Verfahren zur Herstellung von p-Bis- (2-Chlor-äthyl)-amino-L-phenylalanin
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer chemotherapeutisch wirksamen Substanz, nämlich von p-Bis- (2-chlor-äthyl)-amino-L- phenylalanin.
Im Patent Nr. 335688 ist ein Verfahren zur Herstellung des p-Bis- (2-Chlor-äthyl)-amino-phenylalanins beschrieben und sind die Eigenschaften dieser Verbindung vermerkt. Dieses Verfahren richtet sich sowohl auf die Herstellung der racemischen D, L-Form als auch auf die Herstellung der optisch aktiven Isomeren. Aus der im genannten Patent beschriebenen Herstellungsweise der Ausgangsstoffe ist ersichtlich, dass man zur Herstellung der optisch aktiven L-Form vom L-Phenylalanin und zur Herstellung der optisch aktiven D-Form vom D-Phenylalanin ausgeht. Es wird ferner erwähnt, dass die L-Form des erfindungsgemäss erhaltenen Produktes grössere wachstumhindernde Wirkung auf Tumoren ausübt, als dies bei der D-Form oder bei der racemischen Form der Fall ist.
Es hat sich nun ergeben, dass die L-Form des p-Bis (2-chlor-äthyl)-amino-phenylalanins hergestellt werden kann, indem man von optisch inaktivem Material ausgeht und letzteres in der nachstehend beschriebenen Weise über gewisse Zwischenprodukte umsetzt.
Dementsprechend betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von p-Bis- (2-chlor-äthyl)- amino-L-phenylalanin, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine Lösung von N-Acetyl-p-nitro-D, L-phenylalanin mit Brucin behandelt wird, worauf durch Kristallisation des Brucinsalzes des L-Isomeren die optischen Isomeren getrennt werden, eine Lösung des L-Brucinsalzes alkalisch gemacht und das dabei ausgefällte Brucin abgetrennt wird, dass hierauf die Lösung angesäuert wird, wobei sich N-Acetyl-p-nitro-L-phenyl- alanin bildet, welches durch Hydrolyse in p-Nitro-Lphenylalanin übergeführt wird, dessen Carboxylgruppe verestert und der Ester mit Phthalsäureanhydrid zum N-Phthaloylderivat umgesetzt wird,
dass in der letztgenannten Verbindung die Nitrogruppe katalytisch zur Aminogruppe reduziert wird, worauf die Amino Verbindung mit Äthylenoxyd in das Hydroxy-äthyl- derivat übergeführt wird, welch letzteres Produkt mittels Phosphoroxychlorid oder Thionylchlorid chloriert und nachfolgend zur Entfernung der Phthaloylgruppe hydrolysiert wird.
Beispiel
Das Ausgangsmaterial wird wie folgt hergestellt :
50 g Diäthyl-a-acetamido-a-p-nitrobenzylmalonat werden 24 Stunden lang mit einer Lösung von 50 g Natriumcarbonat in 500 ml Wasser am Rückfluss gekocht (Albertson, J. Amer. Chem. Soc., 1950,72, 1396). Zu der heiss filtrierten gertihrten Lösung werden langsam 110 ml Salzsäure zugegeben. Eine fettige Substanz scheidet sich aus und die Temperatur der Lösung steigt an. Die Mischung wird unter Rühren einige Minuten lang zum Sieden erhitzt, hierauf abgekühlt und über Nacht im Eisschrank stehengelassen.
Das fahle, braune kristallisierte Produkt (28 g ; 78% Ausbeute) wird abfiltriert und zeigt einen Schmelzpunkt von 205-209 C. Nach Umkristallisieren aus Wasser (vorgängig mit Tierkohle behandelt) ergeben sich farblose Nadeln von N-Acetyl-p-nitro-D, Lphenylalanin vom Schmelzpunkt 207-209 C (Analyse, gefunden : C = 52,7%, H = 5,0%, N = 10,7%). Die Formel CllHl205N2 erfordert eine Zusammensetzung von C = 52,4%, H = 4,8%, N = 11,1%.
Zur Durchführung des erfindungsgemässen Verfahrens wird zu einer Lösung der DL-Säure (23,55 g) in heissem Athanol (200 ml) eine Lösung von 36,9 g (1, 00 mol) Brucin in heissem Athanol (200ml) zugegeben und die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Es bilden sich hellgelbe Prismen. Die Mischung wird eine Stunde lang in Eiswasser abgekühlt und das Produkt abfiltriert. Erhalten werden 25,35 g entsprechend 84% Ausbeute. Schmelzpunkt : 203-208 C. Beim Umkristallisieren aus Ätha- nol entstehen hellgelbe Prismen des Brucinsalzes des N-Acetyl-p-nitro-L-phenylalanins vom Schmelzpunkt 207-209,5 C, [a] 21 + 19, 2 0, 5' (c 1,59 in 1 : 1 H20 Dioxan).
Durch Umkristallisieren wurde der Schmelzpunkt und der Drehungswert nicht wesentlich beein flusst. (Die Analyse ergab C = 61,1%, H = 5,85%, N = 8,6%, berechnet für C34H3809NJ-H20 : C = 61,0%, H = 6,0%, N = 8,4%.) (Nach Trocknung bei 100 und 1 mm Druck während 4 Stunden ergaben sich folgende Analysenwerte : C = 62,7%, H = 6, 2%, N = 8,6%.
Berechnet für C,, H, 809N, : C 63, 1%, H = 5, 9%, N = 8, 7%.)
Behandlung der wässrigen Lösung des Salzes mit Ammonium oder Natriumhydroxyd, Entfernung des ausgefallenen Brucins durch Filtration, Ansäuren des Filtrates und Umkristallisieren des aus dem Filtrat ausgefällten Produktes aus Wasser ergab farblose Prismen von N-Acetyl-p-nitro-L-phenylalanin, das beim Erhitzen zunächst bei 170-172 C schmolz, hierauf wieder erstarrte und schliesslich bei 206-209 C endgültig schmolz. [a] +49, 7 l (c, 1,55 in Äthylalkohol). Die Analyse ergab C = 52,5%, H = 4,8%, N = 11,0%.
Berechnet für CnHOsNC = 52,4%, H = 4, 8%, N = 11, 1%.
Um zu zeigen, dass es sich bei dieser Verbindung tatsächlich um ein L-Isomeres handelte, wurden 70 mg N-Acetyl-p-nitro-L-phenylalanin, erhalten aus der Brucintrennung, in der Kälte mit doppelt normaler äthanolischer Salzsäure zwei Tage lang bei Zimmertemperatur verestert. Die Verdampfung des Lösungs- mittels ergab ein farbloses Harz, welches aus Wasser in dünnen farblosen Nadeln kristallisierte (90%) Ausbeute und das den Äthylester des N-Acetyl-p-nitro-Lphenylalanins darstellte. Schmelzpunkt : 115-117 C, [a] = +13, 0 0,5 (c 1,33 in Äthanol).
Anderseits wurde der p-Nitro-L-phenylalaninäthyl- ester bzw. sein Hydrochlorid, aus L-phenylalanin nach Bergel und Stock, J. C. S., 1954,2409 hergestellt und diese Verbindung acetyliert, indem sie 10 Minuten lang mit Essigsäureanhydrid und Kaliumcarbonat erhitzt wurde (Ausbeute 75%). Die Kristallisation dieses Produktes aus Wasser ergab farblose Nadeln des L-Acetylderivates vom Schmelzpunkt 115-117 C.
[a] l9 = 13,5 0, 5 (c 1,32 in Äthanol). Die Analyse ergab : C = 55,9%, H = 5,8%, N = 10,2%. Berechnet für Ci, H0, N, : C = 55,7%, H = 5, 75%, N = 10, 0%.
Wenn die so hergestellte Verbindung mit der oben beschriebenen gemischt wurde, ergab sich im Schmelzpunkt des Gemisches keine Änderung.
0,5 g N-Acetyl-p-nitro-L-phenylalanin der spezifischen Drehung [a] 24 = 50 wurden 2 Stunden lang mit 6-normaler Salzsäure (10 ml) am Rückfluss erhitzt.
Die Lösung wurde im Vakuum zur Trockne eingedampft, der kristalline Rückstand im Vakuum mit Athanol abgedampft und dann l l/2 Stunden lang mit doppelt normaler äthanolischer Salzsäure (8 ml) am Rückfluss gekocht. Nach Verdampfen des Lösungs- mittels und Kristallisation des Rückstandes aus Aceton Methanol ergab sich das Hydrochlorid des p-Nitro-Lphenylalaninäthylesters (0,440 g) mit dem Schmelzpunkt 203-205 C unter Zersetzung. Der Schmelzpunkt blieb auf Zumischung der L-Verbindung unver ändert, wobei diese L-Verbindung aus p-Nitro-Lphenylalanin nach Bergel und Stock, wie oben zitiert, hergestellt worden war und [a] 20 = 11,7 0, 5 (c = 2,3 in Wasser) aufwies.
Diese Verbindung wurde in folgender Weise in das p-Bis- (2-chloräthyl)-amino-L-penyl-alanin über- geführt : 1 g des Hydrochlorids wurden in 8 ml trockenem Benzol aufgeschlämmt und 0,3 ml Diäthylamin zugegeben. Das Gemenge wurde geschüttelt, bis keine Kristalle des Hydrochlorids des Esters mehr sichtbar waren. Hierauf wurde zur trüben Lösung trockener Äther zugegeben, bis die Fällung vollständig war, worauf das Diäthylaminhydrochlorid abfiltriert und das Filtrat im Vakuum bis fast zur Trockne verdampft wurde. Der ölige Rückstand wurde in 15 ml trockenem Benzol aufgenommen und 0,54 g Phthalsäureanhydrid unter Schütteln zugegeben. In weniger als einer Minute verwandelte sich das Gemenge unter Temperaturanstieg in eine weisse, pastenartige Masse.
Nach Abdampfen im Vakuum kristallisierte der Rückstand aus Aceton-Petroläther in dünnen, farblosen Kristallen von Athyl-N- (o'-carboxy-benzoyl)-p-nitro-Lphenylalaninat (94%), Smp. 180-182 C [a] 2r3 +19, 4 i0, 3 (c 2,94 in Dioxan).
Die vorstehend erwähnte Verbindung wurde ll/2 Stunden lang mit 25 ml 2-n Chlorwasserstoff in Athanol am Rückfluss gekocht. Nach Entfernen des Lösungsmittels verblieben 1,08 g (86%) eines hellgelben Harzes, das aus n-Propanol in farblosen Prismen auskristallisierte, welche Äthyl-p-nitro-N-phthaloyl-L-phenyl- alaninat darstellten.
9,0 g der letztgenannten Verbindung wurden in einer Mischung von 120 g Äthylacetat mit 80 g Methanol in Gegenwart von 1,4g eines 1% igen Palladium Calciumcarbonat-Katalysators hydriert. Nach Beendigung der Gasaufnahme wurde die filtrierte Hydriermischung unter vermindertem Druck verdampft. Der Harzrückstand wurde in Äther aufgenommen, die Lösung filtriert und unter Rühren ein geringer Überschuss trockener, ätherischer Chlorwasserstofflösung langsam zugegeben. Die entstehende harzartige Fällung wurde beim Reiben körnig. Das mit Äther gewaschene Produkt wurde aus Äthylacetat/Aceton umkristallisiert.
Nach erneutem Umkristallisieren aus Äthylacetat ergab die Analyse des Äthyl-N-phthaloyl-p-amino-L- phenylalaninat-hydrochlorids folgende Werte :
Gefunden : N 7,42 ; Cl 9,30%, CHOCl, berechnet : N 7,48 ; Cl 9,48%. Smp. des Hydrochlorids : 216-218 C (Zers.) [a] 2D2 =-153 1 (c = 0, 945 in Wasser-Äthanol, 3 Vol. : 1 Vol.).
Aus dem Hydrochlorid wurde die freie Base durch Zugabe eines geringen Überschusses von verdünntem Ammoniak zur wässrigen Lösung erhalten. Sie wurde aus wässrigem Methanol auskristallisiert. Nach Um kristallisieren unter Behandlung mit Tierkohle ergaben sich fast farblose Nadeln von Äthyl-N-phthaloyl- p-amino-L-phenylalaninat (gefunden : N 8,29%, ClDHl80oNS, berechnet : N 8,28%).
3,15 g Äthyl-N-phthaloyl-p-amino-L-phenyl- alaninat (nicht umkristallisiert) wurden in 50 g Wasser aufgeschlämmt und 30 g Eisessig zugefügt. Zur klaren Lösung wurden 8,0 g Athylenoxyd zugegeben, worauf die Mischung 17 Stunden lang stehengelassen und dann in 350 g Wasser gegossen wurde. Die Lösung wurde mit Natriumbikarbonat neutralisiert und das freigesetzte Harz mit Äther extrahiert. Der Ätherextrakt wurde mit Magnesiumsulfat getrocknet und der Äther abgedampft. Der Harzrückstand im Gewicht von 3,95 g wurde in 50 g Benzol gelöst und die Lösung getrocknet, indem ein Teil des Lösungsmittels als azeotropes Gemisch abdestilliert wurde. Hierauf wurden 8,0 g frisch destilliertes Phosphoroxychlorid zugegeben und das Gemisch am Rückfluss 30 Minuten lang erhitzt.
Nach Abtreiben des Lösungsmittels unter reduziertem Druck wurde der harzartige Rückstand mit 6-n Salzsäure 31/2 Stunden lang am Rücknuss gekocht. Die Lösung wurde über Nacht abkühlen gelassen und hierauf die ausgefallene Phthalsäure abfiltriert. Nach einer anschliessenden Gefriertrocknung wurden zum rosafarbigen Rückstand 160 g Aceton und 50 g Äthylacetat zugegeben. Das Gemenge wurde über Nacht im Kühlraum gelassen, worauf die rosafarbige, klare, überstehende Flüssigkeit abgegossen wurde. Der rosafarbige, harzartige Hydrochlorid-Rückstand wurde in 20 g Wasser gelöst, gesättigte Natriumacetatlösung zugegeben, bis keine weitere Fällung mehr erfolgte, das ausgefallene Produkt gesammelt und in einem Exsiccator getrocknet.
Das rohe p-Bis-(2-Chlor-äthyl)amino-L-phenylalanin im Gewicht von 3,6 g wurde aus Methanol umkristallisiert, wobei farblose Nadeln des Monohydrates vom Smp. 182-183 C (Zers.) erhalten wurden.
Ausbeute : 37%, bezogen auf das Chlorhydrat des Amins. [a] 25 = +7, 5 + 0, 5 (c = 1, 35 in n HC1).
Process for the preparation of p-bis (2-chloro-ethyl) -amino-L-phenylalanine
The present invention relates to a process for the production of a chemotherapeutically active substance, namely p-bis- (2-chloro-ethyl) -amino-L-phenylalanine.
Patent No. 335688 describes a process for the preparation of p-bis (2-chloro-ethyl) -amino-phenylalanine and the properties of this compound are noted. This process is aimed both at the preparation of the racemic D, L-form and at the preparation of the optically active isomers. It can be seen from the method of preparation of the starting materials described in the cited patent that one starts from L-phenylalanine for the preparation of the optically active L-form and D-phenylalanine for the preparation of the optically active D-form. It is also mentioned that the L-form of the product obtained according to the invention has a greater growth-inhibiting effect on tumors than is the case with the D-form or the racemic form.
It has now been found that the L-form of p-bis (2-chloro-ethyl) -amino-phenylalanine can be prepared by starting from optically inactive material and converting the latter in the manner described below via certain intermediate products.
Accordingly, the present invention relates to a process for the preparation of p-bis- (2-chloro-ethyl) -amino-L-phenylalanine, which is characterized in that a solution of N-acetyl-p-nitro-D, L-phenylalanine is treated with brucine, whereupon the optical isomers are separated by crystallization of the brucine salt of the L-isomer, a solution of the L-brucine salt is made alkaline and the thereby precipitated brucine is separated off, that the solution is then acidified, with N-acetyl-p Forms -nitro-L-phenylalanine, which is converted into p-nitro-L-phenylalanine by hydrolysis, the carboxyl group of which is esterified and the ester is reacted with phthalic anhydride to form the N-phthaloyl derivative,
that in the latter compound the nitro group is catalytically reduced to the amino group, whereupon the amino compound is converted with ethylene oxide into the hydroxy-ethyl derivative, which latter product is chlorinated by means of phosphorus oxychloride or thionyl chloride and then hydrolyzed to remove the phthaloyl group.
example
The raw material is produced as follows:
50 g of diethyl a-acetamido-a-p-nitrobenzylmalonate are refluxed for 24 hours with a solution of 50 g of sodium carbonate in 500 ml of water (Albertson, J. Amer. Chem. Soc., 1950, 72, 1396). 110 ml of hydrochloric acid are slowly added to the hot, filtered solution. A fatty substance precipitates and the temperature of the solution rises. The mixture is heated to boiling for a few minutes with stirring, then cooled and left to stand in the refrigerator overnight.
The pale, brown crystallized product (28 g; 78% yield) is filtered off and has a melting point of 205-209 C. After recrystallization from water (previously treated with animal charcoal), colorless needles of N-acetyl-p-nitro-D result , L-phenylalanine melting point 207-209 C (analysis, found: C = 52.7%, H = 5.0%, N = 10.7%). The formula CllHl205N2 requires a composition of C = 52.4%, H = 4.8%, N = 11.1%.
To carry out the process according to the invention, a solution of 36.9 g (1.00 mol) of brucine in hot ethanol (200 ml) is added to a solution of the DL acid (23.55 g) in hot ethanol (200 ml) and the mixture is added left to stand overnight at room temperature. Light yellow prisms are formed. The mixture is cooled in ice water for one hour and the product filtered off. 25.35 g are obtained, corresponding to an 84% yield. Melting point: 203-208 C. When recrystallizing from ethanol, light yellow prisms of the brucine salt of N-acetyl-p-nitro-L-phenylalanine with a melting point of 207-209.5 C, [a] 21 + 19.2 0.5 '(c 1.59 in 1: 1 H2O dioxane).
The melting point and the twist value were not significantly influenced by recrystallization. (The analysis gave C = 61.1%, H = 5.85%, N = 8.6%, calculated for C34H3809NJ-H20: C = 61.0%, H = 6.0%, N = 8.4 %.) (After drying at 100 and 1 mm pressure for 4 hours, the following analytical values were obtained: C = 62.7%, H = 6.2%, N = 8.6%.
Calculated for C ,, H, 809N,: C 63, 1%, H = 5, 9%, N = 8, 7%.)
Treatment of the aqueous solution of the salt with ammonium or sodium hydroxide, removal of the precipitated brucine by filtration, acidification of the filtrate and recrystallization of the product precipitated from the filtrate from water gave colorless prisms of N-acetyl-p-nitro-L-phenylalanine, which on heating initially melted at 170-172 C, then solidified again and finally melted at 206-209 C. [a] +49, 7 l (c, 1.55 in ethyl alcohol). Analysis found C = 52.5%, H = 4.8%, N = 11.0%.
Calculated for CnHOsNC = 52.4%, H = 4.8%, N = 11.1%.
In order to show that this compound was actually an L-isomer, 70 mg of N-acetyl-p-nitro-L-phenylalanine, obtained from the separation of brucine, were added in the cold with double normal ethanolic hydrochloric acid for two days Esterified at room temperature. Evaporation of the solvent gave a colorless resin which crystallized from water in thin, colorless needles (90% yield) and which was the ethyl ester of N-acetyl-p-nitro-L-phenylalanine. Melting point: 115-117 C, [a] = +13.0 0.5 (c 1.33 in ethanol).
On the other hand, the p-nitro-L-phenylalanine ethyl ester or its hydrochloride was prepared from L-phenylalanine according to Bergel and Stock, JCS, 1954, 2409 and this compound was acetylated by heating it for 10 minutes with acetic anhydride and potassium carbonate (yield 75%). The crystallization of this product from water gave colorless needles of the L-acetyl derivative with a melting point of 115-117 C.
[a] 19 = 13.5 0.5 (c 1.32 in ethanol). The analysis showed: C = 55.9%, H = 5.8%, N = 10.2%. Calculated for Ci, H0, N,: C = 55.7%, H = 5, 75%, N = 10, 0%.
When the compound thus prepared was mixed with that described above, there was no change in the melting point of the mixture.
0.5 g of N-acetyl-p-nitro-L-phenylalanine of specific rotation [a] 24 = 50 was refluxed for 2 hours with 6N hydrochloric acid (10 ml).
The solution was evaporated to dryness in vacuo, the crystalline residue was evaporated off in vacuo with ethanol and then refluxed for 11/2 hours with double normal ethanolic hydrochloric acid (8 ml). After evaporation of the solvent and crystallization of the residue from acetone / methanol, the hydrochloride of the p-nitro-Lphenylalanine ethyl ester (0.440 g) with a melting point of 203-205 ° C. resulted with decomposition. The melting point remained unchanged on admixture of the L compound, this L compound having been prepared from p-nitro-Lphenylalanine according to Bergel and Stock, as cited above, and [a] 20 = 11.7 0.5 (c = 2.3 in water).
This compound was converted into p-bis- (2-chloroethyl) -amino-L-penylalanine in the following manner: 1 g of the hydrochloride was suspended in 8 ml of dry benzene and 0.3 ml of diethylamine was added. The mixture was shaken until no more crystals of the hydrochloride of the ester were visible. Then dry ether was added to the cloudy solution until the precipitation was complete, whereupon the diethylamine hydrochloride was filtered off and the filtrate was evaporated to almost dryness in vacuo. The oily residue was taken up in 15 ml of dry benzene and 0.54 g of phthalic anhydride was added with shaking. In less than a minute, the mixture turned into a white, pasty mass with a rise in temperature.
After evaporation in vacuo, the residue crystallized from acetone-petroleum ether in thin, colorless crystals of ethyl N- (o'-carboxy-benzoyl) -p-nitro-L-phenylalaninate (94%), mp. 180-182 C [a] 2r3 +19.410.3 (c 2.94 in dioxane).
The above-mentioned compound was refluxed with 25 ml of 2N hydrogen chloride in ethanol for 1/2 hour. After removal of the solvent, 1.08 g (86%) of a light yellow resin remained, which crystallized from n-propanol in colorless prisms, which were ethyl p-nitro-N-phthaloyl-L-phenylalaninate.
9.0 g of the last-mentioned compound were hydrogenated in a mixture of 120 g of ethyl acetate with 80 g of methanol in the presence of 1.4 g of a 1% strength palladium-calcium carbonate catalyst. After the uptake of gas had ceased, the filtered hydrogenation mixture was evaporated under reduced pressure. The resin residue was taken up in ether, the solution was filtered and a small excess of dry, ethereal hydrogen chloride solution was slowly added with stirring. The resulting resinous precipitate became granular when rubbed. The product washed with ether was recrystallized from ethyl acetate / acetone.
After renewed recrystallization from ethyl acetate, the analysis of the ethyl N-phthaloyl-p-amino-L-phenylalaninate hydrochloride gave the following values:
Found: N 7.42; Cl 9.30%, CHOCl, calcd: N 7.48; Cl 9.48%. M.p. of the hydrochloride: 216-218 C (dec.) [A] 2D2 = -153 1 (c = 0.945 in water-ethanol, 3 vol: 1 vol).
The free base was obtained from the hydrochloride by adding a small excess of dilute ammonia to the aqueous solution. It was crystallized from aqueous methanol. After recrystallization under treatment with animal charcoal, there were almost colorless needles of ethyl N-phthaloyl-p-amino-L-phenylalaninate (found: N 8.29%, ClDHl80oNS, calculated: N 8.28%).
3.15 g of ethyl N-phthaloyl-p-amino-L-phenylalaninate (not recrystallized) were suspended in 50 g of water and 30 g of glacial acetic acid were added. 8.0 g of ethylene oxide were added to the clear solution, whereupon the mixture was left to stand for 17 hours and then poured into 350 g of water. The solution was neutralized with sodium bicarbonate and the released resin extracted with ether. The ether extract was dried with magnesium sulfate and the ether evaporated. The resin residue weighing 3.95 g was dissolved in 50 g of benzene and the solution was dried by distilling off part of the solvent as an azeotropic mixture. 8.0 g of freshly distilled phosphorus oxychloride were then added and the mixture was refluxed for 30 minutes.
After the solvent had been stripped off under reduced pressure, the resinous residue was boiled with 6N hydrochloric acid for 31/2 hours on the walnut. The solution was allowed to cool overnight and the phthalic acid which had precipitated out was then filtered off. After a subsequent freeze-drying, 160 g of acetone and 50 g of ethyl acetate were added to the pink residue. The mixture was left in the refrigerator overnight, after which the pink, clear, supernatant liquid was poured off. The pink, resinous hydrochloride residue was dissolved in 20 g of water, saturated sodium acetate solution was added until no further precipitation took place, the precipitated product was collected and dried in a desiccator.
The crude p-bis (2-chloro-ethyl) amino-L-phenylalanine weighing 3.6 g was recrystallized from methanol, colorless needles of the monohydrate having a melting point of 182-183 ° C. (decomp.)
Yield: 37%, based on the hydrochloride of the amine. [a] 25 = +7.5 + 0.5 (c = 1.35 in n HC1).