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BR112018008946B1 - MANNASE VARIANT OR A RECOMBINANT POLYPEPTIDE, METHOD OF PRODUCTION THEREOF, CLEANING COMPOSITION, CLEANING METHOD, POLYNUCLEOTIDE, EXPRESSION VECTOR AND HOST CELL - Google Patents

MANNASE VARIANT OR A RECOMBINANT POLYPEPTIDE, METHOD OF PRODUCTION THEREOF, CLEANING COMPOSITION, CLEANING METHOD, POLYNUCLEOTIDE, EXPRESSION VECTOR AND HOST CELL Download PDF

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Publication number
BR112018008946B1
BR112018008946B1 BR112018008946-0A BR112018008946A BR112018008946B1 BR 112018008946 B1 BR112018008946 B1 BR 112018008946B1 BR 112018008946 A BR112018008946 A BR 112018008946A BR 112018008946 B1 BR112018008946 B1 BR 112018008946B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
mannanase
amino acid
variant
active fragment
recombinant polypeptide
Prior art date
Application number
BR112018008946-0A
Other languages
Portuguese (pt)
Other versions
BR112018008946A2 (en
Inventor
Christian D. Adams
Viktor Yuryevich Alekseyev
David Marquez
Miles Christopher Scotcher
Richard R. Bott
Jian Yao
Original Assignee
Danisco Us Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Danisco Us Inc filed Critical Danisco Us Inc
Priority claimed from PCT/US2016/060844 external-priority patent/WO2017079751A1/en
Publication of BR112018008946A2 publication Critical patent/BR112018008946A2/en
Publication of BR112018008946B1 publication Critical patent/BR112018008946B1/en

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Abstract

A presente invenção refere-se a mananases a partir de Paenibacillus sp., polinucleotídeos que codificam as mananases, composições que contêm as mananases e métodos para uso das mesmas. As composições que contêm mananases são adequadas ao uso como detergentes e para limpeza de tecidos e superfícies duras, bem como em uma variedade de outras aplicações industriais.The present invention relates to mannanases from Paenibacillus sp., polynucleotides encoding the mannanases, compositions containing the mannanases and methods for using the same. The compositions containing mannanases are suitable for use as detergents and for cleaning fabrics and hard surfaces, as well as in a variety of other industrial applications.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOSCROSS-REFERENCE TO RELATED ORDERS

[001] Este pedido refere-se e reivindica o benefício de prioridadedos Pedidos de Patente Provisórios dos Estados Unidos com os Números de Série 62/251.516 depositado em 5 de novembro de 2015 e 62/278.387 depositado em 13 de janeiro de 2016, cujas totalidades são incorporadas ao presente documento a título de referência.[001] This application relates to and claims the benefit of priority from United States Provisional Patent Applications Serial Numbers 62/251,516 filed November 5, 2015 and 62/278,387 filed January 13, 2016, the entireties of which are incorporated herein by reference.

[002] A presente invenção refere-se a mananases a partir dePaenibacillus sp., polinucleotídeos que codificam as mananases, composições que contêm as mananases e métodos para uso das mesmas. As composições que contêm mananases são adequadas para uso como detergentes e para limpeza de tecidos e superfícies duras, bem como em uma variedade de outras aplicações industriais.[002] The present invention relates to mannanases from Paenibacillus sp., polynucleotides encoding the mannanases, compositions containing the mannanases and methods for using the same. The compositions containing mannanases are suitable for use as detergents and for cleaning fabrics and hard surfaces, as well as in a variety of other industrial applications.

REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS APRESENTADA ELETRONICAMENTEREFERENCE TO ELECTRONICALLY PRESENTED SEQUENCE LISTING

[003] O conteúdo da listagem de sequências enviadoeletronicamente com o pedido como um arquivo de texto ASCII (Nome: NB40843WOPCT_ST25; Tamanho: 321KB; Criado em: 3 de novembro de 2016) faz parte do pedido e é incorporado ao mesmo a título de referência em sua totalidade.[003] The contents of the sequence listing submitted electronically with the application as an ASCII text file (Name: NB40843WOPCT_ST25; Size: 321KB; Created: November 3, 2016) form part of the application and are incorporated herein by reference in their entirety.

[004] As enzimas mananase, o que inclui endo-β-mananases,foram empregadas em limpeza com detergente para a remoção de manchas de goma através da hidrolisação de mananos. Uma variedade de mananos é encontrada na natureza, tais como, por exemplo, manano linear, glucomanano, galactomanano e glucogalactomanano. Cada manano é compreendido por polissacarídeos que contêm uma cadeia principal ligada a β-1,4 de resíduos de manose que podem ser substituídos até 33% por resíduos de glicose (Yeoman et al., Adv Appl Microbiol, 70:1, 2010, Elsevier). Em galactomananos ouglucogalactomananos, resíduos de galactose são ligados em ligações alfa-1,6 à cadeia principal de manano (Moreira e Filho, Appl Microbiol Biotechnol, 79:165, 2008). Desse modo, a hidrólise de manano a seus açúcares componentes exige endo-1,4-β-mananases que hidrolisam as ligações de cadeia principal para gerar mano-oligossacarídeos de cadeia curta que são adicionalmente degradados para monossacarídeos por 1,4-β-manosidases.[004] Mannanase enzymes, which include endo-β-mannanases, have been employed in detergent cleaning to remove gum stains through the hydrolysis of mannans. A variety of mannans are found in nature, such as linear mannan, glucomannan, galactomannan, and glucogalactomannan. Each mannan is comprised of polysaccharides containing a β-1,4-linked backbone of mannose residues that can be replaced up to 33% by glucose residues (Yeoman et al., Adv Appl Microbiol, 70:1, 2010, Elsevier). In galactomannans or glucogalactomannans, galactose residues are linked in alpha-1,6-linkages to the mannan backbone (Moreira and Filho, Appl Microbiol Biotechnol, 79:165, 2008). Thus, hydrolysis of mannan to its component sugars requires endo-1,4-β-mannanases that hydrolyze the main chain bonds to generate short-chain mannan-oligosaccharides that are further degraded to monosaccharides by 1,4-β-mannosidases.

[005] Embora as mananases, tais como, por exemplo, endo-β-mananases sejam conhecidas na técnica de enzimas industriais, ainda existe uma necessidade de mananases adicionais que sejam adequadas para condições e usos particulares.[005] Although mannanases, such as, for example, endo-β-mannanases are known in the industrial enzyme art, there is still a need for additional mannanases that are suitable for particular conditions and uses.

[006] Variantes, composições e métodos aqui revelados sereferem a uma mananase recombinante ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo gerado através de técnicas de biologia molecular convencionais (consulte, por exemplo, Sambrook et al, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press). Outra modalidade se refere a uma variante de mananase, um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo da mesma que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 1, 2, 3, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 61, 62, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 93, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 135, 136, 139, 143, 150, 167, 168, 184, 213,214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 283, e 284, e (ii) uma inserção na posição 298; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Uma modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 19, 38, 59, 67, 68, 71, 74, 97, 129, 167, 168, 184, 225, 228, 235, 242, 244, 258, e 261; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[006] Variants, compositions and methods disclosed herein relate to a recombinant mannanase or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof generated by conventional molecular biology techniques (see, for example, Sambrook et al, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press). Another embodiment relates to a mannanase variant, a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from 1, 2, 3, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 61, 62, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 93, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 135, 136, 139, 143, 150, 167, 168, 184, 213,214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 283, and 284, and (ii) an insertion at position 298; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. A further embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from 19, 38, 59, 67, 68, 71, 74, 97, 129, 167, 168, 184, 225, 228, 235, 242, 244, 258, and 261; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[007] Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variantede mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1X, A2X, T3X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, Y61X, T62X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, K93X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X, S135X, A136X, D139X, K143X, N150X, F167X, P168X, Q184X, N213X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, D283X, e T284X e (ii) uma inserção na posiçãoZ298.01X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre P19X, T38X, S59X, N67X, A68X, N71X, N74X, N97X, Y129X, F167X, P168X, Q184X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, e N261X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[007] Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1X, A2X, T3X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, Y61X, T62X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, K93X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X, S135X, A136X, D139X, K143X, N150X, F167X, P168X, Q184X, N213X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, D283X, and T284X and (ii) an insertion at position Z298.01X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from P19X, T38X, S59X, N67X, A68X, N71X, N74X, N97X, Y129X, F167X, P168X, Q184X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, and N261X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[008] Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variantede mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X1V, X1L, X2S, X3R, X4S, X6E, X10T, X10S, X19E, X28A, X28S, X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X61W, X62E, X63R, X63L, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74E, X74S, X75L, X78D, X78H, X80T, X82M, X93R, X97D, X97L, X103I, X111D, X111S, X124V, X129M, X131A, X135L, X136L, X139M, X143Q, X143R, X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X283S, X284A, e X284E, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X19E, X38E, X59V, X67D, X68S, X71D, X74E, X74S, X97D, X97L, X129M, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X261Q, e X261R; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[008] Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X1V, X1L, X2S, X3R, X4S, X6E, X10T, X10S, X19E, X28A, X28S, X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X61W, X62E, X63R, X63L, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74E, X74S, X75L, X78D, X78H, X80T, X82M, X93R, X97D, X97L, X103I, X111D, X111S, X124V, X129M, X131A, X135L, X136L, X139M, X143Q, X143R, X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X283S, X284A, and X284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; where X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from X19E, X38E, X59V, X67D, X68S, X71D, X74E, X74S, X97D, X97L, X129M, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X261Q, and X261R; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[009] Outra modalidade adicional se refere a uma variante demananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1V, M1L, A2S, T3R, G4S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, Y61W, T62E, K63R, K63L, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, K93R, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M,T131A, T135L, A136L, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, D283S, T284A, e T284E, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre P19E, T38E, S59D, S59V, N67D, A68S, N71D, N74E, N74S, N97D, N97L, Y129M, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, N261Q, e N261R, em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[009] Another additional embodiment relates to a demannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1V, M1L, A2S, T3R, G4S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, Y61W, T62E, K63R, K63L, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, K93R, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M, T131A, T135L, A136L, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, D283S, T284A, and T284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from P19E, T38E, S59D, S59V, N67D, A68S, N71D, N74E, N74S, N97D, N97L, Y129M, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, N261Q, and N261R, wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0010] Outra modalidade se refere a uma variante de mananase, um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 129-244, 129-143-244, 38-258, 38-143-258, 19-184, 19-143-184, 97-225, 97-143-225, 60-61, 67-168, 67-143-168, 63-71, 63-71-143, 228-235, e 143-228-235; (ii) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre Y129X-K244X, Y129X-K143X-K244X. T38X-S258X, T38X-K143X-S258X, P19X-Q184X, P19X-K143X-Q184X, N97X-G225X,N97X-K143X-G225X, L60X-Y61X, N67X-P168X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X, K63X-N71X-K143X, T228X-Y235X, e K143X-T228X-Y235X, em que X é qualquer aminoácido; (iii) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X129M-X244L, X129M- X143Q-X244L, X38E-X258D, X38E-X143Q-X258D, X19E-X184D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X184L, X19E-X143Q-X184L, X97DX225C, X97D-X143Q-X225C, X97D-X225P, X97D-X143Q-X225P, X60Q-X61W, X67D-X168S, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D, X63L- X71D-X143Q, X63R-X71D, X63R-X71D-X143Q, X228V-X235L, eX143Q-X228V-X235L, em que X é qualquer aminoácido; e (iv) Y129M- K244L, Y129M-K143Q-K244L, T38E-S258D, T38E-K143Q-S258D,P19E-Q184D, P19E-K143Q-Q184D, P19E-Q184L, P19E-K143Q-Q184L, N97D-G225C, N97D-K143Q-G225C, L60Q-Y61W, N97D-G225P, N97D-K143Q-G225P, N67D-P168S, N67D-K143Q-P168S,K63L-N71D, K63L-N71D-K143Q, K63R-N71D, K63R-N71D-K143Q,T228V-Y235L, e K143Q-T228V-Y235L; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0010] Another embodiment relates to a mannanase variant, a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from 129-244, 129-143-244, 38-258, 38-143-258, 19-184, 19-143-184, 97-225, 97-143-225, 60-61, 67-168, 67-143-168, 63-71, 63-71-143, 228-235, and 143-228-235; (ii) one or more substitutions at one or more positions selected from Y129X-K244X, Y129X-K143X-K244X, T38X-S258X, T38X-K143X-S258X, P19X-Q184X, P19X-K143X-Q184X, N97X-G225X, N97X-K143X-G225X, L60X-Y61X, N67X-P168X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X, K63X-N71X-K143X, T228X-Y235X, and K143X-T228X-Y235X, where X is any amino acid; (iii) one or more substitutions at one or more positions selected from X129M-X244L, X129M-X143Q-X244L, X38E-X258D, X38E-X143Q-X258D, X19E-X184D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X184L, X19E-X143Q-X184L, X97DX225C, X97D-X143Q-X225C, X97D-X225P, X97D-X143Q-X225P, X60Q-X61W, X67D-X168S, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D, X63L- X71D-X143Q, X63R-X71D, X63R-X71D-X143Q, X228V-X235L, and X143Q-X228V-X235L, where X is any amino acid; and (iv) Y129M-K244L, Y129M-K143Q-K244L, T38E-S258D, T38E-K143Q-S258D, P19E-Q184D, P19E-K143Q-Q184D, P19E-Q184L, P19E-K143Q-Q184L, N97D-G225C, N97D-K143Q-G225C, L60Q-Y61W, N97D-G225P, N97D-K143Q-G225P, N67D-P168S, N67D-K143Q-P168S,K63L-N71D, K63L-N71D-K143Q, K63R-N71D, K63R-N71D-K143Q,T228V-Y235L, and K143Q-T228V-Y235L; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0011] Uma modalidade adicional se refere a uma variante demananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D- N261R; N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R;P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D- Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P; N10T-T38E-S59V-L60Q- K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L- A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L- S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D- V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E- T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D- Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M- K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E- N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q- D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E- K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L- N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M- A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M- D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S- Q184L-G225C-K244L; P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D- G259P; K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-G259P; ou P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S- Q184L-K244L-S258D-N261R, em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0011] An additional embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R;P19E-T3 8E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D- Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P; N10T-T38E-S59V-L60Q- K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L- A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D- V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E- T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D- Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y12 9M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M- K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111 D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E- N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q- D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E- K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L- N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M- A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M- D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K 143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S- Q184L-G225C-K244L; P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-G259P; or P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R, wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0012] Outra modalidade se refere a um Clado NDL de mananasesque compreende um ou mais variantes de mananase aqui descritos ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo, em que a dita variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma compreende um ou mais motivos selecionados dentre a: motivo WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) nas posições 31-40, em que Xa é F ou Y e X é qualquer aminoácido ("Motivo 1"); motivo LDXXXGPXGXLT (SEQ ID NO:16) nas posições 263-274, em que X é qualquer aminoácido "Motivo de Deleção 1"); motivo LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) nas posições 263-274, em que Xi é um M ou L, X2 é N, A ou S e X3 é S, T ou N "Motivo de Deleção 2"); e motivo LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID No:18) nas posições 263-274 "Motivo de Deleção 3"), em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. O Clado NDL de mananases é descrito de maneira mais completa no Pedido de Patente Internacional n° PCT/US15/40057, depositado em 10 de julho de 2015, subsequentemente publicado como WO2016/007929.[0012] Another embodiment relates to a mannanase NDL Clade comprising one or more mannanase variants described herein or a recombinant polypeptide or active fragment thereof, wherein said variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof comprises one or more motifs selected from: motif WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) at positions 31-40, wherein Xa is F or Y and X is any amino acid ("Motif 1"); motif LDXXXGPXGXLT (SEQ ID NO:16) at positions 263-274, wherein X is any amino acid "Deletion Motif 1"); motif LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) at positions 263-274, wherein Xi is an M or L, X2 is N, A or S, and X3 is S, T or N "Deletion Motif 2"); and LDM/LATGPN/AGS/TLT motif (SEQ ID No:18) at positions 263-274 "Deletion Motif 3"), wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. The NDL Clade of mannanases is more fully described in International Patent Application No. PCT/US15/40057, filed July 10, 2015, subsequently published as WO2016/007929.

[0013] Em outras modalidades, a variante de mananase é umaendo-β-mananase. Em algumas modalidades, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, tem pelo menos 70% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13. Em algumas modalidades, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, tem atividade de mananase, como, por exemplo, atividade em galactomanano de goma de alfarrobeira ou glucomanano de konjac. Em algumas modalidades, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, tem atividade de mananase na presença de um tensoativo. Em algumas modalidades, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, retém pelo menos 10%, 20%, 30%, 40% ou 50% de atividade de mananase residual a uma temperatura de cerca de 40°C a cerca de 70°C, cerca de 45°C a cerca de 65°C, cerca de 50°C a cerca de 60°C, cerca de 60°C a cerca de 70°C ou cerca de 56°C por um período de pelo menos 5 minutos.[0013] In other embodiments, the mannanase variant is an endo-β-mannanase. In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof has at least 70% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13. In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof has mannanase activity, such as activity on locust bean gum galactomannan or konjac glucomannan. In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof has mannanase activity in the presence of a surfactant. In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof, retains at least 10%, 20%, 30%, 40%, or 50% residual mannanase activity at a temperature of about 40°C to about 70°C, about 45°C to about 65°C, about 50°C to about 60°C, about 60°C to about 70°C, or about 56°C for a period of at least 5 minutes.

[0014] Em algumas modalidades, a variante de mananase,polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, tem atividade de limpeza em uma composição detergente. Em algumas modalidades, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, tem atividade de mananase na presença de uma protease. Em algumas modalidades, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, retém pelo menos 50% de atividade de mananase na presença de uma protease e/ou um tensoativo por cerca de 15 ou mais dias de ou cerca de 15 a cerca de 40 dias. Em algumas modalidades, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, tem a capacidade de hidrolisar um substrato selecionado do grupo que consiste em goma guar, goma de alfarrobeira e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, não compreende adicionalmente um módulo de ligação de carboidrato.[0014] In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof has cleaning activity in a detergent composition. In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof has mannanase activity in the presence of a protease. In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof retains at least 50% mannanase activity in the presence of a protease and/or a surfactant for about 15 or more days of or about 15 to about 40 days. In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof has the ability to hydrolyze a substrate selected from the group consisting of guar gum, locust bean gum, and combinations thereof. In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof does not further comprise a carbohydrate binding module.

[0015] Outra modalidade se refere a composições de limpeza quecompreendem um ou mais variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos aqui descritos. Em algumas modalidades, a composição de limpeza compreende adicionalmente um tensoativo. Em algumas modalidades, o tensoativo é um tensoativo iônico. Em algumas modalidades, o tensoativo iônico é selecionado do grupo que consiste em um tensoativo aniônico, um tensoativo catiônico, um tensoativo zwitteriônico e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, a composição compreende adicionalmente uma enzima selecionado do grupo que consiste em acil transferases, amilases, alfa-amilases, beta-amilases, alfa- galactosidases, arabinases, arabinosidases, aril esterases, beta-galactosidases, beta-glucanases, carrageenases, catalases, celobio- hidrolases, celulases, condroitinases, cutinases, endo-beta-1, 4- glucanases, endo-beta-mananases, exo-beta-mananases, esterases, exo-mananases, galactanases, glucoamilases, hemicelulases, hialuronidases, queratinases, lacases, lactases, ligninases, lipases, enzimas lipolíticas, lipoxigenases, mananases, metaloproteases, oxidases, pectato liases, pectina acetil esterases, pectinases, pentosanases, peridrolases, peroxidases, fenoloxidases, fosfatases, fosfolipases, fitases, poligalacturonases, proteases, pululanases, redutases, ramnogalacturonases, beta-glucanases, tanases, transglutaminases, xilano acetil-esterases, xilanases, xiloglucanases, xilosidases e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, a composição compreende adicionalmente uma protease e uma amilase. Em algumas modalidades, a composição de limpeza é selecionada dentre um detergente para lavagem de roupas, um detergente amaciante de tecido, um detergente para lavagem de louças e um detergente para limpeza de superfícies rígidas. Em algumas modalidades, a composição é uma composição granular, em pó, sólida, em barra, líquida, em tablete, em gel, em pasta, em espuma, em folha ou em dose unitária. Em algumas modalidades, a composição de limpeza está sob uma forma selecionada dentre um líquido, um pó, um sólido granulado e um tablete.[0015] Another embodiment relates to cleaning compositions comprising one or more mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein. In some embodiments, the cleaning composition further comprises a surfactant. In some embodiments, the surfactant is an ionic surfactant. In some embodiments, the ionic surfactant is selected from the group consisting of an anionic surfactant, a cationic surfactant, a zwitterionic surfactant, and combinations thereof. In some embodiments, the composition further comprises an enzyme selected from the group consisting of acyl transferases, amylases, alpha-amylases, beta-amylases, alpha-galactosidases, arabinases, arabinosidases, aryl esterases, beta-galactosidases, beta-glucanases, carrageenanses, catalases, cellobiohydrolases, cellulases, chondroitinases, cutinases, endo-beta-1,4-glucanases, endo-beta-mannanases, exo-beta-mannanases, esterases, exo-mannanases, galactanases, glucoamylases, hemicellulases, hyaluronidases, keratinases, laccases, lactases, ligninases, lipases, lipolytic enzymes, lipoxygenases, mannanases, metalloproteases, oxidases, pectate lyases, pectin acetyl esterases, pectinases, pentosanases, perhydrolases, peroxidases, phenoloxidases, phosphatases, phospholipases, phytases, polygalacturonases, proteases, pullulanases, reductases, rhamnogalacturonases, beta-glucanases, tannases, transglutaminases, xylan acetyl esterases, xylanases, xyloglucanases, xylosidases, and combinations thereof. In some embodiments, the composition further comprises a protease and an amylase. In some embodiments, the cleaning composition is selected from a laundry detergent, a fabric softener detergent, a dishwashing detergent, and a hard surface cleaning detergent. In some embodiments, the composition is a granular, powder, solid, bar, liquid, tablet, gel, paste, foam, sheet, or unit dose composition. In some embodiments, the cleaning composition is in a form selected from a liquid, a powder, a granular solid, and a tablet.

[0016] Modalidades adicionais se referem a um método de limpezaque compreende colocar uma superfície ou item que compreende uma sujeira ou mancha que compreende manano em contato com uma (i) variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito ou (ii) uma composição de limpeza aqui descrita, em que o manano contido na dita sujeira ou mancha é hidrolisado.[0016] Additional embodiments relate to a cleaning method comprising placing a surface or item comprising a soil or stain comprising mannan in contact with a (i) mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein or (ii) a cleaning composition described herein, wherein the mannan contained in said soil or stain is hydrolyzed.

[0017] Algumas modalidades se referem ainda a ácidos nucleicosou ácidos nucleicos isolados que codificam as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos aqui descritos. Modalidades adicionais se referem a um vetor de expressão que compreende um ácido nucleico ou ácido nucleico isolado aqui descrito ligado de maneira operacional a uma sequência reguladora. Modalidades adicionais se referem a uma célula hospedeira que compreende um vetor de expressão aqui descrito ou ácidos nucleicos que codificam as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos aqui descritos. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é uma célula bacteriana ou uma célula fúngica. Modalidades adicionais se referem a métodos de produção de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito que compreende: transformar de maneira estável uma célula hospedeira com um vetor de expressão que compreende um polinucleotídeo que codificam variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma; cultivar a célula hospedeira transformada sob condições adequadas para produzir uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma; e recuperar a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma.[0017] Some embodiments further relate to nucleic acids or isolated nucleic acids encoding the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein. Additional embodiments relate to an expression vector comprising a nucleic acid or isolated nucleic acid described herein operatively linked to a regulatory sequence. Additional embodiments relate to a host cell comprising an expression vector described herein or nucleic acids encoding the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein. In some embodiments, the host cell is a bacterial cell or a fungal cell. Additional embodiments relate to methods of producing a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein comprising: stably transforming a host cell with an expression vector comprising a polynucleotide encoding a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof; culturing the transformed host cell under conditions suitable to produce a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof; and recovering the mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOSDESCRIPTION OF DRAWINGS

[0018] A Figura 1 mostra o desempenho de limpeza de mananasePspMan138 e de mananase comercial (MANNAWAY 4L®, Novozymes AS, Dinamarca) em Goma de Alfarrobeira (CFT C-S-73) a 16oC em Detergente Líquido para Lavagem de Roupas.[0018] Figure 1 shows the cleaning performance of mannanasePspMan138 and commercial mannanase (MANNAWAY 4L®, Novozymes AS, Denmark) on Locust Bean Gum (CFT C-S-73) at 16oC in Liquid Laundry Detergent.

[0019] As Figuras 2A-E mostram o alinhamento MUSCLE dasformas maduras de mananases do Clado NDL incluindo mananases PspMan138 e PspMan4 com as sequências de várias formas maduras de outra mananase incluindo BciMan1,Bac.sp._BAD99527.1(1WKY_A), B_nealsonii_AGU71466.1, Bac.sp_WO2015022428-0015 e B. lentus_WO2014100018-0002, cujo alinhamento inclui uma caixa ao redor dos motivos de Clado NDL nas posições 31-40 e 263-274.[0019] Figures 2A-E show the MUSCLE alignment of the mature forms of NDL Clade mannanases including mannanases PspMan138 and PspMan4 with the sequences of several mature forms of other mannanase including BciMan1, Bac.sp._BAD99527.1(1WKY_A), B_nealsonii_AGU71466.1, Bac.sp_WO2015022428-0015, and B. lentus_WO2014100018-0002, whose alignment includes a box around the NDL Clade motifs at positions 31-40 and 263-274.

[0020] A Figura 3 mostra uma árvore filogenética para aminoácidosdas formas maduras de várias mananases que foram construídas usando o programa de construção Geneious Tree e inclui várias mananases do clado NDL incluindo as mananases PspMan138 e PspMan4.[0020] Figure 3 shows a phylogenetic tree for amino acids of the mature forms of several mannanases that was constructed using the Geneious Tree building program and includes several mannanases from the NDL clade including the mannanases PspMan138 and PspMan4.

[0021] A Figura 4 mostra o desempenho de limpeza de mananasePspMan118 e de mananase comercial (MANNAWAY® 4L, Novozymes AS, Dinamarca) em Goma de Alfarrobeira (CFT C-S-73) a 16oC em Detergente em Pó para Lavagem de Roupas.[0021] Figure 4 shows the cleaning performance of mannanasePspMan118 and commercial mannanase (MANNAWAY® 4L, Novozymes AS, Denmark) on Locust Bean Gum (CFT C-S-73) at 16oC in Powder Laundry Detergent.

[0022] A Figura 5 retrata uma comparação estrutural da mananase1WKY_A com a variante de mananase PspMan118, sendo que a cadeia principal da mananase 1WKY_A é mostrada em cinza e a cadeia principal da mananase PspMan118 é mostrada em preto.[0022] Figure 5 depicts a structural comparison of mannanase1WKY_A with the mannanase variant PspMan118, with the mannanase 1WKY_A backbone shown in gray and the mannanase PspMan118 backbone shown in black.

[0023] A Figura 6 retrata uma comparação estrutural das estruturasde PspMan118 e 1WKY_A na retrata dos motivos de NDL e Deleção de PspMan118.[0023] Figure 6 depicts a structural comparison of the structures of PspMan118 and 1WKY_A in depiction of the NDL and Deletion motifs of PspMan118.

[0024] A Figura 7A retrata uma comparação do enovelamento decadeia principal das mananases de PspMan148 (preto) e 2WHL_A (cinza claro) com a porção química de manotriosila ligada a 2WHL_A mostrada como bastões cinza (para indicar a localização relativa do local de ligação de substrato) e as cadeias laterais das dezoito substituições de aminoácido presentes em PspMan148 mostrado como figuras de bastões pretos.[0024] Figure 7A depicts a comparison of the backbone fold of the PspMan148 (black) and 2WHL_A (light gray) mannanases with the mannotriosyl moiety attached to 2WHL_A shown as gray sticks (to indicate the relative location of the substrate binding site) and the side chains of the eighteen amino acid substitutions present in PspMan148 shown as black stick figures.

[0025] A Figura 7B retrata uma comparação do enovelamento decadeia principal das mananase de PspMan148 (preto) e 2WHL_A (cinza claro) com a porção química de manotriosial ligada a 2WHL_A mostrado como bastões cinza (para indicar a localização relativa do local de ligação de substrato) e as posições das sete substituições (S30T, S59V, L60Q, K63R, T228V, S258D e N261R) em PspMan148 em torno de e próximo ao local de ligação de substrato mostrado como esferas pretas.[0025] Figure 7B depicts a comparison of the mannanase backbone folds of PspMan148 (black) and 2WHL_A (light gray) with the mannotriosial moiety bound to 2WHL_A shown as gray sticks (to indicate relative location to the substrate binding site) and the positions of the seven substitutions (S30T, S59V, L60Q, K63R, T228V, S258D, and N261R) in PspMan148 around and near the substrate binding site shown as black spheres.

[0026] A Figura 7C retrata uma comparação do enovelamento decadeia principal das mananase PspMan148 (preto) e 2WHL_A (cinza claro) com a porção química de manotriosila ligada a 2WHL_A mostrado como bastões cinzas (para indicar a localização relativa do local de ligação de substrato) e as onze substituições de superfície em PspMan148 mostradas como esferas pretas.[0026] Figure 7C depicts a comparison of the backbone fold of the mannanases PspMan148 (black) and 2WHL_A (light gray) with the mannotriosyl moiety attached to 2WHL_A shown as gray sticks (to indicate the relative location of the substrate binding site) and the eleven surface substitutions in PspMan148 shown as black spheres.

[0027] São descritas no presente documento endo-β-mananasesde Paenibacillus sp., polinucleotídeos que codificam tais endo-β- mananases, composições de limpeza contendo tais mananases e métodos de uso dos mesmos. Em uma modalidade, as endo-β- mananases de Paenibacillus sp. descritas no presente documento têm atividade de glicosil hidrolase e/ou são estáveis na presença de uma composição de limpeza e/ou protease. Esses recursos das endo-β- mananases descritas no presente documento fazem com que as mesmas sejam bem adequadas para uso em uma variedade de aplicações de limpeza e outras aplicações industriais, por exemplo, onde a enzima pode hidrolisar mananos na presença do tensoativo, protease e/ou outros componentes encontrados em uma composição de detergente.[0027] Described herein are Paenibacillus sp. endo-β-mannanases, polynucleotides encoding such endo-β-mannanases, cleaning compositions containing such mannanases, and methods of using the same. In one embodiment, the Paenibacillus sp. endo-β-mannanases described herein have glycosyl hydrolase activity and/or are stable in the presence of a cleaning composition and/or protease. These features of the endo-β-mannanases described herein make them well suited for use in a variety of cleaning and other industrial applications, for example, where the enzyme can hydrolyze mannans in the presence of surfactant, protease, and/or other components found in a detergent composition.

[0028] Os termos a seguir são definidos por motivo de clareza. Ostermos e abreviações não definidos devem estar de acordo com seus significados comuns conforme usados na técnica. Por exemplo, termos técnicos e científicos não definidos no presente documento têm o mesmo significado como comumente entendido por um indivíduo versado na técnica à qual essa revelação pertence (Consultar, por exemplo, Singleton and Sainsbury, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2a Edição, John Wiley and Sons, NY 1994; e Hale and Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology, Harper Perennial, NY 1991).[0028] The following terms are defined for clarity. Undefined terms and abbreviations should be given their ordinary meanings as used in the art. For example, technical and scientific terms not defined herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this disclosure belongs (See, e.g., Singleton and Sainsbury, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2nd Edition, John Wiley and Sons, NY 1994; and Hale and Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology, Harper Perennial, NY 1991).

[0029] Os termos singulares “um/uma” e “o/a” incluem a referênciaplural a não ser que o contexto indique claramente de outro modo.[0029] The singular terms “a” and “the” include the plural reference unless the context clearly indicates otherwise.

[0030] Os termos "manano endo-1,4-β-manosidase","endo-1,4-β- mananase", "endo-β-1,4-mannase", "β-mananase B", "β-1, 4-manano 4- mananohidrolase", "endo-β-mananase", "β-D-mananase", "1,4-β-D- manano manano-hidrolase" ou "endo-β-mananase" (EC 3.2.1.78) se referem a uma enzima com capacidade para hidrólise aleatória de ligações 1,4-β-D-manosidicas em mananos, galactomananos e glucomananos. Endo-1,4-β-mananases são membros de diversas famílias de glicosil hidrolases, o que inclui GH26 e GH5. Em particular, endo-β-mananases constituem um grupo de polissacarídeos que degradam mananos e indicam enzimas que têm capacidade para clivar cadeias de poliose que contêm unidade de manose (isto é, têm capacidade para clivar ligações glicosídicas em mananos, glucomananos, galactomananos e galactogluco-mananos). As "endo-β- mananases" descritas no presente documento podem possuir atividades enzimáticas adicionais (por exemplo, atividades de endo-1,4- β-glucanase, 1,4-β-manosidase e celodextrinase).[0030] The terms "mannan endo-1,4-β-mannosidase", "endo-1,4-β-mannanase", "endo-β-1,4-mannase", "β-mannanase B", "β-1, 4-mannan 4-mannan hydrolase", "endo-β-mannanase", "β-D-mannanase", "1,4-β-D-mannan mannan hydrolase" or "endo-β-mannanase" (EC 3.2.1.78) refer to an enzyme capable of random hydrolysis of 1,4-β-D-mannosidic linkages in mannans, galactomannans and glucomannans. Endo-1,4-β-mannanases are members of several families of glycosyl hydrolases, which include GH26 and GH5. In particular, endo-β-mannanases constitute a group of polysaccharide degrading mannans and indicate enzymes that have the ability to cleave polyose chains containing mannose units (i.e., they have the ability to cleave glycosidic bonds in mannans, glucomannans, galactomannans and galactoglucomannans). The "endo-β-mannanases" described herein may possess additional enzymatic activities (e.g., endo-1,4-β-glucanase, 1,4-β-mannosidase and cellodextrinase activities).

[0031] Os termos "mananase", "enzima manosídica", "enzimamanolítica", "enzima de mananase", "polipeptídeos de mananase" ou "proteínas de mananase" se referem a uma enzima, polipeptídeo ou proteína que podem degradar manano. A enzima mananase pode, por exemplo, ser uma endo-β-mananase, uma exo-β-mananase ou uma glicosil hidrolase. Conforme usado no presente documento, a atividade de mananase pode ser determinada de acordo com qualquer procedimento conhecido na técnica (Consultar, por exemplo, Lever, Anal. Biochem, 47:273, 1972; Eriksson and Winell, Acta Chem. Scand., (1968), 22:1924; US 6.602.842; e WO95/35362A1).[0031] The terms "mannanase", "mannoside enzyme", "mannanolytic enzyme", "mannanase enzyme", "mannanase polypeptides" or "mannanase proteins" refer to an enzyme, polypeptide or protein that can degrade mannan. The mannanase enzyme may, for example, be an endo-β-mannanase, an exo-β-mannanase or a glycosyl hydrolase. As used herein, mannanase activity may be determined according to any procedure known in the art (See, for example, Lever, Anal. Biochem, 47:273, 1972; Eriksson and Winell, Acta Chem. Scand., (1968), 22:1924; US 6,602,842; and WO95/35362A1).

[0032] Conforme usado no presente documento, "mananos" sãopolissacarídeos que têm uma cadeia principal composta de manose ligada a β-1,4; "glucomananos" são polissacarídeos que têm uma cadeia principal de manose e glicose ligados a β-1,4 mais ou menos regularmente alternados; "galactomananos" e "galactoglucomananos" são mananos e glucomananos com ramificações laterais de galactose ligadas a alfa-1,6. Esses compostos podem ser acetilados. A degradação de galactomananos e galactoglucomananos é facilitada por remoção completa ou parcial das ramificações laterais de galactose. Adicionalmente, a degradação dos mananos, glucomananos, galactomananos e galactoglucomananos acetilados é facilitada por desacetilação completa ou parcial. Os grupos acetila podem ser removidos por álcali ou por manano acetilesterases. Os oligômeros que são liberados das mananases ou por uma combinação de mananases e alfa-galactosidase e/ou manano acetil esterases podem ser adicionalmente degradados para liberar maltose por β-manosidase e/ou β-glucosidase.[0032] As used herein, "mannans" are polysaccharides having a backbone composed of β-1,4-linked mannose; "glucomannans" are polysaccharides having a backbone of more or less regularly alternating β-1,4-linked mannose and glucose; "galactomannans" and "galactoglucomannans" are mannans and glucomannans with alpha-1,6-linked galactose side branches. These compounds may be acetylated. Degradation of galactomannans and galactoglucomannans is facilitated by complete or partial removal of the galactose side branches. Additionally, degradation of acetylated mannans, glucomannans, galactomannans and galactoglucomannans is facilitated by complete or partial deacetylation. The acetyl groups may be removed by alkali or by mannan acetylesterases. Oligomers that are released from mannanases or by a combination of mannanases and alpha-galactosidase and/or mannan acetyl esterases can be further degraded to release maltose by β-mannosidase and/or β-glucosidase.

[0033] O termo "modificação” se refere a qualquer mudança oualteração em uma sequência de aminoácidos, o que inclui a substituição de um aminoácido na posição identificada da sequência de aminoácidos de interesse por um aminoácido que é diferente do aminoácido inicial, deleção de um aminoácido na posição identificada da sequência de aminoácidos de interesse, inserção de um aminoácido na posição identificada da sequência de aminoácidos de interesse, substituição de uma cadeia lateral de aminoácido na sequência de aminoácidos de interesse e/ou modificação química da sequência de aminoácidos de interesse.[0033] The term "modification" refers to any change or alteration in an amino acid sequence, which includes the replacement of an amino acid at the identified position of the amino acid sequence of interest with an amino acid that is different from the starting amino acid, deletion of an amino acid at the identified position of the amino acid sequence of interest, insertion of an amino acid at the identified position of the amino acid sequence of interest, replacement of an amino acid side chain in the amino acid sequence of interest, and/or chemical modification of the amino acid sequence of interest.

[0034] Os termos "atividade catalítica" ou "atividade" descrevemquantitativamente a conversão de um determinado substrato em condições de reação definidas. O termo "atividade residual" é definido como a razão da atividade catalítica da enzima em um determinado conjunto de condições para a atividade catalítica em um conjunto diferente de condições. O termo "atividade específica" descreve quantitativamente a atividade catalítica por quantidade de enzima em condições de reação definidas.[0034] The terms "catalytic activity" or "activity" quantitatively describe the conversion of a given substrate under defined reaction conditions. The term "residual activity" is defined as the ratio of the catalytic activity of the enzyme under a given set of conditions to the catalytic activity under a different set of conditions. The term "specific activity" quantitatively describes the catalytic activity per amount of enzyme under defined reaction conditions.

[0035] O termo "estabilidade de pH" descreve a habilidade de umaproteína para suportar uma exposição limitada aos valores de pH que desviam significativamente do pH em que sua estabilidade é ideal (por exemplo, mais de uma unidade de pH acima ou abaixo do ideal de pH), sem perder sua atividade em condições em que sua atividade é mensurável.[0035] The term "pH stability" describes the ability of a protein to withstand limited exposure to pH values that deviate significantly from the pH at which its stability is optimal (e.g., more than one pH unit above or below the pH optimum), without losing its activity under conditions where its activity is measurable.

[0036] O termo "estabilidade de detergente" se refere à estabilidadede um componente de composição de detergente especificado (tal como uma enzima hidrolítica) em uma mistura de composição de detergente.[0036] The term "detergent stability" refers to the stability of a specified detergent composition component (such as a hydrolytic enzyme) in a detergent composition mixture.

[0037] O termo "peridrolase" se refere a uma enzima comcapacidade para catalisar uma reação que resulta na formação de um perácido adequado para aplicações tais como limpeza, branqueamento e desinfecção.[0037] The term "perhydrolase" refers to an enzyme with the ability to catalyze a reaction that results in the formation of a peracid suitable for applications such as cleaning, bleaching and disinfection.

[0038] O termo "aquoso", conforme usado nas expressões"composição aquosa" e "ambiente aquoso" se refere a uma composição que é constituída de pelo menos 50% de água. Uma composição aquosa pode conter pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98% ou 99% de água.[0038] The term "aqueous" as used in the expressions "aqueous composition" and "aqueous environment" refers to a composition that is comprised of at least 50% water. An aqueous composition may contain at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98% or 99% water.

[0039] O termo "tensoativo" se refere a qualquer compostogeralmente reconhecido na técnica como tendo qualidades ativas na superfície. Tensoativos geralmente incluem compostos aniônicos, catiônicos, não iônicos e zwitteriônicos que são adicionalmente descritos no presente documento.[0039] The term "surfactant" refers to any compound generally recognized in the art as having surface-active qualities. Surfactants generally include anionic, cationic, nonionic, and zwitterionic compounds which are further described herein.

[0040] O termo "propriedade de superfície” é usado em referência àcarga eletrostática, assim como às propriedades tais como a hidrofobicidade e hidrofilicidade exibidas pela superfície de uma proteína.[0040] The term "surface property" is used in reference to the electrostatic charge, as well as properties such as hydrophobicity and hydrophilicity exhibited by the surface of a protein.

[0041] O termo "estabilidade de quelante" se refere a endo-β-mananases da presente revelação que retêm uma quantidade específica de atividade enzimática durante um período de tempo em condições prevalecentes durante o processo manosídico, hidrolisante, de limpeza ou outros processos revelados no presente documento, por exemplo, enquanto expostas a ou em contato com agentes quelantes. Em algumas modalidades, a mananase retém pelo menos cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 92%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98% ou cerca de 99% de atividade de mananase após o contato com um agente quelante durante um determinado período de tempo, por exemplo, pelo menos cerca de 10 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 100 minutos, etc.[0041] The term "chelator stability" refers to endo-β-mannanases of the present disclosure that retain a specific amount of enzymatic activity over a period of time under conditions prevailing during the mannosidic, hydrolyzing, cleaning or other processes disclosed herein, for example, while exposed to or in contact with chelating agents. In some embodiments, the mannanase retains at least about 50%, about 60%, about 70%, about 75%, about 80%, about 85%, about 90%, about 92%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% mannanase activity after contact with a chelating agent for a certain period of time, e.g., at least about 10 minutes, about 20 minutes, about 40 minutes, about 60 minutes, about 100 minutes, etc.

[0042] Os termos "estabilidade térmica" e "termoestável" se referea mananases que retêm uma quantidade especificada depois da exposição a temperaturas elevadas durante um período de tempo em condições prevalecentes durante os processos manosídico, hidrolisante, de limpeza e outros processos, por exemplo, enquanto expostas a temperaturas elevadas. Em algumas modalidades, a mananase retém pelo menos cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 92%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98% ou cerca de 99% de atividade de mananase após a exposição a temperaturas elevadas, por exemplo, pelo menos cerca de 50 °C, cerca de 55 °C, cerca de 60 °C, cerca de 65 °C ou cerca de 70 °C, durante um determinado período de tempo, por exemplo, pelo menos cerca de 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 20 minutos, 30 minutos, 40 minutos, 50 minutos, 60 minutos, 120 minutos, 180 minutos, 240 minutos, 300 minutos, etc.[0042] The terms "thermal stability" and "thermostable" refer to mannanases that retain a specified amount after exposure to elevated temperatures for a period of time under conditions prevailing during mannosidic, hydrolyzing, cleaning and other processes, for example, while exposed to elevated temperatures. In some embodiments, the mannanase retains at least about 50%, about 60%, about 70%, about 75%, about 80%, about 85%, about 90%, about 92%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% of mannanase activity after exposure to elevated temperatures, e.g., at least about 50 °C, about 55 °C, about 60 °C, about 65 °C, or about 70 °C, for a given period of time, e.g., at least about 5 minutes, 10 minutes, 15 minutes, 20 minutes, 30 minutes, 40 minutes, 50 minutes, 60 minutes, 120 minutes, 180 minutes, 240 minutes, 300 minutes, etc.

[0043] O termo "atividade de limpeza" se refere ao desempenho delimpeza alcançado por uma endo-β-mananase em condições prevalecentes durante os processos manosídico, hidrolisante, de limpeza e outros processos relevados no presente documento. Em algumas modalidades, o desempenho de limpeza é determinado pela aplicação de vários arranjos de limpeza relacionados a manchas sensíveis à enzima oriundas de produtos alimentícios, agentes domésticos ou produtos de cuidados pessoais. Algumas dessas manchas incluem, por exemplo, sorvete, ketchup, molho barbecue, maionese, sopas, achocolatado, pudim de chocolate, sobremesas congeladas, xampu, loção corporal, produtos de proteção solar, pasta dental, farinha de semente de alfarroba ou guar conforme determinado por várias metodologias cromatográfica, espectrofotométrica ou outras metodologias quantitativas após a submissão das manchas a condições de lavagem padrão. Ensaios exemplificativos incluem, mas sem limitação, aqueles descritos nos documentos número WO99/34011, US 6.605.458 e US 6.566.114, assim como, aqueles métodos descritos nos Exemplos.[0043] The term "cleaning activity" refers to the cleaning performance achieved by an endo-β-mannanase under conditions prevailing during the mannosidic, hydrolyzing, cleaning and other processes disclosed herein. In some embodiments, the cleaning performance is determined by applying various cleaning arrangements related to enzyme-sensitive stains from food products, household cleaners or personal care products. Some such stains include, for example, ice cream, ketchup, barbecue sauce, mayonnaise, soups, chocolate milk, chocolate pudding, frozen desserts, shampoo, body lotion, sunscreen products, toothpaste, carob or guar seed flour as determined by various chromatographic, spectrophotometric or other quantitative methodologies after subjecting the stains to standard washing conditions. Exemplary tests include, but are not limited to, those described in WO99/34011, US 6,605,458 and US 6,566,114, as well as those methods described in the Examples.

[0044] Os termos "superfície limpa" e "tecido limpo" se referem auma superfície ou tecido, respectivamente, que tem uma remoção de mancha percentual de pelo menos 10%, preferencialmente pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35% ou 40% de uma superfície ou tecido sujos.[0044] The terms "clean surface" and "clean fabric" refer to a surface or fabric, respectively, that has a percent stain removal of at least 10%, preferably at least 15%, 20%, 25%, 30%, 35% or 40% from a soiled surface or fabric.

[0045] O termo "quantidade eficaz" quando usado em combinaçãocom uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos se refere à quantidade de variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos necessários para alcançar o nível desejado de atividade enzimática na composição de limpeza especificada. Tais quantidades eficazes são prontamente determinadas por um indivíduo de habilidade comum na técnica e têm base em muitos fatores, tais como a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante particular ou fragmento ativo dos mesmos que é usado, a aplicação de limpeza, a composição específica da composição de limpeza e se uma composição líquida ou seca (por exemplo, em grânulo, barra, pó, sólida, líquida, tablete, gel, pasta, espuma, lâmina ou dose unitária) é exigida.[0045] The term "effective amount" when used in combination with a recombinant mannanase variant or polypeptide or active fragment thereof refers to the amount of recombinant mannanase variant or polypeptide or active fragment thereof required to achieve the desired level of enzymatic activity in the specified cleaning composition. Such effective amounts are readily determined by one of ordinary skill in the art and are based on many factors, such as the particular recombinant mannanase variant or polypeptide or active fragment thereof that is used, the cleaning application, the specific composition of the cleaning composition, and whether a liquid or dry composition (e.g., granule, bar, powder, solid, liquid, tablet, gel, paste, foam, sheet, or unit dose) is required.

[0046] O termo "ingrediente adjunto" quando usado em combinaçãocom uma composição de limpeza significa qualquer material líquido, sólido ou gasoso selecionado para o tipo particular de composição de limpeza desejada e a forma do produto (por exemplo, composição em líquido, grânulo, pó, barra, pasta, aspersão, tablete, gel, dose unitária, lâmina ou espuma), cujos materiais são também preferencialmente compatíveis com a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos usada na composição. Em algumas modalidades, granular composições estão em forma "compacta", enquanto em outras modalidades, as composições líquidas estão em uma forma "concentrada".[0046] The term "adjunct ingredient" when used in combination with a cleaning composition means any liquid, solid, or gaseous material selected for the particular type of cleaning composition desired and product form (e.g., liquid, granule, powder, bar, paste, spray, tablet, gel, unit dose, sheet, or foam composition), which materials are also preferably compatible with the recombinant mannanase or polypeptide variant or active fragment thereof used in the composition. In some embodiments, granular compositions are in a "packaged" form, while in other embodiments, liquid compositions are in a "concentrated" form.

[0047] Os termos "composições de limpeza" e "formulações delimpeza" se referem a misturas por adição de ingredientes químicos que encontram uso na remoção de compostos indesejados (por exemplo, sujeira ou manchas) de itens ou superfícies a serem limpas, tais como, por exemplo, tecido, louças, lentes de contato, superfícies sólidas, cabelo, pele e dentes. As composições ou formulações podem estar na forma de um líquido, gel, grânulo, pó, barra, pasta, aspersão, tablete, gel, dose unitária, lâmina ou espuma, dependendo da superfície ou item a ser limpo e a forma desejada da composição ou formulação.[0047] The terms "cleaning compositions" and "cleaning formulations" refer to mixtures containing chemical ingredients that find use in removing unwanted compounds (e.g., dirt or stains) from items or surfaces to be cleaned, such as, for example, fabric, dishes, contact lenses, solid surfaces, hair, skin and teeth. The compositions or formulations may be in the form of a liquid, gel, granule, powder, bar, paste, spray, tablet, gel, unit dose, sheet or foam, depending on the surface or item to be cleaned and the desired form of the composition or formulation.

[0048] Os termos "composição de detergente" e "formulação dedetergente" se referem a misturas de ingredientes químicos destinados para o uso em um meio de lavagem para a limpeza de objetos sujos. Composições/formulações de detergente em geral incluem pelo menos um tensoativo e podem incluir opcionalmente enzimas hidrolíticas, oxidorredutases, adjuvante técnico, agentes de branqueamento, ativadores de alvejante, agentes de oxidação negra, corantes fluorescentes, inibidores de empelotamento, agentes de mascaramento, ativadores de enzima, antioxidantes e solubilizantes.[0048] The terms "detergent composition" and "detergent formulation" refer to mixtures of chemical ingredients intended for use in a washing medium for cleaning soiled objects. Detergent compositions/formulations generally include at least one surfactant and may optionally include hydrolytic enzymes, oxidoreductases, technical adjuvant, bleaching agents, bleach activators, black oxidation agents, fluorescent dyes, caking inhibitors, masking agents, enzyme activators, antioxidants and solubilizers.

[0049] O termo "composição de lavagem de louças" se refere atodas as formas de composições o que inclui, por exemplo, granular, dose unitária e formas líquidas para limpeza de louças e talheres. Em algumas modalidades, a composição de lavagem de louças é uma composição de "lavagem de louças automática" que encontra uso em máquinas de lavagem de louças automáticas. O termo "louças" se refere a louças (por exemplo, pratos, copos, vidros, tigelas e recipientes) e talheres (por exemplo, utensílios que incluem, mas sem limitação a colheres, facas e garfos) de qualquer material, o que inclui, mas sem limitação, cerâmica, plástico, metais, porcelana, vidro e acrílico.[0049] The term "dishwashing composition" refers to all forms of compositions which include, for example, granular, unit dose, and liquid forms for cleaning dishes and cutlery. In some embodiments, the dishwashing composition is an "automatic dishwashing" composition that finds use in automatic dishwashing machines. The term "dishware" refers to dishware (e.g., plates, cups, glasses, bowls, and containers) and cutlery (e.g., utensils including, but not limited to, spoons, knives, and forks) of any material, which includes, but is not limited to, ceramics, plastics, metals, porcelain, glass, and acrylic.

[0050] O termo "branqueamento" se refere ao tratamento de ummaterial (por exemplo, tecido, lavagem de roupas, polpa, etc.) ou superfície para uma extensão de tempo suficiente e em pH apropriado e condições de temperatura para efetuar um clareamento (isto é., branqueamento) e/ou limpeza do material. Exemplos de substâncias químicas adequadas para branqueamento incluem, mas sem limitação, ClO2, H2O2, perácidos e NO2.[0050] The term "bleaching" refers to the treatment of a material (e.g., fabric, laundry, pulp, etc.) or surface for a sufficient length of time and under appropriate pH and temperature conditions to effect a lightening (i.e., bleaching) and/or cleaning of the material. Examples of suitable bleaching chemicals include, but are not limited to, ClO2, H2O2, peracids, and NO2.

[0051] O termo "desempenho de lavagem" de uma variante demananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos se refere à contribuição da variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos paro lavar que fornece desempenho de limpeza adicional à composição de detergente. O desempenho da lavagem é comparado sob condições de lavagem relevantes. O termo "condições de lavagem relevantes" é usado no presente documento para indicar as condições, particularmente temperatura de lavagem, tempo, mecânica de lavagem, concentração de bolhas de sabão, tipo de detergente e dureza da água, realmente usada nas tarefas domésticas em um segmento do mercado de detergente de louças ou roupas.[0051] The term "wash performance" of a demannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof refers to the contribution of the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof to washing that provides additional cleaning performance to the detergent composition. Wash performance is compared under relevant washing conditions. The term "relevant washing conditions" is used herein to indicate the conditions, particularly washing temperature, time, washing mechanics, soap bubble concentration, detergent type and water hardness, actually used in household tasks in a segment of the dishwashing or laundry detergent market.

[0052] Conforme usado no presente documento, o termo"desinfetar" se refere à remoção de contaminantes das superfícies, assim como a inibição ou o extermínio de micróbios nas superfícies dos itens.[0052] As used herein, the term "disinfect" refers to the removal of contaminants from surfaces, as well as the inhibition or killing of microbes on the surfaces of items.

[0053] A forma "compacta" das composições de limpeza nopresente documento é a melhor refletida por densidade e, em termos de composição, pela quantidade de sal de carga inorgânico. Os sais de carga inorgânicos são ingredientes convencionais das composições de detergente na forma de pó. Em composições de detergenteconvencionais, os sais de carga estão presentes em quantidades substanciais, tipicamente cerca de 17 a cerca de 35% em peso da composição total. Em contrapartida, em composições compactas, o sal de carga está presente em quantidades que não excedem cerca de 15% da composição total. Em algumas modalidades, o sal de carga está presente em quantidades que não excedem cerca de 10% ou, com mais preferência, cerca de 5% em peso da composição. Em algumas modalidades, os sais de carga inorgânica são selecionados dentre os sais de metal alcalino e alcalino-terroso de sulfatos e cloretos. Em algumas modalidades, um sal de carga preferencial é sulfato de sódio.[0053] The "packaged" form of the cleaning compositions herein is best reflected by density and, compositionally, by the amount of inorganic filler salt. Inorganic filler salts are conventional ingredients of detergent compositions in powder form. In conventional detergent compositions, the filler salts are present in substantial amounts, typically about 17 to about 35% by weight of the total composition. In contrast, in pack compositions, the filler salt is present in amounts not exceeding about 15% of the total composition. In some embodiments, the filler salt is present in amounts not exceeding about 10% or, more preferably, about 5% by weight of the composition. In some embodiments, the inorganic filler salts are selected from the alkali and alkaline earth metal salts of sulfates and chlorides. In some embodiments, a preferred filler salt is sodium sulfate.

[0054] O termo "tecido" se refere a, por exemplo, material tecido,costurado e não tecido, assim como fibras de poliéster e filamentos que podem ser convertidos para, por exemplo, tecidos de fios e tecidos, costurados ou não tecidos. O termo engloba material feito a partir de fibras naturais, assim como sintéticas (por exemplo, fabricadas).[0054] The term "fabric" refers to, for example, woven, stitched and nonwoven material, as well as polyester fibers and filaments that can be converted into, for example, woven, stitched or nonwoven fabrics and yarns. The term encompasses material made from natural as well as synthetic (e.g., manufactured) fibers.

[0055] Um ácido nucleico ou polinucleotídeo é "isolado" quando omesmo é pelo menos parcial ou completamente separado dos outros componentes, o que inclui, mas sem limitação, por exemplo, outras proteínas, ácidos nucleicos e células. De modo similar, um polipeptídeo, proteína ou peptídeo é "isolado" quando o mesmo é parcial ou completamente separado de outros componentes, o que inclui, mas sem limitação, por exemplo, outras proteínas, ácidos nucleicos e células. Em base molar, uma espécie isolada é mais abundante do que são outras espécies em uma composição. Por exemplo, uma espécie isolada pode compreender pelo menos cerca de 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% (em uma base molar) de todas as espécies macromoleculares presentes. De preferência, a espécie de interesse é purificada até homogeneidade essencial (isto é, espécies contaminantes não podem ser detectadas na composição por métodos de detecção convencional). A pureza e a homogeneidade podem ser determinadas com o uso de um número de técnicas bem conhecidas na arte, como eletroforese de gel de agarose ou de poliacrilamida de um ácido nucleico ou uma amostra de proteína, respectivamente, seguida pela visualização no manchamento. Se desejado, uma técnica de alta resolução, como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou um meio semelhante pode ser utilizado para purificação do material.[0055] A nucleic acid or polynucleotide is "isolated" when it is at least partially or completely separated from other components, which includes, but is not limited to, for example, other proteins, nucleic acids, and cells. Similarly, a polypeptide, protein, or peptide is "isolated" when it is partially or completely separated from other components, which includes, but is not limited to, for example, other proteins, nucleic acids, and cells. On a molar basis, an isolated species is more abundant than are other species in a composition. For example, an isolated species can comprise at least about 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% (on a molar basis) of all macromolecular species present. Preferably, the species of interest is purified to essential homogeneity (i.e., contaminating species cannot be detected in the composition by conventional detection methods). Purity and homogeneity can be determined using a number of techniques well known in the art, such as agarose or polyacrylamide gel electrophoresis of a nucleic acid or protein sample, respectively, followed by visualization on the blot. If desired, a high-resolution technique such as high-performance liquid chromatography (HPLC) or a similar means can be used for purification of the material.

[0056] O termo "purificado" conforme aplicado aos ácidos nucleicosou polipeptídeos, de modo geral, denotados como um ácido nucleico ou polipeptídeo que é essencialmente livre de outros componentes conforme determinado pelas técnicas analíticas bem conhecidas na técnica (por exemplo, um polipeptídeo ou polinucleotídeo purificado forma uma banda discreta em um gel eletroforético, eluato cromatográfico e/ou um meio submetido à centrifugação de gradiente por densidade). Por exemplo, um ácido nucleico ou polipeptídeo que origina essencialmente uma banda em um gel eletroforético é "purificado". Um ácido nucleico ou polipeptídeo purificado é pelo menos cerca de 50% puro, usualmente pelo menos cerca de 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% ou mais puro (por exemplo, por cento, em peso, em uma base molar). Em um sentido relacionado, uma composição é enriquecida para uma molécula quando há um aumento substancial na concentração da molécula após aplicação de uma técnica de purificação ou enriquecimento. O termo "enriquecido" se refere a um composto, polipeptídeo, célula, ácido nucleico, aminoácido, ou outro material especificado ou componente que está presente em uma composição em uma concentração relativa ou absoluta que é maior do que em uma composição inicial.[0056] The term "purified" as applied to nucleic acids or polypeptides generally denote a nucleic acid or polypeptide that is essentially free of other components as determined by analytical techniques well known in the art (e.g., a purified polypeptide or polynucleotide forms a discrete band on an electrophoretic gel, chromatographic eluate, and/or a medium subjected to density gradient centrifugation). For example, a nucleic acid or polypeptide that forms essentially a band on an electrophoretic gel is "purified." A purified nucleic acid or polypeptide is at least about 50% pure, usually at least about 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% or more pure (e.g., percent by weight on a molar basis). In a related sense, a composition is enriched for a molecule when there is a substantial increase in the concentration of the molecule after application of a purification or enrichment technique. The term "enriched" refers to a compound, polypeptide, cell, nucleic acid, amino acid, or other specified material or component that is present in a composition at a relative or absolute concentration that is greater than in a starting composition.

[0057] Conforme usado no presente documento, um "polipeptídeo"se refere a uma molécula que compreende uma pluralidade de aminoácidos ligados por ligações de peptídeo. Os termos "polipeptídeo," "peptídeo" e "proteína" são usados indistintamente. Proteínas podem opcionalmente ser modificadas (por exemplo, glicosiladas, fosforiladas, aciladas, farnesiladas, preniladas e sulfonadas) para adicionar funcionalidade. Quando tais sequências de aminoácidos exibem atividade, as mesmas podem ser denominadas "enzima". São usados os códigos convencionais de uma letra ou três letras para resíduos de aminoácidos, com sequências de aminoácidos sendo apresentadas na orientação padrão amino-para-carbóxi terminal (isto é, N^C).[0057] As used herein, a "polypeptide" refers to a molecule comprising a plurality of amino acids linked by peptide bonds. The terms "polypeptide," "peptide" and "protein" are used interchangeably. Proteins may optionally be modified (e.g., glycosylated, phosphorylated, acylated, farnesylated, prenylated and sulfonated) to add functionality. When such amino acid sequences exhibit activity, they may be termed an "enzyme." Conventional one-letter or three-letter codes for amino acid residues are used, with amino acid sequences being presented in the standard amino-to-carboxy terminal (i.e., N^C) orientation.

[0058] O termo "polinucleotídeo" engloba DNA, RNA, heteroduplexe moléculas sintéticas com capacidade para codificar um polipeptídeo. Os ácidos nucleicos podem ser de filamento único ou filamento duplo e podem ter modificações químicas. Os termos "ácido nucleico" e "polinucleotídeo" são usados indistintamente. Uma vez que o código genético é degenerado, pode ser usado mais do que um códon para codificar um aminoácido particular, e as presentes composições e métodos abrangem sequências de nucleotídeos que codificam uma sequência de aminoácidos particular. A menos que indicado de outro modo, sequências de ácidos nucleicos são apresentadas na orientação 5‘-para-3‘.[0058] The term "polynucleotide" encompasses DNA, RNA, heteroduplexes, and synthetic molecules capable of encoding a polypeptide. Nucleic acids may be single-stranded or double-stranded and may have chemical modifications. The terms "nucleic acid" and "polynucleotide" are used interchangeably. Since the genetic code is degenerate, more than one codon may be used to encode a particular amino acid, and the present compositions and methods encompass nucleotide sequences that encode a particular amino acid sequence. Unless otherwise indicated, nucleic acid sequences are presented in the 5'-to-3' orientation.

[0059] Conforme usado no presente documento, os termos "tipo selvagem" e "nativo" se referem a polipeptídeos ou polinucleotídeos que são encontrados na natureza.[0059] As used herein, the terms "wild type" and "native" refer to polypeptides or polynucleotides that are found in nature.

[0060] Os termos “do tipo selvagem” e “parental” relativamente a umpolipeptídeo, se referem a um polipeptídeo que ocorre naturalmente e que não inclui uma substituição, inserção, ou deleção feita por humano em uma ou mais posições de aminoácidos. De modo similar, os termos "do tipo selvagem" e "parental", em relação a um polinucleotídeo, se referem a um polinucleotídeo de ocorrência natural que não inclui uma substituição, inserção ou deleção feita por humano em um ou mais nucleosídeos. Contudo, observa-se que um polinucleotídeo de codificação de um polinucleotídeo do tipo selvagem ou parental não se limita a um polinucleotídeo de ocorrência natural e engloba qualquer polinucleotídeo de codificação de polinucleotídeo do tipo selvagem ou parental.[0060] The terms “wild-type” and “parental” with respect to a polypeptide refer to a naturally occurring polypeptide that does not include a human-made substitution, insertion, or deletion at one or more amino acid positions. Similarly, the terms “wild-type” and “parental” with respect to a polynucleotide refer to a naturally occurring polynucleotide that does not include a human-made substitution, insertion, or deletion at one or more nucleosides. However, it is noted that a polynucleotide encoding a wild-type or parental polynucleotide is not limited to a naturally occurring polynucleotide and encompasses any polynucleotide encoding a wild-type or parental polynucleotide.

[0061] O termo "referência", em relação a um polipeptídeo, se referea um polipeptídeo de ocorrência natural que não inclui uma substituição, inserção, deleção feita pelo humano em uma ou mais posições de aminoácido, assim como um polipeptídeo que inclui uma ou mais substituições, inserções ou deleções feitas por humano em uma ou mais posições de aminoácido. De modo similar, o termo "referência", em relação a um polinucleotídeo, se refere a um polinucleotídeo de ocorrência natural que não inclui uma similarmente, inserção ou deleção feita pelo humano em um ou mais nucleosídeos, assim como um polinucleotídeo que inclui uma ou mais substituições, inserções ou deleções feitas pelo humano em um ou mais nucleosídeos. Contudo, observa-se que um polinucleotídeo de codificação de um polinucleotídeo do tipo selvagem ou parental não se limita a um polinucleotídeo de ocorrência natural e engloba qualquer polinucleotídeo de codificação de polinucleotídeo do tipo selvagem ou parental.[0061] The term "reference", in relation to a polypeptide, refers to a naturally occurring polypeptide that does not include a human-made substitution, insertion, or deletion at one or more amino acid positions, as well as a polypeptide that includes one or more human-made substitutions, insertions, or deletions at one or more amino acid positions. Similarly, the term "reference", in relation to a polynucleotide, refers to a naturally occurring polynucleotide that does not include a human-made substitution, insertion, or deletion at one or more nucleosides, as well as a polynucleotide that includes one or more human-made substitutions, insertions, or deletions at one or more nucleosides. However, it is noted that a polynucleotide encoding a wild-type or parental polynucleotide is not limited to a naturally occurring polynucleotide and encompasses any polynucleotide encoding a wild-type or parental polynucleotide.

[0062] O código de uma letra "Z" identifica uma inserção ou deleçãoem uma sequência de aminoácidos parental ou de referência. Para uma inserção relativa à sequência parental ou de referência, o código de uma letra "Z" está na esquerda do número de posição e inclui adicionalmente um número (por exemplo, .01) antes de cada aminoácido que é inserido para indicar a ordem das inserções. Por exemplo, a inserção de um aminoácido, glutamina (Q), na posição 298 seria retratada como "Z298.01Q"; a inserção de um aminoácido, X (em que X pode ser qualquer aminoácido) na posição 298 seria retratado como "Z298.01X"; e a inserção de três aminoácidos alanina (A), serina (S) e tirosina (Y) entre a posição 87 e 88 seriam retratados como "Z87.01A/Z87.02S/Z87.03Y". Para uma deleção, o código de uma letra "Z" está do lado direito do número de posição. Por exemplo, a deleção de uma alanina (A) da posição 100 seria retratada como A100Z. Uma combinação de algumas das inserções e deleções acima seriam retratadas conforme a seguir:"G87S/Z87.01A/Z87.02S/Z87.03Y/A100Z".[0062] The single-letter code "Z" identifies an insertion or deletion in a parent or reference amino acid sequence. For an insertion relative to the parent or reference sequence, the single-letter code "Z" is to the left of the position number and additionally includes a number (e.g., .01) before each amino acid that is inserted to indicate the order of the insertions. For example, the insertion of an amino acid, glutamine (Q), at position 298 would be depicted as "Z298.01Q"; the insertion of an amino acid, X (where X can be any amino acid) at position 298 would be depicted as "Z298.01X"; and the insertion of three amino acids alanine (A), serine (S), and tyrosine (Y) between position 87 and 88 would be depicted as "Z87.01A/Z87.02S/Z87.03Y". For a deletion, the code for a letter "Z" is to the right of the position number. For example, a deletion of an alanine (A) from position 100 would be depicted as A100Z. A combination of some of the above insertions and deletions would be depicted as follows: "G87S/Z87.01A/Z87.02S/Z87.03Y/A100Z".

[0063] O termo "variante de mananase" se refere a um polipeptídeoque é derivado de um polipeptídeo de referência através da substituição, adição ou deleção, de um ou mais aminoácidos, tipicamente através de técnicas de DNA recombinante. Uma variante de mananase pode diferir de um polipeptídeo de referência por um pequeno número de resíduos de aminoácido e pode ser definido pelo nível de homologia/identidade de sequência de aminoácidos primária com o polipeptídeo de referência ao longo do comprimento do domínio catalítico. Por exemplo, uma variante de mananase tem pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com um polipeptídeo de referência. O polipeptídeo de referência inclui mananases de ocorrência natural e recombinantes dentro da subfamília GH5_8 de mananases (endo-1,4 β- manosidases, EC 3.2.1.78). Essa subfamília GH5_8 é descrita de modo mais completo em Aspeborg et al (2012), "Evolution, substrate specificity and subfamily classification of glycosyl hydrolase family 5 (GH5)", BMC Evolutionary Biology, 12:186. Mananases bacterianas GH5_8 exemplificadoras incluem, por exemplo, mananases do Clado NDL, como, por exemplo, PspMan4 (SEQ ID NO:14) e PspMan9 (SEQ ID NO:30); e outras mananases como, por exemplo, Bac. sp.1WKY_A (BAD99527.1)(SEQ ID NO:43), B. agaradhaerens 2WHL_A (resíduos 30-330 de Q5YEX6)(SEQ ID NO:45), WO2015022428-0015(SEQ ID NO:44), resíduos 32-330 de US6566114-002 (SEQ ID NO:160) e resíduos 32-340 de US6566114-002 (SEQ ID NO:162). O Clado NDL de mananases é descrito de maneira mais completa no Pedido de Patente Internacional n° PCT/US15/40057, depositado em 10 de julho de 2015, subsequentemente publicado como WO2016/007929.[0063] The term "mannanase variant" refers to a polypeptide that is derived from a reference polypeptide through the substitution, addition, or deletion of one or more amino acids, typically through recombinant DNA techniques. A mannanase variant may differ from a reference polypeptide by a small number of amino acid residues and may be defined by the level of primary amino acid sequence homology/identity with the reference polypeptide along the length of the catalytic domain. For example, a mannanase variant has at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% amino acid sequence identity to a reference polypeptide. The reference polypeptide includes both naturally occurring and recombinant mannanases within the GH5_8 subfamily of mannanases (endo-1,4 β-mannosidases, EC 3.2.1.78). This GH5_8 subfamily is most fully described in Aspeborg et al (2012), "Evolution, substrate specificity and subfamily classification of glycosyl hydrolase family 5 (GH5)", BMC Evolutionary Biology, 12:186. Exemplary bacterial GH5_8 mannanases include, for example, mannanases of the NDL Clade, such as PspMan4 (SEQ ID NO:14) and PspMan9 (SEQ ID NO:30); and other mannanases such as Bac. sp.1WKY_A (BAD99527.1)(SEQ ID NO:43), B. agaradhaerens 2WHL_A (residues 30-330 of Q5YEX6)(SEQ ID NO:45), WO2015022428-0015(SEQ ID NO:44), residues 32-330 of US6566114-002 (SEQ ID NO:160) and residues 32-340 of US6566114-002 (SEQ ID NO:162). The NDL clade of mannanases is more fully described in International Patent Application No. PCT/US15/40057, filed on July 10, 2015, subsequently published as WO2016/007929.

[0064] O termo "polinucleotídeo variante" se refere a umpolinucleotídeo que codifica uma variante de mananase, tem um grau especificado de homologia/identidade com um polinucleotídeo parental, ou hibridiza em condições estringentes para um polinucleotídeo parental ou complemento do mesmo. Por exemplo, um polinucleotídeo variante tem pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência de nucleotídeo com um polinucleotídeo parental.[0064] The term "variant polynucleotide" refers to a polynucleotide that encodes a mannanase variant, has a specified degree of homology/identity to a parent polynucleotide, or hybridizes under stringent conditions to a parent polynucleotide or complement thereof. For example, a variant polynucleotide has at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% nucleotide sequence identity to a parent polynucleotide.

[0065] A identidade de sequência pode ser determinada com o usode programas tais como BLAST, ALIGN e CLUSTAL com o uso de parâmetros padrão. (Consulta, por exemplo, Altschul et al. [1990] J. Mol. Biol. 215:403 a 410; Henikoff et al. [1989] Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 89:10915; Karin et al. [1993] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873; e Higgins et al. [1988] Gene 73:237 a 244). Software para realizar análise BLAST está publicamente disponível junto ao National Center for Biotechnology Information (NCBI). Os bancos de dados podem também ser pesquisados com o uso de FASTA (Pearson et al. [1988] Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 85:2.444 a 2.448). Uma indicação de que dois polipeptídeos são substancialmente idênticos é que o primeiro polipeptídeo tem imunologicamente reatividade cruzada com o segundo polipeptídeo. Tipicamente, os polipeptídeos que diferem por substituições de aminoácidos conservadoras têm imunologicamente reatividade cruzada. Portanto, um polipeptídeo é substancialmente idêntico a um segundo polipeptídeo, por exemplo, quando os dois polipeptídeos diferem apenas por uma substancialmente conservadora. Outro algoritmo útil para comparação de múltiplas sequências proteicas é o programa MUSCLE do software Geneious (Biomatters Ltd.) (Robert C. Edgar. MUSCLE: alinhamento de múltiplas sequências com alta precisão e alto rendimento Nucl. Acids Res. (2004) 32 (5): 1.792 a 1.797).[0065] Sequence identity can be determined using programs such as BLAST, ALIGN, and CLUSTAL using default parameters. (See, for example, Altschul et al. [1990] J. Mol. Biol. 215:403-410; Henikoff et al. [1989] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915; Karin et al. [1993] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873; and Higgins et al. [1988] Gene 73:237-244.) Software for performing BLAST analysis is publicly available from the National Center for Biotechnology Information (NCBI). Databases can also be searched using FASTA (Pearson et al. [1988] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444–2448). One indication that two polypeptides are substantially identical is that the first polypeptide is immunologically cross-reactive with the second polypeptide. Typically, polypeptides that differ by conservative amino acid substitutions are immunologically cross-reactive. Thus, a polypeptide is substantially identical to a second polypeptide, for example, when the two polypeptides differ only by a conservative substitution. Another useful algorithm for comparing multiple protein sequences is the MUSCLE program from Geneious software (Biomatters Ltd.) (Robert C. Edgar. MUSCLE: High-Accuracy, High-Throughput Multiple Sequence Alignment Nucl. Acids Res. (2004) 32 (5): 1792–1797).

[0066] O termo "derivado de" abrange os termos "originado a partirde", "obtido a partir de", "obtenível a partir de", "isolado a partir de" e "criado a partir de" e indica geralmente que um material especificado encontra a sua origem em outro material especificado ou tem recursos que podem ser descritos em referência ao outro material especificado.[0066] The term "derived from" encompasses the terms "originated from", "obtained from", "obtainable from", "isolated from" and "created from" and generally indicates that a specified material finds its origin in another specified material or has features that can be described by reference to the other specified material.

[0067] O termo "hibridização" se refere ao processo pelo qual umfilamento de ácido nucleico se junta a um filamento complementar através do pareamento de base, conforme conhecido na técnica.[0067] The term "hybridization" refers to the process by which a nucleic acid strand joins a complementary strand through base pairing, as known in the art.

[0068] O termo "condições de hibridização" se refere às condiçõesnas quais as reações de hibridização são conduzidas. Essas condições são tipicamente classificadas pelo grau de "estringência" das condições sob as quais a hibridização é medida. O grau de estringência pode se basear, por exemplo, na temperatura de fusão (Tm) da sonda ou complexo de ligação a ácido nucleico ou sonda. Por exemplo, a "estringência máxima” ocorre tipicamente a cerca de Tm-5°C (5°C abaixo da Tm da sonda); "estringência alta" a cerca de 5 a 10°C abaixo da Tm; "estringência intermediária" a cerca de 10 a 20°C abaixo da Tm da sonda; e "baixa estringência" a cerca de 20 a 25°C abaixo da Tm. Alternativa ou adicionalmente, condições de hibridização podem ser baseadas nas condições de sal ou força iônica de hibridização e/ou uma ou mais lavagens de estringência, por exemplo, 6X SSC = estringência muito baixa; 3X SSC = estringência baixa a média; 1X SSC = estringência média; e 0,5X SSC = estringência alta. Funcionalmente, podem ser usadas condições de máxima estringência para identificar sequências de ácidos nucleicos com identidade estrita ou identidade quase estrita com a sonda de hibridização; enquanto que são usadas condições de alta estringência para identificar sequências de ácidos nucleicos com cerca de 80% ou mais de identidade de sequência com a sonda. Para aplicações que requerem elevada seletividade, é tipicamente desejável para usar condições relativamente estringentes para formar os híbridos (p.ex., condições salinas relativamente baixas e/ou elevada temperatura).[0068] The term "hybridization conditions" refers to the conditions under which hybridization reactions are conducted. These conditions are typically classified by the degree of "stringency" of the conditions under which hybridization is measured. The degree of stringency may be based, for example, on the melting temperature (Tm) of the probe or nucleic acid-binding complex or probe. For example, "maximum stringency" typically occurs at about Tm-5°C (5°C below the probe Tm); "high stringency" at about 5 to 10°C below the probe Tm; "intermediate stringency" at about 10 to 20°C below the probe Tm; and "low stringency" at about 20 to 25°C below the probe Tm. Alternatively or additionally, hybridization conditions may be based on the hybridization salt or ionic strength conditions and/or one or more stringency washes, e.g., 6X SSC = very low stringency; 3X SSC = low to medium stringency; 1X SSC = medium stringency; and 0.5X SSC = high stringency. Functionally, maximum stringency conditions may be used to identify nucleic acid sequences with close or near-close identity to the hybridization probe; whereas high stringency conditions to identify nucleic acid sequences with approximately 80% or greater sequence identity to the probe. For applications requiring high selectivity, it is typically desirable to use relatively stringent conditions to form the hybrids (e.g., relatively low salt conditions and/or elevated temperature).

[0069] Os termos "substancialmente similar" e "substancialmenteidêntico" no contexto de pelo menos dois ácidos nucleicos ou polipeptídeos significa que um polinucleotídeo ou polipeptídeo compreende uma sequência que tem pelo menos cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com uma sequência parental ou de referência ou uma sequência que inclui substituições, inserções e deleções ou modificações de aminoácidos feitas apenas para desviar-se da presente descrição sem adicionar funcionalidade.[0069] The terms "substantially similar" and "substantially identical" in the context of at least two nucleic acids or polypeptides mean that a polynucleotide or polypeptide comprises a sequence that has at least about 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identity to a parent or reference sequence or a sequence that includes amino acid substitutions, insertions, and deletions or modifications made solely to deviate from the present disclosure without adding functionality.

[0070] O termo "vetor de expressão" se refere a um construto deDNA que contém uma sequência de DNA que codifica o polipeptídeo especificado e é operacionalmente ligado a uma sequência de controle adequada com capacidade para efetuar a expressão dos polipeptídeos em um hospedeiro adequado. Tais sequências de controle incluem um promotor para efetuar a transcrição, uma sequência operadora opcional para controlar tal transcrição, uma sequência codificando locais de ligação de ribossomo de mRNA adequados, e sequências que controlam a terminação de transcrição e tradução. O vetor pode ser um plasmídeo, uma partícula de fago, ou simplesmente uma inserção genômica potencial. Uma vez transformado em um hospedeiro adequado, o vetor pode se replicar e funcionar independentemente do genoma do hospedeiro, ou pode, em alguns casos, se integrar no próprio genoma.[0070] The term "expression vector" refers to a DNA construct that contains a DNA sequence encoding the specified polypeptide and is operably linked to a suitable control sequence capable of effecting expression of the polypeptides in a suitable host. Such control sequences include a promoter to effect transcription, an optional operator sequence to control such transcription, a sequence encoding suitable mRNA ribosome binding sites, and sequences that control the termination of transcription and translation. The vector may be a plasmid, a phage particle, or simply a potential genomic insert. Once transformed into a suitable host, the vector may replicate and function independently of the host genome, or may, in some cases, integrate into the genome itself.

[0071] O termo “recombinante”, se refere a material genético (istoé, ácidos nucleicos, polipeptídeos que eles codificam, e vetores e células compreendendo esses polinucleotídeos) que foi modificado para alterar a sua sequência ou características de expressão, tal como por mutação da sequência codificadora para produzir um polipeptídeo alterado, fusão da sequência codificadora com a de um outro gene, colocação de um gene sob o controle de um promotor diferente, expressão de um gene em um organismo heterólogo, expressão de um gene a níveis diminuídos ou elevados, expressão de um gene condicional ou constitutivamente de forma diferente em relação ao seu perfil natural de expressão, e semelhantes. Geralmente, os ácidos nucleicos recombinantes, polipeptídeos, e células neles baseadas foram manipulados pelo homem de modo a não serem idênticos a ácidos nucleicos, polipeptídeos e células relacionadas encontradas na natureza.[0071] The term “recombinant” refers to genetic material (i.e., nucleic acids, polypeptides they encode, and vectors and cells comprising such polynucleotides) that has been modified to alter its sequence or expression characteristics, such as by mutation of the coding sequence to produce an altered polypeptide, fusion of the coding sequence to that of another gene, placement of a gene under the control of a different promoter, expression of a gene in a heterologous organism, expression of a gene at decreased or increased levels, expression of a gene conditionally or constitutively in a manner different from its natural expression profile, and the like. Generally, recombinant nucleic acids, polypeptides, and cells based thereon have been engineered by man so as not to be identical to related nucleic acids, polypeptides, and cells found in nature.

[0072] Uma “sequência-sinal” se refere a uma sequência deaminoácidos ligada à parte N-terminal de um polipeptídeo, e que facilita a secreção da forma madura da proteína da célula. A forma madura da proteína extracelular carece da sequência-sinal que é clivada durante o processo de secreção.[0072] A “signal sequence” refers to an amino acid sequence attached to the N-terminal part of a polypeptide, and which facilitates the secretion of the mature form of the protein from the cell. The mature form of the extracellular protein lacks the signal sequence which is cleaved during the secretion process.

[0073] O termo “marcador seletivo” ou “marcador selecionável” serefere a um gene capaz de expressão em uma célula hospedeira que permite facilidade de seleção desses hospedeiros contendo um ácido nucleico ou vetor introduzido. Exemplos de marcadores selecionáveis incluem, mas sem limitação, substâncias antimicrobianas (por exemplo, higromicina, bleomicina ou cloranfenicol) e/ou genes que conferem uma vantagem metabólica, tal como uma vantagem nutricional, à célula hospedeira. O termo "produto de gene selecionável" se refere a um gene que codifica uma atividade enzimática que confere resistência a uma antibiótico ou fármaco na célula em que o marcador selecionável é expresso.[0073] The term “selective marker” or “selectable marker” refers to a gene capable of expression in a host cell that allows for ease of selection of those hosts containing an introduced nucleic acid or vector. Examples of selectable markers include, but are not limited to, antimicrobial substances (e.g., hygromycin, bleomycin, or chloramphenicol) and/or genes that confer a metabolic advantage, such as a nutritional advantage, to the host cell. The term “selectable gene product” refers to a gene that encodes an enzymatic activity that confers resistance to an antibiotic or drug in the cell in which the selectable marker is expressed.

[0074] O termo “elemento regulador”, conforme usado no presentedocumento, se refere a um elemento genético que controla algum aspecto da expressão das sequências de ácidos nucleicos. Por exemplo, um promotor é um elemento regulador que facilita a iniciação da transcrição de uma região codificadora operacionalmente ligada. Elementos reguladores adicionais incluem sinais de splicing, sinais de poliadenilação e sinais de terminação.[0074] The term “regulatory element,” as used herein, refers to a genetic element that controls some aspect of the expression of nucleic acid sequences. For example, a promoter is a regulatory element that facilitates the initiation of transcription of an operably linked coding region. Additional regulatory elements include splicing signals, polyadenylation signals, and termination signals.

[0075] O termo "células hospedeiras" geralmente se referem ahospedeiros procarióticos ou eucarióticos que são transformados ou transfectados com vetores construídos com o uso de técnicas de DNA recombinante conhecidas na técnica. As células hospedeiras transformadas têm capacidade para replicar vetores de codificação das variantes de proteína ou expressar a variante de proteína desejada. No caso dos vetores que codificam a pré ou pró forma da variante de proteína, tais variantes, quando expressas, são tipicamente secretadas da célula hospedeira para o meio de célula hospedeira.[0075] The term "host cells" generally refers to prokaryotic or eukaryotic hosts that are transformed or transfected with vectors constructed using recombinant DNA techniques known in the art. The transformed host cells are capable of replicating vectors encoding the protein variants or expressing the desired protein variant. In the case of vectors encoding the pre- or pro-form of the protein variant, such variants, when expressed, are typically secreted from the host cell into the host cell medium.

[0076] O termo “introduzido” no contexto da inserção de umasequência de ácidos nucleicos em uma célula, significa transformação, transdução ou transfecção. Meios de transformação incluem a transformação de protoplastos, precipitação de cloreto de cálcio, eletroporação, ADN nu, e semelhantes conhecidos na técnica. (Consultar, Chang e Cohen [1979] Mol. Gen. Genet. 168:111 a 115; Smith et al. [1986] Appl. Env. Microbiol. 51:634; e o artigo de revisão de Ferrari et al., in Harwood, Bacillus, Plenum Publishing Corporation, páginas 57 a 72, 1989).[0076] The term “introduced” in the context of inserting a nucleic acid sequence into a cell means transformation, transduction, or transfection. Means of transformation include protoplast transformation, calcium chloride precipitation, electroporation, naked DNA, and the like known in the art. (See, Chang and Cohen [1979] Mol. Gen. Genet. 168:111-115; Smith et al. [1986] Appl. Env. Microbiol. 51:634; and the review article by Ferrari et al., in Harwood, Bacillus, Plenum Publishing Corporation, pp. 57-72, 1989).

[0077] O termo "cerca de" quando usado em combinação com umvalor numérico se refere a uma faixa de -10% a +10% do valor numérico. Por exemplo, a expressão um "valor de pH de cerca de 6" se refere a valores de pH de 5,4 a 6,6.[0077] The term "about" when used in combination with a numerical value refers to a range of -10% to +10% of the numerical value. For example, the expression a "pH value of about 6" refers to pH values from 5.4 to 6.6.

[0078] Quaisquer títulos usados no presente documento sãofornecidos em razão de conveniência e não devem ser interpretados como limitações. A descrição incluída abaixo de um título pode se aplicar ao relatório descritivo como um todo.[0078] Any headings used herein are provided for convenience only and should not be construed as limitations. The description included below a heading may apply to the specification as a whole.

[0079] Variantes, composições e métodos revelados no presentedocumento se referem a uma mananase recombinante, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos que compreende duas ou mais modificações, em que tais variantes são técnicas de biologia molecular convencionais (consultar, por exemplo, Sambrook et al, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press). Em uma modalidade, a mananase variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre pelo menos uma substituição, pelo menos uma deleção e pelo menos uma inserção. Em algumas modalidades, a modificação compreende uma combinação de mutações, como, por exemplo, uma combinação de pelo menos uma substituição e pelo menos uma deleção, pelo menos uma deleção e pelo menos uma inserção, pelo menos uma inserção e pelo menos uma substituição ou pelo menos uma substituição, pelo menos uma deleção e pelo menos uma inserção.[0079] Variants, compositions, and methods disclosed herein relate to a recombinant mannanase, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising two or more modifications, wherein such variants are conventional molecular biology techniques (see, e.g., Sambrook et al, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press). In one embodiment, the variant mannanase or recombinant polypeptide or active fragment thereof comprises two or more modifications selected from at least one substitution, at least one deletion, and at least one insertion. In some embodiments, the modification comprises a combination of mutations, such as, for example, a combination of at least one substitution and at least one deletion, at least one deletion and at least one insertion, at least one insertion and at least one substitution, or at least one substitution, at least one deletion, and at least one insertion.

[0080] Uma modalidade se refere a uma variante de mananase, umpolipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo da mesma que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 1, 2, 3, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 61, 62, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 93, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 135, 136, 139, 143, 150, 167, 168, 184, 213, 214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 263, 276, 283, e 284 e (ii) uma inserção na posição 298; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 1, 2, 3, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 62, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 93, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 135, 136, 139, 143, 150, 167, 168, 184, 213, 214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 263, 276, 283, e 284 e (ii) uma inserção na posição 298; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 1, 2, 3, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 62, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 93, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 135, 136, 139, 143, 150, 167, 168, 184, 213, 214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 283, e 284 e (ii) uma inserção na posição 298; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 1, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 143, 167, 168, 184, 214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 263, 276, e 284 e (ii) uma inserção na posição 298; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0080] One embodiment relates to a mannanase variant, a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from 1, 2, 3, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 61, 62, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 93, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 135, 136, 139, 143, 150, 167, 168, 184, 213, 214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 263, 276, 283, and 284 and (ii) an insertion at position 298; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from 1, 2, 3, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 62, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 93, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 135, 136, 139, 143, 150, 167, 168, 184, 213, 214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 263, 276, 283, and 284 and (ii) an insertion at position 298; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from 1, 2, 3, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 62, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 93, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 135, 136, 139, 143, 150, 167, 168, 184, 213, 214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 283, and 284 and (ii) an insertion at position 298; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from 1, 4, 6, 10, 19, 28, 30, 38, 59, 60, 63, 66, 67, 68, 70, 71, 74, 75, 78, 80, 82, 97, 103, 111, 124, 129, 131, 143, 167, 168, 184, 214, 217, 225, 228, 235, 242, 244, 258, 259, 261, 263, 276, and 284 and (ii) an insertion at position 298; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0081] Uma modalidade adicional se refere a uma variante demananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 19, 30, 38, 59, 60, 63, 67, 68, 71, 74, 97, 103, 129, 167, 168, 184, 225, 228, 235, 242, 244, 258, e 261, e (ii) uma inserção na posição 298; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Outra modalidade se refere a uma variante de mananase, um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo da mesma que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 19, 30, 38, 59, 60, 63, 67, 97, 103, 129, 167, 184, 225, 228, 235, 244, 258, e 261, e (ii) uma inserção na posição 298; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 19, 38, 59, 67, 68, 71, 74, 97, 129, 167, 168, 184, 225, 228, 235, 242, 244, 258, e 261; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0081] An additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from 19, 30, 38, 59, 60, 63, 67, 68, 71, 74, 97, 103, 129, 167, 168, 184, 225, 228, 235, 242, 244, 258, and 261, and (ii) an insertion at position 298; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Another embodiment relates to a mannanase variant, a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from 19, 30, 38, 59, 60, 63, 67, 97, 103, 129, 167, 184, 225, 228, 235, 244, 258, and 261, and (ii) an insertion at position 298; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from 19, 38, 59, 67, 68, 71, 74, 97, 129, 167, 168, 184, 225, 228, 235, 242, 244, 258, and 261; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0082] Outra modalidade adicional se refere a uma variante demananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1X, A2X, T3X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, Y61X, T62X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, K93X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X, S135X, A136X, D139X, K143X, N150X, F167X, P168X, Q184X, N213X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, L263X, F276X, D283X, e T284X e (ii) uma inserção na posição Z298.01X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Uma outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1X, A2X, T3X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, T62X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, K93X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X, S135X, A136X, D139X, K143X, N150X, F167X, P168X, Q184X, N213X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, L263X, F276X, D283X, eT284X e (ii) uma inserção na posição Z298.01X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X,K143X, F167X, P168X, Q184X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, L263X, F276X, e T284X, e (ii) uma inserção na posição Z298.01X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1X, A2X, T3X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, T62X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, K93X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X, S135X, A136X, D139X, K143X, N150X, F167X, P168X, Q184X, N213X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, D283X, eT284X, e (ii) uma inserção na posição Z298.01X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0082] Another additional embodiment relates to a demannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1X, A2X, T3X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, Y61X, T62X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, K93X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X, S135X, A136X, D139X, K143X, N150X, F167X, P168X, Q184X, N213X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, L263X, F276X, D283X, and T284X and (ii) an insertion at position Z298.01X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1X, A2X, T3X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, T62X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, K93X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X, S135X, A136X, D139X, K143X, N150X, F167X, P168X, Q184X, N213X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, L263X, F276X, D283X, eT284X and (ii) an insertion at position Z298.01X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X, K143X, F167X, P168X, Q184X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, L263X, F276X, and T284X, and (ii) an insertion at position Z298.01X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1X, A2X, T3X, G4X, Y6X, N10X, P19X, G28X, S30X, T38X, S59X, L60X, T62X, K63X, L66X, N67X, A68X, K70X, N71X, N74X, V75X, Q78X, K80X, I82X, K93X, N97X, V103X, E111X, I124X, Y129X, T131X, S135X, A136X, D139X, K143X, N150X, F167X, P168X, Q184X, N213X, K214X, A217X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, G259X, N261X, D283X, and T284X, and (ii) an insertion at position Z298.01X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0083] Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variantede mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre P19X, S30X, T38X, S59X, L60X, K63X, N67X, A68X, N71X, N74X, N97X, V103X, Y129X, F167X, P168X, Q184X, G225X T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, e N261X e (ii) uma inserção na posiçãoZ298.01X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre P19X, S30X, T38X, S59X, L60X, K63X, N67X, N97X, V103X, Y129X, F167X, Q184X, G225X T228X, Y235X, K244X, S258X, e N261X e (ii) uma inserção na posição Z298.01X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre P19X, T38X, S59X, N67X, A68X, N71X, N74X, N97X, Y129X, F167X, P168X, Q184X, G225X T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, e N261X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0083] Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from P19X, S30X, T38X, S59X, L60X, K63X, N67X, A68X, N71X, N74X, N97X, V103X, Y129X, F167X, P168X, Q184X, G225X T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, and N261X and (ii) an insertion at position Z298.01X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from P19X, S30X, T38X, S59X, L60X, K63X, N67X, N97X, V103X, Y129X, F167X, Q184X, G225X T228X, Y235X, K244X, S258X, and N261X and (ii) an insertion at position Z298.01X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from P19X, T38X, S59X, N67X, A68X, N71X, N74X, N97X, Y129X, F167X, P168X, Q184X, G225X, T228X, Y235X, Q242X, K244X, S258X, and N261X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0084] Uma modalidade adicional se refere a uma variante demananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X1V, X1L, X2S, X3R, X4S, X6S, X6E, X10T, X10S, X19E, X28A, X28S, X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X62E, X63R, X63L, X63E, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74E, X74S, X75L, X78D, X78H, X80T, X82M, X93R, X97D, X97L, X103I, X111D, X111S, X124V, X129M, X131A, X135L, X136L, X139M, X143Q, X143R, X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X263E, X276Y, X283S, X284A, e X284E, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X1V, X1L, X2S, X3R, X4S, X6S, X6E, X10T, X10S, X19E, X28A, X28S, X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X61W, X62E, X63R, X63L, X63E, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74E, X74S, X75L, X78D, X78H, X80T, X82M, X93R, X97D, X97L, X103I, X111D, X111S, X124V,X129M, X131A, X135L, X136L, X139M, X143Q, X143R, X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X263E, X276Y, X283S, X284A, e X284E, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posiçõesselecionadas dentre X1V, X1L, X2S, X3R, X4S, X6E, X10T, X10S,X19E, X28A, X28S, X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X62E, X63R,X63L, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74E, X74S, X75L, X78D,X78H, X80T, X82M, X93R, X97D, X97L, X103I, X111D, X111S, X124V, X129M, X131A, X135L, X136L, X139M, X143Q, X143R, X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X283S, X284A, e X284E, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Uma outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posiçõesselecionadas dentre X1V, X1L, X2S, X3R, X10T, X19E, X28A, X28S,X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X62E, X63R, X63L, X66V, X67D,X68S, X70R, X71D, X74E, X78D, X80T, X82M, X97D, X97L, X103I,X111D, X111S, X124V, X129M, X131A, X139M, X143Q, X143R,X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X283S, X284A, e X284E, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X1V, X4S, X6S, X6E, X10T, X10S, X19E, X28S, X30T, X38E, X59V, X60Q, X63R, X63L, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74S, X75L, X78D, X78H, X80T, X82M, X97D, X103I, X111D, X124V, X129M, X131A, X143Q, X143R, X167Y, X168S, X184L, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261R, X263E, X276Y, e X284A, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0084] An additional embodiment relates to a demannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X1V, X1L, X2S, X3R, X4S, X6S, X6E, X10T, X10S, X19E, X28A, X28S, X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X62E, X63R, X63L, X63E, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74E, X74S, X75L, X78D, X78H, X80T, X82M, X93R, X97D, X97L, X103I, X111D, X111S, X124V, X129M, X131A, X135L, X136L, X139M, X143Q, X143R, X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X263E, X276Y, X283S, X284A, and X284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; where X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X1V, X1L, X2S, X3R, X4S, X6S, X6E, X10T, X10S, X19E, X28A, X28S, X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X61W, X62E, X63R, X63L, X63E, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74E, X74S, X75L, X78D, X78H, X80T, X82M, X93R, X97D, X97L, X103I, X111D, X111S, X124V,X129M, X131A, X135L, X136L, X139M, X143Q, X143R, X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X263E, X276Y, X283S, X284A, and X284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; where X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X1V, X1L, X2S, X3R, X4S, X6E, X10T, X10S, X19E, X28A, X28S, X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X62E, X63R, X63L, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74E, X74S, X75L, X78D, X78H, X80T, X82M, X93R, X97D, X97L, X103I, X111D, X111S, X124V, X129M, X131A, X135L, X136L, X139M, X143Q, X143R, X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X283S, X284A, and X284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; where X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X1V, X1L, X2S, X3R, X10T, X19E, X28A, X28S,X30T, X38E, X59D, X59V, X60Q, X62E, X63R, X63L, X66V, X67D,X68S, X70R, X71D, X74E, X78D, X80T, X82M, X97D, X97L, X103I,X111D, X111S, X124V, X129M, X131A, X139M, X143Q, X143R, X150T, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X213A, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X244L, X258D, X259P, X261Q, X261R, X283S, X284A, and X284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X1V, X4S, X6S, X6E, X10T, X10S, X19E, X28S, X30T, X38E, X59V, X60Q, X63R, X63L, X66V, X67D, X68S, X70R, X71D, X74S, X75L, X78D, X78H, X80T, X82M, X97D, X103I, X111D, X124V, X129M, X131A, X143Q, X143R, X167Y, X168S, X184L, X214I, X217P, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X259P, X261R, X263E, X276Y, and X284A, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0085] Outra modalidade adicional se refere a uma variante demananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X19E, X30T, X38E, X59V, X60Q, X63R, X63L, X63E, X67D, X68S, X71D, X74E, X74S, X97D, X97L, X103I, X129M, X167Y, X168A,X168S, X184D, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X261Q, e X261R, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X19E, X38E, X59V, X67D, X68S, X71D, X74E, X74S, X97D, X97L, X129M, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X261Q, e X261R; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X19E, X38E, X59V, X67D, X68S, X71D, X74E, X97D, X97L, X129M, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X244L, X258D, X261Q, e X261R; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X19E, X30T, X38E, X59V, X60Q, X63R, X63L, X63E, X67D, X97D, X103I, X129M, X167Y, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X244L, X258D, e X261R, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0085] Another additional embodiment relates to a demannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X19E, X30T, X38E, X59V, X60Q, X63R, X63L, X63E, X67D, X68S, X71D, X74E, X74S, X97D, X97L, X103I, X129M, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X261Q, and X261R, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X19E, X38E, X59V, X67D, X68S, X71D, X74E, X74S, X97D, X97L, X129M, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X242L, X244L, X258D, X261Q, and X261R; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X19E, X38E, X59V, X67D, X68S, X71D, X74E, X97D, X97L, X129M, X167Y, X168A, X168S, X184D, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X244L, X258D, X261Q, and X261R; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from X19E, X30T, X38E, X59V, X60Q, X63R, X63L, X63E, X67D, X97D, X103I, X129M, X167Y, X184L, X225C, X225P, X228V, X235L, X244L, X258D, and X261R, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0086] Uma modalidade adicional se refere a uma variante demananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1V, M1L, A2S, T3R, G4S, Y6S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, Y61W, T62E, K63R, K63L, K63E, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, K93R, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M, T131A, T135L, A136L, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, L263E, F276Y, D283S, T284A, e T284E, e (ii) uma inserção na posiçãoZ298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1V, M1L, A2S, T3R, G4S, Y6S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, T62E, K63R, K63L, K63E, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, K93R, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M, T131A, T135L, A136L, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D,Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, L263E, F276Y, D283S, T284A, e T284E, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1V, M1L, A2S, T3R, G4S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, T62E, K63R, K63L, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, K93R, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M, T131A, T135L, A136L, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, D283S, T284A, e T284E, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1V, M1L, A2S, T3R, N10T, P19E,G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, T62E, K63R, K63L, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, Q78D, K80T, I82M, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M, T131A, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, D283S, T284A, e T284E, e (ii) uma inserção na posiçãoZ298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Uma outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre M1V, G4S, Y6S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28S, S30T, T38E, S59V, L60Q, K63R, K63L, K63E, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, N97D, V103I, E111D, I124V, Y129M, T131A, K143Q, K143R, F167Y, P168S, Q184L, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261R, L263E, F276Y, e T284A, e uma inserção na posição Z298.01Q; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0086] An additional embodiment relates to a demannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1V, M1L, A2S, T3R, G4S, Y6S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, Y61W, T62E, K63R, K63L, K63E, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, K93R, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M, T131A, T135L, A136L, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, L263E, F276Y, D283S, T284A, and T284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1V, M1L, A2S, T3R, G4S, Y6S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, T62E, K63R, K63L, K63E, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, K93R, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M, T131A, T135L, A136L, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D,Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, L263E, F276Y, D283S, T284A, and T284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1V, M1L, A2S, T3R, G4S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, T62E, K63R, K63L, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, K93R, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M, T131A, T135L, A136L, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, D283S, T284A, and T284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1V, M1L, A2S, T3R, N10T, P19E, G28A, G28S, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, T62E, K63R, K63L, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74E, Q78D, K80T, I82M, N97D, N97L, V103I, E111D, E111S, I124V, Y129M, T131A, D139M, K143Q, K143R, N150T, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, N213A, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, K244L, S258D, G259P, N261Q, N261R, D283S, T284A, and T284E, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from M1V, G4S, Y6S, Y6E, N10T, N10S, P19E, G28S, S30T, T38E, S59V, L60Q, K63R, K63L, K63E, L66V, N67D, A68S, K70R, N71D, N74S, V75L, Q78D, Q78H, K80T, I82M, N97D, V103I, E111D, I124V, Y129M, T131A, K143Q, K143R, F167Y, P168S, Q184L, K214I, A217P, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, G259P, N261R, L263E, F276Y, and T284A, and an insertion at position Z298.01Q; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0087] Uma modalidade adicional se refere a uma variante demananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre P19E, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, K63R, K63L, K63E, N67D, A68S, N71D, N74E, N74S, N97D, N97L, V103I, Y129M, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, N261Q, e N261R, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre duas ou mais substituições selecionado dentre P19E, T38E, S59D, S59V, N67D, A68S, N71D, N74E, N97D, N97L, Y129M, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, G225C, G225P,T228V, Y235L, K244L, S258D, N261Q, e N261R; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Outra modalidade se refere a uma variante de mananase, um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo da mesma que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre: (i) uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre P19E, S30T, T38E, S59V, L60Q, K63R, K63L, K63E, N67D, N97D, V103I, Y129M, F167Y, Q184L, G225C, G225P T228V, Y235L, K244L, S258D, e N261R, e (ii) uma inserção na posição Z298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0087] An additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from P19E, S30T, T38E, S59D, S59V, L60Q, K63R, K63L, K63E, N67D, A68S, N71D, N74E, N74S, N97D, N97L, V103I, Y129M, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, G225C, G225P, T228V, Y235L, Q242L, K244L, S258D, N261Q, and N261R, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from two or more substitutions selected from P19E, T38E, S59D, S59V, N67D, A68S, N71D, N74E, N97D, N97L, Y129M, F167Y, P168A, P168S, Q184D, Q184L, G225C, G225P, T228V, Y235L, K244L, S258D, N261Q, and N261R; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Another embodiment relates to a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from: (i) one or more substitutions at one or more positions selected from P19E, S30T, T38E, S59V, L60Q, K63R, K63L, K63E, N67D, N97D, V103I, Y129M, F167Y, Q184L, G225C, G225P T228V, Y235L, K244L, S258D, and N261R, and (ii) an insertion at position Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0088] Outra modalidade se refere a uma variante de mananase ouum polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre 129-244, 129-143-244, 38-258, 38-143-258, 19-184, 19-143-184, 97-225, 97-143-225, 67-168, 67-143168, 60-61, 63-71, 63-71-143, 228-235, e 143-228-235 em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre 129-244, 129-143-244, 38-258, 38-143-258, 19-184, 19-143-184, 97-225, 97-143-225, 67-168, 67-143-168, 63-71, 63-71-143, 228-235, e 143-228-235 em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Uma modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre 129-244, 38-258, 19-184, 97-225, 67-168, 63-71, e 228-235 em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre 129-143-244, 38-143-258, 19-143-184, 97-143-225, 67-143-168, 63-71-143, e 143-228-235, em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 129244, 38-258, 19-184, 97-225, 67-168, 63-71, e 228-235, em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre 129-143-244, 38-143-258, 19-143-184, 97-143-225, 67-143-168, 63-71-143, e 143-228-235, em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0088] Another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from 129-244, 129-143-244, 38-258, 38-143-258, 19-184, 19-143-184, 97-225, 97-143-225, 67-168, 67-143168, 60-61, 63-71, 63-71-143, 228-235, and 143-228-235 wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Still another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from 129-244, 129-143-244, 38-258, 38-143-258, 19-184, 19-143-184, 97-225, 97-143-225, 67-168, 67-143-168, 63-71, 63-71-143, 228-235, and 143-228-235 wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. An additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from 129-244, 38-258, 19-184, 97-225, 67-168, 63-71, and 228-235 wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from 129-143-244, 38-143-258, 19-143-184, 97-143-225, 67-143-168, 63-71-143, and 143-228-235, wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from 129-244, 38-258, 19-184, 97-225, 67-168, 63-71, and 228-235, wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from 129-143-244, 38-143-258, 19-143-184, 97-143-225, 67-143-168, 63-71-143, and 143-228-235, wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0089] Outra modalidade se refere a uma variante de mananase ouum polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre Y129X-K244X, Y129X-K143X- K244X, T38X-S258X, T38X-K143X-S258X, P19X-Q184X, P19X-K143X-Q184X, N97X-G225X, N97X-K143X-G225X, L60X-Y61X, N67X- P168X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X, K63X-N71X-K143X, T228X- Y235X, e K143X-T228X-Y235X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre Y129X-K244X, Y129X-K143X-K244X, T38X-S258X, T38X-K143X-S258X, P19X-Q184X, P19X-K143X-Q184X, N97X-G225X,N97X-K143X-G225X, N67X-P168X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X, K63X-N71X-K143X, T228X-Y235X, e K143X-T228X-Y235X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. A modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre Y129X- K244X, T38X-S258X, P19X-Q184X, N97X-G225X, N67X-P168X, K63X- N71X, e T228X-Y235X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre Y129X-K143X-K244X, T38X-K143X-S258X, P19X- K143X-Q184X, N97X-K143X-G225X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X-K143X, e K143X-T228X-Y235X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre Y129X-K244X, Y129X-K143X-K244X, T38X-S258X, T38X-K143X-S258X, P19X-Q184X, P19X-K143X-Q184X, N97X-G225X, N97X-K143X-G225X, N67X-P168X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X, K63X- N71X-K143X, T228X-Y235X, e K143X-T228X-Y235X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre Y129X-K244X, T38X-S258X, P19X-Q184X, N97X-G225X, N67X-P168X, K63X-N71X, e T228X-Y235X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre Y129X-K143X-K244X, T38X-K143X-S258X, P19X-K143X-Q184X, N97X-K143X-G225X,N67X-K143X-P168X, K63X-N71X-K143X, e K143X-T228X-Y235X; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0089] Another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from Y129X-K244X, Y129X-K143X-K244X, T38X-S258X, T38X-K143X-S258X, P19X-Q184X, P19X-K143X-Q184X, N97X-G225X, N97X-K143X-G225X, L60X-Y61X, N67X-P168X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X, K63X-N71X-K143X, T228X-Y235X, and K143X-T228X-Y235X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Still another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from Y129X-K244X, Y129X-K143X-K244X, T38X-S258X, T38X-K143X-S258X, P19X-Q184X, P19X-K143X-Q184X, N97X-G225X, N97X-K143X-G225X, N67X-P168X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X, K63X-N71X-K143X, T228X-Y235X, and K143X-T228X-Y235X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. The additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from Y129X-K244X, T38X-S258X, P19X-Q184X, N97X-G225X, N67X-P168X, K63X-N71X, and T228X-Y235X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from Y129X-K143X-K244X, T38X-K143X-S258X, P19X-K143X-Q184X, N97X-K143X-G225X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X-K143X, and K143X-T228X-Y235X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from Y129X-K244X, Y129X-K143X-K244X, T38X-S258X, T38X-K143X-S258X, P19X-Q184X, P19X-K143X-Q184X, N97X-G225X, N97X-K143X-G225X, N67X-P168X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X, K63X-N71X-K143X, T228X-Y235X, and K143X-T228X-Y235X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof that comprises an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from Y129X-K244X, T38X-S258X, P19X-Q184X, N97X-G225X, N67X-P168X, K63X-N71X, and T228X-Y235X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Still another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from Y129X-K143X-K244X, T38X-K143X-S258X, P19X-K143X-Q184X, N97X-K143X-G225X, N67X-K143X-P168X, K63X-N71X-K143X, and K143X-T228X-Y235X; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0090] Outra modalidade se refere a uma variante de mananase ouum polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre X129M-X244L, X129M-X143Q- X244L, X38E-X258D, X38E-X143Q-X258D, X19E-X184D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X184L, X19E-X143Q-X184L, X97D-X225C,X97D-X143Q-X225C, X97D-X225P, X97D-X143Q-X225P, X60Q-X61W, X67D-X168S, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D, X63L-X71D- X143Q, X63R-X71D, X63R-X71D-X143Q, X228V-X235L, e X143Q- X228V-X235L; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre X129M-X244L, X129M-X143Q-X244L, X38E-X258D, X38E-X143Q-X258D, X19E-X184D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X184L, X19E-X143Q-X184L, X97D-X225C, X97D-X143Q-X225C, X97D-X225P, X97D-X143Q-X225P, X67D-X168S, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D, X63L-X71D-X143Q, X63R-X71D, X63R-X71D-X143Q,X228V-X235L, e X143Q-X228V-X235L; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Uma modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre X129M- X244L, X38E-X258D, X19E-X184D, X19E-X184L, X97D-X225C, X97D- X225P, X67D-X168S, X63L-X71D, X63R-X71D, e X228V-X235L, em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre X129M- X143Q-X244L, X38E-X143Q-X258D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X143Q-X184L, X97D-X143Q-X225C, X97D-X143Q-X225P, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D-X143Q, X63R-X71D-X143Q, e X143Q-X228V-X235L, em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Uma modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X129M-X244L, X129M-X143Q-X244L, X38E- X258D, X38E-X143Q-X258D, X19E-X184D, X19E-X143Q-X184D,X19E-X184L, X19E-X143Q-X184L, X97D-X225C, X97D-X143Q- X225C, X97D-X225P, X97D-X143Q-X225P, X67D-X168S, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D, X63L-X71D-X143Q, X63R-X71D, X63R- X71D-X143Q, X228V-X235L, e X143Q-X228V-X235L; em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X129M-X244L, X38E-X258D, X19E-X184D, X19E-X184L, X97DX225C, X97D-X225P, X67D-X168S, X63L-X71D, X63R-X71D, eX228V-X235L, em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre uma ou mais substituições em uma ou mais posições selecionadas dentre X129M-X143Q-X244L, X38E-X143Q-X258D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X143Q-X184L, X97D-X143Q-X225C,X97D-X143Q-X225P, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D-X143Q, X63R- X71D-X143Q, e X143Q-X228V-X235L, em que X é qualquer aminoácido; e em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0090] Another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from X129M-X244L, X129M-X143Q-X244L, X38E-X258D, X38E-X143Q-X258D, X19E-X184D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X184L, X19E-X143Q-X184L, X97D-X225C, X97D-X143Q-X225C, X97D-X225P, X97D-X143Q-X225P, X60Q-X61W, X67D-X168S, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D, X63L-X71D- X143Q, X63R-X71D, X63R-X71D-X143Q, X228V-X235L, and X143Q- X228V-X235L; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from X129M-X244L, X129M-X143Q-X244L, X38E-X258D, X38E-X143Q-X258D, X19E-X184D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X184L, X19E-X143Q-X184L, X97D-X225C, X97D-X143Q-X225C, X97D-X225P, X97D-X143Q-X225P, X67D-X168S, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D, X63L-X71D-X143Q, X63R-X71D, X63R-X71D-X143Q,X228V-X235L, and X143Q-X228V-X235L; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. An additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from X129M-X244L, X38E-X258D, X19E-X184D, X19E-X184L, X97D-X225C, X97D-X225P, X67D-X168S, X63L-X71D, X63R-X71D, and X228V-X235L, wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from X129M-X143Q-X244L, X38E-X143Q-X258D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X143Q-X184L, X97D-X143Q-X225C, X97D-X143Q-X225P, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D-X143Q, X63R-X71D-X143Q, and X143Q-X228V-X235L, wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. An additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from X129M-X244L, X129M-X143Q-X244L, X38E-X258D, X38E-X143Q-X258D, X19E-X184D, X19E-X143Q-X184D,X19E-X184L, X19E-X143Q-X184L, X97D-X225C, X97D-X143Q-X225C, X97D-X225P, X97D-X143Q-X225P, X67D-X168S, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D, X63L-X71D-X143Q, X63R-X71D, X63R-X71D-X143Q, X228V-X235L, and X143Q-X228V-X235L; wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from X129M-X244L, X38E-X258D, X19E-X184D, X19E-X184L, X97DX225C, X97D-X225P, X67D-X168S, X63L-X71D, X63R-X71D, and X228V-X235L, wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Still another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from one or more substitutions at one or more positions selected from X129M-X143Q-X244L, X38E-X143Q-X258D, X19E-X143Q-X184D, X19E-X143Q-X184L, X97D-X143Q-X225C, X97D-X143Q-X225P, X67D-X143Q-X168S, X63L-X71D-X143Q, X63R-X71D-X143Q, and X143Q-X228V-X235L, wherein X is any amino acid; and wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0091] Outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre Y129M-K244L, Y129M-K143Q- K244L, T38E-S258D, T38E-K143Q-S258D, P19E-Q184D, P19E-K143Q-Q184D, P19E-Q184L, P19E-K143Q-Q184L, N97D-G225C,N97D-K143Q-G225C, N97D-G225P, N97D-K143Q-G225P, L60Q-Y61W, N67D-P168S, N67D-K143Q-P168S, K63L-N71D, K63L-N71D- K143Q, K63R-N71D, K63R-N71D-K143Q, T228V-Y235L, e K143Q-T228V-Y235L; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre Y129M- K244L, Y129M-K143Q-K244L, T38E-S258D, T38E-K143Q-S258D,P19E-Q184D, P19E-K143Q-Q184D, P19E-Q184L, P19E-K143Q-Q184L, N97D-G225C, N97D-K143Q-G225C, N97D-G225P, N97D-K143Q-G225P, N67D-P168S, N67D-K143Q-P168S, K63L-N71D,K63L-N71D-K143Q, K63R-N71D, K63R-N71D-K143Q, T228V-Y235L, e K143Q-T228V-Y235L; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Uma modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre Y129M- K244L, T38E-S258D, P19E-Q184D, P19E-Q184L, N97D-G225C, N97D-G225P, N67D-P168S, K63L-N71D, K63R-N71D, e T228V-Y235L; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende duas ou mais modificações selecionadas dentre Y129M-K143Q-K244L, T38E- K143Q-S258D, P19E-K143Q-Q184D, P19E-K143Q-Q184L, N97D- K143Q-G225C, N97D-K143Q-G225P, N67D-K143Q-P168S, K63L- N71D-K143Q, K63R-N71D-K143Q, e K143Q-T228V-Y235L; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0091] Another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from Y129M-K244L, Y129M-K143Q-K244L, T38E-S258D, T38E-K143Q-S258D, P19E-Q184D, P19E-K143Q-Q184D, P19E-Q184L, P19E-K143Q-Q184L, N97D-G225C, N97D-K143Q-G225C, N97D-G225P, N97D-K143Q-G225P, L60Q-Y61W, N67D-P168S, N67D-K143Q-P168S, K63L-N71D, K63L-N71D- K143Q, K63R-N71D, K63R-N71D-K143Q, T228V-Y235L, and K143Q-T228V-Y235L; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from Y129M-K244L, Y129M-K143Q-K244L, T38E-S258D, T38E-K143Q-S258D, P19E-Q184D, P19E-K143Q-Q184D, P19E-Q184L, P19E-K143Q-Q184L, N97D-G225C, N97D-K143Q-G225C, N97D-G225P, N97D-K143Q-G225P, N67D-P168S, N67D-K143Q-P168S, K63L-N71D, K63L-N71D-K143Q, K63R-N71D, K63R-N71D-K143Q, T228V-Y235L, and K143Q-T228V-Y235L; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. An additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from Y129M-K244L, T38E-S258D, P19E-Q184D, P19E-Q184L, N97D-G225C, N97D-G225P, N67D-P168S, K63L-N71D, K63R-N71D, and T228V-Y235L; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising two or more modifications selected from Y129M-K143Q-K244L, T38E-K143Q-S258D, P19E-K143Q-Q184D, P19E-K143Q-Q184L, N97D-K143Q-G225C, N97D-K143Q-G225P, N67D-K143Q-P168S, K63L-N71D-K143Q, K63R-N71D-K143Q, and K143Q-T228V-Y235L; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0092] Uma modalidade adicional se refere a uma variante demananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D- N261R ; N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R;P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C- K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D- Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P; N10T-T38E-S59V-L60Q- K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L- A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D- N261R; T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L- S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D- V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E- T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-59V-L60Q- K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M- K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V- L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E- N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E- K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L- N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L; P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V- K244L-S258D-G259P; ou P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S- Q184L-K244L-S258D-N261R, em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0092] An additional embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R;P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C- K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D- Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P; N10T-T38E-S59V-L60Q- K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L- A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D- V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E- T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-59V-L60Q- K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M- K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111 D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V- L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E- N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135 L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E- K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L- N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A 136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y 129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K 143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L; P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V- K244L-S258D-G259P; or P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S- Q184L-K244L-S258D-N261R, wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0093] Uma modalidade adicional se refere a uma variante demananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L- S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; ou N10T-P19E-G28A-S30T-T38E- S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q, em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0093] An additional embodiment relates to a variant of mannanase, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N 150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y 129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; or N10T-P19E-G28A-S30T-T38E- S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q, wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0094] Uma outra modalidade adicional se refere a uma variante demananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P;P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S- G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S- Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; ou P19E- T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0094] Another additional embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S- G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F16 7Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S- Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N 150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; or P19E- T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0095] Uma modalidade adicional se refere a uma variante demananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D- N261R; N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R;P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C- K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D- Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P; N10T-T38E-S59V-L60Q- K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L- A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D- N261R; T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L- S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L- N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A- F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q- P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L;P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L;P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D- Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-G259P; ou P19E- T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0095] An additional embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R;P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C- K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D- Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P; N10T-T38E-S59V-L60Q- K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L- A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L- N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y12 9M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A- F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111 D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y 129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q- P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L;P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N9 7D-Y129M-P168S-Q184L-K244L;P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-G259P; or P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0096] Uma outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q- Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V- Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;ou N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0096] A further embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q- Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V- Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y 129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K 143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;or N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0097] Outra modalidade se refere a uma variante de mananase, ouum polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E- T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C- T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-A217P- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R;T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T- T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D- V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E- T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M- K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E- N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M- S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E- K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L- N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M- D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L- K244L-S258D-G259P; ou P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S- Q184L-K244L-S258D-N261R; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0097] Another embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C- T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-A217P- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R ;T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T- T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D- V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E- T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y12 9M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M- K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111 D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E- N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M- S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E- K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L- N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A 136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M- D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L- K244L-S258D-G259P; or P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0098] Ainda outra modalidade se refere a uma variante demananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D- N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D- V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T- N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D- N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T- T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-Q184L- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q- P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E- Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L;P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L;P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D- Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; ou P19E-T38E-K63L- N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0098] Yet another embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P; P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D- V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T- N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y 129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D- E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D- N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135 L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N 150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T- T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-Q184L- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q- P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E- Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L;P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N9 7D-Y129M-P168S-Q184L-K244L;P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P; or P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[0099] Uma outra modalidade se refere a uma variante demananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P;N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I- Y129M-F167Y-Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I- Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E- K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L- N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T- P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A- F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D- N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; ou N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D- N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C- Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[0099] Another embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P;N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I- Y129M-F167Y-Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I- Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E- K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L- N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y12 9M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q- K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L- G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T- P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A- F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111 D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D- N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-T284A-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N 150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A- G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; or N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D- N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C- Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[00100] Outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D- N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L- G225C-K244L-S258D-G259P; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S- G225C-T228V-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D- N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M- P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S- Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D- N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T- P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L- K244L-S258D-G259P; K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-G259P; ou P19E-T38E-K63L-N71D- Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[00100] Another additional embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R; T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R; P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S- G225C-T228V-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D- N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M- P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S- Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D- N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T- P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q; M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A 136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L; P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L- K244L-S258D-G259P; K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-G259P; or P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[00101] Outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V- Y235L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L- P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; ou N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R- N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[00101] Another additional embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R; P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D- Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111 D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P- T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L- P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q; N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M- K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; or N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R- N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[00102] Ainda outra modalidade adicional se refere a uma variante de mananase, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo do mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I- Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q, em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14.[00102] Yet another additional embodiment relates to a mannanase variant, or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof comprising an amino acid sequence comprising P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q, wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14.

[00103] Em uma modalidade adicional, a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante é selecionada dentre SEQ ID NOs:13 e 46 a 91. Ainda em uma modalidade adicional, a variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante é selecionada dentre SEQ ID NOs:13, 49, 60, 69, 74, 77, 78, 82 e 83.[00103] In a further embodiment, the mannanase variant or recombinant polypeptide is selected from SEQ ID NOs:13 and 46 to 91. In a still further embodiment, the mannanase variant or a recombinant polypeptide is selected from SEQ ID NOs:13, 49, 60, 69, 74, 77, 78, 82, and 83.

[00104] Outra modalidade é direcionada a um Clado NDL de mananases que compreende uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos, em que a dita variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos compreende adicionalmente um ou mais motivos selecionados a partir de um: motivo WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) nas posições 31-40, em que Xa é F ou Y e X é qualquer aminoácido ("Motivo 1"); motivo LDXXXGPXGXLT (SEQ ID NO:16) nas posições 263-274, em que X é qualquer aminoácido "Motivo de Deleção 1"); motivo LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) nas posições 263-274, em que Xi é um M ou L, X2 é N, A ou S e X3 é S, T ou N "Motivo de Deleção 2"); e motivo LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID No:18) nas posições 263-274 "Motivo de Deleção 3"), em que as posições de aminoácido da variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Ainda outra modalidade adicional é direcionada a um Clado NDL de mananases que compreende uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos, em que a dita variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos compreende adicionalmente um ou mais motivos selecionados a partir de um: motivo WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) nas posições 31 a 40, em que Xa é F ou Y e X é qualquer aminoácido; motivo LDXXXGPXGXLT (SEQ ID NO:16) nas posições 263 a 274, em que X é qualquer aminoácido; motivo LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) nas posições 263 a 274, em que Xi é um M ou L, X2 é N, A ou S e X3 é S, T ou N; e motivo LDM/LATGPN/AG S/TLT (SEQ ID NO:18) nas posições 263 a 274, em que as posições de aminoácidos da variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU308431, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, PamMan2, PamMan3, PtuMan2, AAX87003, WP_046227931,WP_024633848, PpaMan2, WP_017813111, PspMan9, AEX60762, WP_046214462, YP_003868989, YP_003944884, WP_017427981,AAX87002, WP_009593769, YP_006190599 ou WP_019912481.[00104] Another embodiment is directed to an NDL Clade of mannanases comprising one or more mannanase variants described herein, or a recombinant polypeptide or active fragment thereof, wherein said variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof further comprises one or more motifs selected from one of: motif WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) at positions 31-40, wherein Xa is F or Y and X is any amino acid ("Motif 1"); motif LDXXXGPXGXLT (SEQ ID NO:16) at positions 263-274, wherein X is any amino acid ("Deletion Motif 1"); motif LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) at positions 263-274, wherein Xi is an M or L, X2 is N, A or S, and X3 is S, T or N "Deletion Motif 2"); and motif LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) at positions 263-274 "Deletion Motif 3"), wherein the amino acid positions of the variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. Yet another additional embodiment is directed to an NDL Clade of mannanases comprising one or more mannanase variants described herein or a recombinant polypeptide or active fragment thereof, wherein said variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof further comprises one or more motifs selected from one of: a WXaKNDLXXAI motif (SEQ ID NO:15) at positions 31 to 40, wherein Xa is F or Y and X is any amino acid; a LDXXXGPXGXLT motif (SEQ ID NO:16) at positions 263 to 274, wherein X is any amino acid; a LDX1V/AT/AGPX2GX3LT motif (SEQ ID NO:17) at positions 263 to 274, wherein Xi is an M or L, X2 is N, A or S, and X3 is S, T or N; and LDM/LATGPN/AG S/TLT motif (SEQ ID NO:18) at positions 263 to 274, wherein the amino acid positions of the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14, provided that the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU308431, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, PamMan2, PamMan3, PtuMan2, AAX87003, WP_046227931,WP_024633848, PpaMan2, WP_017813111, PspMan9, AEX60762, WP_046214462, YP_003868989, YP_003944884, WP_017427981,AAX87002, WP_009593769, YP_006190599 or WP_019912481.

[00105] Uma modalidade adicional é direcionada a um Clado NDL de mananases que compreende uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos, em que a dita variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo compreende adicionalmente um motivo WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) nas posições 31 a 40, em que Xa é F e X é qualquer aminoácido, em que as posições de aminoácidos da variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU308431, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003 ou AEX60762. Aindaoutra modalidade adicional é direcionada a um Clado NDL de mananases que compreende uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos, em que a dita variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos compreende adicionalmente um motivo WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) nasposições 31 a 40, em que Xa é F e X é qualquer aminoácido, em que as posições de aminoácidos da variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU308431, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707,WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003,AEX60762, PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2 ou PspMan9.[00105] An additional embodiment is directed to an NDL Clade of mannanases comprising one or more mannanase variants described herein, or a recombinant polypeptide or active fragment thereof, wherein said variant, or recombinant polypeptide or active fragment further comprises a WXaKNDLXXAI motif (SEQ ID NO:15) at positions 31 to 40, wherein Xa is F and X is any amino acid, wherein the amino acid positions of the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU308431, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003 or AEX60762. Yet another additional embodiment is directed to an NDL Clade of mannanases comprising one or more mannanase variants described herein or a recombinant polypeptide or active fragment thereof, wherein said variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof further comprises a WXaKNDLXXAI motif (SEQ ID NO:15) at positions 31 to 40, wherein Xa is F and X is any amino acid, wherein the amino acid positions of the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14, provided that the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU308431, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003,AEX60762, PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2 or PspMan9.

[00106] Em uma modalidade ainda adicional, um Clado NDL de mananases compreende uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos, em que a dita variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos compreende adicionalmente um motivo LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) ou motivo LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) nas posições 263 a 274, em que Xi é um M; X2 é N, A ou S; e X3 é S, T ou N, em que as posições de aminoácidos da variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707,WP_017688745 ou WP_046214462. Em uma modalidade ainda adicional, um Clado NDL de mananases compreende uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos, em que a dita variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos compreende adicionalmente um motivoLDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) ou motivoLDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) nas posições 263 a 274, em que Xi é um M; X2 é N, A ou S; e X3 é S, T ou N, em que as posições de aminoácidos da variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707,WP_017688745, WP_046214462 ou PamMan2. Em uma modalidade ainda adicional, o Clado NDL de mananases compreende uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos, em que a dita variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos compreende adicionalmente (i) um motivo WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) nas posições 31 a 40, em que Xa é F e X é qualquer aminoácido, e (ii) um motivo LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) ou LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) nas posições 263 a 274, em que Xi é um M; X2 é N, A ou S; e X3 é S, T ou N, em que as posições de aminoácidos da variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:i4, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707 ouWP_0i7688745. Em uma modalidade ainda adicional, o Clado NDL de mananases compreende uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento, ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos, em que a dita variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos compreende adicionalmente (i) um motivo WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) nas posições 31 a 40, em que Xa é F e X é qualquer aminoácido, e (ii) um motivo LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) ou LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) nas posições 263 a 274, em que Xi é um M; X2 é N, A ou S; e X3 é S, T ou N, em que as posições de aminoácidos da variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707,WP_017688745 ou PamMan2.[00106] In a still additional embodiment, an NDL Clade of mannanases comprises one or more mannanase variants described herein, or a recombinant polypeptide or active fragment thereof, wherein said variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof further comprises an LDX1V/AT/AGPX2GX3LT motif (SEQ ID NO:17) or LDM/LATGPN/AGS/TLT motif (SEQ ID NO:18) at positions 263 to 274, wherein Xi is an M; X2 is N, A, or S; and X3 is S, T or N, wherein the amino acid positions of the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14, provided that the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745 or WP_046214462. In a still further embodiment, an NDL Clade of mannanases comprises one or more mannanase variants described herein, or a recombinant polypeptide or active fragment thereof, wherein said variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof further comprises an LDX1V/AT/AGPX2GX3LT motif (SEQ ID NO:17) or LDM/LATGPN/AGS/TLT motif (SEQ ID NO:18) at positions 263 to 274, wherein Xi is an M; X2 is N, A, or S; and X3 is S, T or N, wherein the amino acid positions of the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14, provided that the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_046214462 or PamMan2. In a still additional embodiment, the NDL Clade of mannanases comprises one or more mannanase variants described herein, or a recombinant polypeptide or active fragment thereof, wherein said variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof further comprises (i) a WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) motif at positions 31 to 40, wherein Xa is F and X is any amino acid, and (ii) an LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) or LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) motif at positions 263 to 274, wherein Xi is an M; X2 is N, A, or S; and X3 is S, T or N, wherein the amino acid positions of the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:i4, provided that the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707 or WP_0i7688745. In a still additional embodiment, the NDL Clade of mannanases comprises one or more mannanase variants described herein, or a recombinant polypeptide or active fragment thereof, wherein said variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof further comprises (i) a WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) motif at positions 31 to 40, wherein Xa is F and X is any amino acid, and (ii) an LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) or LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) motif at positions 263 to 274, wherein Xi is an M; X2 is N, A, or S; and X3 is S, T or N, wherein the amino acid positions of the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14, provided that the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745 or PamMan2.

[00107] Outra modalidade se refere a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13. Ainda outra modalidade adicional é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmo que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 80% ou 85% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745,WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, WP_046227931,WP_017813111, AEX60762 ou WP_046214462. Ainda outramodalidade adicional é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 80% ou 85% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707,WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003,WP_046227931, WP_017813111, AEX60762, WP_046214462,PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2 ou PspMan9. Ainda outra modalidade adicional é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 80% ou 85% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707,WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003,WP_046227931, WP_017813111, AEX60762, WP_046214462 ouEP2260105-0418. Ainda outra modalidade adicional é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo dos mesmos que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 80% ou 85% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549,WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, WP_046227931, WP_017813111,AEX60762, WP_046214462, EP2260105-0418, PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2 ou PspMan9. Ainda outra modalidade adicional é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 88% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478,WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848 ou AAX87003. Outra modalidade é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 88% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745,WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, PamMan2, PamMan3,PtuMan2, PpaMan2 ou PspMan9. Uma modalidade adicional é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 88% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478,WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003 ou EP2260105-0418. Ainda outra modalidade adicional é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 88% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478,WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, EP2260105-0418, PamMan2, PamMan3, PtuMan2,PpaMan2 ou PspMan9. Ainda outra modalidade adicional é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 92% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707 ouWP_017688745. Ainda outra modalidade adicional é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 92% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13, desde que a variante, ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos não seja ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707,WP_017688745, PamMan2, PamMan3 ou PtuMan2. Outra modalidade é direcionada a uma variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante ou um fragmento ativo que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 95% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:13.[00107] Another embodiment relates to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment comprising an amino acid sequence having at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13. Yet another additional embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof that comprises an amino acid sequence that has at least 80% or 85% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, WP_046227931, WP_017813111, AEX60762, or WP_046214462. Yet another additional embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof that comprises an amino acid sequence that has at least 80% or 85% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, WP_046227931, WP_017813111, AEX60762, WP_046214462, PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2, or PspMan9. Yet another additional embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof that comprises an amino acid sequence that has at least 80% or 85% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, WP_046227931, WP_017813111, AEX60762, WP_046214462 or EP2260105-0418. Yet another additional embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment thereof that comprises an amino acid sequence that has at least 80% or 85% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, WP_046227931, WP_017813111, AEX60762, WP_046214462, EP2260105-0418, PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2 or PspMan9. Yet another additional embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment comprising an amino acid sequence that has at least 88% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848 or AAX87003. Another embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment comprising an amino acid sequence that has at least 88% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2, or PspMan9. An additional embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment comprising an amino acid sequence that has at least 88% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003 or EP2260105-0418. Yet another additional embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment comprising an amino acid sequence having at least 88% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, WP_053782127, WP_024633848, AAX87003, EP2260105-0418, PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2 or PspMan9. Yet another additional embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment comprising an amino acid sequence that has at least 92% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant, or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707 or WP_017688745. Yet another additional embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment comprising an amino acid sequence that has at least 92% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13, provided that the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof is not ACU30843, ETT37549, WP_036608478, WP_036670707, WP_017688745, PamMan2, PamMan3 or PtuMan2. Another embodiment is directed to a mannanase variant or a recombinant polypeptide or an active fragment comprising an amino acid sequence that has at least 95% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13.

[00108] Em uma modalidade, o polipeptídeo de referência é uma mananase GH5. Em ainda outra modalidade, o polipeptídeo de referência é selecionado a partir da SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:160 e SEQ ID NO:162. Em outra modalidade, uma ou mais variantes de mananase aqui descritas têm pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:160 e/ou SEQ ID NO:162.[00108] In one embodiment, the reference polypeptide is a GH5 mannanase. In yet another embodiment, the reference polypeptide is selected from SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:160, and SEQ ID NO:162. In another embodiment, one or more mannanase variants described herein have at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:160 and/or SEQ ID NO:162.

[00109] Em uma modalidade adicional, SEQ ID NO:14 é o polipeptídeo de referência a partir do qual uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento é derivada. Em outra modalidade, uma ou mais variante de mananase aqui descritas têm pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14. Em uma modalidade ainda adicional, SEQ ID NO:30 é o polipeptídeo de referência a partir do qual uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento é derivada. Em outra modalidade, uma ou mais variante de mananase aqui descritas têm pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:30. Em uma modalidade adicional, SEQ ID NO:43 é o polipeptídeo de referência a partir do qual uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento é derivada. Em outra modalidade, uma ou mais variante de mananase aqui descritas têm pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:43. Em uma modalidade ainda adicional, SEQ ID NO:44 é o polipeptídeo de referência a partir do qual uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento é derivada. Em outra modalidade, uma ou mais variante de mananase aqui descritas têm pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:44. Ainda em outra modalidade, SEQ ID NO:45 é o polipeptídeo de referência a partir do qual uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento é derivada. Em outra modalidade, uma ou mais variante de mananase aqui descritas têm pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência de aminoácido com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:45. Em ainda outra modalidade, SEQ ID NO:160 ou 162 é o polipeptídeo de referência a partir do qual uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento é derivada. Ainda em outra modalidade adicional, uma ou mais variante de mananase aqui descritas têm pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequência deaminoácido com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:160 ou 162. Em uma modalidade adicional, a variante de mananase é uma mananase GH5.[00109] In a further embodiment, SEQ ID NO:14 is the reference polypeptide from which one or more mannanase variants described herein is derived. In another embodiment, one or more mannanase variants described herein have at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:14. In a still further embodiment, SEQ ID NO:30 is the reference polypeptide from which one or more mannanase variants described herein is derived. In another embodiment, one or more mannanase variants described herein have at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:30. In a further embodiment, SEQ ID NO:43 is the reference polypeptide from which one or more mannanase variants described herein is derived. In another embodiment, one or more mannanase variants described herein have at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:43. In a still further embodiment, SEQ ID NO:44 is the reference polypeptide from which the one or more mannanase variants described herein are derived. In another embodiment, one or more mannanase variants described herein have at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:44. In yet another embodiment, SEQ ID NO:45 is the reference polypeptide from which the one or more mannanase variants described herein are derived. In another embodiment, one or more mannanase variants described herein have at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:45. In still another embodiment, SEQ ID NO:160 or 162 is the reference polypeptide from which the one or more mannanase variants described herein is derived. In yet another additional embodiment, the one or more mannanase variants described herein have at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:160 or 162. In a further embodiment, the mannanase variant is a GH5 mannanase.

[00110] Em algumas modalidades, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento são isolados. Em outras modalidades, as variantes de mananase descritas no presente documento são endo- β-mananases. Em modalidades adicionais, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento têm atividade de mananase. Em ainda outras modalidades, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento têm atividade de mananase na presença de um tensoativo. Em algumas modalidades, a atividade de mananase é em goma de manano, alfarroba e/ou glucomanano de konjac. Em modalidades adicionais, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento têm atividade de limpeza em uma composição de detergente. Ainda outras modalidades são direcionadas a variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos que têm atividade de mananase na presença de uma protease. Adicionalmente, modalidades são direcionadas a variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos que hidrolisam um substrato selecionado a partir do grupo que consiste em goma guar, goma de alfarroba e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento não compreendem um módulo de ligação a carboidrato.[00110] In some embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein are isolated. In other embodiments, the mannanase variants described herein are endo-β-mannanases. In additional embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein have mannanase activity. In still other embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein have mannanase activity in the presence of a surfactant. In some embodiments, the mannanase activity is in mannan, locust bean gum, and/or konjac glucomannan. In additional embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein have cleaning activity in a detergent composition. Still other embodiments are directed to mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof that have mannanase activity in the presence of a protease. Additionally, embodiments are directed to mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof that hydrolyze a substrate selected from the group consisting of guar gum, locust bean gum, and combinations thereof. In some embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein do not comprise a carbohydrate binding module.

[00111] Em algumas modalidades, a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos tem atividade enzimática ao longo de uma ampla faixa de condições de pH. Em determinadas modalidades, a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos tem atividade enzimática a partir de um pH de cerca de 4,0 a cerca de 11,0. Em modalidades adicionais, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos têm pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 100% de atividade de mananase em um pH de cerca de 4,0 a cerca de 11,0, cerca de 4,5 a cerca de 9,0, cerca de 5,5 a cerca de 8,5 ou cerca de 6,0 a cerca de 7,5.[00111] In some embodiments, the mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof has enzymatic activity over a wide range of pH conditions. In certain embodiments, the mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof has enzymatic activity from a pH of about 4.0 to about 11.0. In additional embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof have at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, or 100% mannanase activity at a pH of about 4.0 to about 11.0, about 4.5 to about 9.0, about 5.5 to about 8.5, or about 6.0 to about 7.5.

[00112] Em uma modalidade ainda adicional, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos têm atividade de mananase a uma temperatura que varia de cerca de 20°C a cerca de 90°C, cerca de 30°C a cerca de 80°C, cerca de 20°C a cerca de 50°C ou cerca de 30°C a cerca de 66°C. Em determinadas modalidades, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos têm pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 100% de atividade de mananase a u uma faixa de temperatura de cerca de 20 °C a cerca de 90°C, cerca de 30°C a cerca de 80°C, cerca de 20 °C a cerca de 50°C ou cerca de 30°C a cerca de 66°C.[00112] In a still further embodiment, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof have mannanase activity at a temperature ranging from about 20°C to about 90°C, about 30°C to about 80°C, about 20°C to about 50°C, or about 30°C to about 66°C. In certain embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof have at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, or 100% mannanase activity at a temperature range of about 20°C to about 90°C, about 30°C to about 80°C, about 20°C to about 50°C, or about 30°C to about 66°C.

[00113] Ainda outras modalidades adicionais são direcionadas a variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento, em que a variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos retém pelo menos 70% de sua atividade máxima de mananase em uma faixa de pH de 4,5 a 9,0, 5,5 a 8,5 ou 6,0 a 7,5. Algumas modalidades são direcionadas a variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento, em que a variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos retém pelo menos 70% de sua atividade máxima de mananase a um pH acima de 3,0, 3,5, 4,0 ou 4,5 ou em um pH abaixo de 9,0, 9,5 ou 10,0.[00113] Still other additional embodiments are directed to mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein, wherein the recombinant polypeptide variant or active fragment thereof retains at least 70% of its maximal mannanase activity in a pH range of 4.5 to 9.0, 5.5 to 8.5, or 6.0 to 7.5. Some embodiments are directed to mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein, wherein the recombinant polypeptide variant or active fragment thereof retains at least 70% of its maximal mannanase activity at a pH above 3.0, 3.5, 4.0, or 4.5 or at a pH below 9.0, 9.5, or 10.0.

[00114] Em algumas modalidades, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descritos têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com um polipeptídeo de referência, em que a propriedade aprimorada é selecionada dentre estabilidade aprimorada na presença de protease, estabilidade aprimorada em detergente ou tampão, desempenho aprimorado de limpeza e desempenho aprimorado de limpeza envelhecido. Em outra modalidade, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descritos têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com um polipeptídeo de referência, em que a propriedade aprimorada é selecionada dentre estabilidade aprimorada na presença de protease, estabilidade aprimorada em detergente ou tampão, desempenho aprimorado de limpeza e desempenho aprimorado de limpeza envelhecido, em que o polipeptídeo de referência é selecionado dentre SEQ ID NO:14, 43, 44, 45 e 160. Ainda em outra modalidade, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descritos têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com SEQ ID NO:14, em que a propriedade aprimorada é selecionada dentre estabilidade aprimorada na presença de protease, estabilidade aprimorada em detergente ou tampão, desempenho aprimorado de limpeza e desempenho aprimorado de limpeza envelhecido. Ainda em outra modalidade, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com SEQ ID NO:43, em que a propriedade aprimorada é selecionada dentre estabilidade aprimorada na presença de protease, estabilidade aprimorada em detergente ou tampão, desempenho aprimorado de limpeza e desempenho aprimorado de limpeza envelhecido. Ainda em outra modalidade adicional, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com SEQ ID NO:44, em que a propriedade aprimorada é selecionada dentre estabilidade aprimorada na presença de protease, estabilidade aprimorada emdetergente ou tampão, desempenho aprimorado de limpeza edesempenho aprimorado de limpeza envelhecido. Ainda em outra modalidade adicional, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com SEQ ID NO:45, em que a propriedade aprimorada é selecionada dentre estabilidade aprimorada na presença de protease, estabilidade aprimorada em detergente ou tampão, desempenho aprimorado de limpeza e desempenho aprimorado de limpeza envelhecido. Em outra modalidade, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com SEQ ID NO:160, em que a propriedade aprimorada é selecionada dentre estabilidade aprimorada na presença de protease, estabilidade aprimorada emdetergente ou tampão, desempenho aprimorado de limpeza edesempenho aprimorado de limpeza envelhecido.[00114] In some embodiments, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to a reference polypeptide, wherein the improved property is selected from improved stability in the presence of protease, improved stability in detergent or buffer, improved cleaning performance, and improved aged cleaning performance. In another embodiment, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to a reference polypeptide, wherein the improved property is selected from improved stability in the presence of protease, improved stability in detergent or buffer, improved cleaning performance, and improved aged cleaning performance, wherein the reference polypeptide is selected from SEQ ID NO:14, 43, 44, 45, and 160. In yet another embodiment, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to SEQ ID NO:14, wherein the improved property is selected from improved stability in the presence of protease, improved stability in detergent or buffer, improved cleaning performance, and improved aged cleaning performance. In yet another embodiment, the one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to SEQ ID NO:43, wherein the improved property is selected from improved stability in the presence of protease, improved stability in detergent or buffer, improved cleaning performance, and improved aged cleaning performance. In yet another additional embodiment, the one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to SEQ ID NO:44, wherein the improved property is selected from improved stability in the presence of protease, improved stability in detergent or buffer, improved cleaning performance, and improved aged cleaning performance. In yet another additional embodiment, the one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to SEQ ID NO:45, wherein the improved property is selected from improved stability in the presence of protease, improved stability in detergent or buffer, improved cleaning performance, and improved aged cleaning performance. In another embodiment, the one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to SEQ ID NO:160, wherein the improved property is selected from improved stability in the presence of protease, improved stability in detergent or buffer, improved cleaning performance, and improved aged cleaning performance.

[00115] Em uma modalidade adicional, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descritos têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com um polipeptídeo de referência, em que a dita propriedade aprimorada é selecionada dentre (i) estabilidade aprimorada em detergente, em que a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma retém pelo menos 10%, 20%, 30%, 40% ou 50% de atividade de mananase residual a uma temperatura de cerca de 40°C a cerca de 70°C, cerca de 45°C a cerca de 65°C, cerca de 50°C a cerca de 60°C, cerca de 60°C a cerca de 70°C ou cerca de 56°C por um período de pelo menos 5 minutos; (ii) estabilidade aprimorada na presença de a protease, em que a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma retém pelo menos 50% de atividade de mananase na presença de uma protease e/ou um tensoativo por pelo menos 15 dias de ou cerca de 15 a cerca de 40 dias; (iii) desempenho aprimorado de limpeza, em que a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma tem um índice de desempenho da limpeza de mancha de goma de alfarrobeira ("PI") >1; e iv) desempenho aprimorado de limpeza envelhecido, em que a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma tem pelo menos 15% de atividade de limpeza remanescente após 7 horas ou pelo menos 11% de atividade de limpeza remanescente após 9 horas. Em ainda outra modalidade adicional, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descritas têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com um polipeptídeo de referência, em que a dita propriedade aprimorada é estabilidade aprimorada em detergente e a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma retém pelo menos 10%, 20%, 30%, 40% ou 50% de atividade de mananase residual a uma temperatura de cerca de 40°C a cerca de 70°C, cerca de 45°C a cerca de 65°C, cerca de 50°C a cerca de 60°C, cerca de 60°C a cerca de 70°C ou cerca de 56°C por um período de pelo menos 5 minutos. Em ainda outra modalidade adicional, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descritas têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com um polipeptídeo de referência, em que a dita propriedade aprimorada é estabilidade aprimorada na presença de uma protease e a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma retém pelo menos 50% de atividade de mananase na presença de uma protease e/ou um tensoativo por pelo menos 15 dias de ou cerca de 15 a cerca de 40 dias. Em ainda outra modalidade adicional, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descritas têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com um polipeptídeo de referência, em que a dita propriedade aprimorada é desempenho aprimorado de limpeza e a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma tem um PI de limpeza de mancha de goma de alfarrobeira >1. Em ainda outra modalidade adicional, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descritas têm uma ou mais propriedades aprimoradas em comparação com um polipeptídeo de referência, em que a dita propriedade aprimorada é desempenho aprimorado de limpeza envelhecido e a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma tem pelo menos 15% de atividade de limpeza remanescente após 7 horas ou pelo menos 11% de atividade de limpeza remanescente após 9 horas.[00115] In a further embodiment, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to a reference polypeptide, wherein said improved property is selected from (i) improved detergent stability, wherein said mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof retains at least 10%, 20%, 30%, 40% or 50% residual mannanase activity at a temperature of about 40°C to about 70°C, about 45°C to about 65°C, about 50°C to about 60°C, about 60°C to about 70°C or about 56°C for a period of at least 5 minutes; (ii) enhanced stability in the presence of a protease, wherein said mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof retains at least 50% mannanase activity in the presence of a protease and/or a surfactant for at least 15 days of or about 15 to about 40 days; (iii) enhanced cleaning performance, wherein said mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof has a locust bean gum stain cleaning performance index ("PI") >1; and (iv) enhanced aged cleaning performance, wherein said mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof has at least 15% cleaning activity remaining after 7 hours or at least 11% cleaning activity remaining after 9 hours. In yet another additional embodiment, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to a reference polypeptide, wherein said improved property is improved stability in detergent and said mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof retains at least 10%, 20%, 30%, 40% or 50% residual mannanase activity at a temperature of about 40°C to about 70°C, about 45°C to about 65°C, about 50°C to about 60°C, about 60°C to about 70°C or about 56°C for a period of at least 5 minutes. In yet another additional embodiment, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to a reference polypeptide, wherein said improved property is improved stability in the presence of a protease and said mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof retains at least 50% mannanase activity in the presence of a protease and/or a surfactant for at least 15 days of or about 15 to about 40 days. In yet another additional embodiment, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to a reference polypeptide, wherein said improved property is improved cleaning performance and said mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof has a locust bean gum stain cleaning PI >1. In yet another additional embodiment, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein have one or more improved properties compared to a reference polypeptide, wherein said improved property is improved aged cleaning performance and said mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof has at least 15% cleaning activity remaining after 7 hours or at least 11% cleaning activity remaining after 9 hours.

[00116] Em algumas modalidades, a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos retém pelo menos 10%, 20%, 30%, 40% ou 50% de atividade residual demananase a uma temperatura de cerca de 40 a 70°C, cerca de 45 a 65°C, cerca de 50 a 60 °C, cerca de 60 a 70 °C ou cerca de 60°C. Em ainda outras modalidades adicionais, a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos retém pelo menos 70% de sua atividade máxima de mananase a uma faixa de temperatura de cerca de 40 a 70°C, cerca de 45 a 75°C, cerca de 45 a 65°C, cerca de 50 a 60°C ou cerca de 60 a 70°C. Em outras modalidades, a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos retém pelo menos 70% de sua atividade máxima de mananase a uma temperatura acima de 20°C, 25°C, 30°C, 35°C ou 40°C ou a uma temperatura abaixo de 60°C, 65°C, 70°C, 75°C ou 80°C. Em modalidades ainda adicionais, a quantidade de atividade máxima de mananase retida é determinada ao longo de um período de tempo de 5 minutos.[00116] In some embodiments, the mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof retains at least 10%, 20%, 30%, 40%, or 50% residual mannanase activity at a temperature of about 40 to 70° C., about 45 to 65° C., about 50 to 60° C., about 60 to 70° C., or about 60° C. In still further embodiments, the mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof retains at least 70% of its maximum mannanase activity at a temperature range of about 40 to 70° C., about 45 to 75° C., about 45 to 65° C., about 50 to 60° C., or about 60 to 70° C. In other embodiments, the mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof retains at least 70% of its maximal mannanase activity at a temperature above 20°C, 25°C, 30°C, 35°C, or 40°C or at a temperature below 60°C, 65°C, 70°C, 75°C, or 80°C. In still additional embodiments, the amount of maximal mannanase activity retained is determined over a 5 minute time period.

[00117] Em certas outras modalidades, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritas no presente documento incluem substituições que não afetam substancialmente a estrutura e/ou função do polipeptídeo. Substituições exemplificativas são mutações conservadoras, conforme resumido na Tabela I. Tabela I. Substituições de Aminoácido [00117] In certain other embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein include substitutions that do not substantially affect the structure and/or function of the polypeptide. Exemplary substitutions are conservative mutations as summarized in Table I. Table I. Amino Acid Substitutions

[00118] As substituições que envolvem aminoácidos que ocorrem naturalmente são geralmente efetuadas por mutação de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo recombinante aqui descrito. A substituições que envolvem aminoácidos que não ocorrem naturalmente ou modificações químicas em aminoácidos são geralmente efetuadas modificando quimicamente um polipeptídeo recombinante aqui descrito.[00118] Substitutions involving naturally occurring amino acids are generally made by mutating a nucleic acid encoding a recombinant polypeptide described herein. Substitutions involving non-naturally occurring amino acids or chemical modifications to amino acids are generally made by chemically modifying a recombinant polypeptide described herein.

[00119] Em algumas modalidades, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos são substancialmente idênticos a SEQ ID NO:13, significando que os mesmos podem conter substituições, inserções ou deleções de aminoácidos que não afetam significativamente a estrutura, função ou expressão da variante ou polipeptídeo ou fragmento ativo do mesmo. Tais variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos incluem aqueles concebidos apenas para contornar a presente descrição.[00119] In some embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof are substantially identical to SEQ ID NO:13, meaning that they may contain amino acid substitutions, insertions, or deletions that do not significantly affect the structure, function, or expression of the variant or polypeptide or active fragment thereof. Such mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof include those designed solely to circumvent the present disclosure.

[00120] Em algumas modalidades, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos têm atividade de hidrolase 1,4-β-D-manosidica que inclui mananase, endo- 1,4-β-D-mananase, exo-1,4-β-D-mananase galactomananase e/ou atividade de glucomananase. Atividade de hidrolase 1,4-β-D- manosídica pode ser determinada e medida com o uso dos ensaios descritos no presente documento ou por outros ensaios conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, um polipeptídeo da presente invenção tem atividade na presença de uma composição de detergente.[00120] In some embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof have 1,4-β-D-mannoside hydrolase activity that includes mannanase, endo-1,4-β-D-mannanase, exo-1,4-β-D-mannanase galactomannanase, and/or glucomannanase activity. 1,4-β-D-mannoside hydrolase activity can be determined and measured using the assays described herein or by other assays known in the art. In some embodiments, a polypeptide of the present invention has activity in the presence of a detergent composition.

[00121] Em algumas modalidades, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento são produzidos como uma proteína de fusão de terminal N e/ou C, por exemplo, para auxiliar na extração, detecção e/ou purificação e/ou para adicionar propriedades funcionais à variante ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos. Exemplos de parceiros de proteína de fusão incluem, mas sem limitação, glutationa-S-transferase (GST), 6XHis, GAL4 (ligação de DNA e/ou domínios de ativação transcricional), FLAG, MYC, BCE103 (WO 2010/044786) ou outras etiquetas são bastante conhecidas por qualquer indivíduo versado na técnica. Em algumas modalidades, um local de clivagem proteolítico é fornecido entre o parceiro de proteína de fusão e a sequência de proteína de interesse para permitir a remoção das sequências de proteína de fusão. Preferencialmente, a proteína de fusão não impede a atividade das variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento.[00121] In some embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein are produced as an N- and/or C-terminal fusion protein, e.g., to aid in extraction, detection, and/or purification and/or to add functional properties to the variant or recombinant polypeptides or active fragments thereof. Examples of fusion protein partners include, but are not limited to, glutathione-S-transferase (GST), 6XHis, GAL4 (DNA binding and/or transcriptional activation domains), FLAG, MYC, BCE103 (WO 2010/044786), or other tags are well known to one of skill in the art. In some embodiments, a proteolytic cleavage site is provided between the fusion protein partner and the protein sequence of interest to allow for removal of the fusion protein sequences. Preferably, the fusion protein does not impede the activity of the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein.

[00122] Em algumas modalidades, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento são fundidos a um domínio funcional o que inclui um peptídeo líder, propeptídeo, um ou mais domínio de ligação (módulos) e/ou um domínio catalítico. Domínios de ligação adequados incluem, mas sem limitação, módulos de ligação a carboidrato (CBM) de várias especificidades que fornecem afinidade aumentada com componentes de carboidrato presentes durante a aplicação das variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento. Conforme descrito no presente documento, o CBM e domínio catalítico de um polipeptídeo da presente invenção são operacionalmente ligados.[00122] In some embodiments, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein are fused to a functional domain which includes a leader peptide, propeptide, one or more binding domains (modules), and/or a catalytic domain. Suitable binding domains include, but are not limited to, carbohydrate binding modules (CBMs) of various specificities that provide increased affinity for carbohydrate components present during application of the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein. As described herein, the CBM and catalytic domain of a polypeptide of the present invention are operably linked.

[00123] Um CBM é definido como uma sequência de aminoácidos contígua dentro de uma enzima ativa em carboidrato com um enovelamento discreto que tem atividade de ligação de carboidrato. Poucas exceções são CBMs em arcabouço celulossômico em proteínas e raros casos de CBMs putativos independentes. A exigência de CBMs existentes como módulos dentro de enzimas diferencia essa classe de proteínas de ligação de carboidrato das outras proteínas de ligação de açúcar tais como lectinas e proteínas de transporte de açúcar. CBMs foram previamente classificadas como domínios de ligação de celulose (CBDs) com base na descoberta inicial de diversos módulos que se ligam à celulose (Tomme et al., Eur J Biochem, 170:575 a 581, 1988; e Gilkes et al., J Biol Chem, 263:10.401 a 10.407, 1988). Contudo,módulos adicionais em enzimas ativas em carboidrato são continuamente encontrados os quais ligam carboidratos em vez de celulose, ainda assim atendem aos critérios do CBM, por isso a necessidade de reclassificar esses polipeptídeos com o uso de terminologia mais inclusiva. A classificação prévia de domínios de ligação de celulose teve base em similaridade de aminoácido. Agrupamentos de CBDs foram chamados de "Tipos" e numerados com numerais romanos (por exemplo, CBDs Tipo I ou Tipo II). De acordo com a classificação de hidrolase de glicosídeo, esses agrupamentos são agora chamados de famílias e numerados com numerais arábicos. As famílias 1 a 13 são as mesmas que os Tipos I a XIII (Tomme et al., in Enzymatic Degradation of Insoluble Polysaccharides (Saddler, J.N. & Penner, M., eds.), Cellulose-binding domains: classification and properties. Páginas 142 a 163, American Chemical Society, Washington, 1995). Uma revisão detalhada da estrutura e modos de ligação de CBMs pode ser encontrada em Boraston et al., Biochem J, 382:769 a 781, 2004. Estima-se que a classificação de família de CBMs auxilie na identificação de CBMs, previsão de especificidade, auxilie na identificação de resíduos funcionais, revelem relações evolucionárias e possivelmente sejam preditivas de enovelamentos de polipeptídeo. Devido ao enovelamento de proteínas ser melhor conservado do que suas sequências, algumas das famílias de CBM podem ser agrupadas em superfamílias ou clãs. As famílias de CBM atuais são 1 a 63. CBDs são encontrados nos terminais N e C de proteínas ou são internos. Os híbridos de enzima são conhecidos na técnica (Consultar por exemplo, documentos número WO90/00609 e WO95/16782) e podem ser preparados através da transformação em uma célula hospedeira de um construto de DNA que compreende pelo menos um fragmento de DNA de codificação do domínio de ligação de celulose ligado, com ou sem um ligante, a uma sequência de DNA de codificação de uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos descritos no presente documento e cultivando-se a célula hospedeira para expressar o gene fundido.[00123] A CBM is defined as a contiguous amino acid sequence within a carbohydrate-active enzyme with a discrete fold that has carbohydrate-binding activity. Few exceptions are CBMs in the cellulosomal scaffold of proteins and rare cases of putative free-standing CBMs. The requirement for CBMs to exist as modules within enzymes differentiates this class of carbohydrate-binding proteins from other sugar-binding proteins such as lectins and sugar transport proteins. CBMs were previously classified as cellulose-binding domains (CBDs) based on the initial discovery of several modules that bind cellulose (Tomme et al., Eur J Biochem, 170:575-581, 1988; and Gilkes et al., J Biol Chem, 263:10,401-10,407, 1988). However, additional modules in carbohydrate-active enzymes are continually found that bind carbohydrates rather than cellulose, yet still meet the CBM criteria, hence the need to reclassify these polypeptides using more inclusive terminology. Previous classification of cellulose-binding domains was based on amino acid similarity. Groupings of CBDs were called "Types" and numbered with Roman numerals (e.g., Type I or Type II CBDs). In keeping with the glycoside hydrolase classification, these groupings are now called families and numbered with Arabic numerals. Families 1 to 13 are the same as Types I to XIII (Tomme et al., in Enzymatic Degradation of Insoluble Polysaccharides (Saddler, J. N. & Penner, M., eds.), Cellulose-binding domains: classification and properties. Pages 142 to 163, American Chemical Society, Washington, 1995). A detailed review of the structure and binding modes of CBMs can be found in Boraston et al., Biochem J, 382:769 to 781, 2004. It is expected that family classification of CBMs will aid in CBM identification, prediction of specificity, aid in identification of functional residues, reveal evolutionary relationships, and possibly be predictive of polypeptide folding. Because protein folding is better conserved than protein sequences, some of the CBM families can be grouped into superfamilies or clans. Current CBM families are 1 to 63. CBDs are found at the N- and C-termini of proteins or are internal. Enzyme hybrids are known in the art (See e.g., WO90/00609 and WO95/16782) and can be prepared by transforming into a host cell a DNA construct comprising at least a DNA fragment encoding the cellulose-binding domain linked, with or without a linker, to a DNA sequence encoding a recombinant mannanase variant or polypeptide or active fragment thereof described herein and culturing the host cell to express the fused gene.

[00124] Híbridos de enzima podem ser descritos pela fórmula seguir: CBM-MR-X ou X-MR-CBM, em que CBM é a região de terminal N ou terminal C de uma sequência de aminoácidos que corresponde pelo menos ao módulo de ligação de carboidrato; MR é a região intermediária (o ligante), e pode ser uma união, ou um grupo de ligação curto de cerca de 2 a cerca de 100 átomos de carbono, de cerca de 2 a cerca de 40 átomos de carbono, de cerca de 2 a cerca de 100 aminoácidos, ou de cerca de 2 a cerca de 40 aminoácidos; e X é uma região de terminal N ou terminal C de uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos descrita no presente documento que tem atividade catalítica de mananase. Adicionalmente, uma mananase pode conter mais de um CBM ou outro módulo (ou módulos)/domínio (ou domínios) de função não glicolítica. Os termos "módulo" e "domínio" são usados indistintamente na presente revelação.[00124] Enzyme hybrids can be described by the following formula: CBM-MR-X or X-MR-CBM, wherein CBM is the N-terminal or C-terminal region of an amino acid sequence that corresponds to at least the carbohydrate binding module; MR is the intermediate region (the linker), and can be a bond, or a short linking group of from about 2 to about 100 carbon atoms, from about 2 to about 40 carbon atoms, from about 2 to about 100 amino acids, or from about 2 to about 40 amino acids; and X is an N-terminal or C-terminal region of a recombinant mannanase or polypeptide variant or active fragment thereof described herein that has mannanase catalytic activity. Additionally, a mannanase can contain more than one CBM or other module(s)/domain(s) of non-glycolytic function. The terms "module" and "domain" are used interchangeably in this disclosure.

[00125] Adicionalmente, exemplos não limitantes de domínioscatalíticos incluem: celulases; hemicelulases, tais como xilanase; exo- mananases; glucanases; arabinases; galactosidases; pectinases; e/ou outras atividades tais como proteases, lipases, fosfatases ácidas e/ou outros fragmentos funcionais dos mesmos. As proteínas de fusão são opcionalmente ligadas a uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos descritos no presente documento através de uma sequência de ligante simplesmente une a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos e o domínio de fusão sem afetar significativamente as propriedades de componente, ou o ligante tem opcionalmente uma importância funcional para a aplicação pretendida.[00125] Additionally, non-limiting examples of catalytic domains include: cellulases; hemicellulases, such as xylanase; exomannanases; glucanases; arabinases; galactosidases; pectinases; and/or other activities such as proteases, lipases, acid phosphatases and/or other functional fragments thereof. Fusion proteins are optionally linked to a mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein via a linker sequence that simply joins the mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof and the fusion domain without significantly affecting component properties, or the linker optionally has a functional importance for the intended application.

[00126] Alternativamente, as variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento são usados em combinação com uma ou mais proteínas de interesse adicionais. Exemplos não limitantes de proteínas de interesse incluem: acil transferases, amilases, alfa- amilases, beta-amilases, alfa-galactosidases, arabinases,arabinosidases, aril esterases, beta-galactosidases, beta-glucanases, carrageenases, catalases, celobio-hidrolases, celulases,condroitinases, cutinases, endo-beta-1, 4-glucanases, endo-beta- mananases, exo-beta-mananases, esterases, exo-mananases,galactanases, glucoamilases, hemicelulases, hialuronidases, ceratinases, lacases, lactases, ligninases, lipases, enzimas lipolíticas, lipoxigenases, mananases, oxidases, pectato liases, pectina acetil esterases, pectinases, pentosanases, peroxidases, fenoloxidases, fosfatases, fosfolipases, fitases, poligalacturonases, proteases, pululanases, redutases, ramnogalacturonases, beta-glucanases, tanases, transglutaminases, acetil-xilano esterases, xilanases, xiloglucanases, xilosidases, metaloproteases e/ou outras enzimas.[00126] Alternatively, the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein are used in combination with one or more additional proteins of interest. Non-limiting examples of proteins of interest include: acyl transferases, amylases, alpha-amylases, beta-amylases, alpha-galactosidases, arabinases, arabinosidases, aryl esterases, beta-galactosidases, beta-glucanases, carrageenanses, catalases, cellobiohydrolases, cellulases, chondroitinases, cutinases, endo-beta-1, 4-glucanases, endo-beta-mannanases, exo-beta-mannanases, esterases, exo-mannanases, galactanases, glucoamylases, hemicellulases, hyaluronidases, keratinases, laccases, lactases, ligninases, lipases, lipolytic enzymes, lipoxygenases, mannanases, oxidases, pectate lyases, pectin acetyl esterases, pectinases, pentosanases, peroxidases, phenoloxidases, phosphatases, phospholipases, phytases, polygalacturonases, proteases, pullulanases, reductases, rhamnogalacturonases, beta-glucanases, tannases, transglutaminases, acetyl-xylan esterases, xylanases, xyloglucanases, xylosidases, metalloproteases and/or other enzymes.

[00127] Em outras modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descritos é fundido a um peptídeo de sinalização para direcionar a secreção extracelular da variante ou polipeptídeo ou fragmento ativo do mesmo. Por exemplo, em certas modalidades, o peptídeo de sinalização é o peptídeo de sinalização nativo da variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito. Em outras modalidades, o peptídeo de sinalização é um peptídeo de sinalização não nativo como o peptídeo de sinalização AprE de B. subtilis.[00127] In other embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein is fused to a signal peptide to direct extracellular secretion of the variant or polypeptide or active fragment thereof. For example, in certain embodiments, the signal peptide is the native signal peptide of the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein. In other embodiments, the signal peptide is a non-native signal peptide such as the AprE signal peptide from B. subtilis.

[00128] Em algumas modalidades, um polipeptídeo da presente invenção é expresso em um organismo heterólogo, isto é, um organismo diferente de Paenibacillus spp. Organismos heterólogos exemplificadores são bactérias Gram(+) como B. subtilis, B. licheniformis, B. lentus, B. brevis, Geobacillus (antes Bacillus) stearothermophilus, B. alkalophilus, B. amyloliquefaciens, B. coagulans, B. circulans, B. lautus, B. megaterium, B. thuringiensis, S. lividans ou S. murinus; bactéria Gram(-) como E. coli; levedura como Saccharomyces spp. ou Schizosaccharomyces spp., por exemplo, S. cerevisiae; e fungos filamentosos como Aspergillus spp., por exemplo, A. oryzae ou A. niger e T. reesei. Os métodos para a transformação de ácidos nucleicos nestes organismos são bem conhecidos na técnica. Um procedimento adequado para a transformação de células hospedeiras de Aspergillus é descrito no documento EP238023.[00128] In some embodiments, a polypeptide of the present invention is expressed in a heterologous organism, that is, an organism other than Paenibacillus spp. Exemplary heterologous organisms are Gram(+) bacteria such as B. subtilis, B. licheniformis, B. lentus, B. brevis, Geobacillus (formerly Bacillus) stearothermophilus, B. alkalophilus, B. amyloliquefaciens, B. coagulans, B. circulans, B. lautus, B. megaterium, B. thuringiensis, S. lividans, or S. murinus; Gram(-) bacteria such as E. coli; yeast such as Saccharomyces spp. or Schizosaccharomyces spp., e.g., S. cerevisiae; and filamentous fungi such as Aspergillus spp., e.g. A. oryzae or A. niger and T. reesei. Methods for transforming nucleic acids into these organisms are well known in the art. A suitable procedure for transforming Aspergillus host cells is described in EP238023.

[00129] Em modalidades particulares, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito é expresso em um organismo heterólogo como um polipeptídeo secretado, caso no qual as composições e método abrangem um método para expressar a variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma como um polipeptídeo secretado em um organismo heterólogo.[00129] In particular embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein is expressed in a heterologous organism as a secreted polypeptide, in which case the compositions and method encompass a method for expressing the variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof as a secreted polypeptide in a heterologous organism.

[00130] Modalidades adicionais são direcionadas a métodos de produção de uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos descritos no presente documento que compreendem: transformar estavelmente uma célula hospedeira com um vetor de expressão que compreende um polinucleotídeo de codificação da variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos; cultivar a célula hospedeira transformada em condições adequadas para produzir a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos; e recuperar a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos.[00130] Additional embodiments are directed to methods of producing a recombinant mannanase variant or polypeptide or active fragment thereof described herein comprising: stably transforming a host cell with an expression vector comprising a polynucleotide encoding the recombinant mannanase variant or polypeptide or active fragment thereof; culturing the transformed host cell under conditions suitable for producing the recombinant mannanase variant or polypeptide or active fragment thereof; and recovering the recombinant mannanase variant or polypeptide or active fragment thereof.

[00131] Ainda outra modalidade é direcionada a um polinucleotídeo que codifica uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos descritos no presente documento. Em um aspecto, o polinucleotídeo é contido em um vetor de expressão contido em um organismo heterólogo, tal como aqueles identificados no presente documento. O polinucleotídeo pode ser ligado operacionalmente a elementos regulatórios (por exemplo, um promotor, terminador, intensificador e similares) para auxiliar na expressão das variantes codificadas ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento. Uma modalidade se refere a uma sequência de polinucleotídeos que codifica uma variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma tendo uma sequência de nucleotídeos selecionado dentre SEQ ID NOs:1 e 93 a 139. Outra modalidade se refere a uma sequência de polinucleotídeos que codifica uma variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma que tem uma sequência de nucleotídeos selecionado dentre SEQ ID NOs:1, 96, 107, 114, 117, 122, 125, 126, 130 e 131.[00131] Yet another embodiment is directed to a polynucleotide encoding a mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein. In one aspect, the polynucleotide is contained in an expression vector contained in a heterologous organism, such as those identified herein. The polynucleotide may be operably linked to regulatory elements (e.g., a promoter, terminator, enhancer, and the like) to aid in the expression of the encoded variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein. One embodiment relates to a polynucleotide sequence encoding a variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof having a nucleotide sequence selected from SEQ ID NOs:1 and 93 to 139. Another embodiment relates to a polynucleotide sequence encoding a variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof having a nucleotide sequence selected from SEQ ID NOs:1, 96, 107, 114, 117, 122, 125, 126, 130, and 131.

[00132] Algumas modalidades se referem a um polinucleotídeo que codifica uma variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma que tem pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% identidade de sequência de aminoácido com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13. Modalidades adicionais se referem a polinucleotídeos que tem pelo menos 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83% 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade com a SEQ ID NO:1. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo é otimizado por códon para expressão em um hospedeiro diferente, mutacionado para introduzir locais de clonagem ou, de outro modo, alterado para adicionar funcionalidade.[00132] Some embodiments relate to a polynucleotide encoding a variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof that has at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% amino acid sequence identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:13. Additional embodiments relate to polynucleotides that have at least 59%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83% 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% identity to SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the polynucleotide is codon-optimized for expression in a different host, mutated to introduce cloning sites, or otherwise altered to add functionality.

[00133] Em algumas modalidades, o polinucleotídeo que codifica uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos descritos no presente documento é fundido a jusante de uma sequência de codificação de um peptídeo de sinal que direciona a secreção extracelular de variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos. Os vetores de expressão podem ser fornecidos em uma célula hospedeira heteróloga adequada para expressar uma variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos descritos no presente documento, ou adequado para propagar o vetor de expressão antes de introduzir o mesmo em uma célula hospedeira adequada.[00133] In some embodiments, the polynucleotide encoding a mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is fused downstream of a sequence encoding a signal peptide that directs extracellular secretion of the variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof. The expression vectors can be provided in a heterologous host cell suitable for expressing a variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein, or suitable for propagating the expression vector prior to introducing the same into a suitable host cell.

[00134] Em algumas modalidades, um polinucleotídeo que codifica uma variante ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos hibridiza para o polinucleotídeo da SEQ ID NO:1 ou o complemento da mesma em condições especificadas de hibridização. Condições exemplificativas são condições de estringente e altamente estringente, as quais são descritas no presente documento.[00134] In some embodiments, a polynucleotide encoding a variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof hybridizes to the polynucleotide of SEQ ID NO:1 or the complement thereof under specified hybridization conditions. Exemplary conditions are stringent and highly stringent conditions, which are described herein.

[00135] DNA que codifica uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo dos mesmos descritos no presente documento podem ser quimicamente sintetizados a partir de sequências publicadas ou obtidas diretamente a partir das células hospedeiras que abrigam o gene (por exemplo, através de varredura de biblioteca de cDNA ou amplificação de PCR). Em algumas modalidades, um polinucleotídeo é incluído em um cassete de expressão e/ou clonado em um vetor de expressão adequado através de técnicas de clonagem moleculares padrão. Tais cassetes de expressão ou vetores contêm sequências que auxiliam a iniciação e terminação de transcrição (por exemplo, promotores e terminadores) e geralmente contêm um marcador selecionável.[00135] DNA encoding a mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein can be chemically synthesized from published sequences or obtained directly from host cells harboring the gene (e.g., through cDNA library screening or PCR amplification). In some embodiments, a polynucleotide is included in an expression cassette and/or cloned into a suitable expression vector through standard molecular cloning techniques. Such expression cassettes or vectors contain sequences that assist in the initiation and termination of transcription (e.g., promoters and terminators) and often contain a selectable marker.

[00136] O cassete de expressão ou vetor é introduzido em uma célula hospedeira de expressão adequada, que, então, expressa a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento correspondente da mesma aqui descrita. Hospedeiros de expressão particularmente adequados são os gêneros de hospedeiros de expressão bacterianos incluindo Escherichia (por exemplo, E. coli), Pseudomonas (por exemplo, P. fluorescens ou P. stutzerei), Proteus (por exemplo, P. mirabilis), Ralstonia (por exemplo, R. eutropha), Streptomyces, Staphylococcus (por exemplo, S. carnosus), Lactococcus (por exemplo, L. lactis) ou Bacillus (subtilis, megaterium, licheniformis, etc.). São particularmente adequados, também, hospedeiros de expressão de levedura como S. cerevisiae, S. pombe, Y. lipolytica, H. polymorpha, K. lactis ou P. pastoris. São especialmente adequados hospedeiros de expressão fúngica como C.lucknowense, Aspergillus (por exemplo, A. oryzae, A. niger, A. nidulans, etc.) ou T. reesei. Também são adequados hospedeiros de expressão de mamífero como camundongo (por exemplo, NS0), linhagens celulares de Ovário de Hamster Chinês (CHO) ou de Rim de Hamster Bebê (BHK). Outros hospedeiros eucarióticos tais como células de insetos ou sistemas de expressão viral (por exemplo, bacteriófagos tais como fago M13, T7 ou Lambda, ou vírus tais como Baculovírus) também são adequados para produzir uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito.[00136] The expression cassette or vector is introduced into a suitable expression host cell, which then expresses the corresponding mannanase variant, recombinant polypeptide or fragment thereof described herein. Particularly suitable expression hosts are bacterial expression host genera including Escherichia (e.g., E. coli), Pseudomonas (e.g., P. fluorescens or P. stutzerei), Proteus (e.g., P. mirabilis), Ralstonia (e.g., R. eutropha), Streptomyces, Staphylococcus (e.g., S. carnosus), Lactococcus (e.g., L. lactis), or Bacillus (subtilis, megaterium, licheniformis, etc.). Also particularly suitable are yeast expression hosts such as S. cerevisiae, S. pombe, Y. lipolytica, H. polymorpha, K. lactis, or P. pastoris. Fungal expression hosts such as C.lucknowense, Aspergillus (e.g. A. oryzae, A. niger, A. nidulans, etc.) or T. reesei are especially suitable. Mammalian expression hosts such as mouse (e.g. NS0), Chinese Hamster Ovary (CHO) or Baby Hamster Kidney (BHK) cell lines are also suitable. Other eukaryotic hosts such as insect cells or viral expression systems (e.g. bacteriophages such as phage M13, T7 or Lambda, or viruses such as Baculovirus) are also suitable for producing a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein.

[00137] As sequências promotoras e/ou sinal associadas a proteínas secretadas em um hospedeiro particular de interesse são candidatas para uso na produção heteróloga e secreção de mananases nesse hospedeiro ou em outros hospedeiros. Como exemplo, em sistemas fúngicos filamentosos, os promotores que conduzem os genes para a celobio-hidrolase I (cbh1), glicoamilase A (glaA), TAKA-amilase (amyA), xilanase (exlA), o promotor gpd cbh1, cbhll, genes da endoglucanase EGI-EGV, Cel61B, Cel74A, egl1-egl5, promotor gpd, Pgk1, pki1, EF- 1alpha, tef1, cADN1 e hex1 são particularmente adequados e podem ser derivados de um número de diferentes organismos (por exemplo, A. niger, T. reesei, A. oryzae, A. awamori, e A. nidulans). Em algumas modalidades, o polinucleotídeo é recombinantmente associado a um polinucleotídeo que codifica uma sequência de sinais homóloga ou heteróloga que conduz à secreção de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito no espaço extracelular (ou periplásmico),permitindo desse modo a detecção direta da atividade enzimática no sobrenadante celular (ou espaço periplásmico ou lisado). Sequências sinal particularmente adequadas para E. coli, outras bactérias Gram negativas e outros organismos conhecidos na técnica incluem as que conduzem a expressão dos genes HlyA, DsbA, Pbp, PhoA, PelB, OmpA, OmpT ou Gill do fago M13. Para o B. subtilis, organismos Gram-positivos e outros organismos conhecidos na técnica, sequências de sinais particularmente adequadas incluem ainda as que conduzem a expressão de AprE, NprB, Mpr, AmyA, AmyE, Blac, SacB, e para S. cerevisiae ou outras leveduras, incluindo a toxina matadora, a sequência de sinais de Bar1, Suc2, Fator de acoplamento alfa, Inu1A ou Ggplp. As sequências-sinal podem ser clivadas por um número de peptidases-sinal, removendo-as assim do resto da proteína expressa. Em algumas modalidades, o restante do polipeptídeo é expresso isoladamente ou como uma fusão com outros peptídeos, marcadores ou proteínas localizadas no N- ou C-terminal (por exemplo, marcadores 6XHis, HA ou FLAG). Fusões adequadas incluem etiquetas, peptídeos ou proteínas que facilitam a purificação ou detecção por afinidade (por exemplo, BCE103, 6XHis, HA, proteína de ligação a quitina, tiorredoxina ou etiquetas FLAG), bem como os que facilitam a expressão, secreção ou processamento da mananase-alvo. Os sítios de processamento adequados incluem enterocinase, STE13, Kex2 ou outros locais de clivagem por protease para clivagem in vivo ou in vitro.[00137] Promoter and/or signal sequences associated with proteins secreted in a particular host of interest are candidates for use in the heterologous production and secretion of mannanases in that host or other hosts. As an example, in filamentous fungal systems, promoters driving the genes for cellobiohydrolase I (cbh1), glucoamylase A (glaA), TAKA-amylase (amyA), xylanase (exlA), the gpd promoter cbh1, cbhll, endoglucanase genes EGI-EGV, Cel61B, Cel74A, egl1-egl5, gpd promoter, Pgk1, pki1, EF-1alpha, tef1, cDNA1, and hex1 are particularly suitable and can be derived from a number of different organisms (e.g., A. niger, T. reesei, A. oryzae, A. awamori, and A. nidulans). In some embodiments, the polynucleotide is recombinantly associated with a polynucleotide encoding a homologous or heterologous signal sequence that leads to the secretion of a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein into the extracellular (or periplasmic) space, thereby allowing direct detection of enzymatic activity in the cell supernatant (or periplasmic space or lysate). Particularly suitable signal sequences for E. coli, other Gram-negative bacteria, and other organisms known in the art include those that lead to the expression of the HlyA, DsbA, Pbp, PhoA, PelB, OmpA, OmpT, or Gill genes of phage M13. For B. subtilis, Gram-positive organisms, and other organisms known in the art, particularly suitable signal sequences further include those that drive the expression of AprE, NprB, Mpr, AmyA, AmyE, Blac, SacB, and for S. cerevisiae or other yeasts, including the killer toxin, the signal sequence of Bar1, Suc2, Coupling Factor alpha, Inu1A, or Ggp1. The signal sequences can be cleaved by a number of signal peptidases, thereby removing them from the remainder of the expressed protein. In some embodiments, the remainder of the polypeptide is expressed alone or as a fusion with other peptides, tags, or proteins located at the N- or C-terminus (e.g., 6XHis, HA, or FLAG tags). Suitable fusions include tags, peptides, or proteins that facilitate affinity purification or detection (e.g., BCE103, 6XHis, HA, chitin-binding protein, thioredoxin, or FLAG tags), as well as those that facilitate expression, secretion, or processing of the target mannanase. Suitable processing sites include enterokinase, STE13, Kex2, or other protease cleavage sites for in vivo or in vitro cleavage.

[00138] Uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito pode ser introduzida em células hospedeiras de expressão por meio de um número de métodos de transformação incluindo, mas não limitados a, eletroporação, transfecção ou transformação assistida por lipídios (“lipofecção”), transfecção mediada quimicamente (por exemplo, CaCl e/ou CaP), transformação mediada por acetato de lítio (por exemplo, de protoplastos de células hospedeiras), transformação biolística “gene gun”, transformação mediada por PEG (por exemplo, de protoplastos de células hospedeiras), fusão de protoplastos (por exemplo, usando protoplastos bacterianos ou eucarióticos), transformação mediada por lipossomas, Agrobacterium tumefaciens, transformação ou transdução de adenovírus ou outros vírus ou fagos.[00138] A mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein can be introduced into expression host cells by a number of transformation methods including, but not limited to, electroporation, lipid-assisted transfection or transformation (“lipofection”), chemically mediated transfection (e.g., CaCl and/or CaP), lithium acetate-mediated transformation (e.g., of host cell protoplasts), biolistic “gene gun” transformation, PEG-mediated transformation (e.g., of host cell protoplasts), protoplast fusion (e.g., using bacterial or eukaryotic protoplasts), liposome-mediated transformation, Agrobacterium tumefaciens, adenovirus or other virus or phage transformation or transduction.

[00139] Alternativamente, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma aqui descrito pode ser expresso de maneira intracelular. Opcionalmente, após expressão intracelular das variantes enzimáticas ou secreção para o espaço periplásmico usando sequências-sinal tais como as mencionadas acima, pode ser usada uma etapa de permeabilização ou lise para liberar o polipeptídeo para o sobrenadante. A ruptura da barreira membranar é efetuada através do uso de meios mecânicos tais como ondas ultrassônicas, tratamento com pressão (prensa francesa), cavitação, ou através do uso de enzimas de digestão de membranas tais como a lisozima ou misturas enzimáticas. Como uma alternativa adicional, os polinucleotídeos que codificam uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo aqui descrito podem ser expressos utilizando um sistema de expressão livre de células adequado. Em sistemas isentos de células, o polinucleotídeo de interesse é tipicamente transcrito com o auxílio de um promotor, mas a ligação para formar um vetor de expressão circular é opcional. Em outras modalidades, o ARN é adicionado exogenamente ou gerado sem transcrição e traduzido em sistemas isentos de células.[00139] Alternatively, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein may be expressed intracellularly. Optionally, following intracellular expression of the enzyme variants or secretion into the periplasmic space using signal sequences such as those mentioned above, a permeabilization or lysis step may be used to release the polypeptide into the supernatant. Disruption of the membrane barrier is accomplished through the use of mechanical means such as ultrasonic waves, pressure treatment (French press), cavitation, or through the use of membrane-digesting enzymes such as lysozyme or enzyme mixtures. As a further alternative, polynucleotides encoding a mannanase variant or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein may be expressed using a suitable cell-free expression system. In cell-free systems, the polynucleotide of interest is typically transcribed with the aid of a promoter, but ligation to form a circular expression vector is optional. In other embodiments, the RNA is added exogenously or generated without transcription and translated in cell-free systems.

[00140] Outra modalidade se refere a uma composição de limpeza que compreende uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma e métodos para utilizar tais composições em aplicações de limpeza. As aplicações de limpeza incluem, sem limitação, limpeza de roupa ou têxteis, amaciamento de roupa ou têxteis, lavagem de louça (manual e automática), pré- tratamento de nódoas e semelhantes. Aplicações particulares são aquelas em que mananos (por exemplo, goma de alfarrobeira, goma guar, etc.) são um componente das sujeiras ou manchas a serem removidas.[00140] Another embodiment relates to a cleaning composition comprising a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof, and methods for using such compositions in cleaning applications. Cleaning applications include, without limitation, cleaning of clothing or textiles, softening of clothing or textiles, dishwashing (manual and automatic), pre-treatment of stains, and the like. Particular applications are those in which mannans (e.g., locust bean gum, guar gum, etc.) are a component of the soils or stains to be removed.

[00141] Composições de limpeza tipicamente incluem uma quantidade eficaz de uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo aqui descrito, por exemplo, pelo menos 0,0001 por cento em peso, de cerca de 0,0001 a cerca de 1, de cerca de 0,001 a cerca de 0,5, de cerca de 0,01 a cerca de 0,1 por cento em peso, ou até de cerca de 0,1 a cerca de 1 por cento em peso, ou mais. Uma quantidade eficaz de uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo na composição de limpeza resulta na variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo do mesmo tendo atividade enzimática suficiente para hidrolisar um substrato contendo manano, como a goma de alfarroba, goma de guar ou combinações dos mesmos.[00141] Cleaning compositions typically include an effective amount of a recombinant mannanase or polypeptide variant or active fragment thereof described herein, for example, at least 0.0001 weight percent, from about 0.0001 to about 1, from about 0.001 to about 0.5, from about 0.01 to about 0.1 weight percent, or even from about 0.1 to about 1 weight percent, or more. An effective amount of a recombinant mannanase or polypeptide variant or active fragment thereof in the cleaning composition results in the recombinant mannanase or polypeptide variant or active fragment thereof having sufficient enzymatic activity to hydrolyze a mannan-containing substrate, such as locust bean gum, guar gum, or combinations thereof.

[00142] Algumas modalidades se referem a uma composição de limpeza sob uma forma selecionada de pó, líquido, granular, barra, sólido, semissólido, gel, pasta, emulsão, tablete, cápsula, dose unitária, lâmina e espuma. Em algumas modalidades, a composição de limpeza é uma composição detergente. Em outras modalidades, a composição de limpeza ou composição detergente é selecionada dentre um detergente para lavagem de roupas, um detergente amaciante de tecido, um detergente para lavagem de louças e um detergente para limpeza de superfícies rígidas.[00142] Some embodiments relate to a cleaning composition in a form selected from powder, liquid, granular, bar, solid, semi-solid, gel, paste, emulsion, tablet, capsule, unit dose, sheet, and foam. In some embodiments, the cleaning composition is a detergent composition. In other embodiments, the cleaning composition or detergent composition is selected from a laundry detergent, a fabric softener detergent, a dishwashing detergent, and a hard surface cleaning detergent.

[00143] A menos que seja notado o contrário, todos níveis de componente ou composição fornecidos no presente documento são feitos em referência ao nível ativo daquele componente ou daquela composição, e são exclusivos em termos de impurezas, por exemplo, solventes residuais ou subprodutos, que podem estar presentes em fontes comercialmente disponíveis. Os pesos de componente de enzima se baseiam na proteína ativa total. Todas as porcentagens e as razões são calculadas em peso a menos que seja indicado o contrário. Todas as porcentagens e as razões são calculadas com base na composição total a menos que seja indicado o contrário. Em composições de detergente exemplificativas, os níveis de enzima são expressos por enzima pura em peso da composição total e a menos que seja especificado de outro modo, os ingredientes detergentes são expressos em peso das composições totais.[00143] Unless otherwise noted, all component or composition levels provided herein are made with reference to the active level of that component or composition, and are exclusive of impurities, e.g., residual solvents or byproducts, which may be present in commercially available sources. Enzyme component weights are based on total active protein. All percentages and ratios are calculated by weight unless otherwise indicated. All percentages and ratios are calculated based on total composition unless otherwise indicated. In exemplary detergent compositions, enzyme levels are expressed per pure enzyme by weight of the total composition, and unless otherwise specified, detergent ingredients are expressed by weight of the total compositions.

[00144] Em algumas modalidades, as composições de limpeza aqui descritas compreendem adicionalmente um tensoativo. Em algumas modalidades, o tensoativo é selecionado de um não iônico, anfolítico, semipolar, aniônico, catiônico, zwitteriônico, e combinações e misturas dos mesmos. Em uma modalidades adicional, o tensoativo iônico é selecionado de um tensoativo aniônico, um tensoativo catiônico, um tensoativo zwitteriônico e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, as composições de limpeza aqui descritas compreendem de cerca de 0,1% a cerca de 60%, cerca de 1% a cerca de 50%, ou cerca de 5% a cerca de 40% de tensioativo em peso da composição. Tensoativos exemplificadores incluem, mas sem limitação, dodecilbenzeno sulfonato de sódio, C12-14 pareth-7, C12-15 pareth-7, C12-15 pareth sulfato de sódio, C14-15 pareth-4, laureth sulfato de sódio (por exemplo, Steol CS-370), cocoato hidrogenado de sódio, C12 etoxilados (Alfonic 1012-6, Hetoxol LA7, Hetoxol LA4), alquil benzeno sulfonatos de sódio (por exemplo, Nacconol 90G), e combinações e misturas dos mesmos. Tensoativos aniônicos incluem, mas sem limitação, alquilbenzenossulfonato linear (LAS), alfa-olefinsulfonato (AOS), alquil sulfato (sulfato de álcool graxo) (AS), etoxissulfato de álcool (AEOS ou AES), alcanossulfonatos secundários (SAS), metil ésteres de ácido alfa-sulfo graxo, ácido alquil- ou alcenilsuccínico, ou sabão. Os tensoativos não iônicos incluem, mas sem limitação, etoxilato de álcool (AEO ou AE), etoxilatos de álcool carboxilados, etoxilato de nonilfenol, alquilpoliglicosídeo, óxido de alquildimetilamina, monoetanolamida de ácido graxo etoxilada, monoetanolamida de ácido graxo, amida de ácido graxo de poli-hidróxi alquila (por exemplo, conforme descrito no documento WO92/06154), ésteres de polioxietileno de ácidos graxos, ésteres de polioxietileno sorbitano (por exemplo, TWEENs), álcoois de polioxietileno, isoálcoois de polioxietileno, éteres de polioxietileno (por exemplo, TRITONs e BRIJ), ésteres de polioxietileno, polioxietileno-p-terc-octilfenóis oucondensados de óxido de octilfenil-etileno (por exemplo, NONIDET P40), condensados de óxido de etileno com álcoois graxos (por exemplo, LUBROL), polioxietileno nonilfenóis, polialquileno glicóis (SINPERONIC F108), tensoativos à base de açúcar (por exemplo, glicopiranosídeos, tioglicopiranosídeos) e combinações e misturas dos mesmos.[00144] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise a surfactant. In some embodiments, the surfactant is selected from a nonionic, ampholytic, semipolar, anionic, cationic, zwitterionic, and combinations and mixtures thereof. In a further embodiment, the ionic surfactant is selected from an anionic surfactant, a cationic surfactant, a zwitterionic surfactant, and combinations thereof. In some embodiments, the cleaning compositions described herein comprise from about 0.1% to about 60%, about 1% to about 50%, or about 5% to about 40% surfactant by weight of the composition. Exemplary surfactants include, but are not limited to, sodium dodecylbenzene sulfonate, C12-14 pareth-7, C12-15 pareth-7, C12-15 sodium pareth sulfate, C14-15 pareth-4, sodium laureth sulfate (e.g., Steol CS-370), sodium hydrogen cocoate, C12 ethoxylates (Alfonic 1012-6, Hetoxol LA7, Hetoxol LA4), sodium alkyl benzene sulfonates (e.g., Nacconol 90G), and combinations and mixtures thereof. Anionic surfactants include, but are not limited to, linear alkylbenzenesulfonate (LAS), alpha-olefinsulfonate (AOS), alkyl sulfate (fatty alcohol sulfate) (AS), alcohol ethoxysulfate (AEOS or AES), secondary alkanesulfonates (SAS), alpha-sulfo fatty acid methyl esters, alkyl- or alkenylsuccinic acid, or soap. Nonionic surfactants include, but are not limited to, alcohol ethoxylate (AEO or AE), carboxylated alcohol ethoxylates, nonylphenol ethoxylate, alkylpolyglucoside, alkyldimethylamine oxide, ethoxylated fatty acid monoethanolamide, fatty acid monoethanolamide, polyhydroxy alkyl fatty acid amide (e.g., as described in WO92/06154), polyoxyethylene esters of fatty acids, polyoxyethylene sorbitan esters (e.g., TWEENs), polyoxyethylene alcohols, polyoxyethylene isoalcohols, polyoxyethylene ethers (e.g., TRITONs and BRIJ), polyoxyethylene esters, polyoxyethylene-p-tert-octylphenols or octylphenyl ethylene oxide condensates (e.g., NONIDET P40), polyoxyethylene oxide condensates ethylene with fatty alcohols (e.g. LUBROL), polyoxyethylene nonylphenols, polyalkylene glycols (SINPERONIC F108), sugar-based surfactants (e.g. glycopyranosides, thioglycopyranosides) and combinations and mixtures thereof.

[00145] Em uma modalidade adicional, as composições detergentes reveladas no presente documento compreendem adicionalmente uma mistura de tensoativos que inclui, mas sem limitação, 5 a 15% de tensoativos aniônicos, < 5% de tensoativos não iônicos, tensoativos catiônicos, fosfonatos, sabão, enzimas, perfume, metilpropionato de butilfenila, geraniol, zeólita, policarboxilados, hexil cinamal, limoneno, tensoativos catiônicos, citronelol e benzisotiazolinona.[00145] In an additional embodiment, the detergent compositions disclosed herein further comprise a surfactant blend that includes, but is not limited to, 5 to 15% anionic surfactants, <5% nonionic surfactants, cationic surfactants, phosphonates, soap, enzymes, perfume, butylphenyl methylpropionate, geraniol, zeolite, polycarboxylates, hexyl cinnamal, limonene, cationic surfactants, citronellol, and benzisothiazolinone.

[00146] As composições de limpeza descritas no presente documento podem incluir adicionalmente um ou mais adjuvantes técnicos de detergente ou sistemas de adjuvante técnico, um agente complexante, um polímero, um sistema de branqueamento, estabilizante, um reforçador de bolhas de sabão, um supressor de bolhas de sabão, um agente anticorrosão, um agente de suspensão de sujeira, um agente antirredeposição de sujeira, um corante, um bactericida, um hidrótopo, um inibidor de deslustre, um abrilhantador óptico, um condicionador de tecido e um perfume. As composições de limpeza descritas no presente documento podem também incluir enzimas adicionais selecionadas dentre proteases, amilases, celulases, lipases, enzimas de degradação de pectina, xiloglucanases ou éster carboxílico hidrolases adicionais.[00146] The cleaning compositions described herein may additionally include one or more detergent builders or builder systems, a complexing agent, a polymer, a bleaching system, a stabilizer, a bubble enhancer, a bubble suppressor, an anti-corrosion agent, a soil suspending agent, a soil anti-redeposition agent, a colorant, a bactericide, a hydrotrope, a tarnish inhibitor, an optical brightener, a fabric conditioner, and a perfume. The cleaning compositions described herein may also include additional enzymes selected from proteases, amylases, cellulases, lipases, pectin degrading enzymes, xyloglucanases, or additional carboxylic ester hydrolases.

[00147] Em algumas modalidades, a composição de limpeza descrita no presente documento compreende adicionalmente de cerca de 1%, de cerca de 3% a cerca de 60% ou até mesmo de cerca de 5% a cerca de 40% de adjuvante técnico em peso da composição de limpeza. Os adjuvantes técnicos podem incluir, mas sem limitação, os metais alcalinos, sais de amônio e alcanolamônio de polifosfatos, silicatos de metal alcalino, carbonatos de metais alcalinos e alcalino-terrosos, aluminossilicatos, compostos de policarboxilato, hidroxipolicarboxilatos de éter, copolímeros de anidrido maleico com etileno ou éter vinil metílico, ácido 1,3,5-tri-hidroxi benzeno-2,4,6-trissulônico e ácido carboximetiloxissuccínico, os vários metais alcalinos, sais de amônio e amônio substituído de ácidos poliacéticos, tais como ácido etilenodiamina tetra-acético e ácido nitrilotriacético, assim como policarboxilatos, tais como ácido melítico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido oxidissuccínico, ácido polimaleico, ácido benzeno 1,3,5- tricarboxílico, ácido carboximetiloxissuccínico e sais solúveis dos mesmos.[00147] In some embodiments, the cleaning composition described herein additionally comprises from about 1%, from about 3% to about 60% or even from about 5% to about 40% technical adjuvant by weight of the cleaning composition. Technical adjuvants may include, but are not limited to, the alkali metal, ammonium and alkanolammonium salts of polyphosphates, alkali metal silicates, alkali and alkaline earth metal carbonates, aluminosilicates, polycarboxylate compounds, ether hydroxypolycarboxylates, copolymers of maleic anhydride with ethylene or vinyl methyl ether, 1,3,5-trihydroxybenzene-2,4,6-trisulonic acid and carboxymethyloxysuccinic acid, the various alkali metal, ammonium and substituted ammonium salts of polyacetic acids such as ethylenediaminetetraacetic acid and nitrilotriacetic acid, as well as polycarboxylates such as mellitic acid, succinic acid, citric acid, oxydisuccinic acid, polymaleic acid, benzene-1,3,5-tricarboxylic acid, carboxymethyloxysuccinic acid and soluble salts thereof.

[00148] Em algumas modalidades, os adjuvantes técnicos de complexos iônicos de dureza solúveis em água (por exemplo, adjuvantes técnicos sequestrantes), tais como citratos e polifosfatos (por exemplo, tripolifosfato de sódio e tripolifosfato de sódio hexaidratado, tripolifosfato de potássio e tripolifosfato de sódio e potássio misturados, etc.). Qualquer adjuvante técnico adequado pode encontrar uso nas composições descritas no presente documento, incluindo aquelas conhecidas na técnica (consultar, por exemplo, o documento EP 2100949).[00148] In some embodiments, water-soluble ionic hardness complex technical adjuvants (e.g., sequestering technical adjuvants), such as citrates and polyphosphates (e.g., sodium tripolyphosphate and sodium tripolyphosphate hexahydrate, potassium tripolyphosphate and mixed sodium and potassium tripolyphosphate, etc.). Any suitable technical adjuvant may find use in the compositions described herein, including those known in the art (see, for example, EP 2100949).

[00149] Conforme indicado no presente documento, em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente um ingrediente auxiliar incluindo, mas sem limitação, tensoativos, adjuvantes técnicos, alvejantes, ativadores de alvejante, catalisadores de alvejante, outras enzimas, sistemas de estabilização de enzima, quelantes, abrilhantadores ópticos, polímeros de liberação de sujeira, agentes de transferência de corante, agentes inibidores de transferência de corante, materiais catalíticos, peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácidos pré-formados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de remoção de sujeira de argila, agentes de elasticidade de estrutura, dispersantes, supressores de bolhas de sabão, corantes, perfumes, colorantes, sais de carga, hidrótopos, fotoativadores, agentes de fluorescência, condicionadores de tecido, tensoativos hidrolisáveis, solventes, conservantes, antioxidantes, agentes antiencolhimento, agentes antiamarrotamento, germicidas, fungicidas,salpicos de cor, silvercare, agentes antideslustre e/ou anticorrosão, fontes de alcalinidade, agentes solubilizantes, carreadores, auxiliares de processamento, pigmentos e agentes de controle de pH (Consultar, por exemplo, os documentos US 6.610.642; 6.605.458; 5.705.464; 5.710.115; 5.698.504; 5.695.679; 5.686.014; e 5.646.101). Em algumas modalidades, um ou mais auxiliar é incorporado, por exemplo, para ajudar ou melhorar o desempenho da limpeza, para o tratamento do substrato a ser limpo ou para modificar a estética da composição de limpeza como é o caso com perfumes, colorantes, corantes ou similares. Qualquer tal ingrediente auxiliar é adicional à variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento. A natureza precisa destes componentes adicionais, e seus níveis de incorporação, dependerá da forma física da composição e da natureza da operação de limpeza para a qual devem ser usados.[00149] As indicated herein, in some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise an auxiliary ingredient including, but not limited to, surfactants, technical adjuvants, bleaches, bleach activators, bleach catalysts, other enzymes, enzyme stabilization systems, chelators, optical brighteners, soil release polymers, dye transfer agents, dye transfer inhibiting agents, catalytic materials, hydrogen peroxide, hydrogen peroxide sources, preformed peracids, polymeric dispersing agents, clay soil removal agents, structure stretch agents, dispersants, bubble suppressants, dyes, perfumes, colorants, loading salts, hydrotopes, photoactivators, fluorescence agents, fabric conditioners, hydrolyzable surfactants, solvents, preservatives, antioxidants, anti-shrinkage agents, anti-wrinkling agents, germicides, fungicides, color splashes, silvercare, anti-tarnish and/or anti-corrosion agents, alkalinity sources, solubilizing agents, carriers, processing aids, pigments, and pH control agents (See, for example, US Pat. No. 6,610,642; 6,605,458; 5,705,464; 5,710,115; 5,698,504; 5,695,679; 5,686,014; and 5,646,101). In some embodiments, one or more auxiliaries are incorporated, for example, to aid or improve cleaning performance, to treat the substrate to be cleaned, or to modify the aesthetics of the cleaning composition as is the case with perfumes, colorants, dyes, or the like. Any such auxiliary ingredient is in addition to the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein. The precise nature of these additional components, and their levels of incorporation, will depend on the physical form of the composition and the nature of the cleaning operation for which they are to be used.

[00150] Nas modalidades em que um ou mais ingredientes auxiliares não são compatíveis com a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma, métodos adequados podem ser empregados para manter o ingrediente auxiliar de limpeza e as mananases separados (isto é, não em contato um com o outro) até a combinação dos dois componentes ser apropriada. Tais métodos de separação incluem qualquer método adequado conhecido na técnica (por exemplo, cápsulas de gel, encapsulamento, tabletes, separação física, etc.). A seleção específica de ingredientes auxiliares adequados é prontamente feita considerando-se a superfície, o item ou o tecido a ser limpo e a forma desejada da composição para as condições de limpeza durante o uso (por exemplo, através do uso de detergente de lavagem).[00150] In embodiments where one or more auxiliary ingredients are not compatible with the mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof, suitable methods may be employed to keep the cleaning auxiliary ingredient and the mannanases separate (i.e., not in contact with each other) until the combination of the two components is suitable. Such separation methods include any suitable method known in the art (e.g., gel capsules, encapsulation, tablets, physical separation, etc.). The specific selection of suitable auxiliary ingredients is readily made by considering the surface, item, or fabric to be cleaned and the desired form of the composition for the cleaning conditions during use (e.g., through the use of laundry detergent).

[00151] As composições de limpeza descritas no presente documento são vantajosamente empregadas, por exemplo, em aplicações de lavagem de roupas, limpeza de superfície dura, aplicações de lavagem de louças, assim como aplicações cosméticas. Ademais, os polipeptídeos da presente invenção podem encontrar uso em composições líquidas e granulares.[00151] The cleaning compositions described herein are advantageously employed, for example, in laundry applications, hard surface cleaning, dishwashing applications, as well as cosmetic applications. Furthermore, the polypeptides of the present invention may find use in liquid and granular compositions.

[00152] Uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode também encontrar uso em produtos aditivos de limpeza. Em algumas modalidades, o aditivo é embalado em uma forma de dosagem adequada para adição a um processo de limpeza. Em algumas modalidades, o aditivo é embalado em uma forma de dosagem para adição a um processo de limpeza em que uma fonte de peroxigênio é empregada, e eficácia de branqueamento aumentada é desejada. Qualquer forma de dosagem unitária única adequada encontra uso com a presente revelação, incluindo, mas sem limitação, pílulas, tabletes, cápsulas de gel ou outra forma de dosagem unitária única, tais como líquidos ou pós pré-medidos. Em algumas modalidades, a carga (ou cargas) ou material (ou materiais) carreador é incluído para aumentar o volume de tais composições. Os materiais adequados incluem adequados incluem, mas sem limitação, vários sais de sulfato, carbonato e silicato assim como talco, argila e similares. Os materiais de carga ou carreadores para composições líquidas incluem, mas sem limitação, água ou álcoois primários e secundários de baixo peso molecular incluindo polióis e dióis. Os exemplos de tais álcoois incluem, mas sem limitação, metanol, etanol, propanol e isopropanol. Em algumas modalidades, as composições contêm de cerca de 5% a cerca de 90% de tais materiais. Cargas ácidas encontram uso na redução de pH. Alternativamente, em algumas modalidades, o aditivo de limpeza inclui um ou mais ingredientes auxiliares.[00152] A mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein may also find use in cleaning additive products. In some embodiments, the additive is packaged in a dosage form suitable for addition to a cleaning process. In some embodiments, the additive is packaged in a dosage form for addition to a cleaning process in which a peroxygen source is employed, and increased bleaching efficacy is desired. Any suitable single unit dosage form finds use with the present disclosure, including, but not limited to, pills, tablets, gel capsules or other single unit dosage form, such as pre-measured liquids or powders. In some embodiments, a filler(s) or carrier material(s) is included to increase the bulk of such compositions. Suitable materials include, but are not limited to, various sulfate, carbonate and silicate salts as well as talc, clay and the like. Filler or carrier materials for liquid compositions include, but are not limited to, water or low molecular weight primary and secondary alcohols including polyols and diols. Examples of such alcohols include, but are not limited to, methanol, ethanol, propanol, and isopropanol. In some embodiments, the compositions contain from about 5% to about 90% of such materials. Acidic fillers find use in reducing pH. Alternatively, in some embodiments, the cleaning additive includes one or more auxiliary ingredients.

[00153] Em uma modalidade, a composição de limpeza ou aditivo de limpeza contém uma quantidade eficaz de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento, opcionalmente em combinação com outras mananases e/ou enzimas adicionais. Em determinadas modalidades, as enzimas adicionais incluem, mas sem limitação, pelo menos uma enzima selecionada dentre acil transferases, amilases, alfa-amilases, beta-amilases, alfa-galactosidases, arabinases, arabinosidases, aril esterases, beta-galactosidases, beta-glucanases, carrageenases, catalases, celobio-hidrolases, celulases, condroitinases, cutinases, endo-beta-1, 4-glucanases, endo-beta-mananases, exo-beta-mananases, esterases, exo-mananases, galactanases, glucoamilases, hemicelulases, hialuronidases, queratinases, lacases, lactases, ligninases, lipases, enzimas lipolíticas, lipoxigenases, mananases, metaloproteases, oxidases, pectato liases, pectina acetil esterases, pectinases, pentosanases, peridrolases, peroxidases, fenoloxidases, fosfatases, fosfolipases, fitases, poligalacturonases, proteases, pululanases, redutases, ramnogalacturonases, beta-glucanases,tanases, transglutaminases, xilano acetil-esterases, xilanases, xiloglucanases, xilosidases e combinações das mesmas. Em modalidades adicionais, as composições de limpeza ou aditivos de limpeza descritos no presente documento compreendem adicionalmente uma protease e/ou amilase.[00153] In one embodiment, the cleaning composition or cleaning additive contains an effective amount of a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein, optionally in combination with other additional mannanases and/or enzymes. In certain embodiments, additional enzymes include, but are not limited to, at least one enzyme selected from acyl transferases, amylases, alpha-amylases, beta-amylases, alpha-galactosidases, arabinases, arabinosidases, aryl esterases, beta-galactosidases, beta-glucanases, carrageenanses, catalases, cellobiohydrolases, cellulases, chondroitinases, cutinases, endo-beta-1,4-glucanases, endo-beta-mannanases, exo-beta-mannanases, esterases, exo-mannanases, galactanases, glucoamylases, hemicellulases, hyaluronidases, keratinases, laccases, lactases, ligninases, lipases, lipolytic enzymes, lipoxygenases, mannanases, metalloproteases, oxidases, pectate lyases, pectin acetyl esterases, pectinases, pentosanases, perhydrolases, peroxidases, phenoloxidases, phosphatases, phospholipases, phytases, polygalacturonases, proteases, pullulanases, reductases, rhamnogalacturonases, beta-glucanases, tannases, transglutaminases, xylan acetyl esterases, xylanases, xyloglucanases, xylosidases, and combinations thereof. In additional embodiments, the cleaning compositions or cleaning additives described herein further comprise a protease and/or amylase.

[00154] As composições de limpeza no presente documento são tipicamente formuladas de modo que, durante o uso em operações de limpeza aquosa, a água de lavagem terá um pH de cerca de 3,0 a cerca de 11. As formulações de produto líquidas são tipicamente formuladas para terem um pH puro de cerca de 5,0 a cerca de 9,0. Os produtos para lavagem de roupas granulares são tipicamente formulados para ter um pH de cerca de 8,0 a cerca de 11,0. As técnicas para controlar o pH em níveis de uso recomendados incluem o uso de tampões, álcalis, ácidos, etc. e são bem conhecidas por aqueles versados na arte.[00154] The cleaning compositions herein are typically formulated so that, during use in aqueous cleaning operations, the wash water will have a pH of about 3.0 to about 11. Liquid product formulations are typically formulated to have a pure pH of about 5.0 to about 9.0. Granular laundry products are typically formulated to have a pH of about 8.0 to about 11.0. Techniques for controlling pH at recommended use levels include the use of buffers, alkalis, acids, etc. and are well known to those skilled in the art.

[00155] As composições de limpeza de baixo pH adequadas têm tipicamente um pH puro de cerca de 3,0 a cerca de 5,0 ou até mesmo de cerca de 3,5 a cerca de 4,5. As composições de limpeza de baixo pH são tipicamente isentas de tensoativos que hidrolisam em tal ambiente de pH. Tais tensoativos incluem tensoativos de alquil sulfato de sódio que compreendem pelo menos uma porção química de óxido de etileno ou até mesmo de cerca de 1 a cerca de 16 mol de óxido de etileno. Tais composições de limpeza compreendem tipicamente uma quantidade suficiente de um modificador de pH, tal como hidróxido de sódio, monoetanolamina ou ácido clorídrico, para fornecer tal composição de limpeza com um pH puro de cerca de 3,0 a cerca de 5,0. Tais composições compreendem tipicamente pelo menos uma enzima estável em relação a ácidos. Em algumas modalidades, as composições são líquidas, embora em outras modalidades as mesmas sejam sólidas. O pH de tais composições líquidas é tipicamente medido como um pH puro. O pH de tais composições sólidas é medido como uma solução de sólidos 10% da composição em que o solvente é água destilada. Nessas modalidades, todas as medições de pH são tomadas a 20 °C, a não ser que indicado de outro modo.[00155] Suitable low pH cleaning compositions typically have a pure pH of about 3.0 to about 5.0 or even about 3.5 to about 4.5. Low pH cleaning compositions are typically free of surfactants that hydrolyze in such a pH environment. Such surfactants include sodium alkyl sulfate surfactants that comprise at least one chemical moiety of ethylene oxide or even from about 1 to about 16 moles of ethylene oxide. Such cleaning compositions typically comprise a sufficient amount of a pH modifier, such as sodium hydroxide, monoethanolamine, or hydrochloric acid, to provide such cleaning composition with a pure pH of about 3.0 to about 5.0. Such compositions typically comprise at least one acid-stable enzyme. In some embodiments, the compositions are liquid, although in other embodiments they are solid. The pH of such liquid compositions is typically measured as a pure pH. The pH of such solid compositions is measured as a 10% solids solution of the composition in which the solvent is distilled water. In these embodiments, all pH measurements are taken at 20 °C unless otherwise indicated.

[00156] As composições de limpeza de alto pH adequadas têm tipicamente um pH puro de cerca de 9,0 a cerca de 11,0 ou até mesmo um pH puro de 9,5 a 10,5. Tais composições de limpeza compreendem tipicamente uma quantidade suficiente de um modificador de pH, tal como hidróxido de sódio, monoetanolamina ou ácido clorídrico, para fornecer tal composição de limpeza com um pH puro de cerca de 9,0 a cerca de 11,0. Tais composições compreendem tipicamente pelo menos uma enzima estável em relação a bases. Em algumas modalidades, as composições são líquidas, embora em outras modalidades as mesmas sejam sólidas. O pH de tais composições líquidas é tipicamente medido como um pH puro. O pH de tais composições sólidas é medido como uma solução de sólidos 10% da dita composição em que o solvente é água destilada. Nessas modalidades, todas as medições de pH são tomadas a 20 °C, a não ser que indicado de outro modo.[00156] Suitable high pH cleaning compositions typically have a pure pH of about 9.0 to about 11.0 or even a pure pH of 9.5 to 10.5. Such cleaning compositions typically comprise a sufficient amount of a pH modifier, such as sodium hydroxide, monoethanolamine, or hydrochloric acid, to provide such cleaning composition with a pure pH of about 9.0 to about 11.0. Such compositions typically comprise at least one base-stable enzyme. In some embodiments, the compositions are liquids, although in other embodiments they are solids. The pH of such liquid compositions is typically measured as a pure pH. The pH of such solid compositions is measured as a 10% solids solution of said composition in which the solvent is distilled water. In such embodiments, all pH measurements are taken at 20°C, unless otherwise indicated.

[00157] Em algumas modalidades, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma está na forma de uma partícula encapsulada para proteger o mesmo de outros componentes da composição granular durante o armazenamento. Adicionalmente, o encapsulamento é também um meio de controlar a disponibilidade da variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma durante o processo de limpeza. Em algumas modalidades, o encapsulamento melhora o desempenho da variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma e/ou enzimas adicionais. Nesse sentido, a variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma é encapsulado com qualquer material de encapsulamento adequado conhecido na técnica. Tipicamente, o material de encapsulamento é solúvel em água e/ou dispersável em água. Em algumas modalidades, o material de encapsulamento tem uma temperatura de transição vítrea (Tg) de 0 °C ou mais alta. A temperatura de transição vítrea é descrita em mais detalhes no documento WO97/11151. O material de encapsulamento é tipicamente selecionado dentre carboidratos, gomas naturais ou sintéticas, quitina, quitosano, celulose e derivados de celulose, silicatos, fosfatos, boratos, álcool polivinílico, polietileno glicol, ceras de parafina e combinações dos mesmos. Quando o material de encapsulamento for um carboidrato, o mesmo é tipicamente selecionado dentre monossacarídeos, oligossacarídeos, polissacarídeos e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades típicas, o material de encapsulamento é um amido (consultar, por exemplo, os documentos EP0922499 e US 4.977.252; 5.354.559; e 5.935.826). Em algumas modalidades, o material de encapsulamento é uma microesfera produzida a partir de plástico, tais como termoplásticos, acrilonitrila, metacrilonitrila, poliacrilonitrila, polimetacrilonitrila e misturas dos mesmos; as microesferas comercialmente disponíveis que encontram uso incluem, mas sem limitação, aquelas fornecidas junto à EXPANCEL® (Stockviksverken, Suécia) e PM6545, PM6550, PM7220, PM7228, EXTENDOSPHERES®, LUXSIL®, Q-CEL® e SPHERICEL® (PQ Corp., Valley Forge, PA).[00157] In some embodiments, the mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof is in the form of an encapsulated particle to protect it from other components of the granular composition during storage. Additionally, encapsulation is also a means of controlling the availability of the mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof during the cleaning process. In some embodiments, encapsulation improves the performance of the mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof and/or additional enzymes. In this regard, the mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof is encapsulated with any suitable encapsulation material known in the art. Typically, the encapsulation material is water-soluble and/or water-dispersible. In some embodiments, the encapsulation material has a glass transition temperature (Tg) of 0 °C or higher. The glass transition temperature is described in more detail in WO97/11151. The encapsulation material is typically selected from carbohydrates, natural or synthetic gums, chitin, chitosan, cellulose and cellulose derivatives, silicates, phosphates, borates, polyvinyl alcohol, polyethylene glycol, paraffin waxes, and combinations thereof. When the encapsulation material is a carbohydrate, it is typically selected from monosaccharides, oligosaccharides, polysaccharides, and combinations thereof. In some typical embodiments, the encapsulation material is a starch (see, for example, EP0922499 and US 4,977,252; 5,354,559; and 5,935,826). In some embodiments, the encapsulation material is a microsphere made from plastic, such as thermoplastics, acrylonitrile, methacrylonitrile, polyacrylonitrile, polymethacrylonitrile, and mixtures thereof; commercially available microspheres that find use include, but are not limited to, those supplied by EXPANCEL® (Stockviksverken, Sweden) and PM6545, PM6550, PM7220, PM7228, EXTENDOSPHERES®, LUXSIL®, Q-CEL® and SPHERICEL® (PQ Corp., Valley Forge, PA).

[00158] O termo "composição granular" refere-se a um conglomerado de partículas macroscópicas sólidas distintas. Pós são uma classe especial de material granular devido a seu tamanho pequeno de partícula que torna os mesmos mais coesivos e mais facilmente suspensos.[00158] The term "granular composition" refers to a conglomerate of distinct solid macroscopic particles. Powders are a special class of granular material because of their small particle size which makes them more cohesive and more easily suspended.

[00159] As concentrações de composições detergentes em soluções de lavagem típicas por todo o mundo variam e menos do que cerca de 800 ppm de composição detergente ("geografias de baixa concentração de detergente"), por exemplo, cerca de 667 ppm no Japão, a entre cerca de 800 ppm a cerca de 2.000 ppm ("geografias de média concentração de detergente"), por exemplo, cerca de 975 ppm nos EUA e cerca de 1.500 ppm no Brasil, a mais do que cerca de 2.000 ppm ("geografias de alta concentração de detergente"), por exemplo, cerca de 4.500 ppm a cerca de 5.000 ppm na Europa e cerca de 6.000 ppm em geografias de adjuvante técnico de fosfato de bolhas de sabão de alto teor.[00159] Concentrations of detergent compositions in typical wash solutions around the world vary from less than about 800 ppm of detergent composition ("low detergent concentration geographies"), e.g., about 667 ppm in Japan, to between about 800 ppm to about 2,000 ppm ("medium detergent concentration geographies"), e.g., about 975 ppm in the U.S. and about 1,500 ppm in Brazil, to more than about 2,000 ppm ("high detergent concentration geographies"), e.g., about 4,500 ppm to about 5,000 ppm in Europe and about 6,000 ppm in high-grade soap bubble phosphate builder geographies.

[00160] Em algumas modalidades, as composições detergentesdescritas no presente documento podem ser utilizadas a uma temperatura de cerca de 10 °C a cerca de 60°C, ou de cerca de 20°C a cerca de 60 C ou de cerca de 30°C a cerca de 60°C, de cerca de 40°C a cerca de 60°C, de cerca de 40°C a cerca de 55°C ou todas as faixas dentro de 10°C a 60°C. Em algumas modalidades, as composições detergentes descritas no presente documento são usadas em "lavagem de água fria" a temperaturas de cerca de 10°C a cerca de 40°C ou de cerca de 20°C a cerca de 30°C, de cerca de 15°C a cerca de 25°C, de cerca de 15°C a cerca de 35°C ou todas as faixas dentro de 10°C a 40°C.[00160] In some embodiments, the detergent compositions described herein can be used at a temperature of from about 10°C to about 60°C, or from about 20°C to about 60°C, or from about 30°C to about 60°C, from about 40°C to about 60°C, from about 40°C to about 55°C, or all ranges within 10°C to 60°C. In some embodiments, the detergent compositions described herein are used in "cold water wash" at temperatures from about 10°C to about 40°C, or from about 20°C to about 30°C, from about 15°C to about 25°C, from about 15°C to about 35°C, or all ranges within 10°C to 40°C.

[00161] Como um exemplo adicional, diferentes geografias têm tipicamente diferentes durezas de água. A dureza de água é normalmente descrita em termos de Ca2+/Mg2+ misturados com grãos por galão. A dureza é uma medida da quantidade de cálcio (Ca2+) e magnésio (Mg2+) na água. A maior parte da água nos Estados Unidos é dura, mas o grau de dureza varia. A água moderadamente dura (60 a 120 ppm) a dura (121 a 181 ppm) tem 60 a 181 partes por milhão (partes por milhão convertidas em grãos por galão americano é o n° de ppm dividido por 17,1 igual aos grãos por galão) de minerais de dureza.Tabela II. Níveis de Dureza de Água [00161] As an additional example, different geographies typically have different water hardnesses. Water hardness is typically described in terms of Ca2+/Mg2+ mixed with grains per gallon. Hardness is a measure of the amount of calcium (Ca2+) and magnesium (Mg2+) in the water. Most water in the United States is hard, but the degree of hardness varies. Moderately hard (60 to 120 ppm) to hard (121 to 181 ppm) water has 60 to 181 parts per million (parts per million converted to grains per US gallon is the number of ppm divided by 17.1 equals grains per gallon) of hardness minerals. Table II. Water Hardness Levels

[00162] A dureza de água europeia é tipicamente maior do que cerca de 10,5 (por exemplo, cerca de 10,5 a cerca de 20,0) grãos por galão de Ca2+/Mg2+ misturados (por exemplo, cerca de 15 grãos por galão de Ca2+/Mg2+ misturados). A dureza de água norte-americana é tipicamente maior do que a dureza de água japonesa, mas menor do que a dureza de água europeia. Por exemplo, a dureza de água norte-americana pode ser entre cerca de 3 a cerca de 10 grãos, cerca de 3 a cerca de 8 grãos ou cerca de 6 grãos. A dureza de água japonesa é tipicamente menor do que a dureza de água norte-americana, usualmente menor do que cerca de 4, por exemplo, cerca de 3 grãos por galão de Ca2+/Mg2+ misturados.[00162] European water hardness is typically greater than about 10.5 (e.g., about 10.5 to about 20.0) grains per gallon of mixed Ca2+/Mg2+ (e.g., about 15 grains per gallon of mixed Ca2+/Mg2+). North American water hardness is typically greater than Japanese water hardness, but less than European water hardness. For example, North American water hardness may be between about 3 to about 10 grains, about 3 to about 8 grains, or about 6 grains. Japanese water hardness is typically less than North American water hardness, usually less than about 4, e.g., about 3 grains per gallon of mixed Ca2+/Mg2+.

[00163] Em algumas modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é comparável em desempenho de lavagem a mananases comercialmente disponíveis. Em algumas modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento exibe desempenho de lavagem melhorado em comparação a mananases comercialmente disponíveis. Em algumas modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento exibe estabilidade oxidativa melhorada, estabilidade térmica melhorada, capacidades de limpeza melhoradas sob várias condições e/ou estabilidade de quelador melhorada. Adicionalmente, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode encontrar uso em composições de limpeza que não incluem detergentes, novamente, ou sozinho ou em combinação com adjuvantes técnicos e estabilizantes.[00163] In some embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is comparable in wash performance to commercially available mannanases. In some embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein exhibits improved wash performance compared to commercially available mannanases. In some embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein exhibits improved oxidative stability, improved thermal stability, improved cleaning capabilities under various conditions and/or improved chelator stability. Additionally, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein may find use in cleaning compositions that do not include detergents, again, either alone or in combination with technical adjuvants and stabilizers.

[00164] Adicionalmente às variantes de mananase ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento, qualquer outra mananase adequada pode encontrar uso nas composições descritas no presente documento ou sozinha ou em combinação com as variantes ou polipeptídeos recombinantes ou fragmentos ativos dos mesmos descritos no presente documento. As mananases adequadas incluem, mas sem limitação, mananases da família GH26 de glicosil hidrolases, mananases da família GH5 de glicosil hidrolases, mananases ácidas, mananases neutras e mananases alcalinas. Os exemplos de mananases alcalinas incluem aquelas descritas nos documentos US 6.060.299; 6.566.114; e6.602.842; e WO9535362, WO9964573, WO9964619 e WO2015022428. Adicionalmente, as mananases adequadas incluem, mas sem limitação, aquelas de origem animal, vegetal, fúngica ou bacteriano. Mutantes química ou geneticamente modificados são abrangidos pela presente revelação.[00164] In addition to the mannanase variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein, any other suitable mannanase may find use in the compositions described herein either alone or in combination with the variants or recombinant polypeptides or active fragments thereof described herein. Suitable mannanases include, but are not limited to, mannanases of the GH26 family of glycosyl hydrolases, mannanases of the GH5 family of glycosyl hydrolases, acidic mannanases, neutral mannanases and alkaline mannanases. Examples of alkaline mannanases include those described in US 6,060,299; 6,566,114; and 6,602,842; and WO9535362, WO9964573, WO9964619 and WO2015022428. Additionally, suitable mannanases include, but are not limited to, those of animal, plant, fungal or bacterial origin. Chemically or genetically modified mutants are encompassed by the present disclosure.

[00165] Os exemplos de mananases úteis incluem endo-β- mananases de Bacillus tais como endo-β-mananase de B. subtilis (consultar, por exemplo, os documentos US 6.060.299 e WO9964573), endo-β-mananase de Bacillus sp. I633 (consultar, por exemplo, os documentos US 6.566.114 e WO9964619), endo-β-mananase de Bacillus sp. AAI12 (consultar, por exemplo, os documentos US 6.566.114 e WO9964619), endo-β-mananase de B. sp. AA349 (consultar, por exemplo, os documentos US 6.566.114 e WO9964619), endo-β-mananase de B. agaradhaerens NCIMB 40482 (consultar, por exemplo, os documentos US 6.566.114 e WO9964619), endo-β- mananase de B. halodurans , endo-β-mananase de B. clausii (consultar, por exemplo, os documentos US 6.566.114 e WO9964619), endo-β- mananase de B. licheniformis (consultar, por exemplo, os documentos US 6.566.114 e WO9964619A1), endo-β-mananases de Humicola, tal como endo-β-mananase de H. insolens (consultar, por exemplo, os documentos US 6.566.114 e WO9964619) e endo-β-mananases de Caldocellulosiruptor, tal como endo-β-mananase de C. sp. (consultar, por exemplo, os documentos US 6.566.114 e WO9964619).[00165] Examples of useful mannanases include Bacillus endo-β-mannanases such as B. subtilis endo-β-mannanase (see, e.g., US 6,060,299 and WO9964573), Bacillus sp. endo-β-mannanase I633 (see, e.g., US 6,566,114 and WO9964619), Bacillus sp. endo-β-mannanase AAI12 (see, e.g., US 6,566,114 and WO9964619), B. sp. endo-β-mannanase AA349 (see, for example, US 6,566,114 and WO9964619), endo-β-mannanase from B. agaradhaerens NCIMB 40482 (see, for example, US 6,566,114 and WO9964619), endo-β-mannanase from B. halodurans, endo-β-mannanase from B. clausii (see, for example, US 6,566,114 and WO9964619), endo-β-mannanase from B. licheniformis (see, for example, US 6,566,114 and WO9964619A1), endo-β-mannanases from Humicola such as endo-β-mannanase from H. insolens (see, for example, US 6,566,114 and WO9964619) and endo-β-mannanases from Caldocellulosiruptor, such as endo-β-mannanase from C. sp. (see, for example, US 6,566,114 and WO9964619).

[00166] Ademais, várias mananases identificadas (isto é, endo-β- mananases e exo-β-mananases) encontram uso em algumas modalidades da presente revelação, incluindo, mas sem limitação, mananase de A. bisporus (consultar, Tang et al., [2001] Appl. Environ. Microbiol. 67:2.298 a 2.303), mananase de A. tamarii (consultar, Civas et al., [1984] Biochem. J. 219:857 a 863), mananase de A. aculeatus (consultar, Christgau et al., [1994] Biochem. Mol. Biol. Int. 33:917 a 925), mananase de A. awamori (consultar, Setati et al., [2001] Protein Express Purif. 21:105 a 114), mananase de A. fumigatus (consultar, Puchart et al., [2004] Biochimica et biophysica Acta. 1674:239 a 250), mananase de A. niger (consultar, Ademark et al., [1998] J. Biotechnol. 63:199 a 210), mananase de A. oryzae NRRL ( , Regalado et al., [2000] J. Sci. Food Agric. 80:1.343 a 1.350), mananase de A. sulphureus (consultar, Chen et al., [2007] J. Biotechnol. 128(3):452 a 461), mananase de A. terrus (consultar, Huang et al., [2007] Wei Sheng Wu Xue Bao. 47(2): 280 a 284), mananase de Paenibacillus e Bacillus spp. (consultar, o documento US 6.376.445.), mananase de Bacillus AM001 (consultar, Akino et al., [1989] Arch. Microbiol. 152:10 a 15), mananase de B. brevis (consultar, Araujo e Ward, [1990] J. Appl. Bacteriol. 68:253 a 261), mananase de B. circulans K-1 (consultar, Yoshida et al., [1998] Biosci. Biotechnol. Biochem. 62(3):514 a 520), mananase de B. polimyxa (consultar, Araujo e Ward, [1990] J. Appl. Bacteriol. 68:253 a 261), mananase de Bacillus sp JAMB-750 (consultar, ,Hatada et al., [2005] Extremophiles. 9:497 a 500), mananase de Bacillus sp. M50(consultar, Chen et al., [2000] Wei Sheng Wu Xue Bao. 40:62 a 68), mananase de Bacillus sp. N 16-5(consultar, ,Yanhe et al., [2004] Extremophiles 8:447 a 454), mananase de B. stearothermophilus (consultar, Talbot e Sygusch, [1990] Appl. Environ. Microbiol. 56: 3.505 a 3.510), mananase de B. subtilis (consultar, Mendoza et al., [1994] World J. Microbiol. Biotechnol. 10:51 a 54), mananase de B. subtilis B36 (Li et al., [2006] Z. Naturforsch (C). 61:840 a 846), mananase de B. subtilis BM9602 (consultar, Cui et al., [1999] Wei Sheng Wu Xue Bao. 39(1):60 a 63), mananase de B. subtilis SA-22 (consultar, Sun et al., [2003] Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao. 19(3):327 a 330), mananase de B. subtilis168 (consultar, Helow e Khattab, [1996] Acta Microbiol. Immunol. Hung. 43:289 a 299), mananase de B. ovatus (consultar, Gherardini et al., [1987] J. Bacteriol. 169:2.038 a 2.043), mananase de B. ruminicola (consultar, Matsushita et al., [1991] J. Bacteriol. 173:6.919 a 6.926), mananase de C. cellulovorans (consultar, Sunna et al., [2000] Appl. Environ. Microbiol. 66:664 a 670), mananase de C. saccharolyticus (consultar, Morris et al., [1995] Appl. Environ. Microbiol. 61: 2.262 a 2.269), mananase de C. saccharolyticum (consultar, Bicho et al., [1991] Appl. Microbiol. Biotechnol. 36:337 a 343), mananase de C. fimi (consultar, Stoll et al., [1999] Appl. Environ. Microbiol. 65(6):2.598 a 2.605), mananase de C. butyricum/beijerinckii (consultar, Nakajima e Matsuura, [1997] Biosci. Biotechnol. Biochem. 61:1.739 a 1.742), mananase de C. cellulolyticum (consultar, Perret et al., [2004] Biotechnol. Appl. Biochem. 40:255 a 259), mananase de C. tertium (consultar, Kataoka e Tokiwa, [1998] J. Appl. Microbiol. 84:357 a 367), mananase de C. thermocellum (consultar, Halstead et al., [1999]Microbiol. 145:3.101 a 3.108), mananase de D. thermophilum (consultar, Gibbs et al., [1999] Curr. Microbiol. 39(6):351 a 357), mananase de Flavobacterium sp. (consultar, Zakaria et al., [1998] Biosci. Biotechnol. Biochem. 62:655 a 660), mananase de G. pulmonata (consultar, Charrier e Rouland, [2001] J. Expt. Zool. 290: 125 a 135), mananase de L. brevicula (consultar, Yamamura et al., [1996] Biosci. Biotechnol. Biochem. 60:674 a 676), mananase de L. esculentum (consultar,Filichkin et al., [2000] Plant Physiol. 134:1.080 a 1.087), mananase de P. curdlanolyticus (consultar, Pason e Ratanakhanokchai, [2006] Appl. Environ. Microbiol. 72:2.483 a 2.490), mananase de P. polimyxa (consultar, Han et al., [2006] Appl. Microbiol Biotechnol. 73(3):618 a 630), mananase de P. chrysosporium (consultar, Wymelenberg et al., [2005] J. Biotechnol. 118:17 a 34), mananase de Piromyces sp. (consultar, Fanutti et al., [1995] J. Biol. Chem. 270(49):29.314 a 29.322), mananase de P. insulars (consultar, Yamamura et al., [1993] Biosci. Biotechnol. Biochem. 7:1.316 a 1.319), mananase de P. fluorescens subsp. cellulosa (consultar, Braithwaite et al., [1995] Biochem J.305:1.005 a 1.010), mananase de R. marinus (consultar, Politz et al., [2000] Appl. Microbiol. Biotechnol. 53 (6):715 a 721), mananase de S.rolfsii (consultar, Sachslehner et al., [2000] J. Biotechnol. 80:127 a 134), mananase de S. galbus (consultar, Kansoh e Nagieb, [2004] Anton. van. Leeuwenhoek. 85:103 a 114), mananase de S. lividans (consultar, Arcand et al., [1993] J.Biochem. 290:857 a 863), mananase de T. Polysaccharolyticum (consultar, Cann et al., [1999] J. Bacteriol. 181:1.643 a 1.651), mananase de T. fusca (consultar, Hilge et al., [1998] Structure 6:1.433 a 1.444), mananase de T. maritima (consultar, Parker et al., [2001] Biotechnol. Bioeng. 75(3):322 a 333), mananase de T. neapolitana (consultar, Duffaud et al., [1997] Appl. Environ. Microbiol. 63:169 a 177), mananase de T. harzianum cepa T4 (consultar, Franco et al., [2004] Biotechnol Appl. Biochem. 40:255 a 259), mananase de T. reesei (consultar, Stalbrand et al., [1993] J. Biotechnol. 29:229 a 242) e mananase de Vibrio sp. (consultar, Tamaru et al., [1997] J. Ferment. Bioeng. 83:201 a 205).[00166] Furthermore, several identified mannanases (i.e., endo-β-mannanases and exo-β-mannanases) find use in some embodiments of the present disclosure, including, but not limited to, A. bisporus mannanase (see, Tang et al., [2001] Appl. Environ. Microbiol. 67:2298-2303), A. tamarii mannanase (see, Civas et al., [1984] Biochem. J. 219:857-863), A. aculeatus mannanase (see, Christgau et al., [1994] Biochem. Mol. Biol. Int. 33:917-925), A. awamori mannanase (see, Setati et al., [2001] Protein Express Purif. 21:105- 114), mannanase from A. fumigatus (see, Puchart et al., [2004] Biochimica et biophysica Acta. 1674:239 to 250), mannanase from A. niger (see, Ademark et al., [1998] J. Biotechnol. 63:199 to 210), mannanase from A. oryzae NRRL ( , Regalado et al., [2000] J. Sci. Food Agric. 80:1,343 to 1,350), mannanase from A. sulphureus (see, Chen et al., [2007] J. Biotechnol. 128(3):452 to 461), mannanase from A. terrus (see, Huang et al., [2007] Wei Sheng Wu Xue Bao. 47(2): 280 to 284), mannanase from Paenibacillus and Bacillus spp. (see US 6,376,445), mannanase from Bacillus AM001 (see, Akino et al., [1989] Arch. Microbiol. 152:10 to 15), mannanase from B. brevis (see, Araujo and Ward, [1990] J. Appl. Bacteriol. 68:253 to 261), mannanase from B. circulans K-1 (see, Yoshida et al., [1998] Biosci. Biotechnol. Biochem. 62(3):514 to 520), mannanase from B. polimyxa (see, Araujo and Ward, [1990] J. Appl. Bacteriol. 68:253 to 261), mannanase from Bacillus sp JAMB-750 (see, ,Hatada et al., [2005] Extremophiles. 9:497 to 500), mannanase from Bacillus sp. M50 (see, Chen et al., [2000] Wei Sheng Wu Xue Bao. 40:62 to 68), mannanase from Bacillus sp. No. (see, Mendoza et al., [1994] World J. Microbiol. Biotechnol. 10:51 to 54), mannanase from B. subtilis B36 (Li et al., [2006] Z. Naturforsch (C). 61:840 to 846), mannanase from B. subtilis BM9602 (see, Cui et al., [1999] Wei Sheng Wu Xue Bao. to 63), B. subtilis SA-22 mannanase (see, Sun et al., [2003] Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao. 19(3):327 to 330), B. subtilis168 mannanase (see, Helow and Khattab, [1996] Acta Microbiol. Immunol. Hung. 43:289 to 299), mannanase from B. ovatus (see, Gherardini et al., [1987] J. Bacteriol. 169:2038 to 2043), mannanase from B. ruminicola (see, Matsushita et al., [1991] J. Bacteriol. 173:6919 to 6926), mannanase from C. cellulovorans (see, Sunna et al., [2000] Appl. Environ. Microbiol. 66:664 to 670), mannanase from C. saccharolyticus (see, Morris et al., [1995] Appl. Environ. Microbiol. 61: 2,262 to 2,269), mannanase from C. saccharolyticum (see, Bicho et al., [1991] Appl. Microbiol. Biotechnol. 36:337 to 343), mannanase from C. fimi (see, Stoll et al., [1999] Appl. Environ. Microbiol. 65(6):2,598 to 2,605), mannanase from C. butyricum/beijerinckii (see, Nakajima and Matsuura, [1997] Biosci. Biotechnol. Biochem. 61:1,739 to 1,742), mannanase from C. cellulolyticum (see, Perret et al., [2004] Biotechnol. Appl. Biochem. 40:255 to 259), mannanase C. tertium (see, Kataoka and Tokiwa, [1998] J. Appl. Microbiol. 84:357 to 367), mannanase from C. thermocellum (see, Halstead et al., [1999]Microbiol. 145:3,101 to 3,108), mannanase from D. thermophilum (see, Gibbs et al., [1999] Curr. Microbiol. 39(6):351 to 357), mannanase from Flavobacterium sp. (see, Zakaria et al., [1998] Biosci. Biotechnol. Biochem. 62:655 to 660), mannanase from G. pulmonata (see, Charrier and Rouland, [2001] J. Expt. Zool. 290: 125 to 135), mannanase from L. brevicula (see, Yamamura et al., [1996] Biosci. Biotechnol. Biochem. 60:674 to 676), mannanase from L. curdlanolyticus (see, Pason and Ratanakhanokchai, [2006] Environ Appl. 72:2,483 to 2,490), mannanase from P. polimyxa (see, Han et al., [2006] Appl. Microbiol Biotechnol. 73(3):618 to 630), mannanase from P. chrysosporium (see, Wymelenberg et al., [2005] J. Biotechnol. 118:17 to 34), mannanase from Piromyces sp. (see, Fanutti et al., [1995] J. Biol. Chem. 270(49):29,314 to 29,322), mannanase from P. insulars (see, Yamamura et al., [1993] Biosci. Biotechnol. Biochem. 7:1,316 to 1,319), mannanase from P. fluorescens subsp. cellulosa (see, Braithwaite et al., [1995] Biochem J.305:1005 to 1010), mannanase from R. marinus (see, Politz et al., [2000] Appl. Microbiol. Biotechnol. 53 (6):715 to 721), mannanase from S.rolfsii (see, Sachslehner et al., [2000] J. Biotechnol. 80:127 to 134), mannanase from S. galbus (see, Kansoh and Nagieb, [2004] Anton. van. Leeuwenhoek. 85:103 to 114), mannanase from S. lividans (see, Arcand et al., [1993] J.Biochem. 290:857 to 863), mannanase from T. Polysaccharolyticum (see Cann et al., [1999] J. Bacteriol. [2001] Biotechnol. Bioeng. 75(3):322 to 333), mannanase from T. neapolitana (see, Duffaud et al., [1997] Appl. Environ. Microbiol. 63:169 to 177), mannanase from T. harzianum strain T4 (see, Franco et al., [2004] Biotechnol Appl. Biochem. 40:255 to 259), mannanase T. reesei (see, Stalbrand et al., [1993] J. Biotechnol. 29:229 to 242) and mannanase from Vibrio sp. (see, Tamaru et al., [1997] J. Ferment. Bioeng. 83:201 to 205).

[00167] As mananases adequadas adicionais incluem endo-β- mananases comercialmente disponíveis, tais como HEMICELL® (Chemgen); GAMANASE® e MANNAWAY®, (Novozymes A/S, Dinamarca); EFFECTENZ™ M 1000, PREFERENZ® M 100, PURABRITE™ e MANNASTAR™ (DuPont); e PYROLASE® 160 ePYROLASE® 200 (Diversa).[00167] Additional suitable mannanases include commercially available endo-β-mannanases, such as HEMICELL® (Chemgen); GAMANASE® and MANNAWAY®, (Novozymes A/S, Denmark); EFFECTENZ™ M 1000, PREFERENZ® M 100, PURABRITE™ and MANNASTAR™ (DuPont); and PYROLASE® 160 and PYROLASE® 200 (Diversa).

[00168] Em outras modalidades, a composição descrita no presente documento compreende uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento e uma ou mais enzimas adicionais. A uma ou mais enzima adicional é selecionada dentre acil transferases, alfa- amilases, beta-amilases, alfa-galactosidases, arabinosidases, aril esterases, beta-galactosidases, carrageenases, catalases, celobio- hidrolases, celulases, condroitinases, cutinases, endo-beta-1,4- glucanases, endo-beta-mananases, esterases, exo-mananases, galactanases, glucoamilases, hemicelulases, hialuronidases, queratinases, lacases, lactases, ligninases, lipases, lipoxigenases, mananases adicionais, metaloproteases, oxidases, pectato liases, pectina acetil esterases, pectinases, pentosanases, peroxidases, fenoloxidases, fosfatases, fosfolipases, fitases, poligalacturonases, proteases, pululanases, redutases, ramnogalacturonases, beta- glucanases, tanases, transglutaminases, xilano acetil-esterases, xilanases, xiloglucanases, xilosidases e qualquer combinação ou mistura das mesmas. Algumas modalidades referem-se a uma combinação de enzimas (isto é, um "coquetel") que compreende enzimas convencionais como amilase, lipase, cutinase, protease e/ou celulase em conjunto com uma ou mais variantes de mananase descritas no presente documento e/ou uma ou mais mananase adicionais.[00168] In other embodiments, the composition described herein comprises one or more mannanase variants described herein and one or more additional enzymes. The one or more additional enzymes are selected from acyl transferases, alpha-amylases, beta-amylases, alpha-galactosidases, arabinosidases, aryl esterases, beta-galactosidases, carrageenanses, catalases, cellobiohydrolases, cellulases, chondroitinases, cutinases, endo-beta-1,4-glucanases, endo-beta-mannanases, esterases, exo-mannanases, galactanases, glucoamylases, hemicellulases, hyaluronidases, keratinases, laccases, lactases, ligninases, lipases, lipoxygenases, additional mannanases, metalloproteases, oxidases, pectate lyases, pectin acetyl esterases, pectinases, pentosanases, peroxidases, phenoloxidases, phosphatases, phospholipases, phytases, polygalacturonases, proteases, pullulanases, reductases, rhamnogalacturonases, beta-glucanases, tannases, transglutaminases, xylan acetyl-esterases, xylanases, xyloglucanases, xylosidases, and any combination or mixture thereof. Some embodiments relate to a combination of enzymes (i.e., a "cocktail") comprising conventional enzymes such as amylase, lipase, cutinase, protease, and/or cellulase together with one or more mannanase variants described herein and/or one or more additional mannanases.

[00169] Em algumas modalidades, as composições de limpeza aqui descritas compreendem adicionalmente uma protease. Em algumas modalidades, a composição compreende de cerca de 0,00001% a cerca de 10% de protease em peso da composição. Em outra modalidade, a composição de limpeza compreende de cerca de 0,0001% a cerca de 10%, cerca de 0,001% a cerca de 5%, cerca de 0,001% a cerca de 2% ou cerca de 0,005% a cerca de 0,5% de protease em peso da composição.[00169] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise a protease. In some embodiments, the composition comprises from about 0.00001% to about 10% protease by weight of the composition. In another embodiment, the cleaning composition comprises from about 0.0001% to about 10%, about 0.001% to about 5%, about 0.001% to about 2%, or about 0.005% to about 0.5% protease by weight of the composition.

[00170] Em uma modalidade, a protease é uma serina protease. As proteases adequadas incluem aquelas de origem animal, vegetal ou microbiana. Em algumas modalidades, a protease é uma protease microbiana. Em outras modalidades, a protease é um mutante química ou geneticamente modificado. Em outra modalidade, a protease é uma protease microbiana alcalina ou uma protease semelhante à tripsina. As proteases alcalinas exemplificativas incluem subtilisinas derivadas de, por exemplo, Bacillus (por exemplo, subtilisina, lentus, amyloliquefaciens, subtilisina Carlsberg, subtilisina 309, subtilisina 147 e subtilisina 168). As proteases adicionais exemplificativas incluem, porém sem limitações, aquelas descritas dos documentos WO92/21760, WO95/23221, WO2008/010925, WO09/149200,WO09/149144, WO09/149145, WO10/056640, WO10/056653,WO2010/0566356, WO11/072099, WO2011/13022, WO11/140364,WO12/151534, WO2015/038792, WO2015/089447, WO2015/089441, WO2015/143360, WO2016/061438, WO2016/069548,WO2016/069544, WO2016/069557, WO2016/069563,WO2016/069569, WO2016/069552, WO2016/145428, Publicação n° US 2008/0090747, US 5.801.039, US 5.340.735, US 5.500.364, US 5.855.625, RE 34.606, US 5.955.340, US 5.700.676, US 6.312.936, US 6.482.628, US 8.530.219, Pedidos Provisórios n° US 62/331282, 62/332417, 62/343618 e 62/351649 e Pedidos PCT n° PCT/US16/32514 e PCT/US2016/038245, assim como as metaloproteases descritas nos documentos WO1999014341, WO1999033960, WO1999014342,WO1999034003, WO2007044993, WO2009058303, WO 2009058661, WO2014071410, WO2014194032, WO2014194034, WO 2014194054 e WO 2014/194117. As proteases exemplificativas incluem, mas sem limitação, tripsina (por exemplo, de origem porcina ou bovina) e a protease de Fusarium descrita no documento WO89/06270. As proteases comerciais exemplificativas incluem, mas sem limitação, as proteases MAXATASE®, MAXACAL™, MAXAPEM™, OPTICLEAN®, OPTIMASE®, PROPERASE®, PURAFECT®, PURAFECT® OXP, PURAMAX™, EXCELLASE™, PREFERENZ™ (por exemplo, P100, P110, P280), proteases EFFECTENZ™ (por exemplo, P1000, P1050, P2000), proteases EXCELLENZ™ (por exemplo, P1000), ULTIMASE® e PURAFAST™ (DuPont); ALCALASE®, BLAZE®, BLAZE® EVITY®, BLAZE® EVITY® 16L, CORONASE®, SAVINASE®, SAVINASE® ULTRA, SAVINASE® EVITY®, SAVINASE® EVERIS®, PRIMASE®, DURAZYM™, POLARZYME®, OVOZYME®, KANNASE®, LIQUANASE®, LIQUANASE EVERIS®, NEUTRASE®, PROGRESS UNO®, RELASE® e ESPERASE® (Novozymes); variantes de BLAP™ e BLAP™ (Henkel); LAVERGY™ PRO 104 L (BASF) e KAP (subtilisina de B. alkalophilus (Kao)).[00170] In one embodiment, the protease is a serine protease. Suitable proteases include those of animal, plant, or microbial origin. In some embodiments, the protease is a microbial protease. In other embodiments, the protease is a chemically or genetically engineered mutant. In another embodiment, the protease is an alkaline microbial protease or a trypsin-like protease. Exemplary alkaline proteases include subtilisins derived from, for example, Bacillus (e.g., subtilisin lentus amyloliquefaciens, subtilisin Carlsberg, subtilisin 309, subtilisin 147, and subtilisin 168). Additional exemplary proteases include, but are not limited to, those described in WO92/21760, WO95/23221, WO2008/010925, WO09/149200, WO09/149144, WO09/149145, WO10/056640, WO10/056653, WO2010/0566356, WO11/072099, WO2011/13022, WO11/140364, WO12/151534, WO2015/038792, WO2015/089447, WO2015/089441, WO2015/143360, WO2016/061438, WO2016/069548,WO2016/069544, WO2016/069557, WO2016/069563,WO2016/069569, WO2016/069552, WO2016/145428, Publication No. US 2008/0090747, US 5,801,039, US 5,340,735, US 5,500,364, US 5,855,625, RE 34,606, US 5,955,340, US 5,700,676, US 6,312,936, US 6,482,628, US 8,530,219, Provisional Orders No. US 62/331282, 62/332417, 62/343618 and 62/351649 and PCT Application Nos. PCT/US16/32514 and PCT/US2016/038245, as well as the metalloproteases described in WO1999014341, WO1999033960, WO1999014342, WO1999034003, WO2007044993, WO2009058303, WO 2009058661, WO2014071410, WO2014194032, WO2014194034, WO 2014194054 and WO 2014/194117. Exemplary proteases include, but are not limited to, trypsin (e.g., of porcine or bovine origin) and the Fusarium protease described in WO89/06270. Exemplary commercial proteases include, but are not limited to, MAXATASE®, MAXACAL™, MAXAPEM™, OPTICLEAN®, OPTIMASE®, PROPERASE®, PURAFECT®, PURAFECT® OXP, PURAMAX™, EXCELLASE™, PREFERENZ™ (e.g., P100, P110, P280) proteases, EFFECTENZ™ proteases (e.g., P1000, P1050, P2000), EXCELLENZ™ proteases (e.g., P1000), ULTIMASE®, and PURAFAST™ (DuPont); ALCALASE®, BLAZE®, BLAZE® EVITY®, BLAZE® EVITY® 16L, CORONASE®, SAVINASE®, SAVINASE® ULTRA, SAVINASE® EVITY®, SAVINASE® EVERIS®, PRIMASE®, DURAZYM™, POLARZYME®, OVOZYME®, KANNASE®, LIQUANASE®, LIQUANASE EVERIS®, NEUTRASE®, PROGRESS UNO®, RELASE® and ESPERASE® (Novozymes); BLAP™ and BLAP™ variants (Henkel); LAVERGY™ PRO 104 L (BASF) and KAP (subtilisin from B. alkalophilus (Kao)).

[00171] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente uma amilase adequada. Em uma modalidade, a composição compreende de cerca de 0,00001% a cerca de 10%, cerca de 0,0001% a cerca de 10%, cerca de 0,001% a cerca de 5%, cerca de 0,001% a cerca de 2% ou cerca de 0,005% a cerca de 0,5% de amilase em peso da composição. Qualquer amilase (por exemplo, alfa e/ou beta) adequada para uso em soluções alcalinas pode ser útil para incluir em tal composição. Uma amilase exemplificativa pode ser um mutante química ou geneticamente modificado. As amilases exemplificativas incluem, mas sem limitação, aquelas de origem bacteriana ou fúngica, como, por exemplo, amilases descritas nos documentos GB 1.296.839, WO9100353, WO9402597, WO94183314, WO9510603, WO9526397, WO9535382, WO9605295, WO9623873, WO9623874, WO 9630481, WO9710342, WO9741213, WO9743424, WO9813481, WO 9826078, WO9902702, WO 9909183, WO9919467, WO9923211, WO9929876, WO9942567, WO 9943793, WO9943794, WO 9946399, WO0029560, WO0060058, WO0060059, WO0060060, WO 0114532, WO0134784, WO 0164852, WO0166712, WO0188107, WO0196537, WO02092797, WO 0210355, WO0231124, WO 2004055178, WO2004113551, WO2005001064, WO2005003311, WO 2005018336, WO2005019443, WO2005066338, WO2006002643, WO2006012899, WO2006012902, WO2006031554, WO 2006063594, WO2006066594, WO2006066596, WO2006136161, WO 2008000825, WO2008088493, WO2008092919, WO2008101894, WO2008/112459, WO2009061380, WO2009061381, WO 2009100102, WO2009140504, WO2009149419, WO 2010/059413, WO 2010088447, WO2010091221, WO2010104675, WO2010115021, WO10115028, WO2010117511, WO 2011076123, WO2011076897, WO2011080352, WO2011080353, WO 2011080354, WO2011082425, WO2011082429, WO 2011087836, WO2011098531, WO2013063460, WO2013184577, WO 2014099523, WO2014164777 e WO2015077126. As amilases comerciais exemplificativas incluem, mas sem limitação, AMPLIFY®, AMPLIFY PRIME®, DURAMYL®, TERMAMYL®, FUNGAMYL®, STAINZYME®, STAINZYME PLUS®, STAINZYME PLUS®, STAINZYME ULTRA® EVITY® e BAN™ (Novozymes); EFFECTENZ™ S 1000, POWERASE™, PREFERENZ™ S 100, PREFERENZ™ S 110, EXCELLENZ™ S 2000, RAPIDASE® e MAXAMYL® P (DuPont).[00171] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise a suitable amylase. In one embodiment, the composition comprises from about 0.00001% to about 10%, about 0.0001% to about 10%, about 0.001% to about 5%, about 0.001% to about 2%, or about 0.005% to about 0.5% amylase by weight of the composition. Any amylase (e.g., alpha and/or beta) suitable for use in alkaline solutions may be useful to include in such a composition. An exemplary amylase may be a chemically or genetically modified mutant. Exemplary amylases include, but are not limited to, those of bacterial or fungal origin, such as, for example, amylases described in GB 1,296,839, WO9100353, WO9402597, WO94183314, WO9510603, WO9526397, WO9535382, WO9605295, WO9623873, WO9623874, WO 9630481, WO9710342, WO9741213, WO9743424, WO9813481, WO 9826078, WO9902702, WO 9909183, WO9919467, WO9923211, WO9929876, WO9942567, WO 9943793, WO9943794, WO 9946399, WO0029560, WO0060058, WO0060059, WO0060060, WO 0114532, WO0134784, WO 0164852, WO0166712, WO0188107, WO0196537, WO02092797, WO 0210355, WO0231124, WO 2004055178, WO2004113551, WO2005001064, WO2005003311, WO 2005018336, WO2005019443, WO2005066338, WO2006002643, WO2006012899, WO2006012902, WO2006031554, WO 2006063594, WO2006066594, WO2006066596, WO2006136161, WO 2008000825, WO2008088493, WO2008092919, WO2008101894, WO2008/112459, WO2009061380, WO2009061381, WO 2009100102, WO2009140504, WO2009149419, WO 2010/059413, WO 2010088447, WO2010091221, WO2010104675, WO2010115021, WO10115028, WO2010117511, WO 2011076123, WO2011076897, WO2011080352, WO2011080353, WO 2011080354, WO2011082425, WO2011082429, WO 2011087836, WO2011098531, WO2013063460, WO2013184577, WO 2014099523, WO2014164777 and WO2015077126. Exemplary commercial amylases include, but are not limited to, AMPLIFY®, AMPLIFY PRIME®, DURAMYL®, TERMAMYL®, FUNGAMYL®, STAINZYME®, STAINZYME PLUS®, STAINZYME PLUS®, STAINZYME ULTRA® EVITY® and BAN™ (Novozymes); EFFECTENZ™ S 1000, POWERASE™, PREFERENZ™ S 100, PREFERENZ™ S 110, EXCELLENZ™ S 2000, RAPIDASE® and MAXAMYL® P (DuPont).

[00172] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente uma enzima de degradação de pectina adequada. Conforme usado no presente documento, "enzima (ou enzimas) de degradação de pectina" abrange arabinanase (EC 3.2.1.99), galactanases (EC 3.2.1.89), poligalacturonase (EC 3.2.1.15) exo-poligalacturonase (EC 3.2.1.67), exo-poli-alfa-galacturonosidase (EC 3.2.1.82), pectina liase (EC 4.2.2.10), pectina esterase (EC 3.1.1.11), pectato liase (EC 4.2.2.2), exo-poligalacturonato liase (EC 4.2.2.9) e hemicelulases, tais como endo-1,3-β-xilosidase (EC 3.2.1.32), xilan-1,4-β-xilosidase (EC 3.2.1.37) e α-L-arabinofuranosidase (EC 3.2.1.55). As enzimas de degradação de pectina são misturas naturais das atividades enzimáticas mencionadas acima. As enzimas pectina incluem, portanto, as pectina metilesterases que hidrolisam as ligações de éster pectina metílico, poligalacturonases que clivam as ligações glicosídicas entre moléculas galacturônicas, e as pectina transeliminases ou liases que atuam nos ácidos pécticos para provocar a ligação não hidrolítica de ligações α-1,4 glicosídicas para formar derivados insaturados de ácido galacturônico.[00172] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise a suitable pectin-degrading enzyme. As used herein, “pectin degrading enzyme(s)” includes arabinanase (EC 3.2.1.99), galactanases (EC 3.2.1.89), polygalacturonase (EC 3.2.1.15) exo-polygalacturonase (EC 3.2.1.67), exo-poly-alpha-galacturonosidase (EC 3.2.1.82), pectin lyase (EC 4.2.2.10), pectin esterase (EC 3.1.1.11), pectate lyase (EC 4.2.2.2), exo-polygalacturonate lyase (EC 4.2.2.9) and hemicellulases such as endo-1,3-β-xylosidase (EC 3.2.1.32), xylan-1,4-β-xylosidase (EC 3.2.1.37) and α-L-arabinofuranosidase (EC 3.2.1.55). Pectin-degrading enzymes are natural mixtures of the above enzymatic activities. Pectin enzymes therefore include pectin methylesterases that hydrolyze pectin methyl ester bonds, polygalacturonases that cleave glycosidic bonds between galacturonic molecules, and pectin transeliminases or lyases that act on pectic acids to cause non-hydrolytic ligation of α-1,4 glycosidic bonds to form unsaturated galacturonic acid derivatives.

[00173] As enzimas de degradação de pectina adequadas incluem aquelas de origem vegetal, fúngica ou microbiana. Em algumas modalidades, os mutantes química ou geneticamente modificados estão incluídos. Em algumas modalidades, as enzimas de degradação de pectina são enzimas de degradação de pectina alcalinas, isto é, enzimas que têm uma atividade enzimática de pelo menos 10%, pelo menos 25% ou pelo menos 40% de sua atividade máxima a um pH de cerca de 7,0 a cerca de 12. Em determinadas outras modalidades, as enzimas de degradação de pectina são enzimas que têm sua atividade máxima a um pH de cerca de 7,0 a cerca de 12. As enzimas de degradação de pectina alcalinas são produzidas por micro-organismos alcalofílicos, por exemplo, micro-organismos bacterianos, fúngicos e de levedura, tal como a espécie Bacillus. Em algumas modalidades, os micro-organismos são B. firmus, B. circulans e B. subtilis conforme descrito nos documentos JP 56131376 e JP 56068393. As enzimas de decomposição de pectina alcalinas podem incluir, mas sem limitação, galacturan-1,4-α-galacturonidase (EC 3.2.1.67), atividades de poli- galacturonase (EC 3.2.1.15), pectina esterase (EC 3.1.1.11), pectato liase (EC 4.2.2.2) e suas isoenzimas. As enzimas de decomposição de pectina alcalinas podem ser produzidas pela espécie Erwinia. Em algumas modalidades, as enzimas de decomposição de pectina alcalinas são produzidas por E.chrysanthemi, E.carotovora,E.amylovora, E.herbicola e E.dissolvens conforme descrito nos documentos JP 59066588, JP 63042988 e em World J. Microbiol. Biotechnol. (8, 2, 115 a 120) 1992. Em determinadas outrasmodalidades, as enzimas pectina alcalinas são produzidas pela espécie Bacillus conforme revelado no documento JP 73006557 e Agr. Biol. Chem. (1972), 36 (2) 285 a 293. Em algumas modalidades, ascomposições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente cerca de 0,00001% a cerca de 10%, cerca de 0,0001% a cerca de 10%, cerca de 0,001% a cerca de 5%, cerca de 0,001% a cerca de 2% ou cerca de 0,005% a cerca de 0,5% de enzima de degradação de pectina em peso da composição.[00173] Suitable pectin degrading enzymes include those of plant, fungal, or microbial origin. In some embodiments, chemically or genetically modified mutants are included. In some embodiments, the pectin degrading enzymes are alkaline pectin degrading enzymes, that is, enzymes that have an enzymatic activity of at least 10%, at least 25%, or at least 40% of their maximum activity at a pH of about 7.0 to about 12. In certain other embodiments, the pectin degrading enzymes are enzymes that have their maximum activity at a pH of about 7.0 to about 12. Alkaline pectin degrading enzymes are produced by alkaliphilic microorganisms, for example, bacterial, fungal, and yeast microorganisms, such as Bacillus species. In some embodiments, the microorganisms are B. firmus, B. circulans, and B. subtilis as described in JP 56131376 and JP 56068393. Alkaline pectin decomposing enzymes may include, but are not limited to, galacturan-1,4-α-galacturonidase (EC 3.2.1.67), poly-galacturonase activities (EC 3.2.1.15), pectin esterase (EC 3.1.1.11), pectate lyase (EC 4.2.2.2), and isoenzymes thereof. Alkaline pectin decomposing enzymes may be produced by Erwinia species. In some embodiments, the alkaline pectin degrading enzymes are produced by E. chrysanthemi, E. carotovora, E. amylovora, E. herbicola, and E. dissolvans as described in JP 59066588, JP 63042988, and in World J. Microbiol. Biotechnol. (8, 2, 115-120) 1992. In certain other embodiments, the alkaline pectin enzymes are produced by Bacillus species as disclosed in JP 73006557 and Agr. Biol. Chem. (1972), 36 (2) 285 to 293. In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise about 0.00001% to about 10%, about 0.0001% to about 10%, about 0.001% to about 5%, about 0.001% to about 2%, or about 0.005% to about 0.5% pectin degrading enzyme by weight of the composition.

[00174] Em algumas outras modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente uma xiloglucanase adequada. As xiloglucanases adequadas incluem, mas sem limitação, aquelas de origem vegetal, fúngica ou bacteriana. Mutantes química ou geneticamente modificados são incluídos em algumas modalidades. Conforme usado no presente documento, "xiloglucanase (ou xiloglucanases)" abrange a família das enzimas descritas por Vincken e Voragen na Universidade de Wageningen [Vincken et al (1994) Plant Physiol., 104, 99 a 107] e tem a capacidade de degradar xiloglucanos conforme descrito em Hayashi et al (1989) Annu. Rev. Plant. Physiol. Plant Mol. Biol., 40, 139 a 168. Vincken et al demonstraram a remoção de revestimento com xiloglucano da celulose da parede celular da maçã isolada por uma xiloglucanase purificada a partir de Trichoderma viride (endo-IV- glucanase). Essa enzima melhora a degradação enzimática da celulose incorporada à parede celular e funciona em sinergia com enzimas pécticas. Rapidase LIQ+ de DSM contém atividade de xiloglucanase. Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente de cerca de 0,00001% a cerca de 10%, cerca de 0,0001% a cerca de 10%, cerca de 0,001% a cerca de 5%, cerca de 0,001% a cerca de 2% ou cerca de 0,005% a cerca de 0,5% de xiloglucanase em peso da composição. Em determinadas outras modalidades, xiloglucanases para aplicações específicas são xiloglucanases alcalinas, isto é, enzimas que têm uma atividade enzimática de pelo menos 10%, pelo menos 25% ou pelo menos 40% de sua atividade máxima a um pH na faixa de 7 a 12. Em determinadas outras modalidades, as xiloglucanases são enzimas que têm uma atividade máxima a um pH de cerca de 7,0 a cerca de 12.[00174] In some other embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise a suitable xyloglucanase. Suitable xyloglucanases include, but are not limited to, those of plant, fungal, or bacterial origin. Chemically or genetically engineered mutants are included in some embodiments. As used herein, "xyloglucanase (or xyloglucanases)" encompasses the family of enzymes described by Vincken and Voragen at Wageningen University [Vincken et al (1994) Plant Physiol., 104, 99-107] and has the ability to degrade xyloglucans as described in Hayashi et al (1989) Annu. Rev. Plant. Physiol. Plant Mol. Biol., 40, 139-168. Vincken et al demonstrated the removal of xyloglucan coating from isolated apple cell wall cellulose by a xyloglucanase purified from Trichoderma viride (endo-IV-glucanase). This enzyme enhances the enzymatic degradation of cell wall-incorporated cellulose and works synergistically with pectic enzymes. Rapidase LIQ+ from DSM contains xyloglucanase activity. In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise from about 0.00001% to about 10%, about 0.0001% to about 10%, about 0.001% to about 5%, about 0.001% to about 2%, or about 0.005% to about 0.5% xyloglucanase by weight of the composition. In certain other embodiments, xyloglucanases for specific applications are alkaline xyloglucanases, that is, enzymes that have an enzymatic activity of at least 10%, at least 25%, or at least 40% of their maximum activity at a pH in the range of 7 to 12. In certain other embodiments, xyloglucanases are enzymes that have a maximum activity at a pH of about 7.0 to about 12.

[00175] Em algumas modalidades adicionais, as composições detergentes descritas no presente documento compreendem adicionalmente uma celulase adequada. Em uma modalidade, a composição compreende de cerca de 0,00001% a cerca de 10%, 0,0001% a cerca de 10%, cerca de 0,001% a cerca de 5%, cerca de 0,001% a cerca de 2% ou cerca de 0,005% a cerca de 0,5% de celulase em peso da composição. Qualquer celulase adequada pode encontrar uso em uma composição descrita no presente documento. Uma celulase exemplificativa pode ser um mutante química ou geneticamente modificado. As celulases exemplificativas incluem, mas sem limitação, aquelas de origem bacteriana ou fúngica, tais como, por exemplo, aquelas descritas nos documentos WO2005054475, WO2005056787, US 7.449.318, US 7.833.773, US 4.435.307; EP 0495257; e no Pedido Provisório n° US 62/296.678. As celulases comerciais exemplificativas incluem, mas sem limitação, CELLUCLEAN®, CELLUZYME®, CAREZYME®, ENDOLASE®,RENOZYME®, e CAREZYME® PREMIUM (Novozymes);REVITALENZ™ 100, REVITALENZ™ 200/220, e REVITALENZ® 2000 (DuPont); e KAC-500(B)™ (Kao Corporation). Em algumas modalidades, celulases são incorporadas como porções ou fragmentos de celulases do tipo selvagem ou variantes maduras, em que uma porção do terminal N é deletada (consulte, por exemplo, o documento US 5.874.276).[00175] In some additional embodiments, the detergent compositions described herein further comprise a suitable cellulase. In one embodiment, the composition comprises from about 0.00001% to about 10%, 0.0001% to about 10%, about 0.001% to about 5%, about 0.001% to about 2%, or about 0.005% to about 0.5% cellulase by weight of the composition. Any suitable cellulase may find use in a composition described herein. An exemplary cellulase may be a chemically or genetically modified mutant. Exemplary cellulases include, but are not limited to, those of bacterial or fungal origin, such as, for example, those described in WO2005054475, WO2005056787, US 7,449,318, US 7,833,773, US 4,435,307; EP 0495257; and US Provisional Application No. 62/296,678. Exemplary commercial cellulases include, but are not limited to, CELLUCLEAN®, CELLUZYME®, CAREZYME®, ENDOLASE®, RENOZYME®, and CAREZYME® PREMIUM (Novozymes); REVITALENZ™ 100, REVITALENZ™ 200/220, and REVITALENZ® 2000 (DuPont); and KAC-500(B)™ (Kao Corporation). In some embodiments, cellulases are incorporated as portions or fragments of wild-type cellulases or mature variants, wherein a portion of the N-terminus is deleted (see, e.g., US 5,874,276).

[00176] Em ainda outras modalidades, as composições detergentes descritas no presente documento compreendem adicionalmente uma lipase adequada. Em algumas modalidades, a composição compreende de cerca de 0,00001 % a cerca de 10%, cerca de 0,0001 % a cerca de 10%, cerca de 0,001% a cerca de 5%, cerca de 0,001% a cerca de 2% ou cerca de 0,005% a cerca de 0,5% de lipase em peso de composição. Uma lipase exemplificativa pode ser um mutante química ou geneticamente modificado. As lipases exemplificativas incluem, mas sem limitação, por exemplo, aquelas de origem bacteriana ou fúngica, tais como, por exemplo, lipase de H. lanuginosa (consultar, por exemplo, os documentos EP 258068 e EP 305216), lipase de T. lanuginosus (consultar, por exemplo, os documentos WO 2014/059360 e WO2015/010009), lipase de Rhizomucor miehei (consultar, por exemplo, os documentos EP 238023), lipase de Candida, tal como lipase de C. antarctica (por exemplo, lipase A ou B de C. antarctica) (consultar, por exemplo, o documento EP 214761), lipases de Pseudomonas, tal como lipase de P. alcaligenes e P. pseudoalcaligenes (consultar, por exemplo, o documento EP 218272), lipase de P. cepacia (consultar, por exemplo, o documento EP 331376), lipase de P. stutzeri (consultar, por exemplo, o documento GB 1.372.034), lipase de P. fluorescens, lipase de Bacillus (por exemplo, lipase de B. subtilis (Dartois et al., Biochem. Biophys. Acta 1131:253 a 260 (1993)), lipase de B. stearothermophilus (consultar, por exemplo, o documento JP 64/744992) e lipase de B. pumilus (consultar, por exemplo, o documento WO 91/16422)). As lipases clonadas exemplificativas incluem, mas sem limitação, lipase de Penicillium camembertii (consultar, Yamaguchi et al., Gene 103:61-67 (1991)), lipase de Geotricum candidum (consultar, Schimada et al., J. Biochem., 106:383 a 388 (1989)) e várias lipases de Rhizopus, tal como lipase de R. delemar (consultar, Hass et al., Gene 109:117 a 113 (1991)), lipase de R. niveus (Kugimiya et al., Biosci. Biotech. Biochem. 56:716 a 719 (1992)) e lipase de R. oryzae. Outras enzimas lipolíticas, tais como cutinases, podem também encontrar uso em uma ou mais composições descritas no presente documento, incluindo, mas sem limitação, por exemplo, cutinase derivada de Pseudomonas mendocina (consultar o documento WO 88/09367) e/ou Fusarium solani pisi (consultar o documento WO90/09446). As lipases comerciais exemplificativas incluem, mas sem limitação, M1 LIPASE™, LUMA FAST™ e LIPOMAX™ (DuPont); LIPEX®, LIPOCLEAN®, LIPOLASE® e LIPOLASE® ULTRA (Novozymes); e LIPASE P™ (Amano Pharmaceutical Co. Ltd).[00176] In still other embodiments, the detergent compositions described herein further comprise a suitable lipase. In some embodiments, the composition comprises from about 0.00001% to about 10%, about 0.0001% to about 10%, about 0.001% to about 5%, about 0.001% to about 2%, or about 0.005% to about 0.5% lipase by weight of composition. An exemplary lipase can be a chemically or genetically modified mutant. Exemplary lipases include, but are not limited to, for example, those of bacterial or fungal origin, such as, for example, H. lanuginosa lipase (see, for example, EP 258068 and EP 305216), T. lanuginosus lipase (see, for example, WO 2014/059360 and WO2015/010009), Rhizomucor miehei lipase (see, for example, EP 238023), Candida lipase such as C. antarctica lipase (e.g., C. antarctica lipase A or B) (see, for example, EP 214761), Pseudomonas lipases such as P. alcaligenes and P. pseudoalcaligenes lipase (see, for example, EP 218272), lipase from P. cepacia (see, for example, EP 331376), lipase from P. stutzeri (see, for example, GB 1,372,034), lipase from P. fluorescens, lipase from Bacillus (e.g. lipase from B. subtilis (Dartois et al., Biochem. Biophys. Acta 1131:253-260 (1993)), lipase from B. stearothermophilus (see, for example, JP 64/744992) and lipase from B. pumilus (see, for example, WO 91/16422)). Exemplary cloned lipases include, but are not limited to, Penicillium camembertii lipase (see, Yamaguchi et al., Gene 103:61-67 (1991)), Geotricum candidum lipase (see, Schimada et al., J. Biochem., 106:383-388 (1989)), and several Rhizopus lipases, such as R. delemar lipase (see, Hass et al., Gene 109:117-113 (1991)), R. niveus lipase (Kugimiya et al., Biosci. Biotech. Biochem. 56:716-719 (1992)), and R. oryzae lipase. Other lipolytic enzymes, such as cutinases, may also find use in one or more of the compositions described herein, including, but not limited to, for example, cutinase derived from Pseudomonas mendocina (see WO 88/09367) and/or Fusarium solani pisi (see WO90/09446). Exemplary commercial lipases include, but are not limited to, M1 LIPASE™, LUMA FAST™ and LIPOMAX™ (DuPont); LIPEX®, LIPOCLEAN®, LIPOLASE® and LIPOLASE® ULTRA (Novozymes); and LIPASE P™ (Amano Pharmaceutical Co. Ltd).

[00177] Em algumas modalidades, as composições de limpezadescritas no presente documento compreendem adicionalmente peroxidases em combinação com peróxido de hidrogênio ou uma fonte do mesmo (por exemplo, um percarbonato, perborato ou persulfato). Em algumas modalidades alternativas, oxidases são usadas em combinação com oxigênio. Ambos os tipos de enzimas são usados para "clareamento de solução" (isto é, para impedir a transferência de um corante têxtil de um tecido tingido para outro tecido quando os tecidos são lavados em conjunto em um líquido de lavagem), de preferência, em conjunto com um agente intensificador (consultar, por exemplo, os documentos WO94/12621 e WO95/01426). As peroxidases/oxidases adequadas incluem, mas sem limitação, aquelas de origem vegetal, bacteriana ou fúngica. Mutantes química ou geneticamente modificados são incluídos em algumas modalidades. Em algumas modalidades, as composições de limpeza da presente revelação compreendem adicionalmente de cerca de 0,00001% a cerca de 10%, cerca de 0,0001% a cerca de 10%, cerca de 0,001% a cerca de 5%, cerca de 0,001% a cerca de 2%, cerca de 0,005% a cerca de 0,5% de peroxidase e/ou oxidase em peso da composição.[00177] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise peroxidases in combination with hydrogen peroxide or a source thereof (e.g., a percarbonate, perborate, or persulfate). In some alternative embodiments, oxidases are used in combination with oxygen. Both types of enzymes are used for "solution bleaching" (i.e., to prevent the transfer of a textile dye from one dyed fabric to another fabric when the fabrics are washed together in a washing liquid), preferably in conjunction with an enhancing agent (see, for example, WO94/12621 and WO95/01426). Suitable peroxidases/oxidases include, but are not limited to, those of plant, bacterial, or fungal origin. Chemically or genetically engineered mutants are included in some embodiments. In some embodiments, the cleaning compositions of the present disclosure further comprise from about 0.00001% to about 10%, about 0.0001% to about 10%, about 0.001% to about 5%, about 0.001% to about 2%, about 0.005% to about 0.5% peroxidase and/or oxidase by weight of the composition.

[00178] Em algumas modalidades, as composições de limpezadescritas no presente documento compreendem adicionalmente enzimas adicionais, incluindo, mas sem limitação, peridrolases (consultar, por exemplo, o documento WO 05/056782). Algumas modalidades referem-se a misturas de uma ou mais dentre protease, amilase, lipase, mananase e/ou celulase mencionadas acima.[00178] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise additional enzymes, including but not limited to perhydrolases (see, for example, WO 05/056782). Some embodiments relate to mixtures of one or more of the above-mentioned protease, amylase, lipase, mannanase, and/or cellulase.

[00179] Algumas modalidades referem-se a composições de limpeza tais como, por exemplo, aquelas descritas no documento US 6.605.458. Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento são composições de limpeza de tecido granulares compactas, embora em outras modalidades a composição seja uma composição de limpeza de tecido granular útil na lavagem de roupas de tecidos coloridos. Em modalidades adicionais, a composição é uma composição de limpeza de tecido granular que fornece maciez através da capacidade de lavagem, e, em modalidades adicionais, a composição é uma composição de limpeza de tecido de líquido para tarefas pesadas (HDL). Em outras modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento são composições de limpeza de tecido, tais como, por exemplo, aquelas descritas no documento US 6.610.642 e 6.376.450. Em uma modalidade alternativa, ascomposições de limpeza descritas no presente documento sãocomposições de limpeza de superfície dura adequadas. As composições de limpeza de superfície dura adequadas incluem, por exemplo, aquelas descritas nos documentos US 6.610.642; 6.376.450; e 6.376.450. Em ainda outras modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento são composições de lavagem de louças. Em algumas modalidades adicionais, as composições descritas no presente documento são composições de cuidados orais, tais como, por exemplo, aquelas descritas nos documentos US 6.376.450 e 6.605.458. As formulações e descrições dos compostos e materiais auxiliares de limpeza contidos nos documentos anteriormente mencionados US 6.376.450; 6.605.458; e 6.610.642 encontram uso com um polipeptídeo da presente invenção.[00179] Some embodiments relate to cleaning compositions such as, for example, those described in US 6,605,458. In some embodiments, the cleaning compositions described herein are compact granular fabric cleaning compositions, while in other embodiments the composition is a granular fabric cleaning composition useful in washing colored fabric garments. In additional embodiments, the composition is a granular fabric cleaning composition that provides softness through washability, and in additional embodiments, the composition is a heavy-duty liquid (HDL) fabric cleaning composition. In other embodiments, the cleaning compositions described herein are fabric cleaning compositions such as, for example, those described in US 6,610,642 and 6,376,450. In an alternative embodiment, the cleaning compositions described herein are suitable hard surface cleaning compositions. Suitable hard surface cleaning compositions include, for example, those described in US Pat. No. 6,610,642; US Pat. No. 6,376,450; and US Pat. No. 6,376,450. In still other embodiments, the cleaning compositions described herein are dishwashing compositions. In some additional embodiments, the compositions described herein are oral care compositions, such as, for example, those described in US Pat. No. 6,376,450 and US Pat. No. 6,605,458. The formulations and descriptions of cleaning aid compounds and materials contained in the aforementioned US Pat. No. 6,376,450; US Pat. No. 6,605,458; and US Pat. No. 6,610,642 find use with a polypeptide of the present invention.

[00180] Em ainda outras modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento são composições amaciante de tecido, tais como, por exemplo, aquelas descritas nos documentos GB 400898, GB 514276, EP0011340, EP0026528, EP0242919,EP0299575, EP0313146 e US 5.019.292.[00180] In still other embodiments, the cleaning compositions described herein are fabric softener compositions, such as, for example, those described in GB 400898, GB 514276, EP0011340, EP0026528, EP0242919, EP0299575, EP0313146 and US 5,019,292.

[00181] As composições de limpeza descritas no presente documento podem ser formuladas em qualquer forma adequada e preparadas por qualquer processo escolhido pelo formulador, os exemplos não limitantes das quais são descritos nos documentos US 5.879.584; 5.691.297; 5.574.005; 5.569.645; 5.565.422; 5.516.448;5.489.392; e 5.486.303. Quando uma composição de limpeza com pH baixo for desejada, o pH de tal composição é ajustado por meio da adição de um material como monoetanolamina ou um material ácido como HCl.[00181] The cleaning compositions described herein may be formulated in any suitable form and prepared by any process chosen by the formulator, non-limiting examples of which are described in US 5,879,584; 5,691,297; 5,574,005; 5,569,645; 5,565,422; 5,516,448; 5,489,392; and 5,486,303. When a low pH cleaning composition is desired, the pH of such composition is adjusted by the addition of a material such as monoethanolamine or an acidic material such as HCl.

[00182] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento são fornecidas em forma de dose unitária, incluindo tabletes, cápsulas, sachês, bolsas, folhas e bolsa multicompatimentada. Em algumas modalidades, o formato de dose unitária é projetado para fornecer liberação controlada de ingredientes dentro de uma bolsa de múltiplos compartimentos (ou outro formato de dose unitária). Os formatos de liberação controlada e dose unitária adequados são conhecidos na técnica (consultar por exemplo, os documentos EP2100949, EP2100947, WO02/102955, WO04/111178, WO2013/165725 e US 4.765.916 e 4.972.017). Em algumas modalidades, a forma de dose unitária é fornecida por tabletes envolvidos com um filme solúvel em água ou bolsas solúveis em água.[00182] In some embodiments, the cleaning compositions described herein are provided in unit dose form, including tablets, capsules, sachets, pouches, sheets, and multi-compartment pouch. In some embodiments, the unit dose format is designed to provide controlled release of ingredients within a multi-compartment pouch (or other unit dose format). Suitable controlled release and unit dose formats are known in the art (see e.g., EP2100949, EP2100947, WO02/102955, WO04/111178, WO2013/165725, and US 4,765,916 and 4,972,017). In some embodiments, the unit dose form is provided by tablets wrapped with a water-soluble film or water-soluble pouches.

[00183] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente pelo menos um agente quelante. Os agentes quelantes adequados podem incluir, mas sem limitação, agentes quelantes de cobre, ferro e/ou manganês e misturas dos mesmos. Nas modalidades em que pelo menos um agente quelante é usado, as composições de limpeza da presente revelação compreendem de cerca de 0,1% a cerca de 15% ou até mesmo de cerca de 3,0% a cerca de 10% de agente quelante em peso da composição de limpeza.[00183] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise at least one chelating agent. Suitable chelating agents may include, but are not limited to, copper, iron, and/or manganese chelating agents and mixtures thereof. In embodiments where at least one chelating agent is used, the cleaning compositions of the present disclosure comprise from about 0.1% to about 15% or even from about 3.0% to about 10% chelating agent by weight of the cleaning composition.

[00184] Em algumas outras modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente pelo menos um auxiliar de deposição. Os auxiliares de deposição adequados incluem, mas sem limitação, polietilenoglicol, polipropilenoglicol, policarboxilato, polímero de liberação de sujeira, tal como ácido politereftálico, argilas, tais como caulinita, montmorilonita, atapulgita, ilita, bentonita, haloisita e misturas dos mesmos.[00184] In some other embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise at least one deposition aid. Suitable deposition aids include, but are not limited to, polyethylene glycol, polypropylene glycol, polycarboxylate, soil release polymer such as polyterephthalic acid, clays such as kaolinite, montmorillonite, attapulgite, illite, bentonite, halloysite, and mixtures thereof.

[00185] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente pelo menos um agente antirredeposição. Em algumas modalidades, o agente antirredeposição é um tensoativo não iônico, tal como, por exemplo, descrito no documento EP2100949. Em algumas modalidades de lavagem de louças automática, tensoativos não iônicos são usados como modificadores de superfície, em particular para revestimento, para evitar formação de filme e manchamento e melhorar o brilho.[00185] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise at least one anti-redeposition agent. In some embodiments, the anti-redeposition agent is a nonionic surfactant, such as, for example, described in EP2100949. In some automatic dishwashing embodiments, nonionic surfactants are used as surface modifiers, in particular for coating, to prevent filming and staining and to improve gloss.

[00186] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente um ou mais agentes inibidores de transferência de corantes. Os agentes de inibição de transferência de corantes adequados incluem, mas sem limitação, polímeros de polivinilpirrolidona, polímeros de N-óxidos de poliamina, copolímeros de N-vinilpirrolidona e N-vinilimidazol, poliviniloxazolidonas e polivinilimidazóis ou suas misturas. Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem de cerca de 0,0001% a cerca de 10%, de cerca de 0,01% a cerca de 5% ou até mesmo de cerca de 0,1% a cerca de 3% de agente inibidor de transferência de corantes em peso da composição de limpeza.[00186] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise one or more dye transfer inhibiting agents. Suitable dye transfer inhibiting agents include, but are not limited to, polyvinylpyrrolidone polymers, polyamine N-oxide polymers, N-vinylpyrrolidone and N-vinylimidazole copolymers, polyvinyloxazolidones, and polyvinylimidazoles, or mixtures thereof. In some embodiments, the cleaning compositions described herein comprise from about 0.0001% to about 10%, from about 0.01% to about 5%, or even from about 0.1% to about 3% dye transfer inhibiting agent by weight of the cleaning composition.

[00187] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente um ou mais silicatos. Em algumas tais modalidades, silicatos de sódio (por exemplo, dissilicato de sódio, metassilicato de sódio e filossilicato cristalino) encontram uso. Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem de cerca de 1% a cerca de 20% ou de cerca de 5% a cerca de 15% de silicato em peso da composição.[00187] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise one or more silicates. In some such embodiments, sodium silicates (e.g., sodium disilicate, sodium metasilicate, and crystalline phyllosilicate) find use. In some embodiments, the cleaning compositions described herein comprise from about 1% to about 20% or from about 5% to about 15% silicate by weight of the composition.

[00188] Em ainda outras modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente um ou mais dispersantes. Os materiais orgânicos solúveis em água incluem, mas sem limitação, os ácido homo ou copoliméricos ou seus sais, em que o ácido policarboxílico compreende pelo menos dois radicais carboxila separados entre si por não mais que dois átomos de carbono.[00188] In still other embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise one or more dispersants. Water-soluble organic materials include, but are not limited to, homo- or copolymeric acids or their salts, wherein the polycarboxylic acid comprises at least two carboxyl radicals separated from each other by no more than two carbon atoms.

[00189] Em algumas modalidades adicionais, as enzimas usadas nas composições de limpeza são estabilizadas por qualquer técnica adequada. Em algumas modalidades, as enzimas empregadas no presente documento são estabilizadas pela presença de fontes solúveis em água de íons de cálcio e/ou de magnésio nas composições finalizadas. Em algumas modalidades, os estabilizantes de enzima incluem oligossacarídeos, polissacarídeos e sais de metais divalentes inorgânicos, incluindo metais alcalino-terrosos, tais como sais de cálcio. Contempla-se que várias técnicas para estabilização de enzimas encontrarão uso na presente revelação. Por exemplo, em algumas modalidades, as enzimas empregadas no presente documento são estabilizadas pela presença de fontes solúveis em água de íons de zinco (II), cálcio (II) e/ou magnésio (II) nas composições acabadas, bem como outros íons de metal (por exemplo, bário (II), escândio (II), ferro (II), manganês (II), alumínio (III), estanho (II), cobalto (II), cobre (II), níquel (II) e oxovanádio (IV)). Cloretos e sulfatos também encontram uso em algumas modalidades. Os exemplos de oligossacarídeos e polissacarídeos adequados (por exemplo, dextrinas) são conhecidos na técnica (consultar, por exemplo, o documento WO07/145964). Em algumas modalidades, inibidores de protease reversíveis, tais como compostos contendo boro (por exemplo, borato, ácido 4-formil fenil borônico) e/ou um aldeído tripeptídeo encontram uso para melhorar adicionalmente a estabilidade.[00189] In some additional embodiments, the enzymes used in the cleaning compositions are stabilized by any suitable technique. In some embodiments, the enzymes employed herein are stabilized by the presence of water-soluble sources of calcium and/or magnesium ions in the finished compositions. In some embodiments, the enzyme stabilizers include oligosaccharides, polysaccharides, and inorganic divalent metal salts, including alkaline earth metals, such as calcium salts. It is contemplated that various techniques for stabilizing enzymes will find use in the present disclosure. For example, in some embodiments, the enzymes employed herein are stabilized by the presence of water-soluble sources of zinc(II), calcium(II), and/or magnesium(II) ions in the finished compositions, as well as other metal ions (e.g., barium(II), scandium(II), iron(II), manganese(II), aluminum(III), tin(II), cobalt(II), copper(II), nickel(II), and oxovanadium(IV)). Chlorides and sulfates also find use in some embodiments. Examples of suitable oligosaccharides and polysaccharides (e.g., dextrins) are known in the art (see, e.g., WO07/145964 ). In some embodiments, reversible protease inhibitors, such as boron-containing compounds (e.g., borate, 4-formyl phenyl boronic acid) and/or a tripeptide aldehyde find use to further improve stability.

[00190] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente um ou mais alvejantes, ativadores de alvejante e/ou catalisadores de alvejante. Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem composto (ou compostos) de branqueamento inorgânico e/ou orgânico. Os alvejantes inorgânicos podem incluir, mas sem limitação, sais de peridrato (por exemplo, sais de perborato, percarbonato, perfosfato, persulfato e persilicato). Em algumas modalidades, os sais de peridrato inorgânicos são sais de metal alcalino. Em algumas modalidades, os sais de peridrato inorgânicos estão incluídos como o sólido de cristalino, sem proteção adicional, embora em algumas outras modalidades, o sal seja revestido. Os sais adequados incluem, por exemplo, aqueles descritos no documento EP2100949. Os ativadores de alvejante são, tipicamente, precursores de perácido orgânico que intensificam a ação de branqueamento no curso da limpeza em temperaturas de 60°C e abaixo. Os ativadores de alvejante adequados para uso no presente documento incluem compostos que, sob condições de peridrólise, geram ácidos peroxicaboxílicos alifáticos que têm, de preferência, de cerca de 1 a cerca de 10 átomos de carbono, em particular de cerca de 2 a cerca de 4 átomos de carbono e/ou ácido perbenzoico opcionalmente substituído. Os ativadores de alvejante adequados incluem, por exemplo, aqueles descritos no documento EP2100949. Os catalisadores de alvejante incluem tipicamente, por exemplo, triazaciclononano de manganês e complexos relacionados e complexos de cobalto, cobre, manganês e ferro, assim como aqueles descritos nos documentos US 4.246.612; 5.227.084; 4.810.410; e WO99/06521 e EP2100949.[00190] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise one or more bleaches, bleach activators, and/or bleach catalysts. In some embodiments, the cleaning compositions described herein comprise inorganic and/or organic bleaching compound(s). Inorganic bleaches can include, but are not limited to, perhydrate salts (e.g., perborate, percarbonate, perphosphate, persulfate, and persilicate salts). In some embodiments, the inorganic perhydrate salts are alkali metal salts. In some embodiments, the inorganic perhydrate salts are included as the crystalline solid, without further protection, although in some other embodiments, the salt is coated. Suitable salts include, for example, those described in EP2100949. Bleach activators are typically organic peracid precursors that enhance the bleaching action in the course of cleaning at temperatures of 60°C and below. Bleach activators suitable for use herein include compounds which, under perhydrolysis conditions, generate aliphatic peroxycarboxylic acids preferably having from about 1 to about 10 carbon atoms, in particular from about 2 to about 4 carbon atoms, and/or optionally substituted perbenzoic acid. Suitable bleach activators include, for example, those described in EP2100949. Bleach catalysts typically include, for example, manganese triazacyclononane and related complexes and complexes of cobalt, copper, manganese and iron, as well as those described in US 4,246,612; 5,227,084; 4,810,410; and WO99/06521 and EP2100949.

[00191] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente um ou mais complexos de metais catalíticos. Em algumas modalidades, um catalisador alvejante contendo metal encontra uso. Em outras modalidades, o catalisador de alvejante de metal compreende um sistema catalisador que compreende um cátion de metal de transição de atividade catalítica de alvejante definida (por exemplo, cátions de cobre, ferro, titânio, rutênio, tungstênio, molibdênio ou manganês), um cátion de metal auxiliar que tem pouca a nenhuma atividade catalítica de alvejante (por exemplo, cátions de zinco ou alumínio) e um sequestrante que tem constantes de estabilidade definidas para os cátions de metais auxiliares e catalíticos, particularmente, ácido etilenodiaminatetra-acético, etilenodiaminetetra (ácidometilenofosfônico) e sais solúveis em água dos mesmos são usados (consultar, por exemplo, o documento US 4.430.243). Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento são catalisadas por meio de um composto de manganês. Tais compostos e níveis de uso são bem conhecidos na técnica (consultar, por exemplo, o documento US 5.576.282). Em modalidades adicionais, os catalisadores de alvejante à base de cobalto encontram uso nas composições de limpeza descritas no presente documento. Vários catalisadores de alvejante à base de cobalto são conhecidos na técnica (consultar, por exemplo, os documentos US 5.597.936 e 5.595.967) e são prontamente preparados por procedimentos conhecidos.[00191] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise one or more catalytic metal complexes. In some embodiments, a metal-containing bleach catalyst finds use. In other embodiments, the metal bleach catalyst comprises a catalyst system comprising a transition metal cation of defined bleach catalytic activity (e.g., copper, iron, titanium, ruthenium, tungsten, molybdenum, or manganese cations), an auxiliary metal cation that has little to no bleach catalytic activity (e.g., zinc or aluminum cations), and a scavenger having defined stability constants for the auxiliary and catalytic metal cations, particularly ethylenediaminetetraacetic acid, ethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid), and water-soluble salts thereof are used (see, e.g., US 4,430,243). In some embodiments, the cleaning compositions described herein are catalyzed by a manganese compound. Such compounds and levels of use are well known in the art (see, e.g., US 5,576,282). In additional embodiments, cobalt-based bleach catalysts find use in the cleaning compositions described herein. Various cobalt-based bleach catalysts are known in the art (see, e.g., US 5,597,936 and 5,595,967) and are readily prepared by known procedures.

[00192] Em algumas modalidades adicionais, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente um complexo de metais de transição de um aglutinante macropolicíclico rígido (MRL). Como uma matéria prática, e não a título de referência, em algumas modalidades, as composições e processos de limpeza fornecidos no presente documento são ajustados para fornecer na ordem de pelo menos uma parte por cem milhões das espécies de MRL ativas no meio de lavagem aquoso e, em outras modalidades, fornecem de cerca de 0,005 ppm a cerca de 25 ppm, de cerca de 0,05 ppm a cerca de 10 ppm ou de cerca de 0,1 ppm a cerca de 5 ppm do MRL no líquido de lavagem.[00192] In some additional embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise a transition metal complex of a rigid macropolycyclic binder (MRL). As a practical matter, and not by way of reference, in some embodiments, the cleaning compositions and processes provided herein are adjusted to provide on the order of at least one part per hundred million of the active MRL species in the aqueous wash medium, and in other embodiments, provide from about 0.005 ppm to about 25 ppm, from about 0.05 ppm to about 10 ppm, or from about 0.1 ppm to about 5 ppm of the MRL in the wash liquid.

[00193] Em algumas modalidades, os metais de transição no presente catalisador de alvejante à base de metal de transição incluem, mas sem limitação, manganês, ferro e cromo. Em outras modalidades, MRLs incluem, mas sem limitação, aglutinantes ultrarrígidos especiais que têm ponte cruzada (por exemplo, 5,12-dietil-1,5,8,12-tetra- azabiciclo[6.6.2] hexadecano). Os MRLs de metal de transição adequados são prontamente preparados por procedimentos conhecidos (consultar, por exemplo, o documento WO 2000/32601 e US 6.225.464).[00193] In some embodiments, transition metals in the present transition metal bleach catalyst include, but are not limited to, manganese, iron, and chromium. In other embodiments, MRLs include, but are not limited to, special ultra-hard binders that are cross-bridged (e.g., 5,12-diethyl-1,5,8,12-tetra-azabicyclo[6.6.2]hexadecane). Suitable transition metal MRLs are readily prepared by known procedures (see, e.g., WO 2000/32601 and US 6,225,464).

[00194] Em algumas modalidades, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem adicionalmente um agente de tratamento de metais. Os agentes de tratamento de metal são usados para impedir e/ou reduzir deslustre, corrosão e/ou oxidação de metais, incluindo alumínio, aço inoxidável e metais não ferrosos (por exemplo, prata e cobre). Os agentes de tratamento de metal incluem aqueles descritos nos documentos EP2100949, WO94/26860 eWO94/26859). Em algumas modalidades, o agente de tratamento de metal é um sal de zinco. Em algumas modalidades adicionais, as composições de limpeza descritas no presente documento compreendem de cerca de 0,1% a cerca de 5% em peso de um ou mais agente de tratamento de metal.[00194] In some embodiments, the cleaning compositions described herein further comprise a metal treating agent. Metal treating agents are used to prevent and/or reduce tarnish, corrosion, and/or oxidation of metals, including aluminum, stainless steel, and non-ferrous metals (e.g., silver and copper). Metal treating agents include those described in EP2100949, WO94/26860, and WO94/26859). In some embodiments, the metal treating agent is a zinc salt. In some additional embodiments, the cleaning compositions described herein comprise from about 0.1% to about 5% by weight of one or more metal treating agents.

[00195] As composições de limpeza descritas no presente documento podem ser usadas para limpar uma superfície, louça ou tecido. Tipicamente, pelo menos uma porção da superfície, louça ou tecido é colocada em contato com pelo menos uma (i) variante, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento ou (ii) pelo menos uma composição de limpeza descrita no presente documento, e, então, a superfície, louça ou tecido é opcionalmente lavada e/ou enxaguado. Para os propósitos da presente revelação, "lavagem" inclui, mas sem limitação, esfregamento e agitação mecânica. Em algumas modalidades, as composições de limpeza são tipicamente empregadas a concentrações de cerca de 500 ppm a cerca de 15.000 ppm na solução. Quando o solvente de lavagem é água, a temperatura da água está tipicamente na faixa de cerca de 5°C a cerca de 90°C e, quando o tecido é envolvido, a razão entre água e massa de tecido é tipicamente de cerca de 1:1 a cerca de 30:1.[00195] The cleaning compositions described herein can be used to clean a surface, dishware or fabric. Typically, at least a portion of the surface, dishware or fabric is contacted with at least one (i) variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein or (ii) at least one cleaning composition described herein, and then the surface, dishware or fabric is optionally washed and/or rinsed. For purposes of the present disclosure, "washing" includes, but is not limited to, scrubbing and mechanical agitation. In some embodiments, the cleaning compositions are typically employed at concentrations of about 500 ppm to about 15,000 ppm in the solution. When the washing solvent is water, the temperature of the water is typically in the range of about 5° C. to about 90° C. and, when the fabric is wrapped, the ratio of water to fabric mass is typically from about 1:1 to about 30:1.

[00196] Algumas modalidades referem-se a um método para limpar que compreende colocar em contato uma quantidade eficaz de (i) uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento ou (ii) uma composição de limpeza descrita no presente documento com um item ou superfície que compreende um sujeira ou mancha que compreende manano para hidrolisar o manano contido na sujeira ou mancha.[00196] Some embodiments relate to a method of cleaning comprising contacting an effective amount of (i) a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein or (ii) a cleaning composition described herein with an item or surface comprising a soil or stain comprising mannan to hydrolyze the mannan contained in the soil or stain.

[00197] Em algumas modalidades, uma ou mais variantes de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo das mesmas descrito no presente documento é usado para impedir, reduzir e/ou remover um biofilme em um ou mais itens selecionados dentre um produto têxtil ou tecido.[00197] In some embodiments, one or more mannanase variants or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is used to prevent, reduce, and/or remove a biofilm on one or more selected items of a textile or fabric product.

[00198] Uma ou mais variantes de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo das mesmas descrito no presente documento hidrolisa cadeias de polissacarídeo contendo unidades de manose, incluindo, porém sem limitação, mananos, galactomananos e glucomananos, tornando tais polipeptídeos particularmente úteis para realizar reações de hidrólise de manano envolvendo substratos de polissacarídeo contendo ligações 1,4-β-D-manosidicas. Em termos gerais, uma molécula doadora é incubada na presença de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento sob condições adequadas para realizar uma reação de hidrólise de manano, seguida, opcionalmente, pelo isolamento de um produto da reação. Alternativamente, no contexto de um gênero alimentício, o produto pode se tornar um componente do gênero alimentício sem isolamento. Em determinadas modalidades, a molécula doadora é uma cadeia de polissacarídeo que compreende unidades de manose, incluindo, mas sem limitação, mananos, glucomananos, galactomananos e galactoglucomananos.[00198] One or more mannanase variants or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein hydrolyzes polysaccharide chains containing mannose units, including, but not limited to, mannans, galactomannans, and glucomannans, making such polypeptides particularly useful for carrying out mannan hydrolysis reactions involving polysaccharide substrates containing 1,4-β-D-mannosidic linkages. In general terms, a donor molecule is incubated in the presence of a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein under conditions suitable for carrying out a mannan hydrolysis reaction, optionally followed by isolation of a product of the reaction. Alternatively, in the context of a foodstuff, the product may become a component of the foodstuff without isolation. In certain embodiments, the donor molecule is a polysaccharide chain comprising mannose units, including, but not limited to, mannans, glucomannans, galactomannans, and galactoglucomannans.

[00199] Em uma modalidade, uma ou mais variantes de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo das mesmas descrito no presente documento é usado em um processo para extrair óleo de caroço de palma. Outra modalidade refere-se a um processo para extrair óleo de caroço de palma de caroços de palma ou uma farinha de caroço de palma que compreende fornecer caroços de palma e/ou farinha de caroço de palma e tratar as ditas sementes ou torta com uma ou mais variantes de mananase ou polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo das mesmas descrito no presente documento.[00199] In one embodiment, one or more mannanase variants or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is used in a process for extracting palm kernel oil. Another embodiment relates to a process for extracting palm kernel oil from palm kernels or a palm kernel flour comprising providing palm kernels and/or palm kernel flour and treating said seeds or cake with one or more mannanase variants or recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein.

[00200] Em uma modalidade, uma composição que compreende uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é usada para processar e/ou fabricar ração para animais ou alimento para seres humanos. Em ainda outra modalidade, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode ser um aditivo para ração para animais não humanos. Em outra modalidade, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode ser útil para alimento para seres humanos, tal como, por exemplo, um aditivo para alimento para seres humanos.[00200] In one embodiment, a composition comprising a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein is used to process and/or manufacture animal feed or human food. In yet another embodiment, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein can be a feed additive for non-human animals. In another embodiment, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein can be useful for human food, such as, for example, a food additive for humans.

[00201] Diversos fatores nutricionais podem limitar a quantidade de material vegetal não custoso que pode ser usado para preparar ração para animais e alimento para seres humanos. Por exemplo, o material vegetal contendo oligomananos tais como manano, galactomanano, glucomanano e galactoglucomanano pode reduzir a capacidade do animal de digerir e absorver compostos nutricionais tais como minerais, vitaminas, açúcares e gorduras. Esses efeitos negativos são, em particular, devido à alta viscosidade dos polímeros contendo manano e à capacidade de os polímeros contendo manano absorverem compostos nutricionais. Esses efeitos podem ser reduzidos incluindo-se uma enzima na ração que degrada os polímeros contendo manano, tal como uma enzima endo-β-mananase descrita no presente documento, permitindo, assim, uma proporção mais alta de polímeros contendo manano tipicamente encontrados em material vegetal não custoso a ser incluído na ração, o que reduz finalmente o custo da razão. Adicionalmente, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode quebrar os polímeros contendo manano em açúcares mais simples que podem ser mais prontamente assimilados para fornecer energia adicional.[00201] Several nutritional factors can limit the amount of inexpensive plant material that can be used to prepare animal feed and human food. For example, plant material containing oligomannans such as mannan, galactomannan, glucomannan and galactoglucomannan can reduce the animal's ability to digest and absorb nutritional compounds such as minerals, vitamins, sugars and fats. These negative effects are in particular due to the high viscosity of mannan-containing polymers and the ability of mannan-containing polymers to absorb nutritional compounds. These effects can be reduced by including an enzyme in the feed that degrades mannan-containing polymers, such as an endo-β-mannanase enzyme described herein, thus allowing a higher proportion of mannan-containing polymers typically found in inexpensive plant material to be included in the feed, which ultimately reduces the cost ratio. Additionally, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein can break down mannan-containing polymers into simpler sugars that can be more readily assimilated to provide additional energy.

[00202] Em uma modalidade adicional, a ração para animais contendo material vegetal é incubada na presença de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento sob condições adequadas para quebrar polímeros contendo manano.[00202] In a further embodiment, animal feed containing plant material is incubated in the presence of a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein under conditions suitable for breaking down mannan-containing polymers.

[00203] Em outra modalidade, uma composição melhoradora de pão compreende uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento, opcionalmente em combinação com uma foto de manano ou glucomanano ou galactomanano e adicional e opcionalmente em combinação com uma ou mais outras enzimas.[00203] In another embodiment, a bread improving composition comprises a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein, optionally in combination with a photo of mannan or glucomannan or galactomannan and additionally and optionally in combination with one or more other enzymes.

[00204] O termo "animal não humano" inclui todos os animais não ruminantes e ruminantes. Em uma modalidade particular, o animal não ruminante é selecionado a partir do grupo que consiste em, mas sem limitação, cavalos animais monogástricos, tais como, mas sem limitação, porcos, aves, suínos e peixes. Em modalidades adicionais, o porco pode ser, mas sem limitação, um leitão, um porco em crescimento e uma porca; as aves podem ser, mas sem limitação, um peru, um pato e uma galinha incluindo, mas sem limitação, um frango de corte e uma poedeira; e o peixe pode ser, mas sem limitação, salmão, truta, tilápia bagre e carpas; e crustáceos incluindo, mas sem limitação, camarões e pitus. Em uma modalidade adicional, o animal ruminante é selecionado a partir do grupo que consiste em, mas sem limitação, gado, bezerros jovens, cabras, ovelhas, girafas, bisão, alce, renas, iaques, búfalo- d'água, veado, camelos, alpacas, lhamas, antílope, antilocapra e nilgó.[00204] The term "non-human animal" includes all non-ruminant and ruminant animals. In a particular embodiment, the non-ruminant animal is selected from the group consisting of, but not limited to, horses, monogastric animals such as, but not limited to, pigs, poultry, swine, and fish. In additional embodiments, the pig may be, but not limited to, a piglet, a growing pig, and a sow; the poultry may be, but not limited to, a turkey, a duck, and a chicken including, but not limited to, a broiler and a layer; and the fish may be, but not limited to, salmon, trout, tilapia, catfish, and carp; and crustaceans including, but not limited to, shrimp and prawns. In an additional embodiment, the ruminant animal is selected from the group consisting of, but not limited to, cattle, young calves, goats, sheep, giraffes, bison, elk, reindeer, yaks, water buffalo, deer, camels, alpacas, llamas, antelope, pronghorn, and nilga.

[00205] Em algumas modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é usado para pré-tratar a ração em vez de como um aditivo de ração. Em algumas modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é adicionado ou usado para pré-tratar a ração para porcos desmamados, porcos de viveiro, leitões, porcos de engorda, porcos em crescimento, porcos em terminação, galinhas poedeiras, frangos de corte e perus.[00205] In some embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein is used to pretreat feed rather than as a feed additive. In some embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein is added to or used to pretreat feed for weaned pigs, nursery pigs, piglets, fattening pigs, growing pigs, finishing pigs, laying hens, broilers, and turkeys.

[00206] Em outra modalidade, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é adicionado ou usado para pré-tratar a ração de material vegetal tal como caroço de palma, coco, coniaco, goma de alfarrobeira, goma guar, soja, cevada, aveia, linho, trigo, milho, linhaça, polpa cítrica, semente de algodão, amendoim, colza, girassol, ervilhas e lupinos.[00206] In another embodiment, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is added or used to pretreat feed from plant material such as palm kernel, coconut, coniaco, locust bean gum, guar gum, soybean, barley, oats, flax, wheat, corn, linseed, citrus pulp, cottonseed, peanut, rapeseed, sunflower, peas and lupines.

[00207] Uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é termoestável, e, como um resultado, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode ser usado nos processos de produzir ração peletizada em que calor é aplicado à mistura de ração antes da etapa de peletização. Em outra modalidade, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é adicionado aos outros ingredientes de ração ou antes da etapa de peletização ou após a etapa de peletização (isto é, aos péletes de ração já formados).[00207] A mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is thermostable, and as a result, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein can be used in processes for producing pelleted feed in which heat is applied to the feed mixture prior to the pelleting step. In another embodiment, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is added to the other feed ingredients either prior to the pelleting step or after the pelleting step (i.e., to already formed feed pellets).

[00208] Em ainda outra modalidade, as composições de suplemento de ração ou processamento de alimento que contêm uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento podem conter opcional e adicionalmente outros substituintes selecionados dentre agentes corantes, compostos de aroma, estabilizantes, vitaminas, minerais e outras enzimas de melhoramento de ração ou alimento. Isso se aplica, em particular, às assim chamadas pré-misturas.[00208] In yet another embodiment, feed supplement or food processing compositions containing a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein may optionally and additionally contain other substituents selected from coloring agents, flavor compounds, stabilizers, vitamins, minerals and other feed or food enhancing enzymes. This applies in particular to so-called premixes.

[00209] Em ainda outra modalidade, um aditivo alimentício de acordo com a presente invenção pode ser combinado em uma quantidade apropriada com outros componentes alimentícios, tal como, por exemplo, uma proteína de cereal ou planta para formar um produto alimentício processo.[00209] In yet another embodiment, a food additive according to the present invention may be combined in an appropriate amount with other food components, such as, for example, a cereal or plant protein to form a process food product.

[00210] Em uma modalidade, uma composição de ração paraanimais e/ou composição de aditivo de ração para animais e/ou alimento para animais de estimação compreende um polipeptídeo descrito no presente documento.[00210] In one embodiment, an animal feed composition and/or animal feed additive composition and/or pet food comprises a polypeptide described herein.

[00211] Outra modalidade refere-se a um método para preparar uma composição de ração para animais e/ou composição de aditivo de ração para animais e/ou alimento para animais de estimação que compreende misturar uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento com um ou mais ingredientes de ração para animais e/ou ingredientes de aditivo de ração para animais e/ou ingredientes de alimento para animais de estimação.[00211] Another embodiment relates to a method for preparing an animal feed composition and/or animal feed additive composition and/or pet food comprising mixing a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein with one or more animal feed ingredients and/or animal feed additive ingredients and/or pet food ingredients.

[00212] Uma modalidade adicional refere-se ao uso de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento para preparar uma composição de ração para animais e/ou composição de aditivo de ração para animais e/ou alimento para animais de estimação. O sintagma "alimento para animais de estimação" significa alimento para um animal doméstico, tais como, mas sem limitação, cães; gatos; gerbos; hamsters; chinchilas; ratos mercol; porquinhos-da-índia; aves de estimação, tais como canários, periquitos e papagaios; répteis de estimação, tais como tartaruga, lagartos e cobras; e animais de estimação aquáticos, tais como peixes tropicais e rãs.[00212] An additional embodiment relates to the use of a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein to prepare an animal feed composition and/or animal feed additive composition and/or pet food. The phrase "pet food" means food for a domestic animal, such as, but not limited to, dogs; cats; gerbils; hamsters; chinchillas; mercol rats; guinea pigs; pet birds, such as canaries, parakeets and parrots; pet reptiles, such as turtles, lizards and snakes; and aquatic pets, such as tropical fish and frogs.

[00213] Os termos ração para animais, "gênero alimentício" e "forragem" são usados intercambiavelmente e podem compreender um ou mais materiais alimentícios selecionados dentre o grupo que compreende a) cereais, como pequenos grãos (por exemplo, trigo, cevada, centeio, aveias e combinações dos mesmos) e/ou grãos grandes como maís ou sorgo; b) subprodutos de cereais, como farinha de milho com glúten, Grãos Secos de Destilaria com Solúveis (DDGS) (particularmente Grãos Secos de Destilaria com Solúveis à base de milho (cDDGS), farelo de trigo, sêmea de trigo, farelo fino de trigo, farelo de arroz, cascas de arroz, cascas de aveia, semente de palma e polpa de cítricos; c) proteína obtida a partir de fontes como soja, girassol, amendoim, tremoço, ervilhas, fava, algodão, canola, farinha de peixe, proteína de plasma seca, farinha de carne e ossos, proteína da batata, soro, copra e gergelim; d) óleos e gorduras obtidos a partir de fontes vegetais e animais; e e) minerais e vitaminas.[00213] The terms animal feed, "foodstuff" and "forage" are used interchangeably and may comprise one or more food materials selected from the group comprising a) cereals, such as small grains (e.g., wheat, barley, rye, oats, and combinations thereof) and/or large grains such as maize or sorghum; (b) cereal by-products such as corn gluten meal, Distillers Dried Grains with Solubles (DDGS) (particularly corn-based Distillers Dried Grains with Solubles (cDDGS), wheat bran, wheat middlings, wheat bran fines, rice bran, rice hulls, oat hulls, palm kernel and citrus pulp; (c) protein obtained from sources such as soya, sunflower, peanut, lupin, peas, broad beans, cottonseed, canola, fish meal, dried plasma protein, meat and bone meal, potato protein, whey, copra and sesame; (d) oils and fats obtained from vegetable and animal sources; and (e) minerals and vitamins.

[00214] Em um aspecto, a composição ou aditivo alimentício pode ser líquido ou sólido.[00214] In one aspect, the food composition or additive may be liquid or solid.

[00215] Em um aspecto da invenção, a composição alimentícia é uma bebida, incluindo, mas sem limitação, uma bebida fermentada, tal como cerveja e vinho.[00215] In one aspect of the invention, the food composition is a beverage, including but not limited to a fermented beverage such as beer and wine.

[00216] No contexto da presente invenção, o termo "bebida fermentada" significa compreender qualquer bebida produzida por um método que compreende um processo de fermentação, tal como uma fermentação microbiana, tal como uma fermentação bacteriana e/ou de levedura.[00216] In the context of the present invention, the term "fermented beverage" means to understand any beverage produced by a method comprising a fermentation process, such as a microbial fermentation, such as a bacterial and/or yeast fermentation.

[00217] Em um aspecto da invenção, a bebida fermentada é cerveja. O termo "cerveja" significa compreender mosto fermentado produzido por fermentação/infusão de um material vegetal contendo amido. Muitas vezes, a cerveja é produzida a partir de malte ou adjunto, ou qualquer combinação de malte e adjunto como material vegetal contendo amido. Como usado aqui, é entendido que o termo "malte" significa qualquer grão de cereal maltado, como cevada ou trigo maltado.[00217] In one aspect of the invention, the fermented beverage is beer. The term "beer" is meant to comprise fermented wort produced by fermentation/infusion of a starch-containing plant material. Often, beer is produced from malt or adjunct, or any combination of malt and adjunct such as starch-containing plant material. As used herein, the term "malt" is understood to mean any malted cereal grain, such as malted barley or malted wheat.

[00218] Conforme usado no presente documento, o termo "adjunto" refere-se a qualquer material vegetal contendo amido e/ou açúcar que não seja malte, tal como malte de trigo ou cevada. Os exemplos de adjuntos incluem, por exemplo, grits de milho comuns, grits de milho refinados, levedura moída de cerveja, arroz, sorgo, amido de milho refinado, cevada, amido de cevada, cevada descascada, trigo, amido de trigo, cereal torrificado, flocos de cereal, centeio, aveia, batata, tapioca, mandioca e xaropes, tal como xarope de milho, xarope de cana- de-açúcar, xarope de açúcar invertido, xaropes de cevada e/ou trigo e similares podem ser usados como uma fonte de amido.[00218] As used herein, the term "adjunct" refers to any starch- and/or sugar-containing plant material other than malt, such as wheat or barley malt. Examples of adjuncts include, for example, common corn grits, refined corn grits, brewer's ground yeast, rice, sorghum, refined cornstarch, barley, barley starch, hulled barley, wheat, wheat starch, torrefied cereal, cereal flakes, rye, oats, potato, tapioca, cassava, and syrups such as corn syrup, sugar cane syrup, invert sugar syrup, barley and/or wheat syrups, and the like may be used as a starch source.

[00219] Conforme usado no presente documento, o termo "farelada" refere-se a uma pasta fluida aquosa de qualquer material vegetal contendo amido e/ou açúcar tal como grão pronto para moagem, por exemplo, compreendendo malte de cevada esmagada, cevada esmagada e/ou outro adjunto ou uma combinação dos mesmos, misturados com água para serem posteriormente separados em mosto e grãos gastos.[00219] As used herein, the term "bran" refers to an aqueous slurry of any starch- and/or sugar-containing plant material such as grain ready for milling, for example comprising crushed barley malt, crushed barley and/or other adjunct or a combination thereof, mixed with water to be subsequently separated into wort and spent grain.

[00220] Como usado aqui, o termo "mosto" se relaciona com o escoamento líquido não fermentado após a extração do malte moído durante a brassagem.[00220] As used herein, the term "wort" relates to the unfermented liquid runoff after the extraction of ground malt during mashing.

[00221] Em outro aspecto, a invenção refere-se a um método para preparar uma bebida fermentada, tal como cerveja, que compreende misturar uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento com um malte e/ou adjunto.[00221] In another aspect, the invention relates to a method for preparing a fermented beverage, such as beer, comprising mixing a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein with a malt and/or adjunct.

[00222] Os exemplos de cerveja compreendem: cerveja puro malte, cerveja fermentada sob a "Reinheitsgebot", ale, IPA, lager, amarga, Happoshu (segunda cerveja), terceira cerveja, cerveja seca, cerveja sem álcool, cerveja suave, cerveja com baixo teor de álcool, cerveja de baixa caloria, porter, cerveja do tipo bock, stout, licor de malte, cerveja não alcoólica, licor de malte não alcoólico e similares, assim como bebidas de malte e cereal alternativas, tais como bebidas de malte com sabor de fruta, por exemplo, bebidas de malte com sabor cítrico, tal como com sabor de limão, laranja, lima ou bagas; bebidas de malte com sabor de licor, por exemplo, bebidas de malte com sabor de vodca, rum ou tequila; ou bebidas de malte com sabor de café, tal como licor de malte com sabor de cafeína; e similares.[00222] Examples of beer include: pure malt beer, beer fermented under the "Reinheitsgebot", ale, IPA, lager, bitter, Happoshu (second beer), third beer, dry beer, non-alcoholic beer, mild beer, low-alcohol beer, low-calorie beer, porter, bock beer, stout, malt liquor, non-alcoholic beer, non-alcoholic malt liquor and the like, as well as alternative malt and cereal beverages, such as fruit-flavoured malt beverages, for example, citrus-flavoured malt beverages, such as lemon, orange, lime or berry flavoured; liqueur-flavoured malt beverages, for example, vodka-, rum- or tequila-flavoured malt beverages; or coffee-flavoured malt beverages, such as caffeine-flavoured malt liquor; and the like.

[00223] Um aspecto da invenção refere-se ao uso de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento na produção de uma bebida fermentada, tal como uma cerveja.[00223] One aspect of the invention relates to the use of a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein in the production of a fermented beverage, such as beer.

[00224] Outro aspecto refere-se a um método para fornecer uma bebida fermentada que compreende a etapa de colocar uma farelada e/ou mosto em contato com uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento.[00224] Another aspect relates to a method for providing a fermented beverage comprising the step of contacting a bran and/or wort with a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein.

[00225] Um aspecto adicional se relaciona com um método de provisão de uma bebida fermentada compreendendo os passos seguintes: (a) preparar uma farelada, (b) filtrar a farelada para obter um mosto e (c) fermentar o mosto para obter uma bebida fermentada, tal como uma cerveja, em que uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é adicionado: (i) à farelada do etapa (a) e/ou (ii) ao mosto da etapa (b) e/ou (iii) ao mosto da etapa (c).[00225] A further aspect relates to a method of providing a fermented beverage comprising the following steps: (a) preparing a mash, (b) filtering the mash to obtain a wort and (c) fermenting the wort to obtain a fermented beverage, such as a beer, wherein a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is added: (i) to the mash of step (a) and/or (ii) to the wort of step (b) and/or (iii) to the wort of step (c).

[00226] De acordo com ainda outro aspecto, uma bebida fermentada, tal como uma cerveja, é produzida ou fornecida por um método que compreende a etapa (ou etapas) de (1) colocar uma farelada e/ou um mosto em contato com uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento; e/ou (2) (a) preparar uma farelada, (b) filtrar a farelada para obter um mosto e (c) fermentar o mosto para obter uma bebida fermentada, tal como uma cerveja, em que uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é adicionado: (i) à farelada da etapa (a) e/ou (ii) ao mosto da etapa (b) e/ou (iii) ao mosto da etapa (c).[00226] According to yet another aspect, a fermented beverage, such as a beer, is produced or provided by a method comprising the step(s) of (1) contacting a mash and/or a wort with a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein; and/or (2) (a) preparing a mash, (b) filtering the mash to obtain a wort, and (c) fermenting the wort to obtain a fermented beverage, such as a beer, wherein a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is added: (i) to the mash of step (a), and/or (ii) to the wort of step (b), and/or (iii) to the wort of step (c).

[00227] Em termos gerais, o extrato de café é incubado na presença de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento sob condições adequadas para hidrolisar galactomananos presentes no extrato de café líquido.[00227] In general terms, the coffee extract is incubated in the presence of a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein under conditions suitable to hydrolyze galactomannans present in the liquid coffee extract.

[00228] Em outro aspecto, a invenção refere-se a um método para preparar produtos assados que compreende a adição de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento à massa, seguida pelo assamento da massa. Os exemplos de produtos assados são bem conhecidos por aqueles versados na técnica e incluem, pães, rocamboles, massas folhadas, massas fermentadas doces, pãezinhos, bolos, bolachas, cookies, biscoitos, waffles, wafers, tortilhas, cereais matinais, produtos extrudidos e similares.[00228] In another aspect, the invention relates to a method for preparing baked products comprising adding a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein to dough, followed by baking the dough. Examples of baked products are well known to those skilled in the art and include breads, Swiss rolls, puff pastries, sweet yeast doughs, rolls, cakes, crackers, cookies, biscuits, waffles, wafers, tortillas, breakfast cereals, extruded products and the like.

[00229] Uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode ser adicionado à massa como parte de uma composição melhoradora de pão. Os melhoradores de pão são composições que contêm uma variedade de ingredientes que melhoram as propriedades da massa e a qualidade dos produtos de panificação, por exemplo, pães e bolo. Os melhoradores de pão são frequentemente adicionados em processos de panificação industriais devido ao fato de que seus efeitos benéficos, por exemplo, a estabilidade de massa e a textura e volume de pão. Os melhoradores de pão usualmente contêm gorduras e óleos assim como aditivos como emulsificantes, enzimas, antioxidantes, oxidantes, estabilizantes e agentes redutores. Adicionalmente a qualquer um dos polipeptídeos da presente invenção, outras enzimas que podem também estar presentes no melhorador de pão ou que podem ser usados de outro modo em conjunto com qualquer um dos polipeptídeos da presente invenção incluem amilases, hemicelulases, complexos amilolíticos, lipases, proteases, xilanases, pectinases, pululanases, enzimas de degradação de polissacarídeo de não amido e enzimas de oxirredução como glicose oxidase, lipoxigenase ou ácido ascórbico oxidase.[00229] A mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein may be added to dough as part of a bread improver composition. Bread improvers are compositions containing a variety of ingredients that improve dough properties and the quality of bakery products, e.g., breads and cakes. Bread improvers are often added in industrial baking processes due to their beneficial effects on, e.g., dough stability and bread texture and volume. Bread improvers usually contain fats and oils as well as additives such as emulsifiers, enzymes, antioxidants, oxidants, stabilizers and reducing agents. In addition to any of the polypeptides of the present invention, other enzymes that may also be present in the bread improver or that may otherwise be used in conjunction with any of the polypeptides of the present invention include amylases, hemicellulases, amylolytic complexes, lipases, proteases, xylanases, pectinases, pullulanases, non-starch polysaccharide degrading enzymes, and redox enzymes such as glucose oxidase, lipoxygenase, or ascorbic acid oxidase.

[00230] Em uma modalidade, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode ser adicionado à massa como parte de uma composição melhoradora de pão que também compreende uma fonte de glucomanano e/ou galactomanano, tal como goma de coniaco, goma guar, goma de alfarrobeira (Ceratonia siliqua), farinha de copra, manano de marfim vegetal (Phytelephas macrocarpa), extrato de manano de algas marinhas, farinha de coco e a parede celular da levedura de cerveja (pode ser seca ou usada na forma de extrato de levedura de cerveja). Outros derivados de manano aceitáveis para uso na presente invenção incluem homopolímero de manano β-1,4-ligado não ramificado e mano-oligossacarídeos (manobiose, manotriose, manotetraose e manopentoase). Uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode ser adicionalmente usado ou sozinho ou em combinação com um glucomanano e/ou galactomanano e/ou galactoglucomanano para melhorar a tolerância de massa; flexibilidade de massa e/ou pegajosidade de massa; e/ou estrutura de migalhas de pão, assim como retardar o endurecimento do pão. Em outro aspecto, os hidrolisados de mananase atuam como prebióticos solúveis tais como mano-oligossacarídeos (MOS) que promovem a proliferação de bactérias de ácido láctico comumente associadas à boa saúde quando encontradas em densidades de população favoráveis no cólon.[00230] In one embodiment, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein may be added to dough as part of a bread improving composition that also comprises a source of glucomannan and/or galactomannan, such as coniac gum, guar gum, locust bean gum (Ceratonia siliqua), copra flour, mannan from plant ivory (Phytelephas macrocarpa), mannan extract from seaweed, coconut flour and the cell wall of brewer's yeast (may be dried or used in the form of brewer's yeast extract). Other mannan derivatives acceptable for use in the present invention include unbranched β-1,4-linked mannan homopolymer and manno-oligosaccharides (mannobiose, mannotriose, mannotetraose and mannopentoase). A mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein may be further used either alone or in combination with a glucomannan and/or galactomannan and/or galactoglucomannan to improve dough tolerance; dough flexibility and/or dough stickiness; and/or bread crumb structure, as well as to delay bread staling. In another aspect, the mannanase hydrolysates act as soluble prebiotics such as mannan-oligosaccharides (MOS) that promote the proliferation of lactic acid bacteria commonly associated with good health when found at favorable population densities in the colon.

[00231] Em um aspecto, a massa à qual qualquer polipeptídeo da invenção é adicionado compreende farelo ou aveia, arroz, painço, maís ou farinha de legume adicionalmente ou em vez de farinha de trigo pura (isto é, não é uma massa de farinha branca pura).[00231] In one aspect, the dough to which any polypeptide of the invention is added comprises bran or oat, rice, millet, maize or legume flour in addition to or instead of pure wheat flour (i.e., it is not a pure white flour dough).

[00232] Em outra modalidade, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento pode ser adicionado a leite ou qualquer outro produto lácteo ao qual foi adicionado um glucomanano e/ou galactomanano. As fontes típicas de glucomanano e/ou galactomanano são listadas acima nos aspectos de panificação e incluem goma guar ou de coniaco. A combinação de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento com um glucomanano e/ou galactomanano libera hidrolisados de mananase (mano-oligossacarídeos) que atuam como prebióticos solúveis promovendo-se o crescimento e proliferação seletivos de bactérias probióticas (especialmente bactérias de ácido lático de Bifidobacteria e Lactobacillus) comumente associadas à boa saúde quando encontradas em densidades de população favoráveis no intestino grosso ou cólon.[00232] In another embodiment, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein can be added to milk or any other dairy product to which a glucomannan and/or galactomannan has been added. Typical sources of glucomannan and/or galactomannan are listed above in the baking aspects and include guar or coniac gum. The combination of a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein with a glucomannan and/or galactomannan releases mannanase hydrolysates (mannano-oligosaccharides) that act as soluble prebiotics promoting the selective growth and proliferation of probiotic bacteria (especially lactic acid bacteria from Bifidobacteria and Lactobacillus) commonly associated with good health when found at favorable population densities in the large intestine or colon.

[00233] Outro aspecto refere-se a um método para preparar leite ouprodutos lácteos que compreende a adição de uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento e qualquer glucomanano ou galactomanano ou galactoglucomanano.[00233] Another aspect relates to a method for preparing milk or dairy products comprising adding a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein and any glucomannan or galactomannan or galactoglucomannan.

[00234] Em outro aspecto, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é usado em combinação com qualquer glucomanano ou galactomanano antes ou após a adição a um gênero alimentício à base de laticínios para produzir um gênero alimentício à base de laticínios que compreende hidrolisados de manano prebióticos. Em um aspecto adicional, o produto lácteo contendo mano-oligossacarídeo assim produzido tem a capacidade de aumentar a população da microflora intestinal humana benéfica, e, em ainda outro aspecto, o gênero alimentício à base de laticínios pode compreender uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento juntamente com qualquer fonte de glucomanano e/ou galactomanano e/ou galactoglucomanano e uma dose suficiente para a inoculação de pelo menos uma cepa de bactéria (tal como Bifidobacteria ou Lactobacillus) conhecida por ser benéfica ao intestino grosso humano. Em um aspecto, o gênero alimentício à base de laticínios é um iogurte ou bebida de leite.[00234] In another aspect, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is used in combination with any glucomannan or galactomannan prior to or after addition to a dairy foodstuff to produce a dairy foodstuff comprising prebiotic mannan hydrolysates. In a further aspect, the mannan-oligosaccharide-containing dairy product thus produced has the ability to increase the population of beneficial human intestinal microflora, and in yet another aspect, the dairy foodstuff may comprise a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein together with any source of glucomannan and/or galactomannan and/or galactoglucomannan and a dose sufficient for inoculation of at least one strain of bacteria (such as Bifidobacteria or Lactobacillus) known to be beneficial to the human large intestine. In one aspect, the dairy-based foodstuff is a yogurt or milk drink.

[00235] A variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento encontra uso adicional no branqueamento auxiliado por enzima de polpas de papel, tais como polpas químicas, polpas semiquímicas, polpas kraft, polpas mecânicas e polpas preparadas pelo método de sulfito. Em termos gerais, as polpas de papel são incubadas com uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento sob condições adequadas para o branqueamento da polpa de papel.[00235] The mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein finds additional use in the enzyme-assisted bleaching of paper pulps, such as chemical pulps, semi-chemical pulps, kraft pulps, mechanical pulps and pulps prepared by the sulfite method. In general terms, the paper pulps are incubated with a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein under conditions suitable for bleaching the paper pulp.

[00236] Em algumas modalidades, as polpas são polpas livres de cloro com oxigênio, ozônio, peróxido ou peroxiácidos. Em algumas modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é usado no branqueamento auxiliado por enzima de polpas produzidas por métodos de polpação modificados ou contínuos que exibem baixos teores de lignina. Em algumas outras modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é aplicado sozinho ou, de preferência, em combinação com as enzimas xilanase e/ou endoglucanase e/ou alfa- galactosidase e/ou celobio-hidrolase.[00236] In some embodiments, the pulps are chlorine-free pulps with oxygen, ozone, peroxide, or peroxyacids. In some embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein is used in the enzyme-assisted bleaching of pulps produced by modified or continuous pulping methods that exhibit low lignin contents. In some other embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein is applied alone or, preferably, in combination with the enzymes xylanase and/or endoglucanase and/or alpha-galactosidase and/or cellobiohydrolase.

[00237] Galactomananos, tais como goma guar e goma de alfarrobeira, são amplamente usados como agentes espessantes, por exemplo, em alimentos (por exemplo, sorvete) e pasta de impressão para impressão têxtil, tais como impressões em camisas. Assim, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento também encontra uso na redução da espessura ou viscosidade de substratos contendo manano. Em algumas modalidades, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo das mesmas descrito no presente documento é usado para hidrolisar galactomananos em um alimento (por exemplo, sorvete) fabricando corrente de refugo. Em determinadas modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é usada para reduzir a viscosidade de alimento residual no equipamento de processamento facilitando, assim, a limpeza após o processamento. Em determinadas outras modalidades, uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento é usado para reduzir a viscosidade da pasta de impressão, facilitando, assim, a remoção por lavagem da pasta de impressão excedente após as impressões têxteis. Em termos gerais, um substrato contendo manano é incubado com uma variante de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo da mesma descrito no presente documento sob condições adequadas para reduzir a viscosidade do substrato contendo manano.[00237] Galactomannans, such as guar gum and locust bean gum, are widely used as thickening agents, for example, in foods (e.g., ice cream) and printing paste for textile printing, such as shirt prints. Thus, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein also finds use in reducing the thickness or viscosity of mannan-containing substrates. In some embodiments, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein is used to hydrolyze galactomannans in a food (e.g., ice cream) by manufacturing waste stream. In certain embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide, or active fragment thereof described herein is used to reduce the viscosity of residual food in processing equipment, thereby facilitating cleaning after processing. In certain other embodiments, a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein is used to reduce the viscosity of the printing paste, thereby facilitating the washing removal of excess printing paste after textile printing. In general terms, a mannan-containing substrate is incubated with a mannanase variant, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein under conditions suitable to reduce the viscosity of the mannan-containing substrate.

[00238] Em ainda outra modalidade, uma ou mais variantes de mananase, polipeptídeo recombinante ou fragmento ativo das mesmas descrito no presente documento pode ser usado na indústria de óleo e gás para, por exemplo, controlar a viscosidade de fluidos de perfuração; aumentar a taxa na qual os fluidos usados no fraturamento hidráulico criam fraturas subterrâneas que se estendem o poço para a rocha; limpar a torta de filtro de poço; e combinações dos mesmos.[00238] In yet another embodiment, one or more mannanase variants, recombinant polypeptide or active fragment thereof described herein can be used in the oil and gas industry to, for example, control the viscosity of drilling fluids; increase the rate at which fluids used in hydraulic fracturing create subsurface fractures that extend down the wellbore into the rock; clean well filter cake; and combinations thereof.

[00239] Outros aspectos e modalidades das presentes composições e métodos serão evidentes a partir da descrição anterior e dos exemplos a seguir. Várias modalidades alternativas além daquelas descritas no presente documento podem ser empregadas na prática da invenção sem se afastar do espírito e escopo da invenção. Consequentemente, as reivindicações, e não as modalidades específicas descritas no presente documento, definem o escopo da invenção, e, como tais, os métodos e as estruturas dentro do escopo nas reivindicações e seus equivalentes são assim cobertos.[00239] Other aspects and embodiments of the present compositions and methods will be apparent from the foregoing description and the following examples. Various alternative embodiments beyond those described herein may be employed in practicing the invention without departing from the spirit and scope of the invention. Accordingly, the claims, and not the specific embodiments described herein, define the scope of the invention, and as such, methods and structures within scope of the claims and their equivalents are thereby covered.

EXEMPLO 1EXAMPLE 1 Clonagem e Expressão de mananase PspMan138 de Paenibacillus sp.Cloning and Expression of PspMan138 mannanase from Paenibacillus sp.

[00240] Manipulações de DNA para gerar a variante de PspMan4 mananase de Paenibacillus sp. PspMan138 foram executadas com o uso de técnicas de biologia molecular convencionais (consultar, por exemplo, Sambrook et al, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press). Uma sequência de DNA artificial foi gerada que introduziu múltiplas modificações de aminoácido na sequência de PspMan4 mananase de Paenibacillus sp. do tipo selvagem, tal mananase do tipo selvagem é mais completamente descrita no documento PCT/US15/40057 depositado em 10 de julho de 2015, que foi subsequentemente publicado como o documento WO2016/007929.[00240] DNA manipulations to generate the Paenibacillus sp. PspMan4 mannanase variant PspMan138 were performed using standard molecular biology techniques (see, e.g., Sambrook et al, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press). An artificial DNA sequence was generated that introduced multiple amino acid modifications into the wild-type Paenibacillus sp. PspMan4 mannanase sequence; such wild-type mannanase is more fully described in PCT/US15/40057 filed July 10, 2015, which was subsequently published as WO2016/007929.

[00241] A sequência de nucleotídeos do gene PspMan138 é apresentada como SEQ ID NO:1 (incluindo a sequência que codifica o peptídeo de sinalização nativo previsto).[00241] The nucleotide sequence of the PspMan138 gene is presented as SEQ ID NO:1 (including the sequence encoding the predicted native signal peptide).

[00242] Os cassetes de DNA que compreendem promotor de B. subtilis aprE (SEQ ID NO:2) e o peptídeo de sinalização de B. subtilis aprE (SEQ ID NO:3) foram sintetizados. Com o uso das técnicas conhecidas na arte, fragmentos de PCR foram montados com o uso da Montagem Gibson para produzir os cassetes de expressão finais. A sequência de aminoácidos do peptídeo de sinalização aprE de B. subtilis codificado por SEQ ID NO:3 é apresentada como SEQ ID NO:4.[00242] DNA cassettes comprising B. subtilis aprE promoter (SEQ ID NO:2) and B. subtilis aprE signal peptide (SEQ ID NO:3) were synthesized. Using techniques known in the art, PCR fragments were assembled using Gibson Assembly to produce the final expression cassettes. The amino acid sequence of the B. subtilis aprE signal peptide encoded by SEQ ID NO:3 is set forth as SEQ ID NO:4.

[00243] O cassete de expressão que incorpora o gene PspMan138 e outros elementos descritos acima foi clonado no vetor bifuncional (shuttle) de replicação pHYT e transformado em uma cepa adequada de B. subtilis. O vetor pHYT foi derivado de pHY300PLK (Takara) adicionando-se um terminador após o gene de resistência à tetraciclina com o uso dos sítios BstEII e EcoRI (SEQ ID NO:5). O sítio HindIII em pHY300PLK foi também removido com o uso de um ligante clonado nos sítios BamHI e HindIII (SEQ ID NO:6).[00243] The expression cassette incorporating the PspMan138 gene and other elements described above was cloned into the bifunctional replication shuttle vector pHYT and transformed into a suitable strain of B. subtilis. The pHYT vector was derived from pHY300PLK (Takara) by adding a terminator after the tetracycline resistance gene using the BstEII and EcoRI sites (SEQ ID NO:5). The HindIII site in pHY300PLK was also removed using a linker cloned into the BamHI and HindIII sites (SEQ ID NO:6).

[00244] Os fragmentos de DNA que compreendem o cassete de expressão de B. subtilis (SEQ ID NO:7) e o gene PspMan138 (SEQ ID NO:1) foram amplificados por PCR com o uso dos iniciadores listadas na Tabela 1 (SEQ ID NOs:8 a 11).[00244] DNA fragments comprising the B. subtilis expression cassette (SEQ ID NO:7) and the PspMan138 gene (SEQ ID NO:1) were amplified by PCR using the primers listed in Table 1 (SEQ ID NOs:8 to 11).

[00245] A sequência de ácidos nucleicos para o cassete de expressão de B. subtilis é apresentada como SEQ ID NO:7: [00245] The nucleic acid sequence for the B. subtilis expression cassette is set forth as SEQ ID NO:7:

[00246] Com o uso das técnicas conhecidas na arte, fragmentos de PCR foram montados com o uso da Montagem Gibson (SGI DNA n° de catálogo GA1100-10) para produzir os cassetes de expressão finais. As células de B. subtilis foram transformadas e cultivadas em LB solidificado por ágar suplementado com 5 μg/ml de cloranfenicol.[00246] Using techniques known in the art, PCR fragments were assembled using Gibson Assembly (SGI DNA catalog no. GA1100-10) to produce the final expression cassettes. B. subtilis cells were transformed and cultured on agar-solidified LB supplemented with 5 μg/ml chloramphenicol.

[00247] A sequência de aminoácidos da proteína precursora de PspMan138 codificada pelo gene PspMan138 é apresentada como SEQ ID NO:12. A sequência de aminoácidos da enzima madura, PspMan138 (298 aminoácidos), é apresentada como SEQ ID NO:13.[00247] The amino acid sequence of the PspMan138 precursor protein encoded by the PspMan138 gene is set forth as SEQ ID NO:12. The amino acid sequence of the mature enzyme, PspMan138 (298 amino acids), is set forth as SEQ ID NO:13.

EXEMPLO 2EXAMPLE 2 Métodos para Caracterizar a Atividade e Estabilidade de MananaseMethods for Characterizing Mannanase Activity and Stability

[00248] Para gerar as amostras de enzima de variante PspMan4 (a sequência de aminoácidos da proteína madura é apresentada como SEQ ID NO:14) e PspMan138 (SEQ ID NO:13) para caracterização bioquímica, o crescimento seletivo das células de B. subtilis transformadas foi realizado em placas de microtitulação de 96 cavidades (MTPs) a 37°C por 68 horas em meio de cultivo (meios semidefinidos enriquecidos à base de tampão MOPS, com ureia como a principal fonte de nitrogênio, glicose como a principal fonte de carbono e suplementado com 1% de soytone para crescimento celular robusto) em cada cavidade. As culturas foram coletadas por centrifugação a 3.600 rpm por 45 min e filtradas através de placas de filtro Multiscreen® (EMD Millipore, Billerica, MA, EUA) com o uso de um sistema de vácuo Millipore. Os sobrenadantes de cultura filtrados foram usados para os ensaios descritos abaixo.[00248] To generate the PspMan4 (the amino acid sequence of the mature protein is presented as SEQ ID NO:14) and PspMan138 (SEQ ID NO:13) variant enzyme samples for biochemical characterization, transformed B. subtilis cells were selectively grown in 96-well microtiter plates (MTPs) at 37°C for 68 h in culture medium (MOPS buffer-based enriched semidefined media with urea as the main nitrogen source, glucose as the main carbon source, and supplemented with 1% soytone for robust cell growth) in each well. Cultures were harvested by centrifugation at 3,600 rpm for 45 min and filtered through Multiscreen® filter plates (EMD Millipore, Billerica, MA, USA) using a Millipore vacuum system. Filtered culture supernatants were used for the assays described below.

Ensaio de Atividade de MananaseMannanase Activity Assay

[00249] A atividade de mananase das variantes PspMan4 e PspMan138 da mesma foi testada medindo-se a hidrólise do galactomanano de goma de alfarrobeira (LBG) em solução. O substrato usado foi solução de LBG 0,28% (em p/v) em tampão de Tris-HCl a 50 mM, pH 7,5 (tampão de diluição de substrato). Para preparar uma solução de substrato de trabalho, LBG em pó (Produto n° G0753, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) foi dissolvido em uma solução aquecida de tampão de Tris-HCl a 50 mM, pH 7,5, sob agitação. Mediante o resfriamento até a temperatura ambiente, a solução foi centrifugada, e o sobrenadante transparente foi usado como a solução de substrato. As amostras de enzima foram diluídas em tampão de diluição de enzima (tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2, contendo 0,005% de TWEEN®-80), e as alíquotas das soluções enzimáticas diluídas foram adicionadas a um MTP de poliestireno transparente de fundo plano contendo a solução de substrato de LBG. A placa foi vedada e incubada a 40 °C com agitação a 900 rpm por 10 min (por exemplo, em um incubador/agitador iEMS, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Após a incubação, os açúcares redutores liberados foram quantificados com o uso do ensaio de reagente BCA (n° de catálogo 23225, Thermo Scientific Pierce, Rockford, IL). Especificamente, alíquotas de cada cavidade da placa de ensaio LBG foram adicionadas a uma placa de PCR contendo solução de reagente de trabalho BCA (preparada de acordo com as instruções do fabricante); a razão entre amostra e reagente de trabalho foi 1:9 (em v/v). As placas foram vedadas e incubadas em um termociclo (por exemplo, Tetrad2 Peltier Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) a 95 °C por 2 a 3 min. Após a placa ter resfriado até 30 °C, a solução de reação foi transferida para um MTP de poliestireno transparente de fundo plano fresco (por exemplo, Costar 9017), e a absorbância foi medida a 562 nm em um espectrofotômetro leitor de placas (por exemplo, SpectraMax Plus 384, Molecular Devices, Sunnyvale, CA). O valor de absorbância de uma amostra que não contém mananase (branco) foi subtraído dos valores de absorbância das amostras contendo mananase. A absorbância resultante foi tomada como uma medição da atividade de mananase.[00249] The mannanase activity of the PspMan4 and PspMan138 variants thereof was assayed by measuring the hydrolysis of locust bean gum galactomannan (LBG) in solution. The substrate used was 0.28% (w/v) LBG solution in 50 mM Tris-HCl buffer, pH 7.5 (substrate dilution buffer). To prepare a working substrate solution, LBG powder (Product No. G0753, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) was dissolved in a heated solution of 50 mM Tris-HCl buffer, pH 7.5, with stirring. Upon cooling to room temperature, the solution was centrifuged, and the clear supernatant was used as the substrate solution. Enzyme samples were diluted in enzyme dilution buffer (50 mM MOPS buffer, pH 7.2, containing 0.005% TWEEN®-80), and aliquots of the diluted enzyme solutions were added to a clear, flat-bottomed polystyrene MTP containing the LBG substrate solution. The plate was sealed and incubated at 40 °C with shaking at 900 rpm for 10 min (e.g., in an iEMS incubator/shaker, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). After incubation, the released reducing sugars were quantified using the BCA reagent assay (catalog no. 23225, Thermo Scientific Pierce, Rockford, IL). Specifically, aliquots from each well of the LBG assay plate were added to a PCR plate containing BCA working reagent solution (prepared according to the manufacturer’s instructions); The sample to working reagent ratio was 1:9 (in v/v). The plates were sealed and incubated in a thermocycler (e.g., Tetrad2 Peltier Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) at 95 °C for 2 to 3 min. After the plate had cooled to 30 °C, the reaction solution was transferred to a fresh flat-bottomed clear polystyrene MTP (e.g., Costar 9017), and the absorbance was measured at 562 nm on a plate reader spectrophotometer (e.g., SpectraMax Plus 384, Molecular Devices, Sunnyvale, CA). The absorbance value of a sample not containing mannanase (blank) was subtracted from the absorbance values of the samples containing mannanase. The resulting absorbance was taken as a measurement of mannanase activity.

Ensaio de EstabilidadeStability Test

[00250] A estabilidade das variantes PspMan4 e PspMan138 da mesma foi testada sob a condição de estresse em uma solução aquosa 10% (em v/v) do detergente líquido para lavagem de roupas TIDE® comercialmente disponível (Original scent, Procter and Gamble, adquirido em supermercados locais em 2014 e inativado por calor com o uso do protocolo descrito no Exemplo 4 abaixo) medindo-se a atividade residual das amostras após a incubação a uma temperatura elevada (56°C) por 5 min.[00250] The stability of the PspMan4 and PspMan138 variants thereof was tested under stress condition in a 10% (v/v) aqueous solution of commercially available TIDE® liquid laundry detergent (Original scent, Procter and Gamble, purchased from local supermarkets in 2014 and heat inactivated using the protocol described in Example 4 below) by measuring the residual activity of the samples after incubation at an elevated temperature (56°C) for 5 min.

[00251] Uma solução aquosa 12,5% (em v/v) do detergente inativado por calor foi preparada, e amostras de enzima dos sobrenadantes de cultura filtrados foram misturadas com o volume apropriado dessa solução detergente para alcançar uma concentração de detergente final de 10% (em v/v). Para medir a atividade inicial (sem estresse), alíquotas dessa mistura foram imediatamente diluídas em tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2, TWEEN®-80 0,005% e avaliadas quanto à atividade em LBG com o uso do "Ensaio de Atividade de Mananase" anteriormente descrito neste documento. Para medir a atividade com estresse, as amostras de enzima que foram misturadas com a solução detergente foram incubadas em uma placa de PCR vedada a 56 °C por 5 min em um termociclo (Tetrad2 Peltier Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), então, diluídas em tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2, TWEEN®-80 0,005% e avaliadas quanto à atividade conforme descrito no "Ensaio de Atividade de Mananase" acima.[00251] A 12.5% (v/v) aqueous solution of the heat-inactivated detergent was prepared, and enzyme samples from the filtered culture supernatants were mixed with the appropriate volume of this detergent solution to achieve a final detergent concentration of 10% (v/v). To measure initial (unstressed) activity, aliquots of this mixture were immediately diluted in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2, 0.005% TWEEN®-80 and assayed for activity in LBG using the "Mannanase Activity Assay" previously described herein. To measure activity under stress, enzyme samples that were mixed with the detergent solution were incubated in a sealed PCR plate at 56 °C for 5 min in a thermocycler (Tetrad2 Peltier Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), then diluted in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2, 0.005% TWEEN®-80, and assayed for activity as described in “Mannanase Activity Assay” above.

[00252] Uma vez que os valores de atividade com estresse e sem estresse foram medidos por hidrólise do substrato de LBG conforme descrito acima, a % de atividades residuais foi calculada tomando-se uma razão entre a atividade com estresse e sem estresse e multiplicando por 100. Os resultados são resumidos na Tabela 2, mostrando que PspMan138 reteve atividade enzimática após esse teste de estresse de temperatura no detergente líquido para lavagem de roupas TIDE®. [00252] Since the stressed and non-stressed activity values were measured by hydrolysis of the LBG substrate as described above, the % residual activities were calculated by taking a ratio of the stressed to non-stressed activity and multiplying by 100. The results are summarized in Table 2, showing that PspMan138 retained enzyme activity after this temperature stress test in TIDE® liquid laundry detergent.

EXEMPLO 3EXAMPLE 3 Desempenho de Limpeza de MananasesMannanases Cleaning Performance

[00253] As enzimas mananase foram isoladas de sobrenadantes de cultura de Bacillus clarificados por precipitação de sulfato de amônio em tampão MES pH 5,3. A purificação foi alcançada por cromatografia de troca hidrofóbica, seguida por diálise em tampão MES a 50 mM, pH 6,0. Propilenoglicol foi, então, adicionado a uma concentração final de 40%, e as amostras armazenadas refrigeradas até caracterização adicional.[00253] Mannanase enzymes were isolated from Bacillus culture supernatants clarified by ammonium sulfate precipitation in MES buffer pH 5.3. Purification was achieved by hydrophobic exchange chromatography, followed by dialysis in 50 mM MES buffer, pH 6.0. Propylene glycol was then added to a final concentration of 40%, and the samples stored refrigerated until further characterization.

[00254] O desempenho de lavagem de PspMan138 e uma mananase comercial (MANNAWAY® 4 l, Novozymes AS, Dinamarca) foi testado em uma aplicação de detergente para lavagem de roupas o uso de um Tergômetro. A avaliação do desempenho foi conduzida a 16°C. A carga de sujeira consistia em duas amostras de goma de alfarrobeira CFT C-S-73 (LBG) (Center for Testmaterials BV, Vlaardingen, Holanda) em um béquer de tergômetro preenchido com 1 l de água deionizada. A dureza de água foi ajustada a 100 ppm (Ca:Mg 3:1), e o pH ajustado a 8,2 com o uso de HEPES a 5 mM. O Detergente Líquido para Lavagem de Roupas Tide® inativado por calor (Original scent, adquirido em supermercados locais em 2014) foi adicionado aos béqueres a 1 g/l. O protocolo de inativação por calor é descrito abaixo no Exemplo 4. Cada mananase foi adicionada aos béqueres em várias doses por um tempo de lavagem de 15 min. Após o tratamento de lavagem, as amostras foram secar por centrifugação seguido por secagem ao ar.[00254] The washing performance of PspMan138 and a commercial mannanase (MANNAWAY® 4 l, Novozymes AS, Denmark) was tested in a laundry detergent application using a Tergometer. The performance evaluation was conducted at 16 °C. The soil load consisted of two samples of CFT C-S-73 locust bean gum (LBG) (Center for Testmaterials BV, Vlaardingen, The Netherlands) in a tergometer beaker filled with 1 l of deionized water. The water hardness was adjusted to 100 ppm (Ca:Mg 3:1), and the pH was adjusted to 8.2 using 5 mM HEPES. Heat-inactivated Tide® Liquid Laundry Detergent (Original scent, purchased from local supermarkets in 2014) was added to the beakers at 1 g/l. The heat inactivation protocol is described below in Example 4. Each mannanase was added to the beakers at various doses for a wash time of 15 min. After the wash treatment, the samples were dried by centrifugation followed by air drying.

[00255] Cada amostra foi medida antes e após o tratamento com o uso de um colorímetro (Konica Minolta Chroma Meter CR-410, abertura de 50 mm). A diferença nos valores L, a, b foi convertida em diferença de cor total (dE) conforme definido pelo espaço de cor CIE-LAB. Esses valores foram usados para determinar o nível de limpeza das amostras, e os resultados foram expressos como remoção de manchas percentual (% de SRI). Os resultados para limpeza de amostras CS-73 por PspMan138 e MANNAWAY® 4 l são mostrados na Figura 1. Nesse ensaio de limpeza, PspMan138 e MANNAWAY® 4 l exibiram remoção de manchas comparável em sujeira LBG.[00255] Each sample was measured before and after treatment using a colorimeter (Konica Minolta Chroma Meter CR-410, 50 mm aperture). The difference in L, a, b values was converted to total color difference (dE) as defined by the CIE-LAB color space. These values were used to determine the cleaning level of the samples, and the results were expressed as percent stain removal (% SRI). The results for cleaning CS-73 samples by PspMan138 and MANNAWAY® 4 L are shown in Figure 1. In this cleaning assay, PspMan138 and MANNAWAY® 4 L exhibited comparable stain removal on LBG soil.

EXEMPLO 4EXAMPLE 4 Determinação da Meia-vida de Mananases em in Detergentes Líquidos para Lavagem de Roupas ComerciaisDetermination of the Half-Life of Mannanases in Commercial Liquid Laundry Detergents Inativação de Detergente ComercialInactivation of Commercial Detergent

[00256] Os detergentes líquidos para lavagem de roupas listados na Tabela 3 apresentada no presente documento abaixo foram adquiridos em supermercados locais. Para abolir a atividade enzimática de fundo, as enzimas presentes nesses detergentes comerciais foram inativadas aquecendo-se os detergentes a 95°C por 3 a 4 horas. Após o aquecimento, os detergentes foram avaliados quanto à atividade enzimática por meio dos ensaios de atividade de protease e amilase apresentados no presente documento abaixo. Após o aquecimento dos detergentes por 4 horas, a atividade de protease e amilase não foi detectada. Ademais, a ausência de atividade de mananase em detergentes inativados por calor foi mostrada pelo ensaio de atividade no substrato LBG descrito sob "Ensaio de Atividade de Mananase Residual" abaixo. [00256] The liquid laundry detergents listed in Table 3 presented herein below were purchased from local supermarkets. To abolish background enzyme activity, the enzymes present in these commercial detergents were inactivated by heating the detergents at 95°C for 3 to 4 hours. After heating, the detergents were evaluated for enzyme activity using the protease and amylase activity assays presented herein below. After heating the detergents for 4 hours, no protease and amylase activity was detected. Furthermore, the absence of mannanase activity in heat-inactivated detergents was shown by the activity assay on the LBG substrate described under "Residual Mannanase Activity Assay" below.

Ensaios de Atividade de Protease e Amilase em Detergente Líquido para Lavagem de Roupas ComercialProtease and Amylase Activity Assays in Commercial Liquid Laundry Detergent

[00257] As atividades de enzima foram medidas diluindo-se primeiramente o detergente 1:5 em tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2.[00257] Enzyme activities were measured by first diluting the detergent 1:5 in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2.

[00258] Ensaio de Protease: A atividade de protease foi medida com o uso do substrato de succinil-L-alanil-L-alanil-L-prolil-L-fenil-p- nitroanilida (suc-AAPF-pNA, Sigma: S-7388) tampão a pH 8,6 e 25°C. As soluções de reagente usadas foram: Tris/HCl a 100 mM, pH 8,6, contendo TWEEN®-80 0,005% (tampão de diluição de Tris); tampão de Tris a 100 mM, pH 8,6, contendo CaCl2 a 10 mM e TWEEN®-80 0,005% (tampão de Tris/Ca); e suc-AAPF-pNA a 160 mM em DMSO (solução de estoque suc-AAPF-pNA) (Sigma: S-7388). O ensaio foi realizado adicionando-se 10 ul de detergente diluído a cada cavidade contendo 150 ul de tampão de diluição de Tris, imediatamente seguido pela adição de 100 ul de 2 mg/ml de solução de trabalho de suc-AAPF-pNA a 25°C. As reações foram avaliadas visualmente versus detergente para lavagem de roupas comercial não aquecido, em que a geração de cor indica a atividade enzimática.[00258] Protease Assay: Protease activity was measured using succinyl-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-L-phenyl-p-nitroanilide (suc-AAPF-pNA, Sigma: S-7388) substrate buffer at pH 8.6 and 25°C. The reagent solutions used were: 100 mM Tris/HCl, pH 8.6, containing 0.005% TWEEN®-80 (Tris dilution buffer); 100 mM Tris buffer, pH 8.6, containing 10 mM CaCl2 and 0.005% TWEEN®-80 (Tris/Ca buffer); and 160 mM suc-AAPF-pNA in DMSO (suc-AAPF-pNA stock solution) (Sigma: S-7388). The assay was performed by adding 10 μl of diluted detergent to each well containing 150 μl of Tris dilution buffer, immediately followed by the addition of 100 μl of 2 mg/ml suc-AAPF-pNA working solution at 25°C. Reactions were assessed visually versus unheated commercial laundry detergent, where color generation indicates enzyme activity.

[00259] Ensaio de amilase: O ensaio de alfa-amilase Ceralpha foi realizado com o uso do kit Ceralpha HR (Megazyme, Wicklow, Irlanda). O substrato usado foi uma mistura do oligossacarídeo definido "malto- heptaosídeo de p-nitrofenila bloqueado de extremidade não redutora (BP-NPG7) e níveis em excesso de alfa-glucosidase (que não tem nenhuma atividade no substrato nativo devido à presença do ‘grupo de bloqueio')". Para iniciar a reação, detergente comercial diluído foi adicionado ao substrato em um tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2 a 25°C. As reações foram avaliadas visualmente versus detergente para lavagem de roupas comercial não aquecido, em que a geração de cor indica a atividade enzimática.[00259] Amylase assay: The Ceralpha alpha-amylase assay was performed using the Ceralpha HR kit (Megazyme, Wicklow, Ireland). The substrate used was a mixture of the defined oligosaccharide "non-reducing end-blocked p-nitrophenyl maltoheptaoside (BP-NPG7) and excess levels of alpha-glucosidase (which has no activity on the native substrate due to the presence of the 'blocking group')". To initiate the reaction, diluted commercial detergent was added to the substrate in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2 at 25°C. Reactions were assessed visually versus unheated commercial laundry detergent, where color generation indicates enzyme activity.

[00260] Amostras de PspMan138 e mananase comercial (MANNAWAY® 4 l, Novozymes AS, Dinamarca) foram adicionadas aos detergentes inativados por calor listados na Tabela 3 para uma concentração final de 0,3% (em p/p). Adicionalmente à mananase, protease BPN'-Y217L subtilisina foi adicionada aos detergentes a 3,0% (em p/p). Os detergentes contendo amostras de mananase e protease foram colocados a 37 °C. As alíquotas foram removidas em vários pontos de tempo (0 a 28 dias) e congeladas. A atividade de mananase residual de todas as amostras foi avaliada como apresentado mais adiante neste documento.[00260] Samples of PspMan138 and commercial mannanase (MANNAWAY® 4 L, Novozymes AS, Denmark) were added to the heat-inactivated detergents listed in Table 3 to a final concentration of 0.3% (w/w). In addition to mannanase, protease BPN'-Y217L subtilisin was added to the detergents at 3.0% (w/w). The detergents containing mannanase and protease samples were placed at 37 °C. Aliquots were removed at various time points (0 to 28 days) and frozen. Residual mannanase activity of all samples was assessed as presented later in this document.

Ensaio de Atividade de Mananase ResidualResidual Mannanase Activity Assay

[00261] A atividade de β-1,4-mananase da mananase foi medida quantificando-se o açúcar redutor liberado. O substrato usado foi LBG galactomanano 0,28% (Sigma G0753). Os açúcares liberados foram quantificados com o uso de ácido dinitrossalicíclico (DNS) que reage com açúcares redutores; sua absorbância a 540 nm é proporcional à atividade enzimática.[00261] The β-1,4-mannanase activity of mannanase was measured by quantifying the released reducing sugar. The substrate used was LBG galactomannan 0.28% (Sigma G0753). The released sugars were quantified using dinitrosalicyclic acid (DNS) which reacts with reducing sugars; its absorbance at 540 nm is proportional to the enzymatic activity.

[00262] O ensaio foi realizado pelo pré-equilíbrio de 0,4 ml de alíquotas da solução de substrato de trabalho (2,8 g/l de LBG em tampão de Tris-HCl a 50 mM, pH 7,5, preparado conforme descrito no Exemplo 2) a 40 °C em um banho de água por 10 min. A reação foi iniciada pela adição de 0,1 ml de 1,9 ppm de solução de mananase na solução de substrato pré-equilibrada, misturada e incubada a 40°C por 15 min. A reação foi terminada pela adição de 0,6 ml de reagente de ácido 3,5-dinitrossalicílico (ácido 3,5-dinitrossalicílico a 43,8 mM, hidróxido de sódio a 400 mM, tartarato de potássio e sódio tetraidratado a 1,06 M). Os tubos de reação foram colocados em um banho de água a 100°C por 15 min, então, resfriados em banho de gelo por 5 min e adicionalmente equilibrados à temperatura ambiente por 10 min. A absorbância foi medida a 540 nm para determinar a atividade enzimática relativa em LBG galactomanano.[00262] The assay was performed by pre-equilibrating 0.4 ml aliquots of the working substrate solution (2.8 g/L LBG in 50 mM Tris-HCl buffer, pH 7.5, prepared as described in Example 2) at 40 °C in a water bath for 10 min. The reaction was initiated by the addition of 0.1 ml of 1.9 ppm mannanase solution to the pre-equilibrated substrate solution, mixed, and incubated at 40 °C for 15 min. The reaction was terminated by the addition of 0.6 ml of 3,5-dinitrosalicylic acid reagent (43.8 mM 3,5-dinitrosalicylic acid, 400 mM sodium hydroxide, 1.06 M potassium sodium tartrate tetrahydrate). The reaction tubes were placed in a 100°C water bath for 15 min, then cooled in an ice bath for 5 min and further equilibrated at room temperature for 10 min. Absorbance was measured at 540 nm to determine relative enzyme activity on LBG galactomannan.

[00263] Os dados de atividade de mananase residual para cada mananase foram, então, ajustados com o uso de um modelo de decaimento exponencial de uma fase. A meia-vida (em dias) foi determinada a partir desses dados e é apresentada na Tabela 4. A meia-vida é o tempo em que 50% da atividade de mananase original é observada. A meia-vida de PspMan138 é melhorada através de MANNAWAY® 4 l (denominada "Referencial" na Tabela 4) emdetergentes líquidos para lavagem de roupas comercialmente disponíveis na presença de protease. [00263] Residual mannanase activity data for each mannanase were then fitted using a one-phase exponential decay model. The half-life (in days) was determined from these data and is presented in Table 4. The half-life is the time at which 50% of the original mannanase activity is observed. The half-life of PspMan138 is improved by MANNAWAY® 4 L (referred to as "Reference" in Table 4) in commercially available liquid laundry detergents in the presence of protease.

EXEMPLO 5EXAMPLE 5 Identificação de Mananases HomólogasIdentification of Homologous Mannanases

[00264] As proteínas relacionadas foram identificadas por uma pesquisa BLAST (Altschul et al., Nucleic Acids Res, 25:3.389 a 3.402, 1997) no banco de dados de proteína não redundante NCBI com o uso da sequência de aminoácidos madura de PspMan138 (SEQ ID NO:13) e um subconjunto são mostrados na Tabela 5A. Uma pesquisa similar que foi executada no banco de dados Genome Quest Patent com os parâmetros de pesquisa definidos para os valores padrão com o uso da sequência de aminoácidos de proteína madura de PspMan138 (SEQ ID NO:13) como a sequência de consulta e um subconjunto são mostrados na Tabela 5B.[00264] Related proteins were identified by a BLAST search (Altschul et al., Nucleic Acids Res, 25:3389-3402, 1997) against the NCBI non-redundant protein database using the mature amino acid sequence of PspMan138 (SEQ ID NO:13) and a subset are shown in Table 5A. A similar search that was performed against the Genome Quest Patent database with the search parameters set to the default values using the mature protein amino acid sequence of PspMan138 (SEQ ID NO:13) as the query sequence and a subset are shown in Table 5B.

[00265] A identidade percentual (PID) para ambos os conjuntos de pesquisa é definida como o número de resíduos idênticos divididos pelo número de resíduos alinhados no alinhamento de pares de sequências. A coluna identificada "comprimento da sequência" refere-se ao comprimento (em aminoácidos) das sequências de proteína associadas aos Números de Acesso listados, ao mesmo tempo que a coluna identificada "Comprimento de alinhamento" refere-se ao comprimento (em aminoácidos) da sequência de proteína alinhada usada para o cálculo de PID. [00265] The percent identity (PID) for both search sets is defined as the number of identical residues divided by the number of aligned residues in the sequence pairwise alignment. The column labeled "sequence length" refers to the length (in amino acids) of the protein sequences associated with the listed Accession Numbers, while the column labeled "Alignment length" refers to the length (in amino acids) of the aligned protein sequence used for the PID calculation.

Alinhamento de Sequências HomólogasHomologous Sequence Alignment

[00266] Um alinhamento das sequências de aminoácidos de proteína madura para mananases do clado NDL incluindo PspMan138 (SEQ ID NO:13) e PspMan4 parental (SEQ ID NO:14) com as sequências de aminoácidos de proteína madura de outra mananase incluindo as formas maduras de BciMan1_BAA25878.1 (SEQ ID NO:40), Bac.sp._BAD99527.1 (SEQ ID NO:43), B_nealsonii_AGU71466.1 (SEQ ID NO:42), Bac.sp_WO2015022428-0015 (SEQ ID NO:44), B. lentus_WO2014100018-0002 (SEQ ID NO:41), US6566114-002 (SEQ ID NO:160) e PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2 e PspMan9 (que são descritas de modo mais completo no Pedido de Patente Internacional n° PCT/US15/40057 que foi depositado em 10 de julho de 2015 e subsequentemente publicado como WO2016/007929) é mostrado na Figura 2. As sequências foram alinhadas com parâmetros padrão com o uso do programa MUSCLE do software Geneious (Biomatters Ltd.) (Robert C. Edgar. MUSCLE: multiple sequence alignment with high accuracy and high throughput Nucl. Acids Res. (2004) 32 (5): 1.792 a 1.797). Uma árvore filogenética para assequências de aminoácidos das formas maduras de várias mananases da Figura 2 foi construída com o uso do programa construtor Geneious Tree e é representada na Figura 3.[00266] An alignment of the mature protein amino acid sequences for NDL clade mannanases including PspMan138 (SEQ ID NO:13) and parental PspMan4 (SEQ ID NO:14) with the mature protein amino acid sequences of other mannanase including the mature forms of BciMan1_BAA25878.1 (SEQ ID NO:40), Bac.sp._BAD99527.1 (SEQ ID NO:43), B_nealsonii_AGU71466.1 (SEQ ID NO:42), Bac.sp_WO2015022428-0015 (SEQ ID NO:44), B. lentus_WO2014100018-0002 (SEQ ID NO:41), US6566114-002 (SEQ ID NO:160) and PamMan2, PamMan3, PtuMan2, PpaMan2, and PspMan9 (which are more fully described in International Patent Application No. PCT/US15/40057 that was filed on July 10, 2015 and subsequently published as WO2016/007929) are shown in Figure 2. The sequences were aligned with default parameters using the MUSCLE program of Geneious software (Biomatters Ltd.) (Robert C. Edgar. MUSCLE: multiple sequence alignment with high accuracy and high throughput Nucl. Acids Res. (2004) 32 (5): 1792–1797). A phylogenetic tree for the amino acid sequences of the mature forms of several mannanases in Figure 2 was constructed using the Geneious Tree builder program and is depicted in Figure 3.

EXEMPLO 6EXAMPLE 6 Características Exclusivas da Mananase PspMan138Unique Features of PspMan138 Mannanase

[00267] As sequências de aminoácidos de PspMan138 (SEQ ID NO:13) e PspMan4 parental (SEQ ID NO:14) foram alinhadas com o uso do software CLUSTALW (Thompson et al., Nucleic Acids Research, 22:4.673 a 4.680, 1994) com parâmetros padrão e mostradas na Figura 2. O alinhamento mostrou que PspMan138 e PspMan4 compartilham um motivo que se estende entre os resíduos Trp31 e Ile40, em que as posições de aminoácido do polipeptídeo são numeradas por correspondência com a sequência aminos apresentada em SEQ ID NO:14. As NDL mananases compartilham características para criar um clado, subsequentemente chamado de Clado NDL, em que o termo NDL deriva dos resíduos conservados NDL próximos ao terminal N (Asn34- Asp35-Leu36). Esse motivo pode ser descrito como WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15), em que Xa é F ou Y, e X é qualquer aminoácido ("Motivo 1"). O motivo é descrito de maneira mais completa no Pedido de Patente Internacional n° PCT/US15/40057, depositado em 10 de julho de 2015, subsequentemente publicado como WO2016/007929.[00267] The amino acid sequences of PspMan138 (SEQ ID NO:13) and parental PspMan4 (SEQ ID NO:14) were aligned using CLUSTALW software (Thompson et al., Nucleic Acids Research, 22:4673-4680, 1994) with default parameters and shown in Figure 2. The alignment showed that PspMan138 and PspMan4 share a motif spanning between residues Trp31 and Ile40, in which the amino acid positions of the polypeptide are numbered by correspondence with the amino sequence shown in SEQ ID NO:14. The NDL mannanases share features to create a clade, subsequently termed the NDL Clade, in which the term NDL derives from the conserved NDL residues near the N terminus (Asn34-Asp35-Leu36). This motif can be described as WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15), where Xa is F or Y, and X is any amino acid ("Motif 1"). The motif is more fully described in International Patent Application No. PCT/US15/40057, filed July 10, 2015, subsequently published as WO2016/007929.

[00268] Os membros do Clado NDL também compartilham um motivo conservado com o recurso-chave de uma deleção que não está presente no Bacillus sp. JAMB-602_BAD99527.1 (Akita et al (2004) Acta Cryst. D60:1.490 a 1.492) e outras sequências de mananase de referência, tais como B_nealsonii_AGU71466.1 eBciman1_B_circulans_BAA25878.1 (doravante o "Motivo de Deleção"). O Motivo de Deleção ocorre entre os resíduos Leu263-Asp264 (LD) e Leu273-Thr274 (LT), em que as posições de aminoácido dopolipeptídeo são numeradas por correspondência com a sequência de aminos apresentada em SEQ ID NO:14, e inclui a sequência LDXXXGPXGXLT (SEQ ID NO:16), em que X é qualquer aminoácido ("Motivo de Deleção 1"); LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17), em que X1 é L ou M, X2 é N, A ou S, e X3 é S, T ou N ("Motivo de Deleção 2"); ou LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) ("Motivo de Deleção 3"). O Motivo de Deleção é descrito de maneira mais completa no Pedido de Patente Internacional n° PCT/US15/40057, depositado em 10 de julho de 2015, subsequentemente publicado como WO2016/007929.[00268] Members of the NDL Clade also share a conserved motif with the key feature of a deletion that is not present in Bacillus sp. JAMB-602_BAD99527.1 (Akita et al (2004) Acta Cryst. D60:1490 to 1492) and other reference mannanase sequences such as B_nealsonii_AGU71466.1 and Bciman1_B_circulans_BAA25878.1 (hereinafter the "Deletion Motif"). The Deletion Motif occurs between residues Leu263-Asp264 (LD) and Leu273-Thr274 (LT), where the amino acid positions of the polypeptide are numbered by correspondence with the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:14, and includes the sequence LDXXXGPXGXLT (SEQ ID NO:16), where X is any amino acid ("Deletion Motif 1"); LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17), where X1 is L or M, X2 is N, A, or S, and X3 is S, T, or N ("Deletion Motif 2"); or LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) ("Deletion Motif 3"). The Deletion Reason is more fully described in International Patent Application No. PCT/US15/40057, filed July 10, 2015, subsequently published as WO2016/007929.

EXEMPLO 7EXAMPLE 7 Clonagem e Expressão de Variantes PspMan4 de Paenibacillus sp. AdicionaisCloning and Expression of PspMan4 Variants from Paenibacillus sp. Additional

[00269] Manipulações de DNA para gerar variantes PspMan4 de Paenibacillus sp. adicionais foram executadas conforme descrito no Exemplo 1 com os iniciadores listados na Tabela 1. A lista de variantes PspMan4 geradas com substituições de sequência em relação à PspMan4 parental (SEQ ID NO:14) é mostrada na Tabela 6. As sequências de aminoácidos das variantes PspMan4 maduras: PspMan115-122, PspMan124-130, PspMan132-145, PspMan148,PspMan150-158, PspMan6153, PspMan6428, PspMan6435, PspMan6574, PspMan6668, PspMan6670, PspMan6722,PspMan7154, PspMan_HM48-64, PspMan_HM66-67 e PspMan_HM71 são apresentadas nas SEQ ID NOs:46 a 91, 141 a 159 e 161. [00269] DNA manipulations to generate PspMan4 variants of Paenibacillus sp. Additional primers were performed as described in Example 1 with the primers listed in Table 1. The list of PspMan4 variants generated with sequence substitutions relative to the parental PspMan4 (SEQ ID NO:14) is shown in Table 6. The amino acid sequences of the mature PspMan4 variants: PspMan115-122, PspMan124-130, PspMan132-145, PspMan148, PspMan150-158, PspMan6153, PspMan6428, PspMan6435, PspMan6574, PspMan6668, PspMan6670, PspMan6722, PspMan7154, PspMan_HM48-64, PspMan_HM66-67, and PspMan_HM71 are presented in SEQ ID NOs:46 to 91, 141 to 159 and 161.

[00270] A sequência de ácidos nucleicos para o peptídeo de sinalização nativo das variantes PspMan4 é apresentada como SEQ ID NO:92. As sequências de nucleotídeos dos genes que codificam as variantes PspMan4 maduras: PspMan115-122, PspMan124-130,PspMan132-145, PspMan148, PspMan150-158, PspMan6153,PspMan6428, PspMan6435, PspMan6574, PspMan6668,PspMan6670, PspMan6722 e PspMan7154 são apresentadas em SEQ ID NOs:93 a 139. A sequência de aminoácidos do peptídeo de sinalização das variantes PspMan4 é apresentada como SEQ ID NO:140.[00270] The nucleic acid sequence for the native signal peptide of the PspMan4 variants is set forth as SEQ ID NO:92. The nucleotide sequences of the genes encoding the mature PspMan4 variants: PspMan115-122, PspMan124-130, PspMan132-145, PspMan148, PspMan150-158, PspMan6153, PspMan6428, PspMan6435, PspMan6574, PspMan6668, PspMan6670, PspMan6722, and PspMan7154 are set forth in SEQ ID NOs:93 through 139. The amino acid sequence of the signal peptide of the PspMan4 variants is set forth as SEQ ID NO:140.

EXEMPLO 8EXAMPLE 8 Desempenho de Limpeza das Variantes PspMan4 com o uso do Ensaio de Pequenas AmostrasCleaning Performance of PspMan4 Variants Using the Small Sample Assay

[00271] Para gerar as amostras de enzima de variante PspMan4 para caracterização bioquímica, o crescimento seletivo das células de B. subtilis transformadas foi realizado em MTPs de 96 cavidades a 37°C por 68 horas em meio de cultivo (meios semidefinidos enriquecidos à base de tampão MOPS, com ureia como a principal fonte de nitrogênio, glicose como a principal fonte de carbono e suplementado com 1% de soytone para crescimento celular robusto) em cada cavidade. As culturas foram coletadas por centrifugação a 3.600 rpm por 45 min e filtradas através de placas de filtro Multiscreen® (EMD Millipore, Billerica, MA, EUA) com o uso de um sistema de vácuo Millipore. Os sobrenadantes de cultura filtrados foram usados para os ensaios descritos abaixo.[00271] To generate PspMan4 variant enzyme samples for biochemical characterization, transformed B. subtilis cells were selectively grown in 96-well MTPs at 37°C for 68 h in culture medium (MOPS buffer-based enriched semidefined media with urea as the primary nitrogen source, glucose as the primary carbon source, and supplemented with 1% soytone for robust cell growth) in each well. Cultures were harvested by centrifugation at 3,600 rpm for 45 min and filtered through Multiscreen® filter plates (EMD Millipore, Billerica, MA, USA) using a Millipore vacuum system. Filtered culture supernatants were used for the assays described below.

[00272] As variantes PspMan4 foram testadas quanto ao desempenho de limpeza em pequenas amostras de goma de alfarrobeira (LBG) (CFT C-S-73, Center for Testmaterials, Vlaardingen, Holanda) em relação ao desempenho da parental conforme indicado no exemplo abaixo.[00272] PspMan4 variants were tested for cleaning performance on small samples of locust bean gum (LBG) (CFT C-S-73, Center for Testmaterials, Vlaardingen, The Netherlands) relative to the performance of the parent as shown in the example below.

[00273] O desempenho de limpeza foi medido com o uso de um ensaio de alto rendimento desenvolvido para medir a remoção de galactomanano de solos técnicos. O ensaio mede a liberação de LBG dos solos técnicos contendo LBG. A reação BCA que usa um reagente comercialmente disponível (n° de catálogo 23225, Thermo Scientific Pierce, Rockford, IL) é usada para medir as extremidades redutoras de oligossacarídeos em solução na presença de enzima, em comparação um controle em branco. Essa medição correlaciona-se com o desempenho de limpeza da enzima. Como a mananase hidrolisa galactomananos, oligossacarídeos de comprimentos variados com extremidades redutoras são supostamente liberados da amostra de algodão. O ácido bicinconínico no reagente BCA permite, então, a detecção colorimétrica altamente sensível de Cu1+ formado pela redução de Cu2+.[00273] Cleaning performance was measured using a high-throughput assay developed to measure galactomannan removal from technical soils. The assay measures the release of LBG from technical soils containing LBG. The BCA reaction using a commercially available reagent (catalog no. 23225, Thermo Scientific Pierce, Rockford, IL) is used to measure the reducing ends of oligosaccharides in solution in the presence of enzyme, compared to a blank control. This measurement correlates with the cleaning performance of the enzyme. As mannanase hydrolyzes galactomannans, oligosaccharides of varying lengths with reducing ends are expected to be released from the cotton sample. Bicinchoninic acid in the BCA reagent then allows highly sensitive colorimetric detection of Cu1+ formed by the reduction of Cu2+.

[00274] Duas pequenas amostras de LBG de 5,5 cm de diâmetro (CFT C-S-73) foram colocadas em cada cavidade de uma placa de ensaio de 96 cavidades de não ligação de fundo plano (por exemplo, Corning 3641). As enzimas foram diluídas em tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2, contendo TWEEN®-80 0,005%. Tampão de ensaio de pequena amostra (HEPES a 25 mM, pH 8, CaCl2 a 2 mM, TWEEN®-80 0,005%) e alíquotas de enzimas diluídas foram adicionados a cada cavidade da placa de ensaio de pequena amostra de 96 cavidades para um volume combinado de 100 μl. As placas foram vedadas e incubadas a 25 °C com agitação a 1150 rpm por 20 min (por exemplo, em um incubador/agitador iEMS, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Após a incubação, os açúcares redutores liberados foram quantificados com o uso do ensaio de reagente BCA conforme descrito na seção de "Ensaio de Atividade de Mananase" do Exemplo 2. A absorbância resultante foi tomada como uma medição do desempenho de limpeza. Os valores de desempenho de limpeza PI foram calculados dividindose o desempenho de limpeza das variantes por este da parental na mesma concentrações de proteína. Os valores teóricos para o desempenho de limpeza da enzima parental nas concentrações de proteína relevantes foram calculados com o uso dos parâmetros extraídos de um ajuste de Langmuir dos valores medidos para uma curva padrão da enzima parental. A Tabela 7 apresenta variantes PspMan4 que têm desempenho de limpeza melhorado em relação à PspMan4 parental no ensaio de pequena amostra descrito acima. [00274] Two small 5.5 cm diameter LBG samples (CFT CS-73) were placed in each well of a flat bottom non-binding 96-well assay plate (e.g., Corning 3641). Enzymes were diluted in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2, containing 0.005% TWEEN®-80. Small sample assay buffer (25 mM HEPES, pH 8, 2 mM CaCl2, 0.005% TWEEN®-80) and aliquots of diluted enzymes were added to each well of the 96-well small sample assay plate to a combined volume of 100 μL. The plates were sealed and incubated at 25 °C with shaking at 1150 rpm for 20 min (e.g., in an iEMS incubator/shaker, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Following incubation, the released reducing sugars were quantified using the BCA reagent assay as described in the “Mannanase Activity Assay” section of Example 2. The resulting absorbance was taken as a measure of cleaning performance. PI cleaning performance values were calculated by dividing the cleaning performance of the variants by that of the parent at the same protein concentrations. Theoretical values for the cleaning performance of the parent enzyme at the relevant protein concentrations were calculated using parameters extracted from a Langmuir fit of the measured values to a standard curve of the parent enzyme. Table 7 presents PspMan4 variants that have improved cleaning performance over the parent PspMan4 in the small sample assay described above.

EXEMPLO 9EXAMPLE 9 Estabilidade das Variantes PspMan4 em Solução TampãoStability of PspMan4 Variants in Buffer Solution

[00275] A estabilidade das variantes PspMan4 foi testada sob condições de estresse em tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2, TWEEN®- 80 0,005% nas temperaturas indicadas na Tabela 8 medindo-se a atividade residual das amostras após a incubação a uma temperatura elevada por 5 min. As condições usadas para os ensaios de estabilidade de proteína em tampão são apresentadas na Tabela 8. [00275] The stability of PspMan4 variants was tested under stress conditions in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2, 0.005% TWEEN®-80 at the temperatures indicated in Table 8 by measuring the residual activity of the samples after incubation at an elevated temperature for 5 min. The conditions used for the protein stability assays in buffer are presented in Table 8.

[00276] Para medir a atividade inicial (sem estresse), as amostras de enzima foram diluídas em tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2, TWEEN®- 80 0,005% e avaliadas imediatamente quanto à atividade em LBG, com o uso do ensaio descrito sob a seção de "Ensaio de Atividade de Mananase" no Exemplo 2. Para medir a atividade com estresse, as amostras de enzima diluídas em tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2, TWEEN®-80 0,005% foram incubadas em uma placa de PCR vedada a uma temperatura elevada (conforme indicado na Tabela 8) por 5 min em um termociclo (Tetrad2 Peltier Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), então, avaliadas quanto à atividade conforme na seção de "Ensaio de Atividade de Mananase" no Exemplo 2.[00276] To measure initial (unstressed) activity, enzyme samples were diluted in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2, 0.005% TWEEN®-80 and immediately assayed for activity in LBG using the assay described under the "Mannanase Activity Assay" section in Example 2. To measure stressed activity, enzyme samples diluted in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2, 0.005% TWEEN®-80 were incubated in a sealed PCR plate at an elevated temperature (as indicated in Table 8) for 5 min in a thermocycler (Tetrad2 Peltier Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), then assayed for activity as in the "Mannanase Activity Assay" section in Example 2.

Cálculo da Atividade ResidualResidual Activity Calculation

[00277] Uma vez que os valores de atividade com estresse e sem estresse foram medidos por hidrólise do substrato de LBG conforme descrito acima, a % de atividades residuais foi calculada tomando-se uma razão entre a atividade com estresse e sem estresse e multiplicando por 100. A Tabela 9 apresenta as variantes PspMan4 que têm estabilidade melhorada em relação à PspMan4 parental no ensaio de estabilidade sob as condições descritas na Tabela 8. * ND: não determinado[00277] Since the stressed and non-stressed activity values were measured by hydrolysis of the LBG substrate as described above, the % residual activities were calculated by taking a ratio of the stressed to non-stressed activity and multiplying by 100. Table 9 presents the PspMan4 variants that have improved stability over the parental PspMan4 in the stability assay under the conditions described in Table 8. * ND: not determined

EXEMPLO 10EXAMPLE 10 Estabilidade das Variantes PspMan4 em Solução DetergenteStability of PspMan4 Variants in Detergent Solution

[00278] A estabilidade das variantes PspMan4 foi testada sob condições de estresse em uma solução aquosa 10% (em v/v) do detergente líquido para lavagem de roupas TIDE® comercialmente disponível (Original scent, Procter and Gamble, adquirido em supermercados locais em 2014 e inativado por calor com o uso do protocolo descrito no Exemplo 4) medindo-se a atividade residual das amostras após a incubação a uma temperatura elevada (conforme indicado na Tabela 10) por 5 min. [00278] The stability of PspMan4 variants was tested under stress conditions in a 10% (v/v) aqueous solution of commercially available TIDE® liquid laundry detergent (Original scent, Procter and Gamble, purchased from local supermarkets in 2014 and heat-inactivated using the protocol described in Example 4) by measuring the residual activity of the samples after incubation at an elevated temperature (as indicated in Table 10) for 5 min.

[00279] Uma solução aquosa 12,5% (em v/v) do detergente inativado por calor foi preparada, e amostras de enzima dos sobrenadantes de cultura filtrados foram misturadas com o volume apropriado dessa solução detergente para alcançar uma concentração de detergente final de 10% (em v/v). Para medir a atividade inicial (sem estresse), alíquotas dessa mistura foram imediatamente diluídas em tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2, TWEEN®-80 0,005% e avaliadas quanto à atividade em LBG com o uso do Ensaio de Atividade de Mananase descrito no Exemplo 2. Para medir a atividade com estresse, as amostras de enzima misturadas com a solução detergente foram incubadas em uma placa de PCR vedada a uma temperatura elevada (conforme indicado na Tabela 10) por 5 min em um termociclo (Tetrad2 Peltier Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), então, diluídas em tampão MOPS a 50 mM, pH 7,2, TWEEN®-80 0,005% e avaliadas quanto à atividade conforme descrito no "Ensaio de Atividade de Mananase" no Exemplo 2.[00279] A 12.5% (v/v) aqueous solution of the heat-inactivated detergent was prepared, and enzyme samples from the filtered culture supernatants were mixed with the appropriate volume of this detergent solution to achieve a final detergent concentration of 10% (v/v). To measure initial (unstressed) activity, aliquots of this mixture were immediately diluted in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2, 0.005% TWEEN®-80 and assayed for activity in LBG using the Mannanase Activity Assay described in Example 2. To measure stressed activity, enzyme samples mixed with the detergent solution were incubated in a sealed PCR plate at an elevated temperature (as indicated in Table 10) for 5 min in a thermocycler (Tetrad2 Peltier Thermal Cycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), then diluted in 50 mM MOPS buffer, pH 7.2, 0.005% TWEEN®-80 and assayed for activity as described in the “Mannanase Activity Assay” in Example 2.

Cálculo da Atividade ResidualResidual Activity Calculation

[00280] Uma vez que os valores de atividade com estresse e sem estresse foram medidos por hidrólise do substrato de LBG conforme descrito acima, a % de atividades residuais foi calculada tomando-se uma razão entre a atividade com estresse e sem estresse e multiplicando por 100, em que a margem de erro estava dentro de 5%. A Tabela 11 apresenta as variantes PspMan4 que têm estabilidade melhorada em relação à PspMan4 parental no ensaio de estabilidade sob as condições descritas na Tabela 10. * ND: não determinado[00280] Since the stressed and non-stressed activity values were measured by hydrolysis of the LBG substrate as described above, the % residual activities were calculated by taking a ratio of the stressed to non-stressed activity and multiplying by 100, where the margin of error was within 5%. Table 11 presents the PspMan4 variants that have improved stability over the parental PspMan4 in the stability assay under the conditions described in Table 10. * ND: not determined

EXEMPLO 11EXAMPLE 11 Desempenho de Limpeza da Variante PspMan118 em TergotômetroCleaning Performance of PspMan118 Variant in Tergotometer

[00281] PspMan118 foi isolada de sobrenadantes de cultura de Bacillus clarificados por precipitação de sulfato de amônio em tampão MES pH 5,3. A purificação foi alcançada por cromatografia de troca hidrofóbica, seguida por diálise em tampão MES a 50 mM, pH 6,0. Propilenoglicol foi, então, adicionado a uma concentração final de 40%, e as amostras armazenadas refrigeradas até caracterização adicional.[00281] PspMan118 was isolated from Bacillus culture supernatants clarified by ammonium sulfate precipitation in MES buffer pH 5.3. Purification was achieved by hydrophobic exchange chromatography, followed by dialysis in 50 mM MES buffer, pH 6.0. Propylene glycol was then added to a final concentration of 40%, and the samples stored refrigerated until further characterization.

[00282] O desempenho de lavagem de PspMan118 e uma mananase comercial (MANNAWAY® 4 l, Novozymes AS, Dinamarca) foi testado em uma aplicação de detergente para lavagem de roupas o uso de um Tergômetro. A avaliação do desempenho foi conduzida a 16 °C. A carga de sujeira consistia em duas amostras de LBG CFT C-S-73 (Center for Testmaterials BV, Vlaardingen, Holanda) em um béquer de tergômetro preenchido com 1 l de água deionizada. A dureza da água foi ajustada em 100 ppm (3:1 de Ca:Mg). O Detergente Líquido para Lavagem de Roupas Em Pó Ultra Tide® Clean Breeze inativado por calor (adquirido em supermercados locais em 2014) foi adicionado aos béqueres a 0,6 g/l. Cada mananase foi adicionada aos béqueres em várias doses por um tempo de lavagem de 12 min. Após o tratamento de lavagem, as amostras foram secar por centrifugação seguido por secagem ao ar. Cada amostra foi medida antes e após o tratamento com o uso de um colorímetro (Konica Minolta Chroma Meter CR-410, abertura de 50 mm).[00282] The washing performance of PspMan118 and a commercial mannanase (MANNAWAY® 4 l, Novozymes AS, Denmark) was tested in a laundry detergent application using a Tergometer. The performance evaluation was conducted at 16 °C. The soil load consisted of two samples of LBG CFT C-S-73 (Center for Testmaterials BV, Vlaardingen, The Netherlands) in a tergometer beaker filled with 1 l of deionized water. The water hardness was adjusted to 100 ppm (3:1 Ca:Mg). Heat-inactivated Ultra Tide® Clean Breeze Liquid Laundry Powder Detergent (purchased from local supermarkets in 2014) was added to the beakers at 0.6 g/l. Each mannanase was added to the beakers in varying doses for a wash time of 12 min. After washing treatment, the samples were dried by centrifugation followed by air drying. Each sample was measured before and after treatment using a colorimeter (Konica Minolta Chroma Meter CR-410, 50 mm aperture).

[00283] A diferença nos valores L, a, b foi convertida em diferença de cor total (dE) conforme definido pelo espaço de cor CIE-LAB. Esses valores foram usados para determinar o nível de limpeza das amostras, e os resultados foram expressos como remoção de manchas percentual (% de SRI). Os resultados para limpeza de amostras CFT C-S-73 por PspMan118 e MANNAWAY® 4 l são mostrados na Figura 4. Nesse ensaio de limpeza, PspMan118 e MANNAWAY® 4 l exibiram remoção de manchas comparável em sujeira LBG em detergente para lavagem de roupas em pó.[00283] The difference in L, a, b values was converted to total color difference (dE) as defined by the CIE-LAB color space. These values were used to determine the cleanliness level of the samples, and the results were expressed as percent stain removal (%SRI). The results for cleaning CFT C-S-73 samples by PspMan118 and MANNAWAY® 4 L are shown in Figure 4. In this cleaning test, PspMan118 and MANNAWAY® 4 L exhibited comparable stain removal on LBG soiling in powdered laundry detergent.

EXEMPLO 12EXAMPLE 12 Estruturas Cristalográficas de Variantes PspMan4Crystallographic Structures of PspMan4 Variants

[00284] As estruturas tridimensionais das variantes PspMan4, PspMan118 e PspMan148, foram determinadas com o uso do método cristalográfica por raios X.[00284] The three-dimensional structures of the PspMan4, PspMan118 and PspMan148 variants were determined using the X-ray crystallographic method.

[00285] PspMan118 (SEQ ID NO:49) com mutações P19E/T38E/N67D/N97D/ Y129M/P168S/Q184L/K244L/S258D/N261R(em que as posições de aminoácido são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14) foi cristalizada com o uso do método de gota suspensa começando com uma solução de proteína 1% em tampão MES a 50 mM pH 6,0 com cloreto de sódio a 50 mM. A solução de reservatório continha fosfato de sódio a 0,7 M, fosfato de potássio a 0,8 M e HEPES a 0,1 M pH 7,5. Os cristais cresceram no grupo de espaço P212121 tendo uma molécula na unidade assimétrica com as dimensões da célula unitária a=53,2 Â, b=76,7 Â, e c=77,3 Â.[00285] PspMan118 (SEQ ID NO:49) with mutations P19E/T38E/N67D/N97D/Y129M/P168S/Q184L/K244L/S258D/N261R (where the amino acid positions are numbered by correspondence to the amino acid sequence of SEQ ID NO:14) was crystallized using the hanging drop method starting with a 1% protein solution in 50 mM MES buffer pH 6.0 with 50 mM sodium chloride. The reservoir solution contained 0.7 M sodium phosphate, 0.8 M potassium phosphate, and 0.1 M HEPES pH 7.5. Crystals were grown in the space group P212121 having an asymmetric unit molecule with unit cell dimensions a=53.2 Å, b=76.7 Å, and c=77.3 Å.

[00286] PspMan148 (SEQ ID NO:74) com mutações N10T/P19E/S30T/T38E/S59V/L60Q/K63R/N67D/N97D/Y129M/K143Q/P168S/Q184L/G225P/T 228V/Y235L/K244L/S258D/N261R/Z298.01Q (em que as posições de aminoácido são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14) foi cristalizada com o uso do método de gota suspensa começando com uma solução de proteína 1% em tampão MES a 50 mM pH 6,0 com cloreto de sódio a 50 mM. A solução de reservatório continha 2-propanol 16%, cloreto de cálcio a 0,16 M e acetato de sódio a 80 mM, pH 4.6. Os cristais cresceram no grupo de espaço P212121 tendo uma molécula na unidade assimétrica com as dimensão da célula unitária a=52,8 Â, b=77,0 Â, e c=78,5 Â.[00286] PspMan148 (SEQ ID NO:74) with mutations N10T/P19E/S30T/T38E/S59V/L60Q/K63R/N67D/N97D/Y129M/K143Q/P168S/Q184L/G225P/T228V/Y235L/K244L/S258D/N261R/Z298.01Q (wherein the amino acid positions are numbered by correspondence to the amino acid sequence of SEQ ID NO:14) was crystallized using the hanging drop method starting with a 1% protein solution in 50 mM MES buffer pH 6.0 with 50 mM sodium chloride. The reservoir solution contained 16% 2-propanol, 0.16 M calcium chloride, and 80 mM sodium acetate, pH 4.6. Crystals grew in the space group P212121 having one molecule in the asymmetric unit with unit cell dimensions a = 52.8 Å, b = 77.0 Å, and c = 78.5 Å.

[00287] Os dados para cristais de PspMan118 e PspMan148 foram coletados em um sistema de difração Bruker X8 Proteum a uma resolução de 1,8 Â e 1,7 Â, respectivamente. As estatísticas adicionas para a coleta de dados são apresentadas na Tabela 12.[00287] Data for crystals of PspMan118 and PspMan148 were collected on a Bruker X8 Proteum diffraction system at a resolution of 1.8 Å and 1.7 Å, respectively. Additional statistics for the data collection are presented in Table 12.

[00288] A estrutura de PspMan118 foi determinada com o uso de substituição molecular com as coordenadas de resíduos 27 a 326 de mananase de Bacillus sp. JAMB-602 (número de acesso BAD99527.1, entrada PDB 1WKY_A) como um modelo de partida. O modelo foi ajustado com o uso do pacote de software Coot [Emsley, P. et al (2010), Acta Cryst. D; 66:486 a 501].[00288] The structure of PspMan118 was determined using molecular replacement with the coordinates of residues 27 to 326 of Bacillus sp. mannanase JAMB-602 (accession number BAD99527.1, PDB entry 1WKY_A) as a starting model. The model was fitted using the Coot software package [Emsley, P. et al (2010), Acta Cryst. D; 66:486 to 501].

[00289] A estrutura de PspMan148 foi determinada com o uso de substituição molecular pelas coordenadas de PspMan118 como um modelo de partida. As coordenadas foram ajustadas para acomodar a densidade de elétron para as substituições adicionais e ajustadas com o uso do pacote de software Coot. Uma densidade fraca e esparsa foi observada para o resíduo adicional, Z298.01Q, inserido na terminação C de PspMan148. Após os ajustes de encaixe e retroencaixe, as coordenadas para ambas as estruturas foram refinadas com o uso do programa REFMAC com definições-padrão no pacote de software CCP4.[00289] The structure of PspMan148 was determined using molecular replacement with the coordinates of PspMan118 as a starting model. The coordinates were adjusted to accommodate the electron density for the additional substitutions and fitted using the Coot software package. A weak and sparse density was observed for the additional residue, Z298.01Q, inserted at the C-terminus of PspMan148. After docking and back-docking, the coordinates for both structures were refined using the REFMAC program with default settings in the CCP4 software package.

[00290] Os modelos finais tiveram boa estereoquímica, conforme relatado na Tabela 13. Para referência, as coordenadas das variantes PspMan118 e PspMan148 poderiam ser alinhadas com um desvio de rms (raiz média quadrática) geral de 0,133Â para 1.954 átomos comuns. *Valores para a carcaça externa são apresentados entre parênteses [00290] The final models had good stereochemistry as reported in Table 13. For reference, the coordinates of the PspMan118 and PspMan148 variants could be aligned with an overall rms (root mean square) deviation of 0.133Å for 1,954 common atoms. *Values for the outer casing are shown in parentheses

[00291] As coordenadas dos monômeros de PspMan118 são sobrepostas com os domínios catalíticos de duas outras estruturas de mananase: Manase de Bacillus sp. cepa JAMB-602 (entrada PDB 1WKY_A) e mananase de B. agaradhaerens cepa NCIMB 40482 (entrada PDB 2WHL_A), com um desvio rms geral de 0,38Â e 0,42Â, respectivamente, com o uso de todos os átomos comuns. Assim, ainda que essas três enzimas compartilhem apenas cerca de 60% de identidade de sequência de aminoácidos sobre os resíduos 1 a 295 de PspMan4, todas as três mananases compartilham um enovelamento comum para os domínios catalíticos.[00291] The coordinates of the PspMan118 monomers overlap with the catalytic domains of two other mannanase structures: Mannanase from Bacillus sp. strain JAMB-602 (PDB entry 1WKY_A) and mannanase from B. agaradhaerens strain NCIMB 40482 (PDB entry 2WHL_A), with an overall rms deviation of 0.38Å and 0.42Å, respectively, using all common atoms. Thus, although these three enzymes share only about 60% amino acid sequence identity over residues 1 to 295 of PspMan4, all three mannanases share a common fold for the catalytic domains.

[00292] A Figura 5 retrata uma comparação estrutural da mananase 1WKY_A com a variante PspMan118, em que o enovelamento de cadeia principal de 1WKY_A (mostrado em cinza) é comparado com o enovelamento de cadeia principal de PspMan118 (mostrado em preto). A Figura 5 mostra que a PspMan118 compartilha um sítio de ligação de cátion comum com 1WKY_A, e que 1WKY_A tem um domínio de ligação de carboidrato adicional. O sítio de ligação de cátion que PspMan118 compartilha com 1WKY_A é formado pelo oxigênio da carbonila do resíduo Gly225, a cadeia lateral de Asp231, o oxigênio da carbonila de Thr232 e a cadeia lateral de Glu234.[00292] Figure 5 depicts a structural comparison of the mannanase 1WKY_A with the PspMan118 variant, where the main-chain fold of 1WKY_A (shown in gray) is compared with the main-chain fold of PspMan118 (shown in black). Figure 5 shows that PspMan118 shares a common cation-binding site with 1WKY_A, and that 1WKY_A has an additional carbohydrate-binding domain. The cation-binding site that PspMan118 shares with 1WKY_A is formed by the carbonyl oxygen of residue Gly225, the side chain of Asp231, the carbonyl oxygen of Thr232, and the side chain of Glu234.

[00293] PspMan118 e PspMan148 podem ser, ainda, caracterizadas por dois motivos: (i) um motivo NDL nas posições N34D35L36 e (ii) um motivo de deleção que abrange as posições 263 a 274 (em que as posições de aminoácido são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14) em relação a outras sequências de mananase GH5, tais como aquelas exemplificadas por 1WKY_A e 2WHL_A. A Figura 6 retrata outra comparação estrutural de PspMan118 com 1WKY_A, em que essa comparação mostra que os resíduos que abrangem os motivos NDL e de Deleção de PspMan118 estão em proximidade um ao outro.[00293] PspMan118 and PspMan148 can be further characterized by two motifs: (i) an NDL motif at positions N34D35L36 and (ii) a deletion motif spanning positions 263 to 274 (wherein the amino acid positions are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14) relative to other GH5 mannanase sequences, such as those exemplified by 1WKY_A and 2WHL_A. Figure 6 depicts another structural comparison of PspMan118 with 1WKY_A, wherein this comparison shows that the residues spanning the NDL and Deletion motifs of PspMan118 are in proximity to each other.

[00294] A estrutura de mananase 2WHL_A de B. agaradhaerens foi relatada como um complexo de manotriosila-enzima. A estrutura de PspMan148 foi alinhada com 2WHL_A para estudar a localização dos sítios variantes em relação à ligação de manotriose no sítio ativo. PspMan148 foi escolhida para comparação visto que inclui todas as 10 substituições presentes em PspMan118, assim como nove substituições adicionais e uma inserção na terminação C. Como com PspMan118, é possível alinhar a estrutura de PspMan148 com aquela de 2WHL_A, resultando em um desvio rms geral de 0,405Â para 1.660 átomos comuns. A sobreposição das estruturas de PspMan148 e 2WHL_A é retratada nas Figuras 7A a 7C.[00294] The structure of mannanase 2WHL_A from B. agaradhaerens has been reported as a mannotriosyl-enzyme complex. The structure of PspMan148 was aligned with 2WHL_A to study the location of variant sites relative to mannotriose binding in the active site. PspMan148 was chosen for comparison as it includes all 10 substitutions present in PspMan118, as well as nine additional substitutions and an insertion at the C-terminus. As with PspMan118, it is possible to align the structure of PspMan148 with that of 2WHL_A, resulting in an overall rms deviation of 0.405Å for 1,660 common atoms. The superposition of the structures of PspMan148 and 2WHL_A is depicted in Figures 7A to 7C.

[00295] Na Figura 7A, o enovelamento de cadeia principal de 2WHL_A é representado esquematicamente em cinza claro, e a manotriose é mostrada como bastões cinza claro. A cadeia principal de PspMan148 é mostrada em preto com as cadeias laterais dos dezenove aminoácidos substituídos mostradas como figuras de bastão preto. O aminoácido Z298.01Q inserido em PspMan148, que foi desordenado no mapa de densidade de elétron, não está incluído nessa figura.[00295] In Figure 7A, the main-chain fold of 2WHL_A is schematically represented in light gray, and mannotriose is shown as light gray sticks. The main chain of PspMan148 is shown in black with the side chains of the nineteen substituted amino acids shown as black stick figures. The inserted amino acid Z298.01Q in PspMan148, which was disordered in the electron density map, is not included in this figure.

[00296] Sete das dezenove substituições em PspMan148 estão situadas no sítio de ligação de substrato. Esses incluem S30T, S59V, L60Q, K63R, T228V, S258D e N261R (em que as posições deaminoácido são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14). A Figura 7B mostra a sobreposição das estruturas de PspMan148 e 2WHL_A com as substituições de sítio de ligação de substrato mostradas como esferas pretas. Entre essas substituições, L60Q introduz uma cadeia lateral que pode ser vista em posições homólogas em ambas as estruturas de 1WKY_A e 2WHL_A. Dois outros resíduos encontrados no sítio ativo de PspMan148 são comuns tanto a 1WKY_A quanto 2WHL_A: Trp61 e Trp260 (em que as posições de aminoácido são numeradas por correspondência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:14). Considerando-se as fortes similaridades estruturas entre essas mananases, pode-se esperar que introduzir as substituições que conferem melhora em PspMan4 em sítios estruturalmente homólogos em qualquer uma das mananases 1WKY_A ou 2WHL_A poderia conferir melhoras similares em desempenho e/ou estabilidade a essas moléculas.[00296] Seven of the nineteen substitutions in PspMan148 are located in the substrate binding site. These include S30T, S59V, L60Q, K63R, T228V, S258D, and N261R (where the amino acid positions are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14). Figure 7B shows the overlay of the structures of PspMan148 and 2WHL_A with the substrate binding site substitutions shown as black spheres. Among these substitutions, L60Q introduces a side chain that can be seen at homologous positions in both the 1WKY_A and 2WHL_A structures. Two other residues found in the active site of PspMan148 are common to both 1WKY_A and 2WHL_A: Trp61 and Trp260 (where the amino acid positions are numbered by correspondence with the amino acid sequence of SEQ ID NO:14). Given the strong structural similarities between these mannanases, it can be expected that introducing the PspMan4-improving substitutions into structurally homologous sites in either 1WKY_A or 2WHL_A mannanases could confer similar improvements in performance and/or stability to these molecules.

[00297] Na Figura 7B, a porção química manotriosila ligada à mananase 2WHL_A é mostrada como bastões cinzas para indicar a localização relativa do sítio de ligação de substrato. As posições das sete substituições (S30T, S59V, L60Q, K63R, T228V, S258D e N261R) em PspMan148 em torno e próximas ao sítio de ligação de substrato são mostradas como esferas pretas.[00297] In Figure 7B, the mannotriosyl moiety bound to mannanase 2WHL_A is shown as gray sticks to indicate the relative location of the substrate binding site. The positions of the seven substitutions (S30T, S59V, L60Q, K63R, T228V, S258D, and N261R) in PspMan148 around and proximal to the substrate binding site are shown as black spheres.

[00298] Conforme visto na Figura 7C, as doze substituições remanescentes em PspMan148 são distribuídas na superfície da molécula (mostradas como esferas pretas). Dessas doze substituições, Q184L e G225P são de interesse particular. A substituição Q184L introduz uma cadeia lateral de leucina que protege uma ponte de sal entre Arg149 e Glu182, estabilizando, assim, a proteína. A substituição G225P introduz um resíduo de prolina de enrijecimento onde o oxigênio da carbonila de cadeia principal forma um ligante ao cátion (um íon de cálcio em PspMan148), estabilizando potencialmente, assim, o cálcio ligado, o que poderia tornar a enzima menos sensível aos quelantes presentes em formulações detergentes.[00298] As seen in Figure 7C, the remaining twelve substitutions in PspMan148 are distributed across the surface of the molecule (shown as black spheres). Of these twelve substitutions, Q184L and G225P are of particular interest. The Q184L substitution introduces a leucine side chain that protects a salt bridge between Arg149 and Glu182, thereby stabilizing the protein. The G225P substitution introduces a stiffening proline residue where the main-chain carbonyl oxygen forms a ligand to the cation (a calcium ion in PspMan148), thereby potentially stabilizing the bound calcium, which could make the enzyme less sensitive to chelators present in detergent formulations.

EXEMPLO 13EXAMPLE 13 Desempenho de Limpeza Envelhecido de Variantes PspMan4Aged Cleaning Performance of PspMan4 Variants

[00299] As variantes PspMan4 foram testadas quanto aodesempenho de limpeza antes e depois da incubação em detergente a 100% à temperatura ambiente. A % de atividade de limpeza remanescente após a incubação foi comparada com a atividade de limpeza inicial antes da incubação.[00299] PspMan4 variants were tested for cleaning performance before and after incubation in 100% detergent at room temperature. The % cleaning activity remaining after incubation was compared to the initial cleaning activity before incubation.

[00300] O detergente líquido para lavagem de roupas comercialmente disponível usado para a incubação foi adquirido em supermercados locais (Nome do detergente: Total Color; Fabricante: Private label; País de aquisição: Suíça; Ano da aquisição: 2011) e inativado por aquecimento com o uso do protocolo descrito no Exemplo 4 acima.[00300] Commercially available liquid laundry detergent used for incubation was purchased from local supermarkets (Detergent name: Total Color; Manufacturer: Private label; Country of purchase: Switzerland; Year of purchase: 2011) and heat inactivated using the protocol described in Example 4 above.

[00301] Um minidisco de agitação (Tumble Stir Disk, Número de catálogo P 721F-1, V&P Scientific, San Diego, CA) foi colocado em cada cavidade de uma MTP de 96 cavidades de polipropileno de baixa ligação de fundo em U, seguido pela adição de detergente líquido Total Color a 100%. As amostras de enzima de sobrenadantes de cultura filtrados foram adicionadas a essa MTP preenchida com detergente (razão de aproximadamente 1:11(v/v) entre amostra e detergente) e misturadas com o uso de um aparelho de agitação por tambor magnético (série VP710, V&P Scientific, San Diego, CA) por 5 min. O desempenho de limpeza inicial (ponto no tempo T=0) foi medido retirando-se uma alíquota de cada cavidade da placa de incubação de detergente-enzima e executando-se o ensaio de desempenho de limpeza por pequena amostra de tecido descrito no Exemplo 8 acima. A razão entre amostra e tampão na placa de ensaio por pequena amostra de tecido foi 1:9 (v/v).[00301] A mini-tumble stir disk (Catalog number P 721F-1, V&P Scientific, San Diego, CA) was placed in each well of a 96-well U-bottom low-binding polypropylene MTP, followed by the addition of 100% Total Color liquid detergent. Enzyme samples from filtered culture supernatants were added to this detergent-filled MTP (approximately 1:11 (v/v) sample to detergent ratio) and mixed using a magnetic drum stirrer (VP710 series, V&P Scientific, San Diego, CA) for 5 min. Initial cleaning performance (time point T=0) was measured by removing an aliquot from each well of the detergent-enzyme incubation plate and performing the small tissue sample cleaning performance assay described in Example 8 above. The ratio of sample to buffer in the assay plate per small tissue sample was 1:9 (v/v).

[00302] A placa de detergente-enzima foi, então, incubada à temperatura ambiente pela quantidade de tempo indicada nos cabeçalhos das Tabelas 14A e 14B (7 horas e 9 horas, respectivamente) e a atividade de limpeza remanescente após a incubação foi determinada retirando-se uma alíquota de cada cavidade da placa de incubação de enzima-detergente ao final do período de incubação e executando-se o ensaio de desempenho de limpeza por pequena amostra de tecido descrito no Exemplo 8 acima. A razão entre amostra e tampão na placa de ensaio por pequena amostra de tecido foi 1:9 (v/v). Um valor de limpeza residual (% de atividade de limpeza remanescente) foi obtido considerando-se uma razão entre a atividade de limpeza (medida no ensaio de limpeza por pequena amostra de tecido) após a incubação e a atividade de limpeza inicial medida no tempo T=0 e multiplicando-se por 100.[00302] The enzyme-detergent plate was then incubated at room temperature for the amount of time indicated in the headings of Tables 14A and 14B (7 hours and 9 hours, respectively) and the cleaning activity remaining after incubation was determined by removing an aliquot from each well of the enzyme-detergent incubation plate at the end of the incubation period and performing the tissue sample cleaning performance assay described in Example 8 above. The sample to buffer ratio in the tissue sample assay plate was 1:9 (v/v). A residual cleaning value (% cleaning activity remaining) was obtained by taking a ratio of the cleaning activity (measured in the tissue sample cleaning assay) after incubation to the initial cleaning activity measured at time T=0 and multiplying by 100.

[00303] As Tabelas 14A 14B e listam o desempenho de variantes PspMan4 no ensaio de desempenho de limpeza envelhecido (mostrado como % de atividade de limpeza remanescente após o período de incubação indicado) em comparação com a PspMan4 parental. [00303] Tables 14A and 14B list the performance of PspMan4 variants in the aged cleaning performance assay (shown as % cleaning activity remaining after the indicated incubation period) compared to the parental PspMan4.

Claims (11)

1. Variante de mananase ou um polipeptídeo recombinante apresentando atividade de mananase, caracterizada pelo fato de que é derivada de um polipeptídeo de referência GH5 e consiste em uma sequência de aminoácido resultante de de duas ou mais modificações em SEQ ID NO: 14, em que a primeira modificação é N97D-G225Cem que as modificações adicionais são selecionadas de:P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C- T228V-K244L;P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L- S258D-N261R;P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S- G225C-K244L-S258D-N261R;T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V- Q242L-K244L-S258D-N261R;P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L- S258D-G259P;N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L- A217P-K244L-S258D-N261R;T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R;P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R;N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M- P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S- G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T- N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q;N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q- Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M- F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q;P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T- N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q;N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q;G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D- Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D- Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D- N261R-T284A-Z298.01Q;Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D- N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L- K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q;A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E- K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q;M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D- Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D- K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-T284E-Z298.01Q;opcionalmente em que a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante compreende ainda um ou mais motivos selecionados de:(i) motivo WXaKNDLXXAI (SEQ ID NO:15) nas posições 31-40, em que Xa é F ou Y e X é qualquer aminoácido;(ii) motivo LDXXXGPXGXLT (SEQ ID NO:16) nas posições 263-274, em que X é qualquer aminoácido;(iii) motivo LDX1V/AT/AGPX2GX3LT (SEQ ID NO:17) nas posições 263-274, em que X1 é um M ou L, X2 é N, A ou S e X3 é S, T ou N; e(iv) motivo LDM/LATGPN/AGS/TLT (SEQ ID NO:18) nas posições 263-274.1. A mannanase variant or a recombinant polypeptide exhibiting mannanase activity, characterized in that it is derived from a reference GH5 polypeptide and consists of an amino acid sequence resulting from two or more modifications in SEQ ID NO: 14, wherein the first modification is N97D-G225C and wherein additional modifications are selected from: P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L; P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L- S258D-N261R;P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S- G225C-K244L-S258D-N261R;T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V- Q242L-K244L-S258D-N261R;P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L- S258D-G259P;N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D -V103I-Y129M-F167Y-P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L- A217P-K244L-S258D-N261R;T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R;P19E-T38E-N6 7D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R;N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M- P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K14 3Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S- G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T- N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q;N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y2 35L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q- Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M- F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q -K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R- Z298.01Q;P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T- N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L- S258D-N261R-Z298.01Q;N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N 67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D- N261R-Z298.01Q;G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-S30T-T38E-S5 9V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D- Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V- Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q; P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M- P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D- Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D- N261R-T284A-Z298.01Q;Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D- N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L- K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q;A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E- K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q;M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D- Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L- K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M- Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q;N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q;optionally wherein the recombinant mannanase variant or polypeptide further comprises one or more motifs selected from:(i) WXaKNDLXXAI motif (SEQ ID NO:15) at positions 31-40, wherein Xa is F or Y and X is any amino acid;(ii) LDXXXGPXGXLT motif (SEQ ID NO:16) at positions 263-274, where X is any amino acid;(iii) LDX1V/AT/AGPX2GX3LT motif (SEQ ID NO:17) at positions 263-274, where X1 is an M or L, X2 is N, A or S, and X3 is S, T or N; and(iv) LDM/LATGPN/AGS/TLT motif (SEQ ID NO:18) at positions 263-274. 2. Variante de mananase ou polipeptídeo recombinante, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que consiste em uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13.2. A mannanase variant or recombinant polypeptide according to any one of the preceding claims, characterized in that it consists of an amino acid sequence of SEQ ID NO:13. 3. Variante de mananase ou polipeptídeo recombinante de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a atividade de mananase ocorre na presença de um surfactante e/ou uma protease.3. Mannanase variant or recombinant polypeptide according to claim 1 or 2, characterized in that the mannanase activity occurs in the presence of a surfactant and/or a protease. 4. Variante de mananase ou polipeptídeo recombinante de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a referida variante tem uma ou mais propriedades melhoradas quando comparada a um polipeptídeo de referência; em que a propriedade melhorada é selecionada entre estabilidade melhorada na presença de protease, estabilidade melhorada em detergente ou tampão; e desempenho de limpeza melhorado, opcionalmente em que a propriedade melhorada é(i) estabilidade melhorada em detergente, onde a referida variante de mananase ou polipeptídeo recombinante retém pelo menos 10%, 20%, 30%, 40% ou 50% de atividade de mananase residual a uma temperatura de cerca de 40°C a cerca de 70°C, cerca de 45°C a cerca de 65°C, cerca de 50°C a cerca de 60°C, cerca de 60°C a cerca de 70°C, ou cerca de 56°C durante um período de tempo de pelo menos 5 minutos;(ii) estabilidade melhorada na presença de protease, em que a referida variante de mananase ou polipeptídeo recombinante retém pelo menos 50% de atividade de mananase na presença de uma protease e/ou um surfactante durante pelo menos 15 dias ou de cerca de 15 a cerca de 40 dias;(iii) desempenho de limpeza melhorado, em que a referida variante de mananase ou polipeptídeo recombinante ou tem um PI de limpeza de manchas de goma de alfarroba >1; e(iv) desempenho de limpeza envelhecido melhorado, em que a referida variante de mananase ou polipeptídeo recombinante tem pelo menos 15% de atividade de limpeza restante após 7 horas ou pelo menos 11% de atividade de limpeza restante após 9 horas.4. The mannanase variant or recombinant polypeptide of any one of claims 1 to 3, wherein said variant has one or more improved properties when compared to a reference polypeptide; wherein the improved property is selected from improved stability in the presence of protease, improved stability in detergent or buffer; and improved cleaning performance, optionally wherein the improved property is (i) improved stability in detergent, wherein said recombinant mannanase variant or polypeptide retains at least 10%, 20%, 30%, 40%, or 50% residual mannanase activity at a temperature of about 40°C to about 70°C, about 45°C to about 65°C, about 50°C to about 60°C, about 60°C to about 70°C, or about 56°C for a time period of at least 5 minutes; (ii) improved stability in the presence of protease, wherein said recombinant mannanase variant or polypeptide retains at least 50% mannanase activity in the presence of a protease and/or a surfactant for at least 15 days or from about 15 to about 40 days; (iii) cleaning performance improved, wherein said recombinant mannanase variant or polypeptide has a locust bean gum stain cleaning PI >1; and(iv) improved aged cleaning performance, wherein said recombinant mannanase variant or polypeptide has at least 15% cleaning activity remaining after 7 hours or at least 11% cleaning activity remaining after 9 hours. 5. Composição de limpeza, caracterizada pelo fato de que compreende a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que a composição de limpeza opcionalmente compreende ainda: pelo menos um tensoativo; pelo menos um íon selecionado dentre cálcio e zinco; pelo menos um ingrediente auxiliar; pelo menos um estabilizante; a partir de cerca de 0,001% a cerca de 1,0% em peso da dita variante de mananase ou polipeptídeo recombinante, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4; pelo menos um agente de branqueamento; e/ou pelo menos uma enzima ou derivado de enzima selecionado dentre acil transferases, amilases, alfa-amilases, beta- amilases, alfa-galactosidases, arabinases, arabinosidases, aril esterases, beta-galactosidases, beta-glucanases, carrageenases, catalases, celobio-hidrolases, celulases, condroitinases, cutinases, endo-beta-1,4-glucanases, endo-beta-mananases, exo-beta-mananases, esterases, exo-mananases, galactanases, glucoamilases, hemicelulases, hialuronidases, queratinases, lacases, lactases, ligninases, lipases, enzimas lipolíticas, lipoxigenases, mananases, oxidases, pectato liases, pectina acetil esterases, pectinases, pentosanases, peridrolases, peroxidases, fenoloxidases, fosfatases, fosfolipases, fitases, poligalacturonases, proteases, pululanases, redutases, ramnogalacturonases, beta-glucanases, tanases, transglutaminases, xilano acetil-esterases, xilanases, xiloglucanases, xilosidases, metaloproteases e uma combinação das mesmas.5. A cleaning composition comprising the recombinant mannanase or polypeptide variant as defined in any one of claims 1 to 4, wherein the cleaning composition optionally further comprises: at least one surfactant; at least one ion selected from calcium and zinc; at least one auxiliary ingredient; at least one stabilizer; from about 0.001% to about 1.0% by weight of said recombinant mannanase or polypeptide variant as defined in any one of claims 1 to 4; at least one bleaching agent; and/or at least one enzyme or enzyme derivative selected from acyl transferases, amylases, alpha-amylases, beta-amylases, alpha-galactosidases, arabinases, arabinosidases, aryl esterases, beta-galactosidases, beta-glucanases, carrageenanses, catalases, cellobiohydrolases, cellulases, chondroitinases, cutinases, endo-beta-1,4-glucanases, endo-beta-mannanases, exo-beta-mannanases, esterases, exo-mannanases, galactanases, glucoamylases, hemicellulases, hyaluronidases, keratinases, laccases, lactases, ligninases, lipases, lipolytic enzymes, lipoxygenases, mannanases, oxidases, pectate lyases, acetyl pectin esterases, pectinases, pentosanases, perhydrolases, peroxidases, phenoloxidases, phosphatases, phospholipases, phytases, polygalacturonases, proteases, pullulanases, reductases, rhamnogalacturonases, beta-glucanases, tannases, transglutaminases, xylan acetyl-esterases, xylanases, xyloglucanases, xylosidases, metalloproteases and a combination thereof. 6. Composição de limpeza, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que a composição de limpeza:(i) é uma composição de detergente selecionada dentre um detergente para lavagem de roupas, um detergente amaciante de tecido, um detergente para lavagem de louças e um detergente para limpeza de superfície rígida; e/ou(ii) está em uma forma selecionada dentre um líquido, um pó, um sólido granulado, um tablete, uma folha e uma dose unitária; e/ou(iii) contém fosfato ou é livre de fosfato e/ou contém boro ou é livre de boro.6. The cleaning composition of claim 5, wherein the cleaning composition: (i) is a detergent composition selected from a laundry detergent, a fabric softener detergent, a dishwashing detergent, and a hard surface cleaning detergent; and/or (ii) is in a form selected from a liquid, a powder, a granular solid, a tablet, a sheet, and a unit dose; and/or (iii) contains phosphate or is phosphate-free, and/or contains boron or is boron-free. 7. Método para limpeza, caracterizado pelo fato de que compreende colocar uma superfície ou item que compreende uma sujeira ou mancha que compreende manano em contato com (i) a variante de mananase ou polipeptídeo recombinante, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou (ii) a composição de limpeza, como definida na reivindicação 5 ou 6, em que o manano contido na dita sujeira ou mancha é hidrolisado, em que o dito item é opcionalmente louça ou tecido.7. A method for cleaning, comprising placing a surface or item comprising a soil or stain comprising mannan in contact with (i) the mannanase variant or recombinant polypeptide as defined in any one of claims 1 to 4, or (ii) the cleaning composition as defined in claim 5 or 6, wherein the mannan contained in said soil or stain is hydrolyzed, wherein said item is optionally crockery or fabric. 8. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que consiste em uma sequência de nucleotídeos selecionada dentre SEQ ID NOs: 1 e 93-139 ou sequências de nucleotídeos degeneradas das mesmas que codificam a mesma sequência de aminoácidos codificando uma variante de mananase ou polipeptídeo recombinante como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.8. Polynucleotide, characterized by the fact that it consists of a nucleotide sequence selected from SEQ ID NOs: 1 and 93-139 or degenerate nucleotide sequences thereof that encode the same amino acid sequence encoding a mannanase variant or recombinant polypeptide as defined in any one of claims 1 to 4. 9. Vetor de expressão, caracterizado pelo fato de que compreende o polinucleotídeo como definido na reivindicação 8.9. Expression vector, characterized by the fact that it comprises the polynucleotide as defined in claim 8. 10. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende o vetor de expressão, como definido na reivindicação 9, em que a célula hospedeira é uma célula fúngica, de levedura ou bacteriana.10. A host cell comprising the expression vector as defined in claim 9, wherein the host cell is a fungal, yeast or bacterial cell. 11. Método para produção da variante de mananase ou polipeptídeo recombinante como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que compreende:(a) transformar de forma estável a célula hospedeira, como definida na reivindicação 10 com o vetor de expressão como definido na reivindicação 9;(b) cultivar a dita célula hospedeira transformada sob condições adequadas para a dita célula hospedeira para produzir a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante; e(c) recuperar a dita variante de mananase, polipeptídeo recombinante.11. A method for producing the recombinant mannanase variant or polypeptide as defined in any one of claims 1 to 4, comprising: (a) stably transforming the host cell as defined in claim 10 with the expression vector as defined in claim 9; (b) culturing said transformed host cell under conditions suitable for said host cell to produce said recombinant mannanase variant polypeptide; and (c) recovering said recombinant mannanase variant polypeptide.
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