Verfahren zur Gewinnung eines physiologisch wirksamen. Egtr aktes aus eiweisshaltigen Produkten. Es wurde gefunden, dass man einen herz wirksamen Extrakt aus eiweisshaltigen Pro dukten, wie Serum, Blut, Blutkuchen, Drüsen, frischer oder gegerbter Tierhaut, Organen und Hefe erhalten kann. Das Verfahren ge mäss der vorliegenden Erfindung zur Gewin nung des physiologisch wirksamen Extraktes aus eiweisshaltigen Produkten ist dadurch gekennzeichnet, dass man das eiweisshaltige Produkt unter Befreiung von Lipoiden einer bei neutraler oder schwach alkalischer Re aktion stattfindenden Hydrolyse und, z. B.
gleichzeitig oder nachfolgend, einer Behand lung mit organischen, wasserlöslichen Lösungs mitteln unterwirft und nach Entfernung der letzteren im Vakuum die Lösung mit wasser unlöslichen, organischen Lösungsmitteln be handelt und physiologisch wirksame Stoffe, die die Herzwirkung störend beeinflussen, durch Behandlung mit starken Alkalien be seitigt. Das neue Verfahrensprodukt ist eiweiss- und phosphatidfrei, leicht löslich in Wasser, unlöslich in hochprozentigen, wasserlöslichen, organischen Lösungsmitteln, löslich dagegen in niederprozentigen (wasserhaltigen), organi schen Lösungsmitteln.
Das Produkt besitzt eine günstige Wirksamkeit bei Angina peo- toris und wirkt gefässerweiternd auf die Koronar- und Kranzgefässe; es kann ent sprechende therapeutische Verwendung finden. Im Endzustand ist der Extrakt unempfind lich gegen Säure und Alkali. Die Lipoide können entweder aus den noch nicht der Hydrolyse unterworfene Ausgangsmaterialien durch Ausziehen mit wasserunlöslichen orga nischen Lösungsmitteln, wie Äther, Petrol- äther und anderen, entfernt werden, oder aber nach erfolgter Hydrolyse durch Aus ziehen der erhaltenen Lösung mit Lipoid lösungsmitteln.
Die Hydrolyse kann in rein wässerigem Medium oder auch in Gegenwart von wässerigen organischen Lösungsmitteln erfolgen. Auf jeden -Fall\ ist es erforderlich, nach der Hydrolyse neu gebildete, in Lipoid lösungsmitteln lösliche Stoffe durch Ausziehen mit -wasserunlöslichen, -organischen Lösungs mitteln zu entfernen.
Der gewonnene, gereinigte Extrakt -wird anschliessend einer energischen Behandlung mit verseifenden Mitteln, wie starker Natron lauge oder Barytlauge unterworfen: Hierbei werden physiologisch wirksame Stoffe, die das pharmakologische und klinische Bild der herzwirksamen Substanz stören können, be seitigt. Zweckmässig lässt.man die verseifen- den Mittel so lange einwirken, bis der Ex trakt keine Wirkung mehr auf den isolierten Darm oder Uterus erkennen lässt. Die herz wirksamen Substanzen erleiden durch diese Behandlung keinen Schaden.
Ihre Lösungen können nach Entfernung der verseifenden Mittel sterilisiert oder mit Konservierungs- mitteln zur therapeutischen Anwendung ge langen.
Es ist bereits bekannt, eiweisshaltige Stoffe in rein wässeriger Lösung sauer - zu- hydro- lysieren. Jedoch bekommt man nach diesem Verfahren Abbauprodukte, die keinerlei Wir kung am Herzen zeigen - und deren Hydrolyse bis zum Verschwinden- derb Peptone geht: <I>Beispiele:</I> 1. 1 Liter Serum - wird mit 200 cm-' normaler Natronlauge und 3'(a Liter Aceton versetzt und 4 Stunden gerührt.
Das dabei ausgefallene Eiweiss wird abgepresst und ein zweites - und- -drittes Mal mit je 1.,75 Liter Aceton extrahiert; der Gesamtextrakt-wird ausgefroren und filtriert. -Nach Entfernung- des orgarrischen-' Lösungsmittels aus - dem- Filtrate im- Vakuum wird- das wässerige- Konzentrat mit 2 Liter Äther- ausgescbüttel.t. Der eiweiss- und lipoidfreie Extrakt wird mit 100 <RTI
ID="0002.0037"> cm3 35 0/0iger Natronlauge erhitzt und nach je 2 Stunden auf seine Wirkung am isolierten Uterus- geprüft. Nach Beendigung der Verseifung wird- neutralisiert -und-nach- eventueller Entfernung von unspezifischen Stoffen sterilisiert oder konserviert. 2. 1 kg frische tierische Haut wird zer kleinert und durch Ausziehen mit 2 Liter Äther von Lipoiden befreit. Der Rückstand wird mit 100 ems normaler Natronlauge und 2 Liter Aceton versetzt und wie in Beispiel 1 weiter behandelt.
Der Acetörrgesamtextrakt wird von dem organischen Lösungsmittel im Vakuum befreit und die resultierende, schwach alkalische Lösung mit 100 cms 35 0%iger Natronlauge -erhitzt und nach je 2 Stunden auf seine Wirkung am isolierten Uterus ge prüft. Nach dieser Behandlung, die bis zum Verschwinden der Uteruswirkung vorgenom men wird, wird die Lösung neutralisiert.:-----= 3. 1 kg Pankreasdrüsen werden von Lipoiden befreit, hierauf mit 100 ems nor maler Natronlauge versetzt und nach Ein wirkung des Alkali mit Alkohol versetzt, das Eiweiss durch Ausfrieren entfernt.
Nach Entfernung -des organischen Lösungsmittels aus dem Filtrat im Vakuum -wird das wäs serige- Konzentrat mit 2 Liter Äther ausge schüttelt. Der eiweiss- und lipoidfreie Extrakt wird mit 100 cm' 35 %iger Natronlauge bis zum Verschwinden von Stoffen, die die herz wirksame Substanz störend beeinflussen und die am isolieren Uterus nachgewiesen werden können;
erhitzt -und sodann neutralisiert.\ An Stelle der -obengenannten Pankreas drüsen -kann man als Pankreäsmaterial auch die aus -der Gewinnung der blutzuckersenken= den Mittel -aus Pankreasdrüsen stammenden, nach der -Bauren alkoholischen -Extraktion bezw. Ammonsulfatfällung erhaltenen Rest produkte irr der oben angegebenen Weise verarbeiten.- Man erhält die gleichen be schriebenen, physiologisch wirksamen StoA:
-4. 200 gr Lederabfälle werden zerkleinert, mit 800<B>cm,'</B> Wasser und 100 cm3 normaler Natronlauge versetzt, 3 kg Alkohol zuge geben und 4 Stunden gerührt. Nach dem Abpressen wird der Rückstand noch zweimal mit je 1 kg Alkohol extrahiert, der Gesamt alkoholextrakt wird ausgefroren und filtriert und aus dem- Filtrat der Alkohol im Vakuum entfernt. Das wässerige Konzentrat--wird mit 400 cm,
' Äther ausgeschüttelt und der so erhaltene eiweiss- und lipoidfreie Extrakt- mit 35 %iger Natronlauge zur Entfernung uterus- wirksamer Substanzen erhitzt und sodann neutralisiert.
Process for obtaining a physiologically effective. Egtr actes from protein-containing products. It has been found that a heart-active extract from protein-containing products such as serum, blood, blood cakes, glands, fresh or tanned animal skin, organs and yeast can be obtained. The method according to the present invention for obtaining the physiologically active extract from protein-containing products is characterized in that the protein-containing product is liberated from lipoids in a hydrolysis taking place in a neutral or weakly alkaline reaction and, for. B.
Simultaneously or subsequently, a treatment with organic, water-soluble solvents is subjected and, after the latter has been removed in vacuo, the solution is treated with water-insoluble, organic solvents and physiologically active substances that interfere with the cardiac function are eliminated by treatment with strong alkalis. The new process product is protein and phosphatide-free, easily soluble in water, insoluble in high-percentage, water-soluble, organic solvents, but soluble in low-percentage (water-containing) organic solvents.
The product has a beneficial effect on angina peotoris and has a vasodilator effect on the coronary and coronary vessels; it can find appropriate therapeutic use. In the final state, the extract is insensitive to acids and alkali. The lipoids can either be removed from the starting materials not yet subjected to hydrolysis by exhaustion with water-insoluble organic solvents such as ether, petroleum ether and others, or, after hydrolysis, by pulling the resulting solution with lipoid solvents.
The hydrolysis can take place in a purely aqueous medium or in the presence of aqueous organic solvents. In any case, it is necessary, after hydrolysis, to remove substances which are soluble in lipoid solvents and which are newly formed after the hydrolysis by extracting them with water-insoluble organic solvents.
The obtained, purified extract is then subjected to vigorous treatment with saponifying agents, such as strong sodium hydroxide or barite: Here, physiologically active substances that can disrupt the pharmacological and clinical picture of the substance active on the heart are eliminated. It is advisable to let the saponifying agent act until the extract no longer shows any effect on the isolated intestine or uterus. The substances active in the heart are not damaged by this treatment.
Your solutions can be sterilized after the saponifying agents have been removed or with preservatives for therapeutic use.
It is already known that substances containing protein can be acidified - hydrolyzed in purely aqueous solutions. However, according to this process, you get degradation products that have no effect on the heart - and the hydrolysis of which goes as far as the disappearance of peptones: <I> Examples: </I> 1. 1 liter of serum - is mixed with 200 cm of normal sodium hydroxide solution and 3 '(a liter of acetone added and stirred for 4 hours.
The protein that has precipitated out is pressed out and extracted a second and third time with 1.75 liters of acetone each time; the total extract is frozen out and filtered. After removing the organic solvent from the filtrate in vacuo, the aqueous concentrate is shaken out with 2 liters of ether. The protein and lipoid-free extract is 100 <RTI
ID = "0002.0037"> cm3 35 0/0 sodium hydroxide solution heated and checked for its effect on the isolated uterus after every 2 hours. After completion of the saponification, neutralization takes place and, after any removal of unspecific substances, it is sterilized or preserved. 2. 1 kg of fresh animal skin is shredded and lipoids are removed by pulling it out with 2 liters of ether. 100 ems normal sodium hydroxide solution and 2 liters of acetone are added to the residue and the treatment is continued as in Example 1.
The total acetate extract is freed from the organic solvent in vacuo and the resulting, weakly alkaline solution is heated with 100 cms of 35% strength sodium hydroxide solution and checked for its effect on the isolated uterus after every 2 hours. After this treatment, which is carried out until the effect of the uterus disappears, the solution is neutralized. :-----= 3. Lipoids are removed from 1 kg of the pancreatic glands, then 100 ems of normal sodium hydroxide solution is added and after the alkali has taken effect mixed with alcohol, the protein removed by freezing out.
After removal of the organic solvent from the filtrate in vacuo, the aqueous concentrate is shaken out with 2 liters of ether. The protein-free and lipoid-free extract is mixed with 100 cm '35% sodium hydroxide solution until substances that have a disruptive effect on the heart and which can be detected on the isolated uterus disappear;
heated -and then neutralized. \ Instead of the -above-mentioned pancreatic glands -there can also be used as pancreas material from -the extraction of the blood sugar sinks = the means -from pancreatic glands, after the -bacco alcoholic extraction or. Process the residual products obtained from ammonium sulphate precipitation in the manner indicated above - The same physiologically active substances as described are obtained:
-4. 200 grams of leather waste are crushed, mixed with 800 cm, water and 100 cm3 of normal sodium hydroxide solution, 3 kg of alcohol are added and the mixture is stirred for 4 hours. After pressing, the residue is extracted twice more with 1 kg of alcohol each time, the total alcohol extract is frozen out and filtered and the alcohol is removed from the filtrate in vacuo. The aqueous concentrate - is 400 cm,
'Ether is shaken out and the protein and lipoid-free extract obtained in this way is heated with 35% sodium hydroxide solution to remove substances that affect the uterus and then neutralized.