BRPI0717734B1 - Método para preparar um pó seco de nanopartículas poliméricas, pó seco e uso do mesmo - Google Patents

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(54) Título: MÉTODO PARA PREPARAR UM PÓ SECO DE NANOPARTÍCULAS POLIMÉRICAS, PÓ SECO E USO DO MESMO (51) Int.CI.: A61L 15/00; A61L 15/14; A61L 27/52; A61L 27/54 (30) Prioridade Unionista: 13/10/2006 US 11/581,049 (73) Titular(es): ULURU INC.

(72) Inventor(es): JOHN V. ST. JOHN; DANIEL G.MORO (85) Data do Início da Fase Nacional: 13/04/2009

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MÉTODO PARA PREPARAR UM PÓ SECO DE NANOPARTÍCULAS POLIMÉRICAS, PÓ SECO E USO DO MESMO

Área da Invenção

Esta invenção diz respeito às áreas de química 5 orgânica, físico-química, química de polímeros, química farmacêutica, medicina e ciência dos materiais.

Antecedentes da Invenção

A principal função de um curativo é fornecer o melhor ambiente possível para a cura. Não há um só curativo que seja apropriado para todos os ferimentos, e a escolha do curativo depende da causa, da presença de infecção, do tipo e do tamanho do ferimento, do estágio de cura do ferimento, do custo e da aceitação por parte do paciente (Findlay D., Aust. Fam Physician, 1994:23(5) :824-839) . De acordo com

Lawrence (Lawrence, J.C., Injury, 1982; 13:500-512), o material de um curativo deve ser estéril, forte, absorvente, protetor, de baixo custo e capaz de moldar-se aos contornos do corpo. Deve ser não-tóxico, antialérgico e livre de materiais particulados que possam soltar-se e penetrar no ferimento. Além disso, deve ser de fácil remoção, sem aderir ao ferimento, e possuir uma aparência aceitável para os pacientes, equipe de enfermagem e outros.

Os curativos podem ser classificados como primários ou secundários. Os curativos primários são colocados diretamente sobre o ferimento. Eles fornecem proteção, suporte e absorção, previnem o ressecamento e infecções, e servem como base adesiva para o curativo secundário. Os curativos secundários fornecem suporte adicional, absorção, proteção, compressão e oclusão. O curativo secundário muitas vezes serve como um curativo de pressão.

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Existe uma grande variedade de curativos disponíveis para cumprir as metas essenciais da terapia tópica, metas estas que são proporcionar oxigênio e circulação adequados aos tecidos, isolar e proteger o ferimento em processo de cura, eliminar infecções clínicas através da remoção do excesso de exsudato, manter um ambiente limpo e úmido, e obter o fechamento completo do ferimento. Podem ser necessários diversos produtos diferentes conforme o ferimento atravessa os diversos estágios da cura. Estes produtos incluem alginatos, que formam um gel que cobre o ferimento; anti-sépticos, que limpam a área do ferimento; colágeno, uma cobertura não-aderente que estimula a migração celular; compósitos e desbridadores enzimáticos que facilitam o desbridamento autolítico; absorventes de exsudato e espumas que preenchem o espaço morto de um ferimento; produtos de gaze com medicamentos para tratar e controlar infecções; hidrocolóides e hidrogéis que reduzem a dor e facilitam o desbridamento autolítico; bolsas para coletar e conter o produto de drenagem; seladores de pele e filmes transparentes, que reduzem a fricção e facilitam o desbridamento autolítico (Robert G. Smith, Wound Care Product Selection, U.S. Pharmacist, 4/2003) . Estes produtos possuem atributos para tratar de vários estágios distintos de ferimentos, porém todos têm suas limitações. Por exemplo, os alginatos podem desidratar o leito do ferimento, produzir odores desagradáveis e são contra-indicados para uso na presença de escara seca, em queimaduras de terceiro grau e na implantação cirúrgica. Os curativos de colágeno também são contra-indicados para uso em queimaduras de terceiro grau e implantação cirúrgica. As bandagens de gaze,

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3/73 que se tornam antiaderentes mediante a incorporação de pretolato, ainda assim têm a tendência de descolar a pele nova durante a remoção e soltar fiapos que penetram o ferimento. Além disso, não são absorventes. Os curativos de hidrocolóides são de difícil remoção e o fluido marrom amarelado de odor desagradável que é drenado do ferimento costuma se acumular sob estes curativos. As espumas não são recomendadas para ferimentos sem exsudatos ou ferimentos com escara seca. Os curativos de hidrogel atuais possuem diversas vantagens quando comparados com outros produtos, mas visto que contém uma grande quantidade de água (80 a 90%), eles não são absorventes e, portanto, não são recomendados para uso em ferimentos com grande quantidade de exsudato, e, quando utilizados sozinhos, não impedem a entrada de bactérias no ferimento.

Esta visão geral foi apresentada no que diz respeito a ferimentos e suas diferentes modalidades de tratamento, e também é importante fornecer uma descrição detalhada dos hidrogéis de polímeros, já que esta invenção está relacionada a curativos para ferimentos e biomateriais de hidrogel.

Um gel é uma rede polimérica tri-dimensional que absorveu um líquido para formar uma composição estável, em geral macia e maleável, com um módulo de cisalhamento não25 zero. Quando o líquido absorvido por um gel é água, o gel é chamado de hidrogel. A água pode compreender uma parte significativa da percentagem de peso de um hidrogel. Isto, aliado ao fato de muitos polímeros formadores de hidrogéis serem biologicamente inertes, faz com que os hidrogéis sejam particularmente úteis em uma ampla variedade de

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4/73 aplicações biomédicas.

Por exemplo, os hidrogéis são comumente usados em lentes de contato gelatinosas. São utilizados também como curativos para ferimentos e queimaduras, com ou sem medicamentos incorporados que podem ser liberados a partir da matriz de gel para auxiliar no processo de cura (ver, por exemplo, Patentes Norte-Americanas Números 3.063.685 e 4.272.518). Os hidrogéis vêm sendo usados como revestimento para melhorar a molhabilidade das superfícies de dispositivos médicos como filtros de sangue (Pat. EUA N— 5.582.794). Os hidrogéis também são utilizados como dispositivos para a liberação de substâncias biologicamente ativas. Por exemplo, a Patente Norte-Americana N- 5.292.515 apresenta um método para preparação de um dispositivo de distribuição de medicamento por reservatório hidrofílico. A patente 515 revela que as taxas de liberação de medicamentos podem ser controladas através da modificação do conteúdo de água do implante de hidrogel subcutâneo, o que afeta diretamente o seu coeficiente de permeabilidade.

Em todas as aplicações acima, o gel ou hidrogel está em formato a granel, ou seja, é uma massa amorfa de material sem qualquer estrutura interna discernível. Os hidrogéis a granel possuem taxas de dilatação baixas devido ao volume interno grande relativamente à área de superfície através da qual a água tem que ser absorvida. Além disso, uma substância dissolvida, ou suspensa na água absorvida, dispersar-se-á para fora do gel a uma taxa que dependerá da distância que terá que percorrer para alcançar a superfície do gel. Isto é, as moléculas próximas da superfície do hidrogel escaparão rapidamente, enquanto as moléculas que

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5/73 estiverem mais no interior da matriz demorarão muito mais para alcançar a superfície externa do gel. Esta situação pode ser contornada, até certo ponto, através de géis particulados. Se cada partícula for suficientemente pequena, as substâncias dispersas nas partículas dispersar-se-ão para a superfície e serão liberadas ao mesmo tempo, aproximadamente.

Os géis particulados podem ser formados através de diversos procedimentos, como a polimerização por emulsão direta ou inversa (Landfester, et al., Macromolecules, 2000, 33:2370) ou podem ser criados a partir de géis a granel, secando-se o gel e então moendo-se o xerogel resultante até obter as partículas do tamanho desejado. As partículas podem então ser re-solvatadas para formar géis particulados.

Partículas com tamanho de diâmetro na faixa de micro (10^-6 metros (m)) a nano (10^-9 m) podem ser produzidas através deste método. As moléculas de uma substância absorvida por partículas nesta faixa de tamanho terão todas aproximadamente a mesma distância a percorrer a fim de chegar à superfície externa da partícula, e exibirão cinética de liberação próxima da ordem zero. Entretanto, os géis particulados têm seus problemas. Por exemplo, é difícil controlar a disseminação das partículas para um ponto-alvo selecionado, bem como a sua localização neste ponto-alvo. Além disso, enquanto os hidrogéis a granel podem ser modificados para que retenham sua forma, o que os torna úteis em diversas aplicações médicas, os géis particulados disponíveis atualmente não podem.

A Publicação de Pedido de Patente Americana Co30 pendente no. US 2004/0086548A1 revela um agregado retentor

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6/73 de forma formado a partir de partículas de hidrogel, combinando assim a capacidade de reter formas dos hidrogéis a granel com o controle de liberação de substâncias dos géis particulados. O pedido ‘548 revela um método para formar os agregados retentores de forma que compreende a preparação de uma suspensão de partículas de hidrogel em água ou outro líquido polarizado, e a concentração da suspensão até que as partículas se aglutinem, formando um agregado retentor de forma que é mantido unido por forças físicas de ligações não-covalentes, inclusive, interações hidrofóbicas-hidrofílicas e ligações de hidrogênio, entre outras. Os dispositivos desta invenção são particularmente úteis, por exemplo, como implantes de distribuição de medicamentos, para criar uma estrutura de tecido para a reparação de cartilagens ou ossos, além de lentes de contato e cateteres moldáveis com eluição de medicamentos.

A Publicação de Pedido de Patente Americana Copendente N- US 2005/0118270A1 revela um método para formação de agregados retentores de forma in situ em que a forma do agregado é ditada pela forma do local da aplicação. A formação do agregado é alcançada através da introdução de uma suspensão de partículas de gel dispersas em um líquido polarizado, preferivelmente água - em que as partículas de gel têm um valor absoluto de potencial Zeta, o que permite que as partículas permaneçam dispersas - em um meio receptor em que o valor absoluto de potencial Zeta das partículas de gel é reduzido. As partículas de gel se aglutinam, formando um agregado retentor de forma que é mantido unido por forças físicas de ligações não-covalentes que compreendem interações hidrofóbicas-hidrofílicas e

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7/73 ligações de hidrogênio. As aplicações incluem, entre outras, usos biomédicos tais como reconstrução de articulações, reparação de ferimentos, implantes de distribuição de medicamentos formados in situ e cirurgia cosmética e reconstrutora.

RELATÓRIO DA INVENÇÃO

Os depositantes apresentam um agregado integral que se adapta a formas e retém formas, e produz um curativo diretamente sobre um ferimento in situ, e, para outras aplicações, produz um biomaterial in vivo em ou sobre um tecido corporal úmido. Na primeira aplicação, o pó nanoparticulado de hidrogel utiliza o sangue ou o exsudato de um ferimento, que é compósito substancialmente de água e outros compósitos biológicos, como fluido seroso, fibrina e leucócitos, absorve este líquido polarizado e se aglutina, formando uma rede estreita de nanopartículas e fluido do ferimento que é mantida unida por forças físicas de ligações não-covalentes, forças estas que compreendem interações hidrofóbicas-hidrofílicas e ligações de hidrogênio. Os curativos de agregado realizam suas propriedades características de conformação ao ferimento e retenção de forma em virtude de intensas forcas atrativas interpartículas, tais como, entre outras, ligações de hidrogênio, e também em virtude das ligações de hidrogênio entre as partículas e o líquido nos espaços entre as partículas. Os curativos permanecem intactos como filmes integrais durante os estágios de cura do ferimento, e caem quando o ferimento não está mais úmido, ou quando a cura tiver ocorrido. Nesta aplicação, o pó utiliza qualquer fluido corporal in vivo para formar um biomaterial agregado

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8/73 retentor de forma que é mantido unido pelas mesmas forças descritas anteriormente. A discussão a seguir ficará concentrada principalmente nos curativos para ferimentos formados in situ, notando, entretanto, que as mesmas propriedades podem ser proporcionadas aos biomateriais formados in vivo para uma ampla variedade de aplicações médicas.

Uma característica importante destes curativos e biomateriais é que uma variedade de agentes biológicos e/ou farmacêuticos pode ser facilmente incorporada através da mistura do pó nanoparticulado com um ativo ou combinação de ativos, e da aplicação do material misturado diretamente no local do ferimento, ou colocação da mistura em ou sobre um tecido corporal úmido in vivo. A bandagem resultante fornecerá então uma distribuição contínua dos compósitos terapêuticos por um período de tempo prolongado ao leito do ferimento a fim de ajudar no tratamento, gerenciamento, e eventual cura do ferimento e/ou para aliviar a dor. A capacidade de formar in situ curativos protetores, não20 oclusivos, bio-compatíveis, adaptáveis a formas e retentores de forma com ou sem compósitos terapeuticamente ativos para diversos ferimentos com exsudatos, tais como queimaduras, dermoabrasões, locais de doação de pele, biópsias com punch, úlceras vasculares e de decúbito, entre outras, representa um grande avanço no tratamento e gerenciamento de ferimentos. Estes curativos possuem todos os atributos ideais que os curativos para ferimentos devem exibir, a saber, a capacidade de fornecer oxigenação adequada para o tecido, já que estes curativos não30 oclusivos são porosos, visto que são compósitos de

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9/73 nanopartículas e exsudato do ferimento, proteger o ferimento de bactérias exógenas, eliminar a possibilidade de infecções utilizando o exsudato do ferimento na formação do curativo, manter um ambiente limpo e úmido, visto que são hidrogéis e obtêm o fechamento completo do ferimento.

Assim, a presente invenção fornece um pó seco de nanopartículas poliméricas preparado através de um método de polimerização de uma quantidade de um monômero, ou dois ou mais monômeros, sendo que pelo menos um deles é um ácido

2-alquenóico, um 2-alquenoato de hidroxi-alquila (2C - 4C) , um 2-alquenoato de di-hidroxi-alquila (2C-4C), um 2alquenoato de hidroxi-alcoxi-(2C - 4C)-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de alcoxi-(1C - 4C)-alcoxi-(2C - 4C)alquila-(2C - 4C) ou um epóxi vicinal 2-alquenoato de alquila (1C - 4C), em um líquido polarizado ou uma mistura de dois ou mais líquidos miscíveis, sendo que pelo menos um deles é polarizado, e uma quantidade efetiva de um tensoativo para produzir uma suspensão de uma pluralidade de nanopartículas poliméricas, sendo que as nanopartículas poliméricas possuem um diâmetro médio de menos do que 1 x 10^-6 m; o líquido (ou líquidos) é então removido da suspensão de modo que a quantidade de líquido (ou líquidos) remanescente no pó seco é de menos de 10% por peso, sendo que a porcentagem é baseada no peso total do pó seco.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método para produzir um curativo in situ de um agregado adaptável a formas e retentor de formas no local de um ferimento úmido através da aplicação do pó seco ao local do ferimento úmido.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece um

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10/73 método de formação de um biomaterial adaptável a formas e retentor de forma in vivo, em ou sobre um tecido corporal úmido, através da aplicação do pó seco sobre o tecido corporal úmido.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento de um ferimento, que compreende a aplicação de uma quantidade efetiva do pó seco.

DESCRIÇÃO BREVE DAS FIGURAS E TABELAS

A Figura 1 é uma fotografia que mostra o pó de nanopartículas de hidrogel, o pó aplicado a uma solução salina tamponada com fosfato, e o agregado resultante após a hidratação do pó.

A Figura 2 é um gráfico que mostra a massa relativa de um agregado formado a partir de 500mg de pó de nanopartículas aplicado a uma solução salina tamponada com fosfato e as mudanças na massa desses agregados no decorrer do tempo a uma temperatura e umidade constantes. Os agregados possuíam composições químicas diferentes.

A Figura 3 é um gráfico que mostra a liberação de lidocaína a partir de curativos para queimaduras feitos de um agregado de nanopartículas compósito de pHEMA e copolímeros de HEMA e GMA.

A Figura 4 é um gráfico que mostra a liberação de eritromicina a partir de curativos de queimaduras feitos de um agregado de nanopartículas compósito de pHEMA e copolímeros de HEMA e GMA.

A Figura 5 é um gráfico que mostra a liberação de 1,10 fenantrolina a partir de pós de nanopartículas compósitos de misturas de partículas de pHEMA e pHPMA com diâmetros diferentes.

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A Figura 6 mostra a inibição de bactérias Staphylococcus aureus em uma placa de petri por um agregado de nanopartículas carregado com doxiciclina e rifampina.

A Figura 7 mostra a inibição de bactérias 5 Staphylococcus aureus em uma placa de petri por um agregado de nanopartículas de controle sem nenhum antibiótico.

A Figura 8 mostra gráficos da inibição de cepas de bactérias Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Enterococcus faecalis no decorrer do tempo por agregados de nanopartículas contendo doxiciclina e rifampina, em comparação com uma bandagem comercial impregnada com antibiótico com prata.

A Figura 9 mostra um pó de nanopartículas sendo aplicado a um ferimento profundo em um modelo porcino.

A Figura 10 mostra o pó de nanopartículas e um curativo de hidrogel comercial aplicados em áreas doadoras de transplante de pele em um modelo porcino com cura no decorrer do tempo.

A Figura 11 mostra a histologia de ferimentos tratados com um agregado de nanopartículas contendo fator de crescimento derivado de plaquetas um agregado de controle sem fator de crescimento.

A Figura 12 mostra a histologia de ferimentos tratados com um agregado de nanopartículas contendo fator de crescimento endotelial vascular e um agregado de controle sem fator de crescimento.

A Figura 13 mostra a histologia de ferimentos tratados com um agregado de nanopartículas contendo uma combinação de um fator de crescimento derivado de plaquetas e um fator de crescimento endotelial vascular, e um agregado de

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12/73 controle sem fator de crescimento.

A Tabela 1 mostra as proporções de monômeros HEMA e HPMA em massa e mmol (milimolar) usados para formar nanopartículas de hidrogel que consistem de copolímeros.

A Tabela 2 mostra as proporções de monômeros HEMA e

GMA usados para formar nanopartículas de hidrogel que consistem de copolímeros.

A Tabela 3 mostra o prolongamento e tensão de falha para agregados formados de nanopartículas com diferentes composições químicas.

A Tabela 4 mostra os tamanhos das nanopartículas usadas para formar agregados de misturas de nanopartículas com diferentes composições químicas para a liberação controlada de 1,1 fenantrolina.

MODOS DE EXECUÇÃO DA INVENÇÃO

Definições

Conforme utilizado no presente relatório, o termo compreender significa que as composições e métodos incluem os elementos citados, mas sem excluir outros. O termo consistir essencialmente em, quando usado para definir composições e métodos, indica a exclusão de outros elementos com qualquer significância para a combinação. Assim, uma composição que consiste essencialmente dos elementos aqui definidos não excluiria traços de contaminantes do método de isolamento e purificação e portadores aceitáveis em termos farmacêuticos, tais como uma solução salina tamponada com fosfato, conservantes e similares. O termo consiste de indica a exclusão de mais do que resíduos de outros ingredientes e etapas de métodos substanciais para se administrar as composições desta

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13/73 invenção. As modalidades definidas por cada um destes termos de transição estão dentro do escopo desta invenção.

Todas as designações numéricas, por exemplo, pH, temperatura, tempo, concentração e peso molecular, inclusive as variações, são aproximações que variam para mais ou para menos em incrementos de 0,1. Embora não seja sempre afirmado explicitamente, deve-se entender que todas as designações numéricas são precedidas pelo termo “cerca de”. Deve também ficar entendido, mesmo não sendo sempre afirmado explicitamente, que os reagentes aqui descritos são meramente exemplos, e que os equivalentes destes são conhecidos por aqueles versados na arte.

Conforme utilizado no presente relatório, o termo “gel” refere-se a uma estrutura polimérica tridimensional que é insolúvel em um líquido específico, mas que é capaz de absorver e reter grandes quantidades do líquido para formar uma estrutura estável, muitas vezes maleável e macia, mas sempre com algum grau de retenção de forma. Quando o líquido é água, o gel é chamado de hidrogel. Salvo afirmação expressa em contrário, o termo “gel” será utilizado em toda esta aplicação para fazer referência tanto a estruturas poliméricas que tenham absorvido um líquido que não a água, como a estruturas poliméricas que tenham absorvido água, sendo que ficará claro imediatamente para aqueles versados na arte se a estrutura em questão é simplesmente um “gel” ou um “hidrogel”.

O termo “líquido polarizado”, conforme usado aqui, possui o significado geralmente entendido por aqueles versados na arte da química. Resumindo, um líquido polarizado é aquele em que os elétrons são distribuídos de

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14/73 maneira desigual entre os átomos de suas moléculas e criam assim um dipolo elétrico. Para ser polarizada, uma molécula deve conter ao menos um átomo que seja mais eletronegativo do que os outros átomos da molécula. Exemplos de líquidos polarizados incluem, sem caráter restritivo, a água, onde o átomo de oxigênio possui uma carga negativa parcial e os átomos de hidrogênio possuem uma carga positiva parcial, e os álcoois, onde o grupo O-H é polarizado de maneira semelhante.

Conforme usado aqui, o termo “partícula de gel” refere-se a uma quantidade microscópica ou submicroscópica de um gel em uma forma distinta, geralmente - mas não necessariamente - esférica ou substancialmente esférica.

Conforme usado aqui, o termo “partícula de gel” refere-se a pequenos clusters de partículas individuais mantidas unidas por forças físicas de ligações não-covalentes, inclusive, mas não somente, interações hidrofóbicas-hidrofílicas e ligações de hidrogênio, sendo que os clusters não afetam de maneira adversa a estabilidade da suspensão de partículas de gel (sistema de suspensão) que contém estes grupos, nem o desempenho do pó de nanopartículas dos métodos desta invenção. Os clusters resultam de mudanças na concentração de partículas de gel em suspensão e durante o estágio de secagem para isolar as nanopartículas. Isto é, em concentrações mais altas, é mais provável que partículas individuais se aproximem o suficiente uma da outra para que forças de ligações não-covalentes façam com que elas se aglutinem.

Conforme utilizado aqui, o termo “suspensão” refere-se a uma dispersão estável e uniformemente distribuída de um

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15/73 sólido em um líquido em que o sólido não é solúvel. Um tensoativo pode ser acrescentado ao líquido para ajudar a estabilizar a dispersão. Conforme usado aqui, o termo “sistema de suspensão” refere-se a uma suspensão em que as partículas de gel desta invenção são o sólido disperso. O termo “estável” significa que o sólido permanece disperso uniformemente por pelo menos 24 horas, a menos que seja submetido a forcas externas tais como, entre outras, a centrifugação ou filtragem.

Conforme utilizado aqui, o termo “tensoativo” tem o significado geralmente entendido por aqueles versados na arte da química, ou seja, um tensoativo é um compósito solúvel que pode ser aniônico, catiônico, zwitteriônico, anfotérico ou neutro em termos de carga, e que reduz a tensão de superfície do líquido em que é dissolvido ou reduz a tensão interfacial entre dois líquidos ou um líquido e um sólido.

Conforme utilizado aqui, o termo “agregado ajustável a formas e retentor de forma” refere-se a uma estrutura formada in situ sobre um ferimento úmido ou um biomaterial formado in vivo sobre ou no interior de um tecido corporal, composta de um grande número de partículas mantidas unidas por forças interpartículas ou partícula/líquido, tais como, entre outras, interações hidrofóbicas-hidrofílicas e ligações de hidrogênio em que a estrutura se mantém indefinidamente contanto que permaneça hidratada.

O termo “monômero”, conforme usado aqui, possui o significado entendido por aqueles versados na arte da química. Um monômero é um compósito químico pequeno capaz de formar uma macromolécula de unidades auto-repetitivas,

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16/73 ou seja, um polímero. Dois ou mais monômeros diferentes podem reagir para formar um polímero em que cada um dos monômeros é repetido diversas vezes, e o polímero é chamado de copolímero de modo a refletir o fato de que é compósito de mais de um monômero.

Conforme usado aqui, o termo tamanho, quando utilizado para descrever uma partícula de gel desta invenção, refere-se ao volume de uma partícula essencialmente esférica conforme representado por seu diâmetro, que, obviamente, está em diretamente relacionado ao seu volume. Quando se refere a uma pluralidade de partículas de gel, o termo tamanho está relacionado ao volume médio das partículas na pluralidade, conforme representado por seu diâmetro médio.

Conforme usado aqui, o termo polidispersão refere-se à faixa de variação do tamanho das partículas de um sistema de suspensão. Polidispersão estreita refere-se a um sistema de suspensão em que o tamanho das partículas individuais, conforme representado por seus diâmetros, apresenta um desvio de 10% ou menos do diâmetro médio das partículas do sistema. Se duas ou mais pluralidades de partículas em um sistema de suspensão forem descritas como tendo polidispersão estreita, isto significa que há dois conjuntos distintos de partículas em que as partículas de cada conjunto apresentam uma variação de diâmetro de não mais do que 10% de um diâmetro médio das partículas daquele conjunto e as duas médias são distintamente diferentes. Um exemplo não-limitador de tal sistema de suspensão seria um sistema que compreendesse um primeiro conjunto de partículas em que cada partícula possui um diâmetro de 20nm

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17/73 + /- 10% e um segundo conjunto de partículas em que cada partícula possui um diâmetro de 40nm +/- 10%.

Conforme utilizado aqui, o termo “polidispersão larga” refere-se a um sistema de suspensão em que o tamanho das partículas individuais de um conjunto de partículas apresenta um desvio de mais de 10% do tamanho médio das partículas do conjunto.

O termo “pluralidade”, conforme usado aqui, refere-se simplesmente a mais do que um, isto é, dois ou mais.

Conforme usado aqui, o termo “composição química”, no tocante a uma partícula de gel desta invenção, refere-se à composição química dos monômeros que são polimerizados a fim de fornecer as linhas de polímeros da partícula, à composição química e proporções de diferentes monômeros no caso de dois ou mais monômeros serem usados para preparar as linhas de polímeros das partículas e/ou à composição e quantidade de qualquer agente (ou agentes) de ligação cruzada que for utilizado para interligar as linhas de partículas.

Conforme utilizado aqui, o termo “linha de partícula” refere-se a uma única molécula de polímero ou, se o sistema em que a linha existir contiver um agente de ligação cruzada, duas ou mais moléculas de polímero interligadas. O número médio de linhas de polímero que terão ligação cruzada e o número médio de ligações cruzadas entre quaisquer duas linhas de polímeros dependerá da quantidade de agente de ligação cruzada no sistema e da concentração de linhas de polímeros.

Conforme usado aqui, o termo “substância de trabalho” refere-se a qualquer substância que seja absorvida por uma

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18/73 partícula de gel ou capturada em um curativo de agregado retentor de forma ou em um biomaterial desta invenção. Exemplos de substâncias de trabalho incluem, sem caráter restritivo, agentes biomédicos, substâncias biologicamente ativas tais como agentes farmacêuticos, genes, proteínas, peptídeos, polissacarídeos, fatores de crescimento, anticorpos monoclonais, anticorpos fragmentados, antígenos, polipeptídios, DNA, RNA e ribozimas.

Conforme usado aqui, o termo “agente farmacêutico” 10 refere-se tanto a compósitos micromoleculares como a compósitos macromoleculares usados como medicamentos. Entre os primeiros estão, sem caráter restritivo, antibióticos, quimioterapêuticos (em especial compósitos de platina e taxol e seus derivados), analgésicos, antidepressivos, antialérgicos, antiarrítmicos, compósitos antiinflamatórios, estimulantes do SNC, sedativos, anticolinérgicos, anti-arterioscleróticos e similares. Os compósitos macromoleculares incluem, sem caráter restritivo, anticorpos monoclonais (mAbs), Fabs, proteínas, peptídeos, células, antígenos, ácidos nucléicos, enzimas, fatores de crescimento e similares. Um agente farmacêutico pode ser indicado para uso tópico ou sistêmico.

Conforme usado aqui, o termo “hidroxi” refere-se a um grupo -OH.

Conforme usado aqui, o termo “alquila” refere-se a um hidrocarboneto alifático saturado de cadeia linear ou ramificada, ou seja, um compósito que consiste somente de carbono e hidrogênio. O tamanho de uma alquila em termos do número de átomos de carbono que ela contém é indicado pela fórmula alquila- (“a”C - “b”C”) , em que a e b são números

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19/73 inteiros. Por exemplo, uma alquila-(1C - 4C) refere-se a uma cadeia alquila linear ou ramificada consistindo de 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono. Um grupo alquila pode ser substituído ou não-substituído.

Conforme usado aqui, o termo alcoxi refere-se ao grupo -O-alquila, entendendo-se o termo alquila conforme descrito acima. O tamanho de um alcoxi em termos do número de átomos de carbono que ele contém é indicado pela fórmula alcoxi-(aC - bC), em que a e b são números inteiros.

Por exemplo, uma alquila-(1C - 4C) refere-se a uma cadeia alquila linear ou ramificada consistindo de 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono. Um grupo alquila pode ser substituído ou não-substituído.

Conforme usado aqui, o termo éster refere-se ao grupo -C(O)O-alquila, entendendo-se o termo alquila conforme definido acima.

Conforme usado aqui, o termo éter refere-se ao grupo alquila-O-alquila, entendendo-se o termo alquila conforme definido acima.

Conforme usado aqui, o termo ácido 2-alquenóico refere-se ao grupo (R¹) (R²)C=C(R³)-C(O)OH, onde R¹, R²e R³ são selecionados independentemente a partir do hidrogênio e alquila, entendendo-se o termo alquila conforme definido acima. Exemplos destes ácidos 2-alquenoatos são o ácido acrílico, ácido metacrílico, etc.

Conforme usado aqui, o termo 2-alquenoato refere-se ao grupo (R¹)(R²)C=C(R³)-C(O)O-alquila, onde R¹, R²e R³ são selecionados independentemente a partir do hidrogênio e alquila, entendendo-se o termo alquila conforme definido acima.

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Conforme usadas aqui, as expressões “espaços vazios entre as nanopartículas de hidrogel” ou “entre as nanopartículas” referem-se ao espaço aberto gerado quando as circunferências das partículas de gel que são essencialmente esféricas encostam-se umas nas outras quando formam os curativos de agregados retentores de forma desta invenção. O volume dos espaços vazios pode ser definido como sendo de aproximadamente 0,414 vezes o raio médio das esferas se as esferas tiverem polidispersão estreita e se agruparem em um arranjo de agrupamento próximo.

Conforme usado aqui, o termo “agente de ligação cruzada” refere-se a uma entidade química bi, tri ou tetrafuncional que seja capaz de formar ligações covalentes com grupos funcionais em cepas poliméricas, resultando em uma estrutura tri-dimensional.

Uma “ligação de hidrogênio” refere-se à atração eletrostática entre um átomo de hidrogênio em ligação covalente com um átomo altamente eletronegativo e outro átomo eletronegativo com pelo menos um par solitário de elétrons. A força de uma ligação de hidrogênio, de cerca de 23kJ (quilo joules) por mol^-1, fica entre a força de uma ligação covalente, de cerca de 500kJ por mol^-1, e a de uma atração de Van der Waals, de cerca de 1,3 kJ por mol^-1. As ligações de hidrogênio têm um efeito notável nas características físicas de uma composição capaz de formar estas ligações. Por exemplo, o etanol possui um átomo de hidrogênio em ligação covalente com um átomo de oxigênio, que também possui um par de elétrons não-compartilhados (ou seja, um “par solitário”), e, portanto, o etanol é capaz de fazer uma ligação de hidrogênio consigo mesmo. O ponto de

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21/73 ebulição do etanol é de 78° C. Em geral, os compósitos com peso molecular semelhante costumam ter pontos de ebulição semelhantes. Entretanto, o dimetil éter, que possui exatamente o mesmo peso molecular do etanol, mas que não é capaz de fazer ligações de hidrogênio entre suas próprias moléculas, possui um ponto de ebulição de -24° C, quando 100 graus a menos do que o etanol. A ligação de hidrogênio entre as moléculas do etanol faz com que o etanol aja como se tivesse um peso molecular substancialmente mais alto.

Conforme usado aqui, o termo excipiente refere-se a uma substância inerte acrescentada a um compósito farmacêutico a fim de facilitar a sua administração. Alguns exemplos de excipientes incluem, sem caráter restritivo, o carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares e tipos de amido, polímeros solúveis em água, derivados da celulose, gelatina, óleos vegetais e glicóis de polietileno. Um excipiente aceitável em termos farmacêuticos refere-se a um excipiente que não causa irritação significativa a um organismo e não prejudica a atividade biológica e as propriedades do compósito administrado.

Conforme usada aqui, a expressão útil no tratamento de significa que o agente farmacêutico tem a capacidade conhecida de inibir, direta ou indiretamente, ou, preferivelmente, de destruir ou desativar o agente causal da doença indicada, ou de pelo menos aliviar, e preferivelmente eliminar os sintomas desta doença. No tocante à cura de ferimentos, o agente deve ser capaz de, pelo menos, diminuir o tempo de fechamento do ferimento.

Conforme usado aqui, o termo câncer refere-se a neoplasmas malignos que, por sua vez, estão relacionados a

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22/73 um grande grupo de doenças que podem surgir em praticamente qualquer tecido compósito de células com potencial de divisão. A característica básica do câncer é uma anormalidade celular transmissível que se manifesta através 5 da redução do controle sobre o crescimento e a função, acarretando efeitos graves e potencialmente letais no hospedeiro por meio de crescimento e metástases invasivos.

Conforme usado aqui, o termo “doença ocular” refere-se a uma doença em que os olhos não funcionam adequadamente, de modo que a visão é afetada. Exemplos de doenças oculares incluem, entre outras, glaucoma, degeneração macular, retinopatia diabética e cataratas. Exemplos de agentes farmacêuticos úteis no tratamento de doenças oculares incluem, sem caráter restritivo, agentes anti-inflamatórios, antibióticos, antimicrobianos e agentes redutores de pressão.

Conforme usado aqui, o termo “infecção” refere-se a um estado de doença causado por um microorganismo, como, por exemplo, sem caráter restritivo, bactérias, vírus, príons, fungos, amebas ou protozoários. Exemplos de agentes farmacêuticos úteis no tratamento de infecções incluem, sem caráter restritivo, agentes antimicrobianos, antibióticos e bacteriostáticos.

Os curativos de agregados retentores de forma ou os biomateriais desta invenção podem ser manipulados utilizando as apresentações aqui contidas de modo a serem capazes de absorver ou reter praticamente qualquer agente farmacêutico conhecido atualmente, ou que possa vir a ser conhecido por aqueles que são versados na arte como sendo eficazes no tratamento e/ou prevenção de qualquer uma das

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23/73 doenças acima referidas, e todos estes agentes farmacêuticos estão dentro do escopo desta invenção.

Conforme usada aqui, a expressão “cerca de” significa +/- 15% do valor modificado pela expressão.

Conforme usada aqui, a expressão “in situ” refere-se ao processo ou procedimento de formar um curativo de um ferimento diretamente no local, externa ou internamente, em um mamífero, particularmente em um ser humano.

Conforme usado aqui, o termo “biomaterial” refere-se 10 ao material retentor de forma e adaptável a formas que é formado quando o pó de nanopartículas de hidrogel é introduzido in vivo em um tecido de um ferimento úmido de um mamífero, particularmente de um ser humano.

Conforme usada aqui, a expressão “interações 15 hidrofílico-hidrofóbicas” refere-se à associação inter ou intramolecular de entidades químicas através de forças físicas, em que compósitos hidrofílicos ou regiões hidrofílicas de compósitos tendem a se associar a outros compósitos hidrofílicos ou regiões hidrofílicas de compósitos, e compósitos hidrofóbicos ou regiões hidrofóbicas de compósitos tendem a se associar a outros compósitos hidrofóbicos ou regiões hidrofóbicas de compósitos.

Conforme usado aqui, o termo “absorver” possui o significado geralmente compreendido por aqueles versados na arte da química, isto é, absorver e reter uma substância por um período. Com relação a esta invenção, as substâncias podem ser absorvidas e retidas pelas partículas de gel desta invenção durante a sua formação.

Conforme usado aqui, o termo “retido” refere-se à

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24/73 retenção, por um período, de uma substância nos espaços vazios entre as partículas de gel que compõem os curativos de agregados retentores de forma ou os biomateriais desta invenção.

Conforme usado aqui, o termo “peso molecular médio” refere-se ao peso das cepas individuais de polímeros ou cepas de polímeros com ligação cruzada desta invenção. Para os propósitos desta invenção, o peso molecular médio é determinado por cromatografia de permeação de gel com detecção por dispersão de luz a laser.

Conforme usado aqui, o termo “fator de crescimento” refere-se a certos polipeptídios que, quando ligados a receptores de fator de crescimento na superfície das células, estimulam o aumento de tamanho e a divisão celular.

Os receptores de fator de crescimento são específicos para cada fator de crescimento, de modo que somente as células que expressam o receptor exato de um fator de crescimento serão estimuladas por aquele fator de crescimento. Exemplos de fatores de crescimento incluem, sem caráter restritivo, o fator de crescimento vascular endotelial (VEGF), fator de crescimento semelhante à insulina (IGF), fator de crescimento de fibroblastos (FGF), fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento de hepatócitos (HGF) e fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF).

Conforme usado aqui, o termo “estrutura de tecido” refere-se a uma matriz extracelular tridimensional, artificial e altamente porosa que é usada in vivo como uma estrutura à qual as células podem se conectar e crescer a fim de regenerar tecidos perdidos devido a ferimentos ou doenças.

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Conforme usado aqui, o termo “ferimento úmido” referese a qualquer ferimento em que há líquido sendo expelido do local do ferimento, líquido este que pode ser sangue ou exsudato.

Conforme usado aqui, o termo “fluido corporal” referese a qualquer líquido presente nos tecidos corporais de mamíferos, preferivelmente seres humanos.

Conforme usado aqui, o termo “exsudato” refere-se ao fluido presente no local de um ferimento, e que é composto substancialmente de água e outros matérias biológicos, como leucócitos, fibrina e soro.

Conforme usada aqui, a expressão “compósito de substância de trabalho/pó particulado” refere-se a uma mistura do pó seco de nanopartículas com qualquer substância de trabalho e/ou excipiente farmacêutico.

Modalidades

Esta invenção fornece um pó seco de nanopartículas poliméricas; métodos para a formação in situ de um curativo de agregado retentor de forma e adaptável a formas no local de um ferimento úmido; métodos para a formação de um biomaterial adaptável a formas e retentor de forma in vivo em ou sobre um tecido corporal úmido e usos do pó seco no tratamento de ferimentos. Estas e outras modalidades são discutidas detalhadamente abaixo.

Em uma modalidade, esta invenção fornece um pó seco de nanopartículas poliméricas preparado através da polimerização de uma quantidade efetiva de um monômero, ou dois ou mais monômeros, sendo que pelo menos um deles é um ácido 2-alquenóico, um 2-alquenoato de hidroxi-alquila (2C

- 4C), um 2-alquenoato de di-hidroxi-alquila (2C-4C), um 2Petição 870180047289, de 04/06/2018, pág. 30/90

26/73 alquenoato de hidroxi-alcoxi--(2C - 4C)-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de alcoxi-(1C - 4C)-alcoxi-(2C - 4C)alquila-(2C - 4C) ou um epóxi vicinal 2-alquenoato de alquila (1C - 4C), em um líquido polarizado ou uma mistura de dois ou mais líquidos miscíveis, sendo que pelo menos um destes é polarizado, e uma quantidade efetiva de um tensoativo para produzir uma suspensão de uma pluralidade de nanopartículas poliméricas em que as nanopartículas poliméricas possuem um diâmetro médio de menos de 1 x 10^-6 m. Após a polimerização, o(s) líquido(s) é removido da suspensão de modo que a quantidade de líquido(s) restante no pó seco é de menos de 10% por peso, sendo que a percentagem é baseada no peso total do pó seco.

Em algumas modalidades, as partículas de gel dos métodos descritos acima têm um diâmetro médio de cerca de 1 nanômetro a cerca de 1 micrômetro, enquanto em outras as partículas de gel têm um diâmetro médio de cerca de 20 a cerca de 800 nanômetros. Em modalidades alternativas, o diâmetro médio das partículas de gel é de cerca de 100 a cerca de 700 nanômetros, ou, alternativamente, de cerca de 40 a cerca de 300 nanômetros, ou, alternativamente, de cerca de 100 a cerca de 800 nanômetros, ou, alternativamente, de cerca de 300 a cerca de 800 nanômetros, ou, alternativamente, de cerca de 600 a cerca de 800 nanômetros, ou, alternativamente, de cerca de 50 a cerca de 700 nanômetros. Em ainda outras modalidades, o diâmetro médio das partículas de gel é maior do que cerca de 35

nanômetros, e	em	outras é	de	55	nanômetros,	ou	em	ainda
outras é maior	do	que cerca	de	75	nanômetros,	ou	em	ainda
outras é maior	do	que cerca	de	100	nanômetros,	ou	em	ainda

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27/73 outras é maior do que cerca de 150 nanômetros, ou em ainda outras é maior do que cerca de 200 nanômetros, ou em ainda outras é maior do que cerca de 250 nanômetros, 300 nanômetros, ou em ainda outras é maior do que cerca de 350 nanômetros, ou em ainda outras é maior do que cerca de 400 nanômetros,

Em algumas modalidades, as partículas de gel dos métodos descritos acima têm mais ou menos o mesmo diâmetro médio, são formadas por um ou mais monômeros e têm polidispersão estreita. Em algumas modalidades, a pluralidade de partículas de gel dos métodos descritos acima está em uma concentração na faixa de 5 a 20%, o que resulta em formação de clusters. Algumas concentrações alternativas que estão dentro do escopo desta invenção incluem a faixa de cerca de 5 a 10%, ou, alternativamente, de cerca de 5 a 15%, ou, alternativamente, de cerca de 10 a 20%, ou, alternativamente, de cerca de 15 a 20%, ou, alternativamente, de cerca de 10 a 15%, ou, alternativamente, de cerca de 6 a 19%, ou, alternativamente, de cerca de 7 a 18%, sendo que cada uma destas resulta em formação de clusters. Em algumas modalidades, as pluralidades de partículas de gel dos métodos descritos acima têm diâmetros diferentes, são formadas de um ou mais monômeros e têm polidispersão estreita, enquanto em outras, elas têm polidispersão larga.

Em outra modalidade, o pó seco é obtido através do acréscimo de uma ou mais substâncias de trabalho em uma quantidade efetiva, de modo a produzir um líquido contendo uma primeira substância de trabalho, sendo que após a polimerização, uma parte do líquido contendo a primeira

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28/73 substância de trabalho é absorvido pelas nanopartículas poliméricas. É acrescentada então a segunda substância (ou substâncias) de trabalho em uma quantidade efetiva às nanopartículas poliméricas secas, e é efetuada a mistura a seco para produzir um pó particulado contendo uma segunda substância de trabalho, sendo que a primeira substância (ou substâncias) de trabalho pode ser igual ou diferente da segunda substância (ou substâncias) de trabalho.

Em outra modalidade, o pó seco é obtido através do 10 acréscimo de 0,01 a 10 mol por cento de um tensoativo a um sistema de polimerização que compreende um monômero, ou dois ou mais monômeros diferentes, sendo que o monômero, ou pelo menos um dos dois ou mais monômeros, consiste de um ou mais grupos hidroxi e/ou um ou mais grupos éster em um líquido polarizado ou uma mistura de líquidos polarizados, sendo que o líquido polarizado, ou pelo menos um dos dois ou mais líquidos polarizados, consiste de um ou mais grupos hidroxi e da polimerização do monômero (ou monômeros) para formar uma pluralidade de nanopartículas poliméricas, sendo que cada partícula compreende uma pluralidade de cepas de polímero, e o acréscimo é feito na ausência de um agente de ligação cruzada, e o polímero resultante sem ligação cruzada, ou copolímero, não é solúvel em água, mas é expansível em água, e da secagem das nanopartículas para obter o pó seco.

Em modalidades alternativas, a quantidade efetiva do tensoativo é de cerca de 0,01 por cento do peso a cerca de 0,1 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,01 por cento do peso a cerca de 0,2 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,01 por cento do peso a

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29/73 cerca de 0,3 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,01 por cento do peso a cerca de 0,4 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,1 por cento do peso a cerca de 1,0 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,1 por cento do peso a cerca de 3,0 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,1 por cento do peso a cerca de 5,0 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,1 por cento do peso a cerca de 7,0 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,1 por cento do peso a cerca de 9,0 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,02 por cento do peso a cerca de 9,5 por cento do peso.

Em outra modalidade, os monômeros (ou o monômero) para o processo descrito acima são selecionados a partir do grupo que consiste de um ácido 2-alquenóico, um 2alquenoato de hidroxi-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de di-hidroxi-alquila (2C-4C), um 2-alquenoato de hidroxialcoxi--(2C - 4C)-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de alcoxi-(1C - 4C)-alcoxi-(2C - 4C)-alquila-(2C - 4C) ou um epóxi vicinal 2-alquenoato de alquila (1C - 4C) e uma combinação de dois ou mais destes. Em outra modalidade, os monômeros (ou o monômero) para o processo descrito acima são selecionados a partir do grupo que consiste de ácido acrílico, ácido metacrílico, acrilato de 2-hidroxietil, metacrilato de 2-hidroxietil, mono-acrilato de dietilenoglicol, mono-metacrilato de dietilenoglicol, acrilato de 2-hydroxi-propil, metacrilato de 2-hidroxipropil, acrilato de 3-hidroxi-propil, metacrilato de 3hidroxi-propil, mono-acrilato de dipropileno glicol, mono30 metacrilato de dipropileno glicol, metacrilato de 2,3-diPetição 870180047289, de 04/06/2018, pág. 34/90

30/73 hidroxi-propil, glicidil acrilato, glicidil metacrilato e uma combinação de dois ou mais destes.

Em outra modalidade, o(s) líquido(s) para o processo descrito acima é selecionado a partir do grupo que consiste de água, um álcool (1C - 10C), um poliol (2C - 8C), um alquil-éter (1C - 4C) de um poliol (2C - 8C) , um ácido éster (1C - 4C) de um poliol (2C - 8C), um óxido de polietileno hydroxi-terminado, um polialquileno glicol e um alquil-éster hidroxi (2C - 4C) de um ácido monocarboxílico, dicarboxílico ou tricarboxílico.

Em outra modalidade, o líquido (ou líquidos) é selecionado a partir do grupo que consiste de água, metanol, etanol, álcool isopropil, etileno glicol, dietileno glicol, trietileno glicol, polietileno glicol 200 - 600, propileno glicol, dipropileno glicol, 1,4-butanodiol, 2,3-butanodiol,

1,6-hexanodiol, 2,5-hexanodiol, etileno glicol monometil éter, etileno glicol monoetil éter, éter de metilcelossolve, etileno glicol monoacetato, propileno glicol monometil éter, glicerina, monoacetato de glicerol, tri(220 hidroxietil)citrato, di(hidroxi-propil)oxalato, diacetato de gliceril e mono-butirato de gliceril. Em uma modalidade específica, o líquido é a água.

Em outra modalidade, o pó seco é obtido através de um processo que compreende o acréscimo de 0,01 a 10 mol por cento de um tensoativo a um sistema de polimerização que compreende um monômero, ou dois ou mais monômeros diferentes, sendo que o monômero, ou pelo menos um dos dois ou mais monômeros, consiste de um ou mais grupos hidroxi e/ou um ou mais grupos éster em um líquido polarizado ou uma mistura de líquidos polarizados, sendo que o líquido

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31/73 polarizado, ou pelo menos um dos dois ou mais líquidos polarizados, consiste de um ou mais grupos hidroxi; o acréscimo de 0,01 a 10 mol por cento de um tensoativo ao sistema de polimerização; a polimerização do monômero (ou monômeros) para formar uma pluralidade de nanopartículas de gel, sendo que cada partícula compreende uma pluralidade de cepas de polímero, de modo que o polímero resultante sem ligação cruzada, ou copolímero, não é solúvel em água, mas é expansível em água, e a secagem das nanopartículas para obter o pó seco, sendo que o processo compreende ainda o acréscimo de cerca de 0,1 a cerca de 15 mol por cento de um agente de ligação cruzada ao sistema de polimerização, o que resulta em ligação cruzada das cepas do polímero. O agente de ligação cruzada é selecionado a partir de um grupo que consiste de diacrilato de etilenoglicol, dimetacrilato de etilenoglicol, dimetacrilato de 1,4 dihidroxi-butano, dimetacrilato de dietilenoglicol, dimetacrilato de propilenoglicol, dimetacrilato de dietilenoglicol, diacrilato de dietilenoglicol, diacrilato de dipropilenoglicol, divinilbenzeno, diviniltolueno, dialil tartrato, dialil malato, divinil tartrato, trialil melamina, N,N'-metileno-bisacrilamida, dialil maleato, divinil éter, 1,3 dialil 2-(2-hidroxietil) citrato, vinil alil citrato, alil vinil maleato, dialil itaconato, di(225 hidroxietil) itaconato, divinil sulfona, hexahidro-1,3,5trialil triazina, trialil fosfito, dialil benzeno fosfonato, trialil aconitato, divinil citraconato, trimetilolpropano, trimetilacrilato e fumarato de dialila.

Em outra modalidade, as cepas de polímero com ligação cruzada têm peso molecular médio de cerca de 3.000 a cerca

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32/73 de 2.000.000. Em modalidades alternativas, as cepas de polímero com ligação cruzada têm peso molecular médio de cerca de 3.000 a cerca de 200.000, ou alternativamente, de cerca de 3.000 a cerca de 20.000, ou alternativamente, de cerca de 30.000 a cerca de 2.000.000, ou alternativamente,

de cerca de	300.000 a	cerca	de 2.000	. 000,	ou
alternativamente,	de cerca	de 100	.000 a	cerca	de
100.000.000, ou	alternativamente, de	cerca de	50.000	a

cerca de 1.500.000.

Em outra modalidade, o processo descrito acima compreende ainda o acréscimo de uma quantidade efetiva para absorção de uma ou mais substâncias de trabalho ao líquido (ou líquidos) polarizado do sistema de polimerização antes da polimerização. Em outra modalidade, a quantidade efetiva de nanopartículas de gel contendo uma substância de trabalho absorve de cerca de 0,1 a cerca de 90 por cento do peso do líquido contendo a substância (ou substâncias) de trabalho. Em modalidades alternativas, a quantidade efetiva de partículas de gel contendo uma substância de trabalho absorve de cerca de 1 a cerca de 90 por cento do peso do líquido contendo substância de trabalho, ou alternativamente, de cerca de 10 a cerca de 90 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,1 a cerca de 70 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,1 a cerca de 50 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,1 a cerca de 20 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 10 a cerca de 50 por cento do peso.

Em outra modalidade, o método compreende o acréscimo de uma quantidade efetiva de uma ou mais substâncias de

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33/73 trabalho ao sistema de polimerização para produzir um líquido que contém uma primeira substância de trabalho, sendo que após a polimerização, uma parte do líquido que contém a primeira substância de trabalho é absorvido pelas nanopartículas poliméricas. É acrescentada então uma quantidade efetiva de uma segunda substância (ou substâncias) de trabalho ao pó particulado, e é efetuada a mistura a seco para produzir um pó particulado contendo uma segunda substância de trabalho, sendo que a primeira substância (ou substâncias) de trabalho pode ser igual à segunda substância (ou substâncias) de trabalho ou diferente desta(s) . Em outra modalidade, de 0,1 a 90 por cento do peso da primeira substância (ou substâncias) de trabalho é absorvido pela pluralidade de partículas de hidrogel, e de 0,1 a 90 por cento do peso da segunda

substância (ou	substâncias	) de trabalho	é	retido	entre as
nanopartículas.
Em outra	modalidade	, acrescenta	se	uma	ou mais
substâncias de	trabalho ao	pó seco, e é	efetuada	a mistura

a fim de produzir um compósito de substância(s) de trabalho/pó particulado. Em outra modalidade, o compósito de substância(s) de trabalho/pó particulado contém cerca de 1 a 90 por cento de substância(s) de trabalho.

Em outra modalidade, a substância (ou substâncias) de trabalho contém um ou mais agentes biomédicos, que podem ser iguais ou diferentes. Em outra modalidade, os agentes biomédicos contêm células, plaquetas ou um ou mais materiais de estrutura para crescimento de tecido. Em outra modalidade, um ou mais dos agentes biomédicos contém um ou mais agentes farmacêuticos. Em outra modalidade, o agente

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34/73 (ou agentes) farmacêutico contém ainda um ou mais excipientes aceitáveis em termos farmacêuticos. Em outra modalidade, o agente (ou agentes) farmacêutico contém um peptídeo, uma proteína ou um polissacarídeo. Em outra modalidade, o agente (ou agentes) farmacêutico é útil no tratamento de ferimentos, câncer, dor, infecção ou doenças oculares. Em outra modalidade, o agente (ou agentes) farmacêutico é um ou mais fatores de crescimento.

Em outra modalidade, o método compreende ainda o 10 acréscimo de um ou mais excipientes aceitáveis em termos farmacêuticos ao pó seco. Em uma modalidade, um ou mais excipientes aceitáveis compõem cerca de 1 a cerca de 50 por cento do peso do pó seco. Em modalidades alternativas, um ou mais excipientes aceitáveis compõem cerca de 10 a cerca de 50 por cento do peso do pó seco, ou alternativamente, de cerca de 20 a cerca de 50 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 30 a cerca de 50 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 40 a cerca de 50 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 1,0 a cerca de 40 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 0,1 a cerca de 30 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 1,0 a cerca de 20 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 1,0 a cerca de 10 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 5,0 a cerca de 45 por cento do peso, ou alternativamente, de cerca de 20 a cerca de 50 por cento do peso.

Em outra modalidade, o excipiente (ou excipientes) aceitável em termos farmacêuticos é um material (ou materiais) de preenchimento solúvel em água.

Esta invenção fornece também um método para formação

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35/73 de curativo adaptável a formas e retentor de forma in situ sobre o local de um ferimento úmido através da aplicação de um pó seco de nanopartículas poliméricas ao local do ferimento úmido, sendo que o pó seco contém uma pluralidade de partículas de gel que possuem um diâmetro médio de menos de 1 x 10^-6 m, sendo que as partículas de gel contêm uma quantidade efetiva de uma pluralidade de cepas poliméricas obtidas através da polimerização de uma quantidade efetiva de um monômero, ou dois ou mais monômeros, sendo que pelo menos um destes é um ácido 2-alquenóico, um 2-alquenoato de hidroxi-alquila (2C - 4C) , um 2-alquenoato de di-hidroxialquila (2C-4C), um 2-alquenoato de hidroxi-alcoxi--(2C 4C)-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de alcoxi-(1C - 4C)alcoxi-(2C - 4C)-alquila-(2C - 4C) ou um epóxi vicinal 215 alquenoato de alquila (1C - 4C) em um líquido polarizado ou uma mistura de dois ou mais líquidos miscíveis, sendo que pelo menos um destes é polarizado, e uma quantidade efetiva de um tensoativo para estabilizar a pluralidade de partículas de gel.

Em outra modalidade, esta invenção fornece também um método para formação de curativo adaptável a formas e retentor de forma in situ sobre ou no interior de um tecido corporal úmido através da aplicação de um pó seco de nanopartículas poliméricas ao tecido corporal úmido, sendo que o pó seco contém uma pluralidade de partículas de gel que possuem um diâmetro médio de menos de 1 x 10^-6 m, sendo que as partículas de gel contêm uma quantidade efetiva de uma pluralidade de cepas poliméricas obtidas através da polimerização de uma quantidade efetiva de um monômero, ou dois ou mais monômeros, sendo que pelo menos um destes é um

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36/73 ácido 2-alquenóico, um 2-alquenoato de hidroxi-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de di-hidroxi-alquila (2C-4C), um 2alquenoato de hidroxi-alcoxi--(2C - 4C)-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de alcoxi-(1C - 4C)-alcoxi-(2C - 4C)5 alquila-(2C - 4C) ou um epóxi vicinal 2-alquenoato de alquila (1C - 4C) em um líquido polarizado ou uma mistura de dois ou mais líquidos miscíveis, sendo que pelo menos um destes é polarizado, e uma quantidade efetiva de um tensoativo para estabilizar a pluralidade de partículas de gel. As nanopartículas poliméricas absorvem o fluido corporal e se aglutinam formando um biomaterial adaptável a formas que é mantido unido por forcas não-covalentes que compreendem interações hidrofóbico-hidrofílicas e ligações de hidrogênio entre as partículas e o fluido corporal no espaço vazio entre as partículas.

As composições desta invenção são úteis no tratamento de ferimentos através da aplicação do pó seco de nanopartículas poliméricas que é preparado através de um método que consiste na polimerização de uma quantidade efetiva de um monômero, ou dois ou mais monômeros, sendo que pelo menos um destes é um ácido 2-alquenóico, um 2alquenoato de hidroxi-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de di-hidroxi-alquila (2C-4C), um 2-alquenoato de hidroxialcoxi--(2C - 4C)-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de alcoxi-(1C - 4C)-alcoxi-(2C - 4C)-alquila-(2C - 4C) ou um epóxi vicinal 2-alquenoato de alquila (1C - 4C) em um líquido polarizado ou uma mistura de dois ou mais líquidos miscíveis, sendo que pelo menos um destes é polarizado, e uma quantidade efetiva de um tensoativo, e na liofilização para remoção de líquidos de modo que a quantidade de

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37/73 líquido remanescente nas nanopartículas poliméricas é de menos de 10% por peso. Em outra modalidade, o pó seco contém ainda um ou mais materiais de estrutura para crescimento de tecido ou agente(s) farmacêutico(s) . Em outra modalidade, o pó seco contém colágeno, ácido hialurônico, agente(s) farmacêutico(s) úteis no tratamento de ferimentos, no tratamento de câncer, no tratamento da dor, no tratamento de doenças oculares, ou os agentes (ou o agente) farmacêuticos que são fatores de crescimento e antibióticos. Em ainda outra modalidade, o agente farmacêutico é a lidocaína, a eritromicina, doxiciclina ou rifampina. Em outra modalidade, os agentes farmacêuticos são os polipeptídios VEGF e PDGF.

Os curativos para ferimentos e biomateriais desta invenção podem ser formados através da polimerização de monômeros específicos em um sistema de suspensão contendo um líquido ou uma mistura de líquidos miscíveis polarizados e um tensoativo, resultando em nanopartículas de gel individuais. As partículas são então purificadas, isoladas, secadas e aplicadas a um ferimento úmido, formando curativos in sítu que são integrais, adaptáveis a formas e retentores de forma. As propriedades físico-químicas singulares destas nanopartículas de hidrogel absorvem parte do sangue e exsudato do ferimento, fazendo com que elas se aglutinem e fiquem unidas como um curativo integral. Ou seja, as partículas desta invenção, uma vez expostas a um líquido polarizado como o sangue ou exsudato - que são essencialmente água, leucócitos, fibrina e outros compósitos biológicos - absorvem parte do fluido, aglutinam-se e são mantidas unidas por fortes interações

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38/73 entre as partículas e entre as partículas e o líquido, tais como, entre outras, as interações hidrofóbico-hidrofílicas e a ligação de hidrogênio, sendo que esta última ocorre em virtude do fato que pelo menos um dos monômeros usados para produzir as cepas de polímeros que compõem as partículas de gel desta invenção tem que conter um ou mais grupos hidroxi e/ou um ou mais grupos éster. Além disso, parte do exsudato que não é absorvido permanece retido nos espaços vazios entre as partículas depois que estas se aglutinam, e visto que o exsudato é um material polarizado, ocorrem fortes ligações de hidrogênio entre as partículas e o exsudato. Uma exigência importante para a formação dos curativos para ferimentos in situ que fazem uso de pó seco nanoparticulado é que o local do ferimento tem que estar úmido, ou seja, deve haver fluido no ferimento, caso contrário a agregação das partículas não poderá ocorrer in situ.

Entretanto, também é possível formar um curativo agregado retentor de forma, com ou sem agentes medicinais, sobre um tecido corporal que não seja úmido ou esteja liberando uma quantidade mínima de exsudato. Neste caso, utilizando os ensinamentos da supracitada Publicação de

Pedido de Patente Americana No.: US 200410086548A1 e os ensinamentos desta apresentação de invenção, o pó seco nanoparticulado é misturado com um liquido polarizado ou uma mistura destes e imediatamente aplicado ao tecido corporal. As nanopartículas se aglutinam formando um curativo agregado adaptável a formas e retentor de forma em virtude das fortes interações entre as partículas e entre as partículas e o liquido, conforme explicado anteriormente.

As únicas exigências para a utilização deste tipo de

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39/73 curativo é que o solvente polarizado ou a mistura destes seja seguro, não-tóxico e aprovado pela FDA para aplicações tópicas e sistêmicas.

Além disso, pode-se também acrescentar um solvente 5 volátil a uma mistura do pó seco de nanopartículas com um líquido polarizado plastificante, homogeneizar os componentes e embalar a mistura resultante em um contêiner lacrável para impedir a evaporação do solvente. Quando é feita a aplicação na superfície de um ferimento seca ou na pela intacta, o solvente volátil evapora, deixando um curativo agregado retentor de forma no local da aplicação.

As nanopartículas de gel são preparadas em um sistema de polimerização que consiste de um ou mais monômeros selecionados geralmente dentre aqueles monômeros que, quando sofrem polimerização, fornecem um polímero solúvel em água, com ou sem ligação cruzada, e capaz de formar ligações de hidrogênio. As classes gerais dos monômeros que têm essa capacidade incluem, sem caráter restritivo, um 2alquenoato de hidroxi-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de di-hidroxi-alquila (2C-4C), um 2-alquenoato de hidroxialcoxi--(2C - 4C)-alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de alcoxi-(1C - 4C)-alcoxi-(2C - 4C)-alquila-(2C - 4C) ou um epóxi vicinal 2-alquenoato de alquila (1C - 4C), e combinações destes.

Os monômeros incluem o acrilato de 2-hidroxietil, metacrilato de 2-hidroxietil, mono-acrilato de dietilenoglicol, mono-metacrilato de dietilenoglicol, acrilato de 2-hydroxi-propil, metacrilato de 2-hidroxipropil, acrilato de 3-hidroxi-propil, metacrilato de 330 hidroxi-propil, metacrilato de glicerol, mono-metacrilato

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40/73 de dipropileno glicol, mono-acrilato de dipropileno glicol, glicidil metacrilato, 2-metacrilato e combinações destes. Os monômeros específicos são o metacrilato de 2-hidroxietil (HEMA), metacrilato de 2-hidroxi-propil, metacrilato de 35 hidroxi-propil e metacrilato de glicerol.

Pode-se acrescentar co-monômeros que não são capazes de formar ligações de hidrogênio ao sistema de polimerização para modificar as características físicoquímicas das partículas de gel resultantes. Exemplos de co10 monômeros que podem ser usados em conjunto com os monômeros acima incluem, sem caráter restritivo, a acrilamida, Nmetil metacrilamida, N,N dimetacrilamida, metil vinil pirrolidona, metacrilato de N,N dimetilamino etil, acrilato de N,N dimetilamino etil. Outros co-monômeros capazes de fazer ligações de hidrogênio, tais como o ácido acrílico e o ácido metacrílico, sem caráter restritivo, também podem ser acrescentados ao sistema de polimerização para modificar o caráter iônico e o pH das nanopartículas de gel resultantes, caso seja desejado. Além disso, alguns aditivos não-polimerizantes, tais como alquenoatos de alquila exemplificados pelo butirato de metila, acetato de butila, etc., podem ser acrescentados à reação de polimerização a fim de modificar ainda mais as características físico-químicas das partículas de gel resultantes.

Um agente de ligação cruzada também pode ser acrescentado ao sistema de polimerização a fim de fortalecer a estrutura tridimensional das partículas de gel resultantes. O agente de ligação cruzada pode ser não30 degradável, como, sem caráter restritivo, o diacrilato ou

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41/73 dimetacrilato de etilenoglicol, dimetacrilato de 1,4 butileno, dimetacrilato de dietilenoglicol, dimetacrilato de propilenoglicol, dimetacrilato de dietilenoglicol, diacrilato de dietilenoglicol, diacrilato de dipropilenoglicol, divinilbenzeno, diviniltolueno, trialil melamina, N,N'-metileno-bisacrilamida, dialil maleato, divinil éter, citrato de monoetilenoglicol dialil, vinil alil citrato, alil vinil maleato, divinil sulfona, hexahidro-1,3,5-trialil triazina, trialil fosfito, dialil benzeno fosfonato, um poliéster de anidrido maleico, dialil aconitato, divinil citraconato, trimetilolpropano, trimetilacrilato e fumarato de dialila. Outros agentes de ligação cruzada não-degradáveis ficarão aparentes para aqueles que são versados na arte com base nas apresentações aqui contidas, e estão dentro do escopo desta invenção.

A composição química dos polímeros que constituem as partículas de gel individuais que compõem os agregados de curativos para ferimentos formados in situ são estáveis e não se degradam facilmente sob uma ampla gama de condições ambientais ou fisiológicas. Os curativos de agregados formados in situ permanecem no lugar até que o ferimento sare e/ou seque. Por outro lado, os curativos de agregados e/ou biomateriais formados in vivo podem ser projetados com base em aplicações específicas, de modo que percam força ou integridade sob certas condições, de maneira controlada. Por exemplo, através da seleção dos aditivos apropriados, eles podem ser retidos na matriz do agregado à medida que este está sendo formado, de modo que os curativos agregados resultantes ficarão mais porosos conforme o aditivo (ou aditivos) muda de estrutura, composição e/ou reatividade

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42/73 quando é exposto a uma variedade de condições ambientais e/ou fisiológicas.

Quando o líquido usado no sistema de polimerização desta invenção é a água, as partículas são partículas de hidrogel.

Certos líquidos orgânicos também podem ser usados no sistema de polimerização desta invenção. Em geral, eles devem ter pontos de ebulição acima de 60° C, ou alternativamente, acima de cerca de 80 °C, 100°C, 120°C,

140°C, 160 °C, 180°C ou cerca de 200 °C. Atualmente, os líquidos orgânicos que podem ser usados são líquidos orgânicos biologicamente inertes, não-tóxicos, polarizados e miscíveis com água, tais como, sem caráter restritivo, etilenoglicol, propilenoglicol, dipropilenoglicol, 1,315 butanodiol, 1,4-butanodiol, 2,5-hexanodiol, 2-metil-2,4pentanodiol, 2,4-heptanodiol, 2-etil-1,3-hexanodiol, dietilenoglicol, trietilenoglicol, tetra-etilenoglicóis e os poli-etilenoglicóis superiores e outros homopolímeros e copolímeros oxialquilenos solúveis em água com peso molecular de no máximo cerca de 2,000, devendo ser de no máximo cerca de 1,600. Por exemplo, podem ser usados, sem caráter restritivo, polímeros hidroxi-terminados de óxido de etileno com pesos moleculares médios de 200 a 1,000, polímeros poliol oxietileno-oxipropileno solúvel em água (principalmente glicol) com peso molecular de até cerca de 1,500, sendo preferível até cerca de 1,000, monoacetin, glicerina, tri(hidroxietil)citrato, etilenoglicol monometil éter, di(hidroxi-propil)oxalato, acetato de hidroxi-propil, triacetato de gliceril, tri-butirato de gliceril, adutos de óxido de etileno de sorbitol líquido, adutos de óxido de

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43/73 etileno de glicerina líquida, éter monoetil dietilenoglicol e diacetato de etilenoglicol.

Em uma modalidade desta invenção, as partículas de hidrogel, com tamanhos nominais na faixa de 10 ⁹ a 10^- são produzidas através de polimerização redox, via radical livre ou foto-iniciada, em água contendo um tensoativo. Assim, podem ser produzidas partículas de polidispersão relativamente estreita. Se for desejável uma aplicação específica, tal como, entre outras, a liberação de substâncias biologicamente ativas por um período extenso, pode ser vantajoso produzir e isolar partículas de polidispersão larga que componham um curativo para ferimento medicado formado in situ ou biomaterial terapêutico produzido in vivo.

Se, por outro lado, o objetivo for a liberação seqüencial de um medicamento ou a liberação imediata em vários momentos em vez da liberação contínua, podem ser usados dois ou mais grupos de partículas de tamanhos diferentes mas com polidispersão estreita dentro de cada um dos tamanhos. Por exemplo, partículas de gel de tamanhos diferentes mas polidispersão estreita podem ser formadas usando as técnicas descritas aqui em sistemas de polimerização separados que contenham uma substância biologicamente ativa específica. As partículas contendo substâncias, após o isolamento e secagem, podem então ser combinadas em um só pó e aplicadas a um ferimento a fim de produzir um curativo medicado retentor de forma.

Devido à diferença de tamanho das partículas, a substância biologicamente ativa será liberada de maneira rápida em diversos momentos. De maneira semelhante,

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44/73 utilizando a mesma técnica, mas acrescentando uma primeira substância biologicamente ativa a um dos sistemas de polimerização e outra substância biologicamente ativa ao segundo sistema de polimerização resultará em partículas que liberarão suas substâncias ativas específicas em diversos momentos, em liberação seqüencial.

Substâncias biologicamente ativas também podem ser introduzidas nos curativos para ferimentos e biomateriais descritos nesta invenção através da mistura de nanopartículas isoladas secas com estas diversas substâncias ativas. Após a aplicação sobre o ferimento úmido, o curativo se forma in situ, e parte das substâncias fica retida entre os espaços vazios entre as partículas que compõem o curativo. Estas substâncias ativas serão liberadas a partir do curativo ao longo de um período prolongado, a fim de acentuar a cura do ferimento, e a taxa (ou taxas) de liberação será afetada pelas propriedades físicas da substância, tais como peso molecular e solubilidade em água, além do tamanho das nanopartículas que constituem o curativo. Fica claro para aqueles versados na arte que uma variedade de curativos medicados e/ou biomateriais podem ser produzidos, por exemplo, usando nanopartículas secas de diversos tamanhos contendo substâncias absorvidas em combinação ou não com outros compósitos biologicamente ativos que são misturados em um pó e aplicados a um ferimento, e que todos estes curativos estão dentro do escopo da apresentação desta invenção.

Diversos fatores afetam as características físicoquímicas dos agregados desta invenção. Um deles é o peso molecular do polímero utilizado para formar as

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45/73 nanopartículas de hidrogel individuais. Sabe-se que partículas de hidrogel que consistem de polímeros com baixo peso molecular geralmente não formam curativos de agregados fortes e estáveis in sítu. Assim, polímeros com peso molecular maior são utilizados nesta invenção. Ao mesmo tempo em que o uso de agentes de ligação cruzada pode reduzir alguns dos problemas associados aos polímeros com baixo peso molecular, o uso excessivo de agentes de ligação cruzada pode ser prejudicial. Se as partículas de hidrogel contiverem uma quantidade alta de agente de ligação cruzada e/ou se o agente de ligação cruzada for altamente hidrofóbico, a rede polimérica resultante pode não permitir a melhor absorção e retenção de sangue e exsudato, o que resultaria em curativos de qualidade mais baixa. Assim, os polímeros que constituem as partículas de gel desta invenção têm peso molecular na faixa de cerca de 3.000 a cerca de 2.000.000 Da. Isto pode ser obtido através da seleção de um monômero comercial adequado, do uso de um sistema de polimerização que produza polímeros com peso molecular na faixa desejada ou da inclusão de um agente de ligação cruzada no sistema de polimerização para unir cepas de polímero pequenas a fim de alcançar a faixa desejada de peso molecular.

O tamanho das partículas também afeta as características dos curativos de agregados. Sabe-se que as partículas de gel menores geralmente absorvem e retêm líquido com mais facilidade e rapidez devido à área de superfície, e produzem uma matriz de curativo mais resistente. Podem ser usadas partículas de gel com tamanho (caracterizado pelos seus diâmetros médios) na faixa de 1 a

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1.000 nm, ou alternativamente, de cerca de 10 a cerca de

800 nm.

Se for utilizado um agente de ligação cruzada, sua composição química e a quantidade utilizada, isto é, a densidade de ligação cruzada resultante, afetarão as características das partículas, conforme discutido anteriormente, e, assim, afetarão as características dos curativos para ferimentos formados. Por exemplo, o excesso de agente de ligação cruzada pode fornecer cepas de polímeros com um peso molecular maior, mas podem também criar um excesso de caráter hidrofóbico e domínios hidrofóbicos na totalidade das nanopartículas de hidrogel, e, assim, as interações essenciais entre as partículas e entre as partículas e o líquido, tais como, entre outras, as interações hidrofóbicas-hidrofílicas e as ligações de hidrogênio, serão impedidas de ocorrer durante a formação dos curativos para ferimentos preparados in situ em um ferimento ou dos biomateriais formados in vivo. A quantidade de agente de ligação cruzada utilizada na preparação das partículas de gel desta invenção deve estar na faixa entre cerca de 0 a cerca de 10, sendo preferível a faixa de cerca de 0,1 a cerca de 2 mol por cento de monômero.

A composição química e quantidade de tensoativo presente no pó de nanopartículas seco e isolado afeta a taxa de agregamento quanto exposto a um líquido polarizado, e as características físico-químicas do curativo para ferimento de agregado desta invenção. Durante o processo de isolamento, é necessário o uso de uma certa quantidade de tensoativo a fim de impedir o auto-agregamento das

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47/73 partículas conforme estas ficam mais concentradas durante o ciclo de secagem. Entretanto, o excesso de tensoativo impediria as partículas secas de formarem agregados de curativos para ferimentos mediante a exposição ao sangue, exsudato de ferimento ou outros líquidos polarizados. A quantidade de tensoativo presente no pó nanoparticulado deve estar na faixa de cerca de 0,1 a 6 por cento do peso do pó de nanopartículas. É importante notar também que os processos de isolamento e secagem efetuados sobre estas nanopartículas de gel deve ser tal que previna ou minimize a concentração e o autoagregamento das partículas, impedindo-os de chegar ao ponto em que as fortes interações interpartículas e partícula/líquido sobrepujam a capacidade inerente do tensoativo de impedir que as partículas se aglutinem. Os processos de isolamento e secagem como a secagem por pulverizador e a liofilização são utilizados, enquanto a evaporação direta não é utilizada, visto que o auto-agregamento ocorre extensivamente, e o pó seco resultante não formará um curativo viável ín situ quanto aplicado ao local de um ferimento úmido. Fica claro para quem é versado na arte que outros processos de isolamento e secagem podem ser usados, contanto que o auto-agregamento seja prevenido ou minimizado. Os diversos parâmetros discutidos acima são, obviamente, interdependentes.

Em uma modalidade desta invenção, as nanopartículas de hidrogel são produzidas através da polimerização de monômeros não-iônicos em água contendo um tensoativo. A suspensão de partículas de hidrogel é tratada para remover monômeros não-reagidos e outras impurezas. As partículas são isoladas e secadas, e o pó particulado é aplicado em um

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48/73 ferimento ou tecido corporal in vivo, e absorve alguns exsudatos, sangue ou outro fluido corporal, aglutinando-se para formar um curativo para ferimento ou biomaterial adaptável a formas e retentor de forma. O curativo permanece integral e retentor de forma em virtude das fortes interações interpartículas e partícula/líquido tais como, entre outras, interações hidrofóbicas-hidrofílicas e ligações de hidrogênio. Isto é, aplicando o pó de nanopartículas de hidrogel em um meio de força iônica maior, por exemplo, soro, tampão fosfato-salino, exsudato de ferimento ou outro fluido corporal, as partículas se autoaglutinam formando um curativo de agregado compacto, elástico e retentor de forma. Em uma modalidade, o meio é in vivo, isto é, um tecido corporal, e o agregado retentor de forma assume e retém a forma da região do corpo em que o pó foi aplicado. Se o meio for ex vivo, o agregado pode, sem caráter restritivo recursos, ser moldado por pressão, extrudado ou moldado para assumir a forma desejada, que ele reterá contanto que seja mantido em estado de hidratação.

Os curativos para ferimentos de agregado desta invenção possuem muitas aplicações, incluindo, entre outras, a administração de uma substância (ou substâncias) biologicamente ativa em um local predeterminado, tal como o local de um ferimento. O alvo pode ser veterinário, envolvendo a administração de medicamentos a répteis, mamíferos e aves. O alvo pode ser, mais especificamente, um ser humano, envolvendo a administração direta e controlada de agentes farmacêuticos ao paciente.

Outra modalidade desta invenção envolve a dissolução ou suspensão do agente biologicamente ativo no sistema de

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49/73 polimerização antes da polimerização. Conforme a reação de polimerização procede e as nanopartículas de hidrogel se formam, o liquido contendo a substância biologicamente ativa é absorvido pelas partículas em formação. O agente biologicamente ativo não absorvido é então removido quando as partículas são tratadas para remover o excesso de monômero e tensoativo. A suspensão de partículas que contêm substância biologicamente ativa é então isolada e secada para produzir o pó nanoparticulado. O processo de secagem é feito através de métodos tradicionais, inclusive, sem caráter restritivo, a secagem por pulverizador e a liofilização. O pó pode então ser introduzido ex vivo ou in vivo, sendo que no segundo caso a introdução deve ser feita através da aplicação do pó ao local do ferimento, o que fará com que as partículas se aglutinem formando um curativo medicado de agregado adaptável a formas e retentor de forma.

Outra modalidade desta invenção inclui a remoção do agente biologicamente ativo não absorvido da suspensão juntamente com o excesso de monômero e o tensoativo, o isolamento e secagem das nanopartículas contendo o agente biologicamente ativo absorvido e depois o acréscimo de uma outra substância biologicamente ativa completamente diversa ao pó nanoparticulado antes da formação do curativo in situ, de modo a reter esta última durante a formação do agregado. A substância retida nos espaços vazios do agregado normalmente é liberada a uma taxa bastante diferente daquela da substância absorvida pelas partículas. Desta maneira, pode-se obter uma ampla variedade de taxas de liberação. A diversidade no perfil de liberação também pode

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50/73 ser alcançada através da variação da composição química e do tamanho das partículas individuais de hidrogel que compõem os agregados de curativos para ferimentos.

Se o agregado de biomaterial for produzido in vivo, uma certa quantidade de substância biologicamente ativa ficará retida nos espaços vazios entre as partículas, dependendo das propriedades físicas tais como tipo e tamanho da substância biologicamente ativa e taxa de formação do agregado. A taxa de formação do agregado é uma função do tamanho e composição das nanopartículas de gel, do tipo e quantidade de tensoativo ou combinação de tensoativos presentes no pó seco nanoparticulado, do meio polarizado ao qual o pó é aplicado e da temperatura do meio.

Além do que foi dito acima, outras substâncias solúveis em água podem ser acrescentadas às nanopartículas secas de gel desta invenção para alterar o agregamento e a taxa do agregado retentor de forma que é formado mediante introdução em um meio, e, portanto, a quantidade e a taxa subseqüente de liberação subseqüente do agente ativo retido podem ser controladas também desta maneira. Além disso, estes excipientes solúveis em água podem usados para alterar, ao longo do tempo, a porosidade do curativo para ferimento formado in situ, à medida que se dissolvem para fora do agregado mediante a exposição aos exsudatos do ferimento ou ao sangue. Com o uso de um ou mais dos procedimentos acima, dever ser possível alcançar taxas de liberação de ordem zero, ou pelo menos de pseudo-ordem zero, para uma ampla gama de agentes biologicamente ativos.

O tipo e quantidade de um agente que pode ser absorvido por uma partícula de gel ou retida em um curativo

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51/73 de agregado ou biomaterial desta invenção depende de uma série de fatores. Em primeiro lugar, o agente não pode interferir, em virtude do seu tamanho, superfície, cargas, polaridade, interações estéricas, etc., na formação de partículas individuais de gel ou na aglutinação das partículas de gel para formar um agregado retentor de forma após a introdução em um meio, tal como um ferimento, pois ambas as interferências iriam de encontro ao propósito desta invenção. Uma vez determinado que este problema não ocorrerá, o tamanho das partículas de hidrogel afetará mais diretamente a quantidade de substância que pode ser incorporada à partícula. O tamanho das próprias partículas ditará a quantidade máxima de agente que pode ser absorvida, enquanto a polidispersão das partículas afetará o tamanho de poro resultante dos curativos de agregado formados in situ. Agentes relativamente pequenos, tais como moléculas individuais de antibiótico, agentes antimicrobianos e analgésicos, podem ser absorvidos em nanopartículas de gel pequenas e facilmente retidos em agregados formados a partir destas partículas de gel pequenas, enquanto os agentes substancialmente maiores, tais como anticorpos monoclonais, proteínas, peptídeos, polissacarídeos e outras macromoléculas, podem ser de difícil absorção por parte destas nanopartículas, e requerem curativos de agregados compósitos de partículas muito maiores e/ou com polidispersão mais larga para serem retidos de maneira eficaz.

Utilizando os métodos aqui descritos, pode-se alcançar o controle preciso da cinética de liberação, isto é, partículas de gel de tamanho e composições químicas

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52/73 diferentes podem ser carregadas com um agente específico e o agente pode ser liberado em diversos intervalos de tempo. Além disso, parte da substância pode estar absorvida nas partículas de gel, e parte pode estar retida nos espaços entre as partículas no agregado de curativo retentor de forma, de modo a fornecer uma flexibilidade ainda maior na liberação.

Utilizando os métodos descritos acima, agentes diversos - mesmo agentes normalmente incompatíveis - podem ser carregados nas partículas de gel desta invenção e liberados seqüencialmente ou simultaneamente. A liberação seqüencial impede que agentes incompatíveis se encontrem. A liberação simultânea permite a administração de dois ou mais agentes bioativos não-ativos, ou minimamente ativos, que, quando combinados, formam um medicamento potente. Deste modo, a formação da espécie ativa pode ser adiada até que o agregado contendo os precursores tenha se formado no local do ferimento quando as nanopartículas tiverem se misturado ou sangue e exsudato e se aglutinado para fornecer liberação ativa prolongada ao leito da ferida.

Em outro aspecto desta invenção, partículas de gel de dois ou mais tamanhos diferentes e polidispersão estreita com relação umas às outras são usadas para formar os agregados de curativos retentores de forma desta invenção.

A eficiência de retenção de substâncias e a sua taxa de liberação subseqüente devem ser substancialmente diferentes daquelas dos agregados formados utilizando-se partículas de um só tamanho e polidispersão estreita. Sem nos comprometermos com qualquer teoria em particular, crê-se que isto seja devido à possibilidade de que, durante o

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53/73 agregamento, na presença de uma substância a ser retida, os espaços vazios entre as partículas que compõem o agregado de curativo para ferimento são preenchidos de maneira mais eficiente por partículas de polidispersão mista. Os exemplos a seguir demonstram que, para um agente específico de um dado tamanho, o tamanho e a proporção de tamanhos das partículas que compõem um agregado afetam dramaticamente a eficiência de um agregado em formação no tocante à retenção de um agente e à sua taxa de liberação subseqüente.

Utilizando esta abordagem, a taxa de liberação de uma substância específica pode ser configurada para ficar próxima de uma cinética de pseudo-ordem zero através do uso de partículas de tamanho e proporção de tamanhos adequados.

Assim, a presente invenção proporciona uma plataforma de liberação de substâncias extremamente versátil para curativos de ferimentos formados in situ, especialmente em relação à liberação de agentes biologicamente ativos, e mais especificamente com relação à liberação de agentes farmacêuticos. Em uma modalidade específica, podem ser formados curativos para ferimentos como úlceras de decúbito, úlceras vasculares, queimaduras de segundo, terceiro e quarto graus e locais de doação de pele, com ou sem a incorporação de antibióticos, analgésicos, fatores de crescimento ou agentes de sinalização vascular, diretamente no local de um ferimento, in situ, através da introdução do pó nanoparticulado em um ferimento úmido e em um local de doação de pele. Um agente farmacêutico ou uma combinação de agentes pode ser administrado continuamente por um período de tempo prolongado; através de liberações rápidas em intervalos de tempo específicos; simultaneamente após um

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54/73 tempo de espera predeterminado, de modo que dois ou mais agentes possam interagir sinergicamente somente após a formação, no local desejado, do curativo de agregado que os contém ou seqüencialmente, de modo que um agente possa agir em um local-alvo antes que o próximo agente seja liberado, ou de modo que dois ou mais agentes possam interagir sinergicamente.

Outra modalidade desta invenção é uso dos materiais de agregados retentores de forma formados in situ através da introdução de nanopartículas no fluido corporal como biomateriais que são úteis para aplicações ortopédicas, como a formação de estruturas de tecido. A estrutura macroporosa dos agregados adaptáveis a formas e retentores de forma desta invenção fornece uma composição que deve permitir preenchimento ósseo substancial, uma propriedade que não é encontrada em hidrogéis micro-porosos comuns. Além disso, os agregados desta invenção exibem propriedades físicas, tais como módulos elástico, volumétrico e de cisalhamento, que são significativamente superiores àquelas dos hidrogéis a granel convencionais. Algumas das possíveis aplicações ortopédicas dos métodos desta invenção incluem, entre outras, reparação óssea e de cartilagens, reparação/substituição de menisco, discos vertebrais artificiais, tendões e ligamentos artificiais e enchimento de defeitos ósseos.

A propriedade de retenção de forma dos materiais agregados desta invenção e sua capacidade para formação in situ e retenção de água sugerem diversos outros usos in vivo. Por exemplo, um agregado com ou sem medicação pode ser moldado para produzir uma lente de contato gelatinosa.

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Um dispositivo biocompatível, macio e maleável para administração de medicamento a ser usado no tratamento de doenças oculares graves pode ser formado in situ, colocando-se no olho as nanopartículas de hidrogel em pó, acrescidas de um agente farmacêutico oftalmológico absorvido e retido. Um agregado retentor de forma pode ser formado em uma bolsa periodontal através da introdução do pó nanoparticulado em que um fator de crescimento ósseo foi absorvido pelas partículas ou retido no agregado em formação. O agregado pode conter também antibiótico absorvido ou retido para controle de infecções através da liberação contínua do antibiótico enquanto a regeneração óssea é estimulada pela liberação controlada do fator de crescimento ósseo. Como um benefício adicional, o agregado retentor de forma, macio e biocompatível, forneceria conforto no local devido à sua maciez e conformabilidade inerentes.

Os agregados desta invenção, produzidos através dos métodos aqui descritos, podem ser usados como portadores para uma gama de materiais que não são agentes biomédicos.

Por exemplo, sem caráter restritivo, metais ou íons de metais podem ser absorvidos pelas partículas de gel, retidos pelo agregado, ou ambos. Os metais e/ou íons proporcionariam graus variáveis de condutividade e radiopacidade aos agregados, que teriam outros usos, como na estimulação elétrica da cura de ferimentos.

Estes e outros usos para os curativos para ferimentos de agregado adaptável a formas e retentor de forma ficarão aparentes para aqueles versados na arte, com base na nesta apresentação. Estes usos fazem parte do escopo desta

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56/73 invenção .

Exemplo 1

Síntese de Nanopartículas de Hidrogel com uso de HEMA

Um frasco com meio de 500 ml, equipado com uma barra 5 agitadora, foi carregado com 4,52g (34,8 Mmol) do monômero metacrilato de hidroxi-metil (HEMA), 77,74 mg (0,428 Mmol) de dimetacrilato de etilenoglicol (EGDM), 0,2123 g (0,634 Mmol) de dodecil sulfato de sódio (SDS) e 240ml de H2O mili-Q. O frasco foi fechado com uma tampa de aspersão e purgado com N2 por 1 hora à temperatura ambiente e agitado. Então, 0,166 g de persulfato de potássio (K2S2O8) foi dissolvido em 21 ml de H2O mili-Q e acrescentado ao frasco com meio enquanto este era agitado. O frasco foi transferido para um banho-maria a 40° C e mantido aí por 12 horas. A suspensão resultante de partículas de hidrogel tinha uma cor azul opalescente. As partículas foram analisadas através de difusão dinâmica de luz e constatouse que tinham um raio médio de 36,5 nm, conforme mostra a Figura 1. As partículas foram purificadas através de filtração de fluxo tangencial e armazenadas em uma suspensão aquosa. Não foi observada qualquer floculação ao longo de vários meses.

Exemplo 2

Síntese de Nanopartículas de Hidrogel com uso de HPMA

Um frasco com meio de 500 ml, equipado com uma barra agitadora, foi carregado com 2,532g (17,5 Mmol) do monômero metacrilato de hidroxi-propil (HPMA), 52,73 mg (0,266 Mmol) do agente de ligação cruzada dimetacrilato de etilenoglicol (EGDM), 107,6 g (0,3730 Mmol) de dodecil sulfato de sódio (SDS) e 118 ml de H2O mili-Q degaseificada com nitrogênio.

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O frasco foi fechado e agitado para formar uma solução límpida. Em um frasco separado, 83 mg de K2S2O8 foram dissolvidos em 2 ml de H2O mili-Q e acrescentados ao frasco com meio enquanto este era agitado. O frasco com meio contendo a solução límpida foi transferido para um banhomaria a 40° C e mantido aí por 12 horas. A suspensão resultante de partículas de hidrogel tinha uma cor azul opalescente. As partículas foram analisadas através de difusão de luz a laser e constatou-se que tinham um tamanho médio de 21,3 nm, e uma faixa de tamanho de 14 nm a 41 nm. A suspensão tinha aproximadamente 1% de polímero sólido por massa. Até a presente data, a suspensão de nanopartículas de hidrogel resiste à floculação e à agregação há dois anos à temperatura ambiente.

Exemplo 3

Síntese de Nanopartículas de Hidrogel de Copolímero com uso de HEMA e HPMA

Usando o método de síntese do Exemplo 1, nanopartículas de polímero foram produzidas utilizando monômero HEMA e monômero HPMA. A Tabela 1 mostra as massas

Mmol relativos dos monômeros acrescentados aos frascos com meio de 150 ml:

Tabela 1

Amost	Massa	Mmol	Massa	Mmol
ra	HEMA	HEMA	HPMA	HPMA
95:5	4.30g	33.06	0.251 g	1.74
pHEMA:HPMA
90:10	4.079	31.32	0.501 g	3.48
pHEMA:HPMA
85:15	3.85g	29.58	0.752g	5.22

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pHEMA:HPMA
75:25 pHEMA:HPMA	3.40g	26.10	1.25g	8.70
50:50 pHEMA:HPMA	2.26g	17.40	2.51 g	17.40

Cada frasco com meio foi carregado com 52,73 mg (0,266

Mmol) de dimetacrilato de etilenoglicol (EGDM), 107,6 g (0,3730 Mmol) de dodecil sulfato de sódio (SDS) e 118 ml de H2O mili-Q degaseificada com nitrogênio. Os frascos foram fechados e agitados por 30 minutos à temperatura ambiente.

Em frascos separados, 83 mg de K2S2O8 foram dissolvidos em 2 ml de H2O mili-Q e acrescentados respectivamente a cada frasco com meio enquanto este era agitado. Os frascos com meio contendo as soluções límpidas foram transferidos para um banho-maria a 40° C e mantidos aí por 12 horas a uma temperatura constante. A suspensão resultante de partículas de hidrogel tinha uma cor azul opalescente.

Exemplo 4

Síntese de Nanopartículas de Hidrogel com uso de GMA

Um frasco com meio de 2000 ml, equipado com uma barra agitadora, foi carregado com 44.59g (277 Mmol) do monômero metacrilato de glicerol (GMA), 92 mg (0,464 Mmol) do agente de ligação cruzada dimetacrilato de etilenoglicol (EGDM), 2,04g (0,3730 Mmol) de dodecil sulfato de sódio (SDS) e 118 ml de H2O mili-Q degaseificada com nitrogênio. O frasco foi fechado e agitado para formar uma solução límpida. Em um frasco separado, 83 mg de K2S2O8 foram dissolvidos em 2 ml de H2O mili-Q e acrescentados ao frasco com meio enquanto este era agitado. O frasco com meio contendo a solução límpida foi transferido para um banho-maria a 40° C e

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59/73 mantido aí por 12 horas a uma temperatura constante. A suspensão resultante de partículas de hidrogel tinha uma cor azul opalescente. As partículas foram analisadas através de difusão de luz a laser e constatou-se que tinham um tamanho médio de 21,3 nm, e uma faixa de tamanho de 14 nm a 41 nm. A suspensão tinha aproximadamente 1% de polímero sólido por massa. Até a presente data, a suspensão de nanopartículas de hidrogel resiste à floculação e à agregação há dois anos à temperatura ambiente.

Exemplo 5

Síntese de Nanopartículas de Hidrogel com Copolímero com uso de HEMA e GMA

Usando os métodos de síntese descritos acima, nanopartículas foram produzidas utilizando monômero HEMA e monômero metacrilato de glicerol. A Tabela 2 mostra as massas e Mmol relativos dos monômeros acrescentados aos frascos com meio de 2.000 ml:

Tabela 2

Amost	Massa HEMA	Mmol HEMA	Massa GMA	Mmol GMA
ra
90:10	40.0g	307.3	4.47g	27.78
pHEMA:GMA		6
75:25	33.35	256.3	11.11 g	69.46
pHEMA:GMA		0

Cada frasco com meio foi carregado com 80 mg (0,404

Mmol) do agente de ligação cruzada dimetacrilato de etilenoglicol (EGDM), 20,4 g (7,09 Mmol) de dodecil sulfato de sódio (SDS) e 2.000 ml de H2O mili-Q degaseif icada com nitrogênio. Os frascos foram fechados e agitados para formar soluções límpidas. Em dois frascos separados, 1,44g

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60/73 (6,31 Mmol) de (NH4)2S2Os foram dissolvidos em 20 ml de H2O mili-Q e acrescentados aos frascos com meio de 2.000 ml enquanto estes eram agitados. Os frascos com meio contendo as soluções límpidas foram transferidos para um banho-maria a 50° C e mantidos aí por 12 horas a uma temperatura constante. As suspensões resultantes de partículas de hidrogel tinham uma cor azul opalescente. As partículas foram analisadas através de difusão de luz a laser e a

Tabela 4 mostra o tamanho médio e as faixas de tamanho das partículas.

Exemplo 6

Liofilização de Suspensões de Nanopartículas

As suspensões de nanopartículas dos exemplo de 1 a 5 foram congeladas -80 °C. As suspensões sólidas foram secadas a vácuo à temperatura ambiente em um sistema de liofilização VIRTIS de modo a produzir um pó branco. O pó foi moído ou peneirado para produzir partículas de tamanho uniforme. A densidade do pó moído era de aproximadamente 200mg/ml e a densidade das partículas peneiradas era de aproximadamente 120mg/ml. As partículas permaneceram como um pó estável sem qualquer mudança na aparência ou na densidade de volume durante seis meses à temperatura ambiente.

Exemplo 7

Redispersão de Pó Seco de Nanopartículas

Os pós-liofilizados do exemplo 6 foram expostos a diversos solventes a fim de determinar se os pós-moídos ou peneirados podiam ser redispersos como suspensões. Os seguintes solventes mostraram capacidade de efetuar a redispersão das partículas:

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Água, etanol, metanol, isopropanol e butanol. Solventes não polarizados, como o hexano ou o acetato de etil, não permitiram a redispersão do pó e formaram massas insolúveis de pó umedecido quando combinados ao pó liofilizado.

Exemplo 8

Agregamento de Pó de Nanopartículas de Poli-HEMA em SSTF

O pó liofilizado de metacrilato de poli-2-hidroxietil do exemplo 6 foi acrescentado a uma solução salina tamponada com fosfato com pH fisiológico e força iônica. Após vários segundos, o pó se aglutinou, formando um filme agregado forte. A Figura 1 mostra uma fotografia do pó de nanopartículas, do pó aplicado à solução salina com fosfato e do agregado resultante após a formação.

Exemplo 9

Taxa de Perda de Água após Hidratação e Agregamento de Pós de Nanopartículas de Copolímeros em SSTF

Vários pós de nanopartículas de diferentes composições químicas foram expostos a um solução salina tamponada com fosfato. A Figura 2 mostra os resultados dos gráficos de perda de água para estes agregados de copolímeros compósitos de proporções variantes de monômero HEMA, metacrilato de glicerol e metacrilato de hidroxi-propil.

Na Figura 2, os gráficos mostram o peso médio de um agregado de nanopartículas de hidrogel formado com o uso de 500mg de pó em uma solução salina tamponada com fosfato de pH = 7,4. Os agregados foram pesados e devolvidos para que secassem em uma câmara ambiental a 37° C.

O gráfico mostra que os materiais agregados que contêm

GMA possuem adsorção inicial de água mais alta, devido ao

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62/73 seu caráter hidrofílico inerentemente mais pronunciado do que o dos materiais HEMA ou HPMA. Entretanto, a perda de água ao longo do tempo é mais rápida no caso destes agregados. Os copolímeros de pHEMA:HPMA possuem uma adsorção inicial de solução mais baixa, mas não perdem massa de água tão rapidamente.

Exemplo 10

Dados de Reologia para Diversos Filmes de Agregados Formados a partir de Pós de Nanopartículas e SSTF

A tabela 3 abaixo mostra as elasticidades relativas para diferentes tipos de agregados de nanopartículas. Em um dado estudo, foi aplicada tensão sobre um agregado de nanopartículas após a formação a partir de um pó e SSTF enquanto estava hidratado usando um tensiômetro Duofield atuando sobre o agregado a 1mm/segundo. Os agregados foram cortados em formato de osso, com 1 cm de cumprimento e 1mm x 2 mm de largura do pescoço. Os agregados foram esticados até o ponto de falha, e a tensão máxima de falha foi observada e registrada em três repetições do teste.

Tabela 3

Amostra	Prolongamento	Tensão	de	falha
	(desvio padrão)	(g)
			(desvio	padrão)
pHEMA	54mm	3.54)	0.58 g	(	1.21)
90:10 pHEMA:GMA	98mm	432)	012 g	(	1.13)
pHPMA	6mm	2.17)	5.9g (1	. 98)
90:10 pHPMA:GMA	69mm	7.83)	0.199	(	3.34)
95:5 pHEMA:HPMA	4 6mm	821)	071 g	(	1.31)
90:10 pHEMA:HPMA	41 mm	3.59)	1.3 g	(	2.91)
85:15 pHEMA:HPMA	38mm	3.42)	2.7 g	(	1.83)

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75:25	pHEMA:HPMA	22mm	(431)	3.8	q	(1.95)
50 : 50	pHEMA:HPMA	11 mm	(3.11)	5.1	g	(0.61)

As tendências gerais dos dados acima mostram que os materiais que contêm GMA se aglutinam para formar agregados que possuem elasticidade alta, porém resistência a quebra muito baixa sob prolongamento. Proporções mais altas de GMA (15% ou mais) resultaram em agregados bastante elásticos, mas com pouca integridade estrutural; os materiais se esticavam para além dos limites do atuador, mas as mudanças bruscas de pressão resultaram em fratura e falha do material. O acréscimo do co-monômero HPMA ao HEMA resultou em materiais mais fortes e menos elásticos, o que manteve parte da elasticidade do pHEMA, mas aumentou a resistência a quebra conforme o co-monômero HPMA, que é mais hidrofóbico, foi aumentado. Esta redução da elasticidade deve-se à absorção e à adsorção mais baixas de SSTF pelo pó quando o agregado se forma.

Exemplo 11

Mistura a Seco de Compósitos Bioativos com Pó de Nanopartículas para Produzir Biomateriais Contendo

Medicamentos

Um pó de nanopartículas de poli-HEMA e pós de nanopartículas de copolímeros de HEMA/GMA foram misturados a seco com pó de lidocaína ou eritromicina e, mediante exposição a SSTF, agregados se formaram, retendo o ativo entre as partículas que constituíam o agregado. O ativo é então liberado a uma taxa controlada, dependendo do tamanho da partícula, do caráter hidrofílico-hidrofóbico das partículas de polímero ou copolímero que constituem o agregado e das propriedades físicas do compósito bioativo

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64/73 utilizado. Conforme mostram as Figuras 3 e 4, a taxa de liberação pode ser configurada para fornecer um nível específico de ativo durante um período de tempo prolongado. A Figura 3 mostra a liberação de lidocaína a partir de três agregados diferentes, e a Figura 4 mostra a liberação de eritromicina. As Figuras 3 e 4 mostram que, para agregados de composição idêntica, a molécula que é retida e posteriormente liberada pode ter perfis de liberação diferentes. Isto se deve às propriedades físicas da molécula que está retida entre as nanopartículas que compõem um agregado e ao caráter hidrofílico-hidrofóbico do agregado. Por exemplo, a molécula de lidocaína relativamente hidrofóbica é liberada a uma taxa mais baixa conforme aumenta a quantidade do co-monômero hidrofílico metacrilato de glicerol no pó de nanopartículas de copolímero, e a taxa da eritromicina aumenta, já que é um ativo mais hidrofílico.

Exemplo 12

Incorporação de 1,10 fenantrolina a Agregados de

Nanopartículas de PHEMA/PHPMA

A 1,10 fenantrolina, um inibidor de protease hidrofóbico que se coordena com metais na metaloprotease e interfere na cinética de enzimas, foi incorporada a agregados de nanopartículas compósitos de misturas de pós de nanopartículas de HEMA e HPMA. A concentração efetiva da metaloprotease é de 0,1 mmol/l e o espectro de absorção UVVis tem uma absorção máxima de 510 nm (McCarty, R. E. Analytical Biochem, 205, 371-372, 1992) . Um estudo de liberação controlada foi realizado moendo 1mg de 1,10 fenantrolina com 100mg de pó de nanopartículas de hidrogel

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65/73 e acrescentado isto a 100 ml de solução salina tamponada com fosfato para produzir o respectivo agregado. Os agregados foram transferidos para 100 ML de SSTF e colocados em banho-maria a 37°C. A quantidade de 1,10 fenantrolina que eluía para a SSTF foi determinada através de espectrofotometria em diferentes intervalos de tempo. Foram produzidas nanopartículas de poli-HEMA e pHPMA com os diâmetros médios diferentes mostrados na Tabela 4:

Tabela 4

Amostra	Diâmetro
pHEMA	(A)	100 nm
pHEMA	(B)	42 nm
pHPMA	(A)	9 6 nm
pHPMA	(B)	3 8 nm

As partículas foram combinadas na proporção de 85:15, pHEMA:pHPMA, peso por peso, e os pós-misturados foram moídos com 1:10 fenantrolina para formar compósitos com 1 miligrama de 1:10 fenantrolina por 100mg de pó.

A Figura 5 mostra a liberação in vitro de 1,10 15 fenantrolina a partir de biomateriais de agregados compósitos de misturas de nanopartículas. O gráfico demonstra que é possível regular a liberação de 1,10 fenantrolina de agregados de nanopartículas usando tamanhos e composições químicas diferentes de nanopartículas para proporcionar doses controladas em intervalos de tempo de 1 dia a 13 dias.

Exemplo 13

Estudo de Destruição de Bactérias in vivo

Um estudo foi projetado para determinar a eficácia da 25 liberação controlada de doxiciclina e rifampina a partir de

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66/73 agregados de nanopartículas em culturas de bactérias infecciosas comumente encontradas em queimaduras. O estudo inicial foi projetada para determinar se a liberação controlada das drogas era suficiente para realizar a destruição efetiva das bactérias ao longo de um período de 14 dias. A fim de simular uma infecção contínua, três cepas de bactérias, Staphylococcus Aureus, Enterococcus e Pseudomonas, foram colocadas em placar de ágar separadas. Foram preparados 150 mg de agregado de nanopartículas contendo 3mg de doxiciclina e 1,5mg de rifampina através de mistura a seco dos antibióticos com os pós de nanopartículas e do acréscimo do pó a 5 ml de solução salina tamponada com fosfato. O agregado intacto ficou em processo de formação durante 5 minutos. O agregado foi cuidadosamente transferido para colônias de bactérias em placas e a zona de inibição foi fotografada conforme mostrado abaixo. A cada 24 horas, uma nova colônia de bactérias foi incubada e o mesmo agregado foi transferido para a nova placa para determinar a inibição da bandagem com antibióticos ao longo do tempo. O agregado de nanopartículas com antibióticos de liberação controlada foi comparado a uma bandagem antibiótica comercial impregnada com prata e sem liberação controlada.

Bactérias testadas no projeto:

Staphylococcus aureus ATCC 25923 (referida pela sigla

SA)

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (referida pela sigla

PS)

Enterococcus faecalis ATCC 51299 (referida pela sigla

EF)

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Material Utilizado:

Sistema de Inoculação BBL para uso em testes de suscetibilidade de disco-difusão

Ágar Mueller Hinton

Protocolo: Colocar 20 mm de bandagem comercial Aquacel

Ag ou agregado com ambos os ativos sobre a superfície do disco inoculado. Transferir cada curativo respectivo para o disco recém inoculado a cada 24 horas enquanto durar o estudo e observar a zona de inibição. Neste estudo, a inibição bacteriana foi medida como a zona de inibição em torno do disco formada em 24 horas para um disco novo com colônias incubadas por 6 horas. A inibição total para cada um incluiu o disco de 20mm do material Aquacel ou do curativo de agregado. As amostras foram testadas em ágar

Mueller Hinton inoculado com cepas separadas de bactéria (método BBL Prompt usado para diluir as bactérias em 1,5 x 10⁸ unidades formadoras de colônias por ml (UFC/ml). A Figura 8 mostra os gráficos de inibição para cada bactéria.

Com base nos estudos acima, o material para curativo de agregado fornece inibição das bactérias Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Enterococcus faecalis ao longo de 18 a 21 dias. Uma bandagem comercial de gaze de hidrogel impregnada com 1% de prata fornece inibição por 10 a 12 dias para as mesmas cepas de bactérias.

Exemplo 14

Estudos de Cura de Ferimentos

As imagens da Figura 9 mostram o pó de nanopartículas sem medicamentos (uma mistura de 85 % de nanopartículas poli-HEMA e 15% de nanopartículas poli-HPMA) aplicado a ferimentos de tamanhos diferentes (2cm, 4cm e 6cm,

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68/73 respectivamente) com espessura parcial (2cm de profundidade) em diferentes momentos durante a cura. O pó é aplicado diretamente sobre um ferimento e utiliza os exsudatos para formar um curativo de agregado.

Neste estudo, o pó de nanopartículas foi aplicado na superfície do ferimento com exsudato e pressionado para que ficasse na posição desejada. Não foi aplicado um curativo secundário. O curativo de hidrogel comercial padrão foi aplicado na superfície do ferimento, exigindo um curativo secundário e trocas diárias. O curativo de agregado de nanopartículas não requereu troca do curativo durante a cura do ferimento e não demonstrou sinais de inflamação, tais como vermelhidão nas margens ou níveis elevados de

TNF-α

O curativo também foi aplicado em locais de doação de pele em um modelo animal porcino. A Figura 10 mostra os resultados de cura ao longo de sete dias após a formação do curativo de agregado em um local de doação de pele porcino em comparação com o Aquacel.

A Figura 10 mostra que o material agregado pode ser

usado como uma	bandagem eficaz	para locais	de	doação	de
pele com cura	equivalente	ou	superior a	uma	bandagem
comercial.
Exemplo 15
Incorporação de Fatores	de	Crescimento	a	Pós	de
Nanopartículas	e Aplicação	de	Bandagens com	Liberação	de

Fator de Crescimento em um Modelo de Cura de Ferimentos

Pós de nanopartículas de hidrogel compósitos de nanopartículas de pHEMA e pHPMA na proporção de 85:15 foram combinados com os fatores de crescimento VEGF (fator de

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69/73 crescimento crescimento ferimentos.

seguir:

endotelial vascular) e PDGF (fator de derivado de plaquetas), e aplicados a

Os pós foram preparados conforme descrito a

A. 105 ml de uma suspensão de nanopartículas na proporção de 85:15 de pHEMA:pHPMA em água foram combinados com 5 microgramas de proteína VEGF. A suspensão foi misturada cuidadosamente para assegurar a homogeneidade e então liofilizada, produzindo 2 g de pó que foi dividido em

5 frações de 400 miligramas. Cada fração continha 1 micrograma de VEGF.

B. 105 ml de uma suspensão de nanopartículas na proporção de 85:15 de pHEMA:pHPMA em água foram combinados com 20 microgramas de proteína PDGF. A suspensão foi misturada cuidadosamente para assegurar a homogeneidade e então liofilizada, produzindo 2 g de pó que foi dividido em 5 frações de 400 miligramas. Cada fração continha 4 microgramas de proteína PDGF.

C. 105 ml de uma suspensão de nanopartículas na proporção de 85:15 de pHEMA:pHPMA em água foram combinados com 5 microgramas de proteína VEGF e 20 microgramas de proteína PDGF. A suspensão foi misturada cuidadosamente para assegurar a homogeneidade e então liofilizada, produzindo 2 g de pó que foi dividido em 5 frações de 400 miligramas. Cada fração continha 1 micrograma de VEGF e 4 microgramas de proteína PDGF.

Ferimentos com espessura total de uma polegada por uma polegada foram formados em um porco, em uma grade de 4 ferimentos x 4 ferimentos para um total de 16 ferimentos.

Cada ferimento foi coberto com um dos quatro tipos de

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70/73 bandagens abaixo:

Pó de nanopartículas contendo 1 micrograma de VEGF por 400 miligramas de bandagem.

Pó de nanopartículas contendo 4 microgramas de PDGF por 400 miligramas de bandagem.

Pó de nanopartículas contendo 1 micrograma de VEGF e 4 microgramas de PDGF por 400 miligramas de bandagem.

Pó de nanopartículas	para controle,	sem	fatores de
crescimento.
Os ferimentos não	foram cobertos	com	bandagens
secundárias. Foram feitas	biópsias no 2°,	7°,	14° e 21°

dias em cada local de ferimento e foram feitos estudos histológicos das amostras.

A histologia do ferimento de controle e do ferimento tratado com PDGF aparece na Figura 11. Nas imagens de histologia mostradas, a biópsia à direita é de um ferimento tratado com a bandagem de controle que não continha fator de crescimento ativo. A biópsia à esquerda é de um ferimento tratado com a bandagem de agregado de nanopartículas carregado com PDGF. As biópsias são ambas do

7° dia.

No controle, o leito do ferimento está bem mais profundo após sete dias e apresenta muito menos granulação. Além disso, houve maior recrutamento de fibroblastos no ferimento carregado de PDGF. A área do ferimento aparece com a caixa em cada uma das imagens de histologia, enquanto o lado direito de cada imagem mostra tecido saudável retirado da margem do ferimento na biópsia. Resultados semelhantes foram obtidos no 14° e no 21° dias, com um aumento significativo da granulação.

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A Figura 12 mostra a histologia do ferimento de controle e do ferimento tratado com VEGF. Nas imagens de histologia mostradas, a biópsia da direita é de um ferimento tratado com a bandagem de controle, sem fator de crescimento ativo. A biópsia da esquerda é de um ferimento tratado com uma bandagem de agregado de nanopartículas carregada de VEGF. A bandagem continha 1 micrograma de VEGF por grama de curativo. As biópsias são ambas do 7° dia.

No controle, o ferimento está muito mais profundo após 10 sete dias e apresenta muito menos granulação. Já o ferimento tratado com VEGF apresenta um aumento acentuado da vascularização no interior do leito do ferimento. A área do ferimento aparece com a caixa em cada uma das imagens de histologia, enquanto o lado direito de cada imagem mostra tecido saudável retirado da margem do ferimento na biópsia.

A Figura 13 mostra a histologia do ferimento de controle e do ferimento tratado com uma combinação de VEGF e PDGF. Nas imagens de histologia mostradas, a biópsia da

direita	é de	um	ferimento tratado	com a	bandagem	de
20 controle,	sem	fator de crescimento	ativo. A	biópsia	da
esquerda	é de	um	ferimento tratado	com uma	bandagem	de

agregado de nanopartículas contendo uma combinação de VEGF e PDGF. As biópsias são ambas do 7° dia.

No controle, o ferimento está muito mais profundo após 25 sete dias e apresenta muito menos granulação. Além disso, há um aumento acentuado da vascularização no interior do leito do ferimento e um aumento da formação de rhett na borda do ferimento. A área do ferimento aparece com a caixa em cada uma das imagens de histologia, enquanto o lado direito de cada imagem mostra tecido saudável retirado da

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72/73 margem do ferimento na biópsia. Com base nos experimentos acima, fica claro que a incorporação de um fator de crescimento ou uma combinação destes no pó de nanopartículas pode ter um efeito significativo sobre a cura de ferimentos.

Exemplo 16

Produção de um Curativo de Agregado de Nanopartículas In situ em uma Superfície de Pele sem Exsudato

Uma formulação de gel fluido composta de pó de nanopartículas, etanol e polietileno glicol-400 foi produzida da seguinte maneira:

Uma quantidade de suspensão de nanopartículas de pHEMA, preparada de acordo com o exemplo 1, é misturada com uma quantidade de suspensão de nanopartículas de pHPMA, preparada de acordo com o exemplo 2, de modo que a suspensão combinada contenha 85% de pHEMA e 15% de pHPMA. A suspensão combinada é liofilizada, e o pó resultante é passado em uma peneira de 150 mícrons e ensacado para armazenamento.

São colocados 1,15g do pó de nanopartículas peneirado em uma proveta de 100ml e uma mistura 1g de PEG-400, 3g de etanol e 0,10g de água deionizada é acrescentada à proveta que contém o pó. Este pó é misturado cuidadosamente com o líquido e forma, inicialmente, uma pasta. A pasta se transforma é um gel viscoso dentro de 30 segundos. O gel é colocado em tubos dispensadores seláveis por calor para armazenamento.

Mediante a aplicação na pele intacta, o álcool evapora e deixa um curativo de agregado plastificado que se adapta a todas as superfícies irregulares e adere intimamente à

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73/73 pele subjacente.

Deve ficar entendido que, embora a invenção tenha sido descrita em conjunto com as modalidades acima, a descrição e os exemplos supracitados servem para ilustrar, e não limitar, o escopo da invenção. Outros aspectos, vantagens e modificações dentro do escopo da invenção ficarão aparentes para aqueles versados na arte à qual a invenção está relacionada.

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1/6

Claims (3)

REIVINDICAÇÕES

1/9

Peso médio do agregado (g)

10 pHEMAOMA 5 pHEMA:HPMA

10 pHEMA 15 pHEMA 10 pHEMA 25 pHEMA 50 pHEMA

HPMA

HPMA

GMA

HPMA

HPMA

1. Método para preparar um pó seco de nanopartículas poliméricas caracterizado pelo fato de compreender:

a) a polimerização de uma quantidade efetiva de um 5 monômero ou dois ou mais monômeros, sendo que pelo menos um deles é um ácido 2-alquenóico, um 2-alquenoato de hidróxialquila (2C - 4C) , um 2-alquenoato de di-hidróxi-alquila (2C-4C), um 2-alquenoato de hidróxi alcóxi (2C - 4C) alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de alcóxi (1C - 4C)

10 alcóxi (2C - 4C) alquila (2C - 4C) ou um epóxi vicinal 2alquenoato de alquila (1C - 4C), em um líquido polar ou uma mistura de dois ou mais líquidos miscíveis, sendo que pelo menos um destes é polar, e uma quantidade efetiva de um tensoativo para produzir uma suspensão de uma pluralidade

15 de nanopartículas poliméricas em que as nanopartículas poliméricas possuem um diâmetro médio inferior a 1 x 10^-6 m;

e

b) remoção do(s) líquido(s) da suspensão por um processo que compreende secagem por pulverização ou

20 liofilização, de modo a prevenir a agregação e tal que a quantidade de líquido(s) restante no pó seco seja inferior a 10% em peso, sendo que a percentagem é baseada no peso total do pó seco.

2/6 nanopartículas poliméricas;

e a etapa (b) ainda compreende:

o acréscimo de uma ou mais segunda(s) substância(s) de trabalho em quantidade efetiva ao pó seco preparado através

5 da etapa (b) e mistura a seco para produzir um pó seco contendo uma segunda substância de trabalho, em que a(s) primeira(s) substância(s) de trabalho pode(m) ser igual(is) à(s) segunda(s) substância(s) de trabalho ou diferente(s) desta;

10 em que as ditas uma ou mais primeira(s) e segunda(s) substância(s) de trabalho são selecionadas do grupo consistindo em: agentes biomédicos, substâncias biologicamente ativas tais como agentes farmacêuticos, genes, proteínas, peptídeos, polissacarídeos, fatores de

15 crescimento, anticorpos monoclonais, anticorpos fragmentados, antígenos, polipeptídios, DNA, RNA e ribozimas.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as nanopartículas

20 poliméricas possuem um diâmetro médio de 1 nanômetro a 1 micrômetro ou de 20 a 800 nanômetros e/ou possuem diâmetro médio igual ou diferente, são formadas a partir de um ou mais monômeros e têm polidispersão estreita ou larga.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1,

25 caracterizado pelo fato de que a etapa (a) compreende:

acréscimo de 0.01 a 10 mol por cento de um tensoativo a um sistema de polimerização que compreende um monômero, ou dois ou mais monômeros diferentes, sendo que o monômero ou pelo menos um dos dois ou mais monômeros compreende um

30 ou mais grupos hidróxi e/ou um ou mais grupos éster, em um

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3/6 líquido polar ou uma mistura de líquidos polares, em que o líquido polar ou pelo menos um dos dois ou mais líquidos polares compreendem um ou mais grupos hidróxi e a polimerização do(s) monômero(s) para formar uma pluralidade de nanopartículas poliméricas, sendo que o acréscimo é feito na ausência de um agente de ligação cruzada.

5. Método, de acordo com a reivindicações 1, caracterizado pelo fato de que o(s) monômero(s) é(são) selecionado(s) a partir do grupo que consiste de um ácido 2-alquenóico, um 2-alquenoato de hidróxi alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de di-hidróxi alquila (2C-4C), um 2alquenoato de hidróxi alcóxi (2C - 4C) alquila (2C - 4C), um 2-alquenoato de alcóxi (1C - 4C) alcóxi (2C - 4C) alquila (2C - 4C) ou um epóxi vicinal 2-alquenoato de alquila (1C - 4C) e uma combinação de dois ou mais destes.

6. Método, de acordo reivindicação 1, líquido(s) é(são) selecionado(s) a partir do grupo que consiste de água,

' com a que o(s) grupo que

caracterizado pelo fato de que o(s metanol, etanol, álcool isopropil, etilenoglicol, dietilenoglicol, trietilenoglicol, polietilenoglicol 200 600, propileno glicol, dipropileno glicol, 1,4-butanodiol, 2,3-butanodiol, 1,6-hexanodiol, 2,5-hexanodiol, etilenoglicol monometil éter, etilenoglicol monoetil éter, éter de metilcelossolve, etileno glicol monoacetato, propileno glicol monometil éter, glicerina, monoacetato de glicerol, tri(2-hidroxietil)citrato, di(hidróxi-propil)oxalato, diacetato de gliceril e mono-butirato de gliceril.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa (a) ainda compreende o acréscimo de 0.1 a 15% mol por cento de um agente de

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4/6 peptídeos, anticorpos antígenos, ligação cruzada.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa (a) compreende ainda o acréscimo de uma quantidade efetiva para absorção de uma 5 ou mais substâncias de trabalho ao(s) líquido(s) polar(es) antes da polimerização, fornecendo nanopartículas poliméricas que contêm substância de trabalho;

em que a(s) dita(s) uma ou mais substância(s) de trabalho são selecionadas do grupo consistindo em: agentes 10 biomédicos, substâncias biologicamente ativas tais como agentes farmacêuticos, genes, proteínas, polissacarídeos, fatores de crescimento, monoclonais, anticorpos fragmentados, polipeptídios, DNA, RNA e ribozimas.

15

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que ainda compreende o acréscimo de uma quantidade efetiva de um composto antibiótico ao líquido (ou líquidos) polares antes da polimerização e/ou ao pó seco preparado através da etapa 20 (b), com mistura a seco.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a etapa (b) ainda compreende:

o acréscimo de uma ou mais substâncias de trabalho ao

25 pó seco e a mistura para produzir um compósito de substância(s) de trabalho/pó seco;

em que a(s) dita(s) uma ou mais substância(s) de trabalho são selecionadas do grupo consistindo em: agentes biomédicos, substâncias biologicamente ativas tais como

30 agentes farmacêuticos, genes, proteínas, peptídeos,

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5/6 útil(eis) no farmacêutico(s) polissacarídeos, fatores de crescimento, anticorpos monoclonais, anticorpos fragmentados, antígenos, polipeptídios, DNA, RNA e ribozimas.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, 5 caracterizado pelo fato de que a(s) substância(s) de trabalho compreende(m) um ou mais agentes biomédicos que podem ser iguais ou diferentes selecionado(s) a partir do seguinte grupo: um ou mais materiais de estrutura para crescimento de tecido; células ou plaquetas; um ou mais 10 agentes farmacêuticos; um ou mais excipientes aceitáveis em termos farmacêuticos; um peptídeo; uma proteína; um polissacarídeo; agente(s) farmacêutico(s) que seja(m) tratamento de feridas; agente(s) que seja(m) útil(eis) no tratamento de

15 câncer; antibióticos; agente(s) farmacêutico(s) que seja(m) útil(eis) no tratamento da dor; agente(s) farmacêutico(s) que seja(m) útil(eis) no tratamento de infecções; agente(s) farmacêutico(s) que seja(m) útil(eis) no tratamento de doenças dos olhos; colágeno; ácido hialurônico; um fator de 20 crescimento; eritromicina; doxiciclina; rifampina; polipeptídeo(s) VEGF; polipeptídeo(s) PDGF e lidocaína.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o(s) excipiente(s) aceitável (eis) em termos farmacêuticos é(são) materiais de

25 preenchimento solúveis em água.

13. Pó seco caracterizado pelo fato de que é preparado pelo método como definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 7 ou 10.

14. Uso de um pó seco como definido na reivindicação

30 13 caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um

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6/6 medicamento para tratar o local de um ferimento úmido in situ.

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2. Método, de acordo com a reivindicação 1,

25 caracterizado pelo fato de que a etapa (a) ainda compreende:

o acréscimo de uma ou mais primeira(s) substância(s) de trabalho em uma quantidade efetiva para resultar em um líquido contendo uma primeira substância de trabalho, em que, após a polimerização, uma porção do líquido contendo a

30 primeira substância de trabalho é absorvida pelas

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3 4 5 6

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