BR122023023902A2 - Composições que compreendem um composto inibidor de ezh2, uso terapêutico das mesmas e método in vitro de inibição da proliferação de células de câncer - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a composições compreendendo os inibidores da histona metiltransferase humana EZH2 e um ou mais outros agentes terapêuticos, agentes anticâncer particulares, tais como a prednisona, e os métodos de terapia de combinação, para administração a indivíduos com necessidade da mesma para o tratamento de câncer.

Description

[001] Dividido do BR 11 2014 025506 7, depositado em 12/04/2013.

PEDIDOS RELACIONADOS

[002] Este pedido reivindica a prioridade e o benefício do Pedido Provisisório US N°. 61/624,194 depositado em 13 de Abril 2012 e ao Pedido Provisório US N°. 61/785,169 depositado em 14 de março, 2013, o conteúdo de cada um dos quais sendo incorporado por referência na sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

[003] Esta invenção relaciona-se com composições compreendendo os inibidores da histona metiltransferase humana EZH2, a subunidade catalítica do complexo PRC2 que catalisa a mono até a tri-metilação de lisina 27 em histona H3 (H3-K27), e um ou mais outros agentes terapêuticos, particularmente agentes anticâncer e os métodos de terapia de combinação para o tratamento de câncer.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[004] Os tratamentos combinados de terapia para o câncer se tornaram mais comuns, em parte, devido à vantagem percebida de atacar a doença através de múltiplos caminhos. Embora muitos tratamentos de terapia de combinação eficazes tenham sido identificados ao longo das últimas décadas; tendo em conta o elevado número de mortes contínuas a cada ano que resultam de câncer, existe uma necessidade contínua para identificar regimes terapêuticos eficazes para o uso no tratamento anticâncer.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[005] Em um aspecto, a presente invenção apresenta uma composição que compreende um composto de Fórmula (IIa) abaixo e um ou mais outros agentes terapêuticos ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou éster do mesmo.

[006] Os compostos de Fórmula (IIa) podem incluir uma ou mais das seguintes características:

[007] Cada um de Rae Rb, independentemente é H ou C1-C6 alquil.

[008] Ra e Rb, juntos com o átomo de N ao qual eles são ligados, é um anel heterocicloalquil de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomos adicionais, o C1-C6 alquil e o anel heterocicloalquil de 4 a 12 membros (por exemplo, de 4 a 7 membros) sendo opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.

[009] Q3 é um ligante ou ligante de C1-C3 alquil substituído ou não substituído.

[010] T3 é H, halo, heterocicloalquil de 4 a 7 membros, C1-C3 alquil, ORd, CO- ORd,-S(O)2Rd, ou -NRdRe, cada um de Rd e Re sendo independentemente H ou C1-C6 alquil.

[011] R7 é C1-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil ou heterocicloalquil de 4 a 12 membros (por exemplo, de 4 a 7 membros), cada um, opcionalmente, substituído com um ou mais -Q5-T5. Por exemplo, R7 não é H.

[012] R7 é heterocicloalquil de 4 a 7 membros opcionalmente, substituído com um ou mais -Q5-T5.

[013] R7 é piperidinil, tetra-hidropirano, ciclopentil, ou ciclo-hexil, cada um, opcionalmente substituído com um -Q5-T5.

[014] T5 é H, halo, C1-C6 alquil, C1-C6 alcóxil, C3-C8 cicloalquil, C6-C10 aril, ou heterocicloalquil de 4 a 12 membros (por exemplo, de 4 a 7 membros).

[015] Q5 é um ligante e T5 é C1-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, ou heterocicloalquil de 4 a 12 membros (por exemplo, de 4 a 7 membros).

[016] Q5 é CO, S(O)2, ou NHC(O); e T5 é C1-C6 alquil, C1-C6 alcóxil, C3-C8 cicloalquil, ou heterocicloalquil de 4 a 12 membros (por exemplo, de 4 a 7 membros).

[017] Q5 é ligante de C1-C3 alquil e T5 é H ou C6-C10 aril.

[018] Q5 é ligante de C1-C3 alquil e T5 é C3-C8 cicloalquil, heterocicloalquil de 4 a 7 membros, ou S(O)qRq.

[019] R7 é ciclopentil ou ciclo-hexil, cada um, opcionalmente substituído com um —Q5-T5.

[020] Q5 é NHC(O) e T5 é C1-C6 alquil ou C1-C6 alcóxi .

[021] R7 é isopropil.

[022] Cada um de R2 e R4, independentemente é H ou C1-C6 alquil opcionalmente substituído com amino, mono-C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, ou C6-C10 aril.

[023] R8 é H, metil, ou etil.

[024] R8 é metil.

[025] R8 é etil.

[026] R8 é 4 a 7-heterocicloalquil, por exemplo, tetra-hidropirano.

[027] A presente invenção apresenta uma composição compreendendo um composto selecionado a partir da Tabela 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou éster do mesmo e um ou mais outros agentes terapêuticos.

[028] A presente invenção apresenta uma composição compreendendo o Composto 44 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou éster do mesmo e um ou mais outros agentes terapêuticos.

[029] Neste e em outros aspectos da invenção, em uma modalidade os outros agentes terapêuticos são agentes anticâncer.

[030] Neste e em outros aspectos da invenção, em uma modalidade os outros agentes terapêuticos são glicocorticóides.

[031] Neste e em outros aspectos da invenção, em uma modalidade os outros agentes terapêuticos, são selecionados a partir de prednisona, prednisolona, ciclofosfamida, vincristina, doxorrubicina, mafosfamida, cisplatina, AraC, everolimus, decitabina, dexametasona, e análogos, derivados, ou combinações dos mesmos.

[032] Neste e em outros aspectos da invenção, em uma modalidade o outro agente terapêutico é a prednisona, ou um análogo ou derivado da mesma.

[033] A presente invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo um composto selecionado a partir daqueles de Fórmula (II-a) divulgados aqui ou sais farmacêuticos aceitáveis dos mesmos e um ou mais agentes terapêuticos, e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[034] A presente invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo um composto selecionado a partir da Tabela I, com um ou mais outros agentes terapêuticos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[035] A presente invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo um composto selecionado a partir daqueles de Fórmula (IIa) aqui divulgados, ou os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, um ou mais outros agentes terapêuticos, e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[036] Um outro aspecto da presente invenção é um método para o tratamento ou prevenção de uma doença através da administração a um sujeito com necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição compreendendo um composto de Fórmula (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais agentes terapêuticos adicionais. A doença da presente invenção pode ser influenciada, tratada ou prevenida por meio da modulação do estado de metilação das histonas e outras proteínas. Por exemplo, a doença é o câncer, uma condição pré-cancerosa, ou uma doença neurológica. De preferência, o linfoma é linfoma de não-Hodgkin, linfoma folicular ou linfoma difuso de células B grandes. Alternativamente, a leucemia é leucemia mielóide crônica (CML). A condição pré-cancerosa é, por exemplo, síndromes mielodisplásicas (MDS, anteriormente conhecido como Pré-Leucemia).

[037] O sujeito da presente invenção inclui qualquer ser humano que tenha sido diagnosticado com, apresenta sintomas de, ou está em risco de desenvolver um, câncer ou uma condição pré-cancerosa. O sujeito da presente invenção inclui qualquer sujeito humano expressando um mutante de EZH2. Por exemplo, um mutante de EZH2 compreende uma ou mais mutações, em que a mutação é uma substituição, uma mutação pontual, uma mutação nonsense, uma mutação misssense, uma deleção ou uma inserção. Um mutante de EZH2 da presente invenção pode compreender uma mutação no domínio da bolsa do substrato tal como definido na SEQ ID NO: 6. Um mutante de EZH2 pode ter uma substituição no aminoácido Y641. De preferência, o mutante de EZH2 tem uma das seguintes mutações: substituição de fenilalanina (F) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641F); uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641H); uma substituição de asparagina (N) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641N); uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641S); e uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641C).

[038] Outras mutações de EZH2 podem incluir, mas não se limitam a: uma substituição de glicina (G) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 677 da SEQ ID NO: 1 (A677G); uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 687 da SEQ ID NO: 1 (A687V); uma substituição de metionina (M) pelo resíduo do tipo selvagem de valina (V) na posição de aminoácido 674 da SEQ ID NO: 1 (V674M); uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 685 da SEQ ID NO: 1 (R685H); uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 685 da SEQ ID NO: 1 (R685C); uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 322 da SEQ ID NO: 3 (N322S), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 288 da SEQ ID NO: 3 (R288Q), uma substituição de isoleucina (I) pelo resíduo do tipo selvagem de treonina (T) na posição de aminoácido 573 da SEQ ID NO: 3 (T573I), uma substituição de ácido glutâmico (E) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 664 da SEQ ID NO: 3 (D664E), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 458 da SEQ ID NO: 5 (R458Q), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 249 da SEQ ID NO: 3 (E249K), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 684 da SEQ ID NO: 3 (R684C), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 628 da SEQ ID NO: 21 (R628H), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de glutamina (Q) na posição de aminoácido 501 da SEQ ID NO: 5 (Q501H), uma substituição de asparagina (N) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 192 da SEQ ID NO: 3 (D192N), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 664 da SEQ ID NO: 3 (D664V), uma substituição de leucina (L) pelo resíduo do tipo selvagem de valina (V) na posição de aminoácido 704 da SEQ ID NO: 3 (V704L), uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de prolina (P) na posição de aminoácido 132 da SEQ ID NO: 3 (P132S), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 669 da SEQ ID NO: 21 (E669K), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 255 da SEQ ID NO: 3 (A255T), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 726 da SEQ ID NO: 3 (E726V), uma substituição de tirosina (Y) pelo resíduo do tipo selvagem de cisteína (C) na posição de aminoácido 571 da SEQ ID NO: 3 (C571Y), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de fenilalanina (F) na posição de aminoácido 145 da SEQ ID NO: 3 (F145C), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 693 da SEQ ID NO: 3 (N693T), uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de fenilalanina (F) na posição de aminoácido 145 da SEQ ID NO: 3 (F145S), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de glutamina (Q) na posição de aminoácido 109 da SEQ ID NO: 21 (Q109H), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de fenilalanina (F) na posição de aminoácido 622 da SEQ ID NO: 21 (F622C), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de glicina (G) na posição de aminoácido 135 da SEQ ID NO: 3 (G135R), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 168 da SEQ ID NO: 5 (R168Q), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de glicina (G) na posição de aminoácido 159 da SEQ ID NO: 3 (G159R), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 310 da SEQ ID NO: 5 (R310C), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 561 da SEQ ID NO: 3 (R561H), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 634 da SEQ ID NO: 21 (R634H), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de glicina (G) na posição de aminoácido 660 da SEQ ID NO: 3 (G660R), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 181 da SEQ ID NO: 3 (Y181C), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de histidina (H) na posição de aminoácido 297 da SEQ ID NO: 3 (H297R), uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de cisteína (C) na posição de aminoácido 612 da SEQ ID NO: 21 (C612S), uma substituição de tirosina (Y) pelo resíduo do tipo selvagem de histidina (H) na posição de aminoácido 694 da SEQ ID NO: 3 (H694Y), uma substituição de alanina (A) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 664 da SEQ ID NO: 3 (D664A), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de isoleucina (I) na posição de aminoácido 150 da SEQ ID NO: 3 (I150T), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de isoleucina (I) na posição de aminoácido 264 da SEQ ID NO: 3 (I264R), uma substituição de leucina (L) pelo resíduo do tipo selvagem de prolina (P) na posição de aminoácido 636 da SEQ ID NO: 3 (P636L), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de isoleucina (I) na posição de aminoácido 713 da SEQ ID NO: 3 (I713T), uma substituição de prolina (P) pelo resíduo do tipo selvagem de glutamina (Q) na posição de aminoácido 501 da SEQ ID NO: 5 (Q501P), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de lisina (K) na posição de aminoácido 243 da SEQ ID NO: 3 (K243Q), uma substituição de ácido aspártico (D) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 130 da SEQ ID NO: 5 (E130D), uma substituição de glicina (G) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 509 da SEQ ID NO: 3 (R509G), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 566 da SEQ ID NO: 3 (R566H), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 677 da SEQ ID NO: 3 (D677H), uma substituição de asparagina (N) pelo resíduo do tipo selvagem de lisina (K) na posição de aminoácido 466 da SEQ ID NO: 5 (K466N), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 78 da SEQ ID NO: 3 (R78H), uma substituição de metionina (M) pelo resíduo do tipo selvagem de lisina (K) na posição de aminoácido 1 da SEQ ID NO: 6 (K6M), uma substituição de leucina (L) pelo resíduo do tipo selvagem de serina (S) na posição de aminoácido 538 da SEQ ID NO: 3 (S538L), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de leucina (L) na posição de aminoácido 149 da SEQ ID NO: 3 (L149Q), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de leucina (L) na posição de aminoácido 252 da SEQ ID NO: 3 (L252V), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de leucina (L) na posição de aminoácido 674 da SEQ ID NO: 3 (L674V), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 656 da SEQ ID NO: 3 (A656V), uma substituição de ácido aspártico (D) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 731 da SEQ ID NO: 3 (Y731D), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 345 da SEQ ID NO: 3 (A345T), uma substituição de ácido aspártico (D) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 244 da SEQ ID NO: 3 (Y244D), uma substituição de triptofano (W) pelo resíduo do tipo selvagem de cisteína (C) na posição de aminoácido 576 da SEQ ID NO: 3 (C576W), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 640 da SEQ ID NO: 3 (N640K), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 675 da SEQ ID NO: 3 (N675K), uma substituição de tirosina (Y) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 579 da SEQ ID NO: 21 (D579Y), uma substituição de isoleucina (I) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 693 da SEQ ID NO: 3 (N693I), e uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 693 da SEQ ID NO: 3 (N693K).

[039] Outras mutações de EZH2 podem incluir: um frameshift na posição de aminoácido 730, 391, 461, 441, 235, 254, 564, 662, 715, 405, 685, 64, 73, 656, 718, 374, 592, 505, 730, ou 363 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21 ou a posição de nucleotídeo correspondente da sequência de ácidos nucleicos que codifica a SEQ ID NO: 3, 5, ou 2; uma deleção de ácido glutâmico (E) e leucina (L) na posição de aminoácidos 148 e 149 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21, ou uma mutação nonsense na posição de aminoácido 733, 25, 317, 62, 553, 328, 58, 207, 123, 63, 137, ou 60 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21.

[040] Um sujeito da presente invenção pode ter qualquer resistência para um ou mais outros agentes terapêuticos ou qualquer um dos compostos descritos no presente documento. Por exemplo, o sujeito pode ter resistência a inibidores de EZH ou prednisona.

[041] A presente invenção apresenta um método para inibir a proliferação de células de câncer, compreendendo o contato das referidas células de câncer com uma composição compreendendo um composto de Fórmula (IIa) ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Inibição da proliferação de células de câncer inclui o retardo do crescimento de células de câncer, indução de morte celular, redução da viabilidade de células de câncer, inibição ou retardo do crescimento do tumor, ou a redução do tamanho do tumor.

[042] A presente invenção apresenta métodos de terapia de combinação, em que qualquer composto de Fórmula (IIa), ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais outros agentes terapêuticos são administrados simultaneamente ou sequencialmente. Por exemplo, qualquer composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser administrado antes da administração de um ou mais outros agentes terapêuticos. Por exemplo, qualquer composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou pode ser administrado antes da administração de uma composição compreendendo um composto de Fórmula (IIa) ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um ou mais outros agentes terapêuticos. A administração simultânea ou sequencial de um composto de Fórmula (IIa) e/ou de cada agente terapêutico pode ser efetuada por qualquer via apropriada incluindo, mas não se limitando a, vias orais, vias intravenosas, vias intramusculares e a absorção direta através de tecidos de membranas das mucosas. Os agentes terapêuticos podem ser administrados pela mesma via ou por vias diferentes.

[043] Os métodos de terapia de combinação caracterizados na presente invenção podem resultar em um efeito sinérgico, em que o efeito de uma combinação de compostos e outros agentes terapêuticos, é maior do que a soma dos efeitos resultantes da administração de qualquer um dos compostos ou outros agentes terapêuticos como agentes únicos. Um efeito sinérgico pode também ser um efeito que não pode ser alcançado através da administração de qualquer um dos compostos ou outros agentes terapêuticos como agentes únicos. Um efeito sinérgico pode incluir, mas não se limita a, um efeito de tratamento de câncer, reduzindo o tamanho do tumor, inibindo o crescimento de tumor, ou aumentando a sobrevivência do sujeito. O efeito sinérgico pode também incluir a redução da viabilidade de células de câncer, a indução de morte de células de câncer, e a inibição ou retardo do crescimento de células de câncer.

[044] As composições da presente invenção podem ser administradas em uma dosagem de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia. Qualquer composto de fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser administrado a uma dosagem de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia. Qualquer outro agente terapêutico pode ser administrado a uma dosagem de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia.

[045] A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado que o normalmente entendido por um vulgar versado na técnica à qual esta invenção pertence. No relatório descritivo, as formas singulares também incluem o plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Embora os métodos e materiais similares ou equivalentes aos descritos no presente documento possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos e materiais adequados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências aqui mencionadas são incorporadas por referência. As referências aqui citadas não são admitidas para serem estado da técnica da invenção reivindicada. No caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo as definições, prevalecerá. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não têm a intenção de ser limitantes.

[046] Outras características e vantagens da invenção serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada e reivindicações.

BREVES DESCRIÇÕES DAS FIGURAS

[047] A Figura 1 é um esquema detalhando esquemas de tratamento in vitro para determinar o efeito da terapia de combinação sobre a viabilidade de células. (A) Administração do Composto 44 antes da administração do Composto 44 e os componentes de CHOP (Ciclofosfamida, Doxorrubicina, Vincristina e Prednisolona). (B) Administração do Composto 44 antes dos componentes de CHOP. (C) Administração dos componentes de CHOP antes da administração do Composto 44 e componentes de CHOP. Após 4 dias, a viabilidade das células foi determinada.

[048] A Figura 2 representa quatro gráficos que medem a viabilidade das células de câncer in vitro depois do tratamento com o Composto 44 e componentes de CHOP isolados ou em combinação. As células WSU-DLCL2 foram tratadas tal como mostrado na Figura 1A. As células foram primeiro tratadas com diferentes concentrações do Composto 44. Depois de quatro dias, as células foram tratadas com a combinação de várias concentrações do Composto 44 e (A) Mafofsamida (metabólito de Ciclofosfamida), (B) Doxorubicina, (C), Vincristina, ou (D) Prednisolona (metabólito de Prednisona). As células de controle foram tratadas com DMSO. A viabilidade de células foi normalizada com a porcentagem de viabilidade de células em DMSO-tratado para cada concentração de Composto 44.

[049] A Figura 3 é de três gráficos que medem a viabilidade das células de câncer após vários esquemas de tratamento. As células WSU-DCLC2 foram tratadas com concentrações crescentes de Prednisolona e Composto 44. As células foram tratadas com o Composto 44 e Prednisolona de acordo com o esquema de tratamento em (A), Figura 1A, (B) Figura 1B, ou (C) Figura 1C. A viabilidade de células foi normalizada para a amostra tratada com DMSO/DMSO.

[050] A Figura 4 é de três gráficos que medem a viabilidade das células de câncer após tratamento com Prednisolona e do Composto 44 em linhagens de células com diferentes mutações de EZH2. As células foram tratadas como descrito na Figura 1A e com concentrações crescentes de Prednisolona e Composto 44. A viabilidade de células foi normalizada em relação ao DMSO/amostra tratada com DMSO. (A) Células WSU-DLCL2 expressam a mutação Y641F e são sensíveis a inibidores de EZH2. (B) Células RL expressam a mutação Y641N e são resistentes aos inibidores de EZH2 e Prednisolona. (C) Células OCI-LY19 são do tipo selvagem em Y641 e mostram sensibilidade para Presnisolone, mas não mostram sensibilidade para o Composto 44, ou sensibilidade aumentada para a combinações de Composto 44 e Prednisolona.

[051] A Figura 5 é de cinco gráficos que mostram um painel de perfis farmacocinéticos para a coadministração de Compostos 44 e componentes de CHOP in vivo. Camundongos BALB/c foram administrados com uma única administração oral dos Compostos 44 e componentes de CHOP. A concentração do Composto 44 (ng/ml) no plasma foi medida em vários pontos de tempo de 0-24 horas após a administração. Ciclofosfamida foi administrada por injeção intraperitoneal a 30 mg/kg. A Vincristina foi administrado por injeção intravenosa a 0,375 mg/kg. A doxorrubicina foi administrada por injeção intravenosa a 2,475 mg/kg. A Prednisolona foi administrada por via oral na dose de 0,15 mg/kg. O Composto 44 foi administrado por via oral a 225 mg/kg.

[052] A Figura 6 são dois gráficos que demonstram o efeito da administração do Composto 44 e de CHOP no modelo de xenoenxerto SUDHL6 sobre o crescimento de tumores e sobrevivência. Camundongos nude atímicos foram injetados subcutaneamente com 1x107células de linfoma humano SUDHL6. Após os tumores atingirem um tamanho de aproximadamente 120 mm3, o Composto 44 foi administrado durante 28 dias nas doses indicadas ou três vezes por dia (TID) ou duas vezes por dia (BID). CHOP (Ciclofosfamida, Vincristina, Doxorrubicina e Prednisona) foi administrado no dia 1 e 8 a camundongos que receberam 225 mg/kg, duas vezes por dia (225 mg/kg BID e CHOP). Os camundongos de controle não receberam qualquer Composto 44 (veículo) ou CHOP apenas (CHOP). O volume do tumor foi medido duas vezes por semana. Os animais foram sacrificados quando o volume do tumor atingiu 2000 mm3, ou 60 dias após a primeira dose. (A) Para a análise de retardo do crescimento do tumor, o volume médio do tumor foi calculado para cada grupo de tratamento através da medição dos tumores duas vezes por semana durante 60 dias, ou até que o tumor atingiu 2000 mm3. (B) curva de Kaplan-Meier descreve a taxa de sobrevivência dos camundongos.

[053] A Figura 7 é de três gráficos que demonstram o efeito da administração do Composto 44 e CHOP no modelo de xenoenxerto de WSU-DLCL2 no crescimento de tumores e sobrevivência. Camundongos SCID foram injetados subcutaneamente com 1x107células de linfoma humano WSU-DLCL2. Após os tumores atingirem um tamanho de aproximadamente 120 mm3 o Composto 44 foi administrado durante 28 dias nas doses indicadas em três vezes ao dia (TID), duas vezes por dia (BID) ou uma vez por dia (QD). CHOP (Ciclofosfamida, Vincristina, Doxorrubicina e Prednisona) foi administrado no dia 1 e 22, para os camundongos que receberam 225 mg/kg duas vezes por dia (225 mg/kg BID e CHOP). Os camundongos de controle, quer não receberam qualquer Composto 44 (veículo) ou receberam CHOP apenas (CHOP). O volume do tumor foi medido duas vezes por semana. Os animais foram sacrificados 28 dias após a primeira dose. (A) Eficácia do tratamento foi determinada por medição do volume médio do tumor ao longo do curso do tratamento. (B) Concentração (ng/ml) do Composto 44 foi medida no plasma de camundongos no dia 28, antes da administração (depressão) e três horas pós-administração (após). (C) Concentração (ng/g) do Composto 44 foi medida a partir de tecido de tumor a partir de camundongos no dia 28 três horas pós-administração.

[054] A Figura 8 é uma análise de Western blot e um gráfico que mostra o estado de metilação de histona a partir de amostras de tumor do modelo de xenoenxerto de WSU-DLCL2. Os tumores foram colhidos 28 dias após a injeção e as histonas foram extraídas. (A) Um Western blot foi sondado com anticorpos que reconhecem especificamente Lisina 27 trimetilada de proteínas histona H3 (H3K27me3) e de histona H3 total. (B) Estado de metilação de tumores foi determinada por ELISA. H3K27 tri-metilação foi detectado e normalizado para os níveis de histona H3 total.

[055] A Figura 9 é de quatro gráficos que demonstram o efeito da administração do Composto 44 e COP em um modelo de xenoenxerto SUDHL10 no crescimento de tumores e sobrevivência. Camundongos SCID foram injetados subcutaneamente com 1x107células de linfoma humano SUDHL10. Após os tumores atingiram um tamanho de aproximadamente 120 mm3, o Composto 44 foi administrado durante 28 dias, nas doses indicadas, duas vezes por dia (BID). COP (Ciclofosfamida, Vincristina, e Prednisona) foi administrada no dia 1 e 22 para os camundongos que receberam 250 mg/kg duas vezes por dia (250 mg/kg BID e COP). Os camundongos de controle não receberam nem o Composto 44 (veículo) ou apenas COP (COP). O volume do tumor foi medido duas vezes por semana. (A) Eficácia do tratamento foi determinada por medição do volume médio do tumor ao longo do curso do tratamento. O peso médio do tumor (B) foi determinado após os camundongos serem sacrificados no dia 28 após a primeira dosagem. (C) Para a análise de retardo do crescimento do tumor, o volume do tumor e SEM foram calculados para cada grupo de tratamento através da medição dos tumores duas vezes por semana durante 60 dias, ou até que o tumor atingiu 2000 mm3. (D) Curva de Kaplan-Meier descreve a taxa de sobrevivência dos camundongos tratados.

[056] A Figura 10 é de quatro gráficos que mostram a perfis farmacocinéticos e farmacodinâmicos após administração de COP e do Composto 44 no modelo de xenoenxerto SUDHL10. Os camundongos portadores de tumores foram sacrificados após 28 dias de tratamento e os tecidos foram colhidos. (A) Concentração (ng/ml) de Composto 44 foi medida no plasma de camundongos no dia 28, antes da administração (depressão) e pós-administração (após) por LC-MS/MS. Estado de metilação de vários tecidos a partir de camundongos portadores de tumor foram determinados por ELISA: (B) tumor, (C) baço, e (D) medula óssea. A tri-metilação de H3K27 foi detectada e normalizada para os níveis totais de histona H3.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[057] A presente invenção é baseada na descoberta de que os inibidores de EZH2 histona metiltransferase e outros agentes anticâncer podem ser usados em combinação para o tratamento de determinados tumores, com resultados superiores aos obtidos com o tratamento de tumores com inibidores da EZH2 histona- metiltransferase e os agentes anticâncer sozinhos. Em consequência, a presente invenção fornece uma composição compreendendo um inibidor da EZH2 histona metiltransferase e um ou mais outros agentes terapêuticos, e métodos para o seu uso para o tratamento de doenças no decurso das quais podem ser influenciadas através da modulação do estado de metilação das histonas e outras proteínas, por exemplo, câncer. Em uma determinada modalidade, a presente invenção apresenta uma composição que compreende um composto de Fórmula (IIa) e prednisona. A presente invenção também inclui métodos para as terapias de combinação compreendendo inibidor EZH2 de histona metiltransferase e um ou mais agentes terapêuticos, tais como um composto de Fórmula (IIa) e prednisona, para o tratamento do câncer, por exemplo, linfoma folicular (FL) e linfoma de células B grandes de células difusas (DCLBL). Especificamente, os métodos da presente invenção são úteis para tratar ou prevenir o câncer ou inibir a proliferação de células de câncer.

[058] EZH2 é uma histona metiltransferase que é a subunidade catalítica do complexo PRC2 que catalisa a mono até tri-metilação de lisina 27 em histona H3 (H3- K27). A trimetilação de Histona H3-K27 é um mecanismo para a supressão da transcrição de genes específicos que são próximos do sítio de modificação da histona. Esta trimetilação é conhecida por ser um marcador de câncer com uma expressão alterada no câncer, tal como câncer da próstata (ver, por exemplo, Publicação do Pedido de Patente US N°. 2003/0175736; incorporada aqui por referência na sua totalidade). Outros estudos forneceram evidências de uma ligação funcional entre a expressão de EZH2 desregulada, a repressão da transcrição e a transformação neoplásica. Varambally et al. (2002) Nature 419(6907):624-9 Kleer et al. (2003) Proc Natl Acad Sci EUA100(20):11606-11.

[059] Um aspecto da presente invenção refere-se a métodos para tratar ou aliviar um sintoma de câncer ou condição pré-cancerosa em um sujeito por administração a um sujeito que expressa um mutante de EZH2 de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de EZH2 e um ou mais outros agentes terapêuticos. O mutante de EZH2 da presente invenção refere-se a um polipeptídeo mutante de EZH2 ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo mutante de EZH2. Em certas modalidades, o mutante de EZH2 compreende uma ou mais mutações no seu domínio de bolsa de substrato (substrate pocket)tal como definido na SEQ ID NO: 6. Por exemplo, a mutação pode ser uma substituição, uma mutação pontual, uma mutação nonsense, uma mutação misssense, uma deleção, ou uma inserção.

[060] Ácidos nucleicos e polipeptídeos de EZH2 Humanos foram previamente descritos. Ver, por exemplo, Chen et al. (1996) Genomics 38:30-7 [746 aminoácidos]; N°. de Acessão de Swiss-Prot Q15910 [746 aminoácidos]; N°s. de Acessão do GenBank. NM_004456 e NP_004447 (isoforma a [751 aminoácidos]); e N°s. de Acessão do GenBank. NM_152998 e NP_694543 (isoforma b [707 aminoácidos]), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.

[061] Um modelo de estrutura de proteína EZH2 parcial com base na cadeia A da proteína do domínio de SET de ligação a receptor nuclear 1 (NSD1) corresponde aos resíduos de aminoácidos 533-732 da sequência de EZH2 de SEQ ID NO: 1.

[062] A sequência de aminoácidos correspondente do presente modelo de estrutura é fornecida abaixo. Os resíduos no domínio de bolsa de substrato estão sublinhados. Os resíduos no domínio de SET são mostrados em itálico. SCPCVIAQNFCEKFCQCSSECQNRFPGCRCKAQCNTKQCPCYLAVRECDPDLCLT CGAADHWDSKNVSCKNCSIQRGSKKHLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEY641C GEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFV674VDA677TRKGNKIR685FA687NHSVN PNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDYRYSQAD(SEQ ID NO: 6)

[063] Acredita-se que o sítio catalítico de EZH2 reside em um domínio conservado da proteína conhecida como o domínio de SET. A sequência de aminoácidos do domínio de SET de EZH2 é fornecida pela seguinte sequência parcial que abrange os resíduos de aminoácidos 613-726 da N°. de Acessão de Swiss-Prot Q15910 (SEQ ID NO: 1): HLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLN NDFVVDATRKGNKIRFANHSVNPNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDY (SEQ ID NO: 7). O resíduo de tirosina (Y) mostrado sublinhado na SEQ ID NO: 7 é Tyr641 (Y641) em N°. de Acessão de Swiss-Prot Q15910 (SEQ ID NO: 1).

[064] O domínio de SET de N°. de Acessão GenBank NP_004447 (SEQ ID NO: 3) abrange os resíduos de aminoácidos 618-731 e é idêntico a à SEQ ID NO: 6. O resíduo de tirosina correspondente a Y641 no N°. de Acessão de Swiss-Prot Q15910 mostrado sublinhado na SEQ ID NO: 7 é Tyr646 (Y646) no N°. de Acessão GenBank NP_004447 (SEQ ID NO: 3).

[065] O domínio de SET de N°. de Acessão GenBank NP_694543 (SEQ ID NO: 5) abrange os resíduos de aminoácidos 574-687 e é idêntico à SEQ ID NO: 7. O resíduo de tirosina correspondente a Y641 no N°. de Acessão de Swiss-Prot Q15910 mostrado sublinhado na SEQ ID NO: 7 é Tyr602 (Y602) no N°. de Acessão GenBank NP_694543 (SEQ ID NO: 5).

[066] A sequência de nucleotídeos que codifica o domínio de SET de N°. de Acessão GenBank NP_004447 é Catctattgctggcaccatctgacgtggcaggctgggggatttttatcaaagatcctgtgcagaaaaatgaattcatctc agaatactgtggagagattatttctcaagatgaagctgacagaagagggaaagtgtatgataaatacatgtgcagcttt ctgttcaacttgaacaatgattttgtggtggatgcaacccgcaagggtaacaaaattcgttttgcaaatcattcggtaaat ccaaactgctatgcaaaagttatgatggttaacggtgatcacaggataggtatttttgccaagagagccatccagactg gcgaagagctgttttttgattac (SEQ ID NO: 8), em que o códon que codifica Y641 é mostrado sublinhado.

[067] Para os fins deste documento, o resíduo de aminoácido Y641 de EZH2 humano deve ser entendido para se referir ao resíduo de tirosina que é ou corresponde a Y641 no N°. de Acessão de Swiss-Prot Q15910. Em que x pode ser qualquer resíduo de aminoácidos diferente de tirosina (Y)

[068] Além disso, para os fins deste documento, um mutante de Y641 de EZH2 humano, e, equivalentemente, um mutante de Y641 de EZH2, deve ser entendido para se referir a um EZH2 humano em que o resíduo de aminoácidos correspondente a Y641 de EZH2 humano do tipo selvagem é substituído por qualquer resíduo de aminoácido diferente se tirosina.

[069] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante de Y641 de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem apenas pela substituição de um único resíduo de aminoácido correspondente a Y641 de EZH2 humano do tipo selvagem por um resíduo de aminoácido diferente de tirosina.

[070] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante de Y641 de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem apenas pela substituição de fenilalanina (F) pelo único resíduo de aminoácidos correspondente a Y641 de EZH2 humano do tipo selvagem. O mutante de Y641 de EZH2 de acordo com a modalidade é chamado aqui de a Y641F mutante ou, equivalentemente, Y641F.

[071] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante de Y641 de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem apenas pela substituição de histidina (H) pelo único resíduo de aminoácidos correspondente a Y641 de EZH2 humano do tipo selvagem. O mutante de Y641 de EZH2 de acordo com a modalidade é chamado aqui de um mutante de Y641H ou, equivalentemente, Y641H.

[072] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante de Y641 de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem apenas pela substituição de asparagina (N) pelo único resíduo de aminoácidos correspondente a Y641 de EZH2 humano do tipo selvagem. O mutante de Y641 de EZH2 de acordo com a modalidade é chamado aqui de um mutante de Y641N ou, equivalentemente, Y641N.

[073] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante de Y641 de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem apenas pela substituição de serina (S) pelo único resíduo de aminoácidos correspondente a Y641 de EZH2 humano do tipo selvagem. O mutante de Y641 de EZH2 de acordo com a modalidade é chamado aqui de um mutante de Y641S ou, equivalentemente, Y641S.

[074] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante de Y641 de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem apenas pela substituição de cisteína (C) pelo único resíduo de aminoácidos correspondente a Y641 de EZH2 humano do tipo selvagem. O mutante de Y641 de EZH2 de acordo com a modalidade é chamado aqui de um mutante de Y641C ou, equivalentemente, Y641C.

[075] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante de A677 de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem apenas pela substituição de um aminoácido não alanina, de preferência, glicina (G) pelo único resíduo de aminoácidos correspondente a A677 de EZH2 humano do tipo selvagem. O mutante A677 de EZH2 de acordo com a modalidade é chamado aqui de um mutante A677, e, de preferência, um mutante A677G ou, equivalentemente, A677G.

[076] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante A687 de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem apenas pela substituição de um aminoácido não alanina, de preferência, valina (V) pelo único resíduo de aminoácidos correspondente a A687 de EZH2 humano do tipo selvagem. O mutante A687 de EZH2 de acordo com a modalidade é chamado aqui de um mutante A687 e, de preferência, um mutante A687V ou, equivalentemente, A687V.

[077] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante de R685 de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem apenas pela substituição de um aminoácido não arginina, de preferência, histidina (H) ou cisteína (C) pelo único resíduo de aminoácidos correspondente a R685 de EZH2 humano do tipo selvagem. O mutante R685 de EZH2 de acordo com a modalidade é chamado aqui de um mutante R685 e, de preferência, um mutante R685C ou um mutante R685H ou, equivalentemente, R685H ou R685C.

[078] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos de um mutante de EZH2 difere da sequência de aminoácidos de EZH2 humano do tipo selvagem em um ou mais resíduos de aminoácidos em seu domínio de bolsa de substrato como definido na SEQ ID NO: 6. O mutante de EZH2 de acordo com a modalidade é chamado aqui de um mutante de EZH2.

[079] Outra substituição de mutação de aminoácido exemplar inclui uma substituição na posição de aminoácido 677, 687, 674, 685, ou 641 da SEQ ID NO: 1, tal como, mas não se limitando a uma substituição de glicina (G) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 677 da SEQ ID NO: 1 (A677G); uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 687 da SEQ ID NO: 1 (A687V); uma substituição de metionina (M) pelo resíduo do tipo selvagem de valina (V) na posição de aminoácido 674 da SEQ ID NO: 1 (V674M); uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 685 da SEQ ID NO: 1 (R685H); uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 685 da SEQ ID NO: 1 (R685C); uma substituição de fenilalanina (F) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641F); uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641H); uma substituição de asparagina (N) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641N); uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641S); ou uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 641 da SEQ ID NO: 1 (Y641C).

[080] A mutação da presente invenção também inclui uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 322 da SEQ ID NO: 3 (N322S), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 288 da SEQ ID NO: 3 (R288Q), uma substituição de isoleucina (I) pelo resíduo do tipo selvagem de treonina (T) na posição de aminoácido 573 da SEQ ID NO: 3 (T573I), uma substituição de ácido glutâmico (E) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 664 da SEQ ID NO: 3 (D664E), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 458 da SEQ ID NO: 5 (R458Q), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 249 da SEQ ID NO: 3 (E249K), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 684 da SEQ ID NO: 3 (R684C), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 628 da SEQ ID NO: 21 (R628H), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de glutamina (Q) na posição de aminoácido 501 da SEQ ID NO: 5 (Q501H), uma substituição de asparagina (N) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 192 da SEQ ID NO: 3 (D192N), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 664 da SEQ ID NO: 3 (D664V), uma substituição de leucina (L) pelo resíduo do tipo selvagem de valina (V) na posição de aminoácido 704 da SEQ ID NO: 3 (V704L), uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de prolina (P) na posição de aminoácido 132 da SEQ ID NO: 3 (P132S), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 669 da SEQ ID NO: 21 (E669K), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 255 da SEQ ID NO: 3 (A255T), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 726 da SEQ ID NO: 3 (E726V), uma substituição de tirosina (Y) pelo resíduo do tipo selvagem de cisteína (C) na posição de aminoácido 571 da SEQ ID NO: 3 (C571Y), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de fenilalanina (F) na posição de aminoácido 145 da SEQ ID NO: 3 (F145C), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 693 da SEQ ID NO: 3 (N693T), uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de fenilalanina (F) na posição de aminoácido 145 da SEQ ID NO: 3 (F145S), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de glutamina (Q) na posição de aminoácido 109 da SEQ ID NO: 21 (Q109H), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de fenilalanina (F) na posição de aminoácido 622 da SEQ ID NO: 21 (F622C), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de glicina (G) na posição de aminoácido 135 da SEQ ID NO: 3 (G135R), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 168 da SEQ ID NO: 5 (R168Q), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de glicina (G) na posição de aminoácido 159 da SEQ ID NO: 3 (G159R), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 310 da SEQ ID NO: 5 (R310C), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 561 da SEQ ID NO: 3 (R561H), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 634 da SEQ ID NO: 21 (R634H), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de glicina (G) na posição de aminoácido 660 da SEQ ID NO: 3 (G660R), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 181 da SEQ ID NO: 3 (Y181C), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de histidina (H) na posição de aminoácido 297 da SEQ ID NO: 3 (H297R), uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de cisteína (C) na posição de aminoácido 612 da SEQ ID NO: 21 (C612S), uma substituição de tirosina (Y) pelo resíduo do tipo selvagem de histidina (H) na posição de aminoácido 694 da SEQ ID NO: 3 (H694Y), uma substituição de alanina (A) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 664 da SEQ ID NO: 3 (D664A), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de isoleucina (I) na posição de aminoácido 150 da SEQ ID NO: 3 (I150T), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de isoleucina (I) na posição de aminoácido 264 da SEQ ID NO: 3 (I264R), uma substituição de leucina (L) pelo resíduo do tipo selvagem de prolina (P) na posição de aminoácido 636 da SEQ ID NO: 3 (P636L), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de isoleucina (I) na posição de aminoácido 713 da SEQ ID NO: 3 (I713T), uma substituição de prolina (P) pelo resíduo do tipo selvagem de glutamina (Q) na posição de aminoácido 501 da SEQ ID NO: 5 (Q501P), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de lisina (K) na posição de aminoácido 243 da SEQ ID NO: 3 (K243Q), uma substituição de ácido aspártico (D) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 130 da SEQ ID NO: 5 (E130D), uma substituição de glicina (G) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 509 da SEQ ID NO: 3 (R509G), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 566 da SEQ ID NO: 3 (R566H), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 677 da SEQ ID NO: 3 (D677H), uma substituição de asparagina (N) pelo resíduo do tipo selvagem de lisina (K) na posição de aminoácido 466 da SEQ ID NO: 5 (K466N), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 78 da SEQ ID NO: 3 (R78H), uma substituição de metionina (M) pelo resíduo do tipo selvagem de lisina (K) na posição de aminoácido 1 da SEQ ID NO: 6 (K6M), uma substituição de leucina (L) pelo resíduo do tipo selvagem de serina (S) na posição de aminoácido 538 da SEQ ID NO: 3 (S538L), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de leucina (L) na posição de aminoácido 149 da SEQ ID NO: 3 (L149Q), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de leucina (L) na posição de aminoácido 252 da SEQ ID NO: 3 (L252V), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de leucina (L) na posição de aminoácido 674 da SEQ ID NO: 3 (L674V), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 656 da SEQ ID NO: 3 (A656V), uma substituição de ácido aspártico (D) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 731 da SEQ ID NO: 3 (Y731D), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 345 da SEQ ID NO: 3 (A345T), uma substituição de ácido aspártico (D) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 244 da SEQ ID NO: 3 (Y244D), uma substituição de triptofano (W) pelo resíduo do tipo selvagem de cisteína (C) na posição de aminoácido 576 da SEQ ID NO: 3 (C576W), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 640 da SEQ ID NO: 3 (N640K), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 675 da SEQ ID NO: 3 (N675K), uma substituição de tirosina (Y) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 579 da SEQ ID NO: 21 (D579Y), uma substituição de isoleucina (I) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 693 da SEQ ID NO: 3 (N693I), e uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 693 da SEQ ID NO: 3 (N693K).

[081] A mutação da presente invenção pode ser um frameshift na posição de aminoácido 730, 391, 461, 441, 235, 254, 564, 662, 715, 405, 685, 64, 73, 656, 718, 374, 592, 505, 730, ou 363 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21 ou a posição de nucleotídeo correspondente da sequência de ácidos nucleicos que codifica a SEQ ID NO: 3, 5, ou 21. A mutação de EZH2 pode também ser uma inserção de um ácido glutâmico (E) entre as posições de aminoácidos 148 e 149 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21. Um outro exemplo de mutação de EZH2 é uma deleção de ácido glutâmico (E) e leucina (L) na posição de aminoácidos 148 e 149 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21. O EZH2 mutante pode compreender ainda uma mutação nonsense na posição de aminoácido 733, 25, 317, 62, 553, 328, 58, 207, 123, 63, 137, ou 60 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21.

[082] As células heterozigóticas para EZH2 seriam esperadas para exibir um fenótipo maligno devido à formação eficiente de H3-K27me1 pela enzima WT e a eficiente transição, subsequente desta espécie progenitora para H3-K27me2, e, especialmente, H3-K27me3 por forma(s) de enzima mutante.

[083] Os resultados anteriores apontam a dependência no acoplamento enzimático entre as enzimas que realizam mono-metilação de H3-K27 e certas formas mutantes da EZH2 para patogênese em linfoma folicular e linfoma de células B grandes difusas. Por exemplo, as células que expressam mutante de Y641 de EZH2 podem ser mais sensíveis aos inibidores de EZH2 de molécula pequena do que as células que expressam WT EZH2. Especificamente, as células que expressam mutante de Y641 de EZH2 não apresentam crescimento reduzido, divisão ou proliferação, ou mesmo sofrem a apoptose ou necrose após o tratamento com inibidores de EZH2. Em contraste, as células que expressam WT EZH2 não são responsivas ao efeito antiproliferativo dos inibidores de EZH2 (Pedido de Patente US No. 61/381,684; aqui incorporado por referência na sua totalidade).

[084] Um aspecto da presente invenção é um método para tratar ou aliviar um sintoma de câncer ou condição pré-cancerosa em um sujeito por administração a um sujeito que expressa um mutante de EZH2 compreendendo uma mutação no domínio de bolsa de substrato tal como definido na SEQ ID NO: 6, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de EZH2, como descrito no presente documento, por exemplo, um composto de Fórmula (IIa) em combinação com outro agente adequado para ser administrado em conjunto simultaneamente, sequencialmente ou em alternância.

[085] Um outro aspecto da invenção é um método para inibição em um sujeito da conversão de H3-K27 para H3-K27 trimetilada. A inibição pode envolver a inibição em um sujeito a conversão de H3-K27 não metilada para H3-K27 monometilada, conversão de H3-K27 monometilada para H3-K27 dimetilada, conversão de H3-K27 dimetilada para H3-K27 trimetilada, ou qualquer combinação dos mesmos, incluindo, por exemplo, a conversão de H3-K27 monometilada para H3-K27 dimetilada e conversão de H3-K27 dimetilada para H3-K27 trimetilada. Como usado no presente documento, H3-K27 não metilada refere-se à histona H3 sem nenhum grupo metil covalentemente ligado ao grupo amino de lisina 27. Como usado no presente documento, H3-K27 monometilada refere-se à histona H3 com um único grupo metil covalentemente ligado ao grupo amino de lisina 27. H3-K27 monometilada é também chamada aqui de H3-K27me1. Como usado no presente documento, H3-K27 dimetilada refere-se à histona H3 com dois grupos metil covalentemente ligados ao grupo amino de lisina 27. H3-K27 dimetilada é também chamada aqui de H3-K27me2. Como usado no presente documento, H3-K27 trimetilada refere-se à histona H3 com três grupos metil covalentemente ligados ao grupo amino de lisina 27. H3-K27 trimetilada é também chamada aqui de H3-K27me3.

[086] Histona H3 é uma proteína de 136 aminoácidos de comprimento, a sequência da qual é conhecida. Ver, por exemplo, N°. de Acessão GenBank CAB02546, o conteúdo do qual sendo aqui incorporado por referência. Como divulgado adicionalmente aqui, além da histona H3 de comprimento completo, os fragmentos de peptídeo de histona H3 compreendendo o resíduo de lisina correspondente a K27 de histona H3 de comprimento completo podem ser usados como substrato para EZH2 (e igualmente para as formas mutantes de EZH2) para avaliar a conversão de H3-K27m1 para H3-K27m2 e conversão de H3-K27m2 para H3-K27m3. Em uma modalidade, tal fragmento de peptídeo corresponde a resíduos de aminoácidos 21-44 de histona H3. Tal fragmento de peptídeo tem a sequência de aminoácidos LATKAARKSAPATGGVKKPHRYRP (SEQ ID NO: 19).

[087] A composição da presente invenção compreende um composto de Fórmula (IIa) e um ou mais outros agentes terapêuticos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Os compostos de fórmula (IIa) são adequados para a administração, como parte de uma terapia de combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos ou modalidade de tratamento, adequado para ser administrado em conjunto, sequencialmente ou em alternância. Outros compostos de Fórmula (IIa) adequados para os métodos da invenção são descritos na Publicação US 20120264734, os conteúdos dos quais são aqui incorporados por referência na sua totalidade.

[088] A presente invenção fornece os compostos de Fórmula (IIa): ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma ou ésteres dos mesmos, em que R7, R8, Ra, e Rb são como definidos no presente documento.

[089] Os compostos de Fórmula (IIa) podem incluir uma ou mais das seguintes características:

[090] Por exemplo, cada um de Ra e Rb independentemente é H ou C1-C6 alquil opcionalmente, substituído com um ou mais -Q3-T3.

[091] Por exemplo, um de Ra e Rb é H.

[092] Por exemplo, Ra e Rb, juntos com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquil de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomos adicionais ao átomo de N (por exemplo, azetidinil, pirrolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oxazolidinil, isoxazolidinil, triazolidinil, piperidinil, 1,2,3,6-tetra- hidropiridinil, piperazinil, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oxazepanil, 2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptanil, 2,5-diazabiciclo[2,2,1]heptanil, e semelhantes) e o anel é opcionalmente, substituído com um ou mais -Q3-T3.

[093] Por exemplo, Ra e Rb, juntos com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam azetidinil, pirrolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oxazolidinil, isoxazolidinil, triazolidinil, tetra-hidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinil, piperazinil, ou morfolinil, e o anel é opcionalmente, substituído com um ou mais -Q3-T3.

[094] Por exemplo, um ou mais -Q3-T3 são oxo.

[095] Por exemplo, Q3 é um ligante ou ligante de C1-C3 alquil substituído ou não substituído.

[096] Por exemplo, T3 é H, halo, heterocicloalquil de 4 a 7 membros, C1-C3 alquil, ORd, CO-ORd,-S(O)2Rd, ou -NRdRe.

[097] Por exemplo, cada um de Rd e Re sendo independentemente H ou C1C6alquil.

[098] Por exemplo, R7 é C3-C8 cicloalquil ou heterocicloalquil de 4 a 7 membros, cada um, opcionalmente, substituído com um ou mais -Q5-T5.

[099] Por exemplo, R7 é piperidinil, tetra-hidropirano, tetra-hidro-2H-tiopiranil, ciclopentil, ciclo-hexil, pirrolidinil, ou ciclo-heptil, cada um, opcionalmente, substituído com um ou mais -Q5-T5.

[0100] Por exemplo, R7 é ciclopentil ciclo-hexil ou tetra-hidro-2H-tiopiranil, cada um dos quais é opcionalmente, substituído com um ou mais -Q5-T5.

[0101] Por exemplo, Q5 é NHC(O) e T5 é C1-C6 alquil ou C1-C6 alcóxi, cada

[0102] Por exemplo, um ou mais -Q5-T5 são oxo.

[0103] Por exemplo, R7 é 1-óxido-tetra-hidro-2H-tiopiranil ou 1,1-dióxido-tetra- hidro-2H-tiopiranil.

[0104] Por exemplo, Q5 é um ligante e T5 é amino, mono-C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino.

[0105] Por exemplo, Q5 é CO, S(O)2, ou NHC(O); e T5 é C1-C6 alquil, C1-C6 alcóxil, C3-C8 cicloalquil, ou heterocicloalquil de 4 a 7 membros.

[0106] Por exemplo, R8 é H ou C1-C6 alquil que é opcionalmente, substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidróxil, CO-OH, C(O)O-C1-C6 alquil, ciano, C1-C6 alcóxil, amino, mono-C1-C6 alquilamino, e di-C1-C6 alquilamino.

[0107] Por exemplo, R8 é H, metil, ou etil.

[0108] Em uma modalidade, o composto da invenção é o Composto 44 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0109] Em uma modalidade, o composto da invenção é o composto em si, isto é, a base livre ou molécula nua. Em uma outra modalidade, o composto é um sal do mesmo, por exemplo, um sal de mono-HCl ou tri-HCl, sal de mono-HBr ou tri-HBr da molécula nua.

[0110] Compostos representativos da presente invenção incluem os compostos listados na Tabela 1. Na tabela abaixo, cada ocorrência de deve ser construída como

[0111] Como usado no presente documento, “alquil”, “C1, C2, C3, C4, C5 ou C6 alquil” ou “C1-C 6 alquil” é destinado a incluir grupos de hidrocarboneto alifáticos saturados (linear) de cadeia linear C1, C2, C3, C4, C5 ou grupos de hidrocarboneto alifáticos saturados ramificados C6 e C3, C4, C5 ou C6. Por exemplo, C1-C6 alquil é destinado a incluir grupos C1, C2, C3, C4, C5 e C6 alquil. Exemplos de alquil incluem, frações tendo de um a seis átomos de carbono, como, mas não se limitando a, metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, s-butil, t-butil, n-pentil, s-pentil ou n-hexil.

[0112] Em certas modalidades, um alquil de cadeia linear ou ramificada tem seis ou menos átomos de carbono (por exemplo, C1-C6 para cadeia linear, C3-C6 para cadeia ramificada), e em uma outra modalidade, um alquil de cadeia linear ou ramificada tem quatro ou menos átomos de carbono.

[0113] Como usado no presente documento, o termo “cicloalquil” refere-se a um sistema (por exemplo, anéis fundidos, em ponte ou espiros) de mono o multi-anel de hidrocarboneto não aromático saturado ou insaturado tendo 3 a 30 átomos de carbono (por exemplo, C3-C10). Exemplos de cicloalquil incluem, mas não se limitam a, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclo-hexil, ciclo-heptil, ciclo-octil, ciclopentenil, ciclo-hexenil, ciclo-heptenil, e adamantil. O termo "heterocicloalquil" refere-se a um sistema de anel saturado ou insaturado não aromático monocíclico de 3 a 8 membros, bicíclico de 7 a 12 membros (anéis fundidos, em ponte ou espiro), ou tricíclico de 11 a 14 membros (anéis fundidos, em ponte ou espiro) tendo um ou mais heteroátomos (tais como O, N, S, ou Se), a menos que especificado de outro modo. Exemplos de grupos heterocicloalquil incluem, mas não se limitam a, piperidinil, piperazinil, pirrolidinil, dioxanil, tetra-hidrofuranil, isoindolinil, indolinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oxazolidinil, isoxazolidinil, triazolidinil, tetra-hidrofuranil, oxiranil, azetidinil, oxetanil, tietanil, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinil, tetra-hidropiranil, di-hidropiranil, piranil, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oxazepanil, 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptanil, 2,5- diazabiciclo[2,2,1]heptanil, 2-oxa-6-azaspiro[3,3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3,3]heptanil, 1,4-dioxa-8-azaspiro[4,5]decanil e semelhantes.

[0114] O termo “alquil opcionalmente substituído” refere-se a alquil não substituído ou alquil tendo substituintes designados substituindo um ou mais átomos de hidrogênio em um ou mais carbonos da cadeia principal de hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquil, alquenil, alquinil, halogênio, hidróxil, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcóxi carbonilóxi, arilóxi carbonilóxi, carbóxilato, alquilcarbonil, arilcarbonil, alcóxi carbonil, aminocarbonil, alquilaminocarbonil, dialquilaminocarbonil, alquiltiocarbonil, alcóxil, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoil e ureido), amidino, imino, sulfidril, alquiltio, ariltio, tiocarbóxilato, sulfatos, alquilassulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, ciano, azido, heterociclil, alquilaril, ou uma fração aromática ou heteroaromática.

[0115] Uma fração “arilalquil” ou “aralquil” é um alquil substituído com um aril (por exemplo, fenilmetil (benzil)). Uma fração “alquilaril” é um aril substituído com um alquil (por exemplo, metilfenil).

[0116] Como usado no presente documento, “ligante de alquil” é destinado a incluir C1, C2, C3, C4, C5 ou C6 grupos de hidrocarbonetos alifáticos divalentes saturados de cadeia reta (linear) e grupos de hidrocarbonetos alifáticos saturados ramificados C3, C4, C5 ou C6. Por exemplo, o ligante de alquil C1-C6é destinado a incluir grupos de ligante de alquil C1, C2, C3, C4, C5 e C6. Exemplos de ligante de alquil incluem, frações tendo de um a seis átomos de carbono, como, mas não se limitando a, metil (-CH2-), etil (-CH2CH2-), n-propil (-CH2CH2CH2-), i-propil (-CHCH3CH2-), n-butil (-CH2CH2CH2CH2-), s-butil (-CHCH3CH2CH2-), i-butil (-C(CH3) 2CH2-), n-pentil (- CH2CH2CH2CH2CH2-), s-pentil (-CHCH3CH2CH2CH2-) ou n-hexil (- CH2CH2CH2CH2CH2CH2-).

[0117] “Alquenil” inclui grupos alifáticos insaturados análogos no comprimento e possível substituição pelos grupos alquil descritos acima, mas que contêm pelo menos uma ligação dupla. Por exemplo, o termo “alquenil” inclui grupos alquenil de cadeia linear (por exemplo, etenil, propenil, butenil, pentenil, hexenil, heptenil, octenil, nonenil, decenil), e grupos alquenil ramificados. Em certas modalidades, um grupo alquenil de cadeia linear ou ramificada tem seis ou menos átomos de carbono na sua cadeia principal (por exemplo, C2-C6 para cadeia linear, C3-C6 para cadeia ramificada). O termo “C2-C6” inclui grupos alquenil contendo dois a seis átomos de carbono. O termo “C3-C6” inclui grupos alquenil contendo três a seis átomos de carbono.

[0118] O termo “opcionalmente substituído alquenil” refere-se um alquenil ou alquenil não substituído tendo substituintes designados substituindo um ou mais átomos de hidrogênio em um ou mais átomos de carbono da cadeia principal de hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquil, alquenil, alquinil, halogênio, hidróxil, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcóxi carbonilóxi, arilóxi carbonilóxi, carbóxilato, alquilcarbonil, arilcarbonil, alcóxi carbonil, aminocarbonil, alquilaminocarbonil, dialquilaminocarbonil, alquiltiocarbonil, alcóxil, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoil e ureido), amidino, imino, sulfidril, alquiltio, ariltio, tiocarbóxilato, sulfatos, alquilassulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, ciano, heterociclil, alquilaril, ou uma fração aromática ou heteroaromática.

[0119] “Alquinil” inclui grupos alifáticos insaturados análogos no comprimento e possível substituição pelos grupos alquil descritos acima, mas que contêm pelo menos uma ligação tripla. Por exemplo, “alquinil” inclui grupos alquinil de cadeia linear (por exemplo, etinil, propinil, butinil, pentinil, hexinil, heptinil, octinil, noninil, decinil), e grupos alquinil ramificados. Em certas modalidades, um grupo alquinil de cadeia linear ou ramificada tem seis ou menos átomos de carbono na sua cadeia principal (por exemplo, C2-C6 para cadeia linear, C3-C6 para cadeia ramificada). O termo “C2-C6” inclui grupos alquinil contendo dois a seis átomos de carbono. O termo “C3-C6” inclui alquinil grupos contendo três a seis átomos de carbono.

[0120] O termo “alquinil opcionalmente substituído” refere-se um alquinil não substituído ou alquinil tendo substituintes designados substituindo um ou mais átomos de hidrogênio em um ou mais átomos de carbono da cadeia principal de hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquil, alquenil, alquinil, halogênio, hidróxil, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcóxi carbonilóxi, arilóxi carbonilóxi, carbóxilato, alquilcarbonil, arilcarbonil, alcóxi carbonil, aminocarbonil, alquilaminocarbonil, dialquilaminocarbonil, alquiltiocarbonil, alcóxil, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoil e ureido), amidino, imino, sulfidril, alquiltio, ariltio, tiocarbóxilato, sulfatos, alquilassulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, ciano, azido, heterociclil, alquilaril, ou uma fração aromática ou heteroaromática.

[0121] Outras frações opcionalmente substituídas (tais como cicloalquil, heterocicloalquil, aril, ou heteroaril opcionalmente substituído) incluem ambas as frações não substituídas quanto as frações tendo um ou mais dos substituintes designados. Por exemplo, heterocicloalquil substituído inclui os substituídos com um ou mais grupos alquil, tais como 2,2,6,6-tetrametil-piperidinil e 2,2,6,6-tetrametil- 1,2,3,6-tetra-hidropiridinil.

[0122] “Aril” inclui grupos com aromaticidade, incluindo sistemas “conjugados,” ou multicíclicos com pelo menos um anel aromático e não contém qualquer heteroátomo na estrutura do anel. Exemplos incluem fenil, benzil, 1,2,3,4- tetra-hidronaftalenil, etc..

[0123] Grupos “Heteroaril” são grupos aril, como definido acima, exceto que tendo de um a quatro heteroátomos na estrutura do anel, e podem também ser chamados de “aril heterociclos” ou “heteroaromáticos.” Como usado no presente documento, o termo “heteroaril” é destinado a incluir um anel heterocíclico aromático estável monocíclico de 5, 6, ou 7 membros ou bicíclico de 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 membros que consiste em átomos de carbono e um ou mais heteroátomos, por exemplo, 1 ou 1-2 ou 1-3 ou 1-4 ou 1-5 ou 1-6 heteroátomos, ou por exemplo,1, 2, 3, 4, 5, ou 6 heteroátomos, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre. O átomo de nitrogênio pode ser substituído ou não substituído (isto é, N ou NR em que R é H ou outros substituintes, como definido). Os heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem, opcionalmente ser oxidados (isto é, NDO e S(O)p, onde p = 1 ou 2). Deve-se notar que o número total de átomos S e O no heterociclo aromático não é mais que 1.

[0124] Exemplos de grupos heteroaril incluem pirrol, furano, tiofeno, tiazol, isotiazol, imidazol, triazol, tetrazol, pirazol, oxazol, isoxazol, piridina, pirazina, piridazina, pirimidina, e semelhantes.

[0125] Além disso, os termos “aril” e “heteroaril” include multicíclico aril e heteroaril grupos, por exemplo, tricíclico, bicíclico, por exemplo, naftaleno, benzoxazol, benzodioxazol, benzotiazol, benzoimidazol, benzotiofeno, metilenodioxifenil, quinolina, isoquinolina, naftridina, indol, benzofurano, purina, benzofurano, deazapurina, indolizina.

[0126] No caso de anéis multicíclicos aromáticos, apenas um dos anéis precisa ser aromático (por exemplo, 2,3-di-hidroindol), embora todos os anéis possam ser aromáticos (por exemplo, quinolina). O segundo anel também pode ser fundido ou em ponte.

[0127] O anel cicloalquil, heterocicloalquil, aril, ou heteroaril pode ser substituído em uma ou mais posições do anel (por exemplo, o heteroátomo ou carbono formador de anel tal como N) com tais substituintes como descrito acima, por exemplo, alquil, alquenil, alquinil, halogênio, hidróxil, alcóxi, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcóxi carbonilóxi, arilóxi carbonilóxi, carbóxilato, alquilcarbonil, alquilaminocarbonil, aralquilaminocarbonil, alquenilaminocarbonil, alquilcarbonil, arilcarbonil, aralquilcarbonil, alquenilcarbonil, alcóxi carbonil, aminocarbonil, alquiltiocarbonil, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoil e ureido), amidino, imino, sulfidril, alquiltio, ariltio, tiocarbóxilato, sulfatos, alquilassulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, ciano, azido, heterociclil, alquilaril, ou uma fração aromática ou heteroaromática. Os grupos aril e heteroaril também podem ser fundidos ou em ponte com anéis alicíclicos ou heterocíclicos, que não são aromáticos de modo a formar um sistema multicíclico (por exemplo, tetralina, metilenodioxifenil).

[0128] Como usado no presente documento, “carbociclo” ou “anel carbocíclico” é destinado a incluir qualquer anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico estável tendo o número especificado de carbonos, qualquer um dos quais podendo ser saturado, insaturado, ou aromático. Carbociclo inclui cicloalquil e aril. Por exemplo, um carbociclo C3-C14 é destinado a incluir um anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico tendo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 átomos de carbono. Exemplos de carbociclos incluem, mas não se limitam a, ciclopropil, ciclobutil, ciclobutenil, ciclopentil, ciclopentenil, ciclo-hexil, ciclo-heptenil, ciclo-heptil, ciclo-heptenil, adamantil, ciclo-octil, ciclo-octenil, ciclo-octadienil, fluorenil, fenil, naftil, indanil, adamantil e tetra-hidronaftil. Anéis em ponte são também incluídos na definição de carbociclo, incluindo, por exemplo, [3,3,0]biciclo-octano, [4,3,0]biciclononano, [4,4,0]biciclodecano e [2,2,2]biciclo-octano. Um anel em ponte ocorre quando um ou mais átomos de carbono se ligam a dois átomos de carbono não adjacentes. Em uma modalidade, os anéis em ponte são um ou dois átomos de carbono. Nota-se que uma ponte sempre converte um anel monocíclico em um anel tricíclico. Quando um anel é em ponte, os substituintes recitados para o anel podem também estar presentes na ponte. Os anéis fundidos (por exemplo, naftil, tetra-hidronaftil) e espiro são também incluídos.

[0129] Como usado no presente documento, “heterociclo” ou “grupo heterocíclico” inclui qualquer estrutura de anel (saturado, insaturado, ou aromático) que contém pelo menos um heteroátomo do anel (por exemplo, N, O ou S). Heterociclo inclui heterocicloalquil e heteroaril. Exemplos de heterociclos incluem, mas não se limitam a, morfolino, pirrolidina, tetra-hidrotiofeno, piperidina, piperazina, oxetano, pirano, tetra-hidropirano, azetidina, e tetra-hidrofurano.

[0130] Exemplos de grupos heterocíclicos incluem, mas não se limitam a, acridinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benzotiofenil, benzoxazolil, benzoxazolinil, benzotiazolil, benzotriazolil, benzotetrazolil, benzisoxazolil, benzisotiazolil, benzimidazolinil, carbazolil, 4aH-carbazolil, carbolinil, cromanil, cromenil, cinolinil, deca-hidroquinolinil, 2H,6H-1,5,2-ditiazinil, di- hidrofuro[2,3-b]tetra-hidrofurano, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, indolnil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, isatinil, isobenzofuranil, isocromanil, isoindazolil, isoindolinil, isoindolil, isoquinolinil, isotiazolil, isoxazolil, metilenodioxifenil, morfolinil, naftiridinil, octa-hidroisoquinolinil, oxadiazolil, 1,2,3-oxadiazolil, 1,2,4-oxadiazolil, 1,2,5-oxadiazolil, 1,3,4-oxadiazolil, 1,2,4-oxadiazol 5(4H)-ona, oxazolidinil, oxazolil, oxindolil, pirimidinil, fenanthridinil, fenantrolinil, fenazinil, fenotiazinil, fenoxathinil, fenoxazinil, fthalazinil, piperazinil, piperidinil, piperidonil, 4-piperidonil, piperonil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolil, piridazinil, pirido-oxazol, piridoimidazol, piridotiazol, piridinil, piridil, pirimidinil, pirrolidinil, pirrolinil, 2H-pirrolil, pirrolil, quinazolinil, quinolinil, 4H-quinolizinil, quinoxalinil, quinuclidinil, tetra-hidrofuranil, tetra-hidroisoquinolinil, tetra-hidroquinolinil, tetrazolil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,3,4- tiadiazolil, tiantrenil, tiazolil, tienil, tienotiazolil, tieno-oxazolil, tienoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, 1,3,4-triazolil e xantenil.

[0131] O termo “substituído,” como usado no presente documento, significa que qualquer um ou mais átomos de hidrogênio no átomo designado é substituído com a seleção a partir de grupos indicados, desde que a valência normal do átomo designado não seja excedida, e que a substituição resulte em um composto estável. Quando um substituinte é oxo ou ceto (isto é, =O), então, 2 átomos de hidrogênio sobre o átomo são substituídos. Os substituintes ceto não estão presentes em frações aromáticas. Ligações duplas do anel, como usado no presente documento, são ligações duplas que são formadas entre dois átomos de anel adjacentes (por exemplo, C=C, C=N ou N=N). “Composto estável” e “estrutura estável” são destinados a indicar um composto que é suficientemente robusto para sobreviver o isolamento a um grau útil de pureza a partir da mistura de reação, e formulação em um agente terapêutico eficaz.

[0132] Quando uma ligação a um substituinte é mostrada cruzar uma ligação que liga dois átomos em um anel, então tal substituinte pode estar ligado a qualquer átomo no anel. Quando um substituinte é listado sem indicação do átomo através do qual esse substituinte está ligado ao resto do composto de uma determinada fórmula, então tal substituinte pode ser ligado através de qualquer átomo em tal fórmula. As combinações de substituintes e/ou variáveis são permitidas, mas apenas se essas combinações resultam em compostos estáveis.

[0133] Quando qualquer variável (por exemplo, R1) ocorre mais do que uma vez em qualquer constituinte ou fórmula para um composto, a sua definição em cada ocorrência é independente da sua definição em qualquer outra ocorrência. Assim, por exemplo, se um grupo é apresentado como sendo substituído com 0-2 grupos R1, em seguida, o grupo pode ser opcionalmente substituído com até duas frações R1 e R1 em cada ocorrência é selecionado independentemente da definição de R1. Além disso, as combinações de substituintes e/ou variáveis são permitidas, mas apenas se essas combinações resultam em compostos estáveis.

[0134] O termo "hidróxi"ou "hidróxil"inclui grupos com um -OH ou -O-.

[0135] Tal como usado no presente documento, "halo" ou "halogênio"refere- se a átomos de flúor, cloro, bromo e iodo. O termo "per-halogenado" refere-se genericamente a uma porção em que todos os átomos de hidrogênio são substituídos por átomos de hidrogênio. O termo "haloalquil" ou "haloalcóxil"refere-se a um grupo alquil ou alcóxi substituído com um ou mais átomos de halogênio.

[0136] O termo "carbonil" inclui compostos e frações que contêm um carbono ligado por uma ligação dupla a um átomo de oxigênio. Exemplos de porções que contêm um carbonil incluem, mas não se limitam a, aldeídos, cetonas, ácidos carboxílicos, amidas, ésteres, anidridos, etc.

[0137] O termo “carbóxil” refere-se a -CO-OH ou seus alquil ésteres C1-C6.

[0138] “Acil” inclui frações que contêm o radical acil (R-C(O)-) ou um grupo carbonil. “Acil Substituído” inclui grupos acil em que um ou mais dos átomos de hidrogênio são substituídos por, por exemplo, grupos alquil, grupos alquinil, halogênio, hidróxil, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcóxi carbonilóxi, arilóxi carbonilóxi, carbóxilato, alquilcarbonil, arilcarbonil, alcóxi carbonil, aminocarbonil, alquilaminocarbonil, dialquilaminocarbonil, alquiltiocarbonil, alcóxil, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoil e ureido), amidino, imino, sulfidril, alquiltio, ariltio, tiocarbóxilato, sulfatos, alquilassulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, ciano, azido, heterociclil, alquilaril, ou uma fração aromática ou heteroaromática.

[0139] “Aroil” inclui frações com um aril ou fração heteroaromática ligada a um grupo carbonil. Exemplos de grupos aroil incluem fenilcarbóxi, naftil carbóxi, etc..

[0140] “Alcóxi alquil,” “alquilaminoalquil,” e “tioalcóxi alquil” incluem grupos alquil, como descrito acima, em que átomos de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre substituem um ou mais átomos de carbono da cadeia principal de hidrocarboneto.

[0141] O termo “alcóxi” ou “alcóxil” inclui grupos alquil, alquenil e alquinil substituídos e não substituídos, covalentemente ligados a um átomo de oxigênio. Exemplos de grupos alcóxi ou radicais alcóxil incluem, mas não se limitam a, grupos metóxi, etóxi, isopropilóxi, propóxi, butóxi e pentóxi. Exemplos de grupos alcóxi substituídos incluem grupos alcóxi halogenado. Os grupos alcóxi podem ser substituídos com grupos tais como alquenil, alquinil, halogênio, hidróxil, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcóxi carbonilóxi, arilóxi carbonilóxi, carbóxilato, alquilcarbonil, arilcarbonil, alcóxi carbonil, aminocarbonil, alquilaminocarbonil, dialquilaminocarbonil, alquiltiocarbonil, alcóxil, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino, e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoil e ureido), amidino, imino, sulfidril, alquiltio, ariltio, tiocarbóxilato, sulfatos, alquilassulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, ciano, azido, heterociclil, alquilaril, ou uma fração aromática ou heteroaromática. Exemplos de grupos alcóxi substituído com halogênio incluem, mas não se limitam a, fluorometóxi, difluorometóxi, trifluorometóxi, clorometóxi, diclorometóxi e triclorometóxi.

[0142] O termo “éter” ou “alcóxi” inclui compostos ou frações que contêm um oxigênio ligado a dois átomos de carbono ou heteroátomos. Por exemplo, o termo inclui “alcóxi alquil,” que refere-se a um grupo alquil, alquenil, ou alquinil ligado covalentemente a um átomo de oxigênio que é ligado covalentemente a um grupo alquil.

[0143] O termo “éster” inclui compostos ou frações que contêm um carbono ou um heteroátomo ligado a um átomo de oxigênio que é ligado ao carbono de um grupo carbonil. O termo “éster” inclui grupos alcóxi carbóxi tais como metóxi carbonil, etóxi carbonil, propóxi carbonil, butóxi carbonil, pentóxi carbonil, etc..

[0144] O termo “tioalquil” inclui compostos ou frações que contêm um grupo alquil conectado com um átomo de enxofre. Os grupos tioalquil podem ser substituídos com grupos tais como alquil, alquenil, alquinil, halogênio, hidróxil, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcóxi carbonilóxi, arilóxi carbonilóxi, carbóxilato, ácido carboxílico, alquilcarbonil, arilcarbonil, alcóxi carbonil, aminocarbonil, alquilaminocarbonil, dialquilaminocarbonil, alquiltiocarbonil, alcóxil, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoil e ureido), amidino, imino, sulfidril, alquiltio, ariltio, tiocarbóxilato, sulfatos, alquilassulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, ciano, azido, heterociclil, alquilaril, ou uma fração aromática ou heteroaromática.

[0145] O termo “tiocarbonil” ou “tiocarbóxi” inclui compostos e frações que contêm um carbono conectado com uma ligação dupla a um átomo de enxofre.

[0146] O termo “tioéter” inclui frações que contêm um átomo de enxofre ligado a dois átomos de carbono ou heteroátomos. Exemplos de tioéteres incluem, mas não se limitam a alctioalquilas, alctioalquenilas, e alctioalquinilas. O termo “alctioalquilas” incluem frações com um grupo alquil, alquenil, ou alquinil ligado a um átomo de enxofre que é ligado a um grupo alquil. De modo similar, o termo “alctioalquenilas” refere-se a frações em que um grupo alquil, alquenil ou alquinil é ligado a um átomo de enxofre que é ligado covalentemente a um grupo alquenil; e alctioalquinilas” refere- se a frações em que um grupo alquil, alquenil ou alquinil é ligado a um átomo de enxofre que é ligado covalentemente a um grupo alquinil.

[0147] Como usado no presente documento, “amina” ou “amino” refere-se a - NH2 não substituído ou substituído. “Alquilamino” inclui grupos de compostos em que nitrogênio de -NH2 é ligado a pelo menos um grupo alquil. Exemplos de grupos alquilamino incluem benzilamino, metilamino, etilamino, fenotilamino, etc. “Dialquilamino” inclui grupos em que o nitrogênio de -NH2 é ligado a pelo menos dois grupos alquil adicionais. Exemplos de grupos dialquilamino incluem, mas não se limitam a, dimetilamino e dietilamino. “Arilamino” e “diarilamino” incluem grupos em que o nitrogênio é ligado a pelo menos um ou dois grupos aril, respectivamente. “Aminoaril” e “aminoarilóxi” refere-se a aril e arilóxi substituído com amino. “Alquilarilamino,” “alquilaminoaril” ou “arilaminoalquil” refere-se a um grupo amino que é ligado a pelo menos um grupo alquil e pelo menos um grupo aril. “Alcaminoalquil” refere-se a um grupo alquil, alquenil, ou alquinil ligado a um átomo de nitrogênio que é também ligado a um grupo alquil. “Acilamino” inclui grupos em que nitrogênio é ligado a um grupo acil. Exemplos de acilamino incluem, mas não se limitam a, grupos alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoil e ureido.

[0148] O termo “amida” ou “aminocarbóxi” inclui compostos ou frações que contêm um átomo de nitrogênio que é ligado ao carbono de um grupo carbonil ou um grupo tiocarbonil. O termo inclui grupos “alcaminocarbóxi” que incluem grupos alquil, alquenil ou alquinil ligados a um grupo amino que é ligado ao carbono de um grupo carbonil ou tiocarbonil. Também inclui grupos “arilaminocarbóxi” que incluem frações aril ou heteroaril ligadas a um grupo amino que é ligado ao carbono de um grupo carbonil ou tiocarbonil. Os termos “alquilaminocarbóxi”, “alquenilaminocarbóxi”, “alquinilaminocarbóxi” e “arilaminocarbóxi” incluem frações em que as frações alquil, alquenil, alquinil e aril, respectivamente, são ligadas a um átomo de nitrogênio que é por sua vez ligada ao carbono de um grupo carbonil. Amidas podem ser substituídas com substituintes tais como alquil de cadeia linear, alquil ramificado, cicloalquil, aril, heteroaril ou heterociclo. Substituintes em grupos amida podem ser ainda substituídos.

[0149] Os compostos da presente invenção que contêm átomos de nitrogênio podem ser convertidos em N-óxidos por tratamento com um agente oxidante (por exemplo, ácido 3-cloroperoxibenzóico (mCPBA) e/ou peróxidos de hidrogênio) para se obter outros compostos da presente invenção. Assim, todos os compostos contendo nitrogênio mostrados e reivindicados são considerados, quando permitido pela valência e estrutura, como incluindo tanto o composto como mostrado quanto o seu N-óxido derivado (que pode ser designado como NDO ou N+-O-). Além disso, em outros casos, os nitrogênios nos compostos da presente invenção podem ser convertidos em compostos N-hidróxi ou N-alcóxi. Por exemplo, os compostos N- hidróxi podem ser preparados por oxidação da amina parental através de um agente oxidante, tal como mCPBA. Todos os compostos contendo nitrogênio mostrados e reivindicados são também considerados, quando permitido pela valência e a estrutura, para cobrir tanto o composto como mostrado quanto os seus N-hidróxi (isto é, N-OH) e derivados N-alcóxi (ou seja, N-OR, em que R é C1-C 6 alquinil, C1-C6 alquenil, C1-C6 alquinil substituído ou não substituído, carbociclo de 3 a 14 membros ou heterociclo de 3 a 14 membros).

[0150] No presente relatório descritivo, a fórmula estrutural do composto representa um determinado isômero para a conveniência em alguns casos, mas a presente invenção inclui todos os isômeros tais como isômeros geométricos, isômeros ópticos baseados em um carbono assimétrico, estereoisômeros, tautômeros, e semelhantes. Além disso, um polimorfismo de cristal pode estar presente para os compostos representados pela fórmula. Note-se que qualquer forma de cristal, mistura de formas de cristal, ou um anidrido ou um hidrato do mesmo está incluído no escopo da presente invenção. Além disso, o chamado metabólito que é produzido por degradação do presente composto in vivo está incluído no escopo da presente invenção.

[0151] "Isomerismo" significa compostos que têm fórmulas moleculares idênticas mas que diferem na sequência da ligação dos seus átomos ou no arranjo dos seus átomos no espaço. Os isômeros que diferem no arranjo dos seus átomos no espaço são denominados "estereoisômeros". Os estereoisômeros que não são imagens no espelho um do outro são denominados "diastereisômeros"e estereoisômeros que são imagens de espelho não sobreponíveis um do outro são denominados "enantiômeros"ou por vezes, isômeros ópticos. Uma mistura que contém quantidades iguais de formas enantioméricas individuais de quiralidade oposta é denominada uma "mistura racêmica".

[0152] Um átomo de carbono ligado a quatro substituintes não idênticos é denominado um "centro quiral".

[0153] "Isômero quiral" significa um composto com pelo menos um centro quiral. Os compostos com mais do que um centro quiral podem existir quer como um diastereisômero individual ou como uma mistura de diastereisômeros, denominada "mistura diastereomérica". Quando um centro quiral está presente, um estereoisômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta (R ou S) desse centro quiral. A configuração absoluta refere-se ao arranjo no espaço dos substituintes ligados ao centro quiral. Os substituintes ligados ao centro quiral em consideração são classificados de acordo com a Regra de Sequência de Cahn, Ingold e Prelog. (Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn e Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (Londres), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116).

[0154] "Isômero geométrico"significa os diastereisômeros que devem sua existência à rotação impedida sobre ligações duplas ou um ligante de alquil (por exemplo, 1,3-ciclobutil). Estas configurações são diferenciadas nos seus nomes pelos prefixos cis e trans ou Z e E, que indicam que os grupos se encontram no lado da ligação dupla, ou mesmo em frente na molécula de acordo com as regras de Cahn- Ingold-Prelog.

[0155] Deve ser compreendido que os compostos da presente invenção podem ser representados como diferentes isômeros geométricos ou isômeros quirais. Também deve ser entendido que quando os compostos têm as formas isoméricas geométricas ou isoméricas quirais, todas as formas isoméricas pretendem ser incluídas no escopo da presente invenção, e a designação dos compostos não exclui quaisquer formas isoméricas.

[0156] Além disso, as estruturas e outros compostos discutidos na presente invenção incluem todos os isômeros atrópiccos dos mesmos. "Isômeros Atrópicos" são um tipo de estereoisômero em que os átomos de dois isômeros são dispostos de forma diferente no espaço. Isômeros Atrópicos devem sua existência a uma rotação restrita causada por impedimento de rotação de grandes grupos sobre uma ligação central. Tais isômeros atrópicos tipicamente existem como uma mistura, no entanto, como resultado de avanços recentes em técnicas de cromatografia, foi possível separar as misturas de dois isômeros atrópicos em alguns casos específicos.

[0157] "Tautômero" é um de dois ou mais isômeros estruturais que existem em equilíbrio e é facilmente convertido de uma forma isomérica para outra. Esta conversão resulta na migração formal de um átomo de hidrogênio acompanhado por um interruptor de ligações duplas conjugadas adjacentes. Tautômeros existem como uma mistura de um conjunto tautomérico em solução. Em soluções onde a tautomerização é possível, um equilíbrio químico dos tautômeros irá ser alcançado. A razão exata das tautômeros depende de vários fatores, incluindo temperatura, solvente e pH. O conceito de tautômeros que são interconvertíveis por tautomerizações é chamado tautomerismo.

[0158] Entre os vários tipos de tautomerismo que são possíveis, dois são frequentemente observados. No tautomerismo ceto-enol uma mudança simultânea de elétrons e um átomo de hidrogênio ocorre. O tautomerismo de anel-cadeia surge como um resultado do grupo aldeído (-CHO) em uma molécula de cadeia de açúcar que reage com um dos grupos hidróxi (-OH), na mesma molécula para dar-lhe uma forma cíclica (em forma de anel), conforme exibido pela glicose.

[0159] Os pares tautoméricos comuns são: tautomerismo de cetona-enol, amida-nitrila, lactama-lactima, amida-ácido imídico em anéis heterocíclicos (por exemplo, em nucleobases, tais como guanina, timina e citosina), imina-enamina e enamina-enamina. Um exemplo de equilíbrios ceto-enol é entre piridin-2 (1H)-onas e os correspondentes piridin-2-óis, como mostrado abaixo.

[0160] Deve ser compreendido que os compostos da presente invenção podem ser representados como tautômeros diferentes. Também deve ser entendido que quando os compostos têm formas tautoméricas, todas as formas tautoméricas são consideradas como estando incluídas no escopo da presente invenção, e a designação dos compostos não exclui nenhuma forma de tautômero.

[0161] O termo "polimorfos de cristal", "polimorfos" ou "formas de cristal" significa estruturas de cristal em que um composto (ou um sal ou solvato do mesmo) pode cristalizar em diferentes arranjos de empacotamento cristalino, todos os quais têm a mesma composição elementar. Formas cristalinas diferentes geralmente têm diferentes padrões de difração de raios-X, espectro de infravermelho, pontos de fusão, dureza de densidade, forma de cristal, propriedades ópticas e elétricas, estabilidade e solubilidade. Solvente de recristalização, taxa de cristalização, temperatura de armazenagem, e outros fatores podem fazer com que uma forma de cristal domine. Polimorfos cristalinos dos compostos podem ser preparados por cristalização sob condições diferentes.

[0162] Os compostos de Fórmula (IIa) descritos no presente documento incluem os compostos em si, bem como os seus sais, os seus ésteres, os seus solvatos e os seus pró-fármacos, se for aplicável. Um sal, por exemplo, pode ser formado entre um ânion e um grupo carregado positivamente (por exemplo, amino) em um composto de benzeno substituído por aril ou heteroaril. Os ânions adequados incluem o cloreto, brometo, iodeto, sulfato, bissulfato, sulfamato, nitrato, fosfato, citrato, metanossulfonato, trifluoroacetato, glutamato, glucuronato, glutarato, malato, maleato, succinato, fumarato, tartarato, tosilato, salicilato, lactato, naftalenossulfonato, e acetato (por exemplo, trifluoroacetato). O termo "ânion farmaceuticamente aceitável"refere-se a um ânion adequado para formar um sal farmaceuticamente aceitável. Da mesma forma, um sal pode também ser formado entre um cátion e um grupo com carga negativa (por exemplo, carbóxilato) em um composto de benzeno substituído com aril ou heteroaril. Os cátions adequados incluem íons de sódio, íons de potássio, íons de magnésio, íons de cálcio, e um cátion de amônio tal como o íon de tetrametilamônio. Os compostos de benzeno substituídos por aril ou heteroaril também incluem aqueles sais que contêm átomos de nitrogênio quaternário. Na forma de sal, entende-se que a razão do composto de cátion ou ânion do sal pode ser de 1:1, ou qualquer outra razão diferente de 1:1, por exemplo, de 3:1, 2:1, 1:2, ou 1:3.

[0163] Como exemplos de pró-fármacos incluem-se os ésteres e outros derivados farmaceuticamente aceitáveis, que, mediante a administração a um sujeito, são capazes de fornecer compostos de benzeno substituídos por aril ou heteroaril ativos.

[0164] Além disso, os compostos da presente invenção, por exemplo, os sais dos compostos, podem existir quer na forma hidratada ou não hidratado (anidra) ou como solvatos com outras moléculas de solvente. Exemplos não limitativos de hidratos incluem mono-hidratos, di-hidratos, etc.. Os exemplos não limitativos de solvatos incluem solvatos de etanol, acetona, solvatos, etc..

[0165] "Solvato" significa formas de adição de solventes que contêm quantidades estequiométricas ou não estequiométricas de solvente. Alguns compostos têm uma tendência para prender uma relação molar fixa de moléculas de solvente no estado sólido cristalino, formando assim um solvato. Se o solvente é a água, o solvato formado é um hidrato; e, se o solvente é o álcool, o solvato formado é um alcoolato. Os hidratos são formados pela combinação de uma ou mais moléculas de água com uma molécula da substância em que a água mantém o seu estado molecular como H2O.

[0166] Tal como usado no presente documento, o termo "análogo"refere-se a um composto químico que é estruturalmente semelhante a outro, mas difere ligeiramente na sua composição (como em uma substituição de um átomo por um átomo de um elemento diferente ou na presença de um determinado grupo funcional, ou uma substituição de um grupo funcional por outro grupo funcional). Assim, um análogo é um composto que é semelhante ou comparável em função e aparência, mas não em estrutura ou origem com o composto de referência.

[0167] Tal como definido no presente documento, o termo "derivado" refere- se a compostos que têm uma estrutura nuclear comum, e são substituídos com vários grupos, tal como descrito no presente documento. Por exemplo, todos os compostos representados pela Fórmula (I) são compostos de benzeno substituídos por aril ou heteroaril, e têm a Fórmula (I) como um núcleo comum.

[0168] O termo "bioisostere" refere-se a um composto resultante da troca de um átomo ou de um grupo de átomos com um outro átomo ou grupo de átomos de um modo muito semelhante. O objetivo de uma substituição bioisosterica é o de criar um novo composto com propriedades biológicas semelhantes às do composto original. A substituição pode ser bioisostérica físico-quimicamente ou topologicamente baseada. Exemplos de substituições bioisostéricas de ácido carboxílico incluem, mas não se limitam a, acil sulfonimidas, tetrazóiss, sulfonatos e fosfonatos. Ver, por exemplo, Patani e LaVoie, Chem. Rev. 96, 3147-3176, 1996..

[0169] A presente invenção destina-se a incluir todos os isótopos de átomos que ocorrem nos presentes compostos. Os isótopos incluem os átomos tendo o mesmo número atômico mas diferentes números de massa. A título de exemplo geral e sem limitação, os isótopos de hidrogênio incluem o trítio e deutério, e isótopos de carbono incluem C-13 e C-14.

[0170] Qualquer composto de Fórmula (IIa) da presente invenção, tal como descrito no presente documento, pode ser um inibidor de EZH2.

[0171] Em certos aspectos da invenção um inibidor de EZH2 “inibe seletivamente” atividade de histona metiltransferase de EZH2 mutante quando o mesmo inibe atividade de histona metiltransferase de EZH2 mutante mais eficazmente do que inibe a atividade de histona metiltransferase de EZH2 do tipo selvagem. Por exemplo, em uma modalidade o inibidor seletivo tem um IC50 para o EZH2 mutante que é pelo menos 40 porcento menor do que o IC50 para EZH2 do tipo selvagem. Em uma modalidade o inibidor seletivo tem um IC50 para o EZH2 mutante que é pelo menos 50 porcento menor do que o IC50 para EZH2 do tipo selvagem. Em uma modalidade o inibidor seletivo tem um IC50 para o EZH2 mutante que é pelo menos 60 porcento menor do que o IC50 para EZH2 do tipo selvagem. Em uma modalidade o inibidor seletivo tem um IC50 para o EZH2 mutante que é pelo menos 70 porcento menor do que o IC50 para EZH2 do tipo selvagem. Em uma modalidade o inibidor seletivo tem um IC50 para o EZH2 mutante que é pelo menos 80 porcento menor do que o IC50 para EZH2 do tipo selvagem. Em uma modalidade o inibidor seletivo tem um IC50 para o EZH2 mutante que é pelo menos 90 porcento menor do que o IC50 para EZH2 do tipo selvagem.

[0172] Em uma modalidade, o inibidor seletivo de um EZH2 mutante não exerce essencialmente nenhum efeito sobre EZH2 do tipo selvagem.

[0173] Em certos aspectos da invenção, o inibidor inibe a conversão de H3- K27me2 para H3-K27me3. Em uma modalidade o inibidor é dito inibir a trimetilação de H3-K27. Uma vez que a conversão de H3-K27me1 para H3-K27me2 antecede a conversão de H3-K27me2 para H3-K27me3, um inibidor de conversão de H3-K27me1 para H3-K27me2 naturalmente também inibe a conversão de H3-K27me2 para H3- K27me3, isto é, inibe a trimetilação de H3-K27. É também possível inibir a conversão de H3-K27me2 para H3-K27me3 sem inibição da conversão de H3-K27me1 para H3- K27me2. A inibição deste tipo deve também resultar na inibição da trimetilação de H3-K27, ainda que sem inibição da dimetilação de H3-K27.

[0174] Em uma modalidade o inibidor inibe a conversão de H3-K27me1 para H3-K27me2 e a conversão de H3-K27me2 para H3-K27me3. Tal inibidor pode inibir diretamente a conversão de H3-K27me1 para H3-K27me2 sozinho. Alternativamente, tal inibidor pode inibir diretamente tanto a conversão de H3-K27me1 para H3-K27me2 quanto a conversão de H3-K27me2 para H3-K27me3.

[0175] Em certos aspectos da invenção, o composto inibe a atividade do inibidor de histona-metiltransferase. A inibição da atividade de histona- metiltransferase pode ser detectada utilizando qualquer método apropriado. A inibição pode ser medida, por exemplo, quer em termos de taxa de atividade de histona metiltransferase ou como produto de atividade de histona metiltransferase.

[0176] A inibição é uma inibição mensurável em comparação com um controle adequado. Em uma modalidade, a inibição é pelo menos 10 por cento de inibição em comparação com um controle adequado. Isto é, a taxa de atividade enzimática ou a quantidade de produto com o inibidor é menor ou igual a 90 por cento da taxa correspondente ou quantidade feita sem o inibidor. Em várias outras modalidades, a inibição é pelo menos 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 90, ou 95 por cento de inibição em comparação com um controle adequado. Em uma modalidade, a inibição é pelo menos 99 por cento de inibição em comparação com um controle adequado. Isto é, a taxa de atividade enzimática ou a quantidade de produto com o inibidor é menor ou igual a 1 por cento da taxa correspondente ou quantidade feita sem o inibidor.

[0177] Uma composição da presente invenção compreende um composto de Fórmula (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais outros agentes terapêuticos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A presente invenção fornece a administração de um composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais agentes terapêuticos ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como uma coformulação ou em formulações separadas, em que a administração das formulações é simultânea, sequencial ou em alternância. Em certas modalidades, outros agentes terapêuticos podem ser um agente que é reconhecido na técnica como sendo útil para tratar a doença ou condição a ser tratada pela composição da presente invenção. Em outra modalidade, o outro agente terapêutico pode ser um agente que não é reconhecido na técnica como sendo útil para tratar a doença ou condição a ser tratada pela composição da presente invenção. Em um aspecto, os outros agentes terapêuticos podem ser um agente que confere um atributo benéfico para a composição da presente invenção (por exemplo, um agente que afeta a viscosidade da composição). O atributo benéfico para a composição da presente invenção inclui, mas não se limita a, co-ação farmacocinética ou farmacodinâmica que resulta da combinação de um composto de Fórmula (IIa) e um ou mais outros agentes terapêuticos. Por exemplo, um ou mais outros agentes terapêuticos podem ser agentes anticâncer ou agentes quimioterapêuticos. Por exemplo, um ou mais outros agentes terapêuticos podem ser glicocorticóides. Por exemplo, um ou mais outros agentes terapêuticos podem ser selecionados a partir de prednisona, prednisolona, ciclofosfamida, vincristina, doxorrubicina, mafosfamida, cisplatina, AraC, everolimus, decitabina, dexametasona, ou análogos funcionais, derivados, pró-fármacos, e seus metabólitos. Em um outro aspecto, o outro agente terapêutico pode ser prednisona ou o seu metabólito ativo, prednisolona.

[0178] Os agentes terapêuticos descritos abaixo são para fins ilustrativos e não pretendem ser limitativos. A presente invenção inclui, pelo menos, um outro agente terapêutico selecionado a partir da lista abaixo. A presente invenção pode incluir mais do que um outro agente terapêutico, por exemplo, dois, três, quatro, cinco ou outros agentes terapêuticos, de modo que a composição da presente invenção pode realizar a sua função pretendida.

[0179] Em uma modalidade, o outro agente terapêutico é um agente anticâncer. Em uma modalidade, o agente anticâncer é um composto que afeta a modificações de histonas, tais como um inibidor de HDAC. Em certas modalidades, um agente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em agentes quimioterapêuticos (tais como 2CdA, 5-FU, 6-Mercaptopurina, 6-TG, Abraxane™, Accutane®, Actinomycin-D, Adriamycin®, Alimta®, ácido retinóico todo trans, ametopterina, Ara-C, Azacitadina, BCNU, Blenoxane®, Camptosar®, CeeNU®, Clofarabina, Clolar™, Cytoxan®, cloridrato de daunorubicina, DaunoXome®, Dacogen®, DIC, Doxil®, Ellence®, Eloxatin®, Emcyt®, etoposido fosfato, Fludara®, FUDR®, Gemzar®, Gleevec®, hexametilmelamina, Hycamtin®, Hydrea®, Idamycin®, Ifex®, ixabepilona, Ixempra®, L-asparaginase, Leukeran®, Ara-C lipossomal, L-PAM, Lisodren, Matulane®, mitracina, Mitomicina-C, Myleran®, Navelbine®, Neutrexin®, nilotinib, Nipent®, Nitrogênio Mustarda, Novantrone®, Oncaspar®, Panretin®, Paraplatin®, Platinol®, prolifeprospan 20 com implante de carmustina, Sandostatin®, Targretin®, Tasigna®, Taxotere®, Temodar®, TESPA, Trisenox®, Valstar®, Velban®, Vidaza™, sulfato de vincristina, VM 26, Xeloda® e Zanosar®); produtos biológicos (tais como Alfa Interferon, Bacillus Calmette-Guerin, Bexxar®, Campath®, Ergamisol®, Erlotinib, Herceptin®, Interleucina-2, Iressa®, lenalidomida, Mylotarg®, Ontak®, Pegasys®, Revlimid®, Rituxan®, Tarceva™, Thalomid®, Tykerb®, Velcade® e Zevalin™); corticosteróides, (tais como fosfato de sódio dexametasona, DeltaSone® e Delta-Cortef®); terapias hormonais (tais como Arimidex®, Aromasin®, Casodex®, Cytadren®, Eligard®, Eulexin®, Evista®, Faslodex®, Femara®, Halotestin®, Megace®, Nilandron®, Nolvadex®, Plenaxis™ e Zoladex®); e radiofarmaceuticos (tais como Iodotope®, Metastron®, Fosfocol® e Samarium SM-153).

[0180] Em outra modalidade, o outro agente terapêutico é um agente quimioterapêutico (também chamado de um agente antineoplásico ou um agente antiproliferativo), selecionado a partir do grupo que inclui um agente de alquilação; um antibiótico; um antimetabólito; um agente de desintoxicação; um interferon; um anticorpo policlonal ou anticorpo monoclonal; um inibidor de EGFR; um inibidor de HER2; um inibidor da histona deacetilase; um hormônio; um inibidor mitótico; um inibidor de mTOR; um inibidor de multiquinase; um inibidor de serina/treonina quinase; inibidores de tirosina quinase; inibidor de VEGF/VEGFR; um derivado de taxano ou taxanos, um inibidor de aromatase, uma antraciclina, um fármaco alvo de microtúbulos, um fármaco de veneno de topoisomerase, um inibidor de um alvo molecular ou enzima (por exemplo, uma cinase de proteína ou uma metiltransferase), um fármaco análogo de citidina ou qualquer agente quimioterapêutico, antineoplásico ou antiproliferativo listados em www.cancer.org/docro-ot/cdg/cdg_0.asp.

[0181] Exemplos de agentes de alquilação incluem, mas não se limitam a, ciclofosfamida (Cytoxan; Neosar); clorambucil (Leukeran); melphalan (Alceran); carmustina (BiCNU); busulfan (Busulfex); lomustina (CeeNU); dacarbazina (DTIC- Dome); oxaliplatina (Eloxatin); carmustina (Gliadel); ifosfamida (Ifex); mecloretamina (Mustargen); busulfan (Myleran); carboplatina (Paraplatin); cisplatina (CDDP; Platinol); temozolomida (Temodar); tiotepa (Tioplex); bendamustina (Treanda); ou estreptozocina (Zanosar).

[0182] Exemplos de antibióticos incluem, mas não se limitam a, doxorubicina (Adriamycin); doxorubicina lipossomal (Doxil); mitoxantrona (Novantrone); bleomicina (Blenoxane); daunorubicina (Cerubidine); daunorubicina lipossomal (DaunoXome); dactinomicina (Cosmegen); epirubicina (Ellence); idarubicina (Idamycin); plicamicina (Mithracin); mitomicina (Mutamycin); pentostatina (Nipent); ou valrubicina (Valstar)

[0183] Exemplos de antimetabólitos incluem, mas não se limitam a, fluorouracil (Adrucil); capecitabina (Xeloda); hidroxiureia (Hydrea); mercaptopurina (Purinathol); pemetrexed (Alimta); fludarabina (Fludara); nelarabina (Arranon); cladribina (Cladribine Novaplus); clofarabina (Clolar); citarabina (Cytosar-U); decitabina (Dacogen); citarabina lipossomal (DepoCyt); hidroxiureia (Droxia); pralatrexato (Folotyn); floxuridina (FUDR); gencitabina (Gemzar); cladribina (Leustatin); fludarabina (Oforta); metotrexato (MTX; Rheumatrex); metotrexato (Trexall); tioguanina (Tabloid); TS-1 ou citarabina (Tarabine PFS).

[0184] Exemplos de agentes desentoxificantes incluem, mas não se limitam a, amifostina (Etiol) ou mesna (Mesnex).

[0185] Exemplos de interferons incluem, mas não se limitam a, interferon alfa- 2b (Intron A) ou interferon alfa-2a (Roferon-A).

[0186] Exemplos de anticorpos policlonais ou monoclonais incluem, mas não se limitam a, trastuzumab (Herceptin); ofatumumab (Arzerra); bevacizumab (Avastin); rituximab (Rituxan); cetuximab (Erbitux); panitumumab (Vectibix); tositumomab/iodine131 tositumomab (Bexxar); alemtuzumab (Campath); ibritumomab (Zevalin; In-111; Y-90 Zevalin); gemtuzumab (Mylotarg); eculizumab (Soliris) ordenosumab.

[0187] Exemplos de inibidores de EGFR incluem, mas não se limitam a, gefitinib (Iressa); lapatinib (Tykerb); cetuximab (Erbitux); erlotinib (Tarceva); panitumumab (Vectibix); PKI-166; canertinib (CI-1033); matuzumab (Emd7200) ou EKB-569.

[0188] Exemplos de inibidores de HER2 incluem, mas não se limitam a, trastuzumab (Herceptin); lapatinib (Tykerb) ou AC-480.

[0189] Os inibidores de Histona Deacetilase incluem, mas não se limitam a, vorinostat (Zolinza).

[0190] Exemplos de Hormônios incluem, mas não se limitam a, tamoxifeno (Soltamox; Nolvadex); raloxifeno (Evista); megestrol (Megace); leuprolida (Lupron; Lupron Depot; Eligard; Viadur) ; fulvestrant (Faslodex); letrozol (Femara); triptorelina (Trelstar LA; Trelstar Depot) ; exemestano (Aromasin) ; goserelina (Zoladex) ; bicalutamida (Casodex); anastrozol (Arimidex); fluoximesterona (Androxi; Halotestin); medroxiprogesterona (Provera; Depo-Provera); estramustina (Emcyt); flutamida (Eulexin); toremifena (Fareston); degarelix (Firmagon); nilutamida (Nilandron); abarelix (Plenaxis); ou testolactona (Teslac).

[0191] Exemplos de inibidores mitóticos incluem, mas não se limitam a, paclitaxel (Taxol; Onxol; Abraxane); docetaxel (Taxotere); vincristina (Oncovin; Vincasar PFS); vinblastina (Velban); etoposido (Toposar; Etopophos; VePesid); teniposido (Vumon); ixabepilona (Ixempra); nocodazol; epotilona; vinorelbina (Navelbine); camptotecina (CPT); irinotecano (Camptosar); topotecano (Hycamtin); ansacrina ou lamelarina D (LAM-D).

[0192] Exemplos de inibidores de MTOR incluem, mas não se limitam a, everolimus (Afinitor) ou temsirolimus (Torisel); rapamuna, ridaforolimus; ou AP23573.

[0193] Exemplos de inibidores de VEGF/VEGFR s incluem, mas não se limitam a, bevacizumab (Avastin); sorafenib (Nexavar); sunitinib (Sutent); ranibizumab; pegaptanib; ou vandetinib.

[0194] Exemplos de fármacos alvos de microtúbulos incluem, mas não se limitam a, paclitaxel, docetaxel, vincristina, vinblastina, nocodazol, epotilonas e navelbina.

[0195] Exemplos de fármacos de veneno de topoisomerase incluem, mas não se limitam a, teniposido, etoposido, adriamicina, camptotecina, daunorubicina, dactinomicina, mitoxantrona, ansacrina, epirubicina e idarubicina.

[0196] Exemplos de taxanos ou derivados de taxano incluem, mas não se limitam a, paclitaxel e docetaxol.

[0197] Exemplos de agentes quimioterapêuticos, antineoplásticos, antiproliferativos gerais incluem, mas não se limitam a, altretamina (Hexalen); isotretinoína (Accutane; Amnesteem; Claravis; Sotret); tretinoína (Vesanoid); azacitidina (Vidaza); bortezomib (Velcade) asparaginase (Elspar); levamisol (Ergamisol); mitotano (Lysodren); procarbazina (Matulane); pegaspargase (Oncaspar); denileucina diftitox (Ontak); porfimero (Photofrin); aldesleucina (Proleukin); lenalidomida (Revlimid); bexarotena (Targretin); talidomida (Thalomid); temsirolimus (Torisel); trióxido arsênico (Trisenox); verteporfina (Visudyne); mimosina (Leucenol); (tegafur 1M - 5-cloro-2,4-di-hidróxipirimidina 0,4 M - oxonato de potassium 1 M), ou lovastatina.

[0198] Em um outro aspecto, o outro agente terapêutico é um agente quimioterapêutico ou uma citoquina tal como G-CSF (fator de estimulação das colônias de granulócitos).

[0199] Em ainda outro aspecto, outros agentes terapêuticos podem ser combinações de quimioterapia padrões, tais como, mas não restrito a, CMF (ciclofosfamida, metotrexato e 5-fluorouracil), CAF (ciclofosfamida, adriamicina e 5- fluorouracil), CA (adriamicina e ciclofosfamida), FEC (5-fluorouracil, epirrubicina e ciclofosfamida), ACT ou ATC (adriamicina, ciclofosfamida, e paclitaxel), rituximab, Xeloda (capecitabina), cisplatina (CDDP), Carboplatina, TS-1 (tegafur, gimestat e otastat potássico a uma razão molar de 1:0,4:1), Camptotecina-11 (CPT-11, Irinotecano ou Camptosar™), CHOP (ciclofosfamida, hidróxi daunorubicina, oncovina, e prednisona ou prednisolona), R-CHOP (rituximab, ciclofosfamida, hidróxi daunorubicina, oncovina, prednisona ou prednisolona), ou CMFP (ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracil e prednisona).

[0200] Em outro aspecto, os outros agentes terapêuticos podem ser um inibidor de uma enzima, tal como uma quinase receptora ou não receptora. As quinases receptoras e não receptoras são, por exemplo, as tirosina quinases ou serina/treonina quinases. Inibidores de quinases descritos no presente documento são moléculas pequenas, os ácidos polinucleicos, polipeptídeos ou anticorpos.

[0201] Exemplos de inibidores de quinase incluem, mas não se limitam a, Bevacizumab (alvos de VEGF), BIBW 2992 (alvos de EGFR e Erb2), Cetuximab/Erbitux (alvos de Erb1), Imatinib/Gleevic (alvos de Bcr-Abl), Trastuzumab (alvos de Erb2), Gefitinib/Iressa (alvos de EGFR), Ranibizumab (alvos de VEGF), Pegaptanib (alvos de VEGF), Erlotinib/Tarceva (alvos de Erb1), Nilotinib (alvos de Bcr- Abl), Lapatinib (alvos de Erb1 e Erb2/Her2), GW-572016/lapatinib ditosilato (alvos de HER2/Erb2), Panitumumab/Vectibix (alvos de EGFR), Vandetinib (alvos de RET/VEGFR), E7080 (múltiplos alvos de incluindo RET e VEGFR), Herceptin (alvos de HER2/Erb2), PKI-166 (alvos de EGFR), Canertinib/CI-1033 (alvos de EGFR), Sunitinib/SU-11464/Sutent (alvos de EGFR e FLT3), Matuzumab/Emd7200 (alvos de EGFR), EKB-569 (alvos de EGFR), Zd6474 (alvos de EGFR e VEGFR), PKC-412 (alvos de VEGR e FLT3), Vatalanib/Ptk787/ZK222584 (alvos de VEGR), CEP-701 (alvos de FLT3), SU5614 (alvos de FLT3), MLN518 (alvos de FLT3), XL999 (alvos de FLT3), VX-322 (alvos de FLT3), Azd0530 (alvos de SRC), BMS-354825 (alvos de SRC), SKI-606 (alvos de SRC), CP-690 (alvos de JAK), AG-490 (alvos de JAK), WHI- P154 (alvos de JAK), WHI-P131 (alvos de JAK), sorafenib/Nexavar (alvos de RAF quinase, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR- ß, KIT, FLT-3, e RET), Dasatinib/Spricel (BCR/ABL e Src), AC-220 (alvos de Flt3), AC-480 (alvos de proteínas HER total, “panHER”), difosfato de Motesanib (alvos de VEGF1-3, PDGFR, e c-kit), Denosumab (alvos de RANKL, inhibits SRC), AMG888 (alvos de HER3), e AP24534 (alvos múltiplos incluindo Flt3).

[0202] Exemplos de inibidores de serina/treonina quinase incluem, mas não se limitam a, Rapamune (alvos de mTOR/FRAP1), Deforolimus (alvos de mTOR), Certican/Everolimus (alvos de mTOR/FRAP1), AP23573 (alvos de mTOR/FRAP1), Eril/Fasudil hydrocloride (alvos de RHO), Flavopiridol (alvos de CDK), Seliciclib/CYC202/Roscovitrina (alvos de CDK), SNS-032/BMS-387032 (alvos de CDK), Ruboxistaurina (alvos de PKC), Pkc412 (alvos de PKC), Briostatina (alvos de PKC), KAI-9803 (alvos de PKC), SF1126 (alvos de PI3K), VX-680 (alvos de Aurora quinase), Azd1152 (alvos de Aurora quinase), Arry-142886/AZD-6244 (alvos de MAP/MEK), SCIO-469 (alvos de MAP/MEK), GW681323 (alvos de MAP/MEK), CC401 (alvos de JNK), CEP-1347 (alvos de JNK), e PD 332991 (alvos de CDK).

[0203] Exemplos de tirosina inibidores de quinase incluem, mas não se limitam a, erlotinib (Tarceva); gefitinib (Iressa); imatinib (Gleevec); sorafenib (Nexavar); sunitinib (Sutent); trastuzumab (Herceptin); bevacizumab (Avastin); rituximab (Rituxan); lapatinib (Tykerb); cetuximab (Erbitux); panitumumab (Vectibix); everolimus (Afinitor); alemtuzumab (Campath); gemtuzumab (Mylotarg); temsirolimus (Torisel); pazopanib (Votrient); dasatinib (Sprycel); nilotinib (Tasigna); vatalanib (Ptk787; ZK222584); CEP-701; SU5614; MLN518; XL999; VX-322; Azd0530; BMS- 354825; SKI-606 CP-690; AG-490; WHI-P154; WHI-P131; AC-220; ou AMG888.

[0204] A presente invenção fornece métodos para a terapia de combinação em que uma composição compreendendo um composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais outros agentes terapêuticos são administrados a um sujeito com necessidade de tratamento de uma doença ou de câncer. A terapia de combinação também pode ser administrada a células de câncer para inibir a proliferação e induzir a morte celular. Em um aspecto, um composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrado antes da administração da composição da presente invenção que compreende um composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais outros agentes terapêuticos. Em um aspecto, um composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrado antes da administração de um ou mais agentes terapêuticos, de modo que os outros agentes terapêuticos são administrados quer em uma única composição ou em duas ou mais composições, por exemplo, administrados simultaneamente, sequencialmente ou em alternância.

[0205] Em uma modalidade, uma composição da presente invenção inclui um composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais agentes anticâncer, por exemplo, CHOP (ciclofosfamida, hidróxi daunorubicina, oncovina, e prednisona ou prednisolona) ou R-CHOP (rituximabe, ciclofosfamida, hidróxi daunorubicina, oncovina, prednisona ou prednisolona). Em uma modalidade, uma composição da presente invenção inclui um composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e prednisona ou prednisolona. Os métodos da presente invenção incluem a terapia de combinação da administração de um composto de Fórmula (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e agentes anticâncer, em que os agentes anticâncer são CHOP, R-CHOP, prednisona ou prednisolona.

[0206] Em certas modalidades, a "terapia de combinação"destina-se a englobar a administração destes agentes terapêuticos de uma forma sequencial, em que cada agente terapêutico é administrado a um tempo diferente, bem como a administração destes agentes terapêuticos, ou, pelo menos, dois dos agentes terapêuticos em simultâneo, ou de uma maneira substancialmente simultânea. A administração simultânea pode ser realizada, por exemplo, pela administração ao sujeito de uma única cápsula tendo uma razão fixa de cada agente terapêutico ou em múltiplas cápsulas individuais para cada um dos agentes terapêuticos. A administração sequencial ou substancialmente simultânea de cada agente terapêutico pode ser efetuada por qualquer via apropriada incluindo, mas não se limitando a, vias orais, vias intravenosas, vias intramusculares e absorção direta através de tecidos de membranas mucosas. Os agentes terapêuticos podem ser administrados pela mesma via ou por vias diferentes. Por exemplo, um primeiro agente terapêutico da combinação selecionada pode ser administrado por injeção intravenosa enquanto os outros agentes terapêuticos da combinação podem ser administrados por via oral. Alternativamente, por exemplo, todos os agentes terapêuticos podem ser administrados por via oral ou todos os agentes terapêuticos podem ser administrados por injeção intravenosa. Os agentes terapêuticos também podem ser administrados em alternância.

[0207] Em certos aspectos da invenção, as terapias de combinação apresentadas na presente invenção, pode resultar em um efeito sinergético no tratamento de uma doença ou de câncer. Um "efeito sinérgico" é definido como um em que a eficácia de uma combinação de agentes terapêuticos é maior do que a soma dos efeitos de qualquer dos agentes administrados sozinho. Um efeito sinérgico pode também ser um efeito que não pode ser alcançado através da administração de qualquer um dos compostos ou de outros agentes terapêuticos como agentes únicos. O efeito sinergético pode incluir, mas não se limita a, um efeito de tratamento de câncer, reduzindo o tamanho do tumor, inibindo o crescimento do tumor, ou aumentando a sobrevivência do sujeito. O efeito sinérgico pode também incluir a redução da viabilidade de células de câncer, a indução de morte de células de câncer, e a inibição ou retardo do crescimento de células de câncer.

[0208] Em certos aspectos da invenção, "terapia de combinação" também abrange a administração de agentes terapêuticos, como descrito acima, em combinação adicional com outros ingredientes biologicamente ativos e terapias sem fármaco (por exemplo, cirurgia ou tratamento com radiação). Quando a terapia de combinação compreende ainda um tratamento não medicamentoso, o tratamento não farmacológico pode ser realizado em qualquer momento adequado, desde que um efeito benéfico a partir da co-ação da combinação dos agentes terapêuticos e tratamento sem fármaco seja alcançado. Por exemplo, em casos apropriados, o efeito benéfico é ainda alcançado quando o tratamento sem fármaco é temporariamente removido da administração dos agentes terapêuticos, talvez por dias ou mesmo semanas.

[0209] Em outro aspecto, uma composição da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo farmaceuticamente aceitável, pode ser administrado em combinação com a terapia de radiação. A terapia de radiação pode também ser administrada em combinação com uma composição da presente invenção e outro agente quimioterapêutico descrito no presente documento como parte de uma terapia com múltiplos agentes.

[0210] A presente invenção também fornece composições farmacêuticas que compreendem um composto de Fórmula (IIa) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e um ou mais outros agentes terapêuticos descritos no presente documento, misturados com carreadores ou excipiente(s) farmaceuticamente adequados em doses para tratar ou prevenir uma doença ou condição, tal como descrito no presente documento. Em um aspecto, a presente invenção também fornece composições farmacêuticas que compreendem um composto da Tabela I ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, e um ou mais agentes terapêuticos, misturados com carreadores ou excipiente(s) farmaceuticamente adequados em doses para tratar ou prevenir uma doença ou condição, tal como descrito no presente documento. Em outro aspecto, a presente invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo o Composto 44 ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e um ou mais agentes terapêuticos, misturados com carreadores ou excipiente(s) farmaceuticamente adequados em doses para tratar ou prevenir uma doença ou condição, tal como descrito no presente documento. As composições farmacêuticas da presente invenção também podem ser administradas em combinação com outros agentes terapêuticos ou modalidades terapêuticas, simultaneamente, sequencialmente, ou em alternância.

[0211] As misturas de composições da presente invenção também podem ser administradas ao paciente como uma mistura simples ou em composições farmacêuticas formuladas adequadas. Por exemplo, um aspecto da invenção refere- se a uma composição farmacêutica que compreende uma dose terapeuticamente eficaz de um inibidor de EZH2 de Fórmula (IIa), ou um sal, hidrato, enantiômero ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; um ou mais outros agentes terapêuticos, e um diluente ou carreador farmaceuticamente aceitável.

[0212] Uma "composição farmacêutica" é uma formulação que contém os compostos da presente invenção em uma forma adequada para administração a um sujeito. Em uma modalidade, a composição farmacêutica é a granel ou em forma de dosagem unitária. A forma de dosagem unitária é qualquer uma de uma variedade de formas, incluindo, por exemplo, uma cápsula, uma sbolsa IV, um comprimido, uma única bomba de um inalador de aerossol ou um frasco. A quantidade de ingrediente ativo (por exemplo, uma formulação do composto divulgado ou sal, hidrato, solvato ou isômero do mesmo) em uma dose unitária de composição é uma quantidade eficaz e varia de acordo com o tratamento particular envolvido. Um versado na técnica irá apreciar que por vezes é necessário fazer variações de rotina para a dosagem dependendo da idade e da condição do paciente. A dosagem também irá depender da via de administração. Uma variedade de vias é contemplada, incluindo a administração oral, pulmonar, retal, parentérica, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, por inalação, bucal, sublingual, intrapleural, intratecal, intranasal, e semelhantes. As formas de dosagem para a administração tópica ou transdérmica de um composto desta invenção incluem pós, sprays, pomadas, pastas, cremes, loções, géis, soluções, emplastros e inalantes. Em uma modalidade, o composto ativo é misturado sob condições estéreis com um carreador farmaceuticamente aceitável, e com quaisquer conservantes, tampões, ou propulsores que sejam requeridos.

[0213] Tal como usado no presente documento, a frase "farmaceuticamente aceitável"refere-se aos compostos, ânions, cátions, materiais, composições, carreadores, e/ou formas de dosagem que estão dentro do escopo do bom julgamento médico, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, comensurável com uma relação risco/benefício razoável.

[0214] Um "excipiente farmaceuticamente aceitável"significa um excipiente que é útil na preparação de uma composição farmacêutica que é geralmente segura, não tóxica e nem biologicamente nem de outro modo indesejável, e inclui excipiente que é aceitável para uso veterinário bem como para uso farmacêutico humano. Um "excipiente farmaceuticamente aceitável"como usado no relatório descritivo e nas reivindicações inclui tanto um como mais do que um desses excipientes.

[0215] Uma composição farmacêutica da invenção é formulada para ser compatível com a sua via de administração pretendida. Exemplos de vias de administração parentérica incluem, por exemplo, por via intravenosa, intradérmica, subcutânea, oral (por exemplo, por inalação), transdérmica (tópica), e administração transmucosa. As soluções ou suspensões usadas para aplicação parentérica, intradérmica, ou subcutânea pode incluir os seguintes componentes: um diluente estéril tal como água para injeção, solução salina, óleos fixos, polietileno glicóis, glicerina, propileno glicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos, tais como álcool benzílico ou metil parabenos; antioxidantes tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; Os agentes quelantes, tais como o ácido etilenodiaminotetracético; tampões tais como acetatos, citratos ou fosfatos, e agentes para o ajuste da tonicidade tais como cloreto de sódio ou dextrose. O pH pode ser ajustado com ácidos ou bases, tais como ácido clorídrico ou hidróxido de sódio. A preparação parentérica pode ser encerrada em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de doses múltiplas feitas de vidro ou de plástico.

[0216] A composição da invenção pode ser administrada a um sujeito em muitos dos métodos bem conhecidos atualmente usados para o tratamento quimioterapêutico. Por exemplo, para o tratamento de cânceres, um composto da invenção pode ser injetado diretamente em tumores, injetado na corrente sanguínea ou cavidades do corpo ou tomado por via oral ou aplicado através da pele com pensos. A dose escolhida deve ser suficiente para constituir um tratamento eficaz, mas não tão alta que cause efeitos colaterais inaceitáveis. O estado da condição de doença (por exemplo, câncer, pré-câncer, e semelhantes) e a saúde do paciente, deve, de preferência, ser cuidadosamente monitorado durante e por um período de tempo razoável após o tratamento.

[0217] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz", tal como usado no presente documento, refere-se a uma quantidade de um agente farmacêutico para tratar, melhorar, ou prevenir uma doença ou condição identificada, ou para exibir um efeito terapêutico ou benéfico detectável. O efeito pode ser detectado por qualquer método de ensaio conhecido na técnica. A quantidade eficaz exata para um sujeito dependerá do peso corporal, do tamanho e saúde do sujeito; da natureza e da extensão da doença; e do agente terapêutico ou combinação de agentes terapêuticos selecionados para administração. As quantidades terapeuticamente eficazes para uma dada situação podem ser determinadas por experimentação de rotina, que está dentro da capacidade e julgamento do médico. Em um aspecto preferencial, a doença ou condição a ser tratada é o câncer. Em outro aspecto, a doença ou condição a ser tratada é um distúrbio proliferativo celular.

[0218] Em certas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz de cada agente farmacêutico usado em combinação será menor quando usada em combinação, em comparação com a monoterapia com um dos agentes sozinho. Essa menor quantidade terapeuticamente eficaz pode produzir menor toxicidade do regime terapêutico.

[0219] Para qualquer composto, a quantidade terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente quer em ensaios de cultura de células, por exemplo, de células neoplásicas, ou em modelos animais, geralmente camundongos, ratos, coelhos, cães, ou porcos. O modelo animal também pode ser usado para determinar a faixa de concentração e a via de administração apropriadas. Tal informação pode então ser usada para determinar as doses úteis e vias de administração em humanos. Eficácia terapêutica/profilática e a toxicidade podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrões em culturas celulares ou animais experimentais, por exemplo, ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população) e LD50 (a dose letal para 50% da população). A razão de doses entre os efeitos tóxico e terapêutico é o índice terapêutico, e ela pode ser expressa como a razão de LD50/ED50. As composições farmacêuticas que exibem índices terapêuticos grandes são preferenciais. A dosagem pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem empregada, da sensibilidade do paciente, e da via de administração.

[0220] A dosagem e a administração são ajustadas para fornecer níveis suficientes do(s) agente(s) ativo ou para manter o efeito desejado. Os fatores que podem ser levados em conta incluem a gravidade do estado da doença, a saúde geral do sujeito, idade, peso e sexo do sujeito, dieta, tempo e frequência de administração, combinação(ões) de fármacos, sensibilidades de reação e tolerância/resposta à terapia. As composições farmacêuticas de longa ação podem ser administradas a cada 3 a 4 dias, todas as semanas, ou uma vez a cada duas semanas, dependendo da meia-vida e taxa de depuração da formulação particular.

[0221] As composições farmacêuticas contendo os compostos ativos da presente invenção podem ser fabricadas de uma forma que é do conhecimento geral, por exemplo, por meio de processos convencionais de mistura, dissolução, granulação, fabricação de drágeas, levigação, emulsificação, encapsulação, aprisionamento ou processos de liofilização. As composições farmacêuticas podem ser formuladas de uma maneira convencional usando um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis, que compreendem excipientes e/ou auxiliares que facilitam o processamento dos compostos ativos em preparações que podem ser usadas farmaceuticamente. É claro que, a formulação apropriada depende da via de administração escolhida.

[0222] As composições farmacêuticas adequadas para uso injetável incluem soluções aquosas estéreis (quando solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções injetáveis estéreis ou dispersão. Para a administração intravenosa, veículos adequados incluem soro fisiológico, água bacteriostática, Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, N.J.) ou salina tamponada com fosfato (PBS). Em todos os casos, a composição deve ser estéril e deve ser fluida na medida em que existe seringabilidade fácil. Ela deve ser estável sob condições de fabricação e armazenamento e deve ser conservada contra a ação contaminante de micro-organismos tais como bactérias e fungos. O carreador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, e polietileno glicol líquido, e semelhantes), e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersão e pelo uso de surfactantes. A prevenção da ação de microorganismos pode ser conseguida através de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, e semelhantes. Em muitos casos, será preferencial incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois tais como manitol e sorbitol, e cloreto de sódio na composição. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser conseguida incluindo na composição um agente que retarda a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.

[0223] As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas incorporando o composto ativo na quantidade requerida em um solvente apropriado com um ou uma combinação dos ingredientes enumerados acima, como requerido, seguido de esterilização por filtração. Geralmente, as dispersões são preparadas por incorporação do composto ativo em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários a partir daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação são a secagem em vácuo e liofilização que produzem um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado a partir de uma solução filtrada estéril anteriormente da mesma.

[0224] As composições orais geralmente incluem um diluente inerte ou um carreador farmaceuticamente aceitável comestível. Elas podem ser encerradas em cápsulas de gelatina ou comprimidas em comprimidos. Para a finalidade de administração terapêutica oral, o composto ativo pode ser incorporado com excipientes e usado na forma de comprimidos, trociscos ou cápsulas. As composições orais podem também ser preparadas usando um carreador fluido para usar como elixir, em que o composto no carreador fluido é aplicado oralmente e bochechado e expectorado ou engolido. Agentes de ligação farmaceuticamente compatíveis e/ou materiais adjuvantes podem ser incluídos como parte da composição. Os comprimidos, pílulas, cápsulas, trociscos e semelhantes podem conter qualquer um dos seguintes ingredientes, ou compostos de uma natureza semelhante: um ligante tal como celulose microcristalina, goma de tragacanto ou gelatina; um excipiente tal como amido ou lactose, um agente de desintegração tal como ácido algínico, Primogel, ou amido de milho; um lubrificante tal como estearato de magnésio ou Sterotes; um deslizante tal como dióxido de silício coloidal; um agente edulcorante tal como sacarose ou sacarina; ou um agente aromatizante tal como hortelã-pimenta, salicilato de metila, ou aroma de laranja.

[0225] Para a administração por inalação, os compostos são administrados sob a forma de um spray de aerossol a partir do recipiente pressurizado ou dispensador que contém um propulsor adequado, por exemplo, um gás tal como dióxido de carbono, ou um nebulizador.

[0226] A administração sistêmica também pode ser por meios transmucosais ou transdérmicos. Para a administração transdérmica ou transmucosal, penetrantes apropriados para a barreira a ser permeada são usados na formulação. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica, e incluem, por exemplo, para administração transmucosa, detergentes, sais biliares, e derivados do ácido fusídico. A administração transmucosal pode ser conseguida através do uso de sprays nasais ou supositórios. Para a administração transdérmica, os compostos ativos são formulados em unguentos, pomadas, géis, ou cremes como geralmente conhecido na técnica.

[0227] Os compostos ativos podem ser preparados com carreadores farmaceuticamente aceitáveis, que irão proteger o composto contra a rápida eliminação do corpo, tais como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes e sistemas de entrega microencapsulados. Polímeros biocompatíveis, biodegradáveis, podem ser usados, tais como o acetato de vinil etileno, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido poliláctico. Os métodos para a preparação de tais formulações serão evidentes para os versados na técnica. Os materiais podem também ser obtidos comercialmente a partir de Alza Corporation e Nova Pharmaceuticals, Inc. As suspensões de lipossomas (incluindo lipossomas alvos para células infectadas com anticorpos monoclonais para antígenos virais) podem também ser usados como veículos farmaceuticamente aceitáveis. Estes podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos dos versados na técnica, por exemplo, como descrito na Pat. No. 4522811.

[0228] É especialmente vantajoso formular as composições orais ou parenterais em forma de unidade de dosagem para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A forma de unidade de dosagem, como usado no presente documento, refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para o sujeito a ser tratado; cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico necessário. A especificação para as formas de dosagem unitárias da invenção é ditadas por e diretamente dependente das características únicas do composto ativo e do efeito terapêutico particular a ser alcançado.

[0229] Nas aplicações terapêuticas, as dosagens dos compostos inibidores de EZH2 descritos no presente documento, outros agentes terapêuticos descritos no presente documento, as composições que compreendem um composto de Fórmula (IIa) e um ou mais outros agentes terapêuticos, ou as composições farmacêuticas usadas de acordo com a invenção variar dependendo do agente, da idade, peso e condição clínica do doente receptor, bem como a experiência e do julgamento do clínico ou o médico que administra o tratamento, entre outros fatores que afetam a dosagem selecionada. Geralmente, a dose deve ser suficiente para resultar na desaceleração, e de preferência, na regressão, o crescimento de tumores e também de preferência, causando a regressão completa do câncer. As dosagens podem variar entre cerca de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 5000 mg/kg por dia. Em aspectos preferencias, as dosagens podem variar entre cerca de 1 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia. Em um aspecto, a dose estará na gama de cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 50 g/dia; cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 25 g/dia; cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 10 g/dia; cerca de 0,1 mg a cerca de 3 g/dia; ou cerca de 0,1 mg a cerca de 1 g/dia, em doses únicas, dividido, ou contínuos (que a dose pode ser ajustada para o peso do paciente, em kg, a área de superfície do corpo em m2, e a idade em anos). Uma quantidade eficaz de um agente farmacêutico é a que fornece uma melhoria objetivamente identificável como observado pelo médico ou outro observador qualificado. Por exemplo, a regressão de um tumor em um paciente pode ser medida com referência ao diâmetro de um tumor. Diminuição do diâmetro de um tumor indica regressão. A regressão é também indicada por falha de tumores que reaparecem após o tratamento ser interrompido. Tal como usado no presente documento, o termo "forma de dosagem eficaz" refere-se à quantidade de um composto ativo para produzir o efeito biológico desejado em um sujeito ou célula.

[0230] As composições farmacêuticas podem ser incluídas em um recipiente, pacote, ou dispensador juntamente com instruções para administração.

[0231] A composição da presente invenção é capaz de formar ainda sais. A composição da presente invenção é capaz de formar mais do que um sal, por molécula, por exemplo, mono, di, tri. Todas estas formas estão também contempladas dentro do escopo da invenção reivindicada.

[0232] Tal como usado no presente documento, "sais farmaceuticamente aceitáveis"referem-se a derivados dos compostos da presente invenção em que o composto de origem é modificado, fazendo os sais de ácido ou base. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não se limitam a, mineral ou de sais de ácidos orgânicos de resíduos básicos, tais como aminas, sais alcalinos ou orgânicos de resíduos acídicos tais como ácidos carboxílicos, e semelhantes. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos convencionais ou os sais de amônio quaternários do composto de origem formados, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, tais sais convencionais não tóxicos incluem, mas não se limitam a, aqueles derivados a partir de ácidos orgânicos e inorgânicos selecionados a partir de ácidos 2-acetoxibenzóico, 2-hidróxi etano-sulfônico, acético, ascórbico, benzenossulfônico, benzóico, bicarbônico, carbônico, cítrico, edético, etanodissulfônico, sulfônico, fumárico, glucoheptônico, glucônico, glutâmico, ácido glicólico, glicoliarsanílico, hexilresorcínico, hidrabâmico, bromídrico, clorídrico, iodídrico, hidróximaleico, hidróxinaftóico, isetiônico, láctico, lactobiônico, lauril sulfônico, maleico, málico 1,2-etano, mandélico, metano-sulfônico, napsílico, nítrico, oxálico, pamóico, pantotênico, fenilacético, fosfórico, poligalacturônico, propiônico, salicílico, esteárico, subacético, succínico, sulfâmico, sulfanílico, sulfúrico, tânico, tartárico, toluenosulfônico, e a amina de ocorrência comum, por exemplo, glicina, alanina, fenilalanina, arginina, etc..

[0233] Outros exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem o ácido hexanóico, o ácido propiônico ciclopentano, ácido pirúvico, ácido malônico, 3 (4- hidróxibenzoil) benzóico, ácido cinâmico, ácido 4-clorobenzenossulfônico, ácido 2- naftalenossulfônico, ácido 4-toluenossulfônico, ácido canforsulfônico, ácido 4- metilbiciclo- [2,2,2] oct-2-eno-1-carboxílico, ácido 3-fenilpropiônico, ácido trimetilacético, ácido butilacético terciário, ácido mucônico, e similares. A presente invenção também engloba os sais formados quando um próton ácido presente no composto de origem ou é substituído por um ião metálico, por exemplo, um ião de metal alcalino, um ião alcalino-terroso, ou um ião alumínio; ou coordena com uma base orgânica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N- metilglucamina, e semelhantes.

[0234] Deve ser entendido que todas as referências a sais f armaceuticamente aceitáveis incluem formas de adição do solvente (solvatos) ou formas cristalinas (polimorfos) tal como definido aqui, do mesmo sal.

[0235] A composição da presente invenção pode também ser preparada na forma de ésteres, por exemplo, os ésteres farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, um grupo de funções de ácido carboxílico em um composto pode ser convertido no seu éster correspondente, por exemplo, um grupo metilo, etilo ou outro éster. Além disso, um grupo álcool em um composto pode ser convertido no seu éster correspondente, por exemplo, acetato, propionato ou outro éster.

[0236] A composição da presente invenção também pode ser preparada como pró-fármacos, por exemplo, pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis. Os termos "pró-fármaco"e "pró-droga" são usados no presente documento indiferentemente e referem-se a qualquer composto que libere um fármaco de origem ativo in vivo. Uma vez que pró-fármacos são conhecidos por melhorar numerosas qualidades desejáveis dos produtos farmacêuticos (por exemplo, solubilidade, biodisponibilidade, fabricação, etc), os compostos da presente invenção podem ser apresentados sob a forma de pró-fármacos. Assim, a presente invenção destina-se a cobrir as pro-fármacos dos compostos presentemente reivindicados, os métodos de fornecer os mesmos e as composições que contêm o mesmo. "Pró-fármacos"pretendem incluir quaisquer veículos covalentemente ligados que liberam um fármaco de origem ativo da presente invenção, in vivo quando tal pró-fármaco é administrado a um sujeito. Os pró-fármacos da presente invenção são preparados por modificação dos grupos funcionais presentes no composto, de tal forma que as modificações são clivadas, quer em manipulação de rotina ou in vivo, para o composto de origem. Os pró-fármacos incluem compostos da presente invenção em que um grupo hidróxi, amino, sulfidril, carbóxi ou carbonil está ligado a qualquer grupo que pode ser clivado in vivo para formar um hidróxilo livre, amino livre, sulfidril livre, carbóxi livre ou grupo carbonil livre, respectivamente.

[0237] Como exemplos de pró-fármacos incluem, mas não se limitam a, ésteres (por exemplo, acetato, dialquilaminoacetates, formatos, fosfatos, sulfatos e derivados de benzoato) e carbamatos (por exemplo, N, N-dimetilaminocarbonil) de grupos funcionais hidróxi, ésteres (por exemplo, ésteres de etilo, ésteres de morfolinoetanol) de grupos funcionais carbóxilo, derivados de N-acilo (por exemplo, N-acetil) bases de N-Mannich, bases de Schiff e enaminonas de grupos funcionais amino, oximas, acetais, cetais e ésteres de enol de cetona e aldeído funcional grupos em compostos da invenção, e outros semelhantes, Ver Bundegaard, H., design of Prodrugs, p1-92, Elesevier, New York-Oxford (1985).

[0238] A composição, ou sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres ou suas pró-fármacos, são administrados por via oral, por via nasal, por via transdérmica, pulmonar, por inalação, bucal, sublingual, intraperintoneamente, por via subcutânea, intramuscular, intravenosa, retal, intrapleural, intratecal, e parentérica. Em uma modalidade, o composto é administrado por via oral. Um versado na técnica vai reconhecer as vantagens de certas vias de administração.

[0239] O regime de dosagem utilizando os compostos é selecionado de acordo com uma variedade de fatores incluindo tipo, espécie, idade, peso, sexo e condição médica do paciente; a gravidade da condição a ser tratada; a via de administração; a função renal e hepática do paciente; e o composto particular ou seu sal empregue. Um médico ou um veterinário ordinariamente versado na técnica pode rapidamente determinar e prescrever a quantidade eficaz da droga requerida para prevenir, contrariar ou parar o progresso da condição.

[0240] As técnicas para a formulação e administração dos compostos descritos da invenção podem ser encontrados em Remington: a ciência ea prática de Farmácia, 19 a edição, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). Em uma modalidade, os compostos descritos no presente documento, e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, são usados em preparações farmacêuticas, em combinação com um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Os carreadores farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem agentes de enchimento ou diluentes sólidos inertes e soluções aquosas ou orgânicas estéreis. Os compostos estarão presentes em tais composições farmacêuticas em quantidades suficientes para fornecer a quantidade de dosagem desejada na faixa descrita no presente documento.

[0241] Todas as porcentagens e razões aqui usadas, a menos que indicado de outra forma, são em peso. Outras características e vantagens da presente invenção são evidentes a partir dos diferentes exemplos. Os exemplos apresentados ilustram diferentes componentes e metodologia útil na prática da presente invenção. Os exemplos não limitam a invenção reivindicada. Com base na presente descrição pelos especialistas na matéria pode identificar e utilizar outros componentes e metodologia úteis para a prática da presente invenção.

[0242] A presente invenção fornece composições e métodos para o tratamento de condições e doenças o decurso das quais podendo ser influenciado através da modulação do estado de metilação das histonas e outras proteínas, em que o referido estado de metilação é mediado, pelo menos em parte, pela atividade de EZH2. A modulação do estado de metilação das histonas pode, por sua vez influenciar o nível de expressão de genes alvos ativados por metilação, e/ou genes alvos suprimidos por metilação. O método inclui a administração a um sujeito com necessidade de tal tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição da presente invenção ou um sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, a um sujeito em necessidade de tal tratamento.

[0243] Com base em, pelo menos, o fato de que a metilação anormal de histona foi verificada como sendo associada com certos tipos de câncer e condições pré-cancerosas, de um método para o tratamento de câncer ou de uma condição pré- cancerosa com uma mutante de EZH2 em um sujeito compreende a administração ao sujeito com necessidade dos mesmos uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto que inibe a metilação. Em uma modalidade de um método para o tratamento de câncer ou de uma condição pré-cancerosa em um sujeito compreende a administração ao sujeito com necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto que inibe a conversão de H3-K27 não metilada para H3-K27 monometilada (H3-K27me1). Em uma modalidade de um método para o tratamento de câncer ou de uma condição pré-cancerosa em um sujeito compreende a administração ao sujeito com necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto que inibe a conversão de H3- K27 monometilada (H3-K27me1) para H3-K27 dimetilada (H3 -K27me2). Em uma modalidade de um método para o tratamento de câncer ou de uma condição pré- cancerosa em um sujeito compreende a administração ao sujeito com necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto que inibe a conversão de H3-K27me2 para H3-K27 trimetilada (H3-K27me3). Em uma modalidade de um método para o tratamento de câncer ou de uma condição pré- cancerosa em um sujeito compreende a administração ao sujeito com necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto que inibe a conversão de H3-K27me1 a H3-K27me2 e conversão de H3-K27me2 a H3 -K27me3. É importante notar que o aumento de uma doença específica em metilação pode ocorrer a cromatina em loci genômico chave na ausência de um aumento global na concentração intracelular de histona ou metilação proteína. Por exemplo, é possível que a hipermetilação aberrante em genes-chave relevantes da doença ocorra em um cenário de histona global ou hipometilação de proteínas.

[0244] Os moduladores de metilação podem ser usados para modular a proliferação de células, em geral. Por exemplo, em alguns casos, a proliferação excessiva pode ser reduzida com agentes que reduzem a metilação, enquanto a proliferação insuficiente, podem ser estimuladas com agentes que aumentam a metilação. Em consequência, as doenças que podem ser tratadas incluem doenças hiperproliferativas, tais como o crescimento de células benignas e crescimento de células malignas (câncer).

[0245] A doença em que a metilação de proteínas por EZH2 desempenha uma parte pode ser um câncer, de uma doença proliferativa de células, ou de uma condição pré-cancerosa. A presente invenção fornece ainda o uso de uma composição da presente invenção, ou um sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, a um sujeito em necessidade de tal tratamento, para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de câncer. Cânceres exemplares que podem ser tratados incluem linfomas, incluindo o linfoma de não-Hodgkin, linfoma folicular (FL) e com linfoma difuso de células B grandes (DLBCL); melanoma; e leucemias, incluindo CML. Condição pré-cancerosa exemplar inclui síndromes mielodisplásicas (MDS; anteriormente conhecido como Pré- Leucemia).

[0246] Em geral, os compostos que são moduladores de metilação podem ser usados para modular a proliferação de células, em geral. Por exemplo, em alguns casos, a proliferação excessiva pode ser reduzida com agentes que reduzem a metilação, enquanto a proliferação insuficiente, pode ser estimulada com agentes que aumentam a metilação. Em consequência, as doenças que podem ser tratadas pelos compostos da invenção incluem doenças hiperproliferativas, tais como o crescimento de células benignas e crescimento de células malignas.

[0247] Tal como usado no presente documento, um "sujeito com essa necessidade"é um sujeito que tem um distúrbio em que a metilação de proteínas por EZH2 desempenha um papel, ou um sujeito com um risco aumentado de desenvolver tal doença em relação à população em geral. Um sujeito com necessidade do mesmo pode ter uma condição pré-cancerosa. De um modo preferencial, um sujeito em necessidade do mesmo tem câncer. Um "sujeito" inclui um mamífero. O mamífero pode ser, por exemplo, qualquer mamífero, por exemplo, um humano, primata, ave, camundongo, rato, galinha, cão, gato, vaca, cavalo, cabra, camelo, ovelha ou porco. De preferência, o mamífero é um ser humano.

[0248] O objeto da presente invenção inclui qualquer ser humano que tenha sido diagnosticado com, apresenta sintomas de, ou está em risco de desenvolver um câncer ou de uma condição pré-cancerosa. O objeto da presente invenção inclui qualquer sujeito humano expressando um mutante de EZH2. Por exemplo, um mutante de EZH2 compreende uma ou mais mutações, em que a mutação é uma substituição, uma mutação pontual, uma mutação nonsense, uma mutação missense, uma deleção ou inserção de um ou qualquer outra mutação EZH2 descrito no presente documento.

[0249] Um sujeito com necessidade dos mesmos podem ter câncer refratário ou resistente. "O câncer de refratário ou resistentes" significa câncer que não responde ao tratamento. O câncer pode ser resistente no início do tratamento ou que podem tornar-se resistentes durante o tratamento. Em algumas modalidades, o sujeito em necessidade do mesmo tem reincidência após a remissão do câncer em terapia mais recente. Em algumas modalidades, o sujeito em necessidade do mesmo recebeu e não todas as terapias eficazes conhecidas para o tratamento do câncer. Em algumas modalidades, o indivíduo em sua necessidade recebeu, pelo menos, uma terapia anterior. Em certas modalidades, a terapêutica prévia, é a monoterapia. Em certas modalidades, a terapêutica prévia, é a terapia de combinação.

[0250] Em algumas modalidades, um sujeito em necessidade dos mesmos, podem ter um câncer derivado como um resultado de uma terapia anterior. "O câncer secundário", o câncer que surge devido a ou como resultado de tratamentos cancerígenos anteriores, como a quimioterapia.

[0251] O objeto pode também exibem resistência a inibidores da histona metiltransferase EZH2 ou qualquer outro agente terapêutico.

[0252] A invenção também apresenta um método de seleção de uma terapia de combinação para um sujeito com câncer. O método inclui os etapas de: detecção de uma ou mais mutações de EZH2 descritas no presente documento em uma amostra a partir do sujeito; e selecionar, com base na presença de um ou mais mutações de EZH2, uma terapia de combinação para o tratamento de câncer. Em uma modalidade, a terapia inclui a administração ao sujeito de uma composição da invenção. Em uma modalidade, o método inclui ainda a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição da invenção. Uma mutação EZH2 pode ser detectada utilizando qualquer método adequado conhecido na técnica. Mais processos estão descritos na publicação de patente US 20130040906, a qual é aqui incorporada por referência na sua totalidade.

[0253] Os métodos e usos aqui descritos podem incluir etapas de detecção de uma ou mais mutações de EZH2 descritas no presente documento, em uma amostra de um sujeito com necessidade do mesmo, antes e/ou após a administração de uma composição da presente invenção (por exemplo, uma composição que compreende um composto da Fórmula (IIa) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e um ou mais agentes terapêuticos) para o sujeito. A presença de uma ou mais mutações de EZH2 descritas no presente documento na amostra testada indica que o sujeito é responsivo à terapia de combinação da invenção.

[0254] A presente invenção fornece a medicina personalizada, tratamento e/ou controle do câncer de um paciente por rastreio genético de um ou mais mutações de EZH2 descritas no presente documento em questão. Por exemplo, a presente invenção fornece métodos para o tratamento ou alívio de um sintoma de câncer ou de uma condição pré-cancerosa, em um sujeito com necessidade do mesmo, determinando a capacidade de resposta do sujeito a uma terapêutica de combinação, e quando o sujeito é responsivo à terapia de combinação, a administração ao submeter uma composição da invenção. A capacidade de resposta é determinada através da obtenção de uma amostra a partir do sujeito e a detecção de uma ou mais mutações de EZH2 descritas no presente documento, e a presença de uma ou mais dessas mutações de EZH2 descritas no presente documento indica que o sujeito é sensível à composição da invenção. Uma vez que a capacidade de resposta de um objeto é determinada, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição, por exemplo, uma composição que compreende um composto de Fórmula (IIa) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e um ou mais agentes terapêuticos, pode ser administrada. A quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição pode ser determinada por um vulgar versado na técnica.

[0255] Tal como usado no presente documento, o termo "receptividade"é indiferenciável com termos "responsivo", "sensível", e a "sensibilidade", e entende-se que um sujeito está mostrandor respostas terapêuticas quando administrado com uma composição da invenção, por exemplo, As células tumorais ou tecidos tumorais do sujeito submetido a apoptose e/ou necrose, e/ou a exposição reduzida crescente, dividindo, ou proliferação. Este termo também significa que um sujeito tem ou terá uma probabilidade mais elevada, em relação à população em geral, de que mostra as respostas terapêuticas quando administrado em uma composição da invenção, por exemplo, células tumorais ou tecidos tumorais do sujeito submetido a apoptose e/ou necrose, e/ou a exposição reduzida crescente, em divisão, ou em proliferação.

[0256] O termo "amostra" significa qualquer amostra biológica obtida a partir do sujeito, incluem mas não se limitam a, células, tecidos, amostras de fluidos corporais (incluindo, mas não limitados a, muco, sangue, plasma, soro, urina, saliva, e de sémen), células tumorais e tecidos tumorais. De preferência, a amostra é selecionada a partir de medula óssea, células do sangue periférico, o sangue, plasma e soro. As amostras podem ser fornecidas pelo sujeito sob tratamento ou teste. Alternativamente as amostras podem ser obtidas pelo médico de acordo com a prática de rotina na técnica.

[0257] Tal como usado no presente documento, o termo "distúrbio proliferativo celular" refere-se a condições em que o crescimento desregulado ou anormal, ou ambos, de células pode levar ao desenvolvimento de uma condição ou doença indesejável, que pode ou não ser cancerígena. Distúrbios proliferativos celulares exemplares da invenção englobam uma variedade de condições em que a divisão celular é desregulada. Distúrbio proliferativo de células exemplares incluem, mas não se limitam a, tumores, tumores benignos, tumores malignos, condições pré- cancerosas, tumores in situ, tumores encapsulados, tumores metastáticos, tumores líquidos, os tumores sólidos, os tumores imunológicos, tumores hematológicos, cânceres, carcinomas, leucemias, linfomas, sarcomas, e as células que se dividem rapidamente. O termo "célula em divisão rápida", tal como usado no presente documento é definido como qualquer célula que se divide com uma taxa que excede ou é maior do que o esperado ou observado entre células vizinhas ou justaposto dentro do mesmo tecido. Um distúrbio proliferativo celular inclui um pré-câncer ou uma condição pré-cancerosa. A distúrbio proliferativo celular inclui o câncer. De preferência, os métodos aqui fornecidos são usados para tratar ou aliviar um sintoma de câncer. O termo "câncer"inclui tumores sólidos, assim como, tumores hematológicos e/ou malignidade. Uma "célula de pré-câncer"ou "célula pré- cancerosa"é uma célula que manifesta um distúrbio proliferativo celular, que é um pré-câncer ou de uma condição pré-cancerosa. Uma "célula de câncer"ou "célula cancerosa"é uma célula que manifesta um distúrbio proliferativo das células que é um câncer. Quaisquer meios reprodutíveis de medição podem ser usados para identificar as células de câncer ou células pré-cancerosas. As células de câncer ou células pré- cancerosas podem ser identificadas por identificação do tipo histológico ou peneiração de uma amostra de tecido (por exemplo, uma amostra de biópsia). As células de câncer ou células pré-cancerosas podem ser identificadas através do uso de marcadores moleculares adequados.

[0258] As condições ou distúrbios não cancerosos exemplares incluem, mas não se limitam a, artrite reumatóide; inflamação; doença auto-imune; condições linfoproliferativas; acromegalia; espondilite reumatóide; osteoartrite; gota, outras condições artríticas; sepses; choque séptico; choque endotóxico; sepsia gram- negativa; síndrome do choque tóxico; asma; síndrome da angústia respiratória do adulto; doença pulmonar obstrutiva crônica; inflamação pulmonar crônica; doença inflamatória intestinal; Doença de Crohn; psoríase; eczema; colite ulcerativa; fibrose pancreática; fibrose hepática; doença renal aguda e crônica; síndrome do intestino irritável; pirése; reestenose; malária cerebral; acidente vascular cerebral e lesão isquêmica; trauma neural; Doença de Alzheimer; Doença de Huntington; Doença de Parkinson; dor aguda e crônica; rinite alérgica; conjuntivite alérgica; insuficiência cardíaca crônica; síndrome coronariana aguda; caquexia; malária; lepra; leishmaniose; Doença de Lyme; A síndrome de Reiter; sinovite aguda; degeneração muscular, bursite; tendinite; tenossinovite; hérnia, rupturas, ou síndrome do disco intervertebral prolapso; osteopetrosis; trombose; reestenose; silicose; sarcose pulmonar; doenças de reabsorção óssea, tais como osteoporose; enxerto-versus- hospedeiro de reação; Esclerose múltipla; lupus; fibromialgia; AIDS e outras doenças virais, tais como Herpes Zoster, Herpes Simplex I ou II, vírus da gripe e citomegalovírus; e diabetes mellitus.

[0259] Os cânceres exemplares incluem, mas não se limitam a, carcinoma adrenocortical, cânceres relacionados com a AIDS, linfoma relacionado à AIDS, câncer anal, câncer anorretal, câncer do canal anal, câncer de apêndice, infância astrocitoma cerebelar, infância astrocitoma cerebral, basais carcinoma de células, o câncer de pele (não-melanoma), o câncer das vias biliares, câncer do duto biliar extra- hepática, câncer do duto biliar intra-hepática, câncer de bexiga, câncer de bexiga urinário, osso e câncer conjunta, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, o câncer cerebral, tumor cerebral, tronco cerebral glioma, astrocitoma cerebelar, astrocitoma cerebral/glioma maligno, ependimoma, meduloblastoma, tumores primitivos neuroectodeimal supratentoriais, via visual e glioma hipotálamo, câncer de mama, adenomas brônquicos/carcinóides, tumor carcinóide, gastrointestinal, câncer do sistema nervoso, o linfoma do sistema nervoso, do sistema nervoso central câncer, o linfoma do sistema nervoso central, o câncer de colo do útero, cânceres infantis, a leucemia linfocítica crônica, leucemia mielóide crônica, doenças reumáticas crônicas, câncer de cólon, câncer colorretal, linfoma cutâneo de células T, neoplasia linfóide, micose fungóide, Síndrome de Seziary, câncer endometrial, esofágico câncer, tumor de células germinativas extracraniana, tumor de células germinativas extragonadal, câncer do duto biliar extra-hepática, câncer de olho, melanoma intra-ocular, retinoblastoma, câncer de vesícula biliar, gástrica (estômago) de câncer, tumor carcinóide gastrointestinal, tumor estromal gastrointestinal (GIST), tumor de células germinativas, ovário tumor de células germinativas, glioma tumor trofoblástico gestacional, câncer de cabeça e pescoço, câncer hepatocelular (do fígado), linfoma de Hodgkin, câncer de hipofaringe, melanoma intra-ocular, câncer ocular, tumores de células da ilhota do pâncreas (endócrino), Sarcoma de Kaposi, câncer de rim, câncer renal, o rim câncer, câncer de laringe, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielóide crônica, leucemia de células pilosas, lábio e câncer de cavidade oral, câncer de fígado, câncer de pulmão, câncer de pulmão de não-pequenas células, câncer de pulmão de pequenas células, linfomas relacionados com AIDS, linfoma não-Hodgkin, linfoma primário do sistema nervoso central, macroglobulinemia DE Waldenstram, meduloblastoma, melanoma, intraocular (olho) melanoma, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma maligno, mesotelioma, câncer de colo epidermóide metastático, câncer de boca, câncer de língua, síndrome de neoplasia endócrina múltipla, MF, síndromes mielodisplásicas, doenças mielodisplásicas/mieloproliferativas, leucemia mielóide crônica, leucemia mielóide aguda, mieloma múltiplo, doenças reumáticas crônicas, câncer de nasofaringe, neuroblastoma, câncer bucal, câncer de cavidade oral, câncer de orofaringe, câncer de ovário, ovário câncer epitelial, de ovário de baixo potencial de malignidade do tumor, câncer pancreático, câncer de células da ilhota pancreática, seios paranasais e câncer de cavidade nasal, câncer de paratireóide, câncer de pênis, câncer de faringe, feocromocitoma, pineoblastoma e tumores primitivos neuroectodérmicas supratentoriais, tumor hipofisário, neoplasia de células plasmáticas/múltipla mieloma, blastoma pleuropulmonar, câncer de próstata, câncer retal, pelve renal e ureter, câncer de células transicionais, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, câncer da glândula salivar, família de Ewing de tumores do sarcoma, sarcoma de Kaposi, sarcoma de tecidos moles, câncer de útero, sarcoma uterino, câncer de pele (não-melanoma), o câncer de pele (melanoma), carcinoma de células de Merkel pele, câncer de intestino delgado, sarcoma dos tecidos moles, carcinoma de células escamosas, estômago (gástrico) câncer, tumores primitivos neuroectodérmicas supratentoriais, câncer testicular, câncer de garganta, timoma, timoma e do timo carcinoma, câncer da tireóide, câncer de células transicionais da pelve renal e ureter e outros órgãos urinários, tumor trofoblástica gestacional, câncer uretral, câncer uterino endometrial, sarcoma uterino, câncer de corpo uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e tumor de Wilms.

[0260] Um "distúrbio proliferativo celular do sistema hematológico" é um distúrbio da proliferação celular envolvendo células do sistema hematológica. Uma célula de doença proliferativa do sistema hematológica pode incluir linfoma, leucemia, tumores mielóides, tumores de células mastro, mielodisplasia, gamopatia monoclonal benigna, granulomatose linfomatoide, papulose linfomatoide, policitemia vera, leucemia mielóide crônica, metaplasia mielóide agnogénica, e trombocitose essencial. Uma célula de doença proliferativa do sistema hematológica pode incluir hiperplasia, displasia, e metaplasia de células do sistema hematológica. De preferência, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar um câncer selecionado a partir do grupo que consiste em um câncer hematológica da presente invenção, ou um distúrbio da proliferação celular hematológica da presente invenção. Um câncer hematológico da presente invenção pode incluir o mieloma múltiplo, linfoma (incluindo o linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, linfomas infantis, e linfomas de linfocítica e origem cutânea), leucemia (incluindo leucemia infantil, leucemia de células pilosas, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielóide crônica, leucemia mielóide crônica, e leucemia de mastócitos), neoplasmas mielóides e neoplasias de células mastro.

[0261] Um "distúrbio proliferativo celular do pulmão" é um distúrbio da proliferação celular, envolvendo células do pulmão. Distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células do pulmão. Distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir câncer de pulmão, um pré-câncer ou condição pré-cancerosa do pulmão, tumores benignos ou lesões do pulmão e tumores malignos ou lesões do pulmão e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo que não seja o pulmão. De preferência, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar o câncer de pulmão ou distúrbios proliferativos celulares do pulmão. O câncer de pulmão pode incluir todas as formas de câncer do pulmão. O câncer de pulmão pode incluir neoplasias malignas do pulmão, carcinoma in situ, tumores carcinóides típicos e tumores carcinóide atípico. O câncer do pulmão pode incluir o câncer do pulmão de pequenas células ("SCLC "), câncer do pulmão de células não pequenas ("NSCLC"), o carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, carcinoma de células pequenas, carcinoma de células grandes, carcinoma de células adenoescamosas e mesotelioma. O câncer de pulmão pode incluir "carcinoma cicatriz," carcinoma bronchioalveolar, carcinoma de células gigantes, carcinoma de células fusiformes, e carcinoma neuroendócrino de grandes células. O câncer de pulmão pode incluir neoplasias pulmonares que têm histológica e heterogeneidade ultrastructual (por exemplo, tipos de células mistas).

[0262] Os distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células do pulmão. Distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir o câncer do pulmão, condições pré-cancerosas do pulmão. Distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir hiperplasia, metaplasia, e displasia do pulmão. Distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir a hiperplasia induzida por asbestos, metaplasia escamosa, e benigna metaplasia mesotelial reativo. Distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir a substituição do epitélio colunar com epitélio escamoso estratificado e da mucosa displasia. Os sujeitos expostos a agentes ambientais nocivos inalados, como fumaça de cigarro e amianto pode estar em risco aumentado de desenvolver distúrbios proliferativos celulares do pulmão. Doenças pulmonares prévias que podem predispor sujeitos ao desenvolvimento de distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir doença pulmonar intersticial crônica, doença pulmonar necrotizante, esclerodermia, doença reumatóide, sarcoidose, pneumonite intersticial, tuberculose, pneumonias de repetição, fibrose pulmonar idiopática, granulomas, asbestose, alveolite fibrosante, e doença de Hodgkin.

[0263] Um "distúrbio proliferativo celular do cólon" é um distúrbio da proliferação celular, envolvendo células do cólon. De preferência, a doença de natureza proliferativa celular de cólon é o câncer do cólon. De preferência, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar o câncer do cólon ou distúrbios proliferativos celulares do cólon. O câncer de cólon pode incluir todas as formas de câncer de cólon. O câncer de cólon pode incluir câncer de cólon esporádico como hereditário. O câncer de cólon pode incluir tumores malignos do cólon, carcinoma in situ, tumores carcinóides típicos e tumores carcinóide atípico. O câncer de cólon pode incluir adenocarcinoma, o carcinoma de células escamosas e carcinoma de células adeno. O câncer do cólon pode ser associado com um distúrbio hereditária selecionado a partir do grupo que consiste em câncer colorretal hereditário não poliposo, polipose adenomatosa familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil. O câncer do cólon pode ser causado por um distúrbio hereditária selecionado a partir do grupo que consiste em câncer colorretal hereditário não poliposo, polipose adenomatosa familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil.

[0264] Os distúrbios proliferativos celulares do cólon podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células do cólon. Distúrbios proliferativos celulares do cólon podem incluir o câncer do cólon, condições pré- cancerosas do cólon, os pólipos adenomatosos do cólon e lesões metacrônicos do cólon. Uma célula de doença proliferativa do cólon pode incluir o adenoma. Distúrbios proliferativos celulares do cólon podem ser caracterizados por hiperplasia, metaplasia, e displasia do cólon. Doenças prévias do cólon que podem predispor sujeitos ao desenvolvimento de distúrbios proliferativos celulares do cólon podem incluir câncer de cólon prévio. A Doença corrente que pode predispor os sujeitos para o desenvolvimento de distúrbios proliferativos celulares do cólon pode incluir a doença de Crohn e colite ulcerativa. Uma célula de doença proliferativa do cólon pode ser associada com uma mutação em um gene selecionado do grupo que consiste em p53, ras, FAP e DCC. Um sujeito pode ter um risco elevado de desenvolver um distúrbio proliferativo de células do cólon, devido à presença de uma mutação em um gene selecionado do grupo que consiste em p53, ras, FAP e DCC.

[0265] Um "distúrbio proliferativo celular do pâncreas" é um distúrbio da proliferação celular, envolvendo células do pâncreas. Distúrbios proliferativos de células do pâncreas podem incluir todas as formas de distúrbios celulares proliferativos que afetam as células pancreáticas. Distúrbios proliferativos de células do pâncreas podem incluir câncer do pâncreas, um pré-câncer ou condição pré- cancerosa do pâncreas, hiperplasia do pâncreas, e dysaplasia do pâncreas, tumores benignos ou lesões do pâncreas, e tumores malignos ou lesões do pâncreas, e lesões metastáticas nos tecidos e órgãos do corpo que não seja o pâncreas. O câncer de pâncreas inclui todas as formas de câncer do pâncreas. O câncer de pâncreas pode incluir adenocarcinoma ductal, carcinoma adeno, carcinoma de células gigantes pleomórfico, adenocarcinoma mucinoso, carcinoma de células gigantes tipo osteoclasto, cistoadenocarcinomas, carcinoma acinar, carcinoma de grandes células não classificada, carcinoma de pequenas células, pancreatoblastoma, neoplasia papilar mucinoso cistadenoma, neoplasia cística papilar, e cistadenoma serosa. O câncer de pâncreas também pode incluir neoplasias pancreáticas tendo histológica e heterogeneidade ultrastructual (por exemplo, tipos de células mistas).

[0266] Um "distúrbio proliferativo de células da próstata" é um distúrbio da proliferação celular envolvendo células da próstata. Distúrbios proliferativos de células da próstata podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células da próstata. Distúrbios proliferativos celulares da próstata podem incluir câncer de próstata, um pré-câncer ou condição pré-cancerosa da próstata, tumores benignos ou lesões da próstata e tumores malignos ou lesões da próstata, e as lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo que não seja a próstata. Distúrbios proliferativos de células da próstata podem incluem hiperplasia, metaplasia, e displasia da próstata.

[0267] Um "distúrbio proliferativo de células da pele"é um distúrbio da proliferação celular envolvendo células da pele. Distúrbios proliferativos de células da pele podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células da pele. Distúrbios proliferativos celulares da pele podem incluir um pré- câncer ou condição pré-cancerosa da pele, tumores benignos ou lesões da pele, melanoma, melanoma maligno e outros tumores malignos ou lesões da pele, e as lesões metastáticas em tecidos e órgãos no corpo outros do que o da pele. Distúrbios proliferativos celulares da pele podem incluir a hiperplasia, a metaplasia, e a displasia da pele.

[0268] Um "distúrbio proliferativo celular do ovário" é um distúrbio da proliferação celular, envolvendo células do ovário. Distúrbios proliferativos celulares do ovário podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células do ovário. Distúrbios proliferativos celulares do ovário podem incluir um pré-câncer ou condição pré-cancerosa do ovário, tumores benignos ou lesões de ovário, câncer de ovário, tumores malignos ou lesões dos ovários e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo que não seja o ovário. Distúrbios proliferativos celulares da pele podem incluir a hiperplasia, a metaplasia, e displasia das células do ovário.

[0269] Um "distúrbio proliferativo de células da mama"é um distúrbio da proliferação celular envolvendo células da mama. Distúrbios proliferativos celulares da mama podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células da mama. Distúrbios proliferativos celulares da mama podem incluir câncer de mama, um pré-câncer ou condição pré-cancerosa da mama, tumores benignos ou lesões da mama e tumores malignos ou lesões da mama e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo que não seja a mama. Distúrbios proliferativos celulares da mama podem incluir a hiperplasia, a metaplasia, e a displasia da mama.

[0270] Um distúrbio proliferativo celular da mama pode ser uma condição pré- cancerosa da mama. As composições da presente invenção podem ser usadas para tratar uma condição pré-cancerosa da mama. Uma condição pré-cancerosa da mama pode incluir hiperplasia atípica da mama, o carcinoma ductal in situ (DCIS), carcinoma intraductal, carcinoma lobular in situ (LCIS), neoplasia lobular, e fase de 0 ou grau 0 de crescimento ou lesão da mama (por exemplo, câncer de mama de estágio 0 ou grau 0, ou carcinoma in situ). A condição pré-cancerosa da mama pode ser encenada de acordo com o esquema de classificação TNM como aceito pelo American Joint Committee on Cancer (AJCC), onde o tumor primário (T) foi atribuído um estágio de T0 ou Tis; e onde os linfonodos regionais (N) foram atribuídos com um estágio de N0; e onde metástase distante (M) foi atribuída com um estágio de M0.

[0271] Um distúrbio proliferativo celular da mama pode ser câncer da mama. De preferência, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar o câncer da mama. O câncer da mama inclui todas as formas de câncer da mama. O câncer de mama pode incluir câncer de mama epiteliais primários. O câncer de mama pode incluir tipos de câncer em que a mama é envolvida por outros tumores como linfoma, sarcoma ou melanoma. O câncer da mama pode incluem carcinoma da mama, o carcinoma ductal da mama, o carcinoma lobular da mama, carcinoma indiferenciado da mama, phyllodes cistosarcoma da mama, angiossarcoma da mama e linfoma primário da mama. O câncer de mama pode incluir Estágios I, II, IIIA, IIIB, IIIC e IV de câncer de mama. Carcinoma ductal da mama pode incluir carcinoma invasivo, carcinoma invasivo in situ, com o componente predominante intraductal, câncer da mama inflamatório, e um carcinoma ductal da mama com um tipo histológico selecionado a partir do grupo que consiste em comedão, mucinoso (colóide), medular, medular com infiltrado linfocítico, papilar, scirrhous e tubular. O carcinoma lobular da mama pode incluir carcinoma lobular invasivo, com predominante componente in situ, carcinoma lobular invasivo, e infiltrando carcinoma lobular. O câncer da mama pode incluir a doença de Paget, doença de Paget com carcinoma intraductal, e doença de Paget com carcinoma ductal invasivo. O câncer de mama pode incluir neoplasias da mama com histológico e heterogeneidade ultraestrutural (por exemplo, tipos de células mistas).

[0272] De preferência, o composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato, pode ser usado para tratar o câncer da mama. Um câncer da mama que se pretende tratar pode incluir câncer da mama familiar. Um câncer da mama que se pretende tratar pode incluir câncer da mama esporádico. Um câncer da mama que se pretende tratar pode surgir em um sujeito do sexo masculino. Um câncer da mama que se pretende tratar podem surgir em um paciente do sexo feminino. Um câncer da mama que se pretende tratar podem surgir em um paciente do sexo feminino de pré- menopausa ou pós-menopausa um sujeito do sexo feminino. Um câncer da mama que se pretende tratar podem surgir em um sujeito igual a ou com mais de 30 anos de idade, ou um sujeito com menos de 30 anos de idade. Um câncer da mama que se pretende tratar surgiu em um sujeito igual ou acima de 50 anos de idade, ou um sujeito mais jovem que 50 anos de idade. Um câncer da mama que se pretende tratar pode surgir em um sujeito igual ou acima de 70 anos de idade, ou um sujeito mais jovem que 70 anos de idade.

[0273] Um câncer da mama que se pretende tratar pode ser especificado para identificar uma mutação espontânea ou familiar em BRCA1, BRCA2, ou p53. Um câncer da mama que se pretende tratar pode ser caracterizado como tendo uma amplificação do gene HER2/neu, como sobre-expressão de HER2/neu, ou como tendo um baixo, médio ou alto nível de expressão de HER2/neu. Um câncer da mama que se pretende tratar pode ser especificado por um marcador selecionado de entre o grupo que consiste em receptor de estrogénio (ER), receptor de progesterona (PR), o fator de crescimento epidérmico humano receptor 2, Ki-67, CA 15-3, CA 27 -29, e c- Met. Um câncer de mama que está sendo tratado pode ser especificado como ER- desconhecido, ER-rico ou ER-pobre. Um câncer da mama que se pretende tratar pode ser especificado como ER-negativo ou ER-positivo. A tipagem ER de um câncer da mama pode ser realizado por quaisquer meios reprodutíveis. A tipagem ER de um câncer da mama pode ser realizada como descrito em Onkologie 27: 175-179 (2004). Um câncer de mama que está sendo tratado pode ser especificado como PR- desconhecido, PR-rico, ou PR-pobre. Um câncer da mama que se pretende tratar pode ser especificado como PR-negativo ou PR-positivo. Um câncer da mama que se pretende tratar pode ser especificado como receptor positivo ou receptor negativo. Um câncer da mama que se pretende tratar pode ser caracterizado como estando associado com níveis sanguíneos elevados de CA 15-3, CA ou 27-29, ou ambos.

[0274] Um câncer da mama que se pretende tratar pode incluir um tumor localizado da mama. Um câncer da mama que se pretende tratar pode incluir um tumor da mama, que está associado a uma biópsia de linfonodo sentinela negativo (SLN). Um câncer da mama que se pretende tratar pode incluir um tumor da mama, que está associado com uma biópsia positiva nó linfático sentinela (SLN). Um câncer da mama que se pretende tratar pode incluir um tumor da mama, que está associado com um ou mais nódulos linfáticos axilares positivos, em que os nodos linfáticos axilares foram encenadas por qualquer método aplicável. Um câncer da mama que se pretende tratar pode incluir um tumor da mama que tenha sido especificado como tendo estado nodal negativo (por exemplo, nódulos negativo) ou estado nodal positivo (por exemplo, nódulos positivos). Um câncer da mama que se pretende tratar pode incluir um tumor da mama que tenha metastizado para outros locais no corpo. Um câncer da mama que se pretende tratar pode ser especificado como tendo metastizado para um local selecionado a partir do grupo que consiste em osso, pulmão, fígado, cérebro ou. Um câncer de mama que está sendo tratado pode ser especificado de acordo com uma característica selecionada do grupo que consiste em metastático, localizada, regional, local, regional, localmente avançado, distante, multicêntrico, bilateral, ipsilateral, contralateral, recém-diagnosticados, recorrente, e inoperável

[0275] Um composto da presente invenção, ou um seu sal, éster, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente, pode ser usado para tratar ou prevenir um distúrbio proliferativo das células da mama, ou para tratar ou prevenir o câncer da mama, em um sujeito ter um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral. Um sujeito com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é um sujeito feminino com história familiar ou história pessoal de câncer de mama. Um sujeito com um risco aumentado de desenvolver câncer da mama em relação à população em geral é um sujeito do sexo feminino com uma linha germinal ou uma mutação espontânea em BRCA1 ou BRCA2, ou ambos. Um sujeito com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é um sujeito feminino, com um histórico familiar de câncer de mama e uma linha germinal ou mutação espontânea em BRCA1 ou BRCA2, ou ambos. Um sujeito com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é uma mulher que é maior de 30 anos de idade, maior de 40 anos, maior de 50 anos, maior de 60 anos, maior de 70 anos, maior de 80 anos ou maior de 90 anos de idade. Um sujeito com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é um sujeito com hiperplasia atípica da mama, carcinoma ductal in situ (DCSI), carcinoma intraductal, carcinoma lobular in situ (LCIS), neoplasia lobular, crescimento ou lesão da mama de estágio 0 (por exemplo, estágio de 0 ou grau 0 de câncer da mama, ou carcinoma in situ).

[0276] Um câncer da mama que se pretende tratar pode histologicamente classificados de acordo com o sistema de Scarff-Bloom-Richardson, um tumor da mama, em que foi atribuída uma pontuação de contagem de mitose de 1, 2, ou 3; uma pontuação de pleiomorfismo nuclear de 1, 2, ou 3; uma pontuação de formação de túbulos de 1, 2, ou 3; e uma pontuação de total Scarff-Bloom-Richardson de entre 3 e 9 de um câncer da mama que se pretende tratar pode ser atribuído um grau do tumor de acordo com o Painel de Consenso Internacional sobre o tratamento de câncer da mama selecionado a partir do grupo que consiste em grau 1, grau 1-2, grau 2, grau 23, ou grau 3.

[0277] Um câncer que está sendo tratado pode ser classificado de acordo com o Sistema de classificação TNM do American Joint Committee on Cancer (AJCC), onde o tumor (T) foi atribuído um estágio de TX, T1, T1mic, T1a, T1b, t1c, T2, T3, T4, T4a, T4b, T4c, ou T4d; e onde os linfonodos regionais (N) foram atribuídos um estágio de NX, N0, N1, N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3B, ou N3C; e onde metástase distante (M) pode ser atribuída com um estágio de MX, M0, ou M1. Um câncer que está sendo tratado pode ser classificado de acordo com classificação do American Joint Committee on Cancer (AJCC) como Estágio I, Fase II, Estágio IIB, Estágio IIIa, Estágio IIIB, Estágio IIIC, ou Estágio IV. Um câncer que está sendo tratado pode ser atribuído uma série de acordo com uma classificação da AJCC como Grau GX (por exemplo, grau não pode ser avaliado), de Grau 1, Grau 2, Grau 3 ou Grau 4 de um câncer que se pretende tratar pode ser classificado, segundo uma classificação patológica de AJCC (pN) de pNX, pN0, PN0 (I-), PN0 (I+), PN0 (mol-), PN0 (mol+), PN1, PN1(mi), PN1a, PN1b, PN1c, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b, ou pN3c.

[0278] Um câncer que está sendo tratado pode incluir um tumor que tenha sido determinado ser menor do que ou igual a cerca de 2 centímetros de diâmetro. Um câncer que está sendo tratado pode incluir um tumor que tenha sido determinada como sendo de cerca de 2 a cerca de 5 centímetros de diâmetro. Um câncer que está sendo tratado pode incluir um tumor que tenha sido determinado para ser maior ou igual a cerca de 3 centímetros de diâmetro. Um câncer que está sendo tratado pode incluir um tumor que tenha sido determinada para ser maior que 5 cm em diâmetro. Um câncer que está sendo tratado pode ser classificado pela aparência microscópica bem diferenciada, moderadamente diferenciada, fracamente diferenciado, ou indiferenciado. Um câncer que está sendo tratado pode ser classificado pela aparência microscópica com respeito à contagem de mitose (por exemplo, quantidade de divisão celular) ou pleomorfismo nuclear (por exemplo, alteração de células). Um câncer que está sendo tratado pode ser classificado pela aparência microscópica como estando associado com áreas de necrose (por exemplo, áreas de células a morrer ou degenerando). Um câncer que está sendo tratado pode ser classificado como tendo um cariótipo anormal, tendo um número anormal de cromossomas, ou tendo um ou mais cromossomas que são anormais na aparência. Um câncer que está sendo tratado pode ser classificado como sendo aneuploidia, triplóides, tetraplóide, ou como tendo uma ploidia alterada. Um câncer que está sendo tratado pode ser classificado como tendo uma translocação cromossômica ou uma deleção ou duplicação de um cromossoma inteiro, ou uma região de deleção, duplicação ou amplificação de uma parte de um cromossoma.

[0279] Um câncer que está sendo tratado pode ser avaliado por citometria de DNA, citometria de fluxo, ou citometria de imagem. Um câncer que está sendo tratado pode ser caracterizado como tendo 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ou 90% de células na fase de síntese de divisão celular (por exemplo, na fase S da divisão celular). Um câncer que está sendo tratado pode ser caracterizado como tendo uma baixa fração da fase S ou uma fração elevada de fase S.

[0280] Tal como usado no presente documento, uma "célula normal"é uma célula que não pode ser classificada como parte de uma "distúrbio proliferativo celular". Uma célula normal carece de crescimento desregulado ou anormal, ou ambos, que pode levar ao desenvolvimento de uma condição de doença ou indesejada. De preferência, uma célula normal dispuser funcionando normalmente no ciclo celular dos mecanismos de controle do ponto de verificação.

[0281] Tal como usado no presente documento, "contato de uma célula"refere-se a uma condição em que um composto ou outra composição de matéria se encontra em contato direto com uma célula, ou está perto o suficiente para induzir um efeito biológico desejado em uma célula.

[0282] Tal como usado no presente documento, "composto candidato" refere- se a um composto da presente invenção, ou um seu sal, éster, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente, que tenha sido ou venha a ser testado em um ou mais ensaios biológicos in vitro ou in vivo, a fim de determinar se o composto é suscetível de provocar uma resposta biológica ou médica desejada em uma célula, tecido, sistema, animal ou humano que está sendo procurada por um investigador ou clínico. Um composto candidato é um composto da presente invenção, ou um seu sal, éster, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente. A resposta biológica ou médica pode ser o tratamento de câncer. A resposta biológica ou médica pode ser o tratamento ou prevenção de um distúrbio da proliferação celular. In vitro ou in vivo, os ensaios biológicos podem incluir, mas não se limitam a, ensaios de atividade enzimática, ensaios de deslocamento da mobilidade eletroforética, ensaios de gene repórter in vitro, ensaios de viabilidade de células, e os ensaios descritos no presente documento.

[0283] Tal como usado no presente documento, "tratamento" ou "tratar", descreve a gestão e cuidados de um paciente com a finalidade de combater uma doença, condição, ou perturbação e inclui a administração de um composto da presente invenção, ou de um farmaceuticamente aceitável sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato, para aliviar os sintomas ou complicações da doença, condição ou distúrbio, ou para eliminar a doença, condição ou distúrbio.

[0284] A composição da presente invenção, ou sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, pode também ser usada para evitar uma doença, condição ou distúrbio. Tal como usado no presente documento, "prevenção"ou "prevenir" descreve redução ou eliminação do aparecimento dos sintomas ou complicações da doença, condição ou distúrbio.

[0285] Tal como usado no presente documento, o termo "aliviar"é usado para descrever um processo em que a gravidade de um sintoma ou sinal de um distúrbio é diminuída. Importantemente, um sinal ou sintoma pode ser aliviado sem ser eliminado. Em uma modalidade preferida, a administração de composições farmacêuticas da invenção conduz à supressão de um sinal ou sintoma, no entanto, não é necessária a eliminação. As dosagens eficazes são esperadas para diminuir a gravidade de um sintoma ou sinal. Por exemplo, um sinal ou sintoma de uma doença, como o câncer, o que pode ocorrer em vários locais, é aliviada se a gravidade do câncer é diminuída em pelo menos uma das várias localizações.

[0286] Tal como usado no presente documento, o termo "intensidade"é usado para descrever o potencial de câncer para transformar a partir de uma pré-cancerosa, ou benigno, estado para um estado maligno. Como alternativa, ou além disso, a gravidade é usada para descrever um estágio do câncer, por exemplo, de acordo com o sistema TNM (aceito pela International Union Against Cancer (UICC) e American Joint Committee on Cancer (AJCC)) ou por outros métodos reconhecidos na técnica. Estágio do câncer refere-se à extensão ou gravidade do câncer, com base em fatores como a localização do tumor primário, tamanho do tumor, número de tumores, e dos linfonodos comprometidos (disseminação do câncer para os linfonodos). Alternativamente, ou em adição, a gravidade é usada para descrever o grau do tumor através de métodos reconhecidos na técnica (ver, National Cancer Institute, www.cancer.gov). O grau do tumor é um sistema usado para classificar as células de câncer em termos de como anormal são vistos sob um microscópio e rapidez com que o tumor tende a crescer e se espalhar. Muitos fatores são considerados na determinação do grau do tumor, incluindo a estrutura e padrão de crescimento das células. Os fatores específicos usados para determinar o grau do tumor variam de acordo com cada tipo de câncer. Gravidade também descreve um grau histológico, também chamado de diferenciação, que se refere a quanto as células tumorais se assemelham a células normais do mesmo tipo de tecido (ver, Instituto Nacional do Câncer, www.cancer.gov). Além disso, a gravidade descreve um grau nuclear, que se refere ao tamanho e forma do núcleo de células de tumor e a porcentagem de células tumorais que estão em divisão (ver, National Cancer Institute, www.cancer.gov).

[0287] Em outro aspecto da invenção, descreve o grau de gravidade de um tumor que tenha secretada fatores de crescimento, matriz extracelular degradada, se tornar vascularizada, perderam a aderência a tecidos justapostas, ou metástase. Além disso, a gravidade descreve o número de locais para que um tumor primário tem metástases. Finalmente, a gravidade inclui a dificuldade de tratamento de tumores de diferentes tipos e localizações. Por exemplo, tumores inoperáveis, os cânceres que têm maior acesso a vários sistemas do corpo (hematológicas e tumores imunológicos), e aqueles que são os mais resistentes aos tratamentos tradicionais são considerados mais graves. Nestas situações, o prolongamento da expectativa de vida do sujeito e/ou a redução da dor, reduzindo a razão de células de câncer ou células restringindo a um sistema, e a melhoria fase câncer/tumor grau/grau histológico/grau nuclear são considerados aliviar um sintoma ou sinal do câncer.

[0288] Como é usado no presente documento o termo "sintoma"é definido como uma indicação de doença, lesão, ou de que algo não está bem no organismo. Os sintomas são sentidos ou percebidos pelo indivíduo tendo o sintoma, mas não podem ser facilmente notados pelos outros. Outros são definidos como não- profissionais de cuidados de saúde.

[0289] Como é usado no presente documento o termo "sinal"é também definido como uma indicação de que algo não está bem no organismo. Mas os sinais são definidos como coisas que podem ser vistos por um médico, enfermeiro ou outro profissional de saúde.

[0290] O câncer é um grupo de doenças que podem causar praticamente qualquer sinal ou sintoma. Os sinais e sintomas dependem de onde o câncer é, do tamanho do câncer, e de quanto isso afeta os órgãos próximos ou estruturas. Se ocorre a disseminação do câncer (metástase), em seguida, os sintomas podem surgir em diferentes partes do corpo.

[0291] A doença em que a metilação de proteínas mediada por EZH2 desempenha um papel pode ser uma doença neurológica. O composto da presente invenção pode assim ser também usado para o tratamento de doenças neurológicas tais como a epilepsia, a esquizofrenia, a doença bipolar ou outros distúrbios psicológicos e/ou psiquiátricos, neuropatias, atrofia do músculo esquelético, e de doenças neurodegenerativas, por exemplo, uma doença neurodegenerativa. Exemplos de doenças neurodegenerativas incluem: a doença de Alzheimer, Esclerose Lateral Amiotrófica (ALS), e doença de Parkinson. Outra classe de doenças neurodegenerativas incluindo doenças causadas, pelo menos em parte, através da agregação de poli-glutamina. Doenças desta classe incluem: doença de Huntington, atrofia Spinalbulbar Muscular (SBMA ou doença de Kennedy) Dentatorubropallidoluysian Atrofia (DRPLA), Ataxia Espinocerebelar 1 (SCA1), Ataxia Espinocerebelar 2 (SCA2), Doença de Machado-Joseph (DMJ; SCA3), Ataxia Espinocerebelar 6 (SCA6), Ataxia Espinocerebelar 7 (SCA7), e Ataxia Espinocerebelar 12 (SCA12).

[0292] Qualquer outra doença em que a metilação epigenética, que é mediada por EZH2, desempenha um papel pode ser tratada ou prevenida usando as composições e métodos descritos no presente documento.

[0293] O tratamento do câncer pode resultar em uma redução no tamanho de um tumor. Uma redução no tamanho de um tumor pode também ser referida como "a regressão do tumor". De preferência, após o tratamento, o tamanho do tumor é reduzido em 5% ou mais em relação ao seu tamanho antes do tratamento; com mais preferência, o tamanho do tumor é reduzido de 10% ou mais; com mais preferência, diminui 20% ou mais; com mais preferência, diminui 30% ou mais; com mais preferência, diminui 40% ou mais; ainda com mais preferência, diminui 50% ou mais; e com mais preferência, reduzida em mais de 75% ou mais. Tamanho de um tumor pode ser medido por qualquer meio de medição reproduzíveis. O tamanho de um tumor pode ser medido como o diâmetro do tumor.

[0294] O tratamento do câncer pode resultar em uma redução do volume do tumor. De preferência, após o tratamento, o volume do tumor é reduzido em 5% ou mais em relação ao seu tamanho antes do tratamento; com mais preferência, o volume do tumor é reduzido de 10% ou mais; com mais preferência, diminui 20% ou mais; com mais preferência, diminui 30% ou mais; com mais preferência, diminui 40% ou mais; ainda com mais preferência, diminui 50% ou mais; e com mais preferência, reduzida em mais de 75% ou mais. O volume do tumor pode ser medido por qualquer meio de medição reproduzíveis.

[0295] Tratar o câncer resulta em uma diminuição no número de tumores. De preferência, após o tratamento, o número de tumor é reduzido em 5% ou mais em relação ao número, antes do tratamento; com mais preferência, o número de tumor é reduzido de 10% ou mais; com mais preferência, diminui 20% ou mais; com mais preferência, diminui 30% ou mais; com mais preferência, diminui 40% ou mais; ainda com mais preferência, diminui 50% ou mais; e com mais preferência, reduzida em mais de 75%. Número de tumores pode ser medido por quaisquer meios de medição reproduzíveis. O número de tumores pode ser medido por contagem de tumores visíveis a olho nu ou com uma ampliação específica. De preferência, a ampliação especificada é 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, ou 50x.

[0296] O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição no número de lesões metastáticas em outros tecidos ou órgãos distantes do local do tumor primário. De preferência, após o tratamento, o número de lesões metastáticas é reduzido em 5% ou mais em relação ao número, antes do tratamento; com mais preferência, o número de lesões metastáticas é reduzido em 10% ou mais; com mais preferência, diminui 20% ou mais; com mais preferência, diminui 30% ou mais; com mais preferência, diminui 40% ou mais; ainda com mais preferência, diminui 50% ou mais; e com mais preferência, reduzida em mais de 75%. O número de lesões metastáticas pode ser medido por quaisquer meios de medição reproduzíveis. O número de lesões metastáticas pode ser medida pelo número de lesões metastáticas visíveis a olho nu ou com uma ampliação específica. De preferência, a ampliação especificada é 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, ou 50x.

[0297] O tratamento do câncer pode resultar em um aumento do tempo médio de sobrevivência de uma população de sujeitos tratados, em comparação com uma população que recebe veículo sozinho. De preferência, o tempo médio de sobrevivência é aumentado em mais de 30 dias; com mais preferência, por mais de 60 dias; com mais preferência, por mais de 90 dias; e com mais preferência, por mais de 120 dias. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medida por quaisquer meios reprodutíveis. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medida, por exemplo, através do cálculo de uma população de o comprimento médio de sobrevivência após o início do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode também ser medida, por exemplo, através do cálculo de uma população de o comprimento médio de sobrevivência após a conclusão de um primeiro ciclo de tratamento com um composto ativo.

[0298] O tratamento do câncer pode resultar em um aumento do tempo médio de sobrevivência de uma população de sujeitos tratados, em comparação com uma população de sujeitos não tratados. De preferência, o tempo médio de sobrevivência é aumentado em mais de 30 dias; com mais preferência, por mais de 60 dias; com mais preferência, por mais de 90 dias; e com mais preferência, por mais de 120 dias. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medida por quaisquer meios reprodutíveis. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medida, por exemplo, através do cálculo de uma população de o comprimento médio de sobrevivência após o início do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode também ser medida, por exemplo, através do cálculo de uma população do comprimento médio de sobrevivência após a conclusão de um primeiro ciclo de tratamento com um composto ativo.

[0299] O tratamento do câncer pode resultar no aumento do tempo médio de sobrevivência de uma população de sujeitos tratados, em comparação com uma população que recebe a monoterapia com um fármaco que não é um composto da presente invenção, ou um seu sal, precursor, metabólito, análogo farmaceuticamente ou um seu derivado. De preferência, o tempo médio de sobrevivência é aumentado em mais de 30 dias; com mais preferência, por mais de 60 dias; com mais preferência, por mais de 90 dias; e com mais preferência, por mais de 120 dias. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medida por quaisquer meios reprodutíveis. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medida, por exemplo, através do cálculo de uma população de o comprimento médio de sobrevivência após o início do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode também ser medida, por exemplo, através do cálculo de uma população de o comprimento médio de sobrevivência após a conclusão de um primeiro ciclo de tratamento com um composto ativo.

[0300] O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição da taxa de mortalidade de uma população de sujeitos tratados, em comparação com uma população que recebe veículo sozinho. O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição da taxa de mortalidade de uma população de sujeitos tratados, em comparação com uma população não tratada. Para tratar o câncer pode resultar em uma diminuição da taxa de mortalidade de uma população de sujeitos tratados, em comparação com uma população que recebe a monoterapia com um fármaco que não é um composto da presente invenção, ou um seu sal, precursor, metabólito, análogo ou derivado farmaceuticamente da mesma. De preferência, a taxa de mortalidade é reduzida em mais de 2%; com mais preferência, em mais do que 5%; com mais preferência, por mais de 10%; e com mais preferência, em mais do que 25%. Uma diminuição da taxa de mortalidade de uma população de sujeitos tratados pode ser medida por quaisquer meios reprodutíveis. A diminuição da taxa de mortalidade de uma população pode ser medida, por exemplo, por meio do cálculo para uma população média do número de mortes relacionadas com a doença por unidade de tempo após o início do tratamento com um composto ativo. A diminuição da taxa de mortalidade de uma população também pode ser medida, por exemplo, por meio do cálculo para uma população média do número de mortes relacionadas com a doença por unidade de tempo após a conclusão de uma primeira rodada de tratamento com um composto ativo.

[0301] O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição na taxa de crescimento do tumor. De preferência, após o tratamento, a taxa de crescimento do tumor é reduzida por pelo menos 5% em relação ao número antes do tratamento; com mais preferência, a taxa de crescimento do tumor é reduzida por pelo menos 10%; com mais preferência, reduzida por pelo menos 20%; com mais preferência, reduzida por pelo menos 30%; com mais preferência, reduzida por pelo menos 40%; com mais preferência, reduzida por pelo menos 50%; ainda com mais preferência, reduzida por pelo menos 50%; e com máxima preferência, reduzida por pelo menos 75%. A taxa de crescimento do tumor pode ser medida por qualquer meio reprodutível de medição. A taxa de crescimento do tumor pode ser medida de acordo com uma mudança no diâmetro do tumor por unidade de tempo.

[0302] O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição da recorrência do tumor. De preferência, após o tratamento, a recorrência do tumor é menor que 5%; com mais preferência, a recorrência do tumor é menor que 10%; com mais preferência, menor que 20%; com mais preferência, menor que 30%; com mais preferência, menor que 40%; com mais preferência, menor que 50%; ainda com mais preferência, menor que 50%; e com máxima preferência, menor que 75%. A recorrência do tumor pode ser medida por qualquer meio reprodutível de medição. A recorrência do tumor é medida, por exemplo, medindo o aumento no diâmetro de um tumor antes de um encolhimento do tumor que sofreu tratamento. Uma diminuição da recorrência do tumor é indicada por falha de tumores que reaparecem após o tratamento ter parado.

[0303] O tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular pode resultar em uma redução na taxa de proliferação celular. De preferência, após o tratamento, a taxa de proliferação celular é reduzida por pelo menos 5%; com mais preferência, por pelo menos 10%; com mais preferência, por pelo menos 20%; com mais preferência, por pelo menos 30%; com mais preferência, por pelo menos 40%; com mais preferência, por pelo menos 50%; ainda com mais preferência, por pelo menos 50%; e com máxima preferência, por pelo menos 75%. A taxa de proliferação celular pode ser medida por qualquer meio reprodutível de medição. A taxa de proliferação celular é medida, por exemplo, medindo o número de divisão de células em uma amostra de tecido por unidade de tempo.

[0304] O tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular pode resultar em uma redução na proporção de células em proliferação. De preferência, após o tratamento, a proporção de células em proliferação é reduzida por pelo menos 5%; com mais preferência, por pelo menos 10%; com mais preferência, por pelo menos 20%; com mais preferência, por pelo menos 30%; com mais preferência, por pelo menos 40%; com mais preferência, por pelo menos 50%; ainda com mais preferência, por pelo menos 50%; e com máxima preferência, por pelo menos 75%. A proporção de células em proliferação pode ser medida por qualquer meio reprodutível de medição. De preferência, a proporção de células em proliferação é medida, por exemplo, quantificando o número de divisão de células em relação ao número de não divisão de células em uma amostra de tecido. A proporção de células em proliferação pode ser equivalente ao índice mitótico.

[0305] O tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular pode resultar numa diminuição do tamanho de uma área ou zum de proliferação celular. De preferência, após o tratamento, o tamanho de uma área ou zum de proliferação celular é reduzido por pelo menos 5% em relação ao seu tamanho antes do tratamento; com mais preferência, reduzido por pelo menos 10%; com mais preferência, reduzida por pelo menos 20%; com mais preferência, reduzido por pelo menos 30%; com mais preferência, reduzido por pelo menos 40%; com mais preferência, reduzido por pelo menos 50%; ainda com mais preferência, reduzido por pelo menos 50%; e com máxima preferência, reduzido por pelo menos 75%. O tamanho de uma área ou zum de proliferação celular pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O tamanho de uma área ou zum de proliferação celular pode ser medido como um diâmetro ou largura de uma área ou zum de proliferação celular.

[0306] O tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular pode resultar em uma diminuição no número ou proporção de células tendo uma aparência ou morfologia anormal. De preferência, após o tratamento, o número de células tendo uma morfologia anormal é reduzido por pelo menos 5% em relação ao seu tamanho antes do tratamento; com mais preferência, reduzido por pelo menos 10%; com mais preferência, reduzido por pelo menos 20%; com mais preferência, reduzido por pelo menos 30%; com mais preferência, reduzido por pelo menos 40%; com mais preferência, reduzido por pelo menos 50%; ainda com mais preferência, reduzido por pelo menos 50%; e com máxima preferência, reduzido por pelo menos 75%. Uma aparência ou morfologia celular anormal pode ser medida por qualquer meio reprodutível de medição. Uma morfologia celular anormal pode ser medida por microscopia, por exemplo, utilizando um microscópio de cultura de tecidos invertido. Uma morfologia celular anormal pode tomar a forma de um pleiomorfismo nuclear.

[0307] Tal como usado no presente documento, o termo "seletivamente" significa que tende a ocorrer a uma frequência maior do que na população em uma outra população. As populações de comparação podem ser de populações de células. De preferência, um composto da presente invenção, ou um seu sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente, atua seletivamente sobre um câncer ou célula de pré-cancerosa, mas não em uma célula normal. De preferência, um composto da presente invenção, ou um seu sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente, atua seletivamente para modular um alvo molecular (por exemplo, uma metiltransferase proteína alvo), mas não significativamente modular a outro alvo molecular (por exemplo, um metiltransferase proteína não-alvo). A invenção também fornece um método para inibir seletivamente a atividade de uma enzima, tal como uma proteína de metiltransferase. De preferência, um evento ocorre seletivamente na população A em relação à população B, se ocorrer mais que duas vezes mais frequentemente na população de A em relação a população B. Um evento ocorre seletivamente se ocorrer mais que cinco vezes mais frequentemente em população A. Um evento ocorre seletivamente se ocorrer mais que dez vezes mais frequentemente na população A; com mais preferência, mais que cinquenta vezes; ainda com mais preferência, mais que 100 vezes; e com mais preferência, mais que 1000 vezes mais frequentemente na população em comparação com uma população de B. Por exemplo, a morte celular seria dita ocorrer seletivamente em células de câncer se ocorreu uma morte mais que duas vezes mais frequentemente em células de câncer, em comparação com células normais.

[0308] A composição da presente invenção, por exemplo, uma composição que compreende um composto de Fórmula (IIa) ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais outros agentes terapêuticos, tais como a prednisona, são capazes de modular a atividade de um alvo molecular (por exemplo, uma metiltransferase proteína alvo). Modulação refere-se a estimular ou inibir uma atividade de um alvo molecular. De preferência, um composto da presente invenção, ou um seu sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente, modula a atividade de um alvo molecular quando estimula ou inibe a atividade do alvo molecular pelo menos de 2 vezes relativamente aos a atividade do alvo molecular nas mesmas condições, mas faltando apenas a presença do referido composto. Com mais preferência, um composto da presente invenção, ou um seu sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente, modula a atividade de um alvo molecular quando estimula ou inibe a atividade do alvo molecular pelo menos 5 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 100 vezes relativamente à atividade do alvo molecular nas mesmas condições, mas apenas sem a presença do referido composto. A atividade de um alvo molecular pode ser medida por quaisquer meios reprodutíveis. A atividade de um alvo molecular pode ser medida in vitro ou in vivo. Por exemplo, a atividade de um alvo molecular pode ser medida in vitro por um ensaio de atividade enzimática ou um ensaio de ligação de DNA, ou a atividade de um alvo molecular pode ser medida in vivo através de ensaio para a expressão de um gene repórter.

[0309] A composição da presente invenção não modula significativamente a atividade de um alvo molecular quando a adição do composto não estimular ou inibir a atividade do alvo molecular pelo mais que 10% em relação à atividade do alvo molecular sob nas mesmas condições, mas com falta apenas a presença do referido composto.

[0310] Tal como usado no presente documento, o termo "isozima seletiva" significa a inibição ou estimulação preferencial de uma primeira isoforma de uma enzima em comparação com uma segunda isoforma da enzima (por exemplo, inibição ou estimulação preferencial de uma isozima alfa metiltransferase proteína em comparação com a uma proteína metiltransferase isozima beta). De preferência, um composto da presente invenção, ou um seu sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente, demonstra um mínimo de um diferencial de quatro vezes, preferencialmente um diferencial de dez vezes, com mais preferência um diferencial de cinquenta vezes, na dosagem necessária para atingir um efeito biológico. De preferência, um composto da presente invenção, ou um seu sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente, demonstra este diferencial ao longo da gama de inibição, e o diferencial é exemplificado no IC50, isto é, uma inibição de 50%, para um alvo molecular de interesse.

[0311] A administração de uma composição da presente invenção a uma célula ou a um sujeito com necessidade do mesmo pode resultar na modulação (isto é, inibição ou estimulação) de uma atividade de uma proteína de interesse metiltransferase.

[0312] A administração de um composto da presente invenção, por exemplo, uma composição que compreende um composto de Fórmula (IIa) ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais outros agentes terapêuticos, tais como a prednisona, a uma célula ou a um sujeito com essa necessidade resulta na modulação (isto é, inibição ou estimulação) de uma atividade de um alvo intracelular (por exemplo, o substrato). Vários alvos intracelulares podem ser modulados com os compostos da presente invenção, incluindo, mas não limitado a, metiltrasferase proteína.

[0313] Ativar refere à colocação de uma composição de matéria (por exemplo, proteína ou ácido nucleico) em condições adequadas para a realização de uma função biológica desejada. Uma composição de matéria capaz de ser ativada também tem um estado não ativado. Uma composição de matéria ativado pode ter uma função biológica inibidora ou estimuladora, ou ambos.

[0314] Elevação refere-se a um aumento em uma atividade biológica desejada de uma composição de matéria (por exemplo, uma proteína ou um ácido nucleico). Elevação pode ocorrer através de um aumento da concentração de uma composição de matéria.

[0315] Tal como usado no presente documento, "um caminho de verificação do ciclo celular" refere-se a uma via bioquímica que está envolvida na modulação de uma verificação do ciclo celular. Uma via de verificação do ciclo celular pode ter efeitos estimuladores ou inibidores, ou ambos, em uma ou mais funções que compreendem uma verificação do ciclo celular. Uma via de verificação do ciclo celular é composta de pelo menos duas composições de matéria, de preferência, as proteínas, os quais contribuem para a modulação de uma verificação do ciclo celular. Uma via de verificação do ciclo celular pode ser ativada através de uma ativação de um ou mais membros da via de verificação do ciclo celular. De preferência, uma via de verificação do ciclo celular é uma via de sinalização bioquímica.

[0316] Tal como usado no presente documento, "regulador de verificação do ciclo celular" refere-se a uma composição de matéria que pode funcionar, pelo menos em parte, na modulação de uma verificação do ciclo celular. Um regulador de verificação do ciclo celular pode ter efeitos estimuladores ou inibidores, ou ambos, em uma ou mais funções que compreendem uma verificação do ciclo celular. Um regulador de verificação do ciclo celular pode ser uma proteína ou não uma proteína.

[0317] O tratamento do câncer ou de um distúrbio proliferativo celular pode resultar na morte da célula, e de um modo preferencial, a morte celular resulta em um decréscimo de pelo menos 10% em número das células de uma população. Com mais preferência, a morte celular significa uma diminuição de pelo menos 20%; com mais preferência, uma diminuição de pelo menos 30%; com mais preferência, uma diminuição de pelo menos 40%; com mais preferência, uma diminuição de pelo menos 50%; com mais preferência, uma diminuição de pelo menos 75%. Número de células em uma população pode ser medido por quaisquer meios reprodutíveis. Um número de células em uma população pode ser medida por fluorescência de células ativadas (FACS), a microscopia de imunofluorescência e microscopia de luz. Métodos de medição da morte celular são como mostrado na Li et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 100(5): 2674-8, 2003. Em um aspecto, a morte celular ocorre por apoptose.

[0318] De preferência, uma quantidade eficaz de uma composição da presente invenção, ou sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, não é significativamente citotóxico para as células normais. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto não é significativamente citotóxico para as células normais, se a administração do composto em uma quantidade terapeuticamente eficaz não induz a morte celular em mais que 10% de células normais. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto não afeta significativamente a viabilidade de células normais, se a administração do composto em uma quantidade terapeuticamente eficaz não induz a morte celular em mais que 10% de células normais. Em um aspecto, a morte celular ocorre por apoptose.

[0319] O contato de uma célula com uma composição da presente invenção, ou sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, pode induzir ou ativar a morte celular seletiva, em células de câncer. A administração a um sujeito com essa necessidade de um composto da presente invenção, ou um seu sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente, podem induzir ou ativar a morte celular seletiva, em células de câncer. O contato de uma célula com uma composição da presente invenção, ou sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, pode induzir a morte celular seletivamente de uma ou mais células afetadas por um distúrbio proliferativo celular. De preferência, administrar a um sujeito em necessidade do mesmo de uma composição da presente invenção, ou sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, induz a morte celular seletivamente de uma ou mais células afetadas por um distúrbio proliferativo celular.

[0320] A presente invenção refere-se a um método de tratamento ou prevenção do câncer através da administração de uma composição da presente invenção, ou um sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, a um sujeito em necessidade dos mesmos, em que a administração da composição da presente invenção, ou sal, precursor, metabólito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, resulta em um ou mais dos seguintes: a prevenção da proliferação de células de câncer por acumulação de células em uma ou mais das fases do ciclo celular (por exemplo, G1, G1/S, G2/M), ou a indução da senescência celular, ou de promoção de diferenciação das células tumorais; promoção da morte celular em células de câncer através de citotoxicidade, a necrose ou apoptose, sem uma quantidade significativa de morte celular em células normais, a atividade anti-tumor em animais, com um índice terapêutico de pelo menos 2. Tal como usado no presente documento, "índice terapêutico" é a dose máxima tolerada dividida pela dose eficaz.

[0321] Um versado na técnica pode referir-se aos textos de referência gerais para as descrições detalhadas de técnicas conhecidas técnicas aqui discutidas ou equivalentes. Estes textos incluem Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley e Sons, Inc. (2005); Sambro-ok et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3°edição), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2000); Coligan et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N.Y.; Enna et al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N.Y.; Fingl et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18°edição (1990). Estes textos podem, é claro, também ser referidos na produção ou uso de um aspecto da invenção. Exemplo 1: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-pirano-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3- carboxamida

[0322] Etapa 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzóico

[0323] A uma solução agitada de ácido 2-metil-3-nitrobenzóico (100 g, 552 mmol) em H2SO4 conc. (400 mL), 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinodiona (88 g, 308 mmol) foi adicionado de modo gradual à temperatura ambiente e a mistura de reação foi então agitada à temperatura ambiente , durante 5 h. A mistura de reação foi vertida em água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para dar o composto desejado como um sólido (140 g, 98%). O composto isolado foi tomado diretamente para a próximo etapa. 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz) d 8,31 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 2,43 (s, 3H).

[0324] Etapa 2: Síntese de metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato

[0325] Para uma solução agitada de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzóico (285 g, 1,105 mmol) em DMF (2,8 L) à temperatura ambiente foi adicionado carbonato de sódio (468 g, 4,415 mmol), seguido pela adição de iodeto de metila (626,6 g, 4415 mmol). A mistura de reação resultante foi aquecida a 60°C durante 8 h. Depois de completada (controlada por TLC), a mistura de reação foi filtrada (para remover o carbonato de sódio) e lavada com acetato de etila (1L X 3). O filtrado combinado foi lavado com água (3L X 5) e a fase aquosa foi novamente extraída com acetato de etila (1L X 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o composto do título como um sólido (290 g, 97% de rendimento). O composto isolado foi tomado diretamente para a próxima etapa. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) d 8,17 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,59 (s, 3H).

[0326] Etapa 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila

[0327] Para uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila (290 g; 1,058 mmol) em etanol (1,5 L) foi adicionado cloreto de amónio aquoso (283 g, 5,290 mmol dissolvido em água de 1,5 L). A mistura resultante foi agitada a 80°C para a qual o pó de ferro (472 g, 8451 mmol) foi adicionado de modo gradual. A mistura de reação resultante foi aquecida a 80°C durante 12 h. Após a conclusão, conforme determinado por TLC, a mistura de reação foi filtrada a quente através de Celite e a camada de celite foi lavada com metanol (5L), seguida por lavagem com 30% de MeOH em DCM (5L). O filtrado combinado foi concentrado sob vácuo, o resíduo obtido foi diluído com uma solução de bicarbonato de sódio aquoso (2 L) e extraído com acetato de etila (5L X 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o composto do título como um sólido (220 g, 85%). O composto foi tomado diretamente para a próxima etapa. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) d 7,37 (s, 1H), 6,92 (s, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,80 (bs, 2H), 2,31 (s, 3H).

[0328] Etapa 4: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-pirano-4-il) amino) benzoato de metila

[0329] Para uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (15 g, 61,5 mmol) e di-hidro-2H-piran-4 (3)-ona (9,2 g, 92 mmol) em dicloroetano (300 mL) foi adicionado ácido acético (22 g, 369 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos, em seguida, a mistura de reação foi resfriada a 0°C, e triacetoxiborohidreto de sódio (39 g, 184 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Após a conclusão da reação, tal como determinado por TLC, a solução de bicarbonato de sódio aquoso foi adicionada à mistura da reação até um pH de 7-8 ser obtido. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (gel de sílica de malha 100-200), efetuando a eluição com acetato de etila: hexano para dar o composto desejado como um sólido (14 g, 69%). 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) d 7,01 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 5,00 (d, 1H, J=7,6 Hz), 3,84-3,87 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,54-3,56 (m, 1H), 3,43 (t, 2H, J=12 Hz), 2,14 (s, 3H), 1,81-1,84 (m, 2H), 1,47-1,55 (m, 2H).

[0330] Etapa 5: Síntese de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-pirano-4-il)amino)- 2-metilbenzoato de metila

[0331] Para uma solução de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-pirano-4-il) amino) benzoato de metila (14 g, 42,7 mmol) em dicloroetano (150 mL) Foi adicionado acetaldeído (3,75 g, 85,2 mmol) e ácido acético (15,3 g, 256 mmol). A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos. A mistura foi resfriada a 0°C e triacetoxiboro-hidreto de sódio (27 g, 128 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. Após a conclusão da reação, tal como determinado por TLC, a solução de bicarbonato de sódio aquoso foi adicionada à mistura da reação até um pH de 7-8 ser obtido, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (gel de sílica de malha 100-200), efetuando a eluição com acetato de etila:hexano para dar o composto desejado como um líquido viscoso (14 g, 93%). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) d 7,62 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 3,80 (bs, 5H), 3,31 (t, 2H), 2,97-3,05 (m, 2H), 2,87-2,96 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 1,52-1,61 (m, 2H), 1,37-1,50 (m, 2H), 0,87 (t, 3H, J=6,8 Hz).

[0332] Etapa 6: Síntese de 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-oxo-1, 2-di-hidropiridin- 3-il) metil)-3-(etil (tetra-hidro-2H-pirano-4-il) amino)-2-metilbenzamida

[0333] Para uma solução agitada de 5-bromo-3-(etil (tetra-hidro-2H-pirano-4- il) amino)-2-metilbenzoato (14 g, 39,4 mmol) em etanol (100 mL) adicionou-se NaOH aquoso (2,36 g, 59,2 mmol em 25 mL de água) e a mistura resultante foi agitada a 60°C durante 1 h. Após a conclusão da reação, tal como determinado por TLC, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo obtido foi acidificada com HCl 1 N até um pH de 7, foi obtido e, em seguida, solução aquosa de ácido cítrico foi adicionado até um pH de 5-6 foi obtido. A camada aquosa foi extraída com 10% de MeOH em DCM (200 mL X 3), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentrados sob pressão reduzida para dar o ácido correspondente (14 g, 100%).

[0334] O ácido acima referido (14 g, 40,9 mmol) foi então dissolvido em DMSO (70 ml) e 3(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H) ona (12,4 g, 81,9 mmol) foi adicionado a ele. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos, em seguida, PYBOP (31,9 g, 61,4 mmol) foi adicionado e a agitação continuou durante a noite à temperatura ambiente. Após a conclusão da reação, tal como determinado por TLC, a mistura de reação foi vertida em água gelada (700 ml), agitada durante 30 minutos e o sólido precipitado foi recolhido por filtração, lavado com água (500 mL) e seco ao ar. O sólido obtido foi agitado com acetonitrila (75 mL X 2), filtrado e seco ao ar. O sólido obtido foi novamente agitado com 5% de MeOH em DCM (100 mL), filtrou- se e secou-se completamente sob vácuo, para fornecer o composto do título como um sólido (14 g, 74%). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) d 11,47 (s, 1H), 8,23 (t, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,23 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,81 (d, 2H, J=10,4 Hz), 3,203,26 (m, 2H), 3,00-3,07 (m, 1H), 2,91-2,96 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,58-1,60 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, 2H), 0,78 (t, 3H, J=6,8 Hz).

[0335] Etapa 7: Síntese de N-((4, 6-dimetil-2-oxo-1, 2-di-hidropiridin-3-il) metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-pirano-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida

[0336] Para uma solução agitada de 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-oxo-1, 2-di- hidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetra-hidro-2H-pirano-4-il) amino)-2-metilbenzamida (14 g, 29,5 mmol) em mistura de dioxano/água (70 mL/14 mL) foi adicionado 4-(4-(4, 4, 5, 5-tetrametil-1, 3, 2-dioxaborolan-2-il) benzil) morfolino (13,4 g, 44,2 mmol) seguido por adição de Na2CO3 (11,2 g, 106,1 mmol). A solução foi purgada com argônio durante 15 minutos e, em seguida, Pd (PPh3)4 (3,40 g, 2,94 mmol) foi adicionado e a solução foi novamente purgada com argônio durante mais 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100°C durante 4 h. Depois de completada (controlada por TLC), a mistura de reação foi diluída com água e extraída com 10% de MeOH/ DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (gel de sílica de malha 100-200) eluindo com metanol:DCM para o composto do título como um sólido (12 g, 71 %). Dados Analíticos: LCMS: 573,35 (M + 1)+; HPLC: 99,5% (@ 254 nm) (Rt;3,999; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 µ; Fase Móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrila; Inj. Vol: 10 µL, Col. Temp.: 30 oC; Vazão: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B para 95% B em 8 min, Mantido por 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) d 11,46 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J=7,2 Hz), 7,36-7,39 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J=2,8 Hz), 3,82 (d, 2H, J=9,6 Hz), 3,57 (bs, 4H), 3,48 (s, 2H), 3,24 (t, 2H, J=10,8Hz), 3,07-3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,36 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64-1,67 (m, 2H), 1,51-1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J=6,4 Hz).

[0337] Etapa 8: Síntese de tricloridrato de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil (tetra-hidro-2H-pirano-4-il)amino)-4-metil-4'- (morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida

[0338] N-((4, 6-dimetil-2-oxo-1, 2-di-hidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetra-hidro- 2H-pirano-4-il) amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1, 1’-bifenil]-3-carboxamida (12 g, 21,0 mmol) foi dissolvido em HCl metanólico (200 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 3 h. Após três horas de agitação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O sólido obtido foi agitado com éter (100 mL X 2), para se obter o sal desejado como um sólido (11 g, 77 %). Dados Analíticos de sal de tri-HCl: LCMS: 573,40 (M + 1)+; HPLC: 99,1% (@ 254 nm) (Rt;3,961; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 µ; Fase Móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrila; Inj. Vol: 10 µL, Col. Temp.: 30 oC; Vazão: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B para 95% B em 8 min, Mantido por 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); 1H NMR (D2O 400 MHz) d 7,92 (bs, 1H,) 7,80 (s, 1H), 7,77 (d, 2H, J=8 Hz), 7,63 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,30 (s, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,42 (s, 2H), 4,09-4,11 (m, 4H), 3,95-3,97 (m, 2H), 3,77 (t, 3H, J=10,4 Hz), 3,44-3,47 (m, 3H), 3,24-3,32 (m, 3H), 2,42 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,01 (m, 2H), 1,76 (m, 2H), 1,04 (t, 3H, J=6,8 Hz).

Exemplo 2: Terapia de Combinação com Composto 44 e componentes de CHOP.

[0339] As linhagens de células humanas de linfoma de WSU-DLCL2 (DSMZ; ACC 575), OCI-Ly19 (DSMZ; ACC 528), RL (ATCC; CRL-2261) foram obtidas a partir das fontes indicadas e mantidas em meio RPMI-1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino e glutamina 2 mM. As células foram cultivadas em frascos de cultura de tecidos em uma incubadora humidificada a 37°C, em uma atmosfera de 5% de CO2 e 95% de ar.

[0340] O efeito de terapia de combinação do Composto 44 com cada componente de CHOP individual (ciclofosfamida, vincristina, doxorrubicina, e prednisolona) sobre a viabilidade das células de câncer foi investigado in vitro. O esquema de dosagem é descrito na Figura 1A. As células de linfoma humano WSU- DLCL2 foram tratadas com concentrações crescentes de Composto 44. Depois de 4 dias, uma combinação de concentrações crescentes de Composto 44 e cada componente de CHOP foi administrada às células. Depois de 4 dias, a viabilidade das células foi determinada utilizando Reagente Guava ViaCount Millipore e citometria de fluxo. A porcentagem de células viáveis para cada uma das amostras foi normalizada com a porcentagem de células viáveis para as amostras tratadas com DMSO, dentro de cada grupo de concentração do Composto 44.

[0341] As células tratadas com o composto 44 e os componentes de CHOP isoladamente mostraram uma diminuição na viabilidade. As células tratadas com o Composto 44 com Mafofsamida (metabólito de Ciclofosfamida) (Figura 2A) e de cloridrato de doxorrubicina (Figura 2B) não exibiram viabilidade de células reduzida em concentrações crescentes de Mafofsamida ou doxorrubicina. A terapia de combinação do Composto 44 com vincristina (Figura 2C) mostrou redução da viabilidade das células na concentração mais elevada do Composto 44. Mais importantemente, a terapia de combinação utilizando o Composto 44 e prednisolona (metabólito de Prednisona) (Figura 2D) mostrou uma redução sinérgica na viabilidade de células nas 2 doses mais altas do Composto 44, e todas as doses de prednisolona.

Exemplo 3: Efeitos sinérgicos da terapia de combinação com o Composto 44 e Prednisolona dependem da posologia.

[0342] Para investigar o papel do momento de administração do Composto 44 e prednisolona sobre a viabilidade de células, as células-WSU DLCL2 foram tratadas com diferentes calendários de dosagem, tal como representado na Figura 1. A viabilidade de células foi determinada através de coloração com Reagente Guava ViaCount Millipore em seguida, analisada por citometria de fluxo.

[0343] A administração do composto 44 antes da co-administração do Composto 44 e prednisolona resultou em viabilidade de células reduzida (Figura 3A). Células tratadas como descrito na Figura 1A. A viabilidade de células foi normalizada para a amostra de DMSO/DMSO, revelando assim o efeito do tratamento com o Composto 44 sozinho. As concentrações crescentes de Composto 44 resultaram em uma redução do crescimento das células. É importante notar que o aumento das concentrações de Prednisolona em combinação com o Composto 44 resultou em redução adicional do crescimento celular em comparação com o tratamento das células com o composto 44 ou prednisolona, independentemente, como agentes isolados. Em consequência, a terapia de combinação de Composto 44 e prednisolona, em que o Composto 44 é administrado pela primeira vez provoca um efeito sinérgico de redução da viabilidade das células de câncer.

[0344] A administração do Composto 44 antes da administração de prednisolona resultou na redução da viabilidade das células (Figura 3B). As células foram tratadas como descrito na Figura 1B. A viabilidade de células foi normalizada para a amostra tratada com DMSO para cada grupo de concentração de Composto 44. O tratamento com concentrações crescentes de prednisolona como um agente único, após uma administração prévia de Composto 44 resultou também em uma redução adicional da viabilidade das células quando comparada com células tratadas com prednisolona sozinha, demonstrando assim o efeito sinérgico da terapia combinada com o Composto 44 e prednisolona.

[0345] A administração de Prednisona antes da co-administração do Composto 44 e prednisolona não reduziu a viabilidade das células (Figura 3C). As células foram tratadas como descrito na Figura 1C. A viabilidade de células foi normalizada para a amostra tratada com DMSO para cada grupo de concentração de Composto 44. Estes resultados demonstraram que a administração de prednisolona antes do tratamento com uma composição que compreende o Composto 44 e prednisolona não provocar um efeito sinérgico sobre a viabilidade de células.

[0346] Estes dados mostram claramente que a terapia de combinação de Composto 44 e prednisolona diminui a viabilidade das células de câncer ou induz a morte da célula do câncer. Especificamente, a terapia de combinação, em que as células são tratadas com o Composto 44, antes do tratamento com prednisolona ou uma combinação de composto 44 e Prednisolona resulta em um efeito sinergético sobre a viabilidade de células, em que a redução da viabilidade das células é mais que a induzida pelo tratamento de qualquer Prednisolona ou Composto 44 como agentes únicos.

Exemplo 4: A sinergia do Composto 44 e prednisolona depende da mutação de EZH2.

[0347] Diferentes linhagens de células de câncer de linfoma humano portando diferentes mutações de EZH2 foram analisadas quanto à sua capacidade de resposta ao Composto 44 e prednisolona. As células foram tratadas com os esquemas de dosagem, como na Figura 1A, em que as células são primeiro tratadas com o Composto 44, e em seguida, após 4 dias, são tratadas com uma combinação de Composto 44 e prednisolona. A viabilidade de células foi determinada 4 dias mais tarde usando o reagente Guava ViaCount Millipore e citometria de fluxo. A porcentagem de viabilidade de células foi normalizada para porcentagem da amostra tratada com DMSO.

[0348] As células que expressam o linfoma de tipo selvagem (WT) EZH2, linhagem de células OCI-LY19, são resistentes ao tratamento com inibidores de EZH2. Assim, o tratamento com concentrações crescentes do Composto 44 não afeta a viabilidade de células. Concentrações crescentes de prednisolona não têm um efeito adicional ou sinérgico sobre a viabilidade de células (Figura 4A).

[0349] As células WSU-DLCL2 portando uma mutação Y641F são sensíveis ao tratamento com inibidores de EZH2, como evidenciado por uma diminuição na viabilidade de células a concentrações crescentes do Composto 44, quando administradas como um único agente. Além disso, quando tratadas em combinação com prednisolona, as células exibem reduzida viabilidade das células (Figura 4B).

[0350] As células RL portando uma mutação Y641N são resistentes ao tratamento com inibidores de EZH2. A administração de concentrações crescentes de Composto 44 sozinho não resulta em uma redução na viabilidade das células. No entanto, a co-administração do Composto 44 com Prednisolona resultou em um efeito sinérgico, em que a viabilidade de células foi diminuída mais que a observada quando o Composto 44 e prednisolona são administrados como agentes isolados (Figura 4C).

[0351] Em conjunto, estes resultados sugerem que a terapia de combinação com o composto 44 e prednisolona pode resultar em um efeito sinergético na redução da viabilidade das células de câncer e aumentar a morte de células de câncer em células que expressam um mutante de EZH2. Além disso, as células que são resistentes a ambos os fármacos, o composto 44 ou prednisolona, quando administradas como um único agente, tornam-se sensíveis ao tratamento de combinação e a viabilidade das células é reduzida.

Exemplo 5: Análise farmacocinética da co-administração in vivo do Composto 44 e componentes de CHOP.

[0352] A análise farmacocinética do composto 44 em combinação com cada um dos componentes de CHOP (ciclofosfamida, vincristina, doxorrubicina, e prednisolona) foi realizada para determinar a absorção ou distribuição do composto 44 in vivo. Camundongos BALB/c machos entre 8-12 semanas de idade e pesando 20-40 g foram obtidos a partir de In vivo, Bangalore, na Índia. Os animais foram administrados com um dos componentes CHOP como um agente único, ou em combinação com o Composto 44. Ciclofosfamida foi administrada por injeção intraperitoneal a 30 mg/kg. A vincristina foi administrada por injeção intravenosa a 0,375 mg/kg. A doxorrubicina foi administrada por injeção intravenosa a 2,475 mg/kg. Prednisolona foi administrada por via oral na dose de 0,15 mg/kg. O Composto 44 foi administrado a 225 mg/kg por administração oral. As amostras de plasma foram colhidas em diversos pontos de tempo ao longo de um período de 24 horas após a administração.

[0353] O procedimento de extração para amostras de estudos de plasma ou os padrões de calibração de plasma enriquecidos foi idêntico: Uma amostra de 25 µL de amostra de estudo ou padrão de calibração reforçado foi adicionada a tubos de micro-centrifugação pré-rotulados individuais. Um volume de 100 µL de IS (Glipizida, 500 ng/ml) preparado em ACN foi então adicionado aos tubos de micro- centrifugadora, exceto na amostra em branco onde acetonitrila foi adicionada e agitada durante 5 minutos. As amostras foram centrifugadas durante 10 minutos à velocidade de 15000 rpm (20600 g) a 4°C. Após centrifugação, 100 µL do sobrenadante foram amostrados a partir de cada tubo de centrifugação e transferidos para frascos de inserção. Estes frascos foram carregados no amostrador automático para a análise LC/MS/MS. Os padrões de calibração foram preparados por dopagem de 10 µL de analito (Composto 44, ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina e prednisolona) em 190 µL de plasma de camundongo do branco.

[0354] Módulo de Análise não Compartamental em WinNonlin® (Versão 5,2) foi usado para avaliar os parâmetros farmacocinéticos. As áreas sob a curva de concentração (AUC) foram calculadas pela regra trapezoidal linear. A razão (AUCcombo/AUCúnica) da AUC para a terapia de combinação do Composto 44 com cada um dos componentes de CHOP (AUCcombo) para AUC de cada componente de CHOP sozinho (AUCúnica) e indicado biodisponibilidade semelhante quando os componentes de CHOP foram administrados isoladamente ou com o Composto 44.

Exemplo 6: Análise da terapia de combinação do Composto 44 e CHOP em modelos de xenoenxerto em camundongo. Camundongos

[0355] Camundongos Fox Chase SCID® do sexo Feminino (CB17/Icr- Prkdcscid/IcrIcoCrl, Charles River Laboratories) ou camundongos nude atímicos (Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu, Charles River Laboratories) estavam com 8 semanas de idade e tinham uma faixa de peso corporal (BW) gama de 16,0-21,1 g no dia 1 do estudo. Os animais foram alimentados ad libitum com água (osmose inversa de Cl 1 ppm) e NIH 31 modificado e irradiados com Lab Diet® composta por 18,0% de proteína bruta, 5,0% de gordura bruta e 5,0% de fibra bruta. Os camundongos foram alojados em leitos Enrich-o’cobsTM irradiados em microisoladores estáticos sobre um ciclo de luz de 12 horas a 20-22°C (68-72°F) e 40-60% de umidade. Todos os procedimentos em conformidade com as recomendações do Guide for Care and Use of Laboratory Animals no que diz respeito à restrição, criação, procedimentos cirúrgicos, alimentação e regulação de fluidos, e cuidados veterinários.

Cultura de Células de Tumor

[0356] As linhagens de células de linfoma humano foram obtidas a partir de diferentes fontes (ATCC, DSMZ) e mantidas em Piedmont como culturas em suspensão em meio RPMI-1640, contendo 100 unidades/ml de sal de penicilina G sódica, 100 g/mL de estreptomicina, e 25 g/ml de gentamicina. O meio foi suplementado com 10% de soro fetal bovino e 2 mM de glutamina. As células foram cultivadas em frascos de cultura de tecidos em uma incubadora umidificada a 37°C, em uma atmosfera de 5% de CO2 e 95% de ar.

Implantação do Tumor In Vivo

[0357] As linhagens de células de linfoma humano foram colhidas durante a fase de crescimento semi-log, e ressuspensas em PBS com MatrigelTM a 50% (BD Biosciences). Cada camundongo recebeu 1 x 107células (0,2 ml) de suspensão de células por via subcutânea no flanco direito. Os tumores foram calibrados em duas dimensões para acompanhar o crescimento como o volume médio se aproximou da faixa de 80-120 mm3 desejada. O tamanho do tumor, em mm3, foi calculado a partir de:

[0358] onde w = largura e l = comprimento em mm do tumor. O peso do tumor pode ser estimado com o pressuposto de que 1 mg é equivalente a 1 mm3 de volume de tumor. Depois de 10-30 dias (dependendo da linhagem de células usada) os camundongos com tumores de 108-126 mm3 foram classificados em grupos de tratamento com volumes de tumor médios de 117-119 mm3.

Artigos de Teste

[0359] Os compostos de Fórmula (IIa) foram armazenados à temperatura ambiente e protegidos da luz. Em cada dia de tratamento, as formulações de compostos frescos foram preparadas por suspensão dos pós em 0,5% de carboximetilcelulose de sódio (NaCMC) e 0,1% de Tween 80 em água desionizada. O veículo do composto 44, 0,5% de NaCMC e 0,1% de Tween 80 em água desionizada, foi usado para tratar os grupos de controle nas mesmas horários. As formulações foram armazenadas ao abrigo da luz a 4°C antes da administração.

[0360] Vários quimioterapêuticos foram usados em paralelo com os compostos de Epizima. Ciclofosfamida (Baxter, Lote # 016591), foi reconstituído a 20 mg/mL com solução salina estéril e armazenado a 4°C. A solução de dosagem foi preparada fresca para cada dose, por diluição com solução salina. O cloridrato de doxorrubicina (Doxorubicin Meiji®, Meiji Pharmaceutical Co. Ltd., 1 mg/mL) foi armazenado a 4°C e diluído com solução salina em cada dia de tratamento. Vincristina (Hospira, Inc., 1 mg/mL) foi diluída com solução salina em cada dia de tratamento. Prednisona (Boehringer Ingelheim GmbH, 1 mg/mL) foi diluída com PBS, no início de cada ciclo de dosagem de 5 dias.

Plano de Tratamento

[0361] Os camundongos foram tratados com doses de compostos que vão de 75-600 mg/kg e em programações de TID (3 vezes por dia a cada 8 h), BID (2 vezes por dia a cada 12 h) ou QD (uma vez por dia) para várias quantidades de dias em dias por gavagem oral ou injeções via intravenosa, intraperitoneal ou subcutânea. Cada dose foi entregue em um volume de 0,2 ml/20 g de camundongo (10 ml/kg), e ajustada para o último peso registrado de animais individuais. O comprimento máximo do tratamento foi de 28 dias.

Análise de Volume Médio do Tumor (MTV) e Inibição do Crescimento do Tumor (TGI)

[0362] A eficácia do tratamento foi determinada no último dia de tratamento. MTV (n), o volume médio de tumor para o número de animais, n, avaliáveis no último dia, foi determinado para cada grupo. A porcentagem de inibição do crescimento do tumor (% TGI) pode ser definida de várias maneiras. Em primeiro lugar, a diferença entre o MTV(n) do grupo de controle designado e MTV (n) do grupo tratado com o fármaco são expressos como uma porcentagem do MTV (n) do grupo de controle:

[0363] Outra forma de calcular a % TGI é levando em conta a mudança do tumor a partir do dia 1 até o dia n em que n é o último dia de tratamento.

Análise de Retardo do Crescimento do Tumor

[0364] Em alternativa, os camundongos foram mantidos vivos após o último dia de tratamento, para análise de retardo de crescimento do tumor. Os tumores foram calibrados duas vezes por semana e de cada animal de ensaio foi sacrificado quando o seu tumor atingiu o ponto final de volume de 2000 mm3, ou sobre o último dia do estudo pré-especificado, o que ocorresse em primeiro. Foi calculado o tempo de chegada ao ponto final (TTE) para cada camundongo a partir da seguinte equação:

[0365] onde b é a intercepção e m é o declive da linha obtida por regressão linear de um conjunto de dados de crescimento de tumor transformados em log. Os conjuntos de dados foram compostos da primeira observação de que superou o volume final do estudo e as três observações consecutivas que imediatamente precederam a realização do volume de ponto final. Os animais que não atingiram o ponto final de volume foram atribuídos com um valor TTE igual ao último dia do estudo (pré-definido). Qualquer animal classificado como um (TR) de morte relacionada com o tratamento deveria ser atribuído um valor igual a TTE o dia da morte. Qualquer animal classificado como uma morte relacionada ao não tratamento (NTR) foi excluído dos cálculos de TTE e todas as análises adicionais.

[0366] O tratamento foi determinado a partir de resultados de retardo de crescimento do tumor (TGD), definidos como o aumento do TTE médio no grupo de tratamento comparado com o grupo de controle: expresso em dias, ou como uma porcentagem da média de TTE do grupo de controle: onde: T = média de TTE para o grupo de tratamento C = média de TTE para o grupo de controle Toxicidade

[0367] Os animais foram pesados diariamente nos Dias 1-5, e depois duas vezes por semana até a conclusão do estudo. Os camundongos foram examinados com frequência para sinais evidentes de quaisquer, efeitos adversos secundários relacionados com o tratamento, que foram documentados. A toxicidade aceitável para a dose máxima tolerada (MTD) foi definida como um grupo de perda média de BW inferior a 20% durante o teste, e a mortalidade não maior do que 10% de mortes devido a TR. A morte era para ser classificada como TR se era atribuível a efeitos colaterais do tratamento, como evidenciado por sinais e/ou necropsia clínicos, ou devido a causas desconhecidas durante o período de dosagem. A morte era para ser classificada como NTR se havia evidência de que a morte não estava relacionada a efeitos colaterais do tratamento. As mortes NTR durante o intervalo de dosagem normalmente seriam classificadas como NTR (devido a um acidente ou erro humano) ou NTRm (devido à disseminação do tumor confirmada por necropsia pela invasão e/ou metástase). Animais tratados por via oral que morrem de causas desconhecidas durante o período de dosagem podem ser classificados como NTRu quando o desempenho do grupo não suporta uma classificação TR e necropsia, para governar um erro de dosagem, não é viável.

Amostragem

[0368] Em vários dias durante o estudo os camundongos foram amostrados de uma forma pré-especificada. A amostragem inclui sangramentos não terminais (0,25 mL) a partir da veia da mandíbula sem anestesia e o volume total de recolha de sangue através de punção cardíaca sob anestesia terminal de CO2. As amostras de sangue foram processadas para plasma, com K2-EDTA como anti-coagulante. As amostras de plasma foram congeladas a -80°C e armazenadas antes da bioanálise de níveis de composto.

[0369] Os tumores foram colhidos a partir de camundongos especificados sob condições livres de RNAse e divididos. Uma fatia de 2 mm de espessura a partir de uma metade de cada tumor foi fixa em formalina durante 24 h e transferida para álcool a 70% e. Os tecidos tumorais fixados foram embebidos em parafina. O tecido de tumor restante a partir de cada animal foi rapidamente congelado em N2 líquido e pulverizado com um almofariz e pilão.

[0370] Os camundongos especificados foram amostrados para os tecidos de substituição, incluindo baço, pele, medula óssea, e pelos. Cada tecido foi isolado e fixo e/ou congelado rapidamente.

Análises estatísticas e gráficas

[0371] Todas as análises estatísticas e gráficas foram realizadas com Prism 3,03 (GraphPad) para Windows. Vários métodos análises foram aplicados. Volumes tumorais D29 Mediana foram comparados com o teste de Kruskal-Wallis, e um teste de comparações múltiplas post hoc de Dunn. Estes testes foram realizados três vezes.

[0372] Análises estatísticas bicaudais foram realizadas em P = 0,05. Relatórios de Prism resultam como não-significativos (ns) em P> 0,05, significativos (simbolizado por "*") em 0,01 <P <0,05, muito significativos ("**") a 0,001 <P <0,01 e extremamente significativos ("* ** ") em P> 0,001.

[0373] Para testar a significância estatística entre os grupos controle e tratados ao longo de todo o curso do tempo de tratamento foram empregados um teste ANOVA de medidas repetidas, seguido pelo teste de pós comparação múltipla de Dunnets ou um teste ANOVA de 2 vias.

[0374] Para representações gráficas o diagrama s de "caixa e pelos" foi construído para mostrar a distribuição dos volumes tumorais individuais para cada grupo. A caixa representa os dias 25 e percentil 75° das observações, a linha horizontal corresponde ao valor médio, e os "pelos" indicam os valores máximos e mínimos. Volumes tumorais medianos ou médios (± SEM) foram representados graficamente em uma plotagem semilog ou linear em função do tempo. As mudanças do Grupo BW médio durante o estudo foram representadas como a mudança percentual, ± SEM, a partir de D1.

[0375] A dispersão foi construída para mostrar os valores de TTE, por grupo. O gráfico de TTE inclui mortes NTR, que são excluídas de todas as outras análises gráficas. Quando um animal saiu do estudo por causa do tamanho do tumor, o volume do tumor final registrado para o animal foi incluído com os dados usados para o cálculo do volume médio em momentos posteriores. A porcentagem de animais em cada grupo remanescente no estudo em função do tempo foi apresentada em um gráfico de sobrevivência de Kaplan-Meier.

Extração de Histona

[0376] Para o isolamento de histonas, 60-90 mg de tecido de tumor foram homogeneizados em 1,5 ml de tampão de extração nuclear (Tris-HCl10 mM, MgCl2 10 mM, KCl 25 mM, 1% de Triton X-100, 8,6% de sacarose, além de um comprimido inibidor de protease Roche 1836145) e incubou-se em gelo durante 5 minutos. Os núcleos foram recolhidos por centrifugação a 600 g durante 5 minutos a 4°C e lavados uma vez em PBS. O sobrenadante foi removido e as histonas extraídas durante uma hora, com vórtex a cada 15 minutos, com ácido sulfúrico frio 0,4 . Os extratos foram clarificados por centrifugação a 10000 g durante 10 minutos a 4°C e transferidos para um tubo de microcentrífuga fresco contendo 10x o volume de acetona gelada. As histonas foram precipitadas a -20°C durante 2 horas durante a noite, peletizadas por centrifugação a 10000 g durante 10 minutos e ressuspensas em água.

ELISA

[0377] As histonas foram extraídas de amostras de tumor, como descrito acima. As histonas foram preparadas em concentrações equivalentes em tampão de revestimento (PBS + BSA a 0,05%), dando origem a 0,5 ng/ul de amostra e 100 ul de amostra ou padrão foram adicionados em duplicata para duas placas de ELISA de 96 poços (Thermo Labsystems, Immulon 4HBX # 3885). As placas foram seladas e incubadas durante a noite a 4°C. No dia seguinte, as placas foram lavadas 3x com 300 ul/poço de PBST (PBS + 0,05% de Tween 20; 10X PBST, KPL # 51-14-02) em um lavador de placas Bio Tek. As placas foram bloqueadas com 300 ul/poço de diluente (PBS + BSA a 2% + 0,05% de Tween 20), incubadas à temperatura ambiente durante 2 horas, e lavadas 3x com PBST. Todos os anticorpos foram diluídos em diluente. 100 ul/poço de anti-H3K27me3 (CST # 9733, 50% de glicerol 1:1000) ou anti- H3 total (Abcam ab1791, glicerol a 50% 1:10000) foi adicionado a cada placa. As placas foram incubadas durante 90 min à temperatura ambiente e lavadas 3x com PBST. 100 ul/poço de anti-Rb-IgG-HRP (Cell Signaling Technology, 7074) foi adicionado 1:2000 para a placa H3K27Me3 e 1:6000 para a placa de H3 e incubados durante 90 min à temperatura ambiente. As placas foram lavadas 4X com PBST. Para a detecção, com 100 ul/poço de substrato de TMB (BioFx Laboratories, #TMBS) foram adicionados e as placas incubadas no escuro à temperatura ambiente durante 5 min. A reação foi interrompida com 100 ul/poço de H2SO4 1N. A absorvância a 450 nm foi lida em um leitor de microplacas SpectaMax M5.

Estudo de eficácia no modelo de xenoenxerto com SUDHL6

[0378] A eficácia do tratamento com o Composto 44 e, em combinação com CHOP na inibição do crescimento do tumor in vivo foi determinada no modelo de xenoenxerto com SUDHL6. A comparação do crescimento do tumor e a taxa de sobrevivência demonstrou que a administração do Composto 44 e CHOP inibiu ou retardou o crescimento de tumor e aumentou a sobrevivência dos camundongos portadores de tumores. Camundongos nude atímicos foram injetados subcutaneamente com 1x107células de linfoma humano SUDHL6. O Composto 44 foi administrado uma vez por dia (QD), duas vezes por dia (BID) ou três vezes por dia (TID) nas concentrações indicadas (75 mg/kg, 150 mg/kg, ou 225 mg/kg). Os camundongos receberam CHOP no dia 1 e 8. O volume do tumor foi medido duas vezes por semana até o ponto final de 60 dias ou quando o volume do tumor atingiu 2000 mm3, o que ocorrer primeiro.

[0379] A terapia de combinação de Composto 44 e CHOP mostrou inibição do crescimento do tumor ao longo do decurso do tratamento (28 dias), em comparação com camundongos tratados com o composto 44 ou CHOP sozinho (Figura 6A). Significativamente, os camundongos que receberam a terapia de combinação do composto 44 e CHOP exibiram uma regressão durável do tamanho do tumor; 7 em cada 12 camundongos demonstraram respostas completas no dia 60 a 225 mg/kg BID e grupo de combinação de CHOP (Figura 6A). A curva de Kaplan-Meier foi determinada para demonstrar a sobrevivência dos camundongos no estudo. 57% dos camundongos que receberam a terapia de combinação de Composto 44 e CHOP sobreviveram 60 dias após a injeção (Figura 6B). Eficácia do agente único com Composto 44 não foi observada durante o tratamento por 28 dias, porém alta variabilidade intra-grupo pode ter mascarado o efeito do tratamento do composto 44 como um agente único.

Estudo de Eficácia em Modelo de Xenoenxerto com WSU-DLCL2

[0380] A eficácia do tratamento com o Composto 44 e, em combinação com CHOP na inibição do crescimento do tumor in vivo foi determinada no modelo de xenoenxerto com WSU-DLCL2. A comparação do crescimento do tumor estabeleceu que a administração do Composto 44 e CHOP inibiu ou retardou o crescimento de tumor dos camundongos portadores de tumores. Camundongos SCID foram injetados subcutaneamente com 1x107células de linfoma humano WSU-DLCL2. O Composto 44 foi administrado uma vez por dia (QD), duas vezes por dia (BID) ou três vezes por dia (TID) nas concentrações indicadas (150 mg/kg, 225 mg/kg, 300 mg/kg ou 600 mg/kg). Os camundongos receberam CHOP no dia 1, e 22 (CHOP no dia 1 e 8 não eram tolerados em camundongos SCID). O volume do tumor foi medido duas vezes por semana até o ponto final de 28 dias.

[0410] Composto 44 sozinho e em combinação com a terapia de CHOP resultou na inibição do crescimento do tumor (Figura 7A). Administração de 150 mg/kg, três vezes por dia (TID) e 225 mg/kg duas vezes por dia (BID) de Composto 44 como um agente único resultou em tumores significativamente menores em volume, quando comparado com os camundongos tratados com veículo de controle (p <0,05). Além disso, a terapia de combinação de Composto 44 e CHOP mostrou inibição estatisticamente significativa do crescimento do tumor, em comparação com camundongos tratados com veículo de controle (p <0,001). As análises estatísticas foram calculadas usando ANOVA de medidas repetidas seguida do teste post Dunnett. A inibição do crescimento de tumor também foi calculada, revelando que o tratamento de tumores, com o Composto 44 resultou em maior inibição do crescimento do tumor em todas as doses (Tabela 2). É importante notar que o tratamento de combinação do Composto 44 com CHOP resultou na maior inibição do crescimento de tumor. Tabela 2. Inibição do Crescimento do Tumor (TGI) de Modelo de Xenoenxerto com WSU-DLCL2.

[0381] Para examinar a absorção e distribuição dos agentes administrados, a análise farmacocinética foi realizada para determinar a concentração de Composto 44 (ng/ml) no plasma de camundongos portadores de tumor (Figura 7B). As amostras de plasma foram obtidas no dia 28, a 5 minutos antes da última dose (“depressão”) e 3 horas após a última dose ("após"). As amostras de plasma foram analisadas por LC- MS/MS para determinar a concentração de Composto 44 (ng/mL). Os níveis do Composto 44 não foram significativamente diferentes entre os camundongos que receberam 225 mg/kg de composto 44 duas vezes por dia (BID), como um agente único, e 225 mg/kg de Composto 44 (BID), com CHOP no ponto temporal de depressão. No entanto, três horas após a administração da última dose, os níveis de Composto 44 estavam significativamente aumentados em camundongos que receberam 225 mg/kg de composto 44 duas vezes por dia (BID), com CHOP em comparação com agente único composto 44.

[0382] A análise farmacocinética foi também realizada para determinar a concentração de Composto 44 (ng/g) no tecido do tumor colhido a partir de camundongos no dia 28 às 3 horas após a última administração do tratamento (Figura 7C).

[0383] A eficácia da inibição do alvo in vivo foi determinada por análise de metilação das histonas em tumores após 28 dias de tratamento. A análise de Western Blot (Figura 8 A) demonstrou que a metilação de h3k27 foi inibida pelo Composto 44 em todas as doses e esquemas de dosagem em tumores WSU-DLCL2. As histonas foram extraídas tal como descrito acima. As concentrações de proteína para o ácido extraído histonas foram determinadas pelo ensaio de BCA (Pierce). 400-800ng de cada lisado foram fracionados em gel de 10-20% de Tris-Glicina (Biorad), transferidos usando iBlot (7 minutos no programa 3, usando pilhas de transferência de nitrocelulose), e sondados com os seguintes anticorpos no tampão de bloqueio Odyssey: anti-coelho -H3K27me3 (CST 9733; 1: 20.000 de diluição) e anti- H3Total de camundongo (CST 3638; 1: 20.000 de diluição). Após a incubação primária Ab, as membranas foram sondadas com IRDye 800CW IgG de burro-anti-camundongo (LiCOR #926-32212) e Alexa Flúor 680 em IgG de cabra-anti-coelho de Ab secundário (Invitrogen #A-21076) e fotografadas utilizando o sistema LiCOR Odyssey. Sinal de proteína total histona H3 foi usado como controle.

[0384] Análise de metilação de histonas em tumores WSU-DLCL2 por ELISA confirmou que a metilação de histonas foi inibida pelo composto 44 em todas as doses e esquemas de dosagem (Figura 8b). Os tumores dos camundongos que receberam veículo ou CHOP não apresentaram qualquer inibição de metilação em H3k27. As histonas foram extraídas a partir de tumores após 28 dias de tratamento e analisadas por ELISA, como descrito acima.

Estudo de Eficácia em Modelo de Xenoenxerto com SUDHL10

[0385] A eficácia do tratamento com o Composto 44, e em combinação com COP (ciclofosfamida, Oncovin [vincristina], e prednisona) na inibição do crescimento do tumor in vivo foi determinada no modelo de xenoenxerto com SUDHL10. A comparação do crescimento do tumor estabeleceu que a administração do Composto 44 e COP inibiu ou retardou o crescimento do tumor dos camundongos portadores de tumores. Camundongos SCID foram injetados subcutaneamente com 1x107células de linfoma humano SUDHL10. Composto 44 foi administrado duas vezes por dia (BID) ou três vezes por dia (TID) nas concentrações indicadas (125 mg/kg, 250 mg/kg, ou 500 mg/kg). Os camundongos receberam COP no dia 1 e 22 (CHOP no dia 1 e 8 não eram tolerados em camundongos SCID). O volume do tumor foi medido duas vezes por semana até que o ponto final de 28 dias. Metade do coorte foi sacrificada após 28 dias de tratamento, enquanto a outra metade foi analisada até um ponto final de 60 dias de análise de retardo do crescimento do tumor.

[0386] A Figura 9A mostra que a administração do Composto 44 sozinho mostrou inibição do crescimento de tumor estatisticamente significativa, como um agente único, a 250 mg/kg e 500 mg/kg quando administrado duas vezes por dia (BID), quando comparado com os camundongos tratados com veículo de controle (p <0,001). Além disso, a terapia de combinação do Composto 44 a 250 mg/kg duas vezes por dia (BID) e COP mostrou inibição estatisticamente significativa do crescimento do tumor, em comparação com camundongos tratados com veículo de controle (p <0,001). As análises estatísticas foram calculadas usando ANOVA de medidas repetidas seguida do teste post Dunnett. Um camundongo no grupo de 500 mg/kg BID foi sacrificado no dia 15, devido à má condição corporal. Os camundongos que receberam o Composto 44 e combinação com terapia de COP apresentaram 8% de perda de peso corporal no dia 25, em que a administração foi interrompida, mas retomada no dia 27. No dia 29, 1/16 dos camundongos e 2/15 dos camundongos estavam sem tumor no grupo de 250 mg/kg e 500 mg/kg. Surpreendentemente, 10/14 dos camundongos que receberam composto 44 e terapia combinada de COP estavam sem tumor no dia 29.

[0387] A inibição do crescimento do tumor foi também calculada, revelando que o tratamento de tumores de xenoenxerto com SUDHL10 com Composto 44, com ou sem COP resultou na inibição do crescimento do tumor em todas as doses eficazes (Tabela 3). Tabela 3. Inibição do Crescimento do Tumor (TGI) um Modelo de xenoenxerto com SUDHL10.

[0388] Os tumores foram pesados após os camundongos serem sacrificados no dia 28 (Figura 9B). Os tumores dos camundongos que receberam administração de agente único composto 44 a 125 mg/kg ou COP foram significativamente menores em comparação com camundongos controle (veículo). Os tumores dos camundongos que receberam terapia de combinação de Composto 44 e COP foram significativamente menores do que os tumores de murganhos que receberam o Composto 44 como um agente único, tanto de 250 mg/kg e 500 mg/kg doses.

[0389] Metade do grupo foi mantida para o dia 60, para determinar o tratamento eficácia, determinando o retardo no crescimento do tumor (Figura 9C). O crescimento do tumor em camundongos tratados com doses de 250 mg/kg e 500 mg/kg do Composto 44 como um único agente exibiram pequenos tumores no dia 28, enquanto o controle e COP camundongos tratados exibiram grandes tumores onde os tumores continuaram a crescer após o dia 28. Surpreendentemente, os camundongos que receberam a terapia de combinação não só tinham tumores menores do que todos os outros grupos de tratamento, mas também exibiram retardo do crescimento de tumor significativo e durável.

[0390] Ab Figura 9E mostra uma curva de Kaplan-Meier que descreve a taxa de sobrevivência de camundongos tratados com o Composto 44 por si só ou em combinação no COP. A administração de Composto 44 como um agente único, a 125 mg/kg, 250 mg/kg, e 500 mg/kg, aumentou a sobrevivência de camundongos em comparação com os camundongos de controle e os camundongos tratados com apenas COP. Significativamente, a administração conjunta do composto 44 com COP melhorou a taxa de sobrevivência de camundongos em comparação com administração única agente.

[0391] Os estudos de farmacocinéticas e farmacodinâmicas foram realizados sobre o modelo de xenoenxerto com SUDHL10. A Figura 10A mostra a análise farmacocinética do Composto 44 concentrações em níveis de plasma (ng/mL). As amostras de plasma foram obtidas a partir de camundongos portadores de tumores no dia 28, quer em 5 minutos antes de a última dose (“depressão”) ou 3 horas após a última dose ("após"). Os níveis do composto 44 foram determinados por LC-MS. A análise Farmacodinâmica foi realizada por ELISA, e determinou-se a razão de H3K27 trimetilada em amostras de tumor. A análise farmacodinâmica também foi realizada em outros tecidos, especificamente o baço e medula óssea, de camundongos portadores de tumor para mostrar a eficácia da inibição de metilação das histonas pelo Composto 44 em tecidos normais do camundongo substituto (Figuras 10B e 10C).

Exemplo 7: Efeitos sinérgicos da terapia de combinação do Composto 44 e agentes anticâncer. Métodos

[0392] As linhagens de células humanas de linfoma de WSU-DLCL2 (DSMZ; ACC 575), SU-DHL-10 (DSMZ; ACC 576), e Toledo (ATCC; CRL-2631) foram obtidas a partir das fontes indicadas e mantidas em RPMI-1640 suplementado com soro fetal bovino inativado a 10% -20% de calor e 2 mM de glutamina. As células foram cultivadas em frascos de cultura de tecidos em uma incubadora umidificada a 37°C, em uma atmosfera de 5% de CO2 e 95% de ar. A WSU-DLCL2 e SU-DHL-10 contêm a mutação Y641 EZH2, e a linhagem de células de Toledo contém WT EZH2.

[0393] Os efeitos anti-proliferativos in vitro da combinação do Composto 44 com os seguintes fármacos: AraC, Cisplatina, decitabina, Dexametasona, Everolímus, prednisolona, e doxorrubicina foram investigados. Células de linfoma humano WSU- DLCL2, SU-DHL-10, ou Toledo foram tratadas com concentrações crescentes de Composto 44 em frascos. Após 4 dias de tratamento, as células WSU-DLCL2 ou SU- DHL-10 foram divididas para a densidade de semeadura inicial e plaqueadas em uma placa de cultura de tecidos de 96 poços com cada concentração do Composto 44 em uma fileira da placa. Após 6 dias, as células Toledo foram divididas em densidade de semeadura inicial e plaqueadas em uma placa de cultura de tecidos de 96 poços com cada concentração do Composto 44 em uma fileira da placa. Doses crescentes de fármaco foram então adicionados às placas. Uma dose por coluna formando uma matriz de composto 44 e de doses de fármacos. Após incubação durante mais 3 dias uma viabilidade de células de WSU-DLCL2 ou SU-DHL-10 foi medida utilizando o reagente Promega Cell Titer-Glo seguido por detecção de luminescência. Após 5 dias a viabilidade das células de Toledo foi medida utilizando o reagente Promega Cell Titer-Glo seguido por detecção de luminescência.

Análise dos dados

[0394] A sinergia foi determinada utilizando o pacote de software CalcuSyn por Biosoft com base no método de Chou-Talalay para a combinação de fármacos, que utiliza a equação de mediana-efeito (Chou 2006). Primeiro, os valores de luminescência em bruto foram convertidos em porcentagem de inibição ou fração afetada (Fa) calculados usando controles de máxima inibição e células tratadas com DMSO para controle mínimo a inibição localizada em cada placa. Valores de percentual de inibição para cada relação constante de combinações de compostos foram introduzidos em CalcuSyn para determinar os valores de índice de combinação. Índice de combinação de valores de menos de 1 indicou sinergia.

[0395] Para os compostos de teste que não inibem a viabilidade das células em 50%, a sinergia não pode ser determinada usando CalcuSyn. Em vez disso, os dados foram relatados como mudança de vezes de IC50 para o IC50 para o Composto 44 Alternativamente, se o composto 44 não teve um efeito, tal como com as células de Toledo, a mudança de vezes de IC50 foi relatada para o fármaco, em vez do Composto 44.

Resultados

[0396] O tratamento das células WSU-DLCL2 e SU-DHL-10 com composto 44 e quer AraC, cisplatina, doxorubicina, Decitabina, ou Everolimus demonstrou redução sinérgica da viabilidade de células. Os valores de índice de combinação para a combinações com o Composto 44 e Decitabina em células WSU-DLCL2 e SU-DHL- 10 foram abaixo de 0,1 o que é designado por sinergismo muito forte de acordo com a caracterização de Chou-Talalay (Chou 2006). Valores de índice de combinação para combinações com Composto 44 e everolimus em células WSU-DLCL2 estavam abaixo de 0,1 e células SU-DHL-10 entre 0,1-0,3, que é denotado por sinergia muito forte e sinergia forte, respectivamente. Combinações com Composto 44 e quer AraC, cisplatina ou doxorrubicina em células WSU-DLCL2 e SU-DHL-10 apresentaram valores de índice de combinação entre 0,3-0,7 que denota sinergia (Chou 2006). Combinação do Composto 44 com prednisolona melhorou a potência do Composto 44 por 7 vezes para células WSU-DLCL2 e três vezes para células SU-DHL-10 na dose superior de prednisolona. Além disso, a combinação com o Composto 44 e a dexametasona melhorou a potência do Composto 44 de 17 vezes para as células WSU-DLCL2 e três vezes para as células SU-DHL-10 no topo como faz a Dexametasona.

[0397] A linhagem de células de Toledo não mostrou sensibilidade ao Composto 44 e nenhum benefício de combinação foi observado quando o composto 44 foi combinado com qualquer AraC, Cisplatina, Doxorrubicina, decitabina, everolimus, prednisolona, ou dexametasona. Assim, a combinação de benefícios obtida nestas experiências parece ser dependente da mutação de EZH2.

[0398] Tabela 4: Lista de compostos e linhagens celulares

INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA

[0399] Todas as publicações e documentos de patente aqui citados são aqui incorporados por referência como se cada publicação ou documento fosse especificamente e individualmente indicado para ser aqui incorporado por referência. A citação de publicações e de documentos de patentes não é concebida como uma admissão de que qualquer uma é do estado da técnica pertinente, nem constitui qualquer admissão quanto ao conteúdo ou à data da mesma. A invenção tendo sido já descrita a título de descrição escrita, os versados na técnica reconhecerão que a invenção pode ser praticada em uma variedade de modalidades e que a descrição anterior e os exemplos apresentados são para fins de ilustração e não como limitação das reivindicações que seguem.

EQUIVALENTES

[0400] A invenção pode ser concretizada em outras formas específicas sem se distanciardo espírito ou características essenciais da mesma. As modalidades anteriores devem, portanto, ser consideradas em todos os aspectos ilustrativos e não limitativos da invenção descrita no presente documento. O escopo da invenção é, portanto, indicado pelas reivindicações anexas e não pela descrição anterior, e todas as alterações que estejam dentro do significado e da faixa de equivalência das reivindicações destinam-se a ser aqui abrangidas.

Claims (13)

1. Composição CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um composto de Fórmula (IIa): ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais outros agentes terapêuticos compreendendo rituximabe e lenalidomida, em que: cada um de Ra e Rb, independentemente, é H ou C1-C6 alquil opcionalmente, substituído por um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é um ligante ou ligante de C1-C3 alquil substituído ou não substituído, e T3 é H, halo, heterocicloalquil de 4 a 7 membros, C1C3alquil, ORd, COORd,-S(O)2Rd, ou -NRdRe, em que cada um de Rd e Re é independentemente H ou C1-C6 alquil, ou -Q3-T3 é oxo; R7 é isopropil ou C1-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, piperidinil, tetra-hidropirano, tetra-hidro-2H-tiopiranoil, ciclopentil, ou ciclo-hexil, ou heterocicloalquil de 4 a 12 membros, cada um, opcionalmente, substituído por um ou mais -Q5-T5, em que Q5 é um ligante, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, ou ligante de C1-C3 alquil, Rk sendo H ou C1-C6 alquil, e T5 é H, halo, C1-C6 alquil, hidróxil, ciano, C1-C6 alcóxil, amino, mono- C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, C3-C8 cicloalquil, C6-C10 aril, heterocicloalquil de 4 a 12 membros, heteroaril de 5- ou 6 membros, ou S(O)qRq em que q é 0, 1, ou 2 e Rq é C1-C6 alquil, C2-C6 alquenil, C2-C6 alquinil, C3-C8 cicloalquil, C6-C10 aril, heterocicloalquil de 4 a 12 membros, ou heteroaril de 5- ou 6 membros, e T5 é opcionalmente, substituído por um ou mais substituintes selecionados dentre o grupo que consiste em halo, C1-C6 alquil, hidróxil, ciano, C1-C6 alcóxil, amino, mono-C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, C3-C8 cicloalquil, C6-C10 aril, heterocicloalquil de 4 a 12 membros, e heteroaril de 5- ou 6 membros exceto quando T5 é H, halo, hidróxil, ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo; e R8 é H, metil, ou etil.

2. Composição CARACTERIZADA pelo fato de que compreende qualquer um dos compostos listados na Tabela 1 ou os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, preferencialmente Composto 44 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais outros agentes terapêuticos compreendendo rituximabe e lenalidomida.

3. Uso de uma composição, como definida na reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para uso em uma terapia combinatória de tratamento ou prevenção de uma doença em um indivíduo com necessidade do mesmo, em que (i) a referida doença pode ser influenciada por meio da modulação do estado de metilação das histonas e outras proteínas; ou (ii) a doença é câncer ou uma condição pré-cancerosa.

4. Uso, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido estado de metilação é mediado, pelo menos em parte, pela atividade de EZH2.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença é câncer e um composto de Fórmula (IIa) e um ou mais outros agentes terapêuticos compreendendo rituximabe e lenalidomida são formulados para serem administrados simultaneamente ou sequencialmente.

6. Uso, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADO pelo fato de que um composto de Fórmula (IIa) é formulado para ser administrado antes da administração dos referidos outros agentes terapêuticos compreendendo rituximabe e lenalidomida.

7. Uso, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença é câncer e a terapia combinatória compreende ainda uma dose terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo formulada para ser administrada, antes de uma dose terapeuticamente eficaz de uma composição, como definida na reivindicação 1, ser formulada para ser administrada.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 5, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição, como definida na reivindicação 1, é formulada para ser administrada em uma dosagem de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 5 ou 7, CARACTERIZADO pelo fato de que (i) o composto de Fórmula (IIa) é formulado para ser administrado a uma dosagem de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia; ou (ii) cada um dos um ou mais outros agentes terapêuticos compreendendo rituximabe e lenalidomida é formulado para ser administrado a uma dosagem de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia.

10. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3, 5 e 7, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido indivíduo expressa EZH2 mutante, opcionalmente quando: (i) o referido EZH2 mutante tem uma ou mais mutações, em que a mutação é uma substituição, uma mutação pontual, uma mutação nonsense, uma mutação missense, uma deleção ou uma inserção; (ii) o referido mutante EZH2 tem uma ou mais mutações no seu domínio de bolso de substrato tal como definido na SEQ ID NO: 6; (iii) o referido EZH2 mutante é um mutante de Y641, opcionalmente selecionado dentre Y641F, Y641H, Y641N, e Y641S; (iv) o referido EZH2 mutante tem uma ou mais mutações selecionadas dentre o grupo que consiste em uma substituição de glicina (G) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 677 da SEQ ID NO: 1 (A677G); uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 687 da SEQ ID NO: 1 (A687V); uma substituição de metionina (M) pelo resíduo do tipo selvagem de valina (V) na posição de aminoácido 674 da SEQ ID NO: 1 (V674M); uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 685 da SEQ ID NO: 1 (R685H); uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 685 da SEQ ID NO: 1 (R685C); uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 322 da SEQ ID NO: 3 (N322S), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 288 da SEQ ID NO: 3 (R288Q), uma substituição de isoleucina (I) pelo resíduo do tipo selvagem de treonina (T) na posição de aminoácido 573 da SEQ ID NO: 3 (T573I), uma substituição de ácido glutâmico (E) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 664 da SEQ ID NO: 3 (D664E), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 458 da SEQ ID NO: 5 (R458Q), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 249 da SEQ ID NO: 3 (E249K), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 684 da SEQ ID NO: 3 (R684C), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 628 da SEQ ID NO: 21 (R628H), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de glutamina (Q) na posição de aminoácido 501 da SEQ ID NO: 5 (Q501H), uma substituição de asparagina (N) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 192 da SEQ ID NO: 3 (D192N), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 664 da SEQ ID NO: 3 (D664V), uma substituição de leucina (L) pelo resíduo do tipo selvagem de valina (V) na posição de aminoácido 704 da SEQ ID NO: 3 (V704L), uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de prolina (P) na posição de aminoácido 132 da SEQ ID NO: 3 (P132S), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 669 da SEQ ID NO: 21 (E669K), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 255 da SEQ ID NO: 3 (A255T), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 726 da SEQ ID NO: 3 (E726V), uma substituição de tirosina (Y) pelo resíduo do tipo selvagem de cisteína (C) na posição de aminoácido 571 da SEQ ID NO: 3 (C571Y), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de fenilalanina (F) na posição de aminoácido 145 da SEQ ID NO: 3 (F145C), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 693 da SEQ ID NO: 3 (N693T), uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de fenilalanina (F) na posição de aminoácido 145 da SEQ ID NO: 3 (F145S), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de glutamina (Q) na posição de aminoácido 109 da SEQ ID NO: 21 (Q109H), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de fenilalanina (F) na posição de aminoácido 622 da SEQ ID NO: 21 (F622C), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de glicina (G) na posição de aminoácido 135 da SEQ ID NO: 3 (G135R), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 168 da SEQ ID NO: 5 (R168Q), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de glicina (G) na posição de aminoácido 159 da SEQ ID NO: 3 (G159R), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 310 da SEQ ID NO: 5 (R310C), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 561 da SEQ ID NO: 3 (R561H), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 634 da SEQ ID NO: 21 (R634H), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de glicina (G) na posição de aminoácido 660 da SEQ ID NO: 3 (G660R), uma substituição de cisteína (C) pelo resíduo do tipo selvagem de tirosina (Y) na posição de aminoácido 181 da SEQ ID NO: 3 (Y181C), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de histidina (H) na posição de aminoácido 297 da SEQ ID NO: 3 (H297R), uma substituição de serina (S) pelo resíduo do tipo selvagem de cisteína (C) na posição de aminoácido 612 da SEQ ID NO: 21 (C612S), uma substituição de tirosina (Y) pelo resíduo do tipo selvagem de histidina (H) na posição de aminoácido 694 da SEQ ID NO: 3 (H694Y), uma substituição de alanina (A) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 664 da SEQ ID NO: 3 (D664A), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de isoleucina (I) na posição de aminoácido 150 da SEQ ID NO: 3 (I150T), uma substituição de arginina (R) pelo resíduo do tipo selvagem de isoleucina (I) na posição de aminoácido 264 da SEQ ID NO: 3 (I264R), uma substituição de leucina (L) pelo resíduo do tipo selvagem de prolina (P) na posição de aminoácido 636 da SEQ ID NO: 3 (P636L), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de isoleucina (I) na posição de aminoácido 713 da SEQ ID NO: 3 (I713T), uma substituição de prolina (P) pelo resíduo do tipo selvagem de glutamina (Q) na posição de aminoácido 501 da SEQ ID NO: 5 (Q501P), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de lisina (K) na posição de aminoácido 243 da SEQ ID NO: 3 (K243Q), uma substituição de ácido aspártico (D) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido glutâmico (E) na posição de aminoácido 130 da SEQ ID NO: 5 (E130D), uma substituição de glicina (G) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 509 da SEQ ID NO: 3 (R509G), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 566 da SEQ ID NO: 3 (R566H), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 677 da SEQ ID NO: 3 (D677H), uma substituição de asparagina (N) pelo resíduo do tipo selvagem de lisina (K) na posição de aminoácido 466 da SEQ ID NO: 5 (K466N), uma substituição de histidina (H) pelo resíduo do tipo selvagem de arginina (R) na posição de aminoácido 78 da SEQ ID NO: 3 (R78H), uma substituição de metionina (M) pelo resíduo do tipo selvagem de lisina (K) na posição de aminoácido 1 da SEQ ID NO: 6 (K6M), uma substituição de leucina (L) pelo resíduo do tipo selvagem de serina (S) na posição de aminoácido 538 da SEQ ID NO: 3 (S538L), uma substituição de glutamina (Q) pelo resíduo do tipo selvagem de leucina (L) na posição de aminoácido 149 da SEQ ID NO: 3 (L149Q), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de leucina (L) na posição de aminoácido 252 da SEQ ID NO: 3 (L252V), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de leucina (L) na posição de aminoácido 674 da SEQ ID NO: 3 (L674V), uma substituição de valina (V) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 656 da SEQ ID NO: 3 (A656V), uma substituição de ácido aspártico (D) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 731 da SEQ ID NO: 3 (Y731D), uma substituição de treonina (T) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 345 da SEQ ID NO: 3 (A345T), uma substituição de ácido aspártico (D) pelo resíduo do tipo selvagem de alanina (A) na posição de aminoácido 244 da SEQ ID NO: 3 (Y244D), uma substituição de triptofano (W) pelo resíduo do tipo selvagem de cisteína (C) na posição de aminoácido 576 da SEQ ID NO: 3 (C576W), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 640 da SEQ ID NO: 3 (N640K), uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 675 da SEQ ID NO: 3 (N675K), uma substituição de tirosina (Y) pelo resíduo do tipo selvagem de ácido aspártico (D) na posição de aminoácido 579 da SEQ ID NO: 21 (D579Y), uma substituição de isoleucina (I) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 693 da SEQ ID NO: 3 (N693I), e uma substituição de lisina (K) pelo resíduo do tipo selvagem de asparagina (N) na posição de aminoácido 693 da SEQ ID NO: 3 (N693K); (v) o referido EZH2 mutante tem um frameshift na posição de aminoácido 730, 391, 461, 441, 235, 254, 564, 662, 715, 405, 685, 64, 73, 656, 718, 374, 592, 505, 730, ou 363 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21 ou a posição de nucleotídeo correspondente da sequência de ácidos nucleicos que codifica a SEQ ID NO: 3, 5, ou 21; (vi) o referido EZH2 mutante tem uma deleção de ácido glutâmico (E) e leucina (L) na posição de aminoácidos 148 e 149 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21; ou (vii) o referido EZH2 mutante tem uma mutação nonsense na posição de aminoácido 733, 25, 317, 62, 553, 328, 58, 207, 123, 63, 137, ou 60 da SEQ ID NO: 3, 5 ou 21.

11. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3, 5 e 7, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido indivíduo demonstrou resistência a qualquer um dos componentes da composição, como definida na reivindicação 1, quando formulados para serem administrados como agente único.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 5 ou 7, CARACTERIZADO pelo fato de que o câncer é linfoma, leucemia, síndrome mielodisplásica (MDS, anteriormente conhecida como Pré-Leucemia) ou melanoma, opcionalmente em que o linfoma é selecionado dentre o grupo que consiste em linfoma de não-Hodgkin, linfoma folicular, e linfoma difuso de células B grandes; e opcionalmente em que a leucemia é leucemia mielóide crônica (LMC).

13. Método in vitro de inibição da proliferação de células de câncer CARACTERIZADO pelo fato de que compreende (i) colocar a referida célula de câncer em contato com a composição, como definida na reivindicação 1, ou (ii) colocar a referida célula de câncer em contato com um composto de Fórmula (IIa) e um ou mais outros agentes terapêuticos compreendendo rituximabe e lenalidomida, em que composto de Fórmula (IIa) e os referidos outros agentes terapêuticos são liberados simultaneamente ou sequencialmente, preferencialmente em que um composto de Fórmula (IIa) é liberado antes da distribuição dos referidos outros agentes terapêuticos; ou (iii) colocar a referida célula de câncer em contato com um composto de Fórmula (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, antes de colocar a referida célula de câncer em contato com uma composição, como definida na reivindicação 1.