BR112017010319B1

BR112017010319B1 - Esteroides 6-alquil-7-hidróxi-4-en-3-ona e processo para a preparação dos mesmos

Info

Publication number: BR112017010319B1
Application number: BR112017010319-2A
Authority: BR
Inventors: Alexander Weymouth-Wilson; Zofia KOMSTA; James BOYDELL; Carl OTTER; Laura WALLIS; Rhys BATCHELOR
Original assignee: NZP UK Limited
Priority date: 2014-11-19
Filing date: 2015-11-19
Publication date: 2023-04-11
Also published as: EA033427B1; HK1246801A1; CA2968309A1; EA201790884A1; WO2016079517A1; TWI690536B; US10301350B2; NZ731924A; EP3221331A1; DK3221331T3; KR102526631B1; JP6700274B2; PT3221331T; ES2759725T3; TW201632537A; CN107207559B; US20170327528A1; EA201790884A8; MX375863B; KR20170086604A

Abstract

A invenção se refere a compostos de fórmula (I): (I) em que R1, R2, Y, R4 e R5 são conforme definidos aqui, neste requerimento de patente. Os compostos são intermediários na síntese de ácidos biliares sintéticos.

Description

[001] A presente invenção se refere a compostos os quais são intermediários na síntese de derivados de ácidos biliares com atividade farmacológica. Em particular, a invenção se refere a intermediários na síntese de ácido obeticólico e seus análogos. Além disso, a invenção se refere a um método para a síntese destes intermediários e um método de preparação de ácido obeticólico e análogos do ácido obeticólico a partir dos compostos da invenção.

[002] Ácidos biliares são ácidos de esteroides os quais são encontrados na bile dos mamíferos e incluem compostos tais como o ácido cólico, o ácido quenodesoxicólico, o ácido litocólico e o ácido desoxicólico, todos os quais são encontrados nos seres humanos. Muitos ácidos biliares são ligantes naturais do receptor farnesoide X (FXR) o qual é expresso no fígado e no intestino dos mamíferos, incluindo humanos.

[003] Os ácidos biliares são derivados de esteroides e são numerados do mesmo modo. A seguir é mostrado o sistema de numeração geral para os esteroides e a numeração dos átomos de carbono no ácido quenodesoxicólico.

[004] Descobriu-se que os agonistas do FXR são de utilidade no tratamento de transtornos hepáticos colestáticos incluindo a cirrose biliar primária e a esteatohepatite não-alcoólica (vide revisão por Jonker et al, in Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology, 2012, 130, 147-158).

[005] O ácido ursodesoxicólico (UDCA), um ácido biliar isolado originalmente a partir da vesícula biliar dos ursos, atualmente é usado no tratamento de transtornos hepáticos colestáticos, embora pareça ser inativo no FXR.

[006] Assim como sua ação no FXR, os ácidos biliares e seus derivados também são moduladores do receptor acoplado à proteína G, o TGR5. Este é um membro da superfamília de receptores acoplados à proteína G semelhantes à rodopsina e tem um papel importante na rede de sinalização de ácidos biliares, a qual complementa o papel do FXR.

[007] Devido à importância dos agonistas de FXR e TGR5 no tratamento dos transtornos hepáticos colestáticos, têm sido empreendidos esforços no sentido de desenvolver novos compostos os quais tenham atividade agonista nestes receptores. Um composto particularmente ativo é o ácido obeticólico, o qual é um potente agonista tanto do FXR quanto do TGR5. O àcido obeticólico é descrito na Patente Internacional No. WO 02/072598 e na Patente Europeia No. EP1568706, ambas as quais descrevem um processo para a preparação de ácido obeticólico a partir do ácido 7-ceto litocólico, o qual é derivado a partir do ácido cólico. Processos adicionais para a produção do ácido obeticólico e de seus derivados são descritos na Patente Internacional No. WO 2006/122977, na Patente dos Estados Unidos No. US 2009/0062256 e na Patente Internacional No. WO 2013/192097 e todos estes processos também se iniciam a partir do ácido 7-ceto litocólico.

[008] É evidente a partir do número de publicações de patente direcionadas para processos para a produção de ácido obeticólico que de modo algum é simples sintetizar este composto, e que na verdade o processo o qual atualmente é utilizado se inicia a partir do ácido cólico, tem 12 etapas além de uma baixa produção geral.

[009] Além da ineficiência e do alto custo deste processo, também existem problemas com relação ao custo e à disponibilidade das matérias-primas. O ácido cólico, a matéria-prima corrente para a produção de ácido obeticólico, é um ácido biliar natural o qual geralmente é obtido a partir do abate de vacas e outros animais. Isto significa que a disponibilidade do cólico ácido e de outros ácidos biliares é limitada pelo número de gado disponível para abate. Como a incidência de doença hepática colestática está crescendo mundialmente, é provável que também aumente a demanda de ácidos biliares sintéticos tais como o ácido obeticólico e há dúvidas de que o suprimento de ácidos biliares de origem natural continue a ser suficiente para satisfazer a demanda.

[010] Além disso, o uso de uma matéria-prima derivada a partir de animais significa que existe a possibilidade de contaminação do material com agentes infecciosos tais como vírus ou príons, os quais podem não somente ser perigosos para os trabalhadores mas podem potencialmente contaminar os produtos finais no caso de não serem empreendidas etapas com a finalidade de prevenir isto.

[011] Embora alguns pacientes com doença hepática colestática possam ser tratados com o ácido ursodesoxicólico, este também é um ácido biliar natural e enfrenta os mesmos problemas de limitada disponibilidade e alto custo.

[012] Em uma tentativa de resolver os problemas associados com o uso de ácidos biliares como matérias-primas, os presentes inventores desenvolveram um processo para a síntese de derivados de ácidos biliares sintéticos, tais como o ácido obeticólico, a qual usa esteróis de plantas como matérias-primas.

[013] Os inventores desenvolveram um processo para a produção de ácidos biliares sintéticos o qual prossegue através de novos intermediários e o qual proporciona o produto final em uma produção significativamente maior do que os processos correntes. O processo é flexível e pode usar uma variedade de matérias-primas diferentes incluindo esteróis de animais, de fungos e de plantas.

[014] Esteróis de animais adequados os quais podem ser usados como matérias-primas incluem o ácido desoxicólico, o ácido cólico, ao passo que os esteróis fúngicos incluem o ergosterol.

[015] Os esteróis vegetais estão amplamente disponíveis em custo significativamente menor do que os ácidos biliares e, na verdade, são frequentemente resíduos de produtos de outros processos. Esteróis vegetais adequados e derivados de esteróis vegetais os quais podem ser usados como matérias-primas incluem o bis-norcolenol (também conhecido como 20-hidroximetilpregn-4-en-3- ona), a androstenodiona, a androstenodienodiona, a dehidroepiandrosterona, o stigmasterol, o brassicasterol, o campesterol e o β-sitosterol.

[016] A presente invenção se refere a intermediários no novo processo bem como a processos para a preparação dos intermediários e processos para a conversão dos mesmos para os produtos desejados.

[017] Portanto, em um primeiro aspecto da presente invenção é proporcionado um composto de fórmula geral (I):

em que: R1 é C1-4 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados entre halo, OR6 ou NR6R7; onde cada um de R6 e R7 é selecionado de modo independente entre H ou C1-4 alquila; R2 é H, halo ou OH ou um OH protegido; Y é uma ligação ou um grupo ligante de alquileno, alquenileno ou alquinileno tendo de 1 a 20 átomos de carbono e opcionalmente substituído com um ou mais grupos R3; cada R3 é de modo independente halo, OR8 ou NR8R9; onde cada um de R8 e R9 é selecionado de modo independente entre H ou C1-4 alquila; e R4 é C(O)OR10, OC(O)R10, C(O)NR10R11, OR10, OSi(R13)3, S(O)R10, SO2R10, OSO2R10, SO3R10, ou OSO3R10; onde cada R10 e R11 é de modo independente: a. hidrogênio ou b. C1-20 alquila, C2-20 alquenila, C2-20 alquinila, -O-C1-20 alquila, -O-C2-20 alquenila ou -O-C2-20 alquinila, cada um dos quais é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados entre halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2, ou um grupo arila de 6 a 14 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros, qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2; ou c. um grupo arila de 6 a 14 membros ou heteroaril de 5 a 14 membros qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados entre C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2; d. um resíduo polietileno glicol; cada R19 é selecionado de modo independente entre H, C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, ou um grupo aril de 6 a 14 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com halo, C1-6 alquila ou C1-6 haloalquila; cada R13 é de modo independente a. C1-20 alquila, C2-20 alquenila ou C2-20 alquinila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados entre halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2, um grupo arila de 6 a 14 membros ou heteroaril de 5 a 14 membros, qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2; ou b. um grupo arila de 6 a 14 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados entre C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2; cada R19 é selecionado de modo independente entre H, C1-6 alquila ou C1-6 haloalquila; c. é H ou OH ou um OH protegido; ou um sal ou uma variante isotópica do mesmo.

[018] Compostos de fórmula geral (I) são intermediários na síntese de compostos farmaceuticamente ativos tais como o ácido obeticólico e seus derivados.

[019] No presente relatório, exceto onde o contexto requeira de modo diverso devido a expressar expressão ou implicação necessária, a palavra "compreende", ou variações tais como "compreende" ou "compreendendo" é usada em um sentido inclusivo, isto é, para especificar a presença das características declaradas mas não para excluir a presença ou adição de características adicionais em várias modalidades da invenção.

[020] Todas as publicações, incluindo mas não limitadas a patentes e requerimentos de patente, citadas neste relatório são aqui, a este requerimento de patente, incorporadas por meio de referência como se cada publicação individual fosse especificamente e individualmente indicada para ser incorporada por meio de referência aqui, a este requerimento de patente, conforme no entanto plenamente estipulado.

[021] No presente requerimento o termo "C1-20" alquila se refere a um grupo de hidrocarboneto reto ou ramificado totalmente saturado tendo de 1 a 20 átomos de carbono. O termo engloba metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, isobutila e t-butila. Outros grupos alquila, por exemplo, C1-20 alquila, C1-6 alquila ou C1-3 alquila são conforme definido acima mas contêm números diferentes de átomos de carbono.

[022] O termo "C1-6 haloalquila" se refere a um grupo de alquila reto ou ramificado conforme definido acima tendo de 1 a 6 átomos de carbono e substituído com um ou mais átomos de halo, até substituição perhalo. Exemplos incluem trifluorometila, cloroetila e 1,1- difluoroetila.

[023] O termo "C2-20 alquenila" se refere a um grupo de hidrocarboneto reto ou ramificado tendo de 2 a 20 átomos de carbono e no mínimo uma ligação dupla carbono-carbono. Exemplos incluem etenila, prop-1-enila, hex-2-enila etc.

[024] O termo "C2-20 alquinila" se refere a um grupo de hidrocarboneto reto ou ramificado tendo de 2 a 20 átomos de carbono e no mínimo uma ligação tripla carbono-carbono. Exemplos incluem etinila, prop-1-inila, hex-2-inila etc.

[025] O termo "alquileno" se refere a uma cadeia de hidrocarboneto reta ou ramificada totalmente saturada. Exemplos de grupos de alquileno incluem -CH2-, -CH2CH2-, CH(CH3)-CH2-, CH2CH(CH3)-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH2CH3)- e - CH2CH(CH2CH3)CH2-.

[026] O termo "alquenileno" se refere a uma cadeia de hidrocarboneto reta ou ramificada contendo no mínimo uma ligação dupla carbono-carbono. Exemplos de grupos de alquenileno incluem- CH=CH-, -CH=C(CH3)-, -CH2CH=CH-, -CH=CHCH2-, CH2CH2CH=CH-, CH2CH=C (CH3)- e -CH2CH=C(CH2CH3)-.

[027] O termo "alquinileno" se refere a uma cadeia de hidrocarboneto reta ou ramificada contendo no mínimo uma ligação tripla carbono-carbono. Exemplos de grupos de alquinileno incluem - C=C-, -CH2CHC-, -C=C-CH2-, CH2CH2CHC-, CH2CHCCH2- e -CH2CHHC- CH2CH2-.

[028] Os termos "arila" e "aromático" se referem a um grupo cíclico com caráter aromático tendo de 6 a 14 átomos de carbono do anel (a menos que especificado de modo diverso) e contendo até três anéis. Onde um grupo arila contém mais de um anel, nem todos os anéis devem ser de caráter aromático. Exemplos incluem fenila, naftila e antracenila bem como sistemas parcialmente saturados tais como tetraidronaftila, indanila e indenila.

[029] Os termos "heteroarila" e "heteroaromático" se referem a um grupo cíclico com caráter aromático tendo de 5 a 14 átomos do anel (a menos que especificado de modo diverso), no mínimo um dos quais é um heteroátomo selecionado entre N, O e S, e contendo até três anéis. Onde um grupo heteroarila contém mais de um anel, nem todos os anéis devem ser de caráter aromático. Exemplos de grupos heteroarila incluem piridina, pirimidina, indol, benzofurano, benzimidazol e indoleno.

[030] O termo "halogênio" se refere a flúor, cloro, bromo ou iodo e o termo "halo" a grupos de fluoro, cloro, bromo ou iodo.

[031] O termo "variante isotópica" se refere a compostos com etiqueta isotópica os quais são idênticos aos mencionados na fórmula (I) com a exceção do fato de que um ou mais átomos são substituídos por um átomo tendo uma massa atômica ou um número de massa diferente da massa atômica ou do número de massa encontrado mais comumente na natureza, ou no qual a proporção de um átomo tendo uma massa atômica ou um número de massa encontrado menos comumente na natureza tem sido aumentada (o último conceito sendo referido como "enriquecimento isotópico"). Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, flúor, iodo e cloro tais como 2H (deutério), 3H, 11C, 13C, 14C, 18F, 123I ou 125I (por exemplo, 3H, 11C, 14C, 18F, 123I ou 125I), os quais podem ser isótopos que ocorrem naturalmente ou que não ocorrem naturalmente.

[032] Polietileno glicol (PEG) é um composto de polieter, o qual em forma linear tem a fórmula geral @H-[O-CH2-CH2]n-OH. Um resíduo polietileno glicol é um PEG no qual o H terminal é substituído por uma ligação ligando o mesmo ao restante da molécula.

[033] Versões ramificadas, incluindo versões hiperramificadas e dendríticas também são contempladas e são conhecidas de modo geral na técnica. Tipicamente, um polímero ramificado tem uma porção de núcleo do ramo central e uma pluralidade de cadeias de polímeros lineares ligadas ao núcleo do ramo central. PEG é comumente usado em formas ramificadas que podem ser preparadas por adição de óxido de etileno a vários polióis, tais como glicerol, oligômeros de glicerol, pentaeritritol e sorbitol. porção de A do ramo central também pode ser derivada a partir de vários aminoácidos, tais como lisina. O poli (etileno glicol) ramificado pode ser representado em forma geral como R(-PEG- OH)m no qual R é derivado a partir de uma porção de núcleo, tal como glicerol, oligômeros de glicerol, ou pentaeritritol, e m representa o número de braços. Também podem ser usadas moléculas de PEG de múltiplos braços, tais como as descritas nos documentos de Patente dos Estados Unidos No. US 5.932.462; de Patente dos Estados Unidos No. US 5.643.575; de Patente dos Estados Unidos No. US 5.229.490; de Patente dos Estados Unidos No. US 4.289.872; de Patente dos Estados Unidos No. US 2003/0143596; de Patente Internacional No. WO 96/21469; e de Patente Internacional No. WO 93/21259.

[034] Os polímeros de PEG podem ter um peso molecular médio de, por exemplo, 600 a 2.000.000 Da, 60.000 a 2.000.000 Da, 40.000 a 2.000.000 Da, 400.000 a 1.600.000 Da, 800 a 1.200.000 Da, 60040,000 Da, 600 a 20.000 Da, 4.000 a 16.000 Da, ou 8.000 a 12.000 Da.

[035] O termo "OH protegido" se refere a um grupo OH protegido com qualquer grupo de proteção adequado. Por exemplo, o OH protegido pode ser um grupo R4 conforme definido acima.

[036] Grupos de proteção adequados incluem ésteres tais que, por exemplo, quando R2 e/ou R5 é um OH protegido, R2 e/ou R5 podem ser de modo independente um grupo OC(O)R14, onde R14 é um grupo R10 conforme definido acima. Éteres silílicos também são adequados, e neste caso, R2 e/ou R5 podem ser de modo independente um grupo OSi(R16)3, onde cada R16 é de modo independente um grupo R13 conforme definido acima.

[037] Outros grupos de proteção adequados para OH são de conhecimento geral das pessoas versadas na técnica (vide Wuts, PGM and Greene, TW (2006) "Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis", 4th Edition, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, NJ, USA).

[038] Referências a um grupo de proteção o qual é estável em condições básicas siognifica que o grupo de proteção não pode ser removido por tratamento com uma base.

[039] Sais apropriados dos compostos de fórmula geral (I) incluem sais de adição básicos tais como sais de sódio, potássio, cálcio, alumínio, zinco, magnésio e outros sais de metais bem como colina, dietanolamina, etanolamina, etil diamina, meglumina e outros sais de adição básicos de conhecimento geral conforme resumido em Paulekuhn et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 6665-6672 e/ou de conhecimento das pessoas versadas na técnica.

[040] Em alguns compostos adequados, o composto de fórmula geral (I) é um composto de fórmula geral (IA):

em que R1, R2, Y, R4 e R5 são conforme definido para a fórmula geral (I).

[041] Em alguns compostos adequados de fórmula geral (I) e (IA): R1 é C1-4 alquila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados entre halo, OR6 ou NR6R7; onde cada um de R6 e R7 é selecionado de modo independente entre H ou C1-4 alquila; R2 é H, halo ou OH; Y é uma ligação ou um grupo ligante de alquileno ou alquenileno tendo de 1 a 6 átomos de carbono e opcionalmente substituído com um ou mais grupo R3; cada R3 é de modo independente halo, OR8 ou NR8R9; onde cada um de R8 e R9 é selecionado de modo independente entre H ou C1-4 alquila; R4 é C(O)OR10, C(O)NR10R11, S(O)R10, SO2R10, OSO2R10, SO3R10, ou OSO3R10; ou R4 é C(O)OR10, C(O)NR10R11, S(O)R10, SO2R10, ou OSO2 10 ; onde, em qualquer caso, cada R10 é hidrogênio ou C1-6 alquila ou benzila, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes halo e R11 é hidrogênio ou C1-6 alquila, benzila, -C1-4 alquileno-SO3H ou -C1-4 alquileno-SO3(C1-4 alquila), qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes halo.

[042] Em compostos adequados de fórmulas gerais (I) e (IA), R1 pode ser C1-4 alquila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados entre halo, OR6 ou NR6R7, onde R6 e R7 são cada um de modo independente H, metila ou etila, especialmente H ou metil.

[043] Mais convenientemente, R1 é C1-4 alquila não substituído.

[044] Em compostos particularmente adequados, R1 é etila.

[045] Em alguns compostos de fórmula geral (I) e (IA), Y é uma ligação.

[046] Convenientemente em compostos de fórmulas gerais (I) e (IA), Y é um grupo ligante de alquileno ou alquenileno tendo de 1 a 15 átomos de carbono, mais convenientemente 1 a 12, 1 a 10 ou 1 a 8 átomos de carbono e opcionalmente substituído com um ou mais grupos R3 conforme definido acima. Tipicamente, cada R3 é de modo independente halo, OR8 ou NR8R9; onde cada um de R8 e R9 é selecionado de modo independente entre H, metila ou etila, especialmente H ou metila.

[047] Em alguns compostos adequados, Y é um ligante de alquileno ou alquenileno não substituído tendo de 1 a 15 átomos de carbono, mais convenientemente 1 a 12, 1 a 10 ou 1 a 8 átomos de carbono.

[048] Em alguns compostos adequados de fórmula geral (I), R2 é H.

[049] Em outros compostos adequados de fórmula geral (I), R2 é OH.

[050] Em ainda outros compostos adequados de fórmula geral (I), R2 é um grupo OH protegido. Quando R2 é um grupo OH protegido, pode ser um grupo o qual não é estável em um meio ambiente básico tal que tratamento com uma base converte o grupo OH protegido para OH. Exemplos de semelhantes grupos são de conhecimento geral na técnica e incluem um grupo OC(O)R14 conforme definido acima no qual R14 é um grupo R10 conforme definido acima para a fórmula geral (I).

[051] Grupos R14 particularmente adequados são conforme definido para R10 abaixo.

[052] Alternativamente, R2 pode ser um grupo OH protegido o qual é estável em um meio ambiente básico. Exemplos de semelhantes grupos incluem OSi(R16)3, onde cada R16 é de modo independente um grupo R13 conforme definido acima.

[053] Grupos R16 particularmente adequados são conforme definido para R13 abaixo.

[054] Nos compostos de fórmulas gerais (I) e (IA) R4 é C(O)OR10, OC(O)R10, C(O)NR10R11, OR10, OSi(R13)3, S(O)R10, SO2R10, OSO2R10, SO3R10, ou OSO3R10.

[055] Convenientemente, é C(O)OR10, OR10, SO3R10, ou OSO3R10

[056] Mais convenientemente, R4 é C(O)OR10, SO3R10, ou OSO3R10

[057] Convenientemente, cada R10 e R11 é de modo independente: a. hidrogênio ou b. C1-10 alquila, C2-10 alquenila, C2-10 alquinila, -O-C1-10 alquila, -O-C2-10 alquenila ou -O-C2-10 alquinila, cada um dos quais é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes conforme descrito acima; ou c. um grupo arila de 6 a 10 membros ou heteroarila de 5 a 10 membros opcionalmente substituído com um ou mais substituintes conforme descrito acima. d. um resíduo polietileno glicol.

[058] Mais convenientemente, cada R10 e R11 é de modo independente a. hidrogênio ou b. C1-10 alquila, C2-10 alquenila, C2-10 alquinila ou -O-C1-10 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes conforme descrito acima ou c. um grupo arila de 6 a 10 membros opcionalmente substituído com um ou mais substituintes conforme descrito acima.

[059] Convenientemente cada R13 é selecionado de modo independente entre: a. C1-10 alquila, C2-10 alquenila ou C2-10 alquinila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes conforme descrito acima; ou b. um grupo arila de 6 a 10 membros ou heteroarila de 5 a 10 membros opcionalmente substituído com um ou mais substituintes conforme descrito acima.

[060] Mais convenientemente, cada R13 é selecionado de modo independente entre: a. C1-10 alquila, C2-10 alquenila ou C2-10 alquinila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes conforme descrito acima; ou b. um grupo aril de 6 a 10 membros opcionalmente substituído com um ou mais substituintes conforme descrito acima.

[061] Ainda mais convenientemente, cada R13 é selecionado de modo independente entre C1-10 alquila ou fenila, qualquer um dos quais é opcionalmente substituído conforme descrito acima.

[062] Substituintes adequados para grupos alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, alquenilóxi e alquinilóxi R10 e R11 e grupos alquila, alquenila e alquinila R13 incluem halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2, ou um grupo arila de 6 a 10 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros, qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2; onde R19 é conforme definido acima.

[063] Substituintes mais adequados para estes grupos R10, R11 e R13 incluem halo, OR19, N(R19)2 ou um grupo aril de 6 a 10 membros opcionalmente substituído conforme descrito acima, mais convenientemente opcionalmente substituído com halo, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, -O-C1-4 alquila, -O-C1-4 haloalquila, -NH(C1-4 alquil) ou - N(C1-4 alquil)2; por exemplo, fluoro, cloro, metila, etila, trifluorometila, metóxi, etóxi, trifluorometóxi, amino, metil amino e dimetilamino.

[064] Substituintes adequados para grupos arila e heteroarila R10, R11 e R13 incluem C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SR19 ou N(R19)2.

[065] Substituintes mais adequados para estes grupos R10, R11 e R13 incluem C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, halo, OR19 ou N(R19)2; em particular, halo, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, -O-C1-4 alquila, -O-C1-4 haloalquila, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2.

[066] Exemplos específicos de substituintes para grupos arila e heteroarila R10, R11 e R13 incluem fluoro, cloro, metila, etila, trifluorometila, metóxi, etóxi, trifluorometóxi, amino, metil amino e dimetilamino.

[067] Conforme estipulado acima, cada R19 é selecionado de modo independente entre H, C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, ou um grupo aril de 6 a 14 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes halo, C1-6 alquila ou C1-6 haloalquila.

[068] Convenientemente, R19 é H, C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, ou um grupo arila de 6 a 10 membros ou heteroarila de 5 a 10 membros opcionalmente substituído com um ou mais substituintes halo, C1-4 alquila ou C1-4 haloalquila.

[069] Mais convenientemente, R19 é H, C1-6 alquila, C1-6 haloalquila ou fenila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes halo, C1-4 alquila ou C1-4 haloalquila.

[070] Exemplos específicos de R19 incluem H, metila, etila, trifluorometila ou fenila opcionalmente substituída com um ou mais grupos de fluoro, cloro, metila, etila ou trifluorometila.

[071] Em alguns compostos adequados de fórmula geral (I), R5 é H.

[072] Em outros compostos adequados de fórmula geral (I), R5 é OH.

[073] Em ainda outros compostos adequados de fórmula geral (I), R5 é um grupo OH protegido.

[074] Em ainda outros compostos adequados de fórmula geral (I), R5 é um grupo OH protegido. Quando R5 é um grupo OH protegido, pode ser um grupo o qual não é estável em um meio ambiente básico tal que tratamento com uma base converte o grupo OH protegido para OH. Exemplos de semelhantes grupos são de conhecimento geral na técnica e incluem um grupo OC(O)R14 conforme definido acima no qual R14 é um grupo R10 conforme definido acima para a fórmula geral (I).

[075] Grupos R14 particularmente adequados são conforme definido para R10 acima.

[076] Alternativamente, R5 pode ser um grupo OH protegido o qual é estável em um meio ambiente básico. Exemplos de semelhantes grupos incluem OSi(R16)3, onde cada R16 é de modo independente um grupo R13 conforme definido acima.

[077] Grupos R16 particularmente adequados são conforme definido para R13 acima.

[078] Em alguns compostos adequados de fórmulas gerais (I) e (IA), de modo independente ou em qualquer combinação: Y é uma ligação ou um grupo de alquileno ou alquenileno tendo 1 a 3 átomos de carbono e é opcionalmente substituído com um ou dois grupos R3; R4 é C(O)OR10, SO3R10, ou OSO3R10, onde R10 é conforme definido acima mas é mais convenientemente H, C1-6 alquila ou benzila; e R5 é H ou OH.

[079] Em alguns compostos mais adequados, de modo independente ou em qualquer combinação: R1 é etila; e/ou R2 é H; e/ou Y é uma ligação, -CH2-, -CH2CH2-, -CH=CH- ou - CH=C(CH3)-; e/ou R4 é C(O)OR10, onde R10 é H, C1-6 alquila ou benzila; e/ou R5 é H.

[080] Em alguns compostos particularmente adequados deste tipo, R1 é etil e/ou R10 é C1-6 alquila ou benzila.

[081] Compostos particularmente adequados da presente invenção incluem ácido (6β, 7α, 22E)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico; ácido (6β, 7a)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-4-colen-24-oico e ésteres C1-6 alquílicos e benzílicos dos mesmos e sais dos mesmos, especialmente os ésteres metílicos e etílicos.

[082] Compostos de fórmula geral (I) e (IA) podem ser preparados a partir de compostos de fórmula geral (II):

em que R2, R4, R5 e Y são conforme definido na fórmula geral (I); por alquilação seletiva com um reagente organometálico.

[083] Reagentes organometálicos adequados incluem reagentes de Gilman formados por reação de um composto de alquil lítio de fórmula (XXIV): R1-Li (XXIV) em que R1 é conforme definido para a fórmula geral (I); e um sal de cobre (I), particularmente um halogeneto de cobre (I) tal como iodeto de cobre (I).

[084] A reação pode ser conduzida em um solvente orgânico tal como tetraidrofurano, outros éteres tais como éter dietílico ou uma mistura dos mesmos.

[085] Alternativamente, a adição pode ser realizada usando reagentes de Grignard R1MgX, onde R1 é conforme definido para a fórmula geral (I) e X é um halogeneto, por exemplo, brometo de etil magnésio e a reação é convenientemente conduzida na presença de um sal de zinco (II) tal como cloreto de zinco e uma quantidade catalítica de um sal ou complexo de cobre (I) ou cobre (II), por exemplo, cloreto de cobre (I), cloreto de cobre (II) ou um complexo de acetil acetonato de (acac) de cobre(I) ou cobre (II).

[086] A reação pode ser realizada em um solvente orgânico, por exemplo, um éter tal como THF, 2-metil THF, éter metil terc-butílico (tBME), éter dietílico. Surpreendentemente, a temperatura da reação não é particularmente significativa e enquanto em alguns casos a reação pode ser realizada em temperatura reduzida, por exemplo, a cerca de -25 a 0 °C, também foi conduzida com sucesso em temperaturas maiores de até cerca de 55 °C.

[087] O processo para preparar um composto de fórmula (I) a partir de um composto de fórmula (II) é novo e o mesmo forma uma ptécnica da invenção.

[088] O método é particularmente adequado para a preparação de compostos de fórmula geral (I) nos quais R4 é C(O)OR10 a partir de compostos de fórmula geral (II) onde R4 também é C(O)OR10, onde R10 é conforme definido acima mas é especialmente H, C1-6 alquila ou benzila.

[089] Alternativamente, compostos de fórmula (I) podem ser preparados a partir de outros compostos de fórmula geral (I). Por exemplo, um composto de fórmula geral (I) no qual R4 é C(O)OR10 pode ser convertido para um composto de fórmula geral (I) no qual R4 é C(O)NR10R11, S(O)R10, SO2R10, OSO2R10, SO3R10, ou OSO3R10.

[090] Compostos de fórmula geral (I) nos quais R4 é SO3R10 podem ser sintetizadso a partir de compostos de fórmula geral (I) nos quais R4 é C(O)OH pelos métodos ensinados nos documentos de Patente Internacional No. WO/2008/002573, No. WO/2010/014836 e No. WO/2014/066819.

[091] Portanto, um composto de fórmula (I) no qual R4 é C(O)OH pode ser reagido com uma C1-6 alcanoíla ou cloreto de benzoíla ou com um anidrido alcanoico C1-6 para proteger os grupos OH. O composto protegido pode ser em seguida reagido com um agente redutor tal como um hidreto, convenientemente hidreto de alumínio de lítio ou boridreto de sódio de modo a reduzir o grupo de ácido carboxílico para OH. O grupo alcoólico pode ser substituído por um halogênio, por exemplo, bromo ou iodo, usando o método de trifenil fosfina / imidazol / halogênio descrito por Classon et al, J. Org. Chem., 1988, 53, 6126-6130. O composto halogenado pode ser em seguida reagido com sulfito de sódio em um solvente alcoólico para proporcionar um composto com um substituinte de SO3- Na+.

[092] Um composto de fórmula geral (I) no qual R4 é OSO3R10 pode ser obtido por meio de reação do álcool obtido a partir da redução do ácido carboxílico protegido conforme descrito acima com ácido clorosulfúrico na presença de uma base tal como trietilamina de modo a produzir o sal de trietilamônio protegido. Grupos de proteção podem ser removidos usando hidrólise de base conforme descrito acima. Redução do ácido carboxílico seguida por reação do álcool resultante com ácido clorosulfuroso produz um composto de fórmula geral (I) no qual R4 é OSO2R10.

[093] Compostos de fórmula geral (I) nos quais R4 é C(O)NR10R11 podem ser preparados a partir do ácido carboxílico por meio de reação com uma amina de fórmula H-NR10R11 em um solvente adequado com aquecimento. Compostos de fórmula geral (I) nos quais R4 é C(O)NR10R11 ou OSO3R10 também podem ser preparados por meio de métodos similares aos descritos por Festa et al, J. Med. Chem., 2014, 57, 8477-8495.

[094] Compostos de fórmula geral (I) com outros grupos R4 podem ser preparados a partir dos compostos de fórmula geral (I) acima por meio de métodos os quais são familiares para as pessoas versadas na técnica. Estes métodos também formam um aspecto da invenção.

[095] Compostos de fórmula geral (II) podem ser preparados a partir de compostos de fórmula (III):

em que R2, R4, R5 e Y são conforme definido na fórmula geral (I); por oxidação, por exemplo, usando hexahidrato de bis(monoperoxiftalato) (MMPP) ou ácido 3-cloroperoxibenzoico, (mCPBA).

[096] A reação usando MMPP pode ser realizada em um solvente orgânico tal como acetato de etila e se for usado mCPBA, a reação pode ser realizada em um solvente tal como diclorometano ou tolueno. Convenientemente, a reação é conduzida na temperatura de refluxo do solvente ou logo abaixo da mesma.

[097] Compostos de fórmula geral (III) podem ser preparados a partir de compostos de fórmula geral (IV):

em que R2, R4, R5 e Y são conforme definido na fórmula geral (I); por meio de reação com um agente oxidante tal como cloranil.

[098] A reação pode ser realizada sob condições acidíferas, por exemplo, na presença de ácido acético, e em um solvente orgânico tal como tolueno.

[099] Alguns compostos de fórmulas gerais (II), (III) e (IV) são conhecidos e, por exemplo, Uekawa et al in Biosci. Biotechnol. Biochem., 2004, 68, 1332-1337 descrevem a síntese de éster etílico de ácido (22E)-3-oxo-4,22-coladien-24-oico a partir de estigmasterol seguida por sua conversão para éster etílico de ácido (22E)-3-oxo- 4,6,22-colatrien-24-oico, o qual tem a fórmula:

[0100] Uekawa et al. em seguida descreveram a conversão deste composto para éster etílico de ácido (6α, 7α, 22E)-6,7-epoxi-3-oxo- 4,22-coladien-24-oico, um composto de fórmula geral (II) no qual R2 e R5 são H, Y é -CH=CH-, e R4 é C(O)OCH2CH3.

[0101] Outros compostos de fórmulas gerais (II), (III) e (IV) podem ser preparados por métodos análogos a partir de fitosteróis similares ao estigmasterol.

[0102] Estigmasterol e outros fitosteróis são esteroides de plantas e estão prontamente disponíveis ou podem ser preparados por vias conhecidas.

[0103] Compostos de fórmula geral (IV) também podem ser preparados a partir de compostos de fórmula geral (Va):

em que R2, R4, R5 e Y são conforme definido na fórmula geral (I); por meio de reação com brometo de lítio e uma base tal como carbonato de lítio. A reação pode ser realizada em um solvente tal como N,N-dimetilformamida (DMF) e em uma temperatura de cerca de 120 °C a 180 °C.

[0104] Compostos de fórmula geral (Va) podem ser obtidos por brominação de um composto de fórmula geral (V):

em que R2, R4, R5 e Y são conforme definido na fórmula geral (I); usando, por exemplo, bromo em ácido acético.

[0105] Compostos de fórmula geral (V) podem ser preparados a partir de compostos de fórmula geral (VI):

em que R2, R4, R5 e Y são conforme definido na fórmula geral (I); por oxidação, tipicamente com um agente oxidante à base de cromo ou com hipoclorito de sódio.

[0106] Compostos de fórmula geral (VI) nos quais R4 é C(O)OR10, onde R10 é C1-6 alquila ou benzila podem ser preparados a partir de compostos de fórmula geral (VI) nos quais R4 é C(O)OH por esterificação, tipicamente por reação com um álcool apropriado sob condições acidíferas.

[0107] Compostos de fórmula geral (VI) nos quais R4 é C(O)OH e R5 é H podem ser preparados a partir de compostos de fórmula geral (VII):

em que R2 e Y são conforme definido na fórmula geral (I); R4 é C(O)OR10, onde R10 é C1-6 alquila ou benzila; e R12 é um OH protegido; por meio de reação com um agente redutor, tipicamente hidrazina, sob condições básicas e em um solvente alcoólico ou glicólico, por exemplo, dietileno glicol.

[0108] Onde R12 é um grupo OH protegido o qual é estável sob condições básicas, a reação pode ser seguida por uma reação para remover o grupo de proteção R12 de modo a deixar um grupo OH.

[0109] Grupos de proteção para OH são discutidos acima e, por exemplo, R12 pode ser um grupo C(O)R14, onde R14 é conforme definido acima, em particular, C1-6 alquila ou benzila. Éteres silílicos também são adequados, e neste caso, R2 e/ou R5 de modo independente podem ser um grupo Si(R16)3, onde R16 é conforme definido acima mas é especialmente C1-6 alquila ou fenila. Outros adequados grupos de proteção para OH são de conhecimento geral das pessoas versadas na técnica (vide Wuts, PGM e Greene, TW (2006) "Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis", 4th Edition, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, NJ, USA).

[0110] Grupos R12 particularmente adequados incluem grupos os quais não são estáveis na presença de uma base uma vez que esta remove a necessidade da etapa adicional de remoção do grupo de proteção. Um exemplo de um grupo R12 o qual não é estável em condições básicas é um grupo C(O)R14, onde R14 é conforme definido acima, e é particularmente C1-6 alquila ou benzila.

[0111] Alternativamente, a reação pode ser realizada em 2 etapas tal que o composto de fórmula geral (VII) é reagido com um composto de fórmula geral (XXXII): R20-NH-NH2 (XXXII) em que R20 é um grupo de partida tal como tolueno sulfonila ou metano sulfonila; para proporcionar um composto de fórmula geral (XXXIII):

seguido por redução com um agente redutor adequado. Exemplos de agentes redutores os quais podem ser usados nesta reação incluem hidretos tais como boridreto de sódio, cianoboridreto de sódio, hidreto de alumínio de lítio etc.

[0112] Compostos de fórmula geral (VII) podem ser preparados a partir de compostos de fórmula geral (VIII):

em que R2 e Y são conforme definido na fórmula geral (I); R4 é C(O)OR10, onde R10 é C1-6 alquila ou benzila; e R12 é conforme definido acima, especialmente -C(O)C1-6 alquila; por meio de reação com um agente oxidante, por exemplo, hipoclorito de sódio.

[0113] A reação pode ser realizada sob condições acidíferas, por exemplo, na presença de ácido acético, e em um solvente orgânico tal como acetato de etila.

[0114] Compostos de fórmula geral (VIII) podem ser preparados a partir de compostos de fórmula geral (IX):

em que R2 e Y são conforme definido na fórmula geral (I); R4 é C(O)OR10, onde R10 é C1-6 alquila ou benzila; por meio de reação com um agente adequado para introduzir o grupo de proteção R12. Por exemplo, quando R12 é C(O)R14, o composto de fórmula geral (IX) pode ser reagido com um anidrido de ácido carboxílico ou um cloreto ácido na presença de uma base fraca tal como piridina, convenientemente catalisado por 4- dimetilaminopiridina (DMAP). A reação pode ser conduzida em um solvente tal como acetato de etila.

[0115] Compostos de fórmula geral (IX) podem ser preparados por esterificação de compostos de fórmula geral (X):

em que R2 e Y são conforme definido na fórmula geral (I).

[0116] A reação pode ser realizada por reação do ácido de fórmula geral (X) com um álcool adequado sob condições acidíferas.

[0117] São conhecidos compostos de fórmula geral (X). Por exemplo, o composto de fórmula geral (X) no qual Y é -CH2CH2- e R2 é H é ácido desoxicólico, o qual está prontamente disponível a partir de uma série de fontes.

[0118] Outros ácidos biliares com diferentes valores para Y e R2 podem ser usados como matérias-primas alternativas.

[0119] Uma via alternativa para os compostos de fórmula geral (IV) é conforme mostrado no Esquema 1 no qual androstenodiona é convertida para um composto de fórmula geral (IV) no qual R2 e R5 são H; R4 é -C(O)OCH3 e Y é ou -CH2CH2- ou -CH=CH-. Esquema 1

[0120] Uma via alternativa para os compostos de fórmula geral (III) nos quais Y é um grupo alquenileno é por uso de uma reação de olefinação, por exemplo, uma olefinação de Horner-Wadsworth- Emmons (HWE) de um composto de fórmula geral (XI):

em que R2 e R5 são conforme definido para a fórmula geral (I); usando um composto de fórmula geral (XII):

em que R10 é conforme definido para a fórmula geral (I).

[0121] A reação pode ser realizada sob condições de HWE de rotina, por exemplo, usando uma base tal como hidreto de sódio.

[0122] Compostos de fórmula geral (XII) estão prontamente disponíveis ou podem ser preparados por meio de métodos de conhecimento das pessoas versadas na técnica.

[0123] Outras reações de olefinação, tais como olefinação de Tebbe, reação de Wittig ou uma olefinação de Julia-Kocienski, também dariam origem a compostos de fórmula geral (III) nos quais Y é um grupo alquenileno. Estas reações de olefinação são familiares de um químico versado na técnica.

[0124] Compostos de fórmula geral (XI) podem ser preparados por reação de um composto de fórmula geral (XIII) com ozônio

em que R2 e R5 são conforme definido para a fórmula geral (I) e R15 é C1-6 alquil.

[0125] Um exemplo de uma reação deste tipo é dado na Patente dos Estados Unidos No. US 2.624.748.

[0126] Compostos de fórmula geral (XIII) podem ser preparados por reação de um composto de fórmula geral (XIV):

em que R2 e R5 são conforme definido para a fórmula geral (I) e R15 é C1-6 alquila com um ácido em um solvente tal como metanol.

[0127] Compostos de fórmula geral (XIV) podem ser preparados por oxidação de um composto de fórmula geral (XV):

em que R2 e R5 são conforme definido para a fórmula geral (I) e R15 é C1-6 alquila usando uma oxidação de Oppenauer.

[0128] Exemplos da conversão de compostos de fórmula geral (XV) para compostos de fórmula geral (XIII) são enxinados por Shepherd et al, J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 1212-1215 e Goldstein, J. Med. Chem. 1996, 39, 5092-5099.

[0129] Um exemplo de um composto de fórmula geral (XV) é ergosterol, o qual é um esterol fúngico e o Esquema 2 abaixo mostra a conversão de ergosterol para um composto de fórmula geral (III) no qual tanto R2 quanto R5 são H, Y é CH=CH2 e R4 é C(O)OR10, onde R10 é etila. Esquema 2

[0130] Conforme com os compostos de fórmula geral (I), os compostos de fórmulas gerais (II) a (X), (Va) e (XXXIII) nos quais R4 é C(O)R10, C(O)NR10R11, S(O)R10, SO3R10, ou OSO3R10 podem ser preparados a partir dos compostos correspondentes nos quais R4 é C(O)OR10 por meio de reação com alguns reagentes apropriados usando métodos de conhecimento geral das pessoas versadas na técnica. Por exemplo, os métodos descritos nos documentos de Patente Internacional No. WO/2008/002573 e de Patente Internacional No. WO/2010/014836 ou métodos similares aos descritos por Classon et al, J. Org. Chem., 1988, 53, 6126-6130 e Festa et al, J. Med. Chem., 2014, 57, 8477-8495.

[0131] Compostos de fórmula geral (I) são intermediários na síntese de compostos de fórmula geral (XVIII):

em que R1 e R4 são conforme definido na fórmula geral (I); R2 é H, halo ou OH; R5a é H ou OH; e Y1 é uma ligação ou um grupo ligante de alquileno tendo de 1 a 20 átomos de carbono e opcionalmente substituído com um ou mais grupo R3; em que R3 é conforme definido para a fórmula geral (I).

[0132] Os compostos de fórmula geral (I) podem ser convertidos para os compostos de fórmula geral (XVIII) em um processo de 4 etapas através de intermediários de fórmulas gerais (XIX), (XX) e (XXI) conforme descrito abaixo.

[0133] Portanto, em um aspecto adicional da invenção é proporcionado um processo para a preparação de um composto de fórmula geral (XVIII), o processo compreendendo: i. redução de um composto de fórmula geral (I) usando um agente redutor adequado para proporcionar um composto de fórmula geral (XIX):

em que R1, R2, R4 e R5 são conforme definido na fórmula geral (I); e Y1 é conforme definido na fórmula geral (XVIII); ii. oxidação do composto de fórmula geral (XIX) usando um agente oxidante adequado para proporcionar um composto de fórmula geral (XX):

em que R1, R2, R4 e R5 são conforme definido na fórmula geral (I); e Y1 é conforme definido na fórmula geral (XVIII); iii. epimerização do composto de fórmula geral (XX) para proporcionar um composto de fórmula geral (XXI):

em que R1 e R4 são conforme definidos na fórmula geral (I); Y1 é conforme definido na fórmula geral (XVIII); R2 é H, halo ou OH ou um grupo OH protegido o qual é estável sob condições básicas; e R5b é H ou OH ou um grupo OH protegido o qual é estável sob condições básicas; e (iv) redução do composto de fórmula geral (XXI) usando um agente redutor adequado e, onde R2 e/ou R5b é um OH protegido, remoção do grupo ou grupos de proteção, para proporcionar um composto de fórmula geral (XVIII) conforme definido acima, em que a remoção do grupo de proteção pode ocorrer antes ou depois da redução; e opcionalmente (v) conversão de um composto de fórmula geral (XVIII) para outro composto de fórmula geral (XVIII).

[0134] Compostos de fórmula geral (XVIII) são potentes agonistas de FXR e TGR5 e incluem o ácido obeticólico, o qual é um composto de fórmula (XVIII) no qual R1 é etila, R2 e R5a são ambos H, Y1 é - CH2CH2-, e R4 é C(O)OH.

[0135] Nos compostos de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI), valores mais adequados para R1 e R4 são conforme definido para a fórmula geral (I).

[0136] Em alguns compostos de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI), Y1 é uma ligação.

[0137] Em outros compostos de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI), Y1 é um grupo ligante de alquileno tendo de 1 a 15 átomos de carbono, mais convenientemente 1 a 12, 1 a 10 ou 1 a 8 átomos de carbono e opcionalmente substituído com um ou mais grupos R3 conforme definido acima. Tipicamente cada R3 é de modo independente halo, OR8 ou NR8R9; onde cada um de R8 e R9 é selecionado de modo independente entre H, metila ou etila, especialmente H ou metila.

[0138] Em alguns compostos adequados de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI), Y1 é um ligante de alquileno ou alquenileno não substituído tendo de 1 a 15 átomos de carbono, mais convenientemente 1 a 12, 1 a 10 ou 1 a 8 átomos de carbono.

[0139] Na etapa (i) acima, a conversão do composto de fórmula geral (I) para o composto de fórmula geral (XIX) por ser realizada por hidrogenação, geralmente por hidrogenação catalítica. Catalisadores adequados para a hidrogenação catalítica incluem um catalisador de paládio / carbono, paládio / carbonato de cálcio, paládio / óxido de alumínio, platina / paládio ou de níquel de Raney. A reação pode ser realizada em um solvente orgânico, o qual pode ser um solvente alcoólico tal como metanol, etanol ou isopropanol; acetato de etila; piridina; ácido acético; éter ciclopentil metílico (CPME) ou N,N- dimetilformamida (DMF). O solvente orgânico opcionalmente pode ser misturado com um cossolvente tal como acetona ou água e/ou uma base tal como trietilamina também pode ser adicionada.

[0140] A escolha do catalisador e do solvente afeta a proporção do produto requerido de fórmula geral (XIX):

para seu isômero de fórmula geral (XXX):

[0141] Também afeta a taxa de conversão do intermediário de fórmula (XXXI):

para o produto.

[0142] Mais convenientemente, é usado um catalisador de paládio / carbono ou paládio / carbonato de cálcio. Tipicamente, no catalisador o paládio está presente em uma quantidade de 5 a 10% em peso com respeito ao peso da matriz (onde a matriz é o carbono, o carbonato de cálcio etc.).

[0143] Solventes os quais dão proporções superiores de (XIX): (XXX) incluem metanol, etanol e DMF, particularmente metanol e DMF.

[0144] Quando metanol é usado como o solvente, pode ser usado isolado ou na presença de uma base tal como trietilamina. Convenientemente, a quantidade de trietilamina usada é uma quantidade subestequiométrica, tipicamente de 0,1 a 0,5 equivalente com respeito à quantidade de matéria-prima de fórmula geral (I).

[0145] Metanol na presença de trietilamina deu uma proporção particularmente elevada do produto requerido de fórmula geral (XIX) para isômero de fórmula geral (XXX).

[0146] Reações conduzidas com metanol como o solvente podem ser realizadas em uma temperatura de cerca de -30 a 25 °C e a temperatura tem pouco efeito sobre a proporção de (XIX): (XXX).

[0147] Quando DMF é usado como um solvente, pode ser misturado com um cossolvente tal como acetona, TBME, THF, acetonitrile ou acetona / água. Opcionalmente, o solvente contém uma base tal como trietilamina em uma quantidade subestequiométrica, tipicamente 0,1 a 0,5 equivalente com respeito à quantidade de matéria-prima de fórmula geral (I).

[0148] As reações conduzidas usando DMF como solvente parecem ser mais sensíveis à temperatura do que as reações realizadas em metanol e a proporção de (XIX) : (XXX) diminui com o aumento da temperatura. Convenientemente, portanto, a reação é conduzida em uma temperatura de -30 a 0 °C, mais convenientemente de -20 a -10°C.

[0149] Foi visto que a pressão de hidrogênio tem pouco efeito sobre a seletividade e portanto a pressão de hidrogênio convenientemente é de cerca de 1 atmosfera.

[0150] De modo similar a diluição não parece ter um impacto importante sobre a seletividade e portanto o solvente pode ser usado em qualquer quantidade conveniente.

[0151] A hidrogenação de um composto de fórmula (I) também vai reduzir quaisquer ligações de alqueno, caso presentes, no ligante Y.

[0152] Na etapa (ii) do processo estipulado acima, a reação de oxidação pode ser realizada usando qualquer método adequado. Um método adequado é uma oxidação de periodinano de Dess-Martin (1,1,1-triacetoxi-1,1-di-hidro-1,2-benziodoxol), a qual pode ser realizada em um solvente clorado tal como clorofórmio ou diclorometano em uma temperatura de cerca de 15 a 25 °C, convenientemente em temperatura ambiente.

[0153] Um método de oxidação alternativo é oxidação usando um hipoclorito, por exemplo, hipoclorito de sódio, sob condições acidíferas, por exemplo, proporcionado por ácido acético. A reação pode ser realizada em um solvente aquoso e em uma temperatura de 0 a 15 °C, mais geralmente a cerca de 0 a 10 °C.

[0154] Outros métodos de oxidação incluem uma reação de Jones usando dicromato de sódio ou, mais geralmente, trióxido crômico em ácido sulfúrico diluído. Este processo é conhecido por ser confiável para a conversão limpa de grupos de hidroxila dos ácidos biliares para os derivados ceto correspondentes (Bortolini et al, J. Org. Chem., 2002, 67, 5802). Alternativamente pode ser realizada oxidação usando TEMPO ((2,2,6,6-Tetrametil-piperidin-1-il)óxi) ou um derivado do mesmo.

[0155] A reação de epimerização da etapa (iii), convenientemente compreende tratar o composto de fórmula geral (XX) com uma base. O composto de fórmula geral (XX) pode ser dissolvido em um solvente alcoólico, opcionalmente misturado com água e contactado com uma base, por exemplo, hidróxido de sódio ou potássio ou um alcóxido de sódio ou potássio, tipicamente um etóxido.

[0156] No caso de compostos de fórmula geral (XX) nos quais R4 é C(O)OR10, onde R10 é C1-6 alquila ou benzila e onde é usada uma base forte tal como hidróxido de sódio ou potássio, a reação de epimerização da etapa (iii) pode ser acompanhada por hidrólise para proporcionar um composto de fórmula geral (XXI) no qual R4 é C(O)OH. .

[0157] Se, no composto de fórmula geral (XX), R2 e/ou R5 for um OH protegido, por exemplo, um grupo OC(O)OR14, onde R14 é conforme definido acima mas é especialmente C1-6 alquila ou benzila, este será removido durante a etapa de epimerização para proporcionar um composto de fórmula geral (XXI) no qual R2 e/ou R5b é OH. Outros grupos OH protegidos os quais são estáveis em condições básicas (por exemplo, um grupo OSi(R16)3 onde cada R16 é de modo independente conforme definido acima mas é especialmente C1-6 alquila ou fenila) podem ser removidos antes ou depois da etapa (iv).

[0158] Na etapa (iv), o agente redutor é tipicamente um hidreto, tal como boridreto de sódio o qual pode ser usado em um solvente tal como um mistura de tetraidrofurano e água. Tipicamente, esta reação é realizada sob condições básicas, por exemplo, na presença de uma base forte tal como hidróxido de sódio ou potássio e em uma temperatura de cerca de 0 a 110°C, mais geralmente de 60 a 100 °C. Um composto de fórmula geral (XVIII) no qual R4 é C(O)OH pode ser produzido pela redução de um composto de fórmula geral (XXI) no qual R4 é C(O)OH.

[0159] Compostos de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI) nos quais R4 é C(O)R10, C(O)NR10R11, S(O)R10, SO2R10, ou OSO2R10 podem ser preparados a partir dos compostos correspondentes nos quais R4 é C(O) OR10 por meio de reação com alguns reagentes apropriados usando métodos de conhecimento geral das pessoas versadas na técnica.

[0160] Compostos de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI) nos quais R4 é SO3R10 podem ser sintetizados a partir de compostos de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI) nos quais R4 é C(O)OH por meio dos métodos ensinados nos documentos de Patente Internacional No. WO/2008/002573, No. WO/2010/014836 e No. WO/2014/066819.

[0161] Portanto, um composto de fórmula (I) no qual R4 é C(O)OH pode ser reagido com uma C1-6 alcanoíla ou cloreto de benzoíla ou com um anidrido alcanoico C1-6 para proteger os grupos OH. O composto protegido pode ser em seguida reagido com um agente redutor tal como um hidreto, convenientemente boridreto de sódio de modo a reduzir o grupo de ácido carboxílico para OH. O grupo de álcool pode ser substituído por um halogênio, por exemplo, bromo ou iodo, usando o método de trifenil fosfina / imidazol / halogênio descrito por Classon et al, J. Org. Chem., 1988, 53, 6126-6130. O composto halogenado pode ser em seguida reagido com sulfito de sódio em um solvente alcoólico para proporcionar um composto com um substituinte SO3- Na+.

[0162] Compostos de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI) nos quais R4 é OSO3R10 podem ser obtidos por meio de reação do álcool obtidos a partir da redução do ácido carboxílico protegido com ácido clorosulfúrico na presença de uma base tal como trietilamina de modo a produzir o sal de trietilamônio protegido. Grupos de proteção podem ser removidos usando hidrólise de base conforme descrito acima. A redução do ácido carboxílico seguida por reação do álcool resultante com ácido clorosulfuroso produz um composto de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI) no qual R4 é OSO2R10.

[0163] Compostos de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI) nos quais R4 é C(O)NR10R11 podem ser preparados a partir do ácido carboxílico por meio de reação com uma amina de fórmula H-NR10R11 em um solvente adequado com aquecimento. Compostos de fórmulas gerais (XVIII) a (XXI) nos quais R4 é C(O)NR10R11 ou OSO3R10 também podem ser preparados por métodos similares aos descritos por Festa et al, J. Med. Chem., 2014, 57 (20), 8477-8495. Estes métodos também formam um aspecto da invenção.

[0164] Um composto de fórmula geral (XVIII) a (XXI) no qual R4 é C(O)R10 pode ser obtido por redução de um composto no qual R4 é C(O) OR10 usando um equivalente de hidreto de diisobutil alumínio (DIBAL) de modo a obter um aldeído no qual R4 é C(O)H (vide, por exemplo, o documento de Patente Internacional No. WO/2011/014661).

[0165] Alternativamente, o aldeído pode ser preparado por oxidação de um composto protegido no qual R4 é OH preparado conforme descrito acima. A oxidação pode ser oxidação de Swern realizada usando oxalil cloreto e dimetil sulfóxido seguido por trietilamina (vide, por exemplo, Xiang-Dong Zhou et al, Tetrahedron, 2002, 58, 10293-10299). Alternativamente, a oxidação pode ser realizada usando um agente oxidante tal como clorocromato de piridínio (PCC) conforme descrito por Carnell et al (J. Med. Chem., 2007, 50, 2700-2707).

[0166] Um composto de fórmula geral (I) no qual R4 é C(O)R10 onde R10 é diferente de hidrogênio pode ser obtido por métodos conhecidos, por exemplo, por meio da reação do aldeído no qual R4 é C(O)H com um reagente de Grignard adequado, seguida por oxidação. Os métodos referidos são de conhecimento geral das pessoas versadas na técnica.

Breve descrição dos desenhos

[0167] Figura 1 mostra o composto preparado conforme o Exemplo 3.

[0168] Figura 2 mostra o composto preparado conforme o Exemplo 16.

[0169] A invenção será agora descrita em maiores detalhes com referência aos exemplos.

[0170] Nos exemplos, foram usadas as seguintes abreviações: AcOH Ácido acético CPME Éter ciclopentil metílico DMF N,N-dimetilformamida EtOAc Acetato de etila EtOH Etanol IPA Álcool isopropílico MeOH Metanol NEt3 Trietilamina nBuOAc n-butil acetato TBME Éter t-butil metílico THF Tetra-hidrofurano TLC Cromatografia de camada fina Exemplos 1 a 4 - Síntese de éster etílico de ácido (6β, 5β, 7α)-6-etil-7- hidroxi-3-oxo-colan-24-oico a partir de Stigmasterol. Exemplo 1 - Síntese de éster etílico de ácido (22E)-3-oxo-4,6,22-cola- trien-24-oico

[0171] A matéria-prima, éster etílico de ácido (22E)-3-oxo-4,22-cola- dien-24-oico, foi preparada a partir de Stigmasterol de acordo com o método descrito por Uekawa et al em Biosci, Biotechnol, Biochem., 2004, 68, 1332-1337.

[0172] Éster etílico de ácido (22E)-3-oxo-4,22-coladien-24-oico (1,00 kg, 2,509 mol; 1 eq) foi carregado para um vaso de reação, seguido por AcOH (3 vol, 3,0 L) e tolueno (1 vol, 1,0 L) com agitação. Cloranil (0,68 kg, 2,766 mol; 1,1 eq) foi em seguida carregado e a mistura da reação foi aquecida até 100 °C e mantida nesta temperatura por 1 a 2 h (IPC por TLC sobre sílica, eluente 3:7 de EtOAc : Heptano; Material de Partida: Rf 0,50, Produto: Rf 0,46; visualizar com corante de anisaldeído). A mistura foi em seguida foi arrefecida em um banho de água e gelo até 10 °C e o sólido resultante foi filtrado. A torta do filtrado foi lavada com 3:1 de AcOH : Tolueno pré-misturado (4 x 0,5 vol) a 5 °C ± 4 °C e o filtrado foi concentrado a vácuo até 70 °C. O resíduo foi dissolvido em acetona (3 vol), em seguida 3% em peso / peso de NaOH aq. (10 vol) foi carregado gota a gota com agitação, mantendo a temperatura abaixo de 30 °C (exotérmica). A suspensão resultante foi arrefecida até 10 a 15 °C e agitada por 30 minutos. Os sólidos foram coletados por filtração e a torta do filtrado foi lavada com 1:1 de acetona : água pré-misturadas (1 x 2 vol e em seguida 3 x 1 vol). A torta do filtrado (sólido marrom) foi seca sob vácuo a 70 a 75 °C, 672 g (68% de produção). A caracterização do composto está de acordo com os dados publicados na literatura. Exemplo 2 - Éster etílico de ácido (6α, 7α, 22E)-6,7-epóxi-3-oxo-4,22- coladien-24-oico

[0173] A uma solução de éster etílico de ácido (22E)-3-oxo-4,6,22- colatrien-24-oico (58,0 g, 146,3 mmol) em EtOAc (1,0 L) em refluxo foi adicionado 80% de MMPP (hexa-hidrato de bis(monoperoxiftalato) de magnésio, 197,0 g, cerca de 318,6 mmol) em quatro porções iguais em intervalos de 30 min. A suspensão foi vigorosamente agitada em refluxo por 5 h e em temperatura ambiente por um adicional de 16 h. A reação foi em seguida aquecida até o refluxo e agitada por um adicional de 6 h. A mistura foi arrefecida até cerca de 50 °C e os sólidos foram filtrados e enxaguados com EtOAc a quente (200 mL). O filtrado foi subsequentemente lavado com 20% de NaHSO3 aq. (100 mL), 1M de NaOH aq. (100 mL em seguida 200 mL) e 10% de NaCl aq. (250 mL), seco sobre Na2SO4, filtrado e concentrado a vácuo. O resíduo (sólido amarelo) foi cristalizado a partir de um volume mínimo de EtOAc a 60 °C para proporcionar o produto de epóxido como cristais esbranquiçados / amarelos pálidos (25,7 g, 43% de produção, prismas). A caracterização do composto está de acordo com os dados publicados na literatura. Exemplo 3 - Síntese de éster etílico de ácido (6β, 7α, 22E)-6-etil-7- hidróxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico

Método 1:

[0174] A uma suspensão de CuI (1,40 g, 7,35 mmol) em éter dietílico (10 mL), arrefecida até -78 °C sob uma manta de argônio foi carregado EtLi (28,8 mL, 14,4 mmol, solução a 0,5 M em benzeno / cicloexano). A suspensão branca espessa formada foi deixada para aquecer até 0 °C, agitada por 5 minutos (formando uma solução escura) e arrefecida até -78 °C. Uma solução de éster etílico de ácido (6α, 7α, 22E)-6,7-epóxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico (1,00 g, 2,42 mmol) em éter dietílico / THF (24 mL, 3:1) foi preparada e carregada para o vaso contendo o organocuprato. THF (1 mL) foi usado para enxaguar o vaso que continha a solução do epóxido e este também foi carregado para o organocuprato. A mistura da reação foi deixada para aquecer até -4 °C durante 30 minutos depois de cujo tempo a reação foi considerada completa por TLC (sílica, 1:1 de EtOAc : heptano). Depois de um adicional de 30 minutos de agitação a cerca de -4 °C uma solução aq. sat. de NH4Cl foi carregada e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A mistura foi transferida para um funil de separação e a fase aquosa foi removida, junto com material sólido presente na interface. A fase orgânica foi lavada com 5 % em peso de NaHCO3 aq (2 x 50 mL) e água (1 x 50 mL). TBME (50 mL) foi usado para extrair a fase aquosa original da reação e as lavagens combinadas. As fases orgânicas combinadas foram concentradas e o resíduo foi purificado por cromatografia usando sílica (25 g) como a fase estacionária (gradiente de elutriação com 0 a 30 % de EtOAc em heptano) para proporcionar éster etílico de ácido (6β, 7α, 22E)-6-etil-7- hidroxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico (0,63 g, 59 %) (Figura 1).

[0175] 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 6,82 (1H, dd, J = 15,6, 8,9, C22H), 5,75 (1H, s, C4H), 5,74 (1H, d, J = 15,6, C23H), 4,17 (2H, q, J = 7,1, OCH2CH3), 3,72 (1H, br s, C7H), 2,52-2,25 (5H, m), 2,05-1,98 (2H, m), 1,82-1,10 (23H, m), 0,91 (3H, t, J = 7,4, CH3), 0,77 (3H, s, CH3). 13C RMN (100 MHz, CDCl3): δ = 199,2, 171,2, 167,1, 154,5, 128,4, 119,0, 71,9, 60,1, 55,3, 54,9, 49,9, 44,3, 42,7, 39,6, 39,1, 38,3, 37,4, 35,6, 34,0, 28,0, 26,3, 23,6, 20,8, 19,7, 19,2, 14,2, 12,8, 12,0; (IR) Vmax(cm-1): 3467, 2939, 2870, 1716, 1651, 1457, 1268, 1229, 1034; HRMS (ESI-TOF) m/z: (M+H)+ calculado para C28H43O4 443,3161; encontrado: 443,3156. ponto de fusão = 59,4 - 62,9 °C

Método 2

[0176] ZnCl2 (32,84 g, 240,9 mmol) foi seco sob vácuo com lenta agitação a 180 °C por 2 h. O frasco foi arrefecido até a temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio e o resíduo foi dissolvido em THF (520 mL) e transferido através de uma cânula para dentro de um frasco de reação de três gargalos equipado com stirrer mecânico e sonda de temperatura. A solução foi arrefecida em um banho de gelo até 0 a 3 °C e uma solução a 3M de EtMgBr em Et2O (80 mL, 240,0 mmol) foi adicionada gota a gota durante 20 minutos, mantendo a temperatura interna abaixo de 10 °C. Foi observada a formação de um precipitado branco (espécie de zincato ativo) depois da adição de cerca de 1/3 da solução de Grignard. A mistura foi agitada por 1,2 h a 0 °C antes de uma solução do epóxido éster etílico de ácido (6α, 7α, 22E)-6,7-epóxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico (43,0 g, 104,2 mmol) em THF (300 mL) ser adicionada gota a gota, mantendo a temperatura interna abaixo de 10 °C. CuCl sólido (1,03 g, 0,104 mmol) foi em seguida adicionado em duas porções iguais com vigorosa agitação. Depois de 10 minutos o banho de arrefecimento foi removido e a agitação continuou em temperatura ambiente por um adicional de 1,2 h. A reação foi extinta por adição gota a gota de NH4Cl sat. aq. (800 mL) a < 15 °C e foi agitada por 0,5 h. A mistura foi filtrada e o sólido foi enxaguado com TBME (150 mL). As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com TBME 2x250 mL. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com 10% de NaCl aq. (2x200 mL), secos sobre Na2SO4, filtrados e concentrados a vácuo para proporcionar 43,7 g do éster etílico de ácido (6β, 7α, 22E)-6-etil-7-hidroxi-3-oxo-4,22- coladien-24-oico bruto como uma espuma amarela.

Método 3

[0177] A uma solução de ZnCl2 em THF (0,5 M, 8,7 mL, 4,85 mmol, 0,9 eq) foi carregada THF anídrica (8,0 mL) e o conteúdo foi em seguida arrefecido até -25 °C. Uma solução de EtMgBr em TBME (1,0 M, 8,7 mL, 8,70 mmol, 1,8 eq) foi adicionada durante 30 minutos e a mistura foi agitada por 45 minutos a -25 °C. CuCl sólido (24 mg, 0,49 mmol, 0,05 eq) foi adicionado em uma porção e uma solução de éster etílico de ácido (6α, 7α, 22E)-6,7-epóxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico (2,0 g, 4,85 mmol) em THF (8,0 mL) foi adicionada gota a gota durante 30 minutos. O CuCl sólido remanescente (24 mg, 0,49 mmol, 0,05 eq) foi adicionado a meio caminho da adição de éster etílico de ácido (6α, 7α, 22E)-6,7-epoxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico. A reação foi agitada por 1 h a -25 °C, (TLC 1:1 a Heptano : EtOAc, visualizado por UV e desenvolvida usando corante de Molibdato de Amônio Cérico) e em seguida um adicional de EtMgBr em TBME (1,0 M, 2,9 mL, 2,91 mmol, 0,6 eq) foi adicionado durante 10 minutos. A reação foi agitada por 0,5 h a -25 °C e em seguida extinta por meio da adição de NH4Cl sat. aq. (5 mL), mantendo a temperatura abaixo de -5 °C. Os sais inorgânicos foram filtrados, enxaguados com TBME e as fases do filtrado foram separadas. A camada aquosa foi extraída com TBME e em seguida os extratos orgânicos combinados foram lavados com NH4CI sat. aq. (3 x 5 mL) e 10% de salmoura (3 x 6 mL). A fase orgânica foi concentrada a vácuo a 40 °C para proporcionar éster etílico de ácido (6β, 7α, 22E)- 6-etil-7-hidroxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico bruto como uma espuma amarela (1,91 g).

Método 4

[0178] A uma solução de ZnCl2 em THF (0,5 M, 8,7 mL, 4,85 mmol, 0,9 eq) foi carregada THF anídrica (8,0mL) e o conteúdo foi em seguida aquecido até 40 °C. Uma solução de EtMgBr em TBME (1,0 M, 8,7 mL, 8,70 mmol, 1,8 eq) foi adicionada durante 30 minutos e a mistura foi agitada por 45 minutos a 40 °C. CuCl sólido (24 mg, 0,49 mmol, 0,05 eq) foi adicionado em uma porção e uma solução de éster etílico de ácido (6α, 7α, 22E)-6,7-epóxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico (2,0 g, 4,85 mmol) em THF (8,0 mL) foi adicionada gota a gota durante 30 minutos. O CuCl sólido remanescente (24 mg, 0,49 mmol, 0,05 eq) foi adicionado a meio caminho da adição de éster etílico de ácido (6α, 7α, 22E)-6,7-epóxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico. A reação foi agitada por 1 h a 40 °C, (TLC 1:1 de Heptano : EtOAc, visualizado por UV e desenvolvida usando corante de Molibdato de Amônio Cérico) e em seguida extinta por meio da adição gota a gota de NH4Cl sat. aq. (5 mL). Os sais inorgânicos foram filtrados, enxaguados com TBME e as fases do filtrado foram separadas. A camada aquosa foi extraída com TBME e em seguida os extratos orgânicos combinados foram lavados com NH4CI sat. aq. (3 x 5 mL) e 10% de salmoura (3 x 6 mL). A fase orgânica foi concentrada a vácuo a 40 °C para proporcionar éster etílico de ácido (6β, 7α, 22 E)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-4,22-coladien-24- oico bruto como uma espuma amarela (2,08 g).

Método 5

[0179] A uma solução de ZnCl2 em THF (0,5 M, 8,7 mL, 4,85 mmol, 0,9 eq) foi carregada THF anídrica (8,0 mL) e o conteúdo foi em seguida arrefecido até -15 °C. Uma solução de EtMgBr em THF (1,0 M, 8,7 mL, 8,70 mmol, 1,8 eq) foi adicionada durante 30 minutos e a mistura foi agitada por 45 minutos a -15 °C. CuCl sólido (24 mg, 0,49 mmol, 0,05 eq) foi adicionado em uma porção e uma solução de éster etílico de ácido (6α, 7α, 22E)-6,7-epoxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico (2,0 g, 4,85 mmol) em THF (8,0 mL) foi adicionada gota a gota durante 30 minutos. O CuCl sólido remanescente (24 mg, 0,49 mmol, 0,05 eq) foi adicionado a meio caminho da adição de éster etílico de ácido (6α, 7α,22E)-6,7-epóxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico. A reação foi agitada por 1 h a -15 °C, (TLC 1:1 de Heptano : EtOAc, visualizado por UV e desenvolvida usando corante de Molibdato de Amônio Cérico) e em seguida EtMgBr adicional em THF (1,0 M, 4,35 mL, 4,36 mmol, 0,9 eq) foi adicionado durante 15 minutos e em seguida foi extinta por meio da adição gota a gota de NH4Cl sat. aq. (5 mL). Os sais inorgânicos foram filtrados, enxaguados com TBME e as fases do filtrado foram separadas. A fase aquosa foi extraída com TBME e em seguida os extratos orgânicos combinados foram lavados com NH4CI sat. aq. (3 x 5 mL) e 10% de salmoura (3 x 6 mL). A fase orgânica foi concentrada a vácuo a 40 °C para proporcionar éster etílico de ácido (6β, 7α, 22E)- 6-etil-7-hidroxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico bruto como uma espuma amarela (1,94 g). Exemplo 4 - Síntese de éster etílico de ácido (6β, 5βα 7α)-6-etil-7- hidróxi-3-oxo-colan-24-oico

Método 1

[0180] A uma suspensão de 10 % em peso de Pd/C (50% a úmido, 20 mg, 8,6 mol%) em DMF (2 mL) foi adicionada uma solução de éster etílico de ácido (6β, 7α, 22E)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-4,22-coladien-24- oico (50 mg, 0,11 mmol) em DMF (3 mL) e a mistura da reação foi arrefecida até 0 °C. O frasco foi evacuado e em seguida preenchido com hidrogênio três vezes com vigorosa agitação. Depois de 3 h o frasco foi evacuado e em seguida preenchido com argônio e a mistura foi filtrada através de filtro de seringa. A mistura foi particionada entre TBME (30 mL) e H2O (20 mL). A fase orgânica foi seca (Na2SO4) e concentrada a vácuo. O produto bruto (50 mg) foi uma mistura a 14:1 de isômeros 5β : 5α (analisados por 1H RMN) de éster etílico de ácido (6β, 5β, 7a)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-colan-24-oico, produção de 92%.

[0181] 1H RMN (700 MHz, CDCl3): δ = 4,12 (2H, q, J = 7,1, OCH2CH3), 3,71 (1H, br s, C7H), 3,34 (1H, dd, J = 15,5, 13,6, C4H), 2,39-2,32 (2H, m), 2,24-2,20 (1H, m), 2,14-2,09 (2H, m), 2,03-1,91 (4H, m), 1,83-1,79 (2H, m), 1,68-1,63 (2H, m), 1,58 (1H, s), 1,55-1,12 (19H, m), 1,04 (3H, s), 0,95-0,93 (6H, m), 0,88 (1H, J = 7,0), 0,71 (3H, s). 13C RMN (100 MHz, CDCl3): δ = 213,5, 174,2, 72,1, 60,2, 55,9, 50,2, 49,8, 47,0, 46,7, 42,7, 39,5, 37,7, 36,3, 36,0, 35,7, 35,3, 34,2, 31,3, 31,0, 28,1, 27,7, 24,4, 23,8, 20,8, 18,3, 14,2, 13,9, 11,8. (IR) Vmax(cm-1):3514, 2939, 2870, 1710, 1462, 1377, 1159, 1099, 1032; HRMS (ESI-TOF) m/z: (M-H2O+H)+ calculado para C28H45O3 429,3369; encontrado: 429,3363.

Método 2

[0182] Éster etílico de ácido (6β, 7α, 22E)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo- 4,22-coladien-24-oico (20,0 g) foi dissolvido em DMF (400 mL) e adicionado sob argônio a 10 % em peso de Pd/C sólido (50% a úmido, 10,0 g). A mistura foi arrefecida em um banho de gelo e sal até aproximadamente -15 °C e o frasco foi evacuado e em seguida preenchido com hidrogênio três vezes com vigorosa agitação. A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio por 6 h e em seguida o frasco foi evacuado, preenchido com argônio e filtrado através de um bloco de celite. O catalisador foi enxaguado com 400 mL de TBME. O filtrado foi lavado com 10% de NaCl aq. (400 mL) e a fase aquosa foi extraída com TBME (400 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com 10% de NaCl aq. (3 x 200 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo para proporcionar éster etílico de ácido (6β, 5β, 7α)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-colan-24-oico bruto (20,0 g, proporção de cerca de 28:1 de 5Hβ : 5Hα) como um óleo amarelo pálido.

Método 3

[0183] 10% de Pd/C foi carregado para um vaso de reação encamisado e de aço inoxidável sob uma atmosfera de argônio; DMF foi adicionado (20 mL), seguido por uma solução de éster etílico de ácido (6β, 7α, 22E)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-4,22-coladien-24-oico bruto do Exemplo 3 (aproximadamente 72,6 mmol) em DMF (130 mL). A mistura da reação foi arrefecida até -25 °C (durante aproximadamente 40 minutos) com vigorosa agitação (1200 rpm). O vaso de reação foi evacuado e carregado com hidrogênio (10 a 12 bar) três vezes. A mistura foi agitada por 16 h sob uma atmosfera de hidrogênio (10 a 12 bar). O vaso foi evacuado, purgado com argônio e aquecido até 20 °C com agitação. TLC da mistura da reação (1:1 de Heptano : EtOAc, desenvolvida usando Molibdato de Amônio Cérico ou dip de vanilina, valores de Rf: matéria-prima = 0,42, produto = 0,67) indicou consumo completo da matéria-prima. A suspensão foi diluída com CH3CN (120 mL) e H2O (30 mL) e a suspensão foi filtrada através de um papel filtro GFA duplo e a torta do filtrado foi enxaguada com CH3CN (60 mL). A mistura foi analisada por telescópio para a próxima etapa sem purificação adicional. A mistura continha aproximadamente 5% do isômero 5H-α.

Otimização

[0184] A reação de hidrogenação deste exemplo prossegue através do intermediário mostrado abaixo e produz tanto o composto 5Hβ requerido quanto seu isômero 5Hα. Foi realizada uma traigem de solvente e catalisador para determinar as condições de reação que levaram à maior produção e às maiores proporções de isômero 5Hβ para isômero 5Hα.

[0185] A triagem de solvente foi realizada usando 10 % em peso de catalisador de Pd/C e as reações foram realizadas em temperatura ambiente sob pressão atmosférica de hidrogênio. A reação realizada em MeOH na presença de NEt3 foi mais seletiva do que a reação realizada em MeOH puro, enquanto que a adição de 10% de H2O diminuiu a seletividade de 5βH. A reação em DMF proporcionou a melhor proporção de β:α. A reação em piridina proporcionou baixa conversão para o produto requerido com essencialmente matéria- prima e intermediário presentes na mistura.

[0186] As reações em DM F e MeOH foram testadas em uma gama de temperaturas. Para as reações realizadas em DMF, a temperatura tem substancial impacto sobre a seletividade (a seletividade diminui com o aumento da temperatura), ao passo que foi observada pouca diferença para as reações em MeOH.

[0187] As reações em DMF e MeOH foram testadas em uma série de catalisadores de Pd a 5 e 10 % em peso disponíveis comercialmente, sobre suporte de carbono, carbonato de cálcio, sulfato de bário e óxido de alumínio. As reações foram realizadas em 10 volumes de solvente a -15 °C sob pressão atmosférica de gás hidrogênio. Para as reações realizadas em DMF, a pressão tem menor impacto sobre a seletividade do que a temperatura. O efeito de diluição sobre a seletividade é desprezível. Exemplos 5 a 14 - Síntese de éster etílico de ácido (6β, 5β, 7α)-6-etil- 7-hidróxi-3-oxo-colan-24-oico a partir do ácido desoxicólico Exemplo 5 - Síntese de éster metílico de ácido (3α, 5β)-3-acetóxi-12- oxo-colan-24-oico

[0188] A uma solução de ácido desoxicólico (500 g, 1,27 mol) em MeOH (1,5 L) foi carregado H2SO4 (0,68 mL, 12,7 mmol) e a reação foi aquecida até 64 °C até estar completa. A reação foi arrefecida até 55 °C e piridina (2,06mL, 25,4 mmol) foi carregada. MeOH (800 mL) foi removido por destilação e a reação foi arrefecida até 50 °C. EtOAc (500 mL) foi carregado e a destilação continuou. Esta coevaporação foi repetida até o conteúdo de MeOH ser <0,5%. A reação foi arrefecida até 40 °C e EtOAc (1,0 L) foi carregado seguido por Piridina (134 mL, 1,65 mol) e DMAP (1,1 g, 8,89 mmol). Anidrido acético (150 mL, 1,58 mmol) foi adicionado gota a gota e o vaso de reação foi agitado a 40 °C até completar. A reação foi arrefecida até 22 °C e 2M de H2SO4 aq. (1500 mL) foi adicionado mantendo a temperatura abaixo de 25 °C. A fase aquosa foi removida e a fase orgânica foi lavada com água (1,2 L), solução sat. aq. de NaHCO3 (1,2 L x 2) e água (1,2 L). AcOH (1,0 L) foi carregada para a camada orgânica, seguida por NaBr (6,6 g, 63,5 mmol). Solução aq. a 16,4% de NaOCl (958 mL, 2,54 mol) foi carregada gota a gota mantendo a reação temperatura abaixo de 25 °C. A reação foi agitada até completar, em seguida foi arrefecida até 10 °C e agitada por 90 minutos. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração, lavados com água (3 x 500 mL) e a torta do filtrado foi seca sob vácuo a 40 °C. Os sólidos foram cristalizados a partir de MeOH (10 vol) para proporcionar éster metílico de ácido (3α, 5β)-3-acet0xi-12-oxo-colan-24-oico como um sólido esbranquiçado (268 g). Exemplo 6 - Síntese de éster metílico de ácido (3α, 5β)-3-acet0xi- colan-24-oico

[0189] Éster metílico de ácido (3α, 5β)-3-acetóxi-12-oxo-colan-24- oico (268 g, 0,6 mol) foi carregado para o vaso de reação sob argônio, seguido por AcOH (1,8 L). Tosil hidrazida (190 g, 1,02 mol) foi em seguida adiionada mantendo a reação temperatura em 25 °C. A reação foi agitada até completar e em seguida NaBH4 (113,5 g, 3,00 mol) foi carregado em porções mantendo a temperatura abaixo de 25 °C. A mistura da reação foi agitada até completar e em seguida extinta por meio da adição gota a gota de água (1,34 L) mantendo a temperatura abaixo de 25 °C. A mistura da reação foi agitada por 30 minutos, os sólidos resultantes foram coletados por filtração, lavados com água (3 x 270 mL) e o sólido foi seco sob vácuo a 40 °C. Os sólidos foram cristalizados a partir de MeOH (3 vol) para proporcionar éster metílico de ácido (3α, 5β)-3-acetóxi-colan-24-oico como um sólido esbranquiçado (214,5g). Exemplo 7 - Síntese de ácido (3α, 5β)-3-hidr0xi-colan-24-oico (Ácido litocólico)

[0190] A uma solução de éster metílico de ácido (3α, 5β)-3-acet0xi -colan-24-oico (214,5 g, 0,50 mol) em IPA (536 mL) foi carregado água (536 mL) e 50% em peso / peso de NaOH (99 g, 1,24 mol). A reação foi aquecida até 50 °C e agitada até completar. 2M de H2SO4 foi carregado lentamente com vigorosa agitação até ter sido obtido um pH 2 a 3 e em seguida a reação foi arrefecida até 20 °C. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração, lavados com água (3 x 215 mL) e o sólido resultante foi seco sob vácuo a 40 °C para proporcionar ácido (3α, 5β)-3-hidr0xi-colan-24-oico (176,53 g) Exemplo 8 - Síntese de éster etílico de ácido (5β)-3-oxocolan-24-oico

[0191] A uma solução de ácido (3α, 5β)-3-hidróxi-colan-24-oico (10 g, 26,5 mmol) em EtOH (50 mL) foi carregado H2SO4 a 96% (14 μL, 0,27 mmol) e a mistura da reação foi em seguida aquecida até o refluxo por 16 h. Em seguida foi carregado piridina, a mistura foi agitada por 30 minutos e concentrada a vácuo a 40 °C. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (30 mL) e AcOH (10 mL) e NaBr (136 mg, 1,33 mmol) foi em seguida carregado. A solução foi arrefecida até 5 °C e NaOCl a 9% (27 mL, 39,8 mmol) foi carregado gota a gota mantendo a temperatura abaixo de 10 °C. A suspensão resultante foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada por 1 h. A mistura da reação foi arrefecida até 0 °C por 10 minutos, os sólidos foram coletados por filtração e lavados com água (3 x 3 vol). O sólido resultante foi seco sob vácuo a 40 °C para proporcionar éster etílico de ácido (5β)-3-oxocolan- 24-oico (7,83 g). Exemplo 9 - Síntese de éster etílico de ácido (4α, 5β)-3-oxo-4-bromo- colan-24-oico

[0192] A uma solução de éster etílico de ácido (5β)-3-oxocolan-24- oico (8,0 g, 19,9 mmol) em AcOH (84 mL) foi adicionado Br2 em AcOH (16 mL, 21,9 mmol) gota a gota durante 15 minutos. A mistura da reação foi agitada por 10 minutos, em seguida diluída com EtOAc (250 mL), lavada com água (2 x 200 mL) e concentrada a vácuo a 40 °C. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna (30% de Heptano : EtOAc) e concentrada a vácuo a 40 °C para proporcionar éster etílico de ácido (4α, 5β)-3-oxo-4-bromo-colan-24-oico como um sólido cristalino pálido (7,49g). Exemplo 10 - Síntese de éster etílico de ácido 3-oxo-4-colen-24-oico

[0193] A uma solução de éster etílico de ácido (4α, 5β)-3-oxo-4- bromo-colan-24-oico (4,0 g, 8,33 mmol) em DMF (40 mL) foi carregado Li2CO3 (4,0 g, 1 massa eq) e LiBr (2,0 g, 0,5 massa eq). A mistura foi aquecida até 150 °C por 2 h em seguida foi deixada para esfriar até a temperatura ambiente e vertida sobre uma mistura de água e gelo (200 g, 50 volumes) e AcOH (8 mL). A suspensão resultante foi agitada por 15 minutos, os sólidos foram coletados por filtração e em seguida purificados por cromatografia de coluna (30% de Heptano : EtOAc) para proporcionar éster etílico de ácido 3-oxo-4-colen-24-oico como um sólido cristalino pálido (1,68 g). Exemplo 11 - Síntese de éster etílico de ácido 3-oxo-4,6-coladien-24- oico

[0194] Éster etílico de ácido 3-oxo-4-colen-24-oico (2,23 g, 5,57 mmol) foi carregado para um vaso de reação, seguido por AcOH (6,7 mL) e tolueno (2,23 mL). Cloranil (1,5 g, 6,13 mmol) foi carregado e a mistura da reação foi aquecida até 100 °C por 2 h (IPC por TLC, 3:7 de EtOAc : Heptano; visualizado com corante de Anisaldeído). A mistura da reação foi arrefecida até 10 °C por 10 minutos e o sólido resultante foi removido por filtração. A torta do filtrado foi lavada com DCM (9 vol) e o filtrado resultante foi em seguida concentrado a vácuo a 40 °C. O resíduo foi dissolvido em acetona (9 vol) e em seguida 3% em peso / peso de NaOH aq. (27 vol) foi adicionado gota a gota mantendo a temperatura abaixo de 30 °C. A mistura resultante foi arrefecida em um banho de gelo por 10 minutos e os sólidos foram coletados por filtração. A torta do filtrado foi lavada com água (2 x 9 vol) e acetona : água a 2:1 (4 vol). Purificação por cromatografia de coluna (0 a 30% de Heptano : EtOAc) proporcionou éster etílico de ácido 3-oxo-4,6- coladien-24-oico como um sólido cristalino pálido (1,45 g) Exemplo 12 - Síntese de éster etílico de ácido (6α, 7a)-6,7-epóxi-3- oxo-4-colen-24-oico

[0195] Éster etílico de ácido 3-oxo-4,6-coladien-24-oico (1,37 g, 4,27 mmol) foi carregado para um vaso de reação, seguido por BHT (23 mg, 0,13 mmol), EtOAc (11mL) e água (3,4 mL) com agitação. A solução foi aquecida até 80 °C e em seguida uma solução de mCPBA 70% (1,5 g, 7,51 mmol) em EtOAc (7,5 mL) foi adicionada gota a gota durante 15 minutos. A mistura da reação foi agitada a 70 °C por 2 h (IPC por TLC, 3:7 de EtOAc : Heptano; visualizado com corante de Anisaldeído), arrefecida até a temperatura ambiente e em seguida lavada com 1M de NaOH aq. (2 x 20 mL) seguido por 10% de NaS2O3 aq. : 2% de NaHCO3 (3 x 20 mL). As fases orgânicas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas a vácuo a 40 °C. Os sólidos brutos foram cristalizados a partir de EtOAc (3 vol) a 60 °C para proporcionar um sólido esbranquiçado o qual foi seco sob vácuo a 40 °C para proporcionar éster etílico de ácido (6α, 7α)-6,7-epoxi-3-oxo-4-colen-24- oico (0,90 g). Exemplo 13 - Síntese de éster etílico de ácido (6β,7α)-6-etil-7-hidr0xi- 3-oxo-4-colen-24-oico

[0196] ZnCl2 (600 mg, 4,25 mmol) foi carregado para um vaso de reação e seco sob vácuo a 180 °C por 1 h. O vaso de reação foi arrefecido até a temperatura ambiente, THF (15 mL) foi carregado e o conteúdo do vaso de reação foi arrefecido até 3 °C. Uma solução de 3M de EtMgBr em Et2O (1,5 mL, 4,25 mmol) foi carregada para o vaso de reação durante 40 minutos mantendo a temperatura abaixo de 5 °C. A mistura da reação foi em seguida agitada por 1 h. Éster etílico de ácido (6α, 7α)-6,7-epóxi-3-oxo-4-colen-24-oico (0,80 g, 1,93 mmol) em THF (6 mL) foi carregado para o vaso de reação durante 40 minutos, mantendo a temperatura abaixo de 5 °C. CuCl (20 mg, 0,19 mmol) foi carregado em uma porção e a reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 h (IPC por TLC, 3:7 de EtOAc : Heptano; visualizado com corante de Anisaldeído). A mistura da reação foi arrefecida em um banho de gelo e NH4Cl sat. aq. foi adicionado gota a gota, mantendo a temperatura abaixo de 10 °C. A mistura da reação foi filtrada e a torta do filtrado foi lavada com TBME (12,5 vol). A fase orgânica do filtrado foi separada e a fase aquosa foi extraída com TBME (2 x 12,5 vol). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com 5% de NaCl (3 x 12,5 vol) e concentradas a vácuo a 40 °C. Exemplo 14 - Síntese de éster etílico de ácido (6β, 5β, 7α)-6-etil-7- hidróxi-3-oxo-colan-24-oico

[0197] 10% de Pd/C (70 mg) foi carregado para um vaso de reação sob uma atmosfera de argônio seguido pelo material bruto do Exemplo 13 em DMF (14,6 mL). A mistura foi arrefecida até -10 °C e o vaso de reação foi evacuado e em seguida preenchido com hidrogênio três vezes com vigorosa agitação. A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio por 24 h enquanto mantendo a temperatura em -10 °C (IPC por TLC, eluente 1:1 de EtOAc : Heptano; visualizado com corante de Anisaldeído) em seguida o frasco foi evacuado, preenchido com argônio e filtrado através de um bloco de celite e enxaguado com DMF (7 mL). 10% de Pd/C (70 mg) foram recarregados para o vaso de reação sob uma atmosfera de argônio seguido pela mistura da reação de DMF. A mistura foi arrefecida até aproximadamente -10 °C e o vaso de reação foi evacuado e em seguida preenchido com hidrogênio três vezes com vigorosa agitação. A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio por 24 h a -10 °C (IPC por TLC, 1:1 de EtOAc : Heptano; visualizado com corante de Anisaldeído) em seguida o frasco foi evacuado, preenchido com argônio e filtrado através de um bloco de celite e lavado com TBME (62,5 vol., 50 mL). O filtrado foi lavado com 10% de NaCl aq. (4 x 25 vol), seco sobre Na2SO4, filtrado e concentrado a vácuo a 40 °C. Purificação por cromatografia de coluna (SiO2, 0 a 30% de Heptano : EtOAc) proporcionou éster etílico de ácido (6β, 5β, 7a)-6-etil-7-hidróxi- 3-oxo-colan-24-oico (0,17 g). O produto foi idêntico ao material obtido a partir do éster etílico de ácido (6β, 7α, 22E)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-4,22- coladien-24-oico de origem vegetal (vide o Exemplo 4). Exemplos 15 a 17 - Conversão de éster etílico de ácido (6β, 5β, 7α)-6- etil-7-hidróxi-3-oxo-colan-24-oico para ácido (3α, 5β, 6α, 7α)-6-etil-3,7- di-hidróxi-colan-24-oico Exemplo 15 - Síntese de éster etílico de ácido (6β, 5β)-3,7-dioxo-6- etil-colan-24-oico

Método 1

[0198] Uma solução de reagente de Jones preparada a partir de CrO3 (1,10 g, 11 mmol) em H2SO4 (1,4 mL) e produzida até 5 mL com água foi carregada gota a gota a uma solução de éster etílico de ácido (6β, 5β, 7α)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-colan-24-oico (0,18 g, 0,40 mmol) em acetona (10 mL) até persistir uma cor laranja. A mistura da reação foi extinta com IPA (1 mL), filtrada através de um filtro de seringa de náilon de 0,45 μm e o filtro foi lavado com acetona (10 mL). O filtrado e a lavagem combinados foram concentrados, o resíduo foi dissolvido em EtOAc (20 mL) e lavado com água (2 x 10 mL). A fase aquosa foi extraída com EtOAc (20 mL), as fases de EtOAc combinadas foram concentradas e o resíduo foi dissolvido e concentrado a partir de tolueno (20 mL) e em seguida acetona (20 mL) para proporcionar um óleo claro contendo éster etílico de ácido (6β, 5β, 7α)-6-etil-7-hidróxi- 3,7-dioxo-colan-24-oico (185 mg).

[0199] 1H RMN (700 MHz, CDCl3): δ = 4,12 (2H, q, J = 7,1), 2,42 (1H, t, J = 11,4), 2,38-2,17 (6H, m), 2,09-1,74 (9H, m), 1,68-1,11 (17H, m), 0,93 (3H, d, J = 6,5), 0,85 (3H, t, J = 7,4), 0,72 (3H, s). 13C RMN (100 MHz, CDCl3): δ = 214,5, 211,4, 174,0, 60,1, 57,1, 55,1, 50,3, 48,4, 47,3, 44,9, 43,6, 43,1, 39,2, 35,8, 35,2 (x2), 34,9, 31,3, 30,9, 28,1, 24,6, 23,7, 23,4, 21,7, 18,3, 14,2, 12,6, 12,2. (IR) Vmax(cm-1): 2950, 2872, 1709, 1461, 1377, 1304, 1250, 1177, 1097, 1034;HRMS (ESI-TOF) m/z: (M+H)+ calculado para C28H45O4 445,3318; encontrado: 445,3312;

Método 2

[0200] A uma solução de éster etílico de ácido (6β, 5β, 7α)-6-etil-7- hidróxi-3-oxo-colan-24-oico (41,0 g massa bruta) em CH2Cl2 anídrico (600 mL) a 0 °C foi adicionado DMP sólido (34,0 g, 80,2 mmol) em porções durante 20 minutos (exotérmica). A mistura foi agitada a 0 a 5 °C por 2 h, em seguida uma porção adicional de DMP (4,0 g, 9,4 mmol) foi acrescentada e a reação foi agitada a 0 a 5 °C por 1 h. A mistura foi filtrada através de um filtro de GFA e o sólido foi enxaguado com CH2Cl2 (50 mL), o filtrado foi agitado vigorosamente com 10% de Na2S2O3 aq. e 2% de NaHCO3 aq. (100 mL) por 20 minutos. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2Cl2 (2 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com 1M de NaOH (100 mL). A mistura foi diluída com CH2Cl2 (300 mL) e as fases foram separadas. A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo (óleo marrom turvo) foi dissolvido em TBME (600 mL) e lavado com 1M de NaOH (100 mL) e NaCl (3 x 100 mL). A fase orgânica foi concentrada a vácuo para proporcionar um óleo escorrendo amarelo-escuro, massa bruta 38,1 g. O óleo foi dissolvido em EtOH (400 mL) e agitado com carvão ativado (10 g) a 50 °C, a mistura foi em seguida filtrada, o carvão foi enxaguado com EtOH (200 mL) e o filtrado foi concentrado a vácuo para proporcionar éster etílico de ácido (6β, 5β)-3,7-dioxo-6-etil-colan-24-oico como um óleo amarelo (35,9 g).

Método 3

[0201] Uma solução de éster etílico de ácido (6β, 5β, 7α)-6-etil-7- hidróxi-3-oxo-colan-24-oico (218 mmol) em DMF (450 ml), CH3CN (540 mL) e H2O (90 mL) foi carregada para dentro de um vaso de 2 L e arrefecida até 9 °C, em seguida AcOH (180 mL) foi carregado, seguido por NaBr (4,1 g). Uma solução de hipoclorito de sódio (~10,5% em peso / volume, 450 mL) foi adicionada gota a gota durante 1,5 h, mantendo a temperatura interna em 5 a 6 °C, em seguida a mistura foi agitada por 5 h a 7 °C. TLC da mistura da reação indicou consumo completo da matéria-prima (IPC por TLC, eluente EtOAc / heptano a 3:7, Rf para (éster etílico de ácido 6β, 5β, 7a)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo- colan-24-oico = 0,34; éster etílico de ácido (6β, 5β)-3,7-dioxo-6-etil- colan-24-oico = 0,45). Uma solução aq. a 10% em peso / volume de Na2SO3 (360 mL) foi carregada gota a gota com vigorosa agitação, mantendo a temperatura interna em 8 a 10 °C, em seguida H2O (270 mL) foi adicionado gota a gota e a mistura foi agitada a 5 °C por 16 h. O sólido foi filtrado e lavado com H2O (720 mL). O sólido foi em seguida dissolvido em TBME (1,1 L) e subsequentemente lavado com um NaHCO3 aq. (300 mL) e 10% de salmoura (300 mL). A fase orgânica foi em seguida agitada com carvão ativado (10 g) por 20 minutos a 40 °C, tratada com MgSO4 anídrico (5 g) e filtrada através de papel filtro GFA, a torta do filtrado foi enxaguada com TBME (50 mL) e o filtrado foi concentrado a vácuo para proporcionar éster etílico de ácido (6β, 5β)-3,7-dioxo-6-etil-colan-24-oico como um óleo marrom- claro o qual solidifica em repouso (82,7 g). Exemplo 16 - Síntese de ácido (6α, 5β)-3,7-dioxo-6-etil-colan-24-oico

[0202] Dentro de um frasco de 500 mL foi carregado 0,5 vol de 0,5 M de NaOH (9 mL) seguido por éster etílico de ácido (6β, 5β)-3,7- dioxo-6-etil-colan-24-oico do Exemplo 15 (18,00 g, 1 eq) e em seguida IPA (180 mL, 10 vol) (a carga de NaOH inicial foi para evitar a possibilidade da formação de C3-cetal). A mistura foi aquecida até 60 ± 2 °C e mantida até ser obtida uma solução (10 a 15 minutos). O restante 0,5 M da solução de NaOH (171 mL, 9,5 vol) foi carregado durante 20 minutos e em seguida a reação foi agitada por um adicional de 3,5 h a 60 ± 2 °C. O IPA foi removido sob vácuo a 60 °C e em seguida 2M de HCl (8 mL) foi carregado até pH 9. EtOAc foi carregado (90 mL, 5 vol) seguido por 2M de HCl (54 mL) até pH 1. Vigorosa mistura foi seguida por separação de fases. A fase aquosa foi extraída de volta com EtOAc adicional (90 mL, 5 vol) e em seguida as fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (54 mL, 3 vol), seguido por três porções de 10% de NaCl aq. (3 x 54 mL, 3 x 3 vol). A fase orgânica foi tratada com carvão ativado (pó de malha 100, 3,37 g, ~0,20 massa eq) por 12 minutos e em seguida filtrada através de GF/B. Concentração a 50 °C a vácuo proporcionou ácido (6α, 5β)-3,7- dioxo-6-etil-colan-24-oico (Figura 2) como uma espuma amarela-clara em produção quantitativa.

[0203] 1H RMN (700 MHz, CDCl3): δ = 2,74 (1H, dd, J = 12,8, 5,4), 2,47 (1H, t, J = 12,5), 2,43-0,90 (32H, m), 0,81 (3H, t, J = 7,4), 0,70 (3H, s). 13C RMN (100 MHz, CDCl3): δ = 212,1, 210,6, 179,4, 54,9, 52,4, 52,3, 50,0, 48,9, 43,7, 42,7, 38,9, 38,3, 36,7, 36,0, 35,5, 35,2, 30,9, 30,7, 28,2, 24,6, 22,9, 22,3, 18,6, 18,3, 12,1, 11,8. (IR) Vmax(cm-1): 2939, 2873, 1706, 1458, 1382, 1284,8. HRMS (ESI-TOF) m/z: (M+H)+ calculado para C26H41O4 417,3005; encontrado: 417,2997; ponto de fusão = 71,2-75,9 °C Exemplo 17 - Síntese de ácido (3α, 5β, 6α, 7a)-6-etil-3,7-di-hidróxi- colan-24-oico

[0204] A uma solução de ácido (6α, 5β)-6-etil-3,7-dioxo-colan-24- oico bruto (21,7 g de massa bruta) em H2O (260 mL) e 50% NaOH (15,2 mL) a 90 °C foi adicionada, gota a gota, uma solução de NaBH4 (4,4 g, 116,3 mmol) em NaOH aq. (preparada a partir de 25 mL de H2O e 0,8 mL 50% NaOH). A mistura foi aquecida até o refluxo e agitada por 3 h. A mistura foi em seguida foi arrefecida até 60 °C e uma solução a 2M de HCl (200 mL) foi adicionada gota a gota com vigorosa agitação. nBuOAc (100 mL) foi em seguida carregado para o frasco de reação e a mistura foi agitada por um adicional de 20 minutos. As fases foram separadas e a fase aquosa (pH = 1/2) foi extraída com nBuOAc (100 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com 2M de HCl (50 mL) e 10% de NaCl aq. (100 mL). O solvente orgânico foi destilado sob pressão reduzida a 70-80 °C. O resíduo (óleo denso) foi dissolvido em nBuOAc (60 mL) a 70 °C e deixado para esfriar gradualmente até a temperatura ambiente, e em seguida armazenado a 6 °C por 2 h. O sólido foi coletado através de filtração, enxaguado com nBuOAc frio (20 mL), em seguida seco sob vácuo a 70 °C por 5h para proporcionar ácido (3α, 5β, 6α, 7a)-6-etil-3,7-di-hidróxi-colan-24- oico como um sólido branco (8,2 g).

Claims

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula geral (I):

em que: R1 é C1-4 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados entre halo, OR6 ou NR6R7; onde cada um de R6 e R7 é selecionado de modo independente entre H ou C1-4 alquila; R2 é H, halo ou OH ou um OH protegido; Y é uma ligação ou um grupo ligante de alquileno, alquenileno ou alquinileno tendo de 1 a 20 átomos de carbono e opcionalmente substituído com um ou mais grupos R3; cada R3 é de modo independente halo, OR8 ou NR8R9; onde cada um de R8 e R9 é selecionado de modo independente entre H ou C1-4 alquila; e R4 é C(O)OR10, OC(O)R10, C(O)NR10R11, OR10, OSi(R13)3, S(O)R10, SO2R10, OSO2R10, SO3R10, ou OSO3R10; onde cada R10 e R11 é de modo independente: a. hidrogênio ou b. C1-20 alquila, C2-20 alquenila, C2-20 alquinila, -O-C1-20 alquila, -O-C2-20 alquenila ou -O-C2-20 alquinila, cada um dos quais é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados entre halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2, ou um grupo arila de 6 a 14 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros, qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2; ou c. um grupo arila de 6 a 14 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados entre C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2; d. um resíduo polietileno glicol; cada R19 é selecionado de modo independente entre H, C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, ou um grupo arila de 6 a 14 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com halo, C1-6 alquila ou C1-6 haloalquila; cada R13 é de modo independente a. C1-20 alquila, C2-20 alquenila ou C2-20 alquinila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados entre halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2, um grupo arila de 6 a 14 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros, qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2; ou b. um grupo aril de 6 a 14 membros ou heteroarila de 5 a 14 membros qualquer um dos quais é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados entre C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo, NO2, CN, OR19, SR19, SO2R19, SO3R19 ou N(R19)2; c. da R19 é selecionado de modo independente entre H, C1-6 alquila ou C1-6 haloalquila; d. é H ou OH ou um OH protegido; ou um sal ou uma variante isotópica do mesmo.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula geral (I) é um composto de fórmula geral (IA):

em que R1, R2, Y, R4 e R5 são como definidos para a fórmula geral (I) como definido na reivindicação 1.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que R1 é etila.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que Y é um grupo ligante de alquileno ou alquenileno tendo de 1 a 8 átomos de carbono e opcionalmente substituído com um ou mais grupos R3, em que R3 é como definido na reivindicação 1.

5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que, de modo independente ou em qualquer combinação: R1 é etila; e/ou R2 é H; e/ou Y é uma ligação, -CH2-, -CH2CH2-, -CH=CH- ou -CH=C (CH3)-; e/ou R4 é C(O)OR10, onde R10 é H, C1-6 alquila ou benzila; e/ou R5 é H.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que R1 é etila e/ou R10 é C1-6 alquila ou benzila.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado de: ácido (6β, 7α, 22E)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-4,22-coladien-24- oico; ácido (6β, 7a)-6-etil-7-hidróxi-3-oxo-4-colen-24-oico e ésteres C1-6 alquílicos e benzílicos dos mesmos e sais dos mesmos, especialmente os ésteres metílicos e etílicos.

8. Processo para a preparação de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o processo compreende ou: A. alquilação seletiva de um composto de fórmula geral (II):

em que R2, R4, R5 e Y são como definidos na reivindicação 1; com um reagente organometálico; ou B. conversão de um composto de fórmula geral (I) em que R4 é C(O)OR10 para um composto de fórmula geral (I) em que R4 é C(O)NR10R11, S(O)R10, SO2R10, OSO2R10, SO3R10, ou OSO3R10; em que R10 e R11 são como definidos na reivindicação 1.

9. Processo, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que, na Etapa (A), o reagente organometálico é um reagente de Gilman formado por reação de um composto de alquil lítio de fórmula (XXIV): R1-Li (XXIV) em que R1 é como definido para a fórmula geral (I) como definido na reivindicação 1; e um sal de cobre (I), particularmente um halogeneto de cobre (I) tal como iodeto de cobre (I); ou o reagente organometálico é um reagente de Grignard R1MgX, onde R1 é como definido para a fórmula geral (I) como definido na reivindicação 1 e X é um halogeneto e em que a reação é conduzida na presença de um sal de zinco (II) tal como cloreto de zinco e uma quantidade catalítica de um sal ou complexo de cobre (I) ou cobre (II).

10. Processo para a preparação de um composto que apresenta a fórmula geral (XVIII):

em que R1 e R4 são como definidos na fórmula geral (I) na reivindicação 1; R2 é H, halo ou OH; R5a é H ou OH; e Y1 é uma ligação ou um grupo ligante de alquileno tendo de 1 a 6 átomos de carbono e opcionalmente substituído com um ou mais grupo R3; em que R3 é como definido para a fórmula geral (I) na reivindicação 1; caracterizado pelo fato de que o processo compreende: i. redução de um composto de fórmula (IA) como definido em qualquer uma das reivindicações 2 a 7, usando um agente redutor adequado para proporcionar um composto de fórmula geral (XIX):

em que R1, R2, R4 e R5 são como definidos na fórmula geral (I) na reivindicação 1; e Y1 é como definido na fórmula geral (XVIII); ii. oxidação do composto de fórmula geral (XIX) usando um agente oxidante adequado para proporcionar um composto de fórmula geral (XX):

em que R1, R2, R4 e R5 são como definidos na fórmula geral (I) na reivindicação 1; e Y1 é como definido na fórmula geral (XVIII); iii. epimerização do composto de fórmula geral (XX) para proporcionar um composto de fórmula geral (XXI):

em que R1 e R4 são como definidos na fórmula geral (I) na reivindicação 1; Y1 é como definido na fórmula geral (XVIII); R2 é H, halo ou OH ou um grupo OH protegido o qual é estável sob condições básicas; e R5b é H ou OH ou um grupo OH protegido o qual é estável sob condições básicas; e iv. redução do composto de fórmula geral (XXI) usando um agente redutor adequado e, onde R2 e/ou R5b é um OH protegido, remoção do grupo ou grupos de proteção, para proporcionar um composto de fórmula geral (XVIII) como definido acima, em que a remoção do grupo de proteção pode ocorrer antes ou depois da redução; e opcionalmente v. conversão de um composto de fórmula geral (XVIII) em que R4 é C(O)OR10 para um composto de fórmula geral (XVIII) em que R4 é C(O)R10, C(O)NR10R11, S(O)R10, SO2R10, OSO2R10, SO3R10, ou OSO3R10; em que R10 e R11 são como definidos na reivindicação 1.

11. Processo, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que, na etapa i: o agente redutor para a conversão do composto de fórmula geral (IA) para o composto de fórmula geral (XIX) é hidrogênio na presença de um paládio / carbono, paládio / carbonato de cálcio, paládio / óxido de alumínio, platina / paládio ou catalisador de níquel Raney; e/ou. o solvente é metanol, etanol ou isopropanol; acetato de etila; piridina; ácido acético; éter ciclopentil metílico (CPME) ou N,N- dimetilformamida (DMF), qualquer um dos quais pode ser opcionalmente misturado com um cossolvente tal como acetona ou água e/ou uma base tal como trietilamina.

12. Processo, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que, na etapa (ii), a reação de oxidação é realizada usando um periodinano de Dess-Martin, isto é, 1,1,1- triacetoxi-1,1-di-hidro-1,2-benziodoxol; um hipoclorito, por exemplo, hipoclorito de sódio, sob condições acidíferas; uma reação de Jones usando dicromato de sódio ou, mais geralmente, trióxido crômico em ácido sulfúrico diluído; ou (2,2,6,6-Tetrametil-piperidin-1-il)óxi ou um derivado dos mesmos; e/ou na reação de epimerização da etapa (iii), o composto de fórmula geral (XX) é dissolvido em um solvente alcoólico, opcionalmente misturado com água e contactado com uma base, por exemplo, hidróxido de sódio ou potássio ou um alcóxido de sódio ou potássio, tipicamente um etóxido.

13. Processo, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que: no composto de fórmula geral (XX), R4 é C(O)OR10, a base é hidróxido de sódio ou potássio e a epimerização é acompanhada por hidrólise para proporcionar um composto de fórmula geral (XXI) no qual R4 é C(O)OH; e/ou no composto de fórmula geral (XX), R2 e/ou R5 é um grupo OC(O)OR14, onde R14 é C1-6 alquila ou benzila; e a etapa de epimerização produz um composto de fórmula geral (XXI) no qual R2 e/ou R5b é OH; ou no composto de fórmula geral (XX), R2 e/ou R5 é um OH protegido o qual é estável sob condições básicas e o processo adicionalmente compreende a etapa de remção do grupo de proteção antes ou depois da etapa (iv).

14. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 13, caracterizado pelo fato de que, na etapa (iv), o agente redutor é um hidreto tal como boridreto de sódio.

15. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 14, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um composto de fórmula geral (XVIII), em que R1 é etila, R2 e R5a são ambos H, Y1 é -CH2CH2-, e R4 é C(O)OH.