BR102023003038A2 - Método para classificar glóbulos brancos em subpopulações - Google Patents
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Abstract
método para classificar glóbulos brancos em subpopulações. a presente invenção refere-se a método para classificar glóbulos brancos em subpopulações que compreende: preparar uma amostra de medição ao misturar uma amostra que contém glóbulos brancos, um reagente de hemólise que contém um tensoativo, um primeiro corante fluorescente e um segundo corante fluorescente; irradiar partículas na amostra de medição com luz e detectar a informação óptica que inclui primeira informação sobre fluorescência com base na fluorescência do primeiro corante fluorescente, segunda informação sobre fluorescência com base na fluorescência do segundo corante fluorescente e informação sobre luz dispersa; classificar uma população de células que contém basófilos de partículas na amostra de medição com base na informação óptica que inclui a primeira informação sobre fluorescência; classificar os glóbulos brancos contidos na população de células em subpopulações com base na segunda informação sobre fluorescência e na informação sobre luz dispersa; e contar as células classificadas como população de basófilos na subpopulação; em que o segundo corante fluorescente é um corante fluorescente que tem uma absorção máxima em uma faixa de comprimento de onda diferente daquela do primeiro corante fluorescente.
Description
[001] A presente invenção refere-se a método para classificar os glóbulos brancos em subpopulações.
[002] Os glóbulos brancos normais são classificados em cinco subpopulações de linfócitos, monócitos, neutrófilos, eosinófilos e basó- filos. Informações tais como classificação e número de glóbulos brancos são informações úteis para examinar a condição de saúde de um indivíduo. Como método para classificar e contar glóbulos brancos, é conhecido um método que usa um citômetro de fluxo. Por exemplo, a Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana N.02010/0151509 descreve que os glóbulos brancos são classificados em cinco subpo- pulações e os glóbulos brancos são contados para cada uma dentre pelo menos quatro subpopulações.
[003] Quando uma amostra de sangue após a coleta do sangue é medida por um citômetro de fluxo, a classificação dos glóbulos brancos pode ser ruim em virtude de uma mudança na morfologia das células, uma mudança no grau de coloração por um corante e assim por diante. Em particular, os basófilos são difíceis de classificar e contar em virtude da influência de outros glóbulos brancos deteriorados. A Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana N.o 2010/0330565 descreve um método para discriminar com precisão basófilos e glóbulos vermelhos nucleados de outros glóbulos brancos, mesmo em uma amostra de sangue após um lapso de tempo da coleta de sangue.
[004] Uma vez que o método descrito na Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana N.o 2010/0330565 é um método para classificar basófilos e outros glóbulos brancos, a fim de classificar e contar glóbulos brancos diferentes de basófilos em subpopulações, é necessário realizar medições separadamente para classificação de glóbulos brancos. Um objetivo da presente invenção é fornecer, em um método para classificar os glóbulos brancos em subpopulações, um método capaz de classificar e contar com precisão os basófilos, mesmo quando uma amostra em que o tempo de coleta já passou é usada.
[005] O presente inventor obteve uma descoberta de que, usando corantes fluorescentes de diferentes comprimentos de onda de absorção máxima, uma causa de má classificação pode ser suprimida, os basófilos podem ser contados com mais precisão e os glóbulos brancos que contêm basófilos podem ser classificados em subpopulações, deste modo, concluindo a presente invenção.
[006] Portanto, a presente invenção fornece um método para classificar os glóbulos brancos em subpopulações que inclui preparar uma amostra de medição ao misturar uma amostra que contém glóbulos brancos, um reagente de hemólise que contém um tensoativo, um primeiro corante fluorescente e um segundo corante fluorescente; irradiar as partículas na amostra de medição com luz e detectar a informação óptica que inclui primeira informação sobre fluorescência com base na fluorescência do primeiro corante fluorescente, segunda informação sobre fluorescência com base na fluorescência do segundo corante fluorescente e informação sobre luz dispersa; classificar uma população de células que contém basófilos de partículas na amostra de medição com base na informação óptica que inclui a primeira informação sobre fluorescência; classificar os glóbulos brancos contidos na população de células em subpopulações com base na segunda informação sobre fluorescência e na informação sobre luz dispersa; e contar as células classificadas como população de basófilos na sub- população; em que o segundo corante fluorescente é um corante fluo-rescente que tem uma absorção máxima em uma faixa de comprimento de onda diferente daquela do primeiro corante fluorescente.
[007] De acordo com a presente invenção, é possível classificar e contar com maior precisão os basófilos mesmo em uma amostra em que um tempo tenha decorrido após a coleta. Isto torna possível classificar com mais precisão os glóbulos brancos na amostra em subpo- pulações.
[008] A Figura 1 é uma vista em perspectiva que mostra um sis tema de análise de acordo com uma primeira modalidade da presente invenção.
[009] A Figura 2 é um diagrama esquemático que mostra uma configuração de uma unidade de medição da primeira modalidade da presente invenção.
[0010] A Figura 3 é um fluxograma que mostra um procedimento de processamento de preparação de amostra de medição pelo sistema de análise da primeira modalidade da presente invenção.
[0011] A Figura 4 é um diagrama de blocos que mostra uma confi guração de uma unidade de medição de um sistema de análise de acordo com uma segunda modalidade da presente invenção.
[0012] A Figura 5 é um diagrama que mostra um circuito de fluido que inclui uma seção de sucção de amostra, uma seção de preparação de amostra e uma seção de detecção na segunda modalidade da presente invenção.
[0013] A Figura 6 é um diagrama esquemático que mostra outro exemplo de uma primeira seção de preparação de amostra na segunda modalidade da presente invenção.
[0014] A Figura 7 é um diagrama explicativo de uma configuração que mostra um exemplo de um sistema óptico de uma seção de de- tecção FCM na segunda modalidade da presente invenção.
[0015] A Figura 8 é um diagrama explicativo de uma configuração que mostra outro exemplo do sistema óptico da seção de detecção FCM na segunda modalidade da presente invenção.
[0016] A Figura 9 é um diagrama que mostra um exemplo o qual a fluorescência emitida por dois corantes fluorescentes diferentes vaza um do outro.
[0017] A Figura 10 é um diagrama de blocos que mostra uma con figuração exemplificativa de uma unidade de análise na segunda mo-dalidade da presente invenção.
[0018] A Figura 11 é uma vista em perspectiva que mostra outra configuração exemplificativa do sistema de análise na segunda moda-lidade da presente invenção.
[0019] A Figura 12 é um diagrama de blocos que mostra uma ou traconfiguração exemplificativa da unidade de medição na segunda modalidade da presente invenção.
[0020] A Figura 13 é uma vista que mostra um estado no qual uma tampa da unidade de medição na segunda modalidade da presente invenção está aberta.
[0021] A Figura 14 é uma vista em perspectiva que mostra um por ta-recipiente de reagente da unidade de medição na segunda modalidade da presente invenção.
[0022] A Figura 15 é uma vista frontal que mostra o porta- recipiente de reagente mostrado na Figura 14.
[0023] A Figura 16 é uma vista esquemática para explicar uma porção de suporte de recipiente de reagente do porta-recipiente de re-agente mostrado na Figura 14.
[0024] A Figura 17 é uma vista esquemática que mostra um esta do no qual um recipiente de reagente está colocado na porção de suporte de recipiente de reagente mostrada na Figura 14.
[0025] A Figura 18 é uma vista esquemática que mostra um esta do no qual um recipiente de reagente está colocado na porção de suporte de recipiente de reagente mostrada na Figura 14.
[0026] A Figura 19 é uma vista seccional longitudinal que mostra esquematicamente uma configuração interna do porta-recipiente de reagente mostrado na Figura 14.
[0027] A Figura 20 é uma vista para explicar um estado definido de um recipiente de reagente na vista seccional longitudinal do porta- recipiente de reagente mostrado na Figura 19.
[0028] A Figura 21 é uma vista para explicar um estado no qual a tampa está abaixada na vista seccional longitudinal do porta-recipiente de reagente mostrado na Figura 20.
[0029] A Figura 22 é uma vista em perspectiva que mostra um re cipiente de reagente de tamanho grande de acordo com a segunda modalidade da presente invenção.
[0030] A Figura 23 é uma vista superior que mostra o recipiente de reagente de tamanho grande de acordo com a segunda modalidade da presente invenção.
[0031] A Figura 24 é uma vista seccional longitudinal que mostra o recipiente de reagente de tamanho grande de acordo com a segunda modalidade da presente invenção.
[0032] A Figura 25 é uma vista em perspectiva que mostra um re cipiente de reagente de tamanho pequeno de acordo com a segunda modalidade da presente invenção.
[0033] A Figura 26 é uma vista superior que mostra o recipiente de reagente de tamanho pequeno de acordo com a segunda modalidade da presente invenção.
[0034] A Figura 27 é uma vista seccional longitudinal que mostra o recipiente de reagente de tamanho pequeno de acordo com a segunda modalidade da presente invenção.
[0035] A Figura 28A é uma vista que mostra um estado no qual um recipiente de reagente 200 de acordo com outra modalidade da presente invenção está instalado em uma unidade de medição 400. A Figura 28B é uma vista que mostra um estado no qual um tubo de sucção 252 está inserido no recipiente de reagente 200 de acordo com outra modalidade da presente invenção acima.
[0036] A Figura 29 é uma vista que mostra que o recipiente de re agente 200 de acordo com outra modalidade da presente invenção inclui uma porção de armazenamento de reagente 10 e uma armação 20.
[0037] A Figura 30 é uma vista que mostra que a porção de arma zenamento de reagente 10 é moldada no formato de saco oco e a ar-mação 20 inclui uma porção de abertura 21, um elemento de fixação 22 e uma porção de restrição de movimento 23.
[0038] A Figura 31 é uma vista superior da porção de restrição de movimento 23.
[0039] A Figura 32 é uma vista que mostra que a porção de suc ção de reagente 250 inclui uma pluralidade de porta-recipientes de re-agentes capazes de conter cada um dos recipientes de reagentes 200.
[0040] A Figura 33 é uma vista que mostra que a porção de arma zenamento 260 inclui uma primeira parte de inserção 261 na qual a porção de armazenamento de reagente 10 do recipiente de reagente 200 é inserida e uma segunda parte de inserção 262 na qual a porção de restrição de movimento 23 do recipiente de reagente 200 é inserida.
[0041] A Figura 34 é uma vista que mostra uma porção de arma zenamento 260 na qual o recipiente de reagente 200 é colocado.
[0042] A Figura 35 é uma vista seccional longitudinal de um porta- recipiente de reagente 250a.
[0043] A Figura 36 é um diagrama conceitual que mostra um mé- todo de análise de acordo com uma quarta modalidade da presente invenção.
[0044] A Figura 37 é um diagrama esquemático para explicar os dados de forma de onda usados no método de análise da quarta mo-dalidade.
[0045] A Figura 38 é um diagrama que mostra esquematicamente a conversão em um sinal digital por um conversor A/D no método de análise da quarta modalidade.
[0046] A Figura 39 é um diagrama que mostra esquematicamente dados de forma de onda obtidos por amostragem no método de análise da quarta modalidade.
[0047] A Figura 40 é um diagrama esquemático que mostra um exemplo de um método de geração de dados de treinamento usados para treinar um algoritmo de aprendizado profundo para determinar o tipo de um componente em um espécime no método de análise da quarta modalidade.
[0048] A Figura 41 é um diagrama que mostra um exemplo de va lores de rótulo no método de análise de acordo com a quarta modalidade.
[0049] A Figura 42 é um diagrama esquemático que mostra um exemplo de um método para analisar dados de forma de onda do componente em uma amostra no método de análise da quarta modali-dade.
[0050] A Figura 43 é um diagrama de blocos que mostra uma con figuração exemplificativa de outra seção de preparação de amostra que tem uma configuração diferente daquela da seção de preparação de amostra mostrada na Figura 12.
[0051] A Figura 44 é um fluxograma que mostra um primeiro exemplo de operação do presente método de análise.
[0052] A Figura 45 é um fluxograma que mostra um segundo exemplo de operação do presente método de análise.
[0053] A Figura 46 é um fluxograma que mostra um terceiro exemplo de operação do presente método de análise.
[0054] A Figura 47 é um diagrama de blocos que mostra uma con figuração exemplificativa de uma quinta modalidade.
[0055] A Figura 48 é um diagrama esquemático que mostra uma configuração exemplificativa de um processador de processamento paralelo.
[0056] A Figura 49 é um primeiro diagrama que mostra um esboço do processamento aritmético executado pelo processador de proces-samento paralelo sob o controle do software de análise executado no processador.
[0057] A Figura 50 é um segundo diagrama que segue a Figura 49.
[0058] A Figura 51 é um terceiro diagrama que segue a Figura 50.
[0059] A Figura 52 é um fluxograma que mostra as etapas de classificação dos glóbulos brancos em subpopulações usando um pri-meiro corante fluorescente e um segundo corante fluorescente.
[0060] A Figura 53 é um fluxograma que mostra as etapas de uma sexta modalidade.
[0061] A Figura 54 é um fluxograma que mostra as etapas de uma sétima modalidade.
[0062] A Figura 55 é um fluxograma que mostra as etapas de uma oitava modalidade.
[0063] A Figura 56A é um diagrama de dispersão de fluorescência vermelha de dispersão lateral quando uma amostra antes da separa ção de basófilos foi medida no Exemplo de Referência 1.
[0064] A Figura 56B é um diagrama de dispersão de fluorescência vermelha de dispersão lateral quando uma amostra após a separação de basófilos foi medida no Exemplo de Referência 1.
[0065] A Figura 56C é um diagrama de dispersão de fluorescência azul-violeta de dispersão lateral quando uma amostra antes da separação de basófilos foi medida no Exemplo de Referência 1.
[0066] A Figura 56D mostra um diagrama de dispersão de fluores cência azul-violeta de dispersão lateral quando uma amostra após a separação de basófilos foi medida no Exemplo de Referência 1.
[0067] A Figura 57A é um diagrama de dispersão de fluorescência azul-violeta de dispersão lateral quando uma amostra foi medida 4 horas após a coleta de sangue no Exemplo de Referência 2.
[0068] A Figura 57B é um diagrama de dispersão de fluorescência azul-violeta de dispersão lateral quando uma amostra foi medida 48 horas após a coleta de sangue no Exemplo de Referência 2.
[0069] A Figura 57C é um diagrama de dispersão de fluorescência azul-violeta de dispersão lateral quando uma amostra foi medida 72 horas após a coleta de sangue no Exemplo de Referência 2.
[0070] A Figura 58A é um diagrama de dispersão de fluorescência vermelha de dispersão lateral no qual as células bloqueadas no diagrama de dispersão da Figura 57A são representadas no Exemplo de Referência 2.
[0071] A Figura 58B é um diagrama de dispersão de fluorescência vermelha de dispersão lateral no qual as células bloqueadas no diagrama de dispersão da Figura 57B são representadas no Exemplo de Referência 2.
[0072] A Figura 58C é um diagrama de dispersão de fluorescência vermelha de dispersão lateral no qual as células bloqueadas no diagrama de dispersão da Figura 57C são representadas no Exemplo de Referência 2.
[0073] A Figura 59A é um diagrama de dispersão de fluorescência azul-violeta de dispersão lateral do Exemplo 1.
[0074] A Figura 59B é um diagrama de dispersão de fluorescência vermelha de dispersão lateral do Exemplo 1.
[0075] A Figura 60A é um histograma de fluorescência azul-violeta do Exemplo 2.
[0076] A Figura 60B é um diagrama de dispersão de fluorescência azul-violeta de dispersão lateral do Exemplo 2.
[0077] A Figura 60C é um diagrama de dispersão de fluorescência vermelha de dispersão lateral do Exemplo 2.
[0078] A Figura 61 é um gráfico que mostra uma alteração no nú mero de basófilos em virtude do lapso de tempo após a coleta de sangue.
[0079] A Figura 62 mostra diagramas de dispersão de fluorescên cia vermelha de dispersão lateral no Exemplo 2 e no Exemplo Compa-rativo 1.
[0080] A seguir, a presente invenção será descrita em mais deta lhes com referência aos desenhos. A descrição a seguir é ilustrativa em todos os aspectos e não deve ser interpretada como limitativa da presente invenção.
[0081] Primeiramente, será descrita uma modalidade de um siste ma de análise adequado para o método de classificação de glóbulos brancos de acordo com a presente invenção. Depois de descrever a modalidade do sistema de análise, será descrita uma modalidade do método de classificação de glóbulos brancos de acordo com a presente invenção.
[0082] A Figura 1 é uma vista em perspectiva que mostra um sis tema de análise de acordo com uma primeira modalidade da presente invenção. Conforme mostrado na Figura 1, um sistema de análise 4000 de acordo com a primeira modalidade inclui individualmente um dispositivo de medição (daqui em diante denominado como uma uni dade de medição) 400 e um analisador (daqui em diante denominado como uma unidade de análise) 300X. Na presente modalidade, a unidade de análise 300X é, por exemplo, um computador pessoal (PC) no qual está incorporado um software para análise de um espécime a ser medido.
[0083] A unidade de medição 400 é uma unidade para medir uma amostra. A unidade de medição 400 inclui um citômetro de fluxo. Na unidade de medição 400, uma amostra e um reagente são misturados para preparar uma amostra de medição. Na preparação da amostra de medição, é usado um reagente que contém uma pluralidade de corantes fluorescentes, cada um correspondendo a uma pluralidade de comprimentos de onda. Cada uma dentre a pluralidade de células na amostra de medição é corada com uma pluralidade de corantes fluo-rescentes. Na análise da célula contida na amostra por este sistema de análise, é analisada uma célula que pode ser corada com uma pluralidade de corantes fluorescentes. Ou seja, a preparação da amostra de medição na presente modalidade se destina a corar uma célula com uma pluralidade de corantes fluorescentes, e a célula a ser medidaé, por exemplo, um linfócito, monócito, eosinófilo, neutrófilo, basófi- lo ou similar.
[0084] A amostra de medição preparada é medida por um citôme- tro de fluxo. Os sinais ópticos que correspondem a cada um dentre a pluralidade de corantes fluorescentes e uma pluralidade de sinais rela-cionadosà luz dispersa frontalmente e à luz dispersa lateralmente são adquiridos a partir das células na amostra de medição irradiada com luz. Cada um dos sinais ópticos adquiridos é convertido A/D para adquirir dados digitais. A unidade de análise 300X analisa os dados digitais adquiridos pela unidade de medição 400. Na unidade de análise 300X, pelo menos uma classificação e contagem de células na amostraé realizada usando uma pluralidade de dados digitais, cada um cor- respondendo pelo menos à luz dispersa lateralmente e fluorescência de uma pluralidade de comprimentos de onda. A unidade de análise 300X também realiza o controle de operação da unidade de medição 400.
[0085] A Figura 2 é um diagrama esquemático que mostra uma configuração de uma unidade de medição da primeira modalidade da presente invenção. Conforme mostrado nas Figuras 1 e 2, a unidade de medição 400 inclui uma seção de preparação de amostra 440 que tem uma câmara 420 e um mecanismo de alimentação de líquido 430, um mecanismo de sucção de amostra 450 e uma seção de detecção de citômetro de fluxo (seção de detecção FCM) 460 como uma seção de detecção que adquire um sinal emitido por uma célula.
[0086] A seção de sucção de amostra 450 é um mecanismo que aspira uma amostra no recipiente de amostra T. A seção de sucção de amostra 450 inclui um bico de sucção de amostra 451. O bico de sucção de amostra 451 pode penetrar no recipiente de amostra selado com uma tampa. O mecanismo de sucção de amostra 450 pode mover o bico de sucção de amostra 451 para inserir o bico de sucção de amostra 451 no recipiente de amostra. O mecanismo de sucção de amostra 450 pode se mover nas direções X-Y de modo a mover o bico de sucção de amostra 451 para a posição superior da câmara 420. O mecanismo de sucção de amostra 450 tem uma seção de medição 452 (por exemplo, uma bomba de seringa) para sucção e descarga uma amostra pelo bico de sucção de amostra 451.
[0087] O mecanismo de alimentação de líquido 430 inclui um tubo de alimentação de líquido 431 e uma seção de alimentação de líquido 432 para injetar um reagente 12 do recipiente de reagente 200 na câmara 420 através do tubo de alimentação de líquido 431. O mecanismo de alimentação de líquido 430 é um mecanismo que alimenta um reagente do recipiente de reagente 200 preso a um porta-recipiente de reagente 60 (consulte Figuras 13 a 15) descrito posteriormente para a câmara 420 através do tubo de alimentação de líquido 431 localizado entre o recipiente de reagente 200 e a câmara 420. O porta-recipiente de reagente 60 é montado com o recipiente de reagente 200 no qual está contido o reagente 12 que contém tanto o primeiro corante fluorescente como o segundo corante fluorescente. O mecanismo de alimentação de líquido 430 alimenta o reagente do recipiente de reagente 200 para a câmara 420. A célula é corada com um primeiro composto que constitui o primeiro corante fluorescente e um segundo composto que constitui o segundo corante fluorescente.
[0088] Um tubo de sucção 64 que constitui uma extremidade do tubo de alimentação de líquido 431 é inserido no recipiente de reagente 200. A outra extremidade do tubo de alimentação de líquido 431 é conectada à câmara 420. O tubo de sucção 64 pode ter uma ponta pontiaguda de modo a ser capaz de penetrar em um filme de vedação (também denominado como um elemento de vedação) do recipiente de reagente 200 preso ao porta-recipiente de reagente 60.
[0089] A seção de alimentação de líquido 432 do mecanismo de alimentação de líquido 430 inclui uma bomba 433 como uma seção de medição que gera uma pressão negativa para extrair o reagente 12 do recipiente de reagente 200 para o tubo de alimentação de líquido 431 e uma pressão positiva para alimentar o reagente extraído à câmara 420. A bomba 433 pode ser, por exemplo, uma bomba de seringa ou uma bomba de diafragma. O mecanismo de alimentação de líquido 430 pode incluir uma pluralidade de válvulas V1 e V2. Por exemplo, quando a seção de medição 433 que inclui uma bomba de seringa ou uma bomba de diafragma aspira o reagente do recipiente de reagente, a válvula V1 é aberta e a válvula V2 é fechada. A seção de medição 433 gera uma pressão negativa, pelo que um percurso de fluxo entre a válvula V1, a válvula V2 e a seção de medição 433 é preenchido com o reagente. Quando o reagente cheio é alimentado à câmara 420, a válvula V1 é fechada, a válvula V2 é aberta e a seção de medição 433 gera uma pressão positiva. Como um resultado, o reagente no recipiente de reagente 200 é alimentado à câmara 420.
[0090] A câmara 420 é um recipiente no qual um reagente e uma amostra são misturados para preparar uma amostra de medição. A câmara 420 mistura um reagente 12 a 3 os primeiro e segundo corantes fluorescentes com a amostra para preparar uma amostra de medição na qual uma célula é corada com os primeiro e segundo corantes fluorescentes. Na unidade de medição 400, são fornecidas uma ou mais câmaras 420. A câmara 420 está conectada a uma câmara de líquido residual 36 por meio de uma válvula 37. Após conclusão da medição por uma seção de detecção FCM 460, a amostra de medição restante na câmara 420 é descartada na câmara de líquido residual 36. A câmara 420 é limpa por um mecanismo de limpeza (não mostrado) antes que a próxima amostra de medição seja preparada e o líquido limpo seja descartado na câmara de líquido residual.
[0091] Na unidade de medição 400, são fornecidos um ou mais porta-recipientes de reagente 60. O porta-recipiente de reagente 60 é montado com o recipiente de reagente 200 que compreende um reagente que contém o primeiro corante fluorescente que é excitado pela luz e emite fluorescência de um primeiro comprimento de onda e o segundo corante fluorescente que é excitado pela luz e emite fluorescência de um segundo comprimento de onda. No exemplo mostrado na Figura 2, o reagente que contém o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente está contido em um recipiente de reagente 200.
[0092] O recipiente de reagente 200 é um recipiente no qual um reagente é armazenado. O recipiente de reagente 200 tem uma abertura na qual é inserido um perfurador (tubo de sucção) 64 conectado à primeira extremidade do tubo de alimentação de líquido 431 do meca-nismo de alimentação de líquido 430. Em um estado antes do recipiente de reagente 200 ser preso ao porta-recipiente de reagente 60, por exemplo, a abertura está coberta com um filme de vedação. O perfurador 64 é inserido em uma abertura do recipiente de reagente 200 preso ao porta-recipiente de reagente 60. O perfurador inserido 64 é fixado em uma posição predeterminada no recipiente de reagente 200. O perfurador 64 inserido no recipiente de reagente 200 é fixado no posição pré-determinada, por exemplo, enquanto o recipiente de reagente 200 está conectado ao porta-recipiente de reagente 60. Pelo menos enquanto uma pluralidade de amostras diferentes é medida (istoé, enquanto uma pluralidade de amostras de medição diferentes são preparadas), a amostra é fixada na posição predeterminada.
[0093] A seção de detecção FCM 460 adquire os primeiro e se gundo sinais, cada um correspondendo à fluorescência dos primeiro e segundo comprimentos de onda emitidos a partir de uma célula corada com os primeiro e segundo corantes fluorescentes. A seção de detecção FCM 460 irradia a amostra de medição que flui em uma célula de fluxo com luz. A seção de detecção FCM 460 pode incluir, por exemplo, uma pluralidade de fontes de luz, cada uma correspondendo a cada comprimento de onda, ou a seção de detecção FCM 460 pode ser configurada para emitir luz de um único comprimento de onda e detectar fluorescência de uma pluralidade de corantes fluorescentes excitados a partir da luz de um único comprimento de onda. Quando a amostra de medição é irradiada com luz, são detectados sinais ópticos que correspondem cada um do primeiro corante fluorescente e segundo corante fluorescente. Cada sinal óptico é convertido A/D para adquirir dados digitais. Os dados digitais adquiridos são analisados pela unidade de análise 300X (consulte Figura 1).
[0094] Na primeira modalidade, o tubo de alimentação de líquido 431 está localizado entre o recipiente de reagente 200 e a câmara 420, e a seção de alimentação de líquido 432 alimenta o reagente no recipiente de reagente 410 para a câmara 420 através do tubo de alimentação de líquido 431. Consequentemente, na primeira modalidade, um processo de sucção do reagente do recipiente de reagente com um bico, mover o bico aspirando o reagente para um local de colocação na câmara e descarregar o reagente na câmara (consulte, por exemplo, Literatura 1: AQUIOS Tetra System Guide https://www.beckmancoulter.com/wsrportal/techdocs?docname=B2636 4AB.pdf.) é desnecessário.
[0095] A unidade de análise 300X (consulte Figura 1) realiza pelo menos uma classificação e contagem de células com base nos primeiro e segundo sinais, cada um correspondendo à fluorescência dos primeiro e segundo comprimentos de onda emitidos a partir da célula corada com os primeiro e segundo corantes fluorescentes.
[0096] A Figura 3 é um fluxograma que mostra um procedimento de processamento de preparação de amostra de medição pelo sistema de análise da primeira modalidade. O processamento de preparação da amostra de medição pelo sistema de análise 4000 será descrito com referência às Figuras 1, 2 e 3. No processamento de preparação da amostra de medição pelo sistema de análise 4000, primeiro, uma amostra é distribuída na câmara 420 na unidade de medição 400 (etapa S1). Em seguida, o reagente é injetado na câmara 420 através do tubo de alimentação de líquido 431 que conecta o recipiente de reagente 410 e a câmara 420 (etapa S2). Em seguida, na câmara 420, a amostra e o reagente que contém os primeiro e segundo corantes fluorescentessão misturados para preparar uma amostra de medição (etapa S3). Em seguida, a amostra de medição preparada na câmara 420 é alimentada à seção de detecção FCM 460 e a amostra de medição é irradiada com luz para adquirir sinais ópticos, cada um corres- pondendo à luz dispersa lateralmente e aos primeiro e segundo corantes fluorescentes (etapa S4). Em seguida, os dados gerados a partir do sinal óptico adquirido são analisados pela unidade de análise 300X (etapa S5). Então, a unidade de análise 300X fornece um resultado de análise (etapa S6).
[0097] De acordo com a primeira modalidade, a alimentação dos primeiro e segundo corantes fluorescentes à câmara 420 para reação dos primeiro e segundo corantes fluorescentes com a amostra pode ser realizada através do tubo de alimentação de líquido 431. O tubo de alimentação de líquido 431 é um percurso de fluxo dedicado que alimenta apenas o reagente 12 que contém os primeiro e segundo corantes fluorescentes à câmara 420. Uma vez que o interior do tubo de alimentação de líquido 431 pode ser sempre mantido em um estado de preenchimento com o reagente 12, a velocidade de processamento é aumentada pelo fato de que a determinação quantitativa pela seção de medição (bomba) 433 pode ser realizada rapidamente. Uma vez que o tubo de alimentação de líquido 431 é o percurso de fluxo dedicado para alimentar o reagente 12, não é necessário evitar a contaminação entre diferentes reagentes e a limpeza é desnecessária. O fato de que a limpeza é desnecessária também contribui para uma melhoria na velocidade de processamento.
[0098] As vantagens de acordo com a primeira modalidade são mais evidentes, por exemplo, comparado com a Literatura 1. Por exemplo, no citômetro de fluxo descrito na Literatura 1, uma placa com 96 cavidades é usada como recipiente de reação. A placa com 96 ca-vidadesé um item consumível. A placa com 96 cavidades é retirada do citômetro de fluxo e descartada após o uso. Portanto, o citômetro de fluxo descrito na Literatura 1 tem uma configuração na qual um recipiente de reagente e o recipiente de reação são conectados através de um tubo de alimentação de líquido e um processo de sucção e des- carga de um reagente não pode ser excluído.
[0099] Para a medição pelo citômetro de fluxo descrito na Literatu ra 1, é usado um reagente que contém quatro tipos de corantes fluo-rescentes que correspondem a quatro marcadores (CD45, CD3, CD4, CD8) em células de uma amostra de sangue (AQUIOS Tetra-1 Panel). Cada um destes corantes fluorescentes está relacionado a um anticorpo que corresponde a cada um dos marcadores descritos acima. Ou seja, o reagente do AQUIOS Tetra-1 Panel e do AQUIOS Tetra-2+ Panel (https://www.beckman.jp/techdocs/B25337AG/wsr-161331) cora as células em uma amostra de sangue através de uma reação anticorpo- antígeno. No caso de tal reagente, uma vez que a reação leva tempo, leva tempo para medir uma amostra. Especificamente, a Literatura 1 descreve que leva cerca de 20 minutos para medir uma amostra, inclu-indo a preparação de uma amostra de medição. Na técnica da Literatura 1, uma vez que o tempo de medição (em particular, o tempo necessário para a reação anticorpo-antígeno) por espécime é longo, a preparação de amostras para medição de uma pluralidade de espécimesé realizada em paralelo em uma pluralidade de cavidades de uma placa com 96 cavidades consumível para reduzir o tempo total de processamento por amostra. Em outras palavras, a capacidade de processamento (taxa de transferência) por unidade de tempo é aumentada. Por outro lado, na primeira modalidade, é usado como reagente 12 um reagente que contém os primeiro e segundo corantes fluorescentes em que um composto cora o citoplasma, o ácido nucleico e o DNA da célula. Tal corante fluorescente reage mais rapidamente para coloração do que um reagente de anticorpo e, por exemplo, o tempo necessário para preparar uma amostra de medição de uma amostra é inferior a 1 minuto. Portanto, de acordo com a primeira modalidade, é possível fornecer um analisador capaz de realizar medições usando uma pluralidade de marcadores fluorescentes com alta capacidade de processamento. Segunda Modalidade
[00100] Um sistema de análise 4000 da segunda modalidade é um analisador automático de células sanguíneas de vários itens que executa pelo menos uma dentre contagens e análises de células em uma amostra de sangue. A Figura 4 é um diagrama de blocos que mostra uma configuração de uma unidade de medição 400 do sistema de análise 4000 (consulte Figura 1) da segunda modalidade. A unidade de medição 400 inclui uma seção de preparação de amostra 440, uma seção de mecanismo de dispositivo 455, um mecanismo de sucção de amostra 450, uma seção de detecção FCM 460, uma seção de detecção de RBC/PLT 461, uma seção de detecção de HGB 462 e uma seção de controle de unidade de medição 480. A seção de detecção de RBC/PLT 461 é uma seção de detecção do tipo resistência elétrica que introduz uma amostra de medição preparada a partir de sangue e um diluente em uma abertura e conta glóbulos vermelhos (RBC) e plaquetas (PLT) ao detectar uma alteração na resistência elétrica gerada quando uma célula passa através da abertura. A seção de detecção de HGB 462 mede a concentração de hemoglobina no sangue através de um método de hemoglobina SLS. A seção de detecção de HGB 462 mede a concentração de hemoglobina no sangue ao irradiar a amostra de medição preparada a partir do sangue e um agente hemo- lítico SLS com luz que tem um comprimento de onda de 555 nm, o qual é o comprimento de onda de absorção da hemoglobina SLS, e medir a absorbância. Daqui em diante, a seção de detecção FCM 460, a seção de detecção de RBC/PLT 461 e a seção de detecção de HGB 462 podem ser denominadas coletivamente como "seções de detecção 460 a 462".
[00101] O mecanismo de sucção de amostra 450 aspira uma amostra do recipiente de amostra. O mecanismo de sucção de amostra 450 descarrega a amostra aspirada em uma câmara da seção de preparação de amostra 440. A seção de preparação de amostra 440 inclui uma câmara para misturar uma amostra e um reagente e um porta- recipiente de reagente 60 no qual um recipiente de reagente está instalado. A seção de preparação de amostra 440 alimenta um reagente a partir de um recipiente de reagente preso no porta-recipiente de reagente 60 a uma câmara por meio de um tubo de alimentação de líquido descrito posteriormente. A amostra e o reagente são misturados na câmara para preparar uma amostra de medição.
[00102] A seção do mecanismo de dispositivo 455 inclui um motor e um acionador que move cada seção da unidade de medição 400. A seção do mecanismo de dispositivo 455 inclui, por exemplo, um mecanismo que move um tubo de coleta de sangue T (consulte Figura 5) descrito posteriormente na direção vertical.
[00103] A seção de controle da unidade de medição 480 inclui um processador analógico 481 que processa uma saída de sinal analógico proveniente da seção de detecção FCM 460, um conversor A/D 481a que converte uma saída de sinal analógico proveniente do processa-doranalógico 481 em um sinal digital, um processador analógico 482 que processa uma saída de sinal analógico proveniente da seção de detecção RBC/PLT 461, um conversor A/D 482a que converte uma saída de sinal analógico proveniente do processador analógico 482 em um sinal digital, um processador analógico 483 que processa uma saída de sinal analógico proveniente da seção de detecção de HGB 462, um conversor A/D 483a que converte uma saída de sinal analógico proveniente do processador analógico 483 em um sinal digital e uma parte IF (parte de interface) 484 eletricamente conectada a cada um dos conversores A/D 481a, 482a e 483a. A seção de controle de unidade de medição 480 inclui ainda uma parte de interface (IF) 488 conectada eletricamente à seção de preparação de amostra 440, à se- ção de mecanismo de dispositivo 455, ao mecanismo de sucção de amostra 450, à seção de detecção FCM 460, à seção de detecção de RBC/PLT 461 e à seção de detecção de HGB 462, um barramento 485 eletricamente conectado às partes IF 484 e 488 e uma parte IF 489 que conecta eletricamente o barramento 485 e a unidade de análise 302X.
[00104] A Figura 5 mostra um circuito de fluido que inclui o mecanismo de sucção de amostra 450, a seção de preparação de amostra 440 e as seções de detecção 460 a 462. A seção de preparação de amostra 440 mostrada na Figura 4 inclui uma primeira seção de preparação de amostra 440A para preparar uma primeira amostra de medição para medição óptica pela seção de detecção FCM 460 e uma segundaseção de preparação de amostra 440B para preparar uma segunda amostra de medição para medição de resistência elétrica pela seção de detecção de RBC/PLT e uma terceira amostra de medição para medição de hemoglobina pela seção de detecção de HGB 462 (consulte Figura 5).
[00105] A primeira seção de preparação de amostra 440A inclui uma primeira câmara 420. A primeira câmara 420 é conectada aos recipientes de reagente R1 e R2. O recipiente de reagente R1 contém um agente hemolítico que contrai os glóbulos vermelhos. O recipiente de reagente 200 contém um reagente de coloração de glóbulos brancos que contém um corante fluorescente. O recipiente de reagente R2 contém um diluente. O recipiente de reagente R2 será descrito posteriormente.
[00106] O reagente de coloração de glóbulos brancos contido no recipiente de reagente 200 contém um primeiro corante fluorescente e um segundo corante fluorescente. O primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente serão descritos posteriormente.
[00107] A segunda seção de preparação de amostra 400B tem uma segunda câmara 55. A segunda câmara 55 está conectada ao recipiente de reagente R2 e a um recipiente de reagente R3. O recipiente de reagente R2 é posicionado em comum com a primeira seção de prepa-ração de amostra 440A. O recipiente de reagente R3 contém um agen-tehemolítico SLS para hemólise de glóbulos vermelhos e preparar uma amostra de medição por meio do método de hemoglobina SLS.
[00108] O recipiente de reagente 200 que contém o reagente de coloração de glóbulos brancos é retido pelo porta-recipiente de reagente 60. O porta-recipiente de reagente 60 é dotado de um tubo de sucção 64 para aspirar o reagente de coloração de ácido nucleico no recipiente de reagente 200 e um mecanismo de elevação de tubo de sucção 65 para levantar e abaixar o tubo de sucção 64. A ponta do tubo de sucção 64 pode penetrar (perfurar) em um material de vedação do recipiente de reagente 200. Uma tampa 63 é conectada ao mecanismo de elevação de tubo de sucção 65. Em um estado onde o mecanismo de elevação de tubo de sucção 65 está abaixado e o tubo de sucção 64 penetra (perfura) no material de vedação do recipiente de reagente 200, a tampa 63 também está abaixada e a tampa 63 cobre o recipiente de reagente 200. Quando o mecanismo de elevação de tubo de sucção 65 é levantado, a tampa 63 também é levantada e o recipiente de reagente 200 se torna removível a partir de fora.
[00109] Um mecanismo de alimentação de líquido 430 está localizado entre o tubo de sucção 64 e a primeira câmara 420. O mecanismo de alimentação de líquido 430 inclui um tubo de alimentação de líquido 431 e um bloco de medição 432. Uma extremidade do tubo de alimentação de líquido 431 é configurada pelo tubo de sucção 64 e a outra extremidade está conectada à primeira câmara 420. O bloco de medição 432 inclui uma seção de medição 30 e válvulas eletromagnéticas V1 e V2. Como seção de medição 30, uma bomba de seringa é usada. Em vez da bomba de seringa, por exemplo, também pode ser usada uma bomba de diafragma. As válvulas eletromagnéticas V1 e V2 abrem e fecham um percurso de fluxo. Ao alimentar o reagente de coloração de glóbulos brancos no recipiente de reagente 200 à câmara 420, a seção de medição 30 aplica uma pressão negativa ao tubo de alimentação de líquido 431 em um estado no qual a válvula eletro-magnética V1 está aberta e a válvula eletromagnética V2 está fechada. Como um resultado, o reagente de coloração de glóbulos brancos é aspirado para dentro do tubo de alimentação de líquido 431 a partir da ponta do tubo de sucção 64 e uma determinada quantidade do reagente de coloração de glóbulos brancos é enchida no percurso de fluxo entre as válvulas eletromagnéticas V1 e V2 e a seção de medição 30. Em seguida, em um estado no qual a válvula eletromagnética V1 está fechada e a válvula eletromagnética V2 está aberta, a seção de medição 30 aplica uma pressão positiva ao tubo de alimentação de líquido 431. Como um resultado, uma determinada quantidade do reagente de coloração de glóbulos brancos enchido no percurso de fluxo entre as válvulas eletromagnéticas V1 e V2 e a seção de medição 30 é empurrada para fora e o reagente de coloração de glóbulos brancos é alimentado à câmara 420 através do tubo de alimentação de líquido 431.
[00110] Um percurso de fluxo entre o recipiente de reagente R1 que contém o agente hemolítico e a primeira câmara 420 é dotado de uma seção de medição 22 e válvulas eletromagnéticas V3 e V4. Como seção de medição 22, uma bomba de seringa é usada. Em vez da bomba de seringa, por exemplo, também pode ser usada uma bomba de diafragma. As válvulas eletromagnéticas V3 e V4 abrem e fecham o percurso de fluxo. A seção de medição 22 e as válvulas eletromagnéticas V3 e V4 enviam quantitativamente o agente hemolítico no recipiente de reagente R1 para a primeira câmara 420, de forma similar às válvulas eletromagnéticas V1 e V2 e seção de medição 30 descritas acima.
[00111] Um percurso de fluxo entre o recipiente de reagente R2 que contém o diluente e a primeira câmara 420 é dotado de uma seção de medição 33 e válvulas eletromagnéticas V5 e V6. Como seção de me-dição 33, uma bomba de seringa é usada. Em vez da bomba de seringa, por exemplo, também pode ser usada uma bomba de diafragma. As válvulas eletromagnéticas V5 e V6 abrem e fecham o percurso de fluxo. A seção de medição 33 e as válvulas eletromagnéticas V5 e V6 alimentam quantitativamente o diluente no recipiente de reagente R2 à primeira câmara 420.
[00112] A primeira câmara 420 está conectada a uma câmara de líquido residual 36 que contém uma solução desnecessária. Uma vál-vulaeletromagnética V7 que abre e fecha o percurso de fluxo está lo-calizada entre a primeira câmara 420 e a câmara de líquido residual 36.
[00113] A primeira câmara 420 está conectada a uma bomba 56A que fornece ar para a primeira câmara 420 para agitar o líquido na primeira câmara 420.
[00114] Um percurso de fluxo entre o recipiente de reagente R2 que contém o diluente e a segunda câmara 55 é dotado de uma seção de medição 38 e válvulas eletromagnéticas V8 e V9. Como seção de me-dição 38, uma bomba de seringa é usada. Em vez da bomba de seringa, por exemplo, também pode ser usada uma bomba de diafragma. As válvulas eletromagnéticas V8 e V9 abrem e fecham o percurso de fluxo. A seção de medição 38 e as válvulas eletromagnéticas V8 e V9 alimentam quantitativamente o diluente no recipiente de reagente R2 à segunda câmara 55. A segunda câmara 55 está conectada a uma câmara de líquido residual 41 que contém uma solução desnecessária. Uma válvula eletromagnética V10 está localizada entre a segunda câmara 55 e a câmara de líquido residual 41 para alternar o percurso de fluxo entre um percurso de fluxo que vai da segunda câmara 55 até a câmara de líquido residual 41 e um percurso de fluxo que vai da se-gundacâmara 55 até a seção 461 de detecção de RBC/PLT e a seção 462 de detecção de HGB. A válvula eletromagnética V10 será descrita posteriormente.
[00115] Um percurso de fluxo entre o recipiente de reagente R3 que contém o agente hemolítico SLS e a segunda câmara 55 é dotado de uma seção de medição 39 e válvulas eletromagnéticas V11 e V12. Como seção de medição 39, uma bomba de seringa é usada. Em vez da bomba de seringa, por exemplo, também pode ser usada uma bomba de diafragma. As válvulas eletromagnéticas V11 e V12 abrem e fecham o percurso de fluxo. A seção de medição 39 e as válvulas eletromagnéticas V11 e V12 alimentam quantitativamente o agente hemo- lítico SLS no recipiente de reagente R3 à segunda câmara 55.
[00116] A segunda câmara 55 está conectada a uma bomba 56B que fornece ar para a segunda câmara 55 para agitar o líquido na se-gundacâmara 55.
[00117] O mecanismo de sucção de amostra 450 inclui um tubo de sucção 20 e uma seção de medição 21. O tubo de sucção 20 tem uma ponta de formato pontiagudo. O mecanismo de sucção de amostra 450 abaixa um tubo de coleta de sangue 100, pelo qual o tubo de sucção 20 perfura uma tampa 100a que fecha o tubo de coleta de sangue 100 e o tubo de sucção 20 é inserido no interior. A seção de medição 21 gera uma pressão negativa em um estado no qual o tubo de sucção 20 é inserido no tubo de coleta de sangue 100, pelo que a amostra de sangue contida no tubo de coleta de sangue 100 é aspirada para o tubo de sucção 20. O mecanismo de sucção de amostra 450 move o tubo de sucção 20 para cima para extrair o tubo de sucção 20 do tubo de coleta de sangue 100. O mecanismo de sucção de amostra 450 move horizontalmente o tubo de sucção 20 acima da primeira câmara 420. O mecanismo de sucção de amostra 450 abaixa o tubo de sucção 20 em relação à primeira câmara 420 e a seção de medição 21 gera uma pressão positiva para descarregar a amostra de sangue aspirada na primeira câmara 420. O mecanismo de sucção de amostra 450 move o tubo de sucção 20 para cima. O mecanismo de sucção de amostra 450 move horizontalmente o tubo de sucção 20 acima da segunda câmara 55. O mecanismo de sucção de amostra 450 descarrega a amostra de sangue na segunda câmara 55 da mesma maneira conforme na primeira câmara 420.
[00118] A primeira câmara 420 está conectada à seção de detecção FCM 460 (consulte Figura 4). A amostra de sangue descarregada na primeira câmara 420 é misturada com o reagente de coloração de glóbulos brancos contido no recipiente de reagente 200 e o agente hemo- lítico contido no recipiente de reagente R1 para preparar uma amostra de medição. Mais especificamente, é preparada uma amostra de medição na qual os glóbulos vermelhos sofrem hemólise pelo agente he- molítico e os glóbulos brancos são corados com o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente. Tal amostra de medição é preparada, por exemplo, como segue. Primeiro, o agente hemolítico é alimentado à primeira câmara 420 e, em seguida, a amostra de sangueé descarregada na primeira câmara 420. Ar é fornecido à primeira câmara 420 e a mistura é agitada. Como um resultado, os glóbulos vermelhos sofrem hemólise pelo agente hemolítico. Em seguida, o reagente de coloração de glóbulos brancos é alimentado à primeira câmara 420. Ar é fornecido à primeira câmara 420 e a mistura é agitada. Uma reação ocorre na primeira câmara 420 e a coloração com os corantes fluorescentes é realizada. O tempo de reação é, por exemplo, inferior a 1 minuto, mais preferivelmente inferior a 50 segundos e, ainda mais preferivelmente, inferior a 45 segundos. Como um resultado, é obtida uma amostra de medição na qual os glóbulos brancos contidos no sangue são corados com o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente. A seção de detecção FCM 460 está conectada a uma bomba (não mostrado) e a amostra de medição na primeira câmara 420 é alimentada à seção de detecção FCM 460 ao acionar a bomba. A seção de detecção FCM 460 adquire uma pluralidade de sinais ópticos que incluem a fluorescência que corresponde ao primeiro corante fluorescente e a fluorescência que corresponde ao segundo corante fluorescente a partir dos glóbulos brancos.
[00119] A segunda câmara 55 está conectada à seção de detecção de RBC/PLT 461 e à seção de detecção de HGB 462. Uma válvula eletromagnética V13 alterna entre a alimentação da amostra de medição da segunda câmara 55 à seção de detecção de RBC/PLT 46 e a alimentação da medição amostra à seção de detecção de HGB 462. A seção de detecção de RBC/PLT 461 e a seção de detecção de HGB 462 estão conectadas a uma bomba (não mostrado) e a amostra de medição na segunda câmara 55 é alimentada a cada uma dentre a seção de detecção de RBC/PLT 461 e a seção de detecção de HGB 462 ao acionar a bomba. A segunda câmara 55 é usada para preparar uma amostra de medição para detecção de RBC/PLT e uma amostra de medição para detecção de HGB. Será descrito um exemplo de um procedimento para preparar tal amostra. Primeiro, o diluente é alimentado do recipiente de reagente R2 à segunda câmara 55. Em seguida, a amostra de sangue é descarregada na segunda câmara 55. Como um resultado, é obtida uma amostra de medição na qual o sangue está diluído. Este serve como amostra de medição para detecção de RBC/PLT. Uma parte da amostra de medição da segunda câmara 55 é alimentada à seção de detecção de RBC/PLT 461 e uma detecção de tipo de resistência elétrica é realizada. Em seguida, o agente hemolíti- co SLS é alimentado do recipiente de reagente R3 à amostra de medição que permanece na segunda câmara 55. Como um resultado, é obtida uma amostra de medição na qual os glóbulos vermelhos sofre-ramhemólise e a hemoglobina é convertida em hemoglobina SLS. A amostra de medição é alimentada à seção de detecção de HGB 462. No exemplo da Figura 5, a amostra de medição para detecção de RBC/PLT e a amostra de medição para detecção de HGB são preparadas na segunda câmara 55 em comum, mas podem ser preparadas em câmaras separadas.
[00120] O sistema de análise 4000 (consulte Figura 1) com tal con-figuração pode ser configurado para ser capaz de medir itens CBC (Contagem Completa de Sangue) incluindo pelo menos oito parâmetros de contagem de glóbulos vermelhos (RBC), contagem de glóbulos brancos (WBC) , contagem de plaquetas (PLT), concentração de he-moglobina (HGB), valor de hematócrito (HCT), volume corpuscular médio (MCV), hemoglobina corpuscular média (MCH) e concentração de hemoglobina corpuscular média (MCHC). O sistema de análise 4000 pode ser configurado para ser capaz de medir, além dos itens CBC, itens DIFF que classificam os glóbulos brancos em uma pluralidade de subpopulações. Modificação em Relação à Seção de Preparação de Amostra
[00121] A Figura 6 é um diagrama esquemático que mostra outro exemplo da primeira seção de preparação de amostra 440A. Na Figura 6, elementos similares àqueles da Figura 5 não são mostrados. No exemplo mostrado na Figura 5, foi exemplificada uma primeira seção de preparação de amostra 440A configurada para armazenar o reagente que contém o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente em um recipiente de reagente 200 e alimentar o reagente em um recipiente de reagente 200 à câmara 420 através de um mecanismo de alimentação de líquido 430. A primeira seção de preparação de amostra 440A da modificação mostrada na Figura 6 é configurada para armazenar um reagente que contém um primeiro corante fluores- cente e um reagente que contém um segundo corante fluorescente em recipientes de reagentes individuais 200A e 200B, respectivamente, e alimentar os reagentes nos recipientes de reagente 200A e 200B à câmara 420 através de primeiro e segundo mecanismos de alimentação de líquido 430a e 430b individuais, respectivamente.
[00122] A primeira seção de preparação de amostra 440A da Figura 6 inclui uma ou mais câmaras 420 que misturam dois reagentes que contêm um dentre os primeiro e segundo corantes fluorescentes co-nectadas a um porta-recipiente de reagente com uma amostra para preparar uma amostra de medição na qual uma célula é corada com os primeiro e segundo corantes fluorescentes. O primeiro recipiente de reagente 200A que contém o reagente que contém o primeiro corante fluorescente é preso a uma primeira porção de suporte do porta- recipiente de reagente 442 e o segundo recipiente de reagente 200B que contém o reagente que contém o segundo corante fluorescente é preso a uma segunda porção de suporte do porta-recipiente de reagente 442.
[00123] O primeiro mecanismo de alimentação de líquido 430a é fornecido para alimentar o reagente no primeiro recipiente de reagente 200A à câmara 54. A configuração do primeiro mecanismo de alimentação de líquido 430a é conforme descrito com referência à Figura 3. O segundo mecanismo de alimentação de líquido 430b é fornecido para alimentar o reagente no segundo recipiente de reagente 200B à câmara 54. A configuração do segundo mecanismo de alimentação de líquido 430b é similar àquela do primeiro mecanismo de alimentação de líquido. Os tubos de alimentação de líquido 431 dos dois mecanismos de alimentação de líquido 430a e 430b se fundem no meio do percurso de fluxo e estão conectados à câmara 420. No exemplo da Figura 6, é mostrado um exemplo no qual os dois tubos de alimentação de líquido se fundem, mas os dois tubos de alimentação de líquido podem ser conectados individualmente à câmara 420.
[00124] Na configuração da Figura 6, o reagente que contém o primeiro corante fluorescente e o reagente que contém o segundo corante fluorescente estão contidos em diferentes recipientes de reagente 200A e 200B, respectivamente e são alimentados à câmara 420 através de dois mecanismos de alimentação de líquido diferentes para serem misturados com a amostra. Também com esta configuração, pode ser construído um sistema para coloração de um componente de célulassanguíneas contido na amostra com dois corantes fluorescentes.
[00125] A Figura 7 é um diagrama explicativo de uma configuração que mostra um exemplo de um sistema óptico da seção de detecção FCM 460. Conforme mostrado na Figura 7, a seção de detecção FCM 460 inclui uma primeira fonte de luz 4111a e uma segunda fonte de luz 4111b com diferentes comprimentos de onda, uma célula de fluxo 4113, espelhos dicroicos 4118a, 4118b e 4118c, elementos receptores de luz dispersa lateralmente 4121a e 4121b, um elemento receptor de luz dispersa frontalmente 4116 e elementos receptores de luz fluorescente lateral 4122a e 4122b. No exemplo da Figura 7, a fonte de luz inclui a primeira fonte de luz 4111a para excitar o primeiro corante fluorescente e a segunda fonte de luz 4111b para excitar o segundo corante fluorescente.
[00126] A seção de detecção FCM 460 adquire o primeiro sinal que inclui uma pluralidade de sinais, cada um correspondendo à luz dispersa lateralmente e à luz fluorescente lateral pela primeira fonte de luz 4111a e o segundo sinal que inclui uma pluralidade de sinais, cada um correspondendo à luz dispersa frontalmente, luz dispersa lateralmente e luz fluorescente lateral pela segunda fonte de luz 4111b. Conforme descrito acima, a seção de detecção FCM 460 está conectada à primeira câmara 420 da primeira seção de preparação de amostra 440A (consulte Figura 5). A amostra de medição preparada na primei- ra câmara 420 flui para uma célula de fluxo (célula de fluxo de bainha) 4113 da seção de detecção FCM 460. No exemplo da Figura 7, a amostra de medição flui em uma direção perpendicular a uma superfície de papel. Em um estado no qual a amostra de medição está fluindo na célula de fluxo 4113, a primeira fonte de luz 4111a e a segunda fonte de luz 4111b irradiam a célula de fluxo 4113 com luz. Mais especificamente, a luz emitida pela primeira fonte de luz 4111a é refletida pelo espelho dicroico 4118a e a luz é aplicada à célula de fluxo 4113. A luz emitida pela segunda fonte de luz 4111b é transmitida através do espelho dicroico 4118a e a luz é aplicada à célula de fluxo 4113.
[00127] A primeira fonte de luz 4111a e a segunda fonte de luz 4111b da seção de detecção FCM 460 não estão particularmente limitadas e uma fonte de luz de um comprimento de onda adequado para excitar o corante fluorescente é selecionada. Por exemplo, a primeira fonte de luz 4111a pode emitir luz de um primeiro comprimento de onda e a segunda fonte de luz 4111b pode emitir luz de um segundo comprimento de onda maior do que o primeiro comprimento de onda. Por exemplo, o primeiro comprimento de onda é a partir de 315 a 490 nm, de preferência a partir de 400 a 450 nm e, mais preferivelmente, a partir de 400 a 410 nm. O segundo comprimento de onda é a partir de 610 a 750 nm, de preferência a partir de 620 a 700 nm e, mais preferivelmente, a partir de 633 a 643 nm. Como tal, a primeira e segunda fontes de luz 4111a e 4111b, por exemplo, uma fonte de luz laser se- micondutora, uma fonte de luz laser de gás, tal como uma fonte de luz laser de argônio e um laser de hélio-neônio, uma lâmpada de arco de mercúrio ou similar podem ser usadas. Especialmente, uma fonte de luz laser semicondutora é preferível porque ela é barata comparado com uma fonte de luz laser a gás. Conforme descrito acima, ao selecionar a primeira fonte de luz 4111a e a segunda fonte de luz 4111b em que as bandas de comprimento de onda da luz a ser emitida são sepa- radas uma da outra, é fácil selecionar um corante no qual a sobreposição de bandas de comprimento de onda de fluorescência dos corantes fluorescentes, cada um correspondendo a cada fonte de luz, é pequena. No caso em que a sobreposição das bandas de comprimento de onda da fluorescência emitida pelo corante fluorescente é grande, é necessário lidar com o vazamento a ser descrito posteriormente. No entanto, uma vez que pode ser selecionado um corante fluorescente que tem uma pequena sobreposição (ou nenhuma sobreposição) das bandas de comprimento de onda da fluorescência, não é necessário lidar com o vazamento.
[00128] O elemento receptor de luz dispersa frontalmente 4116 está posicionado para receber a luz dispersa frontalmente emitida a partir da célula com base na luz emitida pela segunda fonte de luz 4111b. O elemento receptor de luz dispersa frontalmente 4116 é, por exemplo, configurado para receber apenas luz dispersa direta que corresponde à luz emitida pela segunda fonte de luz 4111b. O elemento receptor de luz dispersa frontalmente 4116 é, por exemplo, um fotodiodo. Neste exemplo, o elemento receptor de luz 4116 recebe a luz dispersa direta do segundo comprimento de onda emitida a partir da segunda fonte de luz 4111b, mas o elemento receptor de luz 4116 pode, alternativamente, receber a luz dispersa direta do primeiro comprimento de onda emitido a partir da primeira fonte de luz 4111a.
[00129] O elemento receptor de luz dispersa lateralmente 4121a está posicionado para receber luz dispersa lateralmente que correspondeà luz proveniente da primeira fonte de luz 4111a. A luz dispersa lateralmente que corresponde à luz emitida a partir da primeira fonte de luz 4111a (a primeira luz dispersa lateralmente) é refletida pelo espelho dicroico 4118b e a primeira luz dispersa lateralmente é recebida pelo elemento receptor de luz dispersa lateralmente 4121a. O elemento receptor de luz dispersa lateralmente 4121a é, por exemplo, um fo- todiodo.
[00130] O elemento receptor de luz dispersa lateralmente 4121b está posicionado para receber a luz dispersa lateralmente que correspondeà luz proveniente da segunda fonte de luz 4111b. A luz dispersa lateralmente que corresponde à luz emitida a partir da segunda fonte de luz 4111b (a segunda luz dispersa lateralmente) é refletida pelo espelho dicroico 4118c e a segunda luz dispersa lateralmente é recebida pelo elemento receptor de luz dispersa lateralmente 4121b. O elemento receptor de luz dispersa lateralmente 4121b é, por exemplo, um fo- todiodo.
[00131] O elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a está posicionado para receber fluorescência que corresponde à luz prove-niente da primeira fonte de luz 4111a, isto é, a luz gerada pela excitação do primeiro corante fluorescente pela luz do primeiro comprimento de onda proveniente da primeira fonte de luz 4111a. A luz fluorescente lateral que corresponde à luz emitida pela primeira fonte de luz 4111a (a primeira luz fluorescente lateral) é transmitida através do espelho dicroico 4118b e a primeira luz fluorescente lateral é recebida pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a. O elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a é, por exemplo, um fotodiodo de avalanche.
[00132] O elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b está posicionado para receber fluorescência que corresponde à luz prove-niente da segunda fonte de luz 4111b, isto é, a luz gerada pela excitação do segundo corante fluorescente pela luz do segundo comprimento de onda proveniente da segunda fonte de luz 4111b. A luz fluorescente lateral que corresponde à luz emitida pela segunda fonte de luz 4111b (a segunda luz fluorescente lateral) é transmitida através do espelho dicroico 4118c e a segunda luz fluorescente lateral é recebida pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b. O elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b é, por exemplo, um fotodio- do de avalanche. Fotomultiplicadores podem ser usados como elemento receptor de luz dispersa frontalmente 4116, elementos receptores de luz dispersa lateralmente 4121a e 4121b e elementos receptores de luz fluorescente lateral 4122a e 4122b.
[00133] Cada um dentre os elementos de recepção de luz dispersa frontalmente 4116, os elementos de recepção de luz dispersa lateralmente 4121a e 4121b e os elementos de recepção de luz fluorescente lateral 4122a e 4122b emite um sinal elétrico em uma forma de onda, incluindo um pulso que corresponde à intensidade de luz recebida (também denominado como um sinal luminoso recebido). Normalmente, cada pulso do sinal de luz recebido corresponde a uma célula (por exemplo, glóbulo branco). Cada um dos sinais de luz de entrada é inserido no processador analógico 481. O processador analógico 481 executa processamento, tal como remoção de ruído e suavização, quando de recepção do sinal analógico a partir da seção de detecção FCM 460. O processador analógico 481 envia o sinal analógico processado para o conversor A/D 481a. Os outros processadores analógicos 482 e 483 (consulte Figura 4) são configurados de forma similar ao processador analógico 481.
[00134] O conversor A/D 481a converte a saída de sinal analógico proveniente do processador analógico 481 em um sinal digital. O con-versor A/D 481a converte o sinal analógico do início ao fim da medição da amostra em um sinal digital. Quando uma pluralidade de tipos de sinais analógicos (por exemplo, sinais analógicos que correspondem, respectivamente, à intensidade de luz dispersa frontalmente, a primeira intensidade de luz dispersa lateralmente, a primeira intensidade de fluorescência, a intensidade de segunda luz dispersa lateralmente e a segunda intensidade de fluorescência) são gerados através de medição em um determinado canal de medição, o conversor A/D 481a con- verte cada sinal analógico do início ao fim da medição em um sinal di-gital. Por exemplo, cinco tipos de sinais analógicos (ou seja, o sinal de luz dispersa frontalmente, o sinal de primeira luz dispersa lateralmente, o sinal de primeira fluorescência, o sinal de segunda luz dispersa late-ralmente e o sinal de segunda fluorescência) são inseridos no conversor A/D 481a. O conversor A/D 481a converte cada um dos sinais analógicos de entrada em um sinal digital.
[00135] Por exemplo, o conversor A/D 481a faz amostragem de si-naisanalógicos em uma taxa de amostragem predeterminada (por exemplo, amostragem em 1024 pontos em intervalos de 10 nanosse- gundos, amostragem em 128 pontos em intervalos de 80 nanossegun- dos, amostragem em 64 pontos em intervalos de 160 nanossegundos ou similar). Por exemplo, o conversor A/D 481a gera dados de forma de onda do sinal de luz dispersa direta, dados de forma de onda do sinal de primeira luz dispersa lateralmente, dados de forma de onda do sinal de primeira fluorescência, dados de forma de onda do sinal de segunda luz dispersa lateralmente e dados de forma de onda do sinal de segunda fluorescência para cada componente tangível executando processamento de amostragem em cinco tipos de sinais analógicos que correspondem a células individuais que fluem através da célula de fluxo 4113. O conversor A/D 481a fornece um índice para cada um dos dados de forma de onda gerados. Os dados de forma de onda gerados são, por exemplo, um sinal digital que tem um sinal que corresponde a cada uma das N células contidas em uma amostra. Como um resultado,são gerados cinco sinais digitais que correspondem a cinco tipos de sinais analógicos (sinal de luz dispersa frontalmente, primeiro e segundo sinais de luz dispersa lateralmente e primeiro e segundo sinais de fluorescência) obtidos a partir das células N (consulte Figura 39).
[00136] Além de gerar dados de forma de onda do sinal analógico, o conversor A/D 481a calcula os parâmetros de recursos que repre- sentam recursos morfológicos da célula individual, por exemplo, um valor de pico, uma largura de pulso e uma área de pulso de pulsos do sinal analógico.
[00137] A Figura 8 é um diagrama explicativo de configuração que mostra outro exemplo do sistema óptico da seção de detecção FCM. Conforme mostrado na Figura 8, a fonte de luz da seção de detecção FCM 460x pode ser construída com uma fonte de luz 4111 que excita o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente. Neste caso, a seção de detecção FCM 460x adquire o primeiro sinal que inclui uma pluralidade de sinais, cada um correspondendo à luz dispersa frontalmente, à luz dispersa lateralmente e à luz fluorescente lateral pela fonte de luz 4111 e o segundo sinal que corresponde à luz fluorescente lateral proveniente da fonte de luz 4111.
[00138] Neste caso, por exemplo, a célula de fluxo 4113 é irradiada com luz de um comprimento de onda predeterminado proveniente de uma fonte de luz 4111. A célula contida na amostra de medição que flui através da célula de fluxo 4113 é corada com uma pluralidade de tipos de corantes fluorescentes com diferentes comprimentos de onda de fluorescência emitidos a partir do corante fluorescente a serem excitados, de forma similar ao exemplo descrito acima. Neste exemplo, como a pluralidade de tipos de corantes fluorescentes, é usada uma pluralidade de tipos de corantes fluorescentes com diferentes comprimentos de onda excitados por irradiação com luz de um comprimento de onda predeterminado (por exemplo, 488 nm). A pluralidade de tipos de corantes fluorescentes com diferentes comprimentos de onda a serem excitados significa que, por exemplo, as cores de fluorescência emitidas ao serem excitadas quando cada corante fluorescente é irradiado com luz proveniente de uma fonte de luz são diferentes.
[00139] No sistema óptico da seção de detecção FCM 460x mostrado na Figura 8, a célula contida na amostra de medição é corada com uma pluralidade de corantes fluorescentes e cada fluorescência emitida a partir da pluralidade de corantes fluorescentes ao irradiar a célula com luz proveniente de uma fonte de luz 4111 pode ser detectada. Neste caso, a luz emitida por uma fonte de luz 4111 tem um único comprimento de onda, portanto, quando a célula é irradiada com a luz proveniente de uma fonte de luz 4111, é emitida uma luz dispersa lateralmente que corresponde ao único comprimento de onda da luz. Portanto, no sistema óptico da seção de detecção FCM 460x mostrado na Figura 8, um espelho dicroico 4118 é fornecido para o espelho di- croico e as outras configurações são substancialmente as mesmas do sistema óptico mostrado na Figura 7.
[00140] A fluorescência de cada um dos corantes fluorescentes tem um espectro exclusivo. Portanto, no caso de separação em uma única faixa de comprimento de onda por um sistema óptico (por exemplo, os espelhos dicroicos 4118 e os elementos receptores de luz fluorescente lateral 4122a e 4122b na Figura 7), a fluorescência emitida a partir de um corante fluorescente diferente da fluorescência de um corante conectado a uma molécula alvo em uma célula pode vazar para cada um dos elementos receptores de luz fluorescente laterais 4122a e 4122b. Por exemplo, conforme mostrado no exemplo na Figura 9, quando cada corante fluorescente é excitado ao irradiar uma pluralidade de corantes fluorescentes com luz de um único comprimento de onda, a sobreposição de bandas de comprimento de onda de cada fluorescência emitida pela excitação de cada corante fluorescente pode aumentar. Conforme mostrado na Figura 9 a qual mostra um exemplo de sobreposição de bandas de comprimento de onda de fluorescência, em um caso onde uma pluralidade de corantes fluorescentes com bandas de comprimento de onda sobrepostas de fluorescência é selecionada, por exemplo, uma contramedida contra vazamento de fluorescência é executada.
[00141] A Figura 9 é um diagrama que mostra um exemplo no qual a fluorescência emitida por dois corantes fluorescentes diferentes vaza um para o outro. No exemplo mostrado na Figura 9, é mostrado um exemplo no qual cada fluorescência emitida a partir de dois corantes de corante fluorescente F1 e corante fluorescente F2 vaza um para o outro. No gráfico mostrado na Figura 9, o eixo vertical representa a altitude de fluorescência e o eixo horizontal representa o comprimento de onda. Na luz emitida pelo corante fluorescente F1, a luz na banda de comprimento de onda (a) na Figura 9 é detectada por um elemento receptor de luz fluorescente lateral. Na luz emitida pelo corante fluorescente F2, a luz na banda de comprimento de onda (b) na Figura 9 é detectada pelo outro elemento receptor de luz fluorescente lateral. A banda de comprimento de onda (a) detectada por um elemento receptor de luz fluorescente lateral que corresponde ao corante fluorescente F1 inclui uma banda de comprimento de onda de fluorescência emitida pelo corante fluorescente F2. A banda de comprimento de onda (b) detectada pelo outro elemento receptor de luz fluorescente que corresponde ao corante fluorescente F2 inclui uma banda de comprimento de onda de fluorescência emitida pelo corante fluorescente F1. Portanto, o valor medido da fluorescência pelo corante fluorescente F1 pode ser obtido com mais precisão ao executar uma correção que exclui uma porção que corresponde ao corante fluorescente F2 na fluorescência na faixa de comprimento de onda (a) (que corresponde ao corante fluorescente F1). O valor medido da fluorescência pelo corante fluorescente F2 pode ser obtido com mais precisão ao executar uma correção que exclui uma porção que corresponde ao corante fluorescente F1 na fluorescência na banda de comprimento de onda (b) (que corresponde ao corante fluorescente F2).
[00142] Para corrigir o vazamento de fluorescência mostrado na Figura 9, um controle positivo do corante fluorescente F1 e um contro- le positivo do corante fluorescente F2 são usados. Para o controle po-sitivo do corante fluorescente F1, por exemplo, é usado um reagente de controle que contém uma partícula à qual o corante fluorescente F1 é adicionado. Para o controle positivo do corante fluorescente F2, por exemplo, é usado um reagente de controle que contém uma partícula à qual o corante fluorescente F2 é adicionado.
[00143] A medição do controle positivo do corante fluorescente F1 pelo sistema de análise que inclui o sistema óptico mostrado na Figura 8 é realizada como segue antes de medição da amostra. A luz (luz de um único comprimento de onda) proveniente da fonte de luz 4111 é aplicada à partícula no controle positivo que flui através da célula de fluxo 4113. A fluorescência gerada pela irradiação da partícula com luz é detectada por cada um dos elementos receptores de luz fluorescente laterais 4122a e 4122b. Por exemplo, o elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a corresponde à detecção de fluorescência emitida a partir do corante fluorescente F1 e o elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b corresponde à detecção de fluorescência gerada a partir do corante fluorescente F2. Neste caso, entre a fluorescência emitida pela partícula no controle positivo do corante fluorescente F1, a fluorescência detectada pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b vaza. Por exemplo, quando a intensidade de fluorescência detectada pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a é "100" e a intensidade de fluorescência detectada pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b é "5" entre a fluorescência gerada a partir da partícula no controle positivo do corante fluorescente F1, 5 % da fluorescência do corante fluorescente F1 vazam para o elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b. Por exemplo, quando a intensidade de fluorescência detectada pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a é "10" e a intensidade de fluorescência detectada pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b é "100" entre a fluorescência emitida a partir da partícula no controle positivo do corante fluorescente F2, 10 % da fluorescência do corante fluorescente F2 vazam para o elemento receptor de luz flu-orescente lateral 4122a. Os resultados estão resumidos na Tabela 1 abaixo. Esta Tabela 1 pode ser denominada daqui em diante como uma "matriz de compensação". Tabela 1
[00144] A seguir, será descrito um exemplo no qual um valor medido obtido de uma amostra de medição que contém uma célula corada com cada um dos corantes fluorescentes F1 e F2 é corrigido usando a matriz de compensação. Um exemplo de correção do valor medido é o seguinte.
[00145] • Intensidade de fluorescência corrigida do corante fluores cente F1 pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a = Intensidade de fluorescência medida pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a - (5 % da intensidade de fluorescência quando o controle positivo do corante fluorescente F2 é medido pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b)
[00146] • Intensidade de fluorescência corrigida do corante fluores cente F2 pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b = Intensidade de fluorescência medida pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b - (10 % da intensidade de fluorescência quando o controle positivo do corante fluorescente F1 é medido pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a)
[00147] No exemplo acima, a intensidade de fluorescência quando a fluorescência do controle positivo do corante fluorescente F1 é detectada pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a é "100" e a intensidade de fluorescência quando a fluorescência do controle positivo do corante fluorescente F2 é detectado pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b é "100". Portanto, cada uma das intensidades de fluorescência corrigidas é a seguinte.
[00148] • Intensidade de fluorescência corrigida do corante fluores cente F1 pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a = Intensidade de fluorescência medida pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a 100 -10
[00149] • Intensidade de fluorescência corrigida do corante fluores cente F2 pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b = Intensidade de fluorescência medida pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b 100 -5
[00150] No sistema óptico mostrado nas Figuras 7 e 8, como a fluo-rescência gerada pela excitação do primeiro corante fluorescente e do segundo corante fluorescente, um exemplo no qual a fluorescência gerada na lateral (cerca de 90° em relação à direção de deslocamento nos exemplos das Figuras 7 e 8) em relação à direção de deslocamento da luz de irradiação (luz fluorescente lateral) é detectada, mas o exemplo não está limitado a este exemplo. Por exemplo, a fluorescência gerada na direção de deslocamento frontal da luz de irradiação pode ser detectada ou a fluorescência gerada em um determinado ângulo que não é perpendicular à direção de deslocamento da luz de irradiação, por exemplo, 20 a 90°, pode ser detectada.
[00151] A Figura 10 é um diagrama de blocos que mostra uma con-figuração exemplificativa da unidade de análise 300X. Conforme mostrado na Figura 10, a unidade de análise 300X é eletricamente conectadaà unidade de medição 400 por meio de uma parte de interface 3006. A parte de interface 3006 é, por exemplo, uma interface USB. A unidade de análise 300X inclui um processador 3001, uma memória principal 3017, um barramento 3003, uma porção de armazenamento 3004, a parte de interface 3006, uma parte de exibição 3015 e uma parte de operação 3016. A unidade de análise 300X inclui, por exemplo, um computador (consulte a unidade de análise 300X na Figura 1). A unidade de análise 300X controla a unidade de medição 400 do sistema de análise 4000 ao executar um programa armazenado na porção de armazenamento 3004. A unidade de análise 300X executa, por exemplo, um programa para análise. A unidade de análise 300X analisa os dados adquiridos pela unidade de medição 400. A unidade de análise 300X exibe um resultado de análise na parte de exibição 3015. Por exemplo, no exemplo descrito com referência à Figura 7, a unidade de análise 300X pode realizar a classificação das células ao introduzir,através de um algoritmo de IA aprendido a partir de dados de forma de onda que correspondem a pelo menos uma, de preferência uma pluralidade, dentre a intensidade de luz dispersa frontalmente, primeira intensidade de luz dispersa lateralmente, primeira intensidade de fluorescência, segunda intensidade de luz dispersa lateralmente e segunda intensidade de fluorescência adquirida pelo unidade de medição 400 a partir de uma célula individual pela seção de detecção FCM 460. Alternativamente, a unidade de análise 300X pode realizar a classificação de células com base em parâmetros de recursos (valor de pico, largura de pulso, área de pulso) da célula individual com base na intensidade de luz dispersa frontalmente, a primeira intensidade de luz dispersa lateralmente, a primeira intensidade de fluorescência, a segunda intensidade de luz dispersa lateralmente e a segunda intensidade de fluorescência. Por exemplo, como um método de classificação de partículas em uma pluralidade de tipos usando uma pluralidade de parâmetros de recursos, é possível adotar um método de classificação de uma pluralidade de partículas em uma pluralidade de tipos ao re-presentar as partículas em um espaço de coordenadas multidimensional que tem uma pluralidade de parâmetros tais como eixos, classificar pelo menos algumas partículas em uma pluralidade de populações que correspondem a uma pluralidade de tipos, obter o grau de atribuição de cada partícula para cada população com base em uma posição do centroide de cada população e a distância entre as partículas e re- classificaras partículas com base no grau de atribuição. Tal método de classificação é descrito, por exemplo, na Patente Norte-Americana N.0 5.555.198. A Patente Norte-Americana N.o 5.555.198 é incorporada ao presente documento como referência. Alternativamente, a classificação com base no algoritmo AI pode ser realizada em algumas células contidas em uma amostra de medição e a classificação com base nos parâmetros de recursos pode ser realizada em outras células.
[00152] O processador 3001 é uma unidade de processamento central (CPU) e executa um programa expandido da porção de armazenamento 3004 para a memória principal 3017. A porção de armazenamento 3004 é, por exemplo, um disco rígido ou uma unidade de estado sólido (SSD). A porção de armazenamento 3004 armazena, por exemplo, um programa para controlar a unidade de medição 400, um programa para analisar os dados adquiridos pela unidade de medição 400 e assim por diante. A parte de exibição 3015 inclui uma tela de computador. A parte de exibição 3015 está eletricamente conectada ao processador 3001 através da parte de interface 3006 e do barra- mento 3003. A parte de exibição 3015 exibe, por exemplo, um resultado de análise de dados adquiridos pela unidade de medição 400.
[00153] A parte de operação 3016 inclui um teclado, um mouse ou um dispositivo apontador, incluindo um painel de toque. Um usuário, tal como um médico ou um técnico médico, pode inserir uma solicitação de medição no sistema de análise 4000 e inserir uma instrução de medição de acordo com a solicitação de medição ao operar a parte de operação 3016. A parte de operação 3016 também pode receber uma instrução para exibir um resultado de inspeção do usuário. O usuário pode operar a parte de operação 3016 para navegar por várias infor-mações relacionadas ao resultado da inspeção, por exemplo, um gráfico, um mapa e informações de sinalização fornecidas ao espécime. A unidade de medição 400 descrita acima é eletricamente conectada à unidade de análise 300X através da parte de interface 3006.
[00154] A Figura 11 é uma vista em perspectiva que mostra outra configuração exemplificativa do sistema de análise 4000. Nos exemplos de configuração mostrados nas Figuras 1 a 10, foi exemplificado o sistema de análise 4000 no qual a unidade de medição 400 e a unidade de análise 300X são fornecidas como corpos separados. No entanto, conforme mostrado na Figura 11, o sistema de análise 4001 pode ser aquele no qual a seção de análise 300X está localizada na unidade de medição 400. De acordo com esta configuração, todo o sistema de análise 4001 é compacto.
[00155] A Figura 12 é um diagrama de blocos que mostra uma ou-traconfiguração exemplificativa da unidade de medição. Os exemplos das Figuras 2, 5 e 6 mostram exemplos nos quais há um sistema de medição (também denominado como um canal de medição) que pode ser medido pela seção de detecção FCM 460. A configuração exempli- ficativa da Figura 12 mostra um exemplo no qual são fornecidos cinco canais de medição.
[00156] A primeira seção de preparação de amostra 440A inclui cinco câmaras 54a a 54e. As câmaras 54a a 54e são usadas em canais de medição de DIFF, RET, WPC, PLT-F e WNR, respectivamente. Para cada uma das câmaras 54a a 54e, um recipiente de agente hemolítico que contém um agente hemolítico que é um reagente e um recipiente de solução corante que contém uma solução corante que corresponde a cada canal de medição podem ser alimentados através de percursos de fluxo. Uma câmara e um recipiente de agente hemolí- tico e um recipiente de solução corante fornecidos na câmara de modo que são capazes de fornecer líquido constituem um canal de medição. Por exemplo, o canal de medição DIFF inclui um recipiente de agente hemolítico que contém um agente hemolítico DIFF que é um reagente para medição DIFF, um recipiente de solução corante que contém uma solução corante DIFF e a câmara DIFF 54a conectada a estes recipi-entesatravés dos percursos de fluxo. Os outros canais de medição são configurados de forma similar. No presente documento, é exemplificado um caso onde um canal de medição é configurado para alimentar um agente hemolítico e uma solução corante à câmara, porém, a presente invenção não está limitada a esta configuração. Por exemplo, uma pluralidade de canais de medição pode ser configurada para alimentar um agente hemolítico e uma solução corante a diferentes pluralidades de câmaras. Em outras palavras, um reagente (um agente hemolítico e uma solução corante) pode ser compartilhado pela pluralidade de canais de medição e, por exemplo, dois dos cinco canais de medição podem ser canais de medição DIFF. Um canal de medição pode ser fornecido ou, por exemplo, apenas dois canais de medição DIFF podem ser fornecidos.
[00157] O mecanismo de sucção de amostra 450 (consulte Figuras 2, 4 e 5) aspira uma amostra de sangue do recipiente de amostra T que contém a amostra de sangue. O mecanismo de sucção de amostra 450 move a amostra de sangue aspirada para uma posição superior na câmara do canal de medição que corresponde à ordem entre as câmaras 54a a 54e através deum movimento horizontal/vertical pela seção de mecanismo de dispositivo 455 (consulte Figura 4). O mecanismo de sucção de amostra 450 descarrega a amostra de sangue aspirada para dentro da câmara. A seção de preparação de amostra 440 prepara uma amostra de medição ao alimentar o agente hemolítico e a solução corante correspondentes à câmara da qual a amostra de sangueé descarregada e ao misturar a amostra de sangue, o agente he- molítico e a solução corante na câmara. A amostra de medição preparada é alimentada da câmara para a seção de detecção FCM 460 através dos percursos de fluxo e as células são medidas por meio do método de citometria de fluxo.
[00158] Os canais de medição descritos acima (DIFF, RET, WPC, PLT-F, WNR) correspondem aos itens de medição incluídos na ordem de medição. Por exemplo, DIFF corresponde a um item de medição relacionado à classificação de glóbulos brancos. RET corresponde a um item de medição relacionado aos reticulócitos. WPC corresponde a um item de medição relacionado à medição de glóbulos brancos anormais. PLT-F corresponde a um item de medição relacionado à medida óptica de plaquetas. WNR corresponde a um item de medição relacionado a glóbulos brancos e glóbulos vermelhos nucleados. Os canais de medição descritos acima (DIFF, RET, WPC, PLT-F, WNR) são medidos pela seção de detecção FCM 460.
[00159] A Figura 13 é uma vista que mostra um estado no qual uma tampa 442 da unidade de medição 40 está aberta. A Figura 14 é uma vista em perspectiva que mostra o porta-recipiente de reagente 60 da unidade de medição 400 e a Figura 15 é uma vista frontal que mostra o porta-recipiente de reagente 60 mostrado na Figura 14. Uma tampa frontal que pode ser aberta e fechada 442 está localizada no lado frontal da unidade de medição 400 (consulte Figura 1) do sistema de análise 4000 (consulte Figura 13). O porta-recipiente de reagente 60 está localizado na porção superior da superfície frontal da unidade de medição 400 e, conforme mostrado na Figura 13, ao abrir a tampa 442, o porta-recipiente de reagente 60 fica exposto, podendo ser acessado pelo usuário. Ou seja, o usuário pode instalar o recipiente de reagente 200 no porta-recipiente de reagente 60 e retirar o recipiente de reagente 200 do porta-recipiente de reagente 60.
[00160] Conforme mostrado nas Figuras 14 e 15, o porta-recipiente de reagente 60 inclui cinco porções de suporte 60a, 60b, 60c, 60d e 60e e o porta-recipiente de reagente 60 é configurado para conter um total de cinco (cinco tipos) recipientes de reagente 200 (ou 300). Os recipientes de reagente 200 (ou 300) suportados pelo porta-recipiente de reagente 60 contêm diferentes tipos de reagentes (soluções corantes) para medir uma pluralidade de itens de medição pela seção de detecção FCM 460. A cor do recipiente de reagente é, por exemplo, preto. Como recipientes de reagentes, um recipiente de reagente de tamanho grande (cerca de 100 mL) 200 (consulte Figura 22) e um recipiente de reagente de tamanho pequeno (cerca de 20 mL) 300 (consulte Figura 25) são usados de acordo com o tipo de reagente. O volume do recipiente de reagente não está limitado ao acima e pode ser, por exemplo, inferior a 20 ml, inferior a 100 ml ou superior a 100 ml. Por exemplo, o volume do recipiente de reagente pode ser de cerca de 10 ml, cerca de 40 ml, cerca de 80 ml ou cerca de 300 ml. Cada uma das porções de suporte 60a a 60e é configurada, por exemplo, para ser capaz de conter o recipiente de reagente 200 ou 300. Portanto, as cinco porções de suporte 60a a 60e têm a mesma configuração e, por exemplo, um recipiente de reagente de tamanho grande 200 pode ser colocado nas três porções de suporte 60a a 60c e um recipiente de reagente de tamanho pequeno 300 pode ser colocado nas duas porções de suporte 60d e 60e. Cada uma das porções de suporte 60a a 60e inclui um chassi 61, uma porção de suporte de recipiente de reagente 62, uma tampa 63 para abrir e fechar a porção de suporte de recipiente de reagente 62, o tubo de sucção 64 descrito acima e um mecanismo de elevação de tubo de sucção 65.
[00161] A porção de suporte de recipiente de reagente 62 está loca- lizada em uma porção inferior (consulte Figuras 14 e 15) do chassi 61. A porção de suporte de recipiente de reagente 62 inclui uma primeira parte de recepção 621 que tem uma altura H conforme mostrado na Figura 15 e uma largura W11 conforme mostrado na Figura 16, uma parte de recepção intermediária 622 que é contínua com a primeira parte de recepção 621 e se expande a partir da primeira parte de recepção 621 em um ângulo ?2 predeterminado e uma segunda parte de recepção 623 que é contínua com a parte de recepção intermediária 622. Conforme mostrado nas Figuras 16 e 17, a primeira parte de recepção 621 pode receber uma primeira porção de armazenamento 210 (310) descrita posteriormente do recipiente de reagente 200 (300) e a primeira parte de recepção 621 tem uma largura (largura W11) que impede a entrada do dedo de um usuário. O dedo significa, por exemplo, um dedo adulto que tem uma espessura média e, por exemplo, a largura W11 é de 10 mm. A segunda parte de recepção 623 tem uma largura W12 maior do que a largura W11. Conforme mostrado nas Figuras 16 e 17, a primeira parte de recepção 621 está localizada no lado mais interno (lado da direção da seta Y2) da porção de suporte de recipiente de reagente 62. O recipiente de reagente 200 (300) é inserido em direção ao lado interno da porção de suporte de recipiente de reagente 62 a partir de um lado da porção de entrada 212 (312) descrita posteriormente da primeira porção de armazenamento 210 (310). Portanto, a porção de suporte de recipiente de reagente 62 é configurada para conter o recipiente de reagente 200 (300) em um estado onde a porção de entrada 212 (312) do recipiente de reagente 200 (300) é inserida de modo a ficar no lado mais interno (lado da direção da seta Y2).
[00162] Conforme mostrado nas Figuras 16 a 18, a porção de suporte de recipiente de reagente 62 inclui um par de elementos guia 627 que orienta ambas as superfícies laterais 214 (314) da primeira porção de armazenamento 210 (310) do recipiente de reagente 200 (300) para orientar o recipiente de reagente 200 (300) para a primeira parte de recepção 621. O elemento guia 627 inclui uma primeira parte guia 627a que orienta a primeira porção de armazenamento 210 (310) do recipiente de reagente 200 (300) para a primeira parte de recepção 621, uma parte guia intermediária 627b que corresponde à parte de recepção intermediária 622 e uma segunda parte guia 627c que orienta uma segunda porção de armazenamento 220 (320) descrita posteriormente do recipiente de reagente 200 (300) para a segunda parte de recepção 623. O elemento guia 627 é formado por uma parte (ambas as superfícies laterais internas) do chassi 61. A primeira parte de recepção 621, a parte de recepção intermediária 622 e a segunda parte de recepção 623 são formadas por um espaço entre um par de primeiras partes guia 627a correspondentes, um espaço entre um par de partes guia intermediárias 627b correspondentes e um espaço entre um par de segundas partes guia 627c correspondentes, respectivamente. Portanto, a largura W11 da primeira parte de recepção 621 é igual à largura entre o par de primeiras partes guia 627a e a largura W12 da segunda parte de recepção 623 é igual à largura entre o par de segundas partes guia 627c.
[00163] O par de elementos guia 627 tem uma altura H (consulte Figura 15) substancialmente igual à altura H1 (consulte Figuras 24 e 27) de ambas as superfícies laterais 214 (314) da primeira porção de armazenamento 210 (310) do recipiente de reagente 200 (300). O par de elementos guia 627 é configurado para ser capaz de orientar a partir de uma extremidade inferior para uma extremidade superior de ambas as superfícies laterais 214 (314) da primeira porção de armazenamento 210 (310) do recipiente de reagente 200 (300). O par de elementos guia 627 tem um formato que reflete o formato externo da primeiraporção de armazenamento 210 (310). O par de elementos guia 627 é configurado para ser capaz de orientar ambas as superfícies la-terais 214 (314) da primeira porção de armazenamento 210 (310) do recipiente de reagente 200 (300). A parte guia intermediária 627b e a segunda parte guia 627c têm formatos que refletem o formato externo do recipiente de reagente de tamanho grande 200. A parte guia intermediária 627b e a segunda parte guia 627c são configuradas para serem capazes de orientar ambas as superfícies laterais de uma metade do lado da ponta (lado da primeira porção de armazenamento 210) da segunda porção de armazenamento 220. A segunda porção de armazenamento 220 do recipiente de reagente de tamanho grande 200 tem uma largura W22 maior do que uma largura W21 da primeira porção de armazenamento 210 e a primeira parte guia 627a é dotada de uma largura W11 menor do que a largura W22 da segunda porção de armazenamento 220.
[00164] Conforme mostrado na Figura 18, a porção de suporte de recipiente de reagente 62 inclui uma porção de suporte 624 que suporta o recipiente de reagente 200 (300) e um mecanismo de rotação 625 que suporta rotativamente a porção de suporte 624. A porção de suporte 624 é um elemento em formato de placa que inclui integralmente uma parte frontal 624a apoiada em uma superfície frontal (superfície de ponta da primeira porção de armazenamento 210 (310), consulte Figuras 16 e 17) do recipiente de reagente 200 (300) e uma parte lateral inferior 624b apoiada em um superfície inferior do recipiente de reagente 200 (300). Ou seja, a porção de suporte 624 é moldada para ter um formato que corresponde ao formato do recipiente de reagente 200 (300). O mecanismo de rotação 625 é configurado de modo que uma saliência 624c localizada na porção de suporte 624 seja inserida no rolamento anular 625a localizado sobre a superfície interna do chassi 61, pelo que a porção de suporte 624 pode ser girada com a posição da saliência 624c (rolamento 625a) como centro de rotação.
[00165] Uma porção de travamento 626 que trava a porção de suporte rotativa 624 que apoia na parte frontal 624a da porção de suporte 624 está localizada dentro do chassi 61. A porção de travamento 626 é dotada de um ímã e a porção de travamento 626 é configurada para reter a parte frontal 624a (porção de suporte 624) em um estado de contato na parte frontal 624a da porção de suporte 624. Consequentemente, a porção de suporte 624 é configurada para se mover para uma posição de colocação P1 (consulte Figura 19) onde a parte lateral inferior 624b é horizontal (a superfície inferior do recipiente de reagente 200 (300) é horizontal) e uma posição definida Q1 (consulte Figura 20) onde a parte frontal lateral 624a é vertical. Conforme mostrado na Figura 20, a porção de entrada 212 (312) (consulte Figuras 16 e 17) descrita posteriormente do recipiente de reagente 200 (300) é configurada para ser horizontal (ortogonal ao tubo de sucção 64) em um estado onde o recipiente de reagente 200 (300) está posicionado na posição definida Q1.
[00166] Conforme mostrado na Figura 19, a tampa 63 está posicionada de modo a se projetar de cada uma das porções de suporte 60a a 60e (chassi 61) em direção ao lado frontal (lado da direção da seta Y1) e a tampa 63 está presa ao mecanismo de elevação de tubo de sucção 65. Com o mecanismo de elevação de tubo de sucção 65, a tampa 63 é configurada para ser móvel para uma posição elevada P2 (consulte Figura 19) na qual a porção de suporte de recipiente de reagente 62 está aberta e uma posição abaixada Q2 (consulte Figura 21) na qual a porção de suporte de recipiente de reagente 62 está coberta (fechada). Portanto, a tampa 63 é configurada para permitir que o recipiente de reagente 200 (300) seja recolhido e retirado na posição elevada P2 e evitar que o recipiente de reagente 200 (300) seja recolhido e retirado na posição abaixada Q2.
[00167] Conforme mostrado na Figura 15, uma porção de janela 631 que inclui uma abertura está localizada em uma posição prede-terminada da tampa 63. Conforme mostrado na Figura 21, ela é confi-gurada de modo que, em um estado onde a tampa 63 está posicionada na parte inferior posição Q2 que cobre (fecha) a porção de suporte de recipiente de reagente 62, o usuário pode reconhecer visualmente uma etiqueta 250 (350, consulte Figura 25) anexada ao recipiente de reagente 200 (300) através da porção de janela 631. Uma etiqueta para identificar o tipo (tipo de reagente) do recipiente de reagente 200 (300) é impressa em uma posição visível através da porção de janela 631 da etiqueta 250 (350). Uma etiqueta 632 na qual está impressa uma etiqueta para identificar o tipo (tipo de reagente) do recipiente de reagente 200 (300) colocado na porção de suporte de recipiente de reagente 62 é impressa na tampa 63. Ou seja, uma vez que os recipientes de reagente 200 (300), cada um contendo um tipo predeterminado de reagente, são colocados nas cinco porções de suporte 60a a 60e, a etiqueta 632 para identificar o tipo de reagente a ser colocado é fixada à tampa 63 de cada uma das porções de suporte 60a a 60e de forma correspondente. Consequentemente, ela é configurada de modo que, em um estado no qual o recipiente de reagente 200 (300) está colocado na porção de suporte de recipiente de reagente 62 (em um estado no qual a tampa 63 está abaixada para a posição abaixada Q2), se o reagente correto é definido em cada uma das porções de suporte 60a a 60e pode ser confirmado a partir da etiqueta 632 fixada na tampa 63 e a etiqueta 250 (350) visualmente reconhecida através da porção de janela 631.
[00168] Conforme mostrado nas Figuras 16 e 20, o tubo de sucção 64 está posicionado em uma posição superior na parte interna (lado da direção da seta Y2) da primeira parte de recepção 621 da porção de suporte de recipiente de reagente 62. Ele é configurado para que o tubo de sucção 64 seja movido na direção vertical (direção Z) pelo mecanismo de elevação de tubo de sucção 65 que retém o tubo de sucção 64. Como um resultado, o tubo de sucção 64 é configurado para entrar na primeira porção de armazenamento 210 (310) através da porção de entrada 212 (312) do recipiente de reagente 200 (300) inserido no lado interno da porção de suporte de recipiente de reagente 62, de modo que o tubo de sucção 64 possa aspirar o reagente dentro do recipiente de reagente 200 (300). O tubo de sucção 64 é moldado de modo que uma ponta do mesmo possa penetrar (perfurar) em um elemento de vedação 213 (313) para vedar uma porção de abertura 212a (312a) (consulte Figuras 17 e 18) formada na porção de entrada 212 (312) do recipiente de reagente 200 (300). Conforme descrito com referência às Figuras 2, 5 e 6, o tubo de sucção 64 constitui uma extremidade do tubo de alimentação de líquido 431 e a extremidade superior do tubo de sucção 64 está conectada ao percurso de fluxo (não mostrado nas Figuras 19 a 21) que conduz à seção de alimentação de líquido 430 e a câmara 420.
[00169] Conforme mostrado nas Figuras 19 e 20, o mecanismo de elevação de tubo de sucção 65 é configurado para reter o tubo de sucção 26 e a tampa 63. O mecanismo de elevação de tubo de sucção 65 é engatado nas ranhuras 611 e 612 localizadas no chassi 61 de modo a ser móvel na direção vertical (direção Z). Assim, o mecanismo de elevação de tubo de sucção 65 é configurado para mover integralmente o tubo de sucção 26 na direção vertical (direção Z) em conjunto com a abertura e fechamento (movimento de elevação e abaixamento) da tampa 63. Conforme mostrado na Figura 19, em um estado no qual a tampa 63 está posicionada na posição elevada P2, o tubo de sucção 26 está posicionado na posição elevada P3 acima da porção de suporte de recipiente de reagente 62 (fora do recipiente de reagente 200 (300) e da primeira parte de recepção 621). Conforme mostrado na Figura 21, em um estado no qual a tampa 63 está posicionada na po- sição abaixada Q2, o tubo de sucção 26 está posicionado na posição abaixada Q3 próximo à porção inferior interna imediatamente abaixo da porção de entrada 212 (312) do recipiente de reagente 200 (300).
[00170] A ponta do tubo de sucção 26 inserida no recipiente de reagenteé uma primeira extremidade do tubo de alimentação de líquido. A primeira extremidade do tubo de sucção 26 é fixada na posição abaixada Q3 descrita acima enquanto o recipiente de reagente é colocado no dispositivo. Ou seja, enquanto a medição de uma pluralidade de amostras é realizada usando o reagente no recipiente de reagente, a primeira extremidade do tubo de sucção 26 é fixada na posição abaixada Q3.
[00171] Conforme mostrado nas Figuras 22 e 25, o recipiente de reagente de tamanho grande (volume de cerca de 100 mL) 200 e o recipiente de reagente de tamanho pequeno (volume de cerca de 20 mL) 300 são configurados para serem usados correspondendo ao tipo de reagente a ser contido. Cada um dos recipientes de reagente 200 e 300 inclui integralmente a primeira porção de armazenamento 210 (310) dotada da porção de entrada 212 (312) na qual o tubo de sucção 26 pode entrar em uma porção superior e a segunda porção de armazenamento 220 (320) contínua com a primeira porção de armazenamento 210 (310). Conforme mostrado nas Figuras 17 e 18, a primeira porção de armazenamento 210 (310) é configurada para ser posicionada dentro da primeira parte de recepção 621 em um estado onde o recipiente de reagente 200 (300) está colocado na porção de suporte de recipiente de reagente 62. Conforme mostrado nas Figuras 17 e 18, a segunda porção de armazenamento 220 (320) é configurada para ser posicionada fora da primeira parte de recepção 621 em um estado onde o recipiente de reagente 200 (300) está colocado na porção de suporte de recipiente de reagente 62. Conforme mostrado nas Figuras 23 e 26, um primeiro espaço de armazenamento de reagente 211 (311) está localizado dentro de cada uma das primeiras porções de armazenamento 210 (310) e um segundo espaço de armazenamento de reagente 221 (321) contínuo com o primeiro espaço de armazenamento de reagente 211 (311) está localizado dentro de cada uma das segundas porções de armazenamento 220 (320).
[00172] A primeira porção de armazenamento 210 (310) é uma porção que tem um comprimento L11 e estes formatos são substancialmente em comum aos recipientes de reagentes 200 e 300. Uma vez que os formatos das primeiras porções de armazenamento 210 e 310 são substancialmente os mesmos, os recipientes de reagentes 200 e 300 podem ser ajustados nas porções de suporte de recipiente de reagente 62 (primeiras partes de recepção 621) das porções de suporte 60a a 60e que têm o mesmo formato.
[00173] Especificamente, conforme mostrado nas Figuras 17 e 18, cada uma das primeiras porções de armazenamento 210 (310) tem uma largura constante W21 ligeiramente menor do que a largura W11 da primeira parte de recepção 621. Nas primeiras porções de armazenamento 210 (310), a porção de entrada 212 (312) está localizada em uma extremidade no lado frontal (direção na qual a primeira porção de armazenamento 210 (310) é inserida na porção de suporte de recipiente de reagente 62, direção da seta Y2 nas Figuras 17 e 18). Portanto, o recipiente de reagente 200 (300) é configurado para ser inserido no lado da porção de entrada 212 (312) da primeira porção de armazenamento 210 (310) em direção ao lado interno da porção de suporte de recipiente de reagente 62. Conforme mostrado nas Figuras 23 e 26, a porção de entrada 212 (312) está posicionada de modo a se projetar para cima a partir de uma superfície superior externa 200b (300b). Conforme mostrado nas Figuras 22 e 25, a porção de entrada saliente 212 (312) é formada com a porção de abertura 212a (312a) se comunicando com o interior da primeira porção de armazenamento 210 (310). O elemento de vedação 213 (313) feito de folha de alumínio ou similar está localizado na porção de entrada 212 (312) de modo a fechar a porção de abertura 212a (312a) para que o recipiente de reagente 200 (300) seja vedado. O diâmetro externo da porção de entrada 212 (312) é igual à largura W21 da primeira porção de armazenamento 210 (310) e a porção de entrada 212 (312) é formada para se projetar continuamente (nivelada) a partir da superfície frontal da primeiraporção de armazenamento 210 (310).
[00174] Conforme mostrado nas Figuras 23 e 26, o recipiente de reagente 200 (300) é configurado de modo que uma superfície inferior interna 200a (300a) não seja paralela à superfície superior externa 200b (300b) e a distância entre a superfície inferior interna 200a (300a) e a superfície superior externa 200b (300b) aumenta à medida que se aproxima da porção de entrada 212 (312). Na segunda modalidade, a superfície inferior interna 200a (300a) é configurada para ser uma superfície inclinada em um ângulo ?1 (cerca de 10 graus) em relação à superfície superior externa 200b (300b). Há uma porção inferior 200c (300c) substancialmente paralela à superfície superior externa 200b (300b) em uma porção de superfície inferior imediatamente abaixo da porção de entrada 212 (312) do recipiente de reagente 200 (300) e uma superfície inclinada 200d (300d) começa a partir de uma extremidade da porção inferior 200c (300c). Como um resultado, o recipiente de reagente 200 (300) é configurado de modo que a porção de entrada 212 (312) esteja localizada na posição mais alta e a porção inferior 200c (300c) imediatamente abaixo da porção de entrada 212 (312) esteja localizada na posição mais baixa em um estado no qual o recipiente de reagente 200 (300) está colocado na posição definida Q1 mostrada na Figura 20.
[00175] A superfície superior externa 200b (300b) do recipiente de reagente 200 (300) é dotada de uma saliência 230 (330) que se proje- ta para cima (em uma direção perpendicular à superfície superior externa 200b (300b)). A saliência 230 (330) tem um formato de placa que tem um comprimento L1 que se estende na direção longitudinal do recipiente de reagente 200 (300). A saliência 230 (330) é formada para ter uma quantidade de saliência (altura de saliência) substancialmente igual à porção de entrada 212 (312). A saliência 230 (330) está localizada em uma posição na proximidade da extremidade no lado posterior (lado da direção da seta Y1 nas Figuras 17 e 18) de cada uma das segundas porções de armazenamento 220 (320). A saliência 230 (330) tem uma função como uma porção de alça para que o usuário possa ajustar ou soltar facilmente o recipiente de reagente 200 (300).
[00176] Por outro lado, o formato da segunda porção de armazenamento 220 (320) é diferente entre o recipiente de reagente 200 e o recipiente de reagente 300. Conforme mostrado na Figura 23, a segundaporção de armazenamento 220 do recipiente de reagente de tamanho grande 200 é contínua com a primeira porção de armazenamento 210. A segunda porção de armazenamento 220 inclui integralmente uma primeira parte 222 cuja largura aumenta com a distância da primeira porção de armazenamento 210 e uma segunda parte 223 que tem uma largura constante W22 maior do que a largura W21. Portanto, conforme mostrado na Figura 23, no recipiente de reagente 200, o segundo espaço de armazenamento de reagente 221 dentro da segundaporção de armazenamento 220 é um espaço de armazenamento de reagente localizado continuamente sobre a primeira parte 222 e a segunda parte 223.
[00177] Conforme mostrado na Figura 23, a primeira parte 222 é contínua com a segunda parte 223 de modo a expandir a largura da primeira porção de armazenamento 210 em um ângulo ?2 (cerca de 60 graus). A primeira parte 222 conecta a primeira porção de armazenamento 210 e a segunda parte 223. Uma vez que a segunda parte 223 tem uma largura W22 maior do que a largura W21, o volume do segundo espaço de armazenamento de reagente 221 pode ser asse-gurado em cerca de 100 mL.
[00178] Conforme mostrado nas Figuras 16 e 17, a parte de recepção intermediária 622 da porção de suporte de recipiente de reagente 62 e a segunda parte de recepção 623 contínua com a parte de recepção intermediária 622 e que tem a largura W12 têm formatos que cor-respondemà primeira parte 222 e a segunda parte 223 que tem a largura W22, respectivamente.
[00179] Conforme mostrado na Figura 26, a segunda porção de ar-mazenamento 320 do recipiente de reagente de tamanho pequeno 300 tem uma largura constante W21 que é igual à largura W21 da primeira porção de armazenamento 310. Ou seja, no recipiente de reagente de tamanho pequeno 300, a primeira porção de armazenamento 310 e a segunda porção de armazenamento 320 são formadas de modo a se estender continuamente de modo linear. O comprimento L22 da se-gundaporção de armazenamento 320 é menor do que o comprimento L21 da segunda porção de armazenamento 220 do recipiente de reagente de tamanho grande 200. O recipiente de reagente de tamanho pequeno 300 é configurado para ter um volume de reagente de cerca de 20 mL no total, incluindo a segunda porção de armazenamento 320 que tem uma largura W21 e um comprimento L22 menor do que aqueles da segunda porção de armazenamento 220 do recipiente de reagente de tamanho grande 200.
[00180] Conforme descrito acima, o comprimento L11 da primeira porção de armazenamento 310 é em comum aos recipientes de reagentes 200 e 300 para ser definido na primeira parte de recepção 621. Portanto, conforme mostrado na Figura 18, para o recipiente de reagente de tamanho pequeno 300 em que a primeira porção de armazenamento 310 e a segunda porção de armazenamento 320 são contí- nuas com a mesma largura W21, a região contida na primeira parte de recepção 621 é a primeira porção de armazenamento 310 e a região localizada fora da primeira parte de recepção 621 é a segunda porção de armazenamento 320.
[00181] Ao contrário do recipiente de reagente de tamanho grande 200, o recipiente de reagente de tamanho pequeno 300 está localizado com um recesso 340 que se estende linearmente ao longo da direção longitudinal do recipiente de reagente 300 em uma superfície inclinada 300d da superfície inferior externa. Quando a superfície inclinada 300d é colocada em um plano horizontal pelo recesso 340, a parte periférica externa do recesso 340 serve como um ponto de contato em contato com o plano horizontal. Portanto, mesmo o recipiente de reagente 300 que tem a pequena largura W21 pode ser erguido de forma estável.
[00182] Conforme mostrado nas Figuras 22 e 25, uma etiqueta 250 (350) na qual estão impressos o nome do reagente contido, o número de lote do reagente, a data de validade, o código de barras de identificação e assim por diante é fixada ao recipiente de reagente 200 (300). A etiqueta 250 (350) é fixada sobre a superfície posterior e pelo menos uma das superfícies laterais do recipiente de reagente 200 (300). Uma parte (uma porção que corresponde à superfície posterior do recipiente de reagente 200 (300)) ou toda a etiqueta 250 (350) é dotada de uma cor que indica o tipo de reagente contido, de modo que o tipo de reagente possa ser identificado pela cor exibida na etiqueta 250 (350). É possível confirmar se o recipiente de reagente 200 (300) está ou não colocado nas porções de suporte 60a a 60e corretas dependendo se as cores da etiqueta 250 (350) e da etiqueta 632 (consulte Figura 15) fixadas à tampa 63 do porta-recipiente de reagentes 60 coincidem entre si.
[00183] O reagente no recipiente de reagente 200 (300) pode ser armazenado na temperatura de um ambiente onde o sistema de análi- se 4002 está instalado. A temperatura ambiente na qual o sistema de análise 4002 está instalado é, por exemplo, uma temperatura na faixa a partir de 20 °C a 35 °C. Por exemplo, em uma temperatura ambiente, o reagente no recipiente de reagente 200 (300) pode ser armazenado no dispositivo por vários meses (por exemplo, 60 dias, 90 dias, 120 dias) em um estado no qual o desempenho pode ser assegurado após o recipiente de reagente 200 ser instalado no dispositivo e o elemento de vedação 213 da porção de entrada 212 ser aberto. O reagente contido no recipiente de reagente 200 (300) inclui, por exemplo, uma pluralidade de corantes fluorescentes, cada um correspondendo à luz de uma pluralidade de comprimentos de onda emitidos pela fonte de luz da seção de detecção FCM 460. Nestes corantes fluorescentes, um composto em si constitui o citoplasma, ácido nucleico e DNA de uma célula. Como método para coloração de células sanguíneas, por exemplo, é conhecida a imunocoloração usando um reagente de anticorpo que contém um anticorpo marcado que se liga especificamente a um antígeno na superfície (por exemplo, CD4 ou CD25) da célula, porém, este reagente de anticorpo precisa ser refrigerado e armazenado na geladeira depois de ser usado durante um determinado período de tempo (por exemplo, 8 horas). Ou seja, o usuário precisa retirar o reagente de anticorpo do dispositivo em determinados intervalos de tempo, devolver o reagente de anticorpo para a geladeira e colocar o reagente de anticorpo novamente no dispositivo no momento de uso. A este respeito, no reagente da presente modalidade, uma vez que o próprio composto (corante fluorescente) que constitui o corante cora a célula e não contém o anticorpo, o reagente não precisa ser refrigerado e pode ser armazenado na temperatura ambiente de uso do dispositivo. Portanto, na presente modalidade, uma vez que o recipiente do reagente é instalado no dispositivo durante o período em que o desempenhoé assegurado, substituição não é necessária até que o rea- gente se esgote, a frequência de substituição do reagente é baixa e o custo da operação pelo usuário é reduzido.
[00184] Na presente modalidade, o recipiente de reagente 200 é configurado para suprimir a deterioração da qualidade de um reagente que contém uma pluralidade de corantes fluorescentes após ser instalado na unidade de medição 400 e ser usado continuamente por um longo período de tempo em um estado estar conectado com a unidade de medição 400. Um dos principais meios para suprimir a degradação da qualidade é suprimir o contato entre o reagente e o ar. A fim de suprimir o contato com o ar, a abertura do recipiente de reagente 200 é vedada em um estado no qual o tubo de alimentação de líquido está inserido no recipiente de reagente 200. A fim de permitir a alimentação de reagente pelo tubo de alimentação de líquido que veda a abertura do recipiente de reagente 200, mesmo em um estado onde o contato entre o ar e o reagente é suprimido, o recipiente de reagente 200 inclui uma porção de armazenamento de reagente em formato de bolsa flexível.
[00185] O período de armazenamento do reagente é, por exemplo, 75 dias ou mais e 1 ano ou menos após o recipiente de reagente 200 ser instalado na unidade de medição 400. O período de armazenamentoé a duração de um período em que a precisão da medição usando um reagente pela unidade de medição 400 pode ser assegurada. Na presente modalidade, por exemplo, a precisão da medição é mantida por um período de 75 dias ou mais e 1 ano ou menos em um estado no qual o interior da porção de armazenamento de reagente 10 está vedado. Uma vez que a deterioração do reagente pode ser suprimida pela vedação da porção de armazenamento de reagente 10, a qualidade do reagente pode ser mantida de forma estável por um longo período de tempo. Como um resultado, uma vez que a frequência de substituição do reagente (recipiente de reagente 200) que contém uma pluralidade de corantes fluorescentes pode ser reduzida, a carga para o usuário relacionada a uma operação de substituição pode ser reduzida. A pluralidade de corantes fluorescentes pode, cada um, estar contida em diferentes recipientes de reagente 200 ou pode estar contida em um recipiente de reagente 200.
[00186] Com referência às Figuras 28 e 29, será descrito um recipiente de reagente 200 de acordo com outra modalidade. O recipiente de reagente 200 é instalado na unidade de medição 400 conforme mostrado na Figura 28A. Conforme mostrado na Figura 28B, um tubo de sucção 252 é inserido no recipiente de reagente 200 de cima em conjunto com uma operação predeterminada na unidade de medição 400. O tubo de sucção 252 constitui uma primeira extremidade do tubo de alimentação de líquido descrito acima. Conforme mostrado na Figura 28B, o recipiente de reagente 200 contém um reagente 12 aspirado repetidamente em um estado onde o tubo de sucção 252 localizado na unidade de medição 400 está inserido. O recipiente de reagente 200 inclui uma porção de armazenamento de reagente 10 e uma armação 20. Daqui em diante, a direção vertical é definida como direção Z. Conforme mostrado na Figura 29, na direção horizontal, a direção longitudinal do recipiente de reagente 200 é definida como a primeira direção A e a direção lateral do recipiente de reagente 200 é definida como a segunda direção B.
[00187] A porção de armazenamento de reagente 10 contém o reagente 12 (consulte Figura 29). Conforme mostrado na Figura 29, a porção de armazenamento de reagente 10 é um elemento de armazenamento de líquido em formato de bolsa. O volume da porção de armazenamento de reagente 10 é, por exemplo, 200 mL ou mais e 500 mL ou menos e 20 mL ou mais e 100 mL ou menos.
[00188] A porção de armazenamento de reagente 10 é moldada em um formato de bolsa por um material similar a um filme. A porção de armazenamento de reagente 10 tem flexibilidade para ser deformável. Conforme mostrado na Figura 30, a porção de armazenamento de re-agente 10 é moldada em um formato de bolsa oca ao sobrepor uma pluralidade de elementos em formato de folha e unir as bordas periféricas externas dos materiais de filme sobrepostos. O filme pode ser moldado em formato de bolsa ao unir as superfícies internas da porção periférica externa de um material de filme dobrado.
[00189] A porção de armazenamento de reagente 10 é feita de um material de filme de estrutura laminada 11 que tem propriedades de barreira ao gás e propriedades de blindagem de luz. A propriedade de barreira ao gás é uma propriedade de dificilmente permear o gás. No presente documento, a propriedade de barreira ao gás refere-se a ser menos permeável ao ar, particularmente ao oxigênio. A propriedade de blindagem de luz é uma propriedade de dificilmente transmitir luz. Como um resultado, é possível suprimir a deterioração do reagente 12 contido no recipiente de reagente 200 em virtude do ar externo e a deterioração do reagente 12 contido no recipiente de reagente 200 em virtude da luz externa, tal como a luz solar. Como um resultado, a deterioração do reagente pode ser efetivamente suprimida por um longo período de tempo.
[00190] O material de filme de estrutura laminada 11 pode incluir pelo menos uma camada de material de base e pelo menos uma camada de barreira ao gás. O material de filme de estrutura laminada 11 pode ainda incluir uma camada de proteção que protege a superfície externa da camada de barreira ao gás. O material de filme de estrutura laminada 11 pode ter uma camada de proteção leve feita de um material de proteção leve. Quando um material com propriedades de barreira ao gás e propriedades de proteção à luz é usado para a camada de barreira ao gás, a camada de barreira ao gás e a camada de proteção à luz podem ser a mesma camada. O número de camadas do material de filme de estrutura laminada é de 2 ou mais, mas pode ser de 3 a 9 ou 10 ou mais e não está particularmente limitado.
[00191] Exemplos do material de filme de estrutura laminada 11 usado na porção de armazenamento de reagente 10 incluem a seguin-teconfiguração: (exterior da bolsa)/náilon (15 µm)/folha de alumínio (9 µm)/polietileno (9 µm)/(interior da bolsa). Nesta configuração, na porção de armazenamento de reagente 10, o náilon funciona como uma camada de proteção, uma folha de alumínio funciona como uma camada de barreira ao gás e uma camada de blindagem de luz e o polie- tileno é uma camada de material de base. Na porção de armazenamento de reagente 10, as camadas de material de base feitas de polie- tileno são unidas umas às outras através de soldagem térmica. O material de filme de estrutura laminada 11 que tem esta configuração é um filme laminado de folha metálica que tem uma estrutura na qual uma camada de barreira ao gás feita de folha metálica é laminada sobre uma camada de material com base em resina.
[00192] Para o material de filme de estrutura laminada 11, por exemplo, um filme de barreira com múltiplas camadas com base em resina, um filme com base em revestimento, um filme depositado, um filme compósito orgânico-inorgânico ou similar também pode ser usado. O filme de barreira com múltiplas camadas com base em resina é um filme que tem uma estrutura na qual uma camada de barreira ao gás de um material de resina é laminada. Exemplos do material de resina que tem excelentes propriedades de barreira ao gás incluem cloreto de polivinilideno (PVDC), álcool polivinílico (PVA), copolímero de etileno-álcool vinílico (EVOH) e assim por diante. O filme de revestimentoé um filme que tem uma estrutura na qual um material de barreira ao gás é revestido (formado) sobre uma camada de material de base. O material de barreira ao gás a ser formado inclui PVDC, PVA, EVOH e assim por diante. O filme depositado é um filme que tem uma estrutura na qual um material de barreira ao gás é depositado sobre uma camada de material de base. O material de barreira ao gás a ser depositado inclui metais, tal como alumínio, ou óxidos inorgânicos, tais como alumina e sílica. O filme compósito orgânico-inorgânico inclui um filme laminado que tem uma estrutura na qual uma camada de barreira ao gás de um material orgânico (material de resina) e uma camada de barreira ao gás de um material inorgânico são laminadas separadamente, um filme que inclui uma camada de barreira ao gás na qual um material inorgânico é disperso em um aglutinante orgânico e assim por diante.
[00193] A armação 20 inclui uma abertura 21a fixada à porção de armazenamento de reagente 10. A armação 20 é configurada de modo que o interior da porção de armazenamento de reagente 10 seja vedado quando o tubo de sucção 252 é inserido por cima em conjunto com uma operação predeterminada na unidade de medição 400.
[00194] Conforme mostrado na Figura 28, o recipiente de reagente 200 é instalado e mantido em uma atitude de instalação predeterminada em uma porção de suporte de recipiente 251 da unidade de medição 400 pelo usuário. Em um estado no qual o recipiente de reagente 200 está colocado em uma posição definida Ps da porção de suporte de recipiente 251, o tubo de sucção 252 posicionado acima do recipiente de reagente 200 é inserido na abertura 21a por cima. A posição de ajuste Ps é uma posição onde a abertura 21a está posicionada imediatamente abaixo do tubo de sucção 252. A estrutura 20 é configurada de modo que o interior da porção de armazenamento de reagente 10 seja vedado, fechando a abertura 21a em um estado onde o tubo de sucção 252 está inserido.
[00195] Isto elimina a necessidade de que o usuário execute uma operação de inserção do tubo de sucção 252 na abertura 21a do reci- piente de reagente 200 antes de instalar o recipiente de reagente 200, de modo que o tubo de sucção 252 possa ser facilmente inserido no recipiente de reagente 200. Uma vez que o interior da porção de ar-mazenamento de reagente 10 é vedado quando o tubo de sucção 252 é inserido, é possível impedir que o reagente na porção de armazenamento de reagente 10 entre em contato com o ar externo através da vedação. Portanto, a deterioração do reagente após instalação na unidade de medição 400 pode ser suprimida. Por exemplo, ao segurar uma parte da armação 20 ou instalar a armação 20 na unidade de medição 400, o trabalho de fixação do recipiente de reagente 200 à unidade de medição 400 pode ser facilmente realizado mesmo se o recipiente de reagente 200 tiver uma porção de armazenamento de reagente 10 em formato de bolsa flexível.
[00196] No caso de um recipiente de reagente rígido que não deforma, quando o reagente é aspirado em um estado fechado, a pressão interna do recipiente de reagente diminui juntamente com a diminuição do reagente e o reagente não pode ser aspirado em virtude do equilíbrio com a pressão de sucção. Portanto, é necessário abrir o interior do recipiente para a atmosfera, uma vez que o reagente no recipiente do reagente pode deteriorar em virtude de contato com o ar.
[00197] Por outro lado, na presente modalidade, uma vez que a porção de armazenamento de reagente em formato de bolsa deformá- vel 10 é fornecida, é possível evitar uma diminuição na pressão interna por contração e deformação da própria porção de armazenamento de reagente 10 e, como um resultado, é possível aspirar o reagente 12 mesmo no estado vedado. Portanto, o recipiente de reagente 100 é configurado de modo que o interior da porção de armazenamento de reagente 10 seja vedado, suprimindo a entrada de ar na abertura 21a. Ao suprimir a entrada de ar na abertura 21a, é possível suprimir a de-terioração do reagente 12 em virtude de contato do reagente 12 dentro da porção de armazenamento de reagente 10 com o ar. Uma vez que a deterioração do reagente pode ser suprimida, o reagente no recipiente de reagente 200 pode ser usado continuamente por um longo período de tempo em um estado no qual o recipiente de reagente 200 está instalado na unidade de medição 400. Portanto, ao aumentar a capacidade da porção de armazenamento de reagente 10 para tornar possível aspirar o reagente mais vezes a partir de um recipiente de reagente 200, a frequência de substituição do recipiente de reagente 200 associada à operação da unidade de medição 400 pode ser reduzida. Para o usuário, há uma vantagem pelo fato de que o número de execuções da operação de substituição do recipiente de reagente 200 em um determinado período pode ser reduzido.
[00198] Na configuração na qual o tubo de sucção 252 está inserido na abertura 21a pela operação da unidade de medição 400 em vez de inserir manualmente o tubo de sucção 252 pelo usuário, o posicionamento da abertura 21a e a prevenção do desvio de posição da abertura 21a são importantes para vedar de forma confiável a porção de armazenamento de reagente 10 sem danificar a porção de armazenamento de reagente 10 pelo tubo de sucção 252. O recipiente de reagente 200 da presente modalidade tem uma estrutura de armação para posicionar de forma confiável a abertura 21a e evitar o desvio de posição da abertura 21a ao ser instalado na unidade de medição 400.
[00199] Conforme mostrado na Figura 29, a armação 20 inclui uma porção de abertura 21 que tem uma abertura 21a e uma porção de restrição de movimento 23 configurada para apoiar em uma parte da unidade de medição 400 para restringir o movimento da abertura 21a.
[00200] A porção de restrição de movimento 23 apoia em uma parte da unidade de medição 400, pelo que o movimento da abertura 21a pode ser suprimido. Como um resultado, é possível evitar o desvio de posição entre o tubo de sucção 252 e a abertura 21a quando o tubo de sucção 252 é inserido. Uma vez que é possível evitar o desvio de posição entre o tubo de sucção 252 e a abertura 21a em um estado no qual o tubo de sucção 252 está inserido na porção de armazenamento de reagente 10 da abertura 21a, é possível manter efetivamente um estado vedado dentro da porção de armazenamento de reagente 10.
[00201] A porção de abertura 21 é uma parte cilíndrica na qual a abertura 21a é formada. A extremidade inferior da abertura 21a está conectada ao interior da porção de armazenamento de reagente 10 e a extremidade superior está conectada ao exterior da porção de armazenamento de reagente 10. A porção de abertura 21 está localizada na porção superior da porção de armazenamento de reagente 10.
[00202] A porção de abertura 21 tem uma superfície de vedação 21b que entra em contato com um corpo de vedação 252a (consulte Figura 28) localizado no tubo de sucção 252 para vedar a abertura 21a. Consequentemente, a porção de armazenamento de reagente 10 pode ser fácil e efetivamente vedada através de contato entre o corpo de vedação 252a e a superfície de vedação 21b.
[00203] A superfície de vedação 21b pode ser qualquer uma dentre uma superfície terminal superior da porção de abertura 21, uma superfície periférica interna da porção de abertura 21 e uma superfície periférica externa da porção de abertura 21. No exemplo da Figura 29, a superfície de vedação 21b é uma superfície terminal superior anular da porção de abertura 21 que envolve a abertura 21a (isto é, uma porção de borda da abertura 21a). A superfície de vedação 21b apoia verticalmente no corpo de vedação 252a (consulte Figura 28B) localizado no tubo de sucção 252.
[00204] Por exemplo, uma tampa removível pode ser fixada à porção de abertura 21. O recipiente de reagente 200 é colocado pelo usuário com a abertura 21a vedada pela tampa. O recipiente de reagente 200 pode ser instalado na unidade de medição 400 com a tampa removida.
[00205] Por exemplo, um filme de vedação perfurável pode ser soldado à superfície superior da porção de abertura 21 de modo a cobrir a abertura 21a. O recipiente de reagente 200 é colocado pelo usuário em um estado no qual a abertura 21a é vedada pelo filme de vedação. O recipiente de reagente 200 pode ser aberto ao perfurar o filme de vedação pelo tubo de sucção 252 após ser instalado na unidade de medição 400.
[00206] Conforme mostrado na Figura 30, a porção de abertura 21 é formada em um elemento de fixação 22 conectado à porção de ar-mazenamento de reagente 10. A porção de abertura 21 é formada in-tegralmente com o elemento de fixação 22 de modo a se projetar para cima a partir da superfície superior do elemento de fixação 22.
[00207] Uma porção periférica externa do elemento de fixação 22 é soldada a uma porção periférica interna da porção de armazenamento de reagente 10. O elemento de fixação 22 está localizado na extremidade superior da porção de armazenamento de reagente 10 de modo a ser prensado entre as bordas periféricas externas dos dois materiais de filme de estrutura laminada 11 que constituem a porção de armazenamento de reagente 10. O elemento de fixação 22 é soldado às superfícies internas dos dois materiais de filme de estrutura laminada 11. A porção periférica externa do elemento de fixação 22 e a porção de armazenamento de reagente 10 são vedadas através de soldagem. Como um resultado, o elemento de fixação 22 que tem rigidez para acoplamento com a porção de restrição de movimento 23 pode ser facilmente posicionado na porção de armazenamento de reagente em formato de bolsa flexível 10 e a vedação entre o elemento de fixação 22 e a porção de armazenamento de reagente 10 pode ser facilmente realizada.
[00208] O elemento de fixação 22 tem uma porção de suporte 22a posicionada a uma distância da porção de abertura 21 na direção hori-zontal. O elemento de fixação 22 tem um formato hexagonal fino e longo e a porção de abertura 21 é posicionada em uma extremidade na direção longitudinal do elemento de fixação 22 e a porção de suporte 22a é posicionada na outra extremidade. A porção suportada 22a é uma saliência formada integralmente com o elemento de fixação 22 de modo a se projetar para cima a partir da superfície superior do elemento de fixação 22. A porção suportada 22a tem um formato de T quando vista a partir da direção A e tem uma porção inferior mais fina do que uma porção superior.
[00209] A porção de abertura 21 está posicionada próximo da extremidade da porção de armazenamento de reagente 10 na direção horizontal. Mesmo quando a porção de armazenamento de reagente 10 é expandida para conter o reagente 12 (consulte Figura 28), a porção de abertura 21 do elemento de fixação 22 está localizada em uma posição relativamente próxima à superfície interna da porção de armazenamento de reagente 10. Portanto, quando o tubo de sucção 252 é inserido de maneira inclinada em relação a um eixo central da porção de abertura 21, há a possibilidade de que a ponta do tubo de sucção 252 entre em contato com a superfície interna da porção de armazenamento de reagente 10.
[00210] Portanto, a parte de abertura 21 tem uma parte guia do tubo de sucção 21c se projetando para baixo a partir da extremidade inferior da abertura 21a em direção ao interior da porção de armazenamento de reagente 10. A parte guia do tubo de sucção 21c é formada integralmente com o elemento de fixação 22. A parte guia do tubo de sucção 21c tem um formato obtido ao estender parcialmente a extremidade inferior da porção de abertura cilíndrica 21 para baixo. A parte guia do tubo de sucção 21c é moldada no formato de uma parede de modo a dividir o tubo de sucção 252 inserido na abertura 21a e a su- perfície interna da porção de armazenamento de reagente 10. Como um resultado, mesmo quando o tubo de sucção 252 está inserido na porção de armazenamento de reagente 10 enquanto está inclinado em relação ao eixo central da abertura 21a, a ponta do tubo de sucção 252 pode ser orientada de modo a suprimir o contato entre a ponta do tubo de sucção 252 e a superfície interna da porção de armazenamento de reagente 10.
[00211] Voltando à Figura 29, a porção de restrição de movimento 23 tem a função de posicionar a abertura 21a da unidade de medição 400 em relação ao tubo de sucção 252. A porção de restrição de movimento 23 tem a função de evitar o desvio de posição da abertura 21a.
[00212] A porção de restrição de movimento 23 é fixada à porção de abertura 21 de modo a sobressair da porção de abertura 21 na direção horizontal. Como um resultado, a posição relativa entre a porção de restrição de movimento 23 e a abertura 21a pode ser fixada. A parte da porção de restrição de movimento 23 que se projeta a partir da porção de abertura 21 na direção horizontal torna possível obter facilmente uma configuração na qual a porção apoia em uma parte da unidade de medição 400 para restringir o movimento e obter facilmente uma área de contato necessária para evitar o desvio de posição da abertura 21a pelo apoio.
[00213] Conforme mostrado na Figura 30, a porção de restrição de movimento 23 tem um formato de placa substancialmente plana. A porção de restrição de movimento 23 tem um formato que se estende ao longo da primeira direção A no plano horizontal. A porção de restrição de movimento 23 tem um formato retangular que inclui um par de lados longos que se estendem na primeira direção A e um par de lados curtos que se estendem na segunda direção B. Conforme será descrito posteriormente, o recipiente de reagente 200 é instalado no recipiente que contém porção 251 da unidade de medição 400 ao ser inserido na porção de suporte de recipiente 251 ao longo da primeira direção A com uma extremidade 23a lateral da porção de restrição de movimento 23 na qual a porção de abertura 21 está posicionada como uma cabeça. A porção de restrição de movimento 23 é fixada na porção de abertura 21 entre uma extremidade 23a da porção de restrição de movimento 23 na primeira direção A e a porção central. Ou seja, a porção de abertura 21 está posicionada em uma posição mais próxima de uma extremidade 23a lateral entre uma extremidade 23a e a outra extremidade 23b da porção de restrição de movimento 23. Como um resultado, ao segurar a outra extremidade lateral 23b da porção de restrição de movimento 23 e mover o recipiente de reagente 200 na primeira direção A, a abertura 21a formada na porção de abertura 21 em um lado da extremidade 23a pode ser posicionada em uma posição imediatamente abaixo do tubo de sucção 252. Neste caso, uma vez que a porção de abertura 21 é separada da outra extremidade 23b da porção de restrição de movimento 23, é possível impedir que o dedo do usuário entre em contato com o tubo de sucção 252 quando o recipiente de reagente 200 é colocado.
[00214] A porção de restrição de movimento 23 é configurada para restringir o movimento da abertura 21a na direção horizontal que apoia em uma parte da unidade de medição 400 na direção horizontal. Como um resultado, a porção de restrição de movimento 23 pode impedir que a relação posicional entre a abertura 21a e o tubo de sucção 252 na direção horizontal seja desviada. A porção de restrição de movimento 23 inclui uma superfície de apoio horizontal 24 que inclui qualquer uma dentre uma superfície interna de um orifício formado na porção de restrição de movimento 23, uma superfície interna de um entalhe formado na porção de restrição de movimento 23 e uma superfície lateral da porção de restrição de movimento 23. Com uma configura- ção simples, é possível fornecer a superfície de apoio horizontal 24 para restringir o movimento da abertura 21a na direção horizontal na porção de restrição de movimento 23.
[00215] A superfície de apoio horizontal 24 inclui uma primeira superfície 24a que inclui uma superfície lateral formada em uma extremidade 23a (isto é, uma superfície de ponta) da porção de restrição de movimento 23 na primeira direção A. Como um resultado, quando o recipiente de reagente 200 é preso à unidade de medição 400, tanto o alinhamento quanto a restrição de movimento da abertura 21a na primeiradireção A podem ser facilmente realizados simplesmente avançando o recipiente de reagente 200 na primeira direção A até que uma extremidade 23a da porção de restrição de movimento 23 apoie na superfície interna da porção de suporte de recipiente 251.
[00216] A superfície de apoio horizontal 24 inclui segundas superfícies 24b e 24c formadas por superfícies laterais que se estendem ao longo da primeira direção A da porção de restrição de movimento 23. As segundas superfícies 24b e 24c são um par de superfícies laterais que constituem lados longos da porção de restrição de movimento 23 em vista plana. As segundas superfícies 24b e 24c estão localizadas em um lado e no outro lado na segunda direção B da porção de restrição de movimento 23. Como um resultado, tanto o alinhamento quanto a restrição de movimento da abertura 21a na segunda direção B podem ser facilmente obtidos pela superfície lateral da porção de restrição de movimento 23.
[00217] Conforme mostrado na Figura 31, a porção de restrição de movimento 23 tem um entalhe 23c formado sobre a superfície lateral. A superfície de apoio horizontal 24 inclui uma terceira superfície 24d formada pela superfície interna do entalhe 23c. A terceira superfície 24d apoia em uma parte da unidade de medição 400 que entra no entalhe 23c. Como um resultado, a terceira superfície 24d no entalhe 23c apoia em uma parte da unidade de medição 400, de modo que a porção de restrição de movimento 23 e a unidade de medição 400 possam ser engatadas uma na outra. Através do engate, é possível suprimir eficazmente o desvio de posição da abertura 21a. Quando o recipiente de reagente 200 é preso à unidade de medição 400, a porção de restrição de movimento 23 é engatada com uma parte da unidade de medição 400 e não se move, de modo que o usuário possa perceber que o recipiente de reagente 200 está instalado em uma posição apropriada sem reconhecer visualmente o recipiente de reagente 200.
[00218] A porção de restrição de movimento 23 tem um orifício 23d formado sobre a superfície superior da porção de restrição de movimento 23. A superfície de apoio horizontal 24 inclui uma quarta superfície 24e formada pela superfície interna do orifício 23d. A quarta superfície 24e apoia em uma parte (por exemplo, um elemento de entrada 281 a ser descrito posteriormente, consulte Figura 35) da unidade de medição 400 que entra no interior do orifício 23d. Como um resultado, uma parte da unidade de medição 400 entra no orifício 23d formado na porção de restrição de movimento 23, de modo que a porção de restrição de movimento 23 e a unidade de medição 400 possam ser encaixadas uma na outra. Através do engate, é possível suprimir eficazmente o desvio de posição da abertura 21a. Na Figura 31, são fornecidos dois orifícios 23d. Os dois orifícios 23d estão localizados ao longo da segunda direção B. Apenas um orifício 23d pode ser fornecido.
[00219] A porção de restrição de movimento 23 inclui uma porção guia 23e que orienta o movimento quando a abertura 21a está posicionada abaixo do tubo de sucção 252 da unidade de medição 400. A porção guia 23e se estende ao longo da primeira direção A no plano horizontal. A porção guia 23e desliza em um estado de contato com uma parte da unidade de medição 400, deste modo, alinhando a direção de movimento da porção de restrição de movimento 23 com a pri- meira direção A. Como um resultado, quando o recipiente de reagente 200 é instalado na porção de suporte de recipiente 251 da unidade de medição 400, a abertura 21a pode ser fácil e precisamente posicionada em uma posição apropriada onde o tubo de sucção 252 pode ser inserido.
[00220] A porção de restrição de movimento 23 é configurada para restringir o movimento da abertura 21a na direção vertical que apoia em uma parte da unidade de medição 400 na direção vertical (direção Z). Como um resultado, mesmo no recipiente de reagente 200 que inclui a porção de armazenamento de reagente em formato de bolsa 10 que é facilmente deformada, quando o tubo de sucção 252 é inserido na porção de armazenamento de reagente 10 e quando o tubo de sucção 252 é puxado para fora de dentro da porção de armazenamento de reagente 10, o movimento da abertura 21a na direção vertical pode ser suprimido.
[00221] Conforme mostrado na Figura 31, a porção de restrição de movimento 23 tem uma porção de aperto 25 para prender a porção de restrição de movimento 23 na outra extremidade 23b da porção de res-trição de movimento 23 na primeira direção A. Como um resultado, a outra extremidade 23b da porção de restrição de movimento 23 pode ser facilmente fixada. Uma vez que a porção de armazenamento de reagente em formato de bolsa 10 é facilmente deformada e difícil de prender, o recipiente de reagente 200 pode ser facilmente transportado ao fornecer a porção de aperto 25 na porção de restrição de movimento 23.
[00222] Conforme mostrado na Figura 30, a porção de restrição de movimento 23 inclui uma porção de fixação 26 presa na porção de aber-tura 21 e uma porção de suporte 27 que suporta a porção superior da porção de armazenamento de reagente 10 em uma posição afastada da porção de abertura 21. Como um resultado, quando o recipiente de rea- gente 200 é transportado, em um caso onde a porção de restrição de movimento 23 é segurada manualmente, a porção de armazenamento de reagente 10 pode ser suportada de modo a ficar suspensa da porção de restrição de movimento 23 em uma pluralidade de posições da porção de fixação 26 e da porção de suporte 27. Uma vez que o peso da porção de armazenamento de reagente 10 atua de maneira dispersa em uma pluralidade de posições da porção de restrição de movimento 23, é possível suportar de forma estável a porção de armazenamento de reagente 10 mesmo se a capacidade da porção de armazenamento de reagente 10 é aumentada. Uma vez que o usuário não precisa segurar a porção em formato de bolsa que é facilmente deformada, o recipiente de reagente 200 pode ser facilmente manuseado.
[00223] Conforme mostrado na Figura 29, a porção de restrição de movimento 23 inclui um meio de registro de informações 28 no qual as informações sobre reagente são registradas. O meio de registro de informação 28 é uma etiqueta identificadora de rádio frequência (RFID). Consequentemente, quando o recipiente de reagente 200 é preso à unidade de medição 400, a unidade de medição 400 pode ler a informação sobre reagente a partir do meio de registro de informações 28. No caso onde o meio de registro de informações 28 está localizado na porção de armazenamento de reagente em formato de bolsa 10 que é facilmente deformada, há a possibilidade de ser difícil fornecer o meio de registro de informações 28 ou é difícil ler o meio de registro de informações 28. No entanto, ao fornecer o meio de registro de informações 28 na porção de restrição de movimento 23, o meio de registro de informação 28 pode ser facilmente posicionado e pode ser bem lido.
[00224] Conforme mostrado na Figura 32, a porção de sucção de reagente 250 inclui uma pluralidade de porta-recipientes de reagente capazes de conter, cada um, um recipiente de reagente 200 (ou reci- piente de reagente de tamanho pequeno 300). A porção de sucção de reagente 250 inclui, por exemplo, um total de cinco porta-recipientes de reagente, porém, a Figura 32 mostra apenas três porta-recipientes de reagente 250a, 250b e 250c por conveniência. A pluralidade de porta-recipientes de reagentes 250a a 250c está localizada lado a lado na direção lateral.
[00225] Cada um dos porta-recipientes de reagente 250a a 250c inclui um chassi inferior 255a e um chassi superior 255b, uma porção de suporte de recipiente 251, um tubo de sucção 252, uma parte de operação 253 e um mecanismo móvel 254 (consulte Figura 35). Daqui em diante, a estrutura do porta-recipiente de reagente 250a será descrita como representativa dos porta-recipientes de reagente 250a a 250c. A parte de suporte de recipiente 251 está localizada no chassi 255a inferior. A porção de suporte de recipiente 251 está localizada na porção mais inferior do porta-recipiente de reagente 250a. A porção de suporte de recipiente 251 é configurada para conter um recipiente de reagente 200 que inclui uma porção de armazenamento de reagente em formato de bolsa 10 para conter um reagente e uma armação 20 que inclui uma abertura 21a.
[00226] A porção de suporte de recipiente 251 tem uma porção de armazenamento em formato de caixa ou cilíndrica 260 na qual o reci-piente de reagente 200 pode ser armazenado dentro e uma entrada é formada na direção horizontal. A porção de armazenamento 260 tem uma entrada aberta em uma extremidade na direção Y1. A porção de armazenamento 260 está localizada para se estender a partir da entrada em direção à direção Y2.
[00227] Conforme mostrado na Figura 33, a porção de armazenamento 260 inclui uma primeira parte de inserção 261 na qual a porção de armazenamento de reagente 10 do recipiente de reagente 200 é inserida e uma segunda parte de inserção 262 que está posicionada acima da primeira parte de inserção 261 e na qual a porção de restrição de movimento 23 do recipiente de reagente 200 é inserida.
[00228] A primeira parte de inserção 261 é um espaço dividido por um par de porções de superfície lateral 261a voltadas para ambas as superfícies laterais da porção de armazenamento de reagente 10 na direção da largura (direção X) e uma porção de superfície inferior 261b voltada para a superfície inferior da porção de armazenamento de reagente 10 na direção vertical (direção Z). A porção superior da primeira parte de inserção 261 e da segunda parte de inserção 262 estão co-nectadasatravés de uma passagem de conexão 263.
[00229] A passagem de conexão 263 é um espaço para permitir que uma parte de conexão entre a porção de restrição de movimento 23 e a porção de armazenamento de reagente 10 (uma porção onde o elemento de fixação 22 está posicionado) do recipiente de reagente 200 passe na direção Y.
[00230] A segunda parte de inserção 262 se estende a partir da entrada da porção de armazenamento 260 em direção à posição de ajuste Ps imediatamente abaixo do tubo de sucção 252. A segunda parte de inserção 262 é configurada para orientar o recipiente de reagente 200 para a posição de ajuste Ps (consulte Figura 34) que apoia na porção de restrição de movimento 23. Como um resultado, o recipiente de reagente 200 pode ser orientado da entrada da porção de armazenamento 260 para a posição definida Ps usando a porção de restrição de movimento 23. Como um resultado, mesmo no caso do recipiente de reagente 200 que inclui a porção de armazenamento de reagente 10 que é facilmente deformada, é possível orientar com precisão o recipiente de reagente 200 para a posição definida Ps através de uma operação simples na qual o usuário insere o recipiente de reagente 200 a partir da entrada da porção de armazenamento 260. A segunda parte de inserção 262 tem, por exemplo, um formato seccional trans versal convexo. Ou seja, a segunda parte de inserção 262 tem um formato seccional transversal convexo que tem uma porção inferior larga na qual é inserida a porção de restrição de movimento em formato de placa plana 23 e uma porção superior estreita na qual é inserida a porção de abertura 21 que se projeta para cima a partir da porção restrição de movimento 23.
[00231] A porção de sucção de reagente 250 inclui uma porção adjacente 270. A porção adjacente 270 apoia na porção de restrição de movimento 23 localizada na armação 20 do recipiente de reagente 200 posicionada na porção de suporte de recipiente 251 para restringir o movimento da abertura 21a. Como um resultado, uma vez que a porção adjacente 270 apoia na porção de restrição de movimento 23, é possível suprimir o desvio de posição entre o tubo de sucção 252 e a abertura 21a quando o tubo de sucção 252 é inserido. Uma vez que é possível suprimir o desvio de posição entre o tubo de sucção 252 e a abertura 21a em um estado no qual o tubo de sucção 252 está inserido na porção de armazenamento de reagente 10 da abertura 21a, é possível manter efetivamente um estado vedado dentro da porção de armazenamento de reagente 10.
[00232] A porção adjacente 270 apoia na porção de restrição de movimento 23 localizada na armação 20 do recipiente de reagente 200 posicionada na porção de suporte de recipiente 251 para restringir o movimento da abertura 21a. Uma vez que a porção adjacente 270 apoia na porção de restrição de movimento 23, é possível suprimir o desvio de posição entre o tubo de sucção 252 e a abertura 21a quando o tubo de sucção 252 é inserido. Uma vez que é possível suprimir o desvio de posição entre o tubo de sucção 252 e a abertura 21a em um estado no qual o tubo de sucção 252 está inserido na porção de armazenamento de reagente 10 da abertura 21a, é possível manter efetivamente um estado vedado dentro da porção de armazenamento de reagente 10.
[00233] A porção adjacente 270 é configurada para apoiar na porção de restrição de movimento 23 fixada na abertura 21a do recipiente de reagente 200 para restringir o movimento da abertura 21a. Como um resultado, uma vez que a posição relativa entre a porção de restrição de movimento 23 e a abertura 21a é fixa, o posicionamento e a restrição de movimento da abertura 21a podem ser realizados de forma confiável e precisa quando a porção de apoio 270 apoia na porção de restrição de movimento 23.
[00234] Pelo menos uma parte da porção adjacente 270 está localizada na porção de armazenamento 260. Como um resultado, ao inserir o recipiente de reagente 200 na porção de armazenamento 260 a partir da entrada, a porção adjacente 270 pode ser apoiada na porção de restrição de movimento 23 e o movimento da abertura 21a na porção de armazenamento 260 pode ser restringido.
[00235] A porção adjacente 270 está posicionada na segunda parte de inserção 262. Como um resultado, ao fornecer a porção adjacente 270 na segunda parte de inserção 262 que corresponde à porção de restrição de movimento 23 no recipiente de reagente 200, a porção adjacente 270 pode ser apoiada na porção de restrição de movimento 23 em uma relação posicional relativa predefinida mesmo no caso onde o recipiente de reagente 200 inclui a porção de armazenamento de reagente 10 que é facilmente deformada. Como um resultado, o posicionamento e a restrição de movimento da abertura 21a podem ser obtidos com precisão.
[00236] A porção adjacente 270 é configurada para apoiar em qualquer um dentre um orifício formado na porção de restrição de movimento 23, um entalhe formado na porção de restrição de movimento 23 e uma superfície lateral da porção de restrição de movimento 23. Com uma configuração simples, a porção de apoio 270 pode ser apoi- ada na porção de restrição de movimento 23 para restringir efetivamente o movimento da abertura 21a na direção horizontal.
[00237] Quando o tubo de sucção 252 se move para baixo, o elemento de entrada 281 também se move para baixo juntamente com o tubo de sucção 252 e o elemento de entrada 281 entra no interior do orifício 23d da porção de restrição de movimento 23. Quando o elemento de entrada 281 entra no orifício 23d, o movimento da porção de restrição de movimento 23 é suprimido.
[00238] A porção adjacente 270 é configurada para apoiar na porção de restrição de movimento 23 na direção vertical para restringir o movimento da abertura 21a na direção vertical. Como um resultado, mesmo no recipiente de reagente 200 que inclui a porção de armazenamento de reagente em formato de bolsa 10 que é facilmente deformada, quando o tubo de sucção 252 é inserido na porção de armazenamento de reagente 10 e quando o tubo de sucção 252 é puxado para fora de dentro da porção de armazenamento de reagente 10, o movimento da abertura 21a na direção vertical pode ser suprimido.
[00239] Conforme mostrado na Figura 35, o tubo de sucção 252 está posicionado em uma posição superior da porção mais profunda (extremidade no lado da direção Y2) da porção de armazenamento 260 da porção de suporte de recipiente 251 com a ponta voltada para baixo. O tubo de sucção 252 é retido pelo mecanismo de movimento 254. O tubo de sucção 252 é configurado para ser movido na direção vertical (direção Z) pelo mecanismo de movimento 254. Como um resultado, o tubo de sucção 252 é configurado para entrar no interior do o recipiente de reagente 200 (300) através da abertura 21a da porção de armazenamento de reagente 10 (110) inserido no lado interno da porção de suporte de recipiente 251, de modo que o tubo de sucção 252 possa aspirar o reagente dentro do recipiente de reagente 200 (300).
[00240] O tubo de sucção 252 tem o corpo de vedação 252a que entra em contato com a abertura 21a para vedar a abertura 21a quando o tubo de sucção 252 é inserido na abertura 21a. Como um resultado, a porção de armazenamento de reagente 10 pode ser fácil e eficazmente vedada pelo corpo de vedação 252a.
[00241] O corpo de vedação 252a está localizado de modo a envolver a periferia externa do tubo de sucção 252. O corpo de vedação 252a é configurado para ser elasticamente deformado ao entrar em contato com a porção de borda da abertura 21a (isto é, a superfície de vedação 21b da porção de abertura 21) para vedar a abertura 21a. Como um resultado, a porção de armazenamento de reagente 10 pode ser vedada de forma confiável pelo corpo de vedação 252a usando um movimento para baixo quando o tubo de sucção 252 é inserido na abertura 21a.
[00242] O corpo de vedação 252a é feito de um material de borracha elasticamente deformável. Um elemento tensor 252b para tensio- nar o corpo de vedação 252a em direção à abertura 21a está localizado entre o corpo de vedação 252a e a porção de suporte do tubo de sucção 254a que retém o tubo de sucção 252. O elemento tensor 252b é formado por uma mola de compressão.
[00243] O mecanismo móvel 254 prende o tubo de sucção 252 de modo a ser móvel na direção vertical (direção Z) entre uma posição elevada P1 e uma posição abaixada P2. O mecanismo de movimento 254 inclui a porção de suporte de tubo de sucção 254a e um mecanismo de movimento linear que inclui um trilho linear 254b e um controle deslizante fixo 254c. O tubo de sucção 252 está conectado à porção de suporte de tubo de sucção 254a e a porção de suporte de tubo de sucção 254a está conectada à extremidade superior do trilho linear 254b por meio de uma porção de conexão 254d que se estende na direção Y. O trilho linear 254b está localizado sobre a superfície frontal (a superfície lateral no lado da direção Y1) do porta-recipiente de rea-gente 250a. O trilho linear 254b se estende na direção Z. O trilho fixo 254c é preso ao chassi inferior 255a. O trilho fixo 254c prende o trilho linear 254b de modo a ser móvel ao longo da direção Z. Como um re-sultado, o trilho linear 254b se move na direção Z em relação ao trilho fixo 254c. À medida que o trilho linear 254b se move na direção Z, o tubo de sucção 252 se move integralmente com o trilho linear 254b na direção Z.
[00244] Conforme descrito acima, o mecanismo de movimento 254 é configurado para suportar o tubo de sucção 252 de modo a ser móvel na direção vertical e mover o tubo de sucção 252 em conjunto com uma operação predeterminada na parte de operação 253, fazendo com que o tubo de sucção 252 entre no recipiente de reagente 200 retido pela porção de suporte de recipiente 251 e retrair o tubo de sucção 252 para fora do recipiente de reagente 200. Como um resultado, o tubo de sucção 252 pode entrar no recipiente de reagente 200 e retrair o tubo de sucção 252 para o fora do recipiente de reagente 200 simplesmente ao mover o tubo de sucção 252 para cima e para baixo. À medida que o grau de liberdade na direção de movimento do tubo de sucção 252 diminui, o tubo de sucção 252 pode ser operado com precisão e com alta reprodutibilidade. Portanto, a operação de vedação da porção de armazenamento de reagente 10 quando o tubo de sucção 252 está inserido pode ser obtida com mais precisão através de um simples movimento vertical.
[00245] Conforme mostrado na Figura 35, o mecanismo móvel 254 prende a parte de operação 253 de modo que o tubo de sucção 252 e a parte de operação 253 se movam em conjunto um com o outro. A parte de operação 253 está localizada sobre a superfície frontal (a superfície lateral no lado da direção Y1) do porta-recipiente de reagente 250a e a lateral da superfície posterior (o lado da direção Y2) da parte de operação 253 é presa ao trilho linear 254b. Como um resultado, o trilho linear 254b, o tubo de sucção 252 e a parte de operação 253 se movem integralmente na direção Z.
[00246] Conforme mostrado na Figura 32, a parte de operação 253 está posicionada sobre uma superfície frontal (lado da direção da seta Y1) de cada um dos porta-recipientes de reagente 250a a 250c (chassi inferior 255a). A parte de operação 253 é configurada como uma tampa que cobre de forma aberta e fechada a superfície frontal da porção de suporte de recipiente 251 do porta-recipiente de reagente 250a.
[00247] A parte de operação 253 é configurada para ser segurada e movida pela mão do usuário. Uma porção de alça de operação 253a que se projeta para a frente (direção Y1) a partir de uma superfície frontal da parte de operação 253 é formada na parte de operação 253. O usuário pode mover a parte de operação 253 na direção Z segurando e movendo a porção de alça de operação 253a na direção Z.
[00248] Nos sistemas de análise 4000 e 4001 descritos nas primeira e segunda modalidades, a unidade de análise (seção de análise) 300X pode usar formas de onda do primeiro sinal e do segundo sinal que corresponde à fluorescência emitida a partir de uma célula que flui na célula de fluxo como entradas e realizar a classificação das células usando um algoritmo AI aprendido a partir de formas de onda de sinais que correspondem à fluorescência emitida a partir de várias células a serem classificadas como pelo menos uma parte das primeira à tercei-raanálises. Conforme descrito acima, o primeiro sinal é um sinal que inclui uma pluralidade de sinais, cada um correspondendo à luz dispersa lateralmente e à luz fluorescente lateral pela primeira fonte de luz e o segundo sinal é um sinal que inclui uma pluralidade de sinais, cada um correspondendo ao sinal da luz dispersa frontalmente, luz dispersa lateralmente e luz fluorescente lateral pela segunda fonte de luz. A primeira análise é uma análise com base no primeiro sinal, a se-gundaanálise é uma análise com base no segundo sinal e a terceira análise é uma análise com base no primeiro sinal e no segundo sinal.
[00249] Na presente modalidade, no sistema de análise 4000 (consulte Figura 7) que inclui a seção de detecção FCM 460 capaz de irradiar a amostra de medição com luz de uma pluralidade de comprimentos de onda, os dados adquiridos pela unidade de medição 400 são analisados pelo algoritmo AI. Uma vez que a amostra de medição é irradiada com luz de uma pluralidade de comprimentos de onda, a unidade de medição 400 detecta uma pluralidade de tipos de sinais ópticos que correspondem a cada comprimento de onda. Os dados adquiridos pela conversão A/D de cada um dentre a pluralidade de tipos de sinais ópticos detectados são analisados pelo algoritmo AI. A análise pelo algoritmo AI é executada na unidade de análise 300X (consulte Figura 10). O algoritmo AI é armazenado, por exemplo, na porção de armazenamento 3004 da unidade de análise 300X. O processador 3001 da unidade de análise 302X realiza análise com base no algoritmo AI.
[00250] Conforme no exemplo mostrado na Figura 36, os dados adquiridos pela unidade de medição 402 (daqui em diante, podem ser denominados como "dados de forma de onda") são inseridos no algoritmo AI 50 (ou 60). O algoritmo AI classifica o tipo de célula que corresponde aos dados de entrada ao processar os dados de entrada. Quando a amostra de medição é irradiada com luz de um único comprimento de onda, apenas os dados que correspondem à luz de um único comprimento de onda podem ser obtidos como dados obtidos para uma determinada célula na amostra de medição. Quando a amostra de medição é irradiada com luz de uma pluralidade de comprimentos de onda, uma pluralidade de tipos de dados que correspondemà luz de uma pluralidade de comprimentos de onda é obtida como dados obtidos para uma determinada célula na amostra de medição. Portanto, no caso de irradiar a amostra de medição com luz de uma pluralidade de comprimentos de onda, a quantidade de entrada de dados para o algoritmo AI aumenta comparado com o caso de irradiar a amostra de medição com luz de um único comprimento de onda. À medida que a quantidade de entrada de dados para o algoritmo AI aumenta, a precisão da classificação da célula pelo algoritmo AI aumenta.
[00251] Um método para gerar dados de treinamento 75 (consulte Figura 40) e um método para analisar os dados da forma de onda serão descritos usando os exemplos mostrados nas Figuras 37 a 40. Daqui em diante, um caso onde a seção de detecção FCM 460 que tem a con-figuração da Figura 7 é usada será descrito como um exemplo.
[00252] A Figura 37 é um diagrama esquemático para explicar os dados de forma de onda usados no presente método de análise (quarta modalidade). Conforme mostrado na Figura 37, quando uma amostra que contém uma célula (componente) C é transportada em uma célula de fluxo FC e a célula C que flui através da célula de fluxo FC é irradiada com luz L1 do primeiro comprimento de onda e luz L2 do segundo comprimento de onda , a luz dispersa frontalmente (FSC) é gerada para a frente em relação à direção de deslocamento da luz. A primeira luz dispersa lateralmente (SSC-1) que corresponde à luz do primeiro comprimento de onda e a primeira luz fluorescente lateral (SFL-1) excitada pela luz do primeiro comprimento de onda são geradas lateralmente em relação à direção de deslocamento da luz. A segunda luz dispersa lateralmente (SSC-2) que corresponde à luz do segundo comprimento de onda e a segunda luz fluorescente lateral (SFL- 2) excitada pela luz do segundo comprimento de onda são geradas lateralmente em relação à direção de deslocamento da luz.
[00253] A luz dispersa frontalmente (FSC) é recebida pelo elemento receptor de luz dispersa frontalmente 4116 e um sinal que correspondeà quantidade de luz recebida é emitido. A primeira luz dispersa lateralmente (SSC-1) é recebida pelo elemento receptor de luz dispersa lateralmente 4121a e é emitido um sinal que corresponde à quantidade de luz recebida. A primeira luz fluorescente lateral (SFL-1) é recebida pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122a e é emitido um sinal que corresponde à quantidade de luz recebida. A segunda luz dispersa lateralmente (SSC-2) é recebida pelo elemento receptor de luz dispersa lateralmente 4121b e é emitido um sinal que corresponde à quantidade de luz recebida. A segunda luz fluorescente lateral (SFL- 2) é recebida pelo elemento receptor de luz fluorescente lateral 4122b e é emitido um sinal que corresponde à quantidade de luz recebida. Como um resultado, um sinal analógico que representa uma mudança no sinal com o lapso de tempo é emitido a partir de cada elemento receptor de luz. Um sinal analógico que corresponde à luz dispersa frontalmente (FSC-1) é denominado de "sinal de luz dispersa frontalmente", um sinal analógico que corresponde à primeira luz dispersa lateralmente (SSC-1) é denominado de "sinal de primeira luz dispersa lateralmente", um sinal analógico que corresponde à primeira luz fluorescente lateral (SFL-1) é denominado de "sinal de primeira fluorescência", um sinal analógico que corresponde à segunda luz dispersa lateralmente (SSC-2) é denominado de "sinal de segunda luz dispersa lateralmente" e um sinal analógico que corresponde à segunda luz fluorescente lateral (SFL-2) é denominado de "sinal de segunda fluorescência lateral". Um pulso de cada sinal analógico corresponde a um componente (por exemplo, uma célula).
[00254] O sinal analógico é introduzido no conversor A/D 481a (consulte Figura 37) através do processador analógico 480. O sinal analógico é convertido em um sinal digital. A Figura 38 é um diagrama que mostra esquematicamente a conversão em um sinal digital pelo conversor A/D. Para simplificar a descrição, o sinal analógico é inserido diretamente no conversor A/D 481a. Conforme mostrado na Figura 38, o conversor A/D 481a amostra o sinal de luz dispersa frontalmente, o sinal de primeira luz dispersa lateralmente, o sinal de primeira fluorescência lateral, o sinal de segunda luz dispersa lateralmente e o sinal de segunda fluorescência lateral a partir de um ponto no tempo quando o nível do sinal de luz dispersa frontalmente atinge um nível definido como um valor limite predeterminado entre os sinais analógicos de entrada de cada elemento receptor de luz. O conversor A/D 481a faz a amostragem de cada sinal analógico em uma taxa de amostragem predeterminada (por exemplo, amostragem em 1024 pontos em intervalos de 10 nanossegundos, amostragem em 128 pontos em intervalos de 80 nanossegundos, amostragem em 64 pontos em intervalos de 160 nanossegundos ou similar).
[00255] A Figura 39 é um diagrama que mostra esquematicamente dados de forma de onda obtidos através de amostragem. Através de amostragem, como dados de forma de onda que correspondem a um componente, dados de matriz (os quais podem ser denominados como "dados de matriz" unidimensionais) nos quais valores que indicam digi-talmenteníveis de sinal analógico em uma pluralidade de pontos de tempo são usados como elementos, são obtidos. Desta forma, o conversor A/D 481a gera um sinal digital da luz dispersa frontalmente, um sinal digital da primeira luz dispersa lateralmente, um sinal digital da primeira luz fluorescente lateral, um sinal digital da segunda luz dispersa lateralmente e um sinal digital da segunda luz fluorescente lateral que correspondem a um componente. A conversão A/D é repetida até que o número de células digitalmente sinalizadas atinja um número predeterminado ou até que um tempo predeterminado tenha decorrido desde que a amostra começou a fluir na célula de fluxo 4113. Como um resultado, conforme mostrado na Figura 39, uma é obtido um sinal que inclui dados de forma de onda de N componentes (células C) con-tidos em uma amostra. Um conjunto de dados de amostragem (no exemplo da Figura 39, um conjunto de 1024 valores digitais a cada 10 nanossegundos de t = 0 ns a t = 10240 ns) para cada componente pode ser denominado como dados de forma de onda e um conjunto de dados de forma de onda dos dados obtidos a partir de uma amostra pode ser denominado como um sinal digital. Uma vez que os dados de forma de onda são adquiridos ao irradiar a célula de fluxo 4113 com luz de uma pluralidade de comprimentos de onda, uma pluralidade de dados de forma de onda que corresponde a cada comprimento de ondaé adquirida. Por exemplo, no exemplo mostrado na Figura 37, dados de forma de onda, cada um correspondendo à primeira luz dispersa lateralmente e a primeira luz fluorescente lateral, que correspondem à luz do primeiro comprimento de onda (por exemplo, 405 nm) e dados de forma de onda, cada um correspondendo à luz dispersa frontalmente, segunda luz dispersa lateralmente e segunda luz fluorescente lateral que correspondem à luz do segundo comprimento de onda (por exemplo, 638 nm) são adquiridas. A luz fluorescente lateral que correspondeà luz do primeiro comprimento de onda é adquirida com base no primeiro corante fluorescente e a luz fluorescente lateral que correspondeà luz do segundo comprimento de onda é adquirida com base no segundo corante fluorescente.
[00256] Cada dado de forma de onda gerado pelo conversor A/D 481a pode receber um índice para identificar cada componente. Por exemplo, um número inteiro a partir de 1 a N é atribuído ao índice na ordem dos dados de forma de onda gerados e o mesmo índice é atribuído aos dados de forma de onda da luz dispersa frontalmente, os dados de forma de onda da primeira/segunda luz dispersa lateralmente e os dados de forma de onda da primeira/segunda luz fluorescente lateral obtidos para o mesmo componente. Uma vez que cada dado de forma de onda corresponde a um componente, o índice corresponde ao componente medido. Ao atribuir o mesmo índice aos dados de forma de onda que correspondem ao mesmo componente, um algoritmo de aprendizado profundo a ser descrito posteriormente pode analisar os dados de forma de onda da luz dispersa frontalmente, os dados de forma de onda da primeira/segunda luz dispersa lateralmente e os dados de forma de onda da primeira/segunda fluorescência que corresponde a cada componente como um conjunto para classificar o tipo de componente.
[00257] A Figura 40 é um diagrama esquemático que mostra um exemplo de um método de geração de dados de treinamento usados para treinar um algoritmo de aprendizado profundo para determinar o tipo de um componente em um espécime. Conforme mostrado na Figura 40, os dados de treinamento 75 são dados de forma de onda gerados com base em um sinal analógico 70a da luz dispersa frontalmente (FSC), um sinal analógico 70b da primeira luz dispersa lateralmente (SSC-1), um sinal analógico 70c da primeira luz fluorescente lateral (SFL-1), um sinal analógico 70d da segunda luz dispersa lateralmente (SSC-2) e um sinal analógico 70e da primeira luz fluorescente lateral (SFL-2) obtido para o componente na amostra ao medir a amostra por um citômetro de fluxo (unidade de medição 400, consulte Figura 7). O método de aquisição de dados de forma de onda é conforme descrito acima.
[00258] Como dados de treinamento 75, por exemplo, dados de forma de onda de um componente determinado como sendo um tipo específico com alta possibilidade como um resultado de medição da amostra pelo citômetro de fluxo e análise de componentes contidos na amostra por meio de processamento de cálculo podem ser usados. A seguir, será descrito um exemplo de uso do sistema de análise 4000 (consulte Figura 4) como um contador de células sanguíneas que analisa uma amostra de sangue. A amostra de sangue é medida por um citômetro de fluxo (unidade de medição 400) e os dados da forma de onda de luz dispersa frontalmente, primeira/segunda luz dispersa lateralmente e primeira/segunda luz fluorescente lateral dos componentes individuais contidos na amostra são acumulados. As células no espécimesão classificadas em populações de neutrófilos, linfócitos, monó- citos, eosinófilos, basófilos, granulócitos imaturos e células anormais com base nas intensidades da primeira/segunda luz dispersa lateralmente (altura de pulso do sinal de luz dispersa lateralmente) e nas intensidades da primeira/segunda luz fluorescente lateral (altura de pulso do sinal de fluorescência lateral). Os dados de treinamento 75 são obtidos ao atribuir um valor de rótulo que corresponde ao tipo de célula classificada aos dados de forma de onda da célula. Por exemplo, os dados de treinamento 75 podem ser obtidos determinando o valor do modo, valor médio ou valor mediano da intensidade de luz dispersa lateralmente e da intensidade de fluorescência lateral de células incluídas na população de neutrófilos, identificando células representativas com base nestes valores e fornecendo o valor de rótulo "1" que corresponde aos dados da forma de onda para neutrófilo destas células. O método para gerar os dados de treinamento não está limitado ao mesmo e, por exemplo, os dados de treinamento podem ser obtidos ao coletar apenas uma célula específica por um classificador de células, medir a célula pelo citômetro de fluxo e fornecer um valor de rótulo da célula para os dados de forma de onda obtidos.
[00259] Os sinais analógicos 70a a 70e indicam um sinal de luz dispersa frontalmente, sinais de primeira/segunda luz dispersa lateralmente e sinais de primeira/segunda luz fluorescente lateral quando os neutrófilos são medidos pelo citômetro de fluxo, respectivamente. Quando estes sinais analógicos são convertidos em A/D conforme descrito acima, dados de forma de onda 72a do sinal de luz dispersa frontalmente, dados de forma de onda 72b do sinal de primeira luz dis-persa lateralmente, dados de forma de onda 72c do sinal de primeira fluorescência lateral, dados de forma de onda 72d do sinal de segunda luz dispersa lateralmente e dados de forma de onda 72e do sinal de segunda fluorescência lateral são obtidos. Células adjacentes em cada um dos dados de forma de onda 72a a 72e armazenam níveis de sinal em intervalos que correspondem à taxa de amostragem, por exemplo, em intervalos de 10 nanossegundos. Cada um dos dados de forma de onda 72a a 72e é combinado com um valor de rótulo 77 que representa o tipo de célula a partir da qual os dados são baseados e é inserido no algoritmo de aprendizagem profunda (rede neural 50) como os dados de treinamento 75, de modo que cinco formas de onda dos dados que correspondem a cada célula, em outras palavras, cinco intensidades de sinal (intensidade de sinal de luz dispersa frontalmente, intensidades de sinal de primeira/segunda luz dispersa lateralmente e intensidades de sinal de primeira/segunda luz fluorescente lateral) formem um conjunto. No exemplo da Figura 40, uma vez que a célula na qual os dados de treinamento 75 se baseiam é um neutrófilo, "1"é atribuído a cada um dos dados de forma de onda 72a a 72e como o valor de rótulo 77 indicando um neutrófilo e os dados de treinamento 75 são gerados. A Figura 41 mostra um exemplo do valor de rótulo 77. Uma vez que os dados de treinamento 75 são gerados para cada tipo de célula, um valor de rótulo 77 diferente de acordo com o tipo de célulaé atribuído.
[00260] Um esquema de treinamento da rede neural será descrito com referência à Figura 40 como exemplo. A rede neural 50 é, por exemplo, uma rede neural convolucional com uma camada de convo- lução. O número de nós de uma camada de entrada 50a na rede neural 50 corresponde ao número de elementos de uma matriz incluída nos dados de forma de onda dos dados de treinamento 75 a serem inseridos. O número de elementos da matriz é igual à soma do número de elementos dos dados de forma de onda 72a a 72e da luz dispersa frontalmente, da primeira/segunda luz dispersa lateralmente e da pri- meira/segunda luz fluorescente lateral que correspondem a um componente. No exemplo da Figura 40, cada um dos dados de forma de onda 72a a 72e inclui 1024 elementos. Portanto, o número de nós da camada de entrada 50a é 1024 x 5 = 5120. Cada um dos dados de forma de onda 72a a 72e é inserido na camada de entrada 50a da rede neural 50. O valor de rótulo 77 de cada dado de forma de onda do treinamento os dados 75 é inserido em uma camada de saída 50b da rede neural para treinar a rede neural 50. O número de referência 50c na Figura 40 denota uma camada intermediária.
[00261] A Figura 42 mostra um método exemplificativo para analisar dados de forma de onda de um componente em uma amostra. No método para analisar dados de forma de onda mostrado na Figura 42, dados de análise 85 que incluem os dados de forma de onda obtidos por meio do método descrito acima são gerados a partir de um sinal analógico 80a da luz dispersa frontalmente, um sinal analógico 80b da primeira luz dispersa lateralmente, um sinal analógico 80c da primeira luz fluorescente lateral, um sinal analógico 80d da segunda luz dispersa lateralmente e um sinal analógico 80e da segunda luz fluorescente lateral adquiridos por um citômetro de fluxo (unidade de medição 400, consulte Figura 7) do componente para ser analisado. Uma vez que os dados de forma de onda são adquiridos ao irradiar a célula de fluxo 4113 (consulte Figura 37) com luz de uma pluralidade de comprimentos de onda, uma pluralidade de partes de dados de forma de onda que correspondem a cada comprimento de onda é adquirida. Por exemplo, são adquiridos dados de forma de onda, cada um corres-pondendoà primeira luz dispersa lateralmente e primeira luz fluorescente lateral que correspondem à luz do primeiro comprimento de onda (por exemplo, 405 nm) e dados de forma de onda, cada um correspondendoà luz dispersa frontalmente, segunda luz dispersa lateralmente e segunda luz fluorescente lateral que correspondem à luz do segundo comprimento de onda (por exemplo, 638 nm). A luz fluorescente lateral que corresponde à luz do primeiro comprimento de onda é adquirida com base no primeiro corante fluorescente e a luz fluorescente lateral que corresponde à luz do segundo comprimento de onda é adquirida com base no segundo corante fluorescente.
[00262] É preferível ter as mesmas condições de aquisição dos dados de análise 85 e dos dados de treinamento 75. As condições de aquisição incluem condições para medir o componente na amostra pelocitômetro de fluxo, por exemplo, condições de preparação da amostra de medição, taxa de fluxo quando a amostra de medição é enviada através de uma célula de fluxo, intensidade da luz irradiada para a célula de fluxo, um fator de amplificação (ganho) de um elemento receptor de luz que recebe luz dispersa e fluorescência e assim por diante. As condições de aquisição incluem ainda a taxa de amostragem quando o sinal analógico é convertido A/D.
[00263] Quando o componente a ser analisado flui através da célula de fluxo 4113, o sinal analógico 80a da luz dispersa frontalmente, o sinal analógico 80b da primeira luz dispersa lateralmente, o sinal analógico 80c da primeira luz fluorescente lateral, o sinal analógico 80d da segunda luz dispersa lateralmente luz e o sinal analógico 80e da segunda luz fluorescente lateral são obtidos. Quando estes sinais analógicos 80a a 80e são convertidos em A/D conforme descrito acima, um ponto de tempo no qual a intensidade do sinal é adquirida é sincroni- zado para cada componente e os dados de forma de onda 82a do sinal de luz dispersa frontalmente, dados de forma de onda 82b do sinal de primeira luz dispersa lateralmente, dados de forma de onda 82c do sinal de primeira fluorescência lateral, dados de forma de onda 82d do sinal de segunda luz dispersa lateralmente e dados de forma de onda 82e do sinal de segunda fluorescência lateral são obtidos. Cada um dos dados de forma de onda 82a a 82e são combinados de modo que os dados de intensidade de sinal (intensidade de sinal de luz dispersa frontalmente, intensidades de sinal de primeira/segunda luz dispersa lateralmente e intensidades de sinal de primeira/segunda luz fluorescente lateral) de cada componente formam um conjunto e é inserido no algoritmo de aprendizado profundo 51 como os dados de análise 85. No exemplo da Figura 42, um conjunto de dados que inclui cinco dados de forma de onda dos dados de forma de onda 82a, 82b, 82c, 82d e 82e é inserido.
[00264] Quando os dados de análise 85 são inseridos em uma camada de entrada 51a da rede neural 50 que constitui o algoritmo de aprendizado profundo treinado 51, um resultado de análise 83 é emitido a partir de uma camada de saída 51b como informação sobre classificação em relação ao tipo de componente que corresponde aos dados de análise 85. O número de referência 51c na Figura 42 denota uma camada intermediária. A informação sobre classificação referente ao tipo do componente é, por exemplo, uma probabilidade de que cada componente pertença a cada um dentre uma pluralidade de tipos de células. É determinado que o componente alvo de análise para o qual os dados de análise 85 são adquiridos pertence a uma classificação que tem o valor mais alto entre as probabilidades e um valor de rótulo 82 ou similar que é um identificador que indica o tipo pode ser incluído no resultado da análise 83. O resultado da análise 83 pode ser dado em que o valor do rótulo é substituído por informações (por exemplo, uma cadeia de caracteres) que indicam o tipo, além do próprio valor do rótulo. A Figura 42 mostra um exemplo no qual, com base nos dados de análise 85, o algoritmo de aprendizado profundo 51 emite um valor de rótulo "1" ao qual pertence uma probabilidade de que o componente a ser analisado para o qual os dados de análise 85 são adquiridos foi o mais alto e os dados de caractere "neutrófilo"que cor-respondem ao valor do rótulo são posteriormente emitidos como o re-sultado da análise 83. O resultado do valor de rótulo pode ser obtido pelo algoritmo de aprendizado profundo 51, porém, outro programa de computador pode gerar o valor de rótulo mais preferível com base na probabilidade calculada pelo algoritmo de aprendizado profundo 51.
[00265] A Figura 43 mostra uma configuração exemplificativa de outra seção de preparação de amostra 441 diferente da seção de preparação de amostra 440 mostrada na Figura 12. Na Figura 43, os mesmos elementos daqueles na Figura 12 são indicados pelos mesmosnúmeros de referência.
[00266] O exemplo da Figura 43 mostra que a configuração do canal de medição da seção de preparação de amostra 440 pode ser alterada ao executar uma análise usando o algoritmo de aprendizado profundo (algoritmo AI). No exemplo da Figura 43, o canal de medição (WNR) para contagem de glóbulos brancos, contagem de glóbulos vermelhos nucleados e contagem de basófilos é substituído por um canal de medição (WDF) para realizar a classificação de glóbulos brancos. Ou seja, no exemplo da Figura 43, o canal WNR é substituído pelo canal WDF, de modo que a unidade de medição 400 (consulte Figura 7) inclua uma pluralidade de canais WDF. No caso deste exemplo, a contagem de glóbulos brancos, a contagem de glóbulos vermelhos nucleados e a contagem de basófilos, os quais são itens de medição do canal WNR, são obtidas ao analisar os dados da forma de onda obtidos pela medição usando o canal WDF pelo algoritmo AI 51. Por exemplo, uma vez que glóbulos brancos, glóbulos vermelhos nu- cleados e basófilos podem ser classificados a partir dos dados da forma de onda obtidos através de medição usando o canal WDF, glóbulos brancos, glóbulos vermelhos nucleados e basófilos podem ser classificados a partir dos dados de forma de onda do canal WDF ao fazer com que o algoritmo AI 51 aprenda. Por exemplo, ao fazer com que o algoritmo AI 51 aprenda dados que correspondem a glóbulos brancos, glóbulos vermelhos nucleados e basófilos entre os dados de forma de onda obtidos pela medição do canal WDF como os dados de treinamento, um algoritmo AI 51 capaz de classificar branco glóbulos vermelhos, glóbulos vermelhos nucleados e basófilos é gerado a partir dos dados da forma de onda medidos pelo canal WDF. Na configuração exemplificativa da Figura 43, por exemplo, medições para diferentesespécimes são realizadas em paralelo em uma pluralidade de canais WDF. Por exemplo, a preparação de amostras de diferentes espécimes é realizada em paralelo em cada câmara da pluralidade de canais WDF.
[00267] Conforme mostrado na Figura 43, ao substituir a análise do canal de medição predeterminado pela análise AI de dados por outro canal de medição, o canal de medição predeterminado pode ser substituído por outro canal de medição. Como um resultado, o número de canais de medição a serem adicionados pode ser aumentado sem aumentar o número total de canais de medição fornecidos no sistema de análise 4002 (consulte Figura 7). No exemplo da Figura 43, ao substituir o canal WNR pelo canal WDF, é possível aumentar o número de canais WDF sem aumentar o número total de canais de medição fornecidos no sistema de análise 4002. À medida que o número de canais WDF aumenta, diferentes espécimes podem ser medidos em paralelo em cada um dentre a pluralidade de canais WDF. A medição paralela melhora o rendimento da medição usando o canal WDF. De acordo com o exemplo da Figura 43, é obtido um efeito notável de que o rendimento do processamento do espécime também pode ser aumentado.
[00268] Para um exemplo de substituição de um canal de medição por outro canal de medição usando um algoritmo AI, é necessário analisar itens de medição (no exemplo da Figura 12, glóbulos vermelhos nucleados e basófilos no canal WNR) de um canal de medição para ser substituído com base nos dados medidos com outro canal de medição (no exemplo da Figura 12, o canal WDF). Ao analisar os dados medidos por outro canal de medição pelo algoritmo AI, os itens de medição do canal de medição a serem substituídos podem ser classificados. Na presente modalidade, uma pluralidade de tipos de sinais ópticos, cada um correspondendo à luz de uma pluralidade de comprimentos de onda, é analisada pelo algoritmo AI. Ao aumentar a quantidade de informações usando dados, cada um correspondendo à luz de uma pluralidade de comprimentos de onda, a precisão da análise por IA é aprimorada. Com a melhoria da precisão da análise, é possível classificar os itens de medição (no exemplo da Figura 12, hemácias nuclea- das e basófilos no canal WNR) do canal de medição a ser substituído, mesmo que os dados sejam de outro canal de medição (por exemplo, o canal WDF).
[00269] No método de análise (primeiro exemplo) no exemplo da Figura 43, por exemplo, não apenas classificação e contagem de glóbulos vermelhos nucleados (NRBCs) e classificação e contagem de basófilos (BASOs), mas também classificação (eosinófilos, neutrófilos, linfócitos, monócitos) e contagem de glóbulos brancos diferentes de BASOs é realizada por meio de análise AI de dados de forma de onda obtidos através de medição usando o canal WDF. No caso deste exemplo, o algoritmo AI 51 é aprendido para que glóbulos brancos diferentes de NRBCs, BASOs e BASOs (eosinófilos, neutrófilos, linfóci- tos, monócitos) possam ser classificados pelos dados de forma de onda. Usando o algoritmo AI 51, o canal WNR pode ser substituído pelo canal WDF. Estas análises são realizadas pela unidade de análise 302X (consulte Figura 7) como segue.
[00270] A Figura 44 é um fluxograma que mostra um exemplo de operação (primeiro exemplo de operação) do presente método de análise. Conforme mostrado na Figura 44, no primeiro exemplo de operação, a unidade de análise 302X (consulte Figura 7) adquire dados que correspondem ao sinal óptico detectado no canal WDF (etapa S0). Em seguida, a unidade de análise 302X analisa os dados presentes através do algoritmo AI 51 (etapa S1). A unidade de análise 302X também classifica basófilos e glóbulos vermelhos nucleados analisados no canal WDF, além da classificação de monócitos, linfócitos, neutrófilos e eosinófilos, ao analisar os dados obtidos através de medição usando o canal WDF pelo algoritmo AI 51. Em seguida, a unidade de análise 302X fornece um resultado de análise dos dados do canal WDF (etapa S2).
[00271] Em outro exemplo (segundo exemplo de operação) do método de análise mostrado na Figura 45, por exemplo, classificação e contagem de NRBCs e classificação e contagem de BASOs são realizadas por meio de análise AI de dados de forma de onda obtidos através de medição usando o canal WDF. No algoritmo AI 51, os dados de forma de onda que correspondem às células que não foram classificadas em NRBCs ou BASOs são analisados através de um diagrama de dispersão e a classificação e contagem de eosinófilos, neutrófilos, lin- fócitos e monócitos são realizadas. No caso deste exemplo, o algoritmo AI 51 aprende, por exemplo, a realizar a classificação de NRBCs, BASOs e outros a partir dos dados de forma de onda. Através do algoritmo AI 51 deste exemplo, os dados de forma de onda que correspondemàs células classificadas além de NRBCs e BASOs são analisados pelo diagrama de dispersão. Por exemplo, os valores de pico de dados de forma de onda que correspondem a células classificadas como diferentes de NRBCs e BASOs são extraídos e o tipo de célula é classificado com base em um gráfico bidimensional gerado a partir de um valor de pico que corresponde ao sinal de fluorescência lateral e um valor de pico que corresponde à luz dispersa lateralmente. Por exemplo, as células são classificadas em eosinófilos, neutrófilos, linfócitos, mo- nócitos ou outros com base no diagrama de dispersão. As células classificadas como diferentes de eosinófilos, neutrófilos, linfócitos e monócitos na análise com base no diagrama de dispersão são classificadas, por exemplo, como "detritos". Estas análises são realizadas pela unidade de análise 302X (consulte Figura 7) como segue.
[00272] A Figura 45 é outro fluxograma que mostra um exemplo de operação (segundo exemplo de operação) do presente método de análise. Conforme mostrado na Figura 45, a unidade de análise 302X adquire dados que correspondem ao sinal óptico detectado no canal WDF (etapa S10). Em seguida, a unidade de análise 302X analisa os dados presentes através do algoritmo AI 51 (etapa S11). Em seguida, a unidade de análise 302X especifica dados que correspondem a células diferentes de NRBCs e BASOs (etapa S12). Em seguida, a unidade de análise 302X analisa os dados especificados no diagrama de dispersão (etapa S13). Em seguida, a unidade de análise 302X fornece um resultado de análise dos dados do canal WDF (etapa S14).
[00273] Em ainda outro exemplo (terceiro exemplo) do método de análise mostrado na Figura 46, por exemplo, classificação e contagem de linfócitos, classificação e contagem de monócitos, classificação e contagem de eosinófilos e classificação e contagem de neutrófi- los/basófilos são executadas por meio de análise de diagrama de dis-persão de dados de forma de onda obtidos através de medição usando o canal WDF. Na classificação e contagem de neutrófilos/basófilos, por exemplo, são contadas as células classificadas como neutrófilos ou basófilos. Dados de forma de onda que correspondem a células que não foram classificadas como linfócitos, monócitos, eosinófilos, neutrófilos/basófilos e células classificadas como neutrófilos e basófi- los são analisados pelo algoritmo AI 51 (consulte Figura 42). Por exemplo, os dados de forma de onda são classificados pelo algoritmo AI 51 em NRBCs, basófilos (BASOs) e outros. Por exemplo, a contagem de células classificadas como BASOs por um algoritmo AI 60 é subtraída do resultado da contagem de células classificadas como neutrófilos ou basófilos por meio de análise de diagrama de dispersão e cada contagem de neutrófilos e contagem de basófilos é calculada. As células que não são classificadas como NRBCs ou BASOs por meio de análise AI são classificadas, por exemplo, como "detritos". Estas análises são realizadas pela unidade de análise 302X (consulte Figura 7) como segue.
[00274] A Figura 46 é um fluxograma que mostra um exemplo de operação (terceiro exemplo de operação) do presente método de análise. Conforme mostrado na Figura 46, a unidade de análise 302X adquire dados que correspondem ao sinal óptico detectado no canal WDF (etapa S20). Em seguida, a unidade de análise 302X analisa os dados presentes no diagrama de dispersão (etapa S21). Em seguida, a unidade de análise 302X especifica os dados que correspondem a (1) células que não foram classificadas como linfócitos, monócitos, eo- sinófilos, neutrófilos/basófilos e (2) células que foram classificadas como neutrófilos/basófilos (etapa S22). Em seguida, a unidade de análise 302X analisa os dados especificados pelo algoritmo AI 60 (etapa S23). Em seguida, a unidade de análise 302X fornece um resultado de análise dos dados do canal WDF (etapa S24).
[00275] Uma quinta modalidade descreve um método de análise de espécimes que inclui, em um sistema de análise de espécimes (incluindo os sistemas de análise da primeira à quarta modalidades), um processador hospedeiro (host) e um processador de processamento paralelo que adquirem dados em cada um dos componentes em um espécime sob controle do processador hospedeiro que executa pro-cessamento paralelo nos dados pelo processador de processamento paralelo e gera informação sobre o tipo de cada um dos componentes com base no resultado do processamento paralelo.
[00276] De acordo com a presente modalidade, mesmo quando um grande volume de dados variando de várias centenas de megabytes a vários gigabytes por espécime é analisado, o processamento relacionado aos dados medidos pode ser executado em paralelo por um processador de processamento paralelo fornecido separadamente do processador hospedeiro. Portanto, por exemplo, mesmo quando o grande volume de dados é processado pelo algoritmo de aprendizado profundo, o processamento dos dados é concluído no sistema de análise de espécimes. Por exemplo, não é necessário transmitir dados para o servidor de análise que armazena o algoritmo de aprendizado profundo via Internet ou intranet. Portanto, de acordo com a presente mo-dalidade,não é necessário transmitir um grande volume de dados do sistema de análise de amostra para o servidor de análise e adquirir o resultado da análise retornado do servidor de análise, sendo possível manter a capacidade de processamento do sistema de análise de es-pécimes, ao mesmo tempo em que melhora a precisão da classificação do componente no espécime.
[00277] A Figura 47 mostra uma configuração exemplificativa da presente modalidade. Na Figura 47, os mesmos elementos da Figura 10 são indicados pelos mesmos números de referência. A unidade de análise 303X na Figura 47 inclui um processador de processamento paralelo capaz de processar o processamento aritmético pelo algorit- mo AI em vez de um processador mestre. Ao usar um processador de processamento paralelo adequado para o processamento de uma ope-ração de matriz executada pelo algoritmo AI (por exemplo, algoritmo de aprendizado profundo), o tempo de retorno (TAT) necessário para a análise AI é aprimorado. Na descrição a seguir, a descrição de confi-gurações e funções similares àquelas da modalidade descrita acima será omitida.
[00278] A unidade de análise 302X mostrada na Figura 47 pode ter uma configuração na qual a seção de análise 301X está localizada na unidade de medição 401 conforme mostrado na Figura 11.
[00279] O processador 3001 executa o processamento de análise de dados de forma de onda pelo algoritmo de aprendizado profundo 60 usando um processador de processamento paralelo 3002. Isto é, o pro-cessador 3001 é programado para executar o processamento de análise dos dados de forma de onda de acordo com o algoritmo de aprendizado profundo 60. Um software de análise 3100 para analisar os dados que correspondem ao componente no espécime com base no algoritmo de aprendizado profundo 60 pode ser armazenado na porção de arma-zenamento 3004. Neste caso, o processador 3001 executa o proces-samento de análise de dados com base no algoritmo de aprendizado profundo 60 que executa o software de análise 3100 armazenado na porção de armazenamento 3004. Na presente modalidade, por exemplo, a análise AI é executada pelo processador 3001 e o processador de processamento paralelo 3002 e uma análise de processamento de cál-culoé realizada pelo processador 3001 sem usar o processador de pro-cessamento paralelo 3002. O processador 3001 é, por exemplo, uma unidade de processamento central (CPU). Por exemplo, Core i9, Core i7 ou Core i5 fabricados pela Intel Corporation, Ryzen 9, Ryzen 7, Ryzen 5 ou Ryzen 3 fabricados pela Advanced Micro Devices, Inc ou similar po-dem ser usados como o processador 3001.
[00280] O processador 3001 controla o processador de processamento paralelo 3002. O processador de processamento paralelo 3002 executa, por exemplo, processamento paralelo relacionado à operação de matriz de acordo com o controle do processador 3001. Ou seja, o processador 3001 é um processador mestre do processador de processamento paralelo 3002 e o processador de processamento paralelo 3002 é um processador escravo do processador 3001. O processador 3001 também é denominado como processador hospedeiro ou processador principal.
[00281] O processador de processamento paralelo 3002 executa uma pluralidade de processamentos aritméticos que são pelo menos uma parte do processamento relacionado à análise de dados de forma de onda em paralelo. O processador de processamento paralelo 3002 é, por exemplo, uma unidade de processamento gráfico (GPU), uma matriz de portas programável em campo (FPGA) ou um circuito integradoespecífico para aplicação (ASIC). Quando o processador de processamento paralelo 3002 é um FPGA, o processador de processamento paralelo 3002 pode ser pré-programado, por exemplo, com processamento aritmético para o algoritmo de aprendizado profundo treinado 60. No caso onde o processador de processamento paralelo 3002 é um ASIC, o paralelo processador de processamento 3002 pode incorporar, por exemplo, um circuito para executar processamento aritmético relacionado ao algoritmo de aprendizado profundo treinado 60 antecipadamente ou pode incluir um módulo programável além de tal circuito embutido. Por exemplo, GeForce, Quadro, TITAN ou Jetson fabricados pela NVIDIA Corporation ou similar podem ser usados como o processador de processamento paralelo 3002. No caso da série Jetson, por exemplo, Jetson Nano, Jetson Tx2, Jetson Xavier ou Jetson AGX Xavier é usado.
[00282] O processador 3001 executa, por exemplo, processamento de cálculo relacionado ao controle da unidade de medição 402 (consulte Figura 7). O processador 3001 executa, por exemplo, processamento de cálculo relacionado a um sinal de controle transmitido e recebido entre a seção de mecanismo de dispositivo 455, a seção de preparação de amostra 440 e o mecanismo de sucção de amostra 450. O processador 3001 executa, por exemplo, processamento de cálculo relacionado à transmissão e recepção de informações de e para o computador 310X. O computador 310X tem, por exemplo, uma função de exibição do resultado da análise transmitido a partir da unidade de análise 303X com base no processamento pelo processador 3001. O computador 310X transmite, por exemplo, uma ordem de medição para a unidade de análise 303X. A ordem de medição é inserida, por exemplo, pelo usuário por meio de um dispositivo de entrada do computador 310X. A ordem de medição é transmitida, por exemplo, de um computador hospedeiro para o computador 310X. O processador 3001 executa, por exemplo, processamento relacionado à leitura de dados de programa da porção de armazenamento 3004, expansão de um programa para a memória principal 3017 e transmissão e recepção de dados de e para a memória principal 3017. Cada um dos processos descritos acima executados pelo processador 3001 devem ser executados, por exemplo, em uma ordem predeterminada. Por exemplo, quando o processamento necessário para controlar a seção de mecanismo de dispositivo 455, a seção de preparação de amostra 440 e o mecanismo de sucção de amostra 450 é definido como A, B e C, pode ser necessário executar B, A e C nesta ordem. Uma vez que o processador 3001 geralmente executa este processamento sequencial dependendo da ordem, mesmo que o número de unidades aritméticas (pode ser denominado como "núcleos de processador", "núcleos"ou similar) seja aumentado, a velocidade de processamento não é necessariamente aumentada.
[00283] Por outro lado, o processador de processamento paralelo 3002 executa uma grande quantidade de processamento de cálculo típico, por exemplo, cálculo de dados de matriz, que incluem uma grande quantidade de elementos. Na presente modalidade, o processador de processamento paralelo 3002 executa o processamento paralelo obtido pela paralelização de pelo menos uma parte do processamento da análise de dados de forma de onda de acordo com o algoritmo de aprendizado profundo 60. O algoritmo de aprendizado profundo 60 inclui, por exemplo, um grande número de operações de matriz. O algoritmo de aprendizado profundo 60 pode incluir, por exemplo, pelo menos 100 operações de matriz e pelo menos 1000 operações de matriz. O processador de processamento paralelo 3002 tem uma pluralidade de unidades aritméticas e cada uma destas unidades aritméticas pode realizar simultaneamente uma operação de matriz. Ou seja, o processador de processamento paralelo 3002 pode executar a operação de matriz por cada uma dentre a pluralidade de unidades aritméticas em paralelo como processamento paralelo. Por exemplo, a operação de matriz incluída no algoritmo de aprendizado profundo 60 pode ser dividida em uma pluralidade de processamento aritmético sem dependência da ordem. O processamento aritmético dividido desta maneira pode ser executado em paralelo por cada uma dentre a pluralidade de unidades aritméticas. Estas unidades aritméticas podem ser denominadas de "núcleos de processador", "núcleos"ou similar.
[00284] Ao executar tal processamento paralelo, o processamento aritmético de toda a unidade de medição 402 pode ser acelerado. O processamento tal como operação de matriz incluída no algoritmo de aprendizado profundo 60 pode ser denominado, por exemplo, como "processamento de dados múltiplos de instrução única (SIMD)". O pro-cessador de processamento paralelo 3002 é adequado, por exemplo, para a operação SIMD. Tal processador de processamento paralelo 3002 pode ser denominado como um processador de vetor.
[00285] Conforme descrito acima, o processador 3001 é adequado para executar processamentos diversos e complexos. Entretanto, o processador de processamento paralelo 3002 é adequado para executar uma grande quantidade padronizada de processamento em paralelo. Ao executar uma grande quantidade padronizada de processamento em paralelo, o tempo de retorno (TAT) necessário para o processamento do cálculo é reduzido. O alvo do processamento paralelo executado pelo processador de processamento paralelo 3002 não está limitadoà operação de matriz. Por exemplo, quando o processador de processamento paralelo 3002 executa processamento de aprendizado de acordo com o algoritmo de aprendizado profundo 50, uma operação diferencial ou similar relacionada ao processamento de aprendizado pode ser um alvo de processamento paralelo.
[00286] O número de unidades aritméticas do processador 3001 é, por exemplo, dual core (número de núcleos: 2), quad core (número de núcleos: 4) ou octa core (número de núcleos: 8). Por outro lado, o pro-cessador de processamento paralelo 3002 tem, por exemplo, pelo menos 10 unidades aritméticas (o número de núcleos: 10) e pode executar 10 operações de matriz em paralelo. Alguns processadores de pro-cessamento paralelo 3002 incluem, por exemplo, várias dezenas de unidades aritméticas. Alguns processadores de processamento paralelo 3002 têm pelo menos 100 unidades aritméticas (o número de núcleos: 100), por exemplo e podem executar 100 operações de matriz em paralelo. Alguns processadores de processamento paralelo 3002 têm pelo menos 1.000 unidades aritméticas (o número de núcleos: 1.000), por exemplo e podem executar 1.000 operações de matriz em paralelo. Alguns processadores de processamento paralelo 3002 têm, por exemplo, várias 1000 unidades aritméticas.
[00287] A Figura 48 mostra uma configuração exemplificativa do processador de processamento paralelo 3002. O processador de pro-cessamento paralelo 3002 inclui uma pluralidade de unidades aritméticas 3200 e uma RAM 3201. Cada uma das unidades aritméticas 3200 executa processamento aritmético de dados de matriz em paralelo. A RAM 3201 armazena dados relacionados ao processamento aritmético executado pela unidade aritmética 3200. A RAM 3201 é uma memória que tem capacidade de pelo menos 1 gigabyte. A RAM 3201 pode ser uma memória que tem capacidade de 2 gigabytes, 4 gigabytes, 6 gigabytes, 8 gigabytes ou 10 gigabytes ou mais. A unidade aritmética 3200 adquire dados a partir da RAM 3201. A unidade aritmética 3200 executa o processamento aritmético. A unidade aritmética 3200 pode ser deno-minada como um "núcleo do processador", um "núcleo"ou similar.
[00288] As Figuras 49, 50 e 51 mostram um esboço do processa-mentoaritmético executado pelo processador de processamento paralelo 3002 sob controle do software de análise 3100 que é executado no processador 3001. A Figura 49 mostra uma configuração exemplifi- cativa do processador de processamento paralelo 3002 que executa o processamento aritmético. O processador de processamento paralelo 3002 tem a pluralidade de unidades aritméticas 3200 e a RAM 3201. O processador 3001 que executa o software de análise 3100 instrui o processador de processamento paralelo 3002 a fazer com que o pro-cessador de processamento paralelo 3002 execute pelo menos parte do processamento aritmético necessário quando os dados de forma de onda são analisados pelo algoritmo de aprendizado profundo 60. O processador 3001 instrui o processador de processamento paralelo 3002 a executar processamento aritmético relacionado à análise de dados de forma de onda com base no algoritmo de aprendizado profundo 60. Todos ou pelo menos parte dos dados de forma de onda que correspondem ao sinal detectado pela seção de detecção FCM 460 (consulte Figura 4) é armazenada na memória principal 3017. Os da dos armazenados na memória principal 3017 são transferidos para a RAM 3201 a partir do processador de processamento paralelo 3002. Os dados armazenados na memória principal 3017 são transferidos para a RAM 3201, por exemplo, por meio de um método de acesso direto à memória (DMA). Cada uma dentre a pluralidade de unidades aritméticas 3200 do processador de processamento paralelo 3002 executa processamento aritmético nos dados armazenados na RAM 3201 em paralelo. Cada uma dentre a pluralidade de unidades aritméticas 3200 adquire os dados necessários a partir da RAM 3201 para executar o processamento aritmético. Os dados que correspondem ao resultado aritmético são armazenados na RAM 3201 do processador de processamento paralelo 3002. Os dados que correspondem ao resultadoaritmético são transferidos da RAM 3201 para a memória principal 3017, por exemplo, por meio do método DMA.
[00289] A Figura 50 mostra um esboço da operação de matriz executada pelo processador de processamento paralelo 3002. Quando os dados de forma de onda são analisados de acordo com o algoritmo de aprendizado profundo 60, o cálculo do produto de matriz (operação de matriz) é executado. O processador de processamento paralelo 3002 executa, por exemplo, uma pluralidade de processamentos aritméticos relacionados à operação de matriz em paralelo. A Figura 50A mostra uma fórmula de cálculo do produto da matriz. Na fórmula de cálculo mostrada na Figura 50A, a matriz c é obtida por um produto da matriz a de n linhas e n colunas e da matriz b de n linhas e n colunas. Conforme mostrado na Figura 50, a fórmula de cálculo é descrita em uma sintaxe de loopmultinível. A Figura 50B mostra um exemplo de pro-cessamentoaritmético executado em paralelo pelo processador de processamento paralelo 3002. A fórmula de cálculo mostrada na Figura 50A pode ser dividida, por exemplo, em n x n partes de processa-mentoaritmético que são o número de combinações de i loopsvariá- veis de uma primeira camada e j loopsvariáveis de uma segunda camada. Cada processamento aritmético dividido desta maneira é um processamento aritmético que não depende um do outro e, portanto, pode ser executado em paralelo.
[00290] A Figura 51 é um diagrama conceitual que mostra que a pluralidade de processamento aritmético mostrado na Figura 50B é executada em paralelo pelo processador de processamento paralelo 3002. Conforme mostrado na Figura 51, cada um dentre a pluralidade de processamento aritmético é alocado a qualquer uma dentre a pluralidade de unidades aritméticas 3200 incluídas no processador de processamento paralelo 3002. Cada uma das unidades aritméticas 3200 executa o processamento aritmético alocado em paralelo entre si. Ou seja, cada uma das unidades aritméticas 3200 executa simultaneamente o processamento aritmético dividido.
[00291] Através de cálculo pelo processador de processamento paralelo 3002 mostrado na Figura 51, por exemplo, é obtida informação sobre a probabilidade de que a célula que corresponde aos dados de forma de onda pertença a cada um dentre a pluralidade de tipos de células. Com base no resultado da operação, o processador 3001 que executa o software de análise 3100 realiza a análise no tipo de célula da célula que corresponde aos dados da forma de onda. O resultado aritmético é armazenado na RAM 3201 do processador de processamento paralelo 3002 e o resultado aritmético é transferido da RAM 3201 para a memória principal 3017. O processador 3001 adquire o resultado analisado com base no resultado aritmético armazenado na memória principal 3017 e o processador 3001 armazena o resultado da análise na porção de armazenamento 3004.
[00292] A operação da probabilidade de que o componente no espécime pertença a cada um dentre a pluralidade de tipos de classificação pode ser realizada por um processador diferente do processador de processamento paralelo 3002. Por exemplo, o resultado aritmético pelo processador de processamento paralelo 3002 pode ser transferido da RAM 3201 para a memória principal 3017 e o processador 3001 pode calcular a informação relacionada à probabilidade de que o componente que corresponde a cada dado de forma de onda pertença a cada um dentre a pluralidade de tipos de classificação com base no resultado aritmético lido a partir da memória principal 3017. O resultadoaritmético pelo processador de processamento paralelo 3002 pode ser transferido da RAM 3201 para a unidade de análise 303X (consulte Figura 47) e um processador montado na unidade de análise 303X pode calcular a informação relacionada a uma probabilidade de que um componente que corresponde a cada forma de onda os dados pertença a cada um dentre a pluralidade de tipos de classificação.
[00293] A seguir, serão descritos exemplos do primeiro corante fluo-rescente e do segundo corante fluorescente. Neste exemplo, será descrito um exemplo no qual dois tipos de corantes fluorescentes, um primeiro corante fluorescente e um segundo corante fluorescente, são usados para corar glóbulos brancos em uma amostra. A seguir, em particular, será descrita uma combinação do primeiro corante fluores-cente e do segundo corante fluorescente adequados para contagem precisa de basófilos, mesmo em uma amostra de sangue em que um tempo tenha decorrido desde a coleta de sangue.
[00294] O segundo corante fluorescente é um corante fluorescente que tem uma absorção máxima em uma faixa de comprimento de onda diferente daquela do primeiro corante fluorescente. Ou seja, o segundo corante fluorescente é um corante fluorescente que emite fluorescência de um comprimento de onda detectável separadamente da fluorescência do primeiro corante fluorescente. Cada um dentre o pri- meiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente pode ser adequadamente selecionado a partir de corantes fluorescentes conhe-cidos que têm uma propriedade de ligação ao ácido nucleico de célu-lassanguíneas, tais como glóbulos brancos.
[00295] O primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluo-rescentesão excitados pela luz emitida por uma fonte de luz incluída no citômetro de fluxo. A luz pode ser emitida por uma fonte de luz ou pode ser emitida por duas fontes de luz. Quando a luz é emitida por uma fonte de luz, a luz emitida pela fonte de luz pode ser uma luz capaz de excitar tanto o primeiro corante fluorescente quanto o segundo corante fluorescente. Como tal luz, uma luz que inclui uma pluralidade de com-primentos de onda é preferível e exemplos da mesma incluem luz branca. Alternativamente, quando o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente têm absorção máxima em uma faixa de comprimento de onda próxima a uma extensão que pode ser excitada pela luz de um comprimento de onda, a luz emitida a partir da fonte de luz pode ser a luz de um comprimento de onda. Por exemplo, quando um dentre o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente tem uma absorção máxima em uma faixa de comprimento de onda de 400 a 520 nm e o outro tem uma absorção máxima em uma faixa de comprimento de onda de 300 a 420 nm, ambos os corantes fluorescentes podem ser excitado por luz que tem um comprimento de onda central de 400 a 420 nm, por exemplo, luz de 455 nm. Alternativamente, por exemplo, quando a absorção máxima do primeiro corante fluorescente e do segundo corante fluorescente está dentro de uma faixa de comprimento de onda de 630 a 660 nm, um dentre o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente emite fluorescência com um pico em uma faixa de comprimento de onda de 660 a 670 nm e o outro emite fluorescência com um pico em uma faixa de comprimento de onda maior do que 670 nm, ambos os corantes fluorescentes podem ser excitados por luz que tem um comprimento de onda central de 630 a 655 nm, por exemplo, luz de 633 nm e a luz gerada por cada corante fluorescente pode ser detectada separadamente.
[00296] Quando a luz é emitida a partir de duas fontes de luz, a luz emitida pode ser de dois tipos de luz: luz de um primeiro comprimento de onda capaz de excitar o primeiro corante fluorescente e luz de um segundo comprimento de onda capaz de excitar o segundo corante fluorescente. O segundo comprimento de onda é diferente do primeiro comprimento de onda. O comprimento de onda pode ser adequadamente determinado de acordo com o tipo de corante fluorescente. Por exemplo, o primeiro comprimento de onda é de 315 a 490 nm, de preferência de 400 a 450 nm e, mais preferivelmente, de 400 a 410 nm. O segundo comprimento de onda é de 610 a 750 nm, de preferência de 620 a 700 nm e, mais preferivelmente, de 633 a 643 nm.
[00297] Quando duas luzes de excitação são usadas, o primeiro corante fluorescente é um corante que tem uma absorção máxima em uma faixa de comprimento de onda de 400 a 490 nm e emite fluorescência ao ser excitado pela absorção de luz na faixa de comprimento de onda e o primeiro corante fluorescente é, de preferência, um corante que tem uma propriedade de ligação ao ácido nucleico (particularmente DNA) de células sanguíneas. Exemplos dos mesmos incluem corantes fluorescentes que têm um esqueleto de acridina, dicloridrato de 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI), Hoechst 3342, Hoechst 33258 e Hoechst 334580 da série Hoechst e assim por diante.
[00298] Exemplos do corante fluorescente que tem um esqueleto de acridina incluem proflavina, 9-aminoacridina, laranja de acridina, Acridine Yellow G, acriflavina, Basic Yellow 9, etacridina de ácido láctico, Euchrysine GG (Euchrysine GGNX), hemissulfato de proflavina, 3,6- bis(dimetilamino)acridina (Rhoduline Orange) e cloreto de 3,6-diamino- 2,7,10-trimetil-acridínio. Dentre eles, o Acridine Yellow G é preferido. Alternativamente, um corante fluorescente comercialmente disponível pode ser usado como o segundo corante fluorescente.
[00299] Quando duas luzes de excitação são usadas, como o segundo corante fluorescente, um corante que tem uma absorção máxima em uma faixa de comprimento de onda de 610 a 750 nm e que emite fluorescência ao ser excitado pela absorção de luz na faixa de comprimento de onda e um corante que tem uma propriedade de ligação ao ácido nucleico (particularmente RNA) de células sanguíneas é preferível. Exemplos dos mesmos incluem iodeto de propídio, brometo de etídio, heterodímero de etídio-acridina, diazida de etídio, homodímero de etídio-1, homodímero de etídio-2, monoazida de etídio, trimetilenobis [ [3- [ [4- [ [(3-metilbenzotiazol-3-ío)-2-il]metileno]- 1,4-di-hidroquinolin]-1-il]propil]dimetilamínio]^tetraiodeto (TOTO-1), 4- [(3-metilbenzotiazol-2(3H)-ilideno)metil]-1- [3-(trimetilamínio)propil] quinolínio^di-iodeto (TO-PRO-1), N,N,N',N'-tetrametil-N,N'-bis [3- [4- [3— [(3-metilbenzotiazol-3-ío)-2-il]-2-propenilideno]-1,4-dihidroquinolin-1- il]propil]-1,3-propanodiamínio^tetraiodeto (TOTO-3), 2- [3- [ [1- [3- (trimetilamínio)propil]-1,4-dihidroquinolin]-4-ilideno]-1-propenil]-3- metilbenzotiazol-3-ío^di-iodeto (TOPRO-3), corantes fluorescentes representados pela fórmula geral (V) a seguir, combinações dos mesmos e assim por diante:
[00300] Na fórmula (V), R1 e R4 são um átomo de hidrogênio, um grupo metila, um grupo etila ou um grupo alquila que tem 6 a 18 átomos de carbono e, quando um dentre R1 e R4 é um grupo alquila que tem 6 a 18 átomos de carbono, o outro é um átomo de hidrogênio, um grupo metila ou um grupo etila. R2 e R3são iguais ou diferentes um do outro e R2 e R3são um grupo metila, um grupo etila, um grupo metóxi ou um grupo etóxi. Z é um átomo de enxofre, um átomo de oxigênio ou um átomo de carbono em um grupo metila. n é 0, 1, 2 ou 3. X-é um ânion.
[00301] Na fórmula (V), o grupo alquila que tem 6 a 18 átomos de carbono pode ser linear ou ramificado. Dentre os grupos alquila que têm 6 a 18 átomos de carbono, é preferível um grupo alquila que tem 6, 8 ou 10 átomos de carbono.
[00302] Na fórmula (V), exemplos de substituinte do grupo benzila de R1 e R4 incluem grupos alquila que têm 1 a 20 átomos de carbono, grupos alquenila que têm 2 a 20 átomos de carbono e grupos alquinila que têm 2 a 20 átomos de carbono. Dentre eles, é particularmente preferido um grupo metila ou um grupo etila.
[00303] Na fórmula (V), exemplos do grupo alquenila de R2 e R3incluem grupos alquenila que têm 2 a 20 átomos de carbono. Exemplos do grupo alcóxi de R2 e R3 incluem grupos alcóxi que têm 1 a 20 átomos de carbono. Dentre eles, é particularmente preferido um grupo metóxi ou um grupo etóxi.
[00304] Na fórmula (V), os exemplos de ânion X- incluem íons de halogênio, tais como F- , Cl- , Br- e I- , CF3SO3- , BF4- , ClO4- e assim por diante.
[00305] Como corante fluorescente representado pela fórmula (V), é preferível um corante fluorescente representado pela fórmula a seguir Fórmula Química 2
[00306] Pode ser usado um reagente de coloração comercialmente disponível que contém apenas o segundo corante fluorescente. Exemplos dos mesmos incluem Fluorocell WDF (Sysmex Corporation), Stromatolyzer 4DS (Sysmex Corporation) e assim por diante.
[00307] Quando uma luz de excitação é usada, uma combinação preferida do primeiro corante fluorescente e do segundo corante fluorescente pode ser diferente. Por exemplo, quando a luz com comprimento de onda de 633 nm é usada como luz de excitação, é considerada uma combinação na qual a absorção máxima do primeiro corante fluorescente e do segundo corante fluorescente está dentro de uma faixa de comprimento de onda de 630 a 660 nm, o segundo corante fluorescente o corante emite fluorescência que tem um pico em uma faixa de comprimento de onda de 660 a 670 nm e o primeiro corante fluorescente emite fluorescência que tem um pico em uma faixa de comprimento de onda maior do que 670 nm. Como tal combinação, por exemplo, DRAQ5, DRAQ7 ou DRAQ9 (BioStatus Limited) pode ser usado como o primeiro corante fluorescente e o corante fluorescente representado pela fórmula (V) acima pode ser usado como o segundo corante fluorescente.
[00308] O primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluo-rescentesão, de preferência, usados como soluções. O solvente não está particularmente limitado, contanto que possa dissolver cada um dos corantes fluorescentes descritos acima. Exemplos destes incluem água, solventes orgânicos e misturas dos mesmos. O solvente orgânicoé, de preferência, um solvente que pode ser misturado com água e exemplos do mesmo incluem álcoois que têm 1 a 6 átomos de carbono, etileno glicol, dietileno glicol, polietileno glicol, DMSO e assim por diante.
[00309] Conforme descrito com referência às Figuras 2 e 5, o primeiro corante fluorescente e/ou o segundo corante fluorescente po- dem estar contidos em um recipiente de reagente 200 ou, alternativa-mente, conforme descrito com referência à Figura 6, o primeiro corante fluorescente e/ou o segundo corante fluorescente podem estar contidos separadamente em diferentes recipientes de reagentes 200A e 200B. 2. Reagente de Hemólise
[00310] O primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente descritos acima são usados em combinação com um reagente de hemólise, particularmente de preferência um reagente de hemólise que contém um tensoativo. O tensoativo pode realizar a he- mólise dos glóbulos vermelhos na amostra e danificar a membrana celular dos glóbulos brancos a tal ponto que o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente possam transmitir através da mesma. Exemplos do tensoativo incluem tensoativos não iônicos, tensoativos catiônicos e combinações dos mesmos. O reagente de hemólise contém, de preferência, um tensoativo não iônico.
[00311] Exemplos do tensoativo não iônico incluem aqueles repre-sentados pela fórmula (I) a seguir: em que R1 é um grupo alquila, um grupo alquenila ou um grupo alquini- la que tem 8 ou mais e 25 ou menos átomos de carbono; R2 é um átomo de oxigênio, -(COO)- ou um grupo representado pela fórmula (II) a seguir: e; n é 23 ou mais e 25 ou menos, ou 30.
[00312] Na fórmula (I), n é, de preferência, 23 ou 25 e, mais preferi velmente, n é 23. Quando n é 23 ou mais e 25 ou menos, a concentra- ção do tensoativo não iônico representado pela fórmula (I) no reagente de hemólise é 1700 ppm ou mais e, de preferência, 1750 ppm ou mais. Quando n é 23 ou mais e 25 ou menos, a concentração do tensoativo não iônico representado pela fórmula (I) na amostra de medição é 2300 ppm ou menos e, de preferência, 2200 ppm ou menos.
[00313] Quando n é 30, a concentração do tensoativo não iônico representado pela fórmula (I) no reagente de hemólise é de 1900 ppm ou mais, de preferência 2000 ppm ou mais e, mais preferivelmente, 2100 ppm ou mais. Quando n é 30, a concentração do tensoativo não iônico representado pela fórmula (I) na amostra de medição é de 2300 ppm ou menos e, de preferência, 2200 ppm.
[00314] Exemplos específicos do tensoativo não iônico representado pela fórmula (I) incluem éteres alquílicos de polioxietileno, esterol de polioxietileno, óleo de rícino de polioxietileno, sorbitol ésteres de ácidos graxos de polioxietileno, alquil aminas de polioxietileno, éteres alquílicos de polioxipropileno, combinações dos mesmos e assim por diante. Dentre eles, são preferidos os éteres alquílicos de polioxietile- no. O éter alquílico de polioxietileno é, de preferência, pelo menos um selecionado a partir de éter cetílico de polioxietileno (23), éter cetílico de polioxietileno (25), éter cetílico de polioxietileno (30) e um grupo dos mesmos. O éter cetílico de polioxietileno (23), o éter cetílico de polioxietileno (25) e uma combinação dos mesmos são mais preferidos e o éter cetílico de polioxietileno (23) é ainda mais preferido. O tensoa- tivo não iônico contido no reagente de hemólise pode ser de um tipo ou dois ou mais tipos. O reagente de hemólise pode ainda conter um tensoativo não iônico diferente do tensoativo não iônico representado pela fórmula (I).
[00315] O reagente de hemólise pode ainda incluir um tensoativo catiônico. Exemplos do tensoativo catiônico incluem tensoativos do tipo sal de amônio quaternário, tensoativos do tipo sal de pirídio e combinações dos mesmos. Como tensoativo do tipo sal de amônio quaternário, por exemplo, é preferível um tensoativo que tem 9 a 30 átomos de carbono no total representado pela fórmula (III) a seguir. O tensoativo catiônico contido no reagente de hemólise pode ser de um tipo ou dois ou mais tipos.
[00316] Na fórmula (III), R1é um grupo alquila ou grupo alquenila que têm 6 a 18 átomos de carbono; R2 e R3são iguais ou diferentes um do outro e R2 e R3são um grupo alquila ou grupo alquenila que tem 1 a 4 átomos de carbono; R4é um grupo alquila ou grupo alquenila que tem 1 a 4 átomos de carbono ou um grupo benzila e X-é um íon de halogênio.
[00317] Na fórmula (III), R1é, de preferência, um grupo alquila ou grupo alquenila que tem 6, 8, 10, 12 ou 14 átomos de carbono e R1é, particularmente de preferência, um grupo alquila de cadeia linear. Exemplos mais específicos de R1 incluem um grupo octila, um grupo decila e um grupo dodecila. R2 e R3são iguais ou diferentes um do outro e R2 e R3são, de preferência, um grupo metila, um grupo etila ou um grupo propila. R4é, de preferência, um grupo metila, um grupo etila ou um grupo propila.
[00318] Exemplos do tensoativo do tipo sal de pirídio incluem ten- soativos representados pela fórmula (IV).
[00319] Na fórmula (IV), R1é um grupo alquila ou grupo alquenila que tem 6 a 18 átomos de carbono; e X-é um íon de halogênio.
[00320] Na fórmula (IV), R1é, de preferência, um grupo alquila ou grupo alquenila que tem 6, 8, 10, 12 ou 14 átomos de carbono e R1é, particularmente de preferência, um grupo alquila de cadeia linear. Exemplos mais específicos de R1 incluem um grupo octila, um grupo decila e um grupo dodecila.
[00321] A concentração do tensoativo catiônico no reagente de he- mólise pode ser apropriadamente selecionada dependendo do tipo de tensoativo. A concentração do tensoativo catiônico é de 10 ppm ou mais. A concentração do tensoativo catiônico é, de preferência, 400 ppm ou mais, mais preferivelmente 500 ppm ou mais e, ainda mais preferivelmente, 600 ppm ou mais. A concentração de tensoativo ca- tiônico é de 10.000 ppm ou menos. A concentração do tensoativo ca- tiônico é, de preferência, 1000 ppm ou menos, mais preferivelmente 800 ppm ou menos e, ainda mais preferivelmente, 700 ppm ou menos.
[00322] O reagente de hemólise pode conter uma substância tampão para manter o pH constante. Exemplos destes incluem sais de ácidos inorgânicos, sais de ácidos orgânicos, tampões de Good, combinações dos mesmos e assim por diante. Exemplos do sal de ácido inorgânico incluem fosfatos, boratos, combinações dos mesmos e assim por diante. Exemplos do sal de ácido orgânico incluem citratos, malatos, combinações dos mesmos e assim por diante. Exemplos de tampão de Good incluem MES, Bis-Tris, ADA, PIPES, Bis-Tris- Propano, ACES, MOPS, MOPSO, BES, TES, HEPES, HEPPS, Trici- na, Tris, Bicina, TAPS, combinações dos mesmos e assim por diante.
[00323] O reagente de hemólise pode ainda conter um ácido orgâ-nicoaromático. No presente relatório descritivo, ácido orgânico aromático significa um ácido que tem pelo menos um anel aromático na molécula e um sal do mesmo. Exemplos do ácido orgânico aromático in- cluem ácidos carboxílicos aromáticos, ácidos sulfônicos aromáticos e assim por diante. Exemplos do ácido carboxílico aromático incluem ácido ftálico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido hipúrico, sais dos mesmos, combinações dos mesmos e assim por diante. Exemplos do ácido sulfônico aromático incluem ácido p-aminobenzenossulfônico, ácido benzenossulfônico, sais dos mesmos, combinações dos mesmos e assim por diante. O ácido orgânico aromático contido no reagente de hemólise pode ser de um tipo ou dois ou mais tipos. O ácido orgânico aromático pode exibir uma ação de tamponamento. Quando um ácido orgânico aromático que exibe uma ação de tamponamento é usado, a adição de um agente de tamponamento é opcional e o ácido orgânico aromático pode ser combinado com o agente de tampona- mento acima.
[00324] Quando o reagente de hemólise contém um ácido orgânico aromático, a concentração do ácido orgânico aromático não está parti-cularmente limitada e é, de preferência, 20 mM ou mais e, mais prefe-rivelmente, 25 mM ou mais do ponto de vista da capacidade de classi-ficação entre monócitos e linfócitos. A concentração do ácido orgânico aromático contido no reagente de hemólise é, de preferência, 50 mM ou menos e, mais preferivelmente, 45 mM ou menos.
[00325] O reagente de hemólise é, de preferência, um reagente líquido. O solvente não está particularmente limitado, contanto que possa dissolver cada componente, tal como o tensoativo. Exemplos do solvente incluem água, solventes orgânicos e misturas dos mesmos. O solvente orgânico é, de preferência, um solvente que pode ser misturado com água e exemplos dos mesmos incluem álcoois que têm 1 a 6 átomos de carbono, etileno glicol, dietileno glicol, polietileno glicol, sul- fóxido de dimetila (DMSO) e assim por diante.
[00326] O pH do reagente de hemólise não está particularmente limitado e o pH é, de preferência, 5,5 ou mais. O pH é, mais preferi- velmente, 5,7 ou mais e, ainda mais preferivelmente, 5,9 ou mais. O pH é, de preferência, 7,2 ou menos. O pH é, mais preferivelmente, 6,9 ou menos e, ainda mais preferivelmente, 6,6 ou menos. Para ajustar o pH, uma base conhecida (tal como hidróxido de sódio) ou ácido (tal como ácido clorídrico) pode ser usado.
[00327] No reagente de hemólise, a pressão osmótica não está par-ticularmente limitada e é, de preferência, 150 mOsm/kg ou menos, mais preferivelmente 130 mOsm/kg ou menos e, ainda mais preferivelmente, 110 mOsm/kg ou menos do ponto de vista da eficiência de hemólise de glóbulos vermelhos. Um regulador de pressão osmótica apropriado pode ser adicionado para regular a pressão osmótica. Exemplos do regulador de pressão osmótica incluem açúcares, ami- noácidos, solventes orgânicos, cloreto de sódio, combinações dos mesmos e assim por diante.
[00328] Como reagente de hemólise, pode ser usado um reagente de hemólise comercialmente disponível para medição de células sanguíneas. Exemplos do mesmos incluem Lysercell WDF (Sysmex Corporation), Lysercell WDFII (Sysmex Corporation) e assim por diante.
[00329] O reagente de hemólise está contido, por exemplo, em um recipiente de reagente R1 (consulte Figura 5), alimentado à câmara 420 através do método descrito acima e misturado com a amostra de sangue. 3. Método de Classificação de Glóbulos Brancos
[00330] A seguir, como uma sexta modalidade da presente invenção, será descrito um método de classificação de glóbulos brancos em subpopulações usando o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente descritos acima. Este método é executado, por exemplo, pelas etapas mostradas no fluxograma da Figura 52. Cada etapa será descrita a seguir. A Figura 52 é um fluxograma exemplifica- tivo de um método para classificar os glóbulos brancos em subpopula- ções e a Figura 53 é um fluxograma de uma modalidade preferida que implementa o método da Figura 52.
[00331] Nesta etapa, uma amostra de medição é preparada ao misturar uma amostra que contém glóbulos brancos, um reagente de he- mólise que contém um tensoativo, um primeiro corante fluorescente e um segundo corante fluorescente. Como reagente de hemólise, são adequadamente usados o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente, tais como aqueles descritos acima.
[00332] A amostra não está limitada a sangue total, contanto que seja uma amostra que contenha glóbulos brancos ou que possivelmente contenha glóbulos brancos. Células sanguíneas refere-se a células conhecidas por estarem contidas no sangue total, tais como glóbulos brancos, glóbulos vermelhos e plaquetas. A amostra que contém glóbulos brancos ou que possivelmente contém células sanguíneas é uma amostra de fluido corporal coletada de um mamífero, de preferência um ser humano. Exemplos da amostra incluem amostras coletadas através de sangue total, ascite, fluido articular, derrame pleural, fluido cerebrospinal, fluido de medula óssea, fluido de lavagem broncoalveo- lar, fluido de lavagem peritoneal, urina, aférese e assim por diante.
[00333] O primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluo-rescentesão misturados com a amostra e o reagente de hemólise de modo que as concentrações (concentrações finais) na amostra de me-dição estejam dentro de uma faixa predeterminada. O limite máximo da concentração final preferida do primeiro corante fluorescente na amostra de medição é de 1000 ppm ou menos, de preferência 100 ppm ou menos e, mais preferivelmente, 10 ppm ou menos. O limite mínimo da concentração final preferida do primeiro corante fluorescente na amostra de medição é 0,001 ppm ou mais, de preferência 0,01 ppm ou mais e, mais preferivelmente, 0,1 ppm ou mais. O limite máxi- mo da concentração final preferida do segundo corante fluorescente na amostra de medição é de 1000 ppm ou menos, de preferência 100 ppm ou menos e, mais preferivelmente, 10 ppm ou menos. O limite mínimo da concentração final preferida do segundo corante fluorescente na amostra de medição é 0,001 ppm ou mais, de preferência 0,01 ppm ou mais e, mais preferivelmente, 0,1 ppm ou mais.
[00334] A proporção de mistura do reagente de hemólise, do reagente de coloração e da amostra é, por exemplo, de preferência uma proporção em volume de 1000:1 ou mais:1 ou mais. A proporção de mistura é, mais preferivelmente, 1000:10 ou mais: 10 ou mais e, ainda mais preferivelmente, 1000:15 ou mais: 15 ou mais. A proporção de mistura do reagente de hemólise, do reagente de coloração e da amostra é, de preferência, por exemplo, uma proporção em volume de 1000:50 ou menos. A proporção de mistura é, mais preferivelmente, 1000:30 ou menos: 30 ou menos e, ainda mais preferivelmente, 1000:25 ou menos. A proporção de mistura do corante fluorescente e da amostra pode ser a mesma ou diferente.
[00335] Nesta etapa, as partículas na amostra de medição preparada são irradiadas com luz e informações ópticas, incluindo a primeira informação sobre fluorescência com base na fluorescência do primeiro corante fluorescente, a segunda informação sobre fluorescência com base na fluorescência do segundo corante fluorescente e a informação sobre luz dispersa, são detectadas. A informação óptica é, de preferência, detectada pela seção de detecção FCM 460 (consulte Figura 2). As "partículas na amostra de medição"refere-se a um objeto granular contido na amostra de medição que pode ser medido individualmente pela seção de detecção FCM 460. Especificamente, primeiro, a amostra de medição é introduzida na célula de fluxo 4113 da seção de detecção FCM 460 e, quando cada partícula na amostra de medição passa pela célula de fluxo, a partícula é irradiada com luz. Em seguida, a luz dispersa e a fluorescência emitidas pela partícula são medidas para detectar informações ópticas. As partículas na amostra de medição podem incluir não apenas células, tais como glóbulos brancos, mas também partículas não celulares, tais como resíduos de glóbulos vermelhos hemolisados (glóbulos vermelhos "ghost"), agregados de plaquetas e partículas lipídicas.
[00336] A informação óptica detectada é informação sobre luz dispersa e informação sobre fluorescência. Uma vez que são usados dois tipos de corantes fluorescentes neste método, é detectada a informação sobre fluorescência que corresponde à fluorescência emitida por cada corante fluorescente. Ou seja, são detectadas a primeira informação sobre fluorescência com base na fluorescência do primeiro corante fluorescente e a segunda informação sobre fluorescência com base na fluorescência do segundo corante fluorescente. Quando a luz é emitida a partir de uma fonte de luz, a informação sobre luz dispersa detectada pela emissão de luz é detectada como a informação sobre luz dispersa. Quando a luz do primeiro comprimento de onda e a luz do segundo comprimento de onda são, cada uma, emitidas a partir de duas fontes de luz, a primeira informação sobre luz dispersa detectada pela emissão de luz do primeiro comprimento de onda e a segunda informação sobre luz dispersa detectada pela emissão de luz do segundo comprimento de onda são detectadas como a informação sobre luz dispersa.
[00337] Exemplos de luz dispersa incluem luz dispersa frontalmente (por exemplo, luz dispersa que tem um ângulo de recepção de luz de 0 grau a cerca de 20 graus) e luz dispersa lateralmente (por exemplo, luz dispersa que tem um ângulo de recepção de luz de cerca de 20 graus a cerca de 90 graus). Exemplos da informação sobre luz dispersa e da informação sobre fluorescência incluem um valor de pico (altu ra de um pico de pulso), área de pulso, largura de pulso, transmitância, deslocamento de Stokes, proporção, mudança temporal da luz dispersa e da fluorescência, valores correlacionados aos mesmos e assim por diante. A informação sobre luz dispersa frontalmente não está par-ticularmente limitada, contanto que seja uma informação que reflita o tamanho da célula. A informação sobre luz dispersa lateralmente não está particularmente limitada, contanto que a informação sobre luz dispersa lateralmente seja informação que reflita informação interna, tal como complexidade da estrutura celular, características dos grânulos, estrutura nuclear e grau de lobulação. A informação sobre luz dispersaé, de preferência, um valor de pico de luz dispersa frontalmente ou um valor de pico de luz dispersa lateralmente e, mais preferivelmente, a altura do pico de luz dispersa lateralmente. A informação sobrefluorescência é, de preferência, a altura do pico de fluorescência.
[00338] A primeira informação sobre luz dispersa é, de preferência, um valor de pico de luz dispersa lateralmente detectado por irradiação com luz do primeiro comprimento de onda (daqui em diante, também denominada como "primeira intensidade de luz dispersa lateralmente"). A segunda informação sobre luz dispersa é, de preferência, um valor de pico de luz dispersa lateralmente detectado por irradiação com luz do segundo comprimento de onda (daqui em diante, também denominada como "segunda intensidade de luz dispersa"). A primeira informação sobre fluorescência é, de preferência, um valor de pico de fluorescência do primeiro corante fluorescente (daqui em diante, também denominada como "primeira intensidade de fluorescência"). A segunda informação sobre fluorescência é, de preferência, um valor de pico de fluorescência do segundo corante fluorescente (daqui em diante, também denominada como "segunda intensidade de fluorescência").
[00339] Para a detecção da informação óptica, por exemplo, a pri-meirainformação sobre fluorescência com base na fluorescência do primeiro corante fluorescente, a segunda informação sobre fluorescência com base na fluorescência do segundo corante fluorescente e a informação sobre luz dispersa podem ser usadas. Como tal, uma seção de detecção FCM, por exemplo, FCM que inclui um sistema óptico e um sistema de detecção mostrado nas Figuras 7 e 8, é usada. Etapa S2: Etapa de classificação da população de células que contém basófilos
[00340] Nesta etapa, uma população de células que contém basófi- los é classificada a partir das partículas na amostra de medição com base na informação óptica, incluindo a primeira informação sobre fluorescência. Considera-se que a população que afeta o fracionamento de basófilos pode ser removida antecipadamente através desta etapa. Conforme descrito acima, a população que afeta o fracionamento de basófilos pode ocorrer em uma amostra na qual o tempo já passou desde a coleta. O presente inventor descobriu que há uma diferença distinguível na primeira informação sobre fluorescência entre tal população e basófilos normais. Por exemplo, conforme mostrado na Figura 56C do Exemplo de Referência 1 descrito posteriormente, cada sub- população de glóbulos brancos normais geralmente tem quase a mesma intensidade de fluorescência em um diagrama de dispersão que tem a primeira intensidade de fluorescência (azul-violeta) e a segunda intensidade de luz dispersa lateralmente (vermelho) como dois eixos. Os pontos no diagrama de dispersão representam partículas individuais medidas com FCM. A luz dispersa lateralmente pode ser a primeira luz dispersa lateralmente (azul-violeta). Por outro lado, conforme mostrado nas Figuras 57A a 57C do Exemplo de Referência 2, no espécime em que o tempo decorreu desde a coleta, aparece uma população na qual a primeira intensidade de fluorescência é menor do que aquela da subpopulação de glóbulos brancos normais. Esta população também é observada em uma região onde os basófilos normais aparecem em um diagrama de dispersão que tem a segunda intensidade de fluorescência e a intensidade de luz dispersa lateralmente como dois eixos e, portanto, tal população evita o fracionamento de basófilos. Portanto, ao classificar uma população de células que contém basófilos com base na informação óptica, incluindo a primeira informação sobre fluorescência, é possível remover a população que afeta o fracionamento de basófilos das partículas medidas. Na sexta modalidade, a população de células que contém basófilos é, de preferência, uma população de glóbulos brancos que contém basófilos.
[00341] Quando os glóbulos brancos normais são corados com o reagente de hemólise e o primeiro corante fluorescente, conforme descrito acima, cada subpopulação dos glóbulos brancos tem aproxi-madamente a mesma primeira intensidade de fluorescência. Portanto, a população de células que contém basófilos pode ser classificada pela primeira informação sobre fluorescência. Especificamente, quando a informação óptica que inclui a primeira informação sobre fluorescência é a primeira intensidade de fluorescência, uma população de partículas que tem a primeira intensidade de fluorescência maior do que um valor limite predeterminado é classificada a partir das partículas na amostra de medição. Neste caso, considera-se que uma população de células que contém linfócitos, monócitos, neutrófilos, eosinófilos e ba- sófilos é classificada como uma população de células que contém ba- sófilos.
[00342] Alternativamente, conforme mostrado nas etapas S2-1 e S2-2 do fluxograma da Figura 53, um diagrama de dispersão com base na primeira informação sobre fluorescência e na informação sobre luz dispersa (também denominado como um primeiro diagrama de dispersão) pode ser criado e uma população de células que contém basó- filos pode ser classificada com base no diagrama de dispersão. A informação sobre luz dispersa pode ser a primeira informação sobre luz dispersa. Por exemplo, quando a informação óptica que inclui a primei-rainformação sobre fluorescência é a primeira intensidade de fluores-cência e a intensidade de luz dispersa lateralmente, é possível classificar uma população de partículas que apareceu em uma região prede-terminada onde a primeira intensidade de fluorescência é maior do que um valor limite predeterminado em um diagrama de dispersão que tem a primeira intensidade de fluorescência e a intensidade de luz dispersa lateralmente como dois eixos. Como a intensidade de luz dispersa la-teralmente, pode ser usada a primeira intensidade de luz dispersa late-ralmente ou a segunda intensidade de luz dispersa lateralmente. Por exemplo, conforme mostrado na Figura 56C, em um diagrama de dis-persão em que a primeira intensidade de fluorescência é tomada em um eixo vertical e a segunda intensidade de luz dispersa lateralmente é tomada em um eixo horizontal, cada subpopulação de glóbulos brancos é distribuída substancialmente em um linha. Ou seja, também é conhecida uma região onde cada subpopulação aparece no diagrama de dispersão. A região predeterminada na qual a primeira intensidade de fluorescência é maior do que o valor limite predeterminado pode ser definida antecipadamente como uma região na qual aparece uma subpopulação de glóbulos brancos que contém basófilos. Tal região pode ser, por exemplo, uma região na qual aparecem cinco sub- populações de linfócitos, monócitos, neutrófilos, eosinófilos e basófilos, uma região na qual aparecem quatro subpopulações de linfócitos, mo- nócitos, neutrófilos e basófilos ou uma região na qual aparecem três subpopulações de linfócitos, monócitos e basófilos. Considera-se que a população de células de glóbulos brancos que contém basófilos é classificada ao classificar a população de partículas que aparecem em tal região através de ativação (gating).
[00343] O valor limite predeterminado que corresponde à primeira intensidade de fluorescência não está particularmente limitado e pode ser apropriadamente determinado. Por exemplo, sangue conhecido por conter basófilos ou sangue após um lapso de tempo desde a coleta pode ser medido antecipadamente por FCM usando o reagente de hemólise e o primeiro corante fluorescente, a primeira intensidade de fluorescência para glóbulos brancos pode ser adquirida e o valor obtido pode ser usado como o valor limite predeterminado. Ao acumular dados em uma região onde cada subpopulação de glóbulos brancos aparece a partir do primeiro diagrama de dispersão criado com base nesta medição, o valor limite e a região onde aparece a população de células que contém basófilos podem ser definidos antecipadamente. Etapa S3: Etapa de classificação dos glóbulos brancos contidos na população de células em subpopulações
[00344] Nesta etapa, os glóbulos brancos contidos na população de células que contém basófilos são classificados em subpopulações com base na segunda informação sobre fluorescência e na informação sobre luz dispersa. A informação sobre luz dispersa pode ser a segunda informação sobre luz dispersa. Uma vez que a população que afeta o fracionamento de basófilos é removida na etapa de classificação da população de células, considera-se que os glóbulos brancos contidos na população de células classificadas podem ser classificados com precisão em cada subpopulação que contém basófilos. Nesta etapa, por exemplo, conforme mostrado em S3-1 e S3-2 do fluxograma da Figura 53, um diagrama de dispersão com base na segunda informação sobre fluorescência e na informação sobre luz dispersa (também denominado como um segundo diagrama de dispersão) pode ser criado e os glóbulos brancos contidos na população de células que contém basófilos podem ser classificados em subpopulações com base no diagrama de dispersão. A informação sobre luz dispersa pode ser a segunda informação sobre luz dispersa. Especificamente, é criado um diagrama de dispersão com a segunda intensidade de fluorescência e a intensidade de luz dispersa lateralmente como dois eixos. A intensidade de luz dispersa lateralmente pode ser uma segunda intensidade de luz dispersa lateralmente. Quando a população de células que sofreu triagem é uma população de glóbulos brancos que contém basófi- los, ou seja, uma população de células que contém linfócitos, monóci- tos, neutrófilos, eosinófilos e basófilos, cada subpopulação pode aparecer em uma região diferente e ser classificada em cinco no diagrama de dispersão, por exemplo, conforme mostrado na Figura 56A. Uma vez que o tamanho da célula, a quantidade de ácido nucleico, a estrutura interna e assim por diante são diferentes para cada subpopulação, a segunda intensidade de fluorescência e a intensidade da luz dispersa lateralmente detectada para cada subpopulação são diferentes e, como um resultado, as populações de células classificadas são classificados desta forma. Consequentemente, as populações de células classificadas podem ser classificadas em uma população de linfócitos, uma população de monócitos, uma população de neutrófilos, uma população de eosinófilos e uma população de basófilos.
[00345] Alternativamente, quando a população de células classificadasé uma população de células que contém linfócitos, monócitos, neutrófilos e basófilos, cada subpopulação pode aparecer em regiões diferentes e ser classificada em quatro no diagrama de dispersão que tem a segunda intensidade de fluorescência e a intensidade de luz dispersa lateralmente como dois eixos. Ou seja, as populações de células classificadas podem ser classificadas em uma população de lin- fócitos, uma população de monócitos, uma população de neutrófilos e uma população de basófilos.
[00346] Alternativamente, quando a população de células classificadasé uma população de células que contém linfócitos, monócitos e basófilos, cada subpopulação pode aparecer em regiões diferentes e ser classificada em três no diagrama de dispersão que tem a segunda intensidade de fluorescência e a intensidade de luz dispersa lateralmente como dois eixos, por exemplo , conforme mostrado na Figura 59B do Exemplo 1. Ou seja, as populações de células classificadas podem ser classificadas em uma população de linfócitos, uma população de monócitos e uma população de basófilos.
[00347] Nesta etapa, entre as subpopulações de glóbulos brancos classificadas conforme descrito acima, são contadas as células classi-ficadas como população de basófilos. Na etapa de triagem da população de células que contém basófilos, uma vez que a população que afeta o fracionamento de basófilos é removida, considera-se que as células classificadas como população de basófilos não contêm substancialmente outras células além de basófilos (por exemplo, neutrófilos degradados, linfócitos e assim por diante). Consequentemente, os ba- sófilos na amostra de medição podem ser contados com mais precisão pela etapa de contagem. Para a contagem, é preferível obter o número de células classificadas como população de basófilos ao analisar o segundo diagrama de dispersão com um software de análise apropriado.
[00348] O método para classificar os glóbulos brancos em subpopu- lações de uma sétima modalidade é realizado, por exemplo, pelas etapas mostradas no fluxograma da Figura 54. A preparação de uma amostra de medição (etapa S10) e a detecção de informações ópticas (etapa S11) podem ser realizadas da mesma maneira conforme na sexta modalidade. Na sétima modalidade, entre uma etapa de detecção de informação óptica (etapa S11) e uma etapa de classificação de uma população de células que contém basófilos (etapas S14 e S15), uma etapa de classificação de uma população de células que contém células nucleadas de partículas em uma amostra de medição é reali- zada com base na primeira informação sobre fluorescência (etapas S12 e S13). A primeira informação sobre fluorescência é, de preferência, a primeira intensidade de fluorescência. Especificamente, para as partículas na amostra de medição, é criado um histograma no qual o número de partículas é obtido em um eixo vertical e a primeira intensi-dade de fluorescência é obtida em um eixo horizontal (etapa S12). Uma vez que o primeiro corante fluorescente tem a propriedade de se ligar ao ácido nucleico das células conforme descrito acima, quando a partícula é uma célula nucleada, a primeira intensidade de fluorescênciaé maior do que aquela de uma partícula sem ácido nucleico. Ao usar isto, as partículas que têm a primeira intensidade de fluorescência igual ou maior do que um valor limite predeterminado ou dentro de uma faixa predeterminada no histograma são classificadas como células nucleadas (etapa S13). Por meio desta classificação, partículas sem núcleo, tais como glóbulos vermelhos "ghost", podem ser removidas das partículas na amostra de medição. O valor limite predeterminado e o limite mínimo da faixa predeterminada podem ser valores na medida em que partículas que têm uma primeira intensidade de fluorescência muito baixa, tais como glóbulos vermelhos "ghost", sejam excluídas. Na sétima modalidade, a população de células que contém basófilos pode ser separada da população de células que contém células nucleadas. A etapa de triagem de uma população de células que contém basófilos e as etapas subsequentes podem ser realizadas da mesma maneira conforme na sexta modalidade.
[00349] O método para classificar os glóbulos brancos em subpopu- lações de uma oitava modalidade é realizado, por exemplo, pelas etapas mostradas no fluxograma da Figura 55. A preparação de uma amostra de medição (etapa S20) e a detecção de informações ópticas (etapa S21) podem ser realizadas da mesma maneira conforme na sexta modalidade. A classificação da população de células que contém células nucleadas (etapas S22 e S23) pode ser realizada da mesma maneira conforme na sétima modalidade. Se é necessário ou não classificar a população de células que contém células nucleadas pode ser determinado arbitrariamente. Na oitava modalidade, entre uma etapa de detecção de informação óptica (etapa S21) e uma etapa de triagem de uma população de células que contém basófilos (etapas S27 e S28), uma etapa de classificação de uma população de células que contém partículas ou células nucleadas na amostra de medição em quatro subpopulações de uma população de linfócitos, uma população de monócitos, uma população de eosinófilos e uma população que contém neutrófilos e basófilos é realizada com base na segunda informação sobre fluorescência e na informação sobre luz dispersa (etapas S24 e S25). Esta classificação em si pode ser realizada da mesma maneira conforme na etapa de classificação de glóbulos brancos contidos na população de células em subpopulações na sexta modalidade. Especificamente, um segundo diagrama de dispersão é criado com base na segunda informação sobre fluorescência e a informação sobre luz dispersa (etapa S24) e os glóbulos brancos contidos na população de células que contém partículas ou células nucleadas na amostra de medição são classificados em subpopulações com base no diagrama de dispersão (etapa S25). Após o tempo decorrido desde a coleta de uma amostra, os glóbulos brancos na amostra apresentam fracionamento ruim e é particularmente difícil fracioná-los entre basófi- los e neutrófilos. Quando a amostra medida é uma amostra que tem um fracionamento ruim, na etapa de classificação, a população de células que contém partículas ou células nucleadas na amostra de medição é classificada em quatro subpopulações de uma população de lin- fócitos, uma população de monócitos, uma população de eosinófilos e uma população que contém neutrófilos e basófilos. Por exemplo, as partículas classificadas na população que contém neutrófilos e basófi- los são contadas. Quando a amostra medida é uma amostra que tem um bom fracionamento, na etapa de classificação, a população de células que contém partículas ou células nucleadas na amostra de medição pode ser classificada em cinco subpopulações de uma população de linfócitos, uma população de monócitos, uma população de eosinó- filos, uma população de neutrófilos e uma população de basófilos (etapa S26).
[00350] Na oitava modalidade, após a população de células que contém partículas ou células nucleadas na amostra de medição ser classificada em quatro subpopulações, a etapa de triagem de uma população de células que contém basófilos (etapas S27 e S28), uma etapa de classificação de glóbulos brancos contidos na a população de células em subpopulações (etapa S29) e uma etapa de contagem das células classificadas na população de basófilos (etapa S30) são realizadas conforme na sexta modalidade. Em seguida, a etapa de classificação das partículas na amostra de medição em cinco subpopulações de uma população de linfócitos, uma população de monócitos, uma população de eosinófilos, uma população de neutrófilos e uma população de basófilos (etapa S31) com base no resultado obtido pela etapa de classificação em quatro subpopulações posteriormente é realizado e o resultado obtido na etapa de contagem das células classificadas na população de basófilos. Por exemplo, o número de partículas classificadas na população de neutrófilos pode ser obtido ao subtrair o número de partículas obtidas pela etapa de contagem de células classificadas na população de basófilos (etapa S30) do número de partículas da população que contém neutrófilos e basófilos obtido pela etapa de classificação em quatro subpopulações (etapa S25). Como um resultado, na oitava modalidade, as partículas na amostra de medição podem ser classificadas em cinco subpopulações de uma população de linfócitos, uma população de monócitos, uma população de eosinó- filos, uma população de neutrófilos e uma população de basófilos. Quando as partículas na amostra de medição podem ser classificadas em cinco subpopulações de glóbulos brancos na etapa de classificação em quatro subpopulações, o resultado da classificação pode ser comparado com o resultado da classificação finalmente obtido na oitava modalidade.
[00351] A seguir, o método de classificação de glóbulos brancos de acordo com a presente invenção será descrito em detalhes por meio de exemplos, porém, a presente invenção não está limitada a estes exemplos.
[00352] Uma amostra que contém glóbulos brancos, um reagente de hemólise, um corante de coloração, um analisador e um método de medição usado nos exemplos a seguir serão descritos.
[00353] Foram usados 5 mL de sangue total coletados de um voluntário saudável em um tubo de coleta de sangue EDTA-2K. As amostras que foram armazenadas em temperatura ambiente (25 ± 2 °C) após a coleta de sangue e separadas do tubo de coleta de sangue após 4 horas, 24 horas, 42 horas e 72 horas foram usadas como amostras de amostras. (Amostras Antes e Depois da Separação de Basófilos)
[00354] 1 mL de uma amostra com alto nível de basófilos (> 2 % ou mais) foi preparado e 0,5 mL da amostra foram usados como amostra antes da separação de basófilos. Os glóbulos vermelhos foram removidos do restante usando HetaSep (SCT ST-07906) e os glóbulos brancos foram coletados. Em seguida, os basófilos foram recuperados usando o kit Basophil Isolation II, Human (Miltenyi Biotec 130-092-662) e os basófilos recuperados foram usados como amostra após a sepa-ração de basófilos.
[00355] Lysercell WDFII (Sysmex Corporation) foi usado.
[00356] Foi usado Acridine Yellow G (Kanto Chemical Co., Inc.).
[00357] Como o segundo corante fluorescente, foi usado o Composto corante A descrito na Patente Norte-Americana N.0 6.004.816. A Patente Norte-Americana N.o 6.004.816 é incorporada ao presente documento como referência. O composto corante A era um composto no qual R1 é um grupo metila, R2e R3 são um átomo de hidrogênio, R4é noctila, n é 1, Z é um átomo de enxofre e X- é CF3SO3- na fórmula (V) acima e a fórmula estrutural foi a seguinte.
[00358] Conforme descrito na Patente Norte-Americana N.o 6.004.816, o Composto Corante A pode ser obtido pelas seguintes etapas. Um equivalente de metanossulfato de 3-metil-2- metilbenzotiazólio e três equivalentes de N,N-difenilformamidina foram aquecidos em ácido acético, com agitação, durante 1,5 horas em um banho de óleo a 90 °C. A solução de reação foi vertida em hexano e uma matéria oleosa vermelha foi ainda suspensa e lavada com hexano para remover o ácido acético. O produto bruto foi recristalizado com acetato de etila-hexano (rendimento de 48 %). Ao produto recristaliza- do foi adicionado um equivalente de trifluorato de 1-octil lepidínio e pi- ridina e a mistura foi aquecida, com agitação, durante 3 horas em banho de óleo a 90 °C. A solução de reação foi concentrada e o produto bruto azul restante foi purificado com metanol-clorofórmio por meio de cromatografia rápida para obter o Composto Corante A como um pó azul escuro (rendimento: 62 %). Os resultados dos testes de proprie-dadesfísicas (TLC, 1H-RMN, MASS e assim por diante) do Composto corante A deste pó azul escuro são descritos na Patente Norte- Americana N.0 6.004.816. O espectro máximo de absorção do Composto corante A foi de 629 nm.
[00359] O composto corante A (27,5 mg) e o Acridine Yellow G (25 mg) foram dissolvidos em etileno glicol de grau especial (1 L) para preparar um reagente de coloração.
[00360] Uma máquina modificada do analisador automático de células sanguíneas Multi-Itens XN-1000 (Sysmex Corporation) foi preparada. O XN-1000 inclui uma fonte de luz laser semicondutora que emite luz vermelha (633 nm), um detector para luz vermelha frontalmente dispersa, um detector para luz vermelha dispersa lateralmente e um detector que recebe fluorescência (luz de 660 nm ou mais) excitada pela luz vermelha. O XN-1000 foi modificado pela adição de uma fonte de luz laser semicondutora que emite luz azul-violeta (405 nm), um detector de luz dispersa azul-violeta e um detector de fluorescência que detecta fluorescência (450 a 600 nm) excitada por luz azul. Para o analisador, os dados de medição detectados para informações sobre luz dispersa vermelha e azul-violeta e informações sobre fluorescência geradas a partir do primeiro corante fluorescente e do segundo corante fluorescente foram analisados e um diagrama de dispersão desejado foi exibido. A medição foi realizada com o analisador assim preparado.
[00361] A preparação de uma amostra de medição e a medição da amostra foram realizadas de acordo com um manual afixado ao XN- 1000 (Sysmex Corporation), exceto que o reagente de coloração que contém o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente preparado conforme descrito acima foi usado em lugar do Fluorocell WDF (Sysmex Corporation) que é um reagente de coloração para XN-1000. A análise dos dados foi realizada com o software de análise FCS (Flowjo). A amostra de medição preparada continha 1000 µL de Lysercell WDFII como reagente de hemólise, 17 µL de sangue total e 20 µL do reagente de coloração. A proporção de diluição do reagente de coloração neste ponto foi de 51,85 e as concentrações finais do primeiro corante fluorescente e do segundo corante fluorescente na amostra de medição foram de 0,53 ppm e 0,48 ppm, respectivamente.
[00362] A amostra antes da separação dos basófilos e a amostra após a separação dos basófilos descrita acima foram medidas. Para as informações ópticas obtidas, um diagrama de dispersão no qual o eixo horizontal representa a intensidade da luz dispersa lateralmente do segundo comprimento de onda (comprimento de onda vermelho) e o eixo vertical representa o primeiro comprimento de onda (fluorescência azul-violeta) (primeiro diagrama de dispersão) e um diagrama de dispersão no qual o eixo horizontal representa a intensidade da luz dispersa lateralmente do segundo comprimento de onda (comprimento de onda vermelho) e o eixo vertical representa o segundo comprimento de onda (fluorescência vermelha) (segundo diagrama de dispersão).
[00363] Os diagramas de dispersão obtidos são mostrados nas Figuras 56A a 56D. No segundo diagrama de dispersão da amostra antes da separação dos basófilos (Figura 56A), pode-se observar que cinco tipos de populações de glóbulos brancos estão distribuídos na direção biaxial e o fracionamento é bom. Por outro lado, no primeiro diagrama de dispersão da amostra antes da separação de basófilos (Figura 56C), descobriu-se que cinco populações de glóbulos brancos foram distribuídas separadamente na direção do eixo horizontal (dis-persão lateral), mas todas apareceram em uma região que tem subs-tancialmente a mesma intensidade de fluorescência na direção do eixo vertical (fluorescência azul-violeta). Também no resultado da medição da amostra após a separação de basófilos, os basófilos apareceram em uma região onde a intensidade de fluorescência era menor que aquela dos linfócitos no segundo diagrama de dispersão (Figura 56B) e os basófilos apareceram na mesma posição de intensidade de fluorescência que os linfócitos e monócitos no primeiro diagrama de dispersão (Figura 56D) e a situação de fracionamento na amostra de sangue total pôde ser confirmada.
[00364] Amostras de sangue total 4 horas após a coleta de sangue, 48 horas após a coleta de sangue e 72 horas após a coleta de sangue foram medidas e as informações ópticas foram detectadas. Posteriormente, uma população incluída na região de baixo valor do eixo vertical (fluorescência azul-violeta) que aumenta com o tempo no primeiro diagrama de dispersão foi classificada (fechada) e a população foi re-presentada no segundo diagrama de dispersão.
[00365] Os resultados dos primeiros diagramas de dispersão são mostrados nas Figuras 57A a 57D e os resultados dos segundos dia-gramas de dispersão são mostrados nas Figuras 58A a 58C. A partir das Figuras 58A a 58C, pode-se observar que o número de células incluídas na região de aparecimento de basófilos aumenta com o passar do tempo após a coleta de sangue. Então, descobriu-se que a causa deste aumento eram as células bloqueadas nos primeiros diagramas de dispersão (apareciam em regiões cercadas por quadrângulos nas Figuras 57A a 57C). Ou seja, no segundo diagrama de disper- são, os neutrófilos se deslocaram para o lado de baixo valor da luz dispersa com o passar do tempo após a coleta de sangue e a população considerada derivada de neutrófilos sobrepostos à região de apa-recimento de basófilos revelou-se uma população em que a fluorescência azul-violeta apareceu no lado de baixo valor no primeiro diagrama de dispersão.
[00366] Amostras de sangue total 4 horas após a coleta de sangue, 24 horas após a coleta de sangue, 48 horas após a coleta de sangue e 72 horas após a coleta de sangue foram medidas e as informações ópticas foram detectadas. Depois disso, primeiramente, um primeiro diagrama de dispersão foi criado e uma população incluída em uma região predefinida (consulte Figura 59A) onde a fluorescência azul- violeta era maior do que um valor predeterminado foi classificada. A população que aparece nesta região inclui linfócitos, monócitos e ba- sófilos, mas não inclui células derivadas de neutrófilos que se deslocam para a região de aparecimento de basófilos com o decorrer do tempo após a coleta de sangue. A Figura 59A mostra o primeiro diagrama de dispersão para a amostra 24 horas após a coleta de sangue neste ponto.
[00367] A partir daí, um segundo diagrama de dispersão foi criado para a população ordenada. A população incluída na região de aparecimento de basófilos definida antecipadamente no segundo diagrama de dispersão foi contada. A Figura 59B mostra o segundo diagrama de dispersão para a amostra 24 horas após a coleta de sangue neste momento.
[00368] A seguinte análise foi realizada usando a informação óptica obtida no Exemplo 1. Primeiro, as células cuja fluorescência azul- violeta obtida excedeu um valor limite predeterminado (células nuclea- das) foram classificadas. A Figura 60A mostra um histograma para a amostra 24 horas após a coleta de sangue neste ponto. Em seguida, foi realizada a mesma análise do Exemplo 1 e os basófilos foram contados. O primeiro diagrama de dispersão e o segundo diagrama de dispersão são mostrados nas Figuras 60B e 60C.
[00369] Por outro lado, entre as informações ópticas adquiridas, os basófilos foram contados com base no segundo diagrama de dispersão criado pela intensidade da luz vermelha dispersa lateralmente e pela intensidade da fluorescência vermelha (Exemplo Comparativo 1).
[00370] Para as amostras a cada tempo decorrido após a coleta de sangue, o valor de contagem de basófilos obtido no Exemplo 2 e o valor de contagem de basófilos obtido no Exemplo Comparativo 1 são mostrados na Figura 61. Conforme pode ser visto na Figura 61, adotando o método da presente invenção, o aumento no valor da contagem de basófilos foi suprimido mesmo na amostra em que o tempo transcorreu após a coleta de sangue comparado com o exemplo comparativo.
[00371] A Figura 62 mostra segundos diagramas de dispersão obtidos por meio dos métodos do Exemplo 2 e Exemplo Comparativo 1 para amostras 4 horas após a coleta de sangue e amostras 48 horas após a coleta de sangue. Conforme é evidente no diagrama de dispersão, pode ser observado que o aumento de basófilos é suprimido no método da presente invenção.
[00372] Os glóbulos brancos foram classificados em cinco subpopu- lações com base nas informações ópticas obtidas no Exemplo 1. Dentre as informações ópticas, um segundo diagrama de dispersão foi criado usando a intensidade da luz vermelha dispersa lateralmente e a fluorescência vermelha e as células incluídas em cada uma dentre a região de aparecimento de linfócitos, a região de aparecimento de mo- nócitos, a região de aparecimento de eosinófilos e a região de apare-cimento combinado de neutrófilos e basófilos previamente estabelecidas foram contadas. Ou seja, nesta fase, os glóbulos brancos foram classificados em quatro tipos de populações e contados.
[00373] Posteriormente, de forma similar ao Exemplo 1, a população que contém linfócitos, monócitos e basófilos no primeiro diagrama de dispersão com o eixo horizontal representando a luz azul-violeta dispersa lateralmente e o eixo vertical representando a fluorescência azul-violeta foi classificada e os basófilos no segundo diagrama de dispersão com o eixo horizontal representando a intensidade da luz vermelha dispersa lateralmente e o eixo vertical representando a fluorescência vermelha foram contados em relação à população classificada. A população de neutrófilos foi contada ao subtrair a contagem de basófilos obtida aqui da contagem da população combinada de neutrófilos e basófilos entre os quatro tipos obtidos anteriormente e cinco tipos de subpopulações de glóbulos brancos foram contados juntamente com os resultados acima.
[00374] A Tabela 2 mostra a contagem de cinco classificações de glóbulos brancos para cada tempo decorrido após a coleta de sangue assim obtida. Por outro lado, entre as informações ópticas adquiridas, um segundo diagrama de dispersão criado pela intensidade da luz vermelha dispersa lateralmente e a fluorescência vermelha foi criado e as células incluídas em cada uma das regiões de aparecimento de lin- fócitos, monócitos, eosinófilos, neutrófilos e basófilos definidas antecipadamente foram contadas (Exemplo Comparativo 2). Ou seja, os gló- bulos brancos foram classificados em cinco subpopulações de acordo com o segundo diagrama de dispersão criado primeiro. Os resultados obtidos também são mostrados na Tabela 2. Tabela 2
[00375] Conforme é evidente na Tabela 2, pode ser visto que, de acordo com a presente invenção, o aumento no número de basófilos em virtude do lapso de tempo após a coleta de sangue é suprimido. Pode-se observar que cinco classificações de glóbulos brancos também podem ser realizadas com precisão simultaneamente através de uma medição.
Claims (16)
1. Método para classificar os glóbulos brancos em subpopu- lações, caracterizado pelo fato de que compreende: preparar uma amostra de medição ao misturar uma amostra que contém glóbulos brancos, um reagente de hemólise que contém um tensoativo, um primeiro corante fluorescente e um segundo corante fluorescente; irradiar partículas na amostra de medição com luz e detectar informação óptica que inclui primeira informação sobre fluorescência com base na fluorescência do primeiro corante fluorescente, segundainformação sobre fluorescência com base na fluorescência do segundo corante fluorescente e informação sobre luz dispersa; classificar uma população de células que contém basófilos de partículas na amostra de medição com base na informação óptica que inclui a primeira informação sobre fluorescência; classificar os glóbulos brancos contidos na população de células em subpopulações com base na segunda informação sobre fluorescência e na informação sobre luz dispersa; e contar as células classificadas como população de basófilos na subpopulação; em que o segundo corante fluorescente é um corante fluorescente que tem uma absorção máxima em uma faixa de comprimento de onda diferente daquela do primeiro corante fluorescente.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a informação óptica que inclui a primeira informação sobre fluorescência é a intensidade de fluorescência do primeiro corante fluorescente e, na classificação de uma população de células, é classificada uma população de partículas que tem a intensidade de fluorescência do primeiro corante fluorescente maior do que um valor limite predeterminado.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a informação óptica que inclui a primeira informação sobre fluorescência é a intensidade de fluorescência e a intensidade de luz dispersa lateralmente do primeiro corante fluorescente e, na classificação de uma população de células, uma população de partículas que apareceu em uma região predeterminada onde a intensidade de fluorescência do primeiro corante fluorescente é maior do que um valor limite predeterminado é classificada em um diagrama de dispersão que tem a intensidade de fluorescência e a intensidade de luz dispersa lateralmente do primeiro corante fluorescente como dois eixos.
4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a população de células é uma população de glóbulos brancos que contém basófilos e, na classificação dos glóbulos brancos em subpopulações, a população de células é classificada em população de linfócitos, população de monócitos, população de neutrófilos, população de eosinófilos e população de ba- sófilos.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a população de células é uma população que contém basófilos, monócitos e linfócitos e, na classificação dos glóbulos brancos em subpopulações, a população de célulasé classificada em uma população de linfócitos, uma população de monócitos e uma população de basófilos.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que, na detecção de informação óptica,são emitidas luz de um primeiro comprimento de onda capaz de excitar o primeiro corante fluorescente e luz de um segundo comprimento de onda capaz de excitar o segundo corante fluorescente.
7. Método para classificação de glóbulos brancos, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o primeiro comprimento de onda é de 315 a 490 nm e o segundo comprimento de onda é de 610 a 750 nm.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que, na detecção de informação óptica,é emitida luz capaz de excitar tanto o primeiro corante fluorescente quanto o segundo corante fluorescente.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o primeiro corante fluorescente é um composto que tem um esqueleto de acridina.
10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o composto que tem um esqueleto de acridina é pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em proflavina, 9- aminoacridina, laranja de acridina, Acridine Yellow G, acriflavina, Basic Yellow 9, etacridina de ácido láctico, Euchrysine GG (Euchrysine GGNX), hemissulfato de proflavina, 3,6-bis(dimetilamino)acridina (Rhoduline Orange) e cloreto de 3,6-diamino-2,7,10-trimetil-acridínio.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o segundo corante fluorescenteé um composto representado pela fórmula (V) a seguir: em que R1 e R4são um átomo de hidrogênio, um grupo me- tila, um grupo etila ou um grupo alquila que tem 6 a 18 átomos de carbono e, quando um dentre R1 e R4é um grupo alquila que tem 6 a 18 átomos de carbono, o outro é um átomo de hidrogênio, um grupo meti- la ou um grupo etila; R2 e R3são iguais ou diferentes um do outro e R2 e R3são um grupo metila, um grupo etila, um grupo metóxi ou um grupoetóxi; Z é um átomo de enxofre, um átomo de oxigênio ou um átomo de carbono em um grupo metila; n é 0, 1, 2 ou 3; e X-é um ânion.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que ainda compreende classificar uma população de células que contém células nucleadas de partículas na amostra de medição com base na primeira informação sobre fluorescência entre a detecção de informação óptica e a classificação de uma população de células.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que ainda compreende, entre a detecção de informação óptica e a triagem de uma população de células, classificar as partículas na amostra de medição em quatro subpo- pulações de uma população de linfócitos, uma população de monóci- tos, uma população de eosinófilos e uma população que contém neu- trófilos e basófilos com base na segunda informação sobre fluorescência e na informação sobre luz dispersa.
14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que ainda compreende classificar partículas na amostra de medição em cinco subpopulações de uma população de linfóci- tos, uma população de monócitos, uma população de eosinófilos, uma população de neutrófilos e uma população de basófilos com base no resultado obtido pela classificação em quatro subpopulações e o resultado obtido pela contagem de células classificadas na população de basófilos.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o reagente de hemólise é um reagente para realizar hemólise de glóbulos vermelhos e danificar uma membrana celular de glóbulos brancos a tal ponto que o primeiro corante fluorescente e o segundo corante fluorescente possam trans- mitir através da mesma.
16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o reagente de hemólise contém, como tensoativo, um tensoativo não iônico representado pela fórmula (I) a seguir:em que R1é um grupo alquila, um grupo alquenila ou um grupo alquinila que tem 8 ou mais e 25 ou menos átomos de carbono; R2 representa um átomo de oxigênio, -(COO)- ou um grupo representado pela fórmula (II) a seguir: e; n é 23 ou mais e 25 ou menos, ou 30.
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