BR9809457B1 - sal de peptìdeo de bpc com atividade organo-protetora, composição farmacêutica ou diagnóstica, usos e processos de preparação. - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "SAL DEPEPTÍDEO DE BPC COM ATIVIDADE ORGANO-PROTETORA, COMPO-SIÇÃO FARMACÊUTICA OU DIAGNOSTICA, USOS E PROCESSOS DEPREPARAÇÃO".

Descrição

A presente invenção refere-se a formas de aplicação de peptí-deos de BPC (composto de proteção de corpo) sintéticos compreendendo de8 a 15 resíduos de aminoácido com um peso molecular de 900 a 1.600 dál-tons, que têm atividade organo-protetora, a processos para sua preparaçãoe a seu uso em diagnose e em terapia.

São conhecidos proteínas e peptídeos que são úteis para o tra-tamento de várias doenças em seres humanos e em animais. Muitos destesagentes são produzidos in vivo e podem ser extraídos de animais ou de se-res humanos para preparar composições farmacêuticas. Exemplos para pro-teínas ou peptídeos farmaceuticamente úteis são insulina, eritropoietina,BMPs1 interferons, etc. Um outro exemplo é uma proteína de suco gástricocom atividade protetora de mucosa que foi recentemente isolada e chamadade BPC.

A WO 92/04368 se refere a BPC que exibe atividade protetorade corpo e tem um peso molecular de cerca de 40.000 dáltons, sua prepara-ção e seu uso. A WO 93/24521 e a WO 94/11394 revelam peptídeos de BPCque têm atividade organo-protetora do mesmo tipo que conhecida da proteí-na de origem BPC. Sikiric e outros, em: Digestive Deiseases and Sciences,41 (1996)7, 1518 - 1526, descrevem BPC de pentadecapeptídeo 157, que exi-be quando dissolvido em água e em solução salina, efeitos profiláticos e saluta-res sobre pancreatite aguda e lesões gastroduodenais concomitantes em ratos.

Assim, os peptídeos de BPC são conhecidos para uma amplavariedade de aplicações farmacêuticas. No entanto, a estabilidade fisicoquí-mica destes peptídeos, por exemplo, em solução salina normal, não é satis-fatória. Além do mais, a aplicação de peptídeos de BPC, em particular porinjeção de uma solução aquosa ou em solução salina normal, causa dor e/ounecrose.Sais de proteínas e de peptídeos são bem conhecidos na técni-ca. É, por exemplo, conhecido de Bertrand, M. e outros, em: Journal ofPeptide Research, 49 (1997) 3, 269 - 272, que os efeitos de sais particula-res são muito seletivos com relação à estabilidade e à estrutura de peptí-deos. Por exemplo, a adição de cátions monovalentes, tal como NH4+ a umasolução de peptídeo a 0,1 M final (poli(Glu-Leu)), induz uma transição auma beta-estrutura solúvel em água. Em contraste com isso, nenhuma tran-sição foi observada usando-se íons de Li+, de Na+, ou de Cs+.

A função de pares de íon acessíveis na superfície em estabili-dade de proteína foi investigada por determinação dos efeitos de sais adici-onados (KCI, MgCI2 e LaCI3) em pH ácido ou neutro sobre a estabilidade debobinas enroladas alfa-helicoidais de dois fios projetadas pela de novo. Osresultados mostram que sal adicionado pode ter efeitos complexos sobre aestabilidade de proteína, envolvendo contribuições de estabilização e dedesestabilização, pela qual o efeito de rede depende da natureza dos resí-duos carregados e da interação iônica presente na proteína (Kohn e outros,em: Journal of Molecular Biology, 267 (1997)4, 1039 -1052).

Pesquisas anteriores de peptídeos de modelo também demons-traram que pontes de sais espaçadas em i,i +4 ao longo da cadeia de peptí-deo são mais estabilizantes do que aquelas espaçadas em i,i +3, com umapreferência para a ordem ácido-base ao invés de base-ácido do terminal Naté terminal C. No entanto, no momento não é conhecido se pontes de salde superfície têm um forte efeito de estabilização sobre a estrutura nativaem proteínas (Berger e outros, em: Journal of Biomolecular Structure andDynamics, 14 (1996)3, 285 - 291).

Assim, as propriedades de sais de peptídeo com relação a suaestabilidade, estrutura e função depende muitíssimo dos íons específicosenvolvidos na formação do sal específico e outros fatores intrínsicos ou ex-trínsicos. No momento, não pode ser previsto que propriedades particularesde um sal específico de um peptídeo específico podem ter.

O problema técnico subacente a presente invenção é proverpeptídeos de BPC em forma mais estável e uma composição de diagnósticoe/ou farmacêutica compreendendo peptídeos de BPC exibindo estabilidadeaperfeiçoada e pelo menos as mesmas atividades farmacêuticas que ospróprios peptídeos de BPC. Além do mais, o problema técnico subjacente apresente invenção, é prover uma composição farmacêutica que supere asdesvantagens mencionadas acima, em particular, permitindo injeção indolorde peptídeos de BPC.

A presente invenção resolve estes problemas por prover sais depeptídeo de BPC e uma composição farmacêutica ou de diagnóstico com-preendendo uma quantidade farmaceuticamente ou diagnosticamente eficazdos sais de peptídeos de BPC1 em que o ânion do sal é um peptídeo negati-vamente carregado compreendendo de 8 a 15 aminoácidos, exibindo umpeso molecular de 900 a 1.600 dáltons e tendo a fórmula geral (I)[Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala](">ou (2_) (I)

em que Xaa é um resíduo de aminoácido alifático neutro, em particular Ala,bAla, Leu, lie, Gly, Vai, Nle ou Nva1

Yaa é um resíduo de aminoácido básico, em particular Lys1 Arg, Orn ou Hise

Zaa é um resíduo de aminoácido ácido, em particular Glu, Asp, Aad ou Apm.e em que o cátion do sal é o cátion de uma base farmaceuticamente aceitá-vel e não-tóxica orgânico ou inorgânica. Em particular, o cátion do sal é ummetal alcalino ou um metal alcalino-terroso, por exemplo, Na+, K+, Li+, Cs+,Ca2+, ou um outro metal, tal como Zn2+, ou um composto orgânico ou deamina primária, secundária ou terciária, tal como NH4+, trietanolamina+, ci-Clohexilamina+, 2-AMP+ (2-amino-1-propanol) ou TRIS+ (Tris-(hidroximetil)-aminometano), contanto que estes cátions seja fisiologicamente aceitáveis.

Surpreendentemente, os sais de peptídeo de BPC da presenteinvenção mostram pelo menos a mesma atividade farmacêutica que ospeptídeos de BPC e, adicionalmente, uma estabilidade fisicoquímica remar-cadamente aumentada em comparação com os peptídeos de BPC livres ouacetatos de peptídeos de BPC. O cátion usado de acordo com a presenteinvenção não influencia a atividade dos peptídeos de BPC, mas aumentasua estabilidade. Os sais de peptídeo de BPC da presente invenção são,por exemplo, mais estáveis do que os peptídeos de BPC ou acetatos depeptídeo de BPC em água ou solução salina normal. Além do mais, os saisda presente invenção são bem adequados para uso peroral e não exibemquaisquer efeitos colaterais indesejáveis tal como dor ou necrose duranteou depois da aplicação, em particular, por injeção. Os sais de peptídeo deBPC da presente invenção, portanto, permitem uma aplicação parenteral ouenteral aperfeiçoada. Além do mais, os sais da presente invenção são muitofavoráveis devido à ausência de quaisquer sinais de toxicidade até dosesde 50 mg/kg de p.c. (peso de corpo)

Os sais da invenção podem ser obtidos por dissolução do peptí-deo de BPC livre em um solvente aquoso ou aquoso/alcoólico ou em outrossolventes adequados com uma base apropriada e então o isolamento do salobtido da invenção por evaporação da solução, por congelamento e Iiofiliza-ção ou por adição de um outro solvente, por exemplo, dietiléter, à soluçãoaquosa e/ou alcoólica do sal de peptídeo de BPC induzindo a separação desal bruto insolúvel. Para a formação de sal, usualmente um ou dois molesno máximo de base, isto é, cátion, e um mol dos peptídeo de BPC livre sãousados. Para a preparação de sais de peptídeo de BPC alcalinos, carbona-tos de metal alcalino ou hidrogenocarbonatos são de preferência usados.Os sais de peptídeo preparados são livremente solúveis em água. Assim, apresente invenção também se refere a um processo para a preparação dossais de peptídeo de BPC.

No contexto da presente invenção, uma base é consideradacomo uma substância capaz da formação de um cátion em uma solução,particularmente em uma solução aquosa e aquosa/alcoólica.

No contexto da presente invenção, atividade farmacêutica incluiatividades profiláticas ou terapêuticas. Correspondentemente, uma compo-sição farmacêutica se refere a composições exibindo atividades profiláticase/ou terapêuticas.

Adicionalmente, a invenção se refere a uma composição farma-cêutica ou de diagnóstico compreendendo os sais de peptídeo de BPC dapresente invenção, opcionalmente em combinação com um ou mais veículosfarmaceuticamente aceitáveis, bem como processos para preparação destascomposições. Estas composições são adequadas para aplicação tópica ousistêmica, por exemplo, na forma de soluções injetáveis, comprimidos, cre-mes, cápsulas, pomadas, loções, Iingualetes etc. A dosagem é preferível nafaixa de 10"5 a 10'2 mg/kg de peso de corpo, aplicada sistematicamente outopicamente em concentração mais alta entre 0,1% a 0,5%. A determinaçãodas dosagens ótimas para um tratamento particular está dentro da habilida-de da técnica.

A presente invenção se refere a uma composição farmacêuticaou de diagnóstico de acordo com o exposto acima, que além de um ou maisdos sais de peptídeo de BPC da presente invenção, contém trehalose, emparticular para o uso peroral, e/ou veículos, diluentes e/ou aditivos farma-ceuticamente ou diagnosticamente aceitáveis.

A composição, de preferência a composição solúvel em água,da invenção pode, além do sal de peptídeo de BPC, ulteriormente conteruma proteína solúvel em água injetável em fluidos de corpo sem mostrarqualquer atividade farmacológica substancial na concentração usada emuma forma de dosagem por unidade da presente invenção (aqui em segui-da, "proteína solúvel em água"). Como tais uma proteína solúvel em água,uma albumina de soro, uma globulina, um colágeno e/ou gelatina são prefe-ridos. Esta proteína pode ser adicionada em uma quantidade em geral em-pregada em composições farmacêuticas injetáveis. Assim, por exemplo, arazão em peso entre a proteína solúvel em água e o sal de peptídeo de BPCé cerca de 0,0001:1 a 100:1, de preferência cerca de 0,001:1 a cerca de10:1 ou mais de preferência cerca de 0,01:1 a cerca de 1:1.

Prosseguindo, a invenção também se refere aos próprios saisde peptídeo de BPC acima mencionados e composições contendo eles, emparticular, em forma seca e/ou pura ou em uma solução aquosa ou aquo-sa/alcoólica. O pH de uma solução preparada a partir da composição solú-vel em água ou um sal de peptídeo da presente invenção deve ser tal que odito pH não exercerá qualquer influência adversa sobre a atividade dopeptídeo farmacologicamente ativo, mas está dentro de uma faixa aceitávelpara injeções em geral e ulteriormente, tal que o dito pH nem causará umagrande mudança em viscosidade da solução nem permitirá a formação deum precipitado ou semelhantes. Assim, a solução deve, de preferência terum pH de cerca de 6 a 9, de preferência de 6,5 a 7,5.

Quando a composição solúvel em água da invenção é converti-da em uma solução aquosa para a administração, a concentração do sal depeptídeo farmacologicamente ativo no dita solução deve de preferência sercerca de 0,0000001 a 10% (p/v), mais de preferência cerca de 0,00000 a5% (p/v) ou mais de preferência cerca de 0,00001 a 1% (p/v).

A composição da presente invenção deve, de preferência, teruma forma de dosagem por unidade contendo o sal de peptídeo de BPCfarmacologicamente ativo da invenção e, se necessário, juntamente comaditivos ulteriores tal como a proteína solúvel em água acima mencionada.

Assim, por exemplo, os dois ou os três componentes mencionados acimasão produzidos para acontecer em uma ampola ou frasco por dissolução oususpensão deles em água estéril ou solução salina fisiológica estéril. Nestecaso, o método de preparação pode compreender a misturação de uma so-lução do sal de peptídeo de BPC farmacologicamente ativo e ulteriormente,se necessário, uma solução do aditivo ou adição do aditivo em uma formade pó a uma solução do sal de peptídeo de BPC farmacologicamente ativoou qualquer outra combinação de procedimentos adequados. A forma dedosagem pode também ser preparada por adição de água estéril ou soluçãosalina fisiológica estéril a um Iiofilizado ou pó seco a vácuo em que sal depeptídeo de BPC farmacologicamente ativo, e se necessário o aditivo, coe-xiste. Esta forma de dosagem por unidade pode conter um ou mais aditivosconvencionais tais como agentes de ajuste de pH (por exemplo, glicina, áci-do clorídrico, hidróxido de sódio), anestésicos locais (por exemplo, cloridratode xilocaína, clorobutanol), agentes de isotonização (por exemplo, cloretode sódio, manitol, sorbitol), emulsificadores, inibidores de absorção (porexemplo, Tween® 60 ou 80), talco, amido, Iactose e tragacanto, estearatode magnésio, glicerol, propileno glicol, agentes de preservação, álcool ben-zílico, benzoato de metilhidróxi e/ou oleum araquídio hidrogênio. Esta formade dosagem por unidade pode ulteriormente conter excipientes farmaceuti-camente aceitáveis tal como polietileno glicol 400 ou dextrano.

A composição solúvel em água da presente invenção de prefe-rência toma a forma de uma preparação parenteral. Como a dita preparaçãoparenteral, soluções injetáveis, soluções para a administração intramucosa,soluções nasais, soluções óticas são preferidas.

As ditas soluções injetáveis incluem soluções para a administra-ção intravenosa, administração subcutânea, administração intraarterial, ad-ministração intramuscular e administração intraocular. Estas preparações delonga ação podem ser prontamente tiradas de ampolas ou frascos em serin-gas. Bolhas, se formadas na retirada, podem ser prontamente eliminadaspor um tempo curto de repouso simples.

A composição da presente invenção pode estar em uma formadissolvida em água ou em uma forma Iiolifilizada com um soluto de cristali-zação tal como manitol. Adição de água estéril ou de solução salina fisioló-gica estéril ao Iiofilizado dá uma solução aquosa.

A tonicidade de uma solução aquosa da composição solúvel emágua da presente invenção deve estar dentro da faixa tolerável quando ad-ministrada e é ajustada, por exemplo, por agentes de isotonização tais comocloreto de sódio e manitol. A tonicidade é de preferência desde metade aduas vezes tão alta quanto aquela de solução salina fisiológica, mais depreferência desde 3/4 a um e meio tão alta quanto aquela de solução salinafisiológica.

A viscosidade de uma solução aquosa da composição solúvelem água da presente invenção deve ser baixa o bastante para ser injetada.

A viscosidade é de preferência mais baixa do que 500 cP, mais de preferên-cia mais baixa do que 400 cP. Os valores da viscosidade correspondemàqueles medidos por emprego de Cone LD em um medidor de viscosidadede tipo E (TOKIMEC, Japão) a 25°C.

Quando a composição está na forma de um liofilizado, é preferi-do que a viscosidade, a tonicidade de e as concentrações de componentena solução aquosa derivada da mesma estejam dentro das faixas respecti-vas mencionadas aqui mais acima.

A composição da presente invenção é produzida por misturaçãodestes ingredientes de acordo com um método convencional. O objetivo damisturação dos ingredientes da presente composição deve ser tal que a ati-vidade do sal de BPC farmacologicamente ativo seja mantida e a formaçãode bolha seja minimizada durante o processo. Os ingredientes são postosem um recipiente (por exemplo, uma garrafa ou um tambor) ou ao mesmotempo ou em qualquer ordem. A atmosfera no recipiente pode ser, porexemplo, ar limpo estéril ou gás de nitrogênio limpo estéril. A solução re-sultante pode ser transferida para frascos pequenos ou ampolas e pode serulteriormente submetida a liofilização.

A forma líquida ou a forma em pó de Iiofilizado da composiçãoda presente invenção pode ser dissolvida ou dispersa em uma solução deum polímero biodegradável tal como copolímero de ácido poli(láctico-glicólico), poli(ácido hidroxibutírico), copolímero de ácidopoli(hidroxibutírico-glicólico), ou a mistura destes, e então pode ser formula-da, por exemplo, para películas, microcápsulas (microesferas) ou nanocáp-sulas (nanoesferas), particularmente na forma de cápsulas moles ou duras.

Além disso, a composição da presente invenção encapsuladaem Iipossomas copreendendo fosfolipídios, colesterol ou os derivados des-tes podem ser ulmteriormente dispersos em solução salina fisiológica ouuma solução de ácido hialurônico dissolvida em solução salina fisiológica.

A cápsula mole pode ser enchida com a forma líquida da com-posição da presente invenção. A cápsula dura pode ser enchida com o póIiofilizado da composição da presente invenção, ou pó de Iiofilizado da pre-sente composição pode ser comprimido para dar comprimidos para a admi-nistração retal ou a administração oral respectivamente.

Naturalmente, a composição da presente invenção pode ser for-necida em um seringa preenchida para auto-administração.A composição da presente invenção pode ser mantida em tem-peratura normal tal como de +10°C a +30°C ou em faixa de refrigeraçãonormal, de preferência de cerca de +2°C a +8°C.

A invenção também se refere a novos usos e a métodos de tra-tamento usando-se os sais e/ou composições acima mencionados, em parti-cular, com relação ao tratamento de distúrbios ligados ou com formação deóxido nítrico (NO) ou função de sistema NO diminuídas, em particular, hi-pertensão, angina, impotência, choque séptico e circulatório, inflamação,síndrome de sofrimento respiratório, adesão e agregação de plaquetas eleucócitos, disfunção endotelial, lesões gastrontestinais, distúbios de peris-talse, diabetes, pancreatite, hipotensão e doença de Parkinson; disfunçõesou hiperfunções de nervos somatossensórios, em particular neuropatia sen-sória, neuralgia posterpética, dermatite atópica, cura prejudicada de tecidoferido, urticária por calor ou por frio adquirida, psoríase, penfigóide bolhosa,eczema, fotodermatoses, artrite crônica, lesões gastrontestinais e hiperrea-tividade específica e não específica de tratos respiratórios superiores e infe-riores (asma, rinite; distúrbios de endotélio; ferimentos, úlceras; condiçõesrelacionadas com inflamação aguda e/ou crônica, em particular, artrite crô-nica e distúrbios relacionados com tipo retardado de hipersensibilidade elesões gastrontestinais; distúrbios de fígado, lesões de órgão induzidas porradicais livres especificadamente causados por irradiação; distúrbios liga-dos com distúrbios de sistema catecolaminérgico, em particular, esquizofre-nia, efeitos de desafio de anfetamina, abuso de droga; condições relaciona-das com stress; pancreatite aguda, com um impacto positivo adicional sobrea patologia gastroduodenal concomitante; distúrbios cardíacos, em particu-lar, tratamento anti-arrítmico, antianginal e cardioprotetor; distúrbios depres-sivos; doença de Parkinson e patologia semelhante a doença de Parkinson;distúrbios de temperatura; danos de osso; vários danos de órgão induzidospor hipertensão; distúrbios de coagulação; distúrbios de dor; distúrbios deconvulsão; lesão de coluna vertebral; danos de álcool, induzidos por abusode álcool ou ingestão de álcool aumentada; distúrbios isquêmicos de cére-bro; lesões de nervo periférico; distúrbios catalépticos e distúrbios neuro-lépticos; distúrbios relacionados com linfócitos mutantes ou anormais; dis-túrbios de fetos; desenvolvimento de atrofia vaginal e de osteoporose cau-sado por condições de ovariectomia; tumores; doenças virais, em particularAIDS ou ARC; lesões gastrontestinais; distúrbios cognitivos; distúrbios deretirada; distúrbios de rim e distúrbios em resposta imune celular.

A presente invenção, além do mais, se refere a um sal de peptí-deo de BPC ou a uma composição farmacêutica ou de diagnóstico de acor-do com o exposto acima em que a fórmula geral (II) éXaa Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa (II).

A presente invenção se refere em particular a um sal de peptí-deo de BPC ou a uma composição farmacêutica ou de diagnóstico compre-endendo um sal de um peptídeo de BPC de acordo com o exposto acima dafórmula geral (I) em que o peptídeo é selecionado do grupo que consisteem:

Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Vai;Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Gly Leu Val(também chamado BPC157);

Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Vai;Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Vai;Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Ala Gly Leu Vai;Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala;Asp Pro Pro Pro Ile Arg Pro Ala Asp;Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp;Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Glu Vai;Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Aspe

Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asn.

Estes peptídeos são conhecidos da Wo 94/11394 e WO93/24521, cujos conteúdos são incorporados na presente revelação comrelação à preparação e ao uso dos peptídeos de BPC.

Além do mais, os peptídeos podem estar ligados a outras por-ções funcionais e/ou estruturais tais como carbohidratos, gorduras, proteí-nas ou peptídeos, anticorpos, receptores, hormônios, substâncias citotóxi-cas, substâncias marcadoras, corantes, rótulos radioativos, agentes imuno-moduladores, drogas, veículos, substâncias de sinalização alvos etc.

Adicionalmente, a invenção se refere aos sais de peptídeo deBPC e a composições acima mencionados em que o peptídeo está em for-ma ciclizada ou linear, em particular, ciclizada por uma ligação de amidaentre o primeiro e o último resíduo de aminoácido.

A invenção agora será explicada em mais detalhes por meio deexemplos ilustrativos e as figuras anexas. As figuras mostram:

A figura 1 mostra o espectro de IV de NaBPCI 57.

A figura 2 mostra o espectro de IV de Na2BPCI 57.

A figura 3 mostra o espectro de IV do sal de dicésio de BPC157(Cs2BPCI 57).

A figura 4 mostra o espectro de IV do sal de TRIS de BPC157(TRIS-BPC157).

A figura 5 mostra o espectro de IV do sal de di-TRIS de BPC157((TRIS)2BPCI 57).

A figura 6 mostra o espectro de IV do sal de 2-aminopropanol deBPC157 (2-AMP-BPC157).

A figura 7 mostra o espectro de IV do sal de trietanolamina deBPC157 (TEAM-BPC157).

EXEMPLO 1: Preparação do sal de monossódio de BPC157 (NaBPC157).0,5 g (0,35 mmol) de um pentadecapeptídeo com a seqüência Gly Glu ProPro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Gly Leu Val (BPC157) foi dissolvidoem 10 ml de água contendo 29,6 mg de hidrogenocarbonato de sódio (0,35mmol), filtrado estéril através de um filtro de 0,2 μ e foi seco por secagempor congelamento para dar 0,48 g de um sólido quase branco.

Pureza do sal obtido: 99,4% (HPLC).

Espectro de massa (FAB): 1419, íons superiores a 1441 (M+Na+).A análise de aminoácido do sal de peptídeo obtido depois de 72 horas dehidrólise com HCI a 6 N em um tubo selado a 110°C deu valores correspon-dentes à composição: 3Gly, 4Pro, 2Ala, 2Asp, Glu, Leu, Vai, Lys.Espectro de IV (KBr): Figura 1,

Espectro de UV (H 20): Xmax=I 90 nm, nenhuma outra máxima.Ponto de fusão: 288-290°C (decomposição).

EXEMPLO 2: Preparação do sal de dissódio de BPC157 (Na2BPCI57)0,5 g (0,35 mmol) BPC157 foi dissolvido em 1 0 ml de etanol. 1,4 ml de 0,5mol/L de hidróxido de sódio metanólico foi adicionado enquanto se agitandomoderadamente. Esta solução foi filtrada estéril através de um filtro de 0,2 μe foi lentamente adicionada a um dietil éter (50 ml). O sólido branco separa-do foi filtrado e foi lavado com dietil éter para dar 0,52 g do sal de dissódio.Pureza do sal obtido: 99,4% (HPLC).

Espectro de massa (FAB): 1419, íons superiores a 1441 (M+Na+), 1464(M+Na2+).

A análise de aminoácido do sal de peptídeo obtido correspondeà composição: 3Gly, 4Pro, 2Ala, 2Asp, Glu, Leu, Vai, Lys.

Espectro de IV (KBr): Figura 2,

Espectro de UV (H2O): Xmax=I 90 nm, nenhuma outra máxima.

Ponto de fusão: 275-277°C.

EXEMPLO 3: Preparação do sal de dicésio de BPC157 (Cs2BPCI 57)

0,5 g (0,35 mmol) BPC157 foi dissolvido em 8 ml de água con-tendo 114 mg carbonato de césio e (0,70 mmol), foi filtrado através de umfiltro de 0,2 μ e foi Iiofilizado para dar 0,55 g de um sólido quase branco.Pureza do sal obtido: 99,3% (HPLC).

Espectro de massa (FAB): 1419, íons superiores a 1551 (M+Cs+), 1684(M+Cs2+).

A análise de aminoácido do sal de peptídeo obtido correspondeà composição: 3Gly, 4Pro, 2Ala, 2Asp, Glu, Leu, Vai, Lys.

Espectro de IV (KBr): Figura 3.

Espectro de UV (H2O): Xmax=I 90 nm.

Ponto de fusão: 268-C

EXEMPLO 4: Preparação do sal de TRIS de BPC157 (TRIS-BPC157)0,5 g (0,35 mmol) BPC157 foi dissolvido em 10 ml de metanol contendo 42,6mg (0,35 mmol) de tris-(hidroximetill)aminometano (TRIS), foi filtrado estérilatravés de um filtro de 0,2 μ e foi seco por evaporação de metanol em umvácuo a 40°C para obter 0,56 g de sólido branco.

Pureza do sal obtido: 99,5% (HPLC)Espectro de massa (FAB): 1419 (MH+)

A análise de aminoácido do sal de peptídeo obtido correspondeà composição: 3Gly, 4Pro, 2Ala, 2Asp, Glu, Leu, Val1 Lys.

Espectro de IV (KBr): Figura 4.Espectro de UV (H2O): Xmax=l90 nm.Ponto de fusão: 250-C (decomposição).

EXEMPLO 5: Preparação do sal de di-TRIS de BPC157 ((TRIS)2BPCi 57)

O composto foi preparado de acordo com o procedimento des-crito no exemplo 1, com a exceção que 85,2 mg (0,70 mmol) de TRIS foiusado.

Pureza do sal obtido: 99,5% (HPLC).Espectro de massa (FAB): 1419 (MH+)

A análise de aminoácido do sal de peptídeo obtido correspondeà composição: 3Gly, 4Pro, 2Ala, 2Asp, Glu, Leu, Vai, Lys.

Espectro de IV (KBr): Figura 5,Espectro de UV (H2O): Xmax=I 90 nm.Ponto de fusão: 188-193°C.

EXEMPLO 6: Preparação do sal de 2-aminopropanol de BPC157 (2-AMP-BPC157)

O composto foi preparado de acordo com o procedimento des-crito no exemplo 1.2-aminopropanol (2-AMP) foi usado como uma base.

Pureza do sal obtido: 96,6% (HPLC)Espectro de massa (FAB): 1419 (MH+).

A análise de aminoácido do sal de peptídeo obtido correspondeà composição: 3Gly, 4Pro, 2Ala, 2Asp, Glu, Leu, Vai, Lys.

Espectro de IV (KBr): Figura 6,Espectro de UV (H2O): Xmax= 190 nm.Ponto de fusão: 158°C (decomposição ).EXEMPLO 7: Preparação do sal de trietanolamina de BPC157 (TEAM-BPC157)

O composto foi preparado de acordo com o procedimento des-crito no exemplo 1. Trietanolamina (TEAM) foi usada como uma base.

Pureza do sal obtido: 99,2% (HPLC).

Espectro de massa (FAB): 1419 (MH+)

A análise de aminoácido do sal de peptídeo obtido correspondeà composição: 3Gly, 4Pro, 2 Ala, 2Asp, Glu1 Leu, Vai, Lys.

Espectro de IV (KBr): Figura 7.

Espectro de UV (H2O): Xmax=I 90 nm

Ponto de fusão: 202-205°C.

EXEMPLO 8: Preparação das tabelas contendo TRIS-BPC157Composição mg/comprimido

<table>table see original document page 15</column></row><table>

TRIS-BPC157 (0,5 mg) e trehalose (20 mg) foram dissolvidosem 1 ml de água e foram secos por evaporação. Depois da secagem, o re-síduo bruto foi misturado com os outros ingredientes para se preparar oscomprimidos.

EXEMPLO 9: Preparação de comprimidos contendo NaBPCI 57.<table>table see original document page 16</column></row><table>

NaBPCI57 (0,5 mg) e trehalose (60 mg) foram dissolvidos em 1ml de água e foram secos por evaporação do solvente. O resíduo bruto foimisturado com os outros ingredientes para se preparar as cápsulas.

EXEMPLO 10: Preparação de uma solução contendo NaBPCI 57.

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EXEMPLO 11: Preparação de um creme contendo TRIS-BPC157.

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EXEMPLO 12: Teste de Estabilidade

A estabilidade dos sais de peptídeo de BPC foi testada por in-cubação dos sais por 76 e 120 dias a 40°C. A concentração dos sais depeptídeo de BPC em uma solução aquosa foi de 0,2% (p/v). A estabilidadefoi medida usando-se o método de HPLC: Kromasil de coluna 100, 5 μ, 150χ 4,6 mm, ácido trifluoroacético a 0,1% de fase móvel em água/acetonitrila(de O a 50% de volume), eluição de gradiente em 25 minutos, fluxo 1 ml/min,detecção: UV a 214 nm.

Para a comparação, o peptídeo de BPC livre e seu monoacetatoforam usados.

Tabela 1. A estabilidade dos sais de peptídeo de BPC a 40°C nos dias 0, 76e 120; ensaio em % de área (HPLC).

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Os dados apresentados nesta tabela claramente demonstram aestabilidade aumentada dos sais de peptídeo de BPC da presente invençãoem contraste com o peptídeo de BPC livre ou seu monoacetato. Além domais, provavelmente devido ao valor de pH alto da solução de peptídeo deBPC, a injeção destas soluções não causa qualquer dor ou necrose.

Em uma outra experiência separada, uma melhora adicional daestabilidade dos sais de peptídeo de BPC da presente invenção em formabruta e em soluções foi observada depois da adição de trehalose. Portanto,a adição de trehalose como um aditivo farmaceuticamente aceitável para apreparação de uma composição farmacêutica, em particular, na forma decomprimidos ou de cápsulas, é um outro aspecto importante da presente in-venção.

Os seguintes exemplos descrevem experiências que demons-tram as atividades farmacêuticas dos sais de peptídeo de BPC da presenteinvenção. Estas experiências foram feitas usando-se modelos diferentescomuns "in vitro" e "in vivo". Para as experiências, o sal de monossódio depeptídeo de BPC 157 foi usado (abrev: NaBPCI 57), a não ser que de outramaneira especificado. Ratos Wistar machos, 250 - 280 g de peso de corpo,foram usados em todas as experiências, a não ser que de outra maneira es-pecificado.

EXEMPLO 13: Sistema NO

Introdução:

Funções de óxido nítrico (NO) tanto como uma molécula de si-nalização em células endoteliais e nervosas quanto como uma molécula as-sassina ativada por células imune. Investigações recentes demonstram queela pode ser usada como um medicamento por inalação. Em geral, ou porexcesso ou por diminuição, NO parece causar ou contribuir para uma varie-dade de distúrbios, em particular, hipertensão, angina, impotência, choquecirculatório, choque séptico, acidente vascular cerebral, inflamação, síndro-mes de sofrimento respiratório, hipertensão pulmonar, adesão e agregaçãode plaquetas e de leucócitos, diabetes, hipotensão e doença de Parkinson.

Materiais e Métodos:

Alguns dos efeitos de NaBPCI57 (10 μg ou 10 ng/kg) foram de-safiados em ratos, tais como a atividade salutar contra lesões gástricas eatividade de NaBPCI57's com relação a manutenção de pressão de san-gue. As lesões foram obtidas por uso de 1 hora de tratamento de etanol(96%, i.g. (intragastricamente)). NaBPCI 57 foi simultaneamente aplicado(i.p. (intraperitonalmente)). Na experiência de manutenção de pressão desangue, NaBPCI57 foi dado intravenosamente (i.v.).Também estudada foi a aplicação combinada de metiléster deNG-nitro-L-arginina (L-NAME) (5 mg/kg i.v.), um inibidor competitivo de gera-ção de oxido nítrico (NO) no endotélio e a L-arginina precursora de NO (200mg/kg i.v.) (D-arginina foi ineficaz). Nos ensaios de lesão gástrica, o agen-tes de NO foram dados 5 minutos antes da lesão de etanol e o tratamentocom NaBPCI 57.

Resultados:

No modelo de etanol, NaBPCI57 dado sozinho tem um efeitoanti-úlcera como fez L-arginina. NaBPCI57 preveniu as lesões gástricasseveras em outras circunstâncias seriam observadas em ratos de controletratados com etanol. L-NAME não tinha nenhum efeito. L-NAME totalmenteaboliu a atividade de L-arginina, mas apenas atenuou a atividade deNaBPCI 57. Depois da aplicação de uma combinação de L-NAME + L-arginina, a atividade de NaBPCI57 foi adicionalmente diminuída.

Em pesquisas de pressão de sangue, NaBPCI 57 (sem efeitosobre valores normais basais) comparado com L-arginina tem tanto umefeito de imitação (diminuiu aumento de pressão de sangue por L-NAME,aplicado profiIaticamente e diminuiu valores de L-NAME já aumentados,dado na hora do aumento de pressão de sangue por L-NAME máximo (istoé, 10 minutos depois de L-NAME)) quanto uma atividade preventiva(diminuição de pressão de sangue moderada induzida por L-arginina foievitada por pré-tratamento com NaBPCI57). Quando NaBPCI57 foi dado10 minutos depois da aplicação da combinação de L-NAME + L-arginina(ainda levou a um aumento de pressão de sangue), seu efeito claro(observado em ratos tratados com L-NAME) desapareceu. In vitro, em mu-cosa gástrica oriunda de homogeneizados de tecido de estômago de rato,NaBPCI 57 dados na mesma dose (100 μΜ) que L-arginina, induziu umaformação comparável de NO. Mas efeito de NaBPCI 57 não poderia ser ini-bido por L-NAME, mesmo com uma dose 10 vezes mais alta (100 vs. 1000 μΜ) do que necessitava para uma inibição de efeito da L-arginina. Por outrolado, síntese de NO foi diminuída quando NaBPCI 57 e L-arginina foramcombinados. Em resumo, NaBPCI 57 poderia interferir com os efeitos de NOtanto na integridade da mucosa gástrica quanto na manutenção de pressãode sangue de um modo particular, especialmente quando combinado com L-arginina, tendo um efeito mais proeminente e/ou particularmente diferentesobre NO.

Por ter um efeito mais proeminente sobre NO do que a L-arginina, NaBPCI 57 poderia evitar os efeitos colaterais associados à for-mação de NO excessiva (o efeito interrompido de L-arginina (por exemplo,hipotensão)). Estes efeitos colaterais foram revertidos em relação a valoresnormais in vivo e formação de NO excessiva foi evitada in vitro. Adicional-mente, as conseqüências negativas da inibição de sistema de NO (porexemplo, prevenção de aumento de pressão de sangue induzida por L-NAME e inversão da hipotensão por L-NAME já estabelecida) foram abolidas.

Com base na similaridade próxima dos ensaios de No em outrostecidos (por exemplo, pulmão, fígado, vasos sangüíneos, etc.) e a diversi-dade dos modelos aplicados (lesões gástricas e manutenção de pressão desangue), os efeito benéficos observados de NaBPCI 57 com relação tanto aformação de NO excessivo quanto a funções de sistema de NO diminuídassão evidentes. Em particular, os sais de peptídeo de BPC da presente in-venção são úteis para o tratamento de hipertensão, angina, impotência,choque circulatório, choque séptico, acidente vascular cerebral, inflamação,síndromes de sofrimento respiratório, hipertensão pulmonar, pancreatite,adesão e agregação de plaquetas e de leucócitos, disfunção endotelial edoença de Parkinson.

EXEMPLO 14: Neurônios Somatossensórios

Introdução:

Neurônios somatossensórios estão em geral envolvidos no con-trole da homeostase, particularmente, na reação aos desafios de homeosta-se. Estes neurônios podem detectar uma ameaça potencial. Os neurôniossão, per se, capazes de imediatamente iniciar providências apropriadaspara aliviar o perigo. Neurônios aferentes vasoativos assim representam umsistema de defesa de primeira linha contra trauma. Em geral, sua capacida-de protetora foi evidenciada pelo dano experimental da pele e da mucosagástrica. Ou disfunções ou hiperfunções estão implicadas em uma varieda-de de distúrbios, particularmente neuropatia sensória congênita, neuropatiasensória causada por diabetes, herpes zoster, neuralgia posterpética, der-matite atópica, cura diminuída de tecido ferido (por exemplo, ferimentos depele persistentes, agravação de lesões de pele induzidas por ácido e forma-ção de lesões de tipo ceratite na córnea), urticária por calor ou por frio ad-quirida, psoríase, penfigóide bolhosa, eczema, fotodermatoses, distúrbiosdas via aérea superior e inferior, hiperreatividade específica e não-específi-ca, rinite vasomotora, asma, artrite crônica e lesões gastrontestinais.

Materiais e Métodos:

Os efeitos gastroprotetores de NaBPCI57 sobre lesões gástri-cas (produzidas em ratos por tratamento de etanol a 96%, tensão de restri-ção e tratamento com indometacina) foram estudados. O envolvimento pos-sível de neurônios sensórios nos efeitos salutares de NaBPCI 57 (10 μg/kg,10 ng/kg i.p.) foi estudados com capsaicina que tem efeitos totalmente dis-tintos sobre neurônios sensórios: administração de alta dose a animaisadultos (125 mg/kg s.c., (subcutaneamente) de três meses de idade) ou ad-ministração (50 mg/kg s.c.) a animais neonatais (seis dias de idade) destróifibras sensórias, enquanto que uma dose baixa (500 μg/kg i.p.) ativa umaliberação de neurotransmissor e efeitos protetores sobre a mucosa.

Resultados:

(i) Na ausência de capsaicina, NaBPCI 57 protegeu a mucosa gástrica con-tra etanol, tensão de restrição e aplicação de indometacina.

(ii) Na presença de doses neurotóxicas de capsaicina, a influência negativade capsaicina sobre tensão de restrição, lesões por indometacina ou etanolconsistentemente afetou a atividade salutar de NaBPCI 57. Proteção deNaBPCI 57 sempre era evidente nos modelos tratados com capsaicina (outratados como adultos ou como neonatais) em todos estes ensaios. Depoisdo tratamento com capsaicina em neonatal, uma abolição completa da gas-troproteção causada por NaBPCI 57 foi observada se NaBPCI 57 fosse apli-cado como um regime de ng único. A proteção de mucosa foi totalmente re-vertida quando a mesma dose foi usada diariamente,(iii) Em combinação com a dose exictatória de capsaicina, a atividade bené-fica de NaBPCI57 é adicionalmente aumentada.

Tomados juntos, estes dados demonstram interação sinérgicacomplexa entre a atividade benéfica de NaBPCI57 e atividade de neurônioaferente sensório peptidérgico. Considerando-se a similaridade próxima dosefeitos de capsaicina em animais e em seres humanos e a experiência des-crita acima, NaBPCI 57 pode ser usado para o tratamento de distúrbiosmencionados acima.

EXEMPLO 15: Proteção de EndotélioIntrodução:

Sabe-se que essas lesões de endotélio vascular precedem odesenvolvimento de e são um pré-requesito essencial para lesões de órgãototal. Proteção de endotélio poderia reduzir a conseqüência de dano de is-quemia para a integridade de mucosa. Como um modelo útil, a aplicação deMonastral Blue em ratos logo antes da aplicação de um agente necrotizante(por exemplo, etanol intragastricamente aplicado) conhecido por produzirlesões grandes é amplamente aceito.

Materiais e Métodos:

Todos os ratos receberam i.v. Monastral Blue (MB) (SigmaCompany, USA) (1,0 ml/kg em peso) 3 minutos antes do tratamento de eta-nol. Os ratos foram sacrificados 1 minuto depois do tratamento com etanol.NaBPC15t (10,0 μg/kg i.p.) ou solução salina (5,0 ml/kg i.p.) foi dado 1 horaantes do tratamento de etanol. Imediatamente depois do sacrifício, o estô-mago foi removido e as lesões foram avaliadas por observadores imparciais.Seções representativas do estômago e do duodeno foram processadas paraanálises histológicas ulteriores.

A lesão vascular foi avaliada em um período inicial (1 minutodepois do tratamento de etanol) usando-se a técnica de Monastral Blue(MB). A densidade de área da mucosa manchada foi examinada por TEM.Resultados:

Uma forte redução do manchamento com MB foi consistente-mente observada em grupos tratados com NaBPCI57. A similaridade próxi-ma dos modelos usados com condições humanas demonstra o uso deNaBPCI57 para o tratamento de condições relacionadas com distúrbios deendotélio em terapia de ser humano.

EXEMPLO 16: Angiogênese

Introdução:

Angiogênese é de importância crucial para a geração de tecidode granulação e cura de ferimento e/ou de úlcera. Usando-se em geral ummétodo conhecido, propriedades angiogênicas foram estudadas.Materiais e Métodos:

Em cada rato, duas esponjas estéreis (1 cm χ 1 cm χ 0,25 cm (V= 0,25 ml) com as mesmas quantidades de NaBPCI57, (solução de 50 μg,10 μg, 10 ng/ml) ou os agentes de referência, cimetidina (10 mg, 100 mg,500 mg/ml), rantidina (2,5 mg, 25 mg, 250 mg/ml), famotidina (10 mg, 50 mg,100 mg/ml) e sucralfato (1 mg, 5 mg, 10 mg/ml) foram implantados subcuta-neamente na região lombar. As esponjas foram removidas depois de três esete dias. Elas foram então fixadas em formalina e foram processadas paraa avaliação histoquímica e histológica e morfometria. O microscópio usadofoi: Leitz, DIAPLAN: para análise morfométrica, o programa "SFORM" pro-duzido por VAMS, Zagreb, Croatia foi usado.

Resultados:

Tecido de granulação recentemente formado em volta da es-ponja implantada é usado regularmente como uma medida quantitativa vari-ável para reação de hospedeiro sobre um corpo estranho. As experiênciascom ratos sacrificados três dias depois da implantação mostraram os se-guintes: nos grupos de animais tratados com NaBPCI 57, significativamentemais tecido de granulação foi observado em comparação com aquele dosvalores de controle. Resultados similares foram observados naqueles ratostratados com sucralfato em todas as dosagens usadas. Contrário a isto, ne-nhuma diferença entre os valores de controle e o agente analisado foi ob-servado em grupos tratados com todos os três bloqueadores de H2. Nosanimais sacrificados sete dias depois da implantação, aqueles tratados comtodas as três doses de sucralfato e aqueles tratados com a dose mais altade NaBPCI57 (50 μ9) foram significativamente diferentes em comparaçãocom o grupo de controle. Os valores de controle não diferiam significativa-mente entre as duas condições de sacrifício.

Dentro do tecido de granulação recentemente formado, os es-paços endoteliais foram contados. Em relação aos valores de controle (onúmero de espaços endoteliais recentemente formados no grupo de con-trole três dias depois da implantação foi de 7,94±1,23 e sete dias depois daimplantação 14,8±3,12), todas as substâncias usadas levam a valores signi-ficativamente aumentados em ambos os intervalos (o terceiro e o sétimodia).

Além da evidência que várias drogas anti-úlceras compartilhampropriedades angiogênicas, NaBPCI 57 também estimula formação de gra-nulação, como sucralfato. Correspondentemente, NaBPCI57 pode ser usa-do para iniciar e suportar processos de cura, em particular processos decura de ferimento e/ou de úlcera particulares.EXEMPLO 17: InflamaçãoIntrodução:

Agentes antiinflamatórios atualmente usados são usualmenteavaliados em muitos modelos adequados que representam proximamente osdistúrbios de inflamação crônicas e/ou agudas em seres humanos. No en-tanto, lesões gastrontestinais severas aparecem como um efeito principalcolateral destes agentes.

Uma atividade analgética e antiinflamatória aguda foi observadapara NaBPCI 57 (por exemplo, turpentina, carragenina, ácido acético ouMgSO4, testes de apertar o rabo e retorcer (dependente de protaglandina,dependente de não-protaglandina) juntamente com um efeito antipirético(uma diminuição de febre induzida por levedura (4000 mg/kg s.c.)). Conse-qüentemente, seu efeito salutar conhecido sobre lesões gastrontestinais,seu efeito sobre lesões de inflamação crônicas tais como artrite adjuvante eseu efeito como um agente antiinflamatório não-esteroidal em lesões gas-trontestinais induzidas por NSAIAs foram simultaneamente estudados emratos.

Materiais e Métodos:

Em estudos de lesões gastrontestinais (indometacina (30 mg/kgs.c.), asparina (400 mg/kg i.g. e diclofenac (125 mg/kg i.p.)), NaBPCI57 (10μg ou 10 ng/kg i.p.) foi dado regularmente, ou simultaneamente e/ou umahora antes da aplicação da droga (indometacina). Nos estudos de artriteadjuvante (aplicação no rabo de 0,2 ml de adjuvante de Freund's) (14 dias,30 dias, um ano), NaBPC157 (10 μg ou 10 ng/kg i.p.) foi dado como um úni-ca aplicação (em 1 hora ou antes ou após a aplicação de adjuvante deFreund's) ou em um regime de uma vez por dia (0 -14° dia, 14-30° dia e 14°dia-um ano).

Resultados:

Dadojuntamente com os NSAIAs investigados, NaBPC157 con-sistentemente reduziu as lesões em outras circunstâncias seriam proemi-nentes no estômago dos ratos de controle, bem como as lesões no intestinodelgado nos grupos de idometacina. Nos estudos de artrite adjuvante, odesenvolvimento de lesões foi consideravelmente reduzido depois de umaúnica aplicação de NaBPCI 57 e ainda mais atenuado em ratos tratados dia-riamente com NaBPCI57. Como uma terapia de artrite adjuvante já estabe-lecida, o efeito salutar de NaBPCI 57 consistentemente apareceu depois deapenas duas semanas de medicação e era claramente evidente depois deum ano de aplicação. Estes dados demonstram os efeitos protetores e an-tiinflamatórios de NaBPCI 57 sobre a integridade de mucosa.

Sabe-se que esses dois mecanismos distintos, inflamação e hi-persensibilidade retardada, estejam envolvidos na mediação de artrite adju-vante. NaBPCI 57 positivamente afeta ambos. Em relação aos padrões dereferência (isto é, asparina, indometacina), NaBPCI 57 era eficaz em dosesconsideravelmente mais baixas ^g e ng/kg vs. mg/kg). Esta eficácia inicialem prevenção de artrite adjuvante é ainda mais aumentada em uma aplica-ção diária. Doses mais altas (10 μg/kg) era eficaz ou depois de um regimeúnico ou um regime diário, enquanto que dosagem mais baixa (10 ng/kg),anteriormente ineficaz dada como uma única aplicação, se torna eficazquando aplicada como um regime diário. Esta constatação, em combinaçãocom o efeito terapêutico de NaBPCI 57 sobre artrite totalmente estabeleci-da, evidencia uma aplicação útil durante o curso total de artrite adjuvante. Aeficácia observada de NaBPCI 57 em artrite adjuvante (efeito profiláti-co/terapêutico, atrite adjuvante não-estabelecida/estabelecida) poderia nãoser observada com os agentes terapêuticos atualmente usados. Glucocorti-cóides são eficazes em prevenção de artrite adjuvante quando aplicadosdiariamente, mas não em tratamento curto. Imunossupressores (em dosealta) e analgéticos não-esteróidais são eficazes apenas no pré-tratamentoou pós-tratamento respectivamente.

Assim, com base na similaridade próxima entre o modelo usadoe os distúrbios humanos correspondentes, é evidente que NaBPCI57 comsuas propriedades protetoras de mucosa pode ser usado para o tratamentode condições relacionadas com inflamação aguda e artrite crônica. Adicio-nalmente, NaBPCI 57 pode ser usado para o tratamento de distúrbios rela-cionadas com o tipo retardado de distúrbios de hipersensibilidade e lesõesgastrontestinais induzidas em várias partes do trato gastrontestinal, parti-cularmente aquelas induzidas por agentes tais como NSAIAs.

EXEMPLO 18: Efeito Limpadorde Radical Livre

Materiais e Métodos:

Os efeitos hepatoprotetores de NaBPCI 57 foram avaliados emcomparação com padrões de referência tais como bromocriptina, amantadi-na e somatostatina em vários modelos experimentais de lesão de fígado emratos: ligação de artéria hepática e de duto biliar por 24 horas, tensão derestrição por 48 horas e administração de CCI4 (um agente de indução deradicais livres). NaBPCI 57 foi administrado ou intragastricamente ou intra-peritonealmente.

Resultados:

NaBPCI 57 significativamente preveniu o desenvolvimento denecrose no fígado ou mudanças graxas em ratos submetidos a ligação deartéria hepática e de duto biliar por 24 horas, tensão de restrição por 48 ho-ras e tratamento com CCI4 (1 ml/kg i.p., sacrificar 48 horas depois disso). Asoutras drogas de referência tinham ou pouco ou nenhum dos efeitos proteto-res nestes modelos. Testes de laboratório quanto a bilirrubina demonstra-ram que SGOT e SGPT totalmente se relacionaram com as constataçõesmacro/microscópicas. Assim, NaBPCI57 pode ser usado para o tratamentode doenças no fígado. Além disso, mielossupressão causada por irradiaçãoem um modelo reproduzível para o estudo da dinâmica de recuperação ele-mentos hematopoéticos. NaBPCI57 mostra efeitos benéficos sobre danosde medula óssea induzidos por irradiação sub-letal.

Assim, NaBPCI 57 pode ser usado para o tratamento de danosde medula óssea induzidos por irradiação. Considerando-se a relação reco-nhecida em geral de CCI4 com a formação de radical livre e desenvolvi-mento de lesão, os efeito benéficos de NaBPCI 57 parecem também se apli-car a outras lesões induzidas por radical livre, em particular, irradiação.

EXEMPLO 19: Sistema de Catecolaminérgico

Introdução:

As drogas simpatomiméticas de ação indireta, de tipo anfetami-nas, têm propriedades comuns tais como causando tanto liberação de cate-colamina aumentada quanto a inibição de reabsorção de catecolaina(principalmente dopamina) em extremidades de nervo no Sistema NervosoCentral (SNC). Comportamento estereotipado aparece como um resultadoda ativação do sistema dopaminérgico no corpo estriado. Em geral acredita-se que um comportamento de subir anfetamina aumentada seja um resulta-do de regulação para cima de receptor de dopamina estriada após a aplica-ção de haloperidol de antagonista de dopamina. Isto subseqüentementecausa o desenvolvimento de supersensibilidade a anfetamina. A aplicaçãode NaBPCI 57 não afeta o comportamento total ou induz estereótipos.

Material e Métodos:

Os efeitos de NaBPCI 57 sobre os esterótipos de anfetamina deagonista de dopamina (10 mg/kg i.p.) e sobre a excitablidade foram estuda-dos. NaBPCI 57 foi aplicado como um co-tratamento profilático ou um regi-me salutar terapêutico (10 μρ ou 10 ng/kg i.p.). O comportamento estereoti-pado e excitabilidade foram induzidos em ratos.Resultados:

Uma atenuação marcada ou reversa (medicação no máximo dedistúrbios por anfetamina) tanto de comportamento estereotipado quanto deexcitabilidade aumentada (isto é, contração mais forte e violenta, pulo depânico e fuga) foram regularmente observados.

Além disso, o foco era sobre os efeitos de NaBPCI57 sobre ocomportamento subir aumentado em camundongos. Os camundongos forampré-tratados com haloperidol de antagonista de dopamina (5,0 mg/kg i.p.) esubseqüentemente foram tratados com afetamina (20 mg/kg i.p. desafio 1, 2,4 e 10 dias depois do pré-tratamento de haloperidol), que é usualmene usa-do para o estudo de supersensibilidade de comportamento a um efeito deestimulação de anfetamina. Assim, se a antagonização dos estereótipos deanfetamina apareceria como um resultado de uma atividade de antagonistade dopamina (direta ou indireta) do NaBPCI 57 testado, uma potencializa-ção do efeito crescente de haloperidol sobre comportamento de subir deanfetamina seria esperada. De modo diferente disso, uma contra-ação qua-se completa foi observada quando NaBPCI57 foi co-administrado com ha-loperidol. Juntos, estes dados provêem evidência para uma interação deNaBPCI 57 com o sistema de dopamina. Além do mais, interação deNaBPCI 57 com o sistema de dopamina central foi também mostrado emoutros modelos experimentais (isto é, proteção contra úlceras de tensão).Uma interação com o sistema de dopamina já foi observado para muitospeptídeos conhecidos (neurotensina, CCK1 etc.). Além disso, a aplicação deNaBPCI 57 também reverte distúrbios comportamentais induzidos por LSD(por exemplo, 0,3 mg/kg i.p.). NaBPCI57 tem um efeito modulador sobre osistema de dopamina. Na condição de liberação de dopamina aumentada esíntese induzida por anfetamina, NaBPCI 57 poderia tanto prevenir quantoreverter os distúrbios conseqüentes (isto é, comportamento estereotipado).Similarmente, NaBPCI57 poderia marcadamente atenuar a conseqüênciade receptores de dopamina bloqueados por haloperidol. Isto sugere que oefeito modulador de NaBPCI 57 envolve também -Jma substituição do siste-ma de dopamina em outra circunstância seria proeminente insuficiente. Istoevita a supersensibilidade subseqüente dos receptores de dopamina e osdistúrbios de anfetamina aumentados.

Assim, NaBPCI 57 é um agente útil para o tratamento de esqui-zofrenia, efeitos de desafio de anfetamina (psicose de forma de esquizofre-nia) e abuso de droga.

EXEMPLO 20: Tensão

Introdução:

Tensão é definida como um evento não-específico levando alesões em vários órgãos. A resposta a tensão é definida como uma respostadirecionada contra a vários eventos nocivos. Um dos modelos de tensão emanimal mais freqüentemente empregado é o modelo de tensão de restriçãoque leva a lesões gástricas por tensão severas em ratos. Outros órgãos po-deriam também ser afetados.

Materiais. Métodos e Resultados:

Aplicado em uma dose de 10 μg ou 10 ng/kg em peso, i.p. oui.g. 1 hora antes da indução de tensão, NaBPCI 57 fortemente evitou o des-envolvimento em outra circunstância seria inevitável de lesões gástricas se-veras. Se o tempo entre a aplicação de agentes de redução de tensão e in-dução de tensão (no sequinte texto chamado de "período") é prolongado, osagentes antiúlcera padrão se tornam praticamente ineficaz, fortemente emcontraste com a eficácia clara do NaBPCI57 testado. NaBPCI57 mantevesua atividade salutar mesmo depois de um período prolongado de 48 horas.

A proteção conferida por NaBPCI57 inclui a atenuação de lesões em outracircunstância aparecendo em outros órgãos (por exemplo, fígado, glândulaadrenal, rim, testículo, coração, pâncreas, baço). Assim, uma vez que os pa-râmetros de tensão em geral conhecidos são aparentemente menos pertur-bados (isto é, involução timolimpático e hipertrofia cortical das grândulasadrenais), é evidente que NaBPCI 57 poderia ser aplicado em várias condi-ções de tensão. NaBPCI 57 tem um impacto salutar positivo sobre váriaslesões aparecendo em órgãos diferentes regularmente ligados com patolo-gia de tensão não-específica. Considerando-se a mesma cadeia de eventosem seres humanos que os modelos usados, isto é ainda mais enfatizadouma vez que NaBPC157 tem um efeito salutar ainda se aplicado quando apatologia de tensão já está avançada (por exemplo, 24 horas depois da in-dução de tensão).

EXEMPLO 21: Demonstração de um Efeito Citoprotetor

Introdução:

Citoproteção foi originariamente definida como uma propriedadepara defender as células contra agentes nocivos diferentes, um efeito des-tacado em mucosa gástrica como um efeito independente de ácido gástrico.Mais tarde, esta definição foi extendida para incluir efeitos protetores es-sencialmente similares fora do trato gastrontestinal que envolve as lesõesde órgãos diferentes (citoproteção-organoproteção). Os efeitos citoproteto-res possíveis da aplicação de NaBPC157 foram estudados com base emseu efeito sobre o modelo de Robert inicial para uma triagem de agente ci-toprotetor das lesões gástricas induzidas por etanol.

Materiais. Métodos e Resultados:

NaBPC157 (10 μg ou 10 ng/kg i.p.) tem um efeito profilático(aplicado ou 1 hora antes ou simultaneamente com etanol a 96% (1 ml/rato,i.g.)) e um efeito salutar (aplicado 1 hora depois de etanol no máximo dodesenvolvimento da lesão).

Para criar um ambiente livre de ácido para estudos de citoprote-ção, uma gastrectomia total foi feita 24 horas antes do procedimento ulcero-gênico. Na ausência de estômago e ácido gástrico, os efeitos de dano decisteamina (400 mg/kg s.c., sacrificar 24 horas depois disso), até agora ima-ginado como sendo um ulcerogênio duodenal relacionado com ácido, e osefeitos citoprotetores de NaBPCI57 (10 μg ou 10 ng/kg i.p.) foram ulterior-mente desafiados em comparação com agentes de referência (cimetidina(50), ranitidina (10), omeprazol (10), bromocriptina (10) e atropina (10)(valores dados em mg/kg i.p. 1 hora antes da cisteamina)) conhecida tam-bém por ser citoprotetora. Em ratos simples com um estômago intacto, todasas substâncias aplicadas tinham um forte efeito benéfico. Em animais gas-trectomizados a aplicação dos agentes investigados (isto é, NaBPCI 57 ouos agentes de referência antes da cisteamina) significativamente evitam odesenvolvimento de lesão duodenal em outra circunstância seria severo ob-servado nos ratos de cisteamina gastrectomizados de controle. Nos gruposnão-tratados com citeamina, nem lesões foram observadas (laparotomia egastrectomia apenas 24 horas ou 48 horas de período pós-cirúrgico) nem foiobservada potencialização de lesão em animais de Iaparatomizados trata-dos com citeamina. Estas constatações (efeito de dano igual de cisteamina,proteção igual de NaBPCI 57 e agentes de referência em ratos gastrectomi-zados com estômago intacto e sem estômago, o efeito protetor ou dano nãoestá relacionado com secreção de ácido gástrico) são indicativos de umefeito citoprotetor. Uma analogia (lesões não realcionadas com ácido gástri-co) entre as lesões gástricas (por exemplo, etanol) e as lesões duodenaisde cisteamina é claramente sugerida. Uma "capacidade citoprotetora" alta,evidentemente independente de ácido, comum para todos os agentes testa-dos mas claramente mais proeminente para NaBPCI57 é evidente.

Uma vez que NaBPCI57 era eficaz em doses muito mais baixasdo que outros agentes (isto é, μg ou ng/kg vs. mg/kg), sua eficácia (e apli-cação terapêutica) pode ser extendida a lesões de órgãos diferentes. Isto é,devido ao fato de que a eficácia de outros agentes em outros órgãos é tam-bém sugerida devido a seus efeitos "citoprotetores" (por exemplo, somatos-tatina: lesões da glândula adrenal, pâncreas, fígado, pulmão e trato gas-trontestinal).

EXEMPLO 22: Demonstração de um Efeito Organoprotetor

Introdução:

Para uma extensão útil do efeito "citoprotetor" em um efeito"organoprotetor" a investigação de proteção de endotélio é em geral aceita.Como uma clara indicação, as pesquisas de Monastral Blue em mucosa deratos gástrica danificada por etanol são amplamente reconhecidas devido àcapacidade de Monastral Blue de se ligar a endotélio danificado.Materiais e Métodos:

Todos os ratos receberam Monoastral Blue (MB) (Sigma Com-pany, USA) (1,0 ml/kg em peso, i.v.) 3 minutos antes do etanol e os animaisforam sacrificados 1 minuto depois do tratamento com etanol. NaBPCI57(10,0 μg/kg i.p.) ou solução salina (5,0 ml/kg i.p.) foi dado 1 hora antes doetanol. Imediatamente após o sacrifício o estômago foi removido e as lesõesforam avaliadas por observadores imparciais como descrito antes. Seçõesrepresentativas do estômago e do duodeno foram processadas para análisehistológica ulterior. Lesão vascular no período inicial (1 minuto depois dotratamento com etanol) foi avaliada usando-se a técnica de Monastral Blue.

A densidade de área de mucosa manchada foi examinada por TEM.

Resultados:

Uma forte redução de manchamento por MB foi consistente-mente observada em grupos tratados com NaBPCI 57. Além do mais, ne-nhum dos efeitos negativos foram observados com a aplicação deNaBPCI57. Nenhuma influência sobre parâmetros basais diferentes e ne-nhuma toxicidade foram observadas, apesar da aplicação de altas dosagens(por exemplo, g/kg em peso, i.p.).

Considerando-se a presença difundida de tecido vascular en-dotelial no corpo e a função crucial de proteção de endotélio para efeitosorganoprotetores, NaBPCI 57 pode ser usado como um agente organopro-tetor em lesões de órgão diferentes.

EXEMPLO 23: Pancreatite Aguda

Materiais e Métodos:

NaBPCI 57 foi testado em ratos como um agente protetor ou te-rapêutico para pacreatite aguda (induzida por ligação de duto biliar). Aomesmo tempo, a influência de NaBPCI 57 sobre lesões duodenais e gástri-cas concomitantemente desenvolvidas foi investigada.

NaBPCI57 (10 μg ou 10 ng/kg em peso, i.p., i.g.) foi dado profi-Iaticamente 1 hora antes da ligação, enquanto que a terapia foi conduzidapor uma aplicação diária 1 dia depois da ligação (última aplicação 24 horasantes do sacrifício). O efeito foi investigado em intervalos diários até o fimdo quinto dia de pós-ligação.

Resultados:

Na aplicação de pré-tratamento, uma forte proteção pancreáticafoi obtida. Quando aplicado na condição da pancreatite aguda servera jáestabelecida, um efeito salutar óbvio foi consistentemente observado. Avali-ação da aparência da necrose, edema, neutrófilos e mononucleares, con-sistentemente menos necrose, edema e neutrófilos, mas mais mononuclea-res foram encontrados em ratos tratados com NaBPCI 57. Em pesquisasdos valores de amilase no soro em relação aos dados de controle, um au-mento marcadamente mais baixo (aplicação de pré-tratamento comNaBPCI 57) bem como um dentrimento dos valores já aumentados(aplicação de terapia com NaBPCI 57) foi observado. Juntamente com seuefeito de benefício sobre pancreatite, uma influência positiva de NaBPCI 57sobre lesão gástrica e duodenal naturalmente em ratos ligados a duto biliarfoi observada tanto em aplicações pré- quanto pós-tratamento. Tomadojunto, NaBPCI 57 pode ser usado para o tratamento de pancreatite agudacom um impacto positivo adicional sobre a patologia gastroduodenal con-comitante.

EXEMPLO 24: Efeitos sobre Cardiotoxicidade

Materiais e Métodos:

As experiências foram conduzidas em ratos Albino Wistar e co-baias Hartley. Cardiotoxicidade foi induzida por administração de uma solu-ção de cloreto de bário (10 mg/kg em peso), desipramina (10 mg/kg), digi-tais (dose total 6,5 mg/kg) e isoprenalina (15 mg/kg) através de uma cânulavenosa de jugular. Além disso, doxorubicina foi aplicada em múltiplas dosa-gens (3 mg/kg s.c., uma vez por semana por 13 semandas em dosagensúnicas (7 mg/kg, i.v.) e cardiomiopatia provocada. Cardiotoxicidade foi tam-bém induzida por uma tensão de imobilização como dano de miocardio far-macológica. NaBPCI 57 foi administrado como indicado abaixo:

1. Cloreto de bárioa) pré-tratamento (uma hora antes): NaBPCI 57 50 μ9/Ι<9, 1G e 10ng/kg, intraperiotenealmente;

b) pós-tratamento (depois de 60 segundos): NaBPCI 57 10 e 10ng/kg, intravenosamente;

2. Desipramina: NaBPCI 57 50 μg/kg e 50 ng/kg, intraperitonealmente umahora antes;

3. Digitais: NaBPCI57 50 e 50 ng/kg, intravenosamente em intervalosde 15 minutos;

4. Isoprenalina: NaBPCI 57 50 μg/kg e 50 ng/kg, intravenosamente em in-tervalos de 15 minutos

5. Tensão de imobilização: NaBPCI57 10 μg/kg e 10 ng/kg, intraperitoneal-mente um hora antes e imediatamente após a fixação, e em 24 e 48 horasde imobilização;

6. (a) toxicidade de doxorubicina crônica: NaBPCI57 10 μg/kg e 10 ng/kg,intraperitonealmente concomitantemente com doxorubicina;

(b) toxicidade de doxorubicina aguda: NaBPCI57 10 μg/kg e 10 ng/k, intra-peritonealmente uma hora antes de doxorubina.

Em modelos de arritmia, um eletrocardiograma foi continua-mente registrado em animais anestesiados. A cada 15 segundos ou quandodistúrbios de ritmo ocorreram, registros prolongados foram feitos em 50mm/s ou 100 mm/s. Em outros modelos, um eletrocardiograma foi registradouma vez ou repetidamente com animais sumariamente anestesiados comuma velocidade de papel de 50 mm/s em registros prolongados. Toxicidadede doxorubicina foi avaliada por exame microscópico ou macrocóspico docoração e outros órgãos por análises bioquímicas. Um procedimento similarfoi aplicado nos testes de tensão de imobilização.Resultados:

Um efeito antiarrítmico de NaBPCI 57 no modelo de arritmiasinduzidas por cloreto de bário foi observado. Nas pesquisas de pré-tratamento, NaBPCI 57 retardou e evitou a ocorrência de arritmia e reduziue/ou evitou isquemia. Nas pesquisas pós-tratamento, NaBPCI57 causouconversão rápida em ritmo sinusal e evitou recorrência de arritmia.NaBPCI 57 totalmente evitou diminuição rápida em taxa de co-ração e em distúrbios de condução induzidos por desipramina (prolongaçãode PQ e aumento de QRS). NaBPCI 57 também evitou taquicardia ventricu-Iar associada ao efeito pró-arrítmico de desipramina e bloqueio atrioventri-cular severo. O efeito é dependente de dose.

Além do mais, NaBPCI57 tem efeitos seletivos sobre cardiotoxi-cidade induzida por digital. NaBPCI 57 exibiu efeitos positivos na diminuiçãorápida em taxa de coração e distúrbios de ritmo (extrassístole ventricular,taquicardia ventricular e bloqueio atrioventricular) por meio de evitar ou ate-nuá-los. O efeito de NaBPCI 57 em doses de ng sobre a diminuição de con-dução induzida por uma dose tóxica de digital não era significativa. O efeitofoi mais pronunciado com doses de micrograma de NaBPCI 57.

NaBPCI 57 claramente evitou isquemia e infarto de miocardio. Oefeito foi mais pronunciado com dosagens de micrograma. Uma única admi-nistração intraperitoneal de NaBPCI 57 na forma de um pré-tratamento re-sultou em prevenção de isquemia eletrocardiograficamente demonstrada ede dano de miocardio histológico durante o teste de tensão de !mobilização.Administração pós-tratamento de NaBPCI 57 em mudanças eletrocardiogra-ficamente já evidentes também alivia isquemia. Dosagens de micrograma deNaBPCI 57 resultou em um aumento em voltagem do complexo de QRS,particularmente em uma aplicação de pré-tratamento.

A aplicação de NaBPCI 57 leva a contatações patomorfológicassignificativamente reduzidas de cardiomiopatia de antraciclina (dano severode miócitos e paredes de vaso, e vacuolização) depois de única, em exten-são maior, depois de única e maior extensão, depois de múltipla administra-ção de doxorubicina. A atividade de LDH é significativamente diminuída,apesar de valores absolutos marcadamente elevados.

Sumarizando-se, NaBPCI 57 mostra-se útil como um agentecardioprotetor, antianginal e antiarrítmico.

EXEMPLO 25: Atividade AntidepressoraMateriais e Métodos:

Vários antidepressores têm atividade antiúlcera e os modeloscorrentemente usados em pesquisa de úlcera e de depressão partilham umgrau considerável de similaridade. Portanto, a possibilidade que distúrbiosde depressão poderia ser eficazmente influenciada por um agente anti-úlcera primário com atividade cito-/organo-protetora tal como NaBPCI 57 foiinvestigada em dois ensaios de depressão de rato: o teste de natação for-çada (um procedimento de Porsolt) e o método de tensão imprevisível(depois de cinco dias de protocolo de tensão imprevisível, aplicação de dro-ga uma vez diariamente durante o procedimento de tensão e uma avaliaçãode teste de imobilidade em campo aberto no quarto e sexto dias de medica-ção).

Resultados:

No teste de natação forçada uma redução do tempo de imobili-dade nos ratos tratados com NaBPC157 (10 μg, 10 ng, 10 pg/kg, i.p.) cor-respondiam à atividade de animais tratados com 15 mg ou 40 mg (i.p.) doantidepressor convencional, imipramina ou nialamida, respectivamente.Uma piora ulterior de condições experimentais em procedimento de tensãoimprevisível crônico levam a uma falha de atividade de imipramina (30 mg),enquanto que NaBPCI 57 (10 μg, 10 ng) dependentemente de dose aperfei-çoou a mobilidade em ratos cronicamente estressados.

EXEMPLO 26: Modelos de Doença de Parkinson

Materiais e Métodos:

Agentes Parkinsongênicos, 1-metil-4-fenil-1, 2, 3, 6-tetrahidropiridina (MPTP) (conhecido por detruir o sistema nigroestriatal dedopamina por formação de radicais livres) (30,0 mg/kg em peso, i.p.) umavez diariamente por 6 dias e depois de 4 dias uma vez 50,0 mg/kg em peso,i.p.) ou reserpina (um depletor de vesículas de catecolamina) (5,0 mg/kg empeso, i.p.) foram aplicados. NaBPCI57 (1,50 μg ou 15,0 ng/kg em peso, i.p.)foi aplicado 15 minutos antes ou alternativamente quinze minutos depois decada administração de MPTP. Em pesquisas de reserpina, NaBPCI 57 (10,0μρ ou 10,0 ng/kg em peso, i.p.) foi dado ou 15 minutos antes da reserpinaou na catepsia completa já estabelecida 24 horas depois disso.

Resultados:

NaBPCI 57 fortemente melhorou a orientação somatossensóriadiminuída por MPTP e reduziu a hiperatividade induzida por MPTP. Além domais, NaBPCI 57 reduziu anormalidades motoras de MPTP (tremor, acine-sia, catalepsia, em outras circunstâncias seriam proeminentes em controlede solução salina) levando a uma abolição quase completa do curso nor-malmente letal de tratamento com MPTP em controles. Em experiências dereserfina, NaBPC 157 prevenir fortemente o desenvolvimento de, por outromaneira, catalepsia muito prolminente. Quando aplicado 24 horas depoisdisso, NaBPCI 57 reverteu a catalepsia estabelecida. Sustentantemente,uma redução de hipotermia por reserpina (pré-tratamento com NaBPCI57) ereversão de queda de temperatura ulteriormente proeminente (pós-tratamento com NaBPCI 57) foram consistentemente observadas.

Ambos os modelos de animais comuns usados acima são co-nhecidos como sendo indicativos para distúrbios de ser humano e sua tera-pia. Devido ao fato de que uma alta eficácia foi demonstrada em pesquisasde pré- e pós-tratamento sob regimes de μg e ng, NaBPCI 57 parece serbem adequado para o uso no tratamento de doença de Parkinson e patolo-gias de tipo de doença de Parkinson.

Além do mais, o efeito observado em hipotermia por reserpinapermite a conclusão que NaBPCI 57 é bem adequado para a terapia dedistúrbios de temperatura.

EXEMPLO 27: Efeitos sobre a Cura de Defeitos de Osso

Materiais e Métodos:

O efeito osteogênico de medula óssea e TRIS-BPC157 sobre acura de defeitos ósseos segmentais foi estudado em 42 coelhos por seissemanas pós-operatório. Após indução de lesão (um defeito osteoperiostealde 0,8 cm foi criado no meio de ambos os rádios), as experiências usando-se medula óssea e o TRIS-BPC157 (6 coelhos por grupo) foram realizadascomo se segue: Animais Iesionados tratados com solução salina (2 ml in-tramuscularmente e 2 ml localmente em cada um dos defeitos óssêos) foramusados como controle (grupo 1). No segundo e terceiro grupo cada um dosdefeitos ósseos foi tratado localmente ou com 2 ml de medula óssea autólo-ga (7o dia pós-operatório) ou TRIS-BPC157 (10 μg/kg em peso 7° e 14° diaspós-operativo). Nos grupos quatro, cinco e seis TRIS-BPC157 foi aplicadointramuscularmente (i.m.) ou no 7°, 9°, 14' e 16° dia pós-operativo (10 μg/kgem peso) ou uma vez diariamente no período do 7° - 21° dias pós-operatório(10 μg ou 10 ng/kg em peso). Como um tratamento padrão imediamente de-pois de sua formação, os defeitos ósseos no sétimo grupo foram enchidoscom um enxerto cortical autólogo.

Todos os animais foram sacrificados na sexta semana pós-operatório. Cura de defeito segmentai foi avaliada com radiografias bi-semanalmente e exames histológicos

Resultados:

A comparação paralela de radiografias tomadas em 4 intervalosde tempo (superfície calosa, microfotodensitometria do defeito ósseo) ehistomorfometria quantitativa revelou que medula óssea injetada no defeitoósseo e TRIS-BPC157 aplicado intramuscularmente (particularmente emuma dose diária de 10 μg/kg em peso durante o período de 14 dias) signifi-cativamente melhorou a cura de osso (p<0,001). O efeito corresponde aoefeito do enxerto cortical autólogo.

Considerando-se a relevância clínica deste estudo, medula ós-sea e TRIS-BPC157 (particularmente em dose diária de 10 μg/kg em pesodurante 14 dias) eliciou a cura de defeitos ósseos. Devido a sua administra-ção simples e o baixo risco de complicações, medula óssea autóloga apli-cada localmente e, em particular, substâncias osteógenas administradas in-tramuscularmente tal como TRIS-BPC157, são vantajosas sobre outrosmétodos cirúrgicos mais complexos (isto é, exertos ósseos, exertos ósseosvascularizados, método de llizarov) para o tratamento de cura de danos emseres humanos.

EXEMPLO 28: Efeito sobre a Cura de FerimentoMateriais e Métodos:

NaBPCI57 foi usado a fim de estabelecer sua influência sobrediferentes elementos ligados com o processo de cura. Elementos imagina-dos serem de importância no processo de cura são a formação de tecido degranulação, angiogênese e a produção de colágeno. A influência deNaBPCI57 sobre a formação de tecido de granulação, formação de coláge-no, e angiogênese bem como desenvolvimento de resistência a tração foitestado usando-se três modelos de rato experimentais: 1) Ferimentos incisi-onais na pele 2) Anastomoses de cólon - cólon e 3) anastomoses de esófa-go-duodenal. As espécies foram histologicamente avaliadas quanto a colá-geno, reticulina e vasos sangüínneos usando-se métodos de morfometria econtagem.

Resultados:

Em todas as experiências, diferenças significativas entre ratostratados com NaBPCI 57 e controles foram encontradas. As experiênciasdemonstram uma forte, promoção de envolvimento de NaBPCI57 no pro-cesso de cura. Estes efeitos foram conseguidos por rotas diferentes de apli-cação incluindo aplicação local e intragástrica. Além do mais, a avaliação daresistência a tração consistentemente revelou valores aumentados em ratostratados com NaBPCI 57.

Com base em uma similaridade próxima entre o modelo de ani-mal e os distúrbios de ser humano correspondentes e o alto grau de simila-ridade entre os processos de cura em ratos e em seres humanos,NaBPCI 57 pode ser usado em uma terapia para cura de ferimento em sereshumanos.

EXEMPLO 29: Efeito sobre Distúrbios Respiratórios

Materiais e Métodos:

Cobaias (Hartley, ambos os sexos, 500 - 700 g em peso) completismografia de corpo total, anestesia de uretano (1,5 g/kg i.p.), ventilaçãoartificial sob pressão constante (0,98 kPa), e relaxação da musculatura es-quelética por suxametônio (0,2 mg/kg i.v.) foram usados nas presentes ex-periências. O volume de inflação (mm, média±SD) foi analisado antes e de-pois da aplicação de espasmógenos (histamina, serotonina, acetilcolina,bradiquinina, i.v.) ou NaBPC157 (10 minutos antes da aplicação de espas-mógeno repetido, i.v.).Resultados:

Uma diminuição de volume de inflação induzida por serotonina,

histamina, acetilcolina e bradiquinina foi inibida por NaBPCI 57 (10 μς/Ι^ςem peso, i.v. e/ou 10 ng/kg em peso, i.v.).

Com base no efeito salutar observado de NaBPCI 57 sobrebroncoconstrição por vários espasmógenos e a similiaridade próxima co-nhecida entre o modelo usado e as condições humanas, uma aplicação bemsucedida de NaBPCI57 é evidente no tratamento de vários distúrbios liga-dos com broncoconstrição e/ou distúrbios do trato respiratório.EXEMPLO 30: Efeito sobre Síndrome de Hipertensão PulmonarMateriais e Métodos

As presentes experiências descrevem os efeitos de antagonis-

tas e agonistas de óxido nítrico (NO) e a influência de NaBPCI57 sobre odesenvolvimento de Síndrome de Hipertensão Pulmonar (PHS) e lesões detecido em pintos. Experiências que investigam toxicidade aguda foram con-duzidas. Estas aplicações de dose úncia incluídas de solução salina (1 mli.p.), NaBPCI 57 (10 μg/kg em peso), L-NAME (antagonista de NO/doses 50,100, 150 mg/kg em peso) e L-arginina (agonista de NO/100 mg/kg empeso/com sua combinação (L-NAME + NaBPCI 57, L-NAME + L-arginina)).Exames patofisiológicos do baço, coração, fígado e pulmões e análises he-matológicas foram conduzidos. Além do mais, experiências de toxicidadecrônica foram conduzidas. Os animais foram tratados diariamente durantecinco semanas com L-NAME 10 mg/kg em peso), L-arginina (100 mg/kg empeso), NaBPCI 57 (10 μg/kg em peso) e suas combinações (L-NAME +NaBPCI 57, L-NAME + L-arginina) intraperitonealmente. Sete animais decada grupo incluindo controles (solução salina 1 ml i.p.) foram sacrificados acada semana.Resultados:

A aplicação de L-NAME causou PHS nos pintos tratados. Esteefeito foi evitado pela aplicação simultânea de L-arginina e NaBPCI 57.

Exames patofisiológicos de tanto toxicidade aguda quanto crônica revelaramque L-NAME causou dano severo de tecido (necrose de célula miocardial ehepática, e necrose das células linfóides no baço) enquanto L-arginina pro-vocou predominantemente congestão, edema e hemorragias em todos osórgãos. Análises hematológicas mostraram diminuições de número de Ieu-cócito e hemoglobina significativas nos grupos tratados com L-NAME depintos. Os efeitos de L-NAME foram inibidos sucessivamente pela aplicaçãode L-arginina e NaBPCI57. NaBPCI 57 não causou qualquer dano em teci-do ou em órgão.

Considerando-se a similaridade do modelo de animal usadoacima e os distúrbios de ser humano correspondentes, NaBPCI 57 pode serusado para a terapia de Síndrome de Hipertensão Pulmonar. Além do mais,sua aplicação útil em produção comercial é evidente.

EXEMPLO 31: Hipertensão Experimental

Materiais, Métodos e Resultados:

Em animais hipertensivos (hipertensão de Goldblatt) com doisrins (2K1C) ou com um rim (1K1C) NaBPCI 57 diminuiu pressão de sanguerapidamente (por exemplo, 5 ou 10 minutos após a injeção). Este efeito du-rou 20 minutos em ratos 1K1C ou 12 horas, pelo menos, em animais 2K1C.

O efeito foi repetidamente obtido depois de uma segunda ou terceira aplica-ção 24 - 48 horas depois disso. Similarmente, em ratos alimentados ou comuma dieta com alto teor de frutose (80%) ou com uma dieta com alto teor desal (15%) por um período prolongado, NaBPCI57 marcadamente reduziu osvalores de pressão de sangue em outras circunstâncias estariam continua-mente elevados em relação a valores normais. O efeito terapêutico é delonga duração, e uma tolerância não foi desenvolvida mesmo depois de umperíodo de seis meses. Nenhuma influência de NaBPCI 57 sobre os valoresde pressão de sangue basal foi observada.Além de uma diminuição dos valores de pressão de sangue queem outras circunstâncias estariam elevados, NaBPCI57 também causouuma atenuação marcada ou mesmo abolição das lesões e distúrbios quenormalmente aparecem nos vários órgãos que foram (depois de três sema-nas de um dieta de sal aumentada nos controles): degeneração de hialinamuito severa com hemorragias parenquimatosas proeminentes, degenera-ção das paredes arteriais, vacuolização das células no coração, congestãosevera (especificamente medular) nos adrenais, congestão severa, hemor-ragia parenquimatosa com hematúria no rim e hemossiderose e eritrocitofa-gia no baço. Os vasos foram muito menos danificados nos ratos tratadoscom NaBPCI 57 além de menos vacuolização da parede e ausência de he-morragia. Além do mais, uma clara proteção contra dano fundo foi evidenci-ado consistentemente em ratos tratados com NaBPCI 57.

Usando-se modelos diferentes de hipertensão de animal,NaBPC157, dado como 10 μg ou 10 ng/kg em peso, i.v., i.p., ou i.g., conse-guiu resultados consistentes dentro de regimes diferentes. Considerando-sea similaridade evidente destes modelos com condições humanas corres-pondentes, NaBPCI 57 pode ser usado para o tratamento de hipertensão ede vários danos de órgãos causados por hipertensão.

EXEMPLO 32: Efeito sobre o Tempo de Sangramento

Materiais e Métodos:

O efeito de 2-AMP-BPC157 sobre o tempo de sangramento emcamundongos e ratos (com e sem pré-tratamento com heparina) foi investi-gado em combinação com a atividade in vitro sobre os parâmetros de coa-gulação em sangue de ser humano.

Resultados:

Em condições basais (2-AMP-BPC157, 10 μg, 10 ng10 pg, 1 pg,10 fg/kg em peso, i.p. simultaneamente com corte de rabo) uma forte redu-ção de tempo de sangramento dependente de dose foi consistentementedemonstrada tanto em camundongos quanto em ratos. Em pesquisas depré-tratamento com heparina (100 IU/kg i.p.) (2 horas antes do início desangramento), uma redução proeminente de tempo de sangramento que emoutra circunstância seria fortemente aumentado foi regularmente observadaem animais tratados com 2-AMP-BPC157 com ou 10 μρ ou 10 ng/kg empeso, i.p.. Nenhuma influência (2-AMP-BPC157 em concentração de 10 μg/ml, incubação por 1 hora) sobre os parâmetros de coagulamento em san-5 gue humano foi demonstrada in vitro. Assim, um efeito sobre a camada en-dotelial é sugerido.

Considerando-se a similaridade próxima dos mecanismos desangramento em seres humanos e em animais e a significância amplamentereconhecida dos modelos usados para triagem de agente, 2-AMP-BPC157pode ser usado para o tratamento de coagulação perturbada (por exemplo,heparinização).

EXEMPLO 33: Efeito sobre Diabetes ExperimentaisMateriais. Métodos e Resultados:

Quando dado intraperitonealmente (isto é, 10 μg/kg em peso),NaBPCI 57 demonstrou prevenir o desenvolvimento de aloxano bem comodiabetes induzidas por estreptozotocina em ratos. Uma glucosúria diminuídae menos lesões em forma de ilha foram encontradas durante 14 dias. Naexperiência preliminar, NaBPCI 57 foi também eficaz quando aplicado napresença das lesões de aloxano já estabelecidas por 14 dias. Em experiên-cias ulteriores, os efeitos anti-diabéticos de NaBPCI57 foram ulteriormenteinvestigados com foco particular sobre sua possível atividade quando apli-cado intragastricamente. NaBPCI 57 (dosagem de 10 μg e 10 ng/kg empeso) foi combinado com uma aplicação de aloxano de 300 mg/kg s.c. ou200 mg/kg em peso, s.c., em pré-tratamentos (24 horas ou 1 hora antes daaplicação de aloxano, co- e pós-tratamentos (48 horas após a aplicação dealoxano). Em geral, NaBPCI57 diminuiu os níveis de soro de glicose au-mentados e significativamente aumentou a sobrevivência de animais trata-dos com aloxano (o efeito foi particularmente óbvio em grupos tratados coma dosagem mais alta de aloxano). Interessantemente, além de níveis desoro de glicose aumentados em animais tratados com aloxano, uma aparên-cia exagerada de lesões gástricas foi observada em ratos diabéticos decontrole. Cada um dos regimes de NaBPCI57 significativamente diminuiuseveridade de úlcera apesar das condições de tratamento. Essencialmente,os mesmos resultados foram obtidos em camundongos.

Considerando-se a similaridade entre a patologia humana e osmodelos usados e em vista de seu uso difundido para a triagem de atividadede agente, NaBPCI 57 pode ser usado para o tratamento de diabetes.EXEMPLO 34: Os Efeitos AntinociceptivosMateriais e Métodos:

Os efeitos antinociceptivos de NaBPCI57 foram avaliados emcomparação com padrões de referência de aspirina e morfina em vários mo-delos experimentais de neurotoxicidade e nocicepção indireta/direta: retor-cer (ácido acético/sulfato de magnésio), prender o rabo, placa quente eapli-cação de capsaicina.Resultados:

NaBPCI 57 (administrado ou na faixa de ng ou μg/kg, i.p.) signi-ficativamente reduziu as reações nos testes de retorcer (inflamatório e não-inflamatório, dependente de prostaglandina e independente) e testes deprender o rabo. No teste de placa quente, NaBPCI 57, ao contrário de mor-fina, não tinha nenhum efeito sobre animais normais. Além do mais,NaBPCI57 foi administrado na forma de um pré-tratamento ou uma vez dia-riamente por 14 dias depois da injeção de capsaicina. Nos testes,NaBPCI 57 fortemente reduziu capsaicina-alodinia. Esta redução no efeitode capsaicina não poderia ser obtida quando NaBPCI57 foi aplicado napresença de degeneração de neurônio somatossensória por capsaicina es-tabelecida (aplicação apenas no 14° dia após a capsaicina). Assim, uma vezque a diminuição de somatoneurônio que em outra circunstância seria fatalapós a aplicação de capsaicina poderia totalmente ser evitada com umaaplicação de NaBPCI57 diária, é possível que os efeitos de NaBPCI57 po-deriam ser especificadamente correlacionados com a integridade de neurô-nio somatossensório sensível a capsaicina e sua proteção (isto é, neurôniosaferentes primários tendo fibras de "somata" de pequeno diâmetro e nãomielinadas (C-) ou finamente mielinadas (A-8).Considerando-se que capsaicina induziria essencialmente osmesmos distúrbios tanto em seres humanos quanto em animais, NaBPC157pode ser usado para o tratamento de vários distúrbios de dor bem como emcondições seguidas por diminuição de função de neurônio somatossensório.

EXEMPLO 35: O Efeito sobre Convulsões

Material e Métodos:

Os efeitos de KBPC157 sobre convulsões induzidas por bicucu-lina, picrotoxina, estricnina e isoniazida foram examinados. KBPC157 (100 μg, 10 μg ou 10 ng/kg em peso) foi aplicado (i.p.) simultaneamente ou 15 mi-nutos antes da aplicação dos agentes convulsivos (mg/kg em peso, i.p.) pi-crotoxina (3), estricnina (6, 3 ou 15), bicuculina (2,5) e isoniazida (800 mg).

Resultados:

KBPC157 produziu um efeito anticonvulsivo consistentementepositivo (dose e dependente de tempo) contra todos os convulsivantes.Considerando-se a similaridade dos modelos usados com condições huma-nas, KBPC157 pode ser usado para o tratamento de distúrbios de convul-são.

EXEMPLO 36: Lesão de Coluna Espinhal

Materiais e Métodos:

Lesão de coluna espinhal foi induzida em ratos Albino Wistarmachos por pressão controlada (um clipe vascular Aesulap 0,10 - 0,15 N)sobre a coluna espinhal exposta (no nível de Th12) por 30 segundos. Osanimais foram tratados imediatamente depois da lesão e uma vez diaria-mente até o 10° dia após a lesão com NaBPC157 (10 μg, 10 ng/kg em peso,i.p.) ou solução salina. Os animais foram sacrificados 24 horas após a últi-ma aplicação.

Resultados:

Uma investigação cuidadosa foi conduzida tanto clinicamente(diariamente analisada, contagem 1 - 5) e microscopicamente. Revelou umaforte atenuação de paralisia em que outra circunstância seria sustentada(em ratos de controle) nos ratos tratados com NaBPC157. Considerando-sea similaridade dos modelos usados com condições humanas, NaBPCI 57pode ser usado na terapia de lesões de coluna espinhal.EXEMPLO 37: Intoxicação de Álcool CrônicaMateriais e Métodos:Os efeitos de NaBPCI 57 sobre intoxicação de álcool crônica

foram examinados. Ratos Albino Wistar machos foram usados para estasexperiências. Os ratos estavam bebendo ou uísque ou etanol comercial(solução aquosa a 10 - 20%) por três meses. A aplicação de NaBPCI 57 (10μ9, 10 ng/kg em peso), propranalol (10 mg/kg em peso), e ranitidina (10mg/kg em peso) (ratos de controle receberam um equivolume de soluçãosalina 5,0 ml/kg), ou intragastricamente ou intraperitonealmente, foi condu-zida ou profiIaticamente (10 dias antes do início de álcool) ou como um co-tratamento juntamente com álcool ou terapeuticamente (partindo no fim deum período de dois meses, isto é, durante o último mês da experiência).Resultados:

Uma avaliação direta da pressão de sangue na veia porta cla-ramente demonstrou que NaBPCI57, bem como propranolol (dado em todosos regimes), marcadamente evitou e/ou diminuiu os valores de pressão desangue que em outras circuntâncias estariam elevados em ratos de contro-le. Em contraste com isso, terapia de ranidina levou a valores de pressãoportal ainda mais aumentados do que aqueles presentes em animais decontrole. Além do mais, mais do que propranolol, NaBPCI 57 foi capaz demarcadamente atenuar as lesões que em outras circunstâncias seriamavançadas no estômago dos ratos tratados com álcool. Um efeito benéficosimilar foi também observado sobre outras lesões no órgão (isto é, rim, co-ração).

Considerando-se estes efeitos positivos consistentes e a evi-dência em geral conhecida que ingestão de álcool aumentada produz mu-danças similares em seres humanos, é evidente que NaBPCI 57 é útil naterapia de lesões por álcool.

EXEMPLO 38: Os Efeitos sobre os distúrbios Isquêmicos de CérebroMateriais e Métodos:

NaBPC157 (10 μς ou 10 ng/kg em peso, i.p.) ou solução salina(5,0 ml/kg em peso, i.p.) foi aplicado ou 1 hora antes ou 1 hora depois deambas as artérias carótidas estarem ligadas por 3 ou 6 horas em ratos.

Resultados:

Um forte efeito positivo de NaBPCI 57 é evidente em ambas asaplicações de pré-tratamento (1 hora antes da ligação) bem como de pós-tratamento (1 hora depois da ligação). Este foi o caso tanto em faixas de μgquanto em ng e em ambas as pesquisas de três ou seis horas. Além dosvalores de contagem, severo edema perivascular e de tecido cerebral comcongestão cerebral foram as constatações características e mais distintas.Também as áreas de desmielinização foram observadas, especialmente nocerebelo. Todas estas características eram muito menos pronunciadas nosgrupos de animais tratados com NaBPCI57 apesar das condições de trata-mento.

Considerando-se as severas lesões isquêmicas observadas noscontroles e uma similaridade evidente entre distúrbios isquêmicos em ratose em seres humano, uma aplicação favorável de NaBPCI57 para o trata-mento de distúrbios isquêmicos em seres humanos é evidente.

EXEMPLO 39: Efeito sobre a Lesão de Nervo

Materiais e Métodos:

O efeito de NaBPCI 57 sobre regeneração de nervo periféricofoi examinado. Em ratos machos adultos anestesiados (225 - 250 g), o ner-vo ciático direito foi exposto, foi limpo de tecido conectivo e foi tranfectado 5cm distalmente à incisura ciática. Três suturas perineurais (10,0 Ethilon,Ethicon) foram usadas para a anastomose garantindo próprio alinhamentofascicular. Animais foram tratados ou localmente sobre o sítio da anastomo-se por um banho de 1 ml de NaBPCI 57 (2 μg/ml ou 2 ng/ml), intragastrica-mente ou intraperitonealmente (10 μg ou 10 ng/kg em peso) imediatamenteapós a formação de anastomose. Controles receberam um equivolume desolução salina. Nos dias pós-cirúrgicos indicados (dias 3, 6, 9, 12 e 30),testes funcionais foram realizados. Estes testes incluíram um teste de águaquente (60°C), teste de água fria (2°C), análise de trilha de andar, latênciade EMG-distal, e amplitude de CMAP. As espécies para análises histológi-cas e morfométricas foram também tomadas. Nas outras experiências usan-do-se os mesmos procedimentos cirúrgicos e o mesmo sítio do nervo, umalesão por esmagamento com fórceps microcirúrgico foi induzido por 60 se-gundos e NaBPCI57 foi aplicado localmente. A avaliação foi conduzida de-pois de 2, 7, 10, 50 e 100 dias.

Resultados:

Analisou-se ou clinicamente ou microscopicamente, particular-mente no período inicial, a aplicação de NaBPCI57 marcadamente melho-rou a cura dos ratos lesionados.

Considerando-se a similaridade próxima entre a lesão de animale as condições humanas, NaBPCI 57 pode ser usado para a terapia de le-são de nervo periférico.

EXEMPLO 40: Efeito sobre os Distúrbios Neurolépticos

O efeito de NaBPCI 57 sobre vários distúrbios induzidos porneuroléptico foi examinado.

Materiais, Métodos e Resultados:

Aplicação de NaBPCI57 (10 μg ou 10 ng/kg em peso, i.p.) con-sistentemente atenuou catalepsia por haloperidol e flufenazina (haloperidol0,625, 1,25, 2,5, 5,0 e 10,0 mg/kg em peso, i.p., flufenazina 0,3125, 0,625,1,25, 2,5 e 5,0 mg/kg em peso, i.p. (4,0 ml/kg)) em dosagens mais baixas deambos os neurolépticos em intervalos de tempo subseqüentes. Além doefeito salutar sobre as doses mais baixas de neuolépticos, um efeito anti-cataléptico benéfico ainda mais forte de NaBPCI57 aparece com um dosa-gem mais alta de ambos os neurolépticos observados tanto com doses μgquanto ng de NaBPCI 57. Este efeito foi também observado em orientaçãosomatossensória de animais tratados com sulpirida (20, 40, 80 e 160 mg/kgem peso, i.p.), embora nenhuma catalepsia pudesse ser observada em ca-mundongos tratados com sulpirida de controle.A aplicação favorável de NaBPCI57 no iratamenío de distúrbiosligados com sistemas de dopamina, distúrbios catalépticos e distúrbios neu-rolépticos é evidente.

EXEMPLO 41: Aplicação na Terapia de ChoqueMateriais e Métodos:

Choque hemorrágico experimental foi investigado em ratosanestesiados (cânulas em uma artéria carótida normal e em uma veia jugu-lar). Uma remoção de volume de sangue controlada foi conduzida até amorte ou a pressão de sangue baixa estabilizada (30 - 35 mm Hg). Nestas10 experiências, CaBPCI 57 (10 μg ou 10 ng/kg em peso) ou solução salina foidado intraperitonealmente (5, ml/kg) 15 minutos da hemorragia ou intrave-nosamnte (3,0 ml/kg) depois de um período de 5 minutos de pressão desangue baixa estável.Resultados:

Em relação aos valores de controle, um perda de volume de

sangue significativamente mais alta sustentada antes da morte (que é de-pendente de dose) foi consistentemente observada nos ratos tratados comCaBPCI 57. Em animais hipotensivos e hipovolêmicos tratados comCaBPCI 57, uma aumento de pressão de sangue significativa de longa du-ração e prontamente sem que morte fosse demonstrada. Isto contrastoucom um aumento de pressão de sangue curta e fraca e 75% de taxa demorte antes do fim do período experimental de 45 minutos no grupo de con-trole. Em ratos submetidos apenas à cirurgia depois da anestesia mas não"exanguated", CaBPCI 57 (i.p. ou i.v.) administrado depois de um período deestabilização de 65 minutos não significativamente influenciou os valores depressão de sangue arterial dentro do mesmo período pós-aplicação. Estesdados sugerem que CaBPCI 57 poderia ser eficaz na melhoria das conse-qüências de perda de volume de sangue aguda. Considerando-se uma si-milaridade evidente entre os modelos de animal usados e distúrbios de serhumano, CaBPCI 57 pode ser usado para a terapia de choque.EXEMPLO 42: Efeito sobre Linfócitos AnormaisMateriais. Métodos e Resultados:

Contatações imunológicas em duas pacientes femininas quesofrem de uma entidade clínica rara - eosinofilia hereditária associada àdermatite bolhosa e panencefalite de esclerosação subaguda - foram exa-minadas. Os efeitos de NaBPCI 57 (in vitro) sobre as aberrações de cro-mossomo de linfócito e proliferação de célula T foram investigadas.NaBPCI 57 induziu uma redução significativa de tipos severos de aberra-ções de cromossomo (isto é, constatações de linfócito normalizado) e mos-traram um efeito estimulatório sobre ciclos de mitose.

EXEMPLO 43: 0 Efeito de Malformações

Materiais e Métodos:

O efeito de NaBPCI57 sobre a vitamina A que induziu malfor-mações em camundongos foi examinado. NaBPCI 57 (10 ng/kg em peso, ouμg/kg em peso, i.p.) foi dada simultaneamente com vitamina A (15.700iv/kg) em peso, i.m.) ou solução salina (5 ml/kg em peso, i.p.) no décimo diade gravidez. Camundongos não tratados com vitamina A, mas recebendosolução salina na mesma dosagem ao mesmo tempo, foram usados comocontroles.

Resultados:

Numerosas malformações foram induzidas pela aplicação devitamina A. Uma redução significativa no número de malformações foi ob-servada em grupos tratados com NaBPCI 57. Uma aplicação favorável deNaBPCI 57 em terapia de distúrbios fetais é evidente.

EXEMPLO 44: Ovariectomia

Materiais e Métodos:

Um ovariectomia covencional foi conduzida. NaBPCI 57 foi apli-cado (10 μg ou 10 ng/kg em peso, i.p.) ou uma vez diariamente por 28 dias,ou uma vez diariamente por 14 dias partindo do 15° dia pós-ovariectomia.Regularmente em regime prolongado a última aplicação foi 24 horas antesdo sacrifício. Outros grupos receberam uma única aplicação de μg no 15*dia pós ovariectomia. Cinco grupos foram usados como controles: 2 gruposforam ovariectomizados, foram tratados com solução salina e foram sacrifi-cados no 15° dia e 28° dia pós-ovariectomia, 1 grupo não foi ovariectomiza-do mas tratado com solução salina, e 2 grupos não ovarictomizados foramtratados com NaBPC157 (10 μg ou 10 ng/kg em peso, i.p.) uma vez diaria-mente por 28 dias. Esfregaços vaginais foram tomados a partir de cadaanimal 5 minutos antes da cirurgia nos dias 9, 14 e 28 da experiência e Papmanchado para a avaliação citológica. O grau de maturação de epitélio va-ginal foi expresso pelos meios de valores de maturação. Depois do sacrifí-cio, ossos de extremidade foram coletados a partir de cada animal para afinalidade de testagem biomecânica como resumidamente descrito abaixo.

Testagem Biomecânica

Todos os ossos foram checados em dependência de momentosdiferentes de dobramento (dobramento em um ponto) (momento de dobra-mento = Nm) em direções diferentes, anterior-posterior-, e latero-lateral. Os-sos femorais e de tíbia foram usados nesta experiência. Partes distais dosossos foram fixados com cimento de osso (PaIacos) em tubos de metal lon-gos de 1 cm. Tubos de metal foram fixos em um sistema de carregamento.

Os ossos foram mantidos úmidos continuamente. O comprimento da partelivre do osso foi medido, bem com o comprimento a partir da parte de fixa-ção ao ponto de carregamento. A experiência foi feita de acordo com o prin-cípio de dobramento em bastão, foi fixo em um ponto, dentro dos limites deelasticidade. A carga foi de 0,1, 0,2, 0,5, 0,7, 1,0 N. Deformidade, ou ângulode dobramento foi medido como o ângulo de defleção do feixe de laser quefoi refratado a partir de um espelho pequeno fixo na extremidade do osso. Opeso do espelho foi adicionado à força de dobramento aplicada. O papelmilimetrado, em que o feixe de laser foi direcionado, foi distanciado cerca de1,5 - 1,8 m do osso com um pequeno espelho montado nele. O ângulo dedeformação foi medido usando-se o método trigonométrico. Durante cadacarregamento único, a duração da deformação (e recuperação subseqüen-te) foi medida. Depois do descarregamento, o osso retornou a sua posiçãode partida, evidenciando-se que nenhuma das mudanças estruturais esta-vam presentes no osso e que o carregamento foi provido dentro dos limitesde elasticidade de diagrama de Hook. Esta observação demostrou que erapossível carregar o mesmo osso duas vezes em um diréção diferente semmudança de sua estrutura. Se nenhuma deformidade foi observada durantedois minutos subseqüentes ou se a recuperação adicional foi conseguida,estes pontos foram estimados como final (em geral, o tempo de medição foicerca de 30 segundos (controle ovariectomizado) ou 16 minutos (saudável)).

A deformidade angular de osso (recuperação de carregamento e pós-carregamento) foi expressa em mm/seg.

Resultados:

Tratamento diário com ambas as doses de NaBPCI 57 resultouem uma valor de maturação aumentado perceptível em comparação com ovalor de maturação diminuído atrófico em ratos de controle não tratados.Assim, é sugerido que NaBPCI 57 é capaz de prevenir atrofia vaginal emratos motivados por castração.

Grupos de controle ovariectomizados a amplitude mais baixa dodobramento com o tempo mais curto, bem como a amplitude mais baixa deretorno foi observada. Os mesmos valores baixos foram obtidos em ambosos grupos de controle sacrificados ou depois de 15 ou 28 dias. Isto foi ob-servado em ambos os grupos ovariectomizados, tratados com solução sali-na (sacrificados ou no 15° ou 28° dia). Uma tendência positiva foi observadano grupo que recebeu uma aplicação de μg de NaBPCI 57 no 15° dia pósovariectomia. Resultados significativamente melhores foram obtidos em to-dos os outros grupos tratados com NaBPCI 57, ou ng ou μg. Os melhoresresultados foram obtidos no grupo que recebeu um tratamento de μg deNaBPCI57 diariamente por 28 dias. Todos os parâmetros em animais ova-riectomizados foram marcadamente melhorados e o nível de melhoramentetendeu a conseguir os valores observados em grupos saudáveis. Não houvenenhuma diferença observada entre ratos saudáveis independentementedeles serem tratados com solução salina ou com NaBPCI 57 (dosagem em μg ou ng).

Considerando-se a significância em geral aceita destes modelosde animal para condições de ovariectomia humana tanto sobre atrofia vagi-nal quanto sobre desenvolvimento de osteoporose, é evidente queNaBPCI 57 pode ser usado em terapia de ovariectomia.

EXEMPLO 45: Tumores

Materiais. Métodos e Resultados:

Um dos modelos comumente usados de tumores experimentaisenvolve a avaliação do número de metástases de carcinoma e melanoma B-16 em camundongos. Modelos de vários tipos de tumores experimentais,estes tumores experimentais partilham uma similaridade considerável comdistúrbios observados em pacientes humanos. Aplicado em protocolos dife-rentes, NaBPCI 57 demonstrou diminuir o número de metástase em camun-dongos tratados em relação a controles correspondentes. Tumor de ascitede Ehrlich (EAT) é um tumor que pode se desenvolver em todas as cepasde camundongos. Ele pode se desenvolver ou em forma sólida dependendodo meio em que as células de tumor são administradas. Embora, em geral,modelos de tumor de animal apenas parcialmente partilham uma similarida-de com doença humana, o uso deste modelo conseguiu aceitação geral porcausa de sua possível utilidade quando aplicado em pesquisa de agenteantitumor.

Sobrevivência (dias) nos camundongos injetados com células detumor de ascite de Ehrlich era na maioria das vezes limitada a menos doque 25 dias. Incubação anterior de célula de tumor com NaBPCI 57 (2 μg/ml) levou a uma vida prolongada dos animais injetados com as ditas célu-las de tumor. Mais do que 90% dos animais sobreviveram até o fim do perí-odo de observação de 45 dias. Além disso, várias drogas citoestáticas indu-ziram neutropenia em pacientes bem como em animais experimentais. Ci-clofosfamida é um agente comumente usado para indução de neutropina.

Uma aplicação de ciclofosfamida (180 mg/kg i.p.) induziu distúrbios signifi-cativos. NaBPCI57 preveniu neutropenia, diminuiu os reticulócitos e au-mentou valores de hemoglobina.

Conseqüentemente, um potencial de antitumor de NaBPCI 57 éevidente. Considerando-se a similaridade evidente dos modelos de animal edas condições humanas e dos efeitos benéficos obtidos tanto em experiên-cias in vivo quanto in vitro, NaBPC157 é útil em uma terapia anti-tumor.NaBPC157 é adequado para a atenuação de efeitos nocivos citoestáticos.

EXEMPLO 46: Atividade Antiviral

Materiais e Métodos:

Vírus ARBO (Encefalite Transmitida pelo Carrapato (TBE), Bha-nia, Dengue 1, 2, 3, 4, Sinbis, West Nile1 Éalavo), Hepatite A, Coriomenin-gite Linfática (LCM) e Herpes de tipo 1, foram aplicados i.c. (ou p.o. (pós-operativamente) - Hepatite A) como suspensões de vírus, em uma diluiçãode 10"2 (0,02 ml/camundongo). NaBPC157 (20 μg/kg em peso) ou NaCI a0,9% (0,02 ml/camundongo) foi aplicado i.c. ou i.p. a) em um regime de pré-tratamento, b) simultaneamente com a aplicação de vírus ou c) 4 dias de-pois da infecção na presença dos sintomas de doença estabelecida.Resultados:

Uma demora significativa no início de sintomas de doença econseqüente morte (que em outra circuntância regularmente apareceu no 4°e 5* dia pós-infecção em animais de controle) foi observada depois de apli-cação simultânea de NaBPC157 com os vírus. Quando dado na presençade um quadro de doença severa, um prolongamento significativo de tempode sobrevivência foi consistentemente observado. Evidente foi uma faltacompleta ou de sintomas ou morte subseqüente depois do pré-tratamentode NaBPC157.

Para verificar os resultados obtidos, a virulência das suspen-sões de vírus aplicadas (vírus ARBO infectados) foi também testada porinoculação de suspensões de cérebro preparadas a partir de camundongosque tinham sido anteriormente tratados com NaBPC157 ou solução salina esobreviveram (NaBPC157) (apesar da aplicação de vírus) ou espontanea-mente mortos (solução salina), respectivamente. Ao contário de camundon-gos inoculados com suspensão de solução salina-cérebro (que não se dife-rem de camundongos tratados com solução salina inoculada por suspensãode vírus), nenhum dos sintomas de doença ou morte foi observada em ca-mundongos inoculados por suspensão de NaBPC157-cérebro. Os camun-dongos foram observados por 50 dias após a inoculação de suspensões decérebro.

Os efeitos benéficos de NaBPC157 eram resistentes a uma in-cubação de temperatura aumentada (56°C por 30 minutos.

Considerando-se que estes vírus induzem distúrbios similaresem seres humanos, NaBPCI 57 pode ser usado na terapia de doenças vi-rais, especialmente em uma terapia onde a condição geral é marcadamentediminuída (por exemplo, AIDS e condições relacionadas com AIDS).

EXEMPLO 47: Lesões Intestinais

Materiais e Métodos

Os efeitos de NaBPCI57 (10 μg ou 10 ng/kg i.p., i.g.) foram in-vestigados em ratos em comparação com padrões de referências severosem vários modelos de úlcera experimentais (tensão moderada por 48 horas,cisteamina subcutânea, testes de úlcera por etanol a 96% intragástrica, Ie-sões por NSAIAs, DNFB (dinitrofluorhenzeno), esofagite de refluxo apósanastomose término-lateral esofagojejunal) (pré-/co-/pós-tratamento).Resultados:

Apenas regimes de NaBPCI 57 foram consistentemente eficazesem todos os modelos testados. Bromocriptina, amatadina, famotidina, cime-tidina e somtostatina eram eficazes (tensão moderada) ou apenas parcial-mente eficaz (bromocriptina, lesões intestinais por DNFB; sucralfato, raniti-dina, colestiramina, esofagite de refluxo). Considerando-se os peptídeos dereferência, uma proteção dependente de dose (cisteamina) e/ou efeito posi-tivo parcial (realacionado a condições de tratamento) (etanol) foram obtidoscom glucagon, NPY e secretina, enquanto que CCK/26-30/não foi eficaz.

Considerando-se que todos os modelos foram usados para atriagem dos agente atualmente usados na terapia de lesões gastrontestinaise os efeitos consistentemente benéficos de NaBPC157, sua aplicação favo-rável na terapia das lesões do trato intestinal inteiro é evidente.

EXEMPLO 48: Efeito sobre Distúrbios CognitvasMateriais e Métodos:

A aplicação de agentes anticolinérgidos (scopolamina, atropina,10 mg/kg em peso i.p.) levou a déficit cognitivo significatico nos ratos, umaconstatação de avaliação reproduzida bem sucedida do comportamento deanimais em labirinto em T de água por um período prolongado de tempo.Resultados:

Em relação aos controles, um número aumentado dos erros po-deria ser claramente evidenciados em ratos tratados com scopolamina eatropina. Este déficit cognitivo foi abolido (valores obtidos eram iguais paracontrolar valores) por co-administração subseqüente de NaBPCI 57 (10 μgou 10 ng/kg em peso, i.p.).

Considerando-se a significância amplamente implicada destesmodelos para avaliações de função cognitivas de ser humano, é evidenteque NaBPCI57 é útil na terapia de distúrbios cognitivos.

EXEMPLO 49: Efeito sobre Distúrbios de Retirada

Materiais. Métodos e Resultados:

NaBPCI 57 exibiu um efeito anticonvulsivante que interage como sistema de GABAergic e melhorou a eficácia de diazepam quando co-adminsitrado (10 μg/kg, 10 ng/kg i.p.) com diazepam (5,0 mg/kg i.p., duasvezes diariamente por 10 dias). NaBPCI57 atenuou tolerância a diazepam eadiou os efeitos de retirada e dependência física. Em ensaios de tolerânciaquarenta de duas horas depois do regime de condicionamento, latênciaspré-convulsivas mais curtas do que aquela de camundongos saudáveisapós o tratamento de isoniazid (800 mg/kg i.p.) foram observados se diaze-pam (5,0 mg/kg i.p.) foi dado novamente a camundongos anteriormentecondicionados com diazepam sozinho. Isto foi totalmente evitado em ani-mais condicionados com NaBPCI 57 (ambas as doses) e diazepam. Em umensaio de dependência física (avaliado em 6, 14, 42, e 72 horas depois dotratamento de condicionamento) latências pré-convulsivas mais curtas foramobservadas em camundongos condicionados com diazepam do que em ca-mundongos saudáveis não-condicionados após um tratamento com isonia-zid quarenta e duas e setenta e duas horas depois do tratamento de condi-cionamento. NaBPCI 57 (10 μg/Κg de dose) combinado com diazepam adioueste efeito até o último intervalo observado. Neste grupo em intervalos deseis horas, ao contrário de camundongos condicionados com diazepam, Ia-tências pré-convulsivas por isoniazid eram ainda mais longas que em con-troles correspondentes. NaBPCI 57 não produz qualquer efeito de tolerân-cia.

Considerando-se a significância destes modelos para condiçõeshumanas, é evidente que NaBPCI 57 é útil na terapia dos distúrbios de reti-rada.

EXEMPLO 50: O Efeito sobre os Distúrbios de Rim

Materiais e Métodos:

Administração de cloreto de mercúrio (1 mg/kg i.v.) ou de cispla-tina (10 mg/kg s.c.) produz falha renal aguda em animais experimentais.Quando induzido deste modo, falha renal fortemente se correlaciona comdistúrbio humano correspondente. Conseqüentemente, as lesões induzidasem ratos partilham um grau consideravelmente alto de similaridade com le-sões correspondentes em pacientes humanos.

Resultados:

NaBPCI57 marcadamente atenuou as lesões em ratos tanto emcondições de pré-tratamento quanto em pós-tratamento. Uma nefrectomiaunilateral produziu uma sobrecarga funcional marcada e uma hipertrofiafuncional do rim que sobrou. Tratamento com NaBPCI 57 aumentou diureseem animais nefrectomizados unilateralmente e diminuiu a hipertrofia do rimque sobrou. Assim, em termos da teoria funcional de hipertrofia renal com-pensatória, estas constatações fortemente enfatizam uma função melhoradado rim que sobrou. Isto é também suportado por resultados bioquímicos adi-cionais. Além disso, estes dados estão totalmente de acordo com os efeitosobtidos em ratos hipertensivos com estenose de artéria renal e/ou nefrecto-mia unilateral. A aplicação útil de NaBPCI57 na terapia de distúrbios de rimé evidente.EXEMPLO 51: Respostas Imunes Celulares de Linfócitos de Sangue Perifé-rico

Respostas imunes celulares de linfócitos de sangue periférico aBPC foram investigadas nos controles e nos pacientes com doenças dife-rentes apresentadas na tabela 2. Respostas de célula T de sangue periféri-co a BPC foram testadas por meio do método descrito por deSmet e outros(deSmet MD e outros em: "Celular immune responses of patients with uveitisto retinal antigens and their fragments". Am. J. OphthaL1 110: 135 - 142,1990) com culturas de célula de 7 dias. As células foram incubadas sem oantígeno e com 20 ug/L do antígeno (pentadecapeptídeo de BPC157). Paracada paciente o índice de estimulação foi calculado por divisão das conta-gens médias das culturas estimuladas por antígeno com as contagens mé-dias das culturas de célula de controle em que nenhum antígeno, isto é,pentadecapeptídeo de BPC157, foi adicionado. Os resultados são apre-sentados na tabela 2.

Valores de controle de = 2 medidos nos indivíduos de controle(tabela 2) corresponderam aos valores de outros investigadores para ospeptídeos de peso molecular similar, isto é, nenhuma sensibilização de lin-fócitos de sangue periférico a pentapeptídeo de BPC157 foi observada nosindivíduos de controle. Nos pacientes com diferentes doenças, respostasmarcadas celulares a BPC apresentados na tabela 2 indicaram sensibiliza-ção de linfócito sistêmico a este peptídeo de suco gástrico. Estes dados cla-ramente demonstraram a presença de distúrbios relacionados com BPC empacientes que sofrem de doenças evidentemente diferentes. Isto sugere aaplicação dos agentes relacionados com BPC (por exemplo, os sais doBPC157 de pentapeptídeo) em uma terapia imunomodulatória de distúrbioscorrespondentes.

Tabela 2: índice de estimulação elevada de células T de sangue periféricoem 11 pacientes com doenças diferentes<table>table see original document page 59</column></row><table>

Os resultados das investigações farmacológicas descritas de-monstram a atividade vantajosa dos sais dos peptídeos de BPC na proteçãode organismos contra tensão e doenças e, em geral, normalizando as fun-ções orgânicas. Os sais de peptídeo da presente invenção são também efi-cazes para a prevenção e terapia de várias distúrbios e doenças de ser hu-mano e/ou de animal.

Claims (14)

1.Sal de um peptídeo de BPC (Composto de Proteção de Cor-po) que compreende 8 resíduos de aminoácido, caracterizado pelo fato deque o ânion do sal é um peptídeo negativamente carregado tendo a fórmulageral[Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala]w ou (2">em queXaa é um resíduo de aminoácido alifático neutro,Yaa é um resíduo de aminoácido básico eZaa é um resíduo de aminoácido ácido,e de que o cátion do sal é o cátion de uma base não tóxica, e é selecionadodo grupo que consiste em 2-AMP+ (2-amino-1-propanol) e TRIS+ (Tris-(hidroximetil)-aminometano).

2.Sal de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fatode queXaa é Ala, bAla, Leu, lie, Gly, Vai, Nle ou Nva,Yaa é Lys, Arg, Orn ou His eZaa é Glu, Asp, Aad ou Apm.

3.Sal de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelofato de que, além do mais, compreende um veículo farmaceuticamente oudiagnosticamente aceitável.

4.Sal de acordo com uma das reivindicações 1 a 3, caracteriza-do pelo fato de que, além do mais, compreende trehalose.

5.Sal de acordo com uma das reivindicações 1 a 4, caracteriza-do pelo fato de que a fórmula geral éXaa Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa-5 10Ala Xaa Xaa Xaa-15

6.Sal de acordo com uma das reivindicações 1 a 5, caracte-rizado pelo fato de que o peptídeo é selecionado do grupo que consisteemLeu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp5 10Ala Leu Gly Val;15Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp5 10Ala Gly Leu Val;15Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp5 10Ala Leu Gly Val;15Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala5 10Leu Gly Val;14Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Ala5 10Gly Leu Val;14Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala;5 8AspPro Pro Pro Ile Arg Pro Ala Asp;5 9Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp;5 9Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala5 10Leu Gly Val;14Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp e5 10Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asn.5 9

7.Sal de acordo com uma das reivindicações 1 a 6, caracteriza-do pelo fato de que o peptídeo está ciclizado, em particular, por uma ligaçãode amina entre o primeiro e o último resíduo de aminoácido.

8.Sal de acordo com uma das reivindicações 1 a 7, caracteriza-do pelo fato de que o sal está dissolvido em uma solução aquosa ou aquo-sa/alcoólica, de preferência em um pH de 6,0 a 8,5.

9.Composição farmacêutica compatível, estável ao armazena-mento, caracterizada pelo fato de compreender uma quantidade farmaceuti-camente eficaz do sal de peptídeo de BPC como definido em uma uma dasreivindicações 1 a 8 e opcionalmente um veículo fisiologicamente aceitável.

10.Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 9,utilizável via peroral, caracterizada pelo fato de estar misturada com trehalo-se.

11.Composição diagnostica, estável ao armazenamento, carac-terizada pelo fato de compreender uma quantidade diagnosticamente eficazdo sal de peptídeo de BPC como definido em uma das reivindicações 1 a 8.

12.Uso de um sal de peptídeo de BPC de acordo com uma dasreivindicações de 1 a 8, caracterizado pelo fato de ser para a preparação deuma composição farmacêutica estável ao armazenamento, compatível, co-mo definida na reivindicação 9 e utilizável para o tratamento de:distúrbios ligados ou com formação de óxido nítrico (NO) ou funções do Sis-tema de NO diminuídas, em particular, hipertensão, angina, impotência,choque séptico e circulatório, acidente vascular cerebral, inflamação, sín-drome de sofrimento respiratório, adesão e agregação de plaquetas e deleucócitos, disfunção endotelial, lesões gastrontestinais, distúbios de peris-talse, pancreatite diabética, hipotensão e doença de Parkinson;disfunções ou hiperfunções de nervos somatossensórios, em particular neu-ropatia sensória, neuralgia posterpética, dermatite atópica, cura prejudicadade tecido ferido, urticária por calor ou por frio adquirida, psoríase, penfigóidebolhosa, eczema, fotodermatoses, artrite crônica, lesões gastrontestinais ehiper-reatividade específica e não específica de tratos respiratórios superio-res e inferiores (asma, rinite;distúrbios de endotélio:ferimentos, úlceras;condições relacionadas com inflamação aguda e/ou crônica, em particular,artrite crônica e distúrbios relacionadas com tipo retardado de hipersensibili-dade e lesões gastrontestinais; distúrbios de fígado, lesões de órgão induzi-das por radicais livres especificadamente causados por irradiação;distúrbios ligados com distúrbios de sistema catecolaminérgico, em particu-lar, esquizofrenia, efeitos de desafio de anfetamina, abuso de droga;condições relacionadas com stress;pancreatite aguda; em particular com patologia gastroduodenal concomitan-te;distúrbios cardíacos;distúrbios depressivos;doença de Parkinson e patologia semelhante a doença de Parkinson;distúrbios de temperatura;danos de osso;vários danos de órgão induzidos por hipertensão; distúrbios de coagulação;distúrbios de dor;distúrbios de convulsão;lesão da coluna vertebral;danos de álcool, induzidos por abuso de álcool ou ingestão de álcool aumen-tada;distúrbios isquêmicos de cérebro;lesões de nervo periférico;distúrbios catalépticos e distúrbios neurolépticos;distúrbios relacionados com linfócitos mutantes ou anormais;distúrbios de fetos;desenvolvimento de atrofia vaginal e de osteoporose causado por condiçõesde ovariectomia;tumores;doenças virais, em particular AIDS ou ARC; lesões gastrontestinais;distúrbios cognitivos;distúrbios de retirada;distúrbios de rim edistúrbios em resposta imune celular.

13.Uso de um sal de peptídeo de BPC de acordo com uma dasreivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de ser para a preparação deuma composição farmacêutica estável ao armazenamento, compatível, co-mo definida na reivindicação 9 e utilizável como um agente cito-protetor ouorgano-protetor.

14.Processo para a preparação de sal de peptídeo de BPC deacordo com uma das reivindicações de 1 a 8, caracterizado pelo fato decompreender a mistura de pelo menos um peptídeo de BPC em um solventeaquoso ou aquoso/alcoólico com uma ou mais bases e a obtenção de um salde peptídeo de BPC em que o cátion do sal é o cátion de uma base não tó-xica.