF3) are then added dropwise at an internal temperature of -10 to -120 in the course of 10 minutes and then stirred for 40 minutes at -100 Stirring and cooling a mixture of 17.5 ml abs.
Pyridine and 35 ml of ethylene chloride were added dropwise and, after adding a further 200 ml of ethylene chloride, extracted four times with 100 ml of water each time. After drying over sodium sulfate, the organic phase is evaporated in vacuo and the residue is dried at 700 in a high vacuum. The crude product is dissolved in 125 ml of hot ethanol, 375 ml of water are added, while stirring, and the mixture is stirred with ice-water, with external cooling, until the initially greasy and lumpy precipitate has been converted into a sandy powder. The precipitate is then filtered off with suction, washed with an ethanol-water mixture (1: 3) and dried in a high vacuum at 700. This crude product is dissolved in 300 ml of hot methanol, filtered from a little undissolved flakes and the filtrate is evaporated in vacuo .
After drying the residue in a high vacuum at 700, tetra-O-acetyl -4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss -glucoside is obtained as a white foam. [& D20 = - 41.70 (CHCIs).
For further purification, it can be crystallized from benzene-pentane or a benzene-cyclohexane mixture. Purest tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ss-D-glucoside melting at 167-169. [& D20 = -46.6 (CHCl3).
Example 6
Tetra-O-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin- -ss-D-glucoside
To split off the carbobenzoxy radical from tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy -4'-demethyl-epipodophyllo toxin-, BD-glucoside, 13.4 g of this compound are dissolved in 100 ml of acetone-ethanol (1: 2), with 0 , 5 ml of glacial acetic acid and 2 g of palladium-carbon (with 10% Pd) are added and the mixture is hydrogenated at 200. The catalyst is then filtered off, washed with a warm acetone-methanol mixture and the filtrate is evaporated in vacuo.
The residue is poured over 100 ml of boiling-hot ethanol, allowed to crystallize and the crystals are dried in vacuo after suction and washing with methanol. The purest tetra-O-acetyl-4'-demethyl-eipodophyllotoxin-lp-D-glucoside crystallizes in fine needles with a melting point of 225-227, [& D21 = -64.4 (c = 1.024) in chloroform.
Example 7
4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ss-D-glucoside
2.0 g of the tetra-O-acetyl -4'-demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucose obtained according to Example 6 and 1 g of anhydrous zinc acetate are heated under reflux in 30 ml of absolute methanol for 25 hours. The resulting white precipitate is then brought into solution by adding a few ml of glacial acetic acid and gentle heating, the solvent is removed in vacuo at 400 and the residue is taken up in 50 ml of chloroform butanol (4: 1). The organic phase is washed twice with 10 ml of water each time and, after drying over sodium sulfate, evaporated in vacuo and the residue is chromatographed on silica gel.
Isopropyl acetate-methanol (9: 1), saturated with water, elutes first non-polar components, then pure 4'-demethyl-epipodophyl lotoxin- -D-glucoside. The individual fractions are analyzed in a thin-layer chromatogram on silica gel plates with the flow agent isopropyl acetate-methanol (4: 1), saturated with water, and glucoside fractions are combined and crystallized twice from methanol. 4'-Demethyl-eipodophyllotoxin-ss-D-glucoside melts at 2222300, another modification at 262-264, c] D21 = -880 (c = 0.507) in methanol.