Verfahren zur Reindarstellung von spezifischem Streptokokken-Pseudoglobulin aus Blutserum, sowie aus Exsudaten und Transsudaten erkrankter Individuen. Es ist bekannt, dass sich im Blutserum voll Patienten nach dem Überstehen einer Infektionskrankheit nicht unwesentliche Mengen von spezifischen Immunstoffen vor finden.
Aus dieser Tatsache wurde eine praktische Folgerung dadurch gezogen, dass man das Blutserum von Individuen nach überstandener Krankheit, also sogenanntes Rekonvaleszentenserum, als Schutzmittel ge gen die betreffende Krankheit bei gesunden und als Heilmittel bei an derselben Krank heit erkrankten Individuen verwandte. E¯ ist fernerhin bekannt, dass im Blutserum von Individuen, welche an einer Infektions krankheit leiden oder überhaupt der Ein wirkung von Antigenen unterliegen, Stoffe enthalten sind, welche entweder die Infek tion auf andere Individuen zu übertragen befähigt sind, oder welche zum mindesten bei gesunden Individuen Krankheitserschei nungen derselben Art auszulösen vermögen.
Im ersten Falle handelt es sich um belebte Stoffe, also unmittelbar um Krankheits erreger (Bakterien oder andere Virusarten), im letzteren Falle um sogenannte Toxine, welche im Blute und in dem übrigen Säfte strom erkrankter Individuen zu kreisen pflegen. Man weiss auch, dass die gleichen Stoffe sich- in pathologischen Ergüssen, nämlich in Exsudaten und Transsudaten, vorfinden, die sich infolge von Infektions krankheiten in vielen Fällen in den Körper höhlen erkrankter Individuen ansammeln. Es wurde nun die Beobachtung gemacht, dass die Menge von Antikörpern und Antigenen in derartigen pathologischen Ergüssen im allgemeinen grösser ist als die Menge an die sen spezifischen Stoffen im Blutserum der gleichen Patienten.
' Es ist verständlich, dass die gleich zeitige Anwesenheit von lebenden Erregern und von unbelebten Antigenen (Toxinen) neben den eigentlichen Immunstoffen die Anwendung des Blutserums und ebenso die Anwendung von Exsudaten und Trans sudaten als Schutz- und Heilmittel bei an dern Individuen sehr beträchtlich erschwert, ja sogar in vielen Fällen vollkommen un- :rröglich macht, da mit ihrer Anwendung stets die Gefahr der krankmachenden Wir kung verbunden sein muss.
Es wurde nun gefunden, dass eine lZeindar- stellung von spezifischem Streptokokken- Pseudoglobulin aus Blutserum, sowie aus Exsudaten und Transsudat en erkrankter In dividuen dadurch ermöglicht ist, dass nach der durch elektroosmotische Behandlung und Filtrieren erfolgten Abtrennung des Eiglo- bulins und der in diesem enthaltenen Anti gene das Pseudoglobulin aus der vom Niederschlage befreiten Lösung durch Fäl lung mit Neutralsalzen abgeschieden,
der erhaltene Niederschlag in Wasser gelöst und diese Lösung auf elektroosmotischem Wege gereinigt wird.
Zur Durchführung dieses Verfahrens verfährt man beispielsweise folgendermassen: Die betreffenden Flüssigkeiten werden zunächst durch Zentrifugieren oder Filtrieren von den in ihnen enthaltenen festen Bestand teilen getrennt. Hierauf werden dieselben in den Mittelraum eines elektroosmotischen Dreizellenapparates gebracht, dessen hatho- disches Diaphragma aus Futtertuch (dicht gewebtes Segeltuch), während das anodische Diaphragma aus Chromgelatine auf Wolle oder Chinonleder besteht.
Durch die elektro- osmotische Behandlung entzieht man den betreffenden Flüssigkeiten zunächst alle Elektrolyte, wodurch das unlösliche Globu lin, nämlich das Eiglobulin, im isoelektri- schen Punkt zur Abscheidung kommt. Mit diesem Eiglobulin werden alle Antigene und alle in den Exsudaten ursprünglich vorhan denen Krankheitserreger zur Abscheidung gebracht. Man trennt dann in der salzfreien Flüssigkeit den Bodensatz, also das Eu globulin, von den flüssigen Bestandteilen durch Filtrieren oder Zentrifugieren. Letz tere enthalten nur noch Pseudoglobulin und Albumin.
Die durch das Filtrieren oder Zentrifugieren erhaltene völlig klare Flüs- sigkeit wird nach bekannten Methoden einer Salzfällung -unterworfen, durch welche eine Trennung von Albumin und Pseudoglobulin herbeigeführt werden kann. Der erhaltene, aus Pseudoglobulin bestehende Niederschlag wird hierauf in Wasser gelöst und wiederum der Einwirkung des elektrischen Stromes in dem oben beschriebenen Dreizellenapparat unterworfen. Man erhält hierbei eine voll kommen klare, salzfreie Flüssigkeit, welche im chemischen .Sinne nur Pseudoglobulin in Lösung und damit verbunden spezifische Immunstoffe in reichlicher Menge enthält.
Ausfährungsbeispiel: In dem Blutserum von mit Strepto- kokken behandelten oder an durch Strepto- kokken hervorgerufenen eitrigen Prozessen erkrankten Tieren finden sich grosse Mengen von Antikörpern.
Zur Reinclarstellung der diese Antikörper beinhaltenden Pseudo- g )- obulinfraktion des gesamten Serumeiweisses <B>1</B> wird folgenderweise vorgegangen.: 3 Liter Blutserum werden in den Mittelraum eines Dreizellenapparates gebracht und der Ein wirkung des elektrischen Stromes unter worfen. Die Spannung beträgt anfänglich nur 20 bis<B>3</B>0 Volt, während die Strom stärke zirka 10 bis 12 Amp, beträgt. Inner halb von etwa zwei Stunden sinkt die Stromstärke auf 0,5 bis 0,2 Amp., während die Spannung auf 220 Volt ansteigt.
In der Flüssigkeit scheidet sich nunmehr; und zwar bei einer Wasserstoffionenkonzen- tratioir vors etwa 6,4 pH., ein flockiger Nieder schlag ab, welcher finit Hilfe der Zentrifuge gesammelt wird.
Die vom Bodensatz befreite, völlig klare Flüssigkeit wird mit kristallinischem Mag nesiumsulfat gesättigt oder mit so viel gesättigter Ammoniumsulfatlösung versetzt, dass alle Pseudoglobuline abgeschieden wer den. In beiden Fällen erhält man einen reichlichen Niederschlag, welcher mit Hilfe der Zentrifuge oder durch Filtration von der iiberstehenden Lösung getrennt werden kann.
Der Niederschlag wird in wenig ),Wasser gelöst und wird zur Beseitiigung der überschüssigen Schwefelsäure in be kannter Weise mit Bariumacetat versetzt und vom abgeschiedenen Bariumsulfat ab- filtriert. Die klare Lösung wird dann er neut in dem oben beschriebenen Dreizellen apparat der Elektroosmose unterworfen. Man erhält eine völlig klare Flüssigkeit, welche gegebenenfalls im Vakuum unter Vermeidung hoher Temperaturen konzen triert oder zur Trockne eingedampft wer den kann.
Aus den angewandten 3 Litern Blutserum erhält man im Durchschnitt 0,5 -r Euglobulin und etwa 1 gr trockenes Paraglobulin, welches zum Gebrauch als Heilmittel gegen Streptokokken in physiolo gischer Kochsalzlösung aufzulösen ist.
Process for the pure preparation of specific streptococcal pseudoglobulin from blood serum, as well as from exudates and transudates of diseased individuals. It is known that after surviving an infectious disease, not insignificant amounts of specific immune substances are found in full blood serum in patients.
A practical conclusion was drawn from this fact that the blood serum of individuals who had survived the disease, so-called convalescent serum, was used as a protective agent against the disease in question in healthy individuals and as a remedy for individuals suffering from the same disease. E¯ is also known that the blood serum of individuals who suffer from an infectious disease or are subject to the action of antigens at all contains substances which are either capable of transmitting the infection to other individuals, or which at least in healthy individuals Individuals can trigger symptoms of the same kind.
In the first case it is about living substances, i.e. directly pathogens (bacteria or other types of virus), in the latter case about so-called toxins, which tend to circulate in the blood and in the rest of the juices of sick individuals. It is also known that the same substances are found in pathological effusions, namely in exudates and transudates, which in many cases accumulate in the body cavities of sick individuals as a result of infectious diseases. It has now been observed that the amount of antibodies and antigens in such pathological effusions is generally greater than the amount of these specific substances in the blood serum of the same patient.
'It is understandable that the simultaneous presence of living pathogens and inanimate antigens (toxins) in addition to the actual immune substances makes the use of blood serum and also the use of exudates and transudates as protective and therapeutic agents in other individuals very difficult, in fact, in many cases, it is completely impossible, since their use must always involve the risk of pathogenic effects.
It has now been found that specific streptococcal pseudoglobulin from blood serum and from exudates and transudates of diseased individuals is made possible by the fact that, after the electroosmotic treatment and filtering, the egg lobulin and that contained therein have been separated off Anti-genes, the pseudoglobulin is separated from the solution freed from the precipitate by precipitation with neutral salts,
the precipitate obtained is dissolved in water and this solution is purified by electroosmotic means.
To carry out this process one proceeds, for example, as follows: The liquids in question are first separated from the solid constituents contained in them by centrifugation or filtration. They are then brought into the middle of an electroosmotic three-cell apparatus, the hathodic diaphragm of which is made of lining cloth (tightly woven canvas), while the anodic diaphragm is made of chrome gelatine on wool or quinone leather.
The electro-osmotic treatment removes all electrolytes from the fluids in question, whereby the insoluble globulin, namely the egg globulin, is deposited in the isoelectric point. With this egg globulin, all antigens and all pathogens originally present in the exudates are deposited. The sediment, ie the Eu globulin, is then separated from the liquid components in the salt-free liquid by filtration or centrifugation. The latter only contain pseudoglobulin and albumin.
The completely clear liquid obtained by filtering or centrifuging is subjected to salt precipitation according to known methods, by means of which a separation of albumin and pseudoglobulin can be brought about. The resulting precipitate, consisting of pseudoglobulin, is then dissolved in water and again subjected to the action of the electric current in the three-cell apparatus described above. A completely clear, salt-free liquid is obtained, which in the chemical sense only contains pseudoglobulin in solution and associated specific immune substances in abundant quantities.
Example: Large amounts of antibodies are found in the blood serum of animals treated with streptococci or infected with purulent processes caused by streptococci.
To clarify the pseudog) obulin fraction of the total serum protein containing these antibodies, the following procedure is followed: 3 liters of blood serum are placed in the middle of a three-cell apparatus and subjected to the action of the electric current. The voltage is initially only 20 to <B> 3 </B> 0 volts, while the current is around 10 to 12 amps. Within about two hours, the current drops to 0.5 to 0.2 amps, while the voltage increases to 220 volts.
Now separates in the liquid; at a hydrogen ion concentration below about 6.4 pH., a flocculent precipitate, which is finely collected with the help of the centrifuge.
The completely clear liquid, which has been freed from the sediment, is saturated with crystalline magnesium sulfate or saturated ammonium sulfate solution is added to ensure that all pseudoglobulins are separated out. In both cases an abundant precipitate is obtained, which can be separated from the supernatant solution with the aid of the centrifuge or by filtration.
The precipitate is dissolved in a little water and, in order to eliminate the excess sulfuric acid, barium acetate is added in a known manner and the barium sulfate which has separated out is filtered off. The clear solution is then again subjected to electroosmosis in the three-cell apparatus described above. A completely clear liquid is obtained, which if necessary concentrated in vacuo while avoiding high temperatures or evaporated to dryness who can.
From the 3 liters of blood serum used, an average of 0.5 -r euglobulin and about 1 gram of dry paraglobulin are obtained, which must be dissolved in physiological saline solution for use as a remedy against streptococci.