BR112020003622A2 - cadeia pesada de anticorpo, anticorpo, bibliotecas, kit, método de preparo de uma biblioteca, método de produção de uma biblioteca de anticorpos, fago, método de geração de um anticorpo biespecífico e anticorpo biespecífico - Google Patents
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Abstract
Trata-se de bibliotecas que contêm polinucleotídeos, em que um dos polinucleotídeos codifica uma cadeia pesada de anticorpo com regiões hipervariáveis específicas HVR-H1 e HVR-H2. Ademais, são fornecidas, no presente documento, bibliotecas que contêm polinucleotídeos que codificam uma pluralidade de anticorpos exclusivos, em que cada anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve. Além disto, são fornecidos anticorpos, bibliotecas de polipeptídeos, bibliotecas de vetores, células, animais não humanos, cadeias pesadas de anticorpo, métodos de produção de uma biblioteca de anticorpos, kits e métodos de geração de um anticorpo biespecífico relacionado aos mesmos.
Description
[001] A presente divulgação se refere a bibliotecas contendo polinucleotídeos sintéticos que codificam cadeias pesadas de anticorpo (por exemplo, cadeias pesadas de um anticorpo humano dinâmico), assim como cadeias pesadas de anticorpo, anticorpos, células, animais, métodos e kits relacionados aos mesmos.
[002] Anticorpos monoclonais se tornam extremamente úteis numa ampla variedade de campos, incluindo pesquisa biológica, diagnósticos médicos e produtos farmacêuticos. A variabilidade de especificidades de ligação potenciais permite anticorpos com especificidade e potência valiosas. No entanto, esta variabilidade torna difícil e trabalhosa a triagem através de um grande número de anticorpos para identificar um ou mais dentre eles com as propriedades desejadas.
[003] Um método de identificação de um anticorpo de interesse consiste na triagem através de uma biblioteca de anticorpos, tal como uma biblioteca de sequências de células B clonadas, uma biblioteca de exibição de fagos, uma biblioteca de exibição de levedura e assim por diante. Estas bibliotecas permitem que alguém realize a triagem através de um grande número de anticorpos, representando uma multiplicidade de sequências de anticorpos exclusivos, para identificar anticorpos com propriedades específicas de interesse, por exemplo, ligação a um alvo particular, afinidade de ligação, seletividade e similares. No entanto, as bibliotecas atuais têm limitações particulares. As bibliotecas derivadas de uma fonte biológica, tal como um repertório de células B humanas, são limitadas àquelas sequências de anticorpos que podem ser clonadas a partir da fonte. As bibliotecas sintéticas podem incluir sequências de ocorrência não natural em comparação com as bibliotecas biologicamente derivadas, porém elas são muito limitadas pela quantidade de anticorpos que podem ser sintetizados num período de tempo particular. Ademais, bibliotecas extremamente grandes exigem abordagens de triagem mais demoradas e exaustivas; de outro modo, apenas uma fração da biblioteca pode ser analisada de modo prático para um anticorpo de interesse.
[004] Portanto, existe uma necessidade de desenvolvimento de bibliotecas de anticorpo dinâmicas contendo um conjunto robusto de unidades dinâmicas com perfis de sequência desenvolvíveis bem definidos para projetar e construir anticorpos dinâmicos que são potencialmente mais relevantes funcionalmente. Tais bibliotecas podem aprimorar muito não apenas a diversidade dos sítios de ligação ao anticorpo em anticorpos dentro da biblioteca, mas, também a eficiência de triagem para anticorpos que abrigam epítopos inovadores e/ou conformacionais num determinado antígeno. Além disto, tais bibliotecas podem aumentar a probabilidade com que um anticorpo particular de interesse pode ser identificado com um alto perfil de afinidade e capacidade de desenvolvimento.
[005] Todas as referências citadas no presente documento, incluindo pedidos de patente, publicações de patente e números de acesso ao UniProtKB/Swiss-Prot, são incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade, como se cada referência individual fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada a título de referência.
[006] Para atender as necessidades acima e outras necessidades, são reveladas no presente documento sequências de anticorpos, tais como regiões hipervariáveis de cadeia pesada (HVRs) e regiões variáveis de cadeia pesada (por exemplo, regiões VH), que permitem anticorpos humanos dinâmicos.
Estas sequências foram projetadas para permitir anticorpos com alças de sequências HVR altamente flexíveis que são capazes de ligar seus alvos com alta potência e/ou reconhecer múltiplos epítopos úteis e/ou reagir de modo cruzado com epítopos compartilhados entre diferentes espécies com baixa identidade de sequência (aproximadamente 60% de identidade de sequência ou menos). Vantajosamente, estas sequências de anticorpos permitem a criação de bibliotecas muito menores que, no entanto, contêm uma multiplicidade de anticorpos úteis e/ou uma diversidade muito maior num determinado tamanho de biblioteca. Tais bibliotecas podem ser usadas para identificar novos anticorpos de interesse que são específicos para uma ampla faixa de alvos ou, em alguns casos, reativos de modo cruzado contra múltiplos alvos de interesse.
Adicionalmente, um conceito e metodologia inovadores são introduzidos e implementados no presente documento para projetar e construir bibliotecas de anticorpos dinâmicas com o uso de unidades dinâmicas recentemente identificadas para capturar uma ampla faixa de flexibilidade conformacional de sítios de ligação ao anticorpo em bibliotecas físicas compactas. Além disto, os resultados com o uso de tais anticorpos (conforme descrito abaixo) realçam a capacidade de identificar anticorpos a partir destas bibliotecas que direcionam epítopos conformacionais e/ou sítios evolucionalmente conservados num determinado antígeno a partir de espécies diferentes com baixa identidade de sequência (por exemplo, abaixo de 60% a 70%).
[007] Consequentemente, num aspecto, são fornecidas no presente documento uma ou mais sequências de aminoácidos HVR-H1, e/ou um ou mais polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) que codificam as mesmas, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em: Fórmula (I): X1TFX2X3YX4IHWV (SEQ ID NO:198), em que X1 é F ou Y,
X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W; Fórmula (II): YSIX1SGX2X3WX4WI (SEQ ID NO:199), em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T; e Fórmula (III): FSLSTX1GVX2VX3WI (SEQ ID NO:200), em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e 137-158. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:1-52.
[008] Em outro aspecto, são fornecidas no presente documento uma ou mais sequências de aminoácidos HVR-H2 e/ou um ou mais polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) que codificam as mesmas, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em: Fórmula (IV): LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL (SEQ ID NO:201), em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T; Fórmula (V): IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV (SEQ ID NO:202), em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y; Fórmula (VI): IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV (SEQ ID NO:203), em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y; Fórmula (VII): VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF (SEQ ID NO: 204), em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T; Fórmula (VIII): IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV (SEQ ID NO:205), em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N; Fórmula (IX): IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV (SEQ ID NO:206), em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N; e Fórmula (X): VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF (SEQ ID NO: 207), em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em: Fórmula
(IV); Fórmula (VII); Fórmula (VIII); Fórmula (IX); Fórmula (XI): IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV (SEQ ID NO:208), em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y; Fórmula (XII): IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV (SEQ ID NO:209), em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y; e Fórmula (XIII): VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF (SEQ ID NO:210), em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é P ou S. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53-136.
[009] Em outro aspecto, são fornecidas no presente documento uma ou mais sequências de aminoácidos HVR-H3 e/ou um ou mais polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) que codificam as mesmas, em que a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:223-256.
[010] Em outro aspecto, são fornecidas no presente documento uma ou mais sequências de aminoácidos HVR-L1 e/ou um ou mais polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) que codificam as mesmas, em que a HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:257-264.
[011] Em outro aspecto, são fornecidas no presente documento uma ou mais sequências de aminoácidos HVR-L3 e/ou um ou mais polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) que codificam as mesmas, em que a HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:265-274.
[012] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um polinucleotídeo (por exemplo, um polinucleotídeo sintético) que codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1,
uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que cada um dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III).
[013] Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52 e 137-158. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 e 51. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 e 48. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 6, 10, 17, 29, 36 e 52;
[014] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 223-256.
[015] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende pelo menos duas (por exemplo, pelo menos duas, pelo menos três ou todas as quatro) de um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165, um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166, um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167, e um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168, em qualquer combinação. Em algumas modalidades, a sequência FW-H3 compreende uma mutação de arginina para lisina e R19 da SEQ ID NO:167.
[016] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um polinucleotídeo (por exemplo, um polinucleotídeo sintético) que codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que cada um dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X).
[017] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um polinucleotídeo (por exemplo, um polinucleotídeo sintético) que codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que cada um dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII).
[018] Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53-136. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 e 134. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 e 136. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 e 133.
[019] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 223-256.
[020] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende pelo menos duas (por exemplo, pelo menos duas, pelo menos três ou todas as quatro) de um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165, um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166, um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167, e um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168, em qualquer combinação. Em algumas modalidades, a sequência FW-H3 compreende uma mutação de arginina para lisina e R19 da SEQ ID NO:167.
[021] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um polinucleotídeo (por exemplo, um polinucleotídeo sintético) que codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que cada um dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X).
[022] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um polinucleotídeo (por exemplo, um polinucleotídeo sintético) que codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), e em que a HVR- H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III) , e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos), em que cada um dos polinucleotídeos na biblioteca codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII).
[023] Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52 e 137-158. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:
53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:
1-52 e 137-158, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53-136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 53-136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID
NOs: 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33,
34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 e 51, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53, 60, 63,
65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129,
130, 131, 132 e 134. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:
2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 e 48, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:
55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90,
91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 e 136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 6, 10, 17, 29, 36 e 52, e a
HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101,
102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 e 133.
[024] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII). Em algumas modalidades, uma HVR-H1 e uma HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XI); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XI). Em algumas modalidades, a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X). Em algumas modalidades, a HVR- H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII).
[025] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:157, e uma HVR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, e uma HVR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122; uma HVR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:138, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:154, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:161; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:145, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:128; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:22, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:153, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:155, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:156, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:51, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:138, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:123; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:126; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:129; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:124; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:130; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:150, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:132; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:12,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:149,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:117; e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:7, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:134. Em algumas modalidades, a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:151, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:29, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:152, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:156, e uma HVR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:157, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:94; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:48, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:163; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:160;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:92;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:93;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:97;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:103; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:164; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:137, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:54; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:3, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:127; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:85; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:4, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:109; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:140, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:131; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:141, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:142, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:159; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:143, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:144, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:147, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:133; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:148, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[026] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, os polinucleotídeos na biblioteca contêm menos que cerca de 6,5*104 (por exemplo, menos que cerca de 6.5*104, menos que cerca de 5,5*104, menos que cerca de 2,5*104, menos que cerca de 1*104, menos que cerca de 6700, menos que cerca de 6660, menos que cerca de 5000, menos que cerca de 2500, menos que cerca de 1000, menos que cerca de 690, menos que cerca de 500, menos que cerca de 100, menos que cerca de 50, etc.) combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) contêm cerca de 62272 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) contêm cerca de 60928 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) contêm cerca de 54656 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) contêm cerca de 6660 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) contêm cerca de 690 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, pelo menos uma das HVR-H1 e HVR-H2 da região variável de cadeia pesada de anticorpo adota múltiplas conformações, conforme analisado pela determinação estrutural e/ou modelagem computacional.
[027] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 223-256.
[028] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende pelo menos duas (por exemplo, pelo menos duas, pelo menos três ou todas as quatro) de um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165, um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166, um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167, e um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168, em qualquer combinação. Em algumas modalidades, a sequência FW-H3 compreende uma mutação de arginina para lisina e R19 da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 e 195.
[029] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca codificam cadeias pesadas de anticorpo de comprimento total. Em algumas modalidades, as bibliotecas compreendem ainda um ou mais polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) que codificam regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo. Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo compreendem uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR- L3, em que a HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264 e/ou a HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos que codificam regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo incluem pelo menos uma sequência exclusiva, pelo menos 100 sequências exclusivas, pelo menos 280 sequências exclusivas, pelo menos 103 sequências exclusivas, pelo menos 104 sequências exclusivas, pelo menos 105 sequências exclusivas, pelo menos 106 sequências exclusivas, pelo menos 107 sequências exclusivas, pelo menos 108 sequências exclusivas ou pelo menos cerca de 109 sequências exclusivas. Em algumas modalidades, os um ou mais polinucleotídeos na biblioteca que codificam regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo codificam cadeias leves de anticorpo de comprimento total.
[030] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) que codificam uma pluralidade de anticorpos exclusivos, em que cada anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada de cada anticorpo dentre a pluralidade, compreende uma sequência idêntica e é codificada por qualquer um dos polinucleotídeos que codificam uma região variável de cadeia pesada, conforme descrito acima. Em algumas modalidades, são fornecidas no presente documento bibliotecas que compreendem polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) que codificam uma pluralidade de anticorpos exclusivos, em que cada anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada de cada anticorpo dentre a pluralidade, compreende uma sequência idêntica e é codificada por qualquer um dos polinucleotídeos que codificam uma região variável de cadeia pesada, conforme descrito acima.
[031] Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeia leve compreendem uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR-L3, em que a HVR- L1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264 e/ou a HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274.
Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeia leve dos anticorpos na biblioteca incluem pelo menos uma sequência exclusiva, pelo menos 100 sequências exclusivas, pelo menos 280 sequências exclusivas, pelo menos 103 sequências exclusivas, pelo menos 104 sequências exclusivas, pelo menos 105 sequências exclusivas, pelo menos 106 sequências exclusivas, pelo menos 107 sequências exclusivas, pelo menos 108 sequências exclusivas, ou pelo menos cerca de 109 sequências exclusivas.
[032] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um vetor que compreende qualquer um dos polinucleotídeos, conforme descrito acima. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende vetores, em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos cinco, pelo menos 10, pelo menos 25, pelo menos 50, pelo menos 100, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 690, pelo menos 750, pelo menos 1000, pelo menos 2500, pelo menos 5000,
pelo menos 6000, pelo menos 6500, etc.) dos vetores na biblioteca compreende qualquer um dos polinucleotídeos, conforme descrito acima.
Em algumas modalidades, pelo menos dois dos vetores na biblioteca compreendem um polinucleotídeo, conforme descrito acima.
Em algumas modalidades, pelo menos
100 dos vetores na biblioteca compreendem um polinucleotídeo, conforme descrito acima.
Em algumas modalidades, pelo menos 500 dos vetores na biblioteca compreendem um polinucleotídeo, conforme descrito acima.
Em algumas modalidades, pelo menos 1000 dos vetores na biblioteca compreendem um polinucleotídeo, conforme descrito acima.
Em algumas modalidades, pelo menos 5000 dos vetores na biblioteca compreendem um polinucleotídeo,
conforme descrito acima.
Em algumas modalidades, pelo menos 6500 dos vetores na biblioteca compreendem um polinucleotídeo, conforme descrito acima.
Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende vetores, em que cada um dos vetores na biblioteca compreende qualquer um dos polinucleotídeos, conforme descrito acima.
Em algumas modalidades, o vetor é um vetor de expressão.
Em algumas modalidades, o vetor é um vetor de exibição.
Em algumas modalidades, a biblioteca que compreende vetores compreende ainda pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos cinco, pelo menos 10,
pelo menos 25, pelo menos 50, pelo menos 100, pelo menos 250, pelo menos
500, pelo menos 690, pelo menos 750, pelo menos 1000, pelo menos 2500, pelo menos 5000, pelo menos 6000, pelo menos 6500, etc.) vetor que codifica uma região variável de cadeia leve de polipeptídeo.
Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeia leve compreendem uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR-L3, em que a HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264 e/ou a HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274. Em algumas modalidades, o pelo menos um vetor na biblioteca codifica regiões variáveis de cadeia leve que incluem pelo menos uma sequência exclusiva, pelo menos 100 sequências exclusivas, pelo menos 280 sequências exclusivas, pelo menos 103 sequências exclusivas, pelo menos 104 sequências exclusivas, pelo menos 105 sequências exclusivas, pelo menos 106 sequências exclusivas, pelo menos 107 sequências exclusivas, pelo menos 108 sequências exclusivas, ou pelo menos cerca de 109 sequências exclusivas.
[033] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento uma célula que compreende qualquer um dos polinucleotídeos e/ou vetores, conforme descrito acima. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende uma população de células, em que pelo menos uma (por exemplo, pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos cinco, pelo menos 10, pelo menos 100, pelo menos 103, pelo menos 104, pelo menos 105, pelo menos 106, pelo menos 107, pelo menos 108, pelo menos 109, etc.) das células na biblioteca compreende qualquer um dos polinucleotídeos e/ou vetores, conforme descrito acima. Em algumas modalidades, pelo menos duas das células na biblioteca compreendem um polinucleotídeo e/ou vetor, conforme descrito acima. Em algumas modalidades, pelo menos 100 das células na biblioteca compreendem um polinucleotídeo e/ou vetor, conforme descrito acima. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende uma população de células, em que cada uma das células na biblioteca compreende qualquer um dos polinucleotídeos e/ou vetores conforme descrito acima. Em algumas modalidades, a célula é uma célula bacteriana, de levedura ou de mamífero (por exemplo, células animais não humanas ou células humanas isoladas).
[034] Em outro aspecto, é fornecida no presente documento uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que pelo menos uma (por exemplo, pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III).
Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que cada uma das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III).
[035] Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52 e 137-158. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 e 51. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 e 48. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 6, 10, 17, 29, 36, 8 e 52;
[036] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 223-256.
[037] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende pelo menos duas (por exemplo, pelo menos duas, pelo menos três ou todas as quatro) de um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165, um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166, um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167, e um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168, em qualquer combinação. Em algumas modalidades, a sequência FW-H3 compreende uma mutação de arginina para lisina e R19 da SEQ ID NO:167.
[038] Em outro aspecto, é fornecida no presente documento uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que pelo menos uma (por exemplo, pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que cada uma das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X).
[039] Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que pelo menos uma (por exemplo, pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que cada uma das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII).
[040] Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53-136. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 e 134. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 e 136. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 e 133.
[041] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 223-256.
[042] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende pelo menos duas (por exemplo, pelo menos duas, pelo menos três ou todas as quatro) de um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165, um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166, um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167, e um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168, em qualquer combinação. Em algumas modalidades, a sequência FW-H3 compreende uma mutação de arginina para lisina e R19 da SEQ ID NO:167.
[043] Em outro aspecto, é fornecida no presente documento uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que pelo menos uma (por exemplo, pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III) , e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que cada uma das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) e Fórmula (X).
[044] Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), e em que a HVR- H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que pelo menos uma (por exemplo, pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, etc.) das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, uma HVR- H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III) , e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que cada uma das regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII).
[045] Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52 e 137-158. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52 e 137-158, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53-136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 53-136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 e 51, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 e 134. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 e 48, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 e 136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 6, 10, 17, 29, 36 e 52, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 e 133.
[046] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII). Em algumas modalidades, uma HVR-H1 e uma HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XI); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XI). Em algumas modalidades, a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X). Em algumas modalidades, a HVR- H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII).
[047] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a
HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:157, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:138, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:154, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:161; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:145, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:128; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:22, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:153, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:155, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:156, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:51, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:138, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:123; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:126; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:129; uma HVR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:124; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:130; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:150, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:132; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:12,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:149,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:117; e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:7, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:134. Em algumas modalidades, a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:151, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:29, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:152, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:156, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:157, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:94; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:48, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:163; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:160;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:92;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:93;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:97;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:103; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:164; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:137, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:54; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:3, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:127; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:4, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:85; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:4, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:109; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:140, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:131; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:141, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:142, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:159; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:143, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:144, e uma HVR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:147, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:133; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:148, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[048] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 223-256.
[049] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende ainda um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende pelo menos duas (por exemplo, pelo menos duas, pelo menos três ou todas as quatro) de um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165, um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166, um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167, e um FW-H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168, em qualquer combinação. Em algumas modalidades, a sequência FW-H3 compreende uma mutação de arginina para lisina e R19 da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 e 195.
[050] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, as regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca contêm menos que cerca de 6,5*104 (por exemplo, menos que cerca de 6,5*104, menos que cerca de 5,5*104, menos que cerca de 2,5*104, menos que cerca de 1*104, menos que cerca de 6700, menos que cerca de 6660, menos que cerca de 5000, menos que cerca de 2500, menos que cerca de 1000,
menos que cerca de 690, menos que cerca de 500, menos que cerca de 100, menos que cerca de 50, etc.) combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca contêm cerca de 62272 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca contêm cerca de 60928 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca contêm cerca de 54656 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeia pesada na biblioteca contêm cerca de 6660 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2.
Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeias pesadas na biblioteca contêm cerca de 690 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, pelo menos uma das HVR-H1 e HVR-H2 das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo adota múltiplas conformações, conforme analisado pela determinação estrutural e/ou modelagem computacional.
[051] Em outro aspecto, é fornecida no presente documento uma região variável de cadeia pesada de anticorpo e uma região variável de cadeia leve de anticorpo, em que a região variável de cadeia pesada de anticorpo é qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo e regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo, em que pelo menos uma (por exemplo, pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos cinco, pelo menos 10, pelo menos 100, etc.) das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo na biblioteca é qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo e regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo, em que cada uma das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo na biblioteca é qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve de anticorpo compreende uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR-L3, em que a HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264 e/ou a HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274. Em algumas modalidades, as regiões variáveis de cadeia leve na biblioteca incluem pelo menos uma sequência exclusiva, pelo menos 100 sequências exclusivas, pelo menos 280 sequências exclusivas, pelo menos 103 sequências exclusivas, pelo menos 104 sequências exclusivas, pelo menos 105 sequências exclusivas, pelo menos 106 sequências exclusivas, pelo menos 107 sequências exclusivas, pelo menos 108 sequências exclusivas, ou pelo menos cerca de 109 sequências exclusivas.
[052] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um domínio de ligação ao antígeno que compreende uma região variável de cadeia pesada de anticorpo, em que o domínio de ligação ao antígeno compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende domínios de ligação ao antígeno que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos cinco, pelo menos 10, pelo menos 100, etc.) dos domínios de ligação ao antígeno na biblioteca compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende domínios de ligação ao antígeno que compreende regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, em que cada um dos domínios de ligação ao antígeno na biblioteca compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno compreende ainda uma região variável de cadeia leve de anticorpo que compreende uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR-L3, em que a HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264 e/ou a HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274. Em algumas modalidades, os domínios de ligação ao antígeno que compreendem as regiões variáveis de cadeia leve na biblioteca incluem regiões variáveis de cadeia leve que compreendem pelo menos uma sequência exclusiva, pelo menos 100 sequências exclusivas, pelo menos 280 sequências exclusivas, pelo menos 103 sequências exclusivas, pelo menos 104 sequências exclusivas, pelo menos 105 sequências exclusivas, pelo menos 106 sequências exclusivas, pelo menos 107 sequências exclusivas, pelo menos 108 sequências exclusivas ou pelo menos cerca de 109 sequências exclusivas.
[053] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada de anticorpo, em que o anticorpo compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende anticorpos, em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos cinco, pelo menos 10, pelo menos 100, etc.) dos anticorpos na biblioteca compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende anticorpos, em que cada um dos anticorpos na biblioteca compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende ainda uma região variável de cadeia leve de anticorpo que compreende uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR-L3, em que a HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264 e/ou a HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274. Em algumas modalidades, os anticorpos que compreendem as regiões variáveis de cadeia leve na biblioteca incluem regiões variáveis de cadeia leve que compreendem pelo menos uma sequência exclusiva, pelo menos 100 sequências exclusivas, pelo menos 280 sequências exclusivas, pelo menos 103 sequências exclusivas, pelo menos 104 sequências exclusivas, pelo menos 105 sequências exclusivas, pelo menos 106 sequências exclusivas, pelo menos 107 sequências exclusivas, pelo menos 108 sequências exclusivas, ou pelo menos cerca de 109 sequências exclusivas.
[054] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, os anticorpos contêm menos que cerca de 6,5*104 combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, os anticorpos contêm menos que cerca de 5,5*104 combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os anticorpos contêm cerca de 62272 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os anticorpos contêm cerca de 60928 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os anticorpos contêm cerca de 54656 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os anticorpos contêm cerca de 6660 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, os anticorpos contêm cerca de 690 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2. Em algumas modalidades, pelo menos uma das HVR-H1 e HVR-H2 da região variável de cadeia pesada de anticorpo adota múltiplas conformações, conforme analisado pela determinação estrutural e/ou modelagem computacional.
[055] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo se liga a pelo menos 1 alvo com uma constante de dissociação de equilíbrio (Kd) entre cerca de 10-7 e cerca de 10-11 M. Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma temperatura de fusão (Tm) entre cerca de 60°C e cerca de 90°C.
[056] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um polipeptídeo (por exemplo, polipeptídeos de arcabouço) que compreende uma ou mais (por exemplo, uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais, cinco ou mais, etc.) HVRs da presente divulgação. Em algumas modalidades, são fornecidas no presente documento bibliotecas que compreendem polipeptídeos, em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos cinco, pelo menos 10, pelo menos 25, pelo menos 50, pelo menos 100, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 750, pelo menos 1000, pelo menos 2500, pelo menos 5000, pelo menos 6000, pelo menos 6500, etc.) dos polipeptídeos na biblioteca compreende uma ou mais HVRs da presente divulgação. Em algumas modalidades, são fornecidas no presente documento bibliotecas que compreendem polipeptídeos, em que cada um dos polipeptídeos na biblioteca compreende uma ou mais HVRs da presente divulgação. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer sequência HVR-H1, conforme descrito no presente documento (por exemplo, uma HVR-H1 de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III); e nas SEQ ID NOS:1-52 e 137-158). Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer HVR- H2 conforme descrito no presente documento (por exemplo, a HVR-H2 de acordo com fórmula selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (X), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII); e nas SEQ ID NOS:53-136 e 159- 164). Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer sequência HVR-H3, conforme descrito no presente documento (por exemplo, SEQ ID NOs: 223-256). Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-L1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer sequência HVR-L1, conforme descrito no presente documento (por exemplo, SEQ ID NOs: 257-264). Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-L3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer sequência HVR-L3, conforme descrito no presente documento (por exemplo, SEQ ID NOs: 265-274). Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende duas ou mais (por exemplo, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais, ou todas as cinco) das sequências HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, e/ou HVR-L3 descritas no presente documento. Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento polinucleotídeos e bibliotecas que compreendem polinucleotídeos que codificam qualquer um dos polipeptídeos, conforme descrito acima.
[057] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um fago que compreende pelo menos um polipeptídeo em sua superfície, em que o pelo menos um polipeptídeo compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo descritas no presente documento. Em algumas modalidades, o pelo menos um polipeptídeo é qualquer um dos domínios de ligação ao antígeno, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca de fagos, em que pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos cinco, pelo menos 10, pelo menos 25, pelo menos 50, pelo menos 100, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 750, pelo menos 1000, pelo menos 2500, pelo menos 5000, pelo menos 6000, pelo menos 6500, etc.) fago na biblioteca compreende pelo menos um polipeptídeo em sua superfície que compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo descritas no presente documento. Em algumas modalidades, o pelo menos um fago na biblioteca compreende pelo menos um polipeptídeo em sua superfície que compreende qualquer um dos domínios de ligação ao antígeno conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma biblioteca que compreende fagos, em que cada um dos fagos na biblioteca compreende pelo menos um polipeptídeo em sua superfície que compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo descritas no presente documento. Em algumas modalidades, o pelo menos um polipeptídeo é qualquer um dos domínios de ligação ao antígeno, conforme descrito no presente documento.
[058] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um animal não humano que compreende pelo menos um polinucleotídeo que codifica qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo descritas no presente documento (por exemplo, qualquer um dos polinucleotídeos ou bibliotecas de polinucleotídeos descritos no presente documento). Em algumas modalidades, o animal não humano compreende pelo menos um polinucleotídeo que codifica qualquer um dos anticorpos descritos no presente documento. Em algumas modalidades, o animal não humano é um mamífero (por exemplo, um camundongo, rato, coelho, camelo ou primata não humano).
[059] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de preparo de uma biblioteca que compreendem fornecer e montar qualquer uma das sequências de polinucleotídeos das bibliotecas, conforme descrito no presente documento.
[060] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de triagem para um polipeptídeo que se liga a um alvo, que compreende incubar qualquer uma das bibliotecas que compreendem polipeptídeos descritos no presente documento (por exemplo, uma biblioteca de domínios de ligação ao antígeno, uma biblioteca de anticorpos, uma biblioteca de fagos, etc.) com um alvo, e selecionar um ou mais polipeptídeos da biblioteca que se ligam ao alvo.
[061] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de fabricação de uma biblioteca de anticorpos que compreende as etapas de: (a) selecionar uma, duas ou três HVRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência que tem múltiplas conformações; e (b) montar sequências de polinucleotídeos para produzir uma biblioteca de polinucleotídeos sintéticos que codificam uma pluralidade de sequências de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo. Em algumas modalidades, pelo menos uma dentre a pluralidade de sequências de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo é qualquer uma das sequências de regiões variáveis de cadeia pesada descritas no presente documento. Em algumas modalidades, cada uma dentre a pluralidade de sequências de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo é qualquer uma das sequências de regiões variáveis de cadeia pesada descritas no presente documento.
[062] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de preparo de polipeptídeos (por exemplo, regiões variáveis de cadeia pesada, cadeias pesadas de anticorpo, anticorpos, polipeptídeos de arcabouço, etc.) que compreendem cultivar uma célula que compreende qualquer um dos polinucleotídeos, bibliotecas de polinucleotídeos, vetores e/ou bibliotecas de vetores, conforme descrito acima para produzir o polipeptídeo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é coletado a partir da célula cultivada, e é adicionalmente purificado.
[063] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de geração de um anticorpo biespecífico que compreende duas regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo e duas regiões variáveis de cadeia leve idênticas, que compreendem: (a) realizar a triagem para um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga a um primeiro antígeno, em que o primeiro domínio de ligação ao antígeno compreende uma primeira região variável de cadeia pesada de anticorpo e uma primeira região variável de cadeia leve de anticorpo, em que a primeira região variável de cadeia pesada de anticorpo compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada descritas no presente documento; (b) realizar a triagem para um segundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um segundo antígeno, em que o segundo domínio de ligação ao antígeno compreende uma segunda região variável de cadeia pesada de anticorpo e uma segunda região variável de cadeia leve de anticorpo, em que a segunda região variável de cadeia pesada de anticorpo tem a mesma sequência que a primeira região variável de cadeia pesada de anticorpo; e (c) produzir um anticorpo biespecífico que compreende o primeiro domínio de ligação ao antígeno e o segundo domínio de ligação ao antígeno.
[064] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento anticorpos biespecíficos que compreendem: (a) um primeiro domínio de ligação que compreende uma primeira região variável de cadeia pesada e uma primeira região variável de cadeia leve, em que o primeiro domínio de ligação se liga a um primeiro alvo; (b) um segundo domínio de ligação que compreende uma segunda região variável de cadeia pesada e uma segunda região variável de cadeia leve, em que o segundo domínio de ligação se liga a um segundo alvo, em que a segunda região variável de cadeia pesada tem uma sequência idêntica à primeira sequência de regiões variáveis de cadeia pesada; em que cada uma dentre a primeira e a segunda regiões variáveis de cadeia pesada compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada descritas no presente documento. Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos compreendem uma primeira cadeia leve e uma segunda cadeia leve, em que a primeira cadeia leve compreende a primeira região variável de cadeia leve e a segunda cadeia leve compreende a segunda região variável de cadeia leve, e tanto a primeira como a segunda cadeias leves compreendem, cada uma, um domínio CL kappa (por exemplo, um domínio CL kappa humano). Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos compreendem uma primeira cadeia leve e uma segunda cadeia leve, em que a primeira cadeia leve compreende a primeira região variável de cadeia leve e a segunda cadeia leve compreende a segunda região variável de cadeia leve, e tanto a primeira como a segunda cadeias leves compreendem, cada uma, um domínio CL lambda (por exemplo, um domínio CL lambda humano). Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos compreendem uma primeira cadeia leve e uma segunda cadeia leve, em que a primeira cadeia leve compreende a primeira região variável de cadeia leve e um domínio CL kappa (por exemplo, um domínio CL kappa humano), e a segunda cadeia leve compreende a segunda região variável de cadeia leve e um domínio CL lambda (por exemplo, um domínio CL lambda humano). Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos compreendem uma primeira cadeia leve e uma segunda cadeia leve, em que a primeira cadeia leve compreende a primeira região variável de cadeia leve e um domínio CL lambda (por exemplo, um domínio CL lambda humano), e a segunda cadeia leve compreende a segunda região variável de cadeia leve e um domínio CL kappa (por exemplo, um domínio CL kappa humano).
[065] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento kits que compreendem qualquer um dos polinucleotídeos, bibliotecas de polinucleotídeos, vetores e/ou bibliotecas de vetores (ou quaisquer células ou população de células que compreendem os mesmos) conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento kits que compreendem qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada, bibliotecas de regiões variáveis de cadeia pesada, domínios de ligação ao antígeno, bibliotecas de domínio de ligação ao antígeno, anticorpos, bibliotecas de anticorpos, polipeptídeos (por exemplo, polipeptídeos de arcabouço), bibliotecas de polipeptídeos, fagos e/ou bibliotecas de fagos, conforme descrito no presente documento.
[066] Deve-se compreender que uma, algumas ou todas as propriedades das várias modalidades descritas acima e no presente documento podem ser combinadas para formar outras modalidades da presente divulgação.
Estes e outros aspectos da presente divulgação se tornarão evidentes para uma pessoa versada na técnica. Estas e outras modalidades da presente divulgação são adicionalmente descritas pela descrição detalhada a seguir.
[067] A Figura 1A mostra uma plotagem de entropia por número de resíduos para os aminoácidos de um domínio VH. 113 estruturas VH de anticorpos humanos foram usadas para calcular a entropia.
[068] A Figura 1B mostra a definição das regiões hipervariáveis (HVRs) usadas no presente documento para uma sequência de domínio variável de cadeia pesada (VH) de anticorpo exemplificativo (SEQ ID NO:197) em comparação com a definição de Kabat das regiões determinantes de complementaridade (CDRs) para a mesma sequência VH.
[069] A Figura 2A mostra as medições de afinidade para fabs com ligação confirmada aos antígenos TAGT-1 a TAGT-12.
[070] A Figura 2B mostra as medições de temperatura de fusão (Tm) para fabs com ligação confirmada aos antígenos TAGT-1 a TAGT-12.
[071] A presente divulgação fornece bibliotecas contendo polinucleotídeos sintéticos (por exemplo, de ocorrência não natural) que codificam cadeias pesadas de anticorpo (por exemplo, cadeias pesadas de um anticorpo humano dinâmico). Vantajosamente, as cadeias pesadas de anticorpo reveladas no presente documento incluem sequências HVR projetadas para gerar alças altamente flexíveis para ligação de substrato mais eficaz e/ou especificidade contra múltiplos substratos de interesse. Estas sequências HVR permitem a criação de bibliotecas de anticorpos menores com cobertura de epítopo mais ampla do que as técnicas existentes. I. TÉCNICAS GERAIS
[072] As técnicas e procedimentos descritos ou referidos no presente documento são, de modo geral, bem entendidos e comumente empregados com o uso de metodologia convencional por aqueles versados na técnica, tal como, por exemplo, as metodologias amplamente utilizadas descritas em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3ª edição (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames e G.R. Taylor eds. (1995)); Harlow e Lane, eds.
(1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, edição (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, edição, 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E.
Cellis, edição, 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), edição, 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather e P.E.
Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, e D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley e Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir e C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller e M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The
Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley e Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway e P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., edição, IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P.
Shepherd e C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow e D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti e J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); e Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993).
[073] Antes de descrever a presente divulgação em detalhes, deve-se compreender que esta presente divulgação não se limita a composições particulares ou sistemas biológicos, que podem, certamente, variar. Deve-se entender também que a terminologia usada no presente documento tem o propósito de descrever apenas modalidades particulares e não se destina a ser limitante.
[074] Conforme usado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e “a” incluem referentes plurais a menos que o conteúdo indique claramente o contrário. Deste modo, por exemplo, a referência a “uma molécula” inclui opcionalmente uma combinação de duas mais tais moléculas e similares.
[075] O termo “cerca de”, conforme usado no presente documento, se refere à faixa de erro usual para o respectivo valor prontamente conhecido pelo versado na técnica neste campo técnico. A referência a “cerca de” um valor ou parâmetro no presente documento inclui (e descreve) modalidades que são direcionadas a este valor ou parâmetro por si.
[076] Deve ser entendido que os aspectos e as modalidades da presente divulgação descrita no presente documento incluem “que compreende", "que consiste" e "que consiste essencialmente em" aspectos e modalidades.
[077] O termo “anticorpo” é usado no presente documento no sentido mais amplo e cobre especificamente anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais), anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), e fragmentos de anticorpos (por exemplo, um fragmento variável de cadeia única ou scFv) desde que eles exibam a atividade biológica desejada.
[078] A unidade básica de anticorpos de 4 cadeias é uma glicoproteína heterotetramérica composta por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. O emparelhamento de VH e VL em conjunto forma um único sítio de ligação ao antígeno. Para a estrutura e propriedades das diferentes classes de anticorpos, consulte, por exemplo, Basic and Clinical Immunology, 8ª Edição, Daniel P. Stites, Abba I. Terr e Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, página 71 e Capítulo 6.
[079] A cadeia L de quaisquer espécies de vertebrados pode ser atribuída a um dos dois tipos claramente distintos, chamados de kappa (κ) e lambda (λ), com base nas sequências de aminoácidos de seus domínios constantes. Dependendo da sequência de aminoácidos do domínio constante de suas cadeias pesadas (CH), imunoglobulinas podem ser atribuídas a diferentes classes ou isotipos. Há cinco classes de imunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, tendo cadeias pesadas designadas alfa (“α”), delta (“δ”), épsilon (“ε”), gama (“γ”) e mu (“μ”), respectivamente. As classes γ e α são adicionalmente divididas em subclasses (isotipos) com base nas diferenças relativamente pequenas na sequência e função CH, por exemplo, seres humanos expressam as seguintes subclasses: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. As estruturas de subunidade e configurações tridimensionais de diferentes classes de imunoglobulinas são bem conhecidas e geralmente descritas, por exemplo, em Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4ª edição (W.B. Saunders Co., 2000).
[080] A “região variável” ou “domínio variável” de um anticorpo se refere aos domínios aminoterminais da cadeia pesada ou leve do anticorpo. O domínio variável da cadeia pesada pode ser chamado de “VH”. O domínio variável da cadeia leve pode ser chamado de “VL”. Estes domínios são geralmente as partes mais variáveis de um anticorpo e contêm os sítios de ligação ao antígeno.
[081] O termo “numeração de domínio variável como em Kabat” ou “numeração de posição de aminoácido como em Kabat”, e variações dos mesmos, se refere ao sistema de numeração usado para domínios variáveis de cadeia pesada ou domínios variáveis de cadeia leve da compilação de anticorpos em Kabat et al., supra. Com o uso deste sistema de numeração, a sequência de aminoácidos linear real pode conter menos ou mais aminoácidos que correspondem a um encurtamento ou inserção numa FR ou HVR do domínio variável. Por exemplo, uma cadeia pesada domínio variável pode incluir uma única inserção de aminoácido (resíduo 52a de acordo com Kabat) após o resíduo 52 de H2 e resíduos inseridos (por exemplo, resíduos 82a, 82b e 82c, etc., de acordo com Kabat) após o resíduo 82 de FR de cadeia pesada. A numeração de Kabat de resíduos pode ser determinada para um determinado anticorpo por alinhamento nas regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência numerada Kabat “padrão”.
[082] O sistema de numeração de Kabat é geralmente usado ao se referir a um resíduo no domínio variável (aproximadamente os resíduos 1 a 107 da cadeia leve e os resíduos 1 a 113 da cadeia pesada) (por exemplo, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5ª Edição, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). O “sistema de numeração EU” ou “índice EU” é geralmente usado ao se referir a um resíduo numa região constante de cadeia pesada de imunoglobulina (por exemplo, o índice EU relatado em Kabat et al., supra). O “índice EU como em Kabat” refere-se à numeração de resíduo do anticorpo IgG1 EU humano.
[083] O termo “domínio constante ” se refere à porção de uma molécula de imunoglobulina que tem uma sequência de aminoácidos mais conservada em relação à outra porção da imunoglobulina, o domínio variável, que contém o sítio de ligação ao antígeno. O domínio constante contém os domínios CH1, CH2 e CH3 (coletivamente, CH) da cadeia pesada e o domínio CHL (ou CL) da cadeia leve.
[084] O termo “anticorpo de comprimento total” (os termos anticorpo “intacto” ou anticorpo “inteiro” pode ser usado de modo intercambiável no presente documento) pode se referir a um anticorpo em sua forma substancialmente intacta, em oposição a um fragmento de anticorpo. De modo similar, o termo “cadeia pesada de anticorpo de comprimento total” (os termos cadeia pesada de anticorpo “intacto” ou cadeia pesada de anticorpo “inteiro” pode ser usado de modo intercambiável no presente documento) pode se referir a uma cadeia pesada de anticorpo em sua forma substancialmente intacta, em oposição a um fragmento de cadeia pesada de anticorpo. Especificamente, os anticorpos inteiros incluem aqueles com cadeias pesada e leve incluindo uma região Fc. Os domínios constantes podem ser domínios constantes de sequência nativa (por exemplo, domínios constantes de sequência nativa humanos) ou variantes de sequência de aminoácidos dos mesmos. Em alguns casos, o anticorpo intacto pode ter uma ou mais funções efetoras.
[085] O termo “anticorpo monoclonal”, conforme usado no presente documento se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos, exceto pelas possíveis mutações de ocorrência natural e/ou modificações pós-traducionais (por exemplo, isomerizações, amidações) que podem estar presentes em menores quantidades. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo diretamente contra a um sítio antigênico único. Ao contrário de preparações de anticorpo policlonal que incluem tipicamente diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante no antígeno. O modificador “monoclonal” indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, e não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo por nenhum método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem usados de acordo com a presente divulgação podem ser produzidos por uma variedade de técnicas, incluindo, por exemplo, o método de hibridoma (por exemplo, Kohler e Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3):253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2ª edição 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), métodos de ADN recombinante (consulte, por exemplo, a patente nº U.S. 4.816.567), tecnologias de exibição de fago (consulte, por exemplo, Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol.
222:581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 101(34):12467-472 (2004); e Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004), e tecnologias para produzir anticorpos humanos ou anticorpos semelhantes a humanos em animais que têm partes ou todos os loci ou genes de imunoglobulina humana que codificam sequências de imunoglobulina humana (consulte, por exemplo, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993); U.S. Patent Nos. 5.545.807; 5.545.806;
5.569.825; 5.625.126; 5.633.425; e 5.661.016; Marks et al., Bio/Technology
10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14:845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14:826 (1996); e Lonberg e Huszar, Intern. Rev.
Immunol. 13:65-93 (1995).
[086] Conforme usado no presente documento, “região hipervariável (HVR)” se refere às regiões de um domínio de anticorpo que são hipervariáveis em sequência e/ou formam alças estruturalmente definidas. De modo geral, os anticorpos compreendem seis HVRs; três no VH (H1, H2, H3) e três no VL (L1, L2, L3). Consulte, por exemplo, Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson e Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, edição, Human Press, Totowa, N.J., 2003). Cada VH e VL é composta por três CDRs e quatro regiões de framework (FW) dispostas a partir do terminal amino ao terminal carbóxi na seguinte ordem: FW1-HVR1-FW2-HVR2-FW3-HVR3-FW4.
Ao longo da presente divulgação, as três HVRs da cadeia pesada são chamadas de HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3. Ao longo da presente divulgação, as quatro regiões de framework da cadeia pesada são chamadas de FW-H1, FW-H2, FW- H3 e FW-H4. Para comparação, a definição das HVRs (conforme usado no presente documento) é contrastada com a definição de Kabat das regiões determinantes de complementaridade (CDRs) (Yvonne Chen et al. (1999) “Selection and Analysis of an Optimized Anti-VEGF Antibody: Crystal Structure of an Affinity-matured Fab in Complex with Antigen”, J. Mol. Biol. 293, 865-881) para o domínio variável de cadeia pesada de anticorpo exemplificativo mostrado na Figura 1B.
[087] Conforme usado no presente documento, “biblioteca” se refere a um conjunto de duas ou mais entidades que têm uma classe compartilhada. Por exemplo, uma biblioteca contendo polinucleotídeos pode se referir a um conjunto de dois ou mais polinucleotídeos. O termo “biblioteca” é usado no presente documento no sentido mais amplo e cobre especificamente sub-bibliotecas que podem ser combinadas ou não.
[088] Conforme usado no presente documento, “exclusivo” se refere a um membro de um conjunto que é diferente de outros membros do conjunto. Por exemplo, um anticorpo exclusivo de uma biblioteca que codifica uma pluralidade de polinucleotídeos que codificam anticorpos pode se referir a um anticorpo que tem uma sequência particular não compartilhada por outros anticorpos codificados pela biblioteca. Por uma questão prática, deve-se compreender que um membro “exclusivo” de uma realização física de uma biblioteca pode estar presente em mais de uma cópia. Por exemplo, uma biblioteca pode conter uma pluralidade de anticorpos “exclusivos”, com uma ou mais das moléculas de anticorpo “exclusivas” ocorrendo em mais de uma cópia.
[089] Conforme usado no presente documento, “diversidade” se refere a uma variedade e/ou heterogeneidade. Por exemplo, uma diversidade de anticorpos numa biblioteca pode se referir a uma variedade de anticorpos com sequências exclusivas presentes na biblioteca.
[090] Os termos “polipeptídeo”, “proteína” e “peptídeo” são usados de modo intercambiável no presente documento e podem se referir a polímeros de dois ou mais aminoácidos.
[091] “Polinucleotídeo” ou “ácido nucleico”, conforme usado de modo intercambiável no presente documento, se refere a polímeros de nucleotídeos de qualquer comprimento, e incluem ADN e ARN. Os nucleotídeos podem ser desoxirribonucleotídeos, ribonucleotídeos, nucleotídeos ou bases modificados e/ou seus análogos, ou qualquer substrato que possa ser incorporado num polímero por ADN ou ARN polimerase ou por uma reação sintética. Um polinucleotídeo pode compreender nucleotídeos modificados, tais como nucleotídeos metilados e seus análogos. Se presente, a modificação para a estrutura de nucleotídeo pode ser conferida antes ou após a montagem do polímero. A sequência de nucleotídeos pode ser interrompida por componentes não nucleotídeos. Um polinucleotídeo pode compreender modificação (ou modificações) feitas após a síntese, tal como conjugação a uma identificação.
Outros tipos de modificações incluem, por exemplo, “caps”, substituição de um mais dos nucleotídeos de ocorrência natural por modificações de internucleotídeos análogas, tais como, por exemplo, aquelas com ligações não carregadas (por exemplo, fosfonatos de metila, fosfotriésteres, fosfoamidatos, carbamatos, etc.) e com ligações carregadas (por exemplo, fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.), aquelas contendo porções químicas pendentes, tais como, por exemplo, proteínas (por exemplo, nucleases, toxinas, anticorpos, peptídeos de sinalização, poli-L-lisina, etc.), aquelas com intercaladores (por exemplo, acridina, psoraleno, etc.), aquelas contendo quelantes (por exemplo, metais, metais radioativos, boro, metais oxidantes, etc.), aquelas contendo aquilantes, aquelas com ligações modificadas (por exemplo, ácidos nucleicos alfa anoméricos, etc.), assim como formas não modificadas dos polinucleotídeos.
Ademais, qualquer um dos grupos hidroxila comumente presente nos açúcares pode ser substituído, por exemplo, por grupos fosfonato, grupos fosfato, protegido por grupos protetores padrão ou ativados para preparar ligações adicionais a nucleotídeos adicionais, ou pode ser conjugado com suportes sólidos ou semissólidos. O OH terminal 5’ e 3’ pode ser fosforilado ou substituído por aminas ou porções químicas de grupo de capping orgânico de 1 a 20 átomos de carbono. Outras hidroxilas também podem ser derivatizadas para grupos protetores padrão. Polinucleotídeos também podem conter formas análogas de açúcares de ribose ou desoxirribose que são geralmente conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, 2’-O-metil-, 2’-O-alil-, 2’-fluoro- ou 2’-azido-ribose, análogos de açúcar carboxílico, açucares α-anoméricos, açúcares epiméricos, tais como arabinose, xiloses ou lixoses, açúcares de piranose, açúcares de furanose, sedo-heptuloses, análogos acíclicos e análogos de nucleosídeo básicos, tal como metil ribosídeo. Uma ou mais ligações de fosfodiéster podem ser substituídas por grupos de ligação alternativos. Estes grupos de ligação alternativos incluem, porém sem limitação, modalidades em que o fosfato é substituído por P(O)S (“tioato”), P(S)S (“ditioato”), (O)NR2 (“amidato”), P(O)R, P(O)OR’, CO, ou CH2 (“formacetal”), em que cada R ou R’ é independentemente H ou alquila substituída ou não substituída (1-20 C) contendo opcionalmente uma ligação de éter (-O-), arila, alquenila, cicloalquila, cicloalquenila ou araldila. Nem todas as ligações num polinucleotídeo precisam ser idênticas. A descrição anterior se aplica a todos os polinucleotídeos mencionados no presente documento, incluindo ARN e ADN.
[092] Uma célula (por exemplo, uma célula ou população de células que compreende um polinucleotídeo sintético ou biblioteca de polinucleotídeos sintéticos) inclui uma célula individual ou a cultura celular pode ser ou ter sido um receptor para o vetor (ou vetores) para incorporação em insertos de polinucleotídeo. As células hospedeiras incluem a progênie de uma célula hospedeira única, e a progênie pode não ser necessariamente idêntica por completo (em morfologia ou em complemento de DNA genômico) à célula progenitora original devido a mutação natural, acidental ou deliberada. Uma célula hospedeira inclui células transfectadas in vivo com um polinucleotídeo (ou polinucleotídeos) (por exemplo, um polinucleotídeo sintético que codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo da presente divulgação).
[093] Um “animal não humano” se refere a qualquer animal não classificado como um ser humano, tais como animais domésticos, de fazenda ou de zoológico, esportes, animais de estimação (tais como como cães, cavalos, gatos, vacas etc.), assim como animais usados em pesquisas. Animais de pesquisa podem se referir sem limitação a nematódeos, artrópodes, vertebrados, mamíferos, sapos, roedores (por exemplo, camundongos ou ratos), peixe (por exemplo, peixe-zebra ou baiacu), pássaros (por exemplo, galinhas), cães, gatos e primatas não humanos (por exemplo, macacos rhesus, macacos cinomolgos,
chimpanzés, etc.). Em modalidades preferidas, o animal é aquele que produz anticorpos.
[094] Determinados aspectos da presente divulgação se referem a bibliotecas de polinucleotídeos, por exemplo, que codificam uma região variável de cadeia pesada (VH) ou região variável de cadeia leve (VL) de anticorpo. Uma biblioteca da presente divulgação pode conter um ou mais polinucleotídeos que codificam uma região variável de cadeia pesada que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 e HVR-H2 são qualquer uma dentre as HVRs-H1 e/ou HVRs-H2 descritas no presente documento.
[095] Em algumas modalidades, uma biblioteca da presente divulgação contém um número menor de sequências HVR de cadeia pesada exclusivas e/ou sequências VH exclusivas que as bibliotecas de anticorpo típicas.
Vantajosamente, tais bibliotecas podem fornecer diversidade suficiente para a identificação de anticorpos que se ligam a um ou mais dentre vários antígenos de interesse enquanto também permitem a triagem mais eficiente devido ao tamanho de biblioteca reduzido. Em algumas modalidades, uma biblioteca da presente divulgação inclui ou consiste em polinucleotídeos contendo menos que cerca de 10000, menos que cerca de 9000, menos que cerca de 8000 ou menos que cerca de 7000 combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2.
Em determinadas modalidades, uma biblioteca da presente divulgação inclui ou consiste em polinucleotídeos contendo cerca de 6600 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2.
[096] Em algumas modalidades, uma biblioteca contém uma pluralidade de polinucleotídeos, com pelo menos um dos polinucleotídeos codificando uma região variável de cadeia pesada de anticorpo da presente divulgação (por exemplo, que compreende uma HVR-H1 e uma HVR-H2 da presente divulgação).
[097] Em algumas modalidades, um ou mais dos polinucleotídeos codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I) X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W(SEQ ID NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e (Fórmula III) FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T(SEQ ID NO:200). Em algumas modalidades, um ou mais dos polinucleotídeos codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T(SEQ ID NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y(SEQ ID NO:202); (Fórmula VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:203); (Fórmula VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T(SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N(SEQ ID NO:205); (Fórmula IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N(SEQ ID NO:206); e (Fórmula X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S(SEQ ID NO:207). Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI)
IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que
X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:209); e
(Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S(SEQ ID NO:210). Em algumas modalidades, um ou mais dos polinucleotídeos codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma
HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I)
X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W(SEQ ID NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199);
e (Fórmula III) FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é
A, G, S, ou T(SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em
(Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T(SEQ ID
NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S,
ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y(SEQ ID NO:202); (Fórmula VI)
IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y,
X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:203); (Fórmula VII)
VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D,
S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T(SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII)
IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é
D, G, ou S e X4 é K ou N(SEQ ID NO:205); (Fórmula IX)
IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N(SEQ ID NO:206); e (Fórmula X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S(SEQ ID NO:207). Em algumas modalidades, um ou mais dos polinucleotídeos codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I) X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W(SEQ ID NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e (Fórmula III) FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T(SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S(SEQ ID NO:210). Em algumas modalidades, um ou mais polinucleotídeos da biblioteca se situam num vetor (por exemplo, um vetor de expressão ou vetor de exibição).
[098] Em algumas modalidades, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 55, pelo menos 60, pelo menos 65, pelo menos 70, pelo menos 75, pelo menos 80, pelo menos 85, pelo menos 90, pelo menos 95, pelo menos 100, pelo menos
110, pelo menos 120, pelo menos 130, pelo menos 140, pelo menos 150, pelo menos 160, pelo menos 170, pelo menos 180, pelo menos 190, pelo menos 200,
pelo menos 225, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 1250, pelo menos 1500, pelo menos 1750, pelo menos 2000, pelo menos
2250, pelo menos 2500, pelo menos 2750, pelo menos 3000, pelo menos 3250,
pelo menos 3500, pelo menos 3750, pelo menos 4000, pelo menos 4250, pelo menos 4500, pelo menos 4750, pelo menos 5000, pelo menos 5250, pelo menos
5500, pelo menos 5750, pelo menos 6000, pelo menos 6250, ou pelo menos
6500 dos polinucleotídeos codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I) X1TFX2X3YX4IHWV,
em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W(SEQ ID
NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y,
X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e (Fórmula III)
FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou
T(SEQ ID NO:200); e/ou uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em
(Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T(SEQ ID
NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S,
ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y(SEQ ID NO:202); (Fórmula VI)
IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y,
X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:203); (Fórmula VII)
VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D,
S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T(SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII)
IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é
D, G, ou S e X4 é K ou N(SEQ ID NO:205); (Fórmula IX)
IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N(SEQ ID NO:206); e (Fórmula X)
VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S(SEQ ID NO:207); e/ou menos que cerca de 6,5*104 (por exemplo, menos que cerca de 6,5*104, menos que cerca de 5,5*104, menos que cerca de 2,5*104, menos que cerca de 1*104,
menos que cerca de 6700, menos que cerca de 6660, menos que cerca de 5000,
menos que cerca de 2500, menos que cerca de 1000, menos que cerca de 690,
menos que cerca de 500, menos que cerca de 100, menos que cerca de 50, etc.), menos que ou igual a 62272, menos que ou igual a 60928, menos que ou igual a 54656, ou menos que ou igual a 6660 dos polinucleotídeos codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende HVR-H1, HVR-
H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos,
de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I)
X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W(SEQ ID NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199);
e (Fórmula III) FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é
A, G, S, ou T(SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em
(Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T(SEQ ID
NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S,
ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y(SEQ ID NO:202); (Fórmula VI)
IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y,
X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:203); (Fórmula VII)
VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D,
S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T(SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII)
IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N(SEQ ID NO:205); (Fórmula IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N(SEQ ID NO:206); e (Fórmula X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S(SEQ ID NO:207). Em algumas modalidades, um ou mais polinucleotídeos da biblioteca se situam num vetor (por exemplo, um vetor de expressão ou vetor de exibição).
[099] Em algumas modalidades, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 55, pelo menos 60, pelo menos 65, pelo menos 70, pelo menos 75, pelo menos 80, pelo menos 85, pelo menos 90, pelo menos 95, pelo menos 100, pelo menos 110, pelo menos 120, pelo menos 130, pelo menos 140, pelo menos 150, pelo menos 160, pelo menos 170, pelo menos 180, pelo menos 190, pelo menos 200, pelo menos 225, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 1250, pelo menos 1500, pelo menos 1750, pelo menos 2000, pelo menos 2250, pelo menos 2500, pelo menos 2750, pelo menos 3000, pelo menos 3250, pelo menos 3500, pelo menos 3750, pelo menos 4000, pelo menos 4250, pelo menos 4500, pelo menos 4750, pelo menos 5000, pelo menos 5250, pelo menos 5500, pelo menos 5750, pelo menos 6000, pelo menos 6250, ou pelo menos 6500 dos polinucleotídeos codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I) X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W(SEQ ID NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y,
X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e (Fórmula III)
FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou
T(SEQ ID NO:200); e/ou uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em
(Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XI)
IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII)
VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S(SEQ ID NO:210); e/ou menos que cerca de 6,5*104 (por exemplo, menos que cerca de 6,5*104, menos que cerca de
5,5*104, menos que cerca de 2,5*104, menos que cerca de 1*104, menos que cerca de 6700, menos que cerca de 6660, menos que cerca de 5000, menos que cerca de 2500, menos que cerca de 1000, menos que cerca de 690, menos que cerca de 500, menos que cerca de 100, menos que cerca de 50, etc.), menos que ou igual a 62272, menos que ou igual a 60928, menos que ou igual a 54656,
ou menos que ou igual a 6660 dos polinucleotídeos codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende HVR-H1, HVR-H2 e
HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I)
X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W(SEQ ID NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199);
e (Fórmula III) FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é
A, G, S, ou T(SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em
(Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XI)
IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S(SEQ ID NO:210). Em algumas modalidades, um ou mais polinucleotídeos da biblioteca se situam num vetor (por exemplo, um vetor de expressão ou vetor de exibição).
[100] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T(SEQ ID NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y(SEQ ID NO:202); (Fórmula VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:203); (Fórmula VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T(SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N(SEQ ID NO:205); (Fórmula IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N(SEQ ID NO:206); e (Fórmula X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S(SEQ ID NO:207).
[101] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S(SEQ ID NO:210).
[102] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:19); e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T(SEQ ID NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y(SEQ ID NO:202); (Fórmula VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:203); (Fórmula VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T(SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N(SEQ ID NO:205); (Fórmula IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N(SEQ ID NO:206); e (Fórmula X)
VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S(SEQ ID NO:207).
[103] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S(SEQ ID NO:210).
[104] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T(SEQ ID NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y(SEQ ID NO:202); (Fórmula VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:203); (Fórmula VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T(SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII)
IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N(SEQ ID NO:205); (Fórmula IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N(SEQ ID NO:206); e (Fórmula X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S(SEQ ID NO:207).
[105] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos na biblioteca codificam uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y(SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S(SEQ ID NO:210).
[106] Em algumas modalidades, a biblioteca de polinucleotídeos codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e 137-158. Em algumas modalidades, a biblioteca de polinucleotídeos codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52.
[107] Em algumas modalidades, a biblioteca de polinucleotídeos codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a biblioteca de polinucleotídeos codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136.
[108] Em algumas modalidades, a biblioteca de polinucleotídeos codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), ou a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (X), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, a biblioteca de polinucleotídeos codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 1-52, ou em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 53-136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 e 51, ou em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 e 134. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 e 48, ou em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 e 136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 6, 10, 17, 29, 36 e 52, ou em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 e 133.
[109] Em algumas modalidades, a biblioteca de polinucleotídeos codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H3 é qualquer HVR-H3 conhecida na técnica. Em algumas modalidades, a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256.
[110] As sequências HVR de cadeia pesada descritas no presente documento podem ser incluídas em qualquer combinação numa biblioteca da presente divulgação. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e 137- 158, e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52, e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e 137-158, e uma
HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID
NOS:1-52, e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164 e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID
NOs: 223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e 137-
158, uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164, e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52, uma
HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136, e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:
223-256.
[111] Em determinadas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende três dentre uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR- H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); e uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII). Em algumas modalidades, uma HVR-H1 e uma HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XI); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XI). Em algumas modalidades, a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X). Em algumas modalidades, a HVR- H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII).
[112] Em determinadas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende três dentre uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR- H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:157, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:138, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:154, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:161; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:145, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:128; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:22, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:153, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:155, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:156, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:51, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:138, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:123; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:126; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:129; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:124; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:130; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:150, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:132; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:12,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:149,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:117; e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:7, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:134. Em algumas modalidades, a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:151, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:29, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:152, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:156, e uma HVR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:157, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:94; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:48, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:163; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:160;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:92;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:93;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:97;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:103; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:164; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:137, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:54; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:3, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:127; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:85; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:4, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:109; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:140, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:131; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:141, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:142, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:159; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:143, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:144, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:147, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:133; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:148, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[113] Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende três dentre uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são listadas na Tabela 1. Em algumas modalidades, a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 e 195, ou uma sequência que tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% de identidade de sequência com uma sequência selecionada dentre as SEQ ID NOS: 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 e 195.
[114] Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende ainda sequências de framework de cadeia pesada de região variável justapostas entre as HVRs de acordo com a fórmula: (FW-H1)- (HVR-H1)-(FW-H2)-(HVR-H2)-(FW-H3)-(HVR-H3)-(FW-H4). Em algumas modalidades, uma, duas, três ou quatro das sequências de framework são as seguintes: FW-H1 é EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG (SEQ ID NO:165) FW-H2 é RQAPGKGLEW (SEQ ID NO:166) FW-H3 é TISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC (SEQ ID NO:167) FW-H4 é WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:168).
[115] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência FW-H3 alternativa com uma mutação de arginina para lisina em R19 da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, uma, duas, três ou quatro das sequências de framework são um FW-H1 da SEQ ID NO:165, um FW-H2 da SEQ ID NO:166, um FW-H3 ou SEQ ID NO:167 com uma mutação de arginina para lisina em R19, e um FW-H4 da SEQ ID NO:168.
[116] Em algumas modalidades, uma biblioteca contém uma pluralidade de polinucleotídeos, com pelo menos um dos polinucleotídeos codificando uma região variável de cadeia leve de anticorpo (por exemplo, que compreende uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3). Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve de anticorpo compreende uma HVR-L1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve de anticorpo compreende uma HVR-L3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve de anticorpo compreende uma HVR-L1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264, e uma HVR-L3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274. Em algumas modalidades, uma biblioteca contém uma pluralidade de polinucleotídeos que codificam pelo menos uma,
pelo menos 50, pelo menos 100, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 103, pelo menos 104, pelo menos 105, pelo menos 106, pelo menos 107, pelo menos 108, pelo menos 109, pelo menos 1010, pelo menos 1011, ou pelo menos 1012 sequências exclusivas de regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo. Em algumas modalidades, uma biblioteca contém uma pluralidade de polinucleotídeos que codificam pelo menos 103 sequências exclusivas de regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo. Em algumas modalidades, uma biblioteca contém uma pluralidade de polinucleotídeos que codificam pelo menos 105 sequências exclusivas de regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo. Em algumas modalidades, uma biblioteca contém uma pluralidade de polinucleotídeos que codificam pelo menos 109 sequências exclusivas de regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo. Em outras modalidades, uma biblioteca contém um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia leve de anticorpo. Em algumas modalidades, uma biblioteca contém uma pluralidade de polinucleotídeos que codifica de 1 a cerca de 103 sequências exclusivas de regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve de anticorpo é qualquer uma das regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo encontradas no pedido (ou pedidos) de patente deposito sob o número do dossiê do advogado 69540-3000100, 69540-2000140 e/ou 69540-2000100 (cujas divulgações são, cada uma, incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade). Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve de anticorpo compreende qualquer uma das sequências HVR-L1, HVR-L2 e/ou HVR-L3 encontradas no pedido (ou pedidos) de patente depositado sob o número do dossiê do advogado 69540- 3000100, 69540-2000140 e/ou 69540-2000100 (cujas divulgações são, cada uma, incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade).
[117] Em algumas modalidades, um ou mais dos polinucleotídeos de uma biblioteca codificam cadeia (ou cadeias) pesada de anticorpo de comprimento total. Em outras modalidades, um ou mais dos polinucleotídeos de uma biblioteca codificam fragmento (ou fragmentos) Fab de cadeia pesada. Em algumas modalidades, um ou mais dos polinucleotídeos de uma biblioteca codificam fragmento (ou fragmentos) variável de cadeia única.
[118] Em algumas modalidades, uma biblioteca contém uma pluralidade de polinucleotídeos que codificam uma pluralidade de anticorpos exclusivos. Em algumas modalidades, cada anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada de cada anticorpo dentre a pluralidade compreende uma sequência idêntica e compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3. Em algumas modalidades, pelo menos uma ou pelo menos duas dentre a HVR-H1 e a HVR-H2 compreendem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de uma sequência HVR-H1 da presente divulgação (por exemplo, X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e SEQ ID NOS:1-52 e 137-158), e uma sequência HVR-H2 da presente divulgação (por exemplo, LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ ID NO:201); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y(SEQ ID NO:202); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203); VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204); IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é
D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205); IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO:206); VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209); e VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S (SEQ ID NO:210); e SEQ ID NOS:53-136 e 159-164). As sequências HVR de cadeia pesada descritas no presente documento podem ser incluídas em qualquer combinação numa biblioteca da presente divulgação que também inclui polinucleotídeos que codificam uma ou mais regiões variáveis de cadeia leve.
[119] Em algumas modalidades, uma biblioteca da presente divulgação inclui um ou mais vetores que codificam um ou mais polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) da presente divulgação.
[120] Ademais, é fornecido no presente documento um método de preparo de uma biblioteca, por exemplo, ao fornecer e montar as sequências de polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeo (ou polinucleotídeos) sintético) de uma biblioteca da presente divulgação. Ademais, é fornecido no presente documento um método de produção de uma biblioteca, por exemplo, ao selecionar uma, duas ou três HVRs de cadeia pesada (por exemplo, uma ou duas HVRs de cadeia pesada da presente divulgação) que compreendem uma sequência que tem múltiplas conformações e montar sequências de polinucleotídeo para produzir uma biblioteca de polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos) que codificam uma pluralidade de sequências de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo. Em algumas modalidades, as sequências de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo são sequências de anticorpos humanos.
Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada de anticorpo compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3,
e a HVR-H1 e/ou HVR-H2 compreendem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de uma sequência HVR-H1 da presente divulgação (por exemplo, X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N,
ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é
S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199);
e FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e SEQ ID NOS:1-52 e 137-158), e uma sequência HVR-H2 da presente divulgação (por exemplo, LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ ID NO:201); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é
A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:202);
IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y,
X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203);
VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D,
S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204);
IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é
D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205);
IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO:206);
VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207);
IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou
S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209); e
VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S (SEQ ID NO:210); e SEQ ID NOS:53-136 e 159-164).
[121] Em algumas modalidades, pelo menos uma dentre a HVR- H1, HVR-H2 e HVR-H3 da região variável de cadeia pesada de anticorpo adota múltiplas conformações. Em algumas modalidades, as múltiplas conformações podem ser analisadas ou detectadas com o uso de técnicas conhecidas na técnica, incluindo, sem limitação, determinação estrutural (por exemplo, cristalografia de raios X ou RMN) e/ou modelagem computacional.
[122] Os polinucleotídeos que codificam um conjunto de regiões variáveis de cadeia leve e/ou pesada de anticorpo podem ser clonados em qualquer vetor adequado para expressão de uma porção ou todas as sequências de cadeia leve ou pesada. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo clonado num vetor permite a produção de uma porção ou toda a sequência de cadeia leve ou pesada fundida em toda ou uma porção de uma proteína de revestimento viral (isto é, criando uma proteína de fusão) e exibida na superfície de uma partícula ou célula. Diversos tipos de vetores estão disponíveis e podem ser usados para praticar a presente divulgação, por exemplo, vetores de fagomídeo.
Os vetores de fagomídeo contêm geralmente uma variedade de componentes incluindo promotores, sequências de sinal, genes de seleção fenotípicos, origem de sítios de replicação e outros componentes necessários que são conhecidos por aqueles de habilidade comum na técnica. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos que codificam um conjunto de regiões variáveis de cadeia leve e/ou pesada de anticorpo podem ser clonados em vetores para expressão em células bacterianas para exibição bacteriana ou em células de levedura para exibição de levedura. Os vetores exemplificativos são descritos na Publicação PG US nº US20160145604. Em algumas modalidades, o vetor é um vetor de exibição que compreende, de 5’ a 3’, um polinucleotídeo que codifica uma sequência de aminoácidos a ser exibida numa superfície (por exemplo, uma superfície do fago, bactérias, leveduras ou células de mamíferos), um sítio de restrição, um segundo polinucleotídeo que codifica um peptídeo de superfície capaz de ser exibido na superfície, e um segundo sítio de restrição. Em algumas modalidades, o segundo polinucleotídeo codifica uma proteína de revestimento de fago, uma proteína de parede externa de levedura, uma proteína de membrana externa bacteriana, um domínio de ancoragem de superfície celular, ou um adaptador, ou um truncamento ou derivado do mesmo. Em certas modalidades, o segundo polinucleotídeo é o gene III do fago filamentoso M13, ou um truncamento ou derivado do mesmo. Em algumas modalidades, o peptídeo de superfície serve para exibição de fago, exibição de levedura, exibição bacteriana ou exibição de mamífero, ou exibição de vaivém entre as mesmas. Em algumas modalidades, quando expressa, a sequência de aminoácidos e o peptídeo de superfície são exibidos como uma proteína de fusão na superfície. Em algumas modalidades, o vetor compreende ainda uma etiqueta de fusão 5’ para o primeiro sítio de restrição ou 3’ para o segundo sítio de restrição.
[123] Certos aspectos da presente divulgação se referem a uma população de células contendo o vetor (ou vetores) descrito no presente documento. As cadeias leve e/ou pesada de anticorpo codificadas por polinucleotídeos gerados por qualquer uma das técnicas descritas no presente documento, ou outras técnicas adequadas, podem ser expressas e analisadas para identificar tendo estrutura e/ou atividade desejadas. A expressão dos anticorpos pode ser realizada, por exemplo, com o uso de extratos livres de célula (por exemplo, exibição de ribossoma), exibição de fago, células procarióticas (por exemplo, exibição bacteriana) ou células eucarióticas (por exemplo, exibição de levedura). Em algumas modalidades, as células são células bacterianas, células de levedura ou células de mamífero. Métodos para transfectar células bacterianas, células de levedura ou células de mamífero são conhecidos na técnica e descritos nas referências citadas no presente documento. A expressão (por exemplo, a partir de uma biblioteca da presente divulgação) de polipeptídeos (por exemplo, cadeias de anticorpos) nestes tipos de célula, assim como a triagem de anticorpos de interesse, são descritas em mais detalhes abaixo.
[124] Alternativamente, os polinucleotídeos podem ser expressos num sistema de expressão de E. coli, tal como aquele descrito por Pluckthun e Skerra. (Meth. Enzymol., 1989, 178: 476; Biotechnology, 1991, 9: 273). As proteínas mutantes podem ser expressas para secreção no meio e/ou no citoplasma da bactéria, conforme descrito por Better e Horwitz, Meth. Enzymol., 1989, 178: 476. Em algumas modalidades, os domínios únicos que codificam VH e VL são, cada um, ligados à extremidade 3′ de uma sequência que codifica uma sequência de sinalização, tal como a sequência de sinalização ompA, phoA ou pelB (Lei et al., J. Bacteriol., 1987, 169: 4379). Estas fusões de genes são montadas num construto dicistrônico, de modo que elas possam ser expressas a partir de um único vetor e selecionadas no espaço periplásmico de E. coli em que elas irão se reenovelar e podem ser recuperadas na forma ativa. (Skerra et al., Biotechnology, 1991, 9: 273). Por exemplo, os genes de cadeia pesada de anticorpo podem ser simultaneamente expressos com genes de cadeia leve de anticorpo para produzir anticorpos ou fragmentos de anticorpos.
[125] Em outras modalidades, as sequências de anticorpos são expressas na superfície de membrana de um procariota, por exemplo, E. coli, com o uso de um sinal de secreção e porção química de lipidação, conforme descrito, por exemplo, nos documentos US20040072740; US20030100023; e US20030036092.
[126] Alternativamente, os anticorpos podem ser expressos e analisados por expressão periplásmica ancorada (exibição de superfície híbrida APEx 2), conforme descrito, por exemplo, em Jeong et al., PNAS, 2007, 104:
8247 ou por outros métodos de ancoragem, conforme descrito, por exemplo, em Mazor et al., Nature Biotechnology, 2007, 25: 563.
[127] Células eucarióticas mais altas, tais como células de mamíferos, por exemplo, células de mieloma (por exemplo, células NS/0), células de hibridoma, células de ovário de hamster chinês (CHO), e células de rim embrionárias humanas (HEK), também podem ser usadas para expressão dos anticorpos da presente divulgação. Tipicamente, os anticorpos expressos em células de mamíferos são projetados para serem secretados no meio de cultura, ou expressos na superfície da célula. O anticorpo ou fragmentos de anticorpo podem ser produzidos, por exemplo, como moléculas de anticorpo intactas ou como fragmentos VH e VL individuais, fragmentos Fab, domínios únicos, ou como cadeias únicas (scFv).
[128] Em outras modalidades, os anticorpos podem ser selecionados com o uso de exibição de células de mamíferos (Ho et al., PNAS, 2006, 103: 9637). Em algumas modalidades, conforme descrito acima e exemplificado abaixo, anticorpos podem ser selecionados após a produção de uma porção ou toda a sequência de cadeia leve ou pesada fundida a toda uma porção de uma proteína de revestimento viral (isto é, criando uma proteína de fusão) e exibida na superfície de uma partícula ou célula, por exemplo, com o uso de exibição de fago.
[129] Certos aspectos da presente divulgação se referem a um animal não humano que compreende uma biblioteca de polinucleotídeos da presente divulgação. Por exemplo, um animal não humano da presente divulgação pode ser modificado de modo que seu genoma inclua um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia pesada da presente divulgação. Num exemplo não limitante, é gerado um camundongo transgênico que inclui um locus de imunoglobulina de cadeia pesada modificado para expressar uma ou mais das regiões variáveis de cadeia pesada da presente divulgação. Em algumas modalidades, o animal transgênico (por exemplo, camundongo) expressa anticorpos ou cadeias pesadas codificadas pelos polinucleotídeos. As técnicas para modificar um ou mais loci de imunoglobulina de um animal não humano são conhecidas na técnica (por exemplo, métodos usados para gerar Xenomouse™).
[130] A triagem dos anticorpos derivados das bibliotecas da presente divulgação pode ser realizada por quaisquer meios adequados conhecidos na técnica. Por exemplo, a atividade de ligação pode ser avaliada por imunoensaio padrão e/ou cromatografia de afinidade. A triagem dos anticorpos da presente divulgação para função catalítica, por exemplo, função proteolítica pode ser realizada com o uso de um ensaio padrão, por exemplo, um ensaio de placa de hemoglobina. A determinação de afinidade de ligação de um anticorpo a um alvo pode ser analisada in vitro com o uso de uma variedade de técnicas bem conhecidas, por exemplo, um instrumento BIACORE™, que mede as taxas de ligação de um anticorpo a um determinado alvo ou antígeno com base na ressonância plasmônica de superfície, ou Interferometria de Biocamada (BLI), conforme exemplificado abaixo com o uso da plataforma ForteBio Octet® RED96 (Pall Life Sciences). Ensaios in vivo podem ser conduzidos com o uso de qualquer um dentre inúmeros modelos animais e, então, subsequentemente testados, conforme adequados, em seres humanos. Ensaios biológicos baseados em célula também são contemplados. Os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno podem ser adicionalmente selecionados para atividade funcional, por exemplo, atividade antagonista ou agonista. Os métodos de triagem exemplificativos são descritos no presente documento. Por exemplo, em algumas modalidades, a afinidade de ligação entre fragmentos fab e um ou mais alvos é medida com o uso de BLI marcando-se antígenos com etiqueta IgG1-Fc humana e captura por Biossensor de Captura Anti-hIgG-Fc (AHC). Fabs podem ser marcados em seu C-terminal do domínio CH1 com uma etiqueta His6,
superexpressos numa célula hospedeira, tal como E. coli, e purificados, por exemplo, com o uso de uma resina de Ni-NTA. A afinidade pode, então, ser medida com o uso de sensores AHC (biossensores de imersão e leitura por captura de IgG-Fc anti-humano) imersos em poços contendo os fabs purificados diluídos, por exemplo, a 5 a 10 µg/ml com tampão cinético.
[131] Após os ligantes serem identificados por ligação ao alvo ou antígeno e/ou ensaios funcionais, o ácido nucleico pode ser extraído. O ADN extraído pode, então, ser usado diretamente para transformar células hospedeiras de E. coli ou alternativamente, as sequências de codificação podem ser amplificadas, por exemplo, com o uso de PCR com iniciadores adequados, e sequenciadas por qualquer método de sequenciamento típico. O ADN de domínio variável dos ligantes pode ser digerido por enzima de restrição e, então, inserido num vetor para expressão de proteína.
[132] São fornecidos no presente documento anticorpos identificados e selecionados a partir das bibliotecas descritas no presente documento. Certos aspectos da presente divulgação se referem às HVRs de ou cadeia pesada e cadeia leve de anticorpo, regiões variáveis que compreendem as HVRs e/ou polinucleotídeo (ou polinucleotídeos) que codifica as mesmas. Em algumas modalidades, as HVRs e/ou regiões variáveis fazem parte de um fragmento de anticorpo, anticorpo de comprimento total ou fragmento variável de cadeia única (scFv).
[133] Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I) X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO: 199); e (Fórmula III)
FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T
(SEQ ID NO:200). Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula IV)
LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A,
D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ ID NO:201);
(Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:202); (Fórmula VI)
IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y,
X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203); (Fórmula VII)
VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D,
S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII)
IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é
D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205); (Fórmula IX)
IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO: 206); e (Fórmula X)
VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207). Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI)
IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que
X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209); e
(Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S (SEQ ID NO:210). Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1,
HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I)
X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO: 199);
e (Fórmula III) FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é
A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ
ID NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E,
S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:202); (Fórmula VI)
IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y,
X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203); (Fórmula VII)
VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D,
S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII)
IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é
D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205); (Fórmula IX)
IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO: 206); e (Fórmula X)
VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207). Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1,
HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende a sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula I)
X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO: 199);
e (Fórmula III) FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 que compreende the sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S (SEQ ID NO:210).
[134] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ ID NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:202); (Fórmula VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203); (Fórmula VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205); (Fórmula IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO: 206); e (Fórmula X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207).
[135] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S (SEQ ID NO:210).
[136] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ ID NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:202); (Fórmula VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203); (Fórmula VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205); (Fórmula IX)
IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO: 206); e (Fórmula X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207).
[137] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S (SEQ ID NO:210).
[138] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ ID NO:201); (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:202); (Fórmula VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203); (Fórmula VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D,
S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204); (Fórmula VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205); (Fórmula IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO: 206); e (Fórmula X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207).
[139] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em (Fórmula XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); (Fórmula XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209); e (Fórmula XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S (SEQ ID NO:210).
[140] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 e/ou HVR- H2 compreendem uma sequência de aminoácidos listada na Tabela 1 abaixo. TABELA 1: SEQUÊNCIAS HVR DE CADEIA PESADA SEQ ID NO. Sequência projetada HVR-H1 1 FTFTDYGIHWV 2 FTFTGYAIHWV 3 FTFTNYGIHWV 4 YTFSDYAIHWV 5 YTFSDYGIHWV
Sequência projetada 6 YTFSGYAIHWV 7 YTFSGYGIHWV 8 YTFSNYGIHWV 9 YTFSSYGIHWV 10 YTFSGYWIHWV 11 YTFSNYWIHWV 12 FTFSGYWIHWV 13 FTFSNYWIHWV 14 YTFSDYWIHWV 15 YSISSGHHWAWI 16 YSISSGHYWNWI 17 YSISSGHYWSWI 18 YSISSGHYWTWI 19 YSISSGYHWAWI 20 YSISSGYHWDWI 21 YSISSGYHWGWI 22 YSISSGYHWNWI 23 YSISSGYHWSWI 24 YSISSGHHWDWI 25 YSISSGYYWDWI 26 YSISSGYYWNWI 27 YSISSGYYWTWI 28 YSITSGHHWAWI 29 YSITSGHHWDWI 30 YSITSGHHWGWI 31 YSITSGHHWNWI 32 YSITSGHHWSWI 33 YSISSGHHWGWI 34 YSITSGHYWAWI 35 YSITSGHYWDWI 36 YSITSGHYWGWI 37 YSITSGHYWNWI 38 YSITSGHYWSWI
Sequência projetada 39 YSITSGYHWAWI 40 YSITSGYHWGWI 41 YSISSGHHWNWI 42 YSITSGYHWNWI 43 YSITSGYHWSWI 44 YSITSGYYWDWI 45 YSISSGHHWTWI 46 YSISSGHYWDWI 47 FSLSTSGVAVSWI 48 FSLSTGGVAVGWI 49 FSLSTGGVAVSWI 50 FSLSTGGVGVAWI 51 FSLSTGGVGVSWI 52 FSLSTSGVAVAWI 137 FTFSDYAIHWV 138 FTFSDYGIHWV 139 YTFSNYAIHWV 140 YTFSSYAIHWV 141 YTFTDYAIHWV 142 YTFTDYGIHWV 143 YTFTNYAIHWV 144 YTFTNYGIHWV 145 FTFSGYGIHWV 146 FTFSNYAIHWV 147 FTFSSYGIHWV 148 FTFSDYWIHWV 149 FTFTSYWIHWV 150 YSISSGYYWGWI 151 YSITSGYYWNWI 152 YSITSGYYWSWI 153 YSISSGHYWAWI 154 YSISSGHYWGWI 155 FSLSTSGVAVGWI
Sequência projetada 156 FSLSTSGVGVAWI 157 FSLSTSGVGVGWI 158 FSLSTGGVGVGWI HVR-H2 53 LARIDWDDDKRYSPSLKSRL 54 LALIDWDDDKRYSPSLKSRL 55 LALIDWDDDKRYSTSLKSRL 56 LALIDWDDDKYYSPSLKSRL 57 LALIDWADDKYYSPSLKSRL 58 LALIDWAGDKSYSTSLKSRL 59 LARIDWDDDKYYSPSLKSRL 60 LARIDWDDDKYYSTSLKSRL 61 LARIDWDGDKYYSTSLKSRL 62 IGDIYHSGSTYYSPSLKSRV 63 IGEIYHSGSTYYSPSLKSRV 64 IGEIYYSGSTYYSPSLKSRV 65 IGSIYHSGNTNYNPSLKSRV 66 IGEIYHSGNTYYNPSLKSRV 67 IGEIYHSGSTYYNPSLKSRV 68 IGEIYYSGSTYYNPSLKSRV 69 IGDIYHSGNTYYNPSLKSRV 70 IGDIYHSGSTYYNPSLKSRV 71 VSAISGYGDTTYYADSVKGRF 72 VSAISGYGGSTYYADSVKGRF 73 VSAISGYGGTTYYADSVKGRF 74 VSGISGAGDTTYYADSVKGRF 75 VSGISGDGDTTYYADSVKGRF 76 VSGISGDGGSTYYADSVKGRF 77 VSGISGYGDTTYYADSVKGRF 78 VSGISGYGGTTYYADSVKGRF 79 VSVISGDGDTTYYADSVKGRF 80 VSVISGYGGSTYYADSVKGRF 81 VSGISGDGSTTYYADSVKGRF
Sequência projetada 82 VSGISGYGSTTYYADSVKGRF 83 VSVISGSGSTTYYADSVKGRF 84 VSVISGYGSSTYYADSVKGRF 85 VSVISGYGSTTYYADSVKGRF 86 VSAISGYGSTTYYADSVKGRF 87 VSSISGYGDTTYYADSVKGRF 88 VSSISGYGGSTYYADSVKGRF 89 VSSISGYGGTTYYADSVKGRF 90 VSYISGAGDTTYYADSVKGRF 91 VSSISGAGDTTYYADSVKGRF 92 VSYISGAGGTTYYADSVKGRF 93 VSYISGDGDTTYYADSVKGRF 94 VSYISGDGGSTYYADSVKGRF 95 VSYISGDGGTTYYADSVKGRF 96 VSYISGSGDTTYYADSVKGRF 97 VSSISGAGGSTYYADSVKGRF 98 VSYISGYGDTTYYADSVKGRF 99 VSYISGYGGTTYYADSVKGRF 100 VSSISGAGGTTYYADSVKGRF 101 VSSISGDGDTTYYADSVKGRF 102 VSSISGDGGTTYYADSVKGRF 103 VSSISGAGSSTYYADSVKGRF 104 VSSISGAGSTTYYADSVKGRF 105 VSSISGDGSSTYYADSVKGRF 106 VSSISGDGSTTYYADSVKGRF 107 VSSISGYGSSTYYADSVKGRF 108 VSSISGYGSTTYYADSVKGRF 109 IGWINPNRGDTKYAQKFQGRV 110 IGWINPNRGDTNYAQKFQGRV 111 IGWINPNRGGTKYAQKFQGRV 112 IGWINPNRGGTNYAQKFQGRV 113 IGWINPNRGSTKYAQKFQGRV 114 IGWINPNRGSTNYAQKFQGRV
SEQ ID NO. Sequência projetada 115 IGRINPNFGDTNYAQKFQGRV 116 IGWINPNFGDTNYAQKFQGRV 117 IGWINPNFGSTKYAQKFQGRV 118 IGWINPNFGSTNYAQKFQGRV 119 IGIINPNRGDTKYAQKFQGRV 120 IGIINPNRGDTNYAQKFQGRV 121 IGIINPNFGDTNYAQKFQGRV 122 IGWISPSGGGTKYAQKFQGRV 123 IGWISPSGGGTNYAQKFQGRV 124 IGWISPSSGGTKYAQKFQGRV 125 IGWISPSSGGTNYAQKFQGRV 126 IGWIYPSGGGTKYAQKFQGRV 127 IGWIYPSGGGTNYAQKFQGRV 128 IGWISPSGGSTNYAQKFQGRV 129 IGWISPSSGSTKYAQKFQGRV 130 IGWISPSSGSTNYAQKFQGRV 131 IGWISPSGGSTKYAQKFQGRV 132 IGIIYPSGGGTNYAQKFQGRV 133 IGIISPSGGGTKYAQKFQGRV 134 IGIISPSGGGTNYAQKFQGRV 135 IGIIYPSGGSTNYAQKFQGRV 136 VGRIKSKTDGYTTEYAAPVKGRF 159 VSAISGSGSTTYYADSVKGRF 160 VSSISGSGDTTYYADSVKGRF 161 VSSISGSGGSTYYADSVKGRF 162 VSSISGSGGTTYYADSVKGRF 163 VSSISGDGGSTYYADSVKGRF 164 VSSISGSGSTTYYADSVKGRF
[141] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H3 é qualquer HVR-H3 conhecida na técnica. Em algumas modalidades, a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256.
[142] Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma cadeia pesada de anticorpo com uma região variável de cadeia pesada que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 e/ou HVR-H2 são qualquer uma das HVRs-H1 e/ou HVRs-H2 descritas no presente documento. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer sequência HVR-H1 da presente divulgação (por exemplo, X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198); YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e SEQ ID NOS:1-52 e 137-158). Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer HVR-H2 da presente divulgação (por exemplo, LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ ID NO:201); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:202); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203); VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204); IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205); IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO:206); VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209); e VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S (SEQ ID NO:210); e SEQ ID NOS:53-136 e 159-164).
[143] Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma cadeia pesada de anticorpo com uma região variável de cadeia pesada que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e 137-158. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52.
[144] Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma cadeia pesada de anticorpo com uma região variável de cadeia pesada que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:53-136.
[145] Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma cadeia pesada de anticorpo com uma região variável de cadeia pesada que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste na Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III), ou a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste na Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (X), Fórmula (XI), Fórmula (XII) e Fórmula (XIII). Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma cadeia pesada de anticorpo com uma região variável de cadeia pesada que compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1-52, ou em que a HVR- H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 53-136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 e 51, ou em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 e 134. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 e 48, ou em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 e 136. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 6, 10, 17, 29, 36 e 52, ou em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 e 133.
[146] Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma cadeia pesada de anticorpo com uma região variável de cadeia pesada que compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre as SEQ ID NOS:1-52 e 137-158, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre as SEQ ID NOS:53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre as SEQ ID NOS:1-52, e a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre as SEQ ID NOS:53-136.
[147] Em determinadas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende três dentre uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR- H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII); uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); e uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII). Em algumas modalidades, uma HVR-H1 e uma HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XI); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
Fórmula (XI). Em algumas modalidades, a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (X). Em algumas modalidades, a HVR- H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (XIII).
[148] As sequências HVR de cadeia pesada descritas no presente documento podem ser incluídas em qualquer combinação numa cadeia pesada de anticorpo ou região variável de cadeia pesada da presente divulgação. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 1-52 e 137-158, e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS: 1-52, e uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID
NOS:1-52 e 137-158, e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52, e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164 e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e 137-158, uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164, e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52, uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136, e uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256.
[149] Em determinadas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende três dentre uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-
H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em:
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:157,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:138,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:154, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:161; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:145, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:128; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:22, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:153, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:155, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:156, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:100; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:51, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:138, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:123; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:126; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:129; uma HVR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:124; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:130; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:150, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:132; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:12,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:149,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:117; e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:7, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:134. Em algumas modalidades, a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:151, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:104; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:17, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:101; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:114; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:29, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:112; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:152, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:156, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:157, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:94; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:48, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:89; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:50, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:163; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:160;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:87; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:92;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:93;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:97;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:103; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:164; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:137, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:54; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:3, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:127; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:4, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:85; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:4, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:109; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:140, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:131; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:141, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:142, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:159; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:143, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:116; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:144, e uma HVR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121; uma HVR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:146, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:147, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:133; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:148, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:118.
[150] Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende três dentre uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são listadas na Tabela 1. Em algumas modalidades,
a HVR-H3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:223-256. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende uma sequência selecionada dentre as SEQ ID NOS: 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 e 195, ou uma sequência que tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% de identidade de sequência com uma sequência selecionada dentre as SEQ ID NOS: 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 e 195.
[151] Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada compreende ainda sequências de framework de cadeia pesada de região variável justapostas entre as HVRs de acordo com a fórmula: (FW-H1)- (HVR-H1)-(FW-H2)-(HVR-H2)-(FW-H3)-(HVR-H3)-(FW-H4). Em algumas modalidades, uma, duas, três ou quatro das sequências de framework são as seguintes: FW-H1 é EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG (SEQ ID NO:165) FW-H2 é RQAPGKGLEW (SEQ ID NO:166) FW-H3 é TISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC (SEQ ID NO:167) FW-H4 é WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:168).
[152] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência FW-H3 alternativa com uma mutação de arginina para lisina em R19 da SEQ ID NO:167. Em algumas modalidades, uma, duas, três ou quatro das sequências de framework são um FW-H1 da SEQ ID NO:165, um FW-H2 da SEQ ID NO:166, um FW-H3 ou SEQ ID NO:167 com uma mutação de arginina para lisina em R19, e um FW-H4 da SEQ ID NO:168.
[153] Em algumas modalidades, é fornecido adicionalmente no presente documento um anticorpo que compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada inclui a região variável de cadeia pesada da presente divulgação, e em que a cadeia leve inclui qualquer região variável de cadeia leve (por exemplo, que compreende uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3) conhecida na técnica. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve de anticorpo compreende uma HVR-L1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve de anticorpo compreende uma HVR-L3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve de anticorpo compreende uma HVR-L1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264, e uma HVR-L3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274. Em algumas modalidades, a cadeia leve de anticorpo compreende qualquer uma das regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo encontradas no pedido (ou pedidos) de patente deposito sob o número do dossiê do advogado 69540- 3000100, 69540-2000140 e/ou 69540-2000100 (cujas divulgações são, cada uma, incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade). Em algumas modalidades, a cadeia leve de anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende qualquer uma das sequências HVR-L1, HVR-L2 e/ou HVR-L3 encontradas no pedido (ou pedidos) de patente depositado sob o número do dossiê do advogado 69540-3000100, 69540-2000140 e/ou 69540-2000100 (cujas divulgações são, cada uma, incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade).
[154] Arcabouços derivados de IgG, tais como Fab e Fv de cadeia única (scFv), assim como Fv ou scFv estabilizados, foram projetados e preparados com a capacidade de reconhecer especificamente e se ligar firmemente a antígenos.
Arcabouços de proteína alternativos, ou arcabouço semelhantes a não IgG, foram explorados para aplicações análogas.
Várias famílias de proteína com arquitetura não Ig, tal como a proteína A, fibronectina,
repetição de anquirina, Adnectinas, Aficorpos, Anticalinas, DARPins, inibidores de Kunitz geneticamente modificados ou as lipocalinas, peptídeos cíclicos e policíclicos podem ser capacitados com novos sítios de ligação empregando-se métodos de engenharia combinatória, tal como mutagênese aleatória sítio dirigida em combinação com exibição de fago, exibição de levedura ou outras técnicas de seleção moleculares.
Estes reagentes de ligação alternativos inovadores são coletivamente chamados de arcabouços de proteína geneticamente modificados, que ilustram o fato de que uma estrutura de proteína natural rígida é usada para modificar um sítio de ligação existente ou para implementar um novo para um alvo prescrito com o uso de motivos de ligação dinâmicos ou unidades introduzidas aqui.
Em comparação com anticorpos ou seus fragmentos recombinantes, estes arcabouços de proteína muitas vezes fornecem vantagens práticas incluindo estabilidade elevada e alto rendimento da produção em sistemas de expressão microbianos.
À medida que estas proteínas de ligação inovadoras são obtidas por meio de um processo de engenharia biomolecular a fim de obter atividade de ligação ao alvo, elas podem ser submetidas a esquemas de seleção adicionais focados em outras propriedades desejadas (tais como solubilidade, estabilidade térmica, resistência à protease etc.) Consequentemente, arcabouços de proteína geneticamente modificados se tornaram atraentes para muitas aplicações em biotecnologia e pesquisa biomédica, especialmente para motivos de ligação multiespecíficos.
O esforço para gerar tal proteína de ligação alternativa com propriedades benéficas é voltado em direção ao uso terapêutico com ênfase especial na estrutura e função biomoleculares, assim como em abordagens voltadas para aplicação clínica.
[155] Em algumas modalidades, é fornecido adicionalmente no presente documento um ou mais polipeptídeos (por exemplo, um polipeptídeo de arcabouço, incluindo polipeptídeos de arcabouço derivados de IgG (tais como
Fabs, Fvs de cadeia única e Fvs estabilizados) ou polipeptídeos de arcabouço derivados de não IgG (tais como proteína A, fibronectina, repetição de anquirina,
Adnectinas, Aficorpos, Anticalinas, DARPins, inibidores de Kunitz geneticamente modificados ou as lipocalinas, peptídeos cíclicos e policíclicos)) que compreendem uma ou mais HVRs descritas no presente documento.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer sequência HVR-H1 da presente divulgação (por exemplo, X1TFX2X3YX4IHWV,
em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ
ID NO:198); YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199); e FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200); e SEQ ID
NOS:1-52 e 137-158). Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer HVR-H2 da presente divulgação (por exemplo,
LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A,
D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ ID NO:201);
IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e
X3 é H ou Y (SEQ ID NO:202); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é
D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203);
VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D,
S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204);
IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é
D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205);
IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO:206); VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209); e VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y e X5 é P ou S (SEQ ID NO:210); e SEQ ID NOS:53-136 e 159-164). Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer sequência HVR-H3 da presente divulgação (por exemplo, SEQ ID NOs: 223- 256). Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-L1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer sequência HVR-L1 da presente divulgação (por exemplo, SEQ ID NOs: 257- 264). Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende uma HVR-L3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre qualquer sequência HVR-L3 da presente divulgação (por exemplo, SEQ ID NOs: 265- 274).
[156] Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende duas ou mais (por exemplo, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais, ou todas as cinco) das sequências HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, e/ou HVR-L3 descritas no presente documento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende duas das sequências HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 e/ou HVR-L3 descritas no presente documento, em que as duas são uma HVR-H1 e uma HVR-H2; uma HVR-H1 e uma HVR-H3; uma HVR-H1 e uma HVR-L1; uma HVR-H1 e uma HVR-L3; uma HVR-H2 e uma HVR-H3; uma HVR-H2 e uma HVR-L1; uma HVR-H2 e uma HVR-L3; uma HVR-H3 e uma HVR-L1; uma HVR- H3 e uma HVR-L3; ou uma HVR-L1 e uma HVR-L3. Em algumas modalidades,
o polipeptídeo compreende três das sequências HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 e/ou HVR-L3 descritas no presente documento, em que as três são uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3; uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR- L1; uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-L3; uma HVR-H1, uma HVR-H3 e uma HVR-L1; uma HVR-H1, uma HVR-H3 e uma HVR-L3; uma HVR-H1, uma HVR-L1 e uma HVR-L3; uma HVR-H2, uma HVR-H3 e uma HVR-L1; uma HVR- H2, uma HVR-H3 e uma HVR-L3; uma HVR-H2, uma HVR-L1 e uma HVR-L3; ou uma HVR-H3, uma HVR-L1 e uma HVR-L3. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende quatro das sequências HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 e/ou HVR-L3 descritas no presente documento, em que as quatro são uma HVR-H1, uma HVR-H2, uma HVR-H3 e uma HVR-L1; uma HVR-H1, uma HVR-H2, uma HVR-H3 e uma HVR-L3; uma HVR-H1, uma HVR-H2, uma HVR- L1 e uma HVR-L3; uma HVR-H1, uma HVR-H3, a HVR-L1 e uma HVR-L3; ou uma HVR-H2, uma HVR-H3, uma HVR-L1 e uma HVR-L3. Em algumas modalidades, o polipeptídeo compreende cinco das sequências HVR-H1, HVR- H2, HVR-H3, HVR-L1 e/ou HVR-L3 descritas no presente documento, em que as cinco são uma HVR-H1, uma HVR-H2, uma HVR-H3, uma HVR-L1 e uma HVR-L3.
[157] Em algumas modalidades, é fornecido adicionalmente no presente documento um fragmento de anticorpo ou scFv que compreende uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada da presente divulgação.
[158] Em algumas modalidades, um anticorpo ou fragmento de anticorpo da presente divulgação se liga a pelo menos 1 alvo (por exemplo, uma proteína alvo ou um epítopo) ou pelo menos dois alvos com afinidades de ligação particular. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo ou fragmento de anticorpo da presente divulgação se liga a pelo menos 1 alvo ou pelo menos dois alvos com uma constante de dissociação de equilíbrio (Kd) de cerca de 10-
7M ou menos, 10-8 M ou menos, 10-9 M ou menos, 10-10 M ou menos ou 10-11 M ou menos. Em algumas modalidades, um anticorpo ou fragmento de anticorpo da presente divulgação se liga a pelo menos 1 alvo ou pelo menos dois alvos com uma constante de dissociação de equilíbrio (Kd) entre cerca de 10-7 e cerca de 10-11 M. Ensaios exemplificativos para determinar a afinidade de ligação são descritos e exemplificados infra (Consulte, por exemplo, o ensaio ForteBio do Exemplo 4 abaixo).
[159] Em algumas modalidades, um anticorpo ou fragmento de anticorpo da presente divulgação tem uma temperatura de fusão (Tm) de pelo menos 60°C. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo ou fragmento de anticorpo da presente divulgação tem uma Tm entre cerca de 60°C e cerca de 90°C, entre cerca de 65°C e cerca de 90°C, entre cerca de 70°C e cerca de 90°C, entre cerca de 75°C e cerca de 90°C, entre cerca de 80°C e cerca de 90°C, entre cerca de 85°C e cerca de 90°C, ou pelo menos cerca de 65°C, pelo menos cerca de 70°C, pelo menos cerca de 72°C, pelo menos cerca de 75°C, pelo menos cerca de 80°C ou pelo menos cerca de 85°C. Em algumas modalidades, um anticorpo ou fragmento de anticorpo da presente divulgação tem uma Tm entre cerca de 60°C e cerca de 90°C. Vários métodos de medição de Tm para um anticorpo ou fragmento de anticorpo são conhecidos na técnica.
Ensaios exemplificativos para determinar a Tm de anticorpo são descritos e exemplificados infra (Consulte, por exemplo, o ensaio DSF do Exemplo 4 abaixo).
[160] Os anticorpos da presente divulgação podem ser produzidos com o uso de métodos e composições recombinantes, por exemplo, conforme descrito na patente nº U.S. 4.816.567. Em algumas modalidades, são fornecidos ácidos nucleicos isolados que codificam qualquer anticorpo descrito no presente documento Tais ácidos nucleicos podem codificar uma sequência de aminoácidos que compreende a VL e/ou uma sequência de aminoácidos que compreende a VH dos anticorpos (por exemplo, as cadeias leves e/ou pesadas dos anticorpos). Em algumas modalidades, um ou mais vetores (por exemplo, vetores de expressão) que compreendem tais ácidos nucleicos são fornecidos.
Em algumas modalidades, é fornecida uma célula hospedeira que compreende tais ácidos nucleicos. Numa tal modalidade, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com): (1) um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a VL do anticorpo e uma sequência de aminoácidos que compreende a VH do anticorpo ou (2) um primeiro vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a VL do anticorpo e um segundo vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a VH do anticorpo. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é eucariótica, por exemplo, uma célula de ovário de hamster chinês (CHO) ou célula linfoide (por exemplo, célula Y0, NS0, Sp20). Em algumas modalidades, é fornecido um método para produzir um anticorpo, em que o método compreende cultivar uma célula hospedeira que compreende um ácido nucleico que codifica o anticorpo, conforme fornecido acima, sob condições adequadas para expressão do anticorpo e recuperando opcionalmente o anticorpo da célula hospedeira (ou meio de cultura de célula hospedeira).
[161] Para produção recombinante de anticorpos da presente divulgação, o ácido nucleico que codifica um anticorpo, por exemplo, conforme descrito acima, é isolado e inserido num ou mais vetores para clonagem e/ou expressão adicional numa célula hospedeira. Tal ácido nucleico pode ser prontamente isolado e sequenciado com o uso de procedimentos convencionais (por exemplo, com o uso de sondas de oligonucleotídeo que são capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesadas e leves do anticorpo).
[162] As células hospedeiras adequadas para clonagem ou expressão dos vetores que codificam o anticorpo incluem células procarióticas ou eucarióticas. Por exemplo, os anticorpos podem ser produzidos em bactérias, em particular quando a glicosilação e a função efetora Fc não são necessárias.
Para expressão de fragmentos de anticorpo e polipeptídeos em bactérias, consulte, por exemplo, as patentes nos U.S. 5.648.237, 5.789.199 e 5.840.523.
(Consulte, também Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, edição, Humana Press, Totowa, NJ, 2003), páginas 245-254, que descreve a expressão de fragmentos de anticorpo em E. coli. Após a expressão, o anticorpo pode ser isolado da pasta de células bacterianas numa fração solúvel e pode ser adicionalmente purificado.
[163] Além de procariontes, micróbios eucarióticos, tais como fungos filamentosos ou levedura são hospedeiros de clonagem ou expressão adequados para vetores de codificação de anticorpo, incluindo cepas de fungos e leveduras cujas vias de glicosilação foram “humanizadas”, resultando na produção de um anticorpo com um padrão de glicosilação parcial ou totalmente humano. Consulte Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004) e Li et al., Nat.
Biotech. 24:210-215 (2006).
[164] As células hospedeiras adequadas para a expressão de anticorpo glicosilado também são derivadas de organismos multicelulares (invertebrados e vertebrados). Os exemplos de células invertebradas incluem células de inseto e vegetal. Foram identificadas inúmeras cepas baculovirais que podem ser usadas em conjunto com células de insetos, particularmente para transfecção de células de Spodoptera frugiperda.
[165] Culturas de células vegetais também podem ser utilizadas como hospedeiros. Consulte, por exemplo, as patentes nos U.S. 5.959.177,
6.040.498, 6.420.548, 7.125.978 e 6.417.429 (que descrevem a tecnologia PLANTIBODIES™ para produzir anticorpos em plantas transgênicas).
[166] As células de vertebrados também podem ser usadas como hospedeiros. Por exemplo, as linhagens celulares de mamífero que são adaptadas para crescer em suspensão podem ser úteis. Outros exemplos de linhagens de célula hospedeira de mamífero são linhagem CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7); linhagem de rim embrionário humano (293 ou 293 células, conforme descrito, por exemplo, em Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); células de rim de hamster bebê (BHK); células de sertoli de camundongo (células TM4 conforme descrito, por exemplo, em Mather, Biol.
Reprod. 23:243-251 (1980)); células de rim de macaco (CV1); células de rim de macaco verde africano (VERO-76); células de carcinoma cervical humano (HELA); células de rim canino (MDCK; células de fígado de rato búfalo (BRL 3A); células de pulmão humano (W138); células de fígado humano (Hep G2); tumor mamário de camundongo (MMT 060562); células TRI, conforme descrito, por exemplo, em Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982); células MRC 5 e células FS4. Outras linhagens de célula hospedeira de mamífero úteis incluem células de ovário de hamster chinês (CHO), incluindo células DHFR- CHO (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)) e linhagens celulares de mieloma, tais como Y0, NS0 e Sp2/0. Para análise de determinadas linhagens de célula hospedeira de mamífero para produção de anticorpos, consulte, por exemplo, Yazaki e Wu, Methods in Molecular Biology, Volume 248 (B.K.C. Lo, edição, Humana Press, Totowa, NJ), páginas 255-268 (2003).
[167] Ademais, é fornecido no presente documento um anticorpo biespecífico que tem uma região variável de cadeia pesada idêntica da presente divulgação (por exemplo, que tem duas regiões variáveis de cadeia leve com diferentes especificidades de ligação e duas regiões variáveis de cadeia pesada idênticas). Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende duas cadeias leves diferentes, em que a primeira cadeia leve compreende um domínio
CL kappa (por exemplo, um domínio CL kappa humano), e a segunda cadeia leve compreende um domínio CL lambda (por exemplo, um domínio CL lambda humano). Métodos de produção e/ou purificação de anticorpos biespecíficos que compreendem um domínio CL kappa e um domínio CL lambda são conhecidos na técnica (Consulte, por exemplo, Fischer et al. (2015), Nat.
Commun. 6:6113;
US20140179547). Por exemplo, um anticorpo biespecífico que compreende: a)
duas regiões variáveis de cadeia pesada idênticas (por exemplo, qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada descritas no presente documento), b)
uma primeira cadeia leve que compreende uma primeira região variável de cadeia leve e um domínio CL kappa, e c) uma segunda cadeia leve que compreende uma segunda região variável de cadeia leve e um domínio CL lambda (por exemplo, a região constante de uma segunda cadeia leve que compreende um domínio CL kappa é comutado por um domínio CL lambda) pode ser construído e expresso (por exemplo, clonado num ou mais vetores de expressão e expresso numa ou mais células hospedeiras adequadas). A IgG biespecifica resultante construída deste modo (por exemplo, compreendendo tanto um domínio CL kappa como um lambda) pode ser purificada com o uso das seguintes etapas: primeiro, as IgGs totais são recuperadas do sobrenadante de cultura com o uso de cromatografia de afinidade Capture Select de proteína A ou IgG-CH1, resultando na eliminação de cadeias leves livres e outros contaminantes; a seguir, as IgGs contendo um domínio CL kappa são capturadas com o uso de resina de afinidade KappaSelect, e IgGs monoespecíficas com cadeias contendo apenas domínios CL lambda são eliminadas no fluxo de coluna; finalmente, corpos kappa-lambda biespecíficos puros são recuperados com o uso de resina de afinidade LambdaFabSelect, e separados das IgGs monoespecíficas com cadeias leves contendo apenas domínios CL kappa que não se ligam à resina.
Alternativamente, a IgG de cadeia pesada comum biespecífica (por exemplo, conforme descrito acima) pode ser purificada pela proteína A e resolvida usando resinas específicas para cada domínio CL da cadeia leve com base nas diferenças numa ou mais propriedades biofísicas das cadeias leves diferentes (como diferentes pesos moleculares, diferentes pontos isoelétricos (pI), etc.).
[168] Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico compreende duas regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo e duas regiões variáveis de cadeia pesada idênticas, em que o anticorpo biespecífico inclui: um primeiro domínio de ligação que se liga a um primeiro alvo ou antígeno e compreende uma primeira região variável de cadeia leve de anticorpo e uma primeira região variável de cadeia pesada; e um segundo domínio de ligação que se liga a um segundo alvo ou antígeno e compreende uma segunda região variável de cadeia leve de anticorpo e uma segunda região variável de cadeia pesada de anticorpo; em que a segunda região variável de cadeia pesada de anticorpo tem uma sequência idêntica à primeira sequência de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo. Em algumas modalidades, o primeiro e o segundo domínios de ligação se ligam a diferentes biomoléculas alvo. Em algumas modalidades, o primeiro e o segundo domínios de ligação se ligam a epítopos diferentes numa mesma molécula. Em algumas modalidades, a primeira região variável de cadeia pesada de anticorpo faz parte de uma primeira cadeia pesada de anticorpo que compreende a primeira região variável de cadeia pesada e uma primeira região constante de cadeia pesada (por exemplo, que compreende CH1, dobradiça, CH2 e CH3). Em algumas modalidades, a segunda região variável de cadeia pesada de anticorpo faz parte de uma segunda cadeia pesada de anticorpo que compreende a segunda região variável de cadeia pesada e uma segunda região constante de cadeia pesada (por exemplo, que compreende CH1, dobradiça, CH2 e CH3). Em algumas modalidades, a primeira região variável de cadeia leve de anticorpo faz parte de uma primeira cadeia leve de anticorpo que compreende a primeira região variável de cadeia leve e uma primeira região constante de cadeia leve. Em algumas modalidades, a segunda região variável de cadeia leve de anticorpo faz parte de uma segunda cadeia leve de anticorpo que compreende a segunda região variável de cadeia leve e uma segunda região constante de cadeia leve. Em algumas modalidades, a primeira e a segunda cadeias pesadas de anticorpo têm sequências idênticas a uma cadeia pesada da presente divulgação.
[169] Ademais, é fornecido no presente documento um método de geração de um anticorpo biespecífico que tem uma região variável de cadeia pesada idêntica da presente divulgação (por exemplo, que tem duas regiões variáveis de cadeia leve com diferentes especificidades de ligação e duas regiões variáveis de cadeia pesada idênticas). Em algumas modalidades, o método inclui (a) selecionar um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga a um primeiro antígeno e compreende uma primeira região variável de cadeia leve de anticorpo e uma primeira região variável de cadeia pesada da presente divulgação; (b) selecionar um segundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um segundo antígeno e compreende uma segunda região variável de cadeia leve de anticorpo e uma segunda região variável de cadeia pesada da presente divulgação, em que a segunda região variável de cadeia pesada de anticorpo tem uma sequência idêntica à primeira sequência de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo; e (c) produzir o anticorpo biespecífico que compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da primeira região variável de cadeia leve de anticorpo, uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da segunda região variável de cadeia leve de anticorpo, uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da primeira sequência de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, e uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da segunda sequência de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo. Em algumas modalidades, a primeira região variável de cadeia pesada é codificada por um polinucleotídeo a partir de uma biblioteca da presente divulgação.
[170] Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos descritos no presente documento podem ter especificidades adicionais. Por exemplo, um dentre o antígeno ou sítios de ligação alvo do anticorpo biespecífico pode se ligar a mais de um alvo especificamente.
[171] Métodos para produzir/gerar anticorpos biespecíficos são conhecidos na técnica. A produção de anticorpos biespecíficos de comprimento total pode se basear na coexpressão de dois pares de cadeia pesada-leve de imunoglobulina, em que as duas cadeias têm especificidades diferentes (Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)). Devido à classificação aleatória de cadeias pesada e leve de imunoglobulina, estes hibridomas (quadromas) produzem uma mistura potencial de 10 moléculas de anticorpos diferentes, das quais apenas uma tem estrutura biespecífica correta. A purificação da molécula correta, que é geralmente feita por etapas de cromatografia de afinidade, é bastante complicada, e os rendimentos de produto são baixos. Procedimentos similares são revelados no documento WO 93/08829, e em Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991). V. KITS
[172] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um kit que compreende uma biblioteca de polinucleotídeos da presente divulgação.
Em algumas modalidades, o kit compreende ainda uma bula que compreende instruções para expressar, modificar, realizar triagem ou, de outro modo, usar a biblioteca, por exemplo, para identificar uma HVR de anticorpo ou região variável de interesse. Em algumas modalidades, o kit compreende ainda um ou mais tampões, por exemplo, para armazenar, transferir, transfectar ou, de outro modo, usar um ou mais dos polinucleotídeos (por exemplo, polinucleotídeos sintéticos).
Em algumas modalidades, i kit compreende ainda um ou mais recipientes para armazenar um ou mais dos polinucleotídeos. Em algumas modalidades, o kit compreende ainda um ou mais vetores, por exemplo, para transfecção de uma célula hospedeira com um ou mais dos polinucleotídeos.
[173] A presente divulgação será mais totalmente compreendida por meio de referência aos exemplos a seguir. Os exemplos não devem, no entanto, ser interpretados como limitantes do escopo da divulgação. É entendido que os exemplos e as modalidades descritos no presente documento têm apenas propósitos ilustrativos e que várias modificações ou mudanças à luz dos mesmos serão sugeridas a pessoas versadas na técnica e podem ser incluídos no espírito e alcance deste pedido e escopo das reivindicações anexas.
EXEMPLO 1: IDENTIFICAÇÃO DO CONJUNTO MÍNIMO DE MOTIVOS DINÂMICOS EM
[174] Para entender a variabilidade de domínios variáveis de anticorpo num nível estrutural, um algoritmo foi desenvolvido para mapear o alinhamento geométrico para domínios variáveis de anticorpo, e ainda, para calcular a entropia estrutural e de sequência com base no alinhamento geométrico. Tal abordagem combina a teoria clássica da diversidade de anticorpo que é determinada pelo processo bem estabelecido de recombinação V(D)J acoplada à diversidade conformacional de unidades dinâmicas (seleção conformacional direcionada por modelo de Linus Pauling; Consulte, por exemplo, James, L. e Tawfik, D. “Conformational diversity and protein evolution - a 60- year-old hypothesis revisited”, Trends Biochem Sci. julho de 2003;28(7):361-8) para permitir a amostragem de um espaço de epítopos quase infinito por seleção e adaptação de sítios de ligação ao anticorpo. Como um exemplo, este algoritmo foi usado para analisar a variabilidade estrutural e de sequência de 113 estruturas de cristal de alta resolução de domínios de cadeia pesada variáveis de anticorpo humano. A entropia foi calculada e plotada para cada posição do domínio de cadeia pesada variável, (Figura 1A; entropia estrutural em linha em negrito, entropia de sequência em linha pontilhada). Os resultados obtidos calculando-se a entropia estrutural e de sequência com base no alinhamento geométrico foram usados para localizar as regiões hipervariáveis (HVR), e para identificar as posições críticas nestas regiões variáveis. Para comparação, as HVRs (conforme definido pela metodologia descrita acima) e CDRs (conforme definido por Kabat) foram identificadas para uma sequência de domínio variável de cadeia pesada de anticorpo (Figura 1B).
[175] De modo interessante, a variabilidade conforme analisada por alinhamentos estruturais foi geralmente menor que a variabilidade observada com alinhamentos de sequência. Embora a variabilidade fosse geralmente inferior conforme analisada por alinhamentos estruturais, houve vários sítios/regiões com variação estrutural drástica, sugerindo que estes sítios variáveis podem desempenhar funções críticas na função de anticorpo.
Adicionalmente, algumas regiões hipervariáveis mostram alta flexibilidade com múltiplas conformações. A identificação de regiões de resíduos altamente variáveis proporcionou uma imagem mais abrangente da conservação e variabilidade de domínios variáveis de anticorpos que poderiam ser explorados em novos projetos de anticorpos. A identificação do motivo dinâmico tornou possível cobrir uma ampla faixa de diversidades estruturais com um número reduzido de sequências de aminoácidos. A vantagem surpreendente desta abordagem do projeto de anticorpo foi que um número mais limitado de motivos dinâmicos poderia ser empregado nas regiões variáveis para cobrir uma ampla faixa de diversidades estruturais de anticorpo e fornecer ampla flexibilidade a estes anticorpos, o que pode permitir a ligação a múltiplos antígenos de interesse. Deste modo, as bibliotecas de cadeia pesada dinâmicas foram construídas com o uso de linhagens germinativas humanas únicas ou sequências derivadas de linhagem germinativa para os resíduos invariantes,
enquanto um número limitado de motivos dinâmicos (em comparação com 106, 1010 ou mais) foi usado nas regiões hipervariáveis HVR_H1 e HVR_H2 para capturar a ampla faixa de variabilidade estrutural identificada nestas duas regiões.
EXEMPLO 2: CONSTRUÇÃO DE BIBLIOTECAS DE CADEIA PESADA COMUNS
[176] Para começar a construção das bibliotecas de cadeia pesada, 3 grupos de oligos degenerados foram projetados para a região variável HVR-H1 com base nas fórmulas mostradas na Tabela 2, resultando em 112 sequências HVR-H1 exclusivas. 7 grupos de oligos degenerados foram projetados para a região variável HVR-H2 com base nas fórmulas mostradas na Tabela 2, resultando em 565 sequências HVR-H2 exclusivas. Os c: 0,75 µl de oligos modelo 0,2 µM foram misturados com 10 µl 5x de tampão PrimeSTAR, 4 µl de mistura dNTP, 1 µl de 100 µM de iniciador direto, 1 µl de 100 µM de iniciador reverso, 0,5 µl de ADN polimerase PrimeSTAR HS (2,5 U/ µl) e 33 µl de água.
As soluções PCR foram preaquecidas a 96°C por 5 minutos, então 14 ciclos (96°C por 15 segundos, 60°C por 15 segundos, 72°C por seis segundos) foram realizados, seguido de extensão a 72°C por três minutos. As VHs_vr1 foram amplificadas com o uso do par de iniciadores F_1999 (CGTTTGTCCTGTGCAGCTTCCGG) (SEQ ID NO:211) e R_1999 (CGAGGCCCTTACCCGGGGCCTGACG) (SEQ ID NO:212), enquanto as VHs_vr2 foram amplificadas com o uso do par de iniciadores F_2003 (CCGGGTAAGGGCCTCGAGTGG) (SEQ ID NO:213) e R_2003 (GAGCACGTCCGTTCGAATTGTCGCGACTTATAG) (SEQ ID NO:214).
[177] As VHs_vr1 e VHs_vr2 de fita dupla foram reunidas através de sequências sobrepostas em suas extremidades 5' ou 3'. O protocolo usado foi da seguinte forma: 20 ng de modelos de VH_vr1 e 20 ng de VH_vr2 foram misturados com 10 µl 5x de tampão PrimeSTAR, 4 µl de mistura dNTP, 1 µl de
100 µM de iniciador F_1999, 1 µl de 100 µM de iniciador R_2003, 0,5 µl de AND polimerase PrimeSTAR HS (2,5 U/ µl), e água (até 50 µl), e as misturas foram preaquecidas a 96°C por 5 minutos, então 14 ciclos (96°C por 15 segundos, 60°C por 15 segundos, 72°C por 10 segundos) foram realizados, seguido de extensão a 72°C por três minutos. Estes fragmentos PCR foram, então, foram, então, purificados através de eletroforese em gel (GENEray Gel Extraction kit), digeridos com BspEI e BstBI (Thermo Scientific) e, subsequentemente clonados num vetor de filtro FTV014 digerido com as mesmas duas enzimas. A mistura de ligação foi transformada em células DH10B por eletroporação, e o número de colônias que excede 10 vezes a diversidade calculada foi coletado para preparação de plasmídeos. Os plasmídeos purificados constituíram a biblioteca VH-vr12 TABELA 2: FÓRMULAS PARA SEQUÊNCIAS VARIANTES PROJETADAS HVR-H1 E HVR- H2 Identida Identida Identida Identida Identida Identid Fórmula de Sequência de de de de de de de de de de ade de Grupo Variante de Aminoácidos Resíduo Resíduo Resíduo Resíduo Resíduo Resídu X1 X2 X3 X4 X5 o X6 HVR-H1_A D, G, N, (SEQ ID X1TFX2X3YX4IHWV F, Y S, T A, G, W n/a n/a
S NO:198) HVR-H1_B A, D, G, (SEQ ID NO: YSIX1SGX2X3WX4WI S, T H, Y H, Y n/a n/a N, S, T 199) HVR-H1_C A, G, S, (SEQ ID NO: FSLSTX1GVX2VX3WI G, S A, G n/a n/a n/a
T 200) HVR-H2_A LAX1IX2WX3X4DKX5Y A, D, S, (SEQ ID NO: L, R D, Y D, G R, S, Y P, T SX6SLKSRL Y 201) HVR-H2_B IGX1IX2X3SGSTYYSPS A, D, E, (SEQ ID NO: S, Y H, Y n/a n/a n/a LKSRV S, Y 202) HVR-H2_C IGX1IYX2SGX3TX4YNP D, E, R, (SEQ ID NO: H, Y N, S N, Y n/a n/a SLKSRV S, Y 203) HVR-H2_D VSX1ISGX2GX3X4TYY A, G, S, A, D, S, (SEQ ID NO: D, G, S S, T n/a n/a ADSVKGRF V, Y Y 204) HVR-H2_E IGX1INPNX2GX3TX4YA I, R, W F, R D, G, S K, N n/a n/a
Identida Identida Identida Identida Identida Identid Fórmula de Sequência de de de de de de de de de de ade de Grupo Variante de Aminoácidos Resíduo Resíduo Resíduo Resíduo Resíduo Resídu X1 X2 X3 X4 X5 o X6 (SEQ ID NO: QKFQGRV 205) HVR-H2_F IGX1IX2PSX3GX4TX5Y (SEQ ID NO: I, R, W S, Y G, S D, G, S K, N n/a
AQKFQGRV 206) HVR-H2_G VGRIX1SKX2X3GX4TT (SEQ ID NO: K, R A, T D, Y G, Y D, E P, S X5YAAX6VKGRF 207) n/a, não aplicável.
[178] Centenas de oligos degenerados que codificam a VH_vr3 com diversidade de sequência que se aproxima de 105 foram projetados e sintetizados, e convertidos em ADN de fita dupla através do seguinte protocolo: 0,75 µl de oligos modelo 0,2 µM foram misturados com 10 µl 5x de tampão PrimeSTAR, 4 µl de mistura dNTP, 1 µl de 100 µM de iniciador direto, 1 µl de 100 µM de iniciador reverso, 0,5 µl de ADN polimerase PrimeSTAR HS (2,5 U/ µl) e 33 µl de água. As soluções PCR foram preaquecidas a 96°C por 5 minutos, então 14 ciclos (96°C por 15 segundos, 60°C por 15 segundos, 72°C por seis segundos) foram realizados, seguido de extensão a 72°C por três minutos. O iniciador direto foi S1089 (ACAACTGAACAGCTTAAGAGCTGAGGACACTGCCGTCTATTATTG) (SEQ ID NO:215) e o iniciador reverso foi S1090 (GAGGAGACGGTGACTAGTGTTCCTTGACCCCA) (SEQ ID NO:216). Os ADNs sintetizados resultantes foram, então, foram, então, purificados através de eletroforese em gel (GENEray Gel Extraction kit), digeridos com AflII e SpeI (Thermo Scientific), e, subsequentemente clonados no vetor de filtro FTV012 digerido com as mesmas duas enzimas de restrição. A mistura de ligação foi transformada em células DH10B por eletroporação, e o número de colônias que excede 10 vezes a diversidade calculada foi coletado para preparação de plasmídeos. Os plasmídeos purificados constituíram a biblioteca VH-vr3
[179] Para montar a biblioteca VH de comprimento total, a mistura de plasmídeos de biblioteca VH-vr3 foi digerida com AflII e SpeI (NEB), e os fragmentos que codificam vr3 foram purificados através de eletroforese em gel (GENEray Gel Extraction kit), e clonados na mistura de plasmídeos de biblioteca VH-vr12 digerida com as mesmas duas enzimas de restrição. Os produtos de ligação foram dessalinizados (QIAquick® PCR Purification Kit (QIAGEN)) antes que a amplificação por círculo rolante (RCA) seja realizada. A RCA foi realizada da seguinte forma: 40 ng de produtos de ligação foram misturados com 10 μl 10x de NEBuffer 4, 50 μl de 100 μM pd(N)8, e água (até 88,5 μl), aquecidos a 95°C por três minutos, e hibridizados por 65 ciclos (30 segundos cada ciclo) com cada ciclo diminuindo em 1°C. As reações hibridizadas foram incubadas de um dia para o outro a 30°C após a adição de 10 μl de mistura dNTP 10 mM, 1 μl de 100 x de BSA e 0,5 μl de ADN polimerase Phi29. Os produtos de RCA foram primeiro digeridos com NotI, fragmentos de ADN foram purificados (QIAquick® PCR Purification Kit), e adicionalmente digeridos com XhoI. Os produtos digeridos foram então ligados com AND ligase T4 DNA (Thermo Scientific). Após a purificação através de precipitação de etanol, os produtos de ligação foram transformados em células DH10B por eletroporação. Os plasmídeos purificados constituíram a biblioteca VH-vr123. Estes construtos compartilharam, cada um, as mesmas regiões de framework, a saber FW-H1 (SEQ ID NO:165), FW-H2 (SEQ ID NO:166), FW-H3 (SEQ ID NO:167) e FW-H4 (SEQ ID NO:168).
[180] As misturas de plasmídeos mencionadas acima para as duas bibliotecas de cadeia pesada foram digeridas com PvuI e Acc65I, e ligadas ao vetor de fagomídeo Fad40 que também foi digerido com as mesmas duas enzimas de restrição. As misturas de ligação foram transformadas em células DH10B, as bibliotecas resultantes foram purificadas, quantificadas e armazenadas para a montagem da biblioteca de fagomídeos completa.
[181] Para começar a construção das bibliotecas de cadeia leve, 18 grupos de oligos degenerados e 5 oligos definidos foram projetados para a região variável VL_vr1 e VL_vr2, respectivamente. Eles foram convertidos em ADN de fita dupla através do seguinte protocolo: 0,75 µl de oligos modelo 0,2 µM foram misturados com 10 µl 5x de tampão PrimeSTAR, 4 µl de mistura dNTP, 1 µl de 100 µM de iniciador direto, 1 µl de 100 µM de iniciador reverso, 0,5 µl de ADN polimerase PrimeSTAR HS (2,5 U/ µl) e 33 µl de água. As soluções PCR foram preaquecidas a 96°C por 5 minutos, então 14 ciclos (96°C por 15 segundos, 60°C por 15 segundos, 72°C por seis segundos) foram realizados, seguido de extensão a 72°C por três minutos. As VLs_vr1 foram amplificadas com o uso do par de iniciadores F_2898 (TACTTATGTAGGCGATCGGGTCACCATCACCTGC) (SEQ ID NO:217) e R_2898 (CGGAGCTTTTCCTGGTTTCTGTTGATAC) (SEQ ID NO:218), enquanto as VLa_vr2 foram amplificadas com o uso do par de iniciadores F_2013 (GAAACCAGGAAAAGCTCCGAAG) (SEQ ID NO:219) e R_2013 (CGTCCCGGAACCGGATCCAGAGAAGCGAG) (SEQ ID NO:220).
[182] As VLs_vr1 e VLs_vr2 de fita dupla foram reunidas através de sequências sobrepostas em suas extremidades 5' ou 3'. O protocolo usado foi da seguinte forma: 20 ng de modelos de VL_vr1 e 20 ng de VL_vr2 foram misturados com 10 µl 5x de tampão PrimeSTAR, 4 µl de mistura dNTP, 1 µl de 100 µM de iniciador F_2898, 1 µl de 100 µM de iniciador R_2013, 0,5 µl de AND polimerase PrimeSTAR HS (2,5 U/ µl), e água (até 50 µl), e as misturas foram preaquecidas a 96°C por 5 minutos, então 14 ciclos (96°C por 15 segundos, 60°C por 15 segundos, 72°C por 10 segundos) foram realizados, seguido de extensão a 72°C por três minutos. Estes fragmentos PCR foram, então, foram, então, purificados através de eletroforese em gel (GENEray Gel Extraction kit), digeridos com PvuI e BamHI (Thermo Scientific) e, subsequentemente clonados num vetor de filtro FTV015 digerido com as mesmas duas enzimas. A mistura de ligação foi transformada em células DH10B por eletroporação, e o número de colônias que excede 10 vezes a diversidade calculada foi coletado para preparação de plasmídeos. Os plasmídeos purificados constituíram a biblioteca VL-vr12
[183] 22 grupos de oligos degenerados que codificam VL_vr3 foram projetados, sintetizados e convertidos no ADN de fita dupla através do seguinte protocolo: 0,75 µl de oligos modelos 0,2 µM foram misturados com 10 µl 5x de tampão PrimeSTAR, 4 µl de mistura dNTP, 1 µl de 100 µM de iniciador direto F2929 (ACCATCAGCAGTCTGCAGCCGGAAGACTTCGCAAC) (SEQ ID NO:221), 1 µl de 100 µM de iniciador reverso R2929 (GATCTCCACCTTGGTACCCTGTCCGAA) (SEQ ID NO:222), 0,5 µl de ADN Polimerase PrimeSTAR HS (2,5 U/ µl) e 33 µl de água. As soluções PCR foram preaquecidas a 96°C por 5 minutos, então 14 ciclos (96°C por 15 segundos, 60°C por 15 segundos, 72°C por seis segundos) foram realizados, seguido de extensão a 72°C por três minutos. Os ADNs de fita dupla que codificam a VL_vr3 foram, então, purificados através de eletroforese em gel (GENEray Gel Extraction kit), digeridos com PstI e Acc65I (Thermo Scientific) e, subsequentemente clonados no vetor de filtro FTV013 digerido com as mesmas duas enzimas de restrição. A mistura de ligação foi transformada em células DH10B por eletroporação, e o número de colônias que excede 10 vezes a diversidade calculada foi coletado para preparação de plasmídeos. Os plasmídeos purificados constituíram a biblioteca VL-vr3
[184] Para montar a biblioteca VL de comprimento total, a mistura de plasmídeos de biblioteca VL-vr3 foi digerida com PstI e Acc65I (NEB), e os fragmentos que codificam vr3 foram purificados através de eletroforese em gel (GENEray Gel Extraction kit), e subsequentemente clonados na mistura de plasmídeos de biblioteca VL-vr12 que foi digerida com as mesmas duas enzimas de restrição. Os produtos de ligação foram transformados em células DH10B por eletroporação, e o número de colônias que excede 10 vezes a diversidade calculada foi coletado para preparação de plasmídeos. Os plasmídeos purificados constituíram a biblioteca VL-vr123. Os insertos vr123 a partir dos plasmídeos de biblioteca VL-vr123 foram, então, foram, então, movidos para o vetor de fagomídeo Fad40, com o uso das enzimas de restrição PvuI e Acc65I.
O tamanho da biblioteca contendo Fad40-vr123 atingiu 4*107.
[185] A biblioteca dinâmica era composta da biblioteca de cadeia pesada derivada da biblioteca VH-vr123 e da biblioteca de cadeia leve derivada da biblioteca Fad40-vr123. Tanto os plasmídeos de biblioteca VH-vr123 como os plasmídeos de biblioteca Fad40-vr123 foram digeridos com BspEI e SpeI (Thermo Scientific). Os fragmentos de ADN que codificam a cadeia pesada derivada da biblioteca VH-vr123 foram clonados nas cadeias principais de vetor derivadas da biblioteca Fad40-vr123. Os produtos de ligação foram dessalinizados (QIAquick® PCR Purification Kit (QIAGEN)) antes da amplificação por círculo rolante (RCA). A RCA foi realizada da seguinte forma: 40 ng de produtos de ligação foram misturados com 10 μl 10x de NEBuffer 4, 50 μl de 100 μM pd(N)8, e água (até 88,5 μl), aquecidos a 95°C por três minutos, e hibridizados por 65 ciclos (30 segundos cada ciclo) com cada ciclo diminuindo em 1°C. As reações hibridizadas foram incubadas de um dia para o outro a 30°C após a adição de 10 μl de mistura dNTP 10 mM, 1 μl de 100 x de BSA e 0,5 μl de ADN polimerase Phi29. Os produtos de RCA foram primeiro digeridos com NotI, fragmentos de ADN foram purificados (QIAquick® PCR Purification Kit), e adicionalmente digeridos com Acc65I. Os produtos digeridos foram então ligados com AND ligase T4 DNA (Thermo Scientific). Após a purificação através de precipitação de etanol, os produtos de ligação foram transformados em células ER2738 por eletroporação. Um número total de 1,4*1010 colônias foi coletado das placas (2xYT, 1% de glicose, 100 μg/ml de ampicilina) para produzir a biblioteca DPL6.
EXEMPLO 3: TRIAGEM DAS BIBLIOTECAS DE CADEIA PESADA COMUNS PARA ISOLAR
[186] Para preparar as partículas de fagomídeos de biblioteca para panning de antígeno, 5,0 litros de células ER2738 que abrigam a biblioteca dinâmica (descritas no Exemplo 2 acima) foram inoculadas em meio contendo 2xYT, 2% de glicose, 100 μg/ml de ampicilina e 12,5 μg/ml de tetraciclina numa OD600 inicial de 0,1. As culturas foram desenvolvidas a 37°C, agitadas a 250 rpm, até elas alcançarem a OD600 de 0,6 a 0,8. As células foram, então, foram, então, infectadas com fagos auxiliares M13KO7 numa multiplicidade de infecções (MOI) de 10 por 30 minutos a 37°C. As células ER2738 infectadas foram cultivadas de um dia para o outro a 22°C em 3,2 litros de meio contendo 2xYT, 100 μg/ml de ampicilina e 50 μg/ml de canamicina. Os sobrenadantes de cultura foram, então, foram, então, colhidos por centrifugação a 10000 rpm por 15 minutos, e filtrados através de um filtro de baixa ligação de 0,45 µm (Corning). As partículas de fagomídeo foram, então, precipitadas a partir do sobrenadante filtrado com o uso de PEG/NaCl e ressuspensas em PBS. Uma rodada adicional de precipitação de PEG/NaCl, seguida de ressuspensão em PBS, foi conduzida Títulos de fagos foram determinados por medição de OD268 (supondo que 1 unidade em OD268 seja aproximadamente 1*1013 partículas de fagos/ml) e confirmados por ensaio de placa. As partículas de fagomídeos de biblioteca foram foram armazenadas em glicerol a 20% a -80°C.
[187] As proteínas de antígeno a uma concentração de 1 a 30 μg/ml foram revestidas em tiras Maxisorp (Thermo Scientific, nº Cat. 446469) de um dia para o outro a 4°C. Múltiplos poços de antígenos foram preparados para cada biblioteca. Os poços revestidos foram bloqueados primeiro com 5% de leite em PBS por 1 a 2 horas à temperatura ambiente e lavados com PBS. Então1,100 μl/poço de solução de partículas de fagomídeos (tipicamente 1 a 5*1012 fagos em 2% de leite-PBS) foram adicionados em 4 poços paralelos e incubados por 1 a 2 horas. Os foram, então, poços foram, então, lavados diversas vezes com PBS com concentrações crescentes de Tween 20 (de 0,1% a 0,3%) e, finalmente com PBS sozinho. As partículas de fagomídeos ligadas foram eluídas a partir de poços com 100 µl de glicina-HCl 0,2 M por 10 minutos à temperatura ambiente.
Os fagos eluídos foram imediatamente neutralizados com 18 µl de Tris-HCl 1M (pH 9,1)
[188] Alternativamente, o panning de biblioteca de fagomídeos foi realizado com o uso de Dynabeads (M280, Streptavidin, Invitrogen, nº Cat.
60210) através de KingFisher (Thermo Scientific) de acordo com as instruções do fabricante. 300 µl de Dynabeads foram lavados com PBS e incubados com Fc anti-humano biotinilado por 20 minutos à temperatura ambiente. As microesferas foram, então, bloqueadas com BSA a 5% em PBS por uma hora à temperatura ambiente. Os antígenos de fusão Fc (70-100 pmols) foram capturados por uma incubação de uma hora à temperatura ambiente. As microesferas foram, então, foram, então, lavadas uma vez com PBS, e incubadas com 1 ml de solução de biblioteca de fagos (tipicamente 5*1012 a 1*1013 partículas de fagos em BSA-PBS a 5%) por 1 a 2 horas. As microesferas foram, então, foram, então, lavadas diversas vezes com PBS/Tween (0,1% a 0,3%) e PBS, e os fagos ligados foram eluídos a partir das microesferas com 100 µl de glicina-HCl 0,2 M por 10 minutos à temperatura ambiente. Os fagos eluídos foram imediatamente neutralizados com 18 µl de Tris-HCl 1M (pH 9,1). Um total de três ou quatro rodadas de panning foram conduzidas contra cada um dos antígenos, e um excesso de mais de 10 vezes de Fc humano purificado foi incluído para reduzir a ligação de fundo.
[189] Para alguns dos antígenos testados, 2 ml de antígenos (10 a 30 μg/ml) foram usados para revestir tubos imunes de um dia para o outro a 4°C. O volume de bloqueio, lavagem e eluição de soluções foi consequentemente aumentado.
[190] O grupamento de fagos enriquecidos eluídos foi adicionalmente amplificado da seguinte forma: Células ER2738 foram infectadas com as partículas de fagomídeos eluídas a 37°C por 30 minutos. As células infectadas foram, então, foram, então, plaqueadas em placas de ágar 2xYT com glicose a 2%, 100 μg/ml de ampicilina e 12,5 μg/ml de tetraciclina. As colônias foram, então, foram, então, colhidas a partir de placas, cultivadas em 100 ml de glicose a 2%, 100 μg/ml de ampicilina e 12,5 μg/ml de tetraciclina, e infectadas com fago auxiliar M13KO7. Os fagos amplificados foram purificados e quantificados pelos processos descritos acima. Geralmente, os fagos eluídos após a rodada final de panning foram usados para infectar células ER2738, e as colônias ER2738 resultantes foram selecionadas para ensaios de triagem ELISA de sobrenadante.
[191] Um ensaio Elisa em sanduíche sensível foi desenvolvido para medir os Fabs presentes em sobrenadante bacteriano. Microplacas foram revestidas com IgG policlonal anti-humana (específica de Fab) (Sigma I5260) para capturar Fabs presentes no sobrenadante bacteriano e, então, Fc anti- humano de cabra marcado com HRP foi usado para detectar a quantidade de Fabs capturados. A A450 de cada poço foi medida para determinar a atividade de ligação Fab. Os hits primários foram definidos como aqueles cujos sinais ELISA foram pelo menos duas vezes aqueles do fundo, e foram adicionalmente caracterizados no exemplo a seguir (Exemplo 4).
[192] Doze alvos humanos (TAGT-1, TAGT-2, TAGT-3, TAGT-4,
TAGT-5, TAGT-6, TAGT-7, TAGT-8H, TAGT-9, TAGT-10H, TAGT-11 e TAGT- 12), c (TAGT-8M e TAGT-10M), foram analisados com as bibliotecas construídas. Com estes 14 antígenos, um total de 690 hits positivos exclusivos com alta afinidade foram identificados. A maioria dos grupos variantes (Tabela 2) poderia formar anticorpos que se ligam a diferentes antígenos alvo, ou eram reativos de modo cruzado entre duas espécies (por exemplo, TAGT-8H e TAGT- 8M ligados). Os grupos variantes de ligantes confirmados eram subconjuntos dos grupos variantes projetados mostrados na Tabela 2. A maioria das variantes projetadas também foi encontrada nos ligantes confirmados (Tabela 3). (Consulte as fórmulas projetadas da Tabela 2 versus as fórmulas dos hits positivos da Tabela 3).
TABELA 3: FÓRMULAS PARA SEQUÊNCIAS VARIANTES PROJETADAS HVR-H1 E HVR- H2 A PARTIR DE HITS POSITIVOS Identida Identida Identida Identida Identida Identida Fórmula de Sequência de de de de de de de de de de de de Grupo Variante de Aminoácidos Resíduo Resíduo Resíduo Resíduo Resíduo Resíduo X1 X2 X3 X4 X5 X6 HVR-H1_1 D, G, N, X1TFX2X3YX4IHWV F, Y S, T A, G, W n/a n/a (SEQ ID NO: 198) S HVR-H1_2 A, D, G, YSIX1SGX2X3WX4WI S, T H, Y H, Y n/a n/a (SEQ ID NO: 199) N, S, T HVR-H1_3 A, G, S, FSLSTX1GVX2VX3WI G, S A, G n/a n/a n/a (SEQ ID NO: 200) T HVR-H2_1 LAX1IX2WX3X4DKX5YS A, D, S, L, R D, Y D, G R, S, Y P, T (SEQ ID NO: 201) X6SLKSRL Y HVR-H2_2 IGX1IX2X3SGSTYYSPS A, D, E S, Y H, Y n/a n/a n/a (SEQ ID NO: 208) LKSRV HVR-H2_3 IGX1IYX2SGX3TX4YNP D, E, S H, Y N, S N, Y n/a n/a (SEQ ID NO: 209) SLKSRV HVR-H2_4 VSX1ISGX2GX3X4TYY A, G, S, A, D, S, D, G, S S, T n/a n/a (SEQ ID NO: 204) ADSVKGRF V, Y Y HVR-H2_5 IGX1INPNX2GX3TX4YA I, R, W F, R D, G, S K, N n/a n/a (SEQ ID NO: 205) QKFQGRV HVR-H2_6 IGX1IX2PSX3GX4TX5Y I, R, W S, Y G, S D, G, S K, N n/a (SEQ ID NO: 206) AQKFQGRV HVR-H2_7 VGRIX1SKX2X3GX4TT K, R A, T D, Y G, Y P, S n/a (SEQ ID NO: 210) EYAAX5VKGRF n/a, não aplicável.
EXEMPLO 4: CARACTERIZAÇÃO DE ANTICORPOS IN VITRO
[193] Os Fabs que correspondem aos hits primários identificados no Exemplo 3 acima, que foram marcados em seu C-terminal do domínio CH1 com uma etiqueta His6, foram superexpressos em E. coli, e foram purificados através de resina Ni-NTA (Thermo Fisher Scientific) de acordo com as instruções do fabricante. Suas afinidades foram medidas pelo Sistema ForteBio Octet RED96. Resumidamente, os sensores AHC (biossensores de imersão e leitura por captura de IgG-Fc anti-humano) foram usados para capturar proteína de fusão Fc-His de antígeno (Sino Biological nº 10039-H03H), e imersos em poços contendo Fabs purificados que foram diluídos a 5 a 10 µg/ml com tampão cinético (Consulte, também, ForteBio, Anti-human IgG Capture (AHC) Biosensors, Inserto de Produto 41-0072-PD (2008); Yang et al. (2016), Anal. Biochem.
508:78-96). Os dados ForteBio adquiridos foram processados com software de Aquisição de Dados 7.1, e dados cinéticos foram adaptados a um modelo de ligação Langmuir 1:1. As temperaturas de fusão Fab foram medidas por ensaio de Fluorimetria de Varredura Diferencial (DSF). Resumidamente, o monitoramento de temperatura e fluorescência foi feito com o uso de uma máquina qPCR (PCR em tempo real). SYPRO® Orange foi diluído a partir de um estoque de 5000x 50 vezes a 100x com tampões PBS; 16 µl de cada Fab (~0,5 mg/ml) foram adicionados a cada poço numa microplaca de 96 poços e misturados com 4 µl de 100x de SYPRO® Orange. Um Sistema LightCycler®480 foi usado para medir a intensidade de fluorescência. O comprimento de onda de excitação foi ajustado em 483 nm, e o comprimento de onda de emissão foi ajustado em 568 nm. A temperatura foi aumentada de 25°C para 90°C num incremento de 1,2 a 1,3°C por minuto, e um tempo de equilíbrio de 15 segundos em cada temperatura de medição foi aplicado. Os dados foram analisados com o uso do Software LightCycler®480. O ponto médio de exposição hidrofóbica, Tm, foi definido como a temperatura que corresponde ao valor máximo do primeiro derivado da primeira transição de fluorescência. (Consulte, também, Lavinder et al. (2009), J. Am. Chem. Soc.131: 3794-3795; Ericsson et al. (2006), Analytical Biochemistry 357: 289-298; Phillips e Hernandez de la Pena (2011), Current Protocols in Mol. Biol. 94: 10.28.1-10.28.15).
[194] Os 12 antígenos alvo humanos (TAGT-1, TAGT-2, TAGT-3, TAGT-4, TAGT-5, TAGT-6, TAGT-7, TAGT-8H, TAGT-9, TAGT-10H, TAGT-11 e TAGT-12) eram proteínas não relacionadas que compartilham a identidade de sequência menor que 26%. A identidade de sequência entre antígeno humano TAGT-8H e antígeno de camundongo TAGT-8M foi de 70%, enquanto a identidade de sequência entre antígeno humano TAGT-10H e antígeno de camundongo TAGT-10M foi de 60%. Múltiplos anticorpos que direcionam 14 antígenos diferentes com alta afinidade poderiam ser identificados de maneira bem-sucedida e selecionados a partir das bibliotecas dinâmicas. As afinidades da maioria dos ligantes se situavam na faixa nanomolar, e algumas ainda alcançaram a faixa subnanomolar (Figura 2A). Além disto, os ligantes confirmados demonstraram boa estabilidade, com faixas Tm mostradas na Figura 2B.
EXEMPLO 5: APLICAÇÃO DAS BIBLIOTECAS DE CADEIA PESADA DINÂMICAS
[195] Para examinar adicionalmente a robustez e flexibilidade das bibliotecas de cadeia pesada, as bibliotecas foram analisadas contra os 14 antígenos alvo descritos no Exemplo 4 acima emparelhando-se as cadeias pesadas com diferentes bibliotecas de cadeia leve que têm uma diversidade que varia de 107 a 280, e por todo o caminho a uma única cadeia leve (isto é, uma cadeia leve comum). O limite do projeto de diversidade tanto nas bibliotecas de cadeia pesada como leve foi explorado cortando-se o tamanho físico de seus respectivos parceiros de emparelhamento (por exemplo, bibliotecas de cadeia leve com uma diversidade na faixa de 107 a 280, 20, e a uma única cadeia leve) enquanto explora a flexibilidade e/ou a diversidade dinâmica da própria cadeia leve.
A capacidade destas bibliotecas de cadeia leve dinâmicas no emparelhamento com as bibliotecas de cadeia pesada dinâmicas forneceu um forte racional para o projeto de biblioteca ao gerar e modificar geneticamente os diversos hits/leads de anticorpo contra antígenos alvo conhecidos e desafiadores.
Hits positivos que têm alta afinidade foram identificados a partir de cada biblioteca testada, e um total de 690 hits positivos exclusivos foram medidos e confirmados com dados de afinidade (Tabela 4). Sua capacidade para ligar diferentes alvos, assim como sua variação de epítopo (incluindo, porém sem limitação, as diferenças finas no reconhecimento de epítopo entre duas espécies, conforme mostrado pela reatividade de espécie cruzada com alvos humanos e murinos com identidade de sequência de aproximadamente 60%) foram examinadas.
Hits positivos que usam cada combinação de HVR-H1_1, HVR-H1_2 ou HVRH-1_3, e HVR-H2_1, HVR-H2_2 ou HVRH-2_3, HVR-H2_4, HVR-H_5, HVRH-2_6 ou HVR-H2_7 foram observados.
Estes resultados indicam a potência e o potencial de uso destas unidades de região hipervariável dinâmicas para produzir bibliotecas de anticorpo e proteína que reconhecem uma ampla faixa de alvos para reagentes terapêuticos, de diagnóstico e/ou pesquisa quando eles são enxertados ou projetados nos arcabouços de anticorpo (e/ou proteína alternativa). A natureza dinâmica destas unidades de região hipervariável de cadeia pesada no projeto e construção de arcabouços de anticorpo (e/ou não anticorpo), quando emparelhados com bibliotecas de cadeia leve que têm uma ampla diversidade (por exemplo, na faixa de 107 a 280, abaixo de uma única sequência exclusiva), é uma forte validação do conceito de projeto de anticorpo dinâmico para criar reagentes de ligação inovadores úteis em ambientes terapêuticos, de diagnóstico e/ou pesquisa.
TABELA 4: DADOS DE AFINIDADE PARA HITS CONFIRMADOS Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) HVR-H1_1 e HVR- 3757 TAGT-6 1,84E-08 H2_6 3762 TAGT-6 3,04E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 3780 TAGT-8 1,47E-09 3865 TAGT-11 9,48E-09 3869 TAGT-11 2,35E-08 3898 TAGT-11 1,83E-08 4030 TAGT-8 4,90E-09 4033 TAGT-8 8,75E-10 4043 TAGT-8 2,69E-09 4050 TAGT-10 1,65E-08 4084 TAGT-8 2,94E-09 4101 TAGT-8 2,12E-09 4103 TAGT-8 3,59E-10 4163 TAGT-8 1,37E-08 4614 TAGT-8 3,53E-10 4615 TAGT-8 2,28E-10 4617 TAGT-8 2,88E-10 4618 TAGT-8 1,08E-09 4620 TAGT-8 3,48E-10 4622 TAGT-8 2,74E-10 4623 TAGT-8 4,85E-10 4624 TAGT-8 1,00E-12 4625 TAGT-8 4,02E-10 4627 TAGT-8 1,82E-10 4630 TAGT-8 2,67E-10 4631 TAGT-8 1,83E-10 4633 TAGT-8 3,22E-10 4634 TAGT-8 2,07E-10 4638 TAGT-8 3,14E-10 4642 TAGT-8 1,89E-10 4644 TAGT-8 2,48E-10 4645 TAGT-8 2,96E-10 4650 TAGT-8 3,57E-10 4651 TAGT-8 3,01E-10 4652 TAGT-8 2,94E-10
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 4653 TAGT-8 3,27E-10 4654 TAGT-8 2,32E-10 4658 TAGT-8 1,42E-10 4659 TAGT-8 2,12E-10 4661 TAGT-8 1,62E-09 4662 TAGT-8 8,98E-10 4665 TAGT-8 3,69E-10 4666 TAGT-8 1,17E-09 4668 TAGT-8 5,79E-10 4670 TAGT-8 8,21E-10 4673 TAGT-8 3,23E-10 4674 TAGT-8 5,02E-10 4675 TAGT-8 1,00E-12 4676 TAGT-8 1,62E-10 4678 TAGT-8 5,98E-10 4681 TAGT-8 5,43E-10 4683 TAGT-8 8,97E-10 4684 TAGT-8 6,69E-10 4685 TAGT-8 4,78E-10 4686 TAGT-8 4,78E-10 4687 TAGT-8 4,08E-10 4689 TAGT-8 1,63E-10 4690 TAGT-8 4,67E-10 4792 TAGT-10 7,39E-09 5103 TAGT-10 2,67E-09 5149 TAGT-11 2,91E-09 5159 TAGT-11 4,09E-09 5160 TAGT-11 8,07E-09 5162 TAGT-11 9,87E-09 5163 TAGT-11 1,71E-08 5165 TAGT-11 4,06E-09 5709 TAGT-11 1,93E-08 5740 TAGT-11 7,26E-09
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 5752 TAGT-11 6,33E-09 5935 TAGT-12 8,78E-09 5970 TAGT-12 1,35E-08 5994 TAGT-12 1,58E-08 5997 TAGT-12 8,51E-09 6008 TAGT-12 5,10E-08 6032 TAGT-2 1,63E-08 6531 TAGT-3 1,08E-08 7030 TAGT-8 3,47E-08 7035 TAGT-8 3,04E-09 7038 TAGT-8 2,33E-08 7043 TAGT-8 1,34E-08 7044 TAGT-8 1,12E-09 7045 TAGT-8 1,11E-09 7055 TAGT-8 7,57E-10 7213 TAGT-12 8,87E-09 7215 TAGT-12 1,61E-08 7222 TAGT-12 1,26E-09 7231 TAGT-12 3,38E-09 7232 TAGT-12 8,06E-09 7243 TAGT-12 4,95E-09 7357 TAGT-3 6,14E-08 BH3002 TAGT-8 2,51E-10 BH3004 TAGT-8 3,00E-10 BH3005 TAGT-8 3,46E-10 BH3006 TAGT-8 1,94E-10 4025 TAGT-8 2,89E-09 4031 TAGT-8 1,06E-09 4054 TAGT-10 1,58E-08 HVR-H1_1 e HVR- 4055 TAGT-10 1,07E-08 H2_5 4060 TAGT-10 1,10E-08 4061 TAGT-10 3,42E-08 4065 TAGT-10 4,31E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 4066 TAGT-10 4,76E-08 4181 TAGT-10 4,27E-08 4182 TAGT-10 4,24E-09 4693 TAGT-10 4,87E-10 4696 TAGT-10 4,58E-10 4697 TAGT-10 6,21E-10 4698 TAGT-10 5,70E-10 4700 TAGT-10 2,62E-10 4701 TAGT-10 5,60E-10 4702 TAGT-10 5,02E-10 4703 TAGT-10 2,85E-10 4704 TAGT-10 6,65E-10 4705 TAGT-10 3,02E-10 4706 TAGT-10 2,50E-10 4707 TAGT-10 4,29E-10 4708 TAGT-10 5,29E-10 4710 TAGT-10 6,26E-10 4714 TAGT-10 4,46E-10 4717 TAGT-10 4,61E-10 4718 TAGT-10 5,32E-10 4722 TAGT-10 7,46E-10 4725 TAGT-10 4,84E-10 4729 TAGT-10 8,80E-10 4731 TAGT-10 4,67E-10 4732 TAGT-10 3,33E-10 4738 TAGT-10 5,34E-10 4741 TAGT-10 1,66E-09 4743 TAGT-10 7,40E-09 4744 TAGT-10 3,73E-10 4748 TAGT-10 3,92E-10 4749 TAGT-10 2,55E-10 4750 TAGT-10 7,86E-10 4752 TAGT-10 3,34E-09
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 4753 TAGT-10 3,43E-10 4759 TAGT-10 6,59E-10 4766 TAGT-10 4,09E-10 4788 TAGT-10 2,88E-10 4794 TAGT-10 5,56E-10 4798 TAGT-10 4,35E-09 4803 TAGT-10 1,88E-10 4805 TAGT-10 4,26E-10 4808 TAGT-10 8,28E-10 4909 TAGT-10 2,90E-10 5126 TAGT-8 9,54E-09 5129 TAGT-8 1,12E-09 5132 TAGT-8 3,06E-09 5145 TAGT-8 7,00E-09 5295 TAGT-9 2,21E-09 6179 TAGT-10 1,99E-09 6180 TAGT-10 6,11E-09 6183 TAGT-10 2,70E-09 6184 TAGT-10 <1,0E-12 6185 TAGT-10 1,57E-09 6187 TAGT-10 2,74E-08 6188 TAGT-10 8,76E-09 6189 TAGT-10 2,38E-10 6190 TAGT-10 2,55E-09 6191 TAGT-10 6,58E-11 6193 TAGT-10 3,18E-09 6194 TAGT-10 2,49E-10 6195 TAGT-10 4,30E-09 6196 TAGT-10 <1,0E-12 6197 TAGT-10 8,56E-09 6198 TAGT-10 2,85E-09 6202 TAGT-10 1,03E-09 6203 TAGT-10 1,05E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 6204 TAGT-10 6,46E-09 6206 TAGT-10 3,44E-09 6208 TAGT-10 3,50E-09 6209 TAGT-10 3,35E-09 6210 TAGT-10 5,17E-10 6212 TAGT-10 2,25E-09 6214 TAGT-10 1,51E-09 6216 TAGT-10 6,58E-10 6217 TAGT-10 4,99E-09 6219 TAGT-10 3,15E-09 6220 TAGT-10 3,45E-09 6539 TAGT-4 3,45E-09 7025 TAGT-8 4,87E-08 7036 TAGT-8 1,59E-08 7037 TAGT-8 2,10E-08 7047 TAGT-8 2,15E-08 7066 TAGT-8 1,80E-08 7067 TAGT-8 3,41E-08 7068 TAGT-8 1,11E-08 7073 TAGT-8 3,19E-09 4074 TAGT-6 1,95E-08 4131 TAGT-6 <1,0E-12 4132 TAGT-6 <1,0E-12 4200 TAGT-6 5,68E-08 4216 TAGT-6 2,59E-08 4878 TAGT-12 4,07E-09 HVR-H1_3 e HVR- 5291 TAGT-1 6,57E-09 H2_4 5312 TAGT-6 4,50E-07 5326 TAGT-6 7,84E-07 5345 TAGT-6 1,02E-08 5346 TAGT-6 1,61E-08 5347 TAGT-6 1,21E-08 5348 TAGT-6 1,02E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 5355 TAGT-6 8,71E-10 5364 TAGT-6 7,26E-09 5367 TAGT-6 1,49E-08 5371 TAGT-6 3,97E-09 5405 TAGT-6 1,01E-08 5415 TAGT-6 1,64E-08 5417 TAGT-6 4,04E-08 5418 TAGT-6 2,02E-08 5905 TAGT-12 3,83E-08 5910 TAGT-12 3,30E-08 5911 TAGT-12 3,35E-08 5912 TAGT-12 1,68E-08 5914 TAGT-12 3,30E-08 5915 TAGT-12 1,82E-08 5918 TAGT-12 3,46E-08 5919 TAGT-12 2,38E-08 5920 TAGT-12 1,88E-08 5922 TAGT-12 1,95E-08 5923 TAGT-12 1,60E-08 5927 TAGT-12 4,35E-08 5929 TAGT-12 3,20E-08 5961 TAGT-12 2,41E-08 5962 TAGT-12 8,06E-08 5963 TAGT-12 2,07E-08 5964 TAGT-12 1,40E-08 5974 TAGT-12 5,02E-08 5976 TAGT-12 2,88E-08 5977 TAGT-12 2,70E-08 5978 TAGT-12 3,25E-08 5996 TAGT-12 2,21E-08 5999 TAGT-12 6,29E-08 6000 TAGT-12 7,86E-08 6004 TAGT-12 5,50E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 6543 TAGT-3 6,78E-08 7077 TAGT-6 1,88E-08 7078 TAGT-6 2,52E-08 7079 TAGT-6 2,99E-08 7080 TAGT-6 2,44E-08 7081 TAGT-6 4,31E-08 7087 TAGT-6 6,96E-08 7088 TAGT-6 4,36E-08 7090 TAGT-6 5,55E-08 7100 TAGT-6 3,50E-08 7105 TAGT-6 3,33E-08 7107 TAGT-6 1,22E-07 7109 TAGT-6 3,20E-08 7120 TAGT-6 3,45E-08 7128 TAGT-6 3,97E-08 7131 TAGT-6 3,04E-08 7133 TAGT-6 4,03E-08 7135 TAGT-6 3,17E-08 7190 TAGT-6 1,03E-08 7201 TAGT-6 3,26E-08 7209 TAGT-12 9,36E-09 7210 TAGT-12 9,85E-09 7211 TAGT-12 1,26E-08 7216 TAGT-12 1,88E-08 7218 TAGT-12 1,49E-08 7219 TAGT-12 1,44E-08 7220 TAGT-12 9,12E-09 7225 TAGT-12 9,53E-09 7226 TAGT-12 7,57E-09 7235 TAGT-12 2,18E-08 7237 TAGT-12 2,13E-08 7240 TAGT-12 1,17E-08 7241 TAGT-12 6,43E-09
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 7242 TAGT-12 1,71E-08 7245 TAGT-12 1,38E-08 7246 TAGT-12 6,22E-09 7247 TAGT-12 8,93E-09 7251 TAGT-12 2,69E-08 7252 TAGT-12 9,56E-09 7253 TAGT-12 1,62E-08 7255 TAGT-12 1,20E-08 7256 TAGT-12 7,08E-09 7257 TAGT-12 1,11E-08 7420 TAGT-9 1,38E-08 7425 TAGT-9 1,77E-08 3761 TAGT-6 9,65E-08 3763 TAGT-6 9,30E-09 4029 TAGT-8 1,89E-09 4034 TAGT-8 4,27E-09 4045 TAGT-8 1,10E-09 4073 TAGT-6 <1,0E-12 4075 TAGT-6 <1,0E-12 4076 TAGT-6 7,44E-09 4077 TAGT-6 <1,0E-12 4123 TAGT-6 5,98E-09 HVR-H1_2 e HVR- 4124 TAGT-6 4,43E-09 H2_4 4125 TAGT-6 <1,0E-12 4126 TAGT-6 7,27E-09 4127 TAGT-6 <1,0E-12 4129 TAGT-6 <1,0E-12 4133 TAGT-6 3,90E-10 4135 TAGT-6 <1,0E-12 4137 TAGT-6 <1,0E-12 4140 TAGT-6 <1,0E-12 4141 TAGT-6 <1,0E-12 4201 TAGT-6 1,41E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 4217 TAGT-6 9,67E-08 4218 TAGT-6 2,85E-08 4222 TAGT-6 5,55E-08 4816 TAGT-12 5,32E-09 4842 TAGT-12 4,01E-10 4895 TAGT-7 6,20E-09 4903 TAGT-12 1,91E-09 5212 TAGT-1 9,19E-09 5218 TAGT-1 6,04E-09 5225 TAGT-1 3,10E-10 5235 TAGT-1 1,41E-08 5236 TAGT-1 1,49E-08 5272 TAGT-1 2,49E-08 5275 TAGT-1 9,65E-09 5282 TAGT-1 1,07E-08 5298 TAGT-6 3,41E-07 5301 TAGT-6 2,61E-07 5316 TAGT-6 1,14E-08 5317 TAGT-6 3,34E-07 5320 TAGT-6 6,13E-07 5321 TAGT-6 7,16E-07 5328 TAGT-6 3,42E-07 5329 TAGT-6 2,84E-06 5336 TAGT-6 6,04E-07 5341 TAGT-6 2,93E-08 5349 TAGT-6 6,20E-09 5351 TAGT-6 7,29E-09 5357 TAGT-6 7,14E-09 5360 TAGT-6 2,41E-08 5363 TAGT-6 9,87E-09 5369 TAGT-6 2,05E-08 5399 TAGT-9 3,62E-08 5403 TAGT-6 8,26E-09
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 5408 TAGT-6 2,36E-08 5409 TAGT-6 1,70E-08 5411 TAGT-6 1,25E-08 5416 TAGT-6 1,09E-08 5420 TAGT-6 1,41E-08 5431 TAGT-9 1,19E-08 5437 TAGT-9 1,92E-08 5694 TAGT-11 9,45E-09 5716 TAGT-11 8,14E-09 5732 TAGT-11 5,24E-09 5906 TAGT-12 1,50E-08 5926 TAGT-12 3,23E-08 5933 TAGT-12 3,13E-08 5983 TAGT-12 2,09E-08 5992 TAGT-12 1,70E-08 5993 TAGT-12 1,13E-08 5995 TAGT-12 1,42E-08 6473 TAGT-4 2,30E-08 6555 TAGT-3 4,18E-08 7097 TAGT-6 2,43E-08 7183 TAGT-6 1,48E-08 7262 TAGT-5 2,63E-09 7264 TAGT-5 3,17E-09 7312 TAGT-5 3,11E-09 7315 TAGT-5 5,15E-09 7426 TAGT-9 1,12E-08 7427 TAGT-9 5,58E-09 3760 TAGT-6 1,26E-08 4048 TAGT-10 3,24E-09 HVR-H1_1 e HVR- 4049 TAGT-10 9,37E-09 H2_4 4051 TAGT-10 1,80E-08 4056 TAGT-10 1,09E-08 4058 TAGT-10 1,13E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 4062 TAGT-10 2,11E-08 4063 TAGT-10 1,90E-08 4067 TAGT-10 1,97E-08 4080 TAGT-6 <1,0E-12 4130 TAGT-6 1,00E-09 4138 TAGT-6 1,60E-08 4139 TAGT-6 1,65E-09 4723 TAGT-10 9,11E-10 4733 TAGT-10 3,05E-10 4734 TAGT-10 5,72E-10 4767 TAGT-10 2,77E-10 4771 TAGT-10 7,23E-10 4797 TAGT-10 5,63E-10 4807 TAGT-10 1,17E-09 4829 TAGT-12 3,36E-09 5194 TAGT-1 1,29E-08 5200 TAGT-1 1,53E-08 5210 TAGT-1 3,41E-09 5297 TAGT-6 1,77E-06 5300 TAGT-6 1,53E-08 5315 TAGT-6 2,10E-06 5353 TAGT-6 1,61E-08 5354 TAGT-6 4,96E-09 5438 TAGT-9 9,30E-09 5510 TAGT-2 2,62E-09 5513 TAGT-2 1,07E-09 5526 TAGT-2 1,54E-09 5528 TAGT-2 4,55E-09 5532 TAGT-2 3,65E-09 5553 TAGT-2 6,83E-09 5554 TAGT-2 2,88E-09 5557 TAGT-2 3,24E-09 5558 TAGT-2 2,43E-09
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 5561 TAGT-2 1,64E-08 5565 TAGT-2 3,02E-09 5568 TAGT-2 1,14E-09 5600 TAGT-2 5,33E-09 5612 TAGT-2 7,85E-09 5614 TAGT-2 5,29E-09 5622 TAGT-2 3,06E-09 5642 TAGT-2 3,84E-09 5710 TAGT-11 1,01E-08 5739 TAGT-11 1,29E-08 5745 TAGT-11 1,06E-08 5746 TAGT-11 5,00E-09 5754 TAGT-11 9,52E-09 6221 TAGT-10 6,92E-10 6471 TAGT-4 3,05E-08 6536 TAGT-4 2,03E-09 6537 TAGT-4 1,85E-09 6540 TAGT-4 8,08E-09 7204 TAGT-5 2,33E-09 7212 TAGT-12 1,70E-08 7260 TAGT-5 2,30E-09 7271 TAGT-5 3,13E-08 7276 TAGT-5 1,02E-08 7311 TAGT-5 9,20E-09 7317 TAGT-5 2,02E-08 7323 TAGT-5 3,23E-09 7365 TAGT-5 1,82E-09 7366 TAGT-5 3,76E-09 7369 TAGT-5 2,46E-09 7371 TAGT-5 2,31E-08 7373 TAGT-5 5,13E-09 7374 TAGT-5 1,97E-08 7378 TAGT-5 5,66E-09
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 7411 TAGT-4 3,82E-08 7415 TAGT-4 9,33E-08 7418 TAGT-9 3,41E-08 7419 TAGT-9 1,72E-08 7429 TAGT-9 2,12E-08 7431 TAGT-9 3,53E-08 4027 TAGT-8 1,55E-09 4027 TAGT-8M 3,81E-09 4032 TAGT-8 5,11E-09 4032 TAGT-8M 4,84E-09 4038 TAGT-8 2,98E-09 4204 TAGT-10 6,83E-09 4204 TAGT-10M 6,89E-09 4813 TAGT-12 2,45E-10 4828 TAGT-12 1,10E-09 4849 TAGT-12 8,40E-10 4850 TAGT-12 1,23E-09 4874 TAGT-12 4,19E-09 4925 TAGT-7 1,32E-08 HVR-H1_2 e HVR- 4928 TAGT-7 3,26E-08 H2_6 5012 TAGT-8 1,76E-09 5012 TAGT-8M 2,03E-09 5014 TAGT-8 2,43E-09 5014 TAGT-8M 3,87E-09 5016 TAGT-8 3,56E-09 5016 TAGT-8M 2,84E-09 5020 TAGT-8 8,78E-10 5020 TAGT-8M 7,00E-09 5022 TAGT-8 3,68E-09 5022 TAGT-8M 3,03E-09 5023 TAGT-8 9,46E-10 5023 TAGT-8M 5,77E-09 5024 TAGT-8 4,52E-09
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 5024 TAGT-8M 3,48E-09 5030 TAGT-8 7,03E-10 5030 TAGT-8M 4,27E-09 5037 TAGT-8 1,06E-09 5037 TAGT-8M 4,36E-09 5039 TAGT-8 4,30E-10 5039 TAGT-8M 2,69E-09 5040 TAGT-8 4,37E-10 5040 TAGT-8M 3,13E-09 5041 TAGT-8 1,68E-09 5041 TAGT-8M 1,67E-09 5045 TAGT-8 1,00E-09 5045 TAGT-8M 3,91E-09 5048 TAGT-8 5,10E-10 5048 TAGT-8M 2,52E-09 5066 TAGT-8 5,23E-09 5066 TAGT-8M 9,99E-09 5070 TAGT-8 1,34E-09 5070 TAGT-8M 6,63E-09 5074 TAGT-8 4,31E-09 5074 TAGT-8M 2,98E-09 5082 TAGT-8 4,79E-09 5082 TAGT-8M 3,23E-09 5113 TAGT-12 6,80E-09 5114 TAGT-12 3,42E-08 5116 TAGT-12 1,46E-08 5119 TAGT-12 7,54E-09 5121 TAGT-12 9,29E-09 5123 TAGT-12 5,67E-09 5125 TAGT-12 2,42E-08 5128 TAGT-12 7,12E-09 5138 TAGT-12 8,55E-09 5273 TAGT-1 1,34E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 5423 TAGT-9 4,90E-09 5720 TAGT-11 1,93E-08 5924 TAGT-12 5,95E-08 5934 TAGT-12 1,66E-08 6026 TAGT-2 2,95E-09 6526 TAGT-4 1,16E-08 7040 TAGT-8 2,72E-08 7228 TAGT-12 7,62E-09 7244 TAGT-12 1,05E-08 7254 TAGT-12 1,07E-08 7258 TAGT-12 9,72E-09 7358 TAGT-3 5,15E-08 7442 TAGT-9 6,83E-09 7443 TAGT-9 1,27E-08 4052 TAGT-10 9,73E-09 4059 TAGT-10 3,30E-07 5094 TAGT-10 4,34E-08 5095 TAGT-10 1,27E-08 5097 TAGT-10 1,27E-08 5099 TAGT-10 4,20E-08 5109 TAGT-10 2,59E-08 5215 TAGT-1 6,64E-09 5271 TAGT-1 1,24E-08 HVR-H1_2 e HVR- 5274 TAGT-1 2,52E-08 H2_1 5299 TAGT-6 1,37E-08 5432 TAGT-9 4,83E-09 5491 TAGT-11 1,43E-08 5744 TAGT-11 1,14E-08 5936 TAGT-10 1,75E-08 6475 TAGT-4 7,22E-09 7207 TAGT-5 4,99E-10 7272 TAGT-5 3,49E-09 7313 TAGT-5 5,69E-09
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 7388 TAGT-5 2,72E-09 7389 TAGT-5 4,50E-09 7395 TAGT-5 1,65E-08 7421 TAGT-9 2,47E-08 7440 TAGT-9 6,79E-09 7513 TAGT-9 8,43E-09 4812 TAGT-12 2,89E-09 4815 TAGT-12 5,91E-09 4817 TAGT-12 2,06E-09 4818 TAGT-12 1,02E-09 4836 TAGT-12 2,49E-09 4841 TAGT-12 4,50E-10 4846 TAGT-12 3,19E-09 4852 TAGT-12 2,26E-09 4860 TAGT-12 2,44E-09 4876 TAGT-12 7,75E-09 4880 TAGT-12 2,77E-09 HVR-H1_2 e HVR- 4897 TAGT-12 6,83E-10 H2_2 4901 TAGT-12 3,19E-09 4904 TAGT-12 5,39E-09 5115 TAGT-12 1,16E-08 5220 TAGT-1 5,03E-09 5404 TAGT-6 3,30E-09 5421 TAGT-9 1,05E-08 5422 TAGT-9 5,12E-09 5584 TAGT-2 1,76E-09 5658 TAGT-11 2,61E-10 7273 TAGT-5 6,01E-09 7316 TAGT-5 2,04E-08 7394 TAGT-5 8,75E-09 4037 TAGT-8 5,53E-09 HVR-H1_2 e HVR- 4041 TAGT-8 1,54E-09 H2_3 4180 TAGT-10 7,39E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 4809 TAGT-12 3,69E-10 4820 TAGT-12 3,96E-09 4825 TAGT-12 6,05E-09 4837 TAGT-12 5,36E-09 4838 TAGT-12 2,52E-09 4839 TAGT-12 6,16E-09 4844 TAGT-12 6,95E-10 4847 TAGT-12 3,64E-10 4879 TAGT-12 3,13E-09 4911 TAGT-7 1,50E-08 5228 TAGT-1 3,06E-08 5292 TAGT-1 1,57E-08 5398 TAGT-9 1,97E-08 7248 TAGT-12 1,28E-08 7249 TAGT-12 5,36E-09 7380 TAGT-5 1,24E-08 7386 TAGT-5 1,32E-08 7444 TAGT-9 5,53E-09 7508 TAGT-9 1,36E-08 4097 TAGT-8 6,24E-09 5202 TAGT-1 1,50E-08 5203 TAGT-1 1,31E-08 5207 TAGT-1 7,44E-09 5221 TAGT-1 1,18E-08 5226 TAGT-1 8,36E-09 HVR-H1_1 e HVR- 5230 TAGT-1 9,21E-09 H2_1 5238 TAGT-1 5,04E-08 5280 TAGT-1 8,43E-09 5281 TAGT-1 4,70E-09 5285 TAGT-1 1,42E-08 5288 TAGT-1 1,08E-08 5425 TAGT-9 2,15E-08 7032 TAGT-8 2,08E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 7268 TAGT-5 3,76E-09 7277 TAGT-5 2,56E-09 7278 TAGT-5 1,53E-08 7390 TAGT-5 1,44E-09 4102 TAGT-8 2,54E-09 4116 TAGT-10 <1,0E-12 4827 TAGT-12 1,51E-09 4834 TAGT-12 9,68E-10 4851 TAGT-12 3,84E-10 4863 TAGT-12 6,63E-10 4875 TAGT-12 1,03E-09 5217 TAGT-1 1,08E-08 HVR-H1_2 e HVR- 5921 TAGT-12 8,01E-09 H2_5 5930 TAGT-12 5,66E-09 5932 TAGT-12 1,12E-08 5968 TAGT-12 1,27E-08 5980 TAGT-12 1,14E-08 5990 TAGT-12 1,15E-08 6010 TAGT-12 2,83E-08 7310 TAGT-5 1,41E-08 7379 TAGT-5 5,43E-09 4161 TAGT-8 2,98E-08 4177 TAGT-8 1,48E-08 4823 TAGT-12 2,62E-09 5192 TAGT-1 2,16E-08 5193 TAGT-1 3,69E-08 HVR-H1_1 e HVR- 5204 TAGT-1 1,48E-08 H2_3 5234 TAGT-1 1,28E-08 5237 TAGT-1 3,28E-09 5615 TAGT-2 1,22E-08 5733 TAGT-11 7,15E-09 5741 TAGT-11 1,91E-08 7324 TAGT-5 5,68E-09
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 7367 TAGT-5 2,04E-08 7372 TAGT-5 7,27E-10 7506 TAGT-9 7,73E-09 5208 TAGT-1 3,36E-09 5283 TAGT-1 2,88E-08 5303 TAGT-6 5,12E-09 5310 TAGT-6 5,72E-09 5314 TAGT-6 8,39E-09 HVR-H1_3 e HVR- 5318 TAGT-6 1,90E-08 H2_1 5342 TAGT-6 3,89E-08 5359 TAGT-6 7,10E-10 5365 TAGT-6 2,56E-09 5370 TAGT-6 1,91E-09 5413 TAGT-6 9,93E-10 7275 TAGT-5 6,85E-09 4840 TAGT-12 2,08E-09 5195 TAGT-1 2,62E-08 5201 TAGT-1 5,33E-09 5211 TAGT-1 2,11E-09 5216 TAGT-1 3,08E-09 HVR-H1_1 e HVR- 5286 TAGT-1 6,34E-09 H2_2 5287 TAGT-1 1,02E-08 5290 TAGT-1 6,73E-09 5722 TAGT-11 3,08E-08 6030 TAGT-2 8,27E-08 7370 TAGT-5 1,07E-08 7385 TAGT-5 3,26E-09 4036 TAGT-8 3,13E-09 4096 TAGT-8 2,70E-09 HVR-H1_3 e HVR- 5323 TAGT-6 1,04E-08 H2_2 5387 TAGT-8 1,13E-09 5756 TAGT-11 3,00E-08 5985 TAGT-12 3,92E-08
Uso de HVR-H1 e H2 ID de Hit ID Alvo Kd (M) 5986 TAGT-12 4,65E-08 7163 TAGT-6 1,26E-08 7375 TAGT-5 6,03E-09 7391 TAGT-5 1,35E-08 4026 TAGT-8 3,08E-09 4858 TAGT-12 5,86E-09 6533 TAGT-3 2,62E-08 HVR-H1_3 e HVR- 7159 TAGT-6 3,79E-08 H2_3 7166 TAGT-6 1,24E-08 7239 TAGT-12 2,40E-08 7274 TAGT-5 1,63E-08 7433 TAGT-9 1,67E-08 4857 TAGT-12 4,05E-09 HVR-H1_3 e HVR- 5227 TAGT-1 1,04E-08 H2_6 7221 TAGT-12 5,58E-09 7229 TAGT-12 8,91E-09 4220 TAGT-6 5,72E-08 HVR-H1_2 e HVR- 4861 TAGT-12 5,11E-09 H2_7 5284 TAGT-1 1,84E-08 HVR-H1_1 e HVR- 4079 TAGT-6 3,15E-08 H2_7 7129 TAGT-6 1,90E-08 HVR-H1_3 e HVR- 4072 TAGT-6 6,95E-09 H2_5 HVR-H1_3 e HVR- 5333 TAGT-6 5,02E-09 H2_7
[196] Foram descobertos hits contendo as mesmas sequências HVR-H1 e HVR-H2 que poderiam se ligar a antígenos alvos diferentes quando estas sequências HVR-H1 e 2 foram emparelhadas com sequências HVR-H3 e VL diferentes. Por exemplo, IDs de Hit 4029, 7097 e 5906 continham a mesma combinação HVR-H1 e HVR-H2 (HVR-H1_2 e HVR-H2_4), porém, foram emparelhados com sequências HVR-H3 e VL diferentes, e ligaram três antígenos alvos diferentes (TAGT-8, TAGT-6, e TAGT-12, respectivamente). Os hits 7040 e 5924 continham a mesma combinação HVR-H1 e HVR-H2 (HVR-H1_2 e HVR- H2_6), porém foram emparelhados com sequências HVR-H3 e VL diferentes, e ligaram dois antígenos alvos diferentes (TAGT-8 e TAGT-12, respectivamente).
[197] A Tabela 5 abaixo mostra o uso de sequência e o número de alvos ligados às HVRs-H1 e HVR-H2 identificadas durante as análises de biblioteca. Sem desejar se ater à teoria, imagina-se que um alto número de antígenos ligados por um anticorpo que compreende uma região hipervariável pode ser indicativo de um alto grau de flexibilidade daquela região hipervariável particular, enquanto um uso de segmento alto de uma determinada região hipervariável pode ser indicativo de enovelamento robusto da região hipervariável (e sequência de polipeptídeos circundante).
TABELA 5: CAPACIDADE DE LIGAÇÃO ALVO DE VARIANTES PROJETADAS HVR-H1 E HVR-H2 Porcentagem de Uso Número de Antígenos ID Variante de Sequência atingidos dentre 14 HVR-H1_1 45,0% 11 HVR-H1_2 33,8% 14 HVR-H1_3 19,1% 8 HVR-H2_1 7,9% 8 HVR-H2_2 6,6% 8 HVR-H2_3 6,8% 11 HVR-H2_4 36,4% 12 HVR-H2_5 16,8% 8 HVR-H2_6 21,8% 13 HVR-H2_7 0,9% 3
[198] A Tabela 6 abaixo mostra o uso de sequência e o número de antígenos ligados às combinações HVR-H1 e HVR-H2 identificadas durante as análises de biblioteca.
TABELA 6: USO DE COMBINAÇÃO DE VARIANTES PROJETADAS HVR-H1 E HVR-H2 Número de Classificação ID de ID de Porcentagem Antígenos de Variante Variante de Uso de atingidos dentre Preferência HVR-H1 HVR-H2 Sequência 14 Camada 1 HVR-H1_2 HVR-H2_6 7,6% 11 Camada 1 HVR-H1_2 HVR-H2_4 11,6% 10 Camada 1 HVR-H1_1 HVR-H2_4 11,2% 9 Camada 1 HVR-H1_1 HVR-H2_6 13,5% 7 Camada 1 HVR-H1_2 HVR-H2_1 3,6% 7 Camada 1 HVR-H1_2 HVR-H2_2 3,4% 7 Camada 1 HVR-H1_2 HVR-H2_3 3,4% 7 Camada 1 HVR-H1_1 HVR-H2_3 2,2% 7 Camada 1 HVR-H1_3 HVR-H2_3 1,1% 6 Camada 1 HVR-H1_3 HVR-H2_4 13,1% 5 Camada 1 HVR-H1_2 HVR-H2_5 2,4% 5 Camada 1 HVR-H1_1 HVR-H2_2 1,7% 5 Camada 1 HVR-H1_3 HVR-H2_2 1,4% 5 Camada 1 HVR-H1_1 HVR-H2_5 13,4% 4 Camada 2 HVR-H1_1 HVR-H2_1 2,6% 4 Camada 2 HVR-H1_3 HVR-H2_1 1,7% 3 Camada 2 HVR-H1_2 HVR-H2_7 0,4% 3 Camada 2 HVR-H1_3 HVR-H2_6 0,6% 2 Camada 3 HVR-H1_1 HVR-H2_7 0,3% 1 Camada 3 HVR-H1_3 HVR-H2_5 0,1% 1 Camada 3 HVR-H1_3 HVR-H2_7 0,1% 1
[199] Foram identificadas 74 sequências HVR-H1 (SEQ ID NOS: 1-52 e 137-158, Tabela 1) e 90 sequências HVR-H2 (SEQ ID NOS: 53-136 e 159-164, Tabela 1) que aparecerem em >1 dos hits de anticorpo exclusivos descritos acima. Quando combinadas com várias HVR-H3s e domínios de cadeia variável, estas HVRs foram capazes de formar anticorpos que se ligam a múltiplos antígenos. Foram identificadas 65 novas combinações de sequências
HVR-H1 e HVR-H2 que apareceram em >1 dos hits de anticorpo exclusivos descritos. A Tabela 7 abaixo mostra o uso de HVR-H1 e HVR-H2 e o número de antígenos ligados durante a análise de biblioteca com o uso destas novas sequências HVR.
TABELA 7: USO DE NOVAS SEQUÊNCIAS HVR-H1 E HVR-H2 Número de Antígenos SEQ ID NO: Número de hits atingidos dentre 14 1 12 8 5 10 7 16 9 6 8 37 5 22 12 5 21 7 5 31 14 4 12 12 4 4 11 4 7 11 4 26 7 4 19 6 4 23 6 4 47 6 4 18 5 4 24 5 4 28 5 4 9 5 4 38 4 4 49 4 4 25 16 3 50 13 3 51 8 3 27 5 3 11 5 3
Número de Antígenos SEQ ID NO: Número de hits atingidos dentre 14 40 4 3 43 4 3 20 3 3 33 3 3 42 3 3 45 3 3 13 27 2 34 7 2 35 5 2 41 5 2 3 4 2 15 3 2 30 3 2 44 3 2 46 3 2 32 2 2 37 2 2 39 2 2 2 2 2 14 2 2 48 6 1 29 3 1 6 3 1 17 2 1 36 2 1 52 2 1 10 2 1
63 40 7 93 12 5 66 8 5
Número de Antígenos SEQ ID NO: Número de hits atingidos dentre 14 122 7 5 65 6 5 105 5 5 124 14 4 123 7 4 70 4 4 110 46 3 129 26 3 121 15 3 89 9 3 134 9 3 128 7 3 60 4 3 67 4 3 95 3 3 117 14 2 82 11 2 130 11 2 132 10 2 53 9 2 131 7 2 109 6 2 72 5 2 118 5 2 100 4 2 103 4 2 106 4 2 61 3 2 71 3 2 75 3 2 77 3 2
Número de Antígenos SEQ ID NO: Número de hits atingidos dentre 14 79 3 2 108 3 2 112 3 2 113 3 2 55 2 2 56 2 2 59 2 2 62 2 2 64 2 2 68 2 2 69 2 2 73 2 2 74 2 2 76 2 2 78 2 2 81 2 2 83 2 2 86 2 2 90 2 2 91 2 2 99 2 2 107 2 2 135 2 2 136 2 2 126 29 1 116 10 1 87 5 1 84 4 1 85 4 1 92 4 1 104 4 1
Número de Antígenos SEQ ID NO: Número de hits atingidos dentre 14 57 3 1 80 3 1 94 3 1 96 3 1 101 3 1 111 3 1 114 3 1 120 3 1 133 3 1 54 2 1 58 2 1 88 2 1 97 2 1 98 2 1 102 2 1 115 2 1 119 2 1 125 2 1 127 2 1
[200] Tabela 8 abaixo mostra o uso e o número de antígenos ligados para a combinação de novas sequências HVR-H1 e HVR-H2. TABELA 8: NOVO USO DE COMBINAÇÃO DE HVR-H1 E HVR-H2 Classificação HVR-H1 SEQ HVR-H2 SEQ Número de Antígenos Número de hits de Preferência ID NO: ID NO: atingidos dentre 14 Camada 1 157 63 4 3 Camada 1 1 122 4 3 Camada 1 138 63 3 3 Camada 1 154 63 5 2 Camada 1 158 161 5 2 Camada 1 158 63 3 2 Camada 1 145 128 3 2
Classificação HVR-H1 SEQ HVR-H2 SEQ Número de Antígenos Número de hits de Preferência ID NO: ID NO: atingidos dentre 14
Camada 1 22 61 2 2 Camada 1 31 63 2 2 Camada 1 153 63 2 2 Camada 1 155 67 2 2 Camada 1 156 100 2 2 Camada 1 51 162 2 2 Camada 1 138 123 2 2 Camada 1 139 110 38 1 Camada 1 8 126 29 1 Camada 1 13 129 21 1 Camada 1 31 124 11 1 Camada 1 25 130 10 1 Camada 1 150 132 9 1 Camada 1 158 162 8 1 Camada 1 12 82 8 1 Camada 1 149 117 7 1 Camada 1 7 134 6 1 Camada 2 26 53 4 1 Camada 2 151 53 4 1 Camada 2 34 63 3 1 Camada 2 50 162 3 1 Camada 2 158 104 3 1 Camada 2 5 121 3 1 Camada 2 6 116 3 1 Camada 2 7 121 3 1 Camada 2 17 63 2 1 Camada 2 25 101 2 1 Camada 2 25 114 2 1 Camada 2 29 112 2 1 Camada 2 152 63 2 1 Camada 2 156 89 2 1 Camada 2 157 94 2 1 Camada 2 48 58 2 1
Classificação HVR-H1 SEQ HVR-H2 SEQ Número de Antígenos Número de hits de Preferência ID NO: ID NO: atingidos dentre 14 Camada 2 50 89 2 1 Camada 2 50 163 2 1 Camada 2 158 160 2 1 Camada 2 158 87 2 1 Camada 2 158 92 2 1 Camada 2 158 93 2 1 Camada 2 158 97 2 1 Camada 2 158 103 2 1 Camada 2 158 164 2 1 Camada 2 137 54 2 1 Camada 2 3 127 2 1 Camada 2 4 85 2 1 Camada 2 4 110 2 1 Camada 2 139 109 2 1 Camada 2 139 121 2 1 Camada 2 8 120 2 1 Camada 2 140 131 2 1 Camada 2 141 116 2 1 Camada 2 142 159 2 1 Camada 2 143 116 2 1 Camada 2 144 121 2 1 Camada 2 146 110 2 1 Camada 2 147 133 2 1 Camada 2 148 63 2 1 Camada 2 13 118 2 1
[201] A Tabela 9 mostra dados de afinidade para hits exclusivos com o uso das novas sequências HVR-H1 e HVR-H2 indicadas.
TABELA 9: DADOS DE AFINIDADE PARA HITS CONFIRMADOS COM O USO DE NOVAS SEQUÊNCIAS HVR-H1 E HVR-H2 HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 8 4025 TAGT-8 2,89E-09 8 4033 TAGT-8 8,75E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 8 4614 TAGT-8 3,53E-10 8 4615 TAGT-8 2,28E-10 8 4617 TAGT-8 2,88E-10 8 4622 TAGT-8 2,74E-10 8 4627 TAGT-8 1,82E-10 8 4631 TAGT-8 1,83E-10 8 4633 TAGT-8 3,22E-10 8 4634 TAGT-8 2,07E-10 8 4638 TAGT-8 3,14E-10 8 4642 TAGT-8 1,89E-10 8 4644 TAGT-8 2,48E-10 8 4645 TAGT-8 2,96E-10 8 4650 TAGT-8 3,57E-10 8 4651 TAGT-8 3,01E-10 8 4652 TAGT-8 2,94E-10 8 4654 TAGT-8 2,32E-10 8 4658 TAGT-8 1,42E-10 8 4665 TAGT-8 3,69E-10 8 4673 TAGT-8 3,23E-10 8 4674 TAGT-8 5,02E-10 8 4681 TAGT-8 5,43E-10 8 4689 TAGT-8 1,63E-10 8 4690 TAGT-8 4,67E-10 8 5532 TAGT-2 3,65E-09 8 5558 TAGT-2 2,43E-09 8 5970 TAGT-12 1,35E-08 8 6190 TAGT-10 2,55E-09 8 6203 TAGT-10 1,05E-08 8 7032 TAGT-8 2,08E-08 8 7043 TAGT-8 1,34E-08 8 7367 TAGT-5 2,04E-08 8 BH3002 TAGT-8 2,51E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 8 BH3004 TAGT-8 3,00E-10 8 BH3005 TAGT-8 3,46E-10 8 BH3006 TAGT-8 1,94E-10 13 4043 TAGT-8 2,69E-09 13 4084 TAGT-8 2,94E-09 13 4618 TAGT-8 1,08E-09 13 4620 TAGT-8 3,48E-10 13 4623 TAGT-8 4,85E-10 13 4624 TAGT-8 1,00E-12 13 4625 TAGT-8 4,02E-10 13 4630 TAGT-8 2,67E-10 13 4653 TAGT-8 3,27E-10 13 4659 TAGT-8 2,12E-10 13 4662 TAGT-8 8,98E-10 13 4666 TAGT-8 1,17E-09 13 4668 TAGT-8 5,79E-10 13 4670 TAGT-8 8,21E-10 13 4675 TAGT-8 1,00E-12 13 4676 TAGT-8 1,62E-10 13 4678 TAGT-8 5,98E-10 13 4683 TAGT-8 8,97E-10 13 4684 TAGT-8 6,69E-10 13 4685 TAGT-8 4,78E-10 13 4686 TAGT-8 4,78E-10 13 4687 TAGT-8 4,08E-10 13 5739 TAGT-11 1,29E-08 13 7025 TAGT-8 4,87E-08 13 7035 TAGT-8 3,04E-09 13 7037 TAGT-8 2,10E-08 13 7038 TAGT-8 2,33E-08 25 4201 TAGT-6 1,41E-08 25 4217 TAGT-6 9,67E-08
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 25 4218 TAGT-6 2,85E-08 25 4813 TAGT-12 2,45E-10 25 5113 TAGT-12 6,80E-09 25 5114 TAGT-12 3,42E-08 25 5116 TAGT-12 1,46E-08 25 5119 TAGT-12 7,54E-09 25 5121 TAGT-12 9,29E-09 25 5123 TAGT-12 5,67E-09 25 5125 TAGT-12 2,42E-08 25 5128 TAGT-12 7,12E-09 25 5138 TAGT-12 8,55E-09 25 5968 TAGT-12 1,27E-08 25 5990 TAGT-12 1,15E-08 25 7442 TAGT-9 6,83E-09 31 4027 TAGT-8 1,55E-09 31 4027 TAGT-8M 3,81E-09 31 5020 TAGT-8 8,78E-10 31 5020 TAGT-8M 7,00E-09 31 5023 TAGT-8 9,46E-10 31 5023 TAGT-8M 5,77E-09 31 5030 TAGT-8 7,03E-10 31 5030 TAGT-8M 4,27E-09 31 5037 TAGT-8 1,06E-09 31 5037 TAGT-8M 4,36E-09 31 5039 TAGT-8 4,30E-10 31 5039 TAGT-8M 2,69E-09 31 5040 TAGT-8 4,37E-10 31 5040 TAGT-8M 3,13E-09 31 5045 TAGT-8 1,00E-09 31 5045 TAGT-8M 3,91E-09 31 5048 TAGT-8 5,10E-10 31 5048 TAGT-8M 2,52E-09
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 31 5066 TAGT-8 5,23E-09 31 5066 TAGT-8M 9,99E-09 31 5070 TAGT-8 1,34E-09 31 5070 TAGT-8M 6,63E-09 31 5658 TAGT-11 2,61E-10 31 5926 TAGT-12 3,23E-08 31 7394 TAGT-5 8,75E-09 50 5929 TAGT-12 3,20E-08 50 5978 TAGT-12 3,25E-08 50 5999 TAGT-12 6,29E-08 50 7077 TAGT-6 1,88E-08 50 7090 TAGT-6 5,55E-08 50 7128 TAGT-6 3,97E-08 50 7209 TAGT-12 9,36E-09 50 7219 TAGT-12 1,44E-08 50 7235 TAGT-12 2,18E-08 50 7240 TAGT-12 1,17E-08 50 7256 TAGT-12 7,08E-09 50 7257 TAGT-12 1,11E-08 50 7375 TAGT-5 6,03E-09 22 4116 TAGT-10 <1,0E-12 22 4129 TAGT-6 <1,0E-12 22 4140 TAGT-6 <1,0E-12 22 4842 TAGT-12 4,01E-10 22 5212 TAGT-1 9,19E-09 22 5218 TAGT-1 6,04E-09 22 5271 TAGT-1 1,24E-08 22 5284 TAGT-1 1,84E-08 22 5301 TAGT-6 2,61E-07 22 5336 TAGT-6 6,04E-07 22 5906 TAGT-12 1,50E-08 22 7207 TAGT-5 4,99E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 1 3757 TAGT-6 1,84E-08 1 3869 TAGT-11 2,35E-08 1 5103 TAGT-10 2,67E-09 1 5163 TAGT-11 1,71E-08 1 5201 TAGT-1 5,33E-09 1 5287 TAGT-1 1,02E-08 1 5315 TAGT-6 2,10E-06 1 5612 TAGT-2 7,85E-09 1 7129 TAGT-6 1,90E-08 1 7317 TAGT-5 2,02E-08 1 7411 TAGT-4 3,82E-08 1 7419 TAGT-9 1,72E-08 12 4048 TAGT-10 3,24E-09 12 4163 TAGT-8 1,37E-08 12 4723 TAGT-10 9,11E-10 12 4733 TAGT-10 3,05E-10 12 4734 TAGT-10 5,72E-10 12 4767 TAGT-10 2,77E-10 12 4771 TAGT-10 7,23E-10 12 4797 TAGT-10 5,63E-10 12 4807 TAGT-10 1,17E-09 12 5200 TAGT-1 1,53E-08 12 7030 TAGT-8 3,47E-08 12 7324 TAGT-5 5,68E-09 4 4054 TAGT-10 1,58E-08 4 5203 TAGT-1 1,31E-08 4 5354 TAGT-6 4,96E-09 4 6179 TAGT-10 1,99E-09 4 6183 TAGT-10 2,70E-09 4 6206 TAGT-10 3,44E-09 4 6217 TAGT-10 4,99E-09 4 7260 TAGT-5 2,30E-09
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 4 7278 TAGT-5 1,53E-08 4 7371 TAGT-5 2,31E-08 4 7374 TAGT-5 1,97E-08 7 3898 TAGT-11 1,83E-08 7 4065 TAGT-10 4,31E-08 7 4182 TAGT-10 4,24E-09 7 4741 TAGT-10 1,66E-09 7 5149 TAGT-11 2,91E-09 7 5159 TAGT-11 4,09E-09 7 5160 TAGT-11 8,07E-09 7 5162 TAGT-11 9,87E-09 7 5165 TAGT-11 4,06E-09 7 5510 TAGT-2 2,62E-09 7 7370 TAGT-5 1,07E-08 5 4060 TAGT-10 1,10E-08 5 4130 TAGT-6 1,00E-09 5 4798 TAGT-10 4,35E-09 5 5204 TAGT-1 1,48E-08 5 5526 TAGT-2 1,54E-09 5 5600 TAGT-2 5,33E-09 5 5733 TAGT-11 7,15E-09 5 6219 TAGT-10 3,15E-09 5 6531 TAGT-3 1,08E-08 5 6539 TAGT-4 3,45E-09 16 4034 TAGT-8 4,27E-09 16 4102 TAGT-8 2,54E-09 16 4903 TAGT-12 1,91E-09 16 5220 TAGT-1 5,03E-09 16 5321 TAGT-6 7,16E-07 16 5720 TAGT-11 1,93E-08 16 6010 TAGT-12 2,83E-08 16 7183 TAGT-6 1,48E-08
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HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 44 4875 TAGT-12 1,03E-09 44 5921 TAGT-12 8,01E-09 45 5403 TAGT-6 8,26E-09 45 6526 TAGT-4 1,16E-08 45 7379 TAGT-5 5,43E-09 46 4828 TAGT-12 1,10E-09 46 4863 TAGT-12 6,63E-10 46 7427 TAGT-9 5,58E-09 6 4752 TAGT-10 3,34E-09 6 6210 TAGT-10 5,17E-10 6 6212 TAGT-10 2,25E-09 17 4818 TAGT-12 1,02E-09 17 4841 TAGT-12 4,50E-10 32 7248 TAGT-12 1,28E-08 32 7310 TAGT-5 1,41E-08 36 4815 TAGT-12 5,91E-09 36 4825 TAGT-12 6,05E-09 37 5360 TAGT-6 2,41E-08 39 7358 TAGT-3 5,15E-08 39 7389 TAGT-5 4,50E-09 52 5370 TAGT-6 1,91E-09 52 7166 TAGT-6 1,24E-08 2 5438 TAGT-9 9,30E-09 2 7373 TAGT-5 5,13E-09 10 7055 TAGT-8 7,57E-10 10 7067 TAGT-8 3,41E-08 14 4062 TAGT-10 2,11E-08 14 5237 TAGT-1 3,28E-09 110 4055 TAGT-10 1,07E-08 110 4061 TAGT-10 3,42E-08 110 4066 TAGT-10 4,76E-08 110 4181 TAGT-10 4,27E-08
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 110 4693 TAGT-10 4,87E-10 110 4696 TAGT-10 4,58E-10 110 4697 TAGT-10 6,21E-10 110 4698 TAGT-10 5,70E-10 110 4700 TAGT-10 2,62E-10 110 4701 TAGT-10 5,60E-10 110 4702 TAGT-10 5,02E-10 110 4703 TAGT-10 2,85E-10 110 4704 TAGT-10 6,65E-10 110 4705 TAGT-10 3,02E-10 110 4706 TAGT-10 2,50E-10 110 4707 TAGT-10 4,29E-10 110 4708 TAGT-10 5,29E-10 110 4710 TAGT-10 6,26E-10 110 4714 TAGT-10 4,46E-10 110 4717 TAGT-10 4,61E-10 110 4718 TAGT-10 5,32E-10 110 4722 TAGT-10 7,46E-10 110 4725 TAGT-10 4,84E-10 110 4729 TAGT-10 8,80E-10 110 4731 TAGT-10 4,67E-10 110 4732 TAGT-10 3,33E-10 110 4738 TAGT-10 5,34E-10 110 4743 TAGT-10 7,40E-09 110 4744 TAGT-10 3,73E-10 110 4748 TAGT-10 3,92E-10 110 4749 TAGT-10 2,55E-10 110 4750 TAGT-10 7,86E-10 110 4753 TAGT-10 3,43E-10 110 4759 TAGT-10 6,59E-10 110 4766 TAGT-10 4,09E-10 110 4788 TAGT-10 2,88E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 110 4794 TAGT-10 5,56E-10 110 4803 TAGT-10 1,88E-10 110 4805 TAGT-10 4,26E-10 110 4808 TAGT-10 8,28E-10 110 4909 TAGT-10 2,90E-10 110 6010 TAGT-12 2,83E-08 110 6183 TAGT-10 2,70E-09 110 6191 TAGT-10 6,58E-11 110 6206 TAGT-10 3,44E-09 110 7066 TAGT-8 1,80E-08 63 4036 TAGT-8 3,13E-09 63 4096 TAGT-8 2,70E-09 63 4812 TAGT-12 2,89E-09 63 4815 TAGT-12 5,91E-09 63 4817 TAGT-12 2,06E-09 63 4818 TAGT-12 1,02E-09 63 4836 TAGT-12 2,49E-09 63 4840 TAGT-12 2,08E-09 63 4841 TAGT-12 4,50E-10 63 4846 TAGT-12 3,19E-09 63 4852 TAGT-12 2,26E-09 63 4860 TAGT-12 2,44E-09 63 4876 TAGT-12 7,75E-09 63 4880 TAGT-12 2,77E-09 63 4897 TAGT-12 6,83E-10 63 4901 TAGT-12 3,19E-09 63 4904 TAGT-12 5,39E-09 63 5115 TAGT-12 1,16E-08 63 5195 TAGT-1 2,62E-08 63 5216 TAGT-1 3,08E-09 63 5286 TAGT-1 6,34E-09 63 5287 TAGT-1 1,02E-08
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HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 126 4651 TAGT-8 3,01E-10 126 4652 TAGT-8 2,94E-10 126 4654 TAGT-8 2,32E-10 126 4658 TAGT-8 1,42E-10 126 4665 TAGT-8 3,69E-10 126 4673 TAGT-8 3,23E-10 126 4674 TAGT-8 5,02E-10 126 4681 TAGT-8 5,43E-10 126 4689 TAGT-8 1,63E-10 126 4690 TAGT-8 4,67E-10 126 7043 TAGT-8 1,34E-08 126 BH3002 TAGT-8 2,51E-10 126 BH3004 TAGT-8 3,00E-10 126 BH3005 TAGT-8 3,46E-10 126 BH3006 TAGT-8 1,94E-10 129 4038 TAGT-8 2,98E-09 129 4084 TAGT-8 2,94E-09 129 4618 TAGT-8 1,08E-09 129 4620 TAGT-8 3,48E-10 129 4623 TAGT-8 4,85E-10 129 4624 TAGT-8 1,00E-12 129 4625 TAGT-8 4,02E-10 129 4630 TAGT-8 2,67E-10 129 4653 TAGT-8 3,27E-10 129 4659 TAGT-8 2,12E-10 129 4662 TAGT-8 8,98E-10 129 4666 TAGT-8 1,17E-09 129 4668 TAGT-8 5,79E-10 129 4670 TAGT-8 8,21E-10 129 4675 TAGT-8 1,00E-12 129 4676 TAGT-8 1,62E-10 129 4678 TAGT-8 5,98E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 129 4683 TAGT-8 8,97E-10 129 4684 TAGT-8 6,69E-10 129 4685 TAGT-8 4,78E-10 129 4686 TAGT-8 4,78E-10 129 4687 TAGT-8 4,08E-10 129 5970 TAGT-12 1,35E-08 129 7213 TAGT-12 8,87E-09 129 7232 TAGT-12 8,06E-09 129 7357 TAGT-3 6,14E-08 121 4054 TAGT-10 1,58E-08 121 4060 TAGT-10 1,10E-08 121 4065 TAGT-10 4,31E-08 121 4072 TAGT-6 6,95E-09 121 4182 TAGT-10 4,24E-09 121 4741 TAGT-10 1,66E-09 121 4798 TAGT-10 4,35E-09 121 5295 TAGT-9 2,21E-09 121 6185 TAGT-10 1,57E-09 121 6187 TAGT-10 2,74E-08 121 6195 TAGT-10 4,30E-09 121 6197 TAGT-10 8,56E-09 121 6198 TAGT-10 2,85E-09 121 6209 TAGT-10 3,35E-09 121 6219 TAGT-10 3,15E-09 117 4031 TAGT-8 1,06E-09 117 5126 TAGT-8 9,54E-09 117 5129 TAGT-8 1,12E-09 117 5132 TAGT-8 3,06E-09 117 5145 TAGT-8 7,00E-09 117 7067 TAGT-8 3,41E-08 117 7068 TAGT-8 1,11E-08 117 7073 TAGT-8 3,19E-09
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 124 4027 TAGT-8 1,55E-09 124 4027 TAGT-8M 3,81E-09 124 4043 TAGT-8 2,69E-09 124 5020 TAGT-8 8,78E-10 124 5020 TAGT-8M 7,00E-09 124 5023 TAGT-8 9,46E-10 124 5023 TAGT-8M 5,77E-09 124 5030 TAGT-8 7,03E-10 124 5030 TAGT-8M 4,27E-09 124 5037 TAGT-8 1,06E-09 124 5037 TAGT-8M 4,36E-09 124 5039 TAGT-8 4,30E-10 124 5039 TAGT-8M 2,69E-09 124 5040 TAGT-8 4,37E-10 124 5040 TAGT-8M 3,13E-09 124 5045 TAGT-8 1,00E-09 124 5045 TAGT-8M 3,91E-09 124 5048 TAGT-8 5,10E-10 124 5048 TAGT-8M 2,52E-09 124 5066 TAGT-8 5,23E-09 124 5066 TAGT-8M 9,99E-09 124 5070 TAGT-8 1,34E-09 124 5070 TAGT-8M 6,63E-09 124 5994 TAGT-12 1,58E-08 124 7442 TAGT-9 6,83E-09 93 4062 TAGT-10 2,11E-08 93 4132 TAGT-6 <1,0E-12 93 4201 TAGT-6 1,41E-08 93 5300 TAGT-6 1,53E-08 93 5694 TAGT-11 9,45E-09 93 5906 TAGT-12 1,50E-08 93 5926 TAGT-12 3,23E-08
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 93 7078 TAGT-6 2,52E-08 93 7087 TAGT-6 6,96E-08 93 7120 TAGT-6 3,45E-08 93 7190 TAGT-6 1,03E-08 93 7271 TAGT-5 3,13E-08 82 4048 TAGT-10 3,24E-09 82 4051 TAGT-10 1,80E-08 82 4723 TAGT-10 9,11E-10 82 4733 TAGT-10 3,05E-10 82 4734 TAGT-10 5,72E-10 82 4767 TAGT-10 2,77E-10 82 4771 TAGT-10 7,23E-10 82 4797 TAGT-10 5,63E-10 82 4807 TAGT-10 1,17E-09 82 5346 TAGT-6 1,61E-08 82 6221 TAGT-10 6,92E-10 130 4813 TAGT-12 2,45E-10 130 5113 TAGT-12 6,80E-09 130 5114 TAGT-12 3,42E-08 130 5116 TAGT-12 1,46E-08 130 5119 TAGT-12 7,54E-09 130 5121 TAGT-12 9,29E-09 130 5123 TAGT-12 5,67E-09 130 5125 TAGT-12 2,42E-08 130 5128 TAGT-12 7,12E-09 130 5138 TAGT-12 8,55E-09 116 4752 TAGT-10 3,34E-09 116 6194 TAGT-10 2,49E-10 116 6196 TAGT-10 <1,0E-12 116 6202 TAGT-10 1,03E-09 116 6204 TAGT-10 6,46E-09 116 6208 TAGT-10 3,50E-09
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 116 6210 TAGT-10 5,17E-10 116 6212 TAGT-10 2,25E-09 116 6214 TAGT-10 1,51E-09 116 6217 TAGT-10 4,99E-09 132 4032 TAGT-8 5,11E-09 132 4032 TAGT-8M 4,84E-09 132 4050 TAGT-10 1,65E-08 132 5012 TAGT-8 1,76E-09 132 5012 TAGT-8M 2,03E-09 132 5014 TAGT-8 2,43E-09 132 5014 TAGT-8M 3,87E-09 132 5016 TAGT-8 3,56E-09 132 5016 TAGT-8M 2,84E-09 132 5022 TAGT-8 3,68E-09 132 5022 TAGT-8M 3,03E-09 132 5024 TAGT-8 4,52E-09 132 5024 TAGT-8M 3,48E-09 132 5041 TAGT-8 1,68E-09 132 5041 TAGT-8M 1,67E-09 132 5074 TAGT-8 4,31E-09 132 5074 TAGT-8M 2,98E-09 132 5082 TAGT-8 4,79E-09 132 5082 TAGT-8M 3,23E-09 53 4052 TAGT-10 9,73E-09 53 4059 TAGT-10 3,30E-07 53 5094 TAGT-10 4,34E-08 53 5095 TAGT-10 1,27E-08 53 5097 TAGT-10 1,27E-08 53 5099 TAGT-10 4,20E-08 53 5109 TAGT-10 2,59E-08 53 5280 TAGT-1 8,43E-09 53 5936 TAGT-10 1,75E-08
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 89 4045 TAGT-8 1,10E-09 89 4123 TAGT-6 5,98E-09 89 4125 TAGT-6 <1,0E-12 89 5910 TAGT-12 3,30E-08 89 5920 TAGT-12 1,88E-08 89 5929 TAGT-12 3,20E-08 89 7079 TAGT-6 2,99E-08 89 7133 TAGT-6 4,03E-08 89 7219 TAGT-12 1,44E-08 134 3898 TAGT-11 1,83E-08 134 4925 TAGT-7 1,32E-08 134 5149 TAGT-11 2,91E-09 134 5159 TAGT-11 4,09E-09 134 5160 TAGT-11 8,07E-09 134 5162 TAGT-11 9,87E-09 134 5165 TAGT-11 4,06E-09 134 5752 TAGT-11 6,33E-09 134 7231 TAGT-12 3,38E-09 66 4161 TAGT-8 2,98E-08 66 4180 TAGT-10 7,39E-08 66 4809 TAGT-12 3,69E-10 66 4847 TAGT-12 3,64E-10 66 4879 TAGT-12 3,13E-09 66 6533 TAGT-3 2,62E-08 66 7372 TAGT-5 7,27E-10 66 7386 TAGT-5 1,32E-08 122 3757 TAGT-6 1,84E-08 122 3869 TAGT-11 2,35E-08 122 4163 TAGT-8 1,37E-08 122 4828 TAGT-12 1,10E-09 122 5103 TAGT-10 2,67E-09 122 5163 TAGT-11 1,71E-08
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 122 5740 TAGT-11 7,26E-09 123 3762 TAGT-6 3,04E-08 123 3780 TAGT-8 1,47E-09 123 3865 TAGT-11 9,48E-09 123 7030 TAGT-8 3,47E-08 123 7035 TAGT-8 3,04E-09 123 7055 TAGT-8 7,57E-10 123 7358 TAGT-3 5,15E-08 128 4101 TAGT-8 2,12E-09 128 4661 TAGT-8 1,62E-09 128 4792 TAGT-10 7,39E-09 128 5997 TAGT-12 8,51E-09 128 7040 TAGT-8 2,72E-08 128 7221 TAGT-12 5,58E-09 128 7228 TAGT-12 7,62E-09 131 4103 TAGT-8 3,59E-10 131 7215 TAGT-12 1,61E-08 131 7229 TAGT-12 8,91E-09 131 7243 TAGT-12 4,95E-09 131 7244 TAGT-12 1,05E-08 131 7254 TAGT-12 1,07E-08 131 7258 TAGT-12 9,72E-09 65 4037 TAGT-8 5,53E-09 65 4823 TAGT-12 2,62E-09 65 5292 TAGT-1 1,57E-08 65 5741 TAGT-11 1,91E-08 65 7239 TAGT-12 2,40E-08 65 7433 TAGT-9 1,67E-08 109 6179 TAGT-10 1,99E-09 109 6184 TAGT-10 <1,0E-12 109 6188 TAGT-10 8,76E-09 109 6189 TAGT-10 2,38E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 109 6216 TAGT-10 6,58E-10 109 6539 TAGT-4 3,45E-09 72 5301 TAGT-6 2,61E-07 72 5326 TAGT-6 7,84E-07 72 5420 TAGT-6 1,41E-08 72 5710 TAGT-11 1,01E-08 72 5746 TAGT-11 5,00E-09 87 4216 TAGT-6 2,59E-08 87 5320 TAGT-6 6,13E-07 87 5408 TAGT-6 2,36E-08 87 7183 TAGT-6 1,48E-08 87 7201 TAGT-6 3,26E-08 105 5218 TAGT-1 6,04E-09 105 5316 TAGT-6 1,14E-08 105 5513 TAGT-2 1,07E-09 105 6543 TAGT-3 6,78E-08 105 7427 TAGT-9 5,58E-09 118 4851 TAGT-12 3,84E-10 118 7025 TAGT-8 4,87E-08 118 7036 TAGT-8 1,59E-08 118 7037 TAGT-8 2,10E-08 118 7047 TAGT-8 2,15E-08 60 5226 TAGT-1 8,36E-09 60 5281 TAGT-1 4,70E-09 60 5425 TAGT-9 2,15E-08 60 5744 TAGT-11 1,14E-08 67 4026 TAGT-8 3,08E-09 67 4820 TAGT-12 3,96E-09 67 4839 TAGT-12 6,16E-09 67 7274 TAGT-5 1,63E-08 70 4041 TAGT-8 1,54E-09 70 4844 TAGT-12 6,95E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 70 7159 TAGT-6 3,79E-08 70 7380 TAGT-5 1,24E-08 84 7204 TAGT-5 2,33E-09 84 7323 TAGT-5 3,23E-09 84 7373 TAGT-5 5,13E-09 84 7378 TAGT-5 5,66E-09 85 7260 TAGT-5 2,30E-09 85 7365 TAGT-5 1,82E-09 85 7369 TAGT-5 2,46E-09 85 7374 TAGT-5 1,97E-08 92 4073 TAGT-6 <1,0E-12 92 5355 TAGT-6 8,71E-10 92 7080 TAGT-6 2,44E-08 92 7081 TAGT-6 4,31E-08 100 5328 TAGT-6 3,42E-07 100 5417 TAGT-6 4,04E-08 100 5974 TAGT-12 5,02E-08 100 5977 TAGT-12 2,70E-08 103 4075 TAGT-6 <1,0E-12 103 5961 TAGT-12 2,41E-08 103 5993 TAGT-12 1,13E-08 103 7255 TAGT-12 1,20E-08 104 5912 TAGT-12 1,68E-08 104 5923 TAGT-12 1,60E-08 104 5978 TAGT-12 3,25E-08 104 7226 TAGT-12 7,57E-09 106 4141 TAGT-6 <1,0E-12 106 4222 TAGT-6 5,55E-08 106 5321 TAGT-6 7,16E-07 106 7317 TAGT-5 2,02E-08 57 5303 TAGT-6 5,12E-09 57 5359 TAGT-6 7,10E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 57 5365 TAGT-6 2,56E-09 61 5230 TAGT-1 9,21E-09 61 5271 TAGT-1 1,24E-08 61 7207 TAGT-5 4,99E-10 71 5336 TAGT-6 6,04E-07 71 5418 TAGT-6 2,02E-08 71 5438 TAGT-9 9,30E-09 75 5194 TAGT-1 1,29E-08 75 5235 TAGT-1 1,41E-08 75 5403 TAGT-6 8,26E-09 77 4063 TAGT-10 1,90E-08 77 4067 TAGT-10 1,97E-08 77 7429 TAGT-9 2,12E-08 79 5353 TAGT-6 1,61E-08 79 7419 TAGT-9 1,72E-08 79 7431 TAGT-9 3,53E-08 80 7276 TAGT-5 1,02E-08 80 7311 TAGT-5 9,20E-09 80 7371 TAGT-5 2,31E-08 94 5371 TAGT-6 3,97E-09 94 7088 TAGT-6 4,36E-08 94 7100 TAGT-6 3,50E-08 95 5236 TAGT-1 1,49E-08 95 5983 TAGT-12 2,09E-08 95 7128 TAGT-6 3,97E-08 96 7077 TAGT-6 1,88E-08 96 7107 TAGT-6 1,22E-07 96 7109 TAGT-6 3,20E-08 10 3761 TAGT-6 9,65E-08 10 4217 TAGT-6 9,67E-08 10 4218 TAGT-6 2,85E-08 108 4034 TAGT-8 4,27E-09
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 108 5351 TAGT-6 7,29E-09 108 5357 TAGT-6 7,14E-09 111 4827 TAGT-12 1,51E-09 111 4834 TAGT-12 9,68E-10 111 4875 TAGT-12 1,03E-09 112 4025 TAGT-8 2,89E-09 112 5930 TAGT-12 5,66E-09 112 5932 TAGT-12 1,12E-08 113 4116 TAGT-10 <1,0E-12 113 4863 TAGT-12 6,63E-10 113 5980 TAGT-12 1,14E-08 114 5921 TAGT-12 8,01E-09 114 5968 TAGT-12 1,27E-08 114 5990 TAGT-12 1,15E-08 120 6180 TAGT-10 6,11E-09 120 6190 TAGT-10 2,55E-09 120 6203 TAGT-10 1,05E-08 133 5935 TAGT-12 8,78E-09 133 6008 TAGT-12 5,10E-08 133 7222 TAGT-12 1,26E-09 54 7277 TAGT-5 2,56E-09 54 7390 TAGT-5 1,44E-09 55 5238 TAGT-1 5,04E-08 55 5370 TAGT-6 1,91E-09 56 5285 TAGT-1 1,42E-08 56 5310 TAGT-6 5,72E-09 58 5314 TAGT-6 8,39E-09 58 5342 TAGT-6 3,89E-08 59 5202 TAGT-1 1,50E-08 59 7032 TAGT-8 2,08E-08 62 5220 TAGT-1 5,03E-09 62 7163 TAGT-6 1,26E-08
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 64 5211 TAGT-1 2,11E-09 64 5584 TAGT-2 1,76E-09 68 4177 TAGT-8 1,48E-08 68 5234 TAGT-1 1,28E-08 69 4838 TAGT-12 2,52E-09 69 7166 TAGT-6 1,24E-08 73 4878 TAGT-12 4,07E-09 73 5315 TAGT-6 2,10E-06 74 3760 TAGT-6 1,26E-08 76 5297 TAGT-6 1,77E-06 76 5745 TAGT-11 1,06E-08 78 4058 TAGT-10 1,13E-08 78 5291 TAGT-1 6,57E-09 81 5212 TAGT-1 9,19E-09 81 5568 TAGT-2 1,14E-09 83 5411 TAGT-6 1,25E-08 83 5565 TAGT-2 3,02E-09 86 4129 TAGT-6 <1,0E-12 86 6473 TAGT-4 2,30E-08 88 5905 TAGT-12 3,83E-08 88 5919 TAGT-12 2,38E-08 90 4029 TAGT-8 1,89E-09 90 7097 TAGT-6 2,43E-08 91 5272 TAGT-1 2,49E-08 91 7242 TAGT-12 1,71E-08 97 5915 TAGT-12 1,82E-08 97 5964 TAGT-12 1,40E-08 98 4131 TAGT-6 <1,0E-12 98 5347 TAGT-6 1,21E-08 99 7090 TAGT-6 5,55E-08 102 6004 TAGT-12 5,50E-08 102 7251 TAGT-12 2,69E-08
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 107 4133 TAGT-6 3,90E-10 107 7262 TAGT-5 2,63E-09 115 7310 TAGT-5 1,41E-08 115 7379 TAGT-5 5,43E-09 119 6193 TAGT-10 3,18E-09 119 6220 TAGT-10 3,45E-09 125 4030 TAGT-8 4,90E-09 125 7038 TAGT-8 2,33E-08 127 7044 TAGT-8 1,12E-09 127 7045 TAGT-8 1,11E-09 135 4204 TAGT-10 6,83E-09 135 4204 TAGT-10M 6,89E-09 135 5423 TAGT-9 4,90E-09 136 4861 TAGT-12 5,11E-09 136 7129 TAGT-6 1,90E-08 139 e 110 4181 TAGT-10 4,27E-08 139 e 110 4693 TAGT-10 4,87E-10 139 e 110 4696 TAGT-10 4,58E-10 139 e 110 4697 TAGT-10 6,21E-10 139 e 110 4698 TAGT-10 5,70E-10 139 e 110 4700 TAGT-10 2,62E-10 139 e 110 4701 TAGT-10 5,60E-10 139 e 110 4702 TAGT-10 5,02E-10 139 e 110 4703 TAGT-10 2,85E-10 139 e 110 4704 TAGT-10 6,65E-10 139 e 110 4705 TAGT-10 3,02E-10 139 e 110 4706 TAGT-10 2,50E-10 139 e 110 4707 TAGT-10 4,29E-10 139 e 110 4708 TAGT-10 5,29E-10 139 e 110 4710 TAGT-10 6,26E-10 139 e 110 4714 TAGT-10 4,46E-10 139 e 110 4717 TAGT-10 4,61E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 139 e 110 4718 TAGT-10 5,32E-10 139 e 110 4722 TAGT-10 7,46E-10 139 e 110 4725 TAGT-10 4,84E-10 139 e 110 4729 TAGT-10 8,80E-10 139 e 110 4731 TAGT-10 4,67E-10 139 e 110 4732 TAGT-10 3,33E-10 139 e 110 4738 TAGT-10 5,34E-10 139 e 110 4744 TAGT-10 3,73E-10 139 e 110 4748 TAGT-10 3,92E-10 139 e 110 4749 TAGT-10 2,55E-10 139 e 110 4750 TAGT-10 7,86E-10 139 e 110 4753 TAGT-10 3,43E-10 139 e 110 4759 TAGT-10 6,59E-10 139 e 110 4766 TAGT-10 4,09E-10 139 e 110 4788 TAGT-10 2,88E-10 139 e 110 4794 TAGT-10 5,56E-10 139 e 110 4803 TAGT-10 1,88E-10 139 e 110 4805 TAGT-10 4,26E-10 139 e 110 4808 TAGT-10 8,28E-10 139 e 110 4909 TAGT-10 2,90E-10 139 e 110 6191 TAGT-10 6,58E-11 8 e 126 4033 TAGT-8 8,75E-10 8 e 126 4614 TAGT-8 3,53E-10 8 e 126 4615 TAGT-8 2,28E-10 8 e 126 4617 TAGT-8 2,88E-10 8 e 126 4622 TAGT-8 2,74E-10 8 e 126 4627 TAGT-8 1,82E-10 8 e 126 4631 TAGT-8 1,83E-10 8 e 126 4633 TAGT-8 3,22E-10 8 e 126 4634 TAGT-8 2,07E-10 8 e 126 4638 TAGT-8 3,14E-10 8 e 126 4642 TAGT-8 1,89E-10
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 8 e 126 4644 TAGT-8 2,48E-10 8 e 126 4645 TAGT-8 2,96E-10 8 e 126 4650 TAGT-8 3,57E-10 8 e 126 4651 TAGT-8 3,01E-10 8 e 126 4652 TAGT-8 2,94E-10 8 e 126 4654 TAGT-8 2,32E-10 8 e 126 4658 TAGT-8 1,42E-10 8 e 126 4665 TAGT-8 3,69E-10 8 e 126 4673 TAGT-8 3,23E-10 8 e 126 4674 TAGT-8 5,02E-10 8 e 126 4681 TAGT-8 5,43E-10 8 e 126 4689 TAGT-8 1,63E-10 8 e 126 4690 TAGT-8 4,67E-10 8 e 126 7043 TAGT-8 1,34E-08 8 e 126 BH3002 TAGT-8 2,51E-10 8 e 126 BH3004 TAGT-8 3,00E-10 8 e 126 BH3005 TAGT-8 3,46E-10 8 e 126 BH3006 TAGT-8 1,94E-10 13 e 129 4084 TAGT-8 2,94E-09 13 e 129 4618 TAGT-8 1,08E-09 13 e 129 4620 TAGT-8 3,48E-10 13 e 129 4623 TAGT-8 4,85E-10 13 e 129 4624 TAGT-8 1,00E-12 13 e 129 4625 TAGT-8 4,02E-10 13 e 129 4630 TAGT-8 2,67E-10 13 e 129 4653 TAGT-8 3,27E-10 13 e 129 4659 TAGT-8 2,12E-10 13 e 129 4662 TAGT-8 8,98E-10 13 e 129 4666 TAGT-8 1,17E-09 13 e 129 4668 TAGT-8 5,79E-10 13 e 129 4670 TAGT-8 8,21E-10 13 e 129 4675 TAGT-8 1,00E-12
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 13 e 129 4676 TAGT-8 1,62E-10 13 e 129 4678 TAGT-8 5,98E-10 13 e 129 4683 TAGT-8 8,97E-10 13 e 129 4684 TAGT-8 6,69E-10 13 e 129 4685 TAGT-8 4,78E-10 13 e 129 4686 TAGT-8 4,78E-10 13 e 129 4687 TAGT-8 4,08E-10 31 e 124 4027 TAGT-8 1,55E-09 31 e 124 4027 TAGT-8M 3,81E-09 31 e 124 5020 TAGT-8 8,78E-10 31 e 124 5020 TAGT-8M 7,00E-09 31 e 124 5023 TAGT-8 9,46E-10 31 e 124 5023 TAGT-8M 5,77E-09 31 e 124 5030 TAGT-8 7,03E-10 31 e 124 5030 TAGT-8M 4,27E-09 31 e 124 5037 TAGT-8 1,06E-09 31 e 124 5037 TAGT-8M 4,36E-09 31 e 124 5039 TAGT-8 4,30E-10 31 e 124 5039 TAGT-8M 2,69E-09 31 e 124 5040 TAGT-8 4,37E-10 31 e 124 5040 TAGT-8M 3,13E-09 31 e 124 5045 TAGT-8 1,00E-09 31 e 124 5045 TAGT-8M 3,91E-09 31 e 124 5048 TAGT-8 5,10E-10 31 e 124 5048 TAGT-8M 2,52E-09 31 e 124 5066 TAGT-8 5,23E-09 31 e 124 5066 TAGT-8M 9,99E-09 31 e 124 5070 TAGT-8 1,34E-09 31 e 124 5070 TAGT-8M 6,63E-09 25 e 130 4813 TAGT-12 2,45E-10 25 e 130 5113 TAGT-12 6,80E-09 25 e 130 5114 TAGT-12 3,42E-08
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 25 e 130 5116 TAGT-12 1,46E-08 25 e 130 5119 TAGT-12 7,54E-09 25 e 130 5121 TAGT-12 9,29E-09 25 e 130 5123 TAGT-12 5,67E-09 25 e 130 5125 TAGT-12 2,42E-08 25 e 130 5128 TAGT-12 7,12E-09 25 e 130 5138 TAGT-12 8,55E-09 150 e 132 4032 TAGT-8 5,11E-09 150 e 132 4032 TAGT-8M 4,84E-09 150 e 132 5012 TAGT-8 1,76E-09 150 e 132 5012 TAGT-8M 2,03E-09 150 e 132 5014 TAGT-8 2,43E-09 150 e 132 5014 TAGT-8M 3,87E-09 150 e 132 5016 TAGT-8 3,56E-09 150 e 132 5016 TAGT-8M 2,84E-09 150 e 132 5022 TAGT-8 3,68E-09 150 e 132 5022 TAGT-8M 3,03E-09 150 e 132 5024 TAGT-8 4,52E-09 150 e 132 5024 TAGT-8M 3,48E-09 150 e 132 5041 TAGT-8 1,68E-09 150 e 132 5041 TAGT-8M 1,67E-09 150 e 132 5074 TAGT-8 4,31E-09 150 e 132 5074 TAGT-8M 2,98E-09 150 e 132 5082 TAGT-8 4,79E-09 150 e 132 5082 TAGT-8M 3,23E-09 158 e 162 5962 TAGT-12 8,06E-08 158 e 162 5996 TAGT-12 2,21E-08 158 e 162 6000 TAGT-12 7,86E-08 158 e 162 7210 TAGT-12 9,85E-09 158 e 162 7218 TAGT-12 1,49E-08 158 e 162 7225 TAGT-12 9,53E-09 158 e 162 7241 TAGT-12 6,43E-09
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 158 e 162 7247 TAGT-12 8,93E-09 12 e 82 4048 TAGT-10 3,24E-09 12 e 82 4723 TAGT-10 9,11E-10 12 e 82 4733 TAGT-10 3,05E-10 12 e 82 4734 TAGT-10 5,72E-10 12 e 82 4767 TAGT-10 2,77E-10 12 e 82 4771 TAGT-10 7,23E-10 12 e 82 4797 TAGT-10 5,63E-10 12 e 82 4807 TAGT-10 1,17E-09 149 e 117 4031 TAGT-8 1,06E-09 149 e 117 5126 TAGT-8 9,54E-09 149 e 117 5129 TAGT-8 1,12E-09 149 e 117 5132 TAGT-8 3,06E-09 149 e 117 5145 TAGT-8 7,00E-09 149 e 117 7068 TAGT-8 1,11E-08 149 e 117 7073 TAGT-8 3,19E-09 7 e 134 3898 TAGT-11 1,83E-08 7 e 134 5149 TAGT-11 2,91E-09 7 e 134 5159 TAGT-11 4,09E-09 7 e 134 5160 TAGT-11 8,07E-09 7 e 134 5162 TAGT-11 9,87E-09 7 e 134 5165 TAGT-11 4,06E-09 154 e 63 4812 TAGT-12 2,89E-09 154 e 63 4904 TAGT-12 5,39E-09 154 e 63 5115 TAGT-12 1,16E-08 154 e 63 5421 TAGT-9 1,05E-08 154 e 63 5422 TAGT-9 5,12E-09 158 e 161 5922 TAGT-12 1,95E-08 158 e 161 7135 TAGT-6 3,17E-08 158 e 161 7245 TAGT-12 1,38E-08 158 e 161 7246 TAGT-12 6,22E-09 158 e 161 7252 TAGT-12 9,56E-09
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 26 e 53 4052 TAGT-10 9,73E-09 26 e 53 5094 TAGT-10 4,34E-08 26 e 53 5097 TAGT-10 1,27E-08 26 e 53 5109 TAGT-10 2,59E-08 151 e 53 4059 TAGT-10 3,30E-07 151 e 53 5095 TAGT-10 1,27E-08 151 e 53 5099 TAGT-10 4,20E-08 151 e 53 5936 TAGT-10 1,75E-08 157 e 63 4036 TAGT-8 3,13E-09 157 e 63 4096 TAGT-8 2,70E-09 157 e 63 5323 TAGT-6 1,04E-08 157 e 63 7391 TAGT-5 1,35E-08 1 e 122 3757 TAGT-6 1,84E-08 1 e 122 3869 TAGT-11 2,35E-08 1 e 122 5103 TAGT-10 2,67E-09 1 e 122 5163 TAGT-11 1,71E-08 34 e 63 4836 TAGT-12 2,49E-09 34 e 63 4852 TAGT-12 2,26E-09 34 e 63 4876 TAGT-12 7,75E-09 50 e 162 7240 TAGT-12 1,17E-08 50 e 162 7256 TAGT-12 7,08E-09 50 e 162 7257 TAGT-12 1,11E-08 158 e 63 5387 TAGT-8 1,13E-09 158 e 63 5985 TAGT-12 3,92E-08 158 e 63 5986 TAGT-12 4,65E-08 158 e 104 5912 TAGT-12 1,68E-08 158 e 104 5923 TAGT-12 1,60E-08 158 e 104 7226 TAGT-12 7,57E-09 5 e 121 4060 TAGT-10 1,10E-08 5 e 121 4798 TAGT-10 4,35E-09 5 e 121 6219 TAGT-10 3,15E-09 6 e 116 4752 TAGT-10 3,34E-09
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 6 e 116 6210 TAGT-10 5,17E-10 6 e 116 6212 TAGT-10 2,25E-09 138 e 63 4840 TAGT-12 2,08E-09 138 e 63 5722 TAGT-11 3,08E-08 138 e 63 7385 TAGT-5 3,26E-09 7 e 121 4065 TAGT-10 4,31E-08 7 e 121 4182 TAGT-10 4,24E-09 7 e 121 4741 TAGT-10 1,66E-09 145 e 128 4101 TAGT-8 2,12E-09 145 e 128 4661 TAGT-8 1,62E-09 145 e 128 4792 TAGT-10 7,39E-09 17 e 63 4818 TAGT-12 1,02E-09 17 e 63 4841 TAGT-12 4,50E-10 22 e 61 5271 TAGT-1 1,24E-08 22 e 61 7207 TAGT-5 4,99E-10 25 e 101 4217 TAGT-6 9,67E-08 25 e 101 4218 TAGT-6 2,85E-08 25 e 114 5968 TAGT-12 1,27E-08 25 e 114 5990 TAGT-12 1,15E-08 29 e 112 5930 TAGT-12 5,66E-09 29 e 112 5932 TAGT-12 1,12E-08 31 e 63 5658 TAGT-11 2,61E-10 31 e 63 7394 TAGT-5 8,75E-09 152 e 63 4897 TAGT-12 6,83E-10 152 e 63 4901 TAGT-12 3,19E-09 153 e 63 4817 TAGT-12 2,06E-09 153 e 63 7316 TAGT-5 2,04E-08 155 e 67 4026 TAGT-8 3,08E-09 155 e 67 7274 TAGT-5 1,63E-08 156 e 89 7079 TAGT-6 2,99E-08 156 e 89 7133 TAGT-6 4,03E-08 156 e 100 5417 TAGT-6 4,04E-08
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 156 e 100 5974 TAGT-12 5,02E-08 157 e 94 7088 TAGT-6 4,36E-08 157 e 94 7100 TAGT-6 3,50E-08 48 e 58 5314 TAGT-6 8,39E-09 48 e 58 5342 TAGT-6 3,89E-08 50 e 89 5929 TAGT-12 3,20E-08 50 e 89 7219 TAGT-12 1,44E-08 50 e 163 5999 TAGT-12 6,29E-08 50 e 163 7235 TAGT-12 2,18E-08 158 e 160 5911 TAGT-12 3,35E-08 158 e 160 7216 TAGT-12 1,88E-08 158 e 87 4216 TAGT-6 2,59E-08 158 e 87 7201 TAGT-6 3,26E-08 158 e 92 7080 TAGT-6 2,44E-08 158 e 92 7081 TAGT-6 4,31E-08 158 e 93 7078 TAGT-6 2,52E-08 158 e 93 7087 TAGT-6 6,96E-08 158 e 97 5915 TAGT-12 1,82E-08 158 e 97 5964 TAGT-12 1,40E-08 158 e 103 5961 TAGT-12 2,41E-08 158 e 103 7255 TAGT-12 1,20E-08 158 e 164 7211 TAGT-12 1,26E-08 158 e 164 7220 TAGT-12 9,12E-09 51 e 162 4074 TAGT-6 1,95E-08 51 e 162 7237 TAGT-12 2,13E-08 137 e 54 7277 TAGT-5 2,56E-09 137 e 54 7390 TAGT-5 1,44E-09 3 e 127 7044 TAGT-8 1,12E-09 3 e 127 7045 TAGT-8 1,11E-09 4 e 85 7260 TAGT-5 2,30E-09 4 e 85 7374 TAGT-5 1,97E-08 4 e 110 6183 TAGT-10 2,70E-09
HVR SEQ ID NO(S): ID de Hit Antígeno Kd (M) 4 e 110 6206 TAGT-10 3,44E-09 138 e 123 3762 TAGT-6 3,04E-08 138 e 123 3865 TAGT-11 9,48E-09 139 e 109 6184 TAGT-10 <1,0E-12 139 e 109 6216 TAGT-10 6,58E-10 139 e 121 6187 TAGT-10 2,74E-08 139 e 121 6197 TAGT-10 8,56E-09 8 e 120 6190 TAGT-10 2,55E-09 8 e 120 6203 TAGT-10 1,05E-08 140 e 131 7215 TAGT-12 1,61E-08 140 e 131 7243 TAGT-12 4,95E-09 141 e 116 6204 TAGT-10 6,46E-09 141 e 116 6214 TAGT-10 1,51E-09 142 e 159 5554 TAGT-2 2,88E-09 142 e 159 5622 TAGT-2 3,06E-09 143 e 116 6194 TAGT-10 2,49E-10 143 e 116 6196 TAGT-10 <1,0E-12 144 e 121 6185 TAGT-10 1,57E-09 144 e 121 6209 TAGT-10 3,35E-09 146 e 110 4055 TAGT-10 1,07E-08 146 e 110 4743 TAGT-10 7,40E-09 147 e 133 5935 TAGT-12 8,78E-09 147 e 133 6008 TAGT-12 5,10E-08 148 e 63 5195 TAGT-1 2,62E-08 148 e 63 5290 TAGT-1 6,73E-09 13 e 118 7025 TAGT-8 4,87E-08 13 e 118 7037 TAGT-8 2,10E-08
[202] Uma HVR-H1 que compreende SEQ ID NO:16 foi usada em 8 hits exclusivos. Com o uso desta mesma sequência HVR-H1, porém sequências diferentes das outras HVRs, aqueles 8 hits foram capazes de se ligar a 5 antígenos alvos diferentes. IDs de hit exemplificativos 4034, 6010 e 7183,
que se ligam a TAGT-8, TAGT-12 e TAGT-6, respectivamente, continham uma HVR-H1 que compreende a SEQ ID NO:16.
[203] Uma HVR-H2 que compreende SEQ ID NO:63 foi usada em 40 hits exclusivos. Com o uso desta mesma sequência HVR-H2, porém sequências diferentes das outras HVRs, aqueles 40 hits foram capazes de se ligar a 7 antígenos alvos diferentes. IDs de hit exemplificativos 4036, 5115 e 5404, que se ligam a TAGT-8, TAGT-12 e TAGT-6, respectivamente, continham uma HVR-H2 que compreende a SEQ ID NO:63.
[204] IDs de hit exemplificativos 3757 e 5103 continham a mesma região variável de cadeia pesada, incluindo as mesmas sequências HVR-H1 e HVR-H2 (SEQ ID NOS: 1 e 122), porém quando combinados com domínios de cadeia leve variável diferentes, eles se ligam a dois antígenos alvo diferentes (TAGT-6 e TAGT-10, respectivamente). Dois hits adicionais com estas mesmas sequências HVR-H1 e HVR-H2 poderiam se ligar a outro antígeno alvo, TAGT-
11.
[205] ID de hit exemplificativo 4027, que contém as sequências HVR-H1 e HVR-H2 da SEQ ID NOS:31 e 124, foi capaz de se ligar ao mesmo antígeno de duas espécies diferentes (TAGT-8H e TAGT-8M). Vários outros hits com estas mesmas sequências HVR-H1 e HVR-H2 demonstraram reatividade cruzada de espécies.
[206] A metodologia inovadora empregada para identificar o motivo dinâmico das regiões hipervariáveis redefinidas de anticorpos com base na variabilidade estrutural e de sequência levou ao projeto de um número limitado de componentes VH que podem se ligar ao mesmo ou a múltiplos alvos diferentes dependendo do segmento VL com o qual os componentes VH estão emparelhados Os dados e anticorpos descritos no presente documento revelam que a biblioteca de cadeia pesada, usada como um conjunto inteiro ou um subconjunto, é robusta o suficiente para servir como o componente VH para a descoberta de anticorpos.
[207] Todas as sequências de polipeptídeos são apresentadas do N-terminal ao C-terminal, exceto de indicado de outro modo.
[208] Todas as sequências de polinucleotídeos são apresentadas de 5’ a 3’, exceto se indicado de outro modo.
Sequência HVR-H1 projetada 1: FTFTDYGIHWV (SEQ ID NO:1) Sequência HVR-H1 projetada 2: FTFTGYAIHWV (SEQ ID NO:2) Sequência HVR-H1 projetada 3: FTFTNYGIHWV (SEQ ID NO:3) Sequência HVR-H1 projetada 4: YTFSDYAIHWV (SEQ ID NO:4) Sequência HVR-H1 projetada 5: YTFSDYGIHWV (SEQ ID NO:5) Sequência HVR-H1 projetada 6: YTFSGYAIHWV (SEQ ID NO:6) Sequência HVR-H1 projetada 7: YTFSGYGIHWV (SEQ ID NO:7) Sequência HVR-H1 projetada 8: YTFSNYGIHWV (SEQ ID NO:8) Sequência HVR-H1 projetada 9: YTFSSYGIHWV (SEQ ID NO:9) Sequência HVR-H1 projetada 10: YTFSGYWIHWV (SEQ ID NO:10) Sequência HVR-H1 projetada 11: YTFSNYWIHWV (SEQ ID NO:11) Sequência HVR-H1 projetada 12: FTFSGYWIHWV (SEQ ID NO:12) Sequência HVR-H1 projetada 13: FTFSNYWIHWV (SEQ ID NO:13) Sequência HVR-H1 projetada 14: YTFSDYWIHWV (SEQ ID NO:14) Sequência HVR-H1 projetada 15: YSISSGHHWAWI (SEQ ID NO:15) Sequência HVR-H1 projetada 16: YSISSGHYWNWI (SEQ ID
NO:16)
Sequência HVR-H1 projetada 17: YSISSGHYWSWI (SEQ ID
NO:17)
Sequência HVR-H1 projetada 18: YSISSGHYWTWI (SEQ ID
NO:18)
Sequência HVR-H1 projetada 19: YSISSGYHWAWI (SEQ ID
NO:19)
Sequência HVR-H1 projetada 20: YSISSGYHWDWI (SEQ ID
NO:20) Sequência HVR-H1 projetada 21: YSISSGYHWGWI (SEQ ID
NO:21)
Sequência HVR-H1 projetada 22: YSISSGYHWNWI (SEQ ID
NO:22)
Sequência HVR-H1 projetada 23: YSISSGYHWSWI (SEQ ID
NO:23)
Sequência HVR-H1 projetada 24: YSISSGHHWDWI (SEQ ID
NO:24)
Sequência HVR-H1 projetada 25: YSISSGYYWDWI (SEQ ID
NO:25)
Sequência HVR-H1 projetada 26: YSISSGYYWNWI (SEQ ID
NO:26)
Sequência HVR-H1 projetada 27: YSISSGYYWTWI (SEQ ID
NO:27)
Sequência HVR-H1 projetada 28: YSITSGHHWAWI (SEQ ID
NO:28)
Sequência HVR-H1 projetada 29: YSITSGHHWDWI (SEQ ID
NO:29)
Sequência HVR-H1 projetada 30: YSITSGHHWGWI (SEQ ID
NO:30)
Sequência HVR-H1 projetada 31: YSITSGHHWNWI (SEQ ID
NO:31)
Sequência HVR-H1 projetada 32: YSITSGHHWSWI (SEQ ID
NO:32)
Sequência HVR-H1 projetada 33: YSISSGHHWGWI (SEQ ID
NO:33)
Sequência HVR-H1 projetada 34: YSITSGHYWAWI (SEQ ID
NO:34) Sequência HVR-H1 projetada 35: YSITSGHYWDWI (SEQ ID
NO:35)
Sequência HVR-H1 projetada 36: YSITSGHYWGWI (SEQ ID
NO:36)
Sequência HVR-H1 projetada 37: YSITSGHYWNWI (SEQ ID
NO:37)
Sequência HVR-H1 projetada 38: YSITSGHYWSWI (SEQ ID
NO:38)
Sequência HVR-H1 projetada 39: YSITSGYHWAWI (SEQ ID
NO:39)
Sequência HVR-H1 projetada 40: YSITSGYHWGWI (SEQ ID
NO:40)
Sequência HVR-H1 projetada 41: YSISSGHHWNWI (SEQ ID
NO:41)
Sequência HVR-H1 projetada 42: YSITSGYHWNWI (SEQ ID
NO:42)
Sequência HVR-H1 projetada 43: YSITSGYHWSWI (SEQ ID
NO:43)
Sequência HVR-H1 projetada 44: YSITSGYYWDWI (SEQ ID
NO:44)
Sequência HVR-H1 projetada 45: YSISSGHHWTWI (SEQ ID
NO:45)
Sequência HVR-H1 projetada 46: YSISSGHYWDWI (SEQ ID
NO:46)
Sequência HVR-H1 projetada 47: FSLSTSGVAVSWI (SEQ ID
NO:47)
Sequência HVR-H1 projetada 48: FSLSTGGVAVGWI (SEQ ID
NO:48) Sequência HVR-H1 projetada 49: FSLSTGGVAVSWI (SEQ ID
NO:49)
Sequência HVR-H1 projetada 50: FSLSTGGVGVAWI (SEQ ID
NO:50)
Sequência HVR-H1 projetada 51: FSLSTGGVGVSWI (SEQ ID
NO:51)
Sequência HVR-H1 projetada 52: FSLSTSGVAVAWI (SEQ ID
NO:52)
Sequência HVR-H1 projetada 53: FTFSDYAIHWV (SEQ ID
NO:137)
Sequência HVR-H1 projetada 54: FTFSDYGIHWV (SEQ ID
NO:138)
Sequência HVR-H1 projetada 55: YTFSNYAIHWV (SEQ ID
NO:139)
Sequência HVR-H1 projetada 56: YTFSSYAIHWV (SEQ ID
NO:140)
Sequência HVR-H1 projetada 57: YTFTDYAIHWV (SEQ ID
NO:141)
Sequência HVR-H1 projetada 58: YTFTDYGIHWV (SEQ ID
NO:142)
Sequência HVR-H1 projetada 59: YTFTNYAIHWV (SEQ ID
NO:143)
Sequência HVR-H1 projetada 60: YTFTNYGIHWV (SEQ ID
NO:144)
Sequência HVR-H1 projetada 61: FTFSGYGIHWV (SEQ ID
NO:145)
Sequência HVR-H1 projetada 62: FTFSNYAIHWV (SEQ ID
NO:146) Sequência HVR-H1 projetada 63: FTFSSYGIHWV (SEQ ID
NO:147)
Sequência HVR-H1 projetada 64: FTFSDYWIHWV (SEQ ID
NO:148)
Sequência HVR-H1 projetada 65: FTFTSYWIHWV (SEQ ID
NO:149)
Sequência HVR-H1 projetada 66: YSISSGYYWGWI (SEQ ID
NO:150)
Sequência HVR-H1 projetada 67: YSITSGYYWNWI (SEQ ID
NO:151)
Sequência HVR-H1 projetada 68: YSITSGYYWSWI (SEQ ID
NO:152)
Sequência HVR-H1 projetada 69: YSISSGHYWAWI (SEQ ID
NO:153)
Sequência HVR-H1 projetada 70: YSISSGHYWGWI (SEQ ID
NO:154)
Sequência HVR-H1 projetada 71: FSLSTSGVAVGWI (SEQ ID
NO:155)
Sequência HVR-H1 projetada 72: FSLSTSGVGVAWI (SEQ ID
NO:156)
Sequência HVR-H1 projetada 73: FSLSTSGVGVGWI (SEQ ID
NO:157)
Sequência HVR-H1 projetada 74: FSLSTGGVGVGWI (SEQ ID
NO:158)
Sequência HVR-H2 projetada 1: LARIDWDDDKRYSPSLKSRL
(SEQ ID NO:53)
Sequência HVR-H2 projetada 2: LALIDWDDDKRYSPSLKSRL
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Sequência HVR-H2 projetada 82: IGIISPSGGGTNYAQKFQGRV
(SEQ ID NO134) Sequência HVR-H2 projetada 83: IGIIYPSGGSTNYAQKFQGRV (SEQ ID NO:135) Sequência HVR-H2 projetada 84: VGRIKSKTDGYTTEYAAPVKGRF (SEQ ID NO:136) Sequência HVR-H2 projetada 85: VSAISGSGSTTYYADSVKGRF (SEQ ID NO:159) Sequência HVR-H2 projetada 86: VSSISGSGDTTYYADSVKGRF (SEQ ID NO:160) Sequência HVR-H2 projetada 87: VSSISGSGGSTYYADSVKGRF (SEQ ID NO:161) Sequência HVR-H2 projetada 88: VSSISGSGGTTYYADSVKGRF (SEQ ID NO:162) Sequência HVR-H2 projetada 89: VSSISGDGGSTYYADSVKGRF (SEQ ID NO:163) Sequência HVR-H2 projetada 90: VSSISGSGSTTYYADSVKGRF (SEQ ID NO:164) Sequência FW-H1 de framework: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG (SEQ ID NO:165) Sequência FW-H2 de framework: RQAPGKGLEW (SEQ ID NO:166) Sequência FW-H3 de framework: TISSRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC (SEQ ID NO:167) Sequência FW-H4 de framework: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:168) ID de Hit 4029 - VH
CARDYGDYYGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 169) ID de HIT 4029 - VL
GKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYR TPFTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 170) ID de Hit 7097 - VH
GKGLEWVSYISGAGDTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVY YCAREGSDAVLGDWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 171) ID de HIT 7097 - VL
KLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSTPLTF GQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 172) ID de Hit 5906 - VH
KGLEWVSYISGDGDTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYY CARDLGGYYGWGRYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 173) ID de HIT 5906 - VL
KLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTF GQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 174) ID de Hit 7040 - VH
KGLEWIGWISPSGGSTNYAQKFQGRVTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYY CARDLTAGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 175) ID de HIT 7040 - VL
GQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 176) ID de Hit 5924 - VH
GKGLEWIGIISPSSGSTKYAQKFQGRVTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYY CARGAGVHYALDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 177) ID de HIT 5924 - VL
KLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTF GQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 178) ID de Hit 4034 - VH
KGLEWVSSISGYGSTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYY CARERYYGSTDYAFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 179) ID de HIT 4034 - VL
LLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCLQGTHFPWTFG QGTKVEIKR (SEQ ID NO: 180) ID de Hit 6010 - VH
KGLEWIGWINPNRGDTNYAQKFQGRVTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYY CARDYYGDFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 181) ID de HIT 6010 - VL
KLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPLTF GQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 182) ID de Hit 7183 - VH
CAREGSDTVLGDWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 183) ID de HIT 7183 - VL
KLLIYDASNRATGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTF GQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 184) ID de Hit 4036 - VH
GKGLEWIGEIYHSGSTYYSPSLKSRVTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC ARERYGSYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 185) ID de HIT 4036 - VL
GKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYRI PPTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 186) ID de Hit 5115 - VH
GKGLEWIGEIYHSGSTYYSPSLKSRVTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC ARESYYAFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 187) ID de HIT 5115 - VL
KLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYTTPLTF GQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 188) ID de Hit 5404 - VH
DNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYCARSPYYYGVFDYWGQGTLV TVSS (SEQ ID NO: 189) ID de HIT 5404 - VL
LLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLT ISSLQPEDFATYYCQQYTHDPVTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 190) ID de Hit 3757 - VH
GLEWIGWISPSGGGTKYAQKFQGRVTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC ARHSYYGVGDFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 191) ID de HIT 3757 - VL
KLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTF GQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 192) ID de Hit 5103 - VH
GLEWIGWISPSGGGTKYAQKFQGRVTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC ARHSYYGVGDFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 193) ID de HIT 5103 - VL
KLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTF GQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 194) ID de Hit 4027 - VH
KGLEWIGWISPSSGGTKYAQKFQGRVTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYY CARGFDGFHYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 195) ID de HIT 4027 - VL
GKAPKLLIYDASNRATGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYS WPWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 196) VH na Figura 1B
GLEWVSGISGAGDTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC ARERDYDFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:197) Fórmula (I) X1TFX2X3YX4IHWV, em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G, ou W (SEQ ID NO:198) Fórmula (II) YSIX1SGX2X3WX4WI, em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S, ou T (SEQ ID NO:199) Fórmula (III) FSLSTX1GVX2VX3WI, em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S, ou T (SEQ ID NO:200) Fórmula (IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL, em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S, ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S, ou Y e X6 é P ou T (SEQ ID NO:201) Fórmula (V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, E, S, ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:202) Fórmula (VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, R, S, ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:203) Fórmula (VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF, em que X1 é A, G, S, V, ou Y, X2 é A, D, S, ou Y, X3 é D, G, ou S e X4 é S ou T (SEQ ID NO:204) Fórmula (VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G, ou S e X4 é K ou N (SEQ ID NO:205) Fórmula (IX)
IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV, em que X1 é I, R, ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G, ou S e X5 é K ou N (SEQ ID NO:206) Fórmula (X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S (SEQ ID NO:207) Fórmula (XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV, em que X1 é A, D, ou E, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y (SEQ ID NO:208) Fórmula (XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV, em que X1 é D, E, ou S, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y (SEQ ID NO:209) Fórmula (XIII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF, em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é P ou S (SEQ ID NO:210) Iniciador F_1999 CGTTTGTCCTGTGCAGCTTCCGG (SEQ ID NO:211) Iniciador R_1999 CGAGGCCCTTACCCGGGGCCTGACG (SEQ ID NO:212) Iniciador F_2003 CCGGGTAAGGGCCTCGAGTGG (SEQ ID NO:213) Iniciador R_2003 GAGCACGTCCGTTCGAATTGTCGCGACTTATAG (SEQ ID NO:214) Iniciador S1089
ACAACTGAACAGCTTAAGAGCTGAGGACACTGCCGTCTATTA TTG (SEQ ID NO:215) Iniciador S1090 GAGGAGACGGTGACTAGTGTTCCTTGACCCCA (SEQ ID
NO:216)
Iniciador F_2898
NO:217)
Iniciador R_2898
CGGAGCTTTTCCTGGTTTCTGTTGATAC (SEQ ID NO:218)
Iniciador F_2013
GAAACCAGGAAAAGCTCCGAAG (SEQ ID NO:219)
Iniciador R_2013 CGTCCCGGAACCGGATCCAGAGAAGCGAG (SEQ ID NO:220)
Iniciador F2929
NO:221)
Iniciador R2929
GATCTCCACCTTGGTACCCTGTCCGAA (SEQ ID NO:222)
sequência HVR-H3 1: ARDLGGYYGWGRYFDY (SEQ ID NO:223)
sequência HVR-H3 2: ARDLTAGGFDY (SEQ ID NO:224)
sequência HVR-H3 3: ARDPGVGGFDV (SEQ ID NO:225)
sequência HVR-H3 4: ARDPGYTWYFDV (SEQ ID NO:226)
sequência HVR-H3 5: ARDYGDYYGFDY (SEQ ID NO:227)
sequência HVR-H3 6: ARDYGYTWYFDV (SEQ ID NO:228)
sequência HVR-H3 7: ARDYYGDFDY (SEQ ID NO:229)
sequência HVR-H3 8: AREGSDAVLGDWFAY (SEQ ID NO:230)
sequência HVR-H3 9: AREGSDTVLGDWFAY (SEQ ID NO:231)
sequência HVR-H3 10: ARERYGSYYFDY (SEQ ID NO:232)
sequência HVR-H3 11: ARERYYGSTDYAFDY (SEQ ID NO:233)
sequência HVR-H3 12: ARESYYAFDY (SEQ ID NO:234)
sequência HVR-H3 13: ARGAGVHYALDY (SEQ ID NO:235)
sequência HVR-H3 14: ARGFDGFHY (SEQ ID NO:236)
sequência HVR-H3 15: ARGFYGGALDV (SEQ ID NO:237)
sequência HVR-H3 16: ARGGGGYYFDV (SEQ ID NO:238)
sequência HVR-H3 17: ARGGGLGFDY (SEQ ID NO:239)
sequência HVR-H3 18: ARGGLGPFDI (SEQ ID NO:240)
sequência HVR-H3 19: ARGGSDTVIGDWFAY (SEQ ID NO:241)
sequência HVR-H3 20: ARGGVGPFDI (SEQ ID NO:242)
sequência HVR-H3 21: ARGGYGGYLDV (SEQ ID NO:243)
sequência HVR-H3 22: ARGLSSGYFDY (SEQ ID NO:244) sequência HVR-H3 23: ARGSWYFDV (SEQ ID NO:245)
sequência HVR-H3 24: ARGTRGLDY (SEQ ID NO:246)
sequência HVR-H3 25: ARGYSDYFDY (SEQ ID NO:247)
sequência HVR-H3 26: ARGYYYGRAFDY (SEQ ID NO:248)
sequência HVR-H3 27: ARHSYYGVGDFDY (SEQ ID NO:249)
sequência HVR-H3 28: ARLFEGFPY (SEQ ID NO:250)
sequência HVR-H3 29: ARLYDYFAY (SEQ ID NO:251)
sequência HVR-H3 30: ARSGYYALDY (SEQ ID NO: 252)
sequência HVR-H3 31: ARSPYYYGVFDY (SEQ ID NO:253)
sequência HVR-H3 32: ARSYVYFDY (SEQ ID NO:254)
sequência HVR-H3 33: ARDGLGLRGVYYYYYGLDV (SEQ ID
NO:255)
sequência HVR-H3 34: ARVGESGGIESPYYYYGLDV (SEQ ID
NO:256)
sequência HVR-L1 1: RASESVDFYGISFLP (SEQ ID NO: 257)
sequência HVR-L1 2: RASQSVDFYGISFLA (SEQ ID NO:258)
sequência HVR-L1 3: RASQSVDFYGKSFLD (SEQ ID NO:259)
sequência HVR-L1 4: SASSRVGSVY (SEQ ID NO:260)
sequência HVR-L1 5: SASSRVSHVF (SEQ ID NO:261)
sequência HVR-L1 6: RASQGISSYLA (SEQ ID NO:262)
sequência HVR-L1 7: RASQSVSSYLA (SEQ ID NO:263)
sequência HVR-L1 8: RASQSISSYLN (SEQ ID NO:264)
sequência HVR-L3 1: FCLQGTHFPWT (SEQ ID NO:265)
sequência HVR-L3 2: YCQQSYRTPFT (SEQ ID NO:266)
sequência HVR-L3 3: YCQQSYSWPWT (SEQ ID NO:267)
sequência HVR-L3 4: YCQQYTHDPVT (SEQ ID NO:268)
sequência HVR-L3 5: YCQQYYRIPPT (SEQ ID NO:269)
sequência HVR-L3 6: YCQHHYGTPLT (SEQ ID NO:270) sequência HVR-L3 7: YCQQSYSTPLT (SEQ ID NO:271)
sequência HVR-L3 8: YCQQSYSTPPT (SEQ ID NO:272)
sequência HVR-L3 9: YCQQYYSTPLT (SEQ ID NO:273)
sequência HVR-L3 10: YCQQYYTTPLT (SEQ ID NO:274)
Claims (16)
1. CADEIA PESADA DE ANTICORPO, caracterizada por compreender uma região variável de cadeia pesada que compreende uma HVR- H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em: (Fórmula I) X1TFX2X3YX4IHWV (SEQ ID NO:198), em que X1 é F ou Y, X2 é S ou T, X3 é D, G, N, ou S e X4 é A, G ou W; (Fórmula II) YSIX1SGX2X3WX4WI (SEQ ID NO:199), em que X1 é S ou T, X2 é H ou Y, X3 é H ou Y e X4 é A, D, G, N, S ou T; e (Fórmula III) FSLSTX1GVX2VX3WI (SEQ ID NO:200), em que X1 é G ou S, X2 é A ou G e X3 é A, G, S ou T; e em que a HVR-H2 compreende uma sequência de aminoácidos, de acordo com uma fórmula selecionada do grupo que consiste em: (Fórmula IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL (SEQ ID NO:201), em que X1 é L ou R, X2 é D ou Y, X3 é A, D, S ou Y, X4 é D ou G, X5 é R, S ou Y e X6 é P ou T; (Fórmula V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV (SEQ ID NO:202), em que X1 é A, D, E, S ou Y, X2 é S ou Y e X3 é H ou Y; (Fórmula VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV (SEQ ID NO:203), em que X1 é D, E, R, S ou Y, X2 é H ou Y, X3 é N ou S e X4 é N ou Y; (Fórmula VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF (SEQ ID NO:204), em que X1 é A, G, S, V ou Y, X2 é A, D, S ou Y, X3 é D, G ou S e X4 é S ou T; (Fórmula VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV (SEQ ID NO:205), em que X1 é I, R ou W, X2 é F ou R, X3 é D, G ou S e X4 é K ou N; (Fórmula IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV (SEQ ID NO:206), em que X1 é I, R ou W, X2 é S ou Y, X3 é G ou S, X4 é D, G ou S e X5 é K ou N;
e (Fórmula X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF (SEQ ID NO:207), em que X1 é K ou R, X2 é A ou T, X3 é D ou Y, X4 é G ou Y, X5 é D ou E e X6 é P ou S.
2. CADEIA PESADA DE ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por: a. a região variável de cadeia pesada compreender uma HVR- H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e 137-158; b. a região variável de cadeia pesada compreender uma HVR- H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52; c. a região variável de cadeia pesada compreender uma HVR- H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164; d. a região variável de cadeia pesada compreender uma HVR- H2 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136; e. a região variável de cadeia pesada compreender uma HVR- H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e 137-158, e uma HVR-H2 do anticorpo que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136 e 159-164; f. a região variável de cadeia pesada compreender uma HVR- H1 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:1-52 e uma HVR-H2 do anticorpo que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOS:53-136;
g. a região variável de cadeia pesada compreender três dentre uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IX); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (IV); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VI); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (II) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (III) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (V); e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (I) e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da Fórmula (VIII);
h. a região variável de cadeia pesada compreender três dentre uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3, em que a HVR-H1 e a HVR-H2 são selecionadas do grupo que consiste em: uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:157, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:138, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:154, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-
H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:161; uma HVR-
H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma
HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63; uma
HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:145, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:128;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:153,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:63;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:155,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:67;
uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:156,
e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:100; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID
NO:51, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ
ID NO:138, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:123; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da
SEQ ID NO:139, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:110; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:126; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:129; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:31, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:124; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:130; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:150, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:132; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:158, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:162; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:12, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:82; uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:149, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:117; e uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7, e uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:134; ou i. a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-
H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 223-256.
3. CADEIA PESADA DE ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizada por: a. a região variável de cadeia pesada compreender um FW-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:165, um FW-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:166, um FW-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:167 e/ou um FW- H4 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:168; e/ou b. a região variável de cadeia pesada compreender uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 e 195.
4. ANTICORPO, caracterizado por compreender uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada é uma cadeia pesada conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 3; opcionalmente em que: a. o anticorpo se liga a pelo menos 1 alvo com uma constante de dissociação de equilíbrio (Kd) entre cerca de 10-7 e cerca de 10-11 M; e/ou b. o anticorpo ter uma temperatura de fusão (Tm) entre cerca de 60 °C e cerca de 90 °C.
5. BIBLIOTECA, caracterizada por compreender polinucleotídeos, em que um dos polinucleotídeos codifica uma região variável de cadeia pesada de anticorpo conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.
6. BIBLIOTECA, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelos polinucleotídeos conterem menos do que cerca de 6,5*104 combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2, opcionalmente em que:
a. os polinucleotídeos contêm menos do que cerca de 6700 combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2, ou b. os polinucleotídeos contêm cerca de 6660 ou menos combinações exclusivas de sequências HVR-H1 e HVR-H2.
7. BIBLIOTECA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 6, caracterizada pelos polinucleotídeos codificarem cadeias pesadas de anticopor de comprimento total.
8. BIBLIOTECA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7, caracterizada por adicionalmente compreender polinucleotídoes que codificam regiões variáveis de cade leve de anticorpo, opcionalmente em que: a. as regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo compreendem uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR-L3, em que a HVR-L1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 257-264 e/ou a HVR-L3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 265-274; b. os polinucleotídeos que codificam regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo incluem pelo menos uma sequência exclusiva; c. os polinucleotídeos que codificam regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo incluem pelo menos cerca de 280 sequências exclusivas; d. os polinucleotídeos que codificarem regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo incluem pelo menos cerca de 105 sequências exclusivas; e/ou e. os polinucleotídeos codificam uma pluralidade de anticorpos exclusivos, opcionalmente em que as regiões variáveis de cadeia pesada de cada anticorpo da pluralidade compreendem uma sequência idêntica.
9. BIBLIOTECA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8, caracterizada por: a. pelo menos um dentre a HVR-H1 e a HVR-H2 da região variável de cadeia pesada de anticorpo adota múltiplas conformações, conforme analisado pela determinação estrutural e/ou modelagem computacional; b. pelo menos um dos polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada de anticorpo se situa num vetor, opcionalmente em que o vetor é um vetor de expressão ou o vetor é um vetor de exibição; e/ou c. pelo menos um dos polinucleotídeos que codifica a região variável de cadeia pesada de anticorpo se situa numa célula, opcionalmente em que a célula é uma célula bacteriana, de levedura ou de mamífero.
10. KIT, caracterizado por compreender a biblioteca de polinucleotídeos, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 5 a 9.
11. MÉTODO DE PREPARO DE UMA BIBLIOTECA, caracterizado por compreender fornecer e montar as sequências de polinucleotídeo da biblioteca, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 5 a 9.
12. MÉTODO DE PRODUÇÃO DE UMA BIBLIOTECA DE ANTICORPOS, caracterizado por compreender as etapas de: (a) selecionar uma, duas ou três HVRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência que tem múltiplas conformações; e (b) montar sequências de polinucleotídeos para produzir uma biblioteca de polinucleotídeos que codificam uma pluralidade de sequências de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo; em que um dos polinucleotídeos codifica as regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo, conforme definidas em qualquer uma das regiões 1 a 3; opcionalmente em que as sequências de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo são sequências de anticorpos humanos.
13. FAGO, caracterizado por compreender pelo menos um polipeptídeo exibido em sua superfície, em que o pelo menos um polipeptídeo compreende uma região variável de cadeia pesada de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.
14. BIBLIOTECA, caracterizada por compreender domínios de ligação ao antígeno, em que um dos domínios de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.
15. MÉTODO DE GERAÇÃO DE UM ANTICORPO BIESPECÍFICO que compreende duas regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo e duas regiões variáveis de cadeia leve idênticas, caracterizado por compreender: (a) realizar triagem de um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga a um primeiro antígeno, em que o primeiro domínio de ligação ao antígeno compreende uma primeira região variável de cadeia pesada de anticorpo e uma primeira região variável de cadeia leve de anticorpo, em que a primeira região variável de cadeia pesada de anticorpo é uma região variável de cadeia pesada de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 3; (b) realizar triagem para um segundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um segundo antígeno, em que o segundo domínio de ligação ao antígeno compreende uma segunda região variável de cadeia pesada de anticorpo e uma segunda região variável de cadeia leve de anticorpo, em que a segunda região variável de cadeia pesada de anticorpo tem a mesma sequência que a primeira região variável de cadeia pesada de anticorpo; e (c) produzir um anticorpo biespecífico que compreende o primeiro domínio de ligação ao antígeno e o segundo domínio de ligação ao antígeno.
16. ANTICORPO BIESPECÍFICO, caracterizado por compreender:
(a) um primeiro domínio de ligação que compreende uma primeira região variável de cadeia pesada e uma primeira região variável de cadeia leve, em que o primeiro domínio de ligação se liga a um primeiro alvo;
(b) um segundo domínio de ligação que compreende uma segunda região variável de cadeia pesada e uma segunda região variável de cadeia leve, em que o segundo domínio de ligação se liga a um segundo alvo,
em que a segunda região variável de cadeia pesada tem uma sequência idêntica à primeira sequência de regiões variáveis de cadeia pesada; e em que a primeira região variável de cadeia leve de anticorpo é conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.
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| US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| EP0861893A3 (en) | 1991-09-19 | 1999-11-10 | Genentech, Inc. | High level expression of immunoglobulin polypeptides |
| WO1993008829A1 (en) | 1991-11-04 | 1993-05-13 | The Regents Of The University Of California | Compositions that mediate killing of hiv-infected cells |
| US20030036092A1 (en) | 1991-11-15 | 2003-02-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Directed evolution of enzymes and antibodies |
| US5866344A (en) | 1991-11-15 | 1999-02-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibody selection methods using cell surface expressed libraries |
| US5789199A (en) | 1994-11-03 | 1998-08-04 | Genentech, Inc. | Process for bacterial production of polypeptides |
| US5840523A (en) | 1995-03-01 | 1998-11-24 | Genetech, Inc. | Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| EP1978033A3 (en) | 1995-04-27 | 2008-12-24 | Amgen Fremont Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| EP0823941A4 (en) | 1995-04-28 | 2001-09-19 | Abgenix Inc | HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES |
| AU5702298A (en) | 1996-12-03 | 1998-06-29 | Abgenix, Inc. | Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and VK regions nd antibodies produced therefrom |
| US6040498A (en) | 1998-08-11 | 2000-03-21 | North Caroline State University | Genetically engineered duckweed |
| ES2248127T3 (es) | 1999-10-04 | 2006-03-16 | Medicago Inc. | Metodo para regular la transcripcion de genes foraneos en presencia de nigtrogeno. |
| US7125978B1 (en) | 1999-10-04 | 2006-10-24 | Medicago Inc. | Promoter for regulating expression of foreign genes |
| EP1457559B1 (en) * | 2001-11-22 | 2008-01-16 | Keio University | Artificial antibody library with super-repertory |
| US7785903B2 (en) | 2004-04-09 | 2010-08-31 | Genentech, Inc. | Variable domain library and uses |
| ATE507242T1 (de) | 2005-05-12 | 2011-05-15 | Crucell Holland Bv | Wirtszellenspezifische bindungsmoleküle, die dazu in der lage sind, viren zu neutralisieren, und anwendungen davon |
| WO2007056441A2 (en) | 2005-11-07 | 2007-05-18 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences |
| EP2604279A1 (en) | 2008-03-27 | 2013-06-19 | ZymoGenetics, Inc. | Compositions and methods for inhibiting PDGFRBETA and VEGF-A |
| KR102810907B1 (ko) | 2010-07-16 | 2025-05-21 | 아디맵 엘엘씨 | 항체 라이브러리 |
| CA2808482C (en) | 2010-08-16 | 2021-10-26 | Novimmune S.A. | Methods for the generation of multispecific and multivalent antibodies |
| US20160145604A1 (en) | 2013-03-14 | 2016-05-26 | Adagene Inc. | An Integrated System for Library Construction, Affinity Binder Screening and Expression Thereof |
| CN103603057B (zh) | 2013-07-03 | 2016-01-06 | 深圳大学 | 基于可感染病毒颗粒型抗体重链库/轻链库的抗体筛选和制备方法 |
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