CH214285A - Verfahren zur Darstellung des corticotropen Hormons. - Google Patents

Description

  Verfahren zur Darstellung     des        corticotropen    Hormons.    Der     Hypophysenvorderlappen    enthält ein  Hormon, welches die durch Entfernung der  Hypophyse an der     Nebennierenrinde    hervor  gerufenen Veränderungen, wie zum Beispiel  das Auftreten einer weniger Fett enthalten  den     (sudanophoben)    Zone, rückgängig zu  machen in der Lage ist     (Collip    u. a.,     Lancet     1933, S. 347;     NirehourstArchiv,        Bd.    290, S.23,  1933).

   Zur Gewinnung dieses     Hormons    be  diente man sich bislang der Ultrafiltration       (Hoffmann    u.     Anselmino,    Archiv f. Gynä  kologie,     B,d.157,    S. 86,1934) oder der Alkohol  fällung (Hohl. Patent Nr. 77332). Diese     Mie-          thoden    liefern jedoch, wie wir durch ihre  Nachprüfung feststellen konnten, das Hor  mon nur in sehr unreinem     Zustand.     



  Es wurde nun     gefunden,    dass man das  Hormon in reinem Zustand und in guter Aus  beute bei     Anwendung    einer kombinierten       Fällungsmethode    erhalten kann.  



  Das den     Gegenstand    des vorliegenden Pa  tentes bildende Verfahren zur Darstellung    des     cortico@tropen    Hormons ist - dadurch ge  kennzeichnet, dass man     dieses    Hormon,  Eiweiss     und    andere Verunreinigungen enthal  tende     Lösungen    zunächst mittels eines     Ei-          weissfAlungsmittels        enteiweisst,    aus den so  erhaltenen     eiweissfreien    Lösungen mittels  eines     Fällungsmittels    das     corticotrope    Hor  mon als     salzartige    Komplexverbindung aus  fällt,

   die Fällung abtrennt und aus ihr das       Hormon    in     Freiheit    setzt.  



       Alls    Ausgangslösungen verwendet man  vorzugsweise wässerige, bei erhöhter Tempe  ratur, zweckmässig bei Siedehitze bei schwach  saurer oder schwach     alkalischer        Reaktion    ge  wonnene     Hypophysenvorderlappenextrakte     oder Lösungen von     Hypophysenvorderlappen-          zubereitungen.        DieEignung        desin        jedemFalle     anzuwendenden     Eiweissfällungs,mittels    wird  zweckmässig vorher durch Testversuche fest  gestellt.

   Die     Enteiweissung    erfolgt zweckmä  ssig bei starksaurer Reaktion, zum Beispiel  vom     p$    1-2.     Aus    der eiweissfreien Lösung           wird    dann mittels eines zweckmässig eben  falls durch Testversuche als geeignet befun  denen     Fällungsmittels    das Hormon als salz  artige     Komplexverbindung    ausgefällt. Die er  haltene Fällung wird hierauf, zweckmässig  durch Auflösen in verdünntem Alkali und  Fällung mittels Alkohol oder Aceton oder  anderer geeigneter wasserlöslicher     Lösungs-          mittel    vom     Fäflungsmittel    befreit.  



  Als     Eiweissfällungsmittel    hat sich in er  ster Linie     Sulfosalicylsäure    als brauchbar er  wiesen, während zur Fällung des Hormons       Fällungsmittel.        wie        Pikrinsäure,        Pikrolon-          säure,        Flaviansäure,        Phosphorwolframsäure     und andere verwendet werden können,

   nicht  aber zum Beispiel     Sulfosalicylsäure    und     Tri-          chloressigsäure.    Es     ist    deshalb sehr zu     emp-          fehlen"dieEignung    der     Fällungsmittel    vorher  durch Testversuche (am Tier) festzustellen.  



  Das reine Hormon stellt ein weisses, was  serlösliches Pulver von guter Wirksamkeit  dar, welches sich nach dem erfindungsge  mässen Verfahren frei von andern     Hypophy-          senvorderlappenhormonen    gewinnen     lä.sst.       <I>Beispiel:</I>    1 kg     Acetontrockenpulver    aus     Hypo-          physenvorderlappen    von Rindern wird in der  Siedehitze mit 20 Liter     '/   <B>...</B> n     HCl    30     iHinu-          ten    unter Rühren extrahiert.

   Der     abgeschleu-          derte    oder     abgepresste    Extrakt wird mit     HCl     auf p$ 2 angesäuert und mit der in einem       Vorversuch    bestimmter Menge 20     ö        iger        wä.ss-          riger    Lösung von     Sulfosalicylsäure    versetzt.  Die     Sulfosalicylsäuremenge    ist so zu bemes  sen, dass im Probefiltrat auf weiteren Zusatz  gerade keine Trübung mehr entsteht.

   Die  abgetrennte Fällung wird in 5 Liter Wasser  mit der erforderlichen Menge konzentrierten  Ammoniaks in Lösung gebracht und durch  neuerlichen Zusatz von     Sulfosalicylsäure     nochmals gefällt. Das Filtrat davon wird mit  dem der ersten     Sulfosa.licylsäurefällung    ver  einigt.     Aus    dem vereinigten Filtrat wurde  nach Zusatz von Natronlauge bis zur schwach  kongosauren Reaktion durch Sättigung mit       Pikrinsäure    das     Hormon    gefällt.

   Der abzen-         trifugierte    oder     abfiltrierte        Pikrinsäurenie          derschlag    wird in 500     ein'    Wasser mit der  erforderlichen Menge Ammoniak bis zu     Iak-          musneutraler    Reaktion versetzt, wobei er  grösstenteils in Lösung geht.

   Aus dieser Lö  sung wird das Hormon durch Zusatz des  bis ]     0fachen    Volumens Alkohol oder Aceton  niedergeschlagen,     abgetrennt    und mit Äther       getrocknet.    Ausbeute 8,0-10,0 g, welche 7 0  bis     80/'0    der     Wirksamkeit    des Ausgangs  materials enthalten. Bezeichnet man als Ein  heit jene pro Tag zu injizierende Menge, die  bei 7 Tage dauernder täglicher Injektion an       hypophysektomierte    Ratten gerade imstande  ist, die     sudanophobe    Zone in der Nebennieren  rinde zum Verschwinden zu bringen, so ent  hält ein derartiges Präparat pro kg Aus  gangsmaterial 1 Million bis 1,2 Millionen  Einheiten.

Claims (1)

1. PATENTANSPRUCH: Verfahren zur Darstellung des corti.co- tropen Hormons aus 11ypophy senvorderla.p- pen, ,da.durch gekennzeichnet, dass man dieses Hormon, Eiweiss und andere Verunreinigun gen enthaltende Lösungen zunächst mittels eines Eiweissfällimgsmittels enteiweisst, aus den so erhaltenen ei-%veissfreien Lösungen mit tels eines Fällungsmittels das corticotrope Hormon als salzartige Komplexverbindung ausfällt,

   die Fällung abtrennt und aus ihr das Hormon in Freiheit setzt. <B>UNTERANSPRÜCHE:</B> 1. Verfahren nach Patentanspruch, da durch gekennzeichnet, dass man die Enteiwei- ssung bei stark saurer Reaktion vom pg 1-2 vornimmt. 2. Verfahren nach Patentanspruch und Unteranspruch ], dadurch gekennzeichnet, dass man als Fällungsmittel zur Enteiwei- ssung Sulfoalicylsäure verwendet. 3.

   Verfahren nach Patentanspruch und Unteransprüchen 1 und 2, dadurch gekenn zeichnet, dass man als Hormonfällungsmittel Pikrinsä-ure verwendet. 4. Verfahren nach Patentanspruch und Unteransprüchen 1 und 2, dadurch gekenn- zeichnet, dass man als Hormonfällungsmittel Pikrolonsäure verwendet. 5. Verfahren nach Patentanspruch und Unteransprüchen 1 und 2, dadurch gekenn zeichnet, dass man als Ilormonfällungsmittel Flaviansäure verwendet. 6.

   Verfahren nach Patentanspruch und Unteransprüchen 1 und 2, dadurch gekenn- zeichnet, dass man als Hormonfällungsmittel Phosphorwolframsäure verwendet.