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BR112018068177B1 - Composto, uso do composto e composição para eliminação do vírus da hepatite b com agentes antivirais - Google Patents

Composto, uso do composto e composição para eliminação do vírus da hepatite b com agentes antivirais Download PDF

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BR112018068177B1
BR112018068177B1 BR112018068177-6A BR112018068177A BR112018068177B1 BR 112018068177 B1 BR112018068177 B1 BR 112018068177B1 BR 112018068177 A BR112018068177 A BR 112018068177A BR 112018068177 B1 BR112018068177 B1 BR 112018068177B1
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Schinazi Raymond F.
Boucle Sebastien
Amblard Franck
Sari Ozkan
Bassit Leda
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Emory University
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Abstract

A presente invenção é dirigida a compostos, composições e métodos para prevenir, tratar ou curar infecção por Hepatite B (HBV) em sujeitos humanos ou outros hospedeiros animais. Os compostos são também sais, pró-drogas e outros derivados dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis como composições farmacêuticas e métodos para tratamento, prevenção ou erradicação da infecção por HBV.

Description

Campo da invenção
[0001] A presente invenção é dirigida a compostos, métodos e composições para prevenir, tratar e/ou curar infecções pelo vírus da hepatite B (HBV). Mais especificamente, a invenção descreve compostos aromáticos/heteroaromáticos especificamente substituídos, sais farmaceuticamente aceitáveis, ou outros derivados dos mesmos e o uso dos mesmos no tratamento de infecções por HBV.
Fundamentos da Invenção
[0002] O vírus da hepatite B (HBV) causa um grave problema de saúde humana e perde apenas para o tabaco como causa do câncer humano. O mecanismo pelo qual o HBV induz o câncer é desconhecido. Postula-se que ele pode diretamente desencadear desenvolvimento de tumor, ou indiretamente desencadear desenvolvimento de tumor através de inflamação crônica, cirrose e regeneração celular associada à infecção.
[0003] Após um período de incubação de 2 a 6 meses, durante o qual o hospedeiro normalmente não tem conhecimento da infecção, a infecção pelo HBV pode levar à hepatite aguda e danos no fígado, resultando em dor abdominal, icterícia e níveis sanguíneos elevados de certas enzimas. O HBV pode causar hepatite fulminante, uma forma rapidamente progressiva, frequentemente fatal da doença, na qual grandes seções do fígado são destruídas.
[0004] Os indivíduos tipicamente se recuperam da fase aguda da infecção pelo HBV. Em alguns pacientes, no entanto, o vírus continua a replicação por um período prolongado ou indefinido, causando uma infecção crônica. As infecções crônicas podem levar à hepatite crônica persistente. Pacientes infectados com HBV persistente crônico são mais comuns em países em desenvolvimento. Em meados de 1991, havia aproximadamente 225 milhões de portadores crônicos de HBV somente na Ásia e em todo o mundo quase 300 milhões de portadores. A hepatite crônica persistente pode causar fadiga, cirrose hepática e carcinoma hepatocelular, um câncer primário de fígado.
[0005] Nos países industrializados, o grupo de alto risco para infecção por HBV inclui aqueles em contato com portadores de HBV ou com suas amostras de sangue. A epidemiologia do HBV é muito semelhante à do HIV/AIDS, razão pela qual a infecção pelo HBV é comum entre pacientes infectados pelo HIV ou portadores de AIDS. No entanto, o HBV é mais contagioso do que o HIV.
[0006] 3TC (lamivudina), interferon alfa-2b, peginterferon alfa-2a, hepsera (adefovir dipivoxil), baraclude (entecavir) e Tyzeka (Telbivudina) são atualmente drogas aprovadas pelo FDA para o tratamento da infecção pelo HBV. Outro nucleosídeo, o tenofovir alafenamida fumarato (TAF) (anteriormente GS-7340) está atualmente na fase 3. Todas essas drogas são altamente eficazes na redução da carga viral, mas nenhuma dessas drogas fornece uma cura para o HBV. Além disso, seu impacto pode ser limitado pela resistência aos medicamentos, baixa eficácia e tolerabilidade. As baixas taxas de cura do HBV são atribuídas, pelo menos em parte, à presença e persistência de DNA circular covalentemente fechado (cccDNA) no núcleo de hepatócitos infectados.
[0007] Consequentemente, existe uma necessidade urgente de novas drogas para o HBV que sejam potentes, seguras, que funcionem por um mecanismo diferente dos análogos dos nucleosídeos, e possam reduzir a forma latente do HBV conhecida como cccDNA.
[0008] Seria vantajoso fornecer novos agentes antivirais, composições incluindo estes agentes e métodos de tratamento utilizando estes agentes para tratar HBV e prevenir o aparecimento de HBV resistente à droga. A presente invenção proporciona tais agentes, composições e métodos.
Sumário da Invenção
[0009] A presente invenção proporciona compostos, métodos e composições para prevenir, tratar e/ou curar a infecção por HBV em um hospedeiro, ou reduzir a atividade de HBV no hospedeiro. Os métodos envolvem administrar uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de pelo menos um composto como aqui descrito para tratar, curar ou prevenir uma infecção por, ou uma quantidade suficiente para reduzir a atividade biológica de uma infecção por HBV.
[00010] Os compostos também podem ser usados para tratar outras infecções virais, incluindo os vírus flaviviridae, como o vírus do Nilo Ocidental (WNV) e o vírus da hepatite C (HCV), dengue, zika vírus.
[00011] As composições farmacêuticas incluem um ou mais dos compostos aqui descritos, em combinação com um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável, para o tratamento de um hospedeiro infectado com HBV. Estes compostos podem ser utilizados em combinação com inibidores nucleosídeos e não nucleosídeos do HBV. As formulações podem incluir ainda pelo menos um outro agente terapêutico. Além disso, a presente invenção inclui processos para preparar esses compostos.
[00012] Numa modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: A é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; B é um anel de seis ou sete membros ou um anel de seis ou sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel C5-14 bicíclico, quando R1 e R1’ estão fixados a um carbono, eles são, independentemente, hidrogênio, halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, C2-6alquenil, ciano, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; quando R1 e R1’ estão fixados a um nitrogênio, eles são, independentemente, hidrogênio, C2-6 alcóxi, C3-6 alcoxialquil, C2-6 alquenil, alcoxicarbonil, carbonilalquil, carbonil aril, C1-6 alquil, heterociclilalquil, C2-6 hidroxialquil ou S(O)2R’; cada R’ é independentemente H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, C3-6 cicloalquil, aril, heteroaril, alquilaril ou arilalquil, ou se dois R' residirem no mesmo átomo de nitrogênio, eles podem se unir para formar um anel C3-6 opcionalmente contendo um heteroátomo N, O ou S; os grupos R' podem opcionalmente ser substituídos por um ou mais substituintes, cujos substituintes são, independentemente, halo, C1-6 haloalquil, C1-6 hidroxialquil, hidroxil, carboxil, acil, aril, aciloxi, amino, amido, derivados carboxil, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alcóxi, alcoxialquil, ariloxi, nitro,ciano, ácido sulfônico, tiol, imina, sulfonil, sulfanil, sulfinil, sulfamonil, éster, ácido carboxílico, amida, fosfonil, fosfinil, fosforil, fosfina, tioéster, tioéter, haleto ácido, anidrido, oxima, hidrozina, carbamato, ácido fosfônico ou fosfonato; quer desprotegidos, ou protegidos conforme necessário, como é do conhecimento dos versados na técnica por exemplo, como ensinado em Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991, incorporado por meio deste por referência; u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; R3 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R2 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, tais como fenil, heteroaril, incluindo anéis heteroaromáticos de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio e anéis heteroaromáticos de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que, independentemente, são N, O ou S, alquilaril, arilalquil, anel de seis membros ou um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, um anel de sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um, ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; cicloalquil, alquil-heteroaril ou alquilaril; R2 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, os quais, independentemente, são halogênios (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C26 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; ou é opcionalmente substituído por aril, aril substituído, heteroaril, ou heteroaril substituído, em que os substituintes no aril substituído e heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil. ou R2 e R3 podem se juntar com o nitrogênio ao qual eles estão ligados para formar um anel bicíclico ou em ponte de 6 a 10 membros, um anel saturado de 3 a 8, ou um anel insaturado de 5 membros; tais anéis bicíclicos, ligados em ponte, saturados e insaturados contendo opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais, onde cada um é, independentemente, O, S ou N e, opcionalmente, sendo substituído por um ou mais substituintes, em que cada um, independentemente, é halogênio (incluindo F, Cl, Br, I), CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil.
[00013] Numa segunda modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; C é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel C414 bicíclico, alquilaril ou alquil-heteroaril; D é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel C5-14 bicíclico, R4 é H ou C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil; numa modalidade, R4 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, R5 é alquilaril, arilalquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, tal como fenil, heteroaril, incluindo anéis heteroaromáticos de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio e anéis heteroaromáticos de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que, independentemente, são N, O ou S; e um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; numa modalidade, R5 alquilaril, arilalquil, fenil, um heteroaril de cinco ou seis membros, ou um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; R5 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um dos quais é, independentemente, halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C26 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, cicloalquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; ou é substituído por aril, aril substituído, heteroaril ou heteroaril substituído, onde os substituintes no aril substituído e no heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil; em que, numa modalidade, se C é fenil, D não é fenil ou um heteroaril de anel de 5 membros, e uma outra modalidade, se C é fenil e D é fenil ou um heteroaril de 5 membros, então, R5 não é alquilaril, alquenil, ou um anel em ponte de seis membros; ou quando Y é , R4 e R5 juntamente com o nitrogênio ao qual eles estão ligados para formar um anel de 3 a 4 membros opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um dos quais é, independentemente, halogênio (incluindo, F, Cl, Br, I), CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil.
[00014] Numa modalidade, D é , onde R6 é H, Cl, F ou Br, e R7 é H, metil, F ou Cl.
[00015] Num aspecto desta modalidade, quando Y é , R5 não é
[00016] Num outro aspecto desta modalidade, quando R4 é etil, então, R5 não é.
[00017] Numa terceira modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; E é um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, onde cada um é, independentemente, N, O ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; F é um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel C4-14 bicíclico, Z é ou R8 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R9 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, um anel de seis membros ou anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são independentemente N, O ou S, um anel de sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, os quais são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel de três membros; R9 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um dos quais é independentemente halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C26 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, cicloalquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; ou é substituído por aril, aril substituído, heteroaril ou heteroaril substituído, em que os substituintes no aril substituído e no heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil; ou R8 e R9 podem se juntar com o nitrogênio ao qual eles estão ligados para formar um anel bicíclico ou em ponte de 6 a 10 membros ou um anel saturado de 3 a 8; essa fração de anel bicíclica, ligada em ponte e saturada contendo opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais que, independentemente, são O, S ou N e, opcionalmente, sendo substituídos por um ou mais substituintes, cada um, independentemente, é halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, hidróxi N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil, ou C1-6 hidroxialquil.
[00018] Numa quarta modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: G é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; H é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel não aromático de seis membros opcionalmente contendo um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel C4-14 bicíclico; quando R1 é R1’ estão fixados a um carbono são, independentemente, hidrogênio, halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; quando R1 e R1’ são ligados a um nitrogênio eles são, independentemente, hidrogênio, C1-6 alcóxi, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, carbonilalquil, carbonil aril, C1-6 alquil, C2-6 alquinil, C2-6 alquenil, heterocicloalquil, C1-6 hidroxialquil ou S(O)2R’; Cada R’ é independentemente H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, C3-6 cicloalquil, aril, heteroaril, alquilaril ou arilalquil, ou se dois R' residem no mesmo átomo de nitrogênio, eles podem se juntar para formar um anel C3-6 alquil opcionalmente contendo um N, O ou S; em que os grupos R' podem ser substituídos por um ou mais substituintes como definidos acima, por exemplo C1-6 hidroxialquil, aminoalquil ou alcoxialquil; u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; W é R10 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R11 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, heteroaril, alquilaril, arilalquil, fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel de seis membros ou um anel de seis membros em ponte ou anel espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, os quais são, independentemente, N, O ou S; um anel de três membros, alquil-heteroaril ou alquilaril; em que R11 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio (incluindo F, Cl, Br, e I), SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, C2-6 alquenil, ciano, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil, C1-6 hidroxialquil, aril, aril substituído, heteroaril, e heteroaril substituído, onde substituintes no aril substituído e heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil; ou R10 e R11 podem se juntar com o nitrogênio ao qual eles estão fixados e formar um anel bicíclico ou em ponte de 6 a 10 membros ou um anel saturado de 3 a 8; tal fração de anel bicíclica, ligada em ponte ou saturada contendo opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais, que são cada um, independentemente, O, S ou N, e opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, cada um dos quais é, independentemente, halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil.
[00019] Numa quinta modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; I é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; J é um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de seis ou sete membros ou um anel de seis ou sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; ou um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S. W é , R12 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R13 é C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, incluindo fenil, heteroaril, incluindo anéis heteroaromáticos de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio e anéis heteroaromáticos de cinco um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; alquilaril, arilalquil, um anel C4-14 bicíclico; um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, R13 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio (F, Cl, Br, I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, cicloalquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, haloalquil, heterociclilalquil, ou C1-6 hidroxialquil; ou é opcionalmente substituído por aril, aril substituído, heteroaril e heteroaril substituído, onde substituintes no aril substituído e heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil; ou R12 e R13 juntos com o nitrogênio ao qual eles estão ligados formam um anel de 3 a 4 membros opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio (F, Cl, Br, I), CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil e C1-6 hidroxialquil.
[00020] Numa sexta modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; K é um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; um anel C4-14 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; L é um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de seis ou sete membros ou um anel de seis ou sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S ou um anel C414 bicíclico. W é R14 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R15 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, um anel de seis membros ou anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são independentemente N, O ou S, um anel de sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, os quais são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; R15 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes que são, independentemente, halogênio (F, Cl, Br, I), SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, cicloalquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; ou é opcionalmente substituído por aril, aril substituído, heteroaril ou heteroaril substituído, onde os substituintes no aril substituído e no heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil; ou R14 e R15 podem se juntar ao nitrogênio ao qual estão ligados para formar um anel bicíclico ou ligado em ponte de 6 a 10 membros ou um anel saturado de 3 a 8; essa fração de anel bicíclica, ligada em ponte e saturada contendo opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais que são, independentemente, O, S ou N, e opcionalmente sendo substituídos por um ou mais substituintes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em halogênio (incluindo F, Cl, Br, e I), SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil e C1-6 hidroxialquil.
[00021] Numa sétima modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; M é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril, N é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos independentemente N, O, ou S, um anel de seis ou sete membros ou um anel de seis ou sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; ou um anel C414 bicíclico, V é ; e R16 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, tais como, fenil, heteroaril, tal como um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio ou um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; um anel de seis membros ou um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; alquilaril, arilalquil, alquil-heteroaril ou alquilaril, em que R16 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio (incluindo F, Cl, Br, e I), SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, C2-6 alquenil, ciano, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil, C1-6 hidroxialquil, aril, aril substituído, heteroaril e heteroaril substituído, em que os substituintes no aril substituído e heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil.
[00022] Compostos representativos caindo dentro do escopo da invenção incluem os seguintes: e e sais ou pró-drogas farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[00023] Compostos adicionais também incluem sais ou pró-drogas farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[00024] Compostos particularmente preferidos incluem: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00025] Também são divulgadas composições farmacêuticas que incluem um ou mais dos compostos de Fórmulas I-VII e um transportador farmaceuticamente aceitável. O transportador pode ser, por exemplo, uma composição oral, uma composição injetável, uma composição transdérmica ou uma composição nanoparticulada. As composições podem ainda incluir um segundo agente antiviral, particularmente quando o agente é ativo contra a infecção por HBV, e mais particularmente quando o segundo agente antiviral é ativo contra a infecção por HBV através de um mecanismo diferente do que os compostos instantaneamente descritos.
[00026] Os tipos representativos de segundos agentes antivirais incluem inibidores da polimerase, inibidores da entrada viral, inibidores da maturação viral, moduladores do conjunto de capsídeo, inibidores de IMPDH, inibidores de protease, agentes terapêuticos baseados na imunidade, inibidores de transcriptase reversa, agonistas de TLR e agentes de mecanismo distinto ou desconhecido. Combinações desses agentes podem ser usadas.
[00027] Os compostos aqui descritos podem ser utilizados para preparar medicamentos para tratar infecção por HBV, prevenir uma infecção por HBV ou reduzir a atividade biológica de uma infecção com HBV. Os medicamentos podem ainda incluir outro agente anti-HBV.
[00028] Os compostos e composições podem ser utilizados em métodos para o tratamento de um hospedeiro infectado com HBV, prevenindo uma infecção de um HBV, e reduzindo a atividade biológica de uma infecção por HBV em um hospedeiro. Os métodos também podem envolver a coadministração de outro agente anti-HBV, cuja coadministração pode ser simultânea ou sequencial.
[00029] Estes e outros aspectos da invenção são explicados adicionalmente na seguinte descrição detalhada.
Breve Descrição das Figuras
[00030] A Figura 1 mostra uma série de micrografias eletrônicas do resultado da incubação de HBP Cp149 sob condições que normalmente formariam capsídeos, e onde a incubação era acompanhada pela adição de um agente ativo putativo, onde o agente ativo funciona, pelo menos em parte, inibindo a formação de capsídeo. Onde a incubação foi realizada usando somente o veículo, as micrografias eletrônicas mostram os capsídeos na forma de esferas totalmente formadas. Quando incubados com GLS4, os capsídeos formaram esferas ocas desmontadas, e com o Composto 7a, os capsídeos formaram esferas ocas incompletas, com uma abundância relativamente baixa.
[00031] A Figura 2 mostra uma série de micrografias eletrônicas de capsídeos de HBV Cp149 tratadas com veículo (mostrando os capsídeos na forma de esferas totalmente formadas), com GLS4, mostrando que os capsídeos formaram esferas ocas desmontadas, e com o Composto 7a, mostrando que os capsídeos formaram esferas ocas incompletas, em uma abundância relativamente baixa.
[00032] A Figura 3 mostra uma série de micrografias eletrônicas dos capsídeos mostrados na Figura 2, com as duas primeiras micrografias repetidas, e uma terceira micrografia ampliando a porção da segunda micrografia para melhorar a visão dos danos aos capsídeos.
[00033] A Figura 4 mostra uma série de micrografias eletrônicas dos capsídeos mostrados na Figura 2, com a primeira e a terceira micrografias repetidas como a primeira e a segunda micrografias. Uma terceira micrografia é mostrada, ampliando a porção da segunda micrografia para melhorar a visão dos danos aos capsídeos.
[00034] Os resultados mostram que os compostos efetivamente romperam a formação do capsídeo do HBV.
Descrição Detalhada
[00035] Compostos e composições úteis no tratamento, prevenção ou cura da infecção por HBV são divulgados. Métodos para tratar, prevenir ou curar infecção por HBV também são divulgados.
[00036] Os compostos aqui descritos mostram atividade inibidora contra o HBV em ensaios à base de células. Portanto, os compostos podem ser utilizados para tratar ou prevenir um HBV num hospedeiro, ou reduzir a atividade biológica do vírus. O hospedeiro pode ser um mamífero e, em particular, um humano infectado com HBV. Os métodos envolvem a administração de uma quantidade eficaz de um ou mais dos compostos aqui descritos.
[00037] São também divulgadas formulações farmacêuticas incluindo um ou mais compostos aqui descritos, em combinação com um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Numa modalidade, as formulações incluem pelo menos um composto aqui descrito e pelo menos um agente terapêutico adicional.
[00038] A presente invenção será melhor compreendida com referência às seguintes definições:
I. Definições
[00039] O termo "independentemente" é usado aqui para indicar que a variável, que é independentemente aplicada, varia independentemente de aplicação para aplicação. Assim, em um composto tal como R "XYR", em que R "é" independentemente carbono ou nitrogênio, "ambos R" podem ser carbono, ambos R "podem ser nitrogênio, ou um R" pode ser carbono e o outro R" nitrogênio.
[00040] Como aqui utilizado, o termo “enantiomericamente puro” se refere a uma composição de composto que compreende pelo menos aproximadamente 95%, e, de preferência, aproximadamente 97%, 98%, 99% ou 100% de um único enantiômero desse composto.
[00041] Como aqui utilizado, o termo “substancialmente isento de” ou “substancialmente na ausência de” se refere a uma composição composta que inclui pelo menos 85 a 90% em peso, preferencialmente 95% a 98% em peso, e ainda mais preferencialmente, 99% a 100% em peso, do enantiômero designado desse composto. Numa modalidade preferida, os compostos aqui descritos estão substancialmente isentos de enantiômeros.
[00042] Similarmente, o termo “isolado” se refere a uma composição composta que inclui pelo menos 85 a 90% em peso, preferencialmente 95% a 98% em peso, e ainda mais preferivelmente 99% a 100% em peso do composto, o restante compreendendo outras espécies químicas ou enantiômeros.
[00043] O termo "alquil", tal como aqui utilizado, a menos que especificado de outro modo, se refere a hidrocarbonetos primários, secundários ou terciários saturados lineares, ramificados ou cíclicos, incluindo grupos alquil substituídos e não substituídos. O grupo alquil pode ser opcionalmente substituído por qualquer porção que não interfira de outra forma na reação ou que proporcione uma melhoria no processo, incluindo mas não limitado a, mas limitado a halo, haloalquil, hidroxil, carboxil, acil, aril, aciloxil, amino, amido, derivados carboxil, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alcóxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, tiol, imina, sulfonil, sulfanil, sulfinil, sulfamonil, éster, ácido carboxílico, amida, fosfonil, fosfinil, fosforil, fosfina, tioéster, tioéter, halogeneto de ácido, anidrido, oxima, hidrozina, carbamato, ácido fosfônico, fosfonato, quer desprotegidos, ou protegidos conforme necessário, como é do conhecimento dos versados na técnica, por exemplo, como ensinado em Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons,Segunda Edição, 1991, aqui incorporada por referência. Especificamente incluídos estão CF3 e CH2CF3.
[00044] No texto, sempre que o termo C (faixa de alquil) é utilizado, o termo inclui independentemente cada membro dessa classe como se fosse especificamente e separadamente estabelecido. O termo "alquil" inclui frações C1-22 alquil, e termo "alquil" inclui frações C1-6 alquil. É entendido pelos versados na técnica que o radical alquil relevante é designado substituindo o sufixo “-ane” pelo sufixo “-il”.
[00045] Tal como aqui utilizado, um "alquil em ponte" se se refere a um biciclo ou triciclo alcano, por exemplo, um biciclo-hexano 2:1:1.
[00046] Tal como aqui utilizado, um "espiro-alquil" se refere a dois anéis que estão fixados a um único átomo de carbono (quaternário).
[00047] O termo "alquenil" se refere a um radical hidrocarboneto insaturado, linear ou ramificado, na medida em que contém uma ou mais ligações duplas. O grupo alquenil aqui divulgado pode ser opcionalmente substituído por qualquer fração que não afete adversamente o processo da reação, incluindo mas não limitado a, mas não limitado àqueles descritos para substituintes em frações alquil. Exemplos não limitativos de grupos alquenil incluem etileno, metiletileno, isopropilideno, 1,2-etano-di-il, 1,1-etano-di-il, 1,3- propanodi-il, 1,2-propano-di-il, 1,3- butano-di-il e 1,4-butano-di-il.
[00048] O termo "alquinil" se refere a um radical hidrocarboneto insaturado acíclico, linear ou ramificado, na medida em que contém uma ou mais ligações triplas. O grupo alquinil pode ser opcionalmente substituído por qualquer fração que não afete adversamente o processo da reação, incluindo mas não limitado àqueles descritos acima para frações alquil. Exemplos não limitativos de grupos alquinil adequados incluem radicais etinil, propinil, hidroxipropinil, butin-1-il, butin-2-il, pentin-1-il, pentin-2-il, 4-metoxipentin-2-il, 3-metilbutin-1-il, hexin-1-il, hexin-2-il e hexin-3-il, 3,3-dimetilbutin-1-il.
[00049] O termo “alquilamino” ou “arilamino” se refere a um grupo amino que possui um ou dois substituintes alquil ou aril, respectivamente.
[00050] O termo "protegido", tal como aqui utilizado e a menos que definido de outra forma, se refere a um grupo que é adicionado a um átomo de oxigénio, nitrogênio ou fósforo para evitar a sua reação adicional ou para outros fins. Uma vasta variedade de grupos de oxigênio e nitrogênio é conhecida dos versados na técnica da síntese orgânica e está descrita, por exemplo, em Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, supra.
[00051] O termo "aril", sozinho ou em combinação, significa um sistema aromático carbocíclico contendo um, dois ou três anéis, em que esses anéis podem ser ligados em conjunto de uma maneira pendente ou podem ser fundidos. Exemplos não limitativos de aril incluem fenil, bifenil ou naftil, ou outros grupos aromáticos que permanecem após a remoção de um hidrogênio de um anel aromático. O termo aril inclui frações substituídas e não substituídas. O grupo aril pode ser opcionalmente substituído por qualquer fração que não afete adversamente o processo, incluindo mas não limitado àqueles descritos acima para frações alquil. Exemplos não limitativos de aril substituído incluem heteroarilamino, N-aril-N-alquilamino, N-heteroarilamino-N-alquilamino, heteroaralcoxi, arilamino, aralquilamino, ariltio, monoarilamidosulfonil, arilsulfonamido, diarilamidosulfonil, monoaril amidosulfonil, arilsulfinil, arilsulfonil, heteroariltio, heteroarilsulfinil, heteroarilsulfonil, aroil, heteroaroil, aralcanoil, heteroaralcanoil, hidroxialquil, hidroxi-heteroaralquil, haloalcoxialquil, aril, aralquil, ariloxi, aralcoxi, ariloxialquil, heterociclil saturado, heterociclil parcialmente saturado, heteroaril, heteroariloxi, heteroariloxialquil, arilalquil, heteroarilalquil, arilalquenil e heteroarilalquenil, carboaralcoxi.
[00052] Os termos "alcaril" ou "alquilaril" se referem a um grupo alquil com um substituinte aril. Os termos "aralquil" ou "arilalquil" se referem a um grupo aril com um substituinte alquil.
[00053] O termo "halo", tal como aqui utilizado, inclui cloro, bromo, iodo e flúor.
[00054] O termo “acil” se refere a um éster de ácido carboxílico em que a fração não carbonil do grupo éster é selecionada do grupo que consiste em alquil linear, ramificado ou cíclico ou alquil inferior, alcoxialquilo, incluindo, mas não limitado a metoximetil, aralquil, incluindo, mas não se limitado a, benzil, ariloxialquil, tal como fenoximetil, aril, incluindo, mas não limitado a fenil, opcionalmente substituído por halogênio (F, Cl, Br, ou I), alquil (incluindo, mas não limitado a C1, C2, C3, e C4) ou alcoxi (incluindo mas não limitado a C1, C2, C3, e C4), ésteres de sulfonato, tais como alquil ou aralquil sulfonil, incluindo, mas não limitado a metanossulfonil, o éster mono, di ou trifosfato, tritil ou monometoxitritil, benzil substituído, trialquilsilil (por exemplo, dimetil-t-butilsilil) e difenilmetilsilil. Os grupos aril nos ésteres compreendem idealmente um grupo fenil. O termo "acil inferior" se refere a um grupo acil em que a fração não carbonil é alquil inferior.
[00055] Os termos "alcóxi" e "alcoxialquil" englobam radicais contendo oxi lineares ou ramificados tendo frações alquil, tais como radical metóxi. O termo "alcoxialquil" também abrange radicais alquil tendo um ou mais radicais alcóxi ligados ao radical alquil, isto é, para formar radicais monoalcoxialquil e dialcoxialquil. Os radicais "alcóxi" podem ainda ser substituídos por um ou mais átomos halo, tais como flúor, cloro ou bromo, para fornecer radicais "haloalcóxi". Exemplos de tais radicais incluem fluorometoxi, clorometoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluoroetoxi, fluoroetoxi, tetrafluoroetoxi, pentafluoroetoxi e fluoropropoxi.
[00056] O termo “alquilamino” denota “monoalquilamino” e “dialquilamino” contendo um ou dois radicais alquil, respectivamente, ligados a um radical amino. Os termos arilamino denotam “monoarilamino” e “diarilamino” contendo um ou dois radicais aril, respectivamente, ligados a um radical amino. O termo "aralquilamino", abrange radicais aralquil ligados a um radical amino. O termo aralquilamino denota "monoaralquilamino" e "diaralquilamino" contendo um ou dois radicais aralquil, respectivamente, ligados a um radical amino. O termo aralquilamino denota ainda "monoalquilalquilamino" contendo um radical aralquil e um radical alquil ligado a um radical amino.
[00057] O termo "heteroátomo", tal como aqui utilizado, se refere a oxigênio, enxofre, nitrogênio e fósforo.
[00058] Os termos "heteroaril" ou "heteroaromático", tal como aqui utilizados, se referem a um aromático que inclui pelo menos um enxofre, oxigênio, nitrogênio ou fósforo no anel aromático.
[00059] Os termos "heterocíclico", "heterociclil" e ciclo-heteroalquil se referem a um grupo cíclico não aromático em que existe pelo menos um heteroátomo, tal como oxigênio, enxofre, nitrogênio ou fósforo no anel.
[00060] Exemplos não limitativos de grupos heteroaril e heterocíclico incluem furil, furanil, piridil, pirimidil, tienil, isotiazolil, imidazolil, tetrazolil, pirazinil, benzofuranil, benzotiofenil, quinolil, isoquinolil, benzotienil, isobenzofuril, pirazolil, indolil, isoindolil, benzimidazolil, purinil, carbazolil, oxazolil, tiazolil, isotiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, iso-oxazolil, pirrolil, quinazolinil, cinolinol, ftalazinil, xantinil, hipoxantinil, tiofeno, furano, pirrol, isopirrol, pirazol, imidazol, 1,2,3- triazol, 1,2,4-triazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, pirimidina ou piridazina, e pteridinil, aziridinas, tiazol, isotiazol, 1,2,3-oxadiazol, tiazina, piridina, pirazina, piperazina, pirrolidina, oxaziranos, fenazina, fenotiazina, morfolinil, pirazolil, piridazinil, pirazinil, quinoxalinil, xantinil, hipoxantinil, pteridinil, 5-azacitidinil, 5- azauracilil, triazolopiridinil, imidazolopiridinil, pirrolopirimidinil, pirazolopirimidinil, adenina, N6-alquilpurinas, N6-benzilpurina, N6-halopurina, N6- vinipurina, N6- purina acetilênica, N6-acil purina, N6-hidroxialquil purina, N6-tioalquil, purina, timina, citosina, 6-azapirimidina, 2-mercaptopirimidina, uracil, N5- alquilpirimidinas, N5-benzilpirimidinas, N5-halopirimidinas, N5-vinilpiridina, N5- pirimidina acetilênica, N5-acil pirimidina, N5-hidroxialquil purina e N6-tioalquil purina e isoxazolil. O grupo heteroaromático pode ser opcionalmente substituído como descrito acima para aril. O grupo heterocíclico ou heteroaromático pode ser opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo de halogênio, haloalquil, alquil, alcóxi, hidróxi, derivados carboxil, amido, amino, alquilamino e dialquilamino. O heteroaromático pode ser parcialmente ou totalmente hidrogenado como desejado. Como exemplo não limitativo, a di-hidropiridina pode ser usada em vez da piridina. Os grupos funcionais de oxigênio e nitrogênio no grupo heterocíclico ou heteroaril podem ser protegidos conforme necessário ou desejado. Grupos de proteção adequados são bem conhecidos dos versados na técnica, e incluem trimetilsilil, dimetil-hexilsilil, t-butildimetilsilil, e t-butildifenilsilil, tritil ou tritil substituído, grupos alquil, grupos acil, tais como acetil e propionil, metanossulfonil e p- toluenilsulfonil. O grupo heterocíclico ou heteroaromático pode ser substituído por qualquer fração que não afete adversamente a reação, incluindo, mas não limitado àquelas descritas acima para aril.
[00061] O termo "hospedeiro", tal como aqui utilizado, se refere a um organismo unicelular ou multicelular no qual o vírus pode replicar, incluindo mas não limitado a linhagens celulares e animais, e, de preferência, humanos. Alternativamente, o hospedeiro pode transportar uma parte do genoma viral, cuja replicação ou função pode ser alterada pelos compostos da presente invenção. O termo hospedeiro se refere especificamente a células infectadas, células transfectadas com todo ou parte do genoma viral e animais, em particular, primatas (incluindo mas não limitados a chimpanzés) e humanos. Na maioria das aplicações animais da presente invenção, o hospedeiro é um ser humano. Aplicações veterinárias, em certas indicações, no entanto, são claramente contempladas pela presente invenção (tal como para uso no tratamento de chimpanzés).
[00062] O termo "peptídeo" se refere a um composto natural ou sintético contendo dois a cem aminoácidos ligados pelo grupo carboxil de um aminoácido ao grupo amino de outro.
[00063] O termo “sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável” é utilizado ao longo do relatório descritivo para descrever qualquer composto de forma farmaceuticamente aceitável (tal como um éster) que, após administração a um paciente, proporciona o composto. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles derivados de bases e ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Sais adequados incluem aqueles derivados de metais alcalinos, tais como potássio e sódio, metais alcalino-terrosos, tais como cálcio e magnésio, entre numerosos outros ácidos bem conhecidos na técnica farmacêutica.
[00064] O termo “sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável” é utilizado ao longo do relatório descritivo para descrever qualquer composto de forma farmaceuticamente aceitável (tal como um éster) que, após administração a um paciente, proporciona o composto. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os derivados de bases e ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Sais adequados incluem aqueles derivados de metais alcalinos, tais como potássio e sódio, metais alcalino-terrosos, tais como cálcio e magnésio, entre numerosos outros ácidos bem conhecidos na técnica farmacêutica. Pró- drogas farmaceuticamente aceitáveis referem-se a um composto que metabolizado, por exemplo, hidrolisado ou oxidado, no hospedeiro para formar o composto da presente invenção. Exemplos típicos de pró-drogas incluem compostos que têm grupos de proteção biologicamente lábeis em frações funcionais do composto activo. As pró-drogas incluem compostos que podem ser oxidados, reduzidos, aminados, desaminados, hidroxilados, desidroxilados, hidrolisados, desidrolisados, alquilados, desalquilados, acilados, desacilados, fosforilados ou desfosforilados para produzir o composto ativo. As formas de pró- droga dos compostos desta invenção podem possuir atividade antiviral, podem ser metabolizadas para formar um composto que exibe essa atividade, ou ambas.
II. Compostos Ativos
[00065] O vírus da hepatite B (HBV) é um vírus de DNA parcialmente encapsulado (dsDNA) da família Hepadnavirus (Hepadnaviridae). Seu genoma contém 4 quadros de leitura sobrepostos: o gene precore/core; o gene da polimerase; os genes L, M e S, que codificam para as proteínas de envelope 3; e o gene X.
[00066] Mediante infecção, o genoma do DNA parcialmente em fita dupla (o DNA circular relaxado; rcDNA) é convertido em um DNA circular covalentemente fechado (cccDNA) no núcleo da célula hospedeira, e os mRNAs virais são transcritos. Uma vez encapsidado, o RNA pré-genômico (pgRNA), que também codifica para proteína central e Pol, serve como molde para a transcrição reversa, que regenera o genoma parcialmente de dsDNA (rcDNA) no nucleocapsídeo.
[00067] Após infecções por hepatite B, o cccDNA pode continuar a seguir o tratamento clínico nas células do fígado e pode reativar. A quantidade relativa de cccDNA presente é um indicador para o tratamento do HBV (Bourne, et al., (janeiro de 2007). "Quantitative analysis of HBV cccDNA from clinical specimens: correlation with clinical and virological response during antiviral therapy". Journal of Viral Hepatitis 14 (1): 56-63).
[00068] Um capsídeo é a casca de proteína de um vírus e inclui subunidades estruturais oligoméricas feitas de proteínas chamadas protômeros. As subunidades morfológicas tridimensionais observáveis, que podem ou não corresponder a proteínas individuais, são denominadas capsômeros. O capsídeo envolve o material genético do vírus.
[00069] In vivo, os capsídeos do HBV se agrupam em torno de um complexo de transcriptase reversa de RNA. A montagem do capsídeo é necessária para a transcrição reversa do pré-genoma de RNA para a forma de DNA maduro. No HBV, a forma dominante do capsídeo é composta por 120 cópias do dímero da proteína do capsídeo. Mesmo mutações modestas da proteína do capsídeo podem ter efeitos dramáticos sobre a viabilidade do vírus da progênie.
[00070] A maior parte dos compostos aqui descritos são ativos como inibidores de capsídeo. A inibição da montagem de capsídeo pode reduzir o cccDNA, o principal reservatório para o HBV, e também pode diminuir os níveis de HBV DNA, HBeAg e HBsAg.
[00071] Numa modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: A é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; B é um anel de seis ou sete membros ou um anel de seis ou sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel C4-14 bicíclico, quando R1 e R1’ estão fixados a um carbono, eles são, independentemente, hidrogênio, halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C2-6 alquenil, ciano, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; quando R1 e R1’ estão fixados a um nitrogênio, eles são, independentemente, hidrogênio, C2-6 alcóxi, C3-6 alcoxialquil, C2-6 alquenil, alcoxicarbonil, carbonilalquil, carbonil aril, C1-6 alquil, heterociclilalquil, C2-6 hidroxialquil ou S(O)2R’; cada R’ é independentemente H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, C3-6 cicloalquil, aril, heteroaril, alquilaril ou arilalquil, ou se dois R' residirem no mesmo átomo de nitrogênio, eles podem se unir para formar um anel C3-6 opcionalmente contendo um heteroátomo N, O ou S; os grupos R' podem opcionalmente ser substituídos por um ou mais substituintes, cujos substituintes são, independentemente, halo, C1-6 haloalquil, C1-6 hidroxialquil, hidroxil, carboxil, acil, aril, aciloxi, amino, amido, derivados carboxil, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alcóxi, alcoxialquil, ariloxi, nitro,ciano, ácido sulfônico, tiol, imina, sulfonil, sulfanil, sulfinil, sulfamonil, éster, ácido carboxílico, amida, fosfonil, fosfinil, fosforil, fosfina, tioéster, tioéter, haleto ácido, anidrido, oxima, hidrozina, carbamato, ácido fosfônico ou fosfonato; quer desprotegidos, ou protegidos conforme necessário, como é do conhecimento dos versados na técnica por exemplo, como ensinado em Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991, incorporado por meio deste por referência; u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; X é R3 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R2 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, tais como fenil, heteroaril, incluindo anéis heteroaromáticos de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio e anéis heteroaromáticos de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que, independentemente, são N, O ou S, alquilaril, arilalquil, anel de seis membros ou um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, um anel de sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um, ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; cicloalquil, alquil-heteroaril ou alquilaril; R2 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, os quais, independentemente, são halogênios (incluindo F, Cl, Br, e I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C26 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carboxil, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; ou é substituído por aril, aril substituído, heteroaril ou heteroaril substituído, onde os substituintes no aril substituído e no heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil. R2 e R3 podem se juntar com o nitrogênio ao qual eles estão ligados para formar um anel bicíclico ou em ponte de 6 a 10 membros, um anel saturado de 3 a 8, ou um anel insaturado de 5 membros; tais anéis bicíclicos, ligados em ponte, saturados e insaturados contendo opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais, onde cada um é, independentemente, O, S ou N e, opcionalmente, sendo substituído por um ou mais substituintes, em que cada um, independentemente, é halogênio (incluindo F, Cl, Br, I), CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil.
[00072] Numa segunda modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; C é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel C414 bicíclico, alquilaril ou alquil-heteroaril; D é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel C4-14 bicíclico, Y é R4 é H ou C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil; numa modalidade, R4 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, em que, numa modalidade, se C é fenil, D não é fenil ou um heteroaril de anel de 5 membros, e uma outra modalidade, se C é fenil e D é fenil ou um heteroaril de 5 membros, então, R5 não é alquilaril, alquenil, ou um anel em ponte de seis membros; R5 é alquilaril, arilalquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, tal como fenil, heteroaril, incluindo anéis heteroaromáticos de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio e anéis heteroaromáticos de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que, independentemente, são N, O ou S; e um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; numa modalidade, R5 alquilaril, arilalquil, fenil, um heteroaril de cinco ou seis membros, ou um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; R5 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um dos quais é, independentemente, halogênio (incluindo F, Cl, Br, e I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C26 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, cicloalquil, arilalcoxicarbonil, carboxil, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; ou é substituído por aril, aril substituído, heteroaril ou heteroaril substituído, onde os substituintes no aril substituído e no heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcoxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil; ou quando Y é , R4 e R5 juntamente com o nitrogênio ao qual eles estão ligados para formar um anel de 3 a 4 membros opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um dos quais é, independentemente, halogênio (incluindo, F, Cl, Br, I), CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil.
[00073] Numa modalidade dos compostos de Fórmula II, D é onde R6 é H, Cl, F ou Br, e R7 é H, metil, F ou Cl.
[00074] Num aspecto desta modalidade, quando Y é, R5 não é
[00075] Num outro aspecto desta modalidade, quando R4 é etil, então, R5 não é
[00076] Numa modalidade dos compostos de Fórmula II, C é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio,um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel C4-14 bicíclico, alquilaril ou alquil-heteroaril.
[00077] Numa modalidade dos compostos de Fórmula II, D é um anel C4-14 bicíclico.
[00078] Numa outra modalidade dos compostos de Fórmula II, C, R5 é arilalquil, C2-6 alquinil, aril, tal como fenil, heteroaril, incluindo anéis heteroaromáticos de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio e anéis heteroaromáticos de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, os quais, independentemente, são N, O ou S; e um anel espiro-fundido de seis membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S.
[00079] Numa terceira modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; E é um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, onde cada um é, independentemente, N, O ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; F é um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel C4-14 bicíclico, Z é R8 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R9 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, um anel de seis membros ou anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são independentemente N, O ou S, um anel de sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, os quais são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel de três membros; R9 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um dos quais é independentemente halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcoxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C26 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, cicloalquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil, C1-6 hidroxialquil; ou é substituído por aril, aril substituído, heteroaril ou heteroaril substituído, em que os substituintes no aril substituído e heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil. R8 e R9 podem se juntar com o nitrogênio ao qual eles estão ligados para formar um anel bicíclico ou em ponte de 6 a 10 membros ou um anel saturado de 3 a 8; essa fração de anel bicíclica, ligada em ponte e saturada contendo opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais que, independentemente, são O, S ou N e, opcionalmente, sendo substituídos por um ou mais substituintes, cada um, independentemente, é halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, hidróxi N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil, ou C1-6 hidroxialquil.
[00080] Numa quarta modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: G é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; H é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel não aromático de seis membros opcionalmente contendo um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, ou um anel C4-14 bicíclico; quando R1 e R1’ estão fixados a um carbono eles são, independentemente, hidrogênio, halogênio, (inlcuindo F, Cl, Br e I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil; quando R1 e R1’ são ligados a um nitrogênio eles são, independentemente, hidrogênio, C1-6 alcóxi, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, carbonilalquil, carbonil aril, C1-6 alquil, C2-6 alquinil, C2-6 alquenil, heterocicloalquil, C1-6 hidroxialquil ou S(O)2R’; cada R’ é independentemente H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, C3-6 cicloalquil, aril, heteroaril, alquilaril ou arilalquil, ou se dois R' residem no mesmo átomo de nitrogênio, eles podem se juntar para formar um anel C3-6 alquil opcionalmente contendo um N, O ou S; em que os grupos R' podem ser substituídos por um ou mais substituintes como definidos acima, por exemplo C1-6 hidroxialquil, aminoalquil ou alcoxialquil; u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; W é R10 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R11 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, heteroaril, alquilaril, arilalquil, fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel de seis membros ou um anel de seis membros em ponte ou anel espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, os quais são, independentemente, N, O ou S; um anel de três membros, alquil-heteroaril ou alquilaril; em que R11 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio (incluindo F, Cl, Br, e I), SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, C2-6 alquenil, ciano, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carboxil, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil, C1-6 hidroxialquil, aril, aril substituído, heteroaril e heteroaril substituído, em que os substituintes no aril substituído e heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil; ou R10 e R11 podem se juntar com o nitrogênio ao qual eles estão ligados para formar um anel bicíclico ou em ponte de 6 a 10 membros ou um anel saturado de 3 a 8; essa fração de anel bicíclica, ligada em ponte ou saturada contendo opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais que são cada uma, independentemente O, S ou N e, opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, cada um do qual é, independentemente, halogênio (incluindo F, Cl, Br e I), CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carboxil, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil ou C1-6 hidroxialquil.
[00081] Numa quinta modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; I é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; J é um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de seis ou sete membros ou um anel de seis ou sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; ou um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S. W é R12 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R13 é C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, incluindo fenil, heteroaril, incluindo anéis heteroaromáticos de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio e anéis heteroaromáticos de cinco um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; alquilaril, arilalquil, um anel C4-14 bicíclico; um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, R13 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio (F, Cl, Br, I), CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, cicloalquil, arilalcoxicarbonil, carboxil, halogenoalquil, heterociclilalquil e C1-6 hidroxialquil; ou é opcionalmente substituído por aril, aril substituído, heteroaril ou heteroaril substituído, onde os substituintes no aril substituído e no heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil; ou R12 e R13 juntos com o nitrogênio ao qual eles estão ligados formam um anel de 3 a 4 membros opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio (F, Cl, Br, I), CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil e C1-6 hidroxialquil. Numa sexta modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; K é um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; um anel C4-14 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril; L é um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de seis ou sete membros ou um anel de seis ou sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S ou um anel C4-14 bicíclico. W é R14 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil, R15 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, um anel de seis membros ou anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são independentemente N, O ou S, um anel de sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, os quais são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos, que são, independentemente, N, O ou S; R15 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes que são, independentemente, halogênio (F, Cl, Br, I), SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, cicloalquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil e C1-6 hidroxialquil; ou é substituído por aril, aril substituído, heteroaril, ou heteroaril substituído, em que os substituintes no aril substituído e heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil, ou R14 e R15 podem se juntar ao nitrogênio ao qual estão ligados para formar um anel bicíclico ou ligado em ponte de 6 a 10 membros ou um anel saturado de 3 a 8; essa fração de anel bicíclica, ligada em ponte e saturada contendo opcionalmente um ou mais heteroátomos adicionais que são, independentemente, O, S ou N, e opcionalmente sendo substituídos por um ou mais substituintes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em halogênio, incluindo (F, Cl, Br e I) CF3, hidroxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcoxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil e C1-6 hidroxialquil.
[00082] Numa sétima modalidade, os compostos têm a seguinte fórmula: ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 e R1’ são como definidos em relação à Fórmula I, u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; M é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel C414 bicíclico, alquil-heteroaril ou alquilaril, N é fenil, um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio, um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos independentemente selecionados de N, O e S, um anel de seis ou sete membros ou um anel de seis ou sete membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O, ou S; ou um anel C4-14 bicíclico, V é , e R16 é C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alcoxialquil, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, tal como fenil, heteroaril, tal como um anel heteroaromático de seis membros contendo um, dois ou três átomos de nitrogênio ou um anel heteroaromático de cinco membros contendo um, dois ou três heteroátomos, independentemente, N, O ou S; um anel de seis membros ou um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S, um anel de cinco membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; um anel de quatro membros contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; alquilaril, arilalquil, alquil-heteroaril ou alquilaril, em que R16 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio (incluindo F, Cl, Br, e I), SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, C2-6 alquenil, ciano, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquill, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil, C1-6 hidroxialquil, aril, aril substituído, heteroaril e heteroaril substituído, em que os substituintes no aril substituído e heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil.
[00083] Compostos representativos caindo dentro do escopo da invenção incluem os seguintes: e sais ou pró-drogas farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[00084] Compostos representativos também incluem: e sais ou pró-drogas farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[00085] Compostos particularmente preferidos incluem: ou um sal ou pró- droga farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00086] Um composto particularmente preferido tem a fórmula: ou um sal farmaceuticamente aceitável
III Estereoisomerismo e Polimorfismo
[00087] Os compostos aqui descritos podem ter centros assimétricos e ocorrem como racematos, misturas racêmicas, diastereômeros individuais ou enantiômeros, estando todas as formas isoméricas incluídas na presente invenção. Os compostos da presente invenção com um centro quiral podem existir e ser isolados em formas opticamente ativas e racêmicas. Alguns compostos podem exibir polimorfismo. A presente invenção abrange formas racêmicas, opticamente ativas, polimórficas ou estereoisoméricas, ou misturas, de um composto da invenção, que possui as propriedades úteis aqui descritas. As formas opticamente ativas podem ser preparadas, por exemplo, por resolução da forma racêmica por técnicas de recristalização, por síntese a partir de materiais de partida opticamente ativos, por síntese quiral ou por separação cromatográfica utilizando uma fase estacionária quiral ou por resolução enzimática. Pode-se purificar o respetivo composto, depois derivar o composto para formar os compostos aqui descritos ou purificar o próprio composto.
[00088] As formas opticamente ativas dos compostos podem ser preparadas utilizando qualquer método conhecido na técnica, incluindo mas não limitado a resolução da forma racêmica por técnicas de recristalização, por síntese a partir de materiais de partida opticamente ativos, por síntese quiral ou por separação cromatográfica usando uma fase estacionária quiral.
[00089] Exemplos de métodos para obter materiais opticamente ativos incluem pelo menos o seguinte. i) separação física de cristais: uma técnica em que os cristais macroscópicos dos enantiômeros individuais são separados manualmente. Esta técnica pode ser usada se existirem cristais dos enantiômeros separados, isto é, o material é um conglomerado e os cristais são visualmente distintos; ii) cristalização simultânea: uma técnica em que os enantiômeros individuais são cristalizados separadamente a partir de uma solução do racemato, possível apenas se este último for um conglomerado no estado sólido; iii) resoluções enzimáticas: uma técnica em que a separação parcial ou completa de um racemato em virtude de diferentes taxas de reação para os enantiômeros com uma enzima; iv) síntese assimétrica enzimática: uma técnica sintética em que pelo menos uma etapa da síntese utiliza uma reação enzimática para obter um precursor sintético enantiomericamente puro ou enriquecido do enantiômero desejado; v) síntese química assimétrica: uma técnica sintética em que o enantiômero desejado é sintetizado a partir de um precursor aquiral sob condições que produzem assimetria (isto é, quiralidade) no produto, o que pode ser obtido usando catalisadores quirais ou auxiliares quirais; vi) separações de diastereoisômeros: uma técnica em que um composto racêmico reage com um reagente enantiomericamente puro (o auxiliar quiral) que converte os enantiômeros individuais em diastereômeros. Os diastereômeros resultantes são então separados por cromatografia ou cristalização em virtude das suas diferenças estruturais agora mais distintas e o auxiliar quiral mais tarde removido para obter o enantiômero desejado; vii) transformações assimétricas de primeira e segunda ordem: uma técnica em que diastereômeros do racemato equilibram para produzir uma preponderância em solução do diastereômero a partir do enantiômero desejado ou em que a cristalização preferencial do diastereômero do enantiômero desejado perturba o equilíbrio tal que eventualmente em princípio todo o material é convertido no diastereômero cristalino do enantiômero desejado. O enantiômero desejado é, então, liberado do diastereômero; viii) resoluções cinéticas: esta técnica se refere à obtenção de resolução parcial ou completa de um racemato (ou de uma resolução adicional de um composto parcialmente resolvido) em virtude de taxas de reação desiguais dos enantiômeros com um reagente ou racêmico ou não racêmico, quiral, sob condições cinéticas; ix) síntese enantioespecífica a partir de precursores não racêmicos: uma técnica sintética em que o enantiômero desejado é obtido a partir de materiais de partida não quirais e em que a integridade estereoquímica não é ou é apenas minimamente comprometida ao longo da síntese; x) cromatografia líquida quiral: uma técnica em que os enantiômeros de um racemato são separados numa fase móvel líquida em virtude das suas diferentes interações com uma fase estacionária (incluindo mas não limitado à via HPLC quiral). A fase estacionária pode ser feita de material quiral ou a fase móvel pode conter um material quiral adicional para provocar as diferentes interações; xi) cromatografia gasosa quiral: uma técnica em que o racemato é volatilizado e os enantiômeros são separados em virtude de suas diferentes interações na fase móvel gasosa com uma coluna contendo uma fase adsorvente quiral fixa não racêmica; xii) extração com solventes quirais: uma técnica em que os enantiômeros são separados em virtude da dissolução preferencial de um enantiômero num solvente quiral particular; xiii) transporte através de membranas quirais: uma técnica pela qual um racemato é colocado em contato com uma barreira de membrana fina. A barreira tipicamente separa dois fluidos miscíveis, um contendo o racemato, e uma força motriz como concentração ou diferencial de pressão causa o transporte preferencial através da barreira de membrana. A separação ocorre como resultado da natureza quiral não racêmica da membrana que permite a passagem de apenas um enantiômero do racemato.
[00090] A cromatografia quiral, incluindo mas não limitado à cromatografia em leito móvel simulado, é utilizada numa modalidade. Uma grande variedade de fases estacionárias quirais estão comercialmente disponíveis.
IV. Formulações de sal ou pró-droga
[00091] Nos casos em que os compostos são suficientemente básicos ou ácidos para formar sais ácidos ou básicos não tóxicos estáveis, a administração do composto como um sal farmaceuticamente aceitável pode ser apropriada. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são ácido orgânico, que formam um anião fisiologicamente aceitável, por exemplo, tosilato, metanossulfonato, acetato, citrato, malonato, tartarato, succinato, benzoato, ascorbato, α- cetoglutarato e α-glicerofosfato. Sais inorgânicos adequados podem também ser formados, incluindo mas não limitados a sais de sulfato, nitrato, bicarbonato e carbonato. Para certas aplicações transdérmicas, pode ser preferido utilizar sais de ácidos graxos dos compostos aqui descritos. Os sais de ácidos graxos podem ajudar a penetrar no estrato córneo. Exemplos de sais adequados incluem sais dos compostos com ácido esteárico, ácido oleico, ácido lineoleico, ácido palmítico, ácido caprílico e ácido cáprico.
[00092] Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser obtidos utilizando procedimentos padrão bem conhecidos na técnica, por exemplo, fazendo reagir um composto suficientemente básico, tal como uma amina com um ácido adequado, proporcionando um ânion fisiologicamente aceitável. Nos casos em que um composto inclui múltiplos grupos amina, os sais podem ser formados com qualquer número dos grupos amina. Sais de metal alcalino (por exemplo, sódio, potássio ou lítio) ou metal alcalino-terroso (por exemplo, cálcio) de ácidos carboxílicos também podem ser feitos.
[00093] Uma pró-droga é uma substância farmacológica que é administrada numa forma inativa (ou significativamente menos ativa) e subsequentemente metabolizada in vivo num metabólito ativo. Fornecer mais droga para o alvo desejado com uma dose mais baixa é muitas vezes a razão por trás do uso de uma pró-droga e é geralmente atribuído a melhores propriedades de absorção, distribuição, metabolismo e/ou excreção (ADME). As pró-drogas são geralmente desenvolvidas para melhorar a biodisponibilidade oral, com a má absorção do trato gastrointestinal sendo geralmente o fator limitativo. Adicionalmente, o uso de uma estratégia de pró-droga pode aumentar a seletividade da droga para o alvo pretendido, reduzindo assim o potencial de efeitos fora do alvo.
V. Isótopos
[00094] Os compostos aqui descritos incluem compostos marcados isotopicamente, que são idênticos aos recitados nas várias fórmulas e estruturas aqui apresentadas, mas pelo fato de que um ou mais átomos são substituídos por um átomo com massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa normalmente encontrado na natureza. Em outras modalidades são exemplos de isótopos que são incorporados nos presentes compostos incluindo isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, flúor e cloro, tais como, por exemplo, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 35S, 18F, 36Cl, respectivamente. Certos compostos marcados isotopicamente aqui descritos, por exemplo, aqueles em que isótopos radioativos, como 2H são incorporados, são úteis em ensaios de distribuição em tecido de droga e/ou substrato. Além disso, em algumas modalidades, a substituição por isótopos como deutério, isto é, 2H, pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, como, por exemplo, a meia-vida in vivo ou requisitos de dosagem reduzidos.
VI. Métodos de Tratamento
[00095] Os compostos aqui descritos podem ser utilizados para prevenir, tratar ou curar infecções pelo vírus da hepatite B (HBV) e infecções pelo vírus do Nilo Ocidental.
[00096] Hospedeiros, incluindo, mas não se limitando a, humanos, sofrendo de um desses cânceres, ou infectados com um desses vírus, como o HBV, ou um fragmento do gene do mesmo, podem ser tratados administrando ao paciente uma quantidade eficaz do composto ativo ou de uma pró-droga ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na presença de um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Os materiais ativos podem ser administrados por qualquer via apropriada, por exemplo, oralmente, parenteralmente, intravenosamente, intradermicamente, transdermicamente, subcutaneamente ou topicamente, na forma líquida ou sólida.
[00097] Os compostos e composições aqui descritos também podem ser utilizados para tratar outras doenças virais. Por exemplo, curando, controlando ou eliminando o HBV, a infecção por HDV também pode ser suprimida ou eliminada. Sheldon et al., “Does treatment of hepatitis B virus (HBV) infection reduce hepatitis delta virus (HDV) replication in HIV-HBV-HDV-coinfected patients?” Antivir Ther. 2008;13(1):97-102).
[00098] O vírus da hepatite delta (HDV) tem um processo de replicação único que requer coinfecção com o vírus da hepatite B (HBV). Embora se acredite que o tratamento está atualmente limitado à terapia com interferon, os pacientes submetidos a uma terapia anti-HBV bem-sucedida com os compostos aqui descritos podem beneficiar indiretamente da supressão da replicação do HDV. Uma redução significativa e sustentada no RNA de HDV sérico pode ser obtida reduzindo o DNA circular covalentemente fechado do HBV (cccDNA). O cccDNA no HBV é formado pela conversão de DNA circular relaxado associado ao capsídeo (rcDNA). Guo et al., "Characterization of the intracellular deproteinized relaxed circular DNA of hepatitis B virus: an intermediate of covalently closed circular DNA formation". J Virol. 81 (22):12472-12484 (novembro de 2007). Consequentemente, a inibição da formação de capsídeos utilizando os compostos aqui descritos também pode suprimir ou eliminar a replicação de HDV. Além disso, há um subconjunto de pacientes com HCV que também foram infectados mais precocemente com o HBV, e o HBV está dormente no momento em que o HCV está sendo tratado. Em alguns desses pacientes, o tratamento bem-sucedido do HCV (por exemplo, com Harvoni/Sovaldi) pode reativar a infecção latente do HBV. A coadministração dos compostos aqui descritos, juntamente com o tratamento com HCV, pode impedir a reativação da infecção latente do HBV, ou tratar a infecção por HBV reativada.
VII. Combinação de Terapia Alternativa
[00099] Numa modalidade, os compostos da invenção podem ser utilizados em conjunto com pelo menos um outro agente antiviral, incluindo, mas não limitado a, inibidores da polimerase, nucleosídeos anti-HBV e suas pró-drogas, inibidor da entrada viral, inibidor da maturação viral, modulador de montagem de capsídeo descrito pela literatura, inibidores da IMPDH, inibidores da protease, agentes terapêuticos baseados na imunidade, inibidor da transcriptase reversa, um agonista de TLR e agentes de mecanismo distinto ou desconhecido. Eles também podem ser usados em conjunto com abordagens CRISPR/CAS9 usando AAV como vetor de distribuição humana.
[000100] Por exemplo, quando utilizado para tratar ou prevenir infecção por HBV, o composto ativo ou sua pró-droga ou sal farmaceuticamente aceitável pode ser administrado em combinação ou alternação com outro agente anti- HBV, incluindo, mas não limitado a, aqueles da fórmula acima. Em geral, em terapia de combinação, as dosagens eficazes de dois ou mais agentes são administradas em conjunto, enquanto que durante a terapia alternada, uma dosagem eficaz de cada agente é administrada em série. A dosagem dependerá das taxas de absorção, inativação e excreção da droga, bem como de outros fatores conhecidos dos versados na técnica. Deve-se notar que os valores de dosagem também variam com a gravidade da condição a ser aliviada. Entenda- se ainda que, para qualquer sujeito em particular, regimes e esquemas de dosagem específicos devem ser ajustados ao longo do tempo de acordo com a necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das composições.
[000101] Exemplos não limitativos de agentes antivirais que podem ser utilizados em combinação com os compostos aqui divulgados incluem aqueles nas tabelas abaixo. Terapias da Hepatite B
Tratamentos adicionais anti-HBV que podem ser usados em combinação ou alternância
[000102] Além dos compostos aqui descritos, que podem funcionar por inibição de cccDNA, e as terapias de combinação descritas acima, que combinam os compostos aqui descritos com drogas anti-HBV aprovadas como TAF, abordagens como siRNA, shRNA, Talens, Crisper/Cas9, e compostos mir (microRNA) também podem ser usados.
Terapia com siRNA e shRNA
[000103] A terapia de siRNA para o tratamento do HBV é descrita, por exemplo, em Chen e Mahato, “siRNA Pool Targeting Different Sites of Human Hepatitis B Surface Antigen Efficiently Inhibits HBV Infection;” J Drug Target. Fevereiro de 2008; 16 (2): 140-148 e Morrissey et al., “Potent and persistent in vivo anti-HBV activity of chemically modified siRNAs,” Nature Biotechnology 23, 1002 - 1007 (2005).
[000104] O RNAi é um mecanismo de silenciamento genético pós- transcricional específico de sequência, que é desencadeado por siRNA sintético de fita dupla ou RNA de gancho de cabelo curto (shRNA) expresso intracelularmente a partir de um vetor. A replicação e expressão do HBV podem ser inibidas pela administração de siRNAs sintéticos ou shRNAs expressos endogenamente. Ver, por exemplo, Giladi et al., “Small interfering RNA inhibits hepatitis B virus replication in mice,” Mol Ther. 2003; 8 (5):769-76; McCaffrey et al., “Inhibition of hepatitis B virus in mice by RNA interference,” Nat Biotechnol. 2003;21(6):639-44; e Shlomai and Shaul, “Inhibition of hepatitis B virus expression and replication by RNA interference,” Hepatology. 2003;37(4):764- 70). O silenciamento genético de HBV pode depender, por exemplo, da dosagem e das sequências de siRNA, e os alvos para o silenciamento genético incluem, por exemplo, a inibição da replicação viral e a supressão da expressão de HBsAg.
[000105] Em uma modalidade, uma combinação de vários siRNAs e/ou shRNAs é usada, direcionando dois ou mais dos genes S, C, P e X do HBV. Desta maneira, múltiplos alvos para inibição da replicação do HBV e expressão genética podem ser acessados.
[000106] Uma vez que um alvo apropriado tenha sido identificado, por exemplo, o antígeno de superfície do vírus da hepatite B humana (HBsAg) (Gene Bank Accession #NM_U95551), os siRNAs podem ser projetados de acordo com o guia fornecido pela Ambion (http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html) e Invitrogen (https://rnaidesigner.invitrogen.com/rnaiexpress/design.do). A especificidade da sequência de siRNAs pode ser verificada executando uma pesquisa BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov).
[000107] Uma vez identificadas as sequências de siRNA, elas podem ser convertidas em shRNAs. Para expressar shRNA, vetores de controle podem ser construídos, por exemplo, usando psiSTRIKE™, que é um plasmídeo linearizado e contém um promotor de polimerase de RNA U6. Estes shRNAs contêm dois oligonucleotídeos complementares que podem ser pareados para formar DNA de fita dupla para ligação nos sítios correspondentes ao vetor psiSTRIK™, sob um promotor adequado, tal como o promotor U6, utilizando uma ligase apropriada, tal como T4 DNA ligase. Os plasmídeos podem ser purificados, por exemplo, usando o kit QIAGEN® Plasmid Mini (QIAGEN, Valencia, CA).
Talens CRISPR
[000108] Como discutido acima, infecções virais crônicas por HBV frequentemente persistem devido à presença de formas duradouras de DNA viral em células infectadas. As terapias atuais podem suprimir a replicação viral, mas têm pouco ou nenhum efeito nas formas de DNA de vida longa, de modo que a replicação viral recomeça assim que a terapia é interrompida.
[000109] Além de direcionar formas de DNA de vida longa usando os inibidores de capsídeo descritos aqui, endonucleases alvo, tais como endonucleases de origem, nucleases de dedos de zinco (ZFNs), transcrição de nucleases efetoras ativadoras (TALENs), e o sistema CRISPR (repetições palindrômicas curtas com intervalos regulares inter-agrupados) podem ser usadas. O uso de TALENS para direcionar o HBV é descrito, por exemplo, em Weber et al., “TALENs Targeting HBV: Designer Endonuclease Therapies for Viral Infections,” Molecular Therapy (2013); 21 10, 1819-1820; http://www.nature.com/mt/journal/v21/n10/full/mt2013208a.html.
[000110] Essas nucleases funcionam reconhecendo e clivando especificamente as sequências de DNA selecionadas, o que resulta em ruptura genética ao reparo impreciso do DNA. O direcionamento de TALENs do genoma do vírus da hepatite B (HBV) pode resultar em mutações induzidas por TALEN no DNA circular de longa duração covalentemente fechado do HBV. A mutação e/ou ruptura do cccDNA impede a replicação viral bloqueando a expressão de proteínas virais funcionais.
CRISPR
[000111] O CRISPR, ou repetições palindrômicas curtas interespaçadas agrupadas regularmente, é outra maneira de transformar o DNA-HBV, fornecendo uma edição de genoma direcionada. Além das ferramentas de edição programáveis, tais como nucleases de dedo de zinco e nucleases efetoras semelhantes a ativadores de transcrição (TALENs) descritas acima, CRISPR (repetições palindrômicas curtas interespaçadas agrupadas regularmente)/tecnologia Cas9 também permite a edição de genoma e permite segmentação genômica específica de sítio em HBV.
[000112] O sistema CRISPR/Cas tipo II é um sistema de resposta imune adaptativo procariótico que usa RNAs não codificantes para guiar a Cas9 nuclease a induzir clivagem de DNA específica de sítio. Este dano ao DNA é reparado por mecanismos de reparo de DNA celular, seja pela via de reparo de DNA que une a extremidade não homóloga (NHEJ) ou pela via de reparo dirigida por homologia (HDR).
[000113] O sistema CRISPR/Cas9 fornece um método simples, programável por RNA para gerar nocautes genéticos (via inserção/deleção) ou knockins (via HDR), e permite direcionamento genômico específico de sítio em HBV. O sistema CRISPR/Cas tipo II é um sistema de resposta imune adaptativo procariótico que usa RNAs não codificantes para guiar a Cas9 nuclease a induzir clivagem de DNA específica de sítio.
[000114] Para criar rupturas de genes, um único RNA guia (sgRNA) é gerado para direcionar a Cas9 nuclease para uma localização genômica específica. As quebras de fita dupla induzidas por Cas9 são reparadas através da via de reparação do NHEJ DNA. O reparo é propenso a erros e, portanto, inserções e deleções (INDELs) podem ser introduzidas que podem interromper a função do gene.
[000115] Assim, a segmentação do cccDNA do vírus da hepatite B usando uma nuclease CRISPR/Cas9 pode inibir eficientemente a replicação viral.
Mir/MicroRNA
[000116] Os microRNAs (miRNAs) são minúsculos RNAs não codificantes que regulam a expressão genética principalmente no nível pós-transcricional por ligação a mRNAs. miRNAs contribuem para uma variedade de processos fisiológicos e patológicos. Descobriu-se que uma série de miRNAs desempenham um papel fundamental na interação entre o hospedeiro e o HBV. A infecção por HBV pode alterar os padrões de expressão do miRNA celular, e diferentes estágios da doença associada ao HBV têm apresentado perfis distintos de miRNA. Os miRNAs expressos diferencialmente estão envolvidos na progressão de doenças relacionadas ao HBV. Por exemplo, alguns miRNAs estão envolvidos na tumorigênese do fígado e na metástase tumoral. O miRNA circulante no soro ou plasma pode ser um biomarcador muito útil para o diagnóstico e prognóstico de doenças relacionadas ao HBV. Além disso, a terapia baseada em miRNA pode ser usada para tratar, prevenir ou curar doenças relacionadas ao HBV. Ver, por exemplo, Ying-Feng Wei, “MicroRNAs may solve the mystery of chronic hepatitis B virus infection,” World J Gastroenterol. 14 de agosto de 2013; 19 (30): 4867-4876. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3740416/
[000117] Na interação entre vírus e hospedeiro, os miRNAs podem ser divididos em miRNAs celulares e miRNAs virais. Os perfis de expressão dos miRNAs celulares mudam no estado infectado, e os miRNAs anormais frequentemente estão intimamente relacionados com o ciclo de vida viral, bem como com o distúrbio do hospedeiro. Os miRNAs virais podem evoluir para regular a expressão genética viral e celular.
[000118] Às vezes, os vírus exploram miRNAs celulares para facilitar certas etapas do seu ciclo de vida. Por exemplo, o miR-122 desempenha um papel antiviral no ciclo de vida do HBV. A superexpressão de MiR-122 inibe a expressão de HBV, enquanto que o esgotamento de miR-122 endógeno resulta em aumento da produção de HBV em células transfectadas. Os inibidores MiR- 122 causam um aumento na heme oxigenase-1 celular, o que pode diminuir os níveis de DNA circular fechado covalentemente do HBV (cccDNA) reduzindo a estabilidade da proteína nuclear do HBV. A expressão de MiR-122 no fígado pode ser significativamente infrarregulada em pacientes com infecção por HBV em comparação com controles saudáveis. O MiR-122 é significativamente suprarregulada em pacientes infectados por HBV e pode inibir a replicação do HBV em células Huh7 e HepG2. A ciclina G1 é um alvo miR-122 que interage especificamente com p53, resultando na ligação específica da p53 aos elementos potenciadores do HBV e revogação simultânea da inibição mediada por p53 da transcrição do HBV.
[000119] O HBV é um vírus não citopático que se replica preferencialmente nos hepatócitos. O cccDNA serve como um modelo para a transcrição de todo o RNA viral que é sintetizado após o DNA do HBV entrar no núcleo do hepatócito. O genoma do HBV tem 3,2 kb de comprimento e contém quatro quadros de leitura abertos sobrepostos. Ele pode transcrever RNA pré-genômico viral que reverte a transcrição para sintetizar o genoma do DNA viral e codifica o antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg), proteína do núcleo do vírus da hepatite B, DNA polimerase reversa viral (Pol) e proteína X.
[000120] O Hsa-miR-125a-5p interfere na tradução do HBV e infrarregula a expressão do antígeno de superfície do HBV. Consequentemente, os miRNAs celulares podem alterar a expressão genética do HBV por direcionamento para transcritos do HBV.
[000121] Os miRNAs celulares podem afetar a tradução viral e alterar a replicação viral. Além do exemplo da inibição da replicação de HBV pelo miR- 122, há outros exemplos em que os miRNAs do hospedeiro alteram a replicação de HBV. O MiR-141 suprime a replicação de HBV reduzindo as atividades do promotor de HBV, sobrerregulando o receptor ativado por proliferador de peroxissoma alfa. A hipermetilação de DNA pode estar intimamente relacionada à supressão da transcrição do cccDNA de HBV, e o miR-152 pode ser um fator envolvido na regulação da metilação do cccDNA de HBV.
[000122] Assim, os miRNAs podem direta ou indiretamente alterar a replicação de HBV. A estreita relação entre miRNAs e doenças relacionadas ao HBV oferece uma oportunidade para usar miRNAs ou antagomir em terapias combinadas para tratar, curar ou prevenir o HBV.
VIII. Composições Farmacêuticas.
[000123] Hospedeiros, incluindo, mas não se limitando a, humanos, infectados com HBV podem ser tratados administrando ao paciente uma quantidade eficaz do composto ativo ou de uma pró-droga ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na presença de um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Os materiais ativos podem ser administrados por qualquer via apropriada, por exemplo, oralmente, parenteralmente, intravenosamente, intradermicamente, subcutaneamente ou topicamente, na forma líquida ou sólida.
[000124] Uma dose preferida do composto será na faixa entre cerca de 0,01 e cerca de 10 mg/kg, mais geralmente entre cerca de 0,1 e 5 mg/kg e, de preferência, entre cerca de 0,5 e cerca de 2 mg/kg de corpo peso do destinatário por dia. A faixa de dosagem eficaz dos sais e pró-drogas farmaceuticamente aceitáveis pode ser calculada com base no peso do composto original a ser administrado. Se o sal ou pró-droga exibir atividade em si, a dosagem eficaz pode ser estimada como acima utilizando o peso do sal ou pró-droga, ou por outros meios conhecidos dos versados na técnica.
[000125] O composto é convenientemente administrado em unidade qualquer forma de dosagem adequada, incluindo mas não limitado a um contendo 7 a 600 mg, preferivelmente 70 a 600 mg de ingrediente ativo por forma de dosagem unitária. Uma dose oral de 1-400 mg é geralmente conveniente.
[000126] A concentração do composto ativo na composição da droga dependerá das taxas de absorção, inativação e excreção da droga, bem como de outros fatores conhecidos dos versados na técnica. Deve-se notar que os valores de dosagem também variam com a gravidade da condição a ser aliviada. Entenda-se ainda que, para qualquer sujeito em particular, regimes de dosagem específicos devem ser ajustados ao longo do tempo de acordo com a necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das composições e que as faixas de concentração aqui estabelecidas são apenas exemplificativas e não pretendem limitar o âmbito ou a prática da composição reivindicada. O ingrediente ativo pode ser administrado de uma só vez, ou pode ser dividido em várias doses menores a serem administradas em intervalos variados de tempo.
[000127] Um modo preferido de administração do composto ativo é oral, embora para certos pacientes uma forma injetável estéril possa ser dada sc, ip ou iv. As composições orais incluem geralmente um diluente inerte ou um transportador comestível. Eles podem ser incluídos em cápsulas de gelatina ou comprimidos em comprimidos. Para fins de administração terapêutica oral, o composto ativo pode ser incorporado com excipientes e utilizado na forma de comprimidos, trociscos ou cápsulas. Agentes de ligação farmaceuticamente compatíveis, e/ou materiais adjuvantes podem ser incluídos como parte da composição.
[000128] Os comprimidos, pílulas, cápsulas, trociscos e semelhantes podem conter qualquer um dos seguintes ingredientes, ou compostos de natureza semelhante: um ligante, tal como celulose microcristalina, goma adragante ou gelatina; um excipiente, tal como amido ou lactose, um agente desintegrante, tal como ido algico, Primogel ou amido de milho; um lubrificante, tal como estearato de magnésio ou Estirotes; um deslizante, tal como dióxido de silício coloidal; um agente edulcorante, tal como sacarose ou sacarina; ou um agente aromatizante, tal como hortelã-pimenta, salicilato de metil ou aromatizante de laranja. Quando a forma unitária de dosagem é uma cápsula, pode conter, além do material do tipo acima, um carreador líquido, tal como um óleo graxo. Além disso, as formas de dosagem unitária podem conter vários outros materiais que modificam a forma física da unidade de dosagem, por exemplo, revestimentos de açúcar, goma-laca ou outros agentes entéricos.
[000129] O composto pode ser administrado como um componente de um elixir, suspensão, xarope, bolacha, goma de mascar ou semelhante. Um xarope pode conter, além do(s) composto(s) ativo(s), sacarose como agente edulcorante e certos conservantes, corantes e colorantes e aromatizantes.
[000130] O composto ou uma pró-droga ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo também pode ser misturado com outros materiais ativos que não prejudiquem a ação desejada, ou com materiais que suplementam a ação desejada, tais como antibióticos, antifúngicos, anti-inflamatórios ou outros compostos antivirais. Soluções ou suspensões usadas para aplicação parenteral, intradérmica, subcutânea ou tópica podem incluir os seguintes componentes: um diluente estéril, como água para injeção, solução salina, óleos fixos, polietilenoglicóis, glicerina, propilenoglicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos, tais como álcool benzílico ou metil parabenos; antioxidantes, tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes, como o ácido etilenodiaminotetracético; tampões, tais como acetatos, citratos ou fosfatos, e agentes para o ajuste da tonicidade, tais como cloreto de sódio ou dextrose. A preparação parenteral pode ser encerrada em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de doses múltiplas feitos de vidro ou de plástico.
[000131] Se administrados intravenosamente, os transportadores preferidos são soro fisiológico ou solução salina tamponada com fosfato (PBS).
Formulações Transdérmicas
[000132] Em algumas modalidades, as composições estão presentes na forma de formulações transdérmicas, tal como a utilizada no agonista de rotigitina transdérmica aprovado pelo FDA (emplastro Neupro). Outra formulação adequada é descrita na Publicação US 20080050424, intitulada “Transdérmica Therapeutic System for Treating Parkinsonism.” Esta formulação inclui um adesivo à base de silicone ou acrilato, e pode incluir um aditivo com maior solubilidade para a substância ativa, numa quantidade eficaz para aumentar a capacidade de dissolução da matriz para a substância ativa.
[000133] As formulações transdérmicas podem ser matrizes monofásicas que incluem uma camada de suporte, uma matriz autocolante contendo substância ativa e um filme protetor a ser removido antes da utilização. Modalidades mais complicadas contêm matrizes de múltiplas camadas que podem também conter camadas não adesivas e membranas de controle. Se for utilizado um adesivo de poliacrilato, este pode ser reticulado com íons de metal multivalentes, tais como íons de zinco, cálcio, alumínio ou titânio, tais como acetilacetonato de alumínio e acetilacetonato de titânio.
[000134] Quando adesivos de silicone são usados, eles são tipicamente polidimetilsiloxanos. Contudo, outros resíduos orgânicos, tais como, por exemplo, grupos etil ou grupos fenil podem em princípio estar presentes em vez dos grupos metil. Como os compostos ativos são aminas, pode ser vantajoso usar adesivos resistentes à amina. Adesivos representativos resistentes a amina são descritos, por exemplo, em EP 0 180 377.
[000135] Adesivos de polímeros à base de acrilato representativos incluem ácido acrílico, acrilamida, hexilacrilato, 2-etil-hexilacrilato, hidroxietilacrilato, octilacrilato, butilacrilato, metilacrilato, glicidilacrilato, ácido metacrílico, metacrilamida, hexilmetacrilato, 2- etil-hexilmetacrilato, octilmetacrilato, metilmetacrilato, glicidilmetacrilato, vinilacetato, vinilpirrolidona e combinações dos mesmos.
[000136] O adesivo deve ter uma capacidade de dissolução adequada para a substância ativa, e a substância ativa deve ser capaz de se mover dentro da matriz, e ser capaz de cruzar a superfície de contato até a pele. Os versados na técnica podem prontamente formular uma formulação transdérmica com transporte transdérmico apropriado da substância ativa.
[000137] Certos sais farmaceuticamente aceitáveis tendem a ser mais preferidos para utilização em formulações transdérmicas, porque podem ajudar a substância ativa a passar a barreira do estrato córneo. Exemplos incluem sais de ácidos graxos, tais como ácido esteárico e sais de ácido oleico. Os sais de oleato e estearato são relativamente lipofílicos e podem atuar como um potenciador de permeação na pele.
[000138] Potenciadores de permeação também podem ser usados. Potenciadores de permeação representativos incluem álcoois graxos, ácidos graxos, ésteres de ácidos graxos, amidas de ácidos graxos, glicerol ou seus ésteres de ácidos graxos, N-metilpirrolidona, terpenos como limoneno, alfa- pineno, alfa-terpineol, carvona, carveol, óxido de limoneno, pineno óxido e 1,8- eucaliptol.
[000139] Os emplastros podem geralmente ser preparados dissolvendo ou suspendendo o agente ativo em etanol ou em outro solvente orgânico adequado, depois adicionando a solução adesiva com agitação. Substâncias auxiliares adicionais podem ser adicionadas à solução adesiva, à solução de substância ativa ou à solução adesiva contendo substância ativa. A solução pode então ser revestida sobre uma folha adequada, os solventes removidos, uma camada de suporte laminada sobre a camada de matriz, e emplastros perfurados para fora do laminado total.
Composições Nanoparticuladas
[000140] Os compostos aqui descritos também podem ser administrados na forma de composições nanoparticuladas.
[000141] Numa modalidade, as formulações nanoparticuladas de liberação controlada compreendem um agente ativo nanoparticulado a ser administrado e um polímero de controle de taxa que funciona para prolongar a liberação do agente após administração. Nesta modalidade, as composições podem liberar o agente ativo, após administração, durante um período de tempo que varia entre cerca de 2 e cerca de 24 horas ou até 30 dias ou mais. Formulações de liberação controlada representativas incluindo uma forma nanoparticulada do agente ativo são descritas, por exemplo, na Patente US 8.293.277.
[000142] Composições nanoparticuladas compreendem partículas dos agentes ativos aqui descritos, tendo um estabilizador de superfície não reticulado adsorvido sobre, ou associado a sua superfície.
[000143] O tamanho médio de partícula das nanopartículas é tipicamente inferior a cerca de 800 nm, mais tipicamente inferior a cerca de 600 nm, ainda mais tipicamente inferior a cerca de 400 nm, inferior a cerca de 300 nm, inferior a cerca de 250 nm, inferior a cerca de 100 nm ou inferior a cerca de 50 nm. Num aspecto desta modalidade, pelo menos 50% das partículas de agente ativo têm um tamanho médio de partícula inferior a cerca de 800, 600, 400, 300, 250, 100 ou 50 nm, respectivamente, quando medido por técnicas de dispersão da luz.
[000144] Uma variedade de estabilizadores de superfície é tipicamente usada com composições nanoparticuladas para evitar que as partículas se aglutinem ou se agreguem. Estabilizadores de superfície representativos incluem, mas não estão limitados a, gelatina, lecitina, dextrana, goma acácia, colesterol,tragacanto, ácido esteárico, cloreto de benzalcônio, estearato de cálcio, monoestearato de glicerol, álcool cetoestearílico, cera emulsificante de cetomacrogol, ésteres de sorbitano, éteres alquílicos de polioxietileno, derivados do óleo de castor de polioxietileno, ésteres de ácidos graxos de polioxietileno sorbitano, polietilenoglicóis, estearatos de polioxietileno, dióxido de silício coloidal, fosfatos, dodecilsulfato de sódio, carboximetilcelulose de cálcio, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxietilcelulose, hidroxipropilcelulose, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, celulose não cristalina, silicato de alumínio e magnésio, trietanolamina, álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, tiloxapol, poloxâmeros, polioxaminas, poloxamina 908, dialquilésteres do ácido sulfossuccínico de sódio, lauril sulfato de sódio, um alquil aril poliéter sulfonato, uma mistura de estearato de sacarose e distearato de sacarose, p-isononilfenoxipoli-(glicidol), SA9OHCO, decanoil-N-metilglucamida, n-decil-D-glucopiranosídeo, n-decil-D-maltopiranosídeo, n-dodecil-D- glucopiranosídeo, n-dodecil-D-maltosídeo, heptanoil-N-metilglucamida, n-heptil- D-glucopiranosídeo, n-heptil-D-tioglucosídeo, n-hexil-D-glicopiranosídeo, nonanoil-N-metilglucamida, n-nonil-D-glucopiranosídeo, octanoil-N- metilglucamida, n-octil-D-glucopiranosídeo e octil-D-tioglucopiranosídeo. Lisozimas podem também ser usadas como estabilizadores de superfície para composições nanoparticuladas. Certas nanopartículas, tais como poli(ácido lático-co-glicólico) (PLGA)-nanopartículas são conhecidas por atingir o fígado quando administradas por via intravenosa (IV) ou subcutânea (SQ).
[000145] Como o HBV causa danos e está presente no fígado, em uma modalidade, as nanopartículas ou outros veículos de distribuição de drogas são direcionados para o fígado. Um desses tipos de veículos de distribuição de medicamentos direcionados ao fígado é descrito em Park, et al., Mol Imaging. Fev 2011; 10(1): 69-77, e usa Glypican-3 (GPC3) como um alvo molecular. Park ensinou a usar esse alvo para o carcinoma hepatocelular (HCC), um câncer primário do fígado frequentemente causado por hepatite crônica persistente.
[000146] Num aspecto desta modalidade, este veículo de distribuição de drogas também é usado para direcionar a terapêutica para o fígado para tratar infecções virais. Além disso, uma vez que os compostos aqui descritos têm utilizações anticancerígenas indiretas, este tipo de sistema pode direcionar os compostos para o fígado e tratar cânceres do fígado ou reverter o câncer. O GPC3 é um proteoglicano de sulfato de heparano que não é expresso em tecidos adultos normais, mas significativamente superexpresso em até 80% dos HCC's humanos. O GPC3 pode ser direcionado, por exemplo, utilizando direcionamento e ligação mediados por anticorpos (ver Hsu, et al., Cancer Res. 1997; 57:517984).
[000147] Outro tipo de sistema de administração de dorga para alvejar o fígado é descrito na Patente US 7.304.045. A patente '045 divulga um sistema de direcionamento de tumor ou câncer de partícula dupla que inclui uma primeira nanopartícula de direcionamento mediada por ligando conjugada com galactosamina, estando o ligando numa célula alvo. A primeira nanopartícula inclui copolímeros em bloco poli(ácido Y-glutâmico)/poli(lactida) e n composto antiviral, que neste caso é um composto descrito no presente documento, e na patente '045, o ganciclovir. Uma segunda nanopartícula inclui copolímeros em bloco de poli(ácido Y-glutâmico)/poli (lactida), um promotor específico de célula endotelial e um plasmídeo construído (gene de timidina-quinase de vírus) (herpes-simplex-vírus) e proporciona permeabilidade e direcionamento mediado por retenção. A primeira e a segunda nanopartículas são misturadas em uma solução configurada para distribuição ao fígado. Quando o distúrbio a tratar é um tumor ou câncer do fígado, o parto pode ser diretamente para, ou adjacente a, tumor do fígado ou câncer.
[000148] Polímeros de controle de taxa representativa em que as nanopartículas podem ser formuladas incluem quitosana óxido de polietileno (PEO), ftalato de acetato de polivinil, goma arábica, ágar, goma guar, gengivas de cereais, dextrano, caseína, gelatina, pectina, carragenina, ceras, goma-laca, óleos vegetais hidrogenados, polivinilpirrolidona, hidroxipropil (HPC), hidroxietil celulose (HEC), hidroxipropil metilcelulose (HPMC), carboximetilcelulose de sódio (CMC), óxido de poli(etileno), alquil celulose, etil celulose, metil celulose, carboximetilcelulose, derivados de celulose hidrofílica, polietilenoglicol, polivinilpirrolidona, acetato de celulose, butirato de acetato de celulose, ftalato de acetato de celulose, acetato de celulose trimelitato, ftalato de acetato de polivinil, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, acetato de succinato de hidroxipropilmetilcelulose, acetato de polivinil acetaldietilamino, poli(alquilmetacrilato), poli(acetato de vinil), polímeros derivados de ácido acrílico ou metacrílico e seus respectivos ésteres, e copolímeros derivados de ácido acrílico ou metacrílico e seus respectivos ésteres.
[000149] Os métodos de produção de composições nanoparticuladas são descritos, por exemplo, na Patente US 5.518.187 e 5.862.999, ambos para o "Method of Grinding Pharmaceutical Substances"; Patente US 5.718.388, para"Continuous Method of Grinding Pharmaceutical Substances;" e Patente US 5.510.118 para "Process of Preparing Therapeutic Compositions Containing Nanoparticles."
[000150] As composições nanoparticuladas são também descritas, por exemplo, na Patente US 5.298.262 para "Use of Ionic Cloud Point Modifiers to Prevent Particle Aggregation During Sterilization;" Patente US 5.302.401 para "Method to Reduce Particle Size Growth During Lyophilization;" Patente US 5.318.767 para "X-Ray Contrast Compositions Useful in Medical Imaging;" Patente US 5.326.552 para "Novel Formulation For Nanoparticulate X-Ray Blood Pool Contrast Agents Using High Molecular Weight Non-ionic Surfactants;" Patente US 5.328.404 para "Method of X-Ray Imaging Using Iodinated Aromatic Propanedioates;" Patente US 5.336.507 para "Use of Charged Phospholipids to Reduce Nanoparticle Aggregation;" Patente US 5.340.564 para Formulations Comprising Olin 10-G to Prevent Particle Aggregation and Increase Stability;" Patente US 5.346.702 para "Use of Non-Ionic Cloud Point Modifiers to Minimize Nanoparticulate Aggregation During Sterilization;" Patente US 5.349.957 para "Preparation and Magnetic Properties of Very Small Magnetic-Dextran Particles;" Patente US 5.352.459 para "Use of Purified Surface Modifiers to Prevent Particle Aggregation During Sterilization;" Patente US 5.399.363 e 5.494.683, ambas para "Surface Modified Anticancer Nanoparticles;" Patente US 5.401.492 para "Water Insoluble Non-Magnetic Manganese Particles as Magnetic Resonance Enhancement Agents;" Patente US 5.429.824 para "Use of Tyloxapol as a Nanoparticulate Stabilizer;" Patente US 5.447.710 para "Method for Making Nanoparticulate X-Ray Blood Pool Contrast Agents Using High Molecular Weight Non-ionic Surfactants;" Patente US 5.451.393 para "X-Ray Contrast Compositions Useful in Medical Imaging;" Patente US 5.466.440 para "Formulations of Oral Gastrointestinal Diagnostic X-Ray Contrast Agents in Combination with Pharmaceutically Acceptable Clays;" Patente US 5.470.583 para "Method of Preparing Nanoparticle Compositions Containing Charged Phospholipids to Reduce Aggregation;" Patente US 5.472.683 para "Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carbamic Anhydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Patente US 5.500.204 para "Nanoparticulate Diagnostic Dimers as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Patente US 5.518.738 para "Nanoparticulate NSAID Formulations;" Patente US 5.521.218 para "Nanoparticulate Iododipamide Derivatives for Use as X-Ray Contrast Agents;" Patente US 5.525.328 para "Nanoparticulate Diagnostic Diatrizoxy Ester X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Patente US 5.543.133 para "Process of Preparing X-Ray Contrast Compositions Containing Nanoparticles;" Patente US 5.552.160 para "Surface Modified NSAID Nanoparticles;" Patente US 5.560.931 para "Formulations of Compounds as Nanoparticulate Dispersions in Digestible Oils or Fatty Acids;" Patente US 5.565.188 para "Polyalkylene Block Copolymers as Surface Modifiers for Nanoparticles;" Patente US 5.569.448 para "Sulfated Non-ionic Block Copolymer Surfactant as Stabilizer Coatings for Nanoparticle Compositions;" Patente US 5.571.536 para "Formulations of Compounds as Nanoparticulate Dispersions in Digestible Oils or Fatty Acids;" Patente US 5.573.749 para "Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carboxylic Anydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Patente US 5.573.750 para "Diagnostic Imaging X-Ray Contrast Agents;" Patente US 5.573.783 para "Redispersible Nanoparticulate Film Matrices With Protective Overcoats;" Patente US 5.580.579 para "Site-specific Adhesion Within the GI Tract Using Nanoparticles Stabilized by High Molecular Weight, Linear Poly(ethylene Oxide) Polymers;" Patente US 5.585.108 para "Formulations of Oral Gastrointestinal Therapeutic Agents in Combination with Pharmaceutically Acceptable Clays;" Patente US 5.587.143 para "Butylene Oxide-Ethylene Oxide Block Copolymers Surfactants as Stabilizer Coatings for Nanoparticulate Compositions;" Patente US 5.591.456 para "Milled Naproxen with Hydroxypropyl Cellulose as Dispersion Stabilizer;" Patente US 5.593.657 para "Novel Barium Salt Formulations Stabilized by Non-ionic and Anionic Stabilizers;" Patente US 5.622.938 para "Sugar Based Surfactant for Nanocrystals;" Patente US 5.628.981 para "Improved Formulations of Oral Gastrointestinal Diagnostic X-Ray Contrast Agents and Oral Gastrointestinal Therapeutic Agents;" Patente US 5.643.552 para "Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carbonic Anhydrides as X-Ray Contrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging;" Patente US 5.718.388, para"Continuous Method of Grinding Pharmaceutical Substances;" Patente US 5.718.919 para "Nanoparticles Containing the R(-)Enantiomer of Ibuprofen;" Patente US 5.747.001 para "Aerosols Containing Beclomethasone Nanoparticle Dispersions;" Patente US 5.834.025 para "Reduction of Intravenously Administered Nanoparticulate Formulation Induced Adverse Physiological Reactions;" Patente US 6.045.829 "Nanocrystalline Formulations of Human Immunodeficiency Virus (HIV) Protease Inhibitors Using Cellulosic Surface Stabilizers;" Patente US 6.068.858 para "Methods of Making Nanocrystalline Formulations of Human Immunodeficiency Virus (HIV) Protease Inhibitors Using Cellulosic Surface Stabilizers;" Patente US 6.153.225 para "Injectable Formulations of Nanoparticulate Naproxen;" Patente US 6.165.506 para "New Solid Dose Form of Nanoparticulate Naproxen;" Patente US 6.221.400 para "Methods of Treating Mammals Using Nanocrystalline Formulations of Human Immunodeficiency Virus (HIV) Protease Inhibitors;" Patente US 6.264.922 para "Nebulized Aerosols Containing Nanoparticle Dispersions;" Patente US 6.267.989 para "Methods for Preventing Crystal Growth and Particle Aggregation in Nanoparticle Compositions;" Patente US 6.270.806 para "Use of PEG- Derivatized Lipids as Surface Stabilizers for Nanoparticulate Compositions;" Patente US 6.316.029 para "Rapidly Disintegrating Solid Oral Dosage Form," Patente US 6.375.986 para "Solid Dose Nanoparticulate Compositions Comprising a Synergistic Combination of a Polymeric Surface Stabilizer and Dioctyl Sodium Sulfosuccinate;" Patente US 6.428.814 para "Bioadhesive nanoparticulate compositions having cationic surface stabilizers;" Patente US 6.431.478 para "Small Scale Mill;" e Patente US 6.432.381 para "Methods for targeting drug delivery to the upper and/or lower gastrointestinal tract," all of which are specifically incorporated by reference. Além disso, o Pedido de Patente US 20020012675 A1, publicado em 31 de janeiro de 2002, para "Controlled Release Nanoparticulate Compositions," descreve composições nanoparticuladas e é especificamente incorporado por referência.
[000151] As formulações de nanopartículas, incluindo os compostos aqui descritos, e também na forma de uma pró-droga ou um sal, podem ser utilizadas para tratar ou prevenir infecções pelo vírus da hepatite B.
[000152] As composições de partículas pequenas amorfas são descritas, por exemplo, na Patente US 4.783.484 para "Particulate Composition and Use Thereof as Antimicrobial Agent;" Patente US 4.826.689 para "Method for Making Uniformly Sized Particles from Water- Insoluble Organic Compounds;" Patente US 4.997.454 para "Method for Making Uniformly-Sized Particles From Insoluble Compounds;" Patente US 5.741.522 par "Ultrasmall, Non-aggregated Porous Particles of Uniform Size for Entrapping Gas Bubbles Within and Methods;" e Patente US 5.776.496, para "Ultrasmall Porous Particles for Enhancing Ultrasound Back Scatter."
Formulações de liberação controlada
[000153] Numa modalidade preferida, os compostos ativos são preparados com transportadores que protegerão o composto contra a rápida eliminação do corpo, tal como uma formulação de liberação controlada, incluindo mas não limitado a implantes e sistemas de distribuição microencapsulados. Podem ser usados polímeros biodegradáveis, biocompatíveis, tais como acetato de vinil, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido polilático. Por exemplo, compostos revestidos entericamente podem ser utilizados para proteger a clivagem pelo ácido do estômago. Os métodos para a preparação de tais formulações serão evidentes para os versados na técnica. Materiais adequados podem também ser obtidos comercialmente.
[000154] As suspensões lipossômicas (incluindo mas não limitado a lipossomas direcionados para células infectadas com anticorpos monoclonais para antígenos virais) são também preferidas como transportadores farmaceuticamente aceitáveis. Estes podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos dos versados na técnica, por exemplo, como descrito na Patente US 4.522.811 (incorporado por referência). Por exemplo, as formulações lipossômicas podem ser preparadas dissolvendo o(s) lipídeo(s) adequado(s) (tal como estearoil fosfatidil etanolamina, estearoil fosfatidil colina, arachadoil fosfatidil colina e colesterol) num solvente inorgânico que é então evaporado, deixando uma camada fina de lipídeos secos na superfície do recipiente. Uma solução aquosa do composto ativo é então introduzida no recipiente. O recipiente é então rodado à mão para liberar o material lipídico dos lados do recipiente e para dispersar os agregados lipídicos, formando assim a suspensão lipossômica.
[000155] Os termos utilizados na descrição da invenção são vulgarmente utilizados e conhecidos pelos versados na técnica. Tal como aqui utilizado, as seguintes abreviaturas têm os significados indicados: ACN Acetonitrila Boc2O Di-terc-butil dicarbonato CDI carbonildi-imidazol DCC N,N'-diciclo-hexilcarbodi-imida DCM diclorometano DIPEA di-isopropil etil amina (base de Hünig) DMAP 4-Dimetilaminopiridina DMF N,N-dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido EDC cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida EtOAc acetato de etil h hora HATU Hexafluorofosfato de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3- triazolo[4,5-b]piridínio-3-óxido M molar min minuto rt ou RT temperatura ambiente TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano DMA Dimetilacetamida
IX. Métodos gerais para preparar compostos ativos
[000156] Métodos para a preparação fácil de compostos ativos são conhecidos na técnica e resultam da combinação seletiva de métodos conhecidos. Os compostos aqui descritos podem ser preparados como descrito em detalhes abaixo, ou por outros métodos conhecidos pelos versados na técnica. Será entendido por um versado comum na técnica que as variações de detalhes podem ser feitas sem se afastar do espírito e de nenhuma maneira limitar o âmbito da presente invenção. Os vários esquemas de reação estão resumidos abaixo. Esquema 1 é um exemplo não limitativo da síntese de compostos ativos da presente invenção, e, em particular, uma abordagem sintética do composto A. Esquema 2 é um exemplo não limitativo da síntese de compostos ativos da presente invenção, e, em particular, uma abordagem sintética alternativa ao composto B. Esquema 3 é um exemplo não limitativo da síntese de compostos ativos da presente invenção, e, em particular, uma abordagem sintética do composto C. Esquema 4 é um exemplo não limitativo da síntese de compostos ativos da presente invenção, e, em particular, uma abordagem sintética do composto D. Esquema 5 é um exemplo não limitativo da síntese de compostos ativos da presente invenção, e, em particular, uma abordagem sintética do composto E. Esquema 6 é um exemplo não limitativo da síntese de compostos ativos da presente invenção, e, em particular, uma abordagem sintética do composto F e G. Esquema 7 é um exemplo não limitativo da síntese de compostos ativos da presente invenção, e, em particular, uma abordagem sintética do composto H.
[000157] Compostos de fórmula A podem ser preparados pela primeira reação seletiva de um derivado de anilina com um cloreto de ácido carboxílico de fórmula geral I na presença de uma base orgânica como Et3N ou DIPEA. Intermediário III é, então, reagido com uma amina de fórmula geral IV, por exemplo, em um solvente orgânico como CH2Cl2, na presença de uma base orgânica como Et3N. Esquema 1 Uma abordagem sintética para o composto A
[000158] Compostos de fórmula B podem ser preparados pela primeira reação seletiva de um derivado de anilina com um cloreto de ácido carboxílico de fórmula geral V na presença de uma base orgânica como Et3N ou DIPEA. Intermediário VI é então reagido com uma amina de fórmula geral IV, por exemplo, em um solvente orgânico como CH2Cl2, na presença de uma base orgânica como Et3N. Esquema 2 Uma abordagem sintética para o composto B
[000159] A síntese de compostos de fórmula geral C pode ser executada conforme descrito no Esquema 3. Um ácido carboxílico de fórmula geral VII pode ser N-protegido, por exemplo, por tratamento com Boc2O na presença de uma base como NaHCO3. Intermediário VIII pode ser acoplado a uma amina de fórmula geral II utilizando um reagente de acoplamento peptídico como, por exemplo, EDC na presença de uma base de amina orgânica, tal como DMAP. O composto resultante da fórmula geral IX pode então ser desprotegido, por exemplo, na presença de TFA quando Boc foi usado como um grupo de proteção e então reagir com um cloreto de sulfonil de fórmula geral X na presença de uma base de amina orgânica como Et3N. Esquema 3 Uma abordagem sintética para o composto C
[000160] A síntese de compostos de fórmula geral D pode ser executada conforme descrito no Esquema 4. Um éster de fórmula geral XI pode ser reagido com um monoalquiléster de cloreto de oxalil de fórmula geral XII na presença de um ácido de Lewis como, por exemplo, AlCl3 para dar intermediário XIII. A hidrólise seletiva com uma base inorgânica como, por exemplo, NaOH seguida do acoplamento do ácido alfa-ceto resultante XIV com uma amina de fórmula geral IV na presença de um reagente de acoplamento peptídico como, por exemplo, CDI proporciona compostos de fórmula geral XV. A hidrólise da fração éster com uma base inorgânica como, por exemplo, NaOH seguida pelo acoplamento do ácido carboxílico resultante com uma amina de fórmula geral II na presença de um reagente de acoplamento peptídico como, por exemplo, HATU na presença de uma base de amina orgânica tal como DIPEA dá compostos de fórmula geral D. Esquema 4 Uma abordagem sintética para o composto D
[000161] A síntese de compostos de fórmula geral E pode ser executada conforme descrito no Esquema 5. Um ácido carboxílico de fórmula geral XVII pode ser acoplado a uma amina de fórmula geral II utilizando um reagente de acoplamento peptídico como, por exemplo, HATU na presença de uma base de amina orgânica como DIPEA. Intermediário XVIII pode ser reagido com um monoalquiléster de cloreto de oxalil de fórmula geral XII na presença de um ácido de Lewis como, por exemplo, AlCl3 para dar o intermediário XIX. A hidrólise seletiva com uma base inorgânica como, por exemplo, NaOH seguida do acoplamento do ácido alfa-ceto resultante XX com um álcool de fórmula geral XXI na presença de um reagente de acoplamento peptídico como, por exemplo, DCC na presença de uma base de amina orgânica tal como DMAP proporciona compostos de fórmula geral E. Esquema 5 Uma abordagem sintética para o composto E
[000162] A síntese de compostos de fórmula geral F e G pode ser executada conforme descrito no Esquema 6. Um ácido carboxílico de fórmula geral XVII pode ser acoplado a uma amina de fórmula geral II utilizando um reagente de acoplamento peptídico como, por exemplo, HATU na presença de uma base de amina orgânica como DIPEA. A redução de compostos XXIII usando, por exemplo, Zn na presença de ácido fórmico leva a derivados amino de fórmula geral XXIV que pode ser reagido com um derivado do ácido oxoacético de fórmula geral XXV na presença de um reagente de acoplamento peptídico como, por exemplo, DCC ou com um cloreto de sulfonil de fórmula geral X na presença de uma base de amina orgânica como Et3N para fornecer respectivamente compostos de fórmulas gerais F e G. Esquema 6 Uma abordagem sintética para compostos F e G
[000163] A síntese de compostos de fórmula geral H pode ser executada conforme descrito no Esquema 7. Um derivado bromo de fórmula geral XXVI pode sofrer uma troca de lítio-halogênio usando um reagente de organolítio como, por exemplo, n-BuLi e reagem com um dialquiloxalato como, por exemplo, oxalato de dietil. O composto resultante pode então ser hidrolisado para formar o ácido carboxílico de fórmula geral XXVIII que pode ser acoplado a uma amina de fórmula geral II utilizando um reagente de acoplamento peptídico como, por exemplo, HATU na presença de uma base de amina orgânica como DIPEA. A hidrólise do Composto XXIX com uma base inorgânica como, por exemplo, NaOH seguida do acoplamento do ácido alfa-ceto resultante XXX com uma amina de fórmula geral IV na presença de um reagente de acoplamento peptídico como, por exemplo, CDI na presença de uma base de amina orgânica como DIPEA proporciona compostos de fórmula geral H. Esquema 7 Uma abordagem sintética para o composto H
Exemplos Específicos
[000164] Compostos específicos que são representativos desta invenção foram preparados de acordo com os seguintes exemplos e sequências de reação; os exemplos e os diagramas que representam as sequências de reação são oferecidos a título ilustrativo, para ajudar na compreensão da invenção e não devem ser interpretados como limitando de qualquer modo a invenção exposta nas reivindicações que se seguem. Os presentes compostos podem também ser utilizados como intermediários em exemplos subsequentes para produzir compostos adicionais da presente invenção. Nenhuma tentativa foi feita para otimizar os rendimentos obtidos em qualquer das reações. Um versado na técnica saberá como aumentar esses rendimentos através de variações de rotina em tempos de reação, temperaturas, solventes e/ou reagentes.
[000165] Solventes anidros foram adquiridos na Aldrich Chemical Company, Inc. (Milwaukee, WI) e EMD Chemicals Inc. (Gibbstown, NJ). Reagentes foram adquiridos de fontes comerciais. Salvo indicação em contrário, os materiais utilizados nos exemplos foram obtidos a partir de fornecedores comerciais prontamente disponíveis ou sintetizados por métodos convencionais conhecidos de um versado na técnica da síntese química. Espectros de 1H e 13C NMR foram tomados em um espectrômetro de transformada de Fourier Bruker Ascend™ 400 MHz em temperatura ambiente e relatados em ppm campo baixo de tetrametilsilano interno. Trocas de deutério, experimentos de desacoplamento ou 2D-COSY foram realizados para confirmar as atribuições de prótons. As multiplicidades de sinal são representadas por s (singuleto), d (dupleto), dd (dupleto de dupletos), t (tripleto), q (quadrupleto), br (largo), bs (singuleto largo), m (multípleto). Todos os valores J estão em Hz. Os espectros de massa foram determinados em um espectrômetro Micromass Platform LC usando técnicas de eletropulverização TLC analítica foi realizada em placas de gel de sílica suportadas em alumínio Sigma-Aldrich® (25 μm). A cromatografia em coluna foi realizada em gel de sílica ou através da cromatografia líquida de alta performance de fase reversa. Exemplo 1
[000166] Reagentes e condições: a) MeI, KOH, DMSO; b) ClCOCOOEt, AlCl3, CH2Cl2; c) NaOH 5%, MeOH, RT, 10 min; d) CDI, HCCCH2NH2, DMF, 3 h, RT; e) NaOH 5%, MeOH, 16 h, RT; f) 3,4-difluoroanilina, HATU, DIPEA, DMF, 16 h, RT; ou SOCl2, 3-ciano-4-fluoroanilina, DMA, refluxo; g) i) bromociclopropano, NaN3, H2O, 120oC, MW, 30 min; ii) CuSO4, Na ascorbato, ACN, 80oC, MW, 30 min. Etil 1,3,5-Trimetilpirrol-2-carboxilato (2)
[000167] Adicionou-se etil 3,5-dimetilpirrol-2-carboxilato (100,0 g, 0,59 mol) a uma solução de hidróxido de potássio (100,6 g, 1,79 mol) em dimetilsulfóxido (1 L) e agitou-se durante 30 min sob nitrogênio a 0°C. Iodeto de metil (55,9 mL, 0,89 mol) foi então adicionado e a mistura da reação foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 4 horas. A reação foi então extraída com éter dietílico (3 x 1 L) e a camada orgânica combinada foi finalmente lavada com água (2 x 150 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada in vacuo. O resíduo cristalizou lentamente para produzir etil 1,3,5-trimetilpirrol-2-carboxilato 2 (102,4 g, 0,56 mol, 94%) como um sólido amarelado. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1,32 (t, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 4,22 (q, 2H), 5,75 (s, 1H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C9H14NO2: 182.2, encontrado: 182,3. Ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-1H-pirrol-2-carboxílico (6
[000168] A uma solução de etil 1,3,5-trimetilpirrol-2-carboxilato (10,0 g, 55,2 mmol) em CH2Cl2 (250 mL) a 0oC foi adicionado gota a gota uma solução de etil 2-cloro-2-oxo-acetato (9,3 mL, 82,8 mmol) em CH2Cl2 (100 mL) seguido por AlCl3 (22,1 g, 165,7 mmol) em porções. Agitou-se a mistura da reação durante a noite à temperatura ambiente e depois extinguiu-se com gelo. Após a adição de água (300 mL), a mistura foi filtrada em celite e extraída com CH2Cl2 (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de carbonato de sódio (250 mL) e uma solução saturada de cloreto de amônio (250 mL), secas sobre Na2SO4 e concentradas in vacuo. Ao óleo resultante foram adicionados metanol (100 mL) e uma solução a 5% de hidróxido de sódio (100 mL) e a mistura foi agitada durante 15 min à temperatura ambiente. Após remoção do metanol sob vácuo, a mistura foi lavada com acetato de etil (2 x 100 mL), acidificada com uma solução 1 N de HCl (pH = 1) e extraída com acetato de etil (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas com sulfato de sódio anidro e concentradas sob vácuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (100 mL) e hexanos (100 mL) para produzir ácido 2-(5-etoxicarbonil- 1,3,5-trimetil-pirrol-3-il)-2-oxo-acético 4 (8,1 g, 32,0 mmol, 58%) como um pó esbranquiçado. A uma solução de ácido 2-(5-etoxicarbonil-1,3,5-trimetil-pirrol-3- il)-2-oxo-acético 4 (2,0 g, 7,9 mmol) em DMF (15 mL) e CH2Cl2 (10 mL) adicionou-se 1,1'-carbonildi-imidazol (1,92 g, 11,8 mmol) e propargilamina (0,607 ml, 9,5 mmol). Após agitação durante 2 h à temperatura ambiente, a mistura da reação foi vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com CH2Cl2 (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo para dar 5 como um óleo amarelado. Ao etil 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxilato em bruto 5 dissolvido em metanol (10 mL) e THF (10 mL) foi adicionada uma solução a 5% de hidróxido de sódio (10 mL). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e após evaporação do metanol e THF in vacuo, lavou-se a solução aquosa com acetato de etil (2 x 50 mL), acidificou-se com uma solução 1 N de HCl (pH = 1) e extraiu-se com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (50 mL) e hexanos (50 mL) para produzir ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (1,8 g, 6,9 mmol, 87%) como um pó branco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,77 (s, 1H), 9,14 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,99 (dd, J = 5,7, 2,6 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,18 (t, J = 2,4 Hz, 1H), 2,37 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 188,0, 167,2, 163,0, 142,8, 129,7, 121,8, 117,5, 80,5, 73,8, 33,3, 28,1, 12,3, 12,0. HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C13H15N2O4: 263,1032, encontrado: 263,1025. 4-[(Propargilamino)(oxo)acetil]-N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-1H-pirrol-2- carboxamida (7a).
[000169] A uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (750 mg, 2,7 mmol), 3,4-difluoroanilina (410 mg, 3,2 mmol) e DIPEA (746, 4,3 mmol) em DMF (15 mL) foi adicionado HATU (1,63 g, 4,3 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 50°C durante 3 h. Para completar, foi adicionada mais 3,4-difluoroanilina (410 mg, 3,2 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite a 65°C. A mistura de reação foi então vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 7a como um pó branco (47%, 503 mg, 1,4 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,49 (s, 1H), 8,22 - 8,07 (m, 1H), 8,07 - 7,95 (m, 1H), 7,59 - 7,43 (m, 1H), 7,33 (q, J = 9,4 Hz, 1H), 4,21 - 4.07 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,73 (s, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,29 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, Acetona) δ 188,9, 167,9, 162,1, 152,7, 152,6, 150,3, 150,2, 149,3, 149,2, 146,9, 146,8, 142,8, 137,9, 137,9, 128,5, 124,6, 119,1, 118,9, 118,8, 117,5, 117,5 117,4, 117,4, 110,7, 110,5, 81,4, 73,2, 33,2, 29,7, 12,8, 12,7. 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -139,8 - -140,0 (m), -147,1 - -147,2 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C19H18F2N3O3: 374,1316, encontrado: 374,1309. 4-(2-(((1-ciclopropil-1 H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)-2-oxoacetil)- N -(3,4- difluorofenil)-1,3,5-trimetil-1 H-pirrol-2-carboxamida (8)
[000170] Uma solução de bromociclopropano (0,4 mL, 3,3 mmol) e azida sódica (430 mg, 6,6 mmol) em água (1 mL) foi aquecida sob irradiação de micro-ondas durante 30 minutos a 120°C. Uma solução de composto 7 (0,05 g, 0,1 mmol) em acetonitrila (1 mL) foi então adicionada, seguida por ascorbato de sódio (10 mg, 0,05 mmol) e sulfato de cobre (20 mg, 0,12 mmol). A mistura foi aquecida durante 30 minutos a 80°C sob irradiação de micro-ondas e depois vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL). Após extração com acetato de etil (3 x 50 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. A mistura resultante foi purificada por cromatografia rápida (hexanos/acetato de etil = 6:4 v/v), para dar o composto 8 como um pó branco (61%, 31 mg, 0,06 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,50 (s, 1H), 8,29 - 8,18 (m, 1H), 8,06 - 7,94 (m, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,57 - 7,48 (m, 1H), 7,39 - 7,28 (m, 1H), 6,16 - 5,98 (m, 1H), 5,31 - 5,20 (m, 1H), 5,09 - 5,00 (m, 2H), 4,58 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 3,67 (d, J = 1,4 Hz, 3H), 2,38 (d, J = 1,3 Hz, 3H), 2,24 (d, J = 1,3 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, Acetona) δ 187,4, 166,3, 160,3, 150,9, 150,8, 148,5, 148,4, 147,5, 147,4, 145,1, 144,9, 144,4, 144,4, 140,9, 136,2, 136,1, 136,1, 136,0, 132,7, 126,6, 122,9 , 122,5, 118,3, 117,3, 117,1, 117,1, 115,7, 115,7, 115,7, 115,7, 108,9, 108,7, 51,9, 34,4, 31,4, 11,1, 11,0. 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -139,8 - -140,1 (m), -147,0 - -147,2 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C22H23F2N6O3: 457,1800, encontrado: 457,1790. N -(3-ciano-4-fluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-1 H - pirrol-2-carboxamida (7b).
[000171] A uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (0,1 g, 0,38 mmol) em tolueno (5 mL) foi adicionado 0,1 mL de SOCl2 à temperatura ambiente e a mistura foi refluxada durante 1,5 h. Após a remoção de SOCl2 in vacuo, o óleo residual foi solubilizado em DMA (5 mL) e 3-ciano-4-fluoroanilina (0,1 g, 0,7 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 100 °C por 3 h depois resfriado à temperatura ambiente. A solução foi, então, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com EtOAc (3 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos/EtOAc = 6:4 v/v) para produzir N- (3-ciano-4-fluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1-ilamino)acetil)-1H- pirrol-2-carboxamida 7b (48%, 0,7 g, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,61 (s, 1H), 8,37 - 8,27 (m, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,13 - 8,04 (m, 1H), 7,45 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 4,21 - 4,06 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 2,77 - 2,70 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,30 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 188,9, 167,8, 162,3, 160,7 (d, J = 252,7 Hz) 143,0, 138,0 (d, J = 3,1 Hz), 128,4 (d, J = 8,1 Hz), 128,2, 125,5, 125,0, 118,9, 118,6 (d, J = 20,9 Hz), 115,3, 102,6 (d, J = 16,5 Hz), 81,4, 73,3, 33,3, 29,7, 12,9, 12,8. 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -115,9 (dd, J = 9,6, 4,7 Hz). LCMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C20H19FN4O3: 381,1, encontrado: 381,3.
[000172] Reagentes e condições: a) HSO3Cl, 0 °C, 1 h; b) i) SOCl2, 80°C, 1,5 h; ii) 3,4-difluoroanilina, tolueno, 100 °C, 4 h; c) Propargilamina, Et3N, DMF, RT, durante a noite; d) i) bromociclopropano, NaN3, H2O, 120°C, MW, 30 min; ii) CuSO4, ascorbato de sódio, CH3CN, 80 °C, MW, 30 min. 5-( N -((1-Ciclopropil-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)sulfamoil)-N -(3,4-difluorofenil)-2- fluorobenzamida (13)
[000173] Ácido 2-fluorobenzoico 9 (10,0 g, 71,4 mmol) foi adicionado ao ácido clorossulfônico (50 mL) a 0°C e a mistura foi agitada a 0°C durante 1 h. A mistura da reação foi então lentamente vertida em gelo. O precipitado formado foi filtrado, enxaguado com água (3 x 100 mL) e seco sob vácuo durante a noite para produzir ácido 5-(clorossulfonil)-2-fluorobenzoico 10 como um sólido acastanhado (10,5 g, 44,0 mmol). Ácido 5-(clorossulfonil)-2-fluorobenzoico 10 (10,0 g, 41,9 mmol) foi adicionado a 60 mL de SOCl2 à temperatura ambiente e a mistura foi submetida a refluxo durante 1,5h. Após a remoção de SOCl2 in vacuo, o óleo residual foi solubilizado em tolueno (150 mL) e 3,4-difluoroanilina (6,5 g, 50,3 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 100 °C por 4 h depois resfriado à temperatura ambiente. A solução foi, então, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (200 mL) e extraída com EtOAc (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos/EtOAc = 6:4 v/v) para produzir 3-((cloreto de 3,4- difluorofenil)carbamoil)-4-fluorobenzeno-1-sulfonil 11 (92%, 13,51 g, 38,6 mmol). A uma solução de cloreto de 3-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-4-fluorobenzeno-1- sulfonil 11 (10,0 g, 28,6 mmol) em CH2Cl2 (200 mL) a 0 °C foram adicionados cloridrato de propargilamina (3,1 g, 34,3 mmol) e Et3N (7,8 mL, 57,2 mmol). A mistura da reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e depois vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (250 mL). Após extração com CH2Cl2 (3 x 100 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e finalmente concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (50 mL) e hexanos (50 mL) para produzir N-(3,4- Difluorofenil)-2-fluoro-5-(N-(prop-2-in-1- il)sulfamoil)benzamida 12 (74%, 7,8 g, 21,1 mmol) como um pó branco. Uma solução de bromociclopropano (0,6 mL, 4,9 mmol) e azida sódica (483 mg, 7,4 mmol) em água (1 mL) foi aquecida sob irradiação de micro-ondas durante 30 minutos a 120°C. A esta solução foram adicionados uma solução de composto 12 (0,1 g, 0,3 mmol) em acetonitrila (1 mL), ascorbato de sódio (10 mg, 0,05 mmol) e sulfato de cobre (20 mg, 0,12 mmol).
[000174] A mistura da reação foi, então, aquecida durante 30 minutos a 80°C sob irradiação de micro-ondas antes de ser vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL). Após extração com EtOAc (3 x 50 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) dando composto 13 como um pó branco (19%, 23 mg, 0,05 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,92 (s, 1H), 8,25 (dd, J = 6,6, 2,5 Hz, 1H), 8,06-7,95 (m, 2H), 7,77 (s, 1H), 7,58-7,52 (m, 1H), 7,48 (dd, J = 10,1, 8,7 Hz, 1H), 7,37 (dt, J = 10,6, 9,0 Hz, 1H), 7,21 (s lg, 1H), 6,11 - 5,94 (m, 1H), 5,32 - 5,16 (m, 1H), 4,99 (dt, J = 6,0, 1,5 Hz, 2H), 4,32 (s, 2H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 188,9, 167,9, 162,1, 150,2, 149,2 (d, J = 12,9 Hz), 146,8 (d, J = 13,0 Hz), 142,8, 137,9 (d, J = 5,9 Hz), 128,5, 124,6, 120,4 - 118,2 (m), 117,5 (dd, J = 6,0, 3,6 Hz), 110,6 (d, J = 22,1 Hz), 81,5, 73,3, 33,2, 29,7, 12,8 (d, J = 9,6 Hz). 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -110,6 (s), -139,6 - - 139,7 (m), - 146,1 — -146,3 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C19H17F3N5O3S: 452,1004, encontrado: 452,0999.
[000175] Reagentes e condições: a) HSO3Cl, 0 °C, 1 h; b) i) SOCl2, 100 °C, 1,5 h; ii) 3,4-difluoroanilina, tolueno, RT, 48 h; c) Propargilamina, DIPEA, DMF, RT, durante a noite. N -(3,4-Difluorofenil)-1-metil-4-(N-(prop-2-in-1 -il)sulfamoil)-1H-pirrol-2- carboxamida (17)
[000176] Ácido 1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico (10,0 g, 80 mmol) foi adicionado a ácido clorossulfônico (50 mL) a 0°C e a solução resultante foi agitada a 0 °C por 1 h. A mistura da reação foi então lentamente vertida em gelo. O precipitado formado foi então filtrado, lavado com água (3 x 100 mL) e seco sob vácuo durante a noite para produzir ácido 4-(clorossulfonil)-1-metil-1H-pirrol- 2-carboxílico 15como um sólido acastanhado (10,7 g, 47,8 mmol). Ácido 4- (clorossulfonil)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico 15 (1,0 g, 4,4 mmol) foi adicionado a SOCl2 à temperatura ambiente e a mistura foi aquecida a 100 °C por 1,5 h. Após a remoção do cloreto de tionil in vacuo, o óleo residual foi solubilizado em tolueno (50 mL)e 3,4-difluoroanilina foi adicionado (650 mg, 5,0 mmol). A solução foi agitada durante 48 h à temperatura ambiente antes de ser vertida numa solução saturada de cloreto de amônio (50 mL). Esta solução foi extraída com acetato de etil (3 x 50 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio. Após a concentração in vacuo, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 7:3 v/v) para produzir cloreto de 5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil-1H-pirrol-3-sulfonil 16 (775 mg, 2,3 mmol). A uma solução de cloreto de 5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil- 1H-pirrol-3-sulfonil 16 (100 mg, 0,3 mmol) em DMF (5 mL) foram adicionados cloridrato de propargilamina (33 mg, 0,4 mmol) e DIPEA (78, 0,5 mmol). A mistura da reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo.
[000177] O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 7:3 v/v) para produzir N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-4-(N-(prop- 2-in-1-il)sulfamoil)-1H-pirrol-2-carboxamida 17 (77%, 81 mg, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,56 (s, 1H), 8,05 - 7,87 (m, 1H), 7,62 - 7,48 (m, 2H), 7,38 - 7,25 (m, 1H), 7,22 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 4,03 (s, 3H), 3,79 (s, 2H), 2,70 (t, J = 2,5 Hz, 1H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 160,9, 152,6 (d, J = 13,0 Hz), 150,1 (d, J = 13,2 Hz), 149,1 (d, J = 12,7 Hz), 146,7 (d, J = 12,8 Hz), 137,9 (dd, J = 9,1, 3,0 Hz), 132,2, 128,4, 123,7, 119,7 - 118,4 (m), 117,8 (dd, J = 5,9, 3,5 Hz), 114,0, 110,8 (d, J = 22,1 Hz), 80,8, 74,5, 38,5, 34,2. 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -138,4 - -138,7 (m), -145,4 - -146,1 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C15H14F2N3O3S: 354.0724, encontrado: 354,0717.
[000178] Reagentes e condições: a) HSO3CI, 0 °C a RT, 4 h; b) HCCCH2NH2, EteN, DMF, RT, 2 h; c) NaOH 5%, MeOH, 16 h, RT a 60 °C, 18 h; d) 3,4- difIuoroaniIina, HATU, DIPEA, DMF, 50 °C, 16 h. Ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-1 H-pirrol-2-carboxílico (20)
[000179] EtiI 1,3,5-trimetiIpirroI-2-carboxiIato 2 (2,0 g, 11,0 mmoI) foi adicionado a ácido cIorossuIfônico (10 mL) a 0°C e a mistura foi agitada a 0 °C por 1 h depois 3 h à temperatura ambiente. A mistura da reação foi, então, Ientamente vertida em geIo. A mistura foi basificada com uma soIução a 5% de hidróxido de sódio (pH> 7) e extraída com acetato de etiI (3 x 100 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, secas em Na2SO4 e concentradas in vacuo para produzir 18 um sóIido castanho-escuro escuro (69%, 2,1 g, 7,5 mmoI). Ao etiI 4-(cIorosuIfoniI)-1,3,5-trimetiI-1H-pirroI-2-carboxiIato intermediário 18 soIubiIizado em DMF (10 mL) foram adicionados propargiIamina (0,72 mL, 11,3 mmoI) e trietiIamina (3,1 mL, 22,5 mmoI). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e vertida numa soIução saturada de cIoreto de amônio (50 mL). Após extração com EtOAc (3 x 50 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre suIfato de sódio e concentradas in vacuo. O óleo resultante foi diluído em metanol (5 mL) e foi adicionada uma solução a 5% de hidróxido de sódio (15 mL). A mistura foi agitada durante a noite a 60°C. Após remoção do metanol in vacuo, a mistura foi lavada com acetato de etil (2 x 50 mL), acidificada com uma solução 1 N de HCl (pH = 1) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (20 mL) e hexanos (20 mL) para produzir ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2- (prop-2-in-1-ilamino)acetil)-1H-pirrol-2-carboxílico 20 (28%, 0,8 g, 0,3 mmol) como um pó esbranquiçado. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,70 (s, 1H), 7,64 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,58 (dd, J = 6,0, 2,6 Hz, 2H), 3,04 (t, J = 2,5 Hz, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 163,0, 138,9, 127,6, 120,8, 118,1, 80,1, 74,3, 33,4, 31,8, 12,0, 11,5. N -(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-1 H - pirrol-2-carboxamida (21)
[000180] A uma solução de ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1- ilamino)acetil)-1H-pirrol-2-carboxílico 20 (0,1 g, 0,3 mmol), 3,4-difluoroanilina (96 mg, 7,4 mmol) e DIPEA (746, 1,1 mmol) em DMF (15 mL) foram adicionados HATU (0,211 g, 0,5 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 50 °C durante a noite. A mistura da reação foi então vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 21 como um pó branco (36%, 51 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,44 (s, 1H), 8,24 - 7,80 (m, 1H), 7,74 - 7,44 (m, 1H), 7,40 - 7,22 (m, 1H), 6,51 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 3,77 - 3,70 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,68 - 2,60 (m, 1H), 2,51 (s, 3H), 2,37 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 160,2, 150,9 (d, J = 13,1 Hz), 148,4 (d, J = 13,0 Hz), 147,5 (d, J = 12,9 Hz), 145,1 (d, J = 12,6 Hz), 137,1, 126,1, 120,7, 117,2 (d, J = 18,1 Hz), 117,0, 115,8 (d, J = 3,9 Hz), 108,9 (d, J = 22,2 Hz), 79,1, 72,3, 31,7, 10,4 (d, J = 32,3 Hz). 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -139,8 - -139,9 (m), - 147,0 — -147,1 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C17H18F2N3O3S: 382.1037, encontrado: 382,1027.
[000181] Reagentes e condições: a) HATU, 3,4-difluoroanilina, DIPEA, DMF, 65 °C, durante a noite; b) cloro-oxoacetato de etil, AICI3, CH2CI2, 0 °C a RT, durante a noite; c) i) NaOH 5%, MeOH, RT, 15 min; ii) HCl 1N; d) CDI, R1R2NH, DMF, CH2Cl2, RT, 2 h. Ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1 -metil-1 H-pirrol-3-il)-2-oxoacético (24)
[000182] A uma solução de ácido 1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico (4 g, 32 mmol), 3,4-difluoroanilina (6,2 g, 48 mmol) e DIPEA (13 mL, 96 mmol) em DMF (150 mL) foi adicionado HATU (18,2 g, 48 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 65°C durante a noite e vertida numa solução saturada de cloreto de amônio. Após extração com acetato de etil (3 x 50 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. A mistura resultante foi purificada por cromatografia rápida (hexanos: EtOAc = 6:4 v/v), para dar o composto 22 como um pó branco (82%, 6,2 g, 26,2 mmol).
[000183] A uma solução de N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamida 22 (3 g, 12,7 mmol) em CH2Cl2 (150 mL) foi adicionado gota a gota, a 0 °C, uma solução de etil 2-cloro-2-oxo-acetato (2,12 mL, 19,1 mmol) em CH2Cl2 (20 mL), seguido por AlCl3 (5,1 g, 38,1 mmol) em porções. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e depois vertida sobre gele picado. Após a adição de água (300 mL), a mistura foi filtrada em Celite e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (3 x 100mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de carbonato de sódio (100 mL) e uma solução saturada de cloreto de amônio (100 mL), secas sobre Na2SO4 e concentradas in vacuo. O óleo resultante foi diluído em metanol/THF (v/v = 1/2, 30 mL) e foi adicionada uma solução a 5% de hidróxido de sódio (30 mL). Depois de ser agitada durante 15 min à temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vacuo. A mistura foi lavada com acetato de etil (2 x 50 mL), acidificada com uma solução 1 N de HCl (pH = 1) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (20 mL) e hexanos (20 mL) para produzir ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil) carbamoil)-1-metil-1H-pirrol-3-il)-2-oxoacético 24 (3,48 g, 11,3 mmol) como um pó esbranquiçado. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,28 (s, 1H), 8,02 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,94 - 7,81 (m, 1H), 7,60 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,56 - 7,47 (m, 1H), 7,44 - 7,24 (m, 1H), 3,96 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 181,1, 165,3, 159,5, 150,5 (d, J = 13,1 Hz), 148,0 (d, J = 13,1 Hz), 147,0 (d, J = 12,5 Hz), 144,6 (d, J = 12,6 Hz), 136,6, 136,4 (dd, J = 9,2, 2,8 Hz), 127,9, 119,0, 117,7 (d, J = 17,7 Hz), 116,8 (dd, J = 5,8, 3,2 Hz), 114,9, 109,4 (d, J = 21,7 Hz), 37,7. 19F NMR (377 MHz, DMSO-d6) δ -138,0 - -138,2 (m), -145,5 - -145,6 (m). 4-(2-(alilamino)-2-oxoacetil- N -(3,4-difluorofenil)-1-metil-1 H-pirrol-2-carboxamida (25)
[000184] A uma solução de ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil- 1H-pirrol-3-il)-2-oxoacético 24 (0,1 g, 0,3 mmol)em DMF (4 mL) e CH2Cl2 (5 mL) foram adicionados 1,1’-carbonildi-imidazol (79 mg, 0,05 mmol) e alilamina (29 μl, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente e vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio. Após extração com CH2Cl2 (3 x 20 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos: EtOAc = 7:3 v/v) para proporcionar 4-(2-(alilamino)-2-oxoacetil)-N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-1H-pirrol- 2-carboxamida 25 como um pó esbranquiçado (81%, 91 mg, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,60 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,04 - 7,90 (m, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,57 - 7,49 (m, 1H), 7,30 (q, J = 9,6 Hz, 1H), 6,25 - 5,68 (m, 1H), 5,22 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,11 (dt, J = 10,3, 1,4 Hz, 1H), 4,06 (s, 3H), 3,99 - 3,92 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 182,7, 163,7, 161,1, 152,6 (d, J = 13,1 Hz), 150,2 (d, J = 12,9 Hz), 149,1 (d, J = 12,8 Hz), 146,7 (d, J = 12,9 Hz), 138,9, 137,9, 136,2, 129,0, 120,9, 118,8 (d, J = 18,0 Hz), 117,9 - 117,4 (m), 117,0, 116,6, 110,7 (d, J = 22,1 Hz), 42,9, 38,7. 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -138,5 - -138,8 (m), -145,9 - -146,2 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C17H16F2N3O3: 348,1260, encontrado: 348,1158. N -(3,4-difluorofenil)-1-metil-4-(2-oxo-2-(tiazol-2-ilamino)acetil)-1 H-pirrol-2- carboxamida (26)
[000185] A uma solução de ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil- 1H-pirrol-3-yl)-2-oxoacético 24 (0,1 g, 0,3 mmol) em DMF (4 mL) e CH2Cl2 (5 mL) foram adicionados 1,1’-carbonildi-imidazol (79 mg, 0,05 mmol) e tiazol-2-amina (33 mg, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente e vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio. Após extração com CH2Cl2 (3 x 20 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos: EtOAc =7:3 v/v) para N-(3,4- difluorofenil)-1-metil-4-(2-oxo-2-(tiazol-2-ilamino)acetil)-1H-pirrol-2-carboxamida 26 como um pó acastanhado (79%, 101 mg, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,74 (s, 1H), 10,33 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,94 - 7,83 (m, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,60 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,56 - 7,49 (m, 1H), 7,48 - 7,38 (m, 1H), 3,98 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 180,6, 162,5, 159,5, 150,5 (d, J = 12,9 Hz), 148,1 (d, J = 12,5 Hz), 138,6, 137,2, 136,4 (d, J = 12,0 Hz), 127,9, 118,7, 117,8 (d, J = 17,6 Hz), 116,8, 109,5 (d, J = 21,7 Hz), 60,2, 37,8, 17,9 (d, J = 672,1 Hz). 19F NMR (377 MHz, DMSO-d6) δ -137,3 - -137,4 (m), -144,5 - -144,7 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C17H13F2N4O3S: 391,0676, encontrado: 391,0669. 4-(2-((ciclopentiloxi)amino)-2-oxoacetil)- N -(3,4-difluorofenil)-1-metil-1 H-pirrol-2- carboxamida (27)
[000186] A uma solução de ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil- 1H-pirrol-3-yl)-2-oxoacético 24 (0,1 g, 0,3 mmol) em DMF (4 mL) e CH2Cl2 (5 mL) foram adicionados 1,1'-carbonildi-imidazol (79 mg, 0,05 mmol) e O-cloridrato de ciclopentil-hidroxilamina (44 mg, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente e vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio. Após extração com CH2Cl2 (3 x 20 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (hexano: EtOAc = 7:3 v/v) para dar 4-(2-((ciclopentiloxi)amino)-2- oxoacetil)-N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxamida 27 como um pó acastanhado (26%, 33 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 10,83 (s, 1H), 9,63 (s, 1H), 8,14 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 8,03 - 7,90 (m, 1H), 7,65 - 7,46 (m, 2H), 7,40 - 7,20 (m, 1H), 4,69 - 4,57 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 1,95 - 1,85 (m, 2H), 1,79-1,65 (m, 4H), 1,57 (s, 2H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 181,0, 161,2 (d, J = 178,9 Hz), 159,7, 159,3, 150,8 (d, J = 13,2 Hz), 148,3 (d, J = 13,2 Hz), 147,3 (d, J = 12,8 Hz), 144,9 (d, J = 12,7 Hz), 136,8, 136,2 (dd, J = 9,1, 3,0 Hz), 127,4, 119,2, 117,0 (d, J = 18,0 Hz), 116,5 - 115,7 (m), 114,5, 109,1 (d, J = 22,2 Hz), 87,4, 87,0, 37,0, 30,9, 23,4. 19F NMR (377 MHz, Acetona- d6) δ -138,6 - - 138,7 (m), -146,0 - -146,1 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C19H20F2N3O4: 392,1422, encontrado: 392,1415. N -(3,4-difluorofenil)-1-metil-4-(2-oxo-2-(fenilamino)acetil)-1 H-pirrol-2- carboxamida (28)
[000187] A uma solução de ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil- 1H-pirrol-3-il)-2-oxoacético 24 (0,1 g, 0,3 mmol) em DMF (4 mL) e CH2Cl2 (5 mL) foram adicionados 1,1’-carbonildi-imidazol (79 mg, 0,05 mmol)e anilina (35 μL, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente e vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio. Após extração com CH2Cl2 (3 x 20 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos: EtOAc = 7:3 v/v) para proporcionar N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-4-(2-oxo-2-(fenilamino)acetil)-1H-pirrol- 2-carboxamida 28 como um pó branco (32%, 40 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,79 (s, 1H), 9,64 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,04 - 7,94 (m, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,63 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,60 - 7,52 (m, 1H), 7,44 - 7,37 (m, 2H), 7,36 - 7,27 (m, 1H), 7,22 - 7,14 (m, 1H), 4,10 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 182,4, 162,0, 161,1, 152,6 (d, J = 13,0 Hz), 150,2 (d, J = 13,2 Hz), 149,1 (d, J = 12,5 Hz), 146,7 (d, J = 12,8 Hz), 139,7, 139,1, 138,0 (dd, J = 9,2, 2,9 Hz), 130,6, 129,2, 126,3, 121,8, 120,5, 118,9 (d, J = 17,9 Hz), 117,8 (dd, J = 5,9, 3,5 Hz), 116,7, 110,9 (d, J = 22,3 Hz), 38,8. 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -138,6 - -138,9 (m), -146,1 - -146,2 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C20H16F2N3O3: 384,116, encontrado: 384,1153. N -(3,4-difluorofenil)-1-metil-4-(2-oxo-2-(fenilamino)acetil)-1 H-pirrol-2- carboxamida (29)
[000188] A uma solução de ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil- 1H-pirrol-3-il)-2-oxoacético 24 (0,1 g, 0,3 mmol) em DMF (4 mL) e CH2Cl2 (5 mL) foram adicionados 1,1’-carbonildi-imidazol (79 mg, 0,05 mmol)e benzilamina (42 μL, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente e vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio. Após extração com CH2Cl2 (3 x 20 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos: EtOAc = 7:3 v/v) para proporcionar N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-4-(2-oxo-2-(fenilamino)acetil)-1H-pirrol- 2-carboxamida 29 como um pó branco (99%, 126 mg, 0,2 mmol). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 182,7, 163,9, 161,1, 159,9, 152,6 (d, J = 13,0 Hz), 150,1 (d, J = 13,3 Hz), 149,1 (d, J = 12,7 Hz), 146,7 (d, J = 12,8 Hz), 142,8, 140,7, 139,0, 138,0 (d, J = 12,1 Hz), 130,2, 130,0, 129,4, 129,0, 128,9, 128,4, 120,9, 118,8 (d, J = 18,3 Hz), 118,3 - 117,5 (m), 116,7, 110,8 (d, J = 22,2 Hz), 45,3, 44,3, 38,8. 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -138,7 - -138,8 (m), -146,1 - -146,4 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C21H18F2N3O3: 398,1316, encontrado: 398,1312. 4-(2-((cianometil)amino)-2-oxoacetil)-N -(3,4-difluorofenil)-1-metil-1 H-pirrol-2- carboxamida (30)
[000189] A uma solução de ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil- 1H-pirrol-3-yl)-2-oxoacético 24 (0,1 g, 0,3 mmol) em DMF (4 mL) e CH2Cl2 (5 mL) foram adicionados 1,1'-carbonildi-imidazol (79 mg, 0,05 mmol) e 2-cloridrato de aminoacetonitrila (36 mg, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente e vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio. Após extração com CH2Cl2 (3 x 20 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos: EtOAc = 7:3 v/v) para proporcionar 4-(2-((cianometil)amino)-2-oxoacetil)-N-(3,4- difluorofenil)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxamida 30 como um pó acastanhado (30%, 34 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,43 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 8,06 - 7,71 (m, 1H), 7,54 - 7,40 (m, 1H), 7,37 - 7,12 (m, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,88 - 6,84 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,66 - 3,43 (m, 1H), 1,99 - 1,93 (m, 3H), 1,79 - 1,68 (m, 2H), 1,67 - 1,55 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 181,1, 164,1, 161,1, 139,0, 129,3, 120,5, 118,9 (d, J = 17,6 Hz), 118,0, 117,8 (dd, J = 6,0, 3,2 Hz), 116,6, 110,9 (d, J = 22,1 Hz), 38,8, 28,8. 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -138,7 - -138,8 (m), -145,9 - -146,2 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C17H20F2N3O3S : 384,1193, encontrado : 384,1186. N -(3,4-difluorofenil)-1-metil-4-(2-morfolino-2-oxoacetil-1 H-pirrol-2-carboxamida (31)
[000190] A uma solução de ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil- 1H-pirrol-3-il)-2-oxoacético 24 (0,1 g, 0,3 mmol) em DMF (4 mL) e CH2Cl2 (5 mL) foram adicionados 1,1’-carbonildi-imidazol (79 mg, 0,05 mmol)e morfolina (34 μL, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente e vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio. Após extração com CH2Cl2 (3 x 20 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos: EtOAc = 7:3 v/v) para proporcionar N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-4-2-morfolino-2-oxoacetil)-1H-pirrol-2- carboxamida 31 como um pó branco (80%, 97 mg, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10,28 (s, 1H), 8,19 - 7,80 (m, 2H), 7,57 - 7,47 (m, 2H), 7,46 - 7,36 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,81 - 3,67 (m, 2H). ), 3,64-3,59 (m, 2H), 3,58-3,49 (m, 2H), 3,34-3,25 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 185,9, 165,8, 159,5, 150,5 (d, J = 13,1 Hz), 148,1 (d, J = 13,2 Hz), 147,1 (d, J = 12,8 Hz), 144,7 (d, J = 12,8 Hz), 136,4 (dd, J = 9,1, 3,0 Hz), 135,9, 128,1, 119,8, 117,8 (d, J = 17,7 Hz), 117,2 - 116,3 (m), 114,0, 109,5 (d, J = 21,7 Hz), 66,5 (d, J = 30,5 Hz), 46,3, 41,5, 37,8. 19F NMR (377 MHz, DMSO-d6) δ -137,2 - -137,4 (m), -144,5 - -144,6 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C18H18F2N3O4: 378.1265, encontrado: 378,1257. 4-(2-(3,3-difluoroazetidin-1 -il)-2-oxoacetil) - N -(3,4-difluorofenil)-1 -metil-1 H-pirrol- 2-carboxamida (32)
[000191] A uma solução de ácido 2-(5-((3,4-difluorofenil)carbamoil)-1-metil- 1H-pirrol-3-yl)-2-oxoacético 24 (0,1 g, 0,3 mmol) em DMF (4 mL) e CH2Cl2 (5 mL) foram adicionados 1,1'-carbonildi-imidazol (79 mg, 0,05 mmol) e 3,3-cloridrato de difluoroazetidina (50 mg, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente e vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio. Após extração com CH2Cl2 (3 x 20 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos: EtOAc = 7:3 v/v) para proporcionar 4-(2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-2-oxoacetil)-N- (3,4-difluorofenil)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxamida 32 como um pó branco (48%, 60 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,60 (s, 1H), 8,06 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 8,01 - 7,86 (m, 1H), 7,70 - 7,47 (m, 2H), 7,34 - 7,26 (m, 1H), 4,98 - 4,79 (m, 2H), 4,65 - 4,31 (m, 2H), 4,05 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 182,6, 163,7, 161,1, 152,6 (d, J = 13,1 Hz), 150,2 (d, J = 13,6 Hz), 149,1 (d, J = 12,8 Hz), 146,7 (d, J = 13,1 Hz), 138,4, 138,2 - 137,6 (m), 129,2, 121,4, 121,0, 118,9 (d, J = 17,9 Hz), 118,3, 118,0 - 117,5 (m), 116,2, 115,6, 110,8 (d, J = 22,2 Hz), 65,8 (t, J = 28,6 Hz), 61,9 (t, J = 28,7 Hz), 38,8. 19F NMR (377 MHz, Acetona- d6) δ -102,1 (p, J = 12,3 Hz), -138,7 - -138,8 (m), -146,0 - -146,2 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C17H14F4N3O3: 384,0971, encontrado: 384,0964.
[000192] Reagentes e condições: a) HNO3, AC2O, -25 °C a RT, 2 h; b) HATU, DIPEA, 3,4-difluoroanilina, DMF, 50 °C, durante a noite; c) Zn, HCOOH, MeOH, RT, 10 min; d) RSO2Cl, Et3N, DMF, RT, durante a noite. N -(3,4-difluorofenil)-1 -metil-4-(fenilsulfonamido)-1 H-pirrol-2-carboxamida (36)
[000193] A uma solução de ácido 1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico 14 (4 g, 32 mmol) em anidrido acético (40 mL) foi adicionado ácido nítrico 70% (3,2 mL) a - 25 °C. A reação foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada durante 2 h. Após adição de água (200 mL) a -25 °C, a mistura foi extraída com acetato de etil (3 x 50 mL).
[000194] As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de carbonato de sódio (3 x 100 mL), secas sobre sulfato de sódio, e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 4:6 v/v) para dar o composto 33 como um óleo escuro (14%, 770 mg, 4,5 mmol). A uma solução de ácido1-metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxílico 33 (0,77 g, 4,5 mmol), 3,4-difluoroanilina (1,16 g, 9,0 mmol) e DIPEA (1,85 mL, 13,6 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionado HATU (1,89 g, 5,0 mmol) à temperatura ambiente. A mistura da reação foi agitada a 50 °C durante a noite e depois vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL). Após extração com acetato de etil (3 x 50 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 7:3 v/v) para dar N-(3,4- difluorofenil)-1-metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxamida 34 (64%, 820 mg, 2,9 mmol). A uma suspensão de N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-4-nitro-1H-pirrol-2- carboxamida 34 (250 mg, 0,9 mmol)em metanol (20 mL) e ácido fórmico (0,5 mL, 13,3 mmol) foi adicionado pó de Zn (250 mg, 3,8 mmol). A mistura foi agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente e filtrada em Celite. A solução foi extraída com 1N de HCl (3 x 50 mL) e lavada com acetato de etil (2 x 50 mL). A camada aquosa foi então basificada usando uma solução a 5% de hidróxido de sódio (pH> 8) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL).
[000195] As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo para dar 4-amino-N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxamida 35 como um sólido castanho/amarelado (68%, 153 mg, 0,6 mmol). A uma solução de 4-amino-N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamida 35 (25 mg, 0,1 mmol)em DMF (3 mL) foram adicionados cloreto de benzenossulfonil (14 μL, 0,1 mmol) e Et3N (20 μL, 0,2 mmol). A mistura da reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e depois vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (20 mL). Após extração com EtOAc (3 x 20 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 1:1 v/v) para dar o composto 36 (51%, 20 mg, 0,05 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona- d6) δ 9,37 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,05 - 7,85 (m, 1H), 7,81 - 7,71 (m, 2H), 7,68 - 7,58 (m, 1H), 7,58 - 7,51 (m, 2H), 7,45 - 7,41 (m, 1H), 7,35 - 7,17 (m, 1H), 6,77 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 3,86 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, Acetona-d6) δ 161,3, 141,9, 134,3, 130,6, 128,8, 125,6, 124,2, 121,9, 118,7 (d, J = 17,9 Hz), 118,1 - 117,4 (m), 110,7 (d, J = 22,1 Hz), 110,2, 38,0. 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -140,2 - -140,4 (m), -147,9 - -148,1 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C18H16F2N3O3S: 392,0880, encontrado: 392.0872. 4-(ciclopentanossulfonamido)-N -(3,4-difluorofenil)-1-metil-1 H-pirrol-2- carboxamida (37)
[000196] A uma solução de 4-amino-N-(3,4-difluorofenil)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamida 35 (50 mg, 0,2 mmol) em DMF (5 mL) foram adicionados ciclopentilsulfonilcloreto (51 μL, 0,4 mmol) e Et3N (40 μL, 0,3 mmol). A mistura da reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e depois vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (30 mL). Após extração com EtOAc (3 x 30 mL), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 1:1 v/v) para dar o composto 37 (56%, 43 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,43 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 8,06 - 7,71 (m, 1H), 7,54 - 7,40 (m, 1H), 7,37 - 7,12 (m, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,88 - 6,84 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,66 - 3,43 (m, 1H), 1,99 - 1,93 (m, 3H), 1,79 - 1,68 (m, 2H), 1,67 - 1,55 (m, 2H). 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -140,2 - -140,4 (m), - 148,0 — -148,1 (m). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C17H20F2N3O3S: 384,1193, encontrado: 384,1186. 4-(2-(((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)-2-oxoacetil)- N -(3,4-difluorofenil)-1,3,5- trimetil-1 H-pirrol-2-carboxamida (38)
[000197] A uma solução de 7a em uma mistura de ACN/H2O (2 mL, 1:1) foram adicionados azida de sódio (26 mg, 0,4 mmol), CuSO4.5H2O (5 mg) e ascorbato de sódio (12 mg). A mistura da reação foi aquecida a 150 °C sob irradiação de micro-ondas por 1 h. A solução foi diluída com EtOAc e lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4 e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel usando DCM/MeOH (95:5) para proporcionar 38 em 41% de rendimento (23 mg). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C19H19F2N6O3: 417,1487, encontrado: 417,1476.
[000198] Reagentes e condições: a) MeI, KOH, DMSO; b) NaOH, EtOH, 100°C, 6 h; c) 3,4-difluoroanilina, HATU, DIPEA, DMF, 60; d) cloreto de oxalil etílico, AlCl3, DCM, 0°C a rt, 16, h; e) NaOH, EtOH, rt, 1 h; f) amina, CDI, DMF, DCM, rt, 1 h. Ácido 1,3,5-Trimetil-1H-pirrol-2-carboxílico (39)
[000199] A uma solução de 2 (3 g, 72 mmol) em EtOH (100 mL) foi adicionado NaOH a 20% (70 mL). A reação foi aquecida a 100°C durante 6 h. O EtOH foi evaporado sob vácuo e a mistura foi lavada com DCM (3 x 30 mL). A camada aquosa foi cuidadosamente acidificada para pH 3-4 com 1M de HCl. A mistura foi extraída com DCM (3 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4 e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com Et2O frio para proporcionar 39 em 61% de rendimento (6,7 g) como um sólido rosa. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,88 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,15 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C8H12NO2: 154.1, encontrado: 154,5. N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-1 H-pirrol-2-carboxamida (40)
[000200] A uma solução de 39 (2,9 g, 18,9 mmol) em DMF (20 mL) adicionou-se 3,4-difluoroanilina (4,5 mL, 22,7 mmol), HATU (8,6 g, 22,7 mmol) e DIPEA (6,6 mL, 37,8 mmol) a 0°C. A mistura foi aquecida a 60°C durante 2 dias. A mistura da reação foi então diluída com EtOAC e lavada com 1 M de HCl, água e salmoura. As camadas orgânicas foram secas sobre MgSO4 e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel usando hexanos/EtOAc (8:2) para proporcionar 40 em 37% de rendimento (1,85 g). 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,76 - 7,65 (m, 1H), 7,19 - 7,07 (m, 2H), 5,80 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,24 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C14H14F2N2O: 264,1, encontrado: 265,5. 2-(5-((3,4-Difluorofenil)carbamoil)-1,2,4-trimetil-1 H- pirrol-3-il)-2-oxoacético (42)
[000201] A uma solução de 40 (860 mg, 3,26 mmol) em DCM (30 mL) foram adicionados cloreto de oxalil etílico (980 μL, 8,80mmol) e AlCl3 (1,08 g, 8,15 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h vertida em gelo moído. A mistura foi extraída com DCM e as camadas orgânicas combinadas foram filtradas em Celite. O filtrado foi concentrado e o resíduo resultante foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. A uma solução de 41 bruto em EtOH adicionou-se NaOH 10% (25 mL). A mistura foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. O EtOH foi evaporado sob vácuo e a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 10 mL). A camada aquosa foi acidificada com 1M de HCl. A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4 e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com Et2O para proporcionar 42 com 59% de rendimento (646 mg) em duas etapas. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14,13 (s, 1H), 10,46 (s, 1H), 8,04 - 7,71 (m, 1H), 7,59 - 7,28 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,26 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calculado para C16H15F2N2O4: 337,1, encontrado: 337,5. Procedimento geral para a síntese de 43-48
[000202] A uma solução de 42 (40 mg, 0,119 mmol) numa mistura de DMF/DCM (2 mL, 1:1) adicionou-se CDI (29 mg, 0,178 mmol) à temperatura ambiente. Após 15 min, a amina (0,178 mmol) foi adicionada e a mistura foi agitada durante 1 h. A mistura da reação foi diluída com EtOAc e lavada com H2O (3 x 5 mL). A camada orgânica foi seca sobre MgSO4 e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel usando DCM/MeOH (98:2) para proporcionar compostos 43-48. N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(piridin-2-ilamino)acetil)-1 H-pirrol- 2-carboxamida (43)
[000203] Rendimento: 69%. 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 9,33 (s, 1H), 8,45 - 8,38 (m, 1H), 8,30 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,85 - 7,67 (m, 2H), 7,49 (s, 1H), 7,22 - 7,12 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 2,44 (s, 3H). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C21H19F2N4O3: 413,1425, encontrado: 413,1416. N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-(4-metilpiperazin-1 -il)-2-oxoacetil)-1 H- pirrol-2-carboxamida (44)
[000204] Rendimento: 74%. 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,98 (s, 1H), 7,80 - 7,69 (m, 1H), 7,43 - 7,32 (m, 1H), 7,13 (dt, J = 10,0, 8,8 Hz, 1H), 3,72 - 3,67 (m, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,32 (dd, J = 5,9, 4,1 Hz, 2H), 2,46 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,35 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,30 (s, 3H). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C21H25F2N4O3: 419,1895, encontrado: 419,1886. 4-(2-(dietilamino)-2-oxoacetil)-N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-1 H-pirrol-2- carboxamida (45)
[000205] Rendimento: 71%. 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 9,07 (s, 1H), 7,87 - 7,73 (m, 1H), 7,45 - 7,36 (m, 1H), 7,13 (dt, J = 10,0, 8,8 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,48 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,22 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,14 (t, J = 7,0 Hz, 3H). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C20H24F2N3O3: 392,1786, encontrado: 392,1776. 4-(2-((1 H-benzo[d]imidazol-2-il)amino)-2-oxoacetil)-N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5- trimetil-1 H-pirrol-2-carboxamida (46)
[000206] Rendimento: 46%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,42 (s, 2H), 10,45 (s, 1H), 8,03 - 7,76 (m, 1H), 7,56 - 7,38 (m, 4H), 7,18 (dd, J = 5,9, 3,2 Hz, 2H), 3,61 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 2,27 (s, 3H). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C23H20F2N5O3: 452,1534, encontrado: 452,1525. N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-((piridin-2-ilmetil)amino)acetil)-1 H- pirrol-2-carboxamida (47)
[000207] Rendimento: 55%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,42 (s, 1H), 9,28 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,94 - 7,77 (m, 2H), 7,46 - 7,41 (m, 2H), 7,38 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,34 - 7,26 (m, 1H), 4,50 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 3,59 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,21 (s, 3H). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C22H21F2N4O3: 427,1582, encontrado: 427,1572. N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-(((1-metil)-1 H-imidazol-2-il)metil)amino)- 2-oxoacetil)-1 H-pirrol-2-carboxamida (48)
[000208] Rendimento: 63%. 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,48 (s, 2H), 7,77 - 7,66 (m, 1H), 7,26 - 7,20 (m, 1H), 7,13 (dt, J = 9,9, 8,7 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H). HRMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C21H22F2N5O3: 430,1691, encontrado: 430,1681. a) anilina, HATU, DIPEA, DMF, 60, 16 h; b) cloreto de oxalil etílico, AlCl3, DCM, 0 °C a rt, 16, h; c) NaOH, EtOH, rt, 1 h; d) amina, HATU, DIPEA, DMF, rt, 2 h. 1,3,5-trimetil-N-fenil-1 H-pirrol-2-carboxamida (49)
[000209] A uma solução de 39 (2,0 g, 13 mmol) em DMF (50 mL) adicionou- se anilina (2,4 mL, 26 mmol), HATU (5,93 g, 15,6 mmol) e DIPEA (4,5 mL, 26 mmol) a 0°C. A mistura foi aquecida a 60 °C durante 2 dias. A mistura da reação foi então diluída com EtOAc e lavada com 1 M de HCl, água e salmoura. As camadas orgânicas foram secas sobre MgSO4 e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel usando hexanos/EtOAc (8:2) para proporcionar 49 em 58% de rendimento (1,72 g). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,60 (s, 1H), 7,68 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,31 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,04 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 5,73 (s, 1H), 3,57 (s, 3H), 2,17 (s, 6H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C14H17N2O: 229,1, encontrado: 229,5. ácido 2-oxo-2-(1,2,4-trimetil-5-(fenilcarbamoil)-1 H-pirrol-3-il)acético (51)
[000210] A uma solução de 49 (695 mg, 3,05 mmol) em DCM (30 mL) foram adicionados cloreto de oxalil etílico (916 μL, 8,23 mmol) e AlCl3 (1,01 g, 7,62 mmol) a 0 ° C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h e vertida em gelo moído. A mistura foi extraída com DCM e as camadas orgânicas combinadas foram filtradas em Celite. O filtrado foi concentrado e o resíduo resultante foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. A uma solução de 50 bruto em EtOH adicionou-se NaOH 10% (30 mL). A mistura foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. O EtOH foi evaporado sob vácuo e a mistura foi lavada com EtOAc (3 x 10 mL). A camada aquosa foi acidificada com 1M de HCl. A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4 e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com Et2O para proporcionar 51 com 70% de rendimento (642 mg) em duas etapas. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14,18 (s, 1H), 10,26 (s, 1H), 7,71 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,35 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,10 (td, J = 7,4, 1,1 Hz, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,26 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C16H17N2O4: 301,1, encontrado: 301,5. Procedimento geral para a síntese de compostos 52 e 53
[000211] A uma solução de 51 (50 mg, 0,17 mmol) em DMF (2 mL) foram adicionados amina (0,25 mmol), HATU (76 mg, 0,20 mmol) e DIPEA (58, 0,33 mmol) a 0°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A solução foi então diluída com EtOAc e lavada com água e salmoura. As camadas orgânicas foram secas sobre MgSO4 e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel usando DCM/MeOH (98:2) para proporcionar os compostos desejados 52 e 53. 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(piridin-2-ilamino)acetil)-N-fenil-1 H-pirrol-2- carboxamida (52)
[000212] Rendimento: 75%. 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 9,47 (s, 1H), 8,43 - 8,35 (m, 1H), 8,30 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,86 - 7,74 (m, 1H), 7,68 - 7,57 (m, 3H), 7,46 - 7,34 (m, 1H), 7,22 - 7,10 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 2,43 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C21H21N4O3: 377,2, encontrado: 377,4. 4-(2-((5-fluoropiridin-2-il)amino)-2-oxoacetil)-1,3,5-trimetil-N-fenil-1 H-pirrol-2- carboxamida (53)
[000213] Rendimento: 68%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,16 (s, 1H), 10,26 (s, 1H), 8,61 - 8,47 (m, 1H), 8,40 - 8,19 (m, 1H), 7,76 - 7,66 (m, 2H), 7,34 (dd, J = 8,5, 7,4 Hz, 2H), 7,25 (dd, J = 8,8, 3,2 Hz, 1H), 7,15 - 7,04 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 2,26 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C21H20FN4O3: 395,2, encontrado: 395,5.
[000214] Reagente e condições: a) amina, HATU, DIPEA, DMF, 16 h, rt; ou i) SOCl2, tolueno, 110°C,1 h, ii) amina, DMA, 0°C, 2 h. 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1-ilamino)acetil)-N-(4-(trifluorometoxi)fenil)- 1H-pirrol-2-carboxamida (54)
[000215] A uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (250 mg, 1,0 mmol), 4-(trifluorometoxi)anilina (227 mg, 1,3 mmol) e DIPEA (330, 2,0 mmol) em piridina (10 mL) foi adicionado HATU (0,65 g, 1,8 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 65°C durante 18 h. A mistura da reação foi, então, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 54 como um pó branco (35%, 141 mg, 0,3 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,51 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,95 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 4,17 (dd, J = 5,9, 2,6 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 2,75 (t, J = 2,5 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,31 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C20H19F3N3O4: 422,4, encontrado: 422,4. 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1-ilamino)acetil)-N-(3-(trifluorometoxi)fenil)- 1H-pirrol-2-carboxamida (55)
[000216] A uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (250 mg, 1,0 mmol), 3-(trifluorometoxi)anilina (227 mg, 1,3 mmol) e DIPEA (330, 2,0 mmol) em piridina (10 mL) foi adicionado HATU (0,65 g, 1,8 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 65°C durante 18 h. A mistura da reação foi, então, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 55 como um pó branco (34%, 135 mg, 0,3 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,57 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,81 - 7,67 (m, 1H), 7,50 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,16 - 7,06 (m, 1H), 4,17 (dd, J = 5,8, 2,6 Hz, 2H), 3,71 (s, 3H), 2,75 (t, J = 2,5 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,32 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C20H19F3N3O4: 422,4, encontrado: 422,4. N-(2-(3,4-difluorofenil)propan-2-il-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1- ilamino)acetil)-1 H-pirrol-2-carboxamida (56)
[000217] A uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol), 2-(3,4-difluorofenil)propan-2- amina (65 mg, 0,4 mmol) e DIPEA (132, 0,8 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado HATU (0,218 g , 0,6 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 65°C durante 18 h. A mistura da reação foi, então, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 56 (38%, 61 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 8,11 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,47 - 7,38 (m, 1H), 7,37 - 7,31 (m, 1H), 7,26 (dt, J = 10,5, 8,5 Hz, 1H), 4,14 (dd, J = 5,8, 2,5 Hz, 2H), 3,53 (s, 3H), 2,72 (t, J = 2,6 Hz, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 1,77 (s, 6H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C22H24F2N3O3: 416,4, encontrado: 416,5. N -(1-(3,4-difluorofenil)ciclopropil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1- ilamino)acetil)-1 H-pirrol-2-carboxamida (57)
[000218] A uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (75 mg, 0,3 mmol), 1-(3,4- difluorofenil)ciclopropanamina (50 mg, 0,3 mmol) e DIPEA (100, 0,6 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado HATU (0,163 g, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 65°C durante 18 h. A mistura da reação foi, então, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 57 (46%, 55 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetone-d6) δ 8,11 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,35 - 7,28 (m, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 4,13 (dd, J = 5,8, 2,5 Hz, 2H), 3,60 (s, 3H), 2,72 (t, J = 2,6 Hz, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,41-1,30 (m, 4H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C22H22F2N3O3: 414,4, encontrado: 414,5. 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-N -fenil-1 H-pirrol-2- carboxamida (58)
[000219] A uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol), anilina (53 mg, 0,6 mmol) e DIPEA (100, 0,6 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado HATU (0,163 g, 0,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 65°C durante 18 h. A mistura da reação foi, então, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (DCM:MeOH = 98:2 v/v) para dar o composto 58 como um pó amarelado (66%, 82 mg, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona- d6) δ 9,32 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,88 - 7,79 (m, 2H), 7,44-7,32 (m, 1H), 7,20-7,08 (m, 1H), 4,16 (dd, J = 5,9, 2,5 Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,75 (t, J = 2,5 Hz, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,31 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C19H20N3O3: 338,4, encontrado: 338,5. 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-N -(4- (pentafluorossulfanil)fenil)-1 H-pirrol-2-carboxamida (59)
[000220] Uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foi aquecida a refluxo durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de 4-pentafluorosulfanilanilina (167 mg, 0,8 mmol) em N,N-e (5 mL), dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução de ácido clorídrico 1N (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 59 como um pó branco (47%, 83 mg, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,72 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,88 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 4,16 (dd, J = 5,9, 2,6 Hz, 2H), 3,71 (s, 3H), 2,75 (t, J = 2,5 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,32 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C20H19F3N3O4: 464,4, encontrado: 464,4. 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-N -(3- (pentafluorossulfanil)fenil)-1 H-pirrol-2-carboxamida (60)
[000221] Uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foi aquecida a refluxo durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de 3-pentafluorosulfanilanilina (167 mg, 0,8 mmol) em N,N-e (5 mL), dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução de ácido clorídrico 1N (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 60 como um pó branco (40%, 71 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,68 (s, lH), 8,54 (s, lH), 8,20 (s, lH), 8,00 (m, lH), 7,63 (m, lH), 4,16 (dd, J = 5,9, 2,6 Hz, 2H), 3,71 (s, 3H), 2,75 (t, J = 2,5 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,33 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C19H19F5N3O3S: 464,4, encontrado: 464,4. N -(6-fluoropiridin-3-il)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-1 H - pirrol-2-carboxamida (61)
[000222] Uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foi aquecida a refluxo durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de 6-fluoropiridin-3-amina (85 mg, 0,8 mmol) em N,N- dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 61 como um pó branco (68%, 92 mg, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,56 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,47 - 8,36 (m, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,14 (dd, J = 8,9, 3,4 Hz, 1H), 4,24 - 4,15 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,78 - 2,74 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,34 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C18H18FN4O3: 357,4, encontrado: 357,4. 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-N -(pirimidin-5-il)-1 H-pirrol-2- carboxamida (62)
[000223] Uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foi aquecida a refluxo durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de pirimidin-5-amina (73 mg, 0,8 mmol) em N,N- dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 62 como um pó branco (31%, 40 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetone-d6) δ 9,61 (s, 1H), 9,21 (s, 2H), 8,93 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 4,19 (dd, J = 5,8, 2,6 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H), 2,77 (t, J = 2,6 Hz, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,37 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C17H18N5O3: 340,4, encontrado: 340,5. 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-N -(pirimidin-4-il)-1 H-pirrol-2- carboxamida (63)
[000224] Uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foi aquecida a refluxo durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de 4-aminopiridina (53 mg, 0,6 mmol) em N,N- dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (DCM:MeOH = 98:2 v/v) para dar o composto 63 (71%, 92 mg, 0,3 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,60 (s, 1H), 8,49 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 8,19 (s, 1H), 7,75 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 4,15 (dd, J = 5,7, 2,5 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 2,74 (t, J = 2,6 Hz, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,30 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C18H19N4O3: 339,4, encontrado: 339,5. N -(4-fluoro-3-metilfenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-1 H - pirrol-2-carboxamida (64)
[000225] Uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foi refluxada durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de 4-fluoro-3-metilanilina (71 mg, 0,6 mmol) em N,N- dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 64 como um pó branco (67%, 95 mg, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,25 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,72 (dd, J = 6,9, 2,5 Hz, 1H), 7,68 - 7,59 (m, 1H), 7,05 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 4,15 (dd, J = 5,9, 2,6 Hz, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,73 (t, J = 2,6 Hz, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,27 (d, J = 2,0 Hz, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C20H21FN3O3: 370,4, encontrado: 370,5. N -(3-ciano-4-fluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-1 H - pirrol-2-carboxamida (65)
[000226] Uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foi refluxada durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de 5-amino-2-fluorobenzonitrila (78 mg, 0,6 mmol) em N,N-dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 65 como um pó branco (42%, 61 mg, 0,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetone-d6) δ 9,61 (s, 1H), 8,32 (dd, J = 5,7, 2,7 Hz, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,13 - 8,07 (m, 1H), 7,46 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 4,15 (dd, J = 5,8, 2,5 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 2,74 (t, J = 2,5 Hz, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,30 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C20H18FN4O3: 381,4, encontrado: 381,3. N -(3-ciano-4-fluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(prop-2-in-1 -ilamino)acetil)-1 H - pirrol-2-carboxamida (66)
[000227] Uma solução de ácido 4-[2-(propargilamino)-2-oxo-acetil]-1,3,5- trimetil-pirrol-2-carboxílico 6 (100 mg, 0,4 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foi refluxada durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de 3-cloro-4-fluoroanilina (83 mg, 0,6 mmol) em N,N- dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 66 como um pó branco (20%, 30 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,45 (s, 1H), 8,298,03 (m, 2H), 7,84 - 7,64 (m, 1H), 7,32 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 4,15 (dd, J = 5,9, 2,6 Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,73 (s, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,29 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C19H18ClFN3O3: 390,8, encontrado: 390,4. Reagentes e condições: a) CDI, anilina, DMF, 3 h, rt; b) NaOH 5%, MeOH, 16 h, rt; c) 3,4-difluoroanilina, HATU, DIPEA, DMF, 16 h, rt. ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(fenilamino)acetil)-1 H-pirrol-2-carboxílico (68)
[000228] A uma solução de ácido 2-(5-etoxicarbonil-1,3,5-trimetil-pirrol-3-il)- 2-oxo-acético 4 (2,5 g, 9,9 mmol) em DMF (15 mL) e CH2Cl2 (10 mL) foi adicionado 1,1’-carbonildiimidazol (2,4 g, 11,8 mmol) e anilina (1,35 mL, 9,5 mmol). Após agitação durante 2 h à temperatura ambiente, a mistura da reação foi vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com CH2Cl2 (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo para dar 67 como um sólido branco. Ao etil 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(fenilamino)acetil)-1H-pirrol-2-carboxilato 67 bruto dissolvido em metanol (10 mL) e THF (10 mL) foi adicionada uma solução a 5% de hidróxido de sódio (10 mL). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e após evaporação do metanol e THF in vacuo, lavou- se a solução aquosa com acetato de etil (2 x 50 mL), acidificou-se com uma solução 1 N de HC1 (pH = 1) e extraiu-se novamente com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (50 mL) e hexanos (50 mL) para produzir ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2- (fenilamino)acetil)-1H-pirrol-2-carboxílico 68 (1,8 g, 6,0 mmol, 62%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (s, 1H), 7,75 - 7,67 (m, 2H), 7,37 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 7,207,11 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 2,41 (s, 6H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C16H17N2O4: 301,3, encontrado: 301,4. N -(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(fenilamino)acetil)-1 H-pirrol-2- carboxamida (69)
[000229] A uma solução de ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2- (fenilamino)acetil)-1H-pirrol-2-carboxílico 68 (200 mg, 0,7 mmol), 3,4- difluoroanilina (129 mg, 1,0 mmol) e DIPEA (231, 4,3 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado HATU (304 mg, 0,8 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 50°C durante 3 h. Para completar, foi adicionada mais 3,4- difluoroanilina (65 mg, 0,5 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite a 65°C. A mistura de reação foi então vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 69 como um pó branco (35%, 110 mg, 0,3 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetone-d6) δ 9,73 (s, 1H), 9,52 (s, 1H), 8,02 - 7,94 (m, 1H), 7,87 - 7,80 (m, 2H), 7,56 - 7,48 (m, 1H), 7,43 - 7,36 (m, 2H), 7,32 (dt, J = 10,6, 9,0 Hz, 1H), 7,20 - 7,13 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,31 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C22H20F2N3O3: 412,4, encontrado: 412,5. Reagentes e condições: a) CDI, morfolina, DMF, 3 h, rt; b) NaOH 5%, MeOH, 16 h, rt; d) 3,4-difluoroanilina, HATU, DIPEA, DMF, 16 h, rt. ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-morfolino-2-oxoacetil)-1 H-pirrol carboxílico (71)
[000230] A uma solução de ácido 2-(5-etoxicarbonil-1,3,5-trimetil-pirrol-3-il)- 2-oxo-acético 4 (0,5 g, 2,0 mmol) em DMF (15 mL) e CH2Cl2 (10 mL) foi adicionado 1,1’-carbonildiimidazol (0,53 g, 3,2 mmol) e morfolina (0,25 mL, 3,2 mmol). Após agitação durante 2 h à temperatura ambiente, a mistura da reação foi vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com CH2Cl2 (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo para dar 70 como um óleo amarelado. Ao etil 1,3,5-trimetil-4-(2-morfolino-2-oxoacetil)-1H-pirrol-2-carboxilato 70 bruto dissolvido em metanol (10 mL) e THF (10 mL) foi adicionada uma solução a 5% de hidróxido de sódio (10 mL). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e após evaporação do metanol e THF in vacuo, lavou- se a solução aquosa com acetato de etil (2 x 50 mL), acidificou-se com uma solução 1 N de HC1 (pH = 1) e extraiu-se novamente com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (50 mL) e hexanos (50 mL) para produzir ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-morfolino-2-oxoacetil)- 1H-pirrol-2-carboxílico 71 (0,41 g, 1,3 mmol, 70%). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,86 (s, lH), 3,75 (s, 3H), 3,71-3,63 (m, 2H), 3,59-3,51 (m, 4H), 3,33-3,25 (m, 2H), 2,44 (s, 3H), 2,42 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C14H19N2O5: 295,3, encontrado: 295,4. N -(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-morfolino-2-oxoacetil)-1 H-pirrol-2- carboxamida (72)
[000231] Uma solução de ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-morfolino-2-oxoacetil)-1H- pirrol-2-carboxílico 71 (100 mg, 0,3 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foram aquecidos a refluxo durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de 3,4-difluoroanilina (66 mg, 0,5 mmol) em N,N- dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (DCM:MeOH = 98:2 v/v) para dar o composto 72 como um sólido acastanhado (29%, 40 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetone-d6) δ 9,53 (s, 1H), 8,03 - 7,93 (m, 1H), 7,58 - 7,44 (m, 1H), 7,33 (dt, J = 10,6, 9,0 Hz, 1H), 3,743,67 (m, 6H), 3,66-3,61 (m, 3H), 3,39 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 2,51 (s, 3H), 2,33 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C20H22F2N3O4: 406,4, encontrado: 406,5. Reagentes e condições: a) CDI, alilamina, DMF, 3 h, RT; b) NaOH 5%, MeOH, 16 h, rt; c) 3,4-difluoroanilina, HATU, DIPEA, DMF, 16 h, rt. Ácido 4-(2-(alilamino)-2-oxoacetil)-1,3,5-trimetil-1 H-pirrol-2-carboxílico (74)
[000232] A uma solução de ácido 2-(5-etoxicarbonil-1,3,5-trimetil-pirrol-3-il)- 2-oxo-acético 4 (0,5 g, 2,0 mmol) em DMF (15 mL) e CH2Cl2 (10 mL) foi adicionado 1,1’-carbonildiimidazol (0,53 g, 3,2 mmol) e alilamina (0,18, 3,2 mmol). Após agitação durante 2 h à temperatura ambiente, a mistura da reação foi vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com CH2Cl2 (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo para dar 73 como um sólido branco. Ao etil 4- (2-(alilamino)-2-oxoacetil)-1,3,5-trimetil-1H-pirrol-2-carboxilato 73 bruto dissolvido em metanol (10 mL) e THF (10 mL) foi adicionada uma solução a 5% de hidróxido de sódio (10 mL). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e após evaporação do metanol e THF in vacuo, lavou- se a solução aquosa com acetato de etil (2 x 50 mL), acidificou-se com uma solução 1 N de HC1 (pH = 1) e extraiu-se novamente com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (50 mL) e hexanos (50 mL) para produzir ácido 4-(2-(alilamino)-2-oxoacetil)-1,3,5-trimetil- 1H-pirrol-2-carboxílico 74 (270 mg, 1,0 mmol, 51%). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,74 (s, 1H), 8,86 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 5,99-5,66 (m, 1H), 5,36-5,05 (m, 2H), 3,85-3,80 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 2,36 (s, 6H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C13H17N2O4: 265,3, encontrado: 265,4. 4-(2-(dietilamino)-2-oxoacetil)-N -(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-1 H-pirrol-2- carboxamida (75)
[000233] Uma solução de ácido 4-(2-(alilamino)-2-oxoacetil)-1,3,5-trimetil- 1H-pirrol-2-carboxílico 74 (100 mg, 0,4 mmol) e cloreto de tionil (210, 2,7 mmol) em tolueno (5 mL) foi refluxada durante 1 h. A solução resultante foi concentrada in vacuo, solubilizada em N,N-dimetilacetamida (5 mL), e adicionado a uma solução de 3,4-difluoroanilina (73 mg, 0,6 mmol) em N,N-dimetilacetamida (5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h, vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL) e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 75 como um pó branco (18%, 25 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,48 (s, 1H), 8,09 - 7,94 (m, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,59 - 7,48 (m, 1H), 7,32 (dt, J = 10,2, 9,0 Hz, 1H), 6,02 - 5,86 (m, 1H), 5,28 (dd, J = 17,2, 1,6 Hz, 1H), 5,12 (dd, J = 10,2, 1,4 Hz, 1H), 3,99 - 3,94 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,42 (s, 3H), 2,28 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C19H20F2N3O3: 376,4, encontrado: 376,4. Reagentes e condições: a) CDI, 2-aminotiazol, DMF, 3 h, rt; b) NaOH 5%, MeOH, 16 h, rt; c) 3,4-difluoroanilina, HATU, DIPEA, DMF, 16 h, rt. ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(tiazol-2-ilamino)acetil)-1 H-pirrol-2-carboxílico (77)
[000234] A uma solução de ácido 2-(5-etoxicarbonil-1,3,5-trimetil-pirrol-3-il)- 2-oxo-acético 4 (2,0 g, 7,9 mmol) em DMF (15 mL) e CH2Cl2 (10 mL) foi adicionado 1,1’-carbonildiimidazol (1,92 g, 11,8 mmol) e 2-aminotiazol (0,95 g, 9,5 mmol). Após agitação durante 2 h à temperatura ambiente, a mistura da reação foi vertida numa solução saturada de cloreto de amônio, filtrada através de funil de frita, seca sob vácuo para dar 76 como um sólido amarelo. Ao etil 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(tiazol-2-ilamino)acetil)-1 H-pirrol-2-carboxilato 76 bruto dissolvido em metanol (10 mL) e THF (10 mL) foi adicionada uma solução a 5% de hidróxido de sódio (10 mL). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e após evaporação do metanol e THF in vacuo, lavou- se a solução aquosa com acetato de etil (2 x 50 mL), acidificou-se com uma solução 1 N de HC1 (pH = 1) e extraiu-se novamente com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (50 mL) e hexanos (50 mL) para produzir ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(tiazol-2- ilamino)acetil)-1H-pirrol-2-carboxílico 77 ( 1,9 g, 6,1 mmol, 78%) como um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,96 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,33 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C13H14N3O4: 308,3, encontrado: 308,4. N -(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(tiazol-2-ilamino)acetil)-1 H-pirrol-2- carboxamida (78)
[000235] A uma solução de ácido 1,3,5-trimetil-4-(2-oxo-2-(tiazol-2- ilamino)acetil)-1H-pirrol-2-carboxílico 77 (250 mg, 0,8 mmol), 3,4-difluoroanilina (158 mg, 1,2 mmol) e DIPEA (283, 1,6 mmol) em DMF (15 mL) foi adicionado HATU (0,37 g, 1,0 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 50°C durante 3 h. Para completar, foi adicionada mais 3,4-difluoroanilina (80 mg, 0,6 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite a 65°C. A mistura de reação foi então vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (DCM:MeOH = 98:2 v/v) para dar o composto 78 como um pó amarelado (55%, 187 mg, 0,4 mmol). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,01 (s, 1H), 10,47 (s, 1H), 7,88 (dd, J = 13,3, 7,5 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,54 - 7,35 (m, 3H), 3,62 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,19 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C19H18F2N3O3: 419,4, encontrado: 419,4. Reagentes e condições: a) CDI, cloridrato de aminoacetonitrila, Et3N, DMF, 3 h, rt; b) NaOH 5%, MeOH, 16 h, rt; c) 3,4-difluoroanilina, HATU, DIPEA, DMF, 16 h, rt; d) NaN3, ZnBr2, iPrOH, 110 oC MW, 20 min. Ácido 4-(2-((cianometil)amino)-2-oxoacetil)-1,3,5-trimetil-1 H-pirrol-2-carboxílico (80)
[000236] A uma solução de ácido 2-(5-etoxicarbonil-1,3,5-trimetil-pirrol-3-il)- 2-oxo-acético 4 (3,0 g, 11,8 mmol) em DMF (20 mL) e CH2Cl2 (20 mL) foi adicionado 1,1'-carbonildiimidazol (2,3 g, 14,2 mmol) e cloridrato de 2- aminoacetonitrila (1,63 g, 17,8 mmol) e di-isopropiletilamina (4,12 mL, 23,7 mmol). Após agitação durante 2 h à temperatura ambiente, a mistura da reação foi vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com CH2Cl2 (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo para dar 79 como um sólido. Ao etil 4-(2- (cianometil)amino-2-oxoacetil)-1,3,5-trimetil-1H-pirrol-2-carboxilato 79 bruto dissolvido em metanol (10 mL) e THF (10 mL) foi adicionada uma solução a 5% de hidróxido de sódio (10 mL). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e após evaporação do metanol e THF in vacuo, lavou- se a solução aquosa com acetato de etil (2 x 50 mL), acidificou-se com uma solução 1 N de HC1 (pH = 1) e extraiu-se novamente com acetato de etil (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico (50 mL) e hexanos (50 mL) para produzir ácido 4-(2-((cianometil)amino)-2-oxoacetil)- 1,3,5-trimetil-1H-pirrol-2-carboxílico 80 (0,41 g, 15,5 mmol, 13%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,79 (s, 1H), 9,46 (s, 1H), 4,32 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 3,76 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,36 (s, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C12H14N3O4: 264,3, encontrado: 264,4. 4-(2-((cianometil)amino)-2-oxoacetil)-N -(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-1 H-pirrol- 2-carboxamida (81)
[000237] ácido 4-(2-((cianometil)amino)-2-oxoacetil)-1,3,5-trimetil-1H-pirrol- 2-carboxílico 80 (2 g, 7,6 mmol), 3,4-difluoroanilina (1,47 g, 11,4 mmol) e DIPEA (1,98 mL, 11,4 mmol) em DMF (30 mL) foi adicionado HATU (3,18 g, 8,3 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 65°C durante 18 h. A mistura da reação foi então vertida para uma solução saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etil (3 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos:EtOAc = 6:4 v/v) para dar o composto 81 como um pó branco (30%, 840 mg, 2,2 mmol). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,52 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,09 - 7,90 (m, 1H), 7,58 - 7,45 (m, 1H), 7,40 - 7,23 (m, 1H), 4,49 - 4,36 (m, 2H), 3,74 - 3,65 (m, 3H), 2,46-2,40 (m, 3H), 2,34-2,25 (m, 3H). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C18H17F2N4O3: 375,3, encontrado: 375,4. 4-(2-(((2 H-tetrazol-5-il)metil)amino)-2-oxoacetil)- N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5- trimetil-1 H-pirrol-2-carboxamida (82)
[000238] Azida de sódio (26 mg, 0,4 mmol) e brometo de zinco (90 mg, 0,4 mmol)foram adicionados a uma suspensão de 4-(2-((cianometil)amino)-2- oxoacetil)-N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-1H-pirrol-2-carboxamida 81 (50 mg, 0,1 mmol) em isopropanol (2 mL). A mistura foi aquecida a 110 °C por 20 min sob irradiações de micro-ondas. A mistura da reação foi então vertida para uma solução saturada de carbonato de sódio (50 mL) e lavada com acetato de etil (3 x 20 mL). A fase aquosa foi, então, acidificada para pH ~ 1 e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida (DCM/MeOH = 95:5 v/v), resultando no composto 82 como um pó branco (48%, 27 mg, 0,1 mmol). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,41 (s, 1H), 9,46 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 7,92 - 7,83 (m, 1H), 7,50 - 7,37 (m, 2H), 4,69 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 3,58 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,17 (s, 3H). LCMS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C18H18F2N7O3: 418,4, encontrado: 418.4. Reagentes e condições: a) 2-bromo-1-metil-1H-imidazol, Et3N, DMF, CuI, dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio, 70 oC MW, 20 min. N-(3,4-difluorofenil)-1,3,5-trimetil-4-(2-((3-(1-metil)-1H-imidazol-2-il)prop-2-in-1- il)amino)-2-oxoacetil)-1H-pirrol-2-carboxamida (83)
[000239] Composto 7a (100 mg, 268 μmol), 2-bromo-1 -metil- 1H-imidazol (65 mg, 402 μmol), trietilamina (73 μl, 541 μmol) e dimetilformamida (2 mL) foram combinados num tubo selado. A mistura foi espargida durante 2 minutos com nitrogênio e foi adicionado dicloreto de bis(trifenilfosfina) paládio (19 mg, 27 μmol) seguido de iodeto de cobre (10 mg, 53 μmol). A mistura foi novamente espargida com nitrogênio e agitada durante 20 minutos a 70 °C sob irradiação de microondas. A reação foi diluída com acetato de etil (50 mL), lavada com uma solução saturada de cloreto de amônio (50 mL). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia rapida em sílica gel. (DCM/MeOH: 96/4) para dar o composto 83 (62 mg, 137 μmol, 51%). 1H NMR (400 MHz, Acetona-d6) δ 9,51 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,99 (ddd, J = 13,2, 7,4, 2,6 Hz, 1H), 7,57 - 7,48 (m, 1H), 7,34 (dt, J = 10,5, 9,0 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,32 (s, 3H). 19F NMR (377 MHz, Acetona-d6) δ -139,91 - -140,01 (dt, J = 22,1, 11,6 Hz), -147,12 - -147,23 (dt, J = 20,5, 10,4 Hz). MS (ESI): m/z [M+H]+ calcd para C23H22F2N5O3 : 454,4, encontrado: 454,4.
Exemplo 2 Ensaios de Toxicidade Celular
[000240] A toxicidade dos compostos foi avaliada em células Vero, PBM humana, CEM (linfoblastoide humana), MT-2 e HepG2, conforme descrito anteriormente (ver Schinazi R.F., Sommadossi J.-P., Saalmann V., Cannon D.L., Xie M.-Y., Hart G.C., Smith G.A. & Hahn E.F. Antimicrob. Agents Chemother. 1990, 34, 1061-67). A ciclo-heximida foi incluída como controle citotóxico positivo, e as células não tratadas expostas ao solvente foram incluídas como controles negativos. O IC50 de citotoxicidade foi obtido a partir da curva concentração-resposta utilizando o método eficaz mediano descrito anteriormente (ver Chou T.-C. & Talalay P. Adv. Enzyme Regul. 1984, 22, 27 55; Belen’kii M.S. & Schinazi R.F. Antiviral Res. 1994, 25, 1-11). Os resultados são mostrados na Tabela 1 abaixo: Tabela 1 Citotoxicidade, CC50, μM (% de inibição) Exemplo 3 Ensaios de Toxicidade Mitocondrial em Células HepG2: i) Efeito dos compostos no crescimento celular e produção de ácido lático: Determinou-se o efeito no crescimento de células HepG2 incubando células na presença de 0 μM, 0,1 μM, 1 μM, 10 μM e 100 μM de droga. Células (5 x 104 por poço) foram colocadas em grupos de cultura de 12 poços em meio essencial mínimo com aminoácidos não essenciais suplementados com 10% de soro bovino fetal, 1% de piruvato de sódio e 1% de penicilina/estreptomicina e incubadas durante 4 dias a 37°C. No final do período de incubação, o número de células foi determinado utilizando um hemocitômetro. Também ensinado por Pan-Zhou XR, Cui L, Zhou XJ, Sommadossi JP, Darley-Usmer VM. "Differential effects of antiretroviral nucleoside analogs on mitochondrial function in HepG2 cells," Antimicrob. Agents Chemother. 2000; 44: 496-503.
[000241] Para medir os efeitos dos compostos na produção de ácido lático, as células HepG2 de uma cultura de reserva foram diluídas e plaqueadas em placas de cultura de 12 poços a 2,5 x 104 células por poço. Adicionaram-se várias concentrações (0 μM, 0,1 μM, 1 μM, 10 μM e 100 μM) de composto, e incubaram-se as culturas a 37°C numa atmosfera umidificada de 5% de atmosfera de CO2 por 4 dias. No dia 4, o número de células em cada poço foi determinado e o meio de cultura foi recolhido. O meio de cultura foi então filtrado e o teor de ácido lático no meio foi determinado utilizando um ensaio de ácido lático colorimétrico (Sigma-Aldrich). Uma vez que o produto de ácido lático pode ser considerado um marcador para a função mitocondrial prejudicada, níveis elevados de produção de ácido lático detectados em células cultivadas na presença de compostos de teste indicariam um efeito citotóxico induzido por droga. ii) Efeito sobre compostos na síntese de DNA mitocondrial: um ensaio de PCR em tempo real para quantificar com precisão o teor do DNA mitocondrial foi desenvolvido (ver Stuyver LJ, Lostia S, Adams M, Mathew JS, Pai BS, Grier J, Tharnish PM, Choi Y, Chong Y, Choo H, Chu CK, Otto MJ, Schinazi RF. Antiviral activities and cellular toxicities of modified 2',3'-dideoxy-2',3'-didehydrocytidine analogs. Antimicrob. Agents Chemother. 2002; 46: 3854-60). Este ensaio foi utilizado em todos os estudos descritos neste pedido que determinam o efeito dos compostos no teor de DNA mitocondrial. Neste ensaio, as células HepG2 de número de passagem baixa foram semeadas a 5.000 células/poço em placas de 96 poços revestidas com colágeno. Os compostos de teste foram adicionados ao meio para obter concentrações finais de 0 μM, 0,1 μM, 10 μM e 100 μM. No dia 7 de cultura, os ácidos nucleicos celulares foram preparados utilizando colunas comercialmente disponíveis (kit RNeasy 96; Qiagen). Esses kits copurificam o RNA e o DNA e, assim, os ácidos nucleicos totais são eluídos das colunas. O gene mitocondrial da subunidade citocromo c oxidase II (COXII) e o gene da β-actina ou rRNA foram amplificados a partir de 5 μl dos ácidos nucleicos eluídos usando um protocolo Q-PCR multiplex com iniciadores e sondas adequados para ambas as amplificações alvo e de referência. Para COXII foram utilizados os seguintes iniciadores sentido, sonda e antissentido, respectivamente: 5'- TGCCCGCCATCATCCTA-3', 5'-tetracloro-6- carboxifluoresceína- TCCTCATCGCCCTCCCATCCC-TAMRA-3' e 5'- CGTCTGTTATGTAAAGGATGCGT-3'. Para o éxon 3 do gene da β-actina (Número de acessão do GenBank E01094) os iniciadores sentido, sonda e antissentido são 5'- GCGCGGCTACAGCTTCA-3', 5'-6- FAMCACCACGGCCGAGCGGGATAMRA-3' e 5'- TCTCCTTAATGTCACGCACGAT-3', respectivamente. Os iniciadores e sondas para o gene rRNA estão comercialmente disponíveis na Applied Biosystems. Uma vez que eficiências de amplificação iguais são obtidas para todos os genes, o método comparativo de CT foi usado para investigar a potencial inibição da síntese de DNA mitocondrial. O método de CT comparativo utiliza fórmulas aritméticas em que a quantidade de alvo (gene COXII) é normalizada para a quantidade de uma referência endógena (o gene da β-actina ou rRNA) e é relativa a um calibrador (um controle sem droga no dia 7). A fórmula aritmética para esta abordagem é dada por 2-ΔΔCT, onde ΔΔCT é (CT para amostra de teste alvo média - CT para controle de alvo) - (CT para teste de referência média -CT para controle de referência), Johnson MR, K Wang, JB Smith, MJ Heslin, RB Diasio. Quantitation of dihydropyrimidine dehydrogenase expression by real-time reverse transcription polymerase chain reaction. Anal. Biochem. 2000; 278:175184). Uma diminuição no teor de DNA mitocondrial em células cultivadas na presença de drogas indicou toxicidade mitocondrial.
[000242] O efeito dos compostos 7 e 9 nos níveis de DNA nuclear e mitocondrial, e a produção de ácido lático foi avaliada em células HepG2 (ensaio de 14 dias), e os dados estão tabulados abaixo na Tabela 2: Tabela 2
[000243] Os dados mostram que compostos 7a, como aqui descrito, não é tóxico até 25 μM e muito baixa toxicidade foi observada mesmo a 50 μM, semelhante ao controle negativo 3TC.
Exemplo 4 Ensaios de Toxicidade Mitocondrial em Células Neuro2A
[000244] Para estimar o potencial dos compostos desta invenção para causar toxicidade neuronal, as células Neuro2A de camundongo (American Type Culture Collection 131) podem ser utilizadas como um sistema modelo (ver Ray AS, Hernandez-Santiago BI, Mathew JS, Murakami E, Bozeman C , Xie meu, Dutschman GE, Gullen E, Yang Z, Hurwitz S, Cheng YC, CK Chu, McClure H, RF Schinazi, Anderson KS. Mechanism of anti-human immunodeficiency virus activity of beta-D-6-cyclopropylamino-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxyguanosine. Antimicrob. Agents Chemother. 2005, 49, 1994-2001). As concentrações necessárias para inibir o crescimento celular em 50% (CC50) pode ser medido utilizando o ensaio à base de corante de brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazólio, como descrito. Perturbações nos níveis de ácido láctico celular e DNA mitocondrial em concentrações definidas de droga podem ser realizadas como descrito acima. O ddC e o AZT podem ser utilizados como análogos de nucleosídeos de controle.
Exemplo 5 Ensaio para citotoxicidade da medula óssea
[000245] As células mononucleares da medula óssea humana primária podem ser obtidas comercialmente na Cambrex Bioscience (Walkersville, MD). Os ensaios de CFU-GM são realizados usando um ágar mole de bicamada na presença de 50 unidades/mL de fator estimulante de colônias de granulócitos/macrófagos recombinantes humanos, enquanto os ensaios de BFU- E usaram uma matriz de etilcelulose contendo 1 unidade/mL de eritropoetina (ver Sommadossi JP, Carlisle R. Toxicity of 3’-azido-3’-deoxythymidine and 9-(1,3- dihydroxy-2-propoxymethyl) guanine for normal human hepatopoietic progenitor cells in vitro. Antimicrob. Agents Chemother. 1987; 31: 452-454; Sommadossi, JP, Schinazi, RF, Chu, CK, and Xie, MY. Comparison of cytotoxicity of the (-) and (+) enantiomer of 2’,3’-dideoxy-3’-thiacytidine in normal human bone marrow progenitor cells. Biochem. Pharmacol. 1992; 44:1921- 1925). Cada experiência pode ser realizada em duplicata em células de três diferentes doadores. O AZT é usado como controle positivo. As células podem ser incubadas na presença do composto durante 14-18 dias a 37°C com 5% de CO2, e colônias de mais de 50 células podem ser contadas usando um microscópio invertido para determinar o IC50. A concentração inibitória de 50% (IC50) pode ser obtida por análise de regressão linear de mínimos quadrados do logaritmo da concentração de droga versus frações de sobrevida de BFU-E. A análise estatística pode ser realizada com o teste t de Student para amostras independentes não pareadas.
Exemplo 6 Ensaio anti-HBV
[000246] Determinou-se a atividade anti-HBV dos compostos tratando a linhagem celular AD-38 contendo o tipo selvagem de HBV sob o controle de tetraciclina (ver Ladner S.K., Otto M.J., Barker C.S., Zaifert K., Wang G.H., Guo J.T., Seeger C. & King R.W. Antimicrob. Agents Chemother. 1997, 41, 1715-20). Removal of tetracycline from the medium [Tet (-)] results in the production of HBV. Os níveis de HBV nos fluidos sobrenadantes de cultura das células tratadas com os compostos foram comparados com os dos controles não tratados. Culturas de controle com tetraciclina [Tet (+)] também foram mantidas para determinar os níveis basais da expressão do HBV. 3TC foi incluído como controle positivo. As faixas de concentrações efetivas medianas (EC50) de vários dos compostos aqui descritos contra o HBV são mostrados na Tabela 3: A = 1-9 μM B = 0,1-0,9 μM C = 0,01-0,09 μM D = 0,001-0,009 μM E = 0,0001-0,0009 μM Tabela 3
Exemplo 7
[000247] A produção de HBeAg secretado é predominantemente dependente de cccDNA nas células HepAD38 e, portanto, pode servir como um marcador substituto para o cccDNA (Ladner, S.K., Otto, M.J., Barker, C.S., Zaifert, K., Wang, G.H., Guo, J.T., Seeger, C., King, R.W. Antimicrob Agents Chemother 1997, 41, 1715-1720; Zhou T, Guo H, Guo JT, Cuconati A, Mehta A, Block TM. Antiviral Res. 2006; 72 (2): 116-24.). O efeito nos níveis de formação de cccDNA foi avaliado utilizando um ensaio baseado em células que mede o HBV e o antígeno (HBeAg) como um marcador dependente de cccDNA no sistema HepAD38. Células HepAD38 foram semeadas a 50.000 células/poço em placas de 96 poços revestidas com colágeno com meio DMEM/F12 (Life Technologies) suplementado com 10% de soro bovino fetal inativado pelo calor. As células foram tratadas com 0,3 μg/ml de tetraciclina, conforme necessário. Os compostos de teste e controles foram adicionados às células até uma concentração final de 10 μM ou num modo de resposta à dose variando entre 0,001 e 10 μM. O meio e os compostos de teste foram repostos a cada 5 dias em cultura. Os sobrenadantes foram colhidos no dia 14, clarificados por centrifugação a 5000 rpm por 5 min e armazenados em -70oC até o uso. ELISA - O meio de cultura foi diluído 1:15 em DMEM/F12 e os níveis de HBeAg segregados no meio de cultura foram medidos utilizando o kit HBeAg ELISA (BioChain Institute Inc. Hayward, CA) de acordo com o protocolo do fabricante. A concentração do composto que reduziu os níveis de HBeAg secretado em 50% (EC50) foi determinado por regressão linear. Tabela 4
Exemplo 8
[000248] Curiosamente, alguns dos compostos sintetizados e encontrados ativos contra HBV in vitro também eram inesperadamente ativos contra o vírus do Nilo Ocidental (WNV). WNV é um arbovírus zoonótico transmitido por mosquito pertencendo ao gênero Flavivirus na família Flaviviridae. O material genético do WNV é uma fita única de sentido positivo de RNA, que tem entre 11.000 e 12.000 nucleotídeos de comprimento; estes genes codificam sete proteínas não estruturais e três proteínas estruturais. A fita de RNA é mantida dentro de um nucleocapsídeo formado a partir de blocos de proteína 12-kDa ; o capsídeo está contido dentro de uma membrana derivada de hospedeiro alterada por duas glicoproteínasvirais.
Triagem antiviral utilizando um replicador repórter da luciferase do Vírus do Nilo Ocidental (WNV).
[000249] Células de rim de hamster de bebês (BHK) contendo um replicon repórter de luciferase de WNV (ver Shi PY, Tilgner M, Lo MK. Virology. 2002; 296 (2): 219-33) were used for high throughput screening. Genes de resistência para Renilla luciferase e blasticitin genes como um gene marcador selecionável foram engenheirados no replicon para substituir as proteínas estruturais virais. As atividades da luciferase foram medidas após 48 h de incubação usando o sistema de Ensaio de Luciferase Renilla (Promega).
[000250] A suscetibilidade do vírus do Nilo Ocidental aos compostos aqui descritos também pode ser avaliada usando o ensaio descrito em: Song, G.Y., Paul, V., Choo, H., Morrey, J., Sidwell, R.W., Schinazi, R.F., Chu, C.K. Enantiomeric synthesis of D- and L-cyclopentenyl nucleosides and their antiviral activity against HIV and West Nile virus. J. Med. Chem. 2001, 44, 3985-3993,
Exemplo 9
[000251] A suscetibilidade da febre amarela aos compostos aqui descritos também pode ser avaliada como descrito anteriormente em: Julander, J.G., Furuta, Y., Shafer, K., Sidwell, R.W. Activity of T-1106 in a Hamster Model of Yellow Fever Virus Infection. Antimicrob. Agents Chemother. 2007, 51, 19621966.
Exemplo 10
[000252] A suscetibilidade da Dengue aos compostos aqui descritos pode ser avaliada utilizando o ensaio de alto rendimento divulgado por Lim et al., A scintillation proximity assay for dengue virus NS5 2‘-O-methyltransferase— kinetic and inhibition analyses, Antiviral Research, Volume 80, Issue 3, December 2008, Páginas 360-369.
[000253] O vírus da dengue (DENV) NS5 possui atividade de metiltransferase (MTase) em sua sequência de aminoácidos N-terminal e é responsável pela formação de uma estrutura cap tipo 1, m7GpppAm2‘-O no RNA genômico viral. As condições ideias in vitro para a atividade de 2'-O-MTase de DENV2 podem ser caracterizadas utilizando proteína recombinante purificada e um modelo curto de RNA revestido com GTP biotinilado. Parâmetros da cinética de estado estacionário derivados de velocidades iniciais podem ser usados para estabelecer um ensaio robusto de proximidade de cintilação para teste de compostos. Estudos de pré-incubação de Lim et al., Antiviral Research, volume 80, número 3, dezembro de 2008, páginas 360-369, mostraram que os complexos MTase-AdoMet e MTase-RNA eram igualmente cataliticamente competentes e a enzima suporta um mecanismo cinético aleatório bi bi. Lim validou o ensaio com agentes inibitórios competitivos, S-adenosil-homocisteína e dois homólogos, sinefungina e desidrosinefungina. Uma bolsa de ligação ao GTP presente no N-terminal do MTase DENV2 foi anteriormente postulada como sendo o sítio de ligação de cap. Este ensaio permite uma detecção rápida e altamente sensível da atividade de 2'-O-MTase e pode ser prontamente adaptado para um rastreio de alto rendimento para compostos inibidores. É também adequado para a determinação de atividades enzimáticas de uma ampla variedade de MTases de capeamento de RNA.
Exemplo 11 Atividade Anti-Norovirus
[000254] Compostos podem exibir atividade anti-norovírus inibindo a polimerase e/ou helicase do norovírus, inibindo outras enzimas necessárias no ciclo de replicação, ou por outras vias.
[000255] Atualmente, não existe tratamento farmacêutico aprovado para a infecção por Norovírus, e isto tem sido provavelmente, pelo menos em parte, devido à falta de disponibilidade de um sistema de cultura de células. Recentemente, um sistema de replicon foi desenvolvido para a cepa original de Norwalk GI (Chang, KO, et al. (2006) Virology 353:463-473).
[000256] Tanto os replicons de Norovírus quanto os replicons de Hepatitis C requerem que a helicase viral, protease e polimerase sejam funcionais para que a replicação do replicon ocorra. Mais recentemente, um ensaio de infecciosidade de culturas celulares in vitro foi relatado utilizando inoculantes de genovírus I e II de Norovirus (Straub, T.M. et al. (2007) Emerg. Infect. Dis. 13(3):396-403). Este ensaio é realizado num biorreator de parede rotativa utilizando células epiteliais do intestino delgado em grânulos de microtransportadores. O ensaio de infecciosidade pode ser usado para rastrear inibidores de entrada.
Exemplo 12 Atividade Anti-Chikungunya
[000257] A atividade anti-chikungunya pode ser avaliada conforme descrito em “Anti-Chikungunya Viral Activities of Aplysiatoxin-Related Compounds from the Marine Cyanobacterium Trichodesmium erythraeum” Gupta, D. K.; Kaur, P.; Leong, S. T.; Tan, L. T.; Prinsep, M. R.; Chu, J J. H. Mar Drugs. Jan 2014; 12(1): 115-127; 10.3390/md12010115 e referências aí citadas.
Exemplo 13 Atividade anti-AVC
[000258] A a atividade anti-HCV dos compostos aqui descritos pode ser medida, por exemplo, utilizando um ensaio de replicon de HCV como descrito, por exemplo, em Stuyver L et al., Ribonucleoside analogue that blocks replication or bovine viral diarrhea and hepatitis C viruses in culture. Antimicrob. Agents Chemother. 2003, 47, 244-254.
[000259] Neste ensaio, células Huh 7 Clone B contendo RNA Replicon de HCV podem ser semeadas em uma placa de 96 poços a 5000 células/poço, e os compostos testados a 10 μM em triplicata imediatamente após a semeadura. Após cinco dias de incubação (37°C, 5% de CO2), o RNA celular total pode ser isolado utilizando um kit de purificação de RNA versaGene da Gentra. O RNA Replicon e um controle interno (reagentes de controle TaqMan rRNA, Applied Biosystems) podem ser amplificados em um único ensaio multiplex RT-PCR em tempo real. A eficácia antiviral dos compostos pode ser calculada subtraindo o limiar do ciclo de RT-PCR do composto de teste do ciclo de limiar RT-PCR do controle sem droga (ΔCt HCV). Um ΔCt de 3,3 é igual a uma redução de 1 log (igual a 90% menos material de partida) nos níveis de RNA Replicon. A citotoxicidade dos compostos também pode ser calculada utilizando os valores de ΔCt rRNA. 2'-C-Me-C pode ser usado como controle positivo. Para determinar os valores de EC90 e IC50, ΔCt: os valores podem primeiro ser convertidos em fração do material inicial e depois usados para calcular a % de inibição.
[000260] Para analisar especificamente se os compostos inibem a NS5B do HCV, pode-se usar um ensaio como o descrito em “A complex network of interactions between S282 and G283 of HCV NS5B and the template strand affect susceptibility to Sofosbuvir and Ribavirin,” Kulkarni et al., Antimicrob Agents Chemother. 11 de Jan de 2016. pii: AAC.02436-15.
Exemplo 14 Ensaio de formação de cápsulas para uso na monitorização do conjunto de cápsulas do HBV
[000261] Na ausência de compostos que interrompam a formação do capsídeo, a proteína truncada no C-terminal do núcleo do vírus da hepatite B (HBP Cp149, proteína isolada pelos métodos relatados [Zlotnick, A et al; Biochem 1996, 35, 7412-7421] normalmente é montada em um capsídeo HBV Cp149. O objetivo deste exemplo foi determinar se agentes ativos putativos iriam interromper a formação do capsídeo e, assim, ser ativos como agentes anti-HBV. Agentes ativos putativos foram incubados a uma concentração de 25 μM por 1 h a 4°C com HBP Cp149 a uma concentração de 10 μM. A montagem de capsídeo foi então promovida adicionando NaCl 300 mM e armazenando a mistura durante a noite a 4°. Micrografias eletrônicas de coloração negativa foram coletadas usando um microscópio eletrônico JEOL JEM-1400 de 120 kV usando acetato de uranil como meio de contraste. Essas imagens mostravam se os capsídeos se formavam, e se sim, se eles formavam esferas ocas completamente formadas ou esferas deformadas (por exemplo, esferas desmontadas ou incompletas).
[000262] Quando tratado com veículo, a formação do capsídeo prossegue como esperado, formando esferas ocas totalmente formadas com um diâmetro de aproximadamente 40 nm. Quando o composto GLS4 foi adicionado, a formação do capsídeo foi rompida, como mostrado pela formação de esferas ocas relativamente mal dimensionadas (cerca de 80-100 nm) relativamente grandes. Quando o Composto 7a foi adicionado, a formação do capsídeo foi rompida, como mostrado pela formação de esferas ocas incompletas relativamente pequenas (menos do que cerca de 40 nm) e compactadas. Os resultados são apresentados na Figura 1.
[000263] A próxima pergunta era se esses compostos poderiam atrapalhar os capsídeos já formados. Consequentemente, os capsídeos foram formados como discutido acima (incubação de Cp149 isolada de HBV com NaCl a 300 mM, armazenada durante a noite a 4°). Em seguida, os capsídeos foram incubados com o composto putativo (durante a noite a 4°), e micrografias eletrônicas foram então tiradas. A Figura 2 mostra micrografias eletrônicas de capsídeos incubados com veículo, com 25 μM de GLS4 e 25 μM de Composto 7a. A Figura 3 mostra os resultados com o GLS4, no qual os capsídeos foram rompidos. As micrografias mostram que os capsídeos estavam quebrados, como cascas de ovos rachadas. A Figura 4 mostra os resultados com o Composto 7a, em que a concentração de capsídeos era clara e significativamente reduzida e os capsídeos restantes eram relativamente pequenos e compactos.
[000264] Várias publicações são citadas aqui, cujas divulgações são incorporadas por referência em sua totalidade para todos os fins.
[000265] A presente invenção não será limitada no escopo pelas modalidades específicas aqui descritas. De fato, várias modificações da invenção, além daquelas descritas, se tornarão evidentes para os versados na técnica a partir da descrição anterior e das figuras anexas. Tais modificações são destinadas a cair dentro do escopo das reivindicações anexas.

Claims (19)

1. COMPOSTO, caracterizado por ser da seguinte fórmula: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é, independentemente, hidrogênio, ou C1-6 alquil,; quando R1' está ligado a um carbono, é, independentemente, hidrogênio, halogênio, SF 5, CF 3, hidróxi, N(R ')S (O) 2 R', S(O) 2 R', S( O) 2 N(R') 2, alcoxi C 16, haloalcoxi C 1-6, alquenil C 2-6, ciano, alquinil C 2-6, alcoxialquil C 3-6, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonilo, carboxi, haloalquilo C1-6 ou hidroxialquilo C 1-6; quando R1 é fixado a um nitrogênio eles são, independentemente, hidrogênio, C2-6 alcóxi, C3-6 alcoxialquil, C2-6 alquenil, alcoxicarbonil, carbonilalquil, carbonil aril, C1-6 alquil, C2-6 hidroxialquil ou S(O)2 R’; cada R’ é independentemente H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, C3-6 cicloalquil, aril, heteroaril, alquilaril ou arilalquil, ou se dois R' residirem no mesmo átomo de nitrogênio, eles podem se unir para formar um anel C3-6 opcionalmente contendo um heteroátomo N, O ou S; os grupos R', diferente de H, podem opcionalmente ser substituídos por um ou mais substituintes, cujos substituintes são, independentemente, halo, C1-6 haloalquil, C1-6 hidroxialquil, hidroxil, carboxil, acil, aril, acilóxi, amino, amido, derivados carboxil, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alcóxi, alcoxialquil, ariloxi, nitro,ciano, ácido sulfônico, tiol, imina, sulfonil, sulfanil, sulfinil, sulfamonil, éster, ácido carboxílico, amida, fosfonil, fosfinil, fosforil, fosfina, tioéster, tioéter, haleto ácido, anidrido, oxima, hidrozina, carbamato, ácido fosfônico ou fosfonato; u e v são independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; I é fenil, pirimidinil ou pirridinil; J é pirrolil; W é R12 é H, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-6 alquenil, ou C2-6 alquinil; e R13 é C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril, heteroaril, alquilaril, arilalquil, um anel C4-14 bicíclico; ou um anel de seis membros em ponte ou espiro-fundido contendo zero, um ou dois heteroátomos que são, independentemente, N, O ou S; R13 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, CF3, SF5, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, cicloalquil, arilalcoxicarbonil, carboxil, haloalquil, heterociclilalquil, C1-6 hidroxialquil, aril, aril substituído, heteroaril e heteroaril substituído, em que os substituintes no aril substituído e heteroaril substituído são selecionados do grupo que consiste em halogênio, SF5, CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C(O)R’, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil e C1-6 alquil; ou ou R12 e R13 juntos com o nitrogênio ao qual eles estão fixados formam um anel de 3 a 4 membros opcionalmente substituído por um ou mais substituintes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio (F, Cl, Br, I), CF3, hidróxi, N(R’)S(O)2R’, S(O)2R’, S(O)2N(R’)2, C1-6 alcóxi, ciano, azido, C2-6 alquinil, C3-6 alcoxialquil, alcoxicarbonil, alcoxicarbonilalquil, C1-6 alquil, arilalcoxicarbonil, carbóxi, C1-6 haloalquil, heterociclilalquil e C1-6 hidroxialquil.
2. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser selecionado do grupo que consiste em: e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
3. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por compreender: e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
4. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 2, onde R13 é C2-6 alquenil, C2-6 alquinil, aril ou heteroaril caracterizado por compreender: e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
5. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por compreender: e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
6. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por compreender: e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
7. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R12 ser hidrogênio.
8. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R13 ser C2-6 alquenil.
9. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R13 ser alquinil.
10. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R13 ser aril.
11. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R13 ser heteroaril.
12. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por J ser pirrolil.
13. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por I ser fenil.
14. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por u ser 3.
15. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser C1-6 alquil.
16. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por v ser 2.
17. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1’ ser halogênio.
18. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, que compreende um composto definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada por compreender um transportador farmaceuticamente aceitável.
19. USO DO COMPOSTO, definido em qualquer das reivindicações 1 a 17, caracterizado por ser para a preparação de um medicamento para tratar infecção por HBV, prevenir uma infecção por HBV ou reduzir a atividade biológica de uma infecção com HBV.
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