CA 0221409~ 1997-08-l9 W O ~7/23231 PCTn~R96/02053 NOUVELI E IJTILISATION DE COMPOSITIONS
CONTENANT DE LA NACRE
L'invention concerne une nouvelle utilisation de la nacre à des fins médicales etlou cosmétologiques.
La référence Chemical Abstracts, Vol. 124, No. 1 1, 1996, p. 1084 décrit une prépar~lion de nacre associée à de la kératine; cette préparation est obtenue par 10 digestion à l'acide lactique de nacre pulvérulente, qui détruit la composante minérale de la nacre.
La référence US-A~ 393 045 (E.G. HENDERSON et al.) a pour objet des composants de la nacre ayant un effet curatif, par application d'une préparationobtenue après mise en contact d'un fruit contenant de l'acide citrique avec la 15 coquille d'un mollusque contenant la partie nacrée. On ne conserve ainsi que la partie organique de la nacre.
La référence EP-A-0 393 267 (M. KATO et al.) décrit une substance bioactive obtenue par c'nauffage de la nacre pendant plusieurs heures à température très élevée. Il semble que ce chauffage active un agent de croissance de plantes et 20 d'animaux.
La référence WO-A-95 30426 (S. CAMPRASSE et al.) concerne un produit de régénération et de cicatrisation cutanée, obtenu à partir d'un broyat du test nacré et d'un Iyophilisat de cellules animales que l'on traite par voie enzymatique et thermique.
25 La référence DE-A-34 37 184 (E. IWAN et al.~ concerne un agent pour traiter les brûlures à base d'un mélange de coquilles pulvérisées de moules et d'escargots.
Les coquilles sont au préalable lavées à l'eau et séchées.
Ce mélange a une action antibactérienne.
Le brevet FR-A-2 715 568 (J. VIRASSAMY~ revendique l'utilisation de poudre de 30 nacre pour la reconstruction osseuse.
La nacre est connue depuis longtemps pour ses propriétés régénératrices des os.
CA 022l409~ l997-08-l9 La Demanderesse a constaté que la nacre contenait dans sa structure cristalline des substances susceptibles d'activer les cellules de l'animal et notamment de permettre de réparer la coquille des conchifères lorsque celie-ci est lésée. Certaines substances contenues dans le biominéral qu'est la nacre sont de nature protéique et 5 répondent bien aux anticorps dirigés contre les collagènes humains et de rats, de type I et lll. Il existe donc une analogie entre la peau et la coquille des conchifères.
Sur la base de cette observation, la Demanderesse a étudié et vérifié que la nacre contenait des substances originales qui pouvaient intervenir dans les processus de restructuration, de stimulation, etc., de la peau.
La nécessité de donner à la peau un aspect stimulé ou rajeuni utilise jusqu'à ce jour des soins qui éliminent la couche cornée superficielle, afin de faire apparaître les couches cellulaires sousjacenles. C'est ainsi que l'on donne à la peau un aspectrajeuni, mais avec la triple conséquence:
15 - d'affiner la peau par un amincissement de l'épiderme alors que celui-ci voit son épaisseur diminuer avec l'âge, - de diminuer le nombre de cellules de l'épiderme, entamant ainsi le capital de réplication cellulaire, - d'enlever les cellules apoptosées ou mortes de la partie superficielle de l'épiderme, 20 éli",i"a"L ainsi le film protecteur du stratum corneum et plus particulièrement du stratum disjonctum, sensibilisant la peau aux agressions extérieures.
D'autres techniques de soins font appel à des aspects stric;lemellt visuels, comme le dépôt d'un film lipophile ou siliconé, brillant ou satiné, qui rend étanches les couches 25 externes et évite ainsi leur déshydralalion. Enfin, les modifications de la couleur de la peau assurent un aspect plus chaleureux (bronzage) ou juvénile (blanchiment) en s'associant souvent à des protecteurs solaires (écrans organiques ou minéraux) ou des stimulants du bronzage naturel ou artificiel (Dihydroxyacétone ou D.H.A.). Ces soins ne contribuent en aucune façon à améliorer la qualité naturelle de la peau30 puisqu'ils ne sont, en fait, que des maquillages.
CA 0221409~ 1997-08-l9 C'est pourquoi la présente invention vise à résoudre le problème technique qui n'avait pas été résolu jusqu'ici, de présenter à la surface de la peau une structure néoformée qui lui confère un aspect jeune et dynamique sans éliminer les cellules.
5 La Demanderesse a étudié les conséquences de l'emploi de la nacre sur d'autrestypes de cellules comme les fibroblastes, les Iymphocytes, les kératinocytes et les cellules endothéliales.-L'observation des comportements cellulaires a permis de constater la survenue denouvelles propriétés non décrites à ce jour et qui per",ellent d'employer la nacre 10 pour ces nouvelles ulilisdliGns.
En effet, la poudre de nacre ajoutée dans la culture de kératinocytes provoque de manière inattendue une synthèse accrue de cytokératines.
La structure présente à la surface cutanée doit etre une substance naturellement15 produite par les cellules épithéliales, comme les kératinocytes, qui co, Ill ibue à
l'épaississement physiologique de l'épiderme.
La solution retenue a été de choisir de ne pas décaper la peau pour amener à la surface de nouvelles structures cellulaires, mais de faire produire aux kératinocytes 20 des substances néoformées, les cytokératines, que génèrent normalement ces cellules lorsqu'elles sont jeunes ou actives.
Ces substances protéiques contribuent ainsi à l'épaississement de l'épiderme parl'amélioration de la qualité cytoplasmique des kératinocytes ainsi que des cornéocytes, et par voie de conséquence à sa résistance passive aux agressions 25 extérieures. De plus, la restructuration des stratum épithéliaux améliore la masse de l'épiderme, constituant ainsi une réserve de messagers et contribuant à sa résistance active aux agressions extérieures.
La partie la plus superficielle de la peau est constituée par des cellules anucléées 30 dont les couches les plus externes forment le Stratum corneum. Cette couche cornée externe peut être à l'image de la coquille des bivalves. Il y a donc tout lieu de penser que les processus de restauration de cette structure, (constituée d'une matière sans matériel nucléaire et génétique comme l'est la coquille), peuvent CA 0221409~ 1997-08-19 répondre aux mêmes signaux de restauration. Il reste cependant un problème dfflicile à résoudre du fait que la coquille des bivalves baigne dans l'eau et que les substances relarguées à partir de la coquille à l'occasion d'une lésion doivent répondre à une spécificité d'action très précise.
5 De ce fait, les études menées par la Demanderesse se sont heurtées à de nombreuses difficultés pour faire exprimer cette activité et la mettre en évidence.
L'analyse des protéines après un broyage traditionnel de la nacre montre que celle-ci peut contenir ~i,6 mg de substances protéiques par gramme. On a constaté que 10 ces substances ne développen~ pas selon la dilution la même activité (phosphatase alcaline) sur une culture d'ostéoblastes. De plus, on a noté de manière inattendue que si l'on dilue la nacre en poudre par une autre poudre constituée essentiellement par de l'aragonite (constituant minéral de la nacre), la réponse des cellules à la présence de biocristaux de nacre se trouve amplifiée. C'est donc avec une 15 préparation constituée de nacre et d'aragonite que les essais décrits plus loin ont été réalisés. Selon l'effet souhaité, il est possible d'utiliser des dilutions ayant un pourcentage variable de nacre dans le mélange total.
La présente invention consiste plus spécifiquement dans l'utilisation d'une poudre 20 formée de nacre et éventuellement d'aragonite, sous forme finement pulvérulerite et mélangée à des excipients convenables, en vue de la réaiisation de compositions pharmaceutiques etlou cosr"eli4ues destinées à améliorer la synthèse de nouvelles cytokératines.
L'invention consiste encore dans l'utilisation d'une poudre formée de nacre et 25 éventuellement d'aragonite, sous forme finement pulvérulente et mélangée à des excipients convenables, en vue de son application dans des milieux de cultures cellulaires afin d'améliorer la synthèse de nouvelles cytokératines.
La synthèse très importante de nouvelles cytokératines assure l'amélioration des30 qualités et de l'aspect de la peau, et permet notarnl~ent d'assurer les processus de restauration de la structure de la peau, d'exercer un rôle protecteur sur la peau et de lui conférer une résistance active dans des conditions extérieures agressives (soleil, froid, e~osition prolongée à l'eau, etc.), d'assurer l'amélioration des propriétés CA 0221409~ 1997-08-19 W O g7/23~31 PCTAFR96/02053 mécaniques de la peau, de lui co"rérer un aspect jeune et dynamique, grâce à unestructure néoformée à la surface.
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La poudre formée de nacre et d'aragonite est constituée de telle sorte que le 5 mélange contient de la nacre dans une proportion allant de 0,1 % à 98 % dans le mélange total, et de préférence dans une propollion allant de 5 à 20 % dans le mélange total.
Les essais décrits plus loin ont été réalisés de préférence avec une préparationconstituée de 10 % de nacre et de 90 % d'aragonite.
10 La présente invention concerne encore les compositions pl ,armaceutiques et/ou cosmétiques assurant l'amélioration des ~ tes et de l'aspect de la peau, caractérisées en ce qu'elles sont constituées de nacre, éventuellement additionnée d'aragonite, en association ou en mélange avec un excipient ou un diluant inerte, non toxique, pulvérulent.
Si la nacre permet de développer un effet dermo-protecteur, c'est dans la synthèse des constituants du Stratum corneum que l'on trouve le plus de modiFications. Lacouche cornée étant constit- ~ée par la condensation des cytokératines, la Demanderesse a orienté ses analyses vers cette matière. Les conséquences 20 envisageables sont essentiellement dans la qualité de la réponse des cellules au stress d'une agression (synthèse d'interleukine 1 : IL-1). De plus, la peau est soumise à une impor~ante activité photolumineuse à laquelle elle répond par la synthèse d'un élément photoprolecteur: la mélanine. On observe de ce fait une diminution de la synthèse de la mélanine ou une meilleure répartition de celle-ci 25 dans les kératinocytes.
Rôle de la nacre dans la synthèse des cytokératines Les cytokératines se distinguent par leur poids moléculaire et pour la plupart d'entre elles il existe un a"licor~,s spéciFique. Afin d'étudier l'ensemble du phénomène, on a 30 utilisé un anticorps dirigé contre l'ensemble des cytokératines. De ce fait, il est appelé anti-pan cytokératines.
On a donc réalisé une culture cellulaire de kératinocytes obtenus à partir de prélèvements chirurgicaux de peau. La peau est traitée par digestion enzymatique et CA 022l409~ l997-08-l9 W O 97/23231 PCT~R96/02053 mise en incubation dans un milieu spécifique (Mac Koy modifié ou du type KBM-Kératinocytes Basal Medium -): milieu de culture ne contenant pas de sérum.
105 cellules sont incubées pendant 24 heures en présence de 50 mg de nacre par 5 ml de milieu dépourvu de sérum de veau foetal ou de sérum protéique similaire.Les cellules sont rincées, le surnageant éliminé, les cellules sont séparées de la nacre, Iysées, puis un ~ Western Blot ~ est réalisé sur la fraction cellulaire. La technique du ~ Western Blot ~ est une technique analytique ~asée sur une séparation des protéines selon leur poids moléculaire par électrophorèse suivie 10 d'une détection immunologique. Un anticorps de deuxième couche greffé à un enzyme révèle le premier anticorps lors de la mise en contact avec un substrat cl ,ro, nogène. Pour oi~tenir des résultats interprétables, plusieurs dilutions sont testées et la ~ua"liricdlion de la substance à doser, -ici les pan cytokératines- se fait par simple spe~tropho~o"~e~,ie d'absorption ou par analyse d'image de la plaque de 15 révélation. Dans ces conditions, on a constaté que l'hypothèse de base était vérifiée et que la nacre était susceptibie de doubler la quantité de cytokératines synthétisée par les kératinocytes. Les résultats sont étudiés en tenant compte de la synthèse protéique totale sur plusieurs dilutions, car d'une part le nombre de cellules n'est pas rigoureusement constant, et d'autre part leur activité n'est pas nécessai~n,ent 20 coor~lo"née.
Protéines totales (en ,ug) volume testé en ~ul: 10 20 40 témoin (sans nacre) 8 9,3 18,3 nacre 3 7,5 12 Signal cytokératine volume testé en IJI: 10 20 40 témoin (sans nacre) 62,8 70,9 178 nacre 18,4 108 275 Signal cytokératine (X 10)1 Protéines totales volume testé en ,ul: 10 20 40 témoin (sans nacre) 78 76 97 nacre 61 130 230 CA 0221409~ 1997-08-19 W O 97/23231 PCT~FR96/02053 Rapport Nacre I témoin volume testé en ,ul: 10 20 40 rapport 0,78 1,89 2,36 5 On note donc que la nacre augmente la synthèse des pan cytokératines d'un facteur multiplicatif de l'ordre de 2.
La figure 1 est une représentation graphique de l'évolution de la synthèse des pan cytokératines en fonction du volume testé.
10 On y a montré le rapport slgnal cytokératine X 10 /llg de protéines totales pour le témoin et pour les préparations à base de nacre.
On notera que l'analyse prend toute sa sensibilité lors de l'électrophorèse d'aumoins 20 ~
Si la synthèse des cytokératines améliore les propriétés mécaniques de la peau, il 15 est possible d'envisager un rôle protPctl~nr de la nacre lors des agressions. On peut considérer deux types de réponses aux agressions: les réponses aux agressions detype chimique ou biologique mettant en jeu l'interleukine en première intention et les réponses impliquant la mélanine.
20 Role de la nacre sur la synthèse de l'interleukine 1 (IL-1):
La figure 2 représente les résultats obtenus lors de la culture de la lignée celluiaire HL 60 en présence de nacre.
On note une diminution importante de la sécrétion d'lL-1 lorsque les celhlles sont cultivées en présence de nacre.
Réaction de protection mettant en ~eu la mélanine La culture de mélanocytes (lignée de l'ECACC) lignée G 361 en présence de nacre ne modifie que faiblement la sécrétion de la mélanine.
Moyenne témoin 0,150 0,149 0,1480,149 nacre 0,5 % 0,150 0,132 0,1400,141 nacre 1% 0,139 0,137 0,1430,141 CA 02214095 1997-08-l9 W O 97/23231 PCTrFR96/02053 On constate néanmoins que le nombre de dendrites des mélanocytes est augmenté
lors de la coculture mélanocytes - kératinocytes issus d'e~q~lants de la peau.
(nombre de dendrites) témoin 5 nacre 0,2 % 12 nacre 1 % 1 5 On en déduit une meilleure répartition de la mélanine.
_ CA 0221409 ~ 1997-08-l9 WO ~ 7/23231 PCTn ~ R96 / 02053 NEW E IJ USE OF COMPOSITIONS
CONTAINING NACRE
The invention relates to a new use of mother-of-pearl for medical purposes and / or cosmetological.
The Chemical Abstracts, Vol. 124, No. 11, 1996, p. 1084 describes a preparations ~ mother-of-pearl lion combined with keratin; this preparation is obtained by 10 lactic acid digestion of powdery mother-of-pearl, which destroys the mineral component mother-of-pearl.
The reference US-A ~ 393,045 (EG HENDERSON et al.) Relates to components of mother-of-pearl having a curative effect, by application of a preparation obtained after contacting a fruit containing citric acid with the 15 shell of a mollusc containing the pearly part. We only keep the organic part of mother-of-pearl.
Reference EP-A-0 393 267 (M. KATO et al.) Describes a bioactive substance obtained by cauauffage mother of pearl for several hours at very high. This heating appears to activate a plant growth agent and 20 animals.
The reference WO-A-95 30426 (S. CAMPRASSE et al.) Relates to a product of skin regeneration and healing, obtained from a shredded pearly test and of an animal cell lyophilisate which is treated enzymatically and thermal.
25 The reference DE-A-34 37 184 (E. IWAN et al. ~ Relates to an agent for treating burns from a mixture of sprayed mussel and snail shells.
The shells are washed beforehand with water and dried.
This mixture has an antibacterial action.
Patent FR-A-2,715,568 (J. VIRASSAMY ~ claims the use of 30 mother-of-pearl for bone reconstruction.
Mother of pearl has been known for a long time for its regenerative properties of bones.
CA 022l409 ~ l997-08-l9 The Applicant has found that mother-of-pearl contains in its crystal structure substances likely to activate animal cells and in particular to allow to repair the shell of conchifers when it is damaged. Some substances contained in the biomineral that is nacre are of a protein nature and 5 respond well to antibodies against human and rat collagens, type I and III. There is therefore an analogy between the skin and the shell of conchifers.
Based on this observation, the Applicant has studied and verified that the nacre contained original substances which could intervene in the processes of restructuring, stimulation, etc., of the skin.
The need to give the skin a stimulated or rejuvenated appearance used to date treatments that remove the surface stratum corneum, in order to reveal the underlying cell layers. This is how the skin is given a rejuvenated appearance, but with the triple consequence:
15 - to refine the skin by a thinning of the epidermis while the latter sees its thickness decrease with age, - to decrease the number of cells of the epidermis, thus undermining the capital of cell replication, - remove apoptotic or dead cells from the superficial part of the epidermis, 20 eli ", i" a "L thus the protective film of the stratum corneum and more particularly of the stratum disjunctum, sensitizing the skin to external aggressions.
Other care techniques involve strict visual aspects, such as deposit of a lipophilic or silicone film, gloss or satin, which seals the layers 25 external and thus prevents their dehydralalion. Finally, changes in the color of the skin provides a warmer (tan) or youthful (whitening) appearance often associated with sun protectors (organic or mineral screens) or stimulants for natural or artificial tanning (Dihydroxyacetone or DHA). These skincare in no way contributes to improving the natural quality of the skin30 since they are, in fact, only make-up.
CA 0221409 ~ 1997-08-l9 This is why the present invention aims to solve the technical problem which had not yet been resolved, to present a structure on the surface of the skin neoformed which gives it a young and dynamic appearance without eliminating cells.
5 The Applicant has studied the consequences of the use of nacre on other types of cells such as fibroblasts, Iymphocytes, keratinocytes and endothelial cells.
The observation of cellular behaviors made it possible to note the occurrence of new properties not described to date and which allow "to use pearl 10 for these new ulilisdliGns.
Indeed, the pearl powder added in the culture of keratinocytes causes unexpectedly increased synthesis of cytokeratins.
The structure present on the skin surface must be a substance naturally produced by epithelial cells, such as keratinocytes, which co physiological thickening of the epidermis.
The solution chosen was to choose not to strip the skin to bring the surface of new cellular structures but to cause keratinocytes to produce 20 newly formed substances, cytokeratins, which are normally generated by cells when young or active.
These protein substances thus contribute to the thickening of the epidermis by improving the cytoplasmic quality of keratinocytes as well as corneocytes, and consequently its passive resistance to attacks 25 outdoor. In addition, the restructuring of the epithelial stratum improves the mass of the epidermis, thus constituting a reserve of messengers and contributing to its active resistance to external aggressions.
The most superficial part of the skin is made up of anucleated cells 30, the outermost layers of which form the Stratum corneum. This layer outer cornea can be like the shell of bivalves. There is therefore every place to think that the restoration processes of this structure, (consisting of a matter without nuclear and genetic material like the shell), can CA 0221409 ~ 1997-08-19 respond to the same restoration signals. However, there is still a problem difficult to resolve since the bivalve shell is bathed in water and substances released from the shell on the occasion of an injury must respond to a very specific action specificity.
5 As a result, the studies carried out by the Applicant have come up against many difficulties to express and highlight this activity.
Protein analysis after traditional crushing of the mother-of-pearl shows that this can contain ~ i, 6 mg of protein substances per gram. We found that 10 these substances do not develop ~ according to the dilution the same activity (phosphatase alkaline) on an osteoblast culture. In addition, unexpectedly noted that if you dilute the nacre powder with another powder consisting essentially by aragonite (mineral constituent of mother-of-pearl), the response of cells to presence of mother-of-pearl biocrystals is amplified. So it is with a 15 preparation consisting of mother-of-pearl and aragonite which the tests described below have been made. Depending on the desired effect, it is possible to use dilutions having a variable percentage of mother-of-pearl in the total mixture.
The present invention more specifically consists in the use of a powder 20 formed of mother-of-pearl and possibly aragonite, in finely pulverulent form and mixed with suitable excipients, for the production of compositions etlou cosr "eli4ues pharmaceuticals intended to improve the synthesis of new cytokeratins.
The invention also consists in the use of a powder formed of mother-of-pearl and 25 optionally aragonite, in finely powdered form and mixed with suitable excipients, for application in culture media cells to improve the synthesis of new cytokeratins.
The very important synthesis of new cytokeratins ensures the improvement of the qualities and appearance of the skin, and allows notarnl ~ ent to ensure the processes of restoration of the skin structure, to exercise a protective role on the skin and to give it active resistance in aggressive external conditions (sun, cold, prolonged exposure to water, etc.), to improve properties CA 0221409 ~ 1997-08-19 WO g7 / 23 ~ 31 PCTAFR96 / 02053 mechanical skin, to give it a youthful and dynamic appearance, thanks to a newly formed structure on the surface.
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The powder formed of mother-of-pearl and aragonite is constituted so that the 5 mixture contains mother of pearl in a proportion ranging from 0.1% to 98% in the total mixture, and preferably in a propollion ranging from 5 to 20% in the total mixture.
The tests described below were preferably carried out with a preparation consisting of 10% mother-of-pearl and 90% aragonite.
The present invention also relates to pl, armaceutical and / or cosmetics ensuring improvement of the skin and the appearance of the skin, characterized in that they consist of mother-of-pearl, possibly added aragonite, in combination or in mixture with an inert excipient or diluent, non-toxic, powdery.
If mother-of-pearl makes it possible to develop a dermo-protective effect, it is in the synthesis constituents of the Stratum corneum that we find the most modifications. The corneal layer being constituted by the condensation of cytokeratins, the Applicant has directed its analyzes towards this matter. The results 20 possible are essentially in the quality of the response of cells to stress of aggression (synthesis of interleukin 1: IL-1). In addition, the skin is subject to an important photoluminous activity to which it responds by synthesis of a photoprolective element: melanin. There is therefore a decreased melanin synthesis or better distribution of melanin 25 in keratinocytes.
Role of mother-of-pearl in the synthesis of cytokeratins Cytokeratins are distinguished by their molecular weight and for most of them there is a specific "licor". In order to study the whole phenomenon, we have 30 used an antibody directed against all cytokeratins. Therefore, it is called anti-pan cytokeratins.
A cell culture of keratinocytes obtained from surgical skin samples. The skin is treated by enzymatic digestion and CA 022l409 ~ l997-08-l9 WO 97/23231 PCT ~ R96 / 02053 incubation in a specific medium (modified Mac Koy or KBM type-Basal Medium Keratinocytes -): culture medium containing no serum.
105 cells are incubated for 24 hours in the presence of 50 mg of mother-of-pearl per 5 ml of medium devoid of fetal calf serum or similar protein serum. The cells are rinsed, the supernatant removed, the cells are separated from the nacre, Iysées, then a ~ Western Blot ~ is carried out on the cell fraction. The the ~ Western Blot ~ technique is an analytical technique ~ based on a separation of proteins according to their molecular weight by electrophoresis followed 10 of an immunological detection. A second layer antibody grafted to a enzyme reveals first antibody when contacted with substrate cl, ro, nogene. To maintain interpretable results, several dilutions are tested and the ~ ua "liricdlion of the substance to be assayed, - here the pan cytokeratins - is by simple spe ~ tropho ~ o "~ e ~, ie absorption or by image analysis of the plate 15 revelation. Under these conditions, it was found that the basic hypothesis was verified and that mother-of-pearl was likely to double the amount of cytokeratins synthesized by keratinocytes. The results are studied taking into account the synthesis total protein over several dilutions, because on the one hand the number of cells is not not strictly constant, and on the other hand their activity is not required ~ n, ent 20 coor ~ lo "born.
Total protein (in, ug) volume tested in ~ ul: 10 20 40 witness (without mother-of-pearl) 8 9.3 18.3 mother-of-pearl 3 7.5 12 Cytokeratin signal volume tested in IJI: 10 20 40 witness (without mother-of-pearl) 62.8 70.9 178 mother-of-pearl 18.4 108 275 Cytokeratin signal (X 10) 1 Total proteins volume tested in, ul: 10 20 40 witness (without mother-of-pearl) 78 76 97 mother-of-pearl 61 130 230 CA 0221409 ~ 1997-08-19 WO 97/23231 PCT ~ FR96 / 02053 Mother-of-pearl report I witness volume tested in, ul: 10 20 40 ratio 0.78 1.89 2.36 5 We therefore note that mother-of-pearl increases the synthesis of pan cytokeratins by a factor multiplicative of the order of 2.
Figure 1 is a graphic representation of the evolution of the synthesis of pan cytokeratins depending on the volume tested.
10 There was shown the average cytokeratin X 10 / llg total protein ratio for the witness and for mother-of-pearl preparations.
Note that the analysis takes all its sensitivity during the electrophoresis of at least 20 ~
If the synthesis of cytokeratins improves the mechanical properties of the skin, it 15 is possible to consider a role protPctl ~ nr nacre during assaults. We can consider two types of response to aggressions: responses to chemical or biological aggressions involving interleukin in first intention and responses involving melanin.
20 Role of mother-of-pearl on the synthesis of interleukin 1 (IL-1):
FIG. 2 represents the results obtained during the culture of the cell line HL 60 in the presence of mother-of-pearl.
There is a significant decrease in the secretion of IL-1 when the cells are grown in the presence of mother-of-pearl.
Protective reaction involving ~ had melanin The culture of melanocytes (ECACC line) line G 361 in the presence of mother-of-pearl only slightly changes the secretion of melanin.
Average witness 0.150 0.149 0.1480.149 mother-of-pearl 0.5% 0.150 0.132 0.1400.141 mother-of-pearl 1% 0.139 0.137 0.1430.141 CA 02214095 1997-08-l9 WO 97/23231 PCTrFR96 / 02053 However, we see that the number of melanocyte dendrites is increased during the melanocyte - keratinocyte coculture derived from skin lants.
(number of dendrites) witness 5 mother-of-pearl 0.2% 12 mother-of-pearl 1% 1 5 We deduce a better distribution of melanin.
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