GENERALIDADES DE VIROLOGÍA
DEFINICIÓN:
«AGENTES INFECCIOSOS, PARÁSITOS INTRACELULARES
OBLIGADOS».
NO SON SERES VIVOS PORQUE:
a. NO TIENEN METABOLISMO PROPIO.
b. NO SE REPRODUCEN SINO QUE REPLICAN.
c. PUEDEN SER CRISTALIZADOS.
VIRUS DE LAS BACTERIAS: LOS BACTERIÓFAGOS. 1917
FREDERICK TWORT FELIX D’HERELLE
BACTERIÓFAGOS INFECTANDO UNA BACTERIA. M.E. TINCIÓN NEGATIVA
METODOLOGÍA DEL ESTUDIO DE LOS
VIRUS: ULTRAESTRUCTURA
ESTRUCTURA VIRAL. LOS VIRUS SE OBSERVAN POR
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN.
CORTE ULTRAFINO: SE CORTAN CON ULTRAMICRÓTOMO CORTES MUY DELGADOS DE
TEJIDOS EMBEBIDOS PREVIAMENTE EN RESINAS EPOXI. SE TIÑEN CON SALES PESADAS. SE
OBSERVA EN BLANCO Y NEGRO. EL M.E. NO PERMITE VER EN COLOR.
TINCIÓN NEGATIVA: LA SUSPENSIÓN DE VIRUS SE COLOCA SOBRE GRILLAS
(PORTAOBJETOS DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO) Y SE CONRASTAN CON SALES
DE METALES PESADOS. NO SE LOS CORTA SINO QUE SE VE POR CONTRASTE.
ESTRUCTURA VIRAL
ENVOLTURA CON
ESPÍCULAS
GLICOPROTEICAS
NUCLEOCÁPSIDE
(CÁPSIDE
RECUBRIENDO AL
ÁCIDO
NUCLEICO)
TEGUMENTO. ES EXCEPCIONAL. SÓLO
PRESENTE EN LOS VIRUS HERPES
TAMAÑO: DESDE 20 nm (PARVOVIRUS) HASTA 280 nm (POXVIRUS). MEDIA:
100 nm (RETROVIRUS). UN nm (NANOMETRO) ES LA MILÉSIMA PARTE DE
UN MICRÓMETRO (o Micrón).
ALGUNAS DEFINICIONES
a. TIENEN UN SOLO ÁCIDO NUCLEICO, ADN ó ARN.
b. PUEDEN PARASITAR ANIMALES, VEGETALES O BACTERIAS.
c.LOS MÍNIMOS COMPONENTES QUE DEBE TENER UN VIRUS PARA SER
VIABLE SON EL ÁCIDO NUCLEICO Y LA CÁPSIDE QUE LO RECUBRE.
d. CUANDO UN VIRUS ES COMPLETO E INFECTIVO SE LE
DENOMINA
«VIRIÓN».
e.EL PROCESO DE REPLICACIÓN ES MUY INEFICIENTE, PUDIENDO
GENERARSE PARTÍCULAS VACÍAS O QUE CONTIENEN ADN CELULAR Y NO
VIRAL. SON LAS «PARTÍCULAS DEFECTIVAS».
VIRUS ENVUELTOS Y VIRUS DESNUDOS
CORTE ULTRAFINO TINCIÓN NEGATIVA
Sanjuan, N et al. 1986 Fuller, O. et al, 2005
ARRIBA: VIRUS HERPES SIMPLEX 2. ABAJO: ADENOVIRUS.
LAS IMÁGENES DE ARRIBA TIENEN IGUAL AUMENTO; NO ASÍ LAS INFERIORES
SIMETRÍA
SIMETRÍA
A LA IZQUIERDA, BACTERIÓFAGO. ARRIBA: VIRUS POX. ABAJO:
VIRUS RABIA
SISTEMAS DE CULTIVO
SISTEMAS DONDE LOS VIRUS PUEDEN REPLICAR
• HUEVOS EMBRIONADOS
• ANIMALES DE LABORATORIO
• CULTIVOS CELULARES (ACTUALMENTE ES EL
ÚNICO SISTEMA PARA EL CULTIVO DE VIRUS CON
FINES DIAGNÓSTICOS)
HUEVOS EMBRIONADOS
OBSERVACIÓN DE LOS VASOS DE LA MEMBRANA CORIOALANTOIDEA CON EL OVOSCOPIO
LESIONES EN LA
MEMBRANA
CORIOALANTOIDEA
DISECADA.
INYECCIÓN EN LA MEMBRANA CORIOALANTOIDEA, EN EL SACO
VITELINO O EN EL EMBRIÓN. OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA DE LAS
LESIONES.
ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
FUNDAMENTALES EN EL ESTUDIO EXPERIMENTAL DE LA PATOGÉNESIS
VIRAL. NO SE LOS EMPLEA EN EL DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO. SE LOS
TRATA HUMANITARIAMENTE DE ACUERDO A PROTOCOLOS ESTRICTOS
CULTIVOS CELULARES
EFECTO CITOPÁTICO: ALTERACIÓN MORFOLÓGICA DE LAS CÉLULAS,
CONSECUTIVAS A UNA INFECCIÓN VIRAL Y OBSERVABLE CON EL
MICROSCOPIO ÓPTICO. PUEDE OBSERVARSE LISIS, REDONDEAMIENTO,
FORMACIÓN DE SINCICIOS O CUERPOS DE INCLUSIÓN, DEPENDIENDO DEL
VIRUS.
CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA Y
MOLECULAR
ANTE UN EVENTUAL VIRUS NUEVO:
• CULTIVARLO EN GRANDES CANTIDADES Y PURIFICARLO.
• ESTUDIAR SU ESTRUCTURA POR MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA.
• CARACTERIZAR SUS PROTEÍNAS ESTRUCTURALES POR
ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA.
• CARACTERIZAR SUS PROTEÍNAS TEMPRANAS.
• C ARACTERIZAR SU ÁCIDO NUCLEICO.
• ESTUDIAR SU PATOGENIA A NIVEL EXPERIMENTAL.
PURIFICACIÓN DE PARTÍCULAS VIRALES
1. OBTENCIÓN DE UNA GRAN CANTIDAD DE VIRUS EN CULTIVOS CELULARES
2. OBTENCIÓN DE VIRUS PUROS POR GRADIENTE DE SACAROSA Y
CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS
ESTRUCTURALES
SDS-PAGE DE VIRUS ENTEROS. A LA IZQUIERDA, MARCADORES DE PESO
MOLECULAR. A LA DERECHA, LAS PROTEÍNAS VIRALES.
CARACTERIZACIÓN DEL ÁCIDO NUCLEICO VIRAL
• 1. TRATAMIENTO CON DNAsa Y CON RNAsa.
• 2. TRATAMIENTO CON ENZIMAS DE RESTRICCIÓN.
• 3. CLONACIÓN Y SECUENCIACIÓN.
ESTUDIO DE LA PATOGÉNESIS
VIRAL
ESTUDIO DE LA PATOGÉNESIS VIRAL
• EMPLEO DE CULTIVOS CELULARES (ESTUDIO DE
RECEPTORES, MECANISMOS DE ENTRADA Y SALIDA
DEL VIRUS, EFECTO CITOPÁTICO, ETC).
• USO DE MODELOS ANIMALES EXPERIMENTALES (ESTUDIOS
DE PROGRESIÓN DE LA INFECCIÓN, RESPUESTA INMUNE,
PATOLOGÍA, EXPRESIÓN DE ANTÍGENOS E INTERACCIÓN
MOLECULAR CON LAS PROTEÍNAS DEL HUÉSPED).
CO-INMUNOPRECIPITACIÓN
• SE DESEA SABER CON QUÉ PROTEÍNAS CELULARES
INTERACTÚA UNA PROTEÍNA VIRAL DETERMINADA.
• A UN CULTIVO CELULAR INFECTADO CON EL VIRUS
SE LE
EXTRAEN LAS PROTEÍNAS.
• A ESE EXTRACTO ACUOSO SE LE AGREGA UN SUERO CONTRA
LA PROTEÍNA VIRAL.
• LUEGO LE AGREGA PROTEÍNA «A» DE ESTAFILOCOCOS
CONJUGADA CON BOLITAS MICROSCÓPICAS DE SEFAROSA.
• SE CENTRIFUGA. SE OBTIENE ASÍ LA PROTEÍNA VIRAL UNIDA
A LAS PROTEÍNAS DESCONOCIDAS.
• SE LAS SEPARA POR SDS-PAGE.
• LUEGO SE CARACTERIZA A LAS PROTEÍNAS DESCONOCIDAS.
REPLICACIÓN VIRAL
RECEPTORES CELULARES PARA
VIRUS
• NO ESTÁN DESTINADOS PARA COMBINARSE CON
VIRUS SINO CON OTRAS MOLÉCULAS DE
IMPORTANCIA EN LA BIOLOGÍA DE LA CÉLULA.
• LOS VIRUS SE ADAPTARON A LOS MISMOS,
TOMÁNDOLOS COMO PROPIOS A LO LARGO DE LA
EVOLUCIÓN BIOLÓGICA.
• DETERMINAN LA ESPECIDAD DE UN VIRUS POR
UNA ESPECIE ANIMAL DADA Y POR UN ÓRGANO
DADO.
• SI NO HAY RECEPTORES NO
HABRÁ INFECCIÓN VIRAL
PRODUCTIVA.
UNIÓN AL RECEPTOR CELULAR, INVASIÓN Y
AVANCE
HACIA EL NÚCLEO POR EL CITOESQUELETO
IZQUIERDA: VIRUS AFTOSA UNIDO A UNA INTEGRINA DE LA MEMBRANA PLASMÁTICA
CELULAR (Bell et al; 2017). DERECHA: AVANCE DE POLIOMAVIRUS HACIA EL NUCLEO CELULAR
POR MICROTÚBULOS (Sanjuan et al; 2003). A, B Y C: AVANCE DEL VIRUS (NARANJA) POR
MICROTÚBULOS (VERDES). ESTO NO OCURRE SI SE DESPOLIMERIZAN LOS MICROTÚBULOS (D,
E Y F)
TIPOS DE GENOMAS VIRALES
• ADN DE DOBLE CADENA
• ADN DE CADENA SIMPLE
• ARN DE CADENA SIMPLE
• ARN DE DOBLE CADENA
• ARN Y TRANSCRIPCIÓN
INVERSA
• ARN SEGMENTADO
REPLICACIÓN VIRAL
SALIDA DE LA
CÉLULA
IZQUIERDA: VIRUS DESNUDOS FORMAN CRISTALES INTRACELULARES Y
LLEVAN A LA CÉLULA A LA LISIS POR ESTALLIDO. DERECHA: VIRUS
ENVUELTOS BROTAN DE LA MEMBRANA PLASMÁTICA. LOS AUMENTOS EN
EL M.E. SON DISTINTOS.
POLARIZACIÓN DE LA SALIDA DE VIRUS
ENVUELTOS
INFLUENZA
VSV
LA POLARIDAD CELULAR DETERMINA LA DISEMINACIÓN POSTERIOR DE LOS
VIRUS ENVUELTOS: EL VIRUS INFLUENZA BROTA POR EL BORDE APICAL,
MIENTRAS QUE EL VSV LO HACE POR LA MEMBRANA BASOLATERAL. EL
PRIMERO NO PRODUCIRÁ VIREMIA MIENTRAS QUE EL SEGUNDO SÍ LO HARÁ.
(Sabatini et al; 1984)
PATOGÉNESIS
VÍAS DE ENTRADA
• TRANSCUTÁNEA (CONTACTO DIRECTO ó
ARBOVIRUS)
• RESPIRATORIA
• FECAL-ORAL (DIGESTIVA)
• TRANSPLACENTARIA
• CONNATAL
• TRANSFUSIONAL
TIPOS DE INFECCIONES VIRALES
• PRODUCTIVAS:
• EN GENERAL DE CURSO AGUDO (EN POCO TIEMPO). REPLICACIÓN VIRAL CON ALTOS
TÍTULOS Y RESPUESTA INMUNE EFECTIVA. EJEMPLOS: GRIPE, SARAMPIÓN, ROTAVIRUS.
• PERSISTENTES:
• a. CRÓNICAS: LOS VIRUS REPLICAN A TÍTULOS BAJOS Y LA RESPUESTA INMUNE EXISTE
PERO
ES INEFICIENTE PARA ERRADICARLOS DEL TODO. Ejemplos: Hepatitis B ó C; HIV.
• b. LATENTES: LUEGO DE LA INFECCIÓN LOS VIRUS REPLICAN PERO LUEGO SE ACANTONAN
EN EL INTERIOR DE LAS CÉLULAS COMO MECANISMO DE EVASIÓN DE LA RESPUESTA
INMUNE. ÉSTA ES EFICIENTE. PEWRIÓDICAMENTE SE REACTIVAN. EJEMPLO: VIRUS HERPES.
• c. LENTAS: RARAS. ALGUNOS VIRUS ESTABLECEN INFECCIONES DE MUY LARGA DATA LUEGO
DE LA PRIMOINFECCIÓN, CON POCA RESPUESTA INMUNE. EJEMPLO: PAN ENCEFALITIS
ESCLEROSANTE SUBAGUDA MUCHO TIEMPO DESPUÉS DE HABER TENIDO SARAMPIÓN.
ACTUALMENTE SE ACEPTA QUE LAS DENOMINADFAS «ENFECALOPATÍAS ESPONGIFORMES»
NO SON PRODUCIDAS POR «VIRUS LENTOS» SINO POR PRIONES.
• TRANSFORMANTES: LUEGO DE UN CICLO DE REPLICACIÓN LOS VIRUS SE INTEGRAN AL
GENOMA CELULAR. CON POCA RESPUESTA INMUNE. SON COFACTORES EN LA INDUCCIÓN
DE CÁNCERES.
CONCLUSIONES: FACTORES DETERMINANTES DE
UNA INFECCIÓN VIRAL
• EXISTENCIA DE RECEPTORES CELULARES PARA EL VIRUS EN EL
ORGANISMO.
• TAMAÑO DEL INÓCULO.
• ESTADO GENERAL DEL PACIENTE (NUTRICIÓN, PATOLOGÍAS PREVIAS,
EDAD, FACTORES SOCIOAMBIENTALES Y LABORALES)
• FUNCIONALIDAD DE LA RESPUESTA INMUNE (INMUNIDAD INNATA
E INMUNIDAD ADQUIRIDA)
• EL CURSO DE UNA INFECCIÓN
(VIRAL O DE CUALQUIER OTRO TIPO)
DEPENDERÁ DE UN
EQUILIBRIO ENTRE LA MAGNITUD Y VELOCIDAD
DE LA INFECCIÓN Y LA RAPIDEZ Y EFICIENCIA DE
UNA RESPUESTA INMUNE ADECUADA.
