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BRPI0920876A2 - compostos de carbazol e usos terapêuticos dos compostos - Google Patents

compostos de carbazol e usos terapêuticos dos compostos Download PDF

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BRPI0920876A2
BRPI0920876A2 BRPI0920876-3A BRPI0920876A BRPI0920876A2 BR PI0920876 A2 BRPI0920876 A2 BR PI0920876A2 BR PI0920876 A BRPI0920876 A BR PI0920876A BR PI0920876 A2 BRPI0920876 A2 BR PI0920876A2
Authority
BR
Brazil
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hydrogen
cancer
compound
alkyl
aliphatic ring
Prior art date
Application number
BRPI0920876-3A
Other languages
English (en)
Inventor
John Tucker
Sergey Sviridov
Leonid Brodsky
Catherine Burkhart
Andrei Purmal
Andrei Gudkov
Original Assignee
Incuron, Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Incuron, Llc filed Critical Incuron, Llc
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Abstract

COMPOSTOS DE CARBAZOL E USOS TERAPÊUTICOS DOS COMPOSTOS. São revelados compostos das fórmulas estruturais gerais (I) e (II) e uso dos compostos e sais e hidratos destes, como agentes terapêuticos. As doenças e condições tratáveis incluem cânceres, doenças inflamatórias e condições, e doenças de imunodeficiência.

Description

2. COMPOSTOS DE CARBAZOL E USOS TERAPÊUTICOS DOS COMPOSTOS i REFERÊNCIA CRUZADA COM PEDIDO RELACIONADO ' Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório de Patente U.S. Nº 61/102.913, depositado em 6 de outubro de 2008, aqui incorporado por referência em sua totalidade.
CAMPO DA INVENÇÃO Esta invenção está relacionada aos compostos de carbazol, aos métodos de preparação dos compostos, às composições farmacêuticas que contêm os compostos, e ao seu uso como agentes terapêuticos. Em particular, a invenção está relacionada aos compostos de carbazol e seu uso em diversas áreas terapêuticas, incluindo o tratamento de cânceres.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO A frequência de câncer em humanos aumentou no mundo desenvolvido à medida que a população envelheceu. Para alguns tipos de cânceres e de acordo com o estágio da doença no diagnóstico, as taxas de morbidade e mortalidade não melhoraram significatiívamente nos últimos anos, apesar de intensas pesquisas. A indução de morte celular é uma das estratégias mais atrativas no tratamento do câncer. Há uma necessidade significativa para identificar agentes que sejam capazes de induzir morte celular em células tumorais e/ou que potencializem terapias quimioterápicas e com radiação.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção é dirigida aos compostos e composições que induzem morte celular, e aos usos terapêuticos dos compostos no tratamento de um câncer e de |
7 outras condições em indivíduos que necessitam desse tratamento. A presente invenção também é dirigida aos oO métodos de preparação dos compostos terapêuticos.
Mais particularmente, a presente invenção é dirigida aos compostos e métodos de tratamento de doenças e condições como, por exemplo, cânceres, doenças inflamatórias, infecções microbianas, infecções virais e infecções por protozoários. Os compostos são úteis em um método que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente efícaz de um composto de fórmula estrutural (1) a um indivíduo que dele necessita.
Em particular, a presente invenção é dirigida aos compostos de carbazol que possuem uma fórmula estrutural (1):
TN RA “AI R? N Rô É 3 dl 4 Rº' (CHJ,R HC-R?
N Rº OURO (1) * em que Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cris alquil, C1-e haloalquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, OR“, N(Rº),; e SRº; alternativamente, Rº e R' ou NRº e R', juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico ou heterocíclico de cinco ou seis |
1 membros; Ú Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, OO C1-; alquil, Ci; haloalquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, OR, N(Rº); e SRº, alternativamente, Rº e
RºouNRº e Ri, juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco ou seis membros ou um anel alifático carbocíclico ou heterocíclico de cinco ou seis membros;
Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,
Cie alquil, Cr-6 hidroxialquil, cicloalquil, heterocicloalquil, áril, heteroaril e C(=O)Rº, ou Rº e Rº são tomados em conjunto para formar um anel alifático de cinco, seis ou sete membros, contendo opcionalmente um átomo de oxigênio;
Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril e C(=O)Rº, ou Rê e R', juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros;
Rº, independentemente, é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril e heteroaril, ou dois grupos Rº, tomados em conjunto com um nitrogênio ao qual estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros;
R, RW, R, R, R e Rº, independentemente, são selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-« alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, halo, ORº, C(=0) Rº, C(=0) ORº, OC (=O) Rº, C(=O)N(Rº)2, C(=O)NRºSO.Rº, N(Rº)2, NRºC(=O)Rº, NRºC(=O)N(Rº)., CN, NOz,
CF;, OCF3, SRº, SOR”, SOR”, SOJN(Rº); e OSOZCF;;
|
1 R' é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril e O heteroaril; e n é O, 1, 2, 3, 4 Ou 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste. A presente invenção também está dirigida aos compostos de carbazol que possuem uma fórmula estrutural (IL): Rº RI ON : : NO, Ro N Rs | R11 (CH), RI? | —R as CH-R
N 1” “pg R R (ID, em que R' é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cr. alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril e C(=0)R", ou R e Rº são tomados em conjunto para formar um anel alifático de cinco, seis ou sete membros contendo opcionalmente um átomo de oxigênio; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, hetercaril e C(O)RI, ou Rº e Rº, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros; R", independentemente, é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril e heteroaril, ou dois grupos Rº,
" tomados em conjunto com um nitrogênio ao qual estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis oO membros; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Crie alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aríl e heteroaril; R, Rº, Rº, Rº, Rº e Rº, independentemente, são selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, Cr alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, halo, OR, C(=O)R, C(=0)OR, OC(=O)R', C(=O)N(R")., C(=O)NRFSORº, NR), NRºC(=O)R", NR"CI=O)N(R")., CN, NO, CF;3, OCF;, SRP, SOR”, SOR", SON(R"), e OSOZCF:; péo0o, 11,2,3,40u5, desde que, quando p for 2, um de R e Rº seja diferente de etil, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
Uma doença ou condição que pode ser tratada de acordo com a presente invenção inclui, por exemplo, um câncer, inflamação, doença autoimune, infecção microbiana, infecção por protozoário, infecção víral, doença enxerto versus hospedeiro, uma condição associada à infecção por HIV, ou células pré-cancerosas. Formas de câncer que podem ser tratadas incluem, sem limitação, carcinoma de célula renal, sarcoma, câncer de próstata, câncer de mama, câncer pancreático, mieloma, leucemia mielóide e linfoblástica, neuroblastoma, glioblastoma, ou um câncer causado por infecção por HTLV.
Em algumas modalidades, o composto possui uma fórmula estrutural geral (Ia): |
2 o Rº Ró o
IEA R? v Rô 3 4 s R (cn d.º HER? pe Ng (la) ' em que Rº é C1; alquil, Ci. haloalquil, C3s cicloalquil, N(Rº); ou ORº, ou Rº e R', juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco ou seis membros; R é Gs alquil, Ci, haloalquil, C3s cicloalquil, N(Rº); ou OR, ou Re Rº, juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco ou seis membros ou um anel alifático de cinco ou seis membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é Ci. alquil, Ca.5 cicloalquil ou C1-3 hidroxialquil; Rº é hidrogênio, C1.. alquil ou C;.5 cicloalquil, ou Re R', juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alífático de cinco ou seis membros contendo um átomo de nitrogênio, ou Rº e Rº são tomados em conjunto para formar um anel alifático de seis ou sete membros, contendo opcionalmente um átomo de oxigênio; Rº, independentemente, é hidrogênio ou C1-3 alquil; R' é hidrogênio ou C1.; alquil; R? é hidrogênio, hidróxi ou C1.; alcóxi; Rº' e R, independentemente, são hidrogênio ou C1-3 alquil; Rº é hidrogênio, hidróxi, C1.; alcóxi ou halo; |
2 Rº é hidrogênio, C1.; alquil, C;1.; alcóxi ou halo; R' é hidrogênio ou C1.; alquil; e CU né0o, 1,2,3,4 005, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
Em outras modalidades, o composto possui uma fórmula estrutural geral (Ib); o R RO
É É Too R? " RÔ 3 4 R (cn a? HC-R' Re Ng (b) em que Rº é metil, etil, n-propil, ciclopropil, NH(CH;) ou OCH3, ou Rº e R*, juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco membros; RP é metil, etil, n-propil, ciclopropil, NH(CH;) ou OCH;, ou Rê e Rº, juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco membros ou um anel alifático de cinco membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é metil, etil, n-propil, isopropil, ciíclobutil ou 2-hidroxietil; Rº é hidrogênio, metil, etil ou ciclobutil, ou Re R, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco membros contendo um átomo (de nitrogênio; ou Rº e Rº são tomados em conjunto para formar |
. uma porção morfolino; uma porção tetrahidrofuril; uma : porção piperidinil;
À | O o uma porção ; ou uma porção y; Rº é hidrogênio; Rº é hidrogênio, hidróxi ou metóxi; Rº e Rº são hidrogênio; Rº é hidrogênio, hidróxi, metóxi ou flúor; Rº é hidrogênio, metil, metóxi ou flúor; R' é hidrogênio; e né lou2, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste, Em outras modalidades, o composto possui uma fórmula estrutural geral (IIa);: Rº Ro ON NO? . CO RIº N Rh? Ro (CH, R2 nro RR (a), em que Rí é C1.; alquil; Rº é hidrogênio ou C;1, alquil, ou RE e Rº, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é hidrogênio ou C1.; alquil; | oe R*º é hidrogênio, hidróxi ou C13 alcóxi; ' R* e Rº, independentemente, são hidrogênio ou C13 oO alquil; R”* é hidrogênio, hidróxi, C;1.; alcóxi ou halo; R** é hidrogênio, C1.; alquil ou C1.; alcóxi; Rº é hidrogênio ou C1.; alquil; e péo, 1l,2,3,4 05, desde que, quando p for 2, um de Rº e Rº seja diferente de etil, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
Ainda em outras modalidades, o composto possui uma fórmula estrutural (IIb): "OO as " (CHzl
AA RETRO (Tb), em que RÍ é metil ou etil; Rº é hidrogênio ou metil, ou Re Rº, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é hidrogênio; e pélou?l, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
Um aspecto da presente invenção consiste em fornecer um método de tratamento de uma condição ou doença por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos de fórmula estrutural (1), (Ta), (Ib), |
1. (II), (ITa) ou (IIb), ou uma composição que compreende um ' ou mais de um composto de fórmula estrutural (1), (Ia), Ú (Ib), (II), (IIa) ou (IIb), a um indivíduo que dele necessita. A composição pode ainda compreender um ativador do receptor de morte celular de um polipeptídeo da família TNF. O ativador pode ser um polípeptídeo de TNF, por exemplo, um ou mais de NGF, CD40L, CD1l37L/4-1BBL, TNF-a, CD1341L/OX40L, CD271L/CD70, FasL/CD95, CD30L, TNF-B/LT-a, LT- B e TRAIL.
Outro aspecto da presente invenção consiste em fornecer composições farmacêuticas que compreendem um ou mais compostos de fórmula estrutural (1) ou (II), e o uso das composições em um tratamento terapêutico de uma doença ou condição.
Ainda outro aspecto da presente invenção consiste em fornecer um método de tratamento de um indivíduo submetido a um tratamento quimioterápico ou radioterápico para uma condição médica que compreende a administração de um composto de fórmula estrutural (1) e/ou (11) em combinação com um agente quimioterápico, um agente radioterápico, Ou ambos, ao indivíduo. Uma indicação não limitante tratada por esse método é um câncer.
Os aspectos acima e aspectos adicionais da presente invenção ficarão evidentes a partir da descrição não limitante seguinte de modalidades preferidas da presente invenção.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Figura la é um diagrama de número de vezes da atividade de NF-xB em relação ao controle de DMSO vs.
concentração para carbazóis da presente invenção; |
2 A Figura 1b é um diagrama de ECs, (pM) para ativação : de p53 e inibição de NF-KXB para os carbazóis da presente O invenção; As Figuras 2a a 2k são diagramas de % de viabilidade celular vs. concentração (pM) para várias células tumorais tratadas com carbazóis da presente invenção; A Figura 3 contém um diagrama de volume tumoral vs. dias de tratamento em um modelo de xenoenxerto SC de HCT 116 usando o composto do Exemplo 7; A Figura 4 é uma representação esquemática que mostra a análise tridimensíonal de compostos ativos de carbazol; A Figura 5 é uma representação esquemática que mostra a análise tridimensional de compostos inativos de carbazol; A Figura 6 é uma representação esquemática que mostra a estrutura tridimensional de um composto ativo de carbazol, ou seja, Exemplo 2; A Figura 7 é uma representação esquemática que mostra a estrutura tridimensional de um composto inativo de carbazol, ou seja, Composto 200; A Figura 8 contém diagramas de volume tumoral (mm?) vs. dias de tratamento para o crescimento tumoral individual em camundongos tratados com um veículo de controle (Fig. Ba) e em camundongos tratados com o composto do Exemplo 7 (Fig. 8b); A Figura 9 contém diagramas de volume tumoral (mm) vs. dias de tratamento com um veículo de controle e com o composto do Exemplo 7; A Figura 10 contém diagramas do peso relativo de camundongos individuais vs. dias após inoculação de células em camundongos tratados com o veículo de controle (Fig.
|
Ns 10a) e camundongos tratados com o composto do Exemplo 7 " (Fig 10b); e DO A Figura 11 contém diagramas de concentração de Composto 100 (uM) vs. sobrevida celular relativa para treze linhagens de células de câncer que mostram que um composto de carbazol presente é um agente eficaz contra vários tipos de câncer; A Figura 12 contém gráficos de barras que mostram a atividade antiparasitária de vários compostos de carbazol contra Plasmodium falciparum (cepa D10); e A Figura 13 contém diagramas que mostram a atividade antibacteriana de vários compostos de carbazol contra bactérias Gram-negativas (Fig. 13a) e Gram-positivas (Fig. 13b).
DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERIDAS Com relação aos compostos, composições e métodos aqui revelados, a terminologia usada tem a finalidade de descrever modalidades particulares, e não tem a intenção de ser limitante. Como usadas na especificação e nas reivindicações em anexo, as formas no singular “um”, “uma”, “o” e “a” incluem referentes no plural, a menos que O contexto indique claramente de forma diferente. A presente invenção é dirigida aos compostos que possuem uma fórmula estrutural geral (1) e (II). Os compostos de carbazol aqui revelados são úteis no tratamento de doenças e condições, por exemplo, cânceres, doença inflamatória, infecções microbianas, infecções virais, infecções por protozoários ou uma doença autoimune.
|
- 9 R' Ré o
TOO R? N Ró Rô (CH), Rº HOR? RO URI o ' em que Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1«; alquil, Ci haloalquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, ORº, N(Rº); e SRº, ou Re R ou NR e R, juntos con os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico ou heterocíclico de cinco ou seis membros; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1-e alquil, Cie haloalquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, OR”, N(Rº); e SRº, ou Re Rº ou NRº e Rº, juntos com os átomos de carbono âos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco ou seis membros ou um anel alifático carbocíclico ou heterocíclico de cinco ou seis membros; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-6 alquil, C1-6 hidroxialquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril e C(=O)Rº, ou Rº e Rº são tomados em conjunto para formar um anel alifático de cinco, seis ou sete membros, contendo opcionalmente um átomo de oxigênio; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Ci1-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril e C(=O)Rº, ou Rê e R/, juntos com os átomos aos | o quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou Ú seis membros; Rº, independentemente, é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cri-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril e heteroaril, ou dois grupos Rº, tomados em conjunto com um nitrogênio ao qual estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros ; R, RW, R, R, R e KR, independentemente, são selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1- alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, halo, OR”, C(=0) Rº, C(=0) ORº, OC(=0)Rº, C(=O)N(Rº),, C(=O)NRºSO3Rº, NIRº)o, NRºC(=O)Rº, NRºC(=O)N(Rº)», CN, NO, CF;, OCF;, SR”, SOR”, SOXRº, SOJN(Rº),; e OSOZCF3; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cr-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril e heteroaril; e n é O, 1, 2, 3, 4 OU 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste. Em modalidades preferidas, os compostos possuem à fórmula estrutural geral (Ia): o R RO é é " ATA R? N RR 3 4 R (duo? HOR? Ns Ré CR (a).
|
. em que Rº é CC; alquiíl, Cia haloalquil, Cr-5 * cicloalquil, NIRº); ou ORº, ou Rº e R', juntos com os átomos o de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco ou seis membros; Rº é Cia alquil, Ci, haloalquil, C;s cicloalquil, N(Rº);z ou OR”, ou Re Rº, juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco ou seis membros ou um anel alifático de cinco ou seis membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é Ci alquil, Cs cicloalquil ou C1.; hidroxialquil; Rº é hidrogênio, C1., alquil ou C3;-s cicloalquil, ou Re R', juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros contendo um átomo de nitrogênio, ou Rº e Rº são tomados em conjunto para formar um anel alifático de seis ou sete membros, contendo opcionalmente um átomo de oxigênio; Rº, independentemente, é hidrogênio ou C1.; alquil; Rº é hidrogênio ou C1; alquil; Rº é hidrogênio, hidróxi ou C1; alcóxi; Rº e Rº independentemente, independentemente, são hidrogênio ou C1-; alquil; Rº é hidrogênio, hidróxi, C1.; alcóxi ou halo; Rº é hidrogênio, C1; alquil, C1.; alcóxi ou halo; R' é hidrogênio ou C1.; alquil; e n é O, 1, 2, 3, 4 OU 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
Em mais modalidades preferidas, os compostos possuem uma fórmula estrutural geral (Ib): | o o R RO " " Ú OOo R? N R 3 4 : R (duo? HC-R? Re So ga (1), em que Rº é metil, etil, n-propil, ciclopropil, NH(CH;) ou OCH;, ou Rº e R', juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco membros; Rº é metil, etil, n-propil, ciclopropil, NH(CH;) ou OCH3, Ou Rº e Rº, juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco membros ou um anel aliífático de cinco membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é metil, etil, n-propil, isopropil, ciclobutil ou 2-hidroxietil; Rº é hidrogênio, metil, etil ou ciclobutil, ou ReR, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco membros contendo um átomo de nitrogênio, ou Rº e Rº são tomados em conjunto para formar uma porção morfolino, uma porção tetrahidrofuril, uma porção piperidinil, |
N O o ou uma porção , uma porção 7 R' é hidrogênio; Rº é hidrogênio, hidróxi ou metóxi; |
.. Rº e Rº são hidrogênio; ' Rº é hidrogênio, hidróxi, metóxi ou flúor; Rº é hidrogênio, metil, metóxi ou flúor; R' é hidrogênio; e néloul, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
Em outra modalidade, a presente invenção também está dirigida aos compostos de carbazol que possuem uma fórmula estrutural (11): Re Rs ON NO; AI, RU Ea), RR? qn RR ; O) em que Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1«; alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril e C(=O0)Rº", ou Rí e Rº são tomados em conjunto para formar um anel alifático de cinco, seis ou sete membros contendo opcionalmente um átomo de oxigênio; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cx-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril e C(=O)R", ou Rºe Rà, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco, seis ou sete membros; R", independentemente, é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cr alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril e heteroaril, ou dois grupos RE, |
2. tomados em conjunto com um nitrogênio ao qual estão “ anexados, formam um anel alifático de cinco Ou seis CO membros ; RR, Rº, RE, Rº, Rº e Rº, independentemente, são selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, Ci alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, halo, OR", C(=0)R, C(=0)OR', OC(=0)R, C(=O)N(Rº), CI=O)NR"SO.R", N(R")2, NRIC(=O)R", NRºCI=O)N(R"),, CN, NOz, CF,;, OCF;, SRº, SOR", SOR", SOXN(R*)z e OSOZCF;;
Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril e heteroaril; e péo, 411, 2,3,4015, desde que, quando p for 2, um de R e Rº seja diferente de etil, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
Em outras modalidades, o composto possui uma fórmula estrutural geral (ITa): Rº RÚ ON NO; AÁTIAAL,, RU EH) Ri2 cn RO SR , (Ia) em que Rº é Ci; alquil; Rº é hidrogênio ou C1.. alquil, ou Rº e Rº, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros contendo um átomo de
|
.. nitrogênio; Rº é hidrogênio ou C1.; alquil; " R”* é hidrogênio, hidróxi ou C1.; alcóxi; Rº e R”º, independentemente, são hidrogênio ou C1; alquil; R** é hidrogênio, hidróxi, Ci; alcóxi ou halo; K é hidrogênio, C1-; alquil ou C1.; alcóxi; Rº é hidrogênio ou C1-; alquil; e pé0o 1,2,3,40U5, desde que, quando p for 2, um de Rº e Rº seja diferente de etil, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste. Ainda em outras modalidades, o composto possui uma fórmula estrutural (I1Ib): ON NO; “
Y (Hal Gn Re sço ; (Ib) em que RÍí é metil ou etil; Rº é hidrogênio ou metil, ou Rº e Rº, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é hidrogênio; e pélou?l, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste. Como aqui usado, o termo “alquil” significa grupos |
2. hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada contendo o Í número de átomos de carbono indicado, tipicamente metil, CU etil, e grupos propil e butil de cadeia línear e ramificada, O termo “cicloalquil” é definido como um grupo hidrocarboneto cíclico que contém o número de átomos de carbono indicado, por exemplo, ciclopropil, ciclobutil, ciclohexil e ciclopentil.
o termo “heterocicloalquil” significa grupos cicloalquil monocíclicos, bicíclicos e tricíclicos que contêm um ou mais hetercátomos selecionados do grupo quê consiste em oxigênio, nitrogênio e enxofre na estrutura do anel. Um grupo “heterocicloalquil” também pode conter um grupo oxo (=O) anexado ao anel. Exemplos não limitantes de grupos —heterocicloalquil incluem, sem limitação, 21,3- dioxolano, 2-pirazolina, pirazolidina, pirrolidina, piperazina, uma pirrolina, 2H-pirano, 4H-pirano, morfolino, tiofolino, piperidina, 1,4-ditiano e 1,4-dioxano.
O termo “halo” ou “halogênio” significa flúor, bromo, cloro e iodo.
O termo “haloalquil”" significa um grupo alquil substituído com um ou mais, por exemplo, 1 a 3, substituintes halo, flúor, cloro, bromo, iodo, ou combinações destes. Similarmente, “halocicloalquil" é definido como um grupo cicloalquil que possui um ou mais substituíntes halo, O termo "“aril”", isoladamente ou em combinação, significa um grupo aromático monocíclico ou polícíclico, preferivelmente um grupo aromático monocíclico ou bicíclico, por exemplo, fenil ou naftil. A menos que indicado de forma diferente, um grupo “aril” pode ser não | a... substituído ou substituído, por exemplo, com um ou mais e, em particular, um a três, halo, alquil, hidroxialquil, o alcóxi, alcoxialquil, haloalquil, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinil e alquilsulfonil.
Grupos aril exemplares incluem fenil, naftil, tetrahidronaftil, 2-clorofenil, 3-clorofenil, 4- clorofenil, 2-metilfenil, 4-metoxifenil, 3- trifluormetilfenil, 4-nitrofenil, e semelhantes.
O termo “heteroaril”" significa um sistema de anel monocíclico ou bicíclico que contém um ou dois anéis aromáticos e que contém pelo menos um átomo de nitrogênio, um átomo de oxigênio ou um átomo de enxofre em um anel aromático, e que pode ser não substituído ou substituído, por exemplo, com um ou mais e, em particular, um a três, substituintes como, por exemplo, halo, alquil, hidróxi, hidroxialquil, alcóxi, alcoxialquil, haloalquil, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinil e alquilsulfonil.
Exemplos de grupos heteroaril incluem, sem limitação, tienil, furil, piridil, oxazolil, quinolil, isoquinolil, indolil, triazolil, isotiazolil, isoxazolil, imidizolil, benzotiazolil, pirazinil, pirímidinil, tiazonil e tiadiazolil.
O termo “alquileno” significa um grupo alquil que possui um substituinte.
Por exemplo, o termo “Cris alquilenoaril” refere-se a um grupo alquil que contém um a três átomos de carbono e substituído com um grupo aril.
O termo “hidróxi” significa -OH.
O termo “alcóxi"” significa -OR, em que R é alquil. o termo “amino” significa -NH2, e o termo “alquilamino” significa -NRº, em que pelo menos um R é |
.... alquil e o segundo R é alquil ou hidrogênio. O termo “acilamino” significa R(=O)N-, em que R é O alquil ou aril. O termo “alquiltio” significa -SR, em que R é alquil. O termo “nitro” significa -NO,. O termo “trifluormetil” significa -CF,3. O termo “trifluormetoxi” significa -OCF;. O termo “ciano” significa -CN. O termo “alcoxialquil” significa um grupo alquil em que um hidrogênio foi substituído por um grupo alcóxi. O termo “hidroxialquil” significa um grupo alquil em que um hidrogênio foi substituído por um grupo hidróxi. O termo “alquilsulfinil” significa R-S0;-, em que R é alquil, O termo “alquilsulfonil" significa R-SO0;-, em que R É alquil. |
Q O termo “porção morfolino” significa o |
N O termo “porção tetrahidrofuril" significa () ú O termo “porção piperidinil” significa O ; opcionalmente substituído com um grupo -OH ou -CH;OH. os termos “quantidade eficaz” e “quantidade terapeuticamente eficaz”, quando usados em referência a um composto ou composição, significam uma quantidade suficiente do composto ou composição para fornecer O | o resultado desejado. A quantidade exata desejada Ou ' necessária irá variar, dependendo do composto ou composição o particular usado, de seu modo de administração, e semelhantes. Dessa forma, nem sempre é possível especificar uma “quantidade eficaz” ou “quantidade terapeuticamente eficaz” exata. No entanto, uma quantidade eficaz apropriada pode ser determinada por aqueles habilitados na técnica informados pela presente revelação usando apenas experimentação de rotina.
O termo “adequado” significa uma entidade, por exemplo, uma porção, substituinte ou composto, que é compatível com os compostos ou composições aqui fornecidas para a finalidade definida. A adequabilidade para a finalidade definida pode ser determinada por aqueles habilitados na técnica usando apenas experimentação de rotina.
O termo “administrar”, quando usado para descrever a dosagem de um composto ou composição, significa uma dose única ou múltiplas doses do composto ou composição.
“In vivo” significa dentro de um ser vivo, por exemplo, dentro de um animal ou um ser humano. Nesse contexto, agentes podem ser usados terapeuticamente em um indivíduo para tratar uma condição ou doença, Ou um sintoma desta. Os agentes também podem ser usados como um agente profilático para evitar a ocorrência ou recorrência de uma doença ou condições ou sintomas a elas associados.
“Ex vivo" significa fora de um ser vivo. Exemplos de populações de células ex vivo incluem culturas de células e amostras biológicas in vítro como, por exemplo, amostras de fluido ou tecido de seres humanos ou animais. Amostras | ao desse tipo podem ser obtidas por métodos bem conhecidos na técnica, Amostras de fluidos biológicos exemplares incluem sanque, líquido cerebrospinal, urina, saliva. Amostras de tecido exemplares incluem tumores e biópsias destes. Nesse contexto, os presentes compostos podem ser usados em diversas aplicações, tanto terapêuticas quanto experimentais.
O termo “radiossensibilizante” significa um composto administrado a um ser humano ou a outro animal em uma quantidade terapeuticamente eficaz para aumentar à sensibilidade de células à radiação eletromagnética e/ou para promover o tratamento de doenças tratáveis com radiação eletromagnética.
Os termos “radiação eletromagnética” de Willis e “radiação” significam, sem limitação, radiação que possui o comprimento de onda de 10-20 a 100 metros.
O termo “morte celular” signifíca um processo no qual o funcionamento, proliferação e metabolismo da célula é interrompido.
O termo “tratamento de câncer" significa qualquer tratamento para câncer conhecido na técnica, incluindo, sem limitação, quimioterapia e radioterapia.
O termo “combinação com”, quando usado para descrever a administração de um composto de carbazol presente e qualquer tratamento adicional, significa que o composto de carbazol pode ser administrado antes, simultaneamente ou depois do tratamento adicional, ou uma combinação destes.
Como aqui usados, os termos “tratar”, “que trata”, “tratamento”, e semelhantes, referem-se à eliminação, redução ou melhora de uma doença Ou condição e/ou sintomas | o” à ela associados. Embora não excluído, o tratamento de uma
1. doença ou condição não exige que a doença, condição ou sintomas a ela associados sejam completamente eliminados. Como aqui usado, os termos “tratar”, “que trata”, “tratamento”, e semelhantes, podem incluir “tratamento profilático”, que se refere à redução da probabilidade de redesenvolvimento de uma doença ou condição, ou da recorrência de uma doença ou condição previamente controlada, em um indivíduo que não possui, mas em risco ou suscetível ao redesenvolvimento de uma doença ou condição, ou à recorrência da doença ou condição. O termo “tratar” e sinônimos contemplam a administração de um composto da invenção a um indivíduo que necessita desse tratamento. Dentro do significado da invenção, “tratamento” também inclui profilaxia de recaída ou profilaxia de fase, além do tratamento de sinais, sintomas e/ou mau funcionamentos agudos ou crônicos. O tratamento pode ser orientado sintomaticamente, por exemplo, para suprimir sintomas. Ele pode ser efetuado ao longo de um período curto, Ser orientado ao longo de um período médio, ou pode ser um tratamento de longo prazo, por exemplo, dentro do contexto de uma terapia de manutenção. oO termo “mamífero” inclui humanos, animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e cavalos), animais de zoológico (por exemplo, zebras, elefantes e grandes felinos), animais que dão origem a alimentos (por exemplo, vacas, porcos, cabras e carneiro) e animais de pesquisa (por exemplo, ratos, camundongos, cabras e porquinhos-da- índia). A presente invenção é dirigida, em parte, à descoberta | a. de que composições farmacêuticas que compreendem um composto de carbazol de fórmulas estruturais gerais (1) e CO (II) podem ser usados para modular a atividade de NF-KB, por exemplo, respostas imunes mediadas por NF-KB, &e condições descritas no Pedido de Patente Internacional PCT/USO5/25884, que designa os Estados Unidos, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência.
Em modalidades preferidas de um composto de carbazol de fórmula estrutural (1), Rº é metil, etil, NH(CH;), OCH;s, ou forma um anel alifático de cinco membros com R'. Em outras modalidades preferidas, Rº é metil, etil, NH(CH;), OCH;, forma um anel alifático de cinco membros com Ri, ou forma um anel alifático de cinco membros, contendo nitrogênio, com R. Em outra modalidade preferida, RR é hidrogênio, metil, etil, ou forma um anel alifático de cinco membros com R'.
Em modalidades preferidas, Rº é hidrogênio ou forma um anel alifático de cinco membros com Rº. Em outras modalidades preferidas, Rº é hidrogênio ou hidróxi. Ainda em outras modalidades preferidas, R' é hidrogênio. Em modalidades preferidas adicionais, Rº é hidrogênio. Ainda em modalidades preferidas adicionais, Rº é hidrogênio ou nidróxi. Em algumas modalidades preferidas, Rº é hidrogênio, forma um anel alifático de cinco membros com Rº, ou forma um anel alifático de cinco membros, contendo nitrogênio, com R. Em modalidades preferidas, R' é hidrogênio ou forma um anel de cinco membros com Rº. Ainda em modalidades preferidas adicionais, n é 2 ou 3.
Em modalidades preferidas de um composto de carbazol de fórmula estrutural (IT), Rí é metil ou etil, Rº é | n hidrogênio, metil, etil, ou forma um anel alifático de cinco membros, contendo nitrogênio, com Rº e Rº, ou Rº é hidrogênio, Rº, Rºº, RUM, RM, Rº e R** são hidrogênio.
Ainda em modalidades adicionais, p é 2 ou 3. Dois compostos de carbazol adicionais úteis no tratamento de diversas condições e doenças são: CH; CHa ? > à - “TOMO | "N N (GHz) (EH: Cas” “CHs eH “es Exemplo 26 e Exemplo 17b A presente invenção inclui todos os estereoisômeros e isômeros geométricos possíveis dos compostos de fórmulas estruturais (1) e (II). A presente invenção inclui tanto compostos racêmicos quanto isômeros opticamente ativos.
Quando um composto de fórmula estrutural (1) ou (11) é desejado como um enantiômero simples, ele pode ser obtido por resolução do produto final ou por síntese estéreo- específica a partir de material de partida isomericamente puro ou do uso de um reagente quiral auxiliar, por exemplo, veja (Z.
Ma e cols., Tetrahedron: Asymmetry, 8(6), páginas 8883-888 (1997). A resolução do produto final, um intermediário, ou um material de partida, pode ser obtida por qualquer método adequado conhecido na técnica.
Adicionalmente, quando são possíveis tautômeros dos compostos de fórmula estrutural (1) ou (II), a presente |
.. invenção visa incluír todas as formas tautoméricas dos - compostos. Pró-fármacos de compostos de fórmulas estruturais (1) e (II) também podem ser usados como o composto em um método da presente invenção. Está bem estabelecido que uma abordagem de pró-fármaco, em que um composto é derivatizado em uma forma adequada à formulação e/ou administração, e depois liberado como um fármaco in vivo, foi empregada com sucesso para alterar transitoriamente (por exemplo, de forma biorreversível) as propriedades físico-químicas do composto (veja H, Bundgaard, Ed., “Design of Prodrugs”", Elsevier, Amsterdam, (1985); R.B. Silverman, “The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action”, Academic Press, San Diego, capítulo 8, (1992); K.M. Hillgen e cols., Med. Res. Rev., 15, 83 (1995)).
Os compostos da presente invenção podem conter um ou mais grupos funcionais. Os grupos funcionais, se desejado ou necessário, podem ser modificados para fornecerem um pró-fármaco. Pró-fármacos adequados incluem, por exemplo, derivados ácidos, por exemplo, amidas e ésteres. Também é observado por aqueles habilitados na técnica que N-óxidos podem ser usados como um pró-fármaco.
Os compostos da invenção podem existir como sais, Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção geralmente são preferidos nos métodos da invenção. Como aqui usado, o termo “sais farmaceuticamente aceitáveis” refere-se a sais ou formas zwitteriônicas dos compostos de fórmulas estruturais (1) e (II). Sais de compostos de fórmulas (1) e (II) podem ser preparados durante oO isolamento final e purificação dos compostos, ou |
... separadamente por reação do composto com um ácido que - possui um cátion adequado.
Os sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos de fórmulas estruturais (1) e (11) são sais de adição ácida formados com ácidos farmaceuticamente aceitáveis.
Exemplos de ácidos que podem ser empregados para formar sais farmaceuticamente aceitáveis incluem ácidos inorgânicos como, por exemplo, ácido nítrico, bórico, clorídrico, hidrobrômico, sulfúrico e fosfórico, e ácidos orgânicos como, por exemplo, ácido oxálico, maléico, succínico e cítrico.
Exemplos não limitantes de saís de compostos da invenção incluem, sem limitação, os sais de cloridrato, hidrobrometo, hidroiodeto, sulfato, bissulfato, 2-hidroxietanossulfonato, fosfato, hidrogenofosfato, acetato, adipato, alginato,
aspartato, benzoato, bissulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, formato, succinato, fumarato, maleato, ascorbato, isetionato, salicilato, metanossulfonato, metanossulfonato, naftilenossulfonato,
nicotinato, 2-naftalenossulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, tricloroacetato, trifluoracetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, paratoluenossulfonato, undecanoato, lactato, citrato, tartrato, gluconato,
metanossulfonato, etanodissulfonato, benzeno sulfonato e p- toluenossulfonato.
Além disso, grupos amino disponíveis presentes nos compostos da invenção podem ser quaternizados com metiíl, etil, propil e butil cloretos, brometos e iodetos; dimetil, dietil, dibutil e díamil sulfatos; decil,
lauril, miristil e estearil cloretos, brometos e iodetos; e
|
.." benzil e fenetil brometos. À luz do que foi apresentado . - anteriormente, qualquer “referência aos compostos da presente invenção que aqui aparece visa incluir compostos de fórmula estrutural (1) e/ou (11), além de sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos ou pró-fármacos destes.
Os compostos de fórmulas estruturais (1) e (II) também podem ser conjugados ou ligados a porções auxiliares que promovem uma propriedade benéfica do composto em um método de uso terapêutico. Esses conjugados podem aumentar a liberação dos compostos a um local anatômico em particular ou a uma região de interesse (por exemplo, um tumor), permitir concentrações terapêuticas sustentadas dos compostos em células-alvo, alterar propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas dos compostos, e/ou aumentar o índice terapêutico ou perfil de segurança dos compostos. Porções auxiliares adequadas incluem, por exemplo, aminoácidos, oligopeptídeos, ou polipeptídeos, por exemplo, anticorpos como, por exemplo, anticorpos monoclonais e outros anticorpos criados geneticamente; e ligantes naturais ou sintéticos para os receptores em células ou tecidos-alvo. Outros auxiliares adequados incluem porções de ácido graxo ou de lipídeo que promovem a biodistribuição e/ou captação do composto por células-alvo (veja, por exemplo, Bradley e cols., Clin. Cancer Res. (2001) 7: 3.229).
Os compostos da presente invenção são inibidores potentes de NF-KB. Dessa forma, os compostos de fórmulas (1) e (11) são de interesse para uso em terapia, especificamente para O tratamento de diversas condições nas | eo quais a inibição de NF-XB é considerada benéfica. A
1. inibição de NF-KB é particularmente atraente, pois essa inibição fornece efeitos como, por exemplo, apoptose, atividade antimicrobiana, antiprotozoário, antiviral e antiinflamatória, todas benéficas no tratamento de vários estados de doença. Os compostos de fórmulas (TI) e (IT), portanto, possuem utilidade no tratamento de diversos distúrbios, doenças e condições.
A potência de um composto de carbazol presente é determinada por medida de uma habilidade do composto para inibir a atividade de NF-KB ou para ativar p53. A ativação de p53 tipicamente é medida usando um ensaio de dose- resposta no qual um sistema de ensaio sensível é colocado em contato com um composto de interesse ao longo de uma ampla gama de concentrações, incluindo concentrações nas quais não é observado nenhum efeito ou é observado apenas um efeito mínimo, ao longo de concentrações maiores nas quais é observado um efeito parcial, até concentrações de saturação nas quais é observado um efeito máximo. Teoricamente, esses ensaios do efeito de dose-resposta de compostos ativadores podem ser descritos como uma Curva sigmóide que expressa um grau de ativação em uma função da concentração. A curva teoricamente também passa através de um ponto no qual a concentração é suficiente para aumentar à atividade até um nível que é 50% daquele da diferença entre um valor basal e a ativídade máxima no ensaio. Essa concentração é definida como a Concentração Eficaz (50%) ou valor de ECxº. A determinação de um valor de ECr, é feita usando técnicas convencionais de ensaios bioquímicos —(acelulares) ou técnicas de ensaio baseado em células, | a... Comparações da eficácia de ativadores frequentemente “ são fornecidas com referência aos valores comparativos de CU ECso, EM que uma ECx5, maior indica que Oo composto de teste é menos potente, e uma ECs, menor indica que o composto é mais potente, do que um composto de referência. Os compostos da presente invenção exibem uma potência inesperadamente boa, ou seja, ativação de p53, em um ensaio de linhagem de célula repórter de luciferase. Os compostos da invenção submetidos a um ensaio à base de células descrito abaixo exibiram valores de EC; para ativação de p53 de menos do que cerca de 1,35 upM. Em certas modalidades, os compostos da invenção exibiram um valor de ECsoq de menos do que cerca de 1,0 UM. Em outras modalidades, os compostos da invenção exibiram valores de IC de menos do que cerca de 0,75 pM, cerca de 0,50 UM, cerca de 0,30 uM, menos do que cerca de 0,20 puM ou menos do que 0,05 uM.
Um uso especialmente importante dos presentes compostos de carbazol é o tratamento de um câncer, uma inflamação, uma doença autoimune, uma infecção microbiana, por protozoário ou viral, uma doença enxerto versus hospedeiro, uma condição associada à infecção por HIV, ou células pré-cancerosas que adquiriram dependência sobre NF- KB constitutivamente ativo. Vários cânceres que podem ser tratados de acordo com à presente invenção incluem, sem limitação, carcinoma de célula renal, sarcoma, câncer de próstata, câncer de mama, câncer pancreático, mieloma, leucemia mielóide e linfoblástica, neuroblastoma, glioblastoma, e um câncer causado por infecção por HTLV. Prevê-se, portanto, que os compostos de fórmulas (1) e | a (II) são úteis no tratamento de diversas condições e . . doenças. Dessa forma, a presente invenção está relacionada ao uso de compostos de fórmulas (1) e (II), ou de um sal farmaceuticamente aceitável destes, ou de uma composição farmacêutica que contém uma das entidades, para a fabricação de um medicamento para o tratamento dessas condições e doenças.
os compostos da presente invenção podem ser administrados terapeuticamente como à substância química pura, mas prefere-se administrar os compostos de fórmula estrutural (1) ou (II) como uma composição ou formulação farmacêutica. Dessa forma, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um composto da fórmula (1) ou (II), junto com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável para esta. Também é fornecido um processo de preparação de uma composição farmacêutica que compreende a mistura de um composto de fórmula (1) ou (II) com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável para esta.
Consegúentemente, a presente invenção ainda fornece formulações farmacêuticas que compreendem um composto de fórmula estrutural (1) ou (II), ou um sal, pró-fármaco ou hidrato farmaceuticamente aceitável deste, junto com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis e, opcionalmente, outros ingredientes terapêuticos e/ou profiláticos. Os veículos são “aceitáveis” na medida em que são compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não são prejudiciais ao receptor destes.
As formulações da presente invenção podem ser administradas de uma forma-padrão para o tratamento das |
PS doenças indicadas, por exemplo, por via oral, parenteral, * transmucosa (por exemplo, por meio de administração sublingual ou bucal), topicamente, por via transdérmica, retal, ou por meio de inalação (por exemplo, inalação nasal ou pulmonar profunda). A administração parenteral inclui, sem limitação, a administração intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, subcutânea, intramuscular, intratecal e intra-articular.
A administração parenteral também pode ser obtida usando uma técnica de alta pressão, como PONWDERJECT”" (Powderject Pharmaceuticals, Plc, Oxford, Inglaterra). A composição também pode ser administrada na forma de um implante, que permite a liberação lenta da composição, bem como uma infusão IV controlada lenta.
Para administração oral, incluindo administração bucal, a composição pode estar na forma de comprimidos ou losangos formulados de forma convencional.
Por exemplo, comprimidos e cápsulas para administração oral podem conter excipientes “convencionais como, por exemplo, agentes aglutinantes “(por exemplo, xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucilagem de amido ou polivinilpirrolidona), enchimentos (por exemplo, lactose, açúcar, celulose microcristalina, amido de milho, fosfato de cálcio ou sorbitol), lubrificantes (por “exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico, talco, polietileno qlicol ou sílica), desintegrantes (por exemplo, amido de batata ou amido glicolato de sódio), ou agentes umidificantes (por exemplo, lauril sulfato de sódio). Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na técnica.
Alternativamente, os compostos da presente invenção | eo podem ser incorporados em preparações orais líquidas como, NS por exemplo, suspensões, soluções, emulsões, xaropes Ou elixires aquosos ou oleosos, por exemplo.
Além disso, as formulações que contêm esses compostos — podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes do uso.
Essas preparações líquidas podem conter aditivos convencionais, por exemplo, agentes de suspensão, por exemplo, xarope de sorbitol, metil celulose, xarope de glicose/açúcar, gelatina, hidroxietilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio, e gorduras comestíveis hidrogenadas; agentes emulsificantes, por exemplo, lecitina, monooleato de sorbitano ou acácia; veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), por exemplo, óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos, propileno glicol e álcool etílico; e conservantes, por exemplo, metil ou propil P-
hidroxibenzoato e ácido sórbico.
Essas preparações também podem ser formuladas como supositórios, por exemplo, contendo bases convencionais para supositórios, por exemplo, manteiga de cacau ou outros glicerídeos.
Composições para inalação tipicamente podem ser fornecidas na forma de uma solução, suspensão Ou emulsão, que podem ser administradas como um pó seco ou na forma de um aerossol com a utilização de um propelente convencional, por exemplo, diclorodifluormetano ou triclorofluormetano.
Formulações tópicas e transdêrmicas típicas compreendem veículos aquosos ou não aquosos convencionais, por exemplo, colírios, cremes, pomadas, loções e pastas, ou estão na forma de um gesso, emplastro
|
.. ou membrana com medicação, . - Adicionalmente, as composições da presente invenção podem ser formuladas para administração parenteral por injeção ou infusão contínua. Formulações para injeção podem estar na forma de suspensões, soluções ou emulsões, em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes de formulação, por exemplo, agentes de suspensão, estabilizantes e/ou dispersantes. Alternativamente, o ingrediente ativo pode estar em forma de pó para reconstituição com um veículo adequado (por exemplo, água estéril, sem pirogênio) antes do uso.
Uma composição da presente invenção também pode ser formulada como uma preparação de depósito. Essas formulações de longa ação podem ser administradas por implantação (por —exemplo, de forma subcutânea — ou intramuscular) ou por injeção intramuscular, Conseqúentemente, os compostos da invenção podem ser formulados com materiais políméricos ou hidrofóbicos adequados (por exemplo, uma emulsão em um óleo aceitável), resinas de troca iônica, ou como derivados pouco solúveis (por exemplo, um sal pouco solúvel).
A composição também pode ser formulada como uma preparação de lipossomo. A preparação de lipossomo pode compreender —“lipossomos que penetram nas células de interesse ou no estrato córneo, e se fundem à membrana celular, resultando na liberação do conteúdo do lipossomo dentro da célula. Lipossomos são descritos, por exemplo, na Patente U.S. Nº 5.077.211, Patente U.S. Nº 4.621.023 e Patente U.S. Nº 4.508.703, cada uma aqui incorporada por referência.
|
' " Para uso veterinário, um composto de fórmula (1) ou 2 (11), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco, é administrado como uma formulação adequadamente aceitável de acordo com a prática veterinária normal. O veterinário pode facilmente determinar o regime de dosagem e a via de administração mais adequada a um animal em particular. Os animais tratáveis pelos presentes compostos e métodos incluem, sem limitação, animais de estimação, animais de criação, animais de exibição e animais de zoológico.
MÉTODOS SINTÉTICOS Os compostos de fórmulas (1) e (IT) podem ser preparados por qualquer método adequado conhecido na técnica, ou pelos processos seguintes que formam parte da presente invenção. Em particular, os compostos de fórmulas estruturais (1) e (II) podem ser preparados de acordo com os seguintes esquemas sintéticos.
Nos métodos sintéticos, nos exemplos e ào longo de toda a especificação, as abreviações possuem os seguintes significados: [tm fes [meo o frear [Masson — — [swesto ae sato |
22 RE PPP
. le ea |
[eg [eguivazene O
= Eme magnética [mam marea de saio O | me fmenupionamona | | oo ' | ea Est Pd (dppf) Cl; paládio(II)
Deve-se entender que grupos de proteção podem ser utilizados de acordo com princípios gerais de química orgânica sintética para fornecer compostos de fórmulas estruturais (1) e (II). Reagentes formadores de grupos de proteção são bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica, por exemplo, veja T.W.
Greene e cols., “Protective
Groups in Organic Synthesis", Terceira Edição, John Wiley e
Sons, Inc., NY, N.Y. (1999), Esses grupos de proteção são removidos quando necessário por condições básicas, ácidas ou hidrogenólicas apropriadas conhecidas por aqueles habilitados na técnica.
Conseqúentemente, os compostos de
| e. fórmulas estruturais (1) e (11) não aáqui especificamente
2. exemplificados podem ser preparados por aqueles habilitados na técnica, Além disso, compostos de fórmulas (1) e (II) podem ser convertidos em outros compostos de fórmulas (1) e (11). Dessa forma, por exemplo, um substituinte R em particular pode ser interconvertido para preparar outro composto de fórmula (1) ou (TI) adequadamente substituído. Exemplos de interconversões adequadas incluem, sem limitação, OR*º para hidróxi por meios adequados (por exemplo, com o uso de um agente como, por exemplo, SnCl; ou um catalisador de paládio, como, por exemplo, paládio-sobre-carbono), Ou amino para amino substituído, por exemplo, acilamiíno ou sulfonilamino, usando condições-padrão de acilação ou sulfonilação.
Os compostos de fórmulas (1) e (II) podem ser preparados como estereoisômeros individuais como uma mistura racêmica. Estereoisômeros individuais dos compostos da invenção podem ser preparados a partir de racematos pela utilização de métodos de resolução conhecidos na técnica para a separação de misturas racêmicas em seus estereoisômeros constituintes, por exemplo, usando HPLC em uma coluna quiral, por exemplo, Hipersil naftil uréia, ou com o uso de separação de sais de estereoisômeros. Os compostos da invenção podem ser isolados em associação com moléculas de solvente por cristalização ou evaporação de um solvente apropriado.
PROCEDIMENTOS SINTÉTICOS GERAIS Esquema 1 |
' RRN(CH3LCI" HC), º o v DMF Ao PANO, Ao 1 eo RARA RR as
Procedimento geral para alquilação de carbazóis Carbazol 1 foi dissolvido ou suspenso em DMF.
A seguir, NaH (3 eq) foi adicionado.
A mistura foi agitada em temperatura ambiente ao longo de um período de 5-10 min até a formação de espuma ter cessado.
Um cloridrato de cloreto (1,3 eq) foi adicionado, e a mistura de reação foi mantida a 50-60ºC ao longo de um período de 2-16 h (monitoramento por TLC; eluentes: CH,Cl,/acetato de etila, 1:1 quanto à presença do carbazol de partida; CHCl;/MeOH, 9:1 quanto à pureza do produto). A mistura resultante foi diluída com água, Caso se formasse um precipitado, ele era retirado por filtração e seco ao ar, Caso não se formasse um precipitado (Tabela 1), a mistura era extraída com acetato de etila.
O extrato foi seco sobre Na,SO0,., evaporado, e o resíduo foi purificado por cromatografia (sílica gel, CHCl;/MeOH) . Os rendimentos dos produtos 2a e 2b são mostrados na Tabela 1. Procedimento geral para acilação de carbazóis alquilados Um carbazol 2 foi dissolvido em nitrobenzeno.
A solução foi resfriada em um banho de gelo, e depois AlCl; (5 eq) e ACCl (5 eq) foram adicionados.
A mistura de reação foi mantida ao longo de um período de 2-16 h (monitoramento por LC-MS). Uma amostra da mistura de reação foi diluída com Et,0, e o último foi decantado do precipitado, e depois dissolvido em MeOH.
A mistura resultante foi diluída com |
O água, neutralizada com NazCO;, e extraída com CHCl;. O
2. extrato foi evaporado. O resíduo foi purificado primeiro por cromatografia em uma coluna curta de sílica gel (CHCl;/MeOH) para remover o nitrobenzeno; à seguir, se necessário, em uma coluna de sílica gel ou por HPLC, Os rendimentos dos produtos 3a e 3h são mostrados na Tabela 1.
Esquema 2 o o o o 20 " PANO, v OMF " 1 n 4 R 20 S À S Ns DD CÕOSO. O, 3,6-Diacetilcarbazol (4) Carbazol 1 (16,9 g, 0,1 mol) foi dissolvido em nitrobenzeno (300 ml). ALlCl; anidro (54,0 gq, 0,4 mol) foi adicionado sob agitação e resfriamento com um banho de gelo. A seguir, ACcCl (55,5 g, 0,7 mol) foi adicionado lentamente gota a gota. Deixou-se que a mistura de reação se aquecesse até a temperatura ambiente sob agitação e ela foi mantida ao longo de um período de 13 h. Água (500 ml) foi adicionada em pequenas porções sob resfriamento com um banho de gelo. O banho de resfriamento foi removido, e a mistura foi refluída ao longo de um período de 2 h e extraída com CHCl; (3 x 150 ml). Os extratos combinados foram sequencialmente lavados com soluções saturadas de NaHCO; e NaCl, secos com Na,SO0O, anidro, e evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, CHCl;/MeoH) para gerar 12,5 g (50%) de 3,6- diacetilcarbazol (4).
|
. Para a alquilação do composto 4, o procedimento geral - para a alquilação de carbazóis foi usado. Os rendimentos dos produtos 3c-f são mostrados na Tabela 1. Esquema 3
E o o o o o o sum DAS mm OS
DMF DMF K dos Sbneã Ad + Ú Scn=4 í tah
ROOR Preparação de bromoalquildiacetilcarbazóis Sa-c Diacetilcarbazol 4 foi dissolvido em DMF, e depois NaH (3 eq) foi adicionado. A mistura foi agitada ao longo de um período de 10 min em temperatura ambiente, Um dibromoalcano (7 eq) foi adicionado. A mistura de reação foi mantida ao longo de um período de 1 h (5a em temperatura ambiente; 5b a 40ºC; 5c ao longo de um período de 20 min a 70ºC; monitoramento por TLC, CH,Cl;/acetato de etila, acetato de etila 4:1). A mistura foi então diluída com água e extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com água e salmoura, secos com Na;S0's, € evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, CHCl;) para gerar Sa (21%), 5b (29%) e 5c (74%). Alquilação de aminas com bromoalquildiacetilcarbazóis Sa-c. Um brometo 5 foi dissolvido em DMF, e uma amina foi adicionada (excesso, veja Tabela 3). A mistura foi mantida a 60ºC de um dia para o outro. (monitoramento por TLC, CH;Cl,/acetato de etila, 1:1 quanto à presença do carbazol de partida; CHCl;/MeOH, 9:1 quanto à pureza do produto). A mistura de reação foi diluída com água e extraída com | o acetato de etila.
Os extratos combinados foram secos com NS Na;S0,. O resíduo foi purificado por cromatografia em : coluna (sílica gel, CHCl;/MeOH). O produto foi dissolvido em uma mistura de CH,Cl;, e MeOH.
HCl 4 M em dioxano foi adicionado, e a mistura foi evaporada.
O resíduo foi triturado com Et,;0 e, se necessário, com acetato de etila ou acetona.
Os rendimentos dos produtos 6a-h são mostrados na Tabela 3. Esquema 4 R Rº i N R"COCI, AICIz E (C nº PRNO, N ha Ai AN - ROR 2a R=R'=Et, n=2 —N 2b R=R'=Me, n=3 RÓCR O 7ad Para a acilação de 2, foi usado um procedimento similar àquele descrito em Esquema 1. Os rendimentos dos produtos 7a-d são mostrados na Tabela 4. Esquema 5 e oa o: e criererçços, O & Q ra DO —* OS) P PINO? . erPe P O emo 8 ee 25 3,6-Bis (cloropropionil)-9-N,N-dietilaminoetilcarbazol (8) Uma solução de 1-N,N-dietilaminoetilcarbazol (0,23 9, 0,86 mmol) em 2 ml de nitrobenzeno foi resfriada em um banho de gelo.
AlCl; (0,57 g, 4,3 mmol) e cloreto de 3- cloropropionila (0,4 ml, 4,2 mmol) foram adicionados.
A
' " mistura de reação foi agitada de um dia para o outro 1 (monitoramento por LC-MS) e diluída com HCl aquoso.
O produto foi extraído com CHCl;, e o filtrado foi evaporado,. O resíduo foi rapidamente purificado por cromatografia em uma coluna curta de sílica gel (CHCl;/MeOH) para gerar 0,38 q (91%) do composto 8 como seu cloridrato. 1,2,10,11-Tetrahidro-6-N,N-dimetilamioetil-6H- diciclopenta([c,glcarbazol-3,9-diona (39) O Composto 2 (0,38 g, 0,79 mmol) foi dissolvido em H,SO, 98% (3 1). A mistura de reação foi aquecida até 95ºC, mantida nessa temperatura ao longo de um período de 2,5 h (monitoramento por TLC, CHCl;/MeOH, 4:1), e derramada em gelo.
A mistura resultante foi neutralizada com Na;CO; seco e extraída com CHCl;. O extrato foi evaporado, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (CHCl;/MeOH). O produto bruto obtido (0,08 g) foi dissolvido em MeOH.
HCl 4 M em dioxano foi adicionado, e a mistura foi evaporada.
O resíduo foi suspenso em MeOH, e a suspensão foi refluída (o sólido não se dissolveu no processo). A suspensão foi resfriada, e o sólido foi retirado por filtração para gerar 0,007 g (2%) do composto 9 como seu cloriárato.
Esquema 6 soh ão Hd. == AT OG Se o —em DS o.N T O” NO; N 10a-h . "ah Nars n 2 = OR/AND > DMF A» PNnNOz A À RR O 1a RR 12) ax
|
LABS 2-Metil-2'-nitro-l,1'-bifenil (10a) o Ácido 2-metilfenilborônico (0,64 q, 4,7 mmol) e 2- Í nitroidobenzeno (1,0 g, 4,0 mmol) foram dissolvidos em uma mistura de MeOH (20 ml) e água (4 ml). K;CO; (1,1 g, 8,0 mmol) e Pd(OAc); (0,018 g, 0,08 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi depurada com argônio, aquecida até 50ºC, mantida de um dia para o outro nessa temperatura, e filtrada através de Celite. Esse último foi lavado com MeOH. O filtrado foi evaporado, e o resíduo foi usado sem purificação adicional.
4,4" -Dimetóxi-2-nitro-1,1'-bifenil (10h) Ácido 4-metoxifenilborônico (3,00 q, 19,7 mmol) e 4- cloro-3-nitroanisol (3,69 9, 11,6 mmol) foram dissolvidos em uma mistura de dioxano (40 ml) e água (10 ml). K,CO; (5,44 g, 23,2 mmol) e Pd(PPh;)s (1,14 g, 0,6 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida em argônio até 80ºC, mantida nessa temperatura de um dia para o outro (monitoramento por TLC: hexano/acetato de etila, 4:1), resfriada e filtrada através de Celite, Esse último foi lavado com CH,Cl,, e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em CH;Cl;, e a solução foi evaporada para gerar 6,0 g do bifenil bruto 10h que foi ciclizado sem purificação.
Um procedimento análogo foi usado para obter bifenis 10b-g.
Procedimento geral para a síntese de carbazóis Um bifenil bruto 10 foi dissolvido em (EtO);sP. A mistura de reação foi mantida a 125-140ºC em um fluxo de argôêônio ao longo de um período de cerca de 48 h (monitoramento por TLC: hexano/acetato de etila, 1:1) e | a. diluída com água.
O precipitado foi retirado por filtração ' e lavado com Et,0. Caso não se formasse um precipitado, o o produto era extraído com acetato de etila; o extrato foi evaporado, e o resíduo foi purificado em uma coluna curta de sílica gel (hexano/acetato de etila). Os rendimentos dos produtos 11a-g são mostrados na Tabela 5. 2,7-Dimetóxi-9H-carbazol (11h) A reação foi realizada em um frasco.
O bifeniíl bruto 10h (6,0 g) foi díssolvido em P(OEt):; (36 ml). O frasco foi depurado com argônio.
A mistura de reação foi aquecida até 90ºC, mantida nessa temperatura de um dia para o outro, e resfriada.
Como resultado, O carbazol se precipitou.
Uma mistura de Et,0/CH;Cl, foi adicionada.
O precipitado foi retirado por filtração e lavado com CH;Cl;. O filtrado foi evaporado.
P(OEt); foi adicionado novamente, e a mistura foi deixada para ciclização por 24 h.
Essas operações foram repetidas até que cessasse a formação de precipitado e TLC indicasse que o bifenil de partida havia desaparecido.
No total, 2,9 g do carbazol foram obtidos (65% calculados para duas etapas). Para a alquilação do composto 11, o procedimento geral para a alquilação de carbazóis foi usado.
Os rendimentos dos compostos l12a-i são mostrados na Tabela 1. Para a acilação de 12, um procedimento similar àquele descrito para o Esquema 1 foi usado, No entanto, para a moncoacetilação, a quantidade de ACCl e AIC; foi diminuída para 1,5 eq.
Os rendimentos de compostos 13a-j são mostrados na Tabela 2. Esquema 7
|
Bam *% vagina A o XX jus E | * "s AA Ses A A ro Eles, QE Z? e. 1ab É eo “SS 155 x, * o Yo & Ao LAS Ré, * QE AOL AC DE s sr A PINO, A í 1624 pego Ta qe 19 4,4,5,5-Tetrametil-2-(4-indanona-1-1l1)-[1,3,2]- dioxoborolano (l4a X = CH;) 4-Trifluormetilsulfoniloxi-l1-indanona (9,7 q, 34,6 mmol) e bis(pinacolato)diboro (11,4 g, 45,0 mmol) foram dissolvidos em dioxano (100 ml). ACOK (6,8 g, 69,2 mmol) e Pdídppf):Cl: (1,3 g, 1,8 mmol) foram adicionados.
A mistura de reação foi aquecida em um fluxo de argônio até 80ºC, mantida nessa temperatura de um dia para o outro, resfriada e filtrada através de Celite.
O filtrado foi evaporado., O resíduo foi dissolvido em CH,;Cl, e purificado em uma coluna curta de sílica gel (hexano/acetato de etila) para gerar 9,5 g de um produto contendo 20% (massa) de bis (pinacolato)diboro.
O produto foi usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. ; O éster borônico do brometo foi preparado da mesma forma.
Se 1 eq de bis(pinacolato)diboro era usado, um produto mais puro foi obtido. 4,4,5,5-Tetrametil-2[4- (2-metilisoindolin-l-ona)-il]- [1,3,2] -dioxoborolano (14b X = NMe) 4-Bromo-2-metilisoindolin-l1-ona (3,23 g, 14,3 mmol) e bis (pinacolato)diboro (4,72 g, 18,6 mmol) foram dissolvidos em dioxano (60 ml). ACOK (2,80 q, 28,6 mmol) e Pdídppf)2Cl, |
. " (0,5 g, 0,7 mmol) foram adicionados. A mistura de reação
2. foi aquecida em um fluxo de argônio até 80ºC, mantida nessa , temperatura de um dia para o outro, resfriada e filtrada através de Celite. O filtrado foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em CH,Cl; e purificado em uma coluna curta de sílica gel (hexano/acetato de etila) para gerar 4,2 g de um produto contendo 20% (massa) de bis(pinacolato)diboro, O produto foi usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. Bifenil l15a (X = CH;y, R = H) 4,4,5,5-Tetrametil-2-(4-indanona-1-11)-[1,3,2]- dioxoborolano (2,17 g, 8,4 mmol) e o-nitroiodobenzeno (2,70 g, 10,9 mmol) foram dissolvidos em uma mistura de dioxano (30 ml) e água (5 ml). KCO; (2,30 gq, 16,7 mmol) e Pd(PPh3). (0,48 gq, 0,4 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida em um fluxo de argônio até 80ºC, mantida nessa temperatura ao longo de um período de 24 h (monitoramento por TLC: hexano/acetato de etila, 4:1), resfriada e filtrada através de Celite. O filtrado foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em CH.Cl;, Um precipitado não dissolvido foi retírado por filtração. O filtrado foi parcialmente evaporado, e o produto foi purificado em uma coluna curta de sílica gel (hexano/acetato de etila) para gerar 2,5 gq de um produto contendo PPh;O. O produto foi ciclizado sem purificação adicional, Bifenil 15b (X = CH R = OMe) 4,4,5,5-Tetrametil-2-(4-indanona-1-11)-[1,3,2]- dioxoborolano (1,20 g, 4,6 mmol) e o-nitroiodobenzeno (0,87 g, 4,6 mmol) foram dissolvidos em uma mistura de dioxano (10 ml) e água (2 1). KCO; (1,28 g, 9,2 mmol) e PA(PPH;). |
" " (0,27 gq, 0,2 mmol) foram adicionados, A mistura de reação o. foi aquecida em um fluxo de argônio até 80ºC, mantida nessa * temperatura ao longo de um período de 24 h (monitoramento por TLC: hexano/acetato de etila, 4:1), resfriada e filtrada através de Celite.
O filtrado foi evaporado.
O resíduo foi dissolvido em CH,Cl.. Um precipitado não dissolvido foi retirado por filtração.
O filtrado foi parcialmente evaporado, e o produto foi purificado em uma coluna curta de sílica gel (hexano/acetato de etila) para gerar 1,25 gq de um produto contendo PPh;O0. O produto foi ciclizado sem purificação adicional.
Bifenil l15c (X = NMe, R = H) 4,4,5,5-Tetrametil-2-[4- (à-metilisoindolin-1-ona)-il]- [1,3,2] -dioxoborolano (2,43 g, 8,9 mmol) e o- nitroiodobenzeno (2,44 g, 9,80 mmol) foram dissolvidos em uma mistura de dioxano (30 ml) e água (6 1). K2CO,; (2,50 9, 18,1 mmol) e PA(PPhi). (0,51 &g9, 0,4 mmol) foram adicionados.
A mistura de reação foi aquecida em um fluxo de argônio até 80ºC, mantida nessa temperatura ao longo de um período de 24 h (monitoramento por TLC; hexano/acetato de etila, 4:1), resfriada e filtrada através de Celite.
O filtrado foi evaporado.
O resíduo foi dissolvido em CH2C1,3. Um precipitado não dissolvido foi retirado por filtração.
O filtrado foi parcialmente evaporado, e oO produto foi purificado em uma coluna curta de sílica gel (hexano/acetato de etila) para gerar 2,3 9 de um produto contendo PPh;0. O produto foi ciclizado sem purificação adicional.
Bifenil 15d (X = NMe, R = OMe) 4,4,5,5-Tetrametil-2-([4- (2-metilisoindolin-1-ona)-il]- | o. [1,3,2] -dioxoborolano (0,97 gq, 3,6 mmol) e 4-cloro-3- — nitroanisol (0,67 g, 3,6 mmol) foram dissolvidos em uma * mistura de dioxano (10 ml) e água (2 1). K3;CO; (0,98 g, 7,2 mmol) e PAd(PPh;). (0,21 g, 0,2 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida em um fluxo de argônio até 80ºC, mantida nessa temperatura ao longo de um período de 24 h (monitoramento por TLC: hexano/acetato de etila, 4:1), resfriada e filtrada através de Celite. O filtrado foi evaporado., O resíduo foi dissolvido em CH3Cl,;. Um precipitado não dissolvido foi retirado por filtração. O filtrado foi parcialmente evaporado, e o produto foi purificado em uma coluna curta de sílica gel (hexano/acetato de etila) para gerar 0,76 g de um produto contendo PPh;o. O produto foi ciclizado sem purificação adicional.
Carbazol l6a (X = CH;, R = H) A reação foi realizada em um frasco. 4-(2- Nitrofenil)indanona-1 (2,54 9, 10,0 mmol) foi dissolvida em P(OEt); (8 ml). O frasco foi depurado com argônio. A mistura de reação foi aquecida até 90ºC, mantida nessa temperatura de um dia para o outro, e resfriada. Como resultado, o carbazol se precipitou. CH2Cl; foi adicionado, O precipitado foi retirado por filtração e lavado com CHCl;. O filtrado foi evaporado, P(OEt); (2 ml) foi adicionado novamente, e a mistura foi deixada para ciclização por 24 h. Essas operações foram repetidas até que cessasse a formação de precipitado e TLC indicasse que o bifenil de partida havia desaparecido. No total, 0,58 9 do carbazol foi obtido.
Carbazol 16b (X = CH;y, R = OMe) |
' on A reação foi realizada em um frasco. 4-(4-Metóxi-2- . nitrofenil)-indanona-1 (1,25 9, 4,4 mmol) foi dissolvida em ' P(OEt); (8 ml). O frasco foi depurado com argônio. A mistura de reação foi aquecida até 90ºC, mantida nessa temperatura de um dia para o outro, e resfriada. Como resultado, o carbazol se precipitou. CH3xCl; foi adicionado. O precipitado foi retirado por filtração e lavado com CH,Cl7. O filtrado foi evaporado. P(OEt); (1 ml) foi adicionado novamente, e a mistura foi deixada para ciclização por 24 h. Essas operações foram repetidas até que cessasse a formação de precipitado e TLC indicasse que o bifenil de partida havia desaparecido. No total, 0,39 g do carbazol foi obtido.
Carbazol l6c (X = NMe, R = E) A reação foi realizada em um frasco. 4- (2-Nitrofenil)- 2-metilisoinolin-l-ona (2,29 gq, 8,5 mmol) foi dissolvida em P(OEt); (10 ml). O frasco foi depurado com argônio, A mistura de reação foi aquecida até 90ºC, mantida nessa temperatura de um dia para Oo outro, € resfriada. Como resultado, o carbazol se precipitou. CH;Cl; foi adicionado. O precipitado foi retirado por filtração e lavado com CHCl.. O filtrado foi evaporado,. P(OEt); (0,5 ml) foi adicionado novamente, e a mistura foi deixada para ciclização por 24 h., Essas operações foram repetidas até que a formação de precipitado cessasse e TLC indicasse que o bifenil de partida havia desaparecido. No total, 0,4 g do carbazol foi obtido.
Carbazol 16d (X = NMe, R = OMe) A reação foi realizada em um frasco. 4- (4-Metóxi-2- nitrofenil)-2-metilisoínolin-l-ona (0,76 g, 2,6 mmol) foi |
... dissolvida em P(OEt); (6 ml). O frasco foi depurado com
1. argônio, A mistura de reação foi aquecida até 90ºC, mantida ' nessa temperatura de um dia para o outro, e resfriada. Como resultado, o carbazol se precipitou. CH,Cl, foi adicionado.
O precipitado foi retirado por filtração e lavado com CH,Cl;. O filtrado foi evaporado. P(OEt); (0,5 ml) foi adicionado novamente, e a mistura foi deixada para ciclização por 24 h. Essas operações foram repetídas até que a formação de precipitado cessasse e TLC indicasse que o bifenil de partida havia desaparecido. No total, 0,34 g do carbazol foi obtido.
Para a alquilação de 16, o procedimento geral para a alquilação de carbazóis foi usado. Os rendimentos dos produtos 17a-f são mostrados na Tabela 1.
Para a acilação de 17, um procedimento similar àquele descrito para o Esquema 1 foi usado. Os rendimentos dos produtos l18a-d são mostrados na Tabela 2.
Esquema 8 x Ao SA ” VW x CA BBr3 QN
N DCM N FP” A» por 13,18 geo Nog, 19a-h Procedimento geral para dimetilação.
Um composto de metóxi foi dissolvido em CH;Cl;. A solução foi resfriada até -40ºC. Uma solução 0,5 M de EBr; em DCM (4 eq, para um grupo metóxi) foi adicionada em um fluxo de argônio. Após 10 min, o banho de resfriamento foi removido. A mistura de reação foi aquecida até temperatura |
' " ambiente, mantida ao longo de um período de 1 h
2. (monitoramento por TLC, CHCl;/Me0H, 4:1), e derramada em ' uma mistura de NaHCO; aquoso e CH.Cl;. A camada orgânica foi separada, e aquela aquosa foi extraída mais uma vez com CHCl. Os extratos combinados foram secos com Na;SO, e evaporados. O produto foi purificado por cromatografia em coluna (CHCl;/Meo0H). Os rendimentos dos produtos 19a-h são mostrados na Tabela 6.
Esquema 9 x R o AO Ara Omo ASF É Dou )j j PnNOz f Ú Ô Ç f 129 fo 20 fim fT» 2-Hidróxi-9-N,N-dietilaminoetilcarbazol (20) Doze g de 2-Metóxi-9-N,N-dietilaminoetilcarbazol foram dissolvidos em CH;Cl; (10 1). A solução foi resfriada até - 40ºC. Uma solução 0,5 M de BBr; em DCM (6 ml, 3,00 mmol) foi adicionada em um fluxo de argônio. Como resultado, formou-se uma suspensão laranja. A mistura de reação foi aquecida até temperatura ambiente, mantida ao longo de um período de 1,5 h, e derramada em uma mistura de NaHCO; aquoso e CH.Cl;. A camada orgânica foi separada, e a camada aquosa foi extraída mais uma vez com CH,Cl;, Os extratos combinados foram secos com Na7,SO0, e evaporados. O produto foi purificado por cromatografia em coluna (CHCl;/MeOH) para gerar 0,176 g (92%) do produto.
2-Acetóxi-9S-N,N-dietilaminoetilcarbazol (21) Uma solução do composto 20 (0,176 g, 0,62 mmol) em ACO (2 ml) foi refluída ao longo de um período de 30 min e derramada em água. A mistura resultante foi neutralizada |
' " com NaHCO; e extraída com acetato de etila. O extrato foi 2 evaporado para gerar 0,16 g (79%) do produto. ' 3-Acetiíl-2-hidróxi-I-N,N-dietilaminoetilcarbazol (22) O Composto 21 (0,16 g, 0,49 mmol) foi dissolvido em PhNO; (2 1), e ALCl; (0,1 gq, 0,75 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida em um banho de óleo até 100ºC, mantida nessa temperatura ao longo de um período de 2 h, diluída com água, neutralizada com Na,zCO; e extraída com HCl;. O extrato foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em uma coluna curta de sílica gel (CHC1;/MeOH) para gerar 0,044 g (28%) do composto 22. Tabela 1. Alquilação de carbazóis [o Lo |*renaimento| Rs
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TO " 80% de j o v " v 73% o *º Contém DMF. *” O rendimento não é preciso. Carbazol bruto foi usado para a preparação. Purificação por meio de cloridrato. º Purificação por meio de cloridrato, 9º Isolado como substâncias cristalinas imediatamente após diluição da mistura de reação com água. Tabela 2. Acetilação de carbazóis alquilados [Co To renaimento| Rd ú * o ' t à fo o UR N 64% We too 13a uv 55%
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CO N a 18c L 46% o / o N >. 18d o SN 81% Nº | * Após purificação por HPLC. ” Uma mistura com o composto de partida foi isolada e foi usada sem separação adicional. Tabela 3. Alquilação de carbazóis com bromoalquildiacetilcarbazóis [Co do renaimento| o É Pv N > “ nos 78%
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O * Após purificação por HPLC. Pb Obtido após trabalho com uma mistura e separado por HPLC. º Purificação via cloridrato.
EXEMPLOS Exemplo 1 o CEA een CO (CHSHCHÇOE!, ACI, Toco N DMF N Prtos N E) Yv Exemplo O [3- (9H-carbazol-9-1il)propil]dietilamina (30). Carbazol 3,0 g (18,0 mmol) foi dissolvido em DMF (20 ml). A seguir, NaH 60% em parafina (2,5 g, 62,5 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada por 10 min. Cloreto de 2-N,N-dimetilaminopropila 3,0 g (19,0 mmol) foi adicionado em porções e, em conseqiência, a temperatura se elevou até 45-50ºC. A mistura de reação foi mantida nessa temperatura por 2,5 h (monitoramento por TLC, CHCl;/MeOH, 9:1). A massa obtida foi cuidadosamente derramada em mistura de gelo/água e extraída com acetato de etila. O extrato foi seco com Na;SO, e evaporado para gerar o composto 30 (4,8 gq, 100%) como um óleo fluido marrom. 1,1'-(9-[3- (dimetilamino)propil] - 9IH-carbazol-3,6- diiljbis(2-metilpropan-l-ona) (Exemplo 1). O Composto 30 (0,25 9g, 1,0 mmol) foi dissolvido em |
" nitrobenzeno (5 ml). AICl; (0,6 g, 4,5 mmol) e depois : - cloreto de isobutiroíla (0,6 ml, 5,7 mmol) foram * adicionados em porções. A mistura de reação foi agitada por 40 min (monitoramento por LC/MS). A mistura obtida foi derramada em mistura de gelo/água e extraída com CHCl;. Os extratos combinados foram evaporados, e o resíduo foi purificado por cromatografia em uma coluna espessa curta de sílica gel (eluente: CHCl;/MeO0H 99:1-90:10) para gerar 0,189 g (47%) do produto. *H-RNM (DMSO-ds.): ô 1,20 (12H, d, J=6,7 Hz); 1,90-1,97 (2H, m); 2,11 (6H, Ss); 2,18 (2H, t, J = 6,7 Hz); 3,91 (2H, septeto, J = 6,7 Hz), 4,50 (2H, t, 3 = 6,6 Hz); 7,76 (2H, d, J = 8,7 Hz); 8,14 (2H, dd, 9 = 8,7 Hz, J = 1,5 Hz); 9,11 (2H, d, J = 1,5 Hz). ELSD:; 100%, ESI- MS: m/z 392 [M+H]*. Exemplo 2 LD Po " PANO, y DMF d un Bxenplo 2 No 1,1'- (9H-Carbazol-3,6-diil)dietanona (31).
Carbazol (16,9 &g, 0,1 mol) foi dissolvido em nitrobenzeno (300 ml). AlCl; anidro (54,0 g, 0,4 mol) foi adicionado sob agitação em um banho de gelo. A seguir, AcCl (55,5 gq, 0,7 mol) foi adicionado lentamente gota a gota.
Deixou-se que à mistura de reação se aquecesse até a temperatura ambiente sob agitação e ela foi mantida por 13 h. Água (500 ml) foi adicionada em pequenas porções sob resfriamento em um banho de gelo a fim de evitar formação violenta de espuma. O banho de resfriamento foi removido, e a mistura foi refluída com um condensador por 2 h. O |
: produto foi extraído com clorofórmio (3 x 150 ml). Os - extratos combinados foram sequencialmente lavados com soluções saturadas de NaHCO; e NaCl, secos com Naz2SO, anidro, e evaporados.
O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, CHCl;-MeOH) para gerar 112,5 g (50%). 1,1' -(9- [2- (1-Metilpirrolidin-2-il)etil] -9H-carbazol- 3,6-diil)dietanona (Exemplo 2, 3c). O derivado de diacetila 31 (0,97 g, 3,86 mmol) foi dissolvido em DMF (7 ml). NaH (0,54 g, 13,5 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada por 3-5 min em temperatura ambiente.
Cloridrato de 2- (2-Cloroetil)-1- metilpirrolidina (1,07 gq, 5,8 mmol) foi adicionado.
A mistura de reação foi agitada por 24 bh a 60ºC (monitoramento por TLC, CHCl;/Me0H, 9:1), diluída com água, e extraída com acetato de etíla.
O extrato foi seco com Na;S0, e evaporado.
O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, CHC1;/MeoH 99:1->90:10) para gerar 0,90 g (64%) do produto. 'H-RNM (DMSO-ds):; 8 1,41-1,49 (1H, m); 1,54-1,73 (3H, m); 1,76- 1,85 (1H, m); 1,97-2,13 (3H, m); 2,14 (3H, s); 2,70 (6H, s); 2,86-2,93 (1H, m); 4,46-4,50 (2H, m); 7,72 (2H, d, J = 8,8 Hz); 8,12 (2H, dd, J = 8,8 Hz, J = 1,6 Hz); 9,04 (2H, d, J = 1,6 Hz). ELSD; 100%, ESI-MS: m/z 363 [M+H]”. Exemplo 3 1 EsNICHAZO Nai t ANNA, t ão t 2) a memo sf)
| o [2- (9H-Carbazol-9-1il)etil]dietilamina (32).
2. Carbazol (10,0 g, 59,8 mmol) foi dissolvido em DMF (60 ' ml). A seguir, NaH 60% em parafina (7,2 g, 180,0 mmol) foi adicionado em porções. A mistura foi agitada por 10 min. Cloridrato de cloreto 2- N,N-dietilamínoetil (10,5 g, 61,0 mmol) foi adicionado em porções e, em conseqúência, a temperatura se elevou até 50ºC. A mistura de reação foi mantida nessa temperatura por 2,5 h (monitoramento por TLC, hexano/acetato de etila 4:1). A massa resultante foi cuidadosamente derramada em mistura de gelo/água e extraída com acetato de etila, O extrato foi seco com Na,;SO0, e evaporado para gerar o composto 1 (16,0 g, 100%) como um óleo marrom fluido. 1,1º-(9-[2- (Dietilamino)etil] -9H-carbazol-3,6-diiljbis (3-cloropropan-l1-ona)cloriárato (33).
Uma solução do composto 32 (17,9 g, 67,3 mmol) em nitrobenzeno (150 ml) foi resfriada em um banho de gelo. AlCl; (45,0 gq, 337,1 mmol) foi adicionado em porções. A seguir, cloreto de 3-cloropropionila (32,4 ml, 336,7 mmol) foi adicionado gota a gota por 10 min. A mistura de reação foi agitada por 40 min (monitoramento por LC/MS), derramada em uma mistura de gelo com HCl diluído, e extraída com CHCl;. O extrato foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em uma coluna espessa curta (sílica gel, CHCl;/Me0OH 99:1-90:10) para gerar 22,9 g (76,3%) do cloridrato 33.
Cloridrato de 6-[2-(dietilamino)etil] -10,11-diidro-lH- diciclopenta[c,glcarbazol-3,9(2H,6H) -diona (Exemplo 3).
O cloridrato 2 (22,9 g, 51,3 mmol) foi dissolvido em 98% H;S0, (150 ml). A solução foi mantida a 80ºC por 4 h |
“& (monitoramento por TLC, CHCl;/Me0H 4:1) e derramada em - .' gelo.
A mistura resultante foi neutralizada com Naz;CO; e " extraída com CHCl;. O extrato foi evaporado.
O resíduo foi purificado por cromatografia em uma coluna espessa curta (sílica gel, CHCl;/MeoH 99:1-90;:10) e recristalizado a partir de MeOH para gerar 0,562 g (3%) do produto.
Esse último foi dissolvido em CH;Cl;, HCl em dioxano foi adicionado, e a mistura foi evaporada até a secura.
O resíduo foi lavado com éter e seco para gerar 0,6358 g do cloridrato. "H-RNM (DMSO-ds.); & 1,26 (6H, t, J = 7,4 Hz); 2,77-2,80 (4H, m); 3,42-3,47 (2H, m); 3,23-3,34 (4H, Mm); x 3,83-3,85 (4H, m); 5,88 (2H, t, J = 7,8 Hz); 7,84 (2H, d, 3 = 8,6 Hz); 7,97 (2H, d, IJ = 8,6 Hz); 10,75 (1H, br.s). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 375 [M4+H]*". Exemplo 4 CEEE O So nom o Dioxano dioxano, aq. oué N as No 3 E o o o o E Y 3” “ ee 4- (4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-1il)indan-1- ona (34). Acetato de potássio (17,8 g, 181,6 mmol) e Pd(dppf) Cl, (3,3 g, 4,5 mmol) foram adicionados a uma solução de 4- bromo-1-indanona (19,3 g, 91,5 mmol) e bis(pinacolato)diboro (23,2 9, 91,3 mmol) em dioxano (300 ml). A mistura foi aquecida até BOºC sob argônio, mantida |
” é nessa temperatura por 16 h, resfriada, filtrada através de A, Celite, e evaporada. O resíduo foi dissolvido em CH;Cl;. O ' produto foi purificado em uma coluna espessa curta com sílica gel (eluente: hexano-acetato de etila 10:0—50:50). Rendimento de 34: 23,4 g. O produto contendo bis (pinacolato)diboro (cerca de 7 molar %) foi usado na etapa seguinte, sem purificação adicional.
4- (4-Metóxi-2-nitrofenil)indan-l-ona (35).
Potassa (7,5 g, 54,3 mmol) e Pd(PPh;)s (1,6 9, 1,4 mmol) foram adicionados a uma solução de 4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)indan-1-ona 34 (7,0 9, 27,1 mmol) e 4-cloro-3-nitroanisol (5,1 g, 27,1 mmol) em uma mistura de dioxano (80 ml) e água (20 ml). A mistura obtida foi aquecida até 80ºC sob argônio, mantida nessa temperatura por 16 h (monitoramento por TLC, eluente: hexano-acetato de etila, 1:1), resfriada, filtrada através de Celite, evaporada e dissolvida em CH,Cl;. A seguir, a mistura foi retirada por filtração da porção insolúvel, evaporada com sílica gel, e purificada em uma coluna espessa curta com sílica gel (eluente: hexano-CH,;Cl, 100:00:100, CH;Cl;-acetato de etila 100:0-50:50). Rendimento de 35: 5,59 gq. O produto foi usado na etapa seguinte, sem purificação adicional.
B-Metóxi-1,6-diidrociclopenta[c] carbazol-3 (2H) -ona (36).
Bifenil 35 obtido (5,59 g) foi dividido em cinco porções (1,11 g cada); a seguir, P(OEt); (por 7 ml) foi adicionado a cada porção. A mistura resultante foi submetida a jato de argônio em um frasco, aquecida até 90ºC, mantida nessa temperatura por 3 dias, e resfriada.
|
” Carbazol foi precipitado.
A seguir, à mistura de reação foi diluída com éter; o precipitado foi retirado por filtração ' e lavado com CH;Cl;. Se o bifenil inicial permanecesse no filtrado (monitoramento por TLC, eluente: hexano-acetato de etila, 1:1), esse filtrado era evaporado e P(OEt); (por 1 ml em cada frasco) era adicionado.
A mistura foi submetida à ciclização repetida por um dia.
O procedimento era repetido até que a precipitação cessasse e os dados de TLC mostrassem ausência do bifenil inicial.
Rendimento total de carbazol 36: 2,16 9. 6- [3- (Dimetilamino)propil] -B8-metóxi-1,6- diidrociclopenta[c] carbazol -3 (2H) -ona (37). O Composto 36 (1,0 g, 3,98 mmol) foi suspenso em CHCl;s (10 ml); NaH (0,75 gg, 12,0 mmol, 3 eg) foi adicionado.
A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5-10 min; à seguir, cloridrato de cloreto de 3- dimetilamino-l1-propila (0,75 gg, 4,74 mmol, 1,2 eq) foi adicionado.
A mistura de reação foi aquecida até 70ºC, mantida nessa temperatura por 2 h (monitoramento por TLC, eluente: CH,Cl;-acetato de etila, 1:1 - a presença de carbazol inicial, CHCl;-MeOH, 9:1 - pureza do produto). A mistura resultante foi diluída com água, extraída com acetato de etila, evaporada e purificada em uma coluna espessa curta com sílica gel, eluente: CHCl;-MeOH 99:1-90:10. Rendimento de 37: 0,84 g (63%). 9-AcCetil-6-[3- (dimetilamino)propil] -8-metóxi-1,6- diidrociclopenta[c] carbazol-3(2H)-ona (38). Uma solução do composto 37 (0,84 g, 2,51 mmol) em PINO; (20 ml) foi resfriada em um banho de gelo.
A seguir, AlCl; (1,7 gq, 12,7 mmol, 5 eq) e, depois, ACcCl (0,9 ml, |
| . 75/201 . 2 12,7 mmol, 5 eq) foram adicionados.
A mistura foi mantida por 40 min (monitoramento por LC/MS), diluída com água, ; neutralizada com Na,CO;, extraída com CHCl; e evaporada.
O produto foi purificado em uma coluna espessa curta, eluente: CHCl;-Me0H 99:1-90:10. Rendimento de 38: 0,658 9g (69%) . 9-AcCetil-6-[3- (dimetilamino)propil] -8-hidróxi-l1,6- diidrociclopenta [c] carbazol-3(2H)-ona (Exemplo 4; 19c). Uma solução 0,5 M de BBr; (16,5 ml, 5 eq) foi adicionada gota a gota sob argônio a uma solução do composto 38 (0,658 g, 1,74 mmol) em CH;Cl; (100 ml) resfriada até -40ºC.
A mistura foi mantida por 10 min; a seguir, o banho de resfriamento foi removido e a mistura foi aquecida até a temperatura ambiente e mantida por 1-2 bh (monitoramento por TLC, eluente: CHCl;/NH;-MeOH, 9:1). A mistura resultante foi derramada em uma mistura de solução aquosa de NaHCO; e CH;Cl;. A camada orgânica foi separada; aquela aquosa foi extraída com CH,Cl;, seca sobre Na,SO,, evaporada e dissolvida em uma mistura: CHCl;-MeOH-água, 40:9:1. O produto foi purificado em uma coluna de sílica gel com o uso da última mistura como um eluente.
Rendimento do Exemplo 4: 0,258 g (41%). Para à preparação de cloridrato, o produto isolado foi dissolvido em uma mistura: CH,Cl;-MeO0H; uma solução de HCl em pioxano foi adicionada.
A mistura resultante foi evaporada até a secura; o resíduo foi lavado com éter.
Espectro de 'H-RNM (DMSO-d.): 8 2,14-2,20 (2H, m); 2,70 (6H, d, J = 4,9 Hz); 2,78-2,81 (2H, m); 3,12-3,17 (2H, m); 3,60-3,62 (2H, m); 4,51 (2H, t, J = 7,1 Hz); 7,28 (1H, ss); 7,73 (2H, s - sistema AB degenerado); 8,55 (1H, s); Dr e i
Gu 10,40 (1H, br. s); 12,76 (1H, Ss). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 2 364 [M+H]*. ' Exemplo 5 one LO eme to DO LCOSSOSON HoB Aioxano, 9%: omé NO a, ou EQ ” o o o o OO Lo, ROSOR DOROS
E NTE a“ Y 2 sl Exesção 5 NS 4,4'-dimetóxi-2-nitrobifenil (39) Potassa (9,10 g, 65,9 mmol) e Pd(PPh;). (1,90 g, 1,6 mmol) foram adicionados a uma Solução de ácido 4- metoxifenilborônico (5,0 9, 32,9 mmol) e 4-cloro-3i- nitroanizol (6,17 g, 32,9 mmol) em uma mistura de dioxano (80 ml) e água (20 ml). A mistura resultante foi aquecida até 80ºC sob argônio, mantida nessa temperatura por 16 h (monitoramento por TLC, eluente: hexano-acetato de etila, 4:1), resfriada e filtrada através de Celite. O produto foi retirado por lavagem com CH;Cl;. O resíduo foi dissolvido em CHCl; e purificado em uma coluna espessa curta (eluente: hexano-CH3Cl,; 100:0—0:100, CH,Cl;-acetato de etila 100:0—50:50). Rendimento de 1: 8,47 g. 2,7-dimetóxi-9H-carbazol (40) O Composto 39 (8,47 g) foi divídido em oito porções (1,06 g cada). A seguir, P(OEt); (por 7 ml) foi adicionado a cada porção. As misturas resultantes foram submetidas ao jato de argônio, aquecidas até 90ºC, mantidas nessa | o temperatura por 3 dias, resfriadas e diluídas com éter.
O 2 precipitado obtido foi filtrado e lavado com CH,Cl;. ' Rendimento de carbazol 40: 3,33 g. [3- (2, T-dimetóxi-SH-carbazol-9-1il)propil]dimetilamina (40) O Composto 40 (0,7 q, 3,1 mmol) foi suspenso em DMF (6 ml). Hidreto de sódio (0,4 g, 10,0 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5-10 min.
A seguir, cloridrato de cloreto de 3-dimetilamino-l-propila (0,73 g, 4,6 mmol) foi adicionado.
A mistura obtida foi aquecida até 50-60ºC, mantida nessa temperatura por 16 h (monitoramento por TLC, eluente: CH,Cl;-acetato de etila, 1:1 - a presença do carbazol inicial; CH;Cl;-MeOH, 9:1 - à pureza do produto), e diluída com água.
O precipitado branco obtido foi deixado em repouso por 1 h, retirado por filtração, e seco ao ar.
Rendimento de 41: 0,96 gq (100%). 1,1º-f9-[3- (dimetilamino) propil] -2,7-dimetóxi-9H- carbazol-3,6-diil)kdietanona (42) O Composto 41 (0,96 g, 3,2 mmol) foi dissolvido em PhNO, (20 ml); a solução foi resfriada em um banho de gelo.
A seguir, ACCl (1,1 ml, 15,4 mmol) foi adicionado, seguido por AlCl; (2,1 g, 15,7 mmol) em porções.
A mistura resultante foi mantida por 40 min (monitoramento por LC/MS), diluída com água, neutralizada com Na,zCO,;, extraída com CHCl, e evaporada, O produto foi purificado em uma coluna espessa curta com sílica gel.
Rendimento de 42: 0,787 g (62%), 1,1" -(9-[3- (dimetilamino)propil] -2,7-diidroxi-9H- carbazol-3,6-diíl)dietanona (Exemplo 5; 19b). Uma solução 0,5 M de BBr; (22,5 ml) foi adicionada gota a gota sob argônio a uma solução do composto 42 (0,787 gg, 1,99 mmol) em CHCl; (90 ml), resfriada até -40ºC.
Após |
" 10 min, o banho de resfriamento foi removido; a mistura foi
1. aquecida até a temperatura ambiente e mantida por 1-2 h ' (monitoramento por TLC, eluente: clorofórmio-metanol, 4:1). A mistura resultante foi derramada em uma mistura de solução aquosa de soda e CH,;Cl;. A camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com CH,Cl,, seca sobre Nas;SO0,, evaporada, e dissolvida em uma mistura CHCl;- MeOH-água, 40:9:1. O produto foi purificado em uma coluna. Rendimento do Exemplo 5: 0,379 g (52%).
A seguir, o produto foi dissolvido em uma mistura CH,Cl;-MeOH. Uma solução de HCl em dioxano foi adicionada. A solução resultante foi evaporada até a secura; o resíduo foi lavado com CH;CN e éter. A partir de uma forma de base do produto (0,379 gq), 0,339 g do cloridrato foi isolado.
H-RNM (DMSO-dg) 8: 2,09-2,13 (2H,); 2,72 (6H, Ss); 2,77 (6H, Ss); 3,13-3,16 (2H, m); 4,34 (2H, t, JIJ = 7,1 Hz); 7,13 (2H, 5); 8,84 (2H, s); 10,17 (1H, br. s); 12,82 (2H, s). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 369 [M+H]*.
Exemplo 6
FT
9. 20 r bis(pinacolato)díboro, 2-cloronitrobenzeno, o ARO PA JO, POPA POE Dioxano dioxano, àq. s sº uo NO; as “ o o Sa t acunO t Gascos, Pan * — Dl PINO, Y CHCIMEOH Y nº Nó NH ar NS as 4h Exemplo o É . na nc A Ro Bend NR 2 Pa e FÉ oo IL ” a“ so o 4- (2-Nitrofenil) indan-1-ona (45).
o. Potassa (8,1 g, 58,7 mmol) e PAd(PPh;). (1,7 g, 1,5 ' mmol) foram adicionados à uma solução do composto 44 (7,51 g, 29,1 mmol) e 4-cloro-3-nitrobenzeno (4,6 gq, 29,1 mmol) em uma mistura de dioxano (80 ml) e água (20 ml). A mistura obtida foi aquecida sob argônio até 80ºC, mantida nessa temperatura por 16 h (monitoramento por TLC, eluente; hexano-acetato de etila, 1:1), resfriada, filtrada através de Celite, e evaporada. O produto resultante foi dissolvido em CHCl;, e um resíduo insolúvel foi retirado por filtração. O produto resultante foi evaporado com sílica gel e purificado em uma coluna espessa curta (eluente: hexano- CHxCl2 — 100:0-0:100, CH;Cl;-acetato de etila 100:0->50:50). O Composto 45 (5,0 g) foi isolado e usado na etapa seguinte, sem purificação.
1,6-Diidrociclopenta[c] carbazol-3 (2H) -ona (46).
O Composto 45 (5,0 g) foi dividido em cinco porções (1,0 g cada). P(OEt); (por 7 ml) foi adicionado a cada porção. O produto resultante foi submetido ao jato de argônio em um frasco, aquecido até 90ºC, mantido nessa temperatura por 3 dias, e depois resfriado, O carbazol precipitado foi diluído com éter, O precipitado foi filtrado e lavado com éter. Se o bifenil inicial estivesse presente no filtrado (monitoramento por TLC, eluente: hexano-acetato de etila, 1:1), esse filtrado era evaporado, e depois P(OEt), era adicionado (1 ml para ciclização por 1 dia). O procedimento foi repetido até que a precipitação cessasse e TLC mostrasse ausência do bifenil inicial.
Carbazol 46 (2,7 9) foi obtido.
2-Nitro-N-propilbenzenossulfonamida (49). |
-. Uma solução de 2-nitrofenisulfocloreto (8 9, 36 mmol) . em acetato de etila (25 ml) foi adicionada gota à gota em | * temperatura ambiente a uma mistura de propilamina (3 ml, 36,0 mmol), acetato de etila (15 ml), Na;CO; (4 g, 37,7 mmol) e água (25 ml). A solução resultante foi agitada por 2 h (monitoramento por TLC, eluente: CH;Cl;). A camada orgânica foi separada, lavada com água, uma solução de ácido cítrico, seca sobre Na;SO,s, e evaporada. o precipitado se cristalizou como uma massa branca, que foi retirada por lavagem com hexano.
Rendimento de 49: (7,47 9, 85%) . N- (3-Bromopropil) -2-nitro-N-propilbenzenossulfonamida (50). 1,3-Dibromopropano (8,5 ml, 82,0 mmol, 10 eg) foi adicionado a uma solução do composto 49 (2,0 g, 8,2 mmol) em DMF (20 ml). A seguir, NaH (0,6 gg, 15,0 mmol) foi adicionado em porções.
A temperatura se elevou até 50-60ºC.
A mistura foi agitada nessa temperatura por 20 min (monitoramento por TLC, eluente: CH;Cl;). A seguir, a mistura foi cuidadosamente derramada em gelo.
O produto foi extraído com acetato de etila, e o extrato foi evaporado.
O resíduo foi lavado a partir de 1,3-dibromopropano com hexano.
O produto resultante foi dissolvido em CH,Cl;, e purificado em uma coluna espessa curta com sílica gel, eluente: hexano-CH;Cl>, 100:0->0:100. Composto 50 (1,87 q, 62%) foi isolado como um óleo rapidamente cristalizável. 2-Nitro-N- [3- (3-o0x0-2,3-diidrociclopenta [c] carbazol- 6 (1H) -11) propil] -N-propilbenzenossulfonamida (47). O Composto 46 (0,538 gq, 2,43 mmol) e brometo 50 (0,9 g, 2,46 mmol) foram dissolvidos em CH;Cl; (30 ml). A seguir, WNaH (0,15 g, 3,75 mmol, 1,5 eq) foi adicionado.
A |
" mistura de reação foi agitada por 20 min (monitoramento por oe TLC, eluente: hexano-acetato de etila, 1:1). A seguir, a ' mistura foi derramada sobre gelo. O produto foi extraído com acetato de etila, e o extrato foi evaporado em um evaporador rotatório. O resíduo de CH,Cl; foi removido em alto vácuo. Metanol foi adicionado ao precipitado endurecido. O produto foi triturado; o precipitado foi retirado por filtração. Rendimento de 47: 0,638 g (52%). N-[3- (9-Acetil-3-o0x0-2,3-diidrociclopenta[c] carbazol- 6(1H)-il)propil]-2-nitro-N-propilbenzenossulfonamida (48).
O Composto 47 (0,638 gq, 1,26 mmol) foi dissolvido em PhNO;z (7 ml). A solução foi resfriada em um banho de gelo, AICl; (0,67 g, 5,02 mmol) e depois ACCl (0,45 ml, 6,31 mmol) foram adicionados. A mistura foi mantida por 40 min (monitoramento por LC/MS), diluída com água. O produto foi extraído com CH;Cl;. O extrato foi evaporado. O resíduo foi evaporado, e o produto foi passado através de Celite, eluente: CH/Cl;-acetato de etila 100:0-50:50. Rendimento de 48: 0,453 g (66%).
9-Acetil-6-[3- (propilamino) propil] -1,6- diidrociclopenta[c] carbazol-3 (2H) -ona (Exemplo 6).
O Composto 48 (0,496 g, 0,91 mmol) foi suspenso em uma mistura de MeOH (10 ml) e CHCl; (15 ml). A mistura foi aquecida até a fervura. A seguir, Cs,CO; (0,6 g, 1,82 mmol) foi adicionado, e PhSH de uma vez (0,2 ml, 1,96 mmol) foi derramado (a solução ficou azul). A solução resultante foi refluída por 2 h (monitoramento por TLC, eluente: CHCl;- MeOH, 9:1). Durante esse período, a mistura de reação ficou verde. A seguir, a mistura foi evaporada até a secura. Uma solução diluída de ácido cítrico foi adicionada. Um |
. precipitado amarelo foi retirado por filtração, lavado com a éter, suspenso em CH;CN, e refluído. Após resfriamento, O * precipitado bege foi retirado por filtração do filtrado amarelo, e depois lavado com éter. O produto resultante (0,251 g, 76%) foi isolado. Para a transformação da forma básica em cloridrato, o produto foi dissolvido em uma mistura de CH,Cl;-metanol (a mistura foi adicionada até que o produto fosse completamente dissolvido). A seguir, uma solução de ácido clorídrico em dioxano foi adicionada. A solução foi evaporada até a secura, Um precipitado lilás escuro obtido foi lavado com metanol e acetonitrila. Rendimento do Exemplo 6 como cloridrato: 0,118 q. Espectro de H-RNM (400 MHz, DMSO-ds): 3 0,88 (3H, t, J = 7,32 Hz); 1,53-1,62 (2H, m); 2,13-2,20 (2H, m); 2,73 (2H, s); 2,80-2,83 (4H, m); 2,95-2,96 (2H, m); 3,65-3,68 (2H, m); 4,68 (2H, t, J = 7,3 Hz); 7,81 (1H, d, J = 8,6 Hz); 7,85 (1H, d, J = 8,6 Hz); 8,15 (1H, dd, J = 8,6 Hz, TT = 1,3 Hz); 8,70 (1H, br. s); 8,71 (1H, d, IJ = 1,3 Hz). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 362 [M+H]*. Exemplo 7 o o CÃO = CIO se. DIS” N N — si NS se NM NHNS NHNs o o o o Sc PRE Me;CO, STAB CHCICmEN ú ———— X
N sº Ha Exemção 7 Y 2”) NH, NsCL Na0O, noOA É MSC). EN NHNS W HO? onsoe 7 MOO i PP NOS oa Ns ss 2 ss
. N- (2-Hidroxietil) -2-nitrobenzenossulfonamida (54). " Etanolamina (10 ml, 165 mmol) foi dissolvida em ' acetato de etila (60 ml). A seguir, uma solução de NazsCO; (22,7 g, 214,2 mmol) em água (100 ml) foi adicionada. A seguir, uma solução de cloreto de 2-nitrobenzenossulfonila (35,0 g, 157,9 mmol) em acetato de etila (100 ml) foi adicionada gota a gota sob agitação. A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 h (monitoramento por TLC, eluente: CH;Cl,). A camada orgânica foi separada, lavada com água e uma solução de ácido cítrico, seca sobre Na;SO0., e evaporada. Rendimento de 54: 29,5 g (73%) como cristais brancos. 2-([(2-Nitrofenil)sulfonil] aminojetil metanossulfonato (55).
Trietilamina (20 ml, 144,6 mmol) foi adicionada a uma solução do composto 54 (29,5 g, 119,9 mmol) em acetato de etila (300 ml). A mistura foi resfriada até 10ºC em um banho de gelo. A seguir, uma solução de cloreto de mesila (10,2 ml, 131,8 mmol) em acetato de etila (50 ml) foi adicionada gota a gota em uma temperatura € 20ºC, A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente por 3 h (monitoramento por TLC, eluente: hexano-acetato de etila, 4:1). A mistura de reação foi filtrada para remover o precipitado - cloridrato de trietilamina. O filtrado foi lavado com NaHCO; aquoso, água, e evaporado. Rendimento de 55: 32,2 g (83%) como cristais.
1- [(2-Nitrofenil)sulfonil]azirídina (56). Uma solução de KOH (1,73 gq, 31 mmol) em água (50 ml) foi adicionada a uma solução do composto 55 (10 g, 31 mmol) em acetato de etila (100 ml). A camada aquosa foi corada em | amarelo.
A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 1 h (monitoramento por TLC, eluente: CH,Cl;-acetato de ] o etila, 1:1). Se necessário, porções adicionais de solução de KOH (0,5 eq) foram adicionadas.
A camada orgânica foi separada, lavada cuidadosamente com água, uma solução de ácido cítrico (até o pH 7), novamente com água, seca sobre NasSO,, e evaporada.
Rendimento de 56: 6,6 g (93%) como um óleo fluido amarelado.
N- [2- (9H-Carbazol -9-11) etil] -2-nitrobenzenossulfonamida (51). Carbazol (1,10 gq, 6,59 mmol) foi dissolvido em CH;CN (40 ml). A seguir, hidrato de sódio (0,33 g, 8,25 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 15-20 min.
A seguir, uma solução de aziridina 56 (1,5 g, 7,89 mmol) em CH;CN (30 ml) foi adicionada em uma porção.
A mistura resultante foi agitada por 1 h (monitoramento por TLC, eluente: hexano-acetato de etila, 1:1), derramada em água, acidificada com HCl até o pH 1, e agitada novamente em temperatura ambiente.
Gradualmente, um produto laranja se precipitou da solução turva. o precipitado foi filtrado e lavado com MeOH e éter.
Rendimento de 51: 2,15 g (83%) como cristais laranja.
N- [2- (3, 6-Diacetil-9H-carbazo]l-9-1il1)etil]-2- nitrobenzenossulfonamida (52). O Composto 51 (5,0 g, 12,7 mmol) foi dissolvido em PHNO; (30 ml). A solução foi resfriada em um banho de gelo.
A seguir, AlCl; (8,5 9g, 63,7 mmol) e depois ACCl (4,5 ml, 63,1 mmol) foram adicionados.
A mistura foi mantida por 40 min (monitoramento por LC/MS), diluída com água, extraída com clorofórmio, e evaporada, O produto foi purificado em | uma coluna espessa curta com sílica gel, eluente: CH,Cl;- s acetato de etila 100:0-50:50. Uma mistura de etanol e 1 amônia aquosa 25% (4:1) foi adicionada ao resíduo.
O produto resultante foi refluído por 1,5-2 h.
Uma suspensão quente foi retirada por filtração.
O Produto 52 foi isolado (4,11 g, 68%) como cristais beges. 1,1'-[9- (2-Aminoetil)-9H-carbazol-3,6-diil]dietanona (53). O Composto 52 (4,11 g, 8,58 mmol) foi dissolvido sob refluxo em uma mistura de CH;CN (150 ml) e metanol (50 ml). A seguir, Cs;CO; (8,4 g, 25,78 mmol) foi adicionado e PhSH de uma vez (2,6 ml, 25,48 mmol) foi derramado.
A mistura resultante foi refluída por 2,5 h (monitoramento por TLC, eluente: clorofórmio-metanol, 9:1) e evaporada até à secura.
A seguir, água e uma solução de HCl foram "15 adicionadas.
Como resultado, todos os produtos sólidos . foram dissolvidos.
A solução aquosa ácida foi extraída com acetato de etila até que esse último parasse de ficar amarelo.
A camada aquosa foi neutralizada com uma solução saturada de NaHCO;, extraída com uma mistura de CH,Cl;-MeOH (4:1), e o extrato foi evaporado.
O resíduo retirado por lavagem com MeCN e lavado com éter.
Rendimento de 53: 1,25 g (50%) como cristais beges. 1,1' -(9- [2- (Isopropilamino)etil] -9H-carbazol-3,6-diil) dietanona (Exemplo 7; 6h). Acetona (5 ml, 68,10 mmol) foi adicionada a uma solução do composto 53 (1,25 g, 4,25 mmol) em CH,Cl, (50 ml). A seguir, STAB (3,0 g, 14,15 mmol) foi adicionado.
A mistura obtida foi agitada em temperatura ambiente por 4,5 h (monitoramento por TLC, eluente: CHCl,;-MeOH, 89:1) e depois derramada em uma solução aquosa de NaHCO;. A camada |
- orgânica foi separada.
A camada aquosa foi extraída com ' CHCl;. O produto foi seco sobre Na;S0, e evaporado.
O CU 2 resíduo foi purificado em uma coluna, eluente: CHCl;-MeOH 99;:1—90:10. O Exemplo 7 (1,04 g, 73%) foi isolado como um óleo que se cristaliza rapidamente, Para a preparação de sua cloridrato, a base foi dissolvida em CH;Cl;. A seguir, uma solução de HCl em dioxano foi adicionada.
A mistura foi evaporada até a secura.
O produto foi lavado com éter.
Espectro de *H-RNM (DMSO-ds.): 8 1,25 (6H, d, IJ = 6,6 Hz); 2,72 (6H, Ss); 3,33-3,39 (3H, m); 4,87 (2H, t, IJ = 7,3 Hz); 7,92 (2H, d, J = 8,7 Hz); 8,17 (2H, dd, J = 8,7 Hz, O = 1,6 Hz); 9,01 (2H, d, J = 1,6 Hz); 9,24 (1H, br. s); 9,33 (1H, hr.
Ss). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 336 [M+H]*. Exemplo 8 s fe o N NS Proa S OT i em 5 NHNS Lupo, PhSH NMe3CD, STAB qn CHCIVMeOH N eme N h h h e ue memso A síntese de composto 51 foi descrita no Exemplo 7. N-(2-[3,6-bis(3-cloropropanoil)-9H-carbazol-9-11] etil)-2-nitrobenzenossulfonamiída (57) O Composto 51 (20,0 g, 50,6 mmol) foi dissolvido em PhNO; (130 ml) e a solução foi resfriada em um banho de gelo.
A seguir, AlCl; (34,0 g, 254,7 mmol) e depois cloreto de 3-cloropropionila (25,0 ml, 259,8 mmol) foram adicionados.
A mistura foi mantida por 40 min |
- (monitoramento por LC/MS), derramada em uma mistura de HCl diluído e gelo, extraída com CHCl;, e deixada em repouso o “ por1l6h. oO precipitado de cor de palha obtido foi filtrado e lavado com éter. Rendimento de 57: 18,47 qg (63%).
N-[2- (3, 9-dioxo-1,2,3,9,10,11-hexahidro-6H- diciclopenta[c,g]carbazol-6-il)etil] -2- nitrobenzenossulfonamida (58) Ácido sulfúrico (200 ml) foi aquecido até 40ºC. A seguir, o composto 57 (18,47 g, 32,12 mmol) foi adicionado em porções. A mistura foi aquecida até 90ºC e mantida nessa temperatura por 1,5-2 h (monitoramento por TLC, eluente: CH,Cl;-acetato de etila, 4:1). A mistura resultante foi derramada sobre gelo. O precipitado cinza foi retirado por filtração, lavado em um filtro com uma mistura de CHCl;- Meo0H (4:1). O precipitado restante (em um filtro) foi : recristalizado com DMF, lavado com CH;CN e éter. Rendimento de 58 puro: 2,2 g (14%). 6- (2-aminoetil)-10,11-diidro-l1H-diciclopenta[c,g] carbazol-3,9(2H,6H) -diona O Composto 58 (2,2 gq, 4,38 mmol) foi suspenso em uma mistura de clorofórmio (200 1) e metanol (200 ml). A seguir, Cs,CO; (4,3 g, 13,20 mmol) e PhSH de uma vez (1,3 ml, 12,74 mmol) foram adicionados. A solução foi refluída por 18 h (monitoramento por LC/MS) e evaporada até a secura. A seguir, uma solução aquosa de ácido cítrico foi adicionada. A solução obtida foi neutralizada com uma solução aquosa de NaHCO;. O precipitado foi retirado por filtração, lavado com CH;CN e éter. O produto isolado foi usado na etapa seguinte, sem purificação.
6- [2- (isopropilamino)etil] -10,11-diidro-l1H- |
' diciclopenta[c,g]carbazol-3,9(2H,6H) -diona (Exemplo 8) ' O composto 59 bruto (1,69 g) foi suspenso em CH,Cl, . (200 ml). A sequir, acetona (4 ml) e STAB (3,4 g) foram adicionados. A mistura foi agitada por 24 h (monitoramento por TLC, eluente: CHCl;-MeOH, 9:1), e depois derramada em uma solução aquosa de NaHCO;. A seguir, outra porção de CH;Cl; e MeOH foi adicionada. A camada orgânica foi separada, evaporada, lavada com MeCN e éter. Rendimento do Exemplo 8: 0,759 g. Para a preparação de cloridrato, o produto isolado foi suspenso em uma mistura de CH;Cl; e MeOH, e depois uma solução de HCl em dioxano foi adicionada. A mistura resultante foi evaporada até a secura, e etanol foi adicionado ao resíduo. A solução etanólica foi refluída e resfriada, e o precipitado foi *15 filtrado. Rendimento de cloridrato do composto do Exemplo 8: 0,684 g. Espectro de H-RNM (DMSO-dy): 8 1,24 (6H, d, J = 6,6 Hz); 2,77-2,79 (4H, m); 3,34-3,43 (3H, m); 3,81-3,84 (4H, m); 4,91 (2H, t, J = 7,3 Hz); 7,83 (2H, d, J = 8,6 Hz); 7,91 (2H, d, J = 8,6 Ha); 9,11 (2H, br. Ss). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 360 [M+H)]*. Exemplo 9 o
N CHCHICOC CO = Ee q e, y MF Y — NX so. Ns N ns Led K “ K N Ns Cs;COs, PNSH
X CHCIUBOH Y ia NH se t Exemplo 9 NO, NsCh NaxCOs A BrrcrinãA. Near XY e rosa. SAN nm Ô wo NA “ u“
' N-Etil-2-nitrobenzenossulfonamida (63). ' Uma solução de cloreto de 2-nitrobenzenossulfonila VU ' (140 g, 361 mmol) em acetato de etila (250 ml) foi adicionada gota a gota em temperatura ambiente a uma mistura de etilamina 70% aquosa (50 ml, 630 mmol), acetato de etila (100 ml), Na;CO; (67 g, 632 mmol) e água (250 ml). A mistura de reação foi agitada por 4 h (monitoramento por TLC, CHCl;). A camada orgânica foi separada, lavada com água, com uma solução de ácido cítrico, seca com Naz;SO,, Ee evaporada.
O resíduo se solidificou em uma massa cristalina branca.
Essa última foi triturada com hexano, retirada por filtração e seca, para gerar 134 g (92%) do produto, N- (3-Bromopropil)-N-etil-2-nitrobenzenossulfonamida (64). O Composto 63 (7,8 g, 33,9 mmol) foi dissolvido em DMF 18 (100 ml). 1,3-Dibromopropano (35 ml, 343,0 mmol) e depois NaH em porções (2,7 g, 67,5 mmol) foram adicionados e, em consegilência, a temperatura se elevou até 50-60ºC.
A mistura de reação foi agitada nessa temperatura por 1 h (monitoramento por TLC, CH;Cl;), cuidadosamente derramada em mistura de gelo/água, e extraída com acetato de etila.
O extrato foi evaporado.
O resíduo foi lavado com hexano para remover o 1,3-dibromopropano.
O Composto 64 (9,7 gq, 82%) foi obtido como um óleo amarelo viscoso, N-[3- (9H-Carbazol-9-1il)propil] -N-etil-2- nitrobenzenossulfonamida (60). Carbazol (4,15 g, 24,8 mmol) e brometo 64 (9,7 q, 27,6 mmol) foram dissolvidos em DMF (30 ml). NaH (2,0 9, 50,0 mmol, 2 eq) foi adicionado em porções e, em consegúência, a temperatura se elevou até 60ºC.
A mistura de reação foi agitada por 1 h (monitoramento por TLC, hexano/acetato de |
' etila 3:2), derramada em mistura de gelo/água, e extraída : com acetato de etila, O resíduo foi triturado com éter.
O VU * precipitado amarelo foi retirado por filtração e seco para gerar 6,65 g (61%) do produto.
N-(3-[3,6-Bis(3-cloropropanoil)-SH-carbazol-9-1il] propil)-N-etil-2-nitrobenzenossulfonamida (61). O Composto 63 (6,65 g, 15,2 mmol) foi dissolvido em PhNO; (70 ml). A solução foi resfriada em um banho de gelo.
AICI; (12,2 gg, 91,4 mmol) e depois cloreto de 2- cloropropionila (8,8 ml, 91,4 mmol) foram adicionados.
A mistura de reação foi mantida por 40 min (monitoramento por LC/MS), diluída com água, e extraída com CH;Cl;. O extrato foi evaporado.
O resíduo foi purificado por cromatografia em uma coluna espessa curta (eluente: CH,Cl,/acetato de etila 0:100350:50). O resíduo foi triturado com éter, . retirado por filtração e seco, para gerar 7,60 g (81%) de um produto cristalino esverdeado.
N-[3- (3, 9-Dioxo-1,2,3,9,10,11-hexahidro-6H- diciclopenta[c,g]carbazol-6-il)propil] -N-etil-2- nitrobenzenossulfonamida (62), H;S0s (110 ml) foi aquecido até 40ºC.
O Composto 61 (7,6 gq, 12,3 mmol) foi adicionado em porções.
A mistura de reação foi aquecida até 100ºC, mantida nessa temperatura por 2 h (monitoramento por TLC, CH;Cl;/acetato de etila 4:1), e derramada em gelo, O precipitado cinza formado foi retirado por filtração.
A seguir, CHCl;/MeOH 4:1 (500 ml) foi derramado no filtro.
O sólido no filtro dissolvido e a solução formada foram transferidos em um funil de separação.
Uma solução aquosa de Na7zCO, foi adicionada.
A camada orgânica foi separada, seca com Na,SO0,, e evaporada. |
Acetonitrila foi adicionada ao resíduo.
Um precipitado bege - foi retirado por filtração, lavado com acetonitrila, com - éter, e seco para gerar 1,56 g (23%) de um produto cristalino bege. 6- [3- (Etilamino) propil] -10,11-diidro-lH-diciclopenta [e, g] carbazol -3,9 (2H,6H) -diona (Exemplo 9). O Composto 62 (1,56 q, 2,86 mmol) foi suspenso em uma mistura de CHCl; (80 ml) e MeOH (80 ml). Cs,CO; (2,8 q, 8,59 mmol) e imediatamente depois PhSH (0,87 ml, 8,53 mmol) foram adicionados.
A mistura de reação foi refluída por 6 h (monitoramento por TLC, CHCl;/MeOH 9:1) e evaporada até a secura.
Ácido cítrico aquoso foi adicionado.
A solução foi neutralizada com uma solução de NaHCO;. O precipitado formado foi retirado por filtração, lavado com acetato de * 15 etila, acetonitrila, água, novamente com acetonitrila, e . com éter para gerar 0,75 g (73%) do produto.
Esse último foi transformado em seu cloridrato.
Após evaporação com HCl 4 M em dioxano, o resíduo foi lavado com MeOH para gerar 0,59 g do cloridrato. *H-RNM (DMSO-ds;): 8 1,66 (3H, t, J = 7,3 Hz); 2,09-2,17 (2H, m); 2,73-2,77 (4H, m); 2,86-2,91 (2H, m); 2,95-3,10 (2H, m); 3,77-3,80 (4H, m); 4,70 (2H, t, J =7,3 Hz); 7,80 (2H, d, J = 8,6 Hz); 7,89 (2H, à, J = 8,6 Hz); 8,83 (2H, br.s). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 360 [M+H]*. Exemplos 10 e 11 o e o oro RO aa E " oo d — e es Fr Exemplo 10/11 o A síntese de composto 46 é descrita no Exemplo 6. |
6- [2- (I-metilpirrolidin-2-1il) etil] -1,6- diidrociclopenta[c]carbazol-3(2H)-ona (65). : Carbazol 46 (0,4 gq, 1,81 mmol) foi dissolvido em CHCl; (7 1), e depois NaH (0,22 9, 5,50 mmol) foi adicionado.
A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5-10 min, e cloridrato de 2- (2-cloroetil)-1- metilpirrolidina (0,4 gg, 2,17 mmol) foi adicionado.
A mistura foi aquecida até 60ºC e mantida nessa temperatura por 4 h (monitoramento por TLC, eluente: CHCl;-MeOH, 9:1). A mistura resultante foi derramada em água.
O produto foi extraído com acetato de etila, seco sobre Na;SO0's, &E evaporado.
O resíduo foi tríturado com éter.
O precipitado foi retirado por filtração, Rendimento de 65: 0,365 9g (61%) - isômero S e 0,336 g (55%) - isômero R. 9-acetil-6-[2- (1-metilpirrolidin-2-il)etil]-1,6- : diidrociclopenta[c] carbazol-3 (2H) -ona (Exemplos 10 e 11). O Composto 65 (0,336 g, 1,00 mmol) foi dissolvido em PhNO; (7 ml). A solução foi resfriada em um banho de gelo.
A seguir, AlCl; (0,67 g, 5,02 mmol) e depois ACCl (0,36 ml, 5,04 mmol) foram adicionados.
A mistura resultante foi mantida por 40 min (monitoramento por LC/MS), diluída com água, neutralizada com solução aquosa de NaHCO,, extraída com CHCl;, e evaporada.
O produto foi purificado em uma coluna espessa curta, eluente: 100:0—90:10. Rendimento de produto: 0,307 g (82%) (R); isômero S&S foi obtido similarmente (77%). Exemplo 10 Espectro de '"H-RNM (DMSO-ds): 8 1,69-1,79 (1H, mm); 1,86-2,01 (2H, m); 2,07-2,24 (2H, m); 2,42-2,56 (1H, m); 2,73 (3H, s8); 2,75 (3H, d, J = 5,12 Hz); 2,79-2,82 (2H, m); |
' Í | 93/201 ' . 2,96- 3,05 (1H, m); 3,36-3,43 (1H, m); 3,49-3,57 (1H, mm); 3,64-3,67 (2H, m); 4,62-4,75 (2H, mM); 7,80 (1H, d, J = 8/6 Hz); 7,87 (1H, d, J = 8,6 Hz); 7,96 (1H, d, J = 8,6 Hz); 8,19 (1H, dd, J = 8,6 Hz, J = 1,5 Hz); 8,70 (1H, d, J = 1/5 Hz); 10,63 (1H, br. s). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 374 (MH). Exemplo 11 "H-RNM —(DMSO-dg: 8 1,69-1,79 (1H, m); 1,86-2,01 (2H,); 2,05-2,24 (2H, m); 2,40-2,46 (1H, m); 2,73 (3H, Ss); 2,75 (3H, d, J = 5,12 Hz); 2,79-2,82 (2H, m); 2,98-3,02 (1H, m); 3,36-3,43 (1H, m); 3,47-3,57 (1H, Mm); 3,63-3,66 (2H, m); 4,62-4,75 (2H, m); 7,80 (1H, d, J = 8,6 Hz); 7,87 ' (1H, d, J = 8,6 Hz); 7,96 (1H, d, J = 8,8 Hz); 8,18 (1H, ; dd, J = 8,8 Hz, J = 1,4 Hz); 8,69 (1H, d, J = 1,4 Hz); ! 10,72 (1H, br. s). ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 374 [M+H]*. i Síntese do Exemplo 50 : l ó, 0 | À FÉ o o TR AA CA AIC TRO 7X — — —— 07 “o 9 o S 8 ss E 7 | o AIC o N N ' NO; E | so so o o o o '
N N É P cm & » N | A Exemplo 50 : | ND. ZJ"———Oq2«OSRS A
Etapa 1. 4-hidroxiindan-l-ona (86) ' Cromanona 85 (100 q, 0,68 mol) foi adicionado gota a o - gota a uma mistura de 150 g de NaCl e 500 g de AlCl; a 150ºC.
A mistura resultante foi aquecida até 180ºC, e depois agitada por 8 h.
A mistura foi então resfriada até a temperatura ambiente e 1 kg de gelo picado foi adicionado com agitação intensa, Após homogeneização, a mistura foi filtrada, lavada com 1 litro de água gelada, e seca para gerar cerca de 80 g (80%) de 4-hidroxiindan-1-ona (86) como um sólido cinza.
Etapa 2. 1-0x0-2,3-diidro-lH-inden-4-il trifluormetanossulfonato (87) Anidrido tríflico (152 9, 0,54 mol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 80 g do composto 86 e 60 g de "* 15 NEt; em 1 litro de CH;Cl; a 0ºC, A mistura resultante foi : refluída por 2 h, resfriada até temperatura ambiente, filtrada, lavada com água (0,5 1), ácido cítrico aquoso (50 g/0,5 1), salmoura (0,5 1), seca sobre Na;S0, e evaporada, para gerar cerca de 100 g (67%) do composto 87 como um líquido escuro.
Etapa 3. 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2- il) indan-l1-ona (88) Uma mistura que consiste em acetato de potássio (48 g, 0,5 mol, 1,5 eq), triflato 87 (100 g, 0,36 mol, 1,1 eq), bis(ípinacolo)diborano (100 9, 0,38 mol, 1,2 eq), PPh; (59, 0,02 mol, 0,06 eq) e PACl;(PPh3;)2 (6,9 g, 0,01 mol, 0,03 eq) em tolueno desgaseificado (2 1) foi refluída sob atmosfera de argônio de um dia para o outro.
A mistura resultante foi evaporada até a secura e cromatografada e eluída por EtOAc/hexanos 1/5. Frações contendo o produto desejado | foram coletadas e evaporadas, para gerar cerca de 50 g : (57%) do composto 88 como um sólido amarelo claro.
- Etapa 4. 4- (2-nitrofenil)-indan-l-ona (89) Tolueno desgaseificado (0,5 1), borolano 88 (10 gq, 39 mmol), 2-cloro-l-nitrobenzeno (6,3 gq, 40 mmol), Pd(PPh;). (3 q, 2,6 mmol) e NazCO; 2 M (200 ml) foram misturados sob um fluxo rápido de argônio, e a mistura resultante foi refluída de um dia para o outro. Água (200 ml) e EtOAc (500 ml) foram adicionados. A camada aquosa foi separada e extraída com EtOAcC (2 x 500 1), e os extratos combinados secos sobre Na,SO0.. O solvente foi evaporado em pressão reduzida e o produto bruto purificado por cromatografia em coluna (EtOAc 20% em hexanos) para gerar 9 gq (91%) do intermediário de bifenil 89 como um sólido amarelo.
*15 Etapa 5. 1,2-diidro-6H-ciclopenta[c] carbazol-3-ona (90) : Bifenil 89 (9 q, 35 mmol) e trietilfosfito foram adicionados a uma bomba lacrada e aquecidos a 120ºC de um dia para o outro. Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi filtrada para gerar 4 g de 1,2- diidro-6H-ciclopenta[c] carbazol-3-ona. A precipitação com éter dietílico gerou um adicional de 2 g do produto desejado, O rendimento comum de 90 como um pó amarelo foi de 77,5%.
Etapa 6. 9-acetil-l1,2-diidro-6H-ciclopenta([c] carbazol- 3-ona (91) 1,2-diidro-6H-ciclopenta[c] carbazol-3-ona 590 (6 q, 27,1 mmol) foi suspensa em CH,;Cl, seco (100 ml). AlCl; anidro (6 g, 45 mmol) foi adicionado com agitação em um banho de gelo, seguido pela adição gota a gota de AcCl (2,4 ml, 33,2 mmol). A mistura de reação foi agitada em torno de |
5ºC por 24 h, e derramada em água gelada.
O sólido cinza : Ú precipitado foi retirado por filtração, lavado com água (2 - x100 ml), acetona (3 x 50 ml), éter dietílico (3 x 50 ml) para gerar 4 gg (56,3%) de 9-acetil-1,2-diidro-6H-
ciclopenta(c]carbazol-3-ona 91, Etapa T. 9-acetil-1,2-diidro-6- (2-bromoetil)-
ciclopenta[c] carbazol-3-ona (92) NaH (2 g de 60%, 50 mmol) foi adicionado a uma suspensão do composto 91 (4 g, 15,2 mmol) em DMF seca (100 ml), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por cerca de 1 h, até que cessasse a evolução de hidrogênio. 1,2-Dibrometano (20 gq, 106 mmol) foi adicionado gota a gota sob nitrogênio.
A mistura de reação foi agitada por 30 min em temperatura ambiente, e depois a 60ºC por 24 h, e derramada em água gelada (300 ml). O sólido cinza ' precipitado foi retirado por filtração e o produto bruto purificado por cromatografia em coluna (CHCl;) para gerar 2 q de material de partida e cerca de 1 g (2,7 mmol, 35,5% do material convertido) do carbazol alquilado 92 como um sólido creme.
Etapa 8. Cloridrato de 9-acetil-1,2-diidro-6-(2-(2- propil)aminoetila) -ciclopenta[c]carbazol-3-ona (Exemplo 50) Brometo 92 (1 g, 2,7 mmol) e 2-propilamina foram adicionados a uma bomba lacrada e aquecidos a 180ºC de um dia para o outro.
Após resfriamento até a temperatura ambiente, à mistura foi evaporada até a secura, o resíduo foi desenvolvido com 100 ml de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e filtrado.
O bolo do filtro foi purificado por cromatografia em coluna (CHC1l;/MeOH 10/1). As frações contendo produto desejado foram coletadas, | evaporadas até a secura, diluídas com HCl aquoso 40% (10 : " ml), evaporadas até a secura e reevaporadas com tolueno (2 j: x 100 ml) para gerar 200 mg (0,52 mmol, 19%) de cloridrato de 9-acetil-1,2-diidro-6-(2- (2-propil)aminoetil)-ciclopenta [c] carbazol -3-ona (Exemplo 50) como um sólido cinza. ?H-RNM (DMSO-ds): 1,23 d (6H), 2,74 Ss (3H), 2,83 m (2H), 3,67 m (2H), 4,87 m (2H), 7,85 dd (2H), 7,97 d (1H), 8,22 d (1H), 8,71 s (1H), 8,9-9,2 s amplo (2H). Síntese do Exemplo 51 (o o OO — OO AMO — US Nº N N er Nº Ds Ds Bi Etapa 1. 9- (3-dimetilaminopropil)-carbazol (2Db) “5 NaH (14,4 g de 60%, 360 mmol) foi adicionado em . porções sob argônio a uma suspensão de carbazol 1 (20 g, 119,8 mmol) em DMF seca (200 ml). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por cerca de 1 h até que cessasse à evolução do hidrogênio.
Cloridrato de 3- dimetilaminopropilcloreto (28 q, 180 mmol) foi adicionado em porções em temperatura ambiente.
A mistura de reação foi agitada por 20 min em temperatura ambiente, e depois a 60ºC por 3 horas, e derramada em água gelada (500 ml). O produto foi extraído com EtOAC (2 x 500 ml). A camada orgânica foi extraída de volta com HCl 10% (200 ml) e a camada ácida foi extraída com EtOAc para remover o carbazol não reagido.
Amônia saturada (200 ml) foi adicionada, e oO produto extraído novamente com EtOAc.
A evaporação do solvente gerou 25 gq (99 mmol, 83%) de 9- (2- dimetilaminopropil)carbazol 2b como um óleo marrom. |
Etapa 2. 3,6-di (4-cloropropan-2-ona-il)-9-(2-
' dimetilaminopropil)carbazol (93) - . 9- (2-Dimetilaminopropil)carbazol 2b (25 gq, 99 mmol) foi dissolvido em CH;Cl; seco (150 ml). AlICl; anidro (40 gq,
300 mmol) foi adicionado em porções com agitação e resfriamento em um banho de gelo.
Cloreto de 3-cloro- propionila (30 ml, 312 mmol) foi adicionado gota a gota, mantendo a temperatura interna abaixo de 5ºC.
A mistura de reação foi agitada nessa temperatura de um dia para oO outro, derramada em gelo picado e extraída com CHCl;/MeOH 1/1 (3 x 500 ml). Os extratos foram evaporados até à secura, e o óleo verde resultante foi triturado com éter dietílico (2 x 250 ml) para gerar 20 g (46 mmol, 47%) de 3,6-di (3-cloropropionil)-9-(2-dimetilaminopropil)-carbazol
* 15 93 como um pó cinza. - Etapa 3. 6- (3-Dimetilaminopropil)-1,2,10,11- tetrahidro-6H-bis- (ciclopenta[c]carbazol-3,9-diona (Exemplo 51) 3,6-Di-(3-cloropropionil)-9- (2-dimetilaminopropil)
carbazol 93 (20 g, 46 mmol) foi adicionado em porções ao ácido trifluormetanossulfônico (100 g) com agitação em temperatura ambiente, e a mistura de reação foi aquecida até 95ºC de um dia para o outro.
Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura de reação foi derramada em água gelada.
O precipitado foi retirado por filtração, desenvolvido com bicarbonato de sódio saturado, e retirado por filtração novamente.
O bolo do filtro resultante continha cerca de 80% de produto desejado e 20% de isômero,. Após uma única cristalização a partir de metanol, o precipitado foi desenvolvido com HCl 4 N/dioxano (100 ml),
| evaporado até a secura e recristalizado a partir de EtOH para gerar cerca de 2,8 g (7,1 mmol, 15,4%) de Exemplo 51 + 95% como um sólido branco. LCMS: 100%; *H-RNM (DMSO-ds.) 95%: 2,18 m (2H), 2,71 Ss (6H), 2,78 m (4H), 3,15 m (2H), 3,83 m (4H), 4,68 m (2H), 7,85 dd (4H), 10,0 br é (1H). Síntese alternativa dos Exemplos 15 e 17 e Síntese do Exemplo 20 o a ro O 7 > o <1 CS o CO OS ) ? ? & DO NHEt Exemplo 15 Exemplo 17 Exemplo 20 - 2 o o ne ACI/CHZCI Q CP? asc + > N 70% N sos É 1 67 se He! HO Ol am ao 30% Jão E NaH, DMF ? e o O o o k cr o ca. o; ema, O —ã PE (4d S N ACI/CH,Ch * N gs 2 é es 7% so 2% E
NE PO P NE, NEI
HCVEIOH sex |õe Exemplo 15 A menos que observado de forma diferente, reagentes e solventes foram usados como recebido dos fornecedores comerciais. Os espectros de prótons de ressonância nuclear magnética foram obtidos em um espectrômetro de Bruker ARX
400 a 400 MHz.
O pico de solvente foi usado como o pico de , referência para espectros de prótons.
O progresso das ' - reações foi controlado por TLC e/ou análise LC-MS. 9- (2-Dietilaminoetil)-carbazol (68) NaH (14,4 g de 60%, 360 mmol, 3 eq) foi adicionado em porções sob argônio a uma suspensão de carbazol (1) (20 9, 119,8 mmol, 1 eq) em DMF seca (200 ml). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 min até que cessasse a evolução do hidrogênio.
Cloridrato de 2- dietilaminoetilcloreto 4(31 g, 180 mmol, 1,5 eq) foi adicionado em porções em temperatura ambiente.
A mistura de reação foi agitada por 20 min em temperatura ambiente, e depois a 60ºC por 3 horas (monitoramento por TLC), e derramada em água gelada (1 1). O produto foi extraído com » 15 EtOAc (5 x 200 ml); à camada orgânica foi extraída de volta com HCl 10% (400 1) e a camada ácida foi extraída com EtOAC para remover o carbazol não reagido.
O pH da camada aquosa foi ajustado até cerca de 9 com KxCO;,, & O produto extraído novamente com EtOAc.
A evaporação do solvente gerou 29,5 9g (93%) de 9-(2-dietilaminoetil)carbazol (68) como um óleo marrom.
Cloridrato de 3,6-di (4-cloropropan-2-ona-il)-9-(2- dietilaminoetil)carbazol (69) 9- (2-Dietilamincoetil)carbazol (68) (17,9 g, 67,3 mmol, 1 eq) foi dissolvido em diclorometano seco (150 ml). AlCl; anidro (45 g, 337 mmol, 5 eq) foi adicionado em porções com agitação e resfriamento em um banho de gelo.
Cloreto de 3- cloro-propionila (32,4 ml, 337 mmol, 5 eq) foi adicionado gota a gota, mantendo a temperatura interna abaixo de 5ºC.
A mistura de reação foi agitada nessa temperatura por 15 h, | derramada em HCl 3% gelado (formação violenta de espuma ] deve ser evitada) e extraída com CHCl; (5 x 500 ml), Os * extratos foram evaporados e o óleo verde resultante foi triturado com éter dietílico (5 x 50 ml) para gerar 24 g (74%) de cloridrato de 3,6-di(3-cloropropionil)-9-(2- dietilaminoetil)-carbazol (69) como um sólido cinza escuro.
TH-RNM (DMSO-ds): 1,27 (t, 6H), 2,72 (q, 4H), 3,75 (Mm, 6H), 4,02 (m, 4H), 5,00 (t, 2H), 8,00 (d, 2H), 8,17 (d, 2H), 9,16 (s. 2H), 11,42 (5, 1H).
210 6- (3-Dietilaminoetil)-1,2,10,11-tetrahidro-6H-bis- ciclopenta[c]carbazol-3,9-diona (70) Cloridrato de 3,6-di- (3-cloropropionil)-9-(2- dietilaminoetil)carbazol (69) (5 g, 10,33 mmol, 1 eq) foi adicionado em porções ao ácido trifluormetanossulfônico (50 g,333 mmol, 32 eq) com agitação em temperatura ambiente, e . a mistura de reação foi aquecida até 95ºC de um dia para o outro. Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura de reação foi derramada em água gelada. O pH da solução aquosa foi ajustado até 9 com NaOH 10%, e o produto extraído com uma mistura de EtOAC/THF = 3/1. Os solventes foram retirados por evaporação e o produto bruto purificado por cromatografia em coluna (EtOH 10% em EtOAc) para gerar 1,12 q (29%) do intermediário 70 puro como um sólido branco.
MS(ESI): m/z = 375,3 [M+H]*; *H-RNM (DMSO-ds); 0,70 (t, 6H), 2,41 (q, 4H), 2,68 (m, 6H), 3,73 (m, 4H), 4,55 (t, 2H), 7,77 (s, 4H).
Exemplo 15 O intermediário 70 (1,12 g, 2,99 mmol, 1 eq) foi dissolvido em CH,Cl; (20 ml) e solução de HCl 10% em etanol |
(3,4 g, 93,15 mmol, 30 eq) foi adicionada, causando à formação de um precipitado volumoso. Os solventes foram ' evaporados em pressão reduzida e o resíduo triturado com MeOH quente para gerar 1,17 g (98%) do Exemplo 15 como um sólido esbranquiçado. Pureza: 97,3% por HPLC; MS(ESI): m/z = 375,3 [M- HCl+H] *; m.p. = 312,1 - 314,7ºC. Os Exemplos 17 e 20 são preparados por um processo idêntico usando a cloroamina adequada, ou seja, (CH;)2,CH- NH-CH;CH;-Cl ou (C3Hs)NHCH;CH,-Cl. Síntese alternativa do Exemplo 7 (Composto 6h) tao 5 N « C HC! DO! o % o a ACCYAICh 1s CS CH2CL, CC Cs;COJDBUNNMP O N 54% separados N 190ºC, 54,5% separados N 1 etapa 1 4 etapa 2 é 7
NH o g Dm: raso,
EX N etapa 3 C Hoi 27% de rendimento à partir de 1 (não otimizado) pe Exemplo 7 Composto 6h BocyO nos 1. MSCYVTEAITHF x NH p— N MSCUTEAITH Y o feoA TOS Y MH 7 Tm as. NA 78% re siapa da, n etapô à» zm
Experimental oe A menos que observado de forma diferente, reagentes e 7 solventes foram usados como recebido dos fornecedores comerciais, Os espectros de prótons de ressonância nuclear magnética foram obtidos em um espectrômetro de Bruker ARX 400 a 400 MHz. O pico de solvente foi usado como um pico de referência para os espectros de prótons. TLCsS foram executadas em sílica, a menos que observado de forma diferente.
3,6-Diacetilcarbazol (4) Carbazol (20 g, 0,12 mol, 1 eq) foi suspenso em CH,Cl, anidro (300 ml) sob argônio, e a mistura resultante resfriada até 0ºC. AlCl; (95,5 g, 0,72 mol, 6 eq) foi adicionado à mistura, seguido pela adição gota a gota de "15 cloreto de acetila (25,5 ml, 0,36 mol, 3 eq), mantendo à . temperatura interna em cerca de 0ºC. Após 3 horas agitação a 0ºC, outra porção de cloreto de acetila (5 ml, 0,07 mol, 0,6 eq) foi adicionada e à agitação continuou por mais 2 horas. A mistura de reação foi derramada em gelo durante agitação. O sólido foi coletado por filtração, lavado com CH;Cl; e depois água, e seco em um forno à vácuo a 50ºC. Rendimento: 16,3 g (54%) de carbazol 4. O filtrado e as lavagens foram combinados e extraídos com CH;Cl; (3 x 300 ml). Os extratos de CH;Cl,; foram lavados com NaHCO; saturado (1 x 300 ml) e salmoura (1 x 300 ml). Após secagem sobre NasSO,, O filtrado foi evaporado até a secura para gerar O produto bruto, que foi usado sem purificação adicional.
MS(ESI): m/z = 252,0 [M+H]*.
2-N-Boc-2-N-isopropilaminoetanol (14) |
(Boc)20 (50,8 g, 0,23 mol, 2 eq) foi adicionado a uma » solução de 2-N-isopropilaminoetanol (72) (22,3 ml, 70%, : 0,136 mol) em MeOH (200 ml). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 horas, e depois diluída com água (1,21), 6e 0o produto extraído com EtOAc (4 x 400 ml). Os extratos combinados de EtOAc foram lavados com salmoura (1 x 400 ml) e secos sobre Nas;S0,.. O solvente foi retirado por evaporação e o produto bruto purificado por coluna (eluente: Hexanos;EtOAc de 4:1 a 1:1) para gerar 19,5 g (70,5% de rendimento) de 73 puro como um óleo viscoso. 3-Isopropil-2-oxazolidinona (74) MSsCl (8,5 ml, 0,109 mol) foi adicionado gota à gota a uma solução do álcool (73) (18,5 g, 0,091 mol) e TEA (19 "15 ml, 0,137 mol) em THF anidro (200 ml) resfriada até -20ºC . com agitação vigorosa.
Deixou-se que a reação se aquecesse lentamente até a temperatura ambiente (3 horas). Os sólidos foram removidos por filtração e lavados com THF (20 ml). NasCO; saturado (100 ml) foi adicionado ao filtrado, e a mistura resultante agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro, e depois diluída com água (200 ml) e extraída com EtOAC (3 x 200 ml). Os extratos combinados de EtOAC foram lavados com HCl 1% (1 x 200 ml), salmoura (1 x 200 ml) e secos sobre Na;S0,. O solvente foi retirado por evaporação para gerar 8,8 g (75% de rendimento) de carbamato cíclico (74), que foi usado sem purificação adicional.
MS(ESI): m/z = 130,1 [(M+H]*. 3,6-Diacetil-9-(2-N-isopropilaminoetil)-carbazol (71) Uma mistura de 3,6-diacetilcarbazol (4) (15,12 g, 0,06 | mol), 3-isopropil-2-oxazolidinona (74) (7,80 g, 0,06 mol), — es;0os (39,2 g, 0,12 mol) e DEU (9 ml, 0,06 mol) em NMP 7 (150 ml) foi agitada a 190ºC por 24 horas, e depois derramada em HO (500 ml) e extraída com EtOAC (3 x 300 ml). Os extratos combinados de EtOAc foram lavados com salmoura (2 x 200 ml) e secos sobre Na,;SO0,. O solvente foi evaporado e o produto bruto purificado por cromatografia em coluna (eluente -(5 a 20%) MeOH (contendo 0,1% de NH3;H;0) /ELOAC) . As primeiras frações continham o material de partida não reagido (aproximadamente 1,7 g). As frações puras foram combinadas e o solvente evaporado até a secura para gerar 9,36 g (continham EtOAC 20% por RNM) de (71) puro.
As frações menos puras foram combinadas, evaporadas até a secura e o resíduo triturado com EtOAc para gerar mais 3,47 g do produto puro.
Rendimento total: 54,5% (após . subtração da quantidade de EtOAc); (61,6% de rendimento com base no material de partida reagido). MS(ESI): m/z = 337,1 [M+H]*. Composto 6h O intermediário (71) (3,47 gg, 0,0103 mol) foi dissolvido em CHCl; (30 ml) e a solução resultante resfriada até cerca de 5ºC.
Uma solução de HCl 10% / EtOH (5,6 gg, 0,0153 mol) foi adicionada gota a gota com agitação.
Após 40 minutos, o solvente foi removido sob vácuo, o resíduo foi seco sob alto vácuo a 40ºC para gerar 3,5 g (93% de rendimento) de 6h.
Similarmente, O outro lote de 71 (9,36 g, EtOACc 20%) foi convertido em 6h.
Análise de dados: Pureza: 99,5% por HPLC; MS(ESI): m/z = 337,3 [M-HC]l+H]*; m.p. = 292,7-294,1ºC.
Síntese alternativa do Exemplo 4 | to - TX
N fs HCl >N t oH t or Tt AlCINSCI T4OPy ou THOM, OR o 150:180% CHEh Cnh som o om o n Etapa 1 6 Etapa? w Nº Etapa à Fo om FÉ oo o o do EE) do LEE O nt que ana RI Meo Neo PAlPhPRCIVPROP Tolueno,Ns;CO, 1,2DCB N O Tolueno,KXOAC O | ma pazeir de 77 ho, 79% H mv Etapa 4 Ly Etapa 5 " Etapa 6 n o o o o x . 5 ACCUAICK ANAA NMPIPYHCI HO, DOM Me NaHIDMF — MO 37% E E sm N .» W Etapa 7 tapa 9 . tapa . Etapa 8 mo “ O no | Exemplo 4 Etapa 1. 4-Hidróxi-l-indanona (76) foi sintetizada por reciclização de diidrocumarina induzida por cloreto de alumínio (75), de acordo com Org. Lett., 2007, 9 (15), páginas 2,915-2.918, A reação foi realizada em 100 g de (75) para gerar (76) com 85% de rendimento.
Etapa 2. A indanona (76) foi convertida em triflato (77) com 90% de rendimento por reação com anidrido tríflico em CH;Cl; na presença de Py, seguido por cromatografia instantânea, Etapa 3. Triflato (79) foi sintetizado da mesma forma com rendimento quantitativo, partindo de 50 g de 4-metóxi- 2-nitrofenol (78).
Etapas 4 e 5, Seguindo o protocolo para uma síntese one-pot de compostos de bifenil de Synthetic : ] Communications, 2006, 36 páginas 3.809-3.820, O . intermediário (81) foi obtido em 80% de rendimento partindo de 60 g de triflato (77).
Etapa 6. A ciclização do intermediário de bifenil (81) por aquecimento com excesso de trifenilfosfino em 1,2- diclorobenzeno foi realizada primeiro em pequena escala para gerar o carbazol esperado (82) com aproximadamente 50% de rendimento (não otimizado) após precipitação da mistura de reação com éter. A mesma reação foi escalonada até 42 q de (81), rendendo 27 q (73% de rendimento) de (82) puro.
Etapa 7. A acetilação do intermediário (82) (escala de 27,8 g) foi realizada em CH;Cl, de acordo com o protocolo- padrão para gerar 26 g (80% de rendimento) do intermediário “15 (83).
. Etapa 8. Após uma extração profunda com uma mistura de 1:1 de EtOAc/THF, foi obtido cerca de 68% rendimento do produto (84) bruto, contendo uma impureza basal por TLC. Ele foi usado para a etapa de desmetilação, sem purificação adicional.
Etapa 9. A remoção do grupo metil de (84) foi obtida por aquecimento do s]Substrato em uma mistura de 1:1 de Py*HCl/NMP a 190ºC por 10 h. Após purificação por cromatografia em coluna, 7,8 g (37% de rendimento) de Exemplo 4 (base livre) foram obtidos. Ele foi tratado com solução de HCl 10% em EtOH para gerar 8,4 g do Exemplo 4 puro.
EXPERIMENTAL A menos que observado de forma diferente, reagentes e solventes foram usados como recebido dos fornecedores | comerciais. Os espectros de prótons de ressonância nuclear . magnética foram obtidos em um espectrômetro de Bruker ARX i ' 400 a 400 MHz. O pico de solvente foi usado como o pico de referência para espectros de prótons. O progresso das reações foi controlado por TLC e/ou LCMS análise.
4-Hidróxi-l-indanona (76) Cloreto de alumínio anidro (550 g, 4,135 mol, 4 eq) e cloreto de sódio (105 g, 1,795 mol, 2,7 eq) foram misturados e aquecidos até 150ºC. Diidrocumarina (75) (100 g, 675,7 mol, 1 eq) foi adicionada lentamente, mantendo a temperatura interna entre 150-160ºC. Após a adição, a temperatura foi aumentada até 200ºC e a mistura de reação agitada por 1,5 h e, enquanto quente, derramada em uma placa de porcelana para resfriar. A massa solidificada foi quebrada e adicionada a uma mistura agitada vigorosamente . de gelo e água (4 1) contendo 400 ml de HCl concentrado. A suspensão resultante foi agitada por 1 h, filtrada, lavada com água e seca para gerar 85 g (85%) de 4-hidróxi-1- indanona (76) bruta como um sólido cinza. Ela era suficientemente pura para ser usada na etapa seguinte, 1-Oxoindan-4-il éster de ácido trifluormetanossulfônico (77) Anidrido de ácido trifluormetanossulfônico (72,3 ml, 429,7 mmol, 1,2 eq) foi adicionado à uma suspensão de 4- hidróxi-l-indanona (77) (53 g, 358,1 mmol, 1 eq) em CH,Cl; seco (450 1) e piridina (87 ml, 1,074 mmol, 3 eq), mantendo a temperatura interna abaixo de 5ºC, Deixou-se que a mistura de reação se aquecesse até a temperatura ambiente e a agitação continuou por 1 h. CH,Cl; (300 ml) e água (100 ml) foram adicionados à mistura de reação, a camada | orgânica foi separada, lavada subseqúentemente com solução . ' HCl 2% (3 x 100 1), e NaHCO; saturado (2 x 100 ml), e seca ' sobre Na7SO0,. CH3;Cl,;, foi retirado por evaporação e o produto bruto purificado por cromatografia instantânea (EtOAc 5% a 10% em Hexanos) para gerar 90 g (90%) de 77 puro como um líquido marrom.
H-RNM (DMSO-ds): 2,76 (t, 2H), 3,19 (t, 2H), 7,65 (dd, 1H), 7,94 (2d, 2H).
4-Metóxi-2-nitrofenil éster de ácido trifluormetanossulfônico (78) Anidrido de ácido trifluormetanossulfônico (60 ml, 350 mmol, 1,2 eq) foi adicionado a uma solução de 4-metóxi-2- nitrofenol (78) (50,57 g, 298,9 mmol, 1 eq) em CH;Cl; seco (550 ml) e piridina (72,5 ml, 897 mmol, 3 eq), mantendo a * 15 temperatura interna abaixo de 5ºC. Deixou-se que a mistura . de reação se aquecesse até a temperatura ambiente e ela foi agitada de um dia para o outro, Água (100 ml) foi adicionada à mistura de reação, à camada orgânica foi separada, lavada subsequentemente com soluções de solução de HCl 7%, e depois NaHCO; saturado, e seca sobre Nas;SO0,. A solução de CH,Cl; foi filtrada através de um bloco de SiO; e o solvente removido in vacuum para gerar 89 g (99%) do triflato 79 puro como um líquido amarelo pálido, H-RNM (DMSO-ds): 3,92 (s, 3H), 7,49 (dd, 1H), 7,71 (dd, 21H), 7,81 (d, 1H).
4- (4-Metóxi-2-nitrofenil)-indan-l-ona (81) Uma mistura que consiste em acetato de potássio (29,44 g, 0,3 mol, 1,5 eq), triflato (77) (61,44 g, 0,22 mol, 1,1 eq), bis(pinacolo)diborano (60,94 g, 0,24 mol, 1,2 eq), PPh; (3,15 g, 0,012 mol, 0,06 eq) e PdCl,(PPh;), (4,21 g, |
0,006 mol, 0,03 eq) em tolueno desgaseificado (2 1) foi refluída sob atmosfera de argônio de um dia para o outro. O LO triflato (79) (60,24 q, 0,2 mol, 1 eq), PA(PPh;). (11,55 g, 0,01 mol, 0,05 eq) e Na,CO0O; 2 M (800 ml) foram adicionados consecutivamente ao mesmo frasco sob um fluxo rápido de argônio, e a solução resultante foi refluída de um dia para o outro, Água (200 ml) e EtOAc (500 ml) foram adicionados, a camada aquosa foi separada e extraída com EtOAC (2 x 500 ml) e os extratos combinados secos sobre Na,;SO0,. O solvente foi evaporado em pressão reduzida e o produto bruto purificado por cromatografia em coluna (EtOAcC 20% em hexanos) para gerar 44 g (80%) do intermediário de bifenil (81) como um sólido amarelo.
B-Metóxi-1,2-diidro-6H-ciclopenta[c]carbazol-3-ona Uma solução de 4-(4-metóxi-2-nitrofenil)-indan-l1-ona . (81) (42 q, 148,4 mmol, 1 eq) e trifenilfosfino (116 g, 445 mmol, 3 eq) em o-diclorobenzeno (400 ml) foi refluída com agitação vigorosa por 4 h, e depois resfriada até 0ºC. Éter dietílico (4 1) foi adicionado e o precipitado retirado por filtração, lavado com éter dietílico (3 x 100 ml) e seco para gerar 17 g (46%) de (82). O filtrado foi retirado por evaporação e o resíduo lavado com Me0OH gelado (5 x 100 ml) para gerar um adicional de 10 g (27%) do carbazol (82). Rendimento total 27 q (73%).
H-RNM (DMSO-ds): 2,74 (m, 2H), 3,50 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 6,90 (d, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,97 (d, 1H), 11,79 (s, 1H).
9-Acetil-S-metóxi-1,2-diidro-6H-ciclopenta[c] carbazol- 3-ona (83) 8-Metóxi-1,2-diidro-6H-ciclopenta[c] carbazol -3-ona |
(82) (27,8 g, 110,8 mmol, 1 eq) foi dissolvida em diclorometano seco (300 ml). AlCl; anidro (29,5 9, 221,5 | - mmol, 2 eq) foi adicionado em porções com agitação e resfriamento, seguido pela adição gota a gota de AcCl (24 ml, 332,4 mmol, 3 eq). A mistura de reação foi agitada em torno de 5ºC por 24 h e derramada em água gelada (formação violenta de espuma deve ser evitada). O sólido laranja precipitado foi retirado por filtração, lavado com água (10 x 100 ml), CHCl; (3 x 50 ml), acetona (3 x 50 ml) para gerar 26 g (80%) de 9-acetil-B-metóxi-l,2-diídro-6H- ciclopenta [c] carbazol-3-ona (83). 9-Acetil-S-metóxi-1,2-diidro-6- (3-dimetilaminopropil)- ciclopenta[c] carbazol-3-ona (84) NaH (6,88 g de 60%, 171,95 mmol, 2,5 eg) foi " 15 adicionado a uma suspensão de 9-acetil-8-metóxi-1l,2-diidro- . 6H-ciclopenta [c]carbazol-3-ona (83) (26 g, 68,78 mmol, 1 eq) em CH;Cl; seco (300 ml), e à mistura foi agitada em temperatura ambiente por 20-30 min, até que cessasse a evolução de hidrogênio.
Cloridrato de 3- dimetilaminopropilcloreto (16,3 gq, 103,16 mmol, 1,5 eq) foi adicionado em porções sob nitrogênio.
A mistura de reação foi agitada por 30 min em temperatura ambiente, e depois a 60ºC por 24 h e derramada em água gelada (4 1). A solução aquosa foi acidificada até um pH de cerca de 2 com HCl concentrado, e o material de partida não reagido extraído com uma mistura de EtOAc/THF = 3/1. Com o ajuste do pH da camada aquosa até cerca de 9, o produto foi extraído com uma mistura 1:1 de EtOAC:THF (10 x 500 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na,S0, e o solvente retirado por evaporação para gerar 22 g (68%) de | carbazol bruto (84), razoavelmente puro por LC/MS.
Ele foi : ] usado na etapa seguinte, sem purificação adicional. ” *H-RNM (DMSO-ds): 1,88 (t, 2H), 2,13 (s, 6H), 2,16 (t, 2H), 2,62 (s, 3H), 2,75 (m, 2H), 3,47 (m, 2H), 4,01 (s, 3H), 4,52 (t, 2H), 7,32 (s, 2H), 7,65 (dd, 4H), 8,32 (Ss, 2H). 9-Acetil-S-hidróxi-l1,2-diidro-6- (3-dimetilaminopropil) -ciclopenta[c] carbazol-3-ona Uma solução de 9-acetil-8-metóxi-1,2-diidro-6-(3- dimetilaminopropil)-ciclopenta[c]carbazol-3-ona (84) (22 9, 58,2 mmol, 1 eq) e cloridrato de piridina (134,4 g, 164 mmol, 20 eq) em NMP ()50 ml) foi refluída por 10 h.
A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e derramada na solução aquosa de K,CO; 10% (3 1), O sólido "15 verde escuro precipitado foi retirado por filtração, lavado . com água (5 x 100 ml) e seco.
O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (eluente MeOH 10% - 20% em EtOAc) para gerar 7,81 (37%) de 9-acetil-8-hidróxi- 1,2-diidro-6- (3-dimetilaminopropil)-ciclopenta[c]carbazol- 3-ona pura como um sólido amarelo pálido.
MS(ESI): m/z = 363,3 [M+H]*. H-RNM (DMSO): 1,86 (t, 2H), 2,17 (s, 6H), 2,20 (t, 2H), 2,79 (m, 2H), 2,81 (s, 3H), 3,52 (m, 2H), 4,43 (t, 2H), 7,15 (58, 2H), 7,66 (dd, 4H), 8,50 (58, 2H), 12,71 (s, 1H). Exemplo 4 9-Acetil-BsS-hidróxi-l1,2-diidro-6-(3-dimetilaminopropil) -ciclopenta[c]carbazol-3-ona (7,81 g, 21,46 mmol, 1 eq) foi dissolvida em uma mistura de áqua (20 ml) e uma solução de HCl 10% (20 ml) em etanol (200 ml), e a solução homogênea | evaporou até à secura, O resíduo foi seco in vacuum de um i dia para o outro para gerar 8,47 g do Exemplo 4 como um - sólido cinza. Pureza: 99,2% por HPLC; MS(ESI): m/z = 363,3 [M- HCl+H]'; m.p. = 241,3ºC (Decomposição); '*H-RNM (DMSO-ds): 2,15 t (2H), 2,68 s (3H), 2,69 s (3H), 2,80 m (2H), 2,82 8 (3H), 3,11 m (2H), 3,55 m (2H), 4,53 t (2H), 7,29 8 (2H), 7,73 dd (4H), 8,52 s (2H), 11,00 s (1H), 12,76 s (1H). Os compostos de fórmula estrutural (11) são preparados similarmente àos compostos de fórmula estrutural (1), e incluem, por exemplo, ON, O O -NO; O2N. 2 O -NO;
N N "as < ' CHa, Nx N Exemplo 21 Exemplo 22 ON, O Ú , NO; Oz2N, O ? -NO, Q 2
N N . ”m O Exemplo 23 Exemplo 24
' N <
NH Exemplo 25 Compostos de carbazol adicionais da presente invenção são:
IT o He, o NÔ ON É É > OS “ CO "15 N Ú ( fo o Exemplo 17b Exemplo 26 o ? 2 ê É
N N " / ( o m Exemplo 27 Exemplo 28
N
OH Exemplo 37 Um composto útil nos métodos da presente invenção possui uma estrutura:
N “5 ( Fo Composto 100 Exemplos adicionais que possuem uma fórmula estrutural incluem, sem limitação: o o o o X 1 ! O. ex
AMO TES N N ( (
NH (o PC CH; CH, Exemplo 29 Exemplo 30 o o : % 7 X í
AOS ONON i N HO N OH ; ( (
NH NH / A Exemplo 31 Exemplo 32 o o o o W yu XY U
OO MOO ) ( N e "A Fo - CH Exemplo 33 Exemplo 34 o o EN x " Cc Cc e » OO ? <>" TD Exemplo 35 Exemplo 36 |
Oo o : " U A AD ” SE o
N ) ( (O O Oo Exemplo 38 Exemplo 39 o o o o Q N Ú 1
N N Tr Exemplo 40 Exemplo 41 o o Ú Ú rj h
N N i ( ANS or OoH Exemplo 43 Exemplo 42 o o o o ! h & Ii OO OO" . N N ( ( N *. O. OH Exemplo 44 Exemplo 45 o | o o HJÃC' CIO (3 CH; HC Sw) (O “CH;
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ES Y Exemplo 46 Exemplo 47 o o o o
N N HC. det; Exemplo 48 Exemplo 49 Os Compostos da presente invenção, portanto, incluem, sem limitação:
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NH - " ”" Exemplo 25 , Composto 17b , o 26 o o o ' S é É 7 q F
Y N é é " ” Exemplo 27 : Exemplo 28 ' o q o % ? AO / Cx À o 9 ( P pn NH NH / & P E . CH; q o 2? , Exemplo 30 Exemplo 31 . o i 156 o % q % 9 " Y Fo x & 7 & é LIA y ' no N 'oH 4 / f eno 2 À " T ”" CA CH, o” . Exemplo 33 ; Exemplo 34
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NR À A Exemplo 50 Exemplo 49 . 3 o o cHs A ) o 2º UU
N N Exemplo 51 É f CH, N Exemplo 52 — E 3 À , ê ] o o He Ho
N nº Exemplo 53 A potência de um composto de carbazol é determinada por medida de uma habilidade do composto para ativar p53. Em particular, uma linhagem de célula repórter de luciíferase que responde a p53 é usada para identificar compostos capazes de ativar p53. A ativação de p53 é relatada como o valor de ECsº, que é a concentração eficaz do composto necessária para aumentar a atividade de p53 por 50% em relação a uma atividade de p53 basal. O ensaio de ativação de p53 para determinação do valor
- de ECx9o foi realizado da seguinte forma; - Definições e terminologia Ú - ConAáluc: construção repórter de luciferase que responde a p53 - DMSO: Dimetil sulfóxido - FBS: soro bovino fetal Equipamento - Luminômetro-fluoroscan de 96 poços (por exemplo, Fluoroscan, LabSystems, Inc, ajustes do programa: o tempo de integração é de 0,1 s; a voltagem PMT é de 1.000, e tempo de lacuna zero) - Pipeta multicanal de amplitude de 50-300 pl - Placas de 96 poços . Materiais Linhagens de célula repórter: : - HT1I0B0-L (células de fibrossarcoma humano com repórter ConALuc) - RCC45ConALuc (linhagem de células de carcinoma de renal humano com repórter ConALuc) - Meio DMEM-padrão - Meio RPMI-padrão - Pen/strep 100x - Tripsina-EDTA diluído 10x a 1X em PBS estéril - PBS - Sistema de ensaio de luciferase Bright-Glo (Fisher PR-E2620) - 9-Aminoacridina (9aa) 20 mM em DMSO (Sigma A38401), ativador de p53 (controle positivo) - Composto 100 20 mM em DMSO (Chembridge), ativador de p53 (controle positivo) |
. - DMSO (Fisher D128-500) (controle negativo) Método Ú 1. Dois tipos de células padronizadas foram usados, células HT108B0-L ou RCC45ConALuc. Ambas as linhagens de 5 células expressam estavelmente uma construção repórter de luciferase que responde a p53.
2. As células HT1080-L foram desenvolvidas em meio DMEM contendo FBS 10%. As células RCC45ConALuc foram desenvolvidas em meio RPMI contendo FBS 10% (Pen/Strep pode ser adicionado até uma concentração final de 1%, se desejado). Ambas as linhagens de células foram desenvolvidas em uma incubadora umidificada a 37ºC com CO, 5%. Para cultivo normal, ambas as linhagens de células . foram divididas usando lx tripsina-EDTA em uma proporção de 1:20 para células HT1I0B0O-L e de 1:5 para células , RCC45ConALuc a cada 3-4 dias (quando as células estão 80- 90% confluentes).
3. No dia anterior ao experimento, as células são tripsinizadas por cerca de 5 minutos em 1x solução de tripsina/EDTA em uma incubadora a 37ºC e plaqueadas em placas de 96 poços. As células HT1080-L são semeadas em uma densidade de 1 X 10º/poço em meio DMEM-padrão em um volume de 50 ul. RCC45ConALuc são semeadas em uma densidade de 2X 10º /poço no volume de 50 pl em meio RPMI-padrão.
4, No dia seguinte, vários compostos de carbazol foram preparados por diluição de soluções de estoque em meio DMEM-padrão de tal modo que as células fossem tratadas com as concentrações químicas finais na Tabela 1 abaixo. As soluções de estoque foram feitas em DMSO, Tipicamente, às substâncias químicas foram feitas como soluções de estoque |
. de 20 mM. No entanto, essa concentração é dependente da * solubilidade de certo composto e, portanto, as verdadeiras Ú concentrações do estoque foram observadas no momento do experimento (por exemplo, compostos menos solúveis podem ter uma concentração de estoque de 5 ou 10 mM).
5. Cada composto testado usou duas fileiras de uma placa de 96 poços e, portanto, quatro compostos (por exemplo, W, X, 7Y, Z) foram testados em uma placa simultaneamente. Além dos compostos de teste, cada placa incluía controles positivos e negativos, Como controle positivo, 9aa foi usado em uma dose de 3 ÀuM. Como controle negativo, DMSO foi usado na concentração final de 0,1%. |
- E ' À o elo o à o Ss) ss a n 2) 4) 4) 9) 4) 9) 4) À : ã * - nl ns nn) 1º nn) o â : = os al al al a sl o Mm "o . | nn | | alan a| "” sl al al as al as 8s| Ss o ss] e] E - ns) al ala ala 4! ss x
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E n o ml m| ml ml m| a m|m D Pp n| 4 4) |) 9) o) ns) o É ml ml m|m|m| | m|m|m . º a elo ol ol olol ol o ” 8 * w| vw vw tj 6) o) vv v o nn) | (| Nf un| a | . É - nH/ 4/ 4d) ql nm s4| 4 8 A sleleslelelel oleo
A H o Ss o col co ma mi m| ml om) E v elelelslo| 5 Ss Ss 5 o o| 6| o|/ ol o o|o|o RÃ h o o o o so o o o 3 o ao aja al ala ê ix) m o oe o Êo oe g ã oo ol o| o| o o elo ol ol ol ol o “o 9 CRNCIRE INE RE RN NCIA o “o 6 ” fo) “ o 6 o o aj ala; nal | aj o o o Ê ga | 88 8 o 8/8 /0)S HH op vo = 3) Som E E a E E aj v O mi ml ml ml m ml om dl sa E o A HH > n) go À Õ A) Al! AL ALA ALÇA A a E e | | | Nm o a aj al ol a o É E E| E| E| E E q o) Oo o| O o o o H o DI O un
BR 1. Diluições de substâncias químicas adicionadas à . placa foram feitas como concentrações de 2X em DMEM-padrão i e adicionadas ao poço correspondente em um volume de 50 ul.
2. As substâncias químicas foram díluídas em DMEM- padrão por diluições seriais de duas vezes partindo de 40 uM (2X da maior concentração, por exemplo, 20 puM). Para uma linhagem de células, o volume mínimo foi de 125 pl de solução de trabalho 2X de substância química de cada concentração em DMEM-padrão.
3. Além de um controle positivo adicionado em uma concentração em cada placa, um controle positivo de Composto 100, ou o composto mais ativo em cada estágio de seleção, foi adicionado em cada ensaio efetuado em uma faixa completa de concentrações para assegurar um desempenho adequado e robusto do ensaio (estimado por " comparação de curvas de dose-resposta de ativação de p53 entre as rodadas).
4, Dezesseis horas após adição de composto, todos os poços com as maiores concentrações de compostos são verificados microscopicamente quanto à presença de efeito tóxico, pois a morte de células causada por compostos pode não permitir a detecção de atividade de luciferase. Caso fosse evidenciada citotoxicidade, outras doses dos mesmos compostos eram verificadas quanto à presença de toxicidade.
A menor dose que causa efeito tóxico era registrada. Caso fosse observada citotoxicidade em 3-4 das menores doses de composto (em um esquema de dose atual de 0,3 pM ou menos), o composto era novamente testado separadamente em uma faixa de concentração menor, permitindo que pelo menos 4 doses de duas vezes diferentes de composto fossem testadas sem |
- sinais de citotoxicidade.
. 5. Após exame microscópico, 15 pl de sistema de ensaio de luciferase Bright Glo foram adicionados a cada poço e, após incubação de 5 min em temperatura ambiente, as placas foram lidas em um luminômetro de placas de 96 poços com um tempo de medição de 0,1 s. Uma etapa de agitação foi incluída antes da medição.
6. Os aumentos da ativação de luciferase para cada concentração de cada substância química foram calculados por divisão da atividade de luciferase detectada em cada concentração da substância química pela média da atividade de luciferase para o controle de DMSO na mesma placa. Os aumentos foram então tabulados versus a concentração da substância química para determinar se os compostos são ativos. A partir dos dados, foram determinados tanto o Í aumento máximo de ativação quanto a Emax (concentração que causa ativação de p53 máxima).
7. Para cada composto, esse ensaio é repetido duas vezes mais. Após o término de três rodadas, os dados brutos foram usados para calcular o valor da ECs'.
Um ensaio era considerado inválido quando: - uma diferença entre duas duplicatas aumenta 10% para mais de 10% das leituras; é observada morte de células tratadas com DMSO; - indução de luciferase de menos de 3 vezes em células tratadas com controle positivo (Composto 3a, 0,4 pM) versus atividade de luciferase de células tratadas com DMSO; - incapacidade de obter uma curva dose-dependente de indução de luciferase com controle positivo (por exemplo, Composto 100, 0,03-20 UM).
| z A seguir, serão apresentados exemplos não limitantes - de valores de EC;, para vários compostos de carbazol úteis no método da presente invenção: [composto a fa [composto 78 fas o emos o fa | [eonosto 2982 foao O [empre 14 foos | [een 27 fe | [exempro 26 fo |
|
. Os compostos e as composições farmacêuticas da ' presente invenção incluem aqueles nos quais oO ingrediente Í ativo é administrado em uma quantidade terapeuticamente eficaz para obter seu objetivo desejado.
Uma “quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se àquela quantidade de um composto de carbazol presente que resulta na obtenção do efeito desejado.
A toxicidade e a eficácia terapêutica dos compostos de carbazol, podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padronizados em culturas de células ou animais experimentais, por exemplo, para determinação da LDs, (a dose letal para 50% da população) e da EDso (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A proporção de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico, que É expresso como a ] 15 proporção entre LDs, e EDs.
Compostos que exibem índices . terapêuticos elevados são preferidos.
Os dados obtidos a partir desses dados podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagen para uso em humanos.
A dosagem preferivelmente se situa dentro de uma faixa de concentrações circulantes de composto que incluem a EDso, com pouca ou nenhuma toxicidade.
A dosagem pode variar dentro dessa faixa, dependendo da forma de dosagem empregada e da via de administração utilizada.
A determinação de uma quantidade terapeuticamente eficaz está incluída na capacidade daqueles habilitados na técnica, especialmente à luz da revelação detalhada aqui fornecida.
Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de carbazol de fórmula estrutural (TI) ou (IL) necessária para uso em terapia varia com a natureza da condição sendo tratada, do período de tempo em que a atividade é desejada,
|
' e da idade e da condição do paciente e, por fim, é determinada pelo médico assistente. As quantidades e os : intervalos de dosagem podem ser ajustados individualmente para fornecer níveis plasmáticos do composto de carbazol que são suficientes para manter os efeitos terapêuticos desejados. A dose desejada convenientemente pode ser administrada em uma dose única, ou como múltiplas doses administradas em intervalos apropriados, por exemplo, como uma, duas, três, quatro ou mais subdoses por dia. Frequentemente, são desejadas, ou necessárias, múltiplas doses. Por exemplo, um composto de carbazol presente pode ser administrado em uma fregúência de: quatro doses liberadas como uma dose por dia em intervalos de quatro dias (g4d x 4); quatro doses liberadas como uma dose por i 15 dia em intervalos de três dias (g3d x 4); uma dose liberada 7 por dia em intervalos de cinco dias (gd x 5); uma dose por semana por três semanas (qwk3); cinco doses diárias, com repouso de dois dias, e outras cinco doses diárias (5/2/5); ou qualquer regime de dose determinado como sendo adequado à circunstância.
A dosagem de uma composição que contém um composto de carbazol de fórmula estrutural (1) ou (11), ou uma composição que contém a mesma, pode ser de cerca de 1 ng/kg até cerca de 200 mg/kg, cerca de 1 pg/kg até cerca de 100 mg/kg, ou cerca de 1 mg/kg até cerca de 50 mg/kg. A dosagem de uma composição pode estar em qualquer dosagem, incluindo, sem limitação, cerca de 1 upg/kg. A dosagem de uma composição pode estar em qualquer dosagem, incluindo, sem limitação, cerca de 1 upg/kg, 10 pg/kg, 25 vpg/kg, 50 upg/ka, 75 vpa/kg, 100 pg/kg, 125 pa/kg, 150 pa/kg, 175 |
. vpg/kg, 200 pag/kg, 225 pg/kg, 250 pg/ka, 275 vpg/kg, 300 ug/kg, 325 pa/kg, 350 ng/kg, 375 pg/kg, 400 pg/kg, 425 : ug/kg, 450 pg/kg, 475 pg/kg, 500 pg/kg, 525 upg/kg, 550 va/kg, 575 pg/kg, 600 pq/kg, 625 ug/kg, 650 pg/kg, 675 ug/kg, 700 pog/kg, 725 ng/kg, 750 pog/kg, 775 pg/kg, 800 vg/ka, 825 u1pg/kg, 850 pog/kg, 875 unqg/kg, 900 ug/kg, 925 ug/kg, 950 upg/kg, 975 pg/kg, 1 ma/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 ma/ka, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 60 mg/kg, 70 mg/kg, 80 mg/kg, 90 mg/kg, 100 mg/kg, 125 mg/kg, 150 mg/kg, 175 mg/kg ou 200 mg/kg. As dosagens acima são exemplares do caso médio, mas pode haver casos individuais nos quais dosagens maiores ou menores são possíveis, e isso está incluído dentro do escopo desta invenção.
Quando administrado em combinação com outras ' substâncias terapêuticas, um composto de carbazol presente pode ser administrado em dosagens relativamente menores. Além disso, o uso de agentes de direcionamento pode permitir que à dosagem necessária seja relativamente baixa. Certos compostos podem ser administrados em dosagens relativamente elevadas em função de fatores que incluem, sem limitação, toxicidade baixa e depuração elevada. Para uso humano, um composto de fórmula estrutural (1) ou (II) pode ser administrado isoladamente, mas geralmente é administrado misturado com um veículo farmacêutico selecionado com relação à via de administração desejada padronizada na prática farmacêutica, As composições farmacêuticas para uso de acordo com a presente invenção podem ser formuladas de uma forma convencional usando um ou mais veículos fisiologicamente aceitáveis que compreendem | excipientes e auxiliares que facilitam o processamento de compostos de fórmula (1) ou (11) em preparações . farmacêuticas, Os presentes compostos de carbazol podem ser administrados simultaneamente Ou extemporaneamente com outros tratamentos anticâncer, por exemplo, quimioterapia e/ou radioterapia. o termo “simultânea” ou “simultaneamente” significa "que o outro tratamento anticâncer e o composto de carbazol são administrados em até 6 horas, 3 horas ou menos, um do outro. O termo “"extemporaneamente” significa a administração dos outros tratamentos anticâncer em momentos diferentes dos tratamentos anticâncer e em certa frequência em relação à administração repetida e/ou ao regime de tratamento “15 anticâncer.
& O composto de carbazol, ou as composições que contêm o composto de carbazol, pode ser administrado em qualquer forma, incluindo, sen limitação, administração oral, parenteral, sublingual, transdérmica, retal, transmucosa, topicamente, por meio de inalação, por meio de administração bucal, ou combinações destas. Administração parenteral inclui, sem limitação, administração intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, Subcutânea, intramuscular, intratecal e intra-articular. O composto de carbazol também pode ser administrado na forma de um implante, o que permite uma liberação lenta do composto, bem como uma infusão IV controlada lenta.
Os compostos de carbazol da presente invenção podem ser usados para tratar diversas doenças e condições. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem ser usados |
. em combinação com radiação e/ou um agente quimioterápico no tratamento de cânceres. Por exemplo, os compostos de ' carbazol podem ser usados para melhorar o tratamento de tumores que são normalmente tratados com um antimetabólito, por exemplo, metotrexato ou 5S-fluoruracil (5-FU).
O uso de compostos de carbazol da presente invenção pode resultar na regressão parcial ou completa de células cancerosas, ou seja, o desaparecimento parcial ou completo dessas células da população de células. Por exemplo, um método da invenção pode ser usado para tornar mais lenta a taxa de crescimento tumoral, diminuir o tamanho ou o número de tumores, ou para induzir regressão parcial ou completa do tumor.
Um composto de carbazol presente pode ser usado para tratamento de uma doença ou condição in vivo por ' administração a um indivíduo que dele necessita. A doença ou condição pode ser um câncer. Diversos cânceres podem ser tratados, incluindo, sem limitação: carcinomas, incluindo câncer de bexiga (incluindo câncer de bexiga acelerado e metastático), mama, câncer do cólon (incluindo câncer cólon-retal), câncer renal, câncer hepático, câncer de pulmão (incluindo câncer de pulmão de célula pequena e não pequena e adenocarcinoma do pulmão), câncer do ovário, câncer da próstata, câncer dos testículos, câncer do trato geniturinário, câncer do sistema linfático, câncer do reto, câncer da laringe, câncer do pâncreas (incluindo carcinoma pancreático exócrino), câncer do esôfago, câncer do estômago, câncer da vesícula biliar, câncer cervical, câncer da tireóide, câncer renal e câncer da pele (incluíndo carcinoma de célula escamosa) ; tumores |
. hematopoiéticos de linhagem linfóide, incluindo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, ' linfoma de célula B, linfoma de célula T, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, linfoma de célula pilosa, linfoma histiocítico e linfona de Burkett, tumores hematopoiéticos de linhagem mielóide, incluindo leucemias mielógenas agudas e crônicas, síndrome mielodisplásica, leucemia mielóide e leucemia promielocítica; tumores do sistema nervoso central e periférico, incluindo astrocitoma, neuroblastoma, glioma e schwanomas; tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma, rabdomiossarcoma e osteossarcoma,; e outros tumores, incluindo melanoma, xenoderma pigmentoso, ceratoacantoma, semínoma, câncer folicular da tireóide, teratocarcinoma, ' 15 carcinoma de célula renal (RCC), câncer pancreático, ' mieloma, leucemia mielóide e linfoblástica, neuroblastoma,
e glioblastoma.
A transformação induzida por tax de HTLV, um agente causador de leucemia linfoblástica T de adultos humanos (ATL), pode compartilhar os mesmos alvos moleculares envolvidos no RCC.
Por exemplo, NF-KB está constitutivamente ativa em células transformadas por tax.
Similar ao RCC, a atividade de p53 é inibida por meio da ativação de NF-KB em células transformadas por tax, e a inibição de p53 não envolve o seqgúestro de p300. Como base no mecanismo compartilhado de ativação de p53, as composições também podem ser usadas para tratar leucemia induzida por HETLV.
Independentemente de seu estado de p53, a maioria dos cânceres humanos possui NF-KB constitutivamente hiperativados.
A composição também É
|
. capaz de inibir NF-KB por reprogramação da transativação de complexos de NF-KB em complexos de transrepressão, o que ' pode ser usado para oO tratamento de qualquer tumor, independentemente de seu estrado de p53. As composições podem ainda ser usadas para tratamento de infecções por HIV, pois LTRs de HIV são fortemente dependentes da atividade de NF-KBE.
A composição também pode ser usada como uma terapia adjuvante para superar resistência a fármacos anticâncer que pode ser causada por ativação constitutiva de NF-XxB.
O fármaco anticâncer pode ser um quimioterápico ou radiação,
como aqui descrito.
Um método da presente invenção compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de as um composto de carbazol presente em combinação com um “« agente quimioterápico que pode efetuar quebras de DNA de fita simples ou dupla ou que pode bloquear a replicação de DNA ou à proliferação celular.
Alternativamente, um método da presente invenção compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto de carbazol presente em combinação com terapias que incluem o uso de um anticorpo, por exemplo, herceptina, que possui atividade na inibição da proliferação de células cancerosas.
Consequentemente, cânceres, por exemplo, cânceres cólon-retais, cânceres da cabeça e pescoço, cânceres pancreáticos, cânceres de mama, cânceres gástricos, cânceres da bexiga, cânceres vulvares, leucemias, linfomas, melanomas, carcinomas de célula renal, cânceres ovarianos, tumores cerebrais, oOsteossarcomas €e carcinomas de pulmão, são suscetíveis ao tratamento
|
. aprimorado por administração do presente carbazol em combinação com um agente quimioterápico ou um anticorpo. , Cânceres tratáveis pela presente invenção também incluem tumores sólidos, ou seja, carcinomas e sSarcomas.
Carcinomas incluem neoplasias malignas derivadas de células epiteliais que se infiltram (ou seja, invadem) tecidos circundantes e dão origem a metástases.
Adenocarcinomas são carcinomas derivados de tecido glandular, ou de tecidos que formam estruturas glandulares reconhecíveis.
Outra categoria ampla de cânceres inclui sarcomas, que são tumores cujas células estão embebidas em uma substância fibrilar ou homogênea, como tecido conjuntivo embrionário.
A presente invenção também permite o tratamento de cânceres dos sistemas mielóide ou linfóide, incluindo leucemias, ' 15 linfomas e outros cânceres que tipicamente não estão ' presentes como uma massa tumoral, mas estão distribuídos nos sistemas vascular ou linforreticular.
Formas adicionais de câncer tratável pelos presentes compostos de carbazol incluem, por exemplo, oncologia do adulto e pediátrica, crescimento de tumores/malignidades sólidas, carcinoma de célula mixóide e redonda, tumores localmente avançados, câncer metastático, sarcomas de tecido mole humano, incluindo sarcoma de Ewing, metástases de câncer, incluindo metástases linfáticas, carcinoma de célula escamosa, particularmente da cabeça e pescoço, carcinoma esofagiano de célula escamosa, carcinoma oral, malignidades de células sangúíneas, incluindo mieloma múltiplo, leucemias, incluindo leucemia linfocítica aguda, leucemia não linfocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica crônica e leucemia de célula |
. pilosa, linfomas de efusão (linfomas baseados em cavidade corporal), linfoma tímico, câncer de pulmão (incluíndo , carcinoma de pequena célula), linfoma cutâneo de célula T, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, câncer do córtex adrenal, tumores produtores de ACTH, cânceres de célula não pequena, câncer de mama, incluindo carcinoma de pequena célula e carcinoma ductal, cânceres —“gastrintestinais (incluindo câncer do estômago, câncer de cólon, câncer cólon-retal, e pólipos associados à neoplasia cólon-retal), câncer pancreático, câncer hepático, cânceres urológicos (incluindo câncer de bexiga, por exemplo, tumores superficiais primários da bexiga, carcinoma invasivo de célula transicional da bexiga, e câncer muscular invasivo de bexiga), câncer de próstata, malignidades do trato ' 15 genital feminino (incluindo carcinoma ovariano, neoplasias . epiteliais peritoneais primárias, carcinoma cervical, cânceres uterinos endometriais, câncer vaginal, câncer da vulva, câncer uterino e tumores sólidos no folículo ovariano), malignidades do trato genital masculino (incluindo câncer testicular e câncer do pênis), câncer renal (incluindo carcinoma de célula renal), câncer cerebral (incluindo tumores cerebrais intrínsecos, neuroblastoma, tumores cerebrais astrocíticos, gliomas e invasão tumoral de célula metastática no sistema nervoso central), cânceres ósseos (incluindo osteomas e osteossarcomas), cânceres de pele (incluindo melanoma maligno, progressão tumoral de queratinócitos cutâneos humanos e câncer de célula escamosa), câncer da tireóide, retinoblastoma, neuroblastoma, efusão peritoneal, efusão pleural maligna, mesotelioma, tumores de Wilms, câncer da
|
. vesícula biliar, neoplasias trofoblásticas, hemangiopericitoma e sarcoma de Kaposi. Consequentemente, , espera-se que a administração de um composto de carbazol presente aprimore os regimes de tratamento.
Os compostos da presente invenção também podem potencializar a eficácia de fármacos no tratamento de doenças inflamatórias. Os presentes compostos de carbazol são inibidores potentes da resposta de NF-xB, que envolve a supressão da expressão/secreção de alvos pró-inflamatórios de NF-xB, por exemplo, TNF, IL-l, IL-6, IL-8 e muitos outros. Portanto, a inibição de NF-KB pelo presente carbazol levaria à supressão de reações inflamatórias locais e sistêmicas. A quinacrina, que teoricamente atua por um mecanismo muito similar ao presente carbazol, foi ? 15 amplamente usada como um agente antiinflamatório para o . tratamento de doenças autoimunes e inflamação crônica.
Exemplos de doenças que podem se beneficiar da terapia combinada com compostos adequados ao método da presente invenção são artrite reumatóide, psoríase, vitiligo, granulomatose de Wegener e lúpus eritematoso sistêmico (LES). O tratamento de artrite, granulomatose de Wegener e LES freqúentemente envolve o uso de terapias imunossupressoras, por exemplo, radiação ionizante, metotrexato e ciclofosfamida. Esses tratamentos tipicamente induzem, direta ou indiretamente, dano ao DNA. A inibição de NE-KXKB e/ou a ativação de p53 dentro das células imunes ofensoras tornam as células mais sensíveis ao controle por esses tratamentos — padronizados. Psoríase e vitiligo comumente são tratados com radiação ultravioleta (UV) em combinação com psoraleno. Os presentes compostos de | carbazol induzem o efeito de morte de UV e psoraleno, e ' aumentam o índice terapêutico desse regime de tratamento. : Em geral, os compostos de carbazol úteis nos métodos da presente invenção potencializam o controle de células de doenças inflamatórias quando em combinação com fármacos imunossupressores atualmente usados.
Além das condições acima, a presente invenção também pode ser usada em métodos de tratamento de condições como, por exemplo, sem limitação, aterosclerose, re-estenose, vasculite, nefrite, retinopatia, doença renal, distúrbios cutâneos proliferativos, psoríase, cicatrização quelóide, ceratose actínica, síndrome de Stevens-Johnson, artrite reumatóide (RA), artrite sistêmica crônica de surgimento juvenil (JCA), osteoporose, lúpus eritematoso sistêmico, doenças hiperproliferativas do olho, incluindo > subcrescimento epitelial, vitreorretinopatia proliferativa 7 (PVR), retinopatia diabética, doenças hemangio- proliferativas, ictiose e papilomas.
Os carbazóis da presente invenção também exibem atividade antimicrobiana, por exemplo, agentes antibacterianos Gram-posiítivos e Gram-negativos, incluindo Salmonella; atividade antiprotozoários; e atividade antiviral.
Como observado por aqueles habilitados na técnica, agentes ativos ou auxiliares adicionais podem ser usados nos métodos aqui descritos. As referências aqui feitas ao tratamento também se estendem à profilaxia, bem como ao tratamento de doenças ou sintomas estabelecidos.
A presente invenção pode ser aplicada às populações de células ex vivo. Por exemplo, os presentes compostos de |
' carbazol podem ser usados ex vivo para determinar a posologia e/ou dosagem ótima da administração do composto 7 de carbazol presente para certa indicação, tipo de célula, paciente e outro parâmetro. Informações colhidas a partir desse uso podem ser usadas para fins experimentais ou na clínica para estabelecer protocolos para tratamento in vivo. Outros usos ex vivo para os quais à invenção é adequada são evidentes para aqueles habilitados na técnica.
Um composto de carbazol presente também pode ser administrado em combinação com radiação. Doenças que são tratáveis com radiação eletromagnética incluem doenças neoplásicas, tumores benignos e malignos, e células cancerosas.
O tratamento com radiação eletromagnética de outras a doenças não listadas nesta especificação também está s contemplado pela presente invenção. Modalidades preferidas 7 da presente invenção empregam a radiação eletromagnética de: radiação gama (10? a 10** m), radiação de raios X (10 12 210º m), luz ultravioleta (10 nm a 400 nm), luz visível (400 nm a 700 nm), radiação infravermelha (700 nm a 1 mm) e radiação de micro-ondas (1 mm a 30 cm).
Muitos protocolos de tratamento do câncer atualmente empregam —" radiossensibilizantes ativados por radiação eletromagnética, por exemplo, raios X. Exemplos “de radiossensibilizantes ativados por raios X incluem, sem limitação, os seguintes: metronidazol, misonidazol, desmetilmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomicina Cc, RSU 1069, SR 4233, EOS9, RB 6145, nicotinamida, 5-bromodesoxiuridina (BUdR), 5- iododesoxiurídina (ITUAR), bromodesoxicitidina, |
; fluordesoxiuridina (FUdR), hidroxiuréia, cisplatina, Ee análogos e derivados terapeuticamente eficazes dos mesmos. : A terapia fotodinâmica (PDT) de cânceres emprega luz visível como ativador de radiação do agente sensibilizante. Exemplos de radiossensibilizantes fotodinâmicos incluem os seguintes, sem limitação: derivados de hematoporfirina, PHOTOFRINº, derivados de benzoporfirina, NPe6, etioporfirina de estanho (SnNET2), feoborbida-a, bacterioclorofila-a, naftalocianinas, ftalocianinas, ftalocianina de zinco, e análogos e derivados terapeuticamente eficazes dos mesmos.
Radiossensibilizantes podem ser administrados em conjunto com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos, além de um composto de carbazol presente, tais compostos incluindo, sem limitação, " compostos que promovem a incorporação de 7 radiossensibilizantes às células-alvo, compostos que controlam o fluxo de substâncias terapêuticas, nutrientes e/ou oxigênio às células-alvo, quimioterápicos que atuam sobre o tumor, com ou sem radiação adicional, ou outros compostos terapeuticamente eficazes para tratamento de câncer ou de outra doença. Exemplos de agentes terapêuticos adicionais que podem ser usados em conjunto com radiossensibilizantes incluem, sem limitação, 5-fluoruracil (5-FU), leucovorin, oxigênio, carbogênio, transfusões de células vermelhas, perfluorcarbonos (por exemplo, FLUOSOLWº-DA), 2,3-DPG, BW1I2C, bloqueadores do canal de cálcio, pentoxifilina, compostos antiangiogênese, hidralazina e L-BSO.
O agente quimioterápico pode ser qualquer agente ou |
, composto farmacológico que induz apoptose.
O agente Ou composto farmacológico pode ser, por exemplo, uma pequena . molécula orgânica, peptídeo, polipeptídeo, ácido nucléico ou anticorpo.
Quimioterápicos que podem ser usados incluem, sem limitação, agentes alquilantes, antimetabólitos, hormônios e antagonistas destes, produtos naturais e seus derivados, radioisótopos, anticorpos, além de produtos naturais, e combinações destes.
Por exemplo, um composto de carbazol da presente invenção pode ser administrado com antibióticos, por exemplo, doxorrubicina e outros análogos de antraciclina, mostardas nitrogenadas, por exemplo, ciclofosfamida, análogos de pirimidina como, por exemplo, S-fluoruracil, cisplatina, hidroxiuréia, taxol e seus derivados naturais e sintéticos, e semelhantes.
Como outro exemplo, no caso de tumores mistos, por exemplo, adenocarcinoma da mama, em que os tumores incluem células gonadotropina-dependentes e gonadotropina-independentes, o composto pode ser administrado em conjunto com leuprolida ou goserelina (análogos do peptídeo sintético de LH-RH). Outros protocolos neoplásicos incluem o uso de um composto inibidor com outra modalidade de tratamento, por exemplo, cirurgia ou radiação, também aqui denominadas “modalidades antineoplásicas adjuntas”. Quimioterápicos adicionais úteis na invenção incluem hormônios e antagonistas destes, radioisótopos, anticorpos, produtos naturais, e combinações destes.
Exemplos de quimioterápicos úteis para o método da presente invenção estão lístados na tabela seguinte.
TABELA 1 |
1 Mostardas nitrogenadas Fármacos antimitóticos Mecloretamina Taxanos - Ciclofosfamida Paclitaxel Ifosfamida Alcalóides da vinca Melfalan Vinblastina (VLB) Clorambucil Vincristina Mostarda uracil Vinorelbina Temozolomida Vindesina Nitrosouréias Taxotereº (docetaxel) Carmustina (BCNU) Estramustina Lomustina (CCNU) Fosfato de estramustina Semustina (metil-CCNU) Epipodofilotoxinas Clormetina Etoposida Estreptozocina Teniposida Etilenimina/Metil-melamina Antibióticos Trietilenomelamina (TEM) Actimomicina D Trietileno tiofosforamida | Daunomicina (rubidomícina) (tiotepa) Doxorrubicina (adriamicina) Hexamet ilmelamina (HMM, | Mitoxantroneidarrubicina altretamina) Bleomicina Alquil sulfonatos Esplicamicina (mitramicina) Bussulfan Mitomicina-C Pipobroman Dactinomicina Triazinas Afidicolina Dacarbazina (DTIC) Epirrubicina Idarrubicina Daunorrubicina Mitramicina Desóxi co-formicina Enzimas |
O a PA Antimetabólitos Radiossensibilizantes . Análogos de ácido fólico Metronidazol Metotrexato Misonidazol Trimetrexato Desmetilmisonidazol Pemetrexed (antifolato | Pimonidazol multi-direcionado) Etanidazol Análogos de pirimidina Nimorazol 5-Fluoruracil RSU 1069 Fluordesoxiuridina EOS Gemcitabina RB 6145 Citosina Antiandrogênios não Arabinosídeo (AraC, | esteróides citarabina) SR4233 S5-Azacitidina Flutamida 2,2" -Difluordesoxi-citidina Nicotinâmida Floxuridina S-Bromodesoziuridina Pentostatina 5-Iododesoxiuridina Análogos de purina Bromodesoxicitidina 6-Mercaptopurina 6-Tioguanina Azatioprina 2,2' -Desoxicoformicina (pentostatina) Eritrohidroxinonil-adenina (EHNA) Fosfato de fludarabina 2-Clorodesoxiadenosina (cladribina, 2-CdA) | t do tipo T Complexos de coordenação de Camptotecina platina 7 Topotecan Cisplatina
Irinotecan Carboplatina Oxaliplatina Antracenediona Mitoxantrona Uréia substituída Hidroxiuréia Derivados de metilhidrazina N-metilhidrazina (MHI) Procarbazina Supressores adrenocorticais Mitotano (o,p'-DDD) Aminoglutetimida
Modificadores da resposta | Citocinas biológica Interferon (a, E, 7)
G-CSF Interleucina-2
GM-CSF
Agentes de diferenciação Fotossensibilizantes
Derivados do ácido retinóico | Derivados de hematoporfirina PHOTOFRINº Derivados de benzoporfirina Npe6 Etioporfirina de estanho (SnET,) Feoborida-a Bacterioclorofila-a Naftalocianinas Ftalocianinas
| é [LL resesieninasãezinco — | Hormônios e antagonistas Radiação ' Adrenocorticosteróides/ Raios X antagonistas Luz ultravioleta Prednisona e equivalentes Radiação gama Dexametasona Luz visível Aminoglutetimida Radiação infravermelha Progestinas Radiação de micro-ondas Caproato de hidroxiprogesterona Acetato de medroxiprogesterona Acetato de megestrol Estrogênios Dietilestilbestrol Etinil estradiol/ equivalentes Antiestrogênio Tamoxifeno Androgênios Propionato de testosterona Fluoximesterona/equivalentes Antiandrogênios Flutamida Análogos do hormônio de liberação de gonadotrofina Leuprolida Exemplos de quimioterápicos que são particularmente úteis em conjunto com radiossensibilizantes incluem, por exemplo, camptotecina, carboplatina, cisplatina, |
; daunorrubicina, doxorrubicina, interferon (alfa, beta, gama), irinotecan, hidroxiuréia, clorambucil, se , fluoruracil (5-FU), metotrexato, 2-cloroadenosina, fludarabina, azacitidina, gemcitabina, pemetrexed, interleucina 2; irinotecan, docetaxel, paclitaxel, topotecan, CPT-11, anastrazol, letrazol, capecitabina, reloxafina, ciclofosfamida, ifosamida, droloxafina, e análogos e derivados terapeuticamente eficazes dos mesmos, Agentes que afetam os microtúbulos interferem com a mitose celular e são bem conhecidos na técnica por sua atividade citotóxica. Agentes que afetam os microtúbulos úteis na invenção incluem, sem limitação, alocolchicina (NSC 406042), halicondrina B (NSC 609395), colchicinas (NSC 757), derivados de colchicinas (por exemplo, NSC 33410), dolastatina (NSC 376128), maitansina (NSC 153858), rizoxina (NSC 332598), paclitaxel (NSC 125973), derivados de TAXOLº (por exemplo, NSC 608832), tiocolchicina NSC 361792), tritil cisteína (NSC 83265), sulfato de vinblastina (NSC 49842), sulfato de vincristina (NSC 67574), epotilonas naturais e sintéticas, incluindo, sem limitação, epotilona A, epotilona B e discodelinolida (veja Service, (1996) Science, 274; 2009), estramustina, nocodazol, MAP4, &e semelhantes, Exemplos desses agentes também estão descritos em Bulinski (1997) J. Cell Sci. 110: 3.055-3.064; Panda (1997) Proc. Natl. Acad, Sci. USA 94: 10.560-10.564; Muhlradt (1997) Cancer Res. 57: 3.344-3.346; Nicolaou (1997) Nature 397: 268-272; Vasquez (1997) Mol. Biol, Cell. 8: 973-985; e Panda (1996) JJ. Biol, Chem. 271: 29.8607-
29.812. Agentes citostáticos que podem ser usados incluem, sem |
; limitação, hormônios e esteróides (incluindo análogos ' sintéticos): 17-a-etinilestradiol, dietilestilbestrol, * testosterona, prednisona, fluoximesterona, dromostanolona propionato, testolactona, acetato de megestrol, metilprednisolona, metil-testosterona, prednisolona, triamcinolona, hidrotrianiseno, hidroxiprogesterona, aminoglutimida, estramustina, acetato de medroxiprogesterona, leuprolida, flutamida, toremifeno, zoladex.
Outros agentes citostáticos são antiangiogênicos como, por exemplo, inibidores da metaloproteinase da matriz, e outros são inibidores de VEGF como, por exemplo, anticorpos antí-VEGF e pequenas moléculas como ZD6474 e SU668. Anticorpos anti-Her2 também podem ser utilizados. Um inibidor de EGFR é EKB-569 (um inibidor irreversível). Também estão incluídos anticorpos C225 imunoespecíficos .=«+ . para os inibidores de EGFR e Src.
Também é adequado para uso como agente citostático CASODEXº (bicalutamida, Astra Zeneca), que torna carcinomas androgênio-dependentes não proliferativos, Ainda outro exemplo de um agente citostático é o antiestrogênio TAMOXIFENOº que inibe a proliferação ou o crescimento de câncer de mama estrogênio-dependente, Inibidores da transdução de sinais proliferativos celulares são agentes citostáticos. Exemplos representativos incluem inibidores do fator de crescimento epidérmico, inibidores de Her-2, inibidores de MEK-1 quinase, inibidores de MAPK quinase, inibidores de PI3, inibidores de Src quinase e inibidores de PDGF.
Em função de sua habilidade única para induzir |
; apoptose em células tumorais, os membros da família TNF são considerados substâncias farmacêuticas anticâncer 7 potenciais. No entanto, muitas células tumorais escapam do ácido pró-apoptótico de ligantes de morte, reduzindo, dessa forma, o uso desses agentes para matar cânceres sensíveis a ligante e permitindo que O tumor escape da resposta imune do hospedeiro. O uso de um inibidor de NEF-XB pode sensibilizar as células tumorais à morte por um ligante de morte, por exemplo, um polipeptídeo de TNF.
O polipeptídeo de TNF pode ser um membro da superfamília TNF de ligantes. Exemplos representativos de polipeptídeos de TNF incluem, sem limitação, NGF, CD40L, CD137L/4-1BBL, TNF-m, CD134L/OX40L, CD27L/CD70, FasL/CD95, CD30L, TNF-B/LT-um, LT-a e TRAIL. Os membros da superfamília TNF são proteínas naturais que estão implicadas na manutenção e funcionamento do sistema imune e que podem desencadear apoptose. O polipeptídeo de TNF pode ser TRAIL, que induz apoptose principalmente em células tumorais, mas não em células normais. Acredita-se que a atividade desses denominados “ligantes de morte” seja mediada pela ligação com membros da família do receptor de TNF, que contêm domínios de morte estruturalmente similares em suas porções intracelulares. A ligação desses receptores, específicos para cada ligante de morte, desencadeia à ativação de uma cascata de eventos que resultam na ativação de caspase. Exemplos representativos de receptores de TNF-R ligados pelos polipeptídeos de TNF incluem, sem limitação, LNGFR/p75, CD40, CD137/4-1BB/ILA, TNFRI/p55/CD120a, TNFRILI/p75/CD120b, CD134/O0X40/ACT35, CD27, Fas/CD95/APO-1, CD30/Ki-l, LT-f R, DR3, DR4, DR5, DCR1/TRID, TR2, GITR e |
, osteoprotegerina.
' Contempla-se que outros agentes podem ser usados no 7 lugar do polipeptídeo de TNF. Por exemplo, pode ser usado um anticorpo que mimetiza a atividade de um polipeptídeo de TNF. Exemplos representativos desses anticorpos incluem, sem limitação, um anticorpo agonista para FAS, receptor de TRAIL ou TNFR. Além disso, aptâmeros e outros ligantes sintéticos capazes de ativar os receptores correspondentes podem ser usados.
Também é possível diagnosticar se um tumor em um paciente é capaz de ser tratado por um composto de carbazol presente. Uma amostra do tumor é obtida do paciente. As células do tumor são então transduzidas com um sistema repórter de p53, por exemplo, um repórter lacZ que responde a p53. As células transduzidas são então incubadas com o composto. A produção de um sinal mediado por p53 acima de controles indica que o tumor pode ser tratado pelo composto de carbazol.
As Figs. la e l1b são diagramas que mostram que oOS presentes carbazóis inibem a atividade transcricional de NF-KB em células tratadas com TNF (Fig. la) e uma comparação de concentração ativa (valores de ECs,) sobre a ativação de p53 e a inibição de NF-KB (Fig. 1b).
os presentes compostos de carbazol possuem propriedades anticâncer significantes in vitro (Fig. 2) e in vivo (Fig. 3). A Fig. 2 mostra o efeito de vários compostos de carbazol sobre células tumorais que diferem em seus estados de p53 após tratamento por 1 hora com diferentes concentrações de quatro compostos de carbazol presentes. A sobrevida celular foi avaliada em 72 horas por | coloração com azul de metileno. Portanto, há uma teoria, ' não totalmente aceita, de que a ativação de p53 pelos - presentes compostos de carbazol possa não ser o sinal indutor de morte primário, mas sim reflita um tipo de estresse celular causado pela inativação de NF-xB constitutivamente ativo.
As células tumorais testadas foram p53 wt de adenocarcinoma do cólon HCT116 (Fig. 2a), p53 mut de adenocarcinoma da mama MDA-MB-231 (Fig. 2b), p53 wt de carcinoma do cólon DLD1 (Fig. 2c), p53 wt de adenocarcinoma do pulmão A549 (Fig. 2d), p53 wt de carcinoma de célula renal Cakil (Fig. 2e), p53 mut de adenocarcinoma do cólon HT29 (Fig, 2£), deleção de p53 de adenocarcinoma do pulmão H1299 (Fig. 29), p53 wt de adenocarcinoma da mama MCF7 (Fig, 2h), p53 wt de carcinoma de célula renal RCC45 (Fig. 2i), carcinona de célula renal ACHN (Fig. 23) e fibrossarcoma do pulmão HT1080 (Fig. 2k). A célula tumoral testada na Fig. 3 é o modelo de xenoenxerto SC de HCT116.
Os presentes compostos de carbazol analisados não induziram dano ao DNA (Tabela 1). Portanto, há uma teoria de que a citotoxicidade dos presentes compostos de carbazol resulte de um tipo único de estresse celular não genotóxico que envolve a supressão de NF-XB ao qual as células cancerosas são mais sensíveis do que as células normais.
Isso ilustra que os presentes carbazóis são uma nova classe altamente eficaz de substâncias terapêuticas anticâncer.
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De acordo com uma característica importante da presente invenção, uma superposição tridimensional (3D) de ' confôrmeros de moléculas ativas e inativas de carbazol revelou características dos compostos que contribuem para sua atividade. Uma característica importante é o aspecto plano do centro de carbazol. Comparando-se múltiplos alinhamentos tridimensionais dos confôrmeros, verificou-se que, em todos os compostos ativos de carbazol, a região central do carbazol era plana (Fig. 4). Compostos inativos podem ser planos ou não planos (Fig. 5). Estudos estruturais adicionais de compostos que possuem distribuições de átomos similares ao longo da arquitetura molecular confirmaram que o aspecto plano da área do anel de carbazol é importante na determinação da potência da ativação de p53 pelo composto de carbazol (Figs. 6 e 7), Um carbazol ativo, ou seja, o Exemplo 2, é mostrado na Figura
6. Um carbazol inativo, ou seja, o Composto 200, é mostrado na Figura 7. O Composto 200 possui uma fórmula estrutural: [ Nº < às A O achado de que os compostos de carbazol capazes de ativar p53 possuem uma estrutura plana levou a uma hipótese de que o mecanismo de ação desses compostos seria mediado por meio de intercalação de DNA. Teoricamente, a correlação entre a potência da ativação de p53 e a estrutura plana do | centro do carbazol reflete uma habilidade para intercalar DNA.
Para testar essa hipótese, os compostos de carbazol ' foram praticamente intercalados na estrutura de DNA tridimensional tomada do complexo p53-DNA (estrutura 1TUP PDB). A intercalação inicial foi realizada da seguinte forma: uma molécula ativa de carbazol, ou seja, o Composto 300, foi superposta na estrutura de DNA de tal modo que a área plana do anel fosse posicionada entre e paralela a dois pares de bases empilhados.
A molécula intercalada foi então colocada contra Arg280 de p53. O resíduo Arg280 é considerado como sendo crítico para a interação p53 - DNA, Veja M.
Kitayner e cols., Molecular Cell, 22, páginas 741- 753, Junho de 2006. Essa superposição por força bruta viola as interações de Van der Waals entre átomos das duas estruturas.
Usando o pacote de programas de mecânica molecular MOLOC, o complexo terciário DNA-análogo de carbazol-p53 foi otimizado para reduzir as tensões de Van der Waals e de ângulo de torção na estrutura combinada DNA- molécula.
Após a otimização, a posição da molécula ativa foi ajustada à cavidade no DNA com o plano do anel que é paralelo aos pares de bases empilhados de DNA.
Em conseqiência desse procedimento de otimização, aceptores de ligação de hidrogênio (HBA) localizados nos substituintes do anel de carbazol estavam posicionados no sulco principal, e a cadeia lateral anexada ao nitrogênio do carbazol estava posicionada no sulco estreito menor.
A fórmula estrutural para o Composto 300 é:
|
: q q N Seo
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N fo Em conseqgúência desse estudo, foi criado um fragmento de dsDNA com uma cavídade interior com um formato melhor para acomodar compostos de carbazol de ativação de p53. Usando o pacote de programas GOLD, a ancoragem molecular foi realizada em diversos compostos de carbazol com atividade de p53 conhecida. Foi demonstrado que, na média, moléculas altamente ativas (ECs, de ativação de p53 < 130 qupM) se ajustaram bem melhor nessa cavidade do que moléculas com ECs, > 130 HUM. Os confôrmeros de compostos de carbazol altamente ativos estão posicionados uniformemente dentro da cavidade, enquanto a qualidade do ajuste diminuía entre compostos de carbazol que possuem potência de ativação de p53 fraca. A maioria das moléculas inativas se caracterizava por uma qualidade de ajuste muito ruim.
Um posicionamento adequado do substituinte anexado ao nitrogênio do carbazol no sulco menor de DNA pode ser importante para Obtenção de uma boa atividade de ps3.
Simplesmente, o ajuste da cadeia lateral no sulco menor melhora o ajuste global do composto de carbazol. Além disso, a análise da associação de átomos da superposição tridimensional de compostos ativos de carbazol mostra que um grupo amino carregado positivamente na cadeia lateral é importante para obtenção de atividade.
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As posições de átomos de HBA (ligação de hidrogênio) nos substituintes de carbazol e sua identidade são ' importantes para obter atividade de p53, A baixa qualidade dos átomos de HBA (ou seja, nitrogênio) leva a uma atividade fraca do composto de carbazol.
A ausência de átomos de HBA nos substituintes de carbazol torna um composto inativo.
Todos os compostos altamente ativos possuem substituintes de carbazol não rodados.
A ancoragem de moléculas altamente ativas (EC, < 130 nM) e ativas (ECs, de cerca de 1 nM) na cavidade de DNA demonstra que os substituintes de carbazol rodados com bons átomos de HBA podem criar ligações de hidrogênio com átomos de DNA.
Em contraste, os substituintes de carbazol não rodados não fazem ligação de hidrogênio com DNA, o que leva à sua alta atividade.
A atividade antitumoral do Exemplo 7 (Composto 6h) foi demonstrada usando o modelo de tumor de melanoma singênico B16 da seguinte forma: camundongos C57BL/6 foram inoculados por via intradérmica em 2 locais do abdome com 5 x 10º células de melanoma murídeo Bl6. Quando pelo menos um dos locais de inoculação de tumor desenvolvia um tumor (tamanho médio de cerca de 6 mm), tratamento começava.
Os camundongos foram tratados diariamente por engorda oral por até 14 dias com controle de veículo de metilcelulose 0,5% ou 30 mg/kg do Exemplo 7 (n = 5 camundongos/grupo de tratamento). As medidas do tumor foral coletadas por compassos digitais a cada 1-2 dias.
O efeito do tratamento em tumores individuais é apresentado nas Figuras 8a e &8b.
Com exceção de um camundongo do grupo de tratamento do Exemplo 7, nenhum efeito foi observado no peso global do
| camundongo para qualquer grupo de tratamento (<10% de alterações). Por volta do 9º Dia, havia uma diminuição de ' aproximadamente 3 vezes no crescimento tumoral no grupo de tratamento do Exemplo 7, comparado com o grupo de controle de veículo (68% de supressão do crescimento).
Para confirmar a atividade antitumoral do Exemplo 7, o composto de carbazol (30 mg/kg) foi liberado oralmente usando o modelo de xenoenxerto de HCT1l16. Nesse teste, camundongos atímicos nude foram inoculados com 5 x 10º de células tumorais HCT116 em dois locais. 90% dos tumores apareceram entre o sétimo e o décimo primeiro dias após inoculação. Os tratamentos diários orais com 30 mg/kg do composto do Exemplo 7 em metilcelulose 0,5% ou um controle de veículo de metilcelulose 0,5% começavam quando pelo menos um tumor por camundongo alcançava 20-25 mm? de tamanho. Os camundongos foram tratados até que os tumores de controle alcançassem 1.000 mm. Após o início do tratamento, os camundongos eram monitorados quanto a condição global, perda de peso e sobrevida, bem como quanto ao tamanho de tumores medido em dias alternados.
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Nesse teste, 100% dos camundongos no Grupo 2 sobreviveram ao experimento. Nenhuma perda de peso foi 7 observada no grupo de controle de veículo de controle 1, enquanto, no grupo 2, três camundongos perderam 15-20% do peso ao final do experimento. O peso do restante dos camundongos no grupo 2 flutuou na faixa de 95-105% do peso original. Nenhum outro sinal anormal foi percebido na aparência, atividade ou comportamento do camundongo do grupo 2.
No grupo de controle 1, os tumores de HCT116 cresceram exponencialmente, como esperado em um desvio regular entre tumores com crescimento mais rápido e mais lento. No grupo 2 tratado com Exemplo 7, o crescimento de todos os tumores foi retardado, comparado com grupo tratado com controle de veículo 1, No 14º Dia após oO início do tratamento, nenhum dos tumores tratados atingiu o tamanho do tumor de controle com o crescimento mais lento (530 mm). Na média do crescimento de tumores, o tratamento com Exemplo 7 suprimiu o crescimento tumoral por um fator de cerca de 3,5 (73% de inibição), comparado com o grupo 1 de controle de veículo. Significativamente, um tumor tratado foi completamente curado e, na necropsia, foi encontrada apenas uma formação do tipo tecido conjuntivo mínimo no lugar do tumor. O tamanho de vários tumores tratados não apenas aumentou mais lentamente do que os tumores de controle, mas dimínuiu, o que é indicativo de morte da célula tumoral e destruição do tumor em consegióência do tratamento com o composto do Exemplo 7. Esse resultado foi observado pelos primeiros 3-5 dias de tratamento, e depois os tumores tratados continuaram à crescer lentamente.
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Esse experimento mostra que o composto do Exemplo 7 possui um efeito supressor sobre o crescimento de tumores ' de xenoenxerto subcutâneo de HCT116 em camundongos nude. O valor de supressão do crescimento é de 73%, o que é considerado pelos padrões do NCI como uma atividade anticâncer significante (> 42%). Os resultados abaixo estão ilustrados nas Figuras 3 e 8-10, A Figura 3 é uma curva média do crescimento tumoral que mostra o tratamento de tumor de xenoenxerto de carcinoma do cólon HCT116 com o composto do Exemplo 7 e um controle (MC). Tumores tratados com o composto do Exemplo 7 exiben um volume tumoral substancialmente reduzido. As barras no gráfico do volume tumoral vs. dias de tratamento representam o desvio-padrão. A Fig. 8 contêm diagramas que mostram o crescimento de tumores individuais tratados em camundongos com o veículo de controle (Fig. 8a) e com o composto do Exemplo 7 (Fig. 8b). A Fig. 9 mostra O crescimento de tumores individuais, até 100 mmº, em camundongos tratados com o composto do Exemplo 7. A Figura 10 mostra que o tamanho do tumor diminuiu durante os primeiros dias de tratamento, e os tumores que foram curados. A Fig. 11 demonstra que um composto de carbazol, ou seja, Composto 100, que ativa p53 no ensaio descrito acima, exibe uma atividade anticâncer significante contra uma ampla variedade de células cancerosas testadas. Cada uma das linhagens de células apresentada na Figura 11 foi semeada em placas de 96 poços. No dia seguinte, as células foram tratadas com uma gama de concentrações de Composto
100. O tratamento ocorreu por 24 horas, quando então o meio | preenchido com composto era substituído com meio sem i composto, e permitia-se que as células crescessem até que " os poços de controle, que foram tratados somente com controle de veículo (DMSO), atingissem uma monocamada s (tipicamente dentro de 48 horas). As células eram então fixadas e coradas com azul de metileno 0,5% em metanol 50%. O corante era eluído com SDS 1% e a absorbância medida a 650 nm. Os dados são apresentados como à absorbância a 650 nm versus a concentração de Composto 100.
Os compostos dos Exemplos 7, 15 e 13 mostraram uma atividade anticâncer potente. Em um teste de eficácia usando esses três compostos, camundongos atímicos nude foram inoculados por via subcutânea com uma suspensão de células de carcinoma de célula renal humano Cakil em ambos os flancos traseiros. Quando pelo menos um tumor em um camundongo alcançava 20-50 mm, o tratamento era iniciado. Os camundongos foram tratados oralmente por engorda com 30 mg/kg do Exemplo 7, 5 mg/kg do Exemplo 15 ou 25 mg/kg do Exemplo 13 formulados em hidroximetilcelulose 0,2%. Como um controle positivo, um grupo foi tratado com 40 mg/kg de Sunitinib, um fármaco aprovado para o tratamento de carcinoma de célula renal. O tratamento foi dado por 4 semanas em um esquema de 5 dias seguintes de tratamento por 2 dias sem medicamento. Após o término do tratamento, os camundongos eram monitorados por mais 4 semanas para determinar quão rapidamente o crescimento tumoral retornava ao normal, Todos os três compostos causaram inibição significante do crescimento tumoral, comparados com O controle de veículo (24º Dia (final de tratamento): Exemplo 7, 73% de inibição, Exemplo 15, 50% de inibição, Exemplo |
13, 62% de inibição). Esse efeito antitumoral dos Exemplos 7 e 13 e, em menor grau, do Exemplo 15, era . substancialmente maior do que o controle de Sunitinib (42%). Curiosamente, a cessação do tratamento com qualquer um dos presentes compostos não levou ao recrescimento rápido do tumor. Em contraste, o término do tratamento com Sunitínib resultou em crescimento tumoral imediato, de tal forma que, por volta do 40º Dia, não houve diferença significativa no volume tumoral observado entre os grupos de Sunitinib e de controle de veículo.
Em resumo, todos os três carbazóis causaram inibição do crescimento tumoral que persistia até mesmo após oO término do tratamento. A ordem de potência é: Exemplo 7 é maior ou igual ao Exemplo 13, que é maior do que o Exemplo
15. O tratamento com o Exemplo 7 não causou efeitos colaterais aparentes, comparado com os Exemplos 13 e 15. Os efeitos colaterais mais severos foram observados com o Exemplo 13, no qual dois camundongos tiveram que ser retirados do tratamento por curto prazo e um camundongo foi removido permanentemente em função da perda de peso que levou à eutanásia prematura. Dessa forma, o Exemplo 7 pareceu ser o carbazol “mais seguro” nesse teste. Como oO Exemplo 15 só causou 10-15% de perda de peso que era de curto prazo, esse composto foi o segundo mais seguro nesse modelo de tumor. Com base nos resultados, o Exemplo 7 é um composto preferido com atividade antitumoral potente (70- 80% de inibição) na ausência de efeitos colaterais. Em outro teste, a atividade antitumoral e a toxicidade dos Exemplos 7, 15 e 13, na dose máxima tolerada (MTD) em camundongos nude com xencoenxertos de adenocarcinoma | ileocecal humano HCT-8, e em camundongos nude com xenoenxertos de adenocarcinoma do cólon humano HT-29, foram " avaliadas. Também foi efetuada uma comparação da eficácia antitumoral e toxicidade dos Exemplos 7, 15 e 13 na MTD ladoa lado contra xenoenxertos de cólon humano HCT-8 e HT-
29.
Como mostrado acima, os Exemplos 7, 15 e 13 demonstraram eficácia antitumoral contra vários xenoenxertos SC de tumor humano em camundongos nude ou SCID (por exemplo, tumores de HCT-116, DLD1, Cakil e MDA-MB-231, com as células tumorais inoculadas como uma suspensão de células nos camundongos). A eficácia antitumoral e a toxicidade in vivo desses três compostos foram avaliadas em suas rTepetitivas MTD contra xenoenxertos de HCT-8B (relativamente sensíveis à quimioterapia, por exemplo, 5-FU e irinotecan) e de HT-29 (relativamente resistentes à quimioterapia) estabelecidos em camundongos nude por transplante de cerca de pedaços de tumor de 50 mg. Nesse estudo, o efeito antítumoral e a toxicidade dos três carbazóis contra tumores de câncer de cólon HCT-8 e HT29 foram comparados com tratamento que começava quando oO tamanho do tumor alcançava 150-200 mg (cerca de 7 dias após o transplante do tumor).
Materiais e métodos Animais. Fêmeas de camundongos atímicos nude (nu/nu, peso corporal de 22-25 g) com oito a doze semanas de idade foram obtidas de Harlan Sprague Dawley Inc. (Indianapolis, IN) e mantidas a cinco camundongos/gaiola com água e ração ad libitunm de acordo com um protocolo animal aprovado institucionalmente.
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Fármacos. Todos os três compostos foram formulados em hidroxipropilmetilcelulose 0,2% em concentrações de 0,5 7 mg/ml para o Exemplo 15, 3 mg/ml para o Exemplo 7 e 2,5 mg/ml para o Exemplo 13.
Tumores. Foram usados xenoenxertos de adenocarcinoma ileocecal humano HCT-8 e adenocarcinoma do cólon HT-29. Os xenoenxertos foram inicialmente estabelecidos por injeção subcutânea de 10º células cultivadas, e tumores foram passados por várias gerações por transplante de cerca de 50 mg de tumor não necrótico (2-3 pedaços) por meio de um trocar dos tumores de passagens quando os tumores chegam a 1-1,5 9.
Doses e posologia dos fármacos. Todos os compostos foram dados por administração oral (v.o.) na MTD, com oO Exemplo 15: 5 mg/kg/dia; Exemplo 7: 30 mg/kg/dia; e Exemplo 13: 25 mg/kg/dia, 5 dias por semana por 4 semanas (5 dias/semana x 5) ou até que o camundongo tivesse que ser sacrificado em função de um tumor grande. O tratamento foi iniciado 7 dias após transplante do tumor quando os tumores alcançavam 150-200 mg. Os camundongos no grupo de controle receberam o veículo (hidroxipropilmetilcelulose 0,2%) a 200 nl por 20 g de peso corporal do camundongo (mesmo que os grupos de tratamento). Cinco camundongos foram usados para cada grupo experimental com 10 tumores (1 tumor cada nos flancos esquerdo e direito).
Medidas do tumor. Dois eixos (mm) do tumor (L, eixo mais longo; W, eixo mais curto) foram medidos com o auxílio de um compasso de Vernier. O peso do tumor (mg) foi . estimado usando uma fórmula: peso do tumor = é (L x W2). As medições dos tumores foram feitas diariamente junto com o | tratamento com fármaco e 3-4 vezes por semana pós-terapia. : Avaliação da dose máxima tolerada (MTD) e da - toxicidade. A MTD foi definida como a maior dose de fármaco que não causava letalidade relacionada ao fármaco em camundongos com uma perda de peso de menos de 20% do peso corporal original e com toxicidades que fossem reversíveis. A cinética das toxicidades induzidas por fármaco (perda de peso corporal, diarréia e letalidade) foi determinada diariamente para os primeiros 10 dias após tratamento e a cada dois dias posteriormente.
Atividade antitumoral. A atividade antitumoral foi avaliada por inibição máxima do crescimento tumoral (MTRI), que é o peso médio do tumor do grupo tratado (MTWTG) comparado com grupo de controle não tratado (MTWCG) no mesmo ponto do tempo (MTRI = (MTWIG - MTWCG) + MTWCG x 100%). O tempo de duplicação do tumor (TDT) foi definido como o tempo médio para que o tumor alcance duas vezes seu peso inicial. A resposta do tumor foi expressa como resposta do tumor parcial (PR) quando o peso do tumor era reduzido pelo menos 50% do tamanho inicial do tumor, e resposta de tumor completa (CR) foi definida como a incapacidade de detectar tumor mediante palpação do local inicial de aparecimento do tumor.
Resultados (a) A atividade antitumoral e toxicidade do Exemplo 15, 7 e 13 em camundongos nude que abrigam xenoenxertos de HCT-8.
Os dados na tabela seguinte mostram a atividade antitumoral e toxicidade do controle de veículo, Exemplo 15, Exemplo 7 e Exemplo 13 administrados por v.o. 5 dias | com 2 dias de descanso (sem composto) por semana aos camundongos nude que abrigam xenoenxertos de HCT-8. Os ' dados indicam que os Exemplos 13 e 15 tiveram atividade antitumoral moderada contra xenoenxertos de HCT-8 com taxas inibidoras de 35-40% e crescimento tumoral retardado por 17% (Exemplo 13) e 57% (Exemplo 15), respectivamente, comparados com o controle de veículo (tempo de duplicação: 4,8 dias). Os quatro esquemas de tratamento planejados para os Exemplos 13 e 15 não foram completados por causa do grande volume tumoral que determinou que os camundongos fossem sacrificados. O Exemplo 7 foi bem mais ativo do que os Exemplos 13 e 15 contra xenoenxertos de HCT-8, com uma taxa inibidora de 65,9%, e um retardo de 142% do crescimento tumoral. O Exemplo 7 não produziu nenhum PR ou CR. Com relação à toxicidade, o veículo produziu toxicidade leve, com o grupo de animais de indivíduos com tumor de HCT-8 em esquema de 5 dias com composto e 2 dias sem composto por semana, por 2-4 semanas.
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2.
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MTRI: inibição máxima do crescimento tumoral; TDT: tempo de duplicação do tumor; PR: resposta do tumor ' parcial; CR: resposta de tumor completa; MWL: perda de peso máxima do peso corporal pré-tratamento. O grupo de controle recebeu hidroxipropilmetilcelulose 0,2% (veículo) a 200 ul por 20 g de peso corporal do camundongo. Cinco camundongos foram usados para cada grupo experimental com 10 tumores (nos flancos esquerdo e direito). (b) A atividade antitumoral e toxicidade dos Exemplos 15, 7 e 13 em camundongos nude que abrigam xenoenxertos de HT-29,. Os dados na tabela seguinte mostram a atividade antitumoral e toxicidade do controle de veículo, Exemplo 15, Exemplo 7 e Exemplo 13 administrados por v.o. 5 dias com 2 dias de descanso (sem composto) por semana aos camundongos nude que abrigam xencoenxertos de HT-29, que é mais resistente à maioria dos quimioterápicos, comparado com HCT-8. Os dados indicam que todos os três compostos foram mais ativos contra esse tumor do que HCT-8. Similarmente, o Exemplo 13 foi o composto menos ativo entre os três, com taxas inibidoras de 48% e crescimento tumoral retardado por 50% (o tempo de duplicação do tumor para o controle foi de 7,8 dias). Embora o Exemplo 15 tenha produzido inibição do crescimento tumoral similar (58%), ele teve pouco efeito sobre o retardo do crescimento tumoral (retardo de 76% vs. 122%), comparado com o Exemplo
7. Nenhum PR ou CR foi produzido pelos três agentes, Com relação à toxicidade, os Exemplos 7 e 13 produziram menos perda de peso corporal, O Exemplo 7 foi mais tóxico no experimento de HT-29, comparado com o experimento de HCT-8, | com 18% de perda de peso e 40% de letalídade. ' Tabela: Atividade antitumoral e toxicidade dos Exemplos 15, ” 7 e 13 em camundongos nude que abrigam xenoenxertos de adenocarcinoma do cólon humano HT-29,.
ESSESCNCRREPENROS Tratamento
MTGI TDT PR CR mb ne ee ee (%) (dia) (%) (%) = ET E de veículo 0,8 4,2 Tue e (5) 6,4 2,3 6,8 bb E (30) 17,4 4,8 5,1 Em bob 1 Et 13(25) 6,7 1,2 2,2 MTRI: inibição máxima do crescimento tumoral; TDT: tempo de duplicação do tumor; PR: resposta do tumor parcial; CR: resposta de tumor completa; MWL: perda de peso máxima de peso corporal pré-tratamento. O grupo de controle recebeu hidroxipropilmetilcelulose 0,2% (veículo) a 200 pl por 20 gq de peso corporal do camundongo. Cinco camundongos foram usados para cada grupo experímental com 10 tumores (nos flancos esquerdo e direito). Conclusão Em conclusão, os Exemplos 15 e 13 mostram atividade antitumoral moderada, enquanto o Exemplo 7 teve melhor eficácia antitumoral contra xenoenxertos tanto de HCT-8 quanto de HT-29; O Exemplo 15 foi mais tóxico do que os Exemplos 7 e 15 no estudo de HT-29; |
Diferentemente da resposta à maioria dos outros quimioterápicos, os xenoenxertos de HT-29 foram mais sensíveis a todos os três carbazóis, comparado com a resposta observada com xenoenxertos de HCT-8; Os dados mostram que o Exemplo 7 é um composto preferido contra xenoenxertos tanto de HCT-8 quanto de HT-
29.
Em outro experimento, foi demonstrada a atividade antitumoral do Exemplo 7 em um modelo murídeo de neuroblastoma. Os camundongos transgênicos N-myc (TH-MYCN) carregam o oncogene humano N-myc sob o controle de um promotor de tirosina hidroxilase, que é expresso em células neuroectodérmicas durante o desenvolvimento inicial, e os camundongos desenvolvem um equivalente murídeo de neuroblastoma humano, Esses camundongos provaram que são um excelente modelo que compartilha várias características importantes com a doença humana, incluindo local do tumor e suas metástases, a histologia do tumor, coloração positiva para proteínas marcadoras associadas ao neuroblastoma, a presença de sinapses e grânulos neurossecretores, ganhos e perdas de cromossomos em regiões sintênicas com aqueles observados no neuroblastoma humano, e a amplificação do número de cópia de N-myc especificamente nos tumores que se desenvolvem.
A quimioterapia moderna aumentou dramaticamente as taxas de sobrevida para muitos cânceres. No entanto, o desenvolvimento de resistência a multifármacos no ambiente clínico para neuroblastoma é uma das principais causas de fracasso do tratamento, e a prevenção da resistência a multifármacos possui enorme potencial clínico. Fármacos que | visam novas vias não implicadas previamente no neuroblastoma poderiam fornecer um novo caminho para os y protocolos de tratamento. Os resultados do teste mostraram que o composto do Exemplo 7 possui uma atividade antitumoral notável nesse modelo de neuroblastoma, embora doses elevadas tenham se mostrado tóxicas em alguns camundongos. Os camundongos tratados com 30 mg/kg do Exemplo 7 perderam peso rápida e inesperadamente (2 gq de um dia para o outro em alguns casos) ée foram encontrados mortos com baços pequenos e sinais de desidratação. Os camundongos que sobreviveram à terapia estavam sem tumor por um período que se estende de a 47 dias; no entanto, todos os camundongos não foram tratados de acordo com à mesma posologia. As doses foram 15 alteradas de acordo com à perda de peso, Com base nos resultados, o Exemplo 7 exibe boa eficácia no modelo de TH- MYCN de neuroblastoma.
A quimioterapia moderna aumentou dramaticamente as taxas de sobrevida para muitos cânceres. No entanto, o desenvolvimento de resistência a multifármacos no ambiente clínico para neuroblastoma é uma das causas principais de fracasso do tratamento, e a prevenção da resistência a multifármacos possui enorme potencial clínico. Fármacos que visam novas vias não implicadas previamente no neuroblastoma poderiam fornecer um novo caminho para os protocolos de tratamento.
A administração diária do Exemplo 7 também evita O surgimento do tumor em um modelo de camundongos transgênicos MMTV-neu de cancerogênese mamário.
O câncer de mama (BC) é um problema de saúde sério em | função da incidência elevada dessa malignidade e do sucesso limitado dos tratamentos disponíveis. Sabe-se que a Í história familiar dessa doença, juntamente com vários fatores genéticos específicos com grau substancial de probabilidade, predispõe as mulheres ao BC. Portanto, mulheres de grupos de risco elevado para BC teoricamente podem se beneficiar de uma terapia preventiva anti-BC. Os presentes compostos de carbazol podem modular diversas vias celulares relacionadas ao câncer em uma direção que leva à supressão do crescimento tumoral.
O composto do Exemplo 7 não causa efeitos colaterais sérios em camundongos quando administrado em doses terapêuticas (20-25 mg/kg), O Exemplo 7 não mostrou nenhuma atividade mutagênica no ensaio de Ames. Nesse estudo, o Exemplo 7 foi testado como um agente preventivo para BC em camundongos.
Modelo animal: Fêmeas de camundongos MMTV-neu com base na cepa FVB expressam proto-oncogene Her2 não ativado sob o promotor de MMTV responsivo ao estímulo de estrogênio. Os camundongos desenvolvem tumores mamários espontâneos àa partir de 24 semanas de idade com 70-80% dos animais normalmente desenvolvendo tumores por volta dos 10 meses de idade. Os objetivos desse teste foram: (a) comparar incidência de tumor em camundongos tratados com Exemplo 7 vs. controle de veículo (água), e (b) comparar o ganho de peso e aparência geral de camundongos tratados com o Exemplo 7 vs. controle de veículo.
Design do estudo: 40 fêmeas de camundongos foram desmamadas de seus progenitores com 21 dias de idade e colocadas em gaiolas separadas (4 camundongos/gaiola).
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Nesse momento, os camundongos foram rotulados é designados aos grupos de tratamento ou de controle (20 camundongos em ' cada), O peso corporal em ambos os grupos foi medido uma vez por semana.
A partir de 4 semanas de ídade, os camundongos do grupo de tratamento receberam água contendo o Exemplo 7. O consumo de líquido nos grupos de tratamento e de controle foi estimado a cada dia.
Com base nessas medidas, o consumo de líquido por grama de peso de camundongo foi calculado, e a concentração do Exemplo 7 na água de beber foi ajustada a uma dose terapêutica desejada.
Soluções frescas do Exemplo 7 foram preparadas semanalmente.
Os camundongos foram monitorados uma vez por semana quanto à formação de tumor pela palpação de glândulas mamárias.
Os camundongos foram sacrificados em um momento quando o tamanho cumulativo do tumor alcançava oO volume de 1.000 mmº. ne Jo Dose visada Modo de liberação camundongos E ee 1 20 Nenhuma (água) líquido diária pe Ens Ae O ? do Exemplo 7 líquido diária
Resultados preliminares: Camundongos do grupo de tratamento estavam consumindo o Exemplo 7 em uma taxa média de 20 mg/kg diariamente.
A variabilidade é causada por precisão limitada da liberação de fármaco por meio da água de beber, Nenhuma diferença entre o grupo de tratamento e de controle foi observada na distribuição de peso ou anormalidades da aparência do animal.
Ao longo do experimento, ocorreram várias mortes
| espontâneas nos grupos de tratamento e de controle. A causa da morte não era clara, pois os animais não tinham tumores ' e o exame patológico macroscópico post-mortem não mostrou anormalidades óbvias. Nenhum dos camundongos morreu antes de várias semanas após o início da administração do Exemplo
7. Durante o teste, três camundongos de controle morreram em uma idade de cerca de 15, 41 e 42 semanas, respectivamente. Sete camundongos morreram no grupo do Exemplo 7 em diferentes idades, que variam de 12 a 45 semanas (de 7 a 41 semanas desde o início do tratamento experimental).
Vinte e um e 19 camundongos atingiram a idade de presença do tumor nos grupos de controle e de tratamento, respectivamente. Entre eles, um tumor se desenvolveu em 14 (67%) dos camundongos de controle e 7 (37%) dos camundongos que receberam o Exemplo 7.
Esse teste mostrou que: (a) administração crônica do Exemplo 7 com água de beber a cerca de 20 mg/kg por dia não causou alterações no peso corporal do camundongo; (b) uma taxa de morte mais elevada no grupo tratado com Exemplo 7 versus grupo de controle, mas a diferença não era estatisticamente significante e não havia correlação entre duração e período de tratamento e morte de camundongos; e (ce) uma taxa de carga tumoral menor entre camundongos tratados com Exemplo 7 versus animais de controle, Os compostos de carbazol da presente invenção também exibem atividade antiparasitária. Em particular, o efeito de compostos de carbazol no parasita da malária foi testado | por cultivo de Plasmodium falciparum (cepa D10) in vitro na presença ou ausência de compostos de teste. Compostos , ativos e inativos de carbazol (com relação à ativação de p53) foram selecionados para testes, bem como quinacrina, um agente antimalárico convencional. A Tabela 3 resume as estruturas dos compostos, junto com seus valores de EC:x, no ensaio de ativação de p53. Tabela 3. Compostos de teste ... Exemplo 2 É > 0,64 "mo omposto 400 + Inativo é. 7 - ” Exemplo 7 DS lo, 37 e É "”
E Composto 500 Y 7 Inativo
SS hh ae
À Exemplo 18 Í 7”
Pl ' Quinacrina o Aproximadamente 5 alunções O Exemplo 2, o Composto 400 e o Exemplo 7 foram testados em concentrações de 29, 57 e 143 nM, O Composto 500, o Exemplo 18 e quinacrina foram testados apeénas à 143 nM.
Em cada experimento, 1.000 eritrócitos foram avaliados microscopicamente para determinar o número de células infectadas. Em experimentos de controle (sem compostos de teste adicionados ou PBS adicionado), a percentagem de células infectadas variou entre 1,6% e 6,4%. Os índices de redução da infectividade determinados no estudo são mostrados na Fig. 12. A potência do ensaio de ativação de p53 estava nitidamente, mas indiretamente, correlacionada com a inibição de Plasmodium falciparum in vitro. Três compostos ativos no ensaio de ativação de p53 (Exemplos 2, 7 €18) demonstraram atividade antimalárica comparável à da quinacrina. Compostos inativos no ensaio de ativação de p53 (Compostos 400 e 500) não mostraram redução da parasitemia.
Os compostos dos Exemplos 7, 13 e 15 também mostraram atividade antiprotozoário. A tripanossomíase africana humana (HAT) ou “doença do sono” é uma das infecções tropicais mais importantes, mas igualmente mais negligenciadas. Ela é causada por um protozoário, Trypanosoma brucei, que é transmitido aos seres humanos por meio da picada de uma mosca tsé-tsé (Glossina spp). Embora praticamente eliminada nos anos 60, HAT reapareceu em | escala epidêmica em diversas áreas subsaarianas habitadas ] pela mosca tsé-tsé.
De acordo com a Organização Mundial de - Saúde, cerca de 500.000 pessoas carregam atualmente tripanossonmos e morrerio se não tratadas.
A alta mortalidade associada à HAT é causada, pelo menos em parte, por uma ausência de fármacos eficazes que possam ser facilmente administrados.
Os fármacos atualmente usados para tratar HAT são antigos, tóxicos e de difícil administração no campo.
Suramina e pentamidina, que são usadas para tratar a doença em estágio inicial, devem ser injetadas em uma clínica.
No entanto, Oo acesso à clínicas de saúde é incomum nas áreas rurais da África onde a doença é endêmica.
Além disso, muitos pacientes em estágio inicial não procuram tratamento, pois não têm ciência de que estão infectados.
Isso é causado por seleção deficiente em populações de risco, bem como pela natureza variável, intermitente e relativamente leve dos sintomas de HAT em estágio inicial.
Quando surgem sintomas óbvios, os pacientes fregqúentemente já estão no estágio avançado da doença.
O tratamento de HAT em estágio avançado é especialmente problemático, pois envolve a injeção de melarsoprol, uma substância arsênica que literalmente queima os pacientes na injeção.
Esse tratamento é tão doloroso que muitos pacientes recusam tratamento e devem ser fisicamente contidos e forçados a receber a medicação, Além disso, melarsoprol possui efeitos colaterais adversos significantes que resultam na morte de 5-20% dos pacientes tratados.
Por essas razões, bem como pelo problema esperado de resistência farmacológica, há uma necessidade urgente de criar uma linha de novos fármacos,
| oralmente .biodisponíveis, para ocupar o lugar das medicações antiquadas atuais. ] Testes demonstraram que os compostos dos Exemplos 7, 13 e 15 possuem atividade anti-T, brucei acentuada (ICs, nanomolar baixa) in vitro.
Foram feitos experimentos preliminares de inativação de T. brucei in vitro.
O ciclo de vida de T. brucei envolve um estágio de desenvolvimento “pró-cíclico” em uma mosca tsé-tsé, e uma forma da “corrente sangiínea” em humanos.
Todos os estudos foram realizados com o estágio da corrente sangúínea do parasita, pois esse é o estágio do desenvolvimento que causa a doença.
Para avaliar as atividades antitripanossomo relativas dos Exemplos 7, 13 e 15, e para determinar a concentração de cada composto que matava 50% dos parasitas (ICs), T. brucei foi exposto a uma gama de concentrações de composto, Suramina, um fármaco anti-HAT convencional, foi usado como um controle positívo.
T. brucei da corrente sangúínea foi semeado (3 x 10º células/ml) em uma placa de 24 poços (500 pl do meio por poço). As concentrações dos compostos (0-200 nM para o Exemplo 7, 0-20 nM para o Exemplo 13 e 0-3 nM para o Exemplo 15) foram adicionadas às células (culturas em duplicata). Culturas de cultura receberam volumes iguais de DMSO.
Todos os três compostos de teste eliminaram completamente T. brucei, já que nenhum parasita foi detectado após 48 horas de cultura na presença dos fármacos.
Culturas de controle tratadas com DMSO (veículo) continham parasitas em uma densidade de 3 x 10º/ml.
A atividade tripanocida aumentou na ordem: Exemplo 7 | menos do que o Exemplo 13, que é menos do que o Exemplo 15, com valores de ICºº de cerca de 43 nM, cerca de 6-11 nM e ' cerca de 0,5 nM, respectivamente. A ICs, de suramina é maior do que 300 nM.
Portanto, os compostos da presente invenção são excelentes para o desenvolvimento como fármacos tripanocidas.
O composto do Exemplo 15 foi testado quanto àã atividade contra diferentes cepas de fungos. O teste de suscetibilidade in vitro do Exemplo 15 foi feito pelos métodos de CLSI M27A3 e M38A2 para 31 cepas fúngicas clínicas e laboratoriais. Em geral, as cepas selecionadas demonstram diferentes padrões de suscetibilidade para os fármacos antifúngicos atuais. Para avaliação do Exemplo 15, 8 cepas de Aspergillus spp., 21 de Candida spp., 1 de Cryptococcus neoformans e 1 de Debaryomyces hansenii foram testadas.
Cepas de Aspergillus spp.: Oito cepas de Aspergillus spp. foram usadas ao longo do estudo. Seis cepas de A, fumigatus, uma de A. flavus e uma de A. terreus também foram usadas. O grupo de A. fumigátus incluiu duas cepas resistentes ao itraconazol (cepas RIT13 e RITS) (1), uma cepa com resistência cruzada ao triazol (MUT10) (2, 3), uma cepa com resistência cruzada à equinocandina (EMFRS678P) (4) e 2 isolados suscetíveis do tipo selvagem (R21 e ATCC13073). As cepas “não fumigatus" eram suscetíveis a todos os antifúngicos disponíveis, com exceção do isolado de A. terreus (naturalmente menos suscetível à anfotericina EB) (5).
Cepas de Candida spp.: 20 isolados clínicos de Candida |
Spp. e uma cepa de laboratório de controle (C. albicans SC5314) foram usados no estudo. Na coleção foram incluídos: ' Cinco isolados de C. albicans, dois isolados da cepa do tipo selvagem (SC5314 e ATCC 36082), um isolado resistente à equinocandina (M205) (6), e dois isolados clínicos resistentes ao fluconazol (3795 e 3184) (7).
Três cepas de C. krusei, 1 cepa ATCC de controle (controle ATCC 6258 CLSI), e 2 cepas clínicas isogênicas (98 e 100). 100 possui resistência cruzada à equinocandina (8, 9).
Duas cepas de C. glabrata, uma cepa clínica do tipo selvagem (3168), e um isolado com resistência cruzada à equinocandina (3830) (10).
Duas cepas de C. tropicalis, uma cepa ATCC de controle (ATCC 750), e uma com resistência cruzada à equinocandina (T3) (11), Duas cepas de C. dubliniensis, uma cepa do tipo selvagem (3949) e à outra com efeito paradoxal de equinocandina (M204).
Quatro cepas de Candida spp. com suscetibilidade à equinocandina naturalmente reduzida (12): 1 Cc. orthopsilosis (981224), 1 C. metapsilosis (2006-113), C. parapsilosis (controle ATCC 22019 CLSI) e C. guilliermondii (ATCC6260) (13).
Outras Candida spp. e gêneros: 1 C. rugosa (M83), 1 C. lipolitica (M159), C. lusitaniae (200450), 1 Cryptococcus neoformans (499), e 1 Debwyomyces hansenii.
Teste de suscetibilidade: O teste de suscetibilidade in vitro do Exemplo 15 foi feito usando os métodos padronizados de CLSI para levedura (M27A3) (14) e para | bolores (M38A2) (15). As leituras da MIC (concentração inibidora mínima) foram realizadas em 24 e 48 horas.
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Suscetibilidades de Aspergillus spp. ao Exemplo 15: As i cepas de A, flavus e A, terreus são mais sensíveis ao ' Exemplo 15 do que as cepas de A. fumigatus (Médias geométricas da MIC 24 h: 0,40 e 1,59 pM, respectivamente). Além disso, não houve diferenças da MIC entre cepas suscetíveis e resistentes ao azol ou equinocandina (Tabela 1). Suscetibilidades de levedura ao Exemplo 15: Não houve diferenças da MIC no Exemplo 15 entre isolados resistentes Ou suscetíveis ao azol ou à equinocandina.
Na média, as MICsS de leveduras foram 8 vezes mais baixas do que a MIC de Aspergillus spp. (Tabela 1). As MICsS obtidas para o Exemplo são compatíveis ou melhores do que as MICs para fármacos antifúngicos convencionais.
Cepas resistentes ao azol e à 15 equinocandina são sensíveis ao Exemplo 15. Efeito do Exemplo 15 sobre a viabilidade de Aspergillus fumigatus: A atividade antifúngica do Exemplo 15 na cepa Af293 de A. fumigatus usando o ensaio de viabilidade XTT foi avaliada.
Essa cepa foi selecionada porque é uma das cepas mais bem caracterizadas e foi a cepa usada para o sequenciamento do genoma de A. fumigatus.
O ensaio de viabilidade XTT se baseia na redução do sal de tetrazólio (XTT) na presença de menadiona como um agente de eletroacoplamento.
Há um relacionamento entre o número de fungos viáveis e a quantidade de redução de XTT (16). Métodos Foram usados os mesmos métodos descritos previamente na realização do ensaio de XTT (17). Conídios de Af293 foram colocados em rampas de Sabouraud BHI com cloranfenicol e gentamicina (Becton "—" Dickinson, MD), | incubados por 7 a 10 dias em temperatura ambiente, e coletados por lavagem da rampa com 10 ml de Tween 20 0,05% + em soro fisiológico (NS). A suspensão de conídios foi então passada através de um filtro de 100 pm, contada em um hemocitômetro e diluída até 2,0 x 10º CFU/ml.
Os conídios foram então diluídos 1:50 em RPMI tamponado com MOPS (ácido morfolinopropanossulfônico) (pH 7,0). Uma solução de estoque do Exemplo 15 dissolvido em DMSO foi usada.
O Exemplo 15 foi diluído em RPMI tamponado com MOPS (pH 7,0) (concentração final de DMSO: 2% antes da adição às suspensões fúngicas), Após a adição de meio com fármaco à cada poço, a suspensão de conídios (100 pl) foi adicionada (t = 0 h). Os poços de controle continham conídios, meio e veículo sem fármaco.
Os poços em branco consistiam somente em meio, sem conídios.
Um experimento inicial usando uma ampla gama de concentrações do Exemplo 15 sem fungo adicionado mostrou que o reagente do Exemplo 15 não afetou a densidade óptica no ensaio de XTT.
As placas foram incubadas a 37ºC, e o ensaio de XTT foi realizado em 24 h, basicamente como descrito previamente (16), mas com uma pequena adaptação, Uma solução de estoque de XTT (Sigma Chemical, St.
Louis, MO) foi dissolvida em NS (1 mg/ml). Uma solução de 10 mM do agente de eletroacoplamento menadiona (Sigma Chemical) foi preparada em acetona e depois diluída 1:10 em NS.
Uma solução de trabalho que consiste em 4,0 ml de XTT e 0,5 ml de menadiona foi preparada imediatamente antes do uso.
Cinqúenta microlitros da solução combinada foram adicionados a cada poço, e as placas foram incubadas por 2 h a 37ºC.
Cem microlitros do sobrenadante foram transferidos para uma nova placa, e a | densidade óptica a 450 nm (OD's.) foi determinada pela utilização de uma leitora de placas Labsystems Multiskan : Plus. As concentrações finais de XTT e menadiona em cada poço foram de 200 pg/ml e 25 pM, respectivamente.
O Exemplo 15 teve atividade antifúngica contra Af293. A ICsy foi de aproximadamente 2,5 pM. A supressão completa do crescimento fúngico ocorreu em concentrações do Exemplo 15 acima de 12,5 uM, com base na inspeção visual dos poços.
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Os compostos de carbazol da presente invenção também exibem atividade antibacteriana. Em particular, o efeito de compostos de carbazol da presente invenção sobre bactérias gram-positivas (Bacillus subtilis) e gram-negativas (DH5-a) foi determinado pelo procedimento seguinte, e está resumido nas Figuras 13a e 13b.
Teste in vitro para avaliar o efeito de compostos de carbazol sobre bactérias gram(-) e gram(+).
Equipamento - Leitora de placas de 9 poços (por exemplo, Multiscan, LabSystems, Inc), - Pipeta multicanal de amplitude de 50-300 pl.
- Ponteiras de filtro.
- Placas de 96 poços (Corning Costar Nº de Catálogo: 3598).
- Placas de Petri de 100 mm.
- Alças de inoculação estéreis de 1 pl (Fisher 22-170- 209).
- Tubos de fundo redondo snap-cap de 14 ml (Falcon |
352059). Materiais ' - DH5-a (E. coli - bactérias gram(-)). - Bacillus subtilis (gram(+) bactérias) ). - Ágar Difco LB (BD 244510 - para DH5-a) - Caldo Difco LB (BD 244610 - para DH5-a). - Caldo Nutriente Difco (BD 233000 - para B&B. subtilis). - Ágar Nutriente Difco (BD 212000 - para B. subtiílis).
Método Preparação de reagentes Para preparar as placas para o crescimento de DH5-a, combinar 40 gq de ágar Difco LB por 1 litro de água MilliOQ. Autoclavar no ajuste de líquido. Quando O vaso que contém a solução estiver resfriado, derramar em placas de Petri de 100 mm e deixar as tampas ligeiramente descentradas para evitar a formação de umidade à medida que oO ágar se gelifica. Estourar as bolhas que se formam antes do ajuste de ágar. Armazenar a 4ºC, Para preparar meio para o desenvolvimento de DH5-a, combinar 25 gq de caldo Difco LB por 1 litro de água Millio. Autoclavar no ajuste de líquido para esterilizar.
Para preparar as placas para o crescimento de B. subtilis, combinar 23 g de ágar nutriente Difco por 1 litro de água MilliQ. Autoclavar no ajuste de líquido. Quando o vaso que contém a solução estiver resfriado, derramar em placas de Petri de 100 mm e deixar as tampas ligeiramente descentradas para evitar a formação de umidade à medida que o ágar se gelifica. Estourar as bolhas que se formam antes do ajuste de ágar. Armazenar a 4ºC.
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Para preparar meio para o crescimento de B. subtilis, combinar 8 g de caldo nutriente Difco por 1 litro de água ' MilliQO.
Autoclavar no ajuste de líquido para esterilizar, Preparação de bactérias Dois dias antes do início do ensaio de citotoxicidade, inocular DH5-a e BB. subtilis em 1 ml de meios correspondentes de estoques de glicerol.
Permitir o crescimento ao longo do dia a 37ºC com agitação, Raspar cada bactéria nas placas de ágar apropriadas usando uma alça de inoculação estéril e permitir o crescimento de um dia para o outro a 37ºC na incubadora de bactérias.
Usando uma alça de inoculação estéril, pegar uma única colônia de bactérias e inocular 5 ml dos meios correspondentes em um tubo com tampa de encaixe de 14 ml.
Crescer de um dia para o outro (aproximadamente 16 h) a 37ºC com agitação.
No dia seguinte, medir a ODswo nm da cultura para assegurar que as bactérias estão em crescimento exponencial (ODsoo nm = 0,4-0,8). Ensaio de citotoxicidade (TI) Diluir culturas de 5 ml de DH5-a e B. subtilis até uma OD;oo nm de 0,002, que corresponde a cerca de 2 x 10º células/ml em um volume suficiente para o experimento (dependente do número de placas). Plaquear 50 pl em cada poço de X placas de 96 poços (X = À placas necessárias para certo experimento). Os compostos serão adicionados às placas em diluições de 3 vezes de 0,005-50 pM de acordo com a Tabela 2. As substâncias químicas para o teste são preparadas | por diluição de soluções de estoque em Caldo LB ou Caldo Nutriente para estudos de DH5-a e B. subtilis, : respectivamente. As células são tratadas com as concentrações químicas finais apresentadas no esquema abaixo (Tabela 2), As soluções de estoque são constituídas em DMSO. Tipicamente, as substâncias químicas são formadas como soluções de estoque de 20 mM. No entanto, essa concentração é dependente da solubilidade de certa substância química, e as concentrações reais do estoque devem ser anotadas no momento do experimento.
|
[es] s ss [a ss | ss . 7 vv a na nn 7 a a Do r rm mr E rm r r ' Ss o o o vo o vv o ww = o o o o vo o v vv à Hs A no H Fo n" ns Ho & o v o vw o v na nn mn n n nn FP) À n o no " o o o 4 nn o o o 1 o 1n n rn co o o o co co co o 4 q H Hs H H H H H H al nn n o mn non o 1n nn el qn a ns qo E ES es sn 7) 8 q - HF H H Hs s H CNS rm rm 5 r r r r W 7 H H H H | H H H | x ) o o o o o o o ú o o o o o o o o - nn) v v o o o v o o ol ., o o o o o o o o 6 qW qn qn o s q ns q S 8 o f=) o o o o o o v El v v vw Fe o o o o o o oo o co co o co co H o o vo vo o o o o 8 o o o o o o o o o NS - A > ã. > - - - 8 Ss o o o o o o o o q K a a o E) a o a a 8 q Ns a o o ES NR Ns o o a o o 5 o o o o o oe o o o o o o ml 8 “ - - - - - - - 7 o o o e o o o o o SS nn ns os o o a os q n v v o o o o o nv à o Dr r [o rm Da DD Dm r ul & o o o o o o o o FI: o o =) o o o o o & Ú o o o o o o So o o aj. 488 o 9 Al go m 7 7 o o = = 4/ O do [=] (=) 3 o v o o o o o o e Es) “ ke) fo] ” ” ke! ke v “ “ “ = «“ E “ E 8/2 5/2 5/27 S1E 8 /ER 8/8 8 o A À A A A A A EIS HS AS Gs gos gs Ss 4 Ss Re úola sle sle Sis So sie dl e & 4 37 85 82 81 85 8 O 815 81 n/d nlo à o o o o o o o m|/ 6 djs & S Ss &S &S Ss SS EêS JO mb A Spa 00/84 ls ds 0) sm 0/84 0) - = = < >< = = NM Nm A : : : : . o a a 1 a om a A | Ê& Ê E E E E É E o o o o O o o o Rn o U Uv UV O U Uv DU
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Cada substância química da biblioteca a ser testada necessita de 2 fileiras de uma placa de 96 poços e, dessa " forma, 4 substâncias químicas (por exemplo, W, X, XY, Z) podem ser testadas em uma placa simultaneamente, Além das substâncias químicas de teste, cada placa deve incluír controles positivos e negativos, Como controle positivo, é usada ampicilina a 100 pg/ml. Como controle negativo, é usado DMSO em uma quantidade igual ao maior volume de composto de teste usado (DMSO aproximadamente 0,25% para 50 UM).
As diluições de substâncias químicas a serem adicionadas à placa são constituídas como concentrações de 2X em meios de bactérias apropriados e adicionadas aos poços correspondentes em um volume de 50 ul.
As substâncias químicas são diluídas em meios de bactérias apropriados por diluições seriais de três vezes partindo de 50 1uM (por exemplo, 2X da maior concentração (por exemplo, 50 uM) = 100 UM). São necessários 300 pl da maior concentração de 2X a fim de usar 1/3 para fazer a 1* díluição e 200 pl de meio para todas as diluições subsequentes. Cem ul da maior concentração de 2X são misturados com 200 pl de meios e depois 100 ypl da primeira diluição são misturados com 200 pl de meios para produzir a diluição seguinte. Esse processo é repetido até que todas as 10 doses de 2X sejam preparadas.
Além de um controle positivo adicionado em uma concentração em cada placa, o controle positivo de ampicilina é adicionado a cada rodada do ensaio em uma faixa completa de concentrações (diluições de 3 vezes) para assegurar um desempenho adequado e robusto do ensaio |
(estimado por comparação de curvas de dose-resposta entre rodadas). Após a adição de compostos de carbazol às placas de 96 poços contendo bactérias, as placas são transferidas à incubadora de bactérias a 37ºC por 48 horas.
Após à incubação, a OD«wo mm para cada poço das placas de 96 poços será medida.
Análise de dados A ODsog nm média das soluções de composto de teste é comparada com aquela do controle de DMSO por divisão da ODsoo nm média da solução de teste por aquela do controle de DMSO e multiplicando-se por 100 para produzir o % de controle de DMSO (ou seja, % de citotoxicidade). O % de controle de DMSO é tabulado VS. concentração de composto para gerar curvas de formato sigmóide.
Após o término de três rodadas, os dados brutos para todas as três rodadas são usados para cálculos de ICso.
Os resultados do teste mostraram que os compostos de carbazol dos Exemplos 15, 7, 4, 12, 13, 17 e 18 e o Composto 18c-1 demonstraram um efeito antibacteriano contra B. subtilis e E. coli HB 101 em uma gama de potências.
Bactérias Gram(+) pareceram mais sensíveis aos presentes compostos de carbazol.
Além disso, vários dos compostos de carbazol, por exemplo, Exemplos 15 e 17, foram mais eficazes contra bactérias do que o controle de ampicilina.
Os presentes compostos de carbazol, portanto, demonstram uma atividade antibacteriana definitiva. |

Claims (1)

  1. - REIVINDICAÇÕES os 1. Composto caracterizado por ter uma fórmula o. estrutural: o x RR o " H IA" R? N Ró Rô (CH), Rº HOR? -N Rº CRI ; em que Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cie alquil, Ci; haloalquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, ORº, N(Rº), e SRº; alternativamente, Rº e R' ou NRº e R', juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico ou heterocíclico de cinco ou seis membros;
    Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-s alquil, Cas haloalquil, cicloalquil, heterocicloalquil,
    aril, heteroaril, ORº, N(R), e SRº, alternativamente, Rº e Rº ou NRº e Rº, juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco ou seis membros ou um anel alifático carbocíclico ou heterocíclico de cinco ou seis membros;
    Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alqauil, C1-6 hidroxialquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril e C(=O)Rº, ou Rº e Rº são tomados em conjunto para formar um anel alifático de cinco, seis ou sete membros, contendo opcionalmente um átomo de oxigênio;
    . Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, 1 Cie alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, Do heteroaril e C(=O)Rº, ou Rê e R', juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou Seis membros; Rº, independentemente, é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-6s alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril e heteroaril, ou dois grupos Re, tomados em conjunto com um nitrogênio ao qual estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros; RR, RE, RR, R, Rº e Rº, independentemente, são selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, Ce alquil, cicloalquil, heterocicioatauil, aril, hetercoaril, halo, OR, C(=O)R, C(=0)OR, OC(=O0)R', C(=O)N(Rº)2, C(=O) NR'SO2Rº, NR Jo, NRºC(=O0)Rº, RºC(=O)N(Rº)2, CN, NOz, CF3, OCF3, SRº, SORº, SO2Rº, SO2N(Rº)2 e OSO2CF3; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cis alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril e heteroaril; e n é O, 1, 2, 3, 4 0u 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
    2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto possui uma fórmula estrutural geral (Ia): | 30
    $/02 to o R E o " "
    Ê OO R? N Ró pio Re! (Cada HOR? ge So ga em que Rº é C1;3 alquil, Cria haloalquil, C3s cicloalquil, N(Rº), ou OR, ou Rº e R', juntos com os átomos de carbono ao qual estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco ou seis membros; Rº é Cia alquil, Cia haloalquil, C3-s cicloalquil, NIRO ou OR", ou Re Rº, juntos com os átomos de carbono ao qual estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco ou seis membros ou um anel alifático de cinco ou seis membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é Ci alquil, Cas cicloalquil ou C1-3 hidroxialquil; Rº é hidrogênio, Ci, alquil ou Css cicloalquil, ou Rº e R', juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros contendo um átomo de nitrogênio, ou Rº e Rº são tomados em conjunto para formar um anel alifático de seis ou sete membros, contendo opcionalmente um átomo de oxigênio; Rº, independentemente, é hidrogênio ou C1-; alquil; R' é hidrogênio ou C1-; alquil; R? é hidrogênio, hidróxi ou C1-3 alcóxi; Rº e Ri, independentemente, são hidrogênio ou C1;3 alquil; Rº é hidrogênio, hidróxi, C1-; alcóxi ou halo;
    . Rº é hidrogênio, C1-; alquil, C1-3 alcóxi ou halo; : R é hidrogênio ou C1-3 alquil; e WO ne0,1,2,3,14015, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
    3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto possui uma fórmuia estrutural geral t1D): qt ER e Cc. " O O á R? v se R Rº (Cen HC-R?
    N Rº CRI : em que Rº é metil, etil, n-propil, ciclopropil, NH(CH;) ou OCH3, ou Rº e R', juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco membros; Rº é metil, etil, n-propil, ciclopropil, NH(CH;) ou OCH3, ou Rº e Ró, juntos com os átomos de carbono aos quais estão anexados, formam um anel alifático carbocíclico de cinco membros ou um anel alifático de cinco membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é metil, etil, n-propil, isopropil, ciclobutil ou 2-hidroxietil; Rº é hidrogênio, metil, etil ou ciclobutil, ou R' e R', juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco membros contendo um átomo de
    .: nitrogênio; ou Rº e Rº são tomados em conjunto para formar Y uma porção morfolino; uma porção tetrahidrofuril; uma MO porção piperidinil; ; ú uma porção O , mM Y dao OU Uma porção 7 R' é hidrogênio; Rº é hidrogênio, hidróxi ou metóxi; Rº e Rº são hidrogênio; Rô é hidrogênio, hidróxi, metóxi ou flúor; Rº é hidrogênio, metil, metóxi ou flúor; R' é hidrogênio; e nélouz?, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
    4. Composto caracterizado por ter uma fórmula estrutural: Rº Rá ON : i NO; Ro N Ri? j RU (CH), Rº 1 çaRº -N
    RÚOORI em que Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cris alquil, cicloalquil, heterocicloalquil,
    : aril, heteroaril e C(=O)R', ou Rº e Rº são tomados em oo conjunto para formar um anel alifático de cinco, seis ou A sete membros contendo opcionalmente um átomo de oxigênio; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cree alquil, cicloalquil, heterocicioalgauii, aril, hetercoaril e C(=O0)R", ou Ré e Rº, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros; R", independentemente, é selecionado do grupo que 140 consiste em hidrogênio, C1-6 alquii, cicloalquil, neterocicloalquil, aril e heteroaril, ou dois grupos R", tomados em conjunto com um nitrogênio ao qual estão anexados formam um anel alifático de cinco ou seis membros; Rº é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,
    15. Cie alquil, cicloalauil, heterocicloalquil, aril e heteroaril; Rº, Rº, RU, Rº, RU e RU, independentemente, são selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquil, cicloalquil, heterocicloalquil, aril, heteroaril, halo, OR, C(=0)R, C(=0)OR, OC(I=O)Rt, C(=O)N(R")2, C(=O)NRISOR, NR), NRºC(I=O)R", NR"C(=O)N(R")2, CN, NOz, CF3, OCF3, SR, SOR”, SOXR", SOXN(R")2 e OSO2CF3; l pel 1,2, 53,405, desde que, quando p for 2, um de Rº e Rº seja diferente de etil, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
    5. Composto, de acordo com à reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o composto possui uma fórmula estrutural geral (ITa):
    Rº Rº fo ON NO, AÁIAA,, ; RR Eri Rº GAR? Re "Sgo . em que R é Ca; alquil; Rº é hidrogênio ou Ci, alquil, ou Rº e Rº, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco ou seis membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é hidrogênio ou C1-3 alquil; RM é hidrogênio, hidróxi ou Cos alcóxi; ds RU e Rº, independentemente, são hidrogênio ou C1-3 alquil; RU? é hidrogênio, hidróxi, C1-;3 alcóxi ou halo; R'"* é hidrogênio, C1-; alquil ou C1-3 alcóxi; Rº é hidrogênio ou M.: alquil; e pé0o, 1, 2,3,40u5, dasde que, quando p for 2, um de RR e Rº seja diferente da etil, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
    6. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o composto possui uma fórmula estrutural (IIb)
    SG "OO di N
    À (CH) qAE Rg ; em que R é metil ou etil; Rº é hidrogênio ou metil, ou Rº e Rº, juntos com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel alifático de cinco membros contendo um átomo de nitrogênio; Rº é hidrogênio; e péioul ou um sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato deste.
    7. Composto, de acordo com à reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Rº é metil, etil, NA(CH:), OCH3, ou forma um anel alifático de cinco membros com R', Rº é metil, etil, NH(CH;), OCH3;y, forma um anel alifático de cinco membros com Rº, ou forma um anel alifático de cinco membros, contendo nitrogênio, com Rº, e Rº é hidrogênio, metil, etil, ou forma um anel alifático de Cinco Membros com R'.
    8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R' é hidrogênio ou forma um anel alifático de cinco membros com Rº, Rº é hidrogênio ou hidróxi, Rº é hidrogênio, Rº é hidrogênio, Rº é hidrogênio ou hidrógi, Rº é hidrogênio, forma um anel alifático de cinco membros com Rº, ou forma um anel alifático de cinco membros, contendo nitrogênio, com Rº, R' é hidrogênio ou forma um anel de cinco membros com R, e n é 2 0u 3.
    . 9. Composto, de acordo com a reivindicação &4, fr caracterizado pelo fato de que Rº é metil ou etil, Rº é o hidrogênio, metil, etil, ou forma um anel alifático de cinco membros, contendo nitrogênio, com R e 8 ou RR é & hidrogênio; MR, RM, Re, RO, Rêe Rº* são hidrogênio, p é 2 ou 3.
    10. Composto caracterizado por ter uma fórmula estrutural: CH; FHa 9 y E N C. A” o
    N N
    À À (CH) (Chada ANx. AN CaH “CoHs e cHs CaHs >,
    11. Composto, de acordo coma reivindicação 1 ou 4, caracterizado por ter um valor de ECso para ativação de p53 de menos do que cerca de 1,35 pM.
    12. Composto caracterizado por ser selecionado a partir de: R NR x 1 r o | 3a . E) R be ,
    PP dA
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    “o RN YV Y Õr 182 : 18h / . 1804 . Los Yv e à VA À À . 5 VS ja
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    N $ ) ) ( Ç Exemplo 12 À, pelo 13 OH, EPemio 1 OH, .
    AQ E SOS o o / a oH oH / N N ( ff y a CH, CH. xemp! Exemplo 15 Hs . Bxempao 1 O, . o o F o: o “ o o ) ; h ne. ( x HO Exespio 17 De ul » en ; ss" p 7 :
    14/22 | o o o o OMé N OMé N oMe Ie W n nO NO NS 38 ? : 4 , ss : o no; o o COS : 2 q NS E. AA ” NH . Exemplo 20 .: Exemplo 21 : on no, Nos Oo ne AO O a. CHix N N.
    N Fo (O: Exemplo 22 .” Exemplo 23 , Exemplo 24 . o cH, He SA o ! À / & N N
    NH Ê a Exexpio 25 , composto 17o Exempio 9º
    15/22 | é o a 4 g o o : eye & ê q NH ue DC É - 7 s : Rn Á enennlo 2º ; Exemplo 28 o . Â KR * ê Oo Too o N N à q 7 Ex, . Ç ( TOS ( No ? CH, « da Exenpão 29 o / Frenpio 30 , Exemplo 31 o , % ff o e. X o AA O Aero
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    N N ( ( )j . ( J o" O ou Exenpio 35 Exempão 36 . Exenpão 37 .
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    N N N o ( < < > nO oH Exemplo 41 ; Exemplo 42 , Exemplo 43 . o o o 2 o & so eso MMA NONO RAS ; < “ O, : + or or co Exenpio 44 Exenpio 45 : Exenpão 46 , o o OSS“ o o " ne CH - " He O do
    N Exempão 47 : Exemplo 48 fo o ; ; O TOO oO
    N N Co E = Exemplo 50 Exemplo 49 : ; o er . 2 AD O OSS»
    N N Exemplo 51 ú f CHa N Exemplo 52 = Y” o À , e o o H3C Ho
    N E Exemplo 53
    13. Uso do composto como definido na reivindicação 1, 4 ou 10 ou do composto 100 de fórmula ON NO?
    N f ">: , caracterizado pelo fato de ser na fabricação de UM medicamento para tratar câncer em
    : um indivíduo.
    E 14, Uso, de acordo com a reivindicação 13, Ds caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado dentre carcinomas, câncer de bexiga (incluindo câncer de bexiga acelerado e metastático), câncer de mama, câncer do cólon (incluindo câncer colorretal), câncer renal, câncer hepático, câncer de pulmão (incluindo câncer de pulmão de célula pequena e não pequena e adenocarcinoma do pulmão), câncer do Ovário, câncer da próstata, câncer dos testículos, câncer do trato geniturinário, câncer do sistema linfático, câncer do reto, câncer da laringe, câncer do pâncreas (incluindo carcinoma pancreático exócrino), câncer do esôfago, câncer do estômago, câncer da vesícula biliar, câncer cervical, câncer da tireóide, câncer renal e câncer da pele (incluindo carcinoma de célula escamosa); tumores hematopoiéticos de linhagem linfóide, incluindo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de célula B, linfoma | de célula T, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, linfoma de célula pilosa, linfoma histiocitico e linfoma de Burkett, tumores hematopoiéticos de linhagem mielóide, incluindo leucemias mielógenas agudas e crônicas, sindrome mielodisplásica, leucemia mieilóide e leucemia promielocítica; tumores do sistema nervoso central & periférico, incluindo astrocitoma, neuroblastoma, glioma e schwanomas; tumores de origem mesenquimal, incluindo f£ibrossarcoma, rabdomiossarcoma e osteossarcoma; e outros tumores, incluindo melanoma, xenoderma pigmentoso, ceratoacantoma, seminoma, câncer folicular da tireóide, teratocarcinoma, carcinoma de célula renal (RCC), câncer
    E pancreático, mieloma, leucemia mielóide e linfoblástica, É neuroblastoma, glioblastoma, cânceres da cabeça e pescoço, EO cânceres gástricos, cânceres vulvares, linfomas, melanomas, cânceres ovarianos, tumores cerebrais, Osteossarcomas, carcinomas de pulmão; tumores sólidos, ou seja, carcinomas e sarcomas, os carcinomas incluindo neoplasias malignas derivadas de células epiteliais que se infiltram (ou seja, invadem) nos tecidos circundantes e dão origem a metástases, adenocarcinomas; cânceres dos sistemas mielóide ou linfóide, incluindo leucemias, linfomas e outros cânceres que tipicamente não estão presentes como uma massa tumoral, mas estão distribuídos no sistema vascular ou no sistema linforreticular; oncologia adulta e pediátrica, crescimento de tumores/malignidades sólidas, carcinoma de célula mixóide e redonda, tumores localmente avançados, câncer metastático, sarcomas de tecido mole humano, incluindo sarcoma de Ewing, metástases de câncer, incluindo metástases linfáticas, carcinoma de célula escamosa, particularmente da cabeça e pescoço, carcinoma esofagiano da célula escamosa, carcinoma oral, malignidades de células sanguíneas, incluindo mieloma múltiplo, leucemias, áncluindo leucemia dintocitica aguda, leucemia não linfocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica crônica e leucemia de célula pilosa, linfomas de efusão (linfomas baseados em cavidade corporal), linfoma tímico, linfoma cutâneo de célula T, câncer do córtex adrenal, tumores produtores de ACTH, cânceres de célula não pequena, câncer de mama, incluindo carcinoma de pequena célula e carcinoma ductal, cânceres gastrointestinais (incluindo câncer do estômago, câncer de cólon, câncer
    20/22 | ao colorretal, e pólipos associados à neoplasia colorretal), ' cânceres urológicos (incluindo câncer de bexiga, por Ds exemplo, tumores superficiais primários da bexiga, carcinoma invasivo de célula transicional da bexiga, e câncer muscular invasivo de bexiga), câncer de próstata, malignidades do trato genital feminino (incluindo carcinoma ovariano, neoplasias epiteliais peritoneais primárias, Carcinoma cervical, cânceres uterinos endometriais, câncer vaginal, câncer da vulva, câncer uterino e tumores sólidos no folículo ovariano), malignidades do trato genital masculino (incluindo câncer testicular e câncer do pênis), câncer renal (incluindo carcinoma de célula renal), câncer cerebral (incluindo tumores cerebrais intrínsecos, neuroblastoma, tumores cerebrais astrocíticos, gliomas e invasão tumoral de célula metastática no sistema nervoso central), cânceres ósseos (incluindo osteomas e osteossarcomas), cânceres de pele (incluíndo melanoma maligno, progressão tumoral de queratinócitos cutâneos humanos e câncer de célula escamosa), câncer da tireóide, retinoblastoma, neuroblastoma, efusão peritoneal, efusão pleural maligna, mesotelioma, tumores de Wilms, neoplasias trofoblásticas, hemangiopericitoma e sarcoma de Kaposi.
    15. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado em conjunto com um agente quimioterápico, radioterapia, um agente que afeta o microtúbulo, um agente citostático, um polipeptídeo de TNF, e misturas destes.
    16. Uso do composto como definido na reivindicação 1, 4 ou 10, ou do composto 100 de fórmula
    CCO a Na , caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tratar uma doença inflamatória.
    17. Uso, de — acordo com. a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória é selecionada dentre artrite reumatóide, psoríase, vitiligo, granulomatose de Wegener e lúpus eritematoso sistêmico (LES).
    | 15 18. Uso, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado em conjunto com um fármaco imunossupressor.
    19. Uso do composto como definido na reivindicação 1, 4 ou 10, ou do composto 100 de fórmula
    N ( í > , caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tratar uma infecção microbiana em um indivíduo.
    20. Uso, de acordo com a Teivindicação 19, caracterizado pelo fato de que à doença é malária.
    o 21. Uso do composto como definido na reivindicação 1, o 4 ou 10, ou do composto 100 de fórmula Too
    N ( | É > , caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tratar uma doença Ou condição selecionada dentre aterosclerose, reestenose, vasculits, nefrite, retinopatia, doença renal, distúrbios cutâneos proliferativos, psoríase, cicatrização quelóide, ceratose actínica, síndrome de Stevens-Johnson, artrite reumatóide (RA), artrite sistêmica crônica de surgimento 145 juvenil (JICA), Osteoporose, lúpus eritematoso sistêmico, doenças hiperproliferativas do olho, incluindo subcrescimento epitelial, vitreorretinopatia proliferativa (PVYR), retinopatia diabética, doenças hemangio- proliferativas, ictiose e papilomas.
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