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WO2023249041A1 - 保形性向上用酵素剤 - Google Patents

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Publication number
WO2023249041A1
WO2023249041A1 PCT/JP2023/022885 JP2023022885W WO2023249041A1 WO 2023249041 A1 WO2023249041 A1 WO 2023249041A1 JP 2023022885 W JP2023022885 W JP 2023022885W WO 2023249041 A1 WO2023249041 A1 WO 2023249041A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
amylase
vegetable
maltotriose
lipase
ice cream
Prior art date
Application number
PCT/JP2023/022885
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
モニカ ヘンリー
啓太 奥田
Original Assignee
天野エンザイム株式会社
アマノ エンザイム ユーエスエー カンパニー，リミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 天野エンザイム株式会社, アマノ エンザイム ユーエスエー カンパニー，リミテッド filed Critical 天野エンザイム株式会社
Priority to CN202380042631.7A priority Critical patent/CN119173153A/zh
Priority to JP2024529045A priority patent/JPWO2023249041A1/ja
Priority to EP23827224.9A priority patent/EP4544918A1/en
Publication of WO2023249041A1 publication Critical patent/WO2023249041A1/ja

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    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
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    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
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    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2425—Beta-amylase (3.2.1.2)

Definitions

  • the present invention relates to an enzyme agent for improving the shape retention of vegetable ice cream. More specifically, the present invention provides an enzyme agent for improving shape retention for improving the quality of vegetable ice cream, a vegetable ice cream, a method for producing vegetable ice cream, and a shape retention method for vegetable ice cream. Concerning methods for improving sex.
  • Plant-based ice cream represents an important category in the milk substitute market and continues to be an area of focus. In its production, it is standard to mix and emulsify a protein source and a lipid source with vegetable milk as necessary.
  • Patent Document 1 discloses a manufacturing technology that reduces the amount of vegetable protein used, with the aim of improving the flavor of vegetable ice cream that minimizes animal-derived components such as milk components.
  • plant-based foods and drinks have been attracting attention in recent years due to the growing health consciousness, but plant-based ice cream has a fundamentally different composition from milk ice cream, so it still needs to be improved to achieve satisfactory characteristics.
  • shape retention is related to product stability and is an important property that is desired to be further improved in order to prevent vegetable ice cream from melting or deforming due to heat shock during storage.
  • the main purpose of this technology is to provide a technology that improves the shape retention of vegetable ice cream.
  • the inventors of the present application have conducted extensive research into techniques for improving the shape retention of vegetable ice cream. As a result, the present inventors have found that by allowing maltotriose-producing amylase, lipase, or ⁇ -amylase to act on vegetable materials, We have discovered that the shape retention of ice cream can be improved, and have completed this technology.
  • the present technology first provides an enzyme preparation for improving the shape retention of vegetable ice cream, which contains one or more enzymes selected from the group consisting of maltotriose-producing amylase, lipase, and ⁇ -amylase.
  • the present technology provides a vegetable ice cream in which the enzyme agent for improving shape retention according to the present technology is used.
  • This technology further includes a maltotriose-generating amylase action step in which maltotriose-generating amylase acts on a vegetable carbohydrate-containing material, a lipase action step in which lipase acts on a vegetable oil-containing material, and a vegetable carbohydrate-containing material.
  • a method for producing vegetable ice cream and a method for improving the shape retention of vegetable ice cream including one or more steps selected from the ⁇ -amylase action step of causing ⁇ -amylase to act on the ice cream.
  • Enzyme preparation for improving shape retention contains as an active ingredient one or more enzymes selected from the group consisting of maltotriose-producing amylase, lipase, and ⁇ -amylase. Further, it is also possible to contain ⁇ -amylase, monoglyceride, diglyceride, and other components as necessary. Each component will be explained in detail below.
  • Maltotriose-producing amylase that can be used in the present technology is an enzyme that acts on starch and has the activity of mainly producing maltotriose.
  • the maltotriose-producing amylase that can be used in the present technology may be an enzyme that additionally has other functions as long as it has the activity of producing maltotriose.
  • the shape retention of the produced vegetable ice cream can be improved by allowing maltotriose-generating amylase to act on the vegetable material.
  • the origin of the maltotriose-producing amylase that can be used in the present technology is not particularly limited, but examples include Streptomyces genus (Streptomyces griseus, etc.), Bacillus genus (Bacillus subtilis, etc.), microorganisms disclosed in JP-A-03-251173, Bacterium sp., etc., and maltotriose-producing amylase derived from organisms of the genus Cellulosimicrobium disclosed in WO2020/090734. These maltotriose-producing amylases may be used alone or in combination.
  • maltotriose-producing amylases it is preferable to select maltotriose-producing amylases derived from organisms of the genus Microbacterium from the viewpoint of further enhancing the shape retention of vegetable ice cream. More preferably, a triose-producing amylase is selected.
  • Microbacterium sp. biologically derived maltotriose-producing amylase refers to the maltotriose-producing amylase produced by microorganisms (which may be wild strains or mutant strains) classified as Microbacterium sp. It means amylase or maltotriose-producing amylase obtained by genetic engineering using the maltotriose-producing amylase gene. Therefore, a recombinant produced by a host microorganism into which a maltotriose-producing amylase gene obtained from a Microbacterium sp. ”.
  • the maltotriose-producing amylase used in the present technology can be prepared from the culture solution of the microorganism from which the above-mentioned maltotriose-producing amylase is derived.
  • a specific preparation method includes a method of recovering maltotriose-producing amylase from the culture solution or bacterial cells of the above-mentioned microorganism.
  • the enzyme when using a maltotriose-producing amylase-secreting microorganism, the enzyme can be isolated and/or purified after the bacterial cells are recovered from the culture solution by filtration, centrifugation, etc., if necessary.
  • the enzyme when using maltotriose-producing amylase non-secreting microorganisms, if necessary, after collecting the bacterial cells from the culture solution, the bacterial cells are crushed by pressure treatment, ultrasonication, etc. to expose the enzyme. After that, the enzyme can be isolated and/or purified.
  • any known protein separation and/or purification method can be used without particular limitation, such as centrifugation method, UF concentration method, salting out method, ion exchange resin, etc. Examples include various chromatography methods using .
  • the isolated and/or purified enzyme can be powdered by a drying method such as freeze drying or vacuum drying, and may be powdered using an appropriate excipient and/or drying aid in the drying method. You can also do that.
  • the isolated and/or purified enzyme can be liquefied by adding appropriate additives and sterilizing it by filtration.
  • a commercially available product can also be used as the maltotriose-producing amylase, and a preferred example of a commercially available product is maltotriose-producing amylase manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.
  • the content of maltotriose-generating amylase in the shape retention improving enzyme agent according to the present technology can be freely set as long as it does not impair the effects of the present technology.
  • the content of maltotriose-generating amylase can be set to, for example, 0.05 U or more per 1 g of the vegetable carbohydrate-containing material on which maltotriose-generating amylase acts, from the viewpoint of further improving shape retention. , it can be set to preferably 0.3U or more, more preferably 0.6U or more, still more preferably 3U or more, even more preferably 6U or more.
  • the content of maltotriose-producing amylase can be set to, for example, 0.08 U or more per 1 g of polysaccharide (preferably starch) on which maltotriose-producing amylase acts, thereby improving shape retention. From the viewpoint of further increasing it, it can be set to preferably 0.5 U or more, more preferably 1 U or more, still more preferably 5 U or more, even more preferably 10 U or more.
  • the upper limit of the content of maltotriose-producing amylase is not particularly limited as long as it does not impair the effects of the present technology, but for example, 250 U or less, 50 U per 1 g of vegetable carbohydrate-containing material on which maltotriose-producing amylase is applied. Below, it can be set to 25U or less, 20U or less, 15U or less, or 10U or less.
  • the upper limit of the content of maltotriose-producing amylase is, for example, 400 U or less, 80 U or less, 40 U or less, 30 U or less, 20 U or less, per 1 g of polysaccharide (preferably starch) on which maltotriose-producing amylase acts. , or can be set to 15U or less.
  • the activity of maltotriose-producing amylase is a value defined by the method below.
  • [Definition of activity of maltotriose-producing amylase] Add an appropriate amount of enzyme to 0.5 ml of 2% soluble starch dissolved in 0.1 M phosphate buffer (pH 7.0), and react in a total volume of 1.0 ml at 40°C to generate maltotriose and other Quantify reducing sugars using the Somogyi-Nelson method. Under these conditions, the amount of enzyme that produces reducing sugar equivalent to 1 micromole of glucose per minute is defined as 1 unit (1U).
  • Lipase Lipase that can be used in the present technology is an enzyme that has the activity of hydrolyzing triglyceride to produce diglyceride, monoglyceride, and fatty acid.
  • the lipase that can be used in the present technology may be an enzyme that also has other functions as long as it has the activity of hydrolyzing triglycerides to produce diglycerides, monoglycerides, and fatty acids.
  • the origin of the lipase that can be used in the present technology is not particularly limited, but examples thereof include lipases derived from organisms of the genus Aspergillus, Candida, Rhizopus, Mucor, and Penicillium. These lipases may be used alone or in combination. Among these lipases, from the viewpoint of further enhancing the shape retention of vegetable ice cream, it is preferable to select a lipase derived from an organism of the genus Penicillium, and a lipase derived from an organism of the genus Penicillium is preferably selected. is more preferable.
  • lipase derived from Penicillium roqueforti refers to lipase produced by a microorganism classified as Penicillium roqueforti (which may be a wild strain or a mutant strain), or a lipase that utilizes a lipase gene. This means that it is a lipase obtained by genetic engineering. Therefore, a recombinant produced by a host microorganism into which a lipase gene obtained from a Penicillium roqueforti organism (or a gene modified from that gene) is introduced also falls under "lipase derived from a Penicillium roqueforti organism.”
  • the lipase used in this technology can be prepared from the culture solution of the microorganism from which the above lipase is derived.
  • a specific preparation method includes a method of recovering lipase from the culture solution or bacterial cells of the above-mentioned microorganism.
  • the enzyme can be isolated and/or purified after the bacterial cells are recovered from the culture fluid by filtration, centrifugation, etc., if necessary.
  • non-lipase-secreting microorganisms if necessary, after collecting the bacterial cells from the culture solution in advance, crushing the bacterial cells by pressure treatment, ultrasonication, etc. to expose the enzyme.
  • the isolated and/or purified enzyme can be powdered by a drying method such as freeze drying or vacuum drying, and may be powdered using an appropriate excipient and/or drying aid in the drying method. You can also do that. Furthermore, the isolated and/or purified enzyme can be liquefied by adding appropriate additives and sterilizing it by filtration.
  • a commercially available product can also be used as the lipase, and a preferred example of a commercially available product is a lipase derived from an organism of the genus Penicillium manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.
  • the content of lipase in the enzyme agent for improving shape retention according to the present technology can be freely set as long as it does not impair the effects of the present technology.
  • the lipase content can be set to, for example, 0.01 U or more per 1 g of the vegetable oil-containing material on which the lipase is applied, and from the viewpoint of further improving shape retention, it is preferably 0.1 U or more. , more preferably 0.4U or more, still more preferably 1U or more, even more preferably 2U or more.
  • the lipase content can be set to, for example, 0.09 U or more per 1 g of fat or oil on which the lipase is applied, and from the viewpoint of further improving shape retention, it is preferably 0.4 U or more, and more. It can be set to preferably 0.9U or more, more preferably 1U or more, even more preferably 2U or more.
  • the upper limit of the content of lipase is not particularly limited as long as it does not impair the effect of the present technology, but for example, 100 U or less, 20 U or less, 15 U or less, 10 U or less, 5 U It can be set to 3U or less.
  • the upper limit of the content of lipase can be set to, for example, 100 U or less, 20 U or less, 15 U or less, 10 U or less, 5 U or less, or 3 U or less per 1 g of fat or oil on which lipase is applied.
  • the lipase activity is a value defined by the method below.
  • [Definition of lipase activity] Olive oil 45g and emulsion (polyvinyl alcohol (completely saponified, degree of saponification 98.8 ⁇ 0.2) 18.5g/L, polyvinyl alcohol (partially saponified, degree of saponification 88.8 ⁇ 1.0) 1.5g/L L)
  • emulsion polyvinyl alcohol (completely saponified, degree of saponification 98.8 ⁇ 0.2) 18.5g/L
  • polyvinyl alcohol partially saponified, degree of saponification 88.8 ⁇ 1.0
  • ⁇ -amylase ⁇ -amylase that can be used in the present technology is an exo-type enzyme that sequentially degrades ⁇ -1,4 glucosidic bonds using maltose units from the non-reducing end of starch.
  • ⁇ -amylase that can be used in the present technology as long as it has the above-mentioned ⁇ -amylase activity, it may be an enzyme that also has other actions.
  • the shape retention of the produced vegetable ice cream can be improved by allowing ⁇ -amylase to act on the vegetable material.
  • ⁇ -amylase that can be used in the present technology is not particularly limited, but examples include Bacillus flexus, Bacillus megaterium, Bacillus polymyxa, Bacillus circulans, etc., Pseudomonas, and Streptomyces. Examples include ⁇ -amylase derived from living organisms. These ⁇ -amylases may be used singly or in combination. Among these ⁇ -amylases, ⁇ -amylase derived from organisms of the genus Bacillus is preferably selected from the viewpoint of further enhancing the shape retention of vegetable ice cream, and ⁇ -amylase derived from organisms of the genus Bacillus is selected. More preferably, amylase is selected.
  • ⁇ -amylase derived from Bacillus flexus refers to ⁇ -amylase produced by a microorganism classified as Bacillus flexus (which may be a wild strain or a mutant strain), or ⁇ -amylase produced by a microorganism classified as Bacillus flexus. It means ⁇ -amylase obtained by genetic engineering using the amylase gene. Therefore, a recombinant produced by a host microorganism into which a ⁇ -amylase gene (or a modified gene) obtained from a Bacillus flexus organism has been introduced also falls under " ⁇ -amylase derived from a Bacillus flexus organism.”
  • the ⁇ -amylase used in the present technology can be prepared from the culture solution of the microorganism from which the ⁇ -amylase is derived.
  • a specific preparation method includes a method of recovering ⁇ -amylase from the culture solution or cells of the above-mentioned microorganism.
  • the enzyme when using a ⁇ -amylase-secreting microorganism, the enzyme can be isolated and/or purified after the bacterial cells have been recovered from the culture solution by filtration, centrifugation, etc., if necessary.
  • the enzyme when using a ⁇ -amylase-secreting microorganism, the enzyme can be isolated and/or purified after the bacterial cells have been recovered from the culture solution by filtration, centrifugation, etc., if necessary.
  • a microorganism that does not secrete ⁇ -amylase after collecting the bacterial cells from the culture solution, crush the bacterial cells by pressure treatment, ultrasonication, etc. to expose the enzyme.
  • the enzyme can be separated and/or purified.
  • any known protein separation and/or purification method can be used without particular limitation, such as centrifugation method, UF concentration method, salting out method, ion exchange resin, etc. Examples include various chromatography methods using .
  • the isolated and/or purified enzyme can be powdered by a drying method such as freeze drying or vacuum drying, and may be powdered using an appropriate excipient and/or drying aid in the drying method. You can also do that.
  • the isolated and/or purified enzyme can be liquefied by adding appropriate additives and sterilizing it by filtration.
  • microorganism-derived ⁇ -amylase not only the above-mentioned microorganism-derived ⁇ -amylase but also plant-derived ⁇ -amylase can be used.
  • plant-derived ⁇ -amylase examples include ⁇ -amylase derived from plants such as soybean, wheat, and barley.
  • ⁇ -amylase derived from an organism derived from Bacillus flexus manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.
  • the content of ⁇ -amylase in the enzyme agent for improving shape retention according to the present technology can be freely set as long as it does not impair the effects of the present technology.
  • the content of ⁇ -amylase can be set to, for example, 0.01 U or more per 1 g of the vegetable carbohydrate-containing material on which ⁇ -amylase acts, and from the viewpoint of further improving shape retention, it is preferable.
  • the content of ⁇ -amylase can be set to, for example, 0.016 U or more per 1 g of polysaccharide (preferably starch) on which ⁇ -amylase acts, and from the viewpoint of further improving shape retention.
  • the upper limit of the content of ⁇ -amylase is not particularly limited as long as it does not impair the effect of the present technology, but for example, 100 U or less, 50 U or less, 10 U or less per 1 g of the vegetable carbohydrate-containing material on which ⁇ -amylase is to act. , preferably 7.5U or less, more preferably 4.0U or less, still more preferably 2.5U or less.
  • the upper limit of the content of ⁇ -amylase is, for example, 160 U or less, 80 U or less, 16 U or less, preferably 12 U or less, more preferably 6 It can be set to .4U or less, more preferably 4.0U or less.
  • the activity of ⁇ -amylase is a value defined by the method below. [Definition of ⁇ -amylase activity] Using potato starch as a substrate, the amount of enzyme that causes an increase in reducing power equivalent to 1 mg of glucose per minute is defined as 1 unit (1 U).
  • ⁇ -Amylase ⁇ -amylase can be used in this technology.
  • ⁇ -amylase that can be used in the present technology is an enzyme that acts on starch and mainly hydrolyzes ⁇ -1,4 glycosidic bonds.
  • ⁇ -amylase that can be used in the present technology is not particularly limited, but examples include Aspergillus genus (e.g., Aspergillus oryzae, Aspergillus niga, etc.), Bacillus genus (e.g., Bacillus amyloliquei), Examples include ⁇ -amylases derived from organisms of the genus Bacillus, such as Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, etc., preferably ⁇ -amylases derived from organisms of the genus Bacillus, and more preferably ⁇ -amylases derived from organisms of the genus Bacillus. Examples include ⁇ -amylase derived from Bacillus amyloliquefaciens.
  • Aspergillus genus e.g., Aspergillus oryzae, Aspergillus niga, etc.
  • Bacillus genus e.g., Bacillus amylolique
  • the ⁇ -amylase that can be used in the present technology can be prepared from the culture solution of the microorganism from which the ⁇ -amylase is derived. As specific preparation methods, it can be easily prepared by culturing ⁇ -amylase-producing bacteria and separating ⁇ -amylase using known means, or by using genetic recombination technology.
  • ⁇ -amylase derived from the organism Bacillus amyloliquefaciens manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.
  • the content of ⁇ -amylase in the enzyme agent for improving shape retention according to the present technology can be freely set as long as it does not impair the effects of the present technology.
  • the content of ⁇ -amylase can be set to, for example, 0.5 U or more per 1 g of the vegetable carbohydrate-containing material on which ⁇ -amylase acts, and from the viewpoint of further improving shape retention, it is preferable.
  • the content of ⁇ -amylase can be set to, for example, 0.8 U or more per 1 g of polysaccharide (preferably starch) on which ⁇ -amylase acts, and from the viewpoint of further improving shape retention.
  • the upper limit of the content of ⁇ -amylase is not particularly limited as long as it does not impair the effects of the present technology, but for example, 500 U or less, 100 U or less, 50 U or less per 1 g of the vegetable carbohydrate-containing material on which ⁇ -amylase acts. , preferably 30U or less, more preferably 20U or less, still more preferably 15U or less.
  • the upper limit of the content of ⁇ -amylase is, for example, 800 U or less, 160 U or less, 80 U or less, preferably 40 U or less, more preferably 30 U, per 1 g of polysaccharide (preferably starch) on which ⁇ -amylase acts.
  • it can be more preferably set to 20U or less.
  • the ⁇ -amylase activity is a value defined by the method below.
  • [Definition of ⁇ -amylase activity] It is measured by iodine reaction using potato starch as a substrate. That is, the activity of amylase is determined by performing an enzymatic reaction using potato starch as a substrate in a conventional manner, and determining the amount of enzyme that reduces the coloring caused by the iodine reaction by 10% in 1 minute as 1 unit (1 U).
  • the content ratio is determined based on the above-mentioned content of each enzyme.
  • the content of amylase per 1 U of ⁇ -amylase is preferably 0.001 U or more, more preferably 0.01 U or more, even more preferably 0.05 U or more, even more preferably 0.08 U or more, and even more preferably 0.01 U or more. It can be set to 1U or more, even more preferably 0.2U or more, even more preferably 0.5U or more.
  • the upper limit of the content range per 1 U of ⁇ -amylase of maltotriose-producing amylase can be set, for example, to 100 U or less, and from the viewpoint of further enhancing the shape retention improvement effect, preferably 20 U or less, more preferably can be set to 10 U or less, more preferably 5 U or less, even more preferably 4 U or less, even more preferably 3 U or less, even more preferably 2 U or less, even more preferably 1 U or less.
  • the content ratio is determined based on the above-mentioned content of each enzyme.
  • the content per 1 U of amylase is preferably 0.001 U or more, more preferably 0.01 U or more, even more preferably 0.05 U or more, even more preferably 0.08 U or more, even more preferably 0.1 U or more, and More preferably, it can be set to 0.12U or more.
  • the upper limit of the content range of ⁇ -amylase per 1 U of ⁇ -amylase can be set to, for example, 100 U or less, and from the viewpoint of further enhancing the shape retention improvement effect, it is preferably 20 U or less, more preferably 10 U. Below, it can be set to more preferably 5.0 U or less, even more preferably 2.0 U or less, even more preferably 1 U or less, even more preferably 0.5 U or less, even more preferably 0.2 U or less.
  • Monoglyceride, diglyceride can be used in the enzyme agent for improving shape retention according to the present technology.
  • monoglyceride and/or diglyceride By using monoglyceride and/or diglyceride, the effect of improving the shape retention of the produced vegetable ice cream can be further enhanced.
  • one or more monoglycerides and/or diglycerides that can be used in the food field can be freely selected as long as the effects of the present technology are not impaired.
  • monoglycerides include glycerin caprylate, glycerin caprate, glycerin laurate, glycerin stearate, glycerin oleate, and glycerin behenate.
  • diglycerides include monoglycerides in which two of the same or different fatty acids are bonded.
  • the content of monoglyceride and/or diglyceride in the enzyme agent for improving shape retention according to the present technology can be freely set as long as it does not impair the effects of the present technology.
  • the content of monoglyceride and/or diglyceride can be set to, for example, 0.5 parts by weight or more based on 100 parts by weight of vegetable oil used in the vegetable ice cream to be produced, thereby further improving shape retention. From this point of view, it can be set to preferably 1 part by weight or more, more preferably 2 parts by weight or more.
  • the upper limit of the content of monoglyceride and/or diglyceride in the enzyme agent for improving shape retention according to the present technology is not particularly limited as long as it does not impair the effects of the present technology, but the vegetable oil and fat used in the vegetable ice cream to be manufactured are 100% For example, it can be set to 20 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less, more preferably 8 parts by weight or less.
  • the enzyme agent for improving shape retention according to the present technology may contain one or more enzymes selected from the group consisting of the above-mentioned maltotriose-generating amylase, lipase, and ⁇ -amylase. , may be composed only of one or more enzymes selected from the group consisting of the above-mentioned maltotriose-producing amylase, lipase, and ⁇ -amylase, or may be composed of the above-mentioned ⁇ -amylase, monoglyceride, diglyceride, etc. in combination. Alternatively, one or more other components can be freely selected and included as long as the effects of the present technology are not impaired.
  • components that can be used include, for example, excipients, pH adjusters, colorants, flavoring agents, disintegrants, lubricants, stabilizers, and the like that are commonly used in formulations. Furthermore, components having functions that are known or that will be discovered in the future may be used in combination depending on the purpose.
  • Plant-based ice cream The plant-based ice cream according to the present technology is produced using the above-mentioned enzyme agent for improving shape retention according to the present technology.
  • the vegetable ice cream according to the present technology is produced by treating the vegetable material with one or more enzymes selected from the group consisting of maltotriose-producing amylase, lipase, and ⁇ -amylase in the manufacturing process.
  • one or more enzymes selected from the group consisting of maltotriose-producing amylase, lipase, and ⁇ -amylase in the manufacturing process.
  • shape retention is improved compared to vegetable ice cream manufactured without using the shape retention improving enzyme agent according to the present technology. It is characterized by high stability during storage and difficulty in dissolving.
  • the vegetable ice cream according to the present technology includes a maltotriose-generating amylase-treated vegetable carbohydrate-containing material, a lipase-treated vegetable oil-containing material, and a ⁇ -amylase-treated vegetable carbohydrate-containing material. It is characterized by containing one or more materials selected from.
  • the content of maltotriose contained in the vegetable ice cream according to the present technology includes, for example, 10 parts by weight or more, preferably 15 parts by weight, per 100 parts by weight of carbohydrates derived from the vegetable carbohydrate-containing material. More preferably, the amount is 20 parts by weight or more, and still more preferably 30 parts by weight or more.
  • the upper limit of the content of maltotriose contained in the vegetable ice cream according to the present technology includes, for example, 60 parts by weight or less per 100 parts by weight of carbohydrates derived from vegetable carbohydrate-containing materials, and is preferably 60 parts by weight or less.
  • the amount may be 50 parts by weight or less, more preferably 45 parts by weight or less, even more preferably 40 parts by weight or less, even more preferably 35 parts by weight or less.
  • the content of maltotriose contained in the vegetable ice cream according to the present technology includes, for example, 0.1 parts by weight or more, preferably 0.3 parts by weight or more, per 100 parts by weight of the vegetable ice cream. More preferably, it is 1 part by weight or more, and still more preferably 1.5 parts by weight or more.
  • the upper limit of the content of maltotriose contained in the vegetable ice cream according to the present technology includes, for example, 10 parts by weight or less, preferably 5 parts by weight or less, and more preferably 5 parts by weight or less per 100 parts by weight of the vegetable ice cream. Preferably it is 4 parts by weight or less, more preferably 3 parts by weight or less, even more preferably 2.5 parts by weight or less.
  • the content of monoglyceride and/or diglyceride contained in the vegetable ice cream of the present invention includes, for example, 1 part by weight or more per 100 parts by weight of fat or oil, preferably 2 parts by weight or more, more preferably 5 parts by weight or more. , more preferably 6 parts by weight or more.
  • the upper limit of the content of monoglycerides and/or diglycerides contained in the vegetable ice cream according to the present technology is, for example, 70% per 100 parts by weight of fats and oils. Parts by weight or less, 50 parts by weight or less, 30 parts by weight or less, 20 parts by weight or less, 15 parts by weight or less, and 10 parts by weight or less.
  • the content of monoglyceride and/or diglyceride contained in the vegetable ice cream of the present invention includes, for example, 0.1 part by weight or more, preferably 0.2 part by weight or more, per 100 parts by weight of the vegetable ice cream. More preferably, the amount is 0.3 parts by weight or more, and even more preferably 0.35 parts by weight or more.
  • the upper limit of the monoglyceride and/or diglyceride content contained in the vegetable ice cream according to the present technology is, for example, 100 parts by weight of the vegetable ice cream. Examples include 5 parts by weight or less, 3 parts by weight or less, 2 parts by weight or less, 1 part by weight or less, 0.8 parts by weight or less, or 0.5 parts by weight or less.
  • the method for producing plant-based food and beverages and the method for improving shape retention according to the present technology include maltotriose production in which maltotriose-producing amylase is applied to a vegetable carbohydrate-containing material. At least one or more steps selected from an ose-generating amylase action step, a lipase action step in which lipase acts on a vegetable oil-containing material, and a ⁇ -amylase action step in which ⁇ -amylase acts on a vegetable carbohydrate-containing material are carried out. It's a method.
  • an ⁇ -amylase action step in which ⁇ -amylase is applied to the vegetable carbohydrate-containing material, a monoglyceride and/or diglyceride addition step in which monoglyceride and/or diglyceride is added, a recovery step, etc. can be further carried out.
  • a monoglyceride and/or diglyceride addition step in which monoglyceride and/or diglyceride is added can be further carried out.
  • a recovery step, etc. can be further carried out depending on the type of plant-based ice cream.
  • each process etc. will be explained in detail.
  • a vegetable carbohydrate-containing material and a vegetable oil-containing material are used as the vegetable materials used in the method for producing a vegetable food or beverage and the method for improving shape retention according to the present technology.
  • the vegetable carbohydrate-containing material that can be used in the present technology is not particularly limited as long as it contains plant-derived carbohydrates, but typical examples include grains (oats, etc.). Examples include materials obtained by mechanically crushing wheat, etc.) using a mill or the like.
  • the carbohydrate preferably contains polysaccharides (starch, dextrin, etc.).
  • vegetable carbohydrate-containing material and the vegetable oil-containing material described below may be different materials or may be the same material.
  • the shape of the vegetable carbohydrate-containing material is also not limited as long as it does not impair the effects of the present technology, and includes, for example, powder, flakes, and granules.
  • the content of carbohydrates (preferably starch) contained in the vegetable carbohydrate-containing material is not particularly limited as long as it does not impair the effectiveness of the present technology.
  • the amount is 20% by weight or more, and from the viewpoint of further improving shape retention, it is preferably 50% by weight or more, 55% by weight or more, more preferably 60% by weight or more, and still more preferably 65% by weight or more. .
  • the upper limit of the content of carbohydrates (preferably starch) contained in the vegetable carbohydrate-containing material is not particularly limited as long as it does not impair the effects of the present technology, and is, for example, 95% by weight or less, preferably 90% by weight or less, or more. Preferably it is 85% by weight or less, more preferably 80% by weight or less.
  • the origin of vegetable carbohydrates is not particularly limited as long as it does not impair the effects of this technology, and examples include oats, barley (non-glutinous barley, glutinous barley), rice, wheat, rye, buckwheat, millet, millet, and teff.
  • quinoa, corn, and other grains adzuki beans, fava beans, peas, chickpeas, mung beans, lupine beans, kidney beans, and other grains; almonds, cashews, hazelnuts, pecans, macadamia nuts, pistachios, walnuts, Brazil nuts, peanuts, Seeds and seeds such as coconut, pili nuts, chestnuts, sesame seeds, industrial hemp seeds, canary seeds, flaxseeds, and pine nuts; algae, etc., and one type of these vegetable carbohydrates may be used alone, You may use multiple types in combination. Among these, in the present technique, it is particularly preferable to use a material containing carbohydrates derived from grains, and more preferably to use a material containing carbohydrates derived from oats.
  • the vegetable oil-containing material that can be used in this technology is not particularly limited as long as it contains plant-derived oil, but as a typical example, it is physically made from plant raw materials. Examples include fats and oils obtained through various purification steps after being extracted by compression, extraction with a solvent, or a combination thereof.
  • the shape of the vegetable oil-containing material is not limited as long as it does not impair the effects of the present technology, and examples thereof include solid and liquid.
  • the content of fats and oils contained in the vegetable oil-containing material (based on the weight of the vegetable oil-containing material used) is not particularly limited as long as it does not impair the effects of the present technology, but for example, it may be 20% by weight or more. From the viewpoint of further improving shape retention, the content is preferably 60% by weight or more, more preferably 80% by weight or more, and still more preferably 95% by weight or more.
  • the upper limit of the content of fats and oils contained in the vegetable oil-containing material is not particularly limited as long as it does not impair the effects of the present technology, but examples include 99% by weight or less, 97% by weight or less, or 95% by weight or less.
  • the origin of the vegetable oil is not particularly limited as long as it does not impair the effects of the present technology, and examples include coconut oil, soybean oil, rapeseed oil, rice oil, corn oil, sunflower oil, cottonseed oil, peanut oil, safflower oil, Examples include olive oil, palm oil, palm kernel oil, coconut oil, cocoa butter, etc., and one type of these vegetable oils and fats may be used alone, or a plurality of types may be used in combination. Among these, in this technique, it is particularly preferable to use a material containing coconut oil.
  • the maltotriose-generating amylase action step is a step in which maltotriose-generating amylase is allowed to act on a vegetable carbohydrate-containing material.
  • the amount of maltotriose-generating amylase added in the maltotriose-generating amylase action step can be freely set as long as it does not impair the effects of the present technology.
  • the specific amount of maltotriose-generating amylase added in the present technology is the same as the content of maltotriose-generating amylase in the above-mentioned enzyme agent for improving shape retention, so a description thereof will be omitted here.
  • the pH, temperature, action time, etc. can be set depending on the physicochemical properties such as the optimum pH, stable pH range, optimum temperature, and temperature stability of the maltotriose-producing amylase used.
  • the pH can be set, for example, to pH 5 to 9, preferably pH 6 to 8, more preferably pH 6.5 to 7.5.
  • the temperature can be set to, for example, 20 to 80°C, preferably 30 to 70°C, more preferably 40 to 60°C.
  • the action time can be set, for example, from 5 minutes to 24 hours, preferably from 15 minutes to 12 hours, and more preferably from 30 minutes to 2 hours. Note that the optimal reaction conditions can be determined through preliminary experiments.
  • a vegetable carbohydrate-containing material that has undergone the maltotriose-producing amylase action step has an increased maltotriose content due to the action of maltotriose-producing amylase.
  • the content of maltotriose contained in a vegetable carbohydrate-containing material that has undergone a maltotriose-generating amylase action step (hereinafter also referred to as "a maltotriose-generating amylase-treated vegetable carbohydrate-containing material”) is, for example, 10 parts by weight or more per 100 parts by weight. Preferably it is 15 parts by weight or more, more preferably 20 parts by weight or more, even more preferably 30 parts by weight or more.
  • the upper limit of the content of maltotriose contained in the vegetable carbohydrate-containing material that has undergone the maltotriose-generating amylase action step is, for example, 60 parts by weight or less per 100 parts by weight of carbohydrates. Preferably it is 50 parts by weight or less, more preferably 45 parts by weight or less, even more preferably 40 parts by weight or less, even more preferably 35 parts by weight or less.
  • the lipase action step is a step in which lipase is allowed to act on a vegetable oil-containing material.
  • the amount of lipase added in the lipase action step can be freely set as long as the effect of the present technology is not impaired.
  • the specific amount of lipase added in the present technology is the same as the content of lipase in the above-mentioned enzyme agent for improving shape retention, so a description thereof will be omitted here.
  • the pH, temperature, action time, etc. can be set depending on the physicochemical properties of the lipase used, such as the optimal pH, stable pH range, optimal temperature, and temperature stability.
  • the pH can be set, for example, to pH 5 to 9, preferably pH 6 to 8, more preferably pH 6.5 to 7.5.
  • the temperature can be set to, for example, 20 to 80°C, preferably 30 to 70°C, more preferably 40 to 60°C.
  • the action time can be set, for example, from 5 minutes to 24 hours, preferably from 10 minutes to 12 hours, and more preferably from 20 minutes to 1 hour. Note that the optimal reaction conditions can be determined through preliminary experiments.
  • the vegetable oil-containing material that has undergone the lipase action step has an increased monoglyceride and/or diglyceride content due to the action of the lipase.
  • the content of monoglyceride and/or diglyceride contained in the vegetable oil-containing material that has undergone the lipase action step (hereinafter also referred to as "lipase-treated vegetable oil-containing material") is, for example, 0.6 weight parts per 100 parts by weight of oil or fat. parts or more, preferably 0.7 parts by weight or more, more preferably 0.8 parts by weight or more, even more preferably 0.9 parts by weight or more, even more preferably 1 part by weight or more.
  • the upper limit of the monoglyceride and/or diglyceride content contained in the vegetable oil-containing material that has undergone the lipase action step is, for example, 10 parts by weight or less, 8 parts by weight or less, 6 parts by weight or less per 100 parts by weight of fat or oil. , 4 parts by weight or less, 3 parts by weight or less, or 2 parts by weight or less.
  • the acid value of the vegetable oil-containing material that has undergone the lipase action process increases due to the action of the lipase.
  • the acid value of the vegetable oil-containing material that has undergone the lipase action step is, for example, 1.1 or more, preferably 1.2 or more, more preferably 1.3 or more, even more preferably 1.5 or more, and more. More preferably, it is 1.7 or more.
  • the upper limit of the acid value contained in the vegetable oil-containing material that has undergone the lipase action step is, for example, 5 or less, preferably 4 or less, more preferably 3 or less, and still more preferably 2 or less.
  • Either one or both of the maltotriose-generating amylase action step and the lipase action step may be performed.
  • the order of the maltotriose-generating amylase action step and the lipase action step is not particularly limited.
  • vegetable ice cream is produced by performing each step separately and mixing a vegetable carbohydrate-containing material that has undergone a maltotriose-generating amylase action step and a vegetable oil-containing material that has undergone a lipase action step. be able to.
  • a method of applying lipase to a material containing vegetable carbohydrates and vegetable oil after applying maltotriose-generating amylase and a method of applying lipase to a material containing vegetable carbohydrates and vegetable oil.
  • Examples include a method in which maltotriose-generating amylase is allowed to act, and a method in which maltotriose-generating amylase and lipase are allowed to act simultaneously on a material containing vegetable carbohydrates and vegetable oils.
  • this technology performs each step separately and mixes a vegetable carbohydrate-containing material that has undergone a maltotriose-generating amylase action step and a vegetable oil-containing material that has undergone a lipase action step. It is preferable to adopt a method for producing ice cream.
  • the ⁇ -amylase action step is a step in which ⁇ -amylase is allowed to act on a vegetable carbohydrate-containing material.
  • the amount of ⁇ -amylase added in the ⁇ -amylase action step can be freely set as long as it does not impair the effects of the present technology.
  • the specific amount of ⁇ -amylase added in the present technology is the same as the content of ⁇ -amylase in the above-mentioned enzyme agent for improving shape retention, so a description thereof will be omitted here.
  • the pH, temperature, action time, etc. can be set depending on the physicochemical properties of the ⁇ -amylase used, such as the optimum pH, stable pH range, optimum temperature, and temperature stability.
  • the pH can be set, for example, to pH 5 to 9, preferably pH 6 to 8, more preferably pH 6.5 to 7.5.
  • the temperature can be set to, for example, 20 to 80°C, preferably 30 to 70°C, more preferably 40 to 60°C.
  • the action time can be set, for example, from 5 minutes to 24 hours, preferably from 15 minutes to 12 hours, and more preferably from 30 minutes to 2 hours. Note that the optimal reaction conditions can be determined through preliminary experiments.
  • the ⁇ -amylase action step is a step in which ⁇ -amylase is allowed to act on a vegetable carbohydrate-containing material. By allowing ⁇ -amylase to act on the vegetable carbohydrate-containing material, starch in the vegetable carbohydrate-containing material can be liquefied.
  • the ⁇ -amylase action step is not an essential step; for example, by using a vegetable carbohydrate-containing material that has been previously treated with ⁇ -amylase, the same effect as the ⁇ -amylase action step can be obtained. You can also get it.
  • the amount of ⁇ -amylase added in the ⁇ -amylase action step can be freely set as long as it does not impair the effects of the present technology.
  • the specific amount of ⁇ -amylase added in the present technology is the same as the content of ⁇ -amylase in the above-mentioned enzyme agent for improving shape retention, so a description thereof will be omitted here.
  • the pH, temperature, action time, etc. can be set depending on the physicochemical properties of the ⁇ -amylase used, such as the optimum pH, stable pH range, optimum temperature, and temperature stability.
  • the pH can be set, for example, to pH 5.0 to 8.0, preferably pH 5.5 to 7.5, more preferably pH 6.0 to 7.0.
  • the temperature can be set to, for example, 30°C to 80°C, preferably 40°C to 75°C, more preferably 50°C to 70°C.
  • the action time can be set, for example, from 10 minutes to 12 hours, preferably from 30 minutes to 6 hours, and more preferably from 1 hour to 3 hours. Note that the optimal reaction conditions can be determined through preliminary experiments.
  • the order in which the ⁇ -amylase action step is performed is not limited as long as it does not impair the effects of the present technology; It is preferable to carry out simultaneously with/or the ⁇ -amylase action step.
  • the monoglyceride and/or diglyceride addition step is a step of adding monoglyceride and/or diglyceride in the manufacturing process of vegetable ice cream.
  • the step of adding monoglyceride and/or diglyceride is not an essential step; for example, by using a plant material containing monoglyceride and/or diglyceride, the same effect as that of adding step of monoglyceride and/or diglyceride can be obtained. You can also get
  • the amount of monoglyceride and/or diglyceride added in the monoglyceride and/or diglyceride addition step can be freely set as long as the effects of the present technology are not impaired.
  • the specific amount of monoglyceride and/or diglyceride added in the present technology is the same as the content of monoglyceride and/or diglyceride in the above-mentioned enzyme agent for improving shape retention, so a description thereof will be omitted here.
  • the order of performing the monoglyceride and/or diglyceride addition step is not limited as long as it does not impair the effects of the present technology.
  • the method of adding monoglyceride and/or diglyceride to the vegetable carbohydrate-containing material and/or vegetable oil-containing material that has undergone the step and/or the lipase action step can be freely selected.
  • Recovery step includes one or more steps selected from a maltotriose producing amylase action step, a lipase action step, and a ⁇ -amylase action step, and if necessary an ⁇ -amylase action step, a monoglyceride and/or
  • This is a process of recovering vegetable ice cream produced through a diglyceride addition process and the like.
  • the specific recovery method depending on the type and form of the vegetable ice cream to be produced, one type or a combination of two or more types of recovery methods commonly used in the production of vegetable ice cream can be used.
  • the method for producing vegetable ice cream and the method for improving shape retention according to the present technology described above can be configured to include the following steps (1) to (8).
  • a step of preparing a vegetable carbohydrate-containing material and/or a vegetable oil-containing material (2) A step of allowing maltotriose-generating amylase to act on the prepared vegetable carbohydrate-containing material (3) A prepared plant (4) A step of allowing ⁇ -amylase to act on the prepared vegetable carbohydrate-containing material (5) A step of causing ⁇ -amylase to act on the prepared vegetable carbohydrate-containing material (6 ) Adding monoglyceride and/or diglyceride (7) Deactivating the enzyme (8) Recovering the produced vegetable ice cream
  • any one, two, or all of steps (2) to (4) may be performed.
  • the order is not particularly limited, and they may be performed separately or simultaneously.
  • the enzyme in step (7) may be inactivated between each step, if necessary.
  • steps (5) to (8) are not essential and can be performed as necessary.
  • the order of steps (2) to (4) is not particularly limited, and they may be performed separately or simultaneously.
  • the enzyme in step (7) may be inactivated between each step, if necessary.
  • step (6) it may be performed during any one of steps (1) to (7), or simultaneously with any one of steps (2) to (5).
  • Enzyme activity measurement method Activity measurement method of maltotriose-producing amylase
  • Add an appropriate amount of enzyme to 0.5 ml of 2% soluble starch dissolved in 0.1 M phosphate buffer (pH 7.0), and react in a total volume of 1.0 ml at 40°C to generate maltotriose and other Reducing sugars were determined by the Somogyi-Nelson method. Under these conditions, the amount of enzyme that produced reducing sugar equivalent to 1 micromole of glucose per minute was defined as 1 unit (1 U).
  • hydrochloric acid test solution (2 mol/L) and hydrochloric acid test solution (0.1 mol/L) to neutralize, add 1 mol/L acetic acid/sodium acetate buffer (pH 5.0) 10 mL, and then add water.
  • the solution was made into 100 mL and used as a substrate solution. Measure out 10 mL of the substrate solution, warm it at 37°C for 10 minutes, add 1 mL of the sample solution, shake it immediately, warm it at the same temperature for 10 minutes or 30 minutes, then add 4 mL of Fehling's test solution and shake it gently. After heating in a boiling water bath for 15 minutes, the mixture was cooled to 25° C.
  • a comparative solution was prepared in the same manner as in the preparation of the test solution using 10 mL of water instead of the substrate solution.
  • liberated iodine was titrated with a 0.05 mol/L sodium thiosulfate solution.
  • the end point was defined as when the titration was near the end point, 1 to 2 drops of soluble starch sample solution was added, and the resulting blue color disappeared.
  • the amount of enzyme that causes an increase in reducing power equivalent to 1 mg of glucose per minute was defined as 1 unit (1 U), and was calculated from the following formula.
  • the oat base prepared above was added to the prepared coconut oil base, the temperature was raised to 85°C, and the mixture was stirred for 15 minutes. The mixture was then transferred to a bowl, emulsified for 5 minutes using a hand mixer, and then stored in the refrigerator overnight. The next day, 2 g of vanilla essence and 2 g of salt were added and mixed for 30 to 45 seconds to produce vegetable ice cream using an ice cream maker (NOSTALGIA PRODUCTS, model: PICM20DBL).
  • NOSTALGIA PRODUCTS model: PICM20DBL
  • Shape retention evaluation The produced vegetable ice cream was filled into a paper cup, and then frozen and molded overnight at -15°C. Shape retention evaluation begins when the ice cream from the paper cup is removed from the paper cup and placed on a mesh board set horizontally on a scale at room temperature, and when the ice cream begins to melt and the first drop falls on the scale. As a point, the value on the scale was read every 5 minutes until 90 minutes later.
  • test group 1 which produced vegetable ice cream using ⁇ -amylase
  • test group 2 which produced vegetable ice cream using maltotriose-producing amylase
  • Test Groups 3 and 4 produced vegetable ice cream using maltotriose-producing amylase, and Control 2 produced vegetable ice cream without using maltotriose-producing amylase. It showed high shape retention compared to . Further, from the results of Test Groups 3 and 4, it was found that maltotriose-generating amylase exhibits a sufficient shape retention improvement effect even at about 1.2 U.
  • a vegetable ice cream was produced in the same manner as in Experimental Example 1 using the prepared oat base and coconut oil base.
  • Test Group 5 which produced vegetable ice cream using lipase, showed higher shape retention compared to Control 3, which produced vegetable ice cream without using lipase. was.

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Abstract

植物性アイスクリームの保形性を向上させる技術を提供すること。　本技術では、マルトトリオース生成アミラーゼ、リパーゼ、及びβ－アミラーゼからなる群から選択される１以上の酵素を含む、植物性アイスクリームの保形性向上用酵素剤、及び該保形性向上用酵素剤が用いられた植物性アイスクリームを提供する。また、本技術では、植物性糖質含有材料にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させるマルトトリオース生成アミラーゼ作用工程、植物性油脂含有材料にリパーゼを作用させるリパーゼ作用工程、及びβ－アミラーゼを作用させるβ－アミラーゼ作用工程から選択される１以上の工程を含む、植物性アイスクリームの製造方法、及び植物性アイスクリームの保形性向上方法を提供する。

Description

保形性向上用酵素剤
　本発明は、植物性アイスクリームの保形性向上用酵素剤に関する。より具体的には、本発明は、植物性アイスクリームの品質を向上させるための保形性向上用酵素剤、植物性アイスクリーム、植物性アイスクリームの製造方法、及び植物性アイスクリームの保形性向上方法に関する。
　近年、食品市場ではサステナビリティや健康志向を背景に、乳代替市場や肉代替市場が拡大している。植物性アイスクリームは乳代替市場において重要なカテゴリーを占めており、引き続き注目される分野である。その製造においては、植物性ミルクに必要に応じてタンパク質源と脂質源を混合して乳化させて製造するのが標準的である。
　このような背景の下、植物性アイスクリームの品質を向上させる技術も開発されつつある。例えば、特許文献１には、乳成分などの動物起源の成分を最小限に抑えた植物性アイスクリームの風味改善を目的として、使用する植物タンパク質量を低減させた製造技術が開示されている。
米国公開特許２０１８／０１８４６８４号
　前述の通り、近年、健康志向の高まりから植物性飲食品が注目されているが、植物性アイスクリームは、根本的に乳アイスクリームとは組成が異なるため、満足した特性を得るには未だ改良の余地がある。例えば、保形性は、製品の安定性に関連し、植物性アイスクリームが保存中にヒートショックを受けて融解したり変形したりするのを防ぐために重要な特性としてさらなる向上が望まれる。
　そこで、本技術では、植物性アイスクリームの保形性を向上させる技術を提供することを主目的とする。
　本願発明者らは、植物性アイスクリームの保形性を向上させる技術について、鋭意研究を行った結果、植物性材料にマルトトリオース生成アミラーゼ、リパーゼ、又はβ－アミラーゼを作用させることで、植物性アイスクリームの保形性を向上し得ることを見出し、本技術を完成するに至った。
　即ち、本技術では、まず、マルトトリオース生成アミラーゼ、リパーゼ、及びβ－アミラーゼからなる群から選択される１以上の酵素を含む、植物性アイスクリームの保形性向上用酵素剤を提供する。
　本技術では、次に、本技術に係る保形性向上用酵素剤が用いられた、植物性アイスクリームを提供する。
　本技術では、更に、植物性糖質含有材料にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させるマルトトリオース生成アミラーゼ作用工程、植物性油脂含有材料にリパーゼを作用させるリパーゼ作用工程、及び植物性糖質含有材料にβ－アミラーゼを作用させるβ－アミラーゼ作用工程から選択される１以上の工程を含む、植物性アイスクリームの製造方法、及び、植物性アイスクリームの保形性向上方法を提供する。
　本技術によれば、植物性アイスクリームの保形性を向上させることができ、保存中の安定性が高く、溶けにくい植物性アイスクリームを提供することができる。
　以下、本発明を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
　１．保形性向上用酵素剤
　本技術に係る保形性向上用酵素剤は、マルトトリオース生成アミラーゼ、リパーゼ、及びβ－アミラーゼからなる群から選択される１以上の酵素を有効成分として含有する。また、必要に応じて、α－アミラーゼ、モノグリセリド、ジグリセリド、その他の成分等を含有させることも可能である。以下、各成分について、詳細に説明する。
　（１）マルトトリオース生成アミラーゼ
　本技術に用いることができるマルトトリオース生成アミラーゼは、デンプンに作用し主にマルトトリオースを生成する活性を有する酵素である。本技術に用いることができるマルトトリオース生成アミラーゼとしては、マルトトリオースを生成する活性がある限り、他の作用を更に有する酵素であってもよい。
　本技術では、植物性材料にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させることで、製造された植物性アイスクリームの保形性を向上させることができる。
　本技術に用いることができるマルトトリオース生成アミラーゼの由来は特に限定されないが、例えば、ストレプトマイセス属（Streptomyces griseus等）、バチルス属（Bacillus subtilis等）、特開平０３－２５１１７３に開示されたミクロバクテリウム属（Microbacterium sp.等）、ＷＯ２０２０／０９０７３４に開示されたセルロシミクロビウム属（Cellulosimicrobium）生物由来のマルトトリオース生成アミラーゼが挙げられる。これらのマルトトリオース生成アミラーゼは、１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。これらのマルトトリオース生成アミラーゼの中でも、植物性アイスクリームの保形性をより一層高める観点から、ミクロバクテリウム属生物由来マルトトリオース生成アミラーゼを選択することが好ましく、ミクロバクテリウムエスピー生物由来マルトトリオース生成アミラーゼを選択することがより好ましい。
　ここでの「ミクロバクテリウムエスピー生物由来マルトトリオース生成アミラーゼ」とは、ミクロバクテリウムエスピーに分類される微生物（野生株であっても変異株であってもよい）が生産するマルトトリオース生成アミラーゼ、あるいはマルトトリオース生成アミラーゼ遺伝子を利用して遺伝子工学的手法によって得られたマルトトリオース生成アミラーゼであることを意味する。従って、ミクロバクテリウムエスピー生物より取得したマルトトリオース生成アミラーゼ遺伝子（又は当該遺伝子を改変した遺伝子）を導入した宿主微生物によって生産された組換え体も「ミクロバクテリウムエスピー生物由来マルトトリオース生成アミラーゼ」に該当する。
　本技術に用いるマルトトリオース生成アミラーゼは、上記のマルトトリオース生成アミラーゼの由来元となる微生物の培養液より調製することができる。具体的な調製方法としては、上記の微生物の培養液又は菌体よりマルトトリオース生成アミラーゼを回収する方法が挙げられる。例えば、マルトトリオース生成アミラーゼ分泌型微生物を用いる場合は、培養液から、必要に応じて予めろ過、遠心処理等によって菌体を回収した後、酵素を分離及び／又は精製することができる。また、マルトトリオース生成アミラーゼ非分泌型微生物を用いる場合は、必要に応じて予め培養液から菌体を回収した後、菌体を加圧処理、超音波処理等によって破砕して酵素を露出させた後、酵素を分離及び／又は精製することができる。酵素の分離及び／又は精製法としては、公知のタンパク質分離及び／又は精製法を特に限定されることなく用いることができ、例えば、遠心分離法、ＵＦ濃縮法、塩析法、イオン交換樹脂等を用いた各種クロマトグラフィー法等が挙げられる。分離及び／又は精製された酵素は、凍結乾燥、減圧乾燥等の乾燥法により粉末化することができ、また、当該乾燥法において適当な賦形剤及び／又は乾燥助剤を用いて粉末化することもできる。また、分離及び／又は精製された酵素は、適当な添加剤を加え、ろ過滅菌することで液状化することもできる。
　本技術では、マルトトリオース生成アミラーゼとして、市販品を用いることもでき、好ましい市販品の例として、天野エンザイム株式会社製のマルトトリオース生成アミラーゼが挙げられる。
　本技術に係る保形性向上用酵素剤中のマルトトリオース生成アミラーゼの含有量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。マルトトリオース生成アミラーゼの含有量は、マルトトリオース生成アミラーゼを作用させる植物性糖質含有材料１ｇに対して、例えば、０．０５Ｕ以上に設定することができ、保形性をより一層高める観点からは、好ましくは０．３Ｕ以上、より好ましくは０．６Ｕ以上、さらに好ましくは３Ｕ以上、一層好ましくは６Ｕ以上に設定することができる。
　また、マルトトリオース生成アミラーゼの含有量は、マルトトリオース生成アミラーゼを作用させる多糖類（好ましくはデンプン）１ｇに対して、例えば、０．０８Ｕ以上に設定することができ、保形性をより一層高める観点からは、好ましくは０．５Ｕ以上、より好ましくは１Ｕ以上、さらに好ましくは５Ｕ以上、一層好ましくは１０Ｕ以上に設定することができる。
　マルトトリオース生成アミラーゼの含有量の上限も、本技術の効果を損なわない限り特に限定されないが、マルトトリオース生成アミラーゼを作用させる植物性糖質含有材料１ｇに対して、例えば、２５０Ｕ以下、５０Ｕ以下、２５Ｕ以下、２０Ｕ以下、１５Ｕ以下、又は１０Ｕ以下に設定することができる。
　また、マルトトリオース生成アミラーゼの含有量の上限は、マルトトリオース生成アミラーゼを作用させる多糖類（好ましくはデンプン）１ｇに対して、例えば、４００Ｕ以下、８０Ｕ以下、４０Ｕ以下、３０Ｕ以下、２０Ｕ以下、又は１５Ｕ以下に設定することができる。
　本技術において、マルトトリオース生成アミラーゼの活性については、下記の方法で定義した値である。
　［マルトトリオース生成アミラーゼの活性の定義］
　０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解した２％可溶性澱粉０．５ｍｌに、適量の酵素を加え、全量１．０ｍｌで、４０℃で反応させ、生成するマルトトリオース及びその他の還元糖をソモギー・ネルソン法で定量する。この条件で、１分間に１マイクロモルのグルコースに相当する還元糖を生成する酵素量を１単位（１Ｕ）とする。
　（２）リパーゼ
　本技術に用いることができるリパーゼは、トリグリセリドを加水分解してジグリセリド、モノグリセリド、および脂肪酸を生成する活性を有する酵素である。本技術に用いることができるリパーゼとしては、トリグリセリドを加水分解してジグリセリド、モノグリセリド、および脂肪酸を生成する活性がある限り、他の作用を更に有する酵素であってもよい。
　本技術では、植物性材料にリパーゼを作用させることで、製造された植物性アイスクリームの保形性を向上させ、保存中の安定性を高め、溶けにくくすることができる。
　本技術に用いることができるリパーゼの由来は特に限定されないが、例えば、アスペルギルス属、カンディダ属、リゾプス属、ムコール属、ペニシリウム属生物由来のリパーゼが挙げられる。これらのリパーゼは、１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。これらのリパーゼの中でも、植物性アイスクリームの保形性をより一層高める観点から、ペニシリウム属生物由来のリパーゼを選択することが好ましく、ペニシリウム・ロックフォルティ（Penicillium roqueforti）生物由来のリパーゼを選択することがより好ましい。
　ここでの「ペニシリウム・ロックフォルティ生物由来のリパーゼ」とは、ペニシリウム・ロックフォルティに分類される微生物（野生株であっても変異株であってもよい）が生産するリパーゼ、あるいはリパーゼ遺伝子を利用して遺伝子工学的手法によって得られたリパーゼであることを意味する。従って、ペニシリウム・ロックフォルティ生物より取得したリパーゼ遺伝子（又は当該遺伝子を改変した遺伝子）を導入した宿主微生物によって生産された組換え体も「ペニシリウム・ロックフォルティ生物由来のリパーゼ」に該当する。
　本技術に用いるリパーゼは、上記のリパーゼの由来元となる微生物の培養液より調製することができる。具体的な調製方法としては、上記の微生物の培養液又は菌体よりリパーゼを回収する方法が挙げられる。例えば、リパーゼ分泌型微生物を用いる場合は、培養液から、必要に応じて予めろ過、遠心処理等によって菌体を回収した後、酵素を分離及び／又は精製することができる。また、リパーゼ非分泌型微生物を用いる場合は、必要に応じて予め培養液から菌体を回収した後、菌体を加圧処理、超音波処理等によって破砕して酵素を露出させた後、酵素を分離及び／又は精製することができる。酵素の分離及び／又は精製法としては、公知のタンパク質分離及び／又は精製法を特に限定されることなく用いることができ、例えば、遠心分離法、ＵＦ濃縮法、塩析法、イオン交換樹脂等を用いた各種クロマトグラフィー法等が挙げられる。分離及び／又は精製された酵素は、凍結乾燥、減圧乾燥等の乾燥法により粉末化することができ、また、当該乾燥法において適当な賦形剤及び／又は乾燥助剤を用いて粉末化することもできる。また、分離及び／又は精製された酵素は、適当な添加剤を加え、ろ過滅菌することで液状化することもできる。
　本技術では、リパーゼとして、市販品を用いることもでき、好ましい市販品の例として、天野エンザイム株式会社製のペニシリウム属生物由来のリパーゼが挙げられる。
　本技術に係る保形性向上用酵素剤中のリパーゼの含有量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。リパーゼの含有量は、リパーゼを作用させる植物性油脂含有材料１ｇに対して、例えば、０．０１Ｕ以上に設定することができ、保形性をより一層高める観点からは、好ましくは０．１Ｕ以上、より好ましくは０．４Ｕ以上、さらに好ましくは１Ｕ以上、一層好ましくは２Ｕ以上に設定することができる。
　また、リパーゼの含有量は、リパーゼを作用させる油脂１ｇに対して、例えば、０．０９Ｕ以上に設定することができ、保形性をより一層高める観点からは、好ましくは０．４Ｕ以上、より好ましくは０．９Ｕ以上、さらに好ましくは１Ｕ以上、一層好ましくは２Ｕ以上に設定することができる。
　リパーゼの含有量の上限も、本技術の効果を損なわない限り特に限定されないが、リパーゼを作用させる植物性油脂含有材料１ｇに対して、例えば、１００Ｕ以下、２０Ｕ以下、１５Ｕ以下、１０Ｕ以下、５Ｕ以下、又は３Ｕ以下に設定することができる。
　また、リパーゼの含有量の上限は、リパーゼを作用させる油脂１ｇに対して、例えば、１００Ｕ以下、２０Ｕ以下、１５Ｕ以下、１０Ｕ以下、５Ｕ以下、又は３Ｕ以下に設定することができる。
　本技術において、リパーゼの活性については、下記の方法で定義した値である。
　［リパーゼの活性の定義］
　オリーブ油４５ｇと乳化液（ポリビニルアルコール（完全けん化物、けん化度９８．８±０．２）　１８.５ｇ／Ｌ、ポリビニルアルコール（部分けん化物、けん化度８８．８±１．０）　１．５ｇ／Ｌ）１５０ｍＬと混合し、ホモジナイザーを用いて乳化させ基質溶液を調製する。基質溶液５ｍＬ及び０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４ｍＬに、リパーゼ酵素液１ｍＬを加えて３７℃で反応を行い３０分後にエタノール・アセトン混液１０ｍＬを加え酵素反応を停止させる。次いで、０．０５ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液１０ｍＬ及びエタノール・アセトン混液１０ｍＬを加え、０．０５ｍｏｌ／Ｌ塩酸でｐＨが１０になるよう滴定する。そして、１分間に１μｍｏｌの脂肪酸の増加をもたらす酵素量を１単位（１Ｕ）とする。
　（３）β－アミラーゼ
　本技術で用いることができるβ－アミラーゼは、澱粉の非還元末端からマルトース単位でα－１，４グルコシド結合を逐次分解するエキソ型の酵素である。本技術に用いることができるβ－アミラーゼとしては、前記のβ－アミラーゼ活性がある限り、他の作用を更に有する酵素であってもよい。
　本技術では、植物性材料にβ－アミラーゼを作用させることで、製造された植物性アイスクリームの保形性を向上させることができる。
　本技術に用いることができるβ－アミラーゼの由来は特に限定されないが、例えば、バチルス属（Bacillus flexus、Bacillus megaterium、Bacillus polymyxa、Bacillus circulans等）、シュードモナス属（Pseudomonas）、ストレプトマイセス属（Streptomyces）生物由来のβ－アミラーゼが挙げられる。これらのβ－アミラーゼは、１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。これらのβ－アミラーゼの中でも、植物性アイスクリームの保形性をより一層高める観点から、バチルス属生物由来のβ－アミラーゼを選択することが好ましく、バチルス・フレクサス（Bacillus flexus）生物由来のβ－アミラーゼを選択することがより好ましい。
　ここでの「バチルス・フレクサス生物由来のβ－アミラーゼ」とは、バチルス・フレクサスに分類される微生物（野生株であっても変異株であってもよい）が生産するβ－アミラーゼ、あるいはβ－アミラーゼ遺伝子を利用して遺伝子工学的手法によって得られたβ－アミラーゼであることを意味する。従って、バチルス・フレクサス生物より取得したβ－アミラーゼ遺伝子（又は当該遺伝子を改変した遺伝子）を導入した宿主微生物によって生産された組換え体も「バチルス・フレクサス生物由来のβ－アミラーゼ」に該当する。
　本技術に用いるβ－アミラーゼは、上記のβ－アミラーゼの由来元となる微生物の培養液より調製することができる。具体的な調製方法としては、上記の微生物の培養液又は菌体よりβ－アミラーゼを回収する方法が挙げられる。例えば、β－アミラーゼ泌型微生物を用いる場合は、培養液から、必要に応じて予めろ過、遠心処理等によって菌体を回収した後、酵素を分離及び／又は精製することができる。また、β－アミラーゼ非分泌型微生物を用いる場合は、必要に応じて予め培養液から菌体を回収した後、菌体を加圧処理、超音波処理等によって破砕して酵素を露出させた後、酵素を分離及び／又は精製することができる。酵素の分離及び／又は精製法としては、公知のタンパク質分離及び／又は精製法を特に限定されることなく用いることができ、例えば、遠心分離法、ＵＦ濃縮法、塩析法、イオン交換樹脂等を用いた各種クロマトグラフィー法等が挙げられる。分離及び／又は精製された酵素は、凍結乾燥、減圧乾燥等の乾燥法により粉末化することができ、また、当該乾燥法において適当な賦形剤及び／又は乾燥助剤を用いて粉末化することもできる。また、分離及び／又は精製された酵素は、適当な添加剤を加え、ろ過滅菌することで液状化することもできる。
　また、本技術では、上述した微生物由来のβ－アミラーゼに限らず、植物由来のβ－アミラーゼを用いることもできる。例えば、大豆、小麦、大麦等の植物由来のβ－アミラーゼが挙げられる。
　本技術では、β－アミラーゼとして、市販品を用いることもでき、好ましい市販品の例として、天野エンザイム株式会社製のバシラス・フレクサス由来生物由来のβ－アミラーゼが挙げられる。
　本技術に係る保形性向上用酵素剤中のβ－アミラーゼの含有量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。β－アミラーゼの含有量は、β－アミラーゼを作用させる植物性糖質含有材料１ｇに対して、例えば、０．０１Ｕ以上に設定することができ、保形性をより一層高める観点からは、好ましくは０．１０Ｕ以上、より好ましくは０．５０Ｕ以上、さらに好ましくは１．０Ｕ以上、一層好ましくは１．５Ｕ以上に設定することができる。
　また、β－アミラーゼの含有量は、β－アミラーゼを作用させる多糖類（好ましくはデンプン）１ｇに対して、例えば、０．０１６Ｕ以上に設定することができ、保形性をより一層高める観点からは、好ましくは０．１６Ｕ以上、より好ましくは０．８０Ｕ以上、さらに好ましくは１．６Ｕ以上、一層好ましくは２．４Ｕ以上に設定することができる。
　β－アミラーゼの含有量の上限も、本技術の効果を損なわない限り特に限定されないが、β－アミラーゼを作用させる植物性糖質含有材料１ｇに対して、例えば、１００Ｕ以下、５０Ｕ以下、１０Ｕ以下、好ましくは７．５Ｕ以下、より好ましくは４．０Ｕ以下、さらに好ましくは２．５Ｕ以下に設定することができる。
　また、β－アミラーゼの含有量の上限は、β－アミラーゼを作用させる多糖類（好ましくはデンプン）１ｇに対して、例えば、１６０Ｕ以下、８０Ｕ以下、１６Ｕ以下、好ましくは１２Ｕ以下、より好ましくは６．４Ｕ以下、さらに好ましくは４．０Ｕ以下に設定することができる。
　本技術において、β－アミラーゼの活性については、下記の方法で定義した値である。
　［β－アミラーゼの活性の定義］
　バレイショデンプンを基質とし、１分間に１ｍｇのブドウ糖に相当する還元力の増加をもたらす酵素量を１単位（１Ｕ）とする。
　（４）α－アミラーゼ
　本技術には、α－アミラーゼを用いることができる。本技術に用いることができるα－アミラーゼは、デンプンに作用し主にα－１,４グリコシド結合を加水分解する酵素である。
　本技術に用いることができるα－アミラーゼの由来は特に限定されないが、例えば、アスペルギルス（Aspergillus）属（例えば、アスペルギルス・オリゼ、アスペルギルス・ニガ等）、バシラス（Bacillus）属（例えば、バシラス・アミロリクエファシエンス、バシラス・サブティリス、バシラス・リチェニフォルミス等）生物由来のαアミラーゼが挙げられ、好ましくはバシラス（Bacillus）属生物由来のα－アミラーゼが挙げられ、より好ましくはバシラス・アミロリクエファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）生物由来のα－アミラーゼが挙げられる。
　本技術に用いることができるα－アミラーゼは、上記のα－アミラーゼの由来元となる微生物の培養液より調製することができる。具体的な調製方法としては、α－アミラーゼ生産菌を培養し、α－アミラーゼを公知の手段を用いて分離する方法、及び遺伝子組み換え技術を用いる方法等によって容易に調製することができる。
　本技術では、α－アミラーゼとして、市販品を用いることもでき、好ましい市販品の例として、天野エンザイム株式会社製のα－アミラーゼ（バシラス・アミロリクエファシエンス生物由来）が挙げられる。
　本技術に係る保形性向上用酵素剤中のα－アミラーゼの含有量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。α－アミラーゼの含有量は、α－アミラーゼを作用させる植物性糖質含有材料１ｇに対して、例えば、０．５Ｕ以上に設定することができ、保形性をより一層高める観点からは、好ましくは２Ｕ以上、より好ましくは４Ｕ以上、さらに好ましくは７Ｕ以上、一層好ましくは１０Ｕ以上に設定することができる。
　また、α－アミラーゼの含有量は、α－アミラーゼを作用させる多糖類（好ましくはデンプン）１ｇに対して、例えば、０．８Ｕ以上に設定することができ、保形性をより一層高める観点からは、好ましくは３Ｕ以上、より好ましくは６Ｕ以上、さらに好ましくは１０Ｕ以上、一層好ましくは１５Ｕ以上に設定することができる。
　α－アミラーゼの含有量の上限も、本技術の効果を損なわない限り特に限定されないが、α－アミラーゼを作用させる植物性糖質含有材料１ｇに対して、例えば、５００Ｕ以下、１００Ｕ以下、５０Ｕ以下、好ましくは３０Ｕ以下、より好ましくは２０Ｕ以下、さらに好ましくは１５Ｕ以下に設定することができる。
　また、α－アミラーゼの含有量の上限は、α－アミラーゼを作用させる多糖類（好ましくはデンプン）１ｇに対して、例えば、８００Ｕ以下、１６０Ｕ以下、８０Ｕ以下、好ましくは４０Ｕ以下、より好ましくは３０Ｕ以下、さらに好ましくは２０Ｕ以下に設定することができる。
　本技術において、α－アミラーゼの活性については、下記の方法で定義した値である。
　［α－アミラーゼの活性の定義］
　ポテトスターチを基質とし、ヨウ素反応により測定されるものとする。すなわち、アミラーゼの活性は、ポテトスターチを基質として常法により酵素反応を行い、1分間にヨウ素反応による呈色を１０％減少させる酵素量を１単位（１Ｕ）とする。
　本技術において、マルトトリオース生成アミラーゼとα－アミラーゼを併用する場合、その含有比率については、各酵素についての前述した含有量に基づいて定まるが、効果をより一層高める観点から、マルトトリオース生成アミラーゼのα－アミラーゼ１Ｕ当たりの含有量としては、好ましくは０．００１Ｕ以上、より好ましくは０．０１Ｕ以上、さらに好ましくは０．０５Ｕ以上、一層好ましくは０．０８Ｕ以上、より一層好ましくは０．１Ｕ以上、さらに一層好ましくは０．２Ｕ以上、よりさらに一層好ましくは０．５Ｕ以上に設定することができる。
　マルトトリオース生成アミラーゼのα－アミラーゼ１Ｕ当たりの含有量範囲の上限としては、例えば、１００Ｕ以下に設定することができ、保形性向上効果をより一層高める観点から、好ましくは２０Ｕ以下、より好ましくは１０Ｕ以下、さらに好ましくは５Ｕ以下、一層好ましくは４Ｕ以下、より一層好ましくは３Ｕ以下、さらに一層好ましくは２Ｕ以下、よりさらに一層好ましくは１Ｕ以下に設定することができる。
　本技術において、β－アミラーゼとα－アミラーゼを併用する場合、その含有比率については、各酵素についての前述した含有量に基づいて定まるが、効果をより一層高める観点から、β－アミラーゼのα－アミラーゼ１Ｕ当たりの含有量としては、好ましくは０．００１Ｕ以上、より好ましくは０．０１Ｕ以上、さらに好ましくは０．０５Ｕ以上、一層好ましくは０．０８Ｕ以上、より一層好ましくは０．１Ｕ以上、さらに一層好ましくは０．１２Ｕ以上に設定することができる。
　β－アミラーゼのα－アミラーゼ１Ｕ当たりの含有量範囲の上限としては、例えば、１００Ｕ以下に設定することができ、保形性向上効果をより一層高める観点から、好ましくは２０Ｕ以下、より好ましくは１０Ｕ以下、さらに好ましくは５．０Ｕ以下、一層好ましくは２．０Ｕ以下、より一層好ましくは１Ｕ以下、さらに一層好ましくは０．５Ｕ以下、よりさらに一層好ましくは０．２Ｕ以下に設定することができる。
　（５）モノグリセリド、ジグリセリド
　本技術に係る保形性向上用酵素剤には、モノグリセリド及び／又はジグリセリドを用いることができる。モノグリセリド及び／又はジグリセリドを用いることで、製造後の植物性アイスクリームの保形性向上効果をより一層高めることができる。
　本技術に用いることができるモノグリセリド及び／又はジグリセリドとしては、本技術の効果を損なわない限り、食品分野で用いることができるモノグリセリド及び／又はジグリセリドを、１種又は２種以上、自由に選択して用いることができる。モノグリセリドとしては、例えば、グリセリンカプリル酸エステル、グリセリンカプリン酸エステル、グリセリンラウリン酸エステル、グリセリンステアリン酸エステル、グリセリンオレイン酸エステル、グリセリンベヘン酸エステル等が挙げられる。ジグリセリドとしては、例えば、これらのモノグリセリドの同一若しくは異なる脂肪酸が２つ結合したものが挙げられる。
　本技術に係る保形性向上用酵素剤中のモノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。モノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量は、製造する植物性アイスクリームに用いる植物性油脂１００重量部に対して、例えば、０．５重量部以上に設定することができ、保形性をより一層高める観点からは、好ましくは１重量部以上、より好ましくは２重量部以上に設定することができる。
　本技術に係る保形性向上用酵素剤中のモノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量の上限も、本技術の効果を損なわない限り特に限定されないが、製造する植物性アイスクリームに用いる植物性油脂１００重量部に対して、例えば、２０重量部以下に設定することができ、好ましくは１０重量部以下、より好ましくは８重量部以下に設定することができる。
　（６）その他の成分
　本技術に係る保形性向上用酵素剤は、前述したマルトトリオース生成アミラーゼ、リパーゼ、及びβ－アミラーゼからなる群から選択される１以上の酵素を含有していれば、前述したマルトトリオース生成アミラーゼ、リパーゼ、及びβ－アミラーゼからなる群から選択される１以上の酵素のみで構成されていてもよいし、前述したα－アミラーゼ、モノグリセリド、ジグリセリド等を併用してもよいし、本技術の効果を損なわない限り、他の成分を１種又は２種以上、自由に選択して含有させることもできる。他の成分としては、例えば、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤等の成分を用いることができる。更に、公知の又は将来的に見出される機能を有する成分を、適宜目的に応じて併用することも可能である。
　２．植物性アイスクリーム
　本技術に係る植物性アイスクリームは、前述した本技術に係る保形性向上用酵素剤を用いて製造された植物性アイスクリームである。本技術に係る植物性アイスクリームは、その製造工程において、植物性材料をマルトトリオース生成アミラーゼ、リパーゼ、及びβ－アミラーゼからなる群から選択される１以上の酵素で処理することにより、マルトトリオース、モノグリセリド、及びジグリセリドから選択される一以上の含有量が増加することで、本技術に係る保形性向上用酵素剤を用いずに製造された植物性アイスクリームに比べて、保形性が高く、保存中の安定性が高く、溶けにくいことを特徴とする。即ち、本技術に係る植物性アイスクリームは、マルトトリオース生成アミラーゼ処理された植物性糖質含有材料、リパーゼ処理された植物性油脂含有材料、及びβ－アミラーゼ処理された植物性糖質含有材料から選択される１以上の材料を含むことを特徴とする。
　本技術に係る植物性アイスクリームに含まれるマルトトリオースの含有量としては、例えば、植物性糖質含有材料由来の糖質１００重量部当たりの１０重量部以上が挙げられ、好ましくは１５重量部以上、より好ましくは２０重量部以上、一層好ましくは３０重量部以上が挙げられる。
　本技術に係る植物性アイスクリームに含まれるマルトトリオースの含有量の上限値としては、例えば、植物性糖質含有材料由来の糖質１００重量部当たりの６０重量部以下が挙げられ、好ましくは５０重量部以下、より好ましくは４５重量部以下、一層好ましくは４０重量部以下、より一層好ましくは３５重量部以下が挙げられる。
　本技術に係る植物性アイスクリームに含まれるマルトトリオースの含有量としては、例えば、植物性アイスクリーム１００重量部当たりの０．１重量部以上が挙げられ、好ましくは０．３重量部以上、より好ましくは１重量部以上、一層好ましくは１．５重量部以上が挙げられる。
　本技術に係る植物性アイスクリームに含まれるマルトトリオースの含有量の上限値としては、例えば、植物性アイスクリーム１００重量部当たりの１０重量部以下が挙げられ、好ましくは５重量部以下、より好ましくは４重量部以下、一層好ましくは３重量部以下、より一層好ましくは２．５重量部以下が挙げられる。
　本発明の植物性アイスクリームに含まれるモノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量としては、例えば、油脂１００重量部当たり１重量部以上が挙げられ、好ましくは２重量部以上、より好ましくは５重量部以上、一層好ましくは６重量部以上が挙げられる。
　飽和脂肪酸の遊離量の増加に伴う風味低下を防止する観点から、本技術に係る植物性アイスクリームに含まれるモノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量の上限としては、例えば、油脂１００重量部当たりの７０重量部以下、５０重量部以下、３０重量部以下、２０重量部以下、１５重量部以下、１０質量部以下が挙げられる。
　本発明の植物性アイスクリームに含まれるモノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量としては、例えば、植物性アイスクリーム１００重量部当たり０．１重量部以上が挙げられ、好ましくは０．２重量部以上、より好ましくは０．３重量部以上、一層好ましくは０．３５重量部以上が挙げられる。
　飽和脂肪酸の遊離量の増加に伴う風味低下を防止する観点から、本技術に係る植物性アイスクリームに含まれるモノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量の上限としては、例えば、植物性アイスクリーム１００重量部当たりの５重量部以下、３重量部以下、２重量部以下、１重量部以下、０．８重量部以下、又は０．５重量部以下が挙げられる。
　３．植物性アイスクリームの製造方法、保形性向上方法
　本技術に係る植物性飲食品の製造方法、及び保形性向上方法は、植物性糖質含有材料にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させるマルトトリオース生成アミラーゼ作用工程、植物性油脂含有材料にリパーゼを作用させるリパーゼ作用工程、及び植物性糖質含有材料にβ－アミラーゼを作用させるβ－アミラーゼ作用工程から選択される１以上の工程を少なくとも行う方法である。また、植物性糖質含有材料にα－アミラーゼを作用させるα－アミラーゼ作用工程、モノグリセリド及び／又はジグリセリドを添加するモノグリセリド及び／又はジグリセリド添加工程、回収工程等を更に行うこともできる。その他、植物性アイスクリームの種類等に応じて、各工程の前後や各工程と同時に、本技術の効果を損なわない範囲において、一般的な植物性アイスクリームの製造工程を行うことも可能である。以下、各工程等について詳細に説明する。
　（１）材料
　本技術に係る植物性飲食品の製造方法、及び保形性向上方法に用いる植物性材料としては、植物性糖質含有材料、及び植物性油脂含有材料を用いる。
　（１－１）植物性糖質含有材料
　本技術で用いることができる植物性糖質含有材料は、植物由来の糖質を含んでいれば特に限定されないが、典型的な例として、穀類（オーツ麦等）をミル等で機械的に破砕した材料が挙げられる。糖質としては、多糖類（デンプンやデキストリン等）を含んでいることが好ましい。
　なお、植物性糖質含有材料と後述する植物性油脂含有材料は異なる材料であっても良く、同じ材料であっても良い。
　植物性質糖質含有材料の形状も、本技術の効果を損なわない限り限定されず、例えば、粉状、フレーク状、粒状が挙げられる。
　植物性糖質含有材料に含まれる糖質（好ましくはデンプン）の含有量（植物性糖質含有材料が乾燥した状態の重量を基準とする）は、本技術の効果を損なわない限り特に限定されず、例えば２０重量％以上が挙げられ、保形性をより一層高める観点から、好ましくは５０重量以上、５５重量％以上、より好ましくは６０重量％以上、さらに好ましくは６５重量％以上が挙げられる。
　植物性糖質含有材料に含まれる糖質（好ましくはデンプン）の含有量の上限も、本技術の効果を損なわない限り特に限定されず、例えば９５重量％以下、好ましくは９０重量％以下、より好ましくは８５重量％以下、さらに好ましくは８０重量％以下が挙げられる。
　植物性糖質の由来についても、本技術の効果を損なわない限り特に限定されず、例えば、オート麦、大麦（うるち麦、もち麦）、米、小麦、ライ麦、そば、ひえ、あわ、テフ、キヌア、トウモロコシ等の禾穀類；小豆、空豆、エンドウ、ひよこ豆、緑豆、ルピン豆、インゲン豆等の菽穀類；アーモンド、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、ペカンナッツ、マカダミアナッツ、ピスタチオ、クルミ、ブラジルナッツ、ピーナッツ、ココナッツ、ピリナッツ、栗、ゴマ、産業用ヘンプシード、カナリーシード、亜麻仁、松の実等の種実類；藻類等が挙げられ、これらの植物性糖質から１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。この中でも本技術では、特に、禾穀類由来糖質を含む材料を用いることが好ましく、オート麦由来糖質を含む材料を用いることがより好ましい。
　（１－２）植物性油脂含有材料
　本技術で用いることができる植物性油脂含有材料は、植物由来の油脂を含んでいれば特に限定されないが、典型的な例として、植物原料から物理的に圧搾、または溶剤で抽出、もしくはその組み合わせによって抽出された後、種々の精製工程を経て得られる油脂が挙げられる。
　植物性油脂含有材料の形状は、本技術の効果を損なわない限り限定されず、例えば、固形状、液状が挙げられる。
　植物性油脂含有材料に含まれる油脂の含有量（使用する植物性油脂含有材料の重量を基準とする）は、本技術の効果を損なわない限り特に限定されないが、例えば２０重量％以上が挙げられ、保形性をより一層高める観点から、好ましくは６０重量％以上、より好ましくは８０重量％以上、さらに好ましくは９５重量％以上が挙げられる。
　植物性油脂含有材料に含まれる油脂の含有量の上限も、本技術の効果を損なわない限り特に限定されないが、例えば、９９重量％以下、９７重量％以下、又は９５重量％以下が挙げられる
　植物性油脂の由来についても、本技術の効果を損なわない限り特に限定されず、例えば、ココナッツ油、大豆油、ナタネ油、米油、コーン油、ひまわり油、綿実油、落花生油、サフラワー油、オリーブ油、パーム油、パーム核油、ヤシ油、カカオバター等が挙げられ、これらの植物性油脂から１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。この中でも本技術では、特に、ココナッツ油を含む材料を用いることが好ましい。
　（２）マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程
　マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程は、植物性糖質含有材料にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させる工程である。マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程におけるマルトトリオース生成アミラーゼの添加量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。本技術における具体的なマルトトリオース生成アミラーゼの添加量は、前述した保形性向上用酵素剤中のマルトトリオース生成アミラーゼの含有量と同一であるため、ここでは説明を割愛する。
　マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程の各種条件は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。例えば、用いるマルトトリオース生成アミラーゼの至適ｐＨ、安定ｐＨ範囲、至適温度、温度安定性などの理化学的性質に応じて、ｐＨ、温度、作用時間等を設定することができる。ｐＨは、例えばｐＨ５～９、好ましくはｐＨ６～８、より好ましくはｐＨ６．５～７．５に設定することができる。温度は例えば、２０～８０℃、好ましくは３０～７０℃、より好ましくは４０～６０℃に設定することができる。作用時間は例えば、５分～２４時間、好ましくは１５分～１２時間、より好ましくは３０分～２時間に設定することができる。なお、最適な反応条件は予備実験を通して決定することができる。
　マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程を経た植物性糖質含有材料は、マルトトリオース生成アミラーゼの作用により、マルトトリオースの含有量が増加する。マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程を経た植物性糖質含有材料（以下、「マルトトリオース生成アミラーゼ処理植物性糖質含有材料」ともいう）に含まれるマルトトリオースの含有量としては、例えば、糖質１００重量部当たりの１０重量部以上が挙げられる。好ましくは１５重量部以上、より好ましくは２０重量部以上、一層好ましくは３０重量部以上が挙げられる。
　また、マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程を経た植物性糖質含有材料に含まれるマルトトリオースの含有量の上限としては、例えば、糖質１００重量部当たりの６０重量部以下が挙げられる。好ましくは５０重量部以下、より好ましくは４５重量部以下、一層好ましくは４０重量部以下、より一層好ましくは３５重量部以下が挙げられる。
　（３）リパーゼ作用工程
　リパーゼ作用工程は、植物性油脂含有材料にリパーゼを作用させる工程である。リパーゼ作用工程におけるリパーゼの添加量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。本技術における具体的なリパーゼの添加量は、前述した保形性向上用酵素剤中のリパーゼの含有量と同一であるため、ここでは説明を割愛する。
　リパーゼ作用工程の各種条件は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。例えば、用いるリパーゼの至適ｐＨ、安定ｐＨ範囲、至適温度、温度安定性などの理化学的性質に応じて、ｐＨ、温度、作用時間等を設定することができる。ｐＨは、例えばｐＨ５～９、好ましくはｐＨ６～８、より好ましくはｐＨ６．５～７．５に設定することができる。温度は例えば、２０～８０℃、好ましくは３０～７０℃、より好ましくは４０～６０℃に設定することができる。作用時間は例えば、５分～２４時間、好ましくは１０分～１２時間、より好ましくは２０分～１時間に設定することができる。なお、最適な反応条件は予備実験を通して決定することができる。
　リパーゼ作用工程を経た植物性油脂含有材料は、リパーゼの作用により、モノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量が増加する。リパーゼ作用工程を経た植物性油脂含有材料（以下、「リパーゼ処理植物性油脂含有材料」ともいう）に含まれるモノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量としては、例えば、油脂１００重量部当たり０．６重量部以上が挙げられ、好ましくは０．７重量部以上、より好ましくは０．８重量部以上、一層好ましくは０．９重量部以上、より一層好ましくは１重量部以上が挙げられる。
　また、リパーゼ作用工程を経た植物性油脂含有材料に含まれるモノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量の上限としては、例えば、油脂１００重量部当たりの１０重量部以下、８重量部以下、６重量部以下、４重量部以下、３重量部以下、又は２重量部以下が挙げられる。
　リパーゼ作用工程を経た植物性油脂含有材料は、リパーゼの作用により酸価が増加する。リパーゼ作用工程を経た植物性油脂含有材料の酸価としては、例えば、１．１以上が挙げられ、好ましくは１．２以上、より好ましくは１．３以上、一層好ましくは１．５以上、より一層好ましくは１．７以上が挙げられる。
　また、リパーゼ作用工程を経た植物性油脂含有材料に含まれる酸価の上限としては、例えば、５以下が挙げられ、好ましくは４以下、より好ましくは３以下、一層好ましくは２以下が挙げられる。
　マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程とリパーゼ作用工程は、どちらか一方を行ってもよいし、両方行ってもよい。両方行う場合、マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程とリパーゼ作用工程の順番は特に限定されない。例えば、各工程を別々に行い、マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程を経た植物性糖質含有材料と、リパーゼ作用工程を経た植物性油脂含有材料とを混合することにより、植物性アイスクリームを製造することができる。また、植物性糖質と植物性油脂を含有する材料にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させた後にリパーゼを作用させる方法、植物性糖質と植物性油脂を含有する材料にリパーゼを作用させた後にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させる方法、植物性糖質と植物性油脂を含有する材料にマルトトリオース生成アミラーゼ及びリパーゼを同時に作用させる方法等が挙げられる。本技術では、この中でも特に、各工程を別々に行い、マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程を経た植物性糖質含有材料と、リパーゼ作用工程を経た植物性油脂含有材料とを混合することにより、植物性アイスクリームを製造する方法を採用することが好ましい。
　（４）β－アミラーゼ作用工程
　β－アミラーゼ作用工程は、植物性糖質含有材料にβ－アミラーゼを作用させる工程である。β－アミラーゼ作用工程におけるβ－アミラーゼの添加量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。本技術における具体的なβ－アミラーゼの添加量は、前述した保形性向上用酵素剤中のβ－アミラーゼの含有量と同一であるため、ここでは説明を割愛する。
　β－アミラーゼ作用工程の各種条件は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。例えば、用いるβ－アミラーゼの至適ｐＨ、安定ｐＨ範囲、至適温度、温度安定性などの理化学的性質に応じて、ｐＨ、温度、作用時間等を設定することができる。ｐＨは、例えばｐＨ５～９、好ましくはｐＨ６～８、より好ましくはｐＨ６．５～７．５に設定することができる。温度は例えば、２０～８０℃、好ましくは３０～７０℃、より好ましくは４０～６０℃に設定することができる。作用時間は例えば、５分～２４時間、好ましくは１５分～１２時間、より好ましくは３０分～２時間に設定することができる。なお、最適な反応条件は予備実験を通して決定することができる。
　（５）α－アミラーゼ作用工程
　α－アミラーゼ作用工程は、植物性糖質含有材料にα－アミラーゼを作用させる工程である。植物性糖質含有材料にα－アミラーゼを作用させることで、植物性糖質含有材料中のデンプンを液化させることができる。本技術において、α－アミラーゼ作用工程は必須の工程ではなく、例えば、予めα－アミラーゼで処理された植物性糖質含有材料を用いることで、α－アミラーゼ作用工程を行うのと同様の効果を得ることもできる。
　α－アミラーゼ作用工程におけるα－アミラーゼの添加量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。本技術における具体的なα－アミラーゼの添加量は、前述した保形性向上用酵素剤中のα－アミラーゼの含有量と同一であるため、ここでは説明を割愛する。
　α－アミラーゼ作用工程の各種条件は、本技術の効果を損なわない限り、自由に設定することができる。例えば、用いるα－アミラーゼの至適ｐＨ、安定ｐＨ範囲、至適温度、温度安定性などの理化学的性質に応じて、ｐＨ、温度、作用時間等を設定することができる。ｐＨは例えば、ｐＨ５．０～８．０、好ましくはｐＨ５．５～７．５、より好ましくはｐＨ６．０～７．０に設定することができる。温度は例えば、３０℃～８０℃、好ましくは４０℃～７５℃、より好ましくは５０℃～７０℃に設定することができる。作用時間は例えば、１０分～１２時間、好ましくは３０分～６時間、より好ましくは１時間～３時間に設定することができる。なお、最適な反応条件は予備実験を通して決定することができる。
　α－アミラーゼ作用工程を行う順番は、本技術の効果を損なわない限り限定されないが、マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程及び／又はβ－アミラーゼ作用工程の前、又は、マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程及び／又はβ－アミラーゼ作用工程と同時に行うことが好ましい。
　以上説明した各酵素作用工程の後に、酵素の失活工程を行うことも可能である。
　（６）モノグリセリド及び／又はジグリセリド添加工程
　モノグリセリド及び／又はジグリセリド添加工程は、植物性アイスクリームの製造工程において、モノグリセリド及び／又はジグリセリドを添加する工程である。本技術において、モノグリセリド及び／又はジグリセリド添加工程は必須の工程ではなく、例えば、モノグリセリド及び／又はジグリセリドを含有する植物性材料を用いることで、モノグリセリド及び／又はジグリセリド添加工程を行うのと同様の効果を得ることもできる。
　モノグリセリド及び／又はジグリセリド添加工程におけるモノグリセリド及び／又はジグリセリドの添加量は、本技術の効果を損なわない限り自由に設定することができる。本技術における具体的なモノグリセリド及び／又はジグリセリドの添加量は、前述した保形性向上用酵素剤中のモノグリセリド及び／又はジグリセリドの含有量と同一であるため、ここでは説明を割愛する。
　モノグリセリド及び／又はジグリセリド添加工程を行う順番は、本技術の効果を損なわない限り限定されない。例えば、植物性糖質含有材料及び／又は植物性油脂含有材料にモノグリセリド及び／又はジグリセリドを添加した後に、マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程及び／又はリパーゼ作用工程を行う方法、マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程及び／又はリパーゼ作用工程を経た植物性糖質含有材料及び／又は植物性油脂含有材料に、モノグリセリド及び／又はジグリセリドを添加する方法等、自由に選択することができる。本技術では特に、植物性油脂含有材料にモノグリセリド及び／又はジグリセリドを添加した後にリパーゼ作用工程を行う方法を採用することが好ましい。
　（７）回収工程
　回収工程は、マルトトリオース生成アミラーゼ作用工程、リパーゼ作用工程、及びβ－アミラーゼ作用工程から選択される１以上の工程、必要に応じてα－アミラーゼ作用工程、モノグリセリド及び／又はジグリセリド添加工程等を経て製造された植物性アイスクリームを回収する工程である。具体的な回収方法は、製造する植物性アイスクリームの種類や形態に応じて、一般的な植物性アイスクリームの製造における回収方法を、１種または２種以上自由に組み合わせて用いることができる。
　以上説明した本技術に係る植物性アイスクリームの製造方法、保形性向上方法は、以下の（１）～（８）の工程を含む態様とすることができる。
　（１）植物性糖質含有材料、及び／又は、植物性油脂含有材料を用意する工程
　（２）用意した植物性糖質含有材料にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させる工程
　（３）用意した植物性油脂含有材料にリパーゼを作用させる工程
　（４）用意した植物性糖質含有材料にβ－アミラーゼを作用させる工程
　（５）用意した植物性糖質含有材料にα－アミラーゼを作用させる工程
　（６）モノグリセリド及び／又はジグリセリドを添加する工程
　（７）酵素を失活させる工程
　（８）製造された植物性アイスクリームを回収する工程
　なお、工程（２）～工程（４）はいずれかを行っても、この中から２つの工程を行っても、全ての工程を行ってもよい。２以上の工程を行う場合は、順番は特に限定されず、別々に行ってもよいし、同時に行うこともできる。別々に行う場合は、各工程の間に、必要に応じて工程（７）の酵素の失活を行ってもよい。また、工程(５)～工程（８）は必須でなく、必要に応じて行うことができる。工程（５）を行う場合、工程（２）～工程（４）との順番は特に限定されず、別々に行ってもよいし、同時に行うこともできる。別々に行う場合は、各工程の間に、必要に応じて工程（７）の酵素の失活を行ってもよい。更に、工程（６）を行う場合、工程（１）～工程（７）のいずれかの間に行ってもよいし、工程（２）～工程（５）のいずれかと同時に行うこともできる。
　以下、実施例に基づいて本発明を更に詳細に説明する。なお、以下に説明する実施例は、本発明の代表的な実施例の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
　１．使用材料、使用酵素
　実施例で用いた材料及び酵素を、下記の表１に示す。
　２．酵素活性測定方法
　［マルトトリオース生成アミラーゼの活性測定方法］
　０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解した２％可溶性澱粉０．５ｍｌに、適量の酵素を加え、全量１．０ｍｌで、４０℃で反応させ、生成するマルトトリオース及びその他の還元糖をソモギー・ネルソン法で定量した。この条件で、１分間に１マイクロモルのグルコースに相当する還元糖を生成する酵素量を１単位（１Ｕ）とした。
　［リパーゼの活性測定方法］
　まずオリーブ油４５ｇと乳化液（ポリビニルアルコール（完全けん化物、けん化度９８．８±０．２）１８.５ｇ／Ｌ、ポリビニルアルコール（部分けん化物、けん化度８８．８±１．０）１．５ｇ／Ｌ）１５０ｍＬと混合し、ホモジナイザーを用いて乳化させ基質溶液を調製した。調製した基質溶液５ｍＬ及び０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４ｍＬに、リパーゼ酵素液１ｍＬを加えて３７℃で反応を行い、３０分後にエタノール・アセトン混液１０ｍＬを加え酵素反応を停止させた。次いで、０．０５ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液１０ｍＬ及びエタノール・アセトン混液１０ｍＬを加え、０．０５ｍｏｌ／Ｌ塩酸でｐＨが１０になるよう滴定した。そして、１分間に１μｍｏｌの脂肪酸の増加をもたらす酵素量を１単位（１Ｕ）とした。
　［β－アミラーゼの活性測定方法］
　食品添加物公定書（第９版）に記載の方法に準じて測定した。具体的には、基質としてばれいしょ澱粉を用い、あらかじめ１０５℃で２時間乾燥し、その乾燥物１．０ｇを量り、水２０ｍＬを加え、水酸化ナトリウム試液（２ｍｏｌ／Ｌ）５ｍＬを撹拌しながら徐々に加えて糊状とした。次に、撹拌しながら水浴中で３分間加熱した後、水２５ｍＬを加えた。冷却後、塩酸試液（２ｍｏｌ／Ｌ）及び塩酸試液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）を加えて中和し、１ｍｏｌ／Ｌの酢酸・酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）１０ｍＬを加え、更に水を加えて１００ｍＬとしたものを基質溶液とした。基質溶液１０ｍＬを量り、３７℃で１０分間加温し、試料溶液１ｍＬを加えて直ちに振り混ぜ、同温度で１０分間又は３０分間加温した後、さらに、フェーリング試液４ｍＬを加えて軽く振り混ぜ、沸騰水浴中で１５分間加熱した後、２５℃以下に冷却し、３０％ヨウ化カリウム溶液２ｍＬ及び硫酸（１→６）２ｍＬを加え、検液とした。なお、フェーリング試液は、硫酸銅（ＩＩ）五水和物の細かい結晶３４．６６gを量り、水を加えて溶かして５００ｍＬとした銅液と、（＋）－酒石酸ナトリウムカリウム四水和物１７３ｇ及び水酸化ナトリウム５０ｇを量り、水を加えて溶かして５００ｍＬとしたアルカリ性酒石酸塩液とを、銅液１容量とアルカリ性酒石酸塩液１容量の割合で混和して、用時調製した。別に、基質溶液の代わりに水１０ｍＬを用いて検液の調製と同様に操作し、比較液とした。検液及び比較液について、遊離したヨウ素を０．０５ｍｏｌ／Ｌチオ硫酸ナトリウム溶液で滴定した。終点は、滴定が終点近くになったときに溶性デンプン試液１～２滴を加え、生じた青色が消えるときとした。１分間に１ｍｇのブドウ糖に相当する還元力の増加をもたらす酵素量を１単位（１Ｕ）とし、次式から算出した。
β－アミラーゼの活性（Ｕ／ｇ，Ｕ／ｍＬ）＝ブドウ糖の量（ｍｇ）×１／１０×１／Ｍ
ブドウ糖の量（ｍｇ）＝（ｂ－ａ）×１．６×ｆ
　ａ：酵素反応液の滴定値（ｍＬ）
　ｂ：ブランク液の滴定値（ｍＬ）
　１．６：０．０５ｍｏｌ／Ｌチオ硫酸ナトリウム液１ｍＬは１．６ｍｇのブドウ糖量に相当する
　１／１０：反応時間（分）の単位換算係数
　Ｍ：試料溶液１ｍＬ中の試料の量（ｇ又はｍＬ）
　ｆ：０．０５ｍｏｌ／Ｌチオ硫酸ナトリウム液（定量用）のファクター
　［α－アミラーゼの活性測定方法］
　１％ポテトデキストリン１０ｍLを３７℃で１５分間前処理した後、アミラーゼ溶液を１ｍL添加してすぐによく混合した。３７℃で１０分後、１ｍＬを取り出して、０．１Ｍ塩酸１０ｍLと混合し、さらにその溶液から０．５ｍＬを取り出して０．２ｍＭヨウ素液１０ｍLと混合した後、吸光度（波長６６０ｎｍ）を測定した。１分間にヨウ素反応による呈色を１０％減少させる酵素量を１単位（１Ｕ）とした。
　３．実験例
　＜実験例１＞
　実験例１では、マルトトリオース生成アミラーゼ、及びβ－アミラーゼによる植物性アイスクリームの保形性向上効果を調べた。
　（１）植物性アイスクリームの製造
　精製水１Ｌにオート粉末１２０ｇを添加して、加熱ミキサー（「Thermomix TM6」、Vorwerk社製）を用いてスピード２の速さにて５０℃で２０分間混合した。次に下記表２に示す酵素を加えて、さらに１時間攪拌した。その後、混合物をチーズクロスに通して固形分を分離したものをオートベースとした。
　精製ココナッツ油８９．６ｇにモノ、ジグリセリド４．４８ｇを添加し、加熱ミキサー（「Thermomix TM6」、Vorwerk社製）を用いてスピード２の速さにて７０℃で２０分間混合した。続いて、ブドウ糖８９．６ｇと砂糖７８．４ｇを加えて、さらに１０分間混合したものをココナッツ油ベースとした。
　調製したココナッツ油ベースに、前記で調製したオートベースを加えて８５℃に昇温して、１５分間攪拌した。そして混合物をボウルに移して、ハンドミキサーで５分間乳化させた後、一晩冷蔵庫で保管した。翌日、バニラエッセンス２ｇと塩２ｇを加えて３０秒から４５秒混ぜ合わせ、アイスクリームメーカー（ＮＯＳＴＡＬＧＩＡ　ＰＲＯＤＵＣＴＳ、モデル：ＰＩＣＭ２０ＤＢＬ）で植物性アイスクリームを製造した。
　（２）糖組成分析
　上記で得られたオートベース０．５ｍLを精製水で５倍に希釈し、遠心分離（１３，０００ｒｐｍ、５分）して上清を取り出し、メンブレンフィルター（０．２μｍ）したものの糖組成を、高速液体クロマトグラフィー（検出器：RID-20A、株式会社島津製作所製）で分析した。カラムはCK04S（三菱ケミカル株式会社製）を使用し、特に糖の重合度を分析した。全ピークエリアに対する、各糖成分の割合を下記表２に示す。
　（３）保形性評価
　製造した植物性アイスクリームを紙カップに充填し、－１５℃で一晩かけて、さらに冷凍、および成型した。保形性の評価は、室温で秤上に水平にセットしたメッシュ板の上に、紙カップをはがしたアイスクリームをのせて、アイスクリームが溶け始めて最初の１滴が秤に落ちた時点を開始点として、５分毎に９０分後まで秤の数値を読み取った。
　そして、下記の数式（１）を用いて算出した値を、保形性の評価値とした。
　保形性（％）＝｛（（開始時のアイスクリームの重さ）―（９０分後の秤の数値））÷（開始時のアイスクリームの重さ）｝×１００　・・・（１）
　得られた評価値（保形性（％））について、下記の数式（２）を用いて、保形性上昇率を求めた。
　保形性上昇率（％）＝（各試験区の保形性／コントロールの保形性）×１００　・・・（２）
　（４）結果
　結果を下記の表２に示す。
　（５）考察
　表２に示す通り、β－アミラーゼを用いて植物性アイスクリームを製造した試験区１、及びマルトトリオース生成アミラーゼを用いて植物性アイスクリームを製造した試験区２は、マルトトリオース生成アミラーゼを用いずに植物性アイスクリームを製造したコントロール１に比べて、高い保形性を示していた。特に、マルトトリオース生成アミラーゼを用いて植物性アイスクリームを製造した試験区２では、保形性の向上が顕著であった。
　＜実験例２＞
　実験例２では、マルトトリオース生成アミラーゼの添加量依存性を検討した。
　（１）植物性アイスクリームの製造
　実験例１と同一の方法で、表３に示すコントロール２、試験区３、及び４の植物性アイスクリームを製造した。
　（２）保形性評価
　実験例１と同一の方法で、保形性上昇率を評価した。
　（３）結果
　結果を下記の表３に示す。
　（４）考察
　表３に示す通り、マルトトリオース生成アミラーゼを用いて植物性アイスクリームを製造した試験区３及び４は、マルトトリオース生成アミラーゼを用いずに植物性アイスクリームを製造したコントロール２に比べて、高い保形性を示していた。また、試験区３及び４の結果から、マルトトリオース生成アミラーゼは、１．２Ｕ程度でも十分な保形性向上効果を発揮することが分かった。
　＜実験例３＞
　実験例３では、リパーゼによる植物性アイスクリームの保形性向上効果を調べた。
　（１）植物性アイスクリームの製造
　精製水１Ｌにオート粉末１２０ｇを添加して、加熱ミキサー（「Thermomix TM6」、Vorwerk社製）を用いてスピード２の速さにて５０℃で２０分間混合した。次に、下記表４に示す量のα－アミラーゼを加えて、さらに１時間攪拌した。その後、混合物をチーズクロスに通して固形分を分離したものをオートベースとした。
　精製ココナッツ油８９．６ｇにモノ、ジグリセリド４．４８ｇを添加し、加熱ミキサー（「Thermomix TM6」、Vorwerk社製）を用いてスピード２の速さにて７０℃で２０分間混合した。次に、試験区５については、下記表４に示す量のリパーゼを加えて、さらに５０℃で３０分間攪拌した。その後、ブドウ糖８９．６ｇと砂糖７８．４ｇを加えて、さらに１０分間混合したものをココナッツ油ベースとした。
　調製したオートベース及びココナッツ油ベースを用いて、実験例１と同様の方法にて、植物性アイスクリームを製造した。
　（２）保形性評価
　実験例１と同一の方法で、保形性上昇率を評価した。
　（３）結果
　結果を下記の表４に示す。
　（４）考察
　表４に示す通り、リパーゼを用いて植物性アイスクリームを製造した試験区５は、リパーゼを用いずに植物性アイスクリームを製造したコントロール３に比べて、高い保形性を示していた。
　＜実験例４＞
　実験例４では、リパーゼの添加量依存性を検討した。
　（１）植物性アイスクリームの製造
　実験例３と同一の方法で、表５に示すコントロール４、試験区６、及び７の植物性アイスクリームを製造した。
　（２）保形性評価
　実験例１と同一の方法で、保形性上昇率を評価した。
　（３）結果
　結果を下記の表５に示す。
　（５）考察
　表５に示す通り、植物性油脂含有材料にリパーゼを作用させることにより、保形性が向上することが分かった。また、保形性は、リパーゼの添加量依存的に向上することが分かった。

Claims (4)

  1. 　マルトトリオース生成アミラーゼ、リパーゼ、及びβ－アミラーゼからなる群から選択される１以上の酵素を含む、植物性アイスクリームの保形性向上用酵素剤。
  2. 　請求項１に記載の保形性向上用酵素剤が用いられた、植物性アイスクリーム。
  3. 　植物性糖質含有材料にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させるマルトトリオース生成アミラーゼ作用工程、植物性油脂含有材料にリパーゼを作用させるリパーゼ作用工程、及び植物性糖質含有材料にβ－アミラーゼを作用させるβ－アミラーゼ作用工程から選択される１以上の工程を含む、植物性アイスクリームの製造方法。
  4. 　植物性糖質含有材料にマルトトリオース生成アミラーゼを作用させるマルトトリオース生成アミラーゼ作用工程、植物性油脂含有材料にリパーゼを作用させるリパーゼ作用工程、及び植物性糖質含有材料にβ－アミラーゼを作用させるβ－アミラーゼ作用工程から選択される１以上の工程を含む、植物性アイスクリームの保形性向上方法。
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