Proyecto: Gua Tcnica Sobre Criterios Y Procedimientos Para
El Examen Microbiolgico De Superficies En Relacin Con Alimentos Y
Bebidas
CAPITULO I: DISPOSICIONES GENERALES
1. Finalidad
La presente Gua Tcnica establece los criterios microbiolgicos y los
procedimientos para evaluar las condiciones higinicas sanitarias de las
superficies que estn en contacto o en relacin con los alimentos y bebidas
destinados al consumo humano.
2. Objetivos
2.1. Establecer los criterios microbiolgicos destinados a evaluar las
condiciones higinicas sanitarias de las superficies
vivas e inertes que entran en contacto con los alimentos y bebidas.
2.2. Uniformizar los procedimientos que se deben aplicar para la seleccin
y toma de muestras y para los ensayos
microbiolgicos de superficies vivas e inertes.
3. mbito de aplicacin
La presente Gua Tcnica es de obligatorio cumplimiento en todo el territorio
nacional, para efectos de vigilancia y control sanitario por parte de la Autoridad
Sanitaria, que evala la efectividad de los programas de higiene y saneamiento
(PHS) y de las prcticas de higiene en la manipulacin de los alimentos, segn el
mbito de su competencia y referencial para las personas naturales y jurdicas en
las operaciones de control sanitario que realizan.
4. Procedimientos a estandarizar
Esta Gua Tcnica estandariza los procedimientos para la seleccin y toma de
muestras y los criterios microbiolgicos para superficies que estn en contacto o
relacin directa con los alimentos.
5. Definiciones Operativas
Anlisis microbiolgico: Procedimientos que se siguen para determinar la
presencia, identificacin, y cantidad de microorganismos patgenos e indicadores
de contaminacin.
Calidad sanitaria: Es el conjunto de requisitos microbiolgicos, fsico-qumicos
y organolpticos que debe reunir un alimento para ser considerado inocuo para el
consumo humano.
Criterios microbiolgicos: Es la aceptabilidad sanitaria de una superficie,
basada en la ausencia, presencia, o en un lmite permisible de microorganismos
del mbito muestreado.
Gel refrigerante: Producto acumulador de fro, no txico, no comestible y
reutilizable que se utiliza para mantener la cadena de fro (ms de 50 horas).
Tiene un descongelamiento retardado.
Hisopo: Instrumento con punta de algodn o de rayn que se utiliza humedecido
con solucin diluyente para facilitar la recuperacin bacteriana, en el muestreo de
superficies.
Manipulador de alimentos: Persona que est en contacto con los alimentos
mediante sus manos, cualquier equipo o utensilio que emplea para manipularlos,
en cualquier etapa de la cadena alimentaria.
Peligro: Agente biolgico, qumico o fsico presente en una superficie que est
en contacto con los alimentos y que pueden ocasionar un efecto nocivo para la
salud.
Riesgo: Probabilidad de un efecto nocivo para la salud y de la gravedad de dicho
efecto, como consecuencia de un peligro o peligros en los alimentos, ocasionado
por el contacto con superficies contaminadas.
Vigilancia sanitaria: Conjunto de actividades de observacin y evaluacin que
realiza la Autoridad Sanitaria sobre las condiciones sanitarias de las superficies
que estn en contacto con los alimentos y bebidas, en proteccin de la salud de
los consumidores.
CAPITULO II : OPERACIONES GENERALES
1. Operaciones en campo
Las operaciones en campo son aquellas que se realizan en el establecimiento
donde se procesan, elaboran, almacenan, fraccionan o expenden alimentos y
bebidas, sea fbrica, almacn, servicios de alimentos, quiosco, puesto, comedor,
u otro.
Comprende las siguientes operaciones consecutivas, realizadas por personal
capacitado en la materia:
a. Procedimiento para la seleccin de la muestra.
b. Seleccin del mtodo de muestreo.
c. Procedimiento para la toma de muestra.
2. Operaciones analticas
Las operaciones analticas son aquellas que se realizan en un laboratorio
destinado y acondicionado para el control de la calidad sanitaria e inocuidad de
los alimentos y bebidas.
Comprende las siguientes operaciones consecutivas, realizadas por personal
capacitado en la materia:
a. Determinacin de los ensayos microbiolgicos.
b. Procedimiento de anlisis microbiolgicos.
c. Clculo y expresin de resultados.
d. Interpretacin de resultados de acuerdo a los criterios microbiolgicos.
CAPITULO III: OPERACIONES EN CAMPO
1. Procedimiento para la seleccin de la muestra
El procedimiento para seleccionar las muestras, debe estar en funcin de los
riesgos sanitarios relacionados a las diferentes etapas de la cadena alimentaria,
sea de la fabricacin, de la elaboracin y/o expendio.
1.1. En fbricas de alimentos y bebidas
Superficies inertes: Se seleccionarn aquellas que estn o tendrn contacto
directo con los alimentos que no sern sometidos a un proceso trmico posterior
u otro que disminuya la carga microbiana.
Superficies vivas: Se seleccionarn a los manipuladores de alimentos, con o sin
guantes, que estn en contacto directo con los alimentos que no sern
sometidos a un proceso trmico posterior u otro tratamiento que diminuya la
carga microbiana.
1.2. En establecimientos de elaboracin y expendio
Superficies inertes:Se seleccionarn aquellas superficies que estn en contacto
con los alimentos destinados al consumo directo, como utensilios, vajilla,
superficies de corte, menaje, equipos, entre otros.
Superficies vivas: Se seleccionarn las manos de los manipuladores, con o sin
guantes, que estn en contacto con los alimentos destinados al consumo
directo.
2. Seleccin del mtodo de muestreo
La seleccin del mtodo de muestreo debe estar en funcin de las
caractersticas de la superficie a muestrear.
METODO DE SUPERFICIES A MUESTREAR
MUESTREO
Mtodo del hisopo Se utiliza para superficies inertes regulares e irregulares, tales
como tabla de picar, bandejas, mesas de trabajo, utensilios,
cuchillas de equipos, cortadora de embutidos, cortadora de pan
de molde, fajas transportadoras, tolvas, mezcladoras, pisos,
paredes y otros.
Mtodo de la esponja El mtodo de la esponja se utiliza preferentemente para
muestrear superficies de mayor rea.
Mtodo del enjuague: Se utiliza para superficies vivas (manos) y para objetos
pequeos o para el muestreo de superficies interiores de
envases, botellas, bolsas de plstico, etc.
3. Procedimiento para la toma de muestra
3.1 Mtodo del hisopo
a) Descripcin:
Consiste en frotar con un hisopo estril previamente humedecido en una
solucin diluyente, el rea determinada en el muestreo.
b) Materiales:
1. Hisopos de algodn u otro material equivalente, de largo aproximado de
12 cm.
2. Tubo de ensayo con tapa hermtica conteniendo 10 mL de solucin
diluyente estril.
3. Plantilla estril, con un rea en el centro de 100 cm2 (10cm x 10cm) o
alternativamente, plantilla estril, con un rea en el centro de 25 cm2 (5 x
5 cm). Gradillas
4. Guantes descartables de primer uso.
5. Protector de cabello.
6. Mascarillas descartables.
7. Plumn marcador para vidrio.
8. Caja trmica.
9. Refrigerante.
c) Procedimiento:
1. Colocar la plantilla (10cm x 10cm) sobre la superficie a muestrear.
2. Humedecer el hisopo en la solucin diluyente y presionar ligeramente en
la pared del tubo con un movimiento de rotacin para quitar el exceso
de solucin.
3. Con el hisopo inclinado en un ngulo de 30, frotar 4 veces la superficie
delimitada por la plantilla, cada una en direccin opuesta a la anterior.
4. En el caso de utilizar la plantilla de 5cm x 5cm, repetir esta operacin en 3
lugares diferentes de la misma superficie, para obtener 100 cm2.
5. Colocar el hisopo en el tubo con la solucin diluyente, quebrando la parte
del hisopo que estuvo en contacto con los dedos del muestreador, la
cual debe ser eliminada.
Conservacin y Transporte de la muestra
Las muestras se colocarn en un contenedor isotrmico con gel refrigerante, el
cual se distribuir uniformemente en la base y en los laterales, de tal manera de
asegurar que la temperatura del contenedor no sea mayor de 10C, a fin de
asegurar la vida til de la muestra hasta su llegada al laboratorio. El tiempo de
transporte entre la toma de muestra y la recepcin en el laboratorio estar en
funcin estricta de dicha temperatura, no debiendo exceder las 24 horas y
excepcionalmente las 36 horas.
Se debe registrar la temperatura del contenedor al colocar las muestras y a la
llegada al laboratorio a fin de asegurar que las mismas hayan sido transportadas a
la temperatura indicada. Temperaturas superiores a 10C invalidan la muestra
para su anlisis.
3.2. Mtodo de la esponja
a) Descripcin:
Consiste en frotar con una esponja estril, previamente humedecida en una
solucin diluyente, el rea determinada en el muestreo.
b) Materiales:
o Esponja estril de poliuretano o de celulosa, de 5cm x 5 cm.
o Plantilla estril, con un rea en el centro de 100 cm2 (10 cm x 10 cm).
o Frascos con tapa rosca de 250 mL de capacidad, con 100 mL de solucin
diluyente estril.
o Pinzas estriles.
o Bolsas de polietileno de primer uso.
o Guantes descartables de primer uso.
o Protector de cabello.
o Mascarillas descartables.
o Plumn marcador para vidrio.
o Caja trmica.
o Refrigerante.
c) Procedimiento:
1. Retirar la esponja de su envoltura con la pinza estril o con guantes
descartables o bien usar una bolsa de primer uso, invertida a manera de
guante.
2. Humedecerla con la solucin diluyente estril (aproximadamente 10mL).
3. En condiciones aspticas frotar vigorosamente el rea a muestrear. En el
caso de superficies regulares, frotar el rea delimitada por la plantilla y en
el caso de superficies irregulares (cuchillas, equipos, utensilios, etc), frotar
abarcando la mayor cantidad de superficie.
4. Colocar la esponja en el frasco con el resto de la solucin diluyente o
alternativamente colocar la esponja con la muestra en una bolsa de plstico
de primer uso.
5. Para el caso especfico de utensilios se podr repetir la operacin con 3
utensilios ms (total 4 como mximo), con la misma esponja,
considerando el rea que est en contacto con el alimento o con la boca. Si
no se toman las 4 muestras, anotar en la Ficha de Toma de Muestra.
6. Las tazas, copas o vasos se muestrearn 2 a 3 cm alrededor del borde por
dentro y por fuera.
d) Conservacin y Transporte de la muestra
Las muestras se colocarn en un contenedor isotrmico con gel refrigerante, el
cual se distribuir uniformemente en la base y en los laterales, de tal manera de
asegurar que la temperatura del contenedor no sea mayor de 10C, a fin de
asegurar la vida til de la muestra hasta su llegada al laboratorio. El tiempo de
transporte entre la toma de muestra y la recepcin en el laboratorio estar en
funcin estricta de dicha temperatura, no debiendo exceder las 24 horas y
excepcionalmente las 36 horas.
Se deber registrar la temperatura del contenedor al colocar las muestras y a la
llegada al laboratorio a fin de asegurar que las mismas hayan sido transportadas a
la temperatura indicada. Temperaturas superiores a 10C invalidan la muestra
para su anlisis.
3.3 Mtodo del enjuague
A) Descripcin:
Dependiendo de la muestra, el mtodo consiste en realizar un enjuague (botellas,
frascos, similares) o inmersin (manos, objetos pequeos) en una solucin
diluyente.
B) Materiales:
1. Frascos con tapa hermtica de boca ancha de 250 mL de capacidad, con
100 mL de solucin diluyente estril.
2. Bolsas de polietileno de primer uso.
3. Pinzas estriles.
4. Guantes descartables de primer uso.
5. Protector de cabello.
6. Mascarillas descartables.
7. Plumn marcador para vidrio.
8. Caja trmica.
9. Refrigerante.
C) Procedimiento:
Para manos
1. Vaciar el diluyente del frasco (100 mL) en una bolsa plstica de primer
uso.
2. Introducir las manos a muestrear hasta la altura de la mueca.
3. Solicitar al manipulador que realice un frotado de los dedos y
particularmente alrededor de las uas y la palma de la mano,
adicionalmente el muestreador deber realizar la misma operacin a travs
de las paredes de la bolsa, durante un (01) minuto aproximadamente.
4. Luego de retirar las manos se regresa el lquido al frasco o se deja en la
bolsa con la proteccin adecuada; en este caso, la bolsa que se utilice debe
ser estril.
Para recipientes (frascos, jarras, otros)
1. Vaciar en el recipiente a muestrear una parte de la solucin estril (frasco
con 100 mL) y agitar vigorosamente.
2. Regresar la solucin a su frasco original.
3. Cerrar hermticamente el frasco para su traslado.
Para objetos pequeos (piezas de equipos, otros)
Se introduce individualmente cada objeto en el frasco o bolsa con la solucin
estril y agitar vigorosamente.
1. Luego con una pinza estril, retirar el objeto pequeo del frasco o bolsa.
3. Si se muestrea ms de un objeto pequeo de igual naturaleza, se debe
considerar esto en el clculo de resultados.
D) Conservacin y Transporte de la muestra
Las muestras se colocarn en un contenedor isotrmico con gel refrigerante, el
cual se distribuir uniformemente en la base y en los laterales, de tal manera de
asegurar que la temperatura del contenedor no sea mayor de 10C, a fin de
asegurar la vida til de la muestra hasta su llegada al laboratorio. El tiempo de
transporte entre la toma de muestra y la recepcin en el laboratorio estar en
funcin estricta de dicha temperatura, no debiendo exceder las 24 horas y
excepcionalmente las 36 horas.
Se deber registrar la temperatura del contenedor al colocar las muestras y a la
llegada al laboratorio a fin de asegurar que las mismas hayan sido transportadas a
la temperatura indicada. Temperaturas superiores a 10C invalidan la muestra
para su anlisis.
CAPITULO IV
OPERACIONES ANALITICAS
1. Seleccin de ensayos
Los ensayos a realizar, ser segn el tipo de superficie y del ambiente que
ha sido muestreado.
SUPERFICIES VIVAS SUPERFICIES
INERTES
Indicadores de Higiene Coliformes Coliformes
Patgeno (*) Staphylococcus aureus
Salmonella sp
Salmonella sp
(*) Se podrn considerar otros patgenos segn sea la superficie a analizar.
1. Limites permisibles para superficies vivas
ENSAYO SUPERFICIES VIVAS
Coliformes <100 ufc / manos(*)
Staphylococcus aureus <100 ufc / manos(*)
Salmonella sp. Ausencia / manos
(*) En las operaciones analticas, estos valores son indicadores de ausencia y
estn en concordancia con los criterios microbiolgicos establecidos para
alimentos de consumo directo. (RM N363-2005/MINSA)
3. Lmites permisibles para superficies inertes regulares
ENSAYO SUPERFICIES INERTES
Coliformes <1 ufc / cm2 (*)
Salmonella sp. Ausencia / 100 cm2
(*) Ver "Procedimiento para el control microbiolgico con aplicacin del
mtodo
del hisopo", referencia tem 5.2 (a)
4. Lmites permisibles para superficies inertes irregulares
ENSAYO SUPERFICIES INERTES
Coliformes <100 ufc / utensilio (*)
Salmonella sp. Ausencia / utensilio(s)
(*) Si se utiliza un (01) utensilio. Si se utilizan ms utensilios, aplicar lo indicado
en el tem 6.2 (a) "Procedimiento para el control microbiolgico con aplicacin
del mtodo de la esponja
5. Procedimiento para el control microbiolgico con aplicacin del
mtodo del hisopo
5.1 Procedimiento de anlisis microbiolgicos
Sea por mtodos rpidos o convencionales, los ensayos microbiolgicos se
realizarn utilizando mtodos normalizados por organismos internacionales como
la ISO, AOAC, FDA/BAM, ICMSF, APHA, entre otros.
5.2 Clculo y expresin de resultados
1. Clculo
Para superficies regulares: el nmero de colonias obtenidas (ufc) se multiplicar
por el factor de dilucin y por el volumen de solucin diluyente utilizada en el
muestreo (10 ml) y se dividir entre el rea de la superficie hisopada o
muestreada (100 cm2).
Para superficies irregulares: el nmero de colonias obtenido (ufc) se multiplicar
por el factor de dilucin.
b) Expresin de resultados
Los resultados se expresarn
Para superficies regulares en: ufc / cm2:
Para superficies irregulares en: ufc/ superficie muestreada
(ej.cuchilla de
licuadora)
5.3 Interpretacin de resultados de acuerdo a los criterios microbiolgicos
Para superficies regulares el lmite de deteccin aceptable debe ser: < 1.
Para superficies irregulares, el lmite de deteccin aceptable debe ser: < 10.
6.- Procedimiento para el control microbiolgico con aplicacin del
mtodo de la esponja
6.1. Procedimiento de anlisis microbiolgico
Sea por mtodos rpidos o convencionales, los ensayos microbiolgicos se
realizarn utilizando mtodos normalizados por organismos internacionales como
la ISO, AOAC, FDA/BAM, ICMSF, APHA, entre otros.
6.2. Clculo y expresin de resultados
a) Clculo
Para superficies regulares: el nmero de colonias obtenidas (ufc) se multiplicar
por el factor de dilucin y por el volumen de solucin diluyente utilizada en el
muestreo (100 ml) y se dividir entre el rea de la superficie muestreada (100
cm2)
Para superficies irregulares: el nmero de colonias obtenido (ufc) se multiplica
por el factor de dilucin y por el volumen de solucin diluyente utilizado en el
muestreo (100 ml). En el caso de varias superficies muestreadas, se divide entre
el nmero de superficies muestreadas (Ej. n de cuchillas de licuadoras o n de
utensilios como cucharas, vasos, etc.).
b) Expresin de resultados
Para superficies regulares: ufc/ cm2
Para superficies irregulares: ufc/ superficie muestreada (ej. cuchilla de licuadora,
cubierto, etc)
6.3 Interpretacin de resultados de acuerdo a los criterios
microbiolgicos
a) Para superficies regulares el lmite de deteccin aceptable debe ser < 1.
b) Para superficies irregulares:
Para 1 utensilio, el lmite de deteccin aceptable debe ser < 100
Para 4 utensilios, el lmite de deteccin aceptable debe ser < 25
7.- Procedimiento para el control microbiolgico con aplicacin
del mtodo del enjuague
7.1 Procedimiento de anlisis microbiolgico
Sea por mtodos rpidos o convencionales, los ensayos microbiolgicos se
realizarn utilizando mtodos normalizados por organismos internacionales como
la ISO, AOAC, FDA/BAM, ICMSF, APHA, entre otros.
7.2 Clculo y expresin de resultados
a) Clculo
Para superficies vivas: el nmero de colonias obtenidas (ufc) se multiplicar por
el factor de dilucin y por el volumen de solucin diluyente utilizada en el
muestreo (100 ml).
Para objetos pequeos o para el muestreo de superficies interiores de envases,
botellas, bolsas de plstico, etc.: el nmero de colonias obtenido (ufc) se
multiplica por el factor de dilucin y por el volumen de solucin diluyente
utilizado en el muestreo (100 ml). En el caso de varias superficies muestreadas,
se divide entre el nmero de superficies muestreadas (Ej. n de envases, n de
bolsas de plstico, etc.).
b) Expresin de resultados
Los resultados se expresan en:
Para superficies vivas: ufc/ manos
Para superficies internas: ufc/ superficie muestreada (ej. Envases, bolsas de
plstico, etc).
7.3. Interpretacin de resultados de acuerdo a los criterios
microbiolgicos
a) El lmite de deteccin del mtodo para superficies vivas es < 100.
b) El lmite de deteccin del mtodo para superficies internas < 100.
1. Preparacin de medios de cultivo. (Anexo nico)
_________________________________________________________________
_________
BIBLIOGRAFIA
1. Merck. Alemania, 1994.Manual de Medios de Cultivo -.
2. G-ENAC-04.Gua para la acreditacin de laboratorios que realizan anlisis
microbiolgicos. Rev. Noviembre 2002
3. ISO/IEC 17025:2005 (ES). Norma Internacional.
4. Norma Internacional ISO 6888-1:1999 (E). Microbiologa de alimentos
y forraje animal- Mtodo Horizontal para la numeracin
de Staphylococccus coagulasa positiva (Staphylococcus aureus y otras
especies). Parte 1: Usando la Tcnica del Medio Agar Baird Parker.
5. Procedimiento para el examen microbiolgico de superficies y utensilios.
Q.B.P. Ma.Cristina Parrilla C., Q.B.P. Ofelia Saldate C. Direccin General
de Epidemiologa. Laboratorio Nacional de Salud Pblica. Departamento
de Evaluacin de riesgos microbianos y parasitarios. Mxico D.F. 1990.
6. American Public Health Association. (APHA), Fourth edition 2001.
Compendium of methods for the microbiological examination of foods.
ANEXO UNICO
Cuadro sobre Preparacin de Medios de Cultivo
PLATE COUNT AGAR
NOMBRE:
(Agar-peptona de casena glucosa - extracto de levadura)
Medio de cultivo exento de sustancias inhibidoras y de indicadores.
Descripcin
Concebido esencialmente para la determinacin del nmero total de
Y Uso:
grmenes en leche, productos lcteos, aguas y otros materiales.
Peptona de casena 5,0
Disolver 22,5 g/litro y
2,5
esterilizar en autoclave
Extracto de levadura 1,0
Composicin: por 15 minutos a 121C.
D(+)-glucosa 14,0 Preparacin:
(g/L) Las placas con el medio
Agar-agar 22,5
de cultivo son claras e
incoloras.
pH :7,0 0,1.
NOMBRE: AGAR BAIRD-PARKER
Para el aislamento y la diferenciacin de Estafilococos en alimentos y
materiales farmacuticos, segn Baird-Parker (1962).
Este medio de cultivo corresponde a las recomendaciones de la United
Descripcin States Pharmacopoeia XXI (1985 ), a las de la European Pharmacopoeia
Y Uso: II, a las de la Farmacopea Alemana, a las de la International
Organization for Standardization (ISO ) (1977 , 1978 ), a las de la
Federacin Internacional de Lechera ( 1978 ) y a las Normas DIN 10163
y 10178.
Este medio de cultivo contiene cloruro de litio y telurito para la
inhibicin de la flora acompaante, en tanto que el piruvato y la glicocola
actan favoreciendo selectivamente el crecimiento de Estafilococos.
Sobre el medio de cultivo, opaco por su contenido en yema de huevo, las
colonias de Estafilococos muestran dos caractersticas diagnsticas por
liplisis y protelisis, se producen halos y anillos caractersticos y,
debido a la reduccin del telurito a teluro, se desarrolla una colonia
Forma de
negra. La reaccin con la yema de huevo y la reduccin del telurito se
actuacin
presentan con notable paralelismo con la coagulasa-positiva, y por tanto,
pueden utilizarse como ndice de esta ltima.
Para una demostracin directa de Estafilococos coagulasa-positiva, ha
sido recomendado por Stadhouders y col.( 1976 ) el incorporar al medio
de cultivo plasma sanguneo en lugar de yema de huevo.
Smith y Baird-Parker (1964) recomiendan aadir sulfametacina para
inhibir el crecimiento de Proteus.
Composicin: Peptona de casena 10,0 Preparacin: Disolver 58 g en 0,95
(g/L) Extracto de carne 5,0 litros, esterilizar en
Extracto de levadura 1,0 autoclave (15 min. a 121
Piruvato sdico 10,0 C), enfriar a 45-50C,
Glicina 12,0 aadir mezclando 50 mL
Cloruro de litio 5,0 de emulsin de yema de
Agar-agar 15,0 huevo telurito y,
58,0 eventualmente,50 mg/litro
de Sulfametacina. Verter
en placas.
pH 6,8 0,2.
En tanto que el medio de
cultivo basal puede
Aditivos:
guardarse de 1 a 2 meses a
emulsin de yema de
50,0 4C, el medio de cultivo
huevo telurito (mL);
completo, vertido en
eventualmente,
placas ha de ser utilizado
sulfametacina (g)
dentro de las 24 horas
0,05 siguientes a su
preparacin.
Diluir convenientemente el material a investigar y extenderlo finamente
sobre la superficie del medio de cultivo.
Incubacin: Desde 24 hasta 48 horas a 37C
Empleo e Las colonias de Staphylococcus aureus se presentan negras, lustrosas,
interpretacin convexas, de 1 a 5 mm. de dimetro, con borde estrecho blanquecino,
rodeado por un halo claro de 2 a 5 mm de anchura. Dentro del halo claro
presencia de anillos opacos no visibles antes de las 48 horas de
incubacin.
NOMBRE:
CALDO DE CEREBRO CORAZN (Brain Heart Broth)
Para el cultivo de diversos microorganismos patgenos exigentes.
Estos medios de cultivo corresponden a las recomendaciones de los
Descripcin y Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater (1975).
Uso: El Caldo de cerebro-corazn corresponde a la Norma DIN 10163 para el
anlisis de carnes y a las Prescripciones segn apartado 35 de la LMBG
para el anlisis de alimentos.
Forma de Estos medios de cultivo se basan en el principio del Caldo Rosenow
actuacin preparado con trozos de cerebro (Rosenow 1919) y son adecuados con
trozos el cultivo de muchas bacterias exigentes, como Estreptococos,
Pneumococos, Meningococos y otros. Para el cultivo Gonococos hay que
aadir lquido asctico.
El Caldo de cerebro-corazn es especialmente adecuado para el cultivo
de Estafilococos destinados al ensayo de plasma coagulasa y para la
realizacin de hemocultivos. El crecimiento de grmenes anaerobios o
microaerfilos resulta decisivamente mejorado por la adicin al Caldo de
pequeas cantidades de Agar-agar (aprox. 0,05-0,2%).
Sobre la base del Agar-cerebro-corazn, Queiroz y col. (1987)
desarrollaron un agar selectivo para Campylobacter pylori,
denominndolo Medio Belo Horizonte (MBH).
El Agar-cerebro-corazn, aparte de su aplicacin en el terreno
bacteriolgico, es adecuado tambin para el cultivo de hongos patgenos.
El crecimiento de la flora bacteriana de acompaamiento puede inhibirse
notablemente por adicin de 20 UI de Penicilina y 40 ug de
Estreptomicina por mL de medio de cultivo. Se recomienda la adicin de
Cicloheximida (0,05 ug/mL) y de Cloranfenicol (0,5 ug/mL) para el
aislamiento selectivo de hongos exigentes, especialmente de Histoplasma
capsulatum y Blastomyces, a partir de materiales policontaminados
objeto de investigacin.
Este medio de cultivo es menos adecuado para el estudio de las formas
hemolticas (tras adicin de sangre), debido a su contenido de glucosa.
Disolver 52 g/litro (Agar-
cerebro-corazn) o bien 37
g/L (Caldo de Cerebro-
Corazn) y esterilizar en
Substrato alimenticio 27,5
autoclave (15 min. a
(extracto de cerebro,
121C).
Composicin: extracto de corazn y 2,0
Preparacin: pH: 7,4 0,2.
(g/L) peptona) 5,0
Ambos medios de cultivo
D(+)-glucosa 2,5
son ligeramente parduscos.
Cloruro sdico 15,0
El caldo tiene un aspecto
Hidrgenofosfato 52,0
claro, mientras que el agar
disdico
puede presentar, a veces,
Agar-agar (falta el
opalescencia.
caldo)
Empleo e
De acuerdo con los correspondientes fines de empleo.
interpretacin
NOMBRE:
AGAR TSA
Diluir 40 gramos del
medio de cultivo en
1000 ml de agua
destilada, dejar reposar
Triptona 15,0 por 15 minutos, calentar
Soytona. 5,0 en bao mara hasta
Cloruro de sodio 5,0 disolver por completo.
Composicin: Agar 15,0 Distribuir en tubitos de
Preparacin:
(g/L) 40,0 13 x 100 mm a razn de
3 mL, llevar a esterilizar
en autoclave 121C, 15
pH : 7,3. libras durante 15
minutos, dejar enfriar.
Los tubos destinados al
cepario no necesitan
inclinacin.
EMULSIN YEMA DE HUEVO TELURITO
NOMBRE:
(Egg-yolk Tellurite Emulsin)
La emulsin yema de huevo-telurito, se emplea como aditivo en el Agar
Descripcin y
Baird Parker (base), y posibilita la demostracin de la actividad lecitinasa
Uso:
y la reduccin del telurito.
Agitar el frasco con fuerza para
resuspender el posible
sedimento formado. 50 mL de
la emulsin de yema se
Yema de huevo 500,00 mezclan con 950 mL del medio
estril 4,25 de cultivo esterilizado y
Cloruro de sodio 2,10 enfriado a 45-50 C. Verter en
Telurito potsico placas.
Agua destilada Al tomar la emulsin del
Composicin: hasta 1000 ml frasco, cuidar de que se efecte
Preparacin:
(g/L) de forma estril.
Al contrario que las placas
para cuya preparacin se
aaden por separado la
emulsin y el telurito potsico,
aquellas placas que se preparan
con emulsin yema de huevo-
telurito son estables
aproximadamente 2 meses
almacenadas a 4C.
NOMBRE:
SOLUCIN DILUYENTE (Solucin amortiguadora de fosfatos)
Composicin: Preparacin: Disolver el fosfato en 500 mL de agua
destilada y ajustar el pH a 7.2 con
hidrxido de sodio 1N. Llevar a un
litro con agua destilada.
Esterilizar durante 15 minutos a
121C. Conservar en refrigeracin.
Transferir 1.25 mL de la solucin a un
matraz aforado, llevar a un litro con
agua destilada, sta ltima es la
solucin de trabajo.
KH2PO 34 g Distribuir en frascos con tapa de rosca
4 1000 mL en volmenes de 50 ml o las
Agua cantidades que se requieren en cada
destilada mtodo. Esterilizar a 121C durante 15
minutos.
Para el anlisis de superficies de
manos.
Transferir 1.25 mL de solucin
concentrada a un matraz aforado de un
litro, agregar un mL de Triton X
100. Llevar a un litro con agua
destilada. Distribuir en frascos en
volmenes de 50 mL. Esterilizar a
121C durante 15 minutos.
AGAR OGY
NOMBRE:
(Agar-Oxitetraciclina-glucosa-extracto de levadura)
Agar selectivo segn Mossel y col.(1970) para la demostracin y
numeracin de mohos y levaduras en todo tipo de material de
investigacin (alimentos, material clnico, etc.).
El agar-oxitetraciclina-glucosa-extracto de levadura ha sido recomendado
Descripcin y
como medio de rutina para la investigacin de mantequilla.
Uso:
En la investigacin de muestras de heces procedentes de pacientes
tratados con Tetraciclina, las Enterobactericeas slo son inhibidas de
manera insuficiente. En tales casos, es preferible el empleo de
Gentamicina en vez de la Oxitetraciclina.
Disolver 30 g/litro, esterilizar en
autoclave (15 min. A 121C),
Extracto de 5,0 dejar enfriar hasta unos 50C,
levadura 10,0 incorporar 0,1 g/litro de
D(+)glucosa 15,0 Oxitetraciclina en forma de
Composicin: Agar-agar solucin acuosa o 0,05 g/litro de
Preparacin
(g/L) Gentamicina (1 mL/litro de
Aditivo: Gentamicina en solucin) y
Oxitetraciclina 0,1 verter en placas.
o Gentamicina pH: 6.5 + 0,2
0,05. Las placas con medio de cultivo
son claras e incoloras.
El material objeto de investigacin se homogeniza, eventualmente, con
solucin Ringer (Tabletas de RINGER), se diluye y se extiende sobre las
placas mediante esptula.
Empleo e
Incubacin: hasta 5 das a temperatura ambiente (aprox. 22C).
interpretacin
Contar el nmero de colonias de hongos por placa y mediante el factor de
dilucin, calcular el nmero de grmenes del material objeto de
investigacin.
