Microbiología

General

Bacterias relevantes

Unidad VII: Bacterias relevantes - Microbiología General

Unidad II: Nomenclatura y el Manual de Bergey -

Microbiología Agrícola

Unidad 5: Identificación Microbiana- Microbiología

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General

Bergey´s Manuals
❖Catedrático en bacteriología la Universidad de
Pennsylvania

❖En 1923 junto a cuatro colaboradores más,

publicaron un manual sobre características de las
bacterias de interés médico conocidas hasta
entonces, que podía utilizarse para la
David H. Bergey identificación bacteriana.
 Microbiología
General

Este Bergey’s Manual of

Determinative Bacteriology, ha sido
utilizado en muchos laboratorios de
microbiología de todo el mundo y
ha ido actualizándose a lo largo de
los años hasta que apareció la
novena y última edición en 1994.
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General

En 1984, se publicó la primera edición

de un manual enfocado más a la
clasificación que a la identificación:
Bergey’s Manual of Systematic
Bacteriology.
Constaba de cuatro volúmenes que se
fueron publicando en los siguientes
cinco años.
La segunda edición, constaba de 5
volúmenes, el primero se publicó en
2001 y se terminó de publicar en 2012
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General

Desde abril de 2015 aparece

publicado online el Bergey´s Manual of
Systematics of Archea and Bacteria
(BMSAB)
Este manual reemplaza y amplía la
segunda edición del Bergey’s Manual
of Systematic Bacteriology
El BMSAB es un trabajo de referencia.
Como se han descrito alrededor de
100 géneros nuevos y más de 600
especies nuevas por año, fue
necesaria la creación de un manual
electrónico con actualizaciones
frecuentes.
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La clasificación propuesta por la primera edición del Bergey’s Manual of

Systematic Bacteriology está basada en la tinción de Gram.

Agrupa a todas las bacterias en un solo reino, el procaryotae, con cuatro

divisiones:

Gracilicutes -con pared celular, gramnegativas

Firmicutes -con pared celular, grampositivas

Tenericutes -sin pared celular

Mendosicutes -procariotas filogenéticamente anteriores a las divisiones

mencionadas, como las arqueobacterias y otras
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En esta primera edición
General

Las bacterias se distribuyen en 33 secciones

Secciones constituidas caracteres descriptivos

morfológicos y metabólicos.

Cada sección engloba rangos taxonómicos

distintos (divisiones o géneros).

Se mantiene constante es el estudio de

géneros y especies, categorías taxonómicas
fundamentales en su estructuración.
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Los que no encajaban en alguna de las familias o secciones se les
denominó «género de afiliación dudosa» o se incluyeron en el de «otros
géneros».

Las especies no bien descritas, definidas sin cepa tipo, neotipo o de

referencia, se catalogaron como especies incertae sedis .

Las propiedades empleadas para la diferenciación fueron: características

morfológicas microscópicas, morfología de las colonias y pigmentación,
condiciones de crecimiento y nutrición, fisiología y metabolismo,
características genéticas, plásmidos y bacteriófagos, estructura antigénica,
patogenicidad y ecología.

En general, en cada especie se incluye la cepa tipo.

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Desde el primer volumen (1984), hubo un progreso considerable en el
campo de la taxonomía bacteriana.

Se duplicaron las especies nombradas y más de 170 nuevos géneros fueron

descritos.

En 2001 apareció el Volumen I de la 2da. Edición del Bergey’s Manual of

Systematic Bacteriology .

Esta edición se publicó en 5 volúmenes y fue más filogenética que

fenotípica, por el análisis del RNAr, del DNA y de las proteínas. Contiene más
información ecológica que clínica
 Microbiología
General

Trata el dominio Archaea en su totalidad y de

algunas bacterias Gram (-) especiales, como
las Cianobacterias.

En este volumen no hay casi ninguna bacteria

de importancia clínica.

Proteobacterias. Gram (-), este filo está dividido en

cinco secciones (α, β, δ, γ, y ε proteobacterias).
Bacterias de importancia clínica: Neisseria,
Brucella, Legionella, Pseudomonas, Haemophilus,
Campylobacter y Enterobacterias. Otras son de
vida libre, e incluyen muchas de las bacterias
responsables de la fijación del nitrógeno.
Agrupa a bacterias Gram (+) con bajo contenido
en G+C.

Géneros como Staphylococcus, Streptococcus,

Enterococcus, Clostridium y Bacillus

En esta sección se agrupan a todas las

bacterias Gram (+) con alto contenido en
G+C.

Los géneros más conocidos de este

volumen son Mycobacterium y
Corynebacterium. Microbiología
General
 Microbiología
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Otras bacterias Gram (-), agrupadas en ocho

secciones diferentes.

No tienen ningún factor en común.

Los géneros más importantes desde el punto

de vista clínico son Chlamydia, Treponema,
Borrelia o Bacteroides
 Microbiología
General

El BMSAB es una herramienta esencial

para la investigación en microbiología.

Esta edición digital proporciona

descripciones actualizadas de la
taxonomía, sistemática, ecología, fisiología
y otras propiedades biológicas de todos
los taxones procariotas nombrados.
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General

La novena edición del Bergey’sManual of

Determinative Bacteriology, que tiene mucha
información derivada de los volúmenes del
Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology, NO
es una versión resumida.

Trata un aspecto de taxonomía bacteriana: la

identificación de las bacterias.

Esta diseñado para la identificación de las

bacterias, y no para la clasificación (ordenación en
taxones).
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General

El Bergey’s Manual of DeterminativeBacteriology

No contiene la abundancia de información descriptiva sobre géneros y

especies que proporciona el Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology

NO contiene información detallada de las especies, ni información

concerniente a la clasificación o nomenclatura de las bacterias, o métodos
para el enriquecimiento o aislamiento de diversas especies.

NO incluye esquemas de identificación para ciertos grupos de géneros o

especies porque alguno de ellos requiere métodos muy sofisticados para el
cultivo y/o identificación (ej. Rickettsias) o carecen de suficientes
caacterísticas diferenciales (ej. especies de Bacillus)
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A pesar de los cambios y avances en los criterios de clasificación, la

identificaciónsigue basándose en la distinción entre género y especie, que
apenas se han modificado.

Por este motivo el manual de bacteriología determinativa se puede seguir

utilizando
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¿Cómo usar el Bergey's Manual of

Determinative Bacteriology?
PASO 1:
LA NATURALEZA DE LOS ESQUEMAS DE IDENTIFICACIÓN
BACTERIANA

El lector debe leer el Capítulo II para familiarizarse con los principios

generales usados en identificación bacteriana.
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PASO 2:
¿EL MICROORGANISMO AISLADO ES EUCARIOTA O
PROCARIOTA?

El microorganismo a identificar debe ser una bacteria en vez de

un eucariota microscópico (moho, levadura, alga o protozoo). El
Capítulo III proporciona una tabla de características que
diferencian procariotas de eucariotas.
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PASO 3: General

¿A QUÉ CATEGORÍA DE BACTERIAS PERTENECE EL

MICROORGANISMO?
De forma práctica, las bacterias pueden dividirse en cuatro
grandes categorías:

I. Eubacterias Gram (-) que tienen pared celular

II. Eubacterias Gram (+) que tienen pared celular
III. Eubacterias carentes de pared celular
IV. Arqueobacterias

El Capítulo IV proporciona características que permiten la

diferenciación de estas cuatro categorías.
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PASO 4: General

¿A QUÉ GRUPO PERTENECE EL MICROORGANISMO AISLADO?

Tras la correcta asignación del microorganismo a su
CATEGORÍAS categoría bacteriana, el siguiente paso es determinar
Capítulo IV en que grupo se puede encuadrar el microorganismo.

El capítulo V proporciona un listado de los grupos que

GRUPOS
Capítulo V
existen en cada una de las cuatro categorías y una
breve descripción de los tipos de bacterias contenidos
en cada grupo.
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PASO 5:
¿A QUÉ GÉNERO PERTENECE EL
MICROORGANISMO AISLADO?
La mayoría de los grupos descritos en el Manual
proporcionan una o más tablas o claves indicando las
características que pueden ser usadas para diferenciar los
géneros dentro del grupo.

CATEGORÍAS GRUPOS CLAVES GÉNEROS

Capítulo IV Capítulo V
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PASO 6:
¿A QUE ESPECIE PERTENECE EL
MICROORGANISMO AISLADO?
La mayoría de las descripciones de los géneros están
acompañados por una o varias tablas que permiten la
diferenciación de las especies contenidas en los géneros.

CATEGORÍAS GRUPOS CLAVES GÉNEROS TABLAS ESPECIES

Capítulo IV Capítulo V
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Un esquema de identificación para un grupo de

microorganismos, es establecido solo después de que el grupo
haya sido clasificado inicialmente (es decir, siendo reconocido
como diferente de otros microorganismos); está basado en uno o
más caracteres o sobre un patrón de caracteres que todos los
miembros del grupo tienen y que otros grupos no tienen.
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La identificación se basa sobre caracteres fenotípicos que se

correlacionan bien con la información genética.

Los caracteres estudiados para la identificación, deberían ser también

pocos en cantidad, mientras que la clasificación puede involucrar un
gran número de características.

En algunos géneros y especies, la identificación puede basarse no en

unos pocos tests, sino en la aplicación de un batería completa de tests.
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Los miembros de la familia Enterobacteriaceae representan un ejemplo

típico de esto.

Para disminuir la necesidad de inocular un gran número de medios en

tubo, se han desarrollado una gran variedad de sistemas multitest
rápidos y adecuados para usar en la identificación de diversos taxones,
sobre todo aquellos de importancia médica
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BACTERIAS RELEVANTES
Grupo 4: subgrupo 4A: Pseudomonas
Grupo 5: Subgrupo 1: Escherichia, Salmonella CATEGORÍAS
Grupo 12: subgrupo 3-sección A: Nitrobacter; sección B: Capítulo IV
Nitrosomonas
Grupo 17: Staphylococcus, Leuconostoc, Lactococcus,
Streptococcus
Grupo 18: Bacillus, Clostridium GRUPOS
Grupo 19: Lactobacillus Capítulo V
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Grupo 4: subgrupo 4A: Pseudomonas

Pseudomonas y pseudomonadáceas
Características generales:

❖ Bacilos rectos o curvados pero nunca vibrioides, Gram (-)

❖ Tamaño 0,5-1,0 µm por 1,5-4,0 µm; no forman esporas;
❖ Flagelos polares únicos o múltiples; sin cubiertas, apéndices o
yemas
❖ Metabolismo respiratorio, nunca fermentativo, aunque pueden
producir pequeñas cantidades de ácido a partir de glucosa
aeróbicamente; usan compuestos orgánicos de bajo peso
molecular, algunos son quimiolitótrofos; algunos pueden usar
nitrato como aceptor de electrones anaeróbico; algunos
pueden usar arginina como fuente de energía.
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Pruebas mínimas para su identificación:

Bacilos rectos o ligeramente curvados; Gram (-), no esporas; móvil;

flagelos polares (tinción flagelar); OF- óxido-fermentativo en
medio con glucosa: producción de ácido en tubo abierto; no
produce gas a partir de glucosa, casi siempre oxidasa (+); siempre
catalasa (+); ausencia de pigmentos fotosintéticos; indol (-); RM
rojo de metilo (-); VP Voges-Proskauer (-)
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Grupo 5: Subgrupo 1: Escherichia, Salmonella

Bacterias entéricas

Características generales:
Bacilos rectos Gram (-); móviles por flagelos perítricos, o
inmóviles; no esporulantes; anaerobios facultativos,
producen ácido a partir de glucosa; no requieren sodio
para el crecimiento; catalasa (+); oxidasa (-); normalmente
reduce nitrato a nitrito (no a N2); por RNAr 16s
pertenecen a γ proteobacteria.
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Pruebas clave para diferenciar enterobacterias de otras

semejantes morfológicamente:

Prueba de la oxidasa, las enterobacterias son siempre (-), separa

enterobacterias de bacterias oxidasa positivas de los géneros
Pseudomonas, Aeromonas, Vibrio, Alcaligenes, Achromobacter,
Flavobacterium, Cardiobacterium, que pueden tener una
morfología similar; nitrato reductasa positiva, distingue
enterobacterias de bacterias que reducen nitrato a N2 (se
detecta formación de gas), tales como Pseudomonas y muchas
otras bacterias oxidasa (+); capacidad de fermentar glucosa con
producción de ácido o de ácido y gas, esto diferencia
enterobacterias de bacterias aerobias estrictas.
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Escherichia

Los miembros del género Escherichia son habitantes del tracto

intestinal de los humanos y de otros animales de sangre
caliente, aunque no son en absoluto los organismos
dominantes en este hábitat.

Escherichia juega un papel nutricional en el tracto intestinal al

sintetizar vitaminas, particularmente vitamina K.

Las cepas salvajes de Escherichia rara vez requieren factores

de crecimiento y son capaces de crecer utilizando una amplia
variedad de fuentes de carbono y energía como azúcares,
aminoácidos, ácidos orgánicos, etc.
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General
Algunas cepas de Escherichia son patógenas.

Están implicadas en diarrea en niños, un grave problema de salud en los

países en desarrollo.

Escherichia es responsable de un número considerable de infecciones del

tracto urinario femenino.

Las E. coli enteropatogénicas (EPEC) son cada vez más frecuentes en

infecciones gastrointestinales y en fiebres generalizadas.

Algunas cepas, como la E. coli enterohemorrágica (EHEC), de las que un

representante importante es la cepa 0157:H7, pueden causar
esporádicamente epidemias de una grave enfermedad transmitida por los
alimentos. La infección se produce fundamentalmente por el consumo de
alimentos contaminados.
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Salmonella

En contraposición a la mayoría de las Escherichia, los miembros

del género Salmonella son normalmente patógenos.
Salmonella también está presente en los intestinos de animales
poiquilotermos.

En humanos las enfermedades más frecuentes causadas por

salmonellas son las fiebres tifoideas y la gastroenteritis.
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Las salmonellas se caracterizan inmunológicamente en base a tres antígenos
de superficie, el O, o antígeno de pared celular (somático); el H, o antígeno
flagelar; y el antígeno Vi (de la cubierta de polisacáridos externa), que se
encuentra fundamentalmente en cepas de Salmonella causantes de las
fiebres tifoideas.

El género Salmonella contiene más de 1.0 0 0 serotipos distintos con

diferentes características antigénicas de sus antígenos O.

Subdivisiones antigénicas adicionales se basan en las especificidades

antigénicas de los antígenos flagelares (H). Hay muy poca o ninguna
correlación entre el tipo antigénico de una Salmonella y los síntomas de la
enfermedad que produce, pero el tipificado inmunológico permite rastrear
una cepa específica en un proceso epidémico.
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María Tifoidea, la mujer que dejó un rastro de escándalo y muerte a

sus espaldas y fue la primera paciente asintomática de la historia

https://www.youtube.com/watch?v=7lJs31Rs5F
o
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Grupo 12: subgrupo 3-sección A: Nitrobacter; sección B: Nitrosomonas

Bacterias nitrificantes
Capaces de crecer quimiolitotróficamente utilizando compuestos
nitrogenados inorgánicos reducidos.

Estas bacterias se distribuyen entre cuatro de las clases de

proteobacterias: alfa, beta, gamma y delta.
La nitrificación en la naturaleza resulta de la acción secuencial de
dos grupos distintos de organismos:

❖ las bacterias oxidantes del amoníaco “nitrosificantes”

“Nitroso”

❖ las bacterias oxidantes de nitritos “nitro” que son de hecho las

productoras de nitratos.
“Nitro”
Nitrosomonas y Nitrobacter
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General

Se encuentran ampliamente distribuidas en suelos y aguas. Son más

abundantes en hábitats con una considerable concentración de amoníaco,
como en plantas de tratamiento de aguas residuales.

Los cultivos de enriquecimiento de bacterias nitrificantes se consiguen usando

medios con sales minerales que contienen amoníaco o nitrito como donante
de electrones y bicarbonato como única fuente de carbono.

Debido al ineficaz crecimiento de estos organismos, es posible que no se

observe turbidez incluso cuando ya se haya producido intensa nitrificación.
Una forma de supervisar su crecimiento es ensayar la producción de nitritos o
nitratos.

La mayoría de las bacterias nitrificantes son quimiolitótrofos y aerobios

estrictos.
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General
Grupo 17: Staphylococcus, Leuconostoc, Lactococcus, Streptococcus

Bacterias Gram Positivas

Staphylococcus
Son organismos con metabolismo respiratorio. Son catalasa (+), lo
que permite su distinción frente a Streptococcus y algunos otros
géneros de cocos Gram (+). Son anaerobio facultativos y producen
ácido a partir de glucosa tanto aeróbica como anaeróbicamente. Es
típica la formación de agrupaciones de células.
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Staphylococcus General

Los Staphylococcus son comensales y parásitos habituales de humanos y

de animales y pueden causar ocasionalmente serias infecciones.

En humanos hay dos especies principales, Staphylococcus epidermidis

que es un organismo no pigmentado y no patógeno que se encuentra
habitualmente en la piel o en las membranas de las mucosas y
Staphylococcus aureus una especie de pigmentación amarilla que está
asociada a diversas patologías, que incluyen furúnculos, pústulas,
neumonía, osteomielitis, meningitis y artritis.
 Microbiología
General
Bacterias del ácido láctico
Son bacilos y cocos Gram (+) que producen ácido láctico como único o principal
producto de fermentación.

Obtienen su energía mediante fosforilación a nivel del sustrato, crecen

anaeróbicamente, aunque la mayoría no son sensibles al O 2 y pueden crecer en su
presencia.

La mayoría obtienen energía exclusivamente mediante el metabolismo de

azúcares y por tanto están normalmente restringidas a ambientes en los que hay
azúcares disponibles.

Tienen complejas necesidades nutricionales que incluyen aminoácidos, vitaminas,

purinas y pirimidinas.
 Microbiología
Bacterias del ácido láctico General
Una diferencia entre los subgrupos se basa en el patrón de productos que
generan como consecuencia de la fermentación de azúcares.

Un grupo, denominado homofermentativo, produce ácido láctico como único

producto de fermentación.

El otro grupo, denominado heterofermentativo, produce otros compuestos,

fundamentalmente etanol y CO2, así como lactato.

Los diversos géneros de bacterias del ácido láctico se definen en base a

morfología celular, filogenia y tipo de metabolismo fermentativo.
 Microbiología
General

Streptococcus, Lactococcus y Enterococcus

Streptococcus incluye especies homofermentativas con hábitats y actividades
bastante diferentes. Algunas especies son patógenas para hombres y animales.
Se han separado en dos grupos, lo que producen β hemólisis y los que producen
α hemólisis en agar sangre.

Los estreptococos y cocos relacionados también se dividen en grupos

inmunológicos conforme a la presencia de antígenos específicos.

Los estreptococos β hemolíticos que se encuentran en humanos normalmente

poseen el antígeno A. Los que poseen el antígeno B, que suelen encontrarse
asociados a animales, son los causantes de mastitis vacunas y también se les ha
relacionado con ciertas infecciones en el hombre.
 Microbiología
Streptococcus, Lactococcus y Enterococcus General
Otros estreptococos son importante en la producción de suero de leche, forraje
fermentado en silos y otros productos fermentados y, ciertas especies son
relevantes en la formación de caries dentales.

Para diferenciar los estreptococos patógenos de humanos de los no patógenos, se

definen dos géneros.

El género Lactococcus incluye aquellos estreptococos con relevancia en

productos derivados de la leche, y el el género Enterococcus incluye aquellos de
origen básicamente fecal.

Los Lactococos forman parte del grupo antigénico N y no son patógenos. Son
heterofermentativos, producen compuestos aromatizantes como diacetilo y
acetoína a partir del metabolismo del citrato y se han empleado como cultivos
iniciadores en la fermentación de productos lácteos.
 Microbiología
Grupo 19: Lactobacillus General

Lactobacillus
Presentan morfología bacilar, que puede variar desde bacilos largos y esbeltos a
bacilos cortos y curvados.

La mayoría de las especies son homofermentativas. Son habituales en los productos

derivados de la leche y algunas cepas se emplean para la preparación de leches
fermentadas. Por ejemplo, Lactobacillus acidophilus se emplea en la producción de
leche cultivada; L. delbrueckii se emplea en la preparación de yogur; y otras
especies se emplean en la producción de Chucrut, forraje fermentado y encurtidos.
 Microbiología
General
Lactobacillus
Son más resistentes a condiciones ácidas que otras bacterias del ácido láctico ya
que son capaces de crecer eficientemente a valores de pH de hasta 4.

La resistencia a la acidez les permite continuar creciendo durante la fermentación

láctica, incluso cuando los valores de pH son ya demasiado bajos para el
crecimiento de otras bacterias del ácido láctico. Los lactobacilos son por tanto
responsables de los últimos estadios de la mayoría de las fermentaciones lácticas.

Nunca o prácticamente nunca, son patógenos.

 Microbiología
General
Grupo 18: Bacillus, Clostridium

Bacterias Gram Positivas esporuladas

Los grupos formadores de esporas se diferencian según su morfología celular,
forma y la posición de la endospora dentro de la célula, su relación con el O2 y su
metabolismo energético.

Los dos géneros más conocidos son Bacillus, cuyas especies son aerobios
o anaerobios facultativos y Clostridium, que incluye especies fermentativas.

Micrografías de contraste de fases de

varias especies de Clostridium, con
diferentes ubicaciones de espora.
a- Clostridium cadaveris, esporas
terminales.
b- Clostridium sporogenes, esporas
subterminales.
c- Clostridium bifermentans, esporas
centrales.
 Microbiología
General
Bacterias Gram Positivas esporuladas

Presentan una considerable heterogeneidad genética, sin embargo están

ecológicamente relacionadas, ya que en la naturaleza se encuentran en suelos.

Incluso aquellas especies que son patógenas de humanos u otros animales son
organismos saprofíticos del suelo e infectan animales fortuitamente.

Estos microorganismos pueden aislarse de manera selectiva a partir de tierra,

comida, polvo y otros materiales calentando la muestra a 80 °C durante 10 min,
un tratamiento que mata las células vegetativas pero que mantiene viables
todas las endosporas presentes.

Si se aíslan colonias de las muestras calentadas en placas con el medio

adecuado se obtendrán especies de Bacillus o Clostridium, según se incuben
aeróbica o anaerobiamente.
 Bacillus
Muchos producen enzimas hidrolíticas extracelulares que degradan polímeros complejos
como polisacáridos, ácidos nucleicos y lípidos.

Ciertos Bacillus producen antibióticos, incluyendo bacitracina, polimixinas, tirocidina,

gramicidina y circulina. En la mayoría de los casos estos antibióticos se liberan durante la
esporulación, cuando el cultivo entra en fase estacionaria de crecimiento.

Diversas especies, como B. thuringiensis, producen larvicidas de insectos, que causan una
enfermedad mortal en larvas. Existen preparaciones comerciales de endosporas de B.
thuringiensis para su uso como insecticidas biológicos.

Los genes que codifican la proteína cristalina de B. thuringiensis (conocida como «toxina Bt»)
han sido introducidos en plantas para volverlas «naturalmente» resistentes a los insectos.
También se han desarrollado mediante ingeniería genética toxinas Bt alteradas
genéticamente para incrementar su toxicidad y reducir el desarrollo de resistencia.
 Microbiología

Clostridium General

Carecen de cadena respiratoria y obtienen su ATP exclusivamente mediante

fosforilación a nivel de sustrato. Se conocen varios mecanismos anaerobios de
producción de energía en Clostridium. Algunos fermentan azúcares, produciendo
ácido butírico como principal producto final. Otros también producen acetona y
butanol.

Algunos de los Clostridium que producen acetona-butanol pueden fijar

nitrógeno. El fijador de N 2 más potente es Clostridium pasteurianum, que
probablemente es el responsable de la mayoría de la fijación anaeróbica de
nitrógeno en el suelo.

Un grupo de Clostridium fermenta celulosa produciendo ácidos y alcoholes y

probablemente estos sean los organismos responsables de la mayoría de la
descomposición anaeróbica de celulosa en el suelo.
 Microbiología
General
Clostridium
Otro grupo de Clostridium obtiene su energía de la fermentación de aminoácidos.
Algunas especies fermentan aminoácidos individuales, mientras que otras sólo
fermentan parejas de aminoácidos.

Los productos de fermentación son normalmente acetato, butirato, CO2 y H2.

Muchos de los productos de la fermentación de aminoácidos son substancias
malolientes y el olor resultante de la putrefacción es resultado principalmente de la
acción clostridial.

Además de ácido butírico, otros compuestos malolientes que se producen son el

ácido isobutírico, ácido isovalérico, ácido caproico, sulfuro de hidrógeno,
metilmercaptano, cadaverina, putrescina y amoníaco.
 Microbiología
General
Clostridium
Viven en el suelo, en «bolsillos» carentes de oxígeno como resultado de la
metabolización de compuestos orgánicos por parte de organismos aerobios
facultativos. Algunas especies habitan el tracto intestinal de los mamíferos.

Varias especies son capaces de producir graves enfermedades en humanos. El

botulismo está producido por C. botulinum, el tétanos por C. tetani y la gangrena
gaseosa por C. perfringens.

Las especies patógenas no presentan características metabólicas diferentes, pero

tienen capacidad de producir toxinas específicas o un conjunto de toxinas.

C. perfringens y especies relacionadas también pueden provocar gastroenteritis en

humanos y animales domésticos y el botulismo también se da en ovejas, patos y
otros animales.
 Microbiología
General

TP N° 6: Pruebas bioquímicas de
identificación bacteriana
✓ Aislamiento de microorganismos

✓ Purificación

✓ Caracterización macro y microscópica

✓ Pruebas bioquímicas
 Microbiología
General

Prueba bioquímica: cualquier reacción que pone en evidencia la presencia o

ausencia de una enzima, vía metabólica o alguna otra propiedad característica
de una especie, que la revela como tal.

La elección adecuada de la batería de reacciones a realizar sobre un cultivo

puro desconocido es fundamental y definitoria para su identificación.

Se parte de un cultivo realizado en un medio nutritivo, generalmente Agar

Nutritivo, el cual no presenta interferencias y equipara el estado metabólico de
todas las células de la mayoría de las especies conocidas.

Cada vez que se realiza una serie de pruebas bioquímicas, deben ensayarse
obligatoriamente los controles negativo y positivo, realizados con especies tipo,
para cada una de las reacciones.
 Microbiología
General

Con el patrón de resultados de las pruebas bioquímicas realizadas sobre un

cultivo puro y desconocido, se recurre a la bibliografía para compararlo con las
especies conocidas.

Bergey ‘s Manual of Determinative Bacteriology

 Microbiología
General
La contaminación cloacal es importante por el potencial
patogénico que arrastra, por la presencia de agentes causantes de
enfermedades como: cólera, hepatitis, polio, fiebre tifoidea,
giardiasis, amebiasis, etc.

La concentración de estos agentes es baja y su detección directa

se hace complicada, por lo que se usan indicadores de
contaminación cloacal.
Bacterias indicadoras: grupo bacteriano de hábitat entérico,
cuya presencia permite inferir la posibilidad de un riesgo, por
anunciar la convivencia posible con agentes patógenos
Deben ser :
✓ de fácil detección y recuento
✓ mantener su viabilidad
 Microbiología
General

Bacterias indicadoras
✓ Enterobacterias
Fácilmente reproducibles en medios de cultivos adecuados

✓ Enterococos
Poseen ciertas exigencias nutricionales

✓ Clostridium perfringens
Para la detección de contaminación cloacal lejana en el tiempo
 Microbiología
General
ENTEROBACTERIAS

La familia Enterobacteriaceae se caracteriza por agrupar a cocobacilos

Gram negativos, aerobios facultativos, fermentadores de glucosa con
liberación de ácidos, o de ácido y gas y con las siguientes reacciones
bioquímicas comunes: oxidasa negativos y reducción del nitrato positivos, y
por su condición de aerobios, catalasa positvos. Por lo tanto, una vez aislada
una bacteria que coincida morfológicamente con este grupo, debe
realizarse la prueba de oxidasa como aproximación preliminar, ya que
separa esta familia de otras de características morfológicas parecidas.
 Microbiología
General

Cocobacilo Gram (-)

Catalasa (+)
 Microbiología
General
Prueba de oxidasa
Esta prueba pone de manifiesto la presencia de esta enzima. Las
enterobacterias carecen de este sistema enzimático por lo que el resultado debería
ser negativo.

Procedimiento:
En un tubo de ensayo se coloca 0,2
ml de agua destilada estéril, y se
suspende una colonia de la bacteria a
estudiar. Se agrega un disco de Oxidasa y
se espera 1 minuto

Oxidasa (-)
 Microbiología
General

Morfología Coco bacilos

Gram -
Catalasa +
Oxidasa -

Pruebas para la diferenciación dentro de la familia

Enterobacteriaceae

KIA Indol Rojo de Voges Citrato

Metilo Praskauer

IMViC
 Microbiología
General
Crecimiento Kligler:
 Microbiología
General

Crecimiento Kligler:
 Microbiología
General
Indol
MIO: Movilidad - Indol - Ornitina
SIM: Sulfuro - Indol - Movilidad

Movilidad:
(+) los organismos móviles migran de la línea de siembra y
difunden en el medio provocando turbidez
(-) hay crecimiento bacteriano sólo en la línea de siembra
 Microbiología
General

SIM
 Microbiología
General
SIM

MI0
 Microbiología
General

RM-VP: Rojo de Metilo- Voges Praskauer

Rojo de
metilo

α Naftol +
KOH
RM-VP Microbiología
General

Gotas de RM

Ácido láctico, acético,

succínico, CO2, etanol
 Microbiología
General
Citrato
 Microbiología
General

Pruebas Bac 1 Bac 2

Morfología Bacilos
Gram -
Catalasa +
Oxidasa -
Ferm Glucosa +
Ferm Lactosa +
Gas +
Movilidad +
Indol +
Sulfuro -
Ornitina +
RM +
VP -
Citrato -
β galactosidasa

Arginina dehidrolasa

Lisina
descarboxilasa
Ornitina
descarboxilasa

citrato

sulfuros

ureasa

Triptófano deaminasa

indol

VP

gelatinasa

glucosa

manitol

inositol

sorbitol

ramnosa
General

sacarosa
Microbiología

melobiosa

amigdalina

arabinosal