Cours de Chromatographie Gaz

Faculté des Sciences et de la
Technologie – UBBA
Département des sciences de la

matière
Chromatographie en Phase Gazeuse
CPG
Enseignant : R. AYECHE
Octobre 2022
Plan de cours
1. Introduction générale sur la chromatographie
2. Aspect théorique de la chromatographie
3. Chromatographie gazeuse : principe et appareillage
4. Introduction de l’échantillon : systèmes d’injections
5. Colonnes
6. Détecteurs
7. Analyse quantitative
8. Prétraitement de l’échantillon
Introduction chromatographie
Historique
 1900 : Invention de la chromatographie (Michel TSWETT)
 1938 : Première chromatographie sur couches minces

(Ismailov et Schraiber)
 1952 : Naissance officielle de la chromatographie phase gaz

(Martin et Synge, Nobel 1952)
 1955 – 1960 : Age d’or de la chromatographie en phase

gazeuse
 Fin des années 60 : Naissance de la chromatographie en phase

liquide à haute performance
 De nos jours : Amélioration instrumentale (informatisation) et

innovation dans le domaine de la miniaturisation
(nanotechnologie)
Principe
 Séparation de mélange complexe
 Basée sur des équilibres particuliers entre les composés et deux

phases :
 Phase stationnaire
 Phase mobile
 Différentes interactions peuvent entrer en jeu :
 Adsorption
 Partage
 Paires d’ions
 Échange d’ions
 Exclusion stérique
Principe
 Affinité forte du produit pour la phase stationnaire :
 Le produit progresse lentement dans la phase

stationnaire
 Le temps de rétention du produit est long
 Affinité forte du produit pour la phase mobile :
 Le produit progresse rapidement dans la phase

stationnaire
 Le temps de rétention du produit est plus court
 Le temps de rétention du composé permet son identification

Principe
Colonne
Injection
Détecteur
Phase mobile
Domaines d’applications
 De nos jours, la chromatographie est la technique de séparation

la plus largement utilisée
 Techniques très répandues dans le monde industriel
 Très grand domaine d’applicabilité

Domaines d’applications
 Industrie chimique : production, contrôle…
 Industrie alimentaire : corps gras, arôme…
 Industrie cosmétique et parfums
 Industrie pharmaceutique
 Energie : raffinerie de pétrole, gaz naturel, biomasse…
 Contrôle pollution : eaux, sols, atmosphère
 Exploration spatiale
 Police scientifique
 Recherche scientifique
Les questions que vous aurez à vous poser ?
 Quel type d’échantillon ? Solide, liquide, gazeux
 Que veut on doser ? Composé majeur, mineur ou des traces
 Analyse partielle ou complète de l’échantillon ?
 Récupération de l’échantillon ?
 Précision de l’analyse ? Qualitatif ou quantitatif
 Durée de l’analyse ?
 Quel sera le coût de l’analyse ?
 Poids de l’analyse sur l’environnement ?

Plan de cours
5. Colonnes
6. Détecteurs
Aspect théorique
Le chromatogramme
Colonne
Injection
Détecteur
Phase mobile
Chromatogramme
Aspect théorique
Le chromatogramme
tR
tM tR’
tM : Temps mort
tR : Temps de rétention
t’R : Temps de rétention réduit
Aspect théorique
Grandeurs physiques : Temps
tR
tM tR’
tM (Temps mort) : temps écoulé pour un composé non retenu par la

colonne
tR (Temps de rétention) : temps écoulé entre l’instant de l’injection et

le max du pic du composé
t’R (Temps de rétention réduit) : temps de rétention affranchit des
phénomènes hors phase stationnaire
t’R = tR – tM
Aspect théorique
Le chromatogramme idéal
Caractéristiques de la courbe de Gauss

Aspect théorique
Le chromatogramme réel
Cas idéal Surcharge Composé trop peu

de la phase stationnaire retenu
 Irrégularité de concentration dans la zone de dépôt
 Vitesse de la phase mobile non constante dans la colonne

Aspect théorique
Coefficient de partage
 CS : concentration dans la phase stationnaire
 CM : concentration dans la phase mobile

Aspect théorique
Grandeurs physiques : Volume
VM (Volume mort) : Volume de la phase mobile
tM : tps mort
VM = t M . D D : Débit
Attention
VM différent du volume de la colonne car il faut prendre en compte la
porosité ε de la colonne
VCol = Volume de la colonne = π . (d/2)2
VM = Volume mort = π . (d/2)2 . ε
ε = 0,8 pour une bonne colonne

Aspect théorique
Grandeurs physiques : Volume
VM (Volume mort) : Volume de la phase mobile
tM : tps mort
VM = t M . D D : Débit
VS (Volume stationnaire) : Volume de la phase stationnaire
Vtot : Vol. total interne

VS = Vtot - VM
VR (Volume rétention) : Volume de la phase mobile qu’il faut faire passer
pour faire migrer le soluté
tR : tps rétention
VR = t R . D D : Débit
Aspect théorique
Grandeurs physiques : Facteur de rétention k’
 Indépendant du débit
 Indépendant de la longueur de la colonne
 Définit le comportement des colonnes
tR = tM(k’+ 1) k’ = t’R/tM
Aspect théorique
Règle générale : Facteur de rétention k’
 k’ = 0 → tR = tM ou VR = VM
☻ Composé non retenu par la phase stationnaire
 k’ faible
☻ Composé peu retenu par la phase stationnaire

☻ tR rapide
 k’ très grand
☻ Composé très retenu par la phase stationnaire

☻ tR très grand
 k’ trop grand
☻ Composé trop retenu par la phase stationnaire

☻ Phénomène de diffusion, le pic s’élargit
Aspect théorique
Règle générale : Facteur de rétention k’
 Ordre de grandeur de k’ : Compris entre 1 et 10
 Le meilleur compromis :
☻ Analyse courte
☻ Bonne séparation
2 < k’ < 6
1 heures
Aspect théorique
Grandeurs physiques : la théorie des plateaux
 La théorie des plateaux est sans doute la meilleure théorie
permettant d’expliquer les phénomènes de séparation
chromatographique.
 Modélisation des équilibres Soluté/Phase stationnaire/Phase

mobile sous la forme de plateaux.
 Limitations :
 Absence de considération des phénomènes de

diffusion
 Impossibilité d’introduire tout l’échantillon dans
un volume infiniment petit
 Absence de considération cinétique (vitesse
d’échanges entre les deux phases)
Aspect théorique
Grandeurs physiques : Efficacité
 Paramètre N : Nombre de plateaux théoriques
 Paramètre H : Hauteur des plateaux théoriques
H = L/N
 N : paramètre relatif, dépend du soluté et des conditions

opératoires
Aspect théorique
Grandeurs physiques : Efficacité théorique
δ
ω
Dispersion d’un soluté dans la colonne et traduction sur le chromatogramme
ou
Aspect théorique
Grandeurs physiques : Efficacité réelle
Pour comparer les performances de différentes colonnes, pour un

même composé, on utilise le nombre de plateaux théoriques
effectifs.
t’R : tps réduit

Aspect théorique
Grandeurs physiques : Sélectivité α
 La mesure de la sélectivité d’une séparation entre deux
composés est réalisée à l’aide du facteur de sélectivité α
 Le facteur de sélectivité α décrit la position, l’un par rapport à

l’autre, de deux pics adjacents
Aspect théorique
Grandeurs physiques : Sélectivité α
 Le facteur de sélectivité α peut être exprimé à l’aide des
paramètres de rétention :
• Avec les temps de rétention :
• Avec les volumes :
α = (VR2 – VM)/(VR1 – VM)

 VR2 = VM + K2VS
 VR1 = VM + K1VS
Or Ki = k’i . VM/VS
Aspect théorique
Grandeurs physiques : Résolution R ou Rs
 Le facteur de résolution R permet de traduire numériquement la
qualité de la séparation entre deux pics.
 La résolution
Aspect théorique
Exemple : Résolution R ou Rs
Pour une bonne séparation :
Rs > 1,5
Aspect théorique
Grandeurs physiques : Relation entre N et Rs
 Pour deux pics homologues :
Or
Aspect théorique
Grandeurs physiques : Relation entre Rs et α
Or
Approximation : k’ = moyenne de k’1 et k’2 si les pics sont similaires ou

presque
Aspect théorique
Question :
Que faire quand les pics sont mal résolus ?
 On augmente le facteur de rétention k’
 On augmente l’efficacité N
 On augmente la sélectivité α
Aspect théorique
Exemple appliqué à la CPG:
 Séparation de deux composés A et B sur une colonne de 2 m :
 Calculer la résolution de la colonne ?

o Données expérimentales :
 tRA = 400 sec ωA = 19,5 sec

 tRB = 420 sec ωB = 20,5 sec
 tM = 50 sec
R = 2.(420-400)/(19,5+20,5) = 1
Mauvaise séparation
Aspect théorique
 Calculer le nombre de plateaux théoriques de la colonne ?
= 7,4 = 1,06
Avec
et
=7
= 0,06
NB = 5727 plateaux
Aspect théorique
 Quelle longueur de colonne serait nécessaire pour avoir R = 1,5 ?
 Application numérique :
R2/R1 = 1,5/1 = 1,5 =
y = 2,25
L2 = 2,25 . 2 m = 4,5 m
Aspect théorique
Grandeurs physiques : la théorie des plateaux
 La théorie des plateaux est sans doute la meilleur théorie
permettant d’expliquer les phénomènes de séparation
chromatographique.
 Pics gaussiens
 Calcul du nombre de plateaux
 Limitations :
 Absence de considération des phénomènes de

diffusion
 Impossibilité d’introduire tout l’échantillon dans
un volume infiniment petit
 Absence de considération cinétique (vitesse
d’échanges entre les deux phase
 Causes d’élargissement des pics
Aspect théorique
Grandeurs physiques : la théorie cinétique
 La théorie cinétique considère le pic chromatographique comme

représentatif de la distribution statistique des temps de rétention
des molécules d’une substance donnée sur la colonne.
 La théorie cinétique considère les phénomènes de diffusion et de

transfert de masse
Aspect théorique
Phénomènes de diffusion :
Diffusion moléculaire longitudinale
Diffusion turbulente
Remplissage
Aspect théorique
Transfert de masse
a b
 t0, les molécules a et b d’une
même substance sont sur la même
ligne
 ti, a va rester dans le pore du grain

de la phase stationnaire et b dans la
phase mobile
 tf, b ira plus vite que la molécule a
2 heures
Aspect théorique
Application à la CPG
Equation de Van Deemter
H = A + B/ū + C.ū
ū = vitesse linéaire moyenne d’écoulement de la phase mobile dans la colonne
Aspect théorique
Les solutions pour minimiser des phénomènes de diffusion :
 Réduire le diamètre des particules dp
 Homogénéiser le débit de la phase mobile
 Diminuer la taille des grains et des pores

Aspect théorique
En résumé :
Plan de cours
5. Colonnes
6. Détecteurs
Chromatographie en Phase Gazeuse (CPG)
Principe
 Méthode de séparation de composés
gazeux ou susceptibles d’être
vaporisés dans décomposition
Phase stationnaire
Phase mobile
A  ÉCHANGE de molécule GAZEUSE
entre phase stationnaire et phase
mobile
B  Phase stationnaire liquide ou solide
 Phase mobile GAZEUSE

Phase mobile ou gaz vecteur
 Nature : Gaz inerte
 Hélium
 Diazote
 Argon
 Dihydrogène…
 Propriété : inerte vis-à-vis des solutés et des phases stationnaires
 Choix du gaz vecteur

 Détecteur utilisé
 Coût de fonctionnement…
Il n’y a pas d’interaction entre le gaz et la phase stationnaire
Il n’y a pas d’interaction entre le gaz et les solutés

Pureté du gaz vecteur
 Impératif : Le gaz doit être d’une très grande pureté
 Référence A.0 (ou NA0), A indique le nombre de 9 présent dans le

chiffre de pureté :
 6.0 (ou N60) a une pureté de 99,9999%

 3.5 (ou N35) a une pureté de 99,95%
En CPG, on utilise des gaz de pureté 5.0 (ou N50)

Phase mobile ou gaz vecteur

 La nature et la vitesse linéaire d’une phase mobile donnée,
contribuent à la qualité de la séparation
La température T
La température T est un paramètre majeur en GPG
 Le volume de rétention VR varie selon la loi :
Log(VR) = (a/T) + b
Si T augmente : le volume de rétention diminue et donc le temps de

rétention diminue
La température T
 Représentation de l’équation pour une série de composés
homologues
Log(VR) = (a/T) + b
 Plus la température est forte, plus la séparation est rapide
 A très forte température, il n’y a plus de séparation

La température T
 Représentation de l’équation pour une série de composés
différents
 A T1, on ne sépare pas les composés 1 et 3
 A T3, on ne sépare pas les composés 1 et 2
 A T2, on sépare des composés 1, 2 et 3

Relation entre gaz vecteur et température
Paramètre important : Choix du gaz vecteur

Appareillage
3 heures
Plan de cours
5. Colonnes
6. Détecteurs
Appareillage
Systèmes d’injection
Deux principaux types de colonne en CPG

Choix du système
Colonnes remplies
 Injecteur classique à septum
 Injection directe
 Injecteur automatique
 Vanne à gaz
 Injecteur à solides
Choix du système
Colonnes capillaires
 Injection directe
 Injection avec division (split injection)
 Injection sans division (splitless injection)
 Injection dans la colonne (on column)
 Injection à température programmée
 Injection à évaporation de solvant

Boucle d’injection
Entrée
gaz vecteur
Colonne
4 4
5 3
3
5
2 6
6 2
1 1
Entrée Poubelle
Échantillon
Schéma d’un système d’injection

Injection direct
 Système de première génération
 Utilisé pour des colonnes remplies et des colonnes capillaires
 Limitation du volume injecté
 Variation du diamètre de l’insert suivant le type de colonne
 Grand diamètre pour colonnes remplies

 Petit diamètre pour colonnes capillaires
 Limitation du diamètre interne des colonnes capillaires (0,53 mm)

Injecteur « direct »
Injection direct : Exemple
Cas des fortes concentrations :
 Pour une injection de 0,1 µL (minimum possible) d’un produit

dont la concentration est de l’ordre de 10%, alors il y aura
saturation d’une colonne capillaire
Mauvaise efficacité, mauvaise séparation

Cas des faibles concentrations :
 Volume d’échantillon limité par le volume de l’insert. Si l’on

travail sur des traces et que le détecteur n’est pas sensible, alors
le chromatogramme sera plat.
Pas de séparation
Injection split/splitless
 Système le plus répandu pour les séparation colonne capillaire
 Injection de volume d’échantillon compatible avec la quantité de

phase stationnaire dans la colonne
 Split : système pour les échantillons très concentrés
 Utilisation d’une vanne de Split pour diviser le

volume total injecté
 Réduction du volume injecté dans la colonne
 Splitless : système pour les échantillons très dilués
 Utilisation de la vanne de Split pour pré concentrer

 Pré concentration en tête de colonne
Injecteur Split/Splitless
Fonctionnement Split :
 Injection d’un volume total d’échantillon dans le liner à l’aide
d’une seringue
 L’injecteur étant chauffé, l’échantillon est instantanément vaporisé
 L’échantillon est ensuite divisé en deux partie par une vanne de

split
 La plus petite partie est injectée dans la colonne
 La plus grande est évacuée par ce que l’on appelle la fuite
Rapport de division R = débit de fuite/débit de la colonne

Exemple Split :
 Débit de l’injecteur : 52 ml/min
 Vanne de fuite : 50 ml/min
 On en déduit le débit de la colonne à 2 ml/min
R = débit de fuite/débit de la colonne
R = 50/2 = 25
Si on injecte 1 µL, alors on introduit 1/25 de µL dans la colonne

Fonctionnement Splitless :
 La vanne de split est fermée
 On introduit l’échantillon (max 3µL)
 On attend quelques dizaines de secondes
 Refocalisation dans les premiers cm de la colonne
 On ouvre la vanne de fuite pour purger la chambre d’injection
Application Splitless :
 Piège à froid
 Effet solvant
Injection On column
 Particulièrement utilisée pour l’analyse de composés présentant

une température d’ébullition élevée et à l’état de traces
 Pour les composés facilement dégradables
 Introduction directement dans la colonne sans vaporisation
 Vaporisation directe dans la colonne et progressive

Injecteur On column
Injection On column
Avantage :
 Pas de discrimination et de dégradation thermique
 Pas de décomposition des substances fragile
 Pas de septum
Limitation :
 Nécessite d’utiliser des solution diluées car on ne divise pas

l’échantillon
 Pollution de la colonne par des échantillons non volatils
 Nécessité de dégarnir de phase stationnaire le début de la colonne
 Pas encore automatisé

Injecteur à aiguille de verre

Injection à aiguille de verre
Avantage :
 Pré concentration de l’échantillon
 Quantité d’échantillon injectée aussi faible que l’on souhaite
 Pas de septum, pas de pic de solvant
 Les composés non volatils ne rentrent pas dans la colonne, il reste

dans la seringue
Limitation :
 Manipulation délicate
 Non automatique
Type de liner
Liner ou insert
 Chemisage de la chambre d’injection pour la rendre inerte
 Premier point de contact de l’échantillon avec le système analytique
 Permet de faire évoluer la qualité de l’injection
 Différents diamètres d’insert

 Possibilité de les modifier chimiquement
 Dérivation online des échantillons
 Grand nombre de liner proposé sur le marché
 Choix du liner idéal très compliqué (compromis)
 Possibilité d’activer ou de désactiver chimiquement le liner
 Augmentation du champs d’applications
 Entretient permanent du liner

Injecteur et entrée de colonne encrassés Injecteur et entrée de colonne nettoyés
BON
B
MAUVAIS
A
A B
Choix du liner
Mauvaise séparation Meilleure séparation

1. 2,4,5,6-
tétrachloro-m-
xylène
2. Endrin
3. 4,4’-DDT
4. Endrin aldehyde
5. Methoxychlor
6. Endrin ketone
7. decachlorobiphenyl
Insert non désactivé Insert désactivé

62 % de décomposition de l’endrine 1 % de décomposition de l’endrine
Le septum
4 heures
Le septum
 Le septum doit permettre l’injection et également assurer

l’étanchéité du système
 Matériaux de confection :
 Facilité de perçage
 Bonne étanchéité
 Résistance thermique élevée
 Amélioration des séparations :
 Utiliser des septums comportant une phase teflon

(inertie, temp. basses)
 Conditionner avant utilisation (étuve à 250°C)
Le septum
 Durée de vie très variable. Elle dépend :
 De la température de l’injecteur
 De la forme et du diamètre de l’aiguille de la seringue
 Du degré de serrage
 Problèmes dus au septum:
 Fuite de la chambre d’injection
 Largage polymérique en tête de colonne
 Pic de solvant
Appareillage
Le four
 Elément essentiel aux chromatographes modernes car doit

posséder une excellente stabilité thermique (jusqu’à 450°C)
 Homogénéité de la température assurée par un ventilateur
 Programmateur de température
 Doit chauffer et refroidir très rapidement
 Gradient de température pour pouvoir séparer en un minimum de

temps des mélanges de composés peu volatils et très volatils
Le four
Enceinte thermostaté
Ventilateur
Colonne
Plan de cours
5. Colonnes
6. Détecteurs
La colonne
Chromatographie d’adsorption
Gaz permanents, eau, gaz soufres, diols, glycols, amines légères
Echantillon
Mélanges complexes de solutés organiques de plus de 5 carbones
Chromatographie de partage
La colonne
 Les colonnes remplies
 Verre, métal
 Courte (1 à 15 m) et épaisse (1 à 4 mm)
 Les colonnes capillaires
 Silice fondue
 Longue (15 à 100 m) et très fine (100 à 250 µm)
La colonne

La colonne
Propriétés physiques
La colonne
Différents types de colonnes capillaires
 Colonne usuelle
dc = 0,25 à 0,32 mm
 Colonne macrobore gaz-solide

(macrocapillaire)
dc = 0,32 à 0,53 mm
 Colonne microbore
(microcapillaire)
hybride entre remplies et capillaires
La colonne
Colonnes capillaires
 Absence de remplissage
 Bonne répétabilité
 Possibilité de grandes longueurs
 Faible épaisseur de phase = grandes vitesses d’échange
 Analyse rapide
 Inconvénient : faibles volumes injectés
Vitesse du gaz homogène tout au long de la colonne

La colonne : aspect théorique
Les colonnes remplies Les colonnes capillaires
CG : terme de transfert de
masse en phase gaz
CL : terme de transfert de
masse en phase liquide
Equation de Van Deemter Equation de Golay
H = A + B/ū + C.ū H = B/ū + (CG + CL).ū

Choix de la colonne
 Nature de l’échantillon
 Nature de la phase stationnaire
 Diamètre de la colonne
 Longueur de la colonne
 Épaisseur du film de la phase stationnaire
Paramètre important : Choix de la colonne

Phase stationnaire
 Film polymérique qui recouvre ou qui est greffé sur la paroi interne de la
colonne capillaire
 Équilibres d’interactions entre solutés et phases différents suivant la

nature de la phase
Paramètres de choix de la phase stationnaire
 Nature
 Polarité
 Stabilité
 Température mini et maxi d’utilisation
Phase stationnaire : Polarité
Composé non polaire
Composé polaire
Exemple
5 heures
Échelles de polarité
Indices de rétention et constantes des phases
 Caractériser tout composé par une grandeur plus générale que le temps
de rétention
 Suivre l’évolution des performances des colonnes
 Classer entre elles les phases stationnaires

Indices de rétention : Historique
 1959 : Rohschneider
 Proposition d’une échelle de 0 à 100 entre le squalane (phase non
polaire) et le ββ’-oxydipropionitrile
 1959 : Wehrli et Kovats

 Mesure de la polarité d’une phase vis-à-vis de nombreuses fonctions
chimiques en fonction d’une référence (n-alcanes)
 Obtention de l’indice de Kovats ΔI
 Théorie d’avant garde, mais trop complexe
 1965 : Rohschneider
 Choisit 3 substances témoins : benzène, éthanol, méthyléthylcétone
 Mesure des indices de rétention sur la phase considérée et sur
squalane
 Détermination de trois constante x, y, z
Indices de rétention : Historique
 1970 : Mac Reynolds
 Reprend la théorie de Rohrschneider en changeant la nature des

composés test
 Constantes de Mc Reynolds
 1970 : classement des phases imaginé par Mc Reynolds
 Évaluation de forces intermoléculaires majoritaires par les

différences d’indices de rétention de 10 substances test
 Évaluation sur la phase que l’on veut classer
 Évaluation sur squalane
Toute les phases du commerces sont évaluées de cette manière

Constantes de Mc Reynolds
Exemple
X’ sur OV17 = ΔI du benzène sur OV17

= I du benzène sur OV17 – I du
benzène sur le squalane
= 772 – 653 = 119
Constant de Mc Reynolds faible signifie que la phase retient

sélectivement les fonctions chimiques du même type
Les marques
 OV : Ohio Valley
 DB : JandW
 HP : Hewlett Packard
 CP-Sil : Varian
Choix de la colonne

Choix du diamètre
 Gain en temps d’analyse
 Perte en efficacité (N) et en résolution (R)
 Gain en capacité d’échantillon

Choix du diamètre
Choix de la colonne
4 heures
Influence de la longueur
Plus la colonne est longue :

 Plus la résolution est améliorée
 Mais plus le temps d’analyse augmente
 Plus le cout de la colonne est important
Exemple
 Avec une colonne de 60 m, on gagne 40% en résolution par rapport

à une colonne de 30 m
 Avec une colonne de 60 m, on double le temps d’analyse par

rapport à une colonne de 30 m
La résolution augmente proportionnellement à la racine

carrée de la longueur de la colonne
Choix de la colonne

Influence de l’épaisseur du film
Les effets de l’épaisseur du film de phase et du diamètre

interne de la colonne sont interdépendants
 Utilisation du rapport β pour sélectionner les colonnes :
 Plus la valeur de β est faible, plus la capacité et la rétention du composé

sont élevées
 Application en fonction de β :
 Pour β < 100 - composés très volatils, masses faibles
 Pour β entre 100 et 400 - travaux courants, intervalles importants
 Pour β > 400 -masses moléculaires élevée

Influence de l’épaisseur du film
Choix de la colonne
Vu la grande diversité de phase stationnaire, il est très
important de faire le bon choix de colonne pour optimiser
sa séparation
Plan de cours
5. Colonnes
6. Détecteurs
Détecteurs
ROLE :
 Appareil de mesure physico-chimique qui ne réagit qu’au

passage des solutés voire d’espèces spécifiques du soluté
 Signal traité après amplification par un système informatique
d’acquisition
IDEAL :
 Sensible
 Rapport signal électrique/débit massique
 Rapport signal électrique/concentration
 Universel
 Robuste
 Domaine de linéarité large

Détecteurs
3 types de détecteur
 Les détecteurs universels
 Les détecteurs semi-universels
 Les détecteurs spécifiques
2 types de réponse
 Proportionnelle au débit massique
 Proportionnelle à la concentration du soluté dans la phase mobile

Détecteurs
Comment choisir un détecteur ?

Le catharomètre
Principe :
On mesure la différence de conductibilité entre le gaz vecteur

seul et le gaz vecteur chargé d’échantillon
6 heures
Le catharomètre
Avantages et inconvénients:
 Premier monté sur des GC commerciaux
 Le plus universel
 Simple d’utilisation
 Considéré comme peu sensible
 Amélioration de la sensibilité grâce à la miniaturisation

Détecteur à ionisation de flamme (FID)
Principe :
Mesure le courant ionique généré dans une flamme

hydrogène au passage de l’échantillon
FID
Réponse
 Non proportionnelle au nombre d’atomes de carbone : à masse
égale injectée, un C6 donne aprox. La même réponse qu’un C1
 Le chlorure de méthylène donne une réponse moins grande que

le méthane (le chlore refroidi localement la flamme)
Sensibilité
 Très élevée, s’exprime en coulomb/gramme
Limite de détection
 Peut atteindre 2 à 3 pg/sec
FID
 Décrit la première fois en 1958
 Le plus couramment utilisé
 Grande sensibilité
 Bonne linéarité
 Faible volume mort
 Presque universel
 Destructive
FID
FID alcalin (NDP)
Principe :
Comporte un petit cylindre en céramique dopé avec un sel

alcalin (rubidium ou césium).
NPD
 Grande sensibilité (de l’ordre de 0,1 pg)
 Bonne linéarité
 Faible volume mort
 Spécificité à l’azote (N) et au phosphore (P)

Photomètre de flamme (FPD ou SPD)
Principe :
Présence d’un tube photomultiplicateur qui converti les

photons émis en un signal électrique
FPD
 Présenté pour la première fois en 1966
 Très grande sélectivité vis-à-vis des composés organiques

soufrés ou phosphorés
 Pas universel
Détecteur à capture d’électron (ECD)
Principe :
 Ionisation des analytes par des

particules β émises par une source
radioactive 63Ni
 Lorsque les analytes arrivent, ils seront

ionisés par capture des électrons :
A + e- → A -
 Lors du passage des analytes, le

courant de base diminue
 Ce suivi de courant est traduit sous la

forme d’un chromatogramme
(ECD)
 Décrit par Lovelock en 1960
 Détecteur très sélectif couramment utilisé
 Détecte les composés électronégatifs
 Très sensible pour les composés halogènés
 Détection des composés nitrilés, cyanés, polyaromatiques
 Insensible aux composés de type alcool et carbures saturés
 Très utilisé pour la détection des pesticides organochlorés
 Détecteur peu commun dans un laboratoire car présence de

matière radioactive (norme et contrôle important)
Spectrométrie de masse
Détermination de données structurales sur les composés

Plan de cours
5. Colonnes
6. Détecteurs
7. Analyse qualitative et quantitative
Aspects qualitatifs
L’aspect qualitatif d’une chromatographie consiste à identifier

un composé
 Comparaison des temps de rétention avec ceux des standards
 Détermination des k’ et des α
 Indices de Kowats
 Méthode des surcharges
 Détecteurs sélectifs (Fluo, ECD, NPD,…)
Aspects qualitatifs
Si la comparaison avec les standards ne suffit pas :
 Certains détecteurs peuvent en plus fournir une information sur

la nature du produit
 Spectrométrie de masse
 RMN
Double assurance concernant la nature du composé détecté

Aspects quantitatifs
L’aspect quantitatif d’une chromatographie consiste à

identifier un composé et à le doser
 Pour un détecteur donné, on admet qu’il existe une relation
linéaire entre l’aire d’un pic chromatographique et la quantité de
composé responsable de ce pic
 La quantité de produit injecté dans la colonne se répartit sur

toute la surface du pic chromatographique
 Avant, on découpait le pic et on le pesait
 De nos jours, on intègre la surface du pic (intégrateur)

Intégration du pic :
Problème : on ne connaît pas la valeur du coefficient de

réponse K qui lie la surface à la quantité injectée
Comment faire pour doser un composé?
Utilisation du technique d’étalonnage
 Étalonnage externe
 Étalonnage interne
 Technique des ajouts dosés
 …
Étalonnage externe
Principe :
On injecte des solutions étalons à différentes concentrations

(encadrant la concentration de la solution à analyser)
Aire
Aire
mesurée
Composé
inconnu
Concentration Concentration
Composé
inconnu
Étalonnage externe
Problèmes
 Il peut y avoir des problèmes de répétabilité du volume

injecté
 la référence est indispensable et peut être indisponible

dans le commerce
 Effets de matrice
Étalonnage par ajouts dosés
Mélange de A et B
On veut doser A
A Le détecteur doit détecter A

B
A
Mais B interfère car le détecteur
B A détecte un peu B
B
B B Alors on aura un signal
A correspondant à la quantité de
B A et un peu de la quantité de B
A
B Du coup, [A] sera surestimée
Effet de matrice
Mélange de A et B On veut doser A

Dopé en A
L’échantillon est dopé en A
(concentration connue)
A A
A B interfère toujours
A A BA
A
A A Mais l’effet de B est réduit jusqu’à
A A
A négligeable
B
A A A B A Du coup, [A] n’est plus surestimée
B B
A A A
A
Suppression
Effet de matrice
Principe :
Ajouter à une concentration inconnue mais constante, de notre

composé des ajouts successifs de substance à analyser
Aire
ΔA
ΔA
ΔA
[C0]
[C]
Ajout 1 Ajout 2 Ajout 3

Étalonnage interne
Rappel :
Le problème majeur de l’étalonnage externe est basé sur la non

répétabilité de l’injection.
Aire
Concentration
Résultat :
Droite d’étalonnage non exploitable car non représentative
Solution : étalonnage interne

Étalonnage interne
Nomenclature :
Ei : étalon interne
Eech : échantillon inconnue analysé
ESt : échantillon standard
Principe :
 Utiliser un Ei à une concentration fixe
 Optimiser la séparation des deux composés Ei et Eech
 Réaliser une droite d’étalonnage en faisant varier la concentration

de l’ESt et en gardant concentration de l’Ei fixe
 Représenter la droite d’étalonnage :
Aire Eech/Aire Ei = f([Eech]/[Ei])
 Injecter le mélange contenant l’Ei et l’Eech

Étalonnage interne
Dans la pratique :
Solution mère ESt
V1 V2 V5
V3 V4
1 mg/ml ESt 2 mg/ml ESt 3 mg/ml ESt 4 mg/ml ESt 5 mg/ml ESt
1 mg/ml Ei 1 mg/ml Ei 1 mg/ml Ei 1 mg/ml Ei 1 mg/ml Ei
Solution mère Ei
Étalonnage interne
Résultat : Ei ESt
Concentration Gradient
constante Concentration
Étalonnage interne
Résultat :
Aire ESt/Aire Ei
Aire Eech/Aire Ei
[EEch]/[Ei] [ESt]/[Ei]
[Eech] = (AEech/AEi).[Ei]
Étalonnage interne
Propriété de l’Ei :
 Structure chimique très proche
 Temps de rétention très proche
 Concentration très proche
But de l’utilisation d’un Ei :
 Utiliser un rapport de concentration
 Corriger des erreurs de répétabilité de volume injecté
7 heures
Critère de qualité
En analyse chromatographique comme pour d’autres techniques de

mesure, le calcul statistique est incontournable
Un résultat d’analyse n’a de valeur que s’il est assorti

d’une estimation de l’erreur possible
Pour être acceptable, une mesure doit être répétée : une exploitation
statistique est alors possible
 Moyenne arithmétique x de n mesure :
 Écart type ou déviation standard :
 Coefficient de variation CV :
Bonne indication de la dispersion des résultats

 La répétabilité s’exprime par l’écart-type des résultats d’essais indépendants
entre eux obtenus sur le même échantillon avec la même méthode, dans un
intervalle réduit de temps
 La reproductibilité s’exprime par l’écart-type des résultats d’essais

indépendants entre eux obtenus sur le même échantillon avec la même
méthode, avec des équipements différents et des opérateurs différent
 La précision c’est la dispersion des résultats autour de la moyenne. Elle est

généralement exprimée par l’écart-type des mesures et correspond aux erreurs
aléatoires
 La justesse c’est l’écart entre la moyenne des mesures et de la valeur réelle.

Elle est généralement inaccessible et correspond aux erreurs systématiques
 La linéarité est la plage dans laquelle la réponse reste proportionnelle à la

quantité soumise à l’analyse. Elle est représentée par une droite de régression
de la forme : y = ax + b et la validité est exprimée par le coefficient de
corrélation
Plan de cours
5. Colonnes
6. Détecteurs
Préparation de l’échantillon
Préambule
 De nombreux échantillons ne sont pas injectables directement dans

l’état dans le chromatographe
 Les sciences analytiques demande souvent un prétraitement de

l’échantillon
 La préparation de l’échantillon peut être très complexe et représenter

l’essentiel du travail de l’analyste
 C’est une science à part entière

Techniques :
 Mise en solution
 Distillation
 Extraction
 Méthodes par adsorption
 Purge and trap

 SPE
 SPME
 Dérivation
Mise en solution :
 Choix du solvant :
 Solubilité
 Absence de réaction chimique avec l’échantillon
 Pureté suffisante
 Inertie du solvant
 Formation de péroxydes
 Propriétés corrosives marquées (chlorés)
 toxicité
Techniques :
 Distillation
 Extraction
 Purge and trap

 SPE
 SPME
 Dérivation
Distillation :
 Distillation simple
 Évaporateur rotatif
 Distillation fractionnée
 Entraînement à la vapeur d’eau
But:
 Séparer les volatils des non volatils
 Permettre de concentrer en éliminant les légers ou supprimer les

lourds
Techniques :
 Distillation
 Extraction
 Purge and trap

 SPE
 SPME
 Dérivation
Extraction :
 Extraction classique par solvant
 Extraction par fluide en phase super critique (matrices solides)
But:
 Extraire les composés sélectivement d’un mélange complexe
 Exemple : extraction de l’eugénol contenu dans le clou de gyrofle

Techniques :
 Distillation
 Extraction
 Purge and trap

 SPE
 SPME
 Dérivation
Méthode par adsorption :
 Adsorption des gaz
 Adsorption des liquides : extraction en phase solide SPE ou SPME
But:
 Concentration de constituants mineurs d’une matrice gazeuse
 Extraction sélective des composés d’un mélange complexe
 Injection directe d’un composé dans un GC

Adsorption des gaz
 On utilise un adsorbant spécifique placé dans un tube et l’on fait

passer le gaz à l’aide d’une pompe (Exemple : Liner)
 Les adsorbants les plus utilisés :
 Tenax (polymère organique, hydrophobe, excellente

stabilité thermique)
 Charbon actif : piégeage de polluants organiques variés
dans l’atmosphère
 Le noir de carbone graphité : grande surface spécifique,
piégeage gaz et composés très volatils
 Gel de silice et d’alumine : affinité pour les composés
volatils polaires
Remarque :
Il est courant d’utiliser des cartouches mixtes avec divers
adsorbants en série
Adsorption des liquides : SPE
 Extraction en phase solide SPE : utilisation de cartouches ou disques

remplis avec divers adsorbants
 Sert soit à concentrer, soit à simplifier la matrice
La procédure répond au triangle d’équilibre entre :

composé d’intérêt – matrice - adsorbant
Composé d’intérêt
matrice adsorbant
SPE : Principe
 Similaire à la chromatographie en phase liquide
 On bloque certaines molécules sur un adsorbant et on les

élue brutalement et sélectivement en les décrochant du
support par un solvant spécifique
SPE : procédure
Première étape : conditionnement et solvatation
 Lavage avec un solvant adapté

 La cartouche ne doit plus être séchée
Deuxième étape : équilibration
 Équilibration de la cartouche avec le solvant de l’échantillon
Troisième étape : dépôt de l’échantillon
Quatrième étape : élution
 Un solvant de polarité convenable est introduit dans la cartouche

 Permet selon le choix du solvant d’éluer les produits à isoler et retenir
les interférents ou l’inverse
SPE : procédure
SPE : buts
 Isolation d’un composé d’un mélange complexe
 Concentration de l’échantillon
 Purification de l’échantillon
 Changement de solvant
 Les 4 objectifs à la fois

SPE : matériel
 Cartouches en forme de seringues ou disques (capacité de 2,5

mg à 500 mg, volume d’élution de 125 µl à 25 ml)
 Corps en polypropylène ou en verre
 Fritté en polyéthylène
 Divers adsorvants
 Silice greffée
 Résines
 Florisil, alumine, carbone graphité…

SPE : avantages
 Technique rapide, sélective et peu consommatrice de solvant
 Extraction d’un ou plusieurs composés d’une matrice complexe
 Enrichissement de traces (préconcentration)
 Dessalage de solutions
 Dérivatisation en ligne
 Grande variété d’adsorbants

SPE : guide de choix
Matrice aqueuse : composés d’intérêt
 Apolaires : phase apolaire
 Ionisables basiques : résine échangeuse de cations
 Ionisables acides : résine échangeuse d’anion
 Non ionisables polaires : SPE non adaptée

SPE : guide de choix
Matrice organique apolaire : composés d’intérêt
 Polaires : phase polaire
 Moyennement polaire : phase polaire
 Apolaires : SPE non adaptée

Microextration en phase solide : SPME
 Utilisation d’une seringue spéciale comportant une

aiguille creuse dans laquelle coulisse une fibre en
silice fondue recouverte d’une fine couche de phase
stationnaire
 Adsorption d’un composé d’intérêt sur cette fibre
Extraction sélective
8 heures
 Fibre peut être utilisée soit en immersion soit en espace de

tête
 Fibre ensuite désorbée directement dans l’injecteur du GC
 Domaines d’applications innombrables
 Évite l’utilisation de solvants
 Fibre réutilisable
Méthode de l’espace de tête
 Analyse constituants volatils d’un

échantillon lorsqu’il n’est pas
souhaitable d’introduire l’ensemble de
l’échantillon dans la GC
Techniques :
 Distillation
 Extraction
 Purge and trap

 SPE
 SPME
 Dérivation
Dérivation :
But:
 Rendre les constituants d’un mélange moins polaires et plus volatils en

les dérivants chimiquement
Les réactions les plus courantes :
 Silylation
 Alkylation
 Acylation
Dérivation :
Silylation
 Sur fonctions alcool, phénol, amine. Substitution d’un groupe

triméthylsilyle (TMS) à un atome d’hydrogène mobile
Acylation
 On remplace un hydrogène mobile par un groupement acyle

(obtention d’un ester)
Alkylation
 Remplacement d’un hydrogène mobile par un radical alkyle, en

générale un méthyle

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Chromatographie en Phase Gazeuse

1. Introduction générale sur la chromatographie

2. Aspect théorique de la chromatographie

3. Chromatographie gazeuse : principe et appareillage

4. Introduction de l’échantillon : systèmes d’injections

 1938 : Première chromatographie sur couches minces

 1952 : Naissance officielle de la chromatographie phase gaz

 1955 – 1960 : Age d’or de la chromatographie en phase

 Fin des années 60 : Naissance de la chromatographie en phase

 De nos jours : Amélioration instrumentale (informatisation) et

 Séparation de mélange complexe

 Basée sur des équilibres particuliers entre les composés et deux

 Le produit progresse lentement dans la phase

 Le temps de rétention du produit est long

 Affinité forte du produit pour la phase mobile :

 Le produit progresse rapidement dans la phase

 Le temps de rétention du produit est plus court

 Le temps de rétention du composé permet son identification

 De nos jours, la chromatographie est la technique de séparation

 Techniques très répandues dans le monde industriel

 Très grand domaine d’applicabilité

 Industrie alimentaire : corps gras, arôme…

 Industrie cosmétique et parfums

 Energie : raffinerie de pétrole, gaz naturel, biomasse…

 Contrôle pollution : eaux, sols, atmosphère

 Que veut on doser ? Composé majeur, mineur ou des traces

 Analyse partielle ou complète de l’échantillon ?

 Précision de l’analyse ? Qualitatif ou quantitatif

 Quel sera le coût de l’analyse ?

 Poids de l’analyse sur l’environnement ?

1. Introduction générale sur la chromatographie

2. Aspect théorique de la chromatographie

3. Chromatographie gazeuse : principe et appareillage

4. Introduction de l’échantillon : systèmes d’injections

tM (Temps mort) : temps écoulé pour un composé non retenu par la

tR (Temps de rétention) : temps écoulé entre l’instant de l’injection et

Caractéristiques de la courbe de Gauss

Cas idéal Surcharge Composé trop peu

 Irrégularité de concentration dans la zone de dépôt

 Vitesse de la phase mobile non constante dans la colonne

 CS : concentration dans la phase stationnaire

 CM : concentration dans la phase mobile

VCol = Volume de la colonne = π . (d/2)2

VM = Volume mort = π . (d/2)2 . ε

ε = 0,8 pour une bonne colonne

VS (Volume stationnaire) : Volume de la phase stationnaire

Vtot : Vol. total interne

 Indépendant de la longueur de la colonne

 Définit le comportement des colonnes

☻ Composé non retenu par la phase stationnaire

☻ Composé peu retenu par la phase stationnaire

☻ Composé très retenu par la phase stationnaire

☻ Composé trop retenu par la phase stationnaire

 Ordre de grandeur de k’ : Compris entre 1 et 10

 Modélisation des équilibres Soluté/Phase stationnaire/Phase

 Absence de considération des phénomènes de