BRPI0814003B1

BRPI0814003B1 - Formulações de anticorpo anti-cd20

Info

Publication number: BRPI0814003B1
Application number: BRPI0814003-0A
Authority: BR
Inventors: Charlene E. Brisbane; Amol Sharad Ketkar; Ulla Tove Lashmar
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2007-07-06
Filing date: 2008-07-03
Publication date: 2021-06-15
Also published as: AR109461A2; MA31471B1; EP2889310A1; PT2889310T; TWI515204B; CA2692681A1; WO2009009407A1; HUS2100038I1; KR20150088335A; AR067455A1; HK1207652A1; PE20090738A1; JP2011526880A; HRP20170033T1; UA107557C2; TR201802928T4; IL202950A0; EP2170388B1; BR122020026978B1; JO3219B1

Abstract

formulações de anticorpo. esta invenção refere-se a formulações de anticorpo estáveis em cisalhamento e temperatura que são mais estáveis do que quando comparadas a uma formulação padrão (tal como 30 mm de citrato, 100 mm de nacl, ph 6,5). as formulações de anticorpo estável em temperatura e cisalhamento da presente invenção mostram precipitação reduzida quando submetidas a condições de estresse, mas a formulação padrão foi agregada. este resultado foi imprevisível porque termodinamicamente as duas formulações são similares como vistas por seus perfis dsc (calorimetria por varredura diferencial).

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001]A invenção refere-se a formulações de anticorpo estáveis em cisalha- mento e temperatura.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[002]Proteínas são fármacos maiores e mais complexos do que fármacos orgânicos e inorgânicos tradicionais (isto é, possuir múltiplos grupos funcionais em adição a estruturas tridimensionais complexas), e a formulação de tais proteínas possui problemas especiais. Para uma proteína permanecer biologicamente ativa, uma formulação deve preservar a integridade conformacional intacta de pelo menos uma sequência núcleo dos aminoácidos da proteína enquanto ao mesmo tempo protege os múltiplos grupos funcionais da proteína de degradação. Os percursos de degradação para proteínas podem envolver instabilidade química (isto é, qualquer processo que envolve modificação da proteína ligando a formação da clivagem re-sultante em uma nova entidade química) ou instabilidade física (isto é, mudanças na ordem de estrutura superior da proteína). Instabilidade química pode resultar da de- samidação, racemização, hidrólise, oxidação, eliminação de beta ou troca de dissul- feto. Instabilidade física pode resultar da desnaturação, agregação, precipitação, ou absorção, por exemplo, os três percursos de degradação da proteína mais comuns são agregação de proteína, desaminação e oxidação. Cleland et al. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4): 307-377 (1993).

[003]A molécula CD20 (também chamada de antígeno de diferenciação restrito por linfócito B humano ou Bp35) é uma proteína de transmembrana hidrofóbica com um peso molecular de aproximadamente 35 kD localizada nos linfócitos pré-B e B maduros (Valentine et al. (1989) J. Biol. Chem. 264(19): 11282-11287 1128211287; e Einfield et al. (1988) EMBO J. 7(3):711-717). CD20 é encontrada na superfície de mais de 90% de Células B provenientes do sangue periférico ou órgãos lin- fóides e é expressa durante desenvolvimento de célula pré-B anterior e permanece até a diferenciação da célula plasmática. CD20 está presente em ambas as Células B normais bem como em Células B malignas. Em particular, CD20 é expressa em mais de 90% de linfoma não Hodkin de célula B (NHL) (Anderson et al. (1984) Blood 63(6): 1424-1433), mas não é encontrada em células hematopoiéticas, pró-Células B, células plasmáticas normais, ou outros tecidos normais (Tedder et al. (1985) J. Immunol. 135(2):973-979).

[004]A região terminada pelo aminoácido 85 da proteína CD20 está localizada dentro do citoplasma o comprimento desta região contrasta com aquela das estruturas de superfície específicas Célula B tais como cadeias pesadas IgM, IgD, e IgG ou cadeias de antígenos de histocompatibilidade de classe II .alfa, ou .beta. que têm regiões intracitoplasmática relativamente curtas de aminoácidos 3, 3, 28, 15, e 16, respectivamente (Komaromy et al. (1983) NAR 11:6775-6785). Dos últimos 61 aminoácidos terminados em carboxila 61, 21 são resíduos acídicos, onde apenas 2 são básicos, indicando que esta região tem uma carga negativa de forte rede. No No. de Acesso GenBank é NP. sub. - - 90605,

[005]Foi descoberto que CD20 pode estar envolvida na regulação em etapas anteriores no processo de ativação e diferenciação de Células B (Tedder et al. (1986) Eur.J. Immunol. 16:881-887) e poderiam funcionar como canal de íon de cálcio (Tedder et al. (1990) J. Cell. Biochem. 14D: 195).

[006]Apesar da incerteza sobre a função real de CD20 em promover a proliferação e/ou diferenciação de Células B, El aprove um importante objetivo para a terapia mediada por anticorpo para controlar ou matar células B envolvidas em câncer ou distúrbios autoimunes. Em particular, a expressão de CD20 em células tumo- rais, por exemplo, NHL, torna um importante objetivo para terapia mediada por anticorpo para agentes terapêuticos especificamente objetivos contra células neoplási- cas positivas - CD20,

[007]HuMax-CD20™ (ofatumumab), descrito como anticorpo 2F2 no WO2004/035607, é um anticorpo de alta afinidade IgGlK alvejado como uma molécula CD20 na membrana celular de células B. HuMax-CD20™ é um desenvolvimento clínico para o tratamento de linfoma não Hodgkin (NHL), leucemia linfocítica crônica (CLL), e artrite reumatóide (RA). Ver também Teeling et al., Blood, 104, pp 1793 (2004); and Teeling et al., J. Immunology, 177, pp 362-371 (2007).

[008]Existe uma necessidade para formular uma formulação farmacêutica estável em temperatura e cisalhamento compreendendo um anticorpo que é adequado para uso terapêutico. Em uma modalidade o anticorpo pode ser anticorpo anti-CD20, incluindo mas não limitado a ofatumumab, rituximab, tositumomab, ocre- lizumab (2H7,v16), 11B8 ou 7D8 (descrita em WO2004/035607), um anticorpo anti- CD20 descrito em WO 2005/103081 tal como C6, um anticorpo anti-CD descrito em WO2003/68821 tal como IMMU-106 (de Immunomedics), um anticorpo anti-CD20 descrito em WO2004/103404 tal como AME-133 (de Applied Molecular Evoluti- on/Lilly), e um anticorpo anti-CD20 descrito em US 2003/0118592 tal como TRU-015 (de Trubion Pharmaceuticals Inc).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[009]A presente invenção refere-se a uma formulação de anticorpo aquoso estável em cisalhamento e temperatura.

[0010]Esta invenção não deve ser limitada no escopo pelas modalidades específicas descritas aqui. Na verdade, várias modificações da invenção em adição aquelas descritas aqui irão se tornar aparentes aqueles versados na técnica a partir da descrição seguinte. Tais modificações pretendem estar dentro do escopo das reivindicações anexas.

[0011]Embora uma modalidade seja adaptada para uma formulação de anticorpo anti-CD20 monoclonal de comprimento complete, ela pode também ser usada para a formulação de outras classes de anticorpo, por exemplo, anticorpos policlo- nais, ou fragmentos de anticorpos monoclonais ou policlonais.

[0012]Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 compreendendo quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-CD20, em que a formulação adicionalmente compreende 10 a 100 mM de acetato de sódio, 25 a 100 mM de cloreto de sódio, 0,5 a 5% de base livre de argini- na, 0,02 a 0,2 mM de EDTA, 0,01 a 0,2 % de polissorbato 80 e ajustado a pH 5,0 a 7,0,

[0013]Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 compreendendo um anticorpo anti-CD20 na faixa de concentração de 20-300 mg/mL, em que a formulação adicionalmente compreende 50 mM de acetato de sódio, 51 mM de cloreto de sódio, 1% de base livre de arginina, 0,05 mM de EDTA, 0,02% de polissorbato 80, e ajustada para pH 5,5, Em outra modalidade, o anticorpo é um fragmento de anticorpo anti-CD20, tal como um fragmento de anticorpo monoclonal. O anticorpo anti-CD20 preferido é ofatumumab.

[0014]Em uma modalidade, a invenção refere-se to uma formulação de ofa- tumumab compreendendo a quantidade terapeuticamente eficaz de ofatumumab, em que a formulação adicionalmente compreende 10 a 100 mM de acetato de sódio, 25 a 100 mM de cloreto de sódio, 0,5 a 5% de base livre de arginina, 0,02 a 0,2 mM de EDTA, 0,01 a 0,2 % de polissorbato 80 e ajustada para pH 5,0 a 7,0,

[0015]Em uma modalidade, a invenção refere-se to uma formulação de ofa- tumumab compreendendo um ofatumumab na faixa de concentração de 20-300 mg/mL, em que a formulação adicionalmente compreende 50 mM de acetato de sódio, 51 mM de cloreto de sódio, 1% de base livre de arginina, 0,05 mM de EDTA, 0,02% de polissorbato 80, e ajustado a pH 5,5,

[0016]Em ainda outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que a formulação é estável por pelo menos 2 anos. Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que a formulação é estável a temperaturas de até pelo menos 55°C. Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que a formulação é estável a uma temperatura de cerca de 5°C por pelo menos 2 anos.

[0017]Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que a formulação é estável a uma temperatura de cerca de 25°C por pelo menos 3 meses. Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que a formulação é estável a uma temperatura de cerca de 400C por pelo menos 1 mês. Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que a formulação é estável a uma temperatura de cerca de 55°C por pelo menos 1 dia. Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que a formulação é estável a uma faixa de temperatura de aproximadamente, 5 a 25°C, 5 a 35°C, 5 a 45°C, 10 a 25°C, 10 a 35°C, 10 a 45°C, 10 a 55°C, 20 a 35°C, 20 a 45°C, ou 20 a 55°C por pelo menos 1 dia com agitação.

[0018]Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que o anticorpo está presente em uma quantidade de cerca de 20-300 mg/mL, 50-300 mg/mL, 100-300 mg/mL, 150-300 mg/mL, 200-300 mg/mL, ou 250-300 mg/mL.

[0019]Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que acetato de sódio está presente em uma quantidade de cerca de 50mM, 40mM, 45mM, 55mM, ou 60mM. Em outras modalidades, o acetato de sódio pode estar presente em uma quantidade de 10 a 100 mM, 20 a 100 mM, 30 a 100 mM, 40 a 100 mM, 50 a 100 mM, 60 a 100 mM, 70 a 100 mM, 25 a 80 mM, ou 30 a 70 mM.

[0020]Em ainda outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que ácido acético está presente (cerca de 100 mM de ácido acético) para ajustar a formulação para cerca de pH 5,5, Em outras modalida- des, o pH pode ser ajustado para pH 5,0, 5,5, 6,0, 6,5 ou 7,0, Em ainda outras modalidades da invenção, NaOH ou HCl é usado para ajustar o pH para 5,0, 5,5, 6,0, 6,5 ou 7,0,

[0021]Em ainda outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que cloreto de sódio está presente em uma quantidade de cerca de 51mM, 45mM, 46mM, 47mM, 48mM, 49mM, 50mM, 52mM, 53mM, 54mM, 55mM. Em outras modalidades, o cloreto de sódio pode estar presente em uma quantidade de 25 a 100 mM, 35 a 90 mM, 45 a 80 mM, 25 a 70 mM, ou 45 a 70 mM.

[0022]Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que base livre de arginina está presente em uma quantidade de cerca de 1%, 0,7%, 1.3%, ou 2,0%. Em outras modalidades, the base livre de argini- na pode estar entre 0,5 e 5,0%, 0,5 a 2,0%, 0,5 a 2,5%, 0,5 a 3,0%, 0,5 to 3,5%, 0,5 a 4,0%, ou 0,5 a 4,5%.

[0023]Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que EDTA está presente em uma quantidade de cerca de 0,05 mM, 0,03 mM, 0,04 mM, ou 0,06 mM. Em outras modalidades, o EDTA pode estar presente em uma quantidade de 0,02 mM - 0,2 mM, 0,02 mM - 0,1 mM, 0,02 mM - 0,15 mM, 0,04 mM - 0,1 mM, 0,03 mM - 0,15 mM, ou 0,03 mM - 0,2 mM.

[0024]Em outra modalidade, a invenção refere-se a uma formulação de anticorpo anti-CD20 em que polissorbato 80 está presente em uma quantidade de cerca de 0,02%, 0,015%, ou 0,025%. Em outras modalidades, o polissorbato 80 pode estar presente em uma quantidade de 0,01 - 0,2%, 0,01 - 0,15%, 0,02 - 0,2%, 0,02 - 0,15%, 0,01 - 0,25%, ou 0,01 - 0,05%.

[0025]Em outra modalidade, a invenção refere-se a um método para tratar uma doença que envolve células que expressam CD20 administrando a um mamífero uma formulação de anticorpo anti-CD20 da presente invenção compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-CD20, em que a formulação adicionalmente compreende 10 a 100 mM de acetato de sódio, 25 a 100 mM de cloreto de sódio, 0,5 a 5% de base livre de arginina, 0,02 a 0,2 mM de EDTA, 0,01 a 0,2 % de polissorbato 80 e ajustada para pH 5,0 a 7,0, Exemplo de "Doenças que envolvem células que expressam CD20" que podem ser tratadas (por exemplo, melhorar) ou evitadas incluem, mas não são limitadas a, doenças tumorigênicas e doenças imunes, por exemplo, doenças autoimunes. Exemplos de doenças tumori- gênicas que podem ser tratadas e/ou evitadas incluem Linfoma de célula B, por exemplo, NHL, incluindo leucemia/linfoma linfoblástica de célula B precursora e neoplasmas de célula B madura, tais como Leucemia linfocítica crônica de célula B (CLL)/linfoma linfocítica pequeno (SLL), Leucemia prolinfocítica de célula B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de célula do manto (MCL), linfoma folicular (FL), incluindo FL de baixo grau, médio grau e alto grau de malignidade, linfoma central de folículo cutâneo, linfoma de célula B de zona marginal (Tipo MALT, tipo nodal e esplênico), leucemia de célula capilar, linfoma de célula B de grande difusão, Linfoma de Burkitt, plasmacitoma, mieloma de célula plasmática, distúrbio linfoproliferativo pós- transplante, Macroglobulinemia de Waldenstrom, e linfoma de célula grande ana- plástica (ALCL). Exemplos de distúrbios imunes em que CD20 expressando células B estão envolvidos que podem ser tratados e/ou evitados incluem psoríase, artrite psoriática, dermatite, esclerodermia e esclerose sistêmicos, doença do intestino inflamatória (IBD), Doença de Crohn, colite ulcerativa, síndrome de insuficiência respiratória, meningite, encefalite, uveíte, glomerulonefrite, eczema, asma, aterosclerose, deficiência de aderência de leucócito, esclerose múltipla, Síndrome de Raynaud, Síndrome de Sjogren, diabetes juvenil inicial, Doença de Reiter, Doença de Behcet, nefrite complexa imune, Nefropatia IgA, Polineuropatia IgM, trombocitopenia imuno- mediada, tais como púrpura trombocitopênica idiopática aguda e púrpura tromboci- topênica idiopática crônica, anemia hemolítica, miastenia grave, nefrite de lúpus, lú- pus eritematoso sistêmico, artrite reumatóide (RA), dermatite atópica, pênfigo, Doença de Grave, Tiroidite de Hashimoto, Granulomatose de Wegener, Síndrome de Omenn, insuficiência renal crônica, mononucleose infecciosa aguda, HIV, e doenças associadas ao vírus da herpes. Exemplos adicionais são síndrome de insuficiência respiratória aguda severa e coreoretinite. Ainda, exemplos adicionais são doenças e distúrbios causados por infecção de células B com vírus, tais como vírus Epstein- Barr (EBV). Ainda, um exemplo adicional é COPD.

[0026]Em ainda outra modalidade, a invenção refere-se a um método para tratar uma doença que envolve células que expressam CD20 administrando a um mamífero uma formulação de anticorpo anti-CD20 da presente invenção compreendendo a quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-CD20, em que a formulação adicionalmente compreende 10 a 100 mM de acetato de sódio, 25 a 100 mM de cloreto de sódio, 0,5 a 5% de base livre de arginina, 0,a 0,2 mM de EDTA, 0,01 a 0,2 % de polissorbato 80 e ajustada para pH 5,0 a 7,0 e em que a formulação de anticorpo estável é administrada forma oral, parenteral, intranasal, vaginal, retal, lingual, sublingual, bucal, transdérmica, intravenosa, ou subcutânea a um mamífero.

[0027]Em ainda outra modalidade, a invenção refere-se a um método para tratar uma doença que envolve células que expressam CD20 administrando a um mamífero uma formulação de anticorpo anti-CD20 da presente invenção compreendendo um anticorpo anti-CD20 na faixa de concentração de 20-300 mg/mL, em que a formulação adicionalmente compreende 50 mM de acetato de sódio, 51 mM de cloreto de sódio, 1% de base livre de arginina, 0,05 mM de EDTA, 0,02% de polis- sorbato 80, e ajustada para pH 5,5, O anticorpo anti-CD20 preferido é ofatumumab.

[0028]Deve ser entendido que ambos a descrição do sumário acima e a seguinte descrição detalhada são exemplares e explicativos, e pretendem prover explicação adicional da invenção como reivindicado.

[0029]Os desenhos em anexo são incluídos para prover compreensão adici- onal da invenção, e são incorporados, e constituem uma parte desta especificação, ilustram várias modalidades da invenção. E juntos com a descrição servem para ex-plicar os princípios da invenção.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0030]A figura 1 ilustra a formulação padrão (RefMat) do anticorpo anti-CD20 a 20 mg/mL (30 mM de citrato, 100mM de NaCl, pH 6,5) em duplicata.

[0031]A figura 2 ilustra uma modalidade da invenção (PlatForm) de formulação de anticorpo anti-CD20 a 20 mg/mL (50 mM de acetato de sódio, cloreto de sódio (51 mM), 1% de base livre de arginina, 0,05 mM de EDTA, 0,02% de polissorbato 80, e ajustada para pH a 5,5 com HCl) em duplicata.

[0032]A figura 3 ilustra graficamente uma comparação de estabilidade térmica de anticorpo anti-CD20 em uma modalidade de formulação da invenção (PlatForm) e tampões de formulação padrão (RefMat) por DSC. Termodinamicamente, as duas formulações são similares como vista por seus perfis DSC uma vez que a mudança em Tm aparente é menor do que 0,5 C entre as formulações.

[0033]DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0034]Uma modalidade da presente invenção refere-se a formulações de anticorpo estável em temperatura e cisalhamento.

[0035]Em outra modalidade, a invenção provê uma estabilidade inesperada vista por uma formulação sob condições de estresse simultâneas de temperatura elevada e agitação a 55°C.

[0036]Uma modalidade adicional da invenção é uma formulação mais estável do que comparada a uma formulação padrão (tal como 30 mM de citrato, 100mM de NaCl, pH 6,5). A formulação da presente invenção mostrou precipitação reduzida (claro restante) quando submetida a condições de estresse, mas a formulação padrão foi agregada. Este resultado não foi previsto porque termodinamicamente as duas formulações são similares quando vistas por seu perfil DSC (calorímetro de varredura diferencial).

[0037]Na descrição da presente invenção, certos termos são usados como definido abaixo.

[0038]O termo “formulação de proteína” ou “formulação de anticorpo” refere- se a preparações que estão em tal forma que permitem a atividade biológica dos ingredientes ativos para serem inequivocadamente eficazes, e que não contêm nenhum componente adicional que são tóxicos aos sujeitos aos quais a formulação seria administrada.

[0039] Excipientes “farmaceuticamente aceitáveis” (veículos, aditivos) são aqueles que podem ser administrados de forma razoável a um sujeito mamífero para prover uma dose eficaz do ingrediente ativo empregado. Por exemplo, a concentração dos excipientes é também relevante para aceitabilidade à injeção.

[0040]Uma formulação “estável” é uma que a proteína da mesma essencialmente retém sua estabilidade física e/ou química e/ou atividade biológica no armazenamento. Várias técnicas analíticas para medir a estabilidade da proteína estão disponíveis na técnica e são revistas em Peptide and Protein Drug Delivery, 247301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs (1991) e Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993), por exemplo. A estabilidade pode ser medida em uma temperatura selecionada por um período de tempo selecionado. Preferivelmente, a formulação é estável em temperatura ambiente ou a 400C por pelo menos 1 mês e/ou estável a 2-8°C por pelo menos 1 a 2 anos. Além do mais, é desejável que a formulação seja estável seguinte a congelamento (por exemplo, a - 700C) e descongelamento do produto.

[0041]Uma proteína “retém sua estabilidade física” em uma formulação bio- farmacêutica se ela apresenta pouca ou nenhuma mudança em agregação, precipitação e/ou desnaturação como observado por exame visual de cor e/ou clareza, ou como medido por espalhamento de luz UV (agregados visíveis de medida) ou cro- matografia por exclusão de tamanho (SEC). SEC mede agregados solúveis que não são necessariamente um precursor para agregados visíveis.

[0042]Uma proteína “retém sua estabilidade química” em uma formulação biofarmacêutica, se a estabilidade química em um dado tempo é tal que a proteína seja considerada como retendo sua atividade biológica como definido abaixo. Espécies quimicamente degradadas podem ser biologicamente ativas e quimicamente estáveis. Estabilidade química pode ser acessada detectando e quantificando formas quimicamente alteradas da proteína. Alteração química pode envolver modificação de tamanho (por exemplo, clipping) que pode ser avaliada usando SEC, SDS- PAGE e/ou ionização de desabsorção por laser assistido por matriz /espectrometria de massa por tempo de vôo (MALDI/TOF MS), por exemplo. Outros tipos de alteração química incluem alteração de carga. (por exemplo, ocorrendo como resultado desaminação) que podem ser avaliados por cromatografia por troca de íon, por ex- meplo.

[0043]Um anticorpo "retém sua atividade biológica" em uma formulação farmacêutica, se a mudança na atividade biológica do anticorpo em um dado tempo está dentro de cerca de 10% (dentro dos erros do ensaio) da atividade biológica exibida no tempo da formulação farmacêutica foi preparado como determinado em um ensaio de ligação de antígeno, por exemplo. Outros ensaios de “atividade biológica” para anticorpos são elaborados aqui abaixo..

[0044]O termo “isotônico” significa que a formulação de interesse tem essencialmente a mesma pressão osmótica do sangue humano. Em uma modalidade, as formulações isotônicas da invenção irão geralmente ter uma pressão osmótica na faixa de 250 a 350 mOsm. Em outras modalidades, formulações isotônica da invenção irão ter uma pressão osmótica de cerca de 350 a 450 mOsm. Em ainda outra modalidade, formulações isotônicas da invenção irão ter uma pressão osmótica acima de 450 mOsm. Isotonicamente podem ser medidas usando uma pressão de va- por ou osmomêtro de tipo congelamento, por exemplo.

[0045]Como usado aqui, "tampão" refere-se a uma solução tamponada que resiste a mudanças no pH pela ação de seus componentes conjugados ácido-base. Em uma modalidade, o tampão da invenção tem um pH na faixa de cerca de 4,5 a cerca de 6,0; em outra modalidade, de cerca de 4,8 a cerca de 5,8; e em uma modalidade adicional, um pH de cerca de 5,5, Exemplos de tampões que irão controla o pH nesta faixa incluem acetato (por exemplo, acetato de sódio), succinato (tal como succinato de sódio), gluconato, histidina, citrato e outros tampos de ácidos orgânicos. Onde uma formação estável descongelada é desejada, o tampão é preferivelmente não fosfato.

[0046]Em um sentido farmacológico, no contexto da presente invenção, a "quantidade terapeuticamente eficaz" de um anticorpo refere-se a uma quantidade eficaz na prevenção ou tratamento de um distúrbio para o tratamento do qual o anticorpo é efetivo. Um "distúrbio" é qualquer condição que se beneficiaria do tratamento com o anticorpo. Isto inclui distúrbios ou doenças crônicas e agudas incluindo aquelas condições patológicas que se predispõe a mamíferos para o distúrbio em questão. Em uma modalidade preferida "distúrbio" é uma doença que envolve células que expressam CD20,

[0047]Um "conservante" é um composto que pode ser incluído na formulação para essencialmente reduzir ação bacteriana do mesmo, assim facilitando a produção de uma formulação multiuso, por exemplo. Exemplos de conservantes potenciais incluem cloreto de amônio de octadecildimetilbenzila, cloreto de hexametô- nio, cloreto de banzalcônio (uma mistura de cloretos alquilbenzildimetilamônio em que os grupos alquila são compostos de cadeia longa), e cloreto de benzeltônio. Outros tipos de conservantes incluem alcoóis aromáticos tais como fenol, álcool butílico e benzílico, alquil parabenos tais como metil ou propil parabeno, catechol, resorcinol, ciclohexanol, 3-pentanol, e m-cresol. O conservante mais preferido aqui é álcool banzílico.

[0048]O termo "anticorpo" é usado no sentido mais amplo e especificamente cobre anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento completo), anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), e fragmentos de anticorpo de modo que eles exibam a atividade biológica desejável.

[0049]"Fragmentos de anticorpo" compreendem uma porção de um anticorpo de comprimento complete, geralmente a ligação de antígeno ou região variável do mesmo. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem fragmentos Fab, Fab', F(ab') 2, e Fv; diacorpos; anticorpos lineares; moléculas de anticorpo de cadeia simples; e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpo.

[0050]O termo "anticorpo monoclonal" como usado aqui refere-se a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos exceto para possíveis mutações que ocorrem de modo natural que podem estar presentes em menores quantidades. Anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo direcionados contra um único sítio antigênico. Além do mais, em contraste a preparações de anticorpos convencionais (policlonal) que tipicamente incluem diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra uma única determinação no antígeno. O modificador “monoclonal” indica o caráter do anticorpo como sendo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, e não deve ser inter-pretado como requerendo produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem usados com a presente invenção podem ser feitos pelo método de hibridoma primeiro descrito Kohler et al., Nature 256:495 (1975), ou podem ser feitos por métodos de DNA recombinante (ver, por exemplo, U.S. Pat. No. 4,816,567). Os “anticorpos monoclonais” podem ser isolados de bibliotecas de anticorpo de fago usando a técnica descrita em Clackson et al., Nature 352:624-626 (1991) and Marks et al., J. MoI. Biol. 222:581-597 (1991), por exemplo.

[0051]Formas “humanizadas” de anticorpos não humanos (por exemplo, mu- rinos) são anticorpos quiméricos que contêm sequência mínima derivada de imuno- globulina humana. Para a maior parte, anticorpos humanizados são imunoglobulinas humanas (anticorpo recipiente) em que resíduos de uma região hipervariável de uma espécie não humana (anticorpo doador) tal como camundongo, rato, coelho ou primata tendo a especificidade, afinidade e capacidade desejada. Em alguns casos, resíduos de FR da imunoglobulina humana são recolocados por resíduos não humanos correspondentes. Além do mais, anticorpos humanizados podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo recipiente ou no anticorpo doador. Essas modificações são feitas para adicionalmente refinar desempenho de anticorpo. Em geral, o anticorpo humanizado irá compreender substancialmente todos de pelo menos um, e tipicamente dois domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas das regiões hipervariáveis correspondem aquelas de uma imuno- globulina não humana e todas ou substancialmente todas das regiões FR são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado opcionalmente também irá compreender pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. Para detalhes adicionais, ver Jones et al., Nature 321 :522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); e Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992).

[0052]Fragmentos de anticorpo "Fv de cadeia simples" ou "sFv" compreendem o domínio de anticorpo VH e VL, em que estes domínios estão presentes em uma cadeia de polipeptídeo simples. Geralmente, o polipeptídeo Fv adicionalmente compreende um ligante de polipeptídeo entre os domínios VH e VL que permite que SFv forme a estrutura desejada para ligação de antígeno. Para uma visão de sFv ver Pluckthun em The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer- Verlag, N.Y., pp. 269-315 (1994).

[0053]O termo “diacorpos” refere-se a pequenos fragmentos de anticorpo com dois sítios de ligação de antígeno, cujos fragmentos compreendem domínio variável de cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável de cadeia leve (VL) na mesma cadeia de polipeptídio (VH e VL). Usando um ligante que é muito pequeno para permitir pareamento entre os dois domínios na mesma cadeia, os domínios são forçados a parear com os domínios complementares de outra cadeia, e criar dois sítios de ligação de antígeno. Diacorpos são descritos mais completamente em, por exemplo, EP 404,097; WO 93/11161; e Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993).

[0054]A expressão “anticorpos lineares” quando usada pelo pedido refere-se a anticorpos descritos em Zapata et al. Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995). Brevemente, esses anticorpos compreendem um par de segmentos Fd tandem (VH -CH --V H1 --CH1) que formam um par de regiões de ligação de antígeno. Anticorpos lineares podem ser biespecíficos ou monoespecíficos.

[0055]O anticorpo que é formulado é preferível e essencialmente puro e desejável e essencialmente homogêneo (isto é, livre de proteínas contaminantes, etc.). Anticorpos “essencialmente puros” significa uma composição compreendendo pelo menos cerca de 90% em peso do anticorpo, com base no peso total da composição, preferivelmente pelo menos cerca de 95% em peso. Anticorpo “essencialmente homogêneo” significa uma composição compreendendo pelo menos cerca de 99% em peso do anticorpo, com base no peso total da composição.

[0056]"Tratamento" refere-se tanto a tratamento terapêutico quanto a tratamento profilático ou medidas de prevenção. Aqueles em necessidade de tratamento incluem aqueles que já tem o distúrbio bem como aqueles em que o distúrbio já está sendo prevenido.

[0057]"Mamífero" para finalidades de tratamento refere-se a qualquer animal classificado como um mamífero, incluindo, mas não limitado a humanos, animais domésticos e de fazenda, e animais de zoológico, esportes ou de estimação, tais como cachorros, cavalos, gatos e vacas.

[0058]"Condição de estresse" refere-se a uma ambiente que é química e fisicamente desfavorável para uma proteína e pode renderizar estabilidade de proteína inaceitável (por exemplo, estresse térmico, cisalhamento e químico).

[0059]Cromatografia por Exclusão de Tamanho é um método de cromatogra- fia em que partículas são separadas com base em seu tamanho ou volume hidrodinâmico.

[0060]Dispersão de Luz Dinâmica é um método que mede a dependência de tempo de lus de dispersão de proteína. Tradicionalmente, esta dependência de tempo é processada para fornecer o raio hidrodinâmico de uma molécula.

[0061]"DSC" refere-se a calorímetro de varredura diferencial: parâmetros de aquisição de DSC: podem ser, mas não limitados a, 1 mg/ml de proteína varredura para 5 a 800C com uma taxa de varredura de 700C por hora e 15 minutos de pré- espera. Uma varredura tampão-tampão pode ser adquirida primeiro e subtraída dos dados brutos. Os dados podem ser corrigidos para o tampão e normalizados para a concentração de proteína em seguida colocados em gráfico. Agregação pode evitar correção de baselina.

[0062]Os seguintes exemplos são ilustrações adicionais da presente invenção. Os exemplos não pretendem limitar o escopo da presente invenção, e proveem compreensão adicional da invenção.

EXEMPLOS

[0063]A invenção adicionalmente ilustrada para fins dos seguintes exemplos que pretendem elucidar a invenção. Esses exemplos não pretendem, nem devem ser interpretados, como limitantes do escopo da invenção. Várias modificações e variações da presente invenção são possíveis em vista dos ensinamentos neste documento e, portanto, estão dentro do escopo da invenção. Os exemplos abaixo são realizados usando técnicas padrão, e tais técnicas padrão são bem conhecidas e rotineiras para aqueles versados na técnica, exceto onde de outra maneira descritas em detalhes.Exemplo 1.1: Preparação do tampão de formulação de plataforma

[0064]Em uma modalidade da invenção, 4 litros de tampão de acetato foram preparados. Nesta modalidade, o tampão final era compreendido de 50 mM de acetato de sódio, 0,05 mM de EDTA, 51 mM de NaCl, 1.0% de Arginina, 0,02% de po- lissorbato 80, pH 5,5, O tampão foi preparado dissolvendo triidrato de acetato de sódio, edetato dissódio (EDTA), polissorbato 80 e base livre de L-arginina em 3,5L de água deionizada. Uma vez que o pH foi ajustado para 5,5 usando 3N de HCl, o volume foi trazido para 4,0L e o tampão foi filtrado usando uma unidade de filtro a 0,45 μm. O tampão pôde em seguida ser armazenado a 2-80C até utilização. A formulação "%" descrita no presente pedido refere-se a "% em volume".

[0065]Exemplo 2.1: Preparação de ofatumumab em um tampão de formulação de plataforma

[0066]Em uma modalidade da invenção, ofatumumab foi diafiltrado em uma plataforma (50 mM de acetato de sódio, 51 mM de NaCl, 0,05mM de EDTA, 0,02% de polissorbato 80, e 1.0% de Arginina (base livre)) e concentrado para estabilidade. Ofatumumab foi diafiltrado na formulação de plataforma usando um sistema de fluxo tangencial em escala de laboratório com três membranas. Após a diafiltragem no tampão de plataforma, ofatumumab foi concentrado a uma concentração máxima de 179 mg/mL. O processo inteiro levou aproximadamente três dias de trabalho para finalizar e o rendimento foi de 96,1%. Algum de 179 mg/mL foi diluído com tampão de formulação de plataforma de que a faixa de concentração de -20 - 179 mg/mL pôde ser estudada. Exemplo 3.1: Preparação de ofatumumab Em uma Formulação de Plataforma e Padrão para Comparação Direta de Aparência Geral (GA)

[0067]Um anticorpo anti-CD20 (ofatumumab) foi preparado na formulação padrão e na formulação de plataforma (uma modalidade da presente invenção) em uma concentração de 20 mg/mL para aparência geral em comparação direta durante um período de tempo de 12 semanas e para experimentos de agitação. O anticorpo anti-CD20 nas formulações padrão e de plataforma foi filtrado usando uma ligação de proteína baixa de 0,2 μm de filtro de membrana. Após a filtração, cada formulação foi enchida com 3 mL em 5 cc frascos, paralisadas e onduladas usando técnica estéril sob capa clara. Dois frascos de cada formulação foram colocados em um agitador com controle de temperatura. Os frascos foram agitados a 325 RPM a uma temperatura de 550C. Durante a agitação com calor, a aparência geral foi observada, como descrito no Exemplo 3,2, periodicamente durante um período de tempo de 42 horas. As figuras 1 e 2 mostram as formulações de plataforma e padrão, respectivamente, após 18,5 horas de agitação com calor. Os resultados de aparência total do estudo de agitação indicaram que a formulação padrão irá gerar partículas durante o tempo quando o sujeito agitar a temperaturas de 55 graus C mais rapidamente do que a formulação de plataforma.Exemplo 3.2: GA, 18.5 h Estudo de Agitação-Aparência geral de ofatumu- mab, 20 e 100 mg/mLAparência geral (GA) de amostras de estudo de agitação mab anti-CD20 é apresentada na tabela abaixo. GA foi completada usando um método que pode ser usado por um solução de anticorpo IgG que descreve cor, clareza, matéria de parti- culados visíveis.

Exemplo 4: Determinar a estabilidade térmica de solução de ofatumumab no tampão de plataforma ou padrão por Calorimetria de Varredura Diferencial (DSC).

[0068]A fim de completar apropriadamente a testagem por DSC, varreduras dos tampões sozinho ou com proteína são adquiridas. A proteína nas formulações padrão e de plataforma foi diluída a 1 mg/mL como apresentado no Exemplo 4.1. Dados foram adquiridos estabelecendo o DSC para varrer de 5 - 800C em uma taxa de varredura de 700C por hora com um 15 minutos de equilíbrio antes de cada varredura. O volume da célula de amostra DSC é ~ 0,5 mL. Depois que as varreduras do tampão e proteína foram adquiridas, as varreduras de tampão poderiam em seguida serem subtraídas da varredura de proteína. Uma concentração da proteína nas amostras foi obtida para corrigir a concentração em cada varredura (Ver, Exemplo 4.2). Os valores Tun, 0C, início de desdobramento, Tm, 0C, temperatura de desnaturação (em uma transição máxima) e T1/2, 0C, a largura de pico em meio peso (reflete mudanças na estrutura terciária e cooperatividade das transições) foram obtidos para ofatumumab para cada formulação (ver, Exemplo 4.3). As varreduras DSC podem ser vistas na figura 3, com base nos resultados do DSC, o ofatumumab na formulação padrão ou na formulação de plataforma teve perfis DSC similares e, portanto espera-se que tenham estabilidade térmica similar.Exemplo 4.1: Preparação de amostra para caracterização biofísica de estudo de pH de ofatumumab:

*uso para normalizar varreduras DSC.

[0069]Preparar uma amostra, limpar com tampão correspondente, ler 3 vezes. Usar 1 cm de cuveta. Subtrair absorbância A320 antes de dividir por coeficiente de extinção (1.49).Exemplo 4.3: Resultados DSC

* Os valores T foram determinados manualmente. A contribuição exotérmicaproveniente da agregação distorce a baselina, assim esses valores foram determinados manualmente. A contribuição exotérmica provenientes da agregação distorce a baselina, assim esses valores podem ser artificialmente pequenos.

[0070]Em modalidades mais detalhadas, a formulação de anticorpo anti- CD20 da presente invenção pode ser usada para tratar um sujeito com um distúrbio tumorigênico, por exemplo, caracterizado pela presença de células tumorais que ex- pressam CD20 incluindo, for exemplo, Linfoma de célula B, por exemplo, NHL. Exemplos de doenças tumorigênicas que podem ser tratadas e/ou prevenidas include linfoma de célula B, por exemplo, NHL, incluindo leucemia/linfoma linfoblástica de célula B precursora e neoplasmas de célula B madura, tais como leucemia linfocítica crônica de célula B (CLL)/linfoma linfocítica pequeno (SLL), leucemia prolinfocítica de célula B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de célula do manto (MCL), linfoma foli- cular (FL), incluindo FL de baixo grau, médio grau e alto grau de malignidade, linfo- ma central de folículo cutâneo, linfoma de célula B de zona marginal (Tipo MALT, tipo nodal e esplênico), leucemia de célula capilar, linfoma de célula B de grande difusão, Linfoma de Burkitt, plasmacitoma, mieloma de célula plasmática, distúrbio linfoproliferativo pós-transplante, Macroglobulinemia de Waldenstrom, e linfoma de célula grande anaplástica (ALCL).

[0071]Exemplos adicionais de Célula B linfoma não Hodgkins são granulo- matose linfomatóide, linfoma de efusão primária, linfoma de célula B grande intravascular, Linfoma de célula B grande mediastinal, doenças de cadeia pesada (incluindo doenças .gama., .mu., e .alfa), linfomas induzidos por terapia com agentes imu- nossupressores, tais como linfoma induzido por ciclosporina, e linfoma induzido por metotrexato.

[0072]Em uma modalidade adicional, a formulação de anticorpo anti-CD20 da presente invenção pode ser usada para tratar linfoma de Hodgkin.

[0073]Exemplos de distúrbios imunes (doenças) em que células que expressam CD20 que podem ser tratadas e/ou prevenidas por uma formulação de anticorpo anti-CD20 da presente invenção incluem distúrbios autoimune, tais como psoría- se, artrite psoriática, dermatite, esclerodermia e esclerose sistêmicos, doença do intestino inflamatória (IBD), Doença de Crohn, colite ulcerativa, síndrome de insuficiência respiratória, meningite, encefalite, uveíte, glomerulonefrite, eczema, asma, ate- rosclerose, deficiência de aderência de leucócito, esclerose múltipla, Síndrome de Raynaud, Síndrome de Sjogren, diabetes juvenil inicial, Doença de Reiter, Doença de Behcet, nefrite complexa imune, Nefropatia IgA, Polineuropatia IgM, trombocito- penia imunomediada, tais como púrpura trombocitopênica idiopática aguda e púrpura trombocitopênica idiopática crônica, anemia hemolítica, miastenia grave, nefrite de lúpus, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatóide (RA), dermatite atópica, pênfigo, Doença de Grave, Tiroidite de Hashimoto, Granulomatose de Wegener, Síndrome de Omenn, insuficiência renal crônica, mononucleose infecciosa aguda, HIV, e doenças associadas ao vírus da herpes. Exemplos adicionais are síndrome de insuficiência respiratória aguda severa e coreoretinite. Além do mais, outras doenças e distúrbios incluem aqueles causados por ou mediados por infecção de células B com vírus, tais como vírus Epstein-Barr (EBV).

[0074]Exemplos adicionais de distúrbios inflamatórios, imunes e/ou autoimu- nes em que autoanticorpos e/ou atividade de linfócito B excessiva são proeminentes e que podem ser tratados e/ou prevenidos por formulação de anticorpo anti-CD20 da presente invenção, incluem as seguintes: vasculite e outros distúrbios de vasos sanguíneos, tais como poliangeíte microscópica, Síndrome Churg-Strauss, e outras vasculite associadas a ANCA, poliarterite nodosa, vasculite crioglobulinaêmica essencial, angeíte leucocitoclástica cutânea, doença de Kawasaki, arterite de Takayasu, artitte de células gigantes, Púrpura Henoch-Schonlein, angeíte cerebral primária ou isolada, eritema nodoso, trombangeíte obliterante, púrpura trombocitopênica trombótica (incluindo síndrome urêmica hemolítica), e vasculite secundária, incluindo vasculite leucocitoclástica cutânea (por exemplo, secundária para hepatite B, hepatite C, Macroglobulinemia de Waldenstrom, Neoplasia de célula B, artrite reumatóide, Síndrome de Sjogren, ou lúpus eritematoso sistêmico); exemplos adicionais são eri- tema nodoso, vasculite alérgica, paniculite, doença de Weber-Christian, púrpura hi- perglobulinaêmica, e doença de Buerger; distúrbios de pele, tais como dermatite de contato, dermatose linear IgA, vitiligo, pyoderma gangrenosum, epidermólise bolho- sa adquirida, pênfigo vulgaris (incluindo cicatricial penfigóide e penfigóide bulhosa), alopecia areata (incluindo alopecia universal e alopecia total), dermatite herpetifor- me, eritema multiforme, e urticária autoimune crônica (incluindo edema angioneuró- tico e vasculite urticária); citopenia mediada imune, tais como neutropenia autoimmune, e aplasia de cálula vermelha pura, distúrbios de tecido conectivo, tais como lúpus CNS, lúpus eritematoso discoidal, síndrome de CRST, doença de tecido co- nectivo misturado, polimiosite/dermatomiosite, miosite de corpo de inclusão, amiloi- dose secundária, crioglobulinemia, tipo I e II, fibromialgia, síndrome de anticorpo de fosfolípideo, hemofilia secundária, policondrite relapsa, sarcoidose, síndrome de homem exagerada; e febre reumática; um exemplo adicional é faceíte eosinófila, artritide, tais como espondilite anquilosante, artrite crônica juvenil, doença de Still adulta, e síndrome de SAPHO; exemplos adicionais are sacroileíte, artrite reativa, doença de Still, e gota; distúrbios hematológicos, tais como anemia aplástica, anemia hemolítica primária (incluindo síndrome de aglutininna fria), anemia hemolítica secundária para CLL ou lúpus eritematoso sistêmico; síndrome de POEMS, anemia perniciosa, e púrpura hiperglobulinaêmica de Waldemstromde; exemplos adicionais saio agranulocitose, neutropenia autoimune, doença de Franklin, doença de Selig- mann, doença de cadeia .mu., syndrome paraneoplástica secundária para timoma e linfomas, e formação de inibidor de fator VIII; endocrinopatias, tais como poliendocri- nopatia e doença de Addison; exemplos adicionais são hipoglicemia autoimune, hi- potiroidismo autoimune, syndrome de isulina autoimune, tireoidite de Quervain, e resistência a insulina mediada por anticorpo receptor de insulina; distúrbios hepato- gastrointestinais, tais como doença celíaca, doença de Whipple, cirrose biliar primária, hepatite ativa crônica, e colangeíte esclerosante primária; um exemplo adicional é artrite autoimune; nefropatias, tais como glomerulonefrite progressiva rápida, nefri- te pós-estreptococos, síndrome de Goodpasture, glomerulonefrite membranosa, e nefrite crioglobulinêmica; um exemplo adicional é doença de mudança mímima; dis- túrbios neurológicos, tais como neuropatias autoimunes, mononeurite multiplexa, síndrome miastênica de Lambert-Eaton, coreia de Sydenham, tabes dorsalis, e sín- drome de Guillain-Barr; exemplos adicionais são myelopathy/tropical paraparesis espasmódica, miastenia grave, polineuropatia desmielinizante inflamatória aguda, e polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica; distúrbios cardíacos e pulmonares, tais como doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), alveolíte fibrosa, bron- quiolíte obliterante, aspergilose alérgica, fibrose cística, síndrome de Loffler, miocar- dite, e periocardite; exemplos adicionais são pneomonite hipersensitiva, e síndrome paranoeplástica secundária para câncer de pulmão; distúrbios alérgicos, tais como bronquite asmática e síndrome hiper-IgE; um exemplo adicional é aumarose fugaz; distúrbios oftamológicos, tais como coreoretinite idiopática; doenças infecciosas, tais como infecção por parvovírus B (incluindo síndrome das mãos e dos pés); e distúrbios ginecológicos-obstétricos, tais como aborto recorrente, perda fetal recorrente, e retardo de crescimento intrauterino; um exemplo adicional é síndrome paraneoplás- tica secundária para neoplasmos ginecológicos; distúrbios reprodutivos masculinos, tais como síndrome paraneoplástica secundária para neoplasmos testiculares; e distúrbios derivados de transplante, tais como rejeição a homotransplante e a xenoen- xerto, e doença enxerto-versus transplantado.

[0075]Em uma modalidade, a doença que envolvem células que expressam CD20 é u distúrbio inflamatório, imune e/ou autoimune selecionado a partir de colite ulcerativa, Doença de Crohn, diabetes juvenil inicial, esclerose múltipla, trombocito- penia imunomediada, tais como púrpura trombocitopênica idiopática aguda e púrpura trombocitopênica idiopática crônica, anemia hemolítica (incluindo anemia hemolí- tica autoimune), miastenia grave, esclerose sistêmica, e pênfigo vulgaris.

[0076]Esta invenção não deve ser limitada no escopo pelas modalidades específicas descritas aqui. Na verdade, várias modificações da invenção descritas em adição àquelas descritas aqui serão aparentes aqueles versados na técnica a partir da descrição acima. Tais modificações pretendem estar dentro do escopo das reivindicações anexas.

Claims

1. Formulação de anticorpo anti-CD20, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende 20 a 300 mg/mL de ofatumumab, em que a formulação compreende ainda 10 a 100 mM de acetato de sódio, 25 a 100 mM de cloreto de sódio, 0,5 a 5% de base livre de arginina, 0,02 a 0,2 mM de EDTA, 0,01 a 0,2% de polissorbato 80 e ajustada para pH 5,0 a 7,0.

2. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a formulação é estável a uma temperatura de 5°C por 2 anos.

3. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a formulação é estável a uma temperatura de 25°C por 3 meses.

4. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a formulação é estável a uma temperatura de 40°C por 1 mês.

5. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a formulação é estável a uma temperatura de 55°C por pelo menos 1 dia.

6. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a formulação é estável a uma faixa de tempera-tura de 5 a 55°C por 1 dia com agitação.

7. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o acetato de sódio está presente em uma quan-tidade de 50mM.

8. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a formulação de anticorpo anti-CD20 é de pH 5,5.

9. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o cloreto de sódio está presente em uma quan-tidade de 51 mM.

10. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a base livre de arginina está presente em uma quantidade de 1%.

11. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o EDTA está presente em uma quantidade de 0,05 mM.

12. Formulação de anticorpo anti-CD20, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o polissorbato 80 está presente em uma quan-tidade de 0,02%.

13. Formulação de anticorpo anti-CD20, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende ofatumumab na faixa de concentração de 20-300 mg/mL, em que a formulação compreende ainda 50 mM de acetato de sódio, 51 mM de cloreto de só-dio, 1% de base livre de arginina, 0,05 mM de EDTA, 0,02% de polissorbato 80, e ajustada para pH 5,5.