Procédé de séparation du liquide contenant des éléments du sang d'autres éléments et dispositif pour sa mise en ouvre La présente invention a pour objets un procédé de séparation du liquide contenant des éléments du sang, tels le plasma et le sérum, d'autres éléments, dans un échantillon de sang, ainsi qu'un dispositif pratique, simple, rapide et peu coûteux pour la mise en ouvre de ce procédé.
Il est nécessaire, dans la plupart des essais et réactions immunologiques, sérologiques et chimiques effectués avec le sang de disposer de plasma et de sérum. Ce sang a été obtenu jusqu'à présent d'une manière générale par prélèvement dans une veine du bras et on sépare les globules du sérum ou du plasma par centrifugation. En raison des perfectionnements des techniques micro-chimiques, ces essais peuvent s'effectuer avec des échantillons très petits de sang, prélevés en piquant le doigt ou le lobe de l'oreille. Cette opération s'effectue généralement au moyen d'une lancette avec laquelle on prélève deux ou trois gouttes de sang permettant de recueillir une quantité utilisable de sérum ou de plasma.
On sépare alors le sérum ou le plasma en faisant couler le sang dans un tube capillaire, puis en le centrifugeant pour sé parer les globules du sang du liquide contenant les éléments. Dans ces deux opérations, la centrifugation prend beaucoup de temps et elle exige en outre un équipement spécial, du courant électrique et d'autres facilités de laboratoire.
L'invention a pour but de remédier aux diffi cultés et inconvénients des procédés antérieurs, au moyen d'un procédé de séparation du liquide conte nant les éléments tels que le sérum et le plasma à partir d'un petit échantillon de sang, dont il est facile de se servir, requérant aussi peu de temps que possible et permettant de se passer d'un appareil de centrifugation ou d'un équipement de laboratoire en se servant d'un dispositif de petites dimensions, peu encombrant et peu coûteux, et qui supprime les problèmes de la contamination et de la stérilisation.
Le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'on dépose un échantillon de sang dans une portion principale d'un évidement d'un élément plan, en ce qu'on agite cet échantillon en le mélangeant avec un agent de précipitation qui s'y trouve jusqu'à ce que les éléments se séparent du sang, puis en ce qu'on incline l'élément plan pour faire couler le liquide contenant les éléments du sang de la portion principale dans la portion auxiliaire de l'évidement.
Le dispositif pour la mise en ouvre du procédé est caractérisé en ce qu'il comporte un élément plan dans la surface supérieure duquel est formé un évide ment dont la surface en retrait par rapport à la sur face supérieure est imperméable aux liquides et qui comporte une portion principale destinée à recevoir d'abord l'échantillon de sang et contient un agent de précipitation de certains éléments du sang, et une portion auxiliaire qui communique avec la portion principale et destinée à recevoir ensuite les éléments non précipités et les liquides du sang.
Le dessin annexé représente, à titre d'exemple, un mode d'exécution du dispositif pour la mise en ouvre du procédé, objet de l'invention. La fig. 1 en est une vue en perspective.
La fig. 2 est la coupe partielle suivant 2-2 de la fig. 1 observée dans la direction des flèches. La fig. 3 est la vue perspective du dispositif en position horizontale en surplomb sur le bord d'une surface de support et indiquant de quelle manière s'effectuent la première et la seconde opération du procédé de l'invention, La fig. 4 est la vue perspective analogue sur la quelle le dispositif est incliné sur la même surface de support et indiquant de quelle manière s'effectue la troisième opération du procédé de l'invention.
Le dispositif représenté dans les fig. 1 et 2 du dessin comporte un élément plan, mince, relativement peu encombrant 10, de préférence sous forme de palette ou de carte, dont la surface supérieure rela tivement plane 11 présente un évidement 12.
La surface de l'évidement en retrait au-dessous de la surface supérieure 11 de la palette est imper méable aux liquides. L'évidement comporte une por tion principale relativement grande 13, disposée plus près d'une extrémité de la palette et une portion auxiliaire relativement petite 14 communiquant avec la première et disposée plus près de l'autre extrémité de la palette.
La palette est établie en une matière elle-même inerte à l'égard des éléments du sang et imperméable aux éléments liquides ou en toute autre matière appropriée sur laquelle, ou tout au moins sur la sur face de l'évidement 12, est appliquée une couche de matière inerte à l'égard des éléments du sang et im perméable aux liquides. La palette peut être ainsi en une matière plastique, telle que le polypropylène, le polyéthylène, le polystyrène, ou en une matière plas tique polyvinylique contenant un plastifiant inerte à l'égard des éléments du sang. Cependant la palette est de préférence en une matière fibreuse, telle que le carton ou le papier journal encollé recouvert d'une couche de caséine par exemple.
La surface supé rieure totale ou au moins la portion de son évidement sont recouvertes d'une couche inerte à l'égard des éléments du sang et imperméable à ses éléments li quides, par exemple en polyéthylène, polypropylène, polystyrène ou matière plastique polyvinylique du type indiqué.
La profondeur de l'évidement 12 est suffisante pour recevoir l'échantillon initial de sang dans sa portion principale 13 lorsque la palette est horizon tale et à transférer le liquide contenant les éléments dans sa portion auxiliaire lorsqu'on l'incline suivant un certain angle, ainsi qu'on le verra plus loin.
La surface de la portion principale de l'évidement est assez étendue pour que en raison de la cohésion du sang, l'échantillon initial y reste sans couler dans sa portion auxiliaire lorsque la palette est hori zontale. La surface de la portion auxiliaire est assez étendue pour retenir le liquide contenant les élé ments du sang lorsqu'on incline la palette suivant un certain angle ainsi qu'on le verra plus loin.
Le dispositif décrit est destiné à être utilisé avec des échantillons de sang relativement petits, que l'on prélève en piquant un doigt ou le lobe de l'oreille avec une lancette. Il suffit généralement à cet effet de deux à cinq gouttes de sang. On a constaté que l'on obtient des résultats satisfaisants avec le dis- positif décrit en donnant à l'évidement une profon deur d'au moins 0,1 mm, à la surface de la portion principale de l'évidement une étendue d'environ 300 mm2 au moins et à la surface de sa portion auxi liaire une étendue d'environ 75 mm2 au moins. On verse l'échantillon initial de sang de deux à cinq gouttes, de préférence d'environ trois gouttes dans la portion principale 13 de l'évidement, dans laquelle certains de ses éléments se séparent par agglutination, coagulation ou précipitation.
A cet effet on dispose dans cette portion principale des agents qui provoquent la séparation, l'agglutination, la formation de caillots ou la précipitation de cer tains de ces éléments. Ces agents sont disposés de préférence sous forme de couche sur la surface de la portion principale 13. On désire dans certains cas recueillir le sérum, c'est-à-dire le liquide contenant les éléments du sang, sans les globules et le fibrinogène. Dans d'autres cas, on désire recueillir le plasma qui comprend le liquide contenant les éléments sans les globules mais avec le fibrinogène.
La couche servant à recueillir le sérum ou le plasma doit contenir une hémagglu- tinine appropriée, telle que la phytohémagglutinine, ou celle que l'on obtient par des procédés immuno- logiques. Si l'on désire recueillir le sérum, la couche doit aussi contenir un agent coagulant accélérant la formation du caillot de fibrinogène tel que la throm bine, ou bien cette opération peut s'effectuer plus lentement en agitant rapidement.
Lorsque l'on désire recueillir le plasma, la couche doit contenir, outre l'hémagglutinine, un agent anticoagulant, tel que l'héparine, le dicumarol, le citrate de sodium, l'oxa- late de potassium, d'ammonium, de lithium ou de sodium, ou le diamino-tétra acétate d'éthylène.
L'hémagglutinine à choisir de préférence consiste en phytohémagglutinine sensiblement pure, telle que celle que l'on prépare à partir des graines de légu mineuses. Une phytohémagglutinine qui donne d'excellents résultats est celle obtenue à partir des haricots. Mais on ne doit pas choisir d'hémaggluti- nine qui précipite la fraction de globuline. On a cons taté que l'on obtient des résultats satisfaisants en in corporant dans la portion principale de l'évidement ayant les dimensions indiquées ci-dessus, convenant à un petit échantillon de sang, c'est-à-dire de 2 à 5 gouttes, une couche d'au moins 0,3 et de préférence de 0,5 mg environ.
On peut appliquer cette couche en mélangeant une proportion d'environ 0,5 mg de phytohémagglutinine avec 0,1 cm3 de liquide salin physiologique, puis en l'étalant uniformément sur la surface de la portion principale de l'évidement et en la laissant sécher.
Lorsque l'on désire recueillir le plasma, l'agent anticoagulant à choisir de préférence consiste en héparine avec un échantillon de sang du volume pré cité. On a constaté que l'on obtient des résultats satisfaisants dans un évidement des dimensions pré citées en incorporant à la couche une proportion d'au moins 0,02 et de préférence de 0,1 mg environ d'hé parine. On peut mélanger l'héparine avec le liquide physiologique salin en même temps que la phyto- hémagglutinine et l'appliquer sur la surface de la portion principale de l'évidement.
Lorsque la palette doit servir à recueillir le sérum, l'agent de coagulation consiste de préférence en thrombine. On a constaté que l'on obtient de bons résultats en incorporant à la couche au moins 10 et de préférence 12 unités de cet agent. Ces unités sont dites unités N.I.H. et ont été établies par le National Institute of Health . On peut mélanger la thrombine avec la phytohémagglutinine dans le liquide physio logique salin et l'appliquer sur la surface de la por tion principale de l'évidement.
Les exemples suivants indiquent de quelle ma nière on peut préparer et appliquer les couches sur les palettes servant à prélever le sang et à en séparer le plasma.
Exemple 1 On prépare la couche en mélangeant les subs tances suivantes
EMI0003.0002
Phytohémagglutinine <SEP> sensiblement <SEP> pure <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,3 <SEP> mg
<tb> Héparine <SEP> ... <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> .................. <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,1 <SEP> mg
<tb> Liquide <SEP> salin <SEP> physiologique <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,1 <SEP> ce Après avoir intimement mélangé les substances, on étale le mélange uniformément sur la surface de la portion principale de l'évidement, puis on fait sécher la couche, en y formant une couche uniformé ment répartie du mélange de phytohémagglutinine, d'héparine et des sels.
On peut alors emballer la palette, avec une lancette appropriée, une tige appro priée pour agiter et une boucle ou pipette dans une enveloppe fermée, obtenant ainsi une palette prête à servir pour prélever un petit échantillon de sang et en séparer le plasma.
Exemple 2 On prépare la couche en mélangeant les subs tances suivantes
EMI0003.0003
Hémagglutinine <SEP> ....... <SEP> ....... <SEP> 0,5 <SEP> mg
<tb> Citrate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> ... <SEP> ... <SEP> 1,0 <SEP> mg
<tb> Liquide <SEP> salin <SEP> normal <SEP> ....... <SEP> . <SEP> ... <SEP> .... <SEP> 0,1 <SEP> cm3 On mélange les substances et on applique ce mélange sur la surface de la portion principale de l'évidement, puis on emballe la palette comme dans l'exemple 1.
Exemple 3 Les proportions des substances de la couche des exemples 1 et 2 donnent toute satisfaction dans les essais du sang humain et de la plupart des animaux de laboratoire. Mais lorsqu'il s'agit du sang des bo vins, on a besoin d'une quantité beaucoup plus grande. Le présent exemple convient particulièrement à l'essai du sang des bovins.
On prépare la couche en mélangeant les subs tances suivantes
EMI0003.0004
Hémagglutinine <SEP> ..... <SEP> .............. <SEP> 3,0 <SEP> mg
<tb> Héparine <SEP> .................... <SEP> . <SEP> ..... <SEP> 0,2 <SEP> mg
<tb> Liqueur <SEP> saline <SEP> normale <SEP> .............. <SEP> 0,1 <SEP> cm3 Après avoir mélangé les substances, on applique la couche et on emballe la palette comme dans l'exemple 1. Mais pour se servir de la palette, on ajoute une goutte de plus de liquide salin au moment où l'on dépose le sang dans la portion principale de l'évidement.
Les exemples suivants indiquent de quelle ma nière on peut préparer et appliquer les couches sur les évidements des palettes servant à prélever de petits échantillons de sang et à en séparer le sérum. <I>Exemple 4</I> On mélange les substances suivantes
EMI0003.0005
Phytohémagglutinine
<tb> sensiblement <SEP> pure <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,5 <SEP> mg
<tb> Thrombine <SEP> ....... <SEP> . <SEP> ...... <SEP> 10 <SEP> unités <SEP> N.I.H.
<tb> Liquide <SEP> salin <SEP> physiologique <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,1 <SEP> cm3 Après avoir mélangé les substances intimement, on étale le mélange uniformément sur la portion principale de l'évidement de la palette, puis on fait sécher la couche, qui consiste en un mélange uni forme de phytohémagglutinine, d'alun et de sel.
On peut emballer la palette ainsi préparée dans une enveloppe fermée avec une lancette, une tige pour agiter et une boucle ou pipette, en obtenant ainsi une trousse pouvant servir à prélever le sang et à en séparer le sérum.
<I>Exemple 5</I> On mélange les substances suivantes
EMI0003.0006
Hémagglutinine <SEP> .................... <SEP> 0,5 <SEP> mg
<tb> Liquide <SEP> salin <SEP> normal <SEP> ................ <SEP> 0,1 <SEP> cm3 Après avoir ainsi mélangé les substances, on les applique à la surface de la portion principale de l'évidement et on emballe la palette de la manière décrite dans l'exemple 4. Mais lorsqu'on se sert de cette palette, il est nécessaire d'agiter l'échantillon de sang plus rapidement et pendant plus longtemps (une ou deux minutes) pour former un caillot avec le fibrinogène puisque la couche ne contient pas d'agent de formation de caillot.
Il doit être bien entendu que les substances énumérées dans les exemples 1 à 5 peuvent être remplacées par d'autres hémagglutinines, agents de formation de caillots et anticoagulants. De même, il doit être bien entendu que lorsque l'on traite des échantillons de sang plus importants et que les évi dements sont plus grands, la quantité des substances de la couche doit augmenter proportionnellement. Le dispositif est employé de la manière suivante On dépose un petit échantillon de sang de 2 à 5 et de préférence de 3 gouttes, dans la portion princi pale 13 de l'évidement de la palette 10. Puis on pose la palette sur une surface horizontale telle que le dessus 26 d'une table 27.
Puis on se sert d'une tige à agiter pour agiter l'échantillon de sang tout autour de la portion principale 13 de l'évidement, en le mélangeant ainsi intimement avec l'hémagglu- tinine de la couche. Il faut avoir soin à ce propos de ne pas faire passer de sang dans la portion auxi liaire 14 de l'évidement. On continue à agiter pen dant environ 30 à 50 secondes. Pendant que l'on agite, il y a lieu d'incliner la palette et de la faire tourner pour que les globules du sang se répartissent uniformément et permettre au plasma ou au sérum de commencer à se séparer. Mais ainsi qu'il a déjà été dit, il faut avoir soin d'empêcher le sang de cou ler dans la portion auxiliaire de l'évidement.
Lorsque la palette a été préparée en vue de re cueillir le plasma, le sang se mélange aussi pendant l'opération d'agitation avec l'agent anticoagulant en évitant ainsi la formation d'un caillot de fibrinogène. Par contre, lorsque la palette a été préparée en vue de recueillir le sérum, le sang se mélange avec l'a gent coagulant, accélérant ainsi la formation du cail lot de fibrinogène.
L'hémagglutinine a pour effet, pendant l'opéra tion d'agitation d'agglutiner les globules du sang et de les précipiter dans la portion principale de l'évide ment. Si la palette a été préparée en vue de re cueillir le sérum, le fibrinogène forme aussi des caillots et se précipite pendant cette période dans la portion principale de l'évidement. Puis on pousse la palette vers le bord de la table ou surface de sup port de façon à amener la patte 17 en surplomb sur le bord en faisant coïncider la ligne de pliage 16 avec ce bord (fig. 3). Puis on rabat la patte 17 vers le bas à angle droit avec la portion principale de la palette, et on la fait revenir en arrière pour la reposer complètement sur la table (fig. 4) sur laquelle elle est ainsi supportée en position inclinée.
Le liquide contenant les éléments du sang, c'est-à-dire le plasma ou le sérum coule alors de haut en bas de la por tion principale dans la portion auxiliaire de l'évide ment. Lorsque la totalité du sérum ou du plasma s'est rassemblée dans la portion auxiliaire de l'évi dement on peut en prélever la quantité que l'on désire avec une pipette ou un tube capillaire ou avec une boucle pour effectuer les essais ou réactions immunologiques, sérologiques ou chimiques désirées. On peut faire varier la longueur de la patte de pliage 17 et l'angle d'inclinaison de la patte sur la table, lorsqu'on rabat la patte de haut en bas.
On a constaté qu'avec la palette du type représenté et décrit et présentant les dimensions indiquées, on obtient des résultats satisfaisants en prélevant des petits échantillons de sang, et en supportant la palette suivant un angle d'inclinaison d'environ 5 à 20 et de préférence de 10 à 15 .
On voit donc que le procédé a l'avantage de permettre de séparer facilement le sérum et le plasma à partir de petits échantillons de sang sans avoir besoin de dispositifs de centrifugation ou d'un équipement de laboratoire. Le dispositif pour la mise en ouvre du procédé à l'avantage de pouvoir servir en dehors du laboratoire puisque le dispositif est facile à transporter et peut servir dans un bureau ou sur place.
Method for separating liquid containing elements from blood from other elements and device for its implementation The present invention relates to a process for separating liquid containing elements from blood, such as plasma and serum, from other elements , in a blood sample, as well as a practical, simple, rapid and inexpensive device for carrying out this method.
Plasma and serum are required in most immunological, serological and chemical tests and reactions carried out with blood. This blood has heretofore been obtained generally by taking a sample from a vein in the arm and the globules are separated from the serum or plasma by centrifugation. Due to improvements in micro-chemical techniques, these tests can be performed with very small samples of blood, taken by pricking the finger or the earlobe. This operation is generally carried out by means of a lancet with which two or three drops of blood are taken to collect a usable quantity of serum or plasma.
The serum or plasma is then separated by running the blood in a capillary tube, then centrifuging it to separate the blood cells from the liquid containing the elements. In both of these operations, centrifugation is very time consuming and furthermore requires special equipment, electric power and other laboratory facilities.
The object of the invention is to remedy the difficulties and drawbacks of the prior methods, by means of a method for separating the liquid containing elements such as serum and plasma from a small sample of blood, of which it is is easy to use, requiring as little time as possible and eliminating the need for centrifuge apparatus or laboratory equipment by using a device that is small, space-saving and inexpensive, and which eliminates the problems of contamination and sterilization.
The method according to the invention is characterized in that a blood sample is deposited in a main portion of a recess of a planar element, in that this sample is stirred by mixing it with a precipitating agent which therein until the elements separate from the blood, and then tilting the planar element to flow the liquid containing the blood elements from the main portion into the auxiliary portion of the recess.
The device for implementing the method is characterized in that it comprises a planar element in the upper surface of which a recess is formed, the surface of which is set back relative to the upper surface is impermeable to liquids and which comprises a recess. main portion intended to first receive the blood sample and contains an agent for precipitating certain elements of the blood, and an auxiliary portion which communicates with the main portion and then intended to receive the non-precipitated elements and blood fluids.
The appended drawing represents, by way of example, an embodiment of the device for implementing the method, object of the invention. Fig. 1 is a perspective view.
Fig. 2 is the partial section on 2-2 of FIG. 1 observed in the direction of the arrows. Fig. 3 is the perspective view of the device in a horizontal position overhanging the edge of a support surface and showing how the first and second operation of the method of the invention are carried out, FIG. 4 is the similar perspective view in which the device is inclined on the same support surface and indicating how the third operation of the method of the invention is carried out.
The device shown in FIGS. 1 and 2 of the drawing comprises a flat, thin, relatively compact element 10, preferably in the form of a pallet or card, the relatively flat upper surface 11 of which has a recess 12.
The surface of the recessed recess below the upper surface 11 of the pallet is liquid impermeable. The recess has a relatively large main portion 13 disposed closer to one end of the pallet and a relatively small auxiliary portion 14 communicating with the first and disposed closer to the other end of the pallet.
The pallet is made of a material which is itself inert with respect to blood elements and impermeable to liquid elements or of any other suitable material on which, or at least on the surface of the recess 12, is applied a layer of material inert to the elements of the blood and impermeable to liquids. The pallet can thus be made of a plastic material, such as polypropylene, polyethylene, polystyrene, or of a polyvinyl plastic material containing a plasticizer which is inert with respect to the elements of the blood. However, the pallet is preferably made of a fibrous material, such as cardboard or sized newspaper covered with a layer of casein for example.
The total upper surface or at least the portion of its recess is covered with a layer inert with respect to the elements of blood and impermeable to its liquid elements, for example of polyethylene, polypropylene, polystyrene or polyvinyl plastic material of the type indicated.
The depth of the recess 12 is sufficient to receive the initial blood sample in its main portion 13 when the paddle is horizontal and to transfer the liquid containing the elements into its auxiliary portion when tilted at a certain angle. , as we will see later.
The surface of the main portion of the recess is large enough so that, due to the cohesion of the blood, the initial sample remains there without flowing into its auxiliary portion when the pallet is horizontal. The surface of the auxiliary portion is large enough to retain the liquid containing the blood elements when tilting the paddle at an angle as will be seen later.
The device described is intended for use with relatively small blood samples, which are taken by pricking a finger or the earlobe with a lancet. Usually two to five drops of blood are sufficient for this purpose. It has been found that satisfactory results are obtained with the device described by giving the recess a depth of at least 0.1 mm, at the surface of the main portion of the recess an extent of. approximately 300 mm2 at least and on the surface of its auxiliary portion an extent of approximately 75 mm2 at least. The initial blood sample of two to five drops, preferably about three drops, is poured into the main portion 13 of the recess, in which some of its parts separate by agglutination, coagulation or precipitation.
For this purpose, agents which cause the separation, agglutination, the formation of clots or the precipitation of certain of these elements are available in this main portion. These agents are preferably arranged in the form of a layer on the surface of the main portion 13. In some cases it is desired to collect the serum, that is to say the liquid containing the elements of the blood, without the blood cells and the fibrinogen. In other cases, it is desired to collect the plasma which includes the liquid containing the elements without the globules but with the fibrinogen.
The layer for collecting serum or plasma should contain an appropriate hemagglutinin, such as phytohemagglutinin, or that obtained by immunological methods. If it is desired to collect the serum, the diaper should also contain a coagulating agent which accelerates the formation of the fibrinogen clot such as thrombin, or this can be done more slowly with rapid stirring.
When it is desired to collect the plasma, the layer should contain, in addition to hemagglutinin, an anticoagulant agent, such as heparin, dicumarol, sodium citrate, potassium oxalate, ammonium oxalate, lithium or sodium, or ethylene diamino-tetraacetate.
The preferred hemagglutinin is substantially pure phytohemagglutinin, such as that prepared from the seeds of legumes. One phytohemagglutinin that gives excellent results is that obtained from beans. However, one should not choose hemagglutinin which precipitates the globulin fraction. It has been found that satisfactory results are obtained by incorporating in the main portion of the recess having the dimensions indicated above, suitable for a small sample of blood, that is to say from 2 to 5 drops, a layer of at least 0.3 and preferably about 0.5 mg.
This layer can be applied by mixing a proportion of about 0.5 mg phytohemagglutinin with 0.1 cm3 of physiological saline liquid, then spreading it evenly over the surface of the main portion of the recess and allowing it to dry. .
When it is desired to collect the plasma, the anticoagulant agent to be preferably chosen consists of heparin with a blood sample of the volume mentioned above. It has been found that satisfactory results are obtained in a recess of the abovementioned dimensions by incorporating into the layer a proportion of at least 0.02 and preferably of approximately 0.1 mg of heparin. The heparin can be mixed with the physiological saline liquid along with the phyto-hemagglutinin and applied to the surface of the main portion of the recess.
When the paddle is to be used to collect serum, the clotting agent is preferably thrombin. It has been found that good results are obtained by incorporating into the layer at least 10 and preferably 12 units of this agent. These units are called N.I.H. and have been established by the National Institute of Health. The thrombin can be mixed with the phytohemagglutinin in the physiologic saline fluid and applied to the surface of the main portion of the recess.
The following examples show how the layers can be prepared and applied to pallets used to collect blood and separate plasma.
Example 1 The layer is prepared by mixing the following substances
EMI0003.0002
Substantially pure <SEP> <SEP> phytohaemagglutinin <SEP>. <SEP>. <SEP> 0.3 <SEP> mg
<tb> Heparin <SEP> ... <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP> .................. <SEP>. <SEP>. <SEP> 0.1 <SEP> mg
<tb> Saline <SEP> physiological <SEP> liquid <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP> 0.1 <SEP> ce After having thoroughly mixed the substances, the mixture is spread evenly over the surface of the main portion of the recess, then the layer is dried, forming therein an evenly distributed layer of mixture of phytohemagglutinin, heparin and salts.
The pallet can then be packed, with a suitable lancet, a suitable rod for shaking and a loop or pipette in a closed envelope, thus obtaining a ready-to-use pallet for taking a small sample of blood and separating the plasma from it.
Example 2 The layer is prepared by mixing the following substances
EMI0003.0003
Hemagglutinin <SEP> ....... <SEP> ....... <SEP> 0.5 <SEP> mg
<tb> <SEP> sodium citrate <SEP> <SEP> ... <SEP> ... <SEP> 1.0 <SEP> mg
<tb> Liquid <SEP> saline <SEP> normal <SEP> ....... <SEP>. <SEP> ... <SEP> .... <SEP> 0.1 <SEP> cm3 The substances are mixed and this mixture is applied to the surface of the main portion of the recess, then the pallet is packed as in example 1.
Example 3 The proportions of the substances in the layer of Examples 1 and 2 are satisfactory in tests of human blood and most laboratory animals. But when it comes to the blood of wine, a much larger quantity is needed. The present example is particularly suitable for testing the blood of cattle.
The layer is prepared by mixing the following substances
EMI0003.0004
Hemagglutinin <SEP> ..... <SEP> .............. <SEP> 3.0 <SEP> mg
<tb> Heparin <SEP> .................... <SEP>. <SEP> ..... <SEP> 0.2 <SEP> mg
<tb> Liquor <SEP> saline <SEP> normal <SEP> .............. <SEP> 0.1 <SEP> cm3 After having mixed the substances, apply the layer and the pallet is wrapped as in Example 1. But to use the pallet, one more drop of saline liquid is added as the blood is deposited in the main portion of the recess.
The following examples show how the layers can be prepared and applied to the recesses of pallets used to collect small blood samples and separate serum from them. <I> Example 4 </I> The following substances are mixed
EMI0003.0005
Phytohemagglutinin
<tb> substantially <SEP> pure <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP>. <SEP> 0.5 <SEP> mg
<tb> Thrombin <SEP> ....... <SEP>. <SEP> ...... <SEP> 10 <SEP> units <SEP> N.I.H.
<tb> Saline <SEP> physiological <SEP> liquid <SEP>. <SEP>. <SEP> 0.1 <SEP> cm3 After mixing the substances thoroughly, spread the mixture evenly over the main portion of the recess of the pallet, then dry the layer, which consists of a uniform mixture of phytohemagglutinin , alum and salt.
The pallet thus prepared can be wrapped in a closed envelope with a lancet, a stirring rod and a loop or pipette, thereby obtaining a kit which can be used to collect the blood and separate the serum therefrom.
<I> Example 5 </I> The following substances are mixed
EMI0003.0006
Hemagglutinin <SEP> .................... <SEP> 0.5 <SEP> mg
<tb> Liquid <SEP> saline <SEP> normal <SEP> ................ <SEP> 0.1 <SEP> cm3 After having mixed the substances in this way, they are applies to the surface of the main portion of the recess and the pallet is packaged as described in Example 4. But when using this pallet it is necessary to agitate the blood sample more quickly and longer (one or two minutes) to clot with fibrinogen since the diaper does not contain a clot forming agent.
It should be understood that the substances listed in Examples 1 to 5 can be replaced by other hemagglutinins, clot forming agents and anticoagulants. Likewise, it should be understood that when larger blood samples are processed and the recesses are larger, the amount of the substances in the layer should increase proportionately. The device is used as follows. A small blood sample of 2 to 5 and preferably 3 drops is placed in the main portion 13 of the recess of the pallet 10. Then the pallet is placed on a horizontal surface. such as the top 26 of a table 27.
Then a swirl rod is used to swirl the blood sample all around the main portion 13 of the recess, thereby mixing it intimately with the hemagglutinin of the diaper. Care must be taken in this connection not to pass blood into the auxiliary portion 14 of the recess. Stirring is continued for about 30 to 50 seconds. While shaking, the paddle should be tilted and rotated so that the blood cells distribute themselves evenly and allow the plasma or serum to begin to separate. But as has already been said, care must be taken to prevent blood from flowing into the auxiliary portion of the recess.
When the paddle has been prepared for collecting the plasma, the blood also mixes during the stirring operation with the anticoagulant agent thus preventing the formation of a fibrinogen clot. On the other hand, when the pallet has been prepared for collecting the serum, the blood mixes with the coagulant agent, thus accelerating the formation of the fibrinogen batch.
The haemagglutinin has the effect, during the stirring operation, of agglutinating the blood cells and precipitating them in the main portion of the recess. If the paddle has been prepared to collect serum, fibrinogen also forms clots and during this time rushes into the main portion of the recess. Then the pallet is pushed towards the edge of the table or support surface so as to bring the tab 17 overhanging the edge by making the fold line 16 coincide with this edge (FIG. 3). Then the tab 17 is folded down at a right angle with the main portion of the pallet, and it is brought back to rest it completely on the table (FIG. 4) on which it is thus supported in an inclined position.
The liquid containing the elements of the blood, that is to say the plasma or the serum, then flows from the top to the bottom of the main portion into the auxiliary portion of the recess. When all of the serum or plasma has collected in the auxiliary portion of the recess, the desired amount can be withdrawn with a pipette or a capillary tube or with a loop to perform the immunological tests or reactions , serological or chemical desired. The length of the folding tab 17 and the angle of inclination of the tab on the table can be varied, when the tab is folded up and down.
It has been found that with the pallet of the type shown and described and having the dimensions indicated, satisfactory results are obtained by taking small samples of blood, and by supporting the pallet at an angle of inclination of about 5 to 20 and preferably 10 to 15.
It can therefore be seen that the method has the advantage of allowing easy separation of serum and plasma from small blood samples without the need for centrifugation devices or laboratory equipment. The device for implementing the method has the advantage of being able to be used outside the laboratory since the device is easy to transport and can be used in an office or on site.