Serao war die Tochter von Francesco Serao und dessen Ehefrau Paolina Borely. Ihr Vater war ein Italiener, der wegen seiner anti-bourbonischen Einstellung Neapel verlassen musste und als Exil Griech...mehr sehenSerao war die Tochter von Francesco Serao und dessen Ehefrau Paolina Borely. Ihr Vater war ein Italiener, der wegen seiner anti-bourbonischen Einstellung Neapel verlassen musste und als Exil Griechenland wählte; ihre Mutter stammte aus einer alteingesessenen griechischen Familie. Matilde Serao kam in Patras im späteren Geburtshaus des griechischen Schriftstellers Kostis Palamas zur Welt.
Später kehrte die Familie nach Neapel zurück, wo Serao dann auch die Scuola Normale Eleonora Fonseca Pimentel besuchte. Nach ihrem Studium arbeitete sie in Neapel als Lehrerin; einige Zeit sogar an ihrer alten Schule.
1880 ging sie nach Rom und blieb dort bis 1886. Dort machte sie die Bekanntschaft mit dem Journalisten Edoardo Scarfaglio (1860–1917) und heiratet ihn am 28. Februar 1885. Sie hatte mit ihm vier Söhne, darunter Carlo, der später ebenfalls ein bekannter Journalist werden sollte.
Zusammen mit ihrem Ehemann gründete Serao in Rom die Tageszeitung Il Corriere di Roma. Bald nachdem Serao wieder nach Neapel zurückgekehrt war, stellte auch der Il Corriere di Roma sein Erscheinen ein. Die erste Zeit in Neapel arbeitete sie beim Il Corriere di Napoli und konnte parallel dazu auch ihre literarischen Werke erfolgreich veröffentlichen.
1892 trennte Serao sich von ihrem Ehemann und gründete in Neapel alleine den Il Mattino, eine der erfolgreichsten Tageszeitungen in Süditalien seiner Zeit.
Am 25. Juli 1927 starb Matilde Serao in Neapel an einem Herzinfarkt und fand dort auch ihre letzte Ruhestätte.
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