Biotecnologa

UNASAM
Facultad de Ingeniera de
Industrias Alimentarias
Huaraz, Setiembre 2012
 Es la aplicacin de la ciencia y la
ingeniera en el uso directo o indirecto
de organismos vivos o partes de ellos,
en sus formas naturales o
modificadas para la produccin de
bienes y servicios o para la mejora de
procesos industriales.
Las tcnicas biotecnolgicas utilizadas se agrupar
en tres grandes reas:
Fementaciones: involucra el uso de
microorganismos para la obtencin de productos
mas estables y con mejores cualidades nutritivas
u organolepticas.
Cultivo de tejidos: Trabaja a un nivel superior a la
clula e incluye clulas, tejidos y rganos que se
desarrollan en condiciones controladas.
Tecnologa del ADN: Involucra la manipulacin de
genes a nivel del ADN, aislamiento de genes, su
recombinacin y expresin en nuevas formas, etc.
ESPECIALIZACIN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
La lista de usos y
aplicaciones de la
biotecnologa aumenta da
con da (medicina,
ganadera, agricultura, etc).
Su impacto en la sociedad
es tan grande, que incluso
se prev que sta ser la
revolucin tecnolgica de
mayor envergadura para la
humanidad en el sigo XXI.
 Biotecnologa

El desarrollo de la ciencia
bsica y el entendimiento
de los procesos que
gobiernan la biologa
y a los seres vivos es
fundamental.
 Biotecnologa

Con el desciframiento de la
estructura del ADN, los avances en
biologa y bioqumica y, por ende, en
la biotecnologa, han dado un salto
cualitativo sin precedentes.
 DEFINICIN

Microbiologa

Biologa Molecular
Ingeniera Gentica

ORGANISMOS
BIENES Biotecnologa SERVICIOS
PARTES

Bioqumica Bioingeniera

Medicina
HOMBRE
 Biotecnologa
La biotecnologa moderna utiliza
diversas tcnicas para acercarse a su
objeto de estudio:
Microbiologa
Ingeniera gentica
Biologa molecular
Bioqumica
Genmica
Bioinformtica
Protemica
 Se utiliza en:

Industria Alimenticia: Arroz dorado

Industria Farmacolgica: Antibiticos
Agroindustria: Nuevas variedades
Minera: Biolixiviacin bacteriana
Medicina: Marcadores moleculares
 Genmica:
En estos momentos es una
promesa con grandes
proyecciones cientficas y
comerciales.
 Sin un conocimiento y
desarrollo en ciencias bsicas
no es posible realizar
desarrollos en biotecnologa.
Invertir en educacin cientfica
es el pilar de la generacin de
nuevos desarrollos
biotecnolgicos.
HISTORIA

Robert Hooke
1664

Una de las pimeras

descripciones de una
clula eucariota.
L. Pasteur 1864 derroc la teora de la generacin espontnea y
produjo varias vacunas
R. Koch 1868 escribi los postulados de Koch para la clasificacin y
cultivo de bacterias.

Ferdinand Cohn 1872 escribi un tratado que dio origen a la

Microbiologa como ciencia.

1928 Griffith encontr que bacterias no patgenas podan ser

transformadas a patgenas usando restos celulares de otras bacterias

1940s Avery encontr que el factor transformante era el ADN, lo

cual dio inicio a la era de la Microbiologa Molecular.

1953 James Watson and Francis Crick dilucidaron la estructura del

ADN
1970s Fred Sanger hizo posible la secuenciacin y Kary Mullis la
amplificacin de DNA (PCR).

1980s Tecnologa del DNA recombinante y la Biotecnologa moderna y

sus productos (Insulina, Francisco Bolvar).

1980 Moseley realiz el primer diagnostico molecular identificando una

cepa patgena de E. coli. (E. coli 0157:H7)

En la actualidad ni todo el avance en la biotecnologa ni en la

microscopa, han hecho posible el poder crecer al 98% de los
microorganismos y las clulas en un medio de cultivo.

Sin embargo, estos avances s han hecho posible cambiar una caja Petri
y un medio de cultivo, por un tubo Eppendorf y una reaccin de PCR,
evitando la necesidad de cultivar al microorganismo en cuestin.
PROTENA FUNCIN
INSULINA GLUCOSA
 APLICACIONES

AGRICULTURA
a).-Produccin de plantas resistentes a plagas, enfermedades, sequas y sal
b).-Propagacin en masa de clones vegetales
c).-Desarrollo de insecticidas biolgicos
d).-Mejoramiento de caractersticas nutricionales

GANADERA
a).-Control de la fertilidad
b).-Produccin de ganado genticamente mejorado
c).-Diagnstico de enfermedades bacterianas
 APLICACIONES

MEDICINA
a).-Produccin de vacunas y hormonas en microorganismos recombinantes
b).-Diagnstico molecular de enfermedades
c).-Terapia gnica de enfermedades hereditarias

AMBIENTE
a).-Biorremediacin de agua y suelos contaminados con:
-petrleo
-solventes
-desechos orgnicos
-metales
LA BIOTECNOLOGA COMO UN MEDIO ADECUADO Y SEGURO
PARA ALIVIAR ENFERMEDADES Y MITIGAR EL HAMBRE

Tratamiento para la Diabetes mellitus

Tratamiento para el Cncer
Terapia Gnica

Maz transgnico resistente a plagas

Arroz con sobreproduccin de Vitamina A
Plantas resistentes a sequas
 LA HUMANIDAD SIN BIOTECNOLOGA

Periodo de vida reducido por la falta de:

vacunas
medicamentos
alimentos suficientes
contaminacin excesiva
diagnstico oportuno de enfermedades infecciosas
 REALIDADES Y MITOS

REALIDADES
-Produccin de Insulina, Hormona de Crecimiento, Interfern
-Biorremediacin de agua y suelos contaminados
-Produccin de plantas resistentes a enfermedades y a sequa
-Diagnstico oportuno de enfermedades infecciosas

MITOS
-Carne, frutas y verduras txicos
-Leche y agua contaminada
-Vacunas y hormonas inseguras
-? ? ? ?
 NORMATIVAS Y TICA
EN BIOTECNOLOGA

-Cada pas tiene sus normas de lo que se

puede y no se puede hacer.
-Colombia tiene su normativa con respecto al maz transgnico
-La utilizacin de clulas embrionarias para la clonacin de
humanos
-La ley para el uso y produccin de organismos transgnicos
-La ley para el aprovechamiento y proteccin de la biodiversidad

-La tica depende de cada quien: principios morales y religiosos

Ingeniera Gentica
y
Biotecnologa
Ingeniera gentica:
modificacin deliberada de la informacin gentica de un
organismo que resulta en un cambio heredable de su
genoma

Aplicaciones:
- medicina (diagnstico y caracterizacin de
enfermedades)
- agricultura (plantas transgnicas)
- industria farmacetica (produccin de protenas con fines
terapeticos)
- industria alimentaria (mejoramiento de cepas, aditivos
alimenticios (ej. vainillina))
- industria qumica (productos naturales, biopolmeros,
etanol)
Biotecnologa
La produccin industrial de bienes o servicios por
procesos que utilizan organismos, sistemas o procesos
biolgicos

Ingeniera Biotecnologa
+ Biotecnologa =
Gentica Molecular

Biotecnologa Molecular Microbiana

 Biotecnologa
La produccin de insulina Molecular
humana en E. coli (1980) y su Mtodo tradicional
aprobacin para uso clnico
(1982) revolucionaron la
biotecnologa

Esto fue posible por el

desarrollo de tcnicas que
permitieron

-transferir informacin gen-

tica de un organismo a otro
-expresar esa informacin en
el organismo husped
Tcnicas que permitieron transferir informacin gentica
de un organismo a otro
Cmo se logra introducir y perpetuar ADN forneo en otro
organismo? Necesidad de un vehculo que lleve el ADN y sea
capaz de autoreplicarse.
- desarrollo de vectores
Cmo se logra introducir ADN forneo en ese vector?

- el uso de enzimas de restriccin permite

generar molculas recombinantes

Cmo se introduce el vector portador del ADN de inters en la

clula husped?
- desarrollo de tcnicas de transformacin
Las enzimas de restriccin reconocen secuencias palindrmicas
especficas generando extremos complementarios que pueden ser
ligados por medio de una ligasa

EcoRI reconoce la secuencia GAATTC y corta el ADN

Dos molculas de ADN cortadas con la misma enzima de restriccin pueden ser
unidas por una ligasa generando una molcula de ADN recombinante
 Los vehculos o vectores de clonado deben ser capaces de portar
secuencias de ADN forneo y de mantenerlo en forma estable en
la clula husped.

Vectores de clonado:

- plsmidos (10 kb)

- bacterifagos (20 kb)
- csmidos (50 kb)
- YAC (200 - 800 kb)
(yeast artificial chromosome)

Qu precisa tener un vector para mantenerse estable en la clula husped?

Caractersticas generales de los plsmidos como vectores de clonado:

Sitios de restriccin nicos

Marcadores
genticos pBR322
(permiten seleccin 4361 bp
de transformantes)

Orgen de
replicacin
Tamao pequeo
(mayor eficiencia de transformacin)
Proceso de clonado:

-se corta el ADN de inters y

el vector con la misma
enzima de restriccin

-se ligan los fragmentos

generndose un vector Transformacin:
recombinante - CaCl2
- electroporacin

-se transforman clulas del

organismo husped

La presencia de marcadores
- se seleccionan las que portan genticos, ej resistencia a
el plsmido antibiticos, permite seleccionar las
clulas que portan el plsmido
 Seleccin de transformantes que portan el plsmido

La seleccin se realiza en medio slido

La seleccin puede basarse en alguna

caracterstica aportada por el plsmido:
resistencia a antibiticos

caractersticas nutricionales
(marcadores auxotrficos)
ejemplo: sntesis de aminocidos

resistencia a compuestos txicos

La seleccin permite crecer a las que portan un plsmido con el

marcador gentico adecuado. El medio puede hacerse diferencial para
distinguir un plsmido recombinante del plsmido original, o puede
hacerse una segunda seleccin.
Los marcadores genticos permiten la seleccin de transformantes:

En pBR322 la insercin de un
molcula de ADN resulta en la prdida
de la resistencia a Ampicilina (a) o
Tetraciclina (b)

a
b

Otros vectores slo presentan resistencia

a un antibitico que permite su seleccin
y otro mecanismo para ver presencia de
inserto
Bacterifagos: ejemplo fago lambda modificado
Caractersticas de los csmidos
como vectores de clonado:

a) derivados del fago , sin regiones

codificantes

b) permite el clonado de grandes

fragmentos de ADN

c) la presencia de sitios cos permite

su encapsulamiento in vitro

d) La infeccin (transduccin) es
ms eficiente que la
transformacin

e) Se mantiene como plsmido en

E. coli
 Cromosomas artificiales como vectores de clonado:

Los YACs (yeast artificial chromosomes) fueron muy usados para el

clonado de ADN con fines de secuenciacin

Caractersticas:

- muy estable (se replica

como un cromosoma)

- permite el clonado de
grandes molculas de
ADN

Tambin existen los BAC (bacterial artificial chromosome)

Cmo identificamos la secuencia de ADN que nos interesa
clonar?

- secuenciado en el caso de algunos organismos la

informacin de inters existe pues se ha secuenciado el total o
parcialmente el genoma de dicho organismo
- genotecas coleccin de vectores representativos de todo el
genoma del organismo en estudio

Cmo aislamos el gen o la regin especfica que nos interesa?

- amplificacin de genes por la reaccin en cadena de

la polimerasa PCR
Genoteca:

- se fragmenta randmicamente el
ADN del organismo en estudio y
se clonan los fragmentos

- representa todo el genoma de un

organismo

- las colonias obtenidas se

analizan en bsqueda del gen de
inters
 Existen varios mtodos para rastrear una genoteca

a) Por hibridacin con

sondas de ADN

- sonda:
oligonucletido
especfico para la
secuencia buscada
 Otros mtodos de rastreo se basan en la expresin de la protena
codificada por el gen de inters:

b) inmunodeteccin: utilizacin de un anticuerpo especfico para la

protena de inters asociado con un anticuerpo que de una
reaccin
colorimtrica

c) Deteccin de
una
actividad
enzimtica
caracterstica
Una vez que se identifica el gen o la
secuencia de inters se lo puede
amplificar y aislar por la reaccin en
cadena de la polimerasa PCR

Este mtodo permite obtener grandes

cantidades de ADN con la secuencia
deseada

Mediante este mtodo se pueden

introducir, en ambos extremos de la
secuencia amplificada, secuencias
especficas para enzimas de
restriccin que faciliten su clonado
Hemos visto

a) como clonar fragmentos de ADN e introducirlos en una

clula husped

b) como identificar y aislar el gen o la secuencia de inters

Cmo se logra la expresin de dicha informacin gentica en la clula

husped de forma que esta produzca la protena de inters?

Aplicaciones de la Expresin de Protenas

Con fines comerciales

- industriales
- terapetica
Mejoramiento gentico de cultivares: transgnicos
Terapia gnica
 Para que una protena sea expresada en un husped dado el gen
debe ir acompaado de las secuencias especficas que permitan
su transcripcin y traduccin
En procariotas:
Sitio de unin Seal de
Promotor terminacin
del ribosoma

En eucariotas es similar pero con los componentes que

permiten la transcripcin y traduccin eucariota
Estas caractersticas son aportadas en
un Vector de Expresin

Debe contener:
- un promotor
- un terminador
- un sitio de unin a
ribosoma (en procariotas)

- sitios de corte de enzimas

de restriccin en posicin
adecuada
- marcadores genticos
(seleccin de transformantes)
- orgen de replicacin
- tamao pequeo
La expresin de genes eucariotas
requiere el procesamiento de
intrones, proceso que no se da
procariotas (E. coli)

Se debe clonar una copia del gen de

la cual se hayan removido los
intrones

Para ello se utiliza la enzima

transcriptasa reversa

ARN ADNs ADNd

El clonado y la expresin de protenas heterlogas no est limitado a
procariotas como hospederos, tambin se han utilizado eucariotas (Ej.
S. cerevisiae, P. pastoris, A. niger)

La ingeniera gentica tambin se aplica a plantas y animales

Los principios bsicos son similares

La ingeniera gentica no queda restringida a la expresin de

protenas sino que tambin utiliza otras herramientas como:

- delecin de genes
- desregulacin de rutas metablicas
- generacin de diversidad
 Otras tcnicas utilizadas en Mutagnesis dirigida en casette:
ingeniera gentica: delecin, interrupcin o desregulacin
de genes
Mutagnesis sitio dirigida:
Tendencias actuales:

a) produccin heterloga de protenas

( industria farmacetica: protenas con aplicacin terapeticas,
vacunas)

b) ingeniera metablica
(industria alimenticia: produccin de vino, aditivos,
conservadores)
(industria qumica: produccin de etanol, biopolmeros)

c) evolucin dirigida de protenas

(industria qumica: desarrollo de lipasas o estearasas
termoestables, desarrollo de enzimas con tolerancia a solventes)
Algunas de las Aplicaciones en Medicina
Aplicaciones: produccin comercial de vacunas, frmacos y
agentes de diagnstico

Vacunas: Antgeno de superficie - Hepatitis B

Malaria
protena de la envuelta de HIV-1
Frmacos: Factor de crecimiento epidrmico
Insulina
Factor de crecimiento de plaquetas
Factor de coagulacin VIIIa

Agentes de
diagnstico: Antgeno HIV-1
Hepatitis C
Produccin de Indigo en E. coli recombinante que expresa una
dioxigenasa (naphtalene dioxygenase) de Pseudomonas sp.
Ingeniera Metablica:
Alteracin de rutas metablicas existentes para:

a) favorecer la produccin del b) introduccin de nuevas

compuesto de inters rutas metablicas
materia prima
Ej: Produccin de
vainillina a partir de
Diverge materia
prima a glucosa en E. coli
productos
secundarios

Delecin de
genes
Producto deseado
La tecnologa de evolucin dirigida de protenas se ha utilizado
con xito en el mejoramiento de enzimas
Ej. desarrollo de estearasas termoestables
 Plantas transgnicas

Se han desarrollado muchas con

distintos fines:
- resistencia a insectos
- resistencia a herbicidas
- resistencia a salinidad
- Resistencia a sequa
- mejor calidad alimenticia
Uso de Agrobacterium tumefaciens
- clonado en plsmido Ti
- la secuencia de inters pasa a la
clula vegetal a travs de un
proceso similar a la conjugacin
bacteriana. Pasa el T-ADN lineal
con capacidad de integracin (simil
transposn)
 El nivel de expresin depende del promotor y del nmero
de copia del vector de expresin

Nmero de copia del vector de expresin: depende del orgen de

replicacin que tenga puede ir desde una copia hasta cerca de 100
(1-4: bajo nmero de copia; 10-100: alto nmero de copia)
Promotores
Constitutivos: siempre estn transcribindose
Regulables: se mantienen apagados y son inducidos por algn
cambio en el medio (inductor, cambio de T)
Fuerza del promotor: determina el nivel de transcripcin

La mejor produccin de protena no est necesariamente asociada a un

promotor fuerte y un vector con alto nmero de copia. Si el sistema es
muy pesado para la clula, esta lo pierde y la poblacin que lo pierde
crece ms rpido disminuyendo el rendimiento
Posibles sistemas de expresin
Escherichia coli
Saccharomyces cerevisiae
Picchia pastoris
Baculovirus
Cultivos celulares (lneas celulares de mamferos)
Animales o plantas transgnicos
Criterios de seleccin de un sistema de expresin
Rendimiento
Facilidad de purificacin
Necesidad de modificaciones post-traduccionales
Preferencias de uso de codones
Costos
Diseo experimental
La ingeniera gentica tambin
se aplica a plantas y animales

Los principios bsicos son

similares

Ej: produccin de a-1AT en la

leche de cabra u oveja
La biotecnologa puede ser clasificada en cinco
amplias reas.
Biotecnologa en Salud Humana.( donde
se incluye la B. Alimentara)
Biotecnologa Animal.

Biotecnologa Industrial

Biotecnologa Vegetal

Biotecnologa Ambiental

ESPECIALIZACIN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Desarrollo en tecnologas para el diagonstico de
enfermedades infecciosas o de desordenes genticos.
LINEAS DE INVESTIGACIN:
Clonacin de clulas madre: James Thonson, Unv.
Wisconsin (1998).
Reprogramacin de cellas adultas sin necesidad de
clonar.
Esclarecimiento y manipulacin del mecanismo
gentico que dispara la formacin de rganos y
extremidades en el embrin.

ESPECIALIZACIN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Su aplicacin es dirigida a sistemas diagnsticos,
nuevas vacunas y drogas, fertilizacin de embriones in
vitro, uso de hormonas de crecimiento, etc.
reas en las cuales esta influyendo la biotecnologia para
produccin animal
El uso de tecnologas reproductivas
Nuevas vacunas y
Nuevas bacterias y cultivos celulares que producen
hormonas.

ESPECIALIZACIN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Biotecnologa Industrial es la disciplina que hace uso de

los conocimientos cientficos campos de biologa

molecular, microbiologa, bioqumica e ingeniera

bioqumica, para contribuir al desarrollo de la

agricultura, la medicina y las ciencias ambientales

(Hernndez M 2000 www. Uprm.edu.es)

ESPECIALIZACIN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
 BIOTECNOLOGIA VEGETAL
BENEFICIOS ENCONTRA
Alimentos con ms vitaminas, Aparicin de alergias
minerales y protenas, y menor insospechadas
contenido en grasas

Cultivos ms resistentes al ataque Desaparicin de avifauna que no se

de virus, hongos insectos sin la adapte a las nuevas condiciones
necesidad de emplear productos de plantas mejoradas.
qumicos, lo que supone un mayor
ahorro econmico y menor dao al
medio ambiente

Mayor tiempo de conservacin de

frutas y verduras
Cultivos tolerantes al sequa y
estrs

ESPECIALIZACIN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
La biotecnologa ambiental se refiere a la aplicacin de
los procesos biolgicos modernos para la proteccin y
restauracin de la calidad del ambiente.
El uso de microorganismos en procesos ambientales
se encuentra desde el siglo XIX. Hacia finales de 1950
y principios de 1960, cuando se descubri la estructura
y funcin de los cidos nucleicos
La biorremediacin (uso de sistemas biolgicos para la
reduccin de la polucin del aire o de los sistemas
acuticos y terrestres)

ESPECIALIZACIN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Directiva del Consejo 90/219/CEE, de 23 de Abril de 1990, relativa a la utilizacin
confinada de microorganismos modificados genticamente.

Directiva del Consejo 90/220/CEE, de 23 de Abril de 1990, sobre la liberacin

intencional en el medio ambiente de organismos modificados genticamente.

Directiva 98/81/CE del Consejo, de 26 de Octubre de 1997 por la que se modifica

la Directiva 90/219/CEE relativa a la utilizacin confinada de microorganismos
modificados genticamente.

Directiva 1999/10/CE de la Comisin de 8 de Marzo de 1999, por la que se

establecen excepciones a las disposiciones del artculo 7 de la Directiva
79/112/CEE del Consejo en lo relativo al etiquetado de los productos alimenticios.

ESPECIALIZACIN EN INGENIERIA
AMBIENTAL
Cdigo de Nuremberg (Tribunal Internacional de Nuremberg) Publicado
en 1946 como respuesta a las atrocidades cometidas por los mdicos
investigadores nazis.Declaracin de Helsinki de la Asociacin Mdica
Mundial.
Recomendaciones para orientar a los mdicos en la investigacin con
seres humanos. Adoptado en 1964 y varias veces revisado. Ultima
revisin, ao 2000.
Principios de tica Mdica. Detallados en el texto de la Resolucin
37/194 adoptada por la Asamblea General de la Naciones Unidas en
1982.
Fin de la primera parte del Curso

Gracias