BE489942A - - Google Patents

Description

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  "PROCEDE DE PREPARATION DE MILIEUX DE   CULTURE   PERFECTIONNES" 
La présente invention se rapporte à un procédé de préparation d'un agent chimique nouveau et perfectionné provenant de la prolifération de divers champignons microsco- 

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 piques parasites et plus particulièrement à la production d'un agent chimique complexe nouveau sous une forme nouvelle cristalloïde ne nécessitant pas de conservation spéciale. La présente invention se rapporte également à la fourniture d'un milieu de culture nouveau et perfectionné en vue de la prolifération et du développement de champignons microsco- piques en vue d'obtenir un agent chimique nouveau. 



   Sans y être limitée, la présente invention est particulièrement applicable à la production d'agents chimi- ques complexes nouveaux provenant de la prolifération de types de champignons microscopiques pénicillium,   streptomyces   et aspergillus tels que penicillium glaucum, pénicillium nota- tum,   streptomyces     griseus,   streptomyces   f lavius   et   aspergil-   lus niger ou leurs variantes, lesdits champignons micros- copiques proliférant seule ou en mélange. La mise en pratique de la présente invention permet de produire des agents chimiques complexes nouveaux à partir de ces champignons. 



   On sait que les rouilles, charbons, mildew, moisis- sures, etc. sont essentiellement et entièrement de nature parasitique et empruntent donc la nourriture nécessaire à leur croissance à un "hôte" et (ou) à une substance nutritive.   On   a également démontré que les produits finals de cette crois- sance et de ce développement aux dépens d'un hôte et (ou) d'une substance nutritive ont une grande utilité dans les études et recherches biologiques. 



   Pour favoriser la production de ces produits et la prolifération de champignons microscopiques tels que rouilles, charbons, mildew, moisissures etc., on a utilisé certains "hôtes" et (ou) milieux de culture nutritifs et pour préparer ces milieux de culture destinés à faciliter   @@   

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 prolifération des rouilles, charbons, milden, moisissures etc, on a l'habitude d'utiliser, séparément ou en mélange, des matières connues comme les sucres, le dextrose, le lac- tose, le glucose, l'infusion de malt, des sels minéraux,etc. 



   Le demandeur a découvert, conformément à la présente invention, que l'on peut produire des agents chimiques et (ou) des complexes chimiques beaucoup plus efficaces à partir des champignons microscopiques parasites en incorporant dans les milieux de culture connus un faible pourcentage de chloro- phylle, en ajoutant à ces milieux de culture contenant de la chlorophylle les champignons microscopiques choisis et en laissant proliférer et se développer lesdits champignons microscopiques dans ces milieux de culture contenant de la chlorophylle en soumettant le mélange à la photo-synthèse par exposition à la lumière naturelle ou à une lumière émet- tant des radiations infra-rouges, ou à une autre source dé- terminée à l'avance de radiations lumineuses, etc. 



   La chlorophylle est la matière colorante verte existant dans les végétaux vivants et elle existe dans la plupart des cellules végétales en croissance. Dans les végé en croissance, elle est composée d'au moins deux pigments, la chlorophylle A de formule C55H72O5N4Mg et la chlorophylle B de formule C55H70O6N4Mg. On peut-actuellement se procurer ces deux composés isolés, physiquement et chimiquement purs, et chimiquement définis.

   On connait également plusieurs déri- vés isolés solubles dans l'eau de la chlorophylle tels que la sodico-magnésio-chlorophylline C34H31O6N4MgNa, et les sodi co-ferro- et   sodico-cuivro-chlorophyllines.-Il   est bien entendu que le terme de chlorophylle utilisé ici est pris dans son sens générique et englobe la chlorophylle A, la 

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 chlorophylle B ainsi que ses divers dérivés solubles dans l'eau tels que les chlorophyllines. 



   Il doit être également bien entendu que la chloro- phylle utilisée dans la présente invention est un composé défini préformé, isolé, chimiquement inaltéré et physiquement pur tel que celui existant dans les plantes vertes en crois- sance. En d'autres termes la chlorophylle que l'on doit uti- liser se distingue donc nettement, du type de chlorophylle chimiquement altéré et (ou) physiquement adultéré qui est constitué par les produits de dégénérescence et (ou) d'oxy- dation que l'on obtient après récolte et séchage des plantes vertes vivantes* La chlorophylle obtenue à partir des plantes récoltées et séchées, et qui contient une forte proportion de chlorophylle oxydée et (ou) dégénérée,

   est totalement diffé- rente de la chlorophylle utilisée dans le présent procédé car il existe invariablement des produits du type de la coumarine dans les végétaux dégénérés. Ces produits de dégradation ne sont pas actifs et ils sont inefficaces dans la production de la substance chimique du caractère envisagé dans la pré- sente invention. 



   Quand on ajoute de la chlorophylle active, de pré- férence sous une forme soluble   dansi'eau,   aux milieux de cul- ture aux seins desquels la souche désirée de moisissure ou autre doit êtrecultivés, le produit cristalloïde final obtenu, qui est l'agent chimique complexe, manifeste plus de proprié- tés que celui obtenu à partir d'une même souche de moisissure développée dans les mêmes milieux de culture, mais dépourvus de chlorophylle, et bienque la réaction exacte qui se produit ne soit pas quant à présent complètement connue,

   les essais de laboratoire ont nettement établi que l'activité des agents 

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 complexes chimiques obtenus par prolifération des dits micro- organismes dans des milieux de culture contenant de la chlorophylle est beaucoup plus grande que celle des agents chimiques obtenus par prolifération au sein de milieux de culture dépourvus de chlorophylle. 



   La culture des champignons dans le but de produire ces agents chimiques complexes perfectionnés se fait par un procédé très simple. On utilise un milieu de culture ordinaire quelconque contenant des sucres, du dextrose, du lactose, du glucose., de l'infusion de malt, des sels miné- raux, etc., ou un mélange de ces produits, et on ajoute à ce milieu de 1 à 3% de chlorophylle soluble dans   l'eau.   



   Pour citer un exemple entrant dans le cadre de l'invention, on fait un milieu de culture au moyen de 5 à 7% de solution aqueuse de sirop de malt   U.S.P.,   Dispensatory, 23ème édition) contenant 0,05 à 0,1% de chlorure de sodium et 1 à 45 de sodico-magnésio-chlorophylline. On peut remplacer le sirop de malt par un hydrate de carbone nutritif équivalent quelconque tel que le dextrose, le sucre, le lactose,   etc.,   et le chlorure de sodium par du sulfate de sodium. On peut également ajouter de la gélatine dans le milieu de culture. 



   On stérilise alors ce milieu de culture pendant 2 à 3 minutes. On doit faire remarquer que cette stérilisation est un facteur tout à fait critique en raison de ce que toute surchauffe détruirait l'activité et l'efficacité de la chlorophylle. On doit donc prendre grand soin, dans la préparation des milieux de culture, de ne jamais chauffer à l'ébullition le milieu contenant la chlorophylle plus de trois minutes.

   L'expression de "chlorophylle active" uti- lisée ici se rapporte donc à une chlorophylle dont l'activité 

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 et l'efficacité n'ont pas été détruites par la chaleur ou autre   moye n.   Après stérilisation du milieu de culture, on le laisse refroidir dans des fioles ou récipients munis d'un dispositif de bouchage stérile et on choisit les champignons microscopiques tels que pénicillium   glaucum,     streptomyces   griseus ou aspergillus niger, ou des mélanges ou des variantes de ces microorganismes. On introduit les champignons micros- copiques dansée milieu de culture et on maintient le mélange vers 24 C.

   La croissance et la prolifération se font en pré-   sence de   lumière et (ou) de radiations jusqu'à cessation de dégagement d'anhydride carbonique, ce qui prend 5 à 7 jours. 



  Les récipients étant munis d'un joint d'eau, lequel est lui- même bouché au moyen de coton stérile pour que la croissance des champignons microscopiques soit sûrement préservée de toute contamination, il n'est pas difficile de vérifier la cessation de dégagement d'anhydride carbonique dans la prati- que. 



   On centrifuge alors le mélange épuisé ou on le filtre sur charbon activé, puis on acidifie le filtrat par addition d'acide chlorhydrique   (U.S.P.   35-37   %)   de manière à ce que la teneur enacide soit de 2%. On agite modérément et on abandonne le liquide au repos pendant une heure. On effectue alors la neutralisation par addition d'ammoniaque aqueuse (28 - 29 %) et on fait cristalliser l'agent chimique final de toute manière convenable, par exemple dans des pla- teaux chauffés vers 65 5 - 79 5 C. 



   Comme on   l'a'   indiqué, on peut cultiver un quelconque des champignons microscopiques particuliers ci-dessus dans les milieux de culture contenant de la chlorophylle, isolé ou mélangé avec d'autres champignons. 

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   Pour préparer les corps cristalloïdes obtenus comme ci-dessus en vue des recherches physiologiques, on utilise des matières tampon. Pour   ce.,   on prépare   d'abord   ce qu'on peut appeler un corps   plasmoïde   artificiel au moyen d'une solution aqueuse à   1 %   de gélatine à laquelle on ajoute une solution d'ioduré de plomb colloïdal non-toxique ayant une concentration de 0,05   %.   On acidifie alors le mélange par addition d'acide chlorhydrique à 1   %,   ce qui libère les   amino-acides.   Pour protéger la solution protéi- nique colloïdale on ajoute alors du phénol à 5   %et   de la chlorophylle soluble dans l'eau à 1 %.

   Pour tamponner cette solution complexe on ajoute du sulfate   d'oxyquinoléine   à 0,1% puis finalement on ajoute l'agent complexe antibiotique cris- tallisé produit comme ci-dessus décrit, les proportions étant réglées de manière à ce que chaque centimètre cube de la solution complexe tamponnée contienne 3 mg. de la matière cristallisée nouvelle. AU lieu d'ajouter le sulfate d'oxy- quinoléine à la solution de gélatine comme ci-dessus, on peut l'ajouter au milieu de culture épuisé immédiatement après filtration et (ou) centrifugeage.

Claims (1)

1. RESUME Procédé de préparation d'une substance chimique cristalloïde complexe perfectionnée, ledit procédé étant caractérisé par les points suivants, séparément ou cn combinaisons : 1 ) on fait proliférer des champignons micros- copiques dans un milieu de culture contenant un hydrate de carbone nutritif et de la chlorophylle active, préformée, isolée, chimiquement inaltérée et physiquement non-adultérée; <Desc/Clms Page number 8> 2 ) ledit champignon microscopique est le penicil- lium glaucum; 3 ) ledit champignon microscopique est le strepto- myces grisous ; 4 ) ledit champignon microscopique est l'aspergillus piger.