WO2011049243A1

WO2011049243A1 - バイオマスが増大し、かつ環境ストレス耐性が向上した形質転換植物およびその作出方法

Info

Publication number: WO2011049243A1
Application number: PCT/JP2010/069229
Authority: WO
Inventors: 榊原均; 中道範人; 槇田庸絵
Original assignee: 独立行政法人理化学研究所
Priority date: 2009-10-23
Filing date: 2010-10-22
Publication date: 2011-04-28
Also published as: US20120278948A1; US9145563B2

Abstract

　本発明は、疑似レスポンスレギュレータ(PRR)遺伝子群の欠損とは異なるアプローチでPRR遺伝子群の発現制御を行ない、有用形質を付与した形質転換植物を提供することを課題とする。　本発明によれば、植物の疑似レスポンスレギュレータ（Pseudo-Response-Regulator）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Pseudo-Receiver domain）およびCCTモチーフ（CCT-motif）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、あるいは、該ポリヌクレオチドと少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチド若しくは融合ポリヌクレオチドを含む組み換えベクターを導入したことを特徴とする、形質転換植物が提供される。

Description

バイオマスが増大し、かつ環境ストレス耐性が向上した形質転換植物およびその作出方法

　本発明は、植物一個体あたりのバイオマスが増大し、かつ環境ストレスに対する耐性が向上した形質転換植物、およびその作出方法に関する。

　シロイヌナズナの概日時計システムは、バイオマスの増大や開花時期の決定、環境ストレス応答に関わることが示唆されている（非特許文献１）。植物の時計関連遺伝子については、シロイヌナズナを用いた研究で、ＣＩＲＣＡＤＩＡＮ　ＣＬＯＣＫ　ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ１（ＣＣＡ１）、ＬＡＴＥ　ＥＬＯＮＧＡＴＥＤ　ＨＹＰＯＣＯＴＹＬ（ＬＨＹ）、ＴＩＭＩＮＧ　ＯＦ　ＣＡＢ　ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ１（ＴＯＣ１）という３つの遺伝子が発見され、植物の概日リズムの機構は、これらの複数の遺伝子の転写フィードバックループに基づいていることが明らかとなっている。このうちＴＯＣ１遺伝子は、疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の１つである。シロイヌナズナでは現在、ＴＯＣ１（ＰＲＲ１）を含め、ＰＲＲ３、ＰＲＲ５、ＰＲＲ７、ＰＲＲ９の計５つが疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子として同定されており、ＰＲＲ９、ＰＲＲ７、ＰＲＲ５、ＰＲＲ３、ＰＲＲ１（ＴＯＣ１）の順に、夜明けとともに位相段階的に夕方にかけて発現量が上昇・減衰していく。
　本発明者らは、シロイヌナズナのｐｒｒ９　ｐｒｒ７　ｐｒｒ５三重変異株（ｄ９７５変異株）に注目して研究を行ってきた。これまでの研究より、ｄ９７５変異株は、概日時計システムの崩壊に加えて（非特許文献２）、産業上有用な形質、例えば花茎の伸長（非特許文献３）、開花の遅延（非特許文献２）、低温や乾燥に対してより強い耐性（非特許文献４）を示すことがわかった。しかし、３つのＰＲＲ遺伝子群は、互いに機能を補完しあうので、単一変異株では目立った形質は示さない（非特許文献２）。また、３つのＰＲＲ遺伝子群の欠損をターゲットにした有用形質の付与は、多重変異体の作成という困難を伴う。さらにＰＲＲ９、ＰＲＲ７、ＰＲＲ５タンパク質の生化学的な機能は未知であるため、低分子化合物などによるＰＲＲタンパク質群の機能抑制も、手法としては現実的ではない。
　一方、低温や乾燥耐性を付与できる技術として、シロイヌナズナの乾燥ストレス応答性プロモーターの支配下でＤＲＥＢ１Ａ遺伝子あるいは類似の遺伝子群の発現を誘導する方法が挙げられる（特許文献１および非特許文献５）。この方法は、ストレス耐性の付与としては充分であるが、バイオマスの増大については述べられていない。
　バイオマスの増大は、時計関連遺伝子のＧＩＧＡＮＴＥＡの変異体（ｇｉ）によって観察されるが（非特許文献６）、この変異体は低温ストレスにより感受性であるため（非特許文献７）、この遺伝子の機能欠損をターゲットとした方法では、バイオマスの増大かつ環境ストレスへ耐性を持つ植物は作成できない。
　また時計関連遺伝子のＣＩＲＣＡＤＩＡＮ　ＣＬＯＣＫ　ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ　１（ＣＣＡ１）とＬＡＴＥ　ＥＬＯＮＧＡＴＥＤ　ＨＹＰＯＣＯＴＹＬ（ＬＨＹ）の若干の発現低下がバイオマスの増大と相関があるとされるが（非特許文献８）、ＣＣＡ１とＬＨＹ遺伝子の完全な発現抑制株（ｃｃａ１　ｌｈｙ二重変異体）は逆にバイオマスが低下しており（非特許文献９）、これらの遺伝子をターゲットとしたバイオマスの増大は難しいと考えられる。
　また長日性植物と短日性植物の生物時計はほぼ同じながらも（非特許文献１０）、それを利用した季節応答性は異なることが知られており（非特許文献１１）、長日性植物シロイヌナズナの時計遺伝子の改変を用いた有用形質の付与が、短日性植物にどの程度有効かは不明である。
特開２０００−１１６２６０号公報Ｈａｒｍｅｒ，Ｓ．Ｌ．，Ｈｏｇｅｎｅｓｃｈ，Ｊ．Ｂ．，Ｓｔｒａｕｍｅ，Ｍ．，Ｃｈａｎｇ，Ｈ．Ｓ．，Ｈａｎ，Ｂ．，Ｚｈｕ，Ｔ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｋｒｅｐｓ，Ｊ．Ａ．，ａｎｄ　Ｋａｙ，Ｓ．Ａ．２０００．Ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｅｄ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｋｅｙ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ．Ｓｃｉｅｎｃｅ　２９０（５４９９）：２１１０−２１１３．Ｎａｋａｍｉｃｈｉ，Ｎ．，Ｋｉｔａ，Ｍ．，Ｉｔｏ，Ｓ．，Ｙａｍａｓｈｉｎｏ，Ｔ．，ａｎｄ　Ｍｉｚｕｎｏ，Ｔ．２００５．ＰＳＥＵＤＯ−ＲＥＳＰＯＮＳＥ　ＲＥＧＵＬＡＴＯＲＳ，ＰＲＲ９，ＰＲＲ７　ａｎｄ　ＰＲＲ５，ｔｏｇｅｔｈｅｒ　ｐｌａｙ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｒｏｌｅｓ　ｃｌｏｓｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　４６（５）：６８６−６９８．Ｙａｍａｓｈｉｎｏ，Ｔ．，Ｉｔｏ，Ｓ．，Ｎｉｗａ，Ｙ．，Ｋｕｎｉｈｉｒｏ，Ａ．，Ｎａｋａｍｉｃｈｉ，Ｎ．，ａｎｄ　Ｍｉｚｕｎｏ，Ｔ．２００８．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｓｅｕｄｏ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｉｎ　ｄｉｕｒｎａｌ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｔｉｍｅ　ｃｕｅｓ．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　４９（１２）：１８３９−１８５０．Ｎａｋａｍｉｃｈｉ，Ｎ．，Ｋｕｓａｎｏ，Ｍ．，Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ａ．，Ｋｉｔａ，Ｍ．，Ｉｔｏ，Ｓ．，Ｙａｍａｓｈｉｎｏ，Ｔ．，Ｓａｉｔｏ，Ｋ．，Ｓａｋａｋｉｂａｒａ，Ｈ．，ａｎｄ　Ｍｉｚｕｎｏ，Ｔ．２００９．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ　ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ　ｏｆ　ａｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ＰＳＥＵＤＯ　ＲＥＳＰＯＮＳＥ　ＲＥＧＵＬＡＴＯＲ　ａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ　ｔｒｉｐｌｅ　ｍｕｔａｎｔ　ｒｅｖｅａｌｓ　ａ　ｒｏｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ　ｉｎ　ｃｏｌｄ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　５０（３）：４４７−４６２．Ｋａｓｕｇａ，Ｍ．，Ｌｉｕ，Ｑ．，Ｍｉｕｒａ，Ｓ．，Ｙａｍａｇｕｃｈｉ−Ｓｈｉｎｏｚａｋｉ，Ｋ．，ａｎｄ　Ｓｈｉｎｏｚａｋｉ，Ｋ．１９９９．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ｐｌａｎｔ　ｄｒｏｕｇｈｔ，ｓａｌｔ，ａｎｄ　ｆｒｅｅｚｉｎｇ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｂｙ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｏｆ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｓｔｒｅｓｓ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ．Ｎａｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　１７（３）：２８７−２９１．Ｒｅｄｅｉ，Ｇ．１９６０．Ｓｕｐｅｒｖｉｔａｌ　ｍｕｔａｎｔｓ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　４７：４４３−４６０．Ｃａｏ，Ｓ．，Ｙｅ，Ｍ．，ａｎｄ　Ｊｉａｎｇ，Ｓ．２００５．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ＧＩＧＡＮＴＥＡ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｌｄ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｒｅｐ　２４（１１）：６８３−６９０．Ｎｉ，Ｚ．，Ｋｉｍ，Ｅ．Ｄ．，Ｈａ，Ｍ．，Ｌａｃｋｅｙ，Ｅ．，Ｌｉｕ，Ｊ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｓｕｎ，Ｑ．，ａｎｄ　Ｃｈｅｎ，Ｚ．Ｊ．２００９．Ａｌｔｅｒｅｄ　ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｒｈｙｔｈｍｓ　ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｖｉｇｏｕｒ　ｉｎ　ｈｙｂｒｉｄｓ　ａｎｄ　ａｌｌｏｐｏｌｙｐｌｏｉｄｓ．Ｎａｔｕｒｅ　４５７（７２２７）：３２７−３３１．Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｗｈｅａｔｌｅｙ，Ｋ．，Ｈａｎｚａｗａ，Ｙ．，Ｗｒｉｇｈｔ，Ｌ．，Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ，Ｍ．，Ｓｏｎｇ，Ｈ．Ｒ．，Ｃａｒｒｅ，Ｉ．Ａ．，ａｎｄ　Ｃｏｕｐｌａｎｄ，Ｇ．２００２．ＬＨＹ　ａｎｄ　ＣＣＡ１　ａｒｅ　ｐａｒｔｉａｌｌｙ　ｒｅｄｕｎｄａｎｔ　ｇｅｎｅｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｔｏ　ｍａｉｎｔａｉｎ　ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｒｈｙｔｈｍｓ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．Ｄｅｖ　Ｃｅｌｌ　２（５）：６２９−６４１．Ｍｕｒａｋａｍｉ　Ｍ，Ｔａｇｏ　Ｙ，Ｙａｍａｓｈｉｎｏ　Ｔ，Ｍｉｚｕｎｏ　Ｔ．２００７　Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｏｖｅｒｖｉｅｗｓ　ｏｆ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ　ａｎｄ　Ｏｒｙｚａ　ｓａｔｉｖａ．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．４８（１）：１１０−１２１Ｈａｙａｍａ　Ｒ，Ｙｏｋｏｉ　Ｓ，Ｔａｍａｋｉ　Ｓ，Ｙａｎｏ　Ｍ，Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ　Ｋ．２００３　Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄｉｃ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｓ　ｓｈｏｒｔ−ｄａｙ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｉｎ　ｒｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ．４２２（６９３３）：７１９−７２２

　従って、本発明の課題は、疑似レスポンスレギュレータ（ＰＲＲ）遺伝子群の欠損とは異なるアプローチでＰＲＲ遺伝子群の機能制御を行ない、有用形質を付与した形質転換植物を提供することにある。
　本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、植物の概日時計システムに関与する疑似レスポンスレギュレータ（ＰＲＲ）と、転写因子の転写活性化ドメインの融合タンパク質を長日性植物のシロイヌナズナで強制発現させることにより、バイオマスの増大と環境ストレス耐性の向上が同時に達成できることを見出した。また、短日性植物のイネでは、疑似レスポンスレギュレータ（ＰＲＲ）のみを強制発現させることにより、バイオマスの増大と環境ストレス耐性の向上が得られることを見出した。本発明はかかる知見により完成されたものである。
　即ち、本発明は以下の発明を包含する。
（１）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチド、または該融合ポリヌクレオチドを含む組み換えベクターを導入したことを特徴とする、形質転換植物。
（２）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（１）に記載の形質転換植物。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（３）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、（１）に記載の形質転換植物。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
（４）　転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｇ）~（ｉ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（１）~（３）のいずれかに記載の形質転換植物。
　（ｇ）　配列番号１１に示す塩基配列からなるからなるポリヌクレオチド
　（ｈ）　配列番号１１に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｉ）　配列番号１１に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（５）　植物が長日性植物である、（１）~（４）のいずれかに記載の形質転換植物。
（６）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチドを含む組み換えベクターを導入したことを特徴とする、形質転換植物。
（７）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（６）に記載の形質転換植物。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（８）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、（６）に記載の形質転換植物。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
（９）　植物が短日性植物である、（６）~（８）のいずれかに記載の形質転換植物。
（１０）　バイオマスが増量した、（１）~（９）のいずれかに記載の形質転換植物。
（１１）　環境ストレス耐性が付与された、（１）~（９）のいずれかに記載の形質転換植物。
（１２）　環境ストレスが、乾燥ストレス、低温ストレス、及び塩ストレスから成る群から選択される少なくとも１種以上である、（１１）に記載の形質転換植物。
（１３）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチド、または該融合ポリヌクレオチドを含む組み換えベクターを植物細胞に導入し、該植物細胞から植物体を再生することを特徴とする、形質転換植物の作出方法。
（１４）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（１３）に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（１５）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、（１３）に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
（１６）　転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｇ）~（ｉ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（１３）~（１５）のいずれかに記載の方法。
　（ｇ）　配列番号１１に示す塩基配列からなるからなるポリヌクレオチド
　（ｈ）　配列番号１１に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｉ）　配列番号１１に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（１７）　植物が長日性植物である、（１３）~（１６）のいずれかに記載の方法。
（１８）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチドを含む組み換えベクターを植物細胞に導入し、該植物細胞から植物体を再生することを特徴とする、形質転換植物の作出方法。
（１９）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（１８）に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（２０）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、（１８）に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
（２１）　植物が短日性植物である、（１８）~（２０）のいずれかに記載の方法。
（２２）　形質転換植物が、バイオマスが増量した形質転換植物である、（１３）~（２１）のいずれかに記載の方法。
（２３）　形質転換植物が、環境ストレス耐性を有する形質転換植物である、（１３）~（２１）のいずれかに記載の方法。
（２４）　環境ストレスが、乾燥ストレス、低温ストレス、及び塩ストレスから成る群から選択される少なくとも１種以上である、（２３）に記載の方法。
（２５）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチドを植物内で過剰発現させることを特徴とする、植物のバイオマスを増大させる方法。
（２６）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（２５）に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（２７）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、（２５）に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
（２８）　転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｇ）~（ｉ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（２５）~（２７）のいずれかに記載の方法。
　（ｇ）　配列番号１１に示す塩基配列からなるからなるポリヌクレオチド
　（ｈ）　配列番号１１に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｉ）　配列番号１１に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（２９）　植物が長日性植物である、（２５）~（２８）のいずれかに記載の方法。
（３０）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを植物内で過剰発現させることを特徴とする、植物のバイオマスを増大させる方法。
（３１）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（３０）に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（３２）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、（３０）に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
（３３）　植物が短日性植物である、（３０）~（３２）のいずれかに記載の方法。
（３４）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチドを植物内で過剰発現させることを特徴とする、植物に環境ストレス耐性を付与する方法。
（３５）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（３４）に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（３６）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、（３４）に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
（３７）　転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｇ）~（ｉ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（３４）~（３６）のいずれかに記載の方法。
　（ｇ）　配列番号１１に示す塩基配列からなるからなるポリヌクレオチド
　（ｈ）　配列番号１１に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｉ）　配列番号１１に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（３８）　植物が長日性植物である、（３４）~（３７）のいずれかに記載の方法。
（３９）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを植物内で過剰発現させることを特徴とする、植物に環境ストレス耐性を付与する方法。
（４０）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、（３９）に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（４１）　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、（３９）に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
（４２）　植物が短日性植物である、（３９）~（４１）のいずれかに記載の方法。
（４３）　環境ストレスが、乾燥ストレス、低温ストレス、及び塩ストレスから成る群から選択される少なくとも１種以上である、（３４）~（４２）のいずれかに記載の方法。

　図１は、疑似レスポンスレギュレータ遺伝子のＰＲＲ１（ＴＯＣ１）、ＰＲＲ３、ＰＲＲ５、ＰＲＲ７、ＰＲＲ９遺伝子の共通構造を示す。
　図２は、ＰＲＲ５、ＰＲＲ７、ＰＲＲ９のＣＣＡ１：：ＬＵＣ比活性（ＣＣＡ１プロモーター活性）への影響を示す。
　図３は、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２ベクターの構造を示す。
　図４は、ＴＯＣ１−ＶＰ３２、ＰＲＲ３−ＶＰ３２、ＰＲＲ５−ＶＰ３２、ＰＲＲ７−ＶＰ３２、およびＰＲＲ９−ＶＰ３２のＣＣＡ１：：ＬＵＣ比活性（ＣＣＡ１プロモーター活性）への影響を示す。
　図５は、ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体、野生株、およびｐｒｒ９　ｐｒｒ７　ｐｒｒ５三重変異体の花芽が出るまでの日数、花芽が出た時点での葉の枚数を示す。
　図６は、ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体および野生株の花芽形成時（生育ステージが同じ）の形態を示す。
　図７は、ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体および野生株の発芽３８日後（生育日数が同じ）の形態（上段）、および葉の面積（下段）を示す。
　図８は、ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体および野生株の花茎の断面図を示す。
　図９は、ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体および野生株の塩ストレス耐性テストの結果を示す。
　図１０は、ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体および野生株の乾燥ストレス耐性テストの結果を示す。
　図１１は、ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体および野生株の低温ストレス耐性テストの結果を示す。
　図１２は、ＰＲＲ５発現植物体（イネ）の形態を示す。
　本願は、２００９年１０月２３日に出願された日本国特許出願２００９−２４４５９５号、および２００９年１２月３０日に出願された米国仮出願６１／２９１，３００号の優先権を主張するものであり、該特許出願の明細書に記載される内容を包含する。

　以下、本発明を詳細に説明する。
１．ポリヌクレオチド
　本発明の形質転換植物を作出するのに使用するポリヌクレオチドは、植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、あるいは、当該ポリヌクレオチドと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチドである。
　上記の擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドとして、例えば、疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子であるＰＲＲ１（ＴＯＣ１）、ＰＲＲ３、ＰＲＲ５、ＰＲＲ７、ＰＲＲ９遺伝子が挙げられる。これらＰＲＲ１（ＴＯＣ１）、ＰＲＲ３、ＰＲＲ５、ＰＲＲ７、ＰＲＲ９遺伝子は図１に示す共通構造を有する。
　ＰＲＲ１（ＴＯＣ１）、ＰＲＲ３、ＰＲＲ５、ＰＲＲ７、ＰＲＲ９遺伝子の塩基配列を配列番号１、３、５、７、９に、またそれらによりコードされるアミノ酸配列を配列番号２、４、６、８、１０にそれぞれ示す。
　上記の擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）は、疑似レスポンスレギュレータ遺伝子に共通して見出されるモチーフであり、タンパク質間の相互作用能を有することが知られている。ＰＲＲ１（ＴＯＣ１）、ＰＲＲ３、ＰＲＲ５、ＰＲＲ７、ＰＲＲ９遺伝子の擬似レシーバードメインのアミノ酸配列はそれぞれ配列番号１２、１３、１４、１５、１６で表わされる。
　また、上記のＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）は、植物タンパク質中によくみられる構造で、塩基性アミノ酸に富み、約４５アミノ酸からなる。シロイヌナズナのＣＯＮＳＴＡＮＳ（ＣＯ）タンパク質のＣＣＴモチーフは、核局在とタンパク質間の相互作用に関与することが知られている。ＰＲＲ１（ＴＯＣ１）、ＰＲＲ３、ＰＲＲ５、ＰＲＲ７、ＰＲＲ９遺伝子のＣＣＴモチーフのアミノ酸配列はそれぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１で表わされる。
　上記の擬似レシーバードメインとＣＣＴモチーフを含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド（以下、「ＰＲＲポリヌクレオチド」という）は、植物界に広く分布すると考えられ、由来は問わないが、例えば、シロイヌナズナ（アブラナ科）のほか、イネ（イネ科）、ポプラ（ヤナギ科）、ブドウ（ブドウ科）、トマト（ナス科）、キャッサバ（トウダイグサ科）、ダイズ（マメ科）、裸子植物、シダ類、コケ類などが挙げられる。
　本発明においては、ＰＲＲポリヌクレオチドとして、配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチドのほか、当該ポリヌクレオチドと同等の機能を有する限り、配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と類似する塩基配列からなるポリヌクレオチドを使用することもできる。従って、本発明において用いるＰＲＲポリヌクレオチドは、上記配列番号の塩基配列と類似する塩基配列からなり、ＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドを包含する。このようなポリヌクレオチドは、天然から調製されたものでも人工的に調製されたものでもよい。例えば、上記配列番号の塩基配列のホモログ（オーソログ、パラログを含む）、人工的に変異をいれたものであってもよい。
　具体的には、次のポリヌクレオチドが挙げられる。
（ｉ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｉｉ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｉｉｉ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｉｖ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｖ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　上記の「ＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子」は、概日時計システムを構成し、朝に発現量が最大となる朝方位遺伝子（ｍｏｒｎｉｎｇ　ｇｅｎｅ）である。「ＣＣＡ１遺伝子の転写抑制活性」は、当該遺伝子の転写を抑制して、その発現量を減少させる活性をいう。また、「ＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子」はＣＣＡ１遺伝子の機能的に相同な遺伝子である。
　ここでいう「ストリンジェントな条件」とは、いわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいう。上記のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、当業者であれば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ　Ｅｄ，，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（２００１）を参照し、適宜選択することができる。一例を示せば、２５％ホルムアミド、よりストリンジェントな条件では５０％ホルムアミド、４×ＳＳＣ、５０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、１０×デンハルト溶液、２０μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含むハイブリダイゼーション溶液中、４２℃で一晩プレハイブリダイゼーションを行った後、標識したプローブを添加し、４２℃で一晩保温することによりハイブリダイゼーションを行う。その後の洗浄における洗浄液および温度条件は、「１ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度であり、よりストリンジェントな条件としては「０．５ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度であり、さらにストリンジェントな条件としては「０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度である。温度が高いほど、塩濃度が低いほどストリンジェンシーは高くなり、より相同性の高いポリヌクレオチドを単離できる。
　但し、上記ＳＳＣ、ＳＤＳおよび温度の条件の組み合わせは例示であり、当業者であれば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを決定する上記若しくは他の要素（例えば、プローブ濃度、プローブの長さ、ハイブリダイゼーション反応時間など）を適宜組み合わせることにより、上記と同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
　上記のストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションにより得られるポリヌクレオチドは、配列番号１、３、５、７、又は９のいずれかに示す塩基配列により示されるＤＮＡと通常高い相同性を有する。ここで、高い相同性とは、上記配列番号の塩基配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましく９５％以上、もっとも好ましくは９７％以上（例えば、９８から９９％）の配列の相同性をいう。
　また、前記の「１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列」について、欠失、置換若しくは付加されてもよいアミノ酸の数としては、部位特異的突然変異誘発法等の公知の変異タンパク質作製法により欠失、置換、若しくは付加できる程度の数をいい、前記した活性を保持する限り、その個数は制限されないが、通常は、たとえば、１~２０個、好ましくは１~１０個、より好ましくは１~５個をいう。また、ここにいう「変異」は、主には公知の変異タンパク質作製法により人為的に導入された変異を意味するが、天然に存在する同様の変異であってもよい。
　また、前記のアミノ酸配列に関し、「７０％以上の相同性」とは、好ましくは８０％以上、８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましく９５％以上、もっとも好ましくは９７％以上（例えば、９８から９９％）の配列の相同性をいう。配列（アミノ酸配列、塩基配列）の同一性は、ＦＡＳＴＡ検索やＢＬＡＳＴ検索により決定することができる。
　本発明に用いるＰＲＲポリヌクレオチドは、公知技術によって調製することができる。例えば、シロイヌナズナ組織抽出物からｔｏｔａｌ　ｍＲＮＡを調製し、上記配列番号の塩基配列をもとにプライマーを設計し、ＲＡＣＥ法等を行って上記配列番号の塩基配列の完全長ｃＤＮＡを得ることができる。またはシロイヌナズナ組織抽出物からｃＤＮＡライブラリーを作製し、上記配列番号の塩基配列をもとにプローブを設計し、ハイブリダイゼーション法によって得ることもできる。さらには、上記配列番号の塩基配列をもとに、人工的に合成してもよい。
　また、当業者であれば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ　３ｒｄ　ｅｄ．，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，１０　Ｓｋｙｌｉｎｅ　Ｄｒｉｖｅ　Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ（２００１））等を参照することにより、ＰＲＲポリヌクレオチドのホモログを容易に取得することができる。
　たとえば、アミノ酸の欠失、付加、及び置換は、上記タンパク質をコードする遺伝子に、当該技術分野で公知の手法によって変異を導入することによって行うことができる。遺伝子に変異を導入するには、Ｋｕｎｋｅｌ法またはＧａｐｐｅｄ　ｄｕｐｌｅｘ法等の公知手法またはこれに準ずる方法により行うことができ、例えば部位特異的突然変異誘発法を利用した変異導入用キット（例えばＭｕｔａｎｔ−Ｋ（ＴＡＫＡＲＡ社製）やＭｕｔａｎｔ−Ｇ（ＴＡＫＡＲＡ社製））、ＴＡＫＡＲＡ社のＬＡ　ＰＣＲ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓシリーズキットを利用することができる。あるいは、上記配列番号の塩基配列に変異を導入した配列を、市販の核酸合成装置によって合成することも可能である。
　一方、ＰＲＲポリヌクレオチドに融合させる少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドは、ＰＲＲポリヌクレオチドによるＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制を解除し、その転写を活性化させる機能を有する。転写因子の転写活性化ドメインは転写活性化能をもつものであれば如何なるものでもよく、具体例としては、ヘルペスウイルスＶＰ１６タンパク質の転写活性化ドメイン、酵母由来ＧＡＬ４タンパク質の転写活性化ドメインが挙げられる。当該転写活性化ドメインは少なくとも１種あればよく、同種または異種の転写活性化ドメインを２種以上組み合わせてもよい。また、ヘルペスウイルスＶＰ１６タンパク質の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドは配列番号１１に示されるが、ＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制を解除し、その転写を活性化させる機能を有する限り、配列番号１１に示す塩基配列と類似する塩基配列からなるポリヌクレオチドであってもよい。例えば、配列番号１１に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドや、配列番号１１に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドが挙げられる。「ストリンジェント」や「相同性」の意味は、前記に定義したとおりである。
２．組換えベクター
　植物形質転換に用いる本発明の組換えベクターは、上記のポリヌクレオチドまたは融合ポリヌクレオチド（以下、目的遺伝子という）を適当なベクターに導入することにより構築することができる。ここで、ベクターとしては、例えば、アグロバクテリウムを介して植物に目的遺伝子を導入することができる、ｐＢＩ系、ｐＰＺＰ系、ｐＳＭＡ系、ｐＣＡＭＢＩＡ系のベクターなどが好適に用いられる。特にｐＢＩ系のバイナリーベクター又は中間ベクター系が好適に用いられ、例えば、ｐＢＩ１２１、ｐＢＩ１０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３等が挙げられる。バイナリーベクターとは大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）及びアグロバクテリウムにおいて複製可能なシャトルベクターで、バイナリーベクターを保持するアグロバクテリムを植物に感染させると、ベクター上にあるＬＢ配列とＲＢ配列より成るボーダー配列で囲まれた部分のＤＮＡを植物核ＤＮＡに組み込むことが可能である。一方、ｐＵＣ系のベクターは、植物に遺伝子を直接導入することができ、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＵＣ９等が挙げられる。また、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）、インゲンマメモザイクウイルス（ＢＧＭＶ）、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）等の植物ウイルスベクターも用いることができる。
　バイナリーベクター系プラスミドを用いる場合、上記のバイナリーベクターの境界配列（ＬＢ，ＲＢ）間に、目的遺伝子を挿入し、この組換えベクターを大腸菌中で増幅する。次いで、増幅した組換えベクターをＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ　ＧＶ３１０１、Ｃ５８、ＬＢＡ４４０４、ＥＨＡ１０１、ＥＨＡ１０５あるいはＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ　ＬＢＡ１３３４等に、エレクトロポレーション法等により導入し、該アグロバクテリウムを植物の形質導入に用いる。
　また、上記の方法以外にも、三者接合法（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２：８７１１（１９８４））によって、目的遺伝子を含む植物感染用アグロバクテリウムを調製することができる。すなわち、目的遺伝子を含むプラスミドを保有する大腸菌、ヘルパープラスミド（例えば、ｐＲＫ２０１３等）を保有する大腸菌、及びアグロバクテリウムを混合培養し、リファンピシリン及びカナマイシンを含む培地上で培養することにより植物感染用の接合体アグロバクテリウムを得ることができる。
　ベクターに目的遺伝子を挿入するには、まず、精製されたＤＮＡを適当な制限酵素で切断し、適当なベクターＤＮＡの制限酵素部位又はマルチクローニングサイトに挿入してベクターに連結する方法などが採用される。
　また、目的遺伝子は、当該遺伝子の機能が発揮されるようにベクターに組み込まれることが必要である。そこで、ベクターには、目的遺伝子の上流、内部、あるいは下流に、プロモーター、エンハンサー、ターミネーター、バイナリーベクター系を使用するための複製開始点（Ｔｉ又はＲｉプラスミド由来の複製開始点など）、選抜マーカー遺伝子などを連結することができる。
　「プロモーター」としては、植物細胞において機能し、植物の特定の組織内あるいは特定の発育段階において発現を導くことのできるＤＮＡであれば、植物由来のものでなくてもよい。具体例としては、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）３５Ｓプロモーター、ノパリン合成酵素遺伝子のプロモーター（Ｐｎｏｓ）、トウモロコシ由来ユビキチンプロモーター、イネ由来のアクチンプロモーター、タバコ由来ＰＲタンパク質プロモーター等が挙げられる。また、特定器官について特に目的遺伝子を発現させたい場合は、組織特異的に発現するプロモーターを用いることもできる。例えば、花茎特異的遺伝子あるいは茎頂特異的遺伝子のプロモーターを用いれば、本発明のポリヌクレオチドのバイオマス増量効果を効率的に取得することも可能である。
　エンハンサーとしては、例えば、目的遺伝子の発現効率を高めるために用いられ、ＣａＭＶ３５Ｓプロモーター内の上流側の配列を含むエンハンサー領域などが挙げられる。
　ターミネーターとしては、プロモーターにより転写された遺伝子の転写を終結できる配列であればよく、例えば、ノパリン合成酵素（ＮＯＳ）遺伝子のターミネーター、オクトピン合成酵素（ＯＣＳ）遺伝子のターミネーター、ＣａＭＶ　３５Ｓ　ＲＮＡ遺伝子のターミネーター等が挙げられる。
　選抜マーカー遺伝子としては、例えば、アンピシリン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ビアラホス耐性遺伝子、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子などが挙げられる。
　また、選抜マーカー遺伝子は、上記のように目的遺伝子とともに同一のプラスミドに連結させて組換えベクターを調製してもよいが、あるいは、選抜マーカー遺伝子をプラスミドに連結して得られる組換えベクターと、目的遺伝子に連結して得られる組換えベクターとを別々に調製してもよい。別々に調製した場合は、各ベクターを宿主にコトランスフェクト（共導入）する。
３．形質転換植物及びその作出方法
　本発明の形質転換植物は、上記ポリヌクレオチド若しくは融合ポリヌクレオチド又は組換えベクター（以下、これらを総称して目的遺伝子という）を対象植物に導入することによって作出することができる。本発明において「遺伝子の導入」とは、例えば公知の遺伝子工学的手法により、目的遺伝子を上記宿主植物の細胞内に発現可能な形で導入することを意味する。ここで導入された遺伝子は、宿主植物のゲノムＤＮＡ中に組み込まれてもよいし、外来ベクターに含有されたままで存在していてもよい。
　上記目的遺伝子を植物中に導入する方法としては、既に報告され、確立されている種々の方法を適宜利用することができ、例えば、アグロバクテリウム法、ＰＥＧ−リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法、リポソーム法、パーティクルガン法、マイクロインジェクション法等が挙げられる。アグロバクテリウム法を用いる場合は、プロトプラストを用いる場合、組織片を用いる場合、及び植物体そのものを用いる場合（ｉｎ　ｐｌａｎｔａ法）がある。プロトプラストを用いる場合は、ＴｉプラスミドないしはＲｉプラスミドをもつアグロバクテリウム（それぞれＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ又はＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）と共存培養する方法、スフェロプラスト化したアグロバクテリウムと融合する方法（スフェロプラスト法）、組織片を用いる場合は、対象植物の無菌培養葉片（リーフディスク）に感染させる方法やカルス（未分化培養細胞）に感染させる等により行うことができる。また種子あるいは植物体を用いるｉｎ　ｐｌａｎｔａ法を適用する場合、すなわち植物ホルモン添加の組織培養を介さない系では、吸水種子、幼植物（芽生え）、鉢植え植物などへのアグロバクテリウムの直接処理等にて実施可能である。これらの植物形質転換法は、「島本功、岡田清孝　監修、新版　モデル植物の実験プロトコール　遺伝学的手法からゲノム解析まで（２００１）、秀潤社」などの一般的な教科書の記載に従って行うことができる。
　目的遺伝子が植物体に組み込まれたか否かの確認は、ＰＣＲ法、サザンハイブリダイゼーション法、ノーザンハイブリダイゼーション法、ウェスタンブロッティング法等により行うことができる。例えば、形質転換植物からＤＮＡを調製し、目的遺伝子特異的プライマーを設計してＰＣＲを行う。ＰＣＲを行った後は、増幅産物についてアガロースゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又はキャピラリー電気泳動等を行い、臭化エチジウム、ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ液等により染色し、そして増幅産物を１本のバンドとして検出することにより、形質転換されたことを確認することができる。また、予め蛍光色素等により標識したプライマーを用いてＰＣＲを行い、増幅産物を検出することもできる。さらに、マイクロプレート等の固相に増幅産物を結合させ、蛍光又は酵素反応等により増幅産物を確認する方法でもよい。さらに、その植物細胞からタンパク質を抽出し、２次元電気泳動を行って分画し、目的遺伝子がコードするタンパク質のバンドを検出することにより、植物細胞に導入された目的遺伝子が発現されていること、すなわちその植物が形質転換されていることを確認してもよい。
　あるいは、種々のレポーター遺伝子、例えばベータグルクロニダーゼ（ＧＵＳ）、ルシフェラーゼ（ＬＵＣ）、Ｇｒｅｅｎ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ベータガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）等の遺伝子を目的遺伝子の下流域に連結したベクターを作製し、該ベクター導入したアグロバクテリムを用いて上記と同様にして植物を形質転換させ、該レポーター遺伝子の発現を測定することによっても確認できる。
　本発明において形質転換に用いられる植物としては単子葉植物又は双子葉植物あるいは短日性植物又は長日性植物のいずれであってもよいが、短日性植物（例えば、イネ、トウモロコシ、ダイズ、キク、アサガオ、コスモスなど）の場合は、前述の植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、長日性植物（例えば、シロイヌナズナ、コムギ、オオムギ、ホウレンソウ、ポプラなど）の場合は、該ポリヌクレオチと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチドを導入して形質転換する。本発明において形質転換に用いられる植物としては、例えば、アブラナ科（シロイヌナズナ、キャベツ、ナタネ等）、イネ科（イネ、トウモロコシ、オオムギ、コムギ、スイッチグラス、サトウキビ、ソルガム等）、ナス科（トマト、ナス、ジャガイモ、タバコ等）、マメ科（ダイズ、エンドウ、インゲン等）、ヒルガオ科（サツマイモ等）、キク科（ヒマワリ等）、トウダイグサ科（キャツサバ、ヤトロファ等）、バラ科（イチゴ等）、ヤナギ類（ポプラ等）等に属する植物が挙げられるが、これらの植物に限定されるものではなく、裸子植物、シダ類、コケ類をも含む陸生植物全般に汎用可能である。
　本発明において、形質転換の対象とする植物材料としては、茎、葉、種子、胚、胚珠、子房、茎頂等の植物器官、葯、花粉等の植物組織やその切片、未分化のカルス、それを酵素処置して細胞壁を除いたプロプラスト等の植物培養細胞のいずれであってもよい。またｉｎ　ｐｌａｎｔａ法適用の場合、吸水種子や植物体全体を利用できる。
　本発明において、形質転換植物とは、植物体全体、植物器官（例えば葉、花弁、茎、根、穀実、種子等）、植物組織（例えば表皮、師部、柔組織、木部、維管束等）、又は植物培養細胞（例えばカルス）のいずれをも意味するものである。
　植物培養細胞を対象とする場合において、得られた形質転換細胞から形質転換体を再生させるためには既知の組織培養法により器官又は個体を再生させればよい。このような操作は、植物細胞から植物体への再生方法として一般的に知られている方法により、当業者であれば容易に行うことができる。植物細胞から植物体への再生については、例えば、以下のように行うことができる。
　まず、形質転換の対象とする植物材料として植物組織又はプロトプラストを用いた場合、これらを無機要素、ビタミン、炭素源、エネルギー源としての糖類、植物生長調節物質（オーキシン、サイトカイニン、ジベレリン、アブシジン酸、エチレン、ブラシノステロイド等の植物ホルモン）等を加えて滅菌したカルス形成用培地中で培養し、不定形に増殖する脱分化したカルスを形成させる（以下「カルス誘導」という）。このように形成されたカルスをオーキシン等の植物生長調節物質を含む新しい培地に移しかえて更に増殖（継代培養）させる。
　カルス誘導は寒天等の固型培地で行い、継代培養は例えば液体培養で行うと、それぞれの培養を効率良くかつ大量に行うことができる。次に、上記の継代培養により増殖したカルスを適当な条件下で培養することにより器官の再分化を誘導し（以下、「再分化誘導」という）、最終的に完全な植物体を再生させる。再分化誘導は、培地におけるオーキシン等の植物生長調節物質、炭素源等の各種成分の種類や量、光、温度等を適切に設定することにより行うことができる。かかる再分化誘導により、不定胚、不定根、不定芽、不定茎葉等が形成され、更に完全な植物体へと育成させる。あるいは、完全な植物体になる前の状態（例えばカプセル化された人工種子、乾燥胚、凍結乾燥細胞及び組織等）で貯蔵等を行ってもよい。
　本発明の形質転換植物は、当該遺伝子を導入した植物体（形質転換された細胞やカルスから再生された植物体を含む）の有性生殖又は無性生殖により得られる子孫の植物体、及びその子孫植物体の組織や器官等の一部（種子、プロトプラストなど）も包含するものとする。本発明の形質転換植物は、前記目的遺伝子を導入して形質転換した植物体から、種子、プロトプラストなどの繁殖材料を取得し、それを栽培又は培養することによって量産することができる。
　上記のようにして得られる形質転換植物は、前記融合ポリヌクレオチドの発現により植物一個体当たりのバイオマスが増量する。本発明においては、「バイオマス」とは、ある時点に任意の空間内に存在する植物体またはその部分の量をいい、当該植物体またはその部分を由来とする物質、食料、資材、燃料、資源などをも含む意味で用いる。具体的には、バイオマスの増量は、地下茎（根茎、球茎、塊茎、鱗茎）・地上茎・花茎・蔓の肥大、種子の肥大、茎丈・草丈、稈丈、穂丈の伸長促進、葉などのソース器官の増大をいう。
　また、上記のようにして得られる形質転換植物は、環境ストレス耐性をも有する。「環境ストレス」とは、一般には非生物的ストレスを意味し、例えば乾燥ストレス、低温ストレス、高塩濃度ストレス等をいう。「乾燥」とは水分が欠乏した状態を意味し、「低温」とはそれぞれの生物種の生活至適温度よりも低い温度にさらされた状態（例えばシロイヌナズナの場合−２０~＋２１℃の温度を継続的に１時間~数週間さらすことをいう。また、「高塩濃度」とは、５０ｍＭ~６００ｍＭの濃度のＮａＣｌを継続的に０．５時間~数週間処理したときの状態を意味する。これらの環境ストレスは、１種類のものを負荷してもよく、複数種類のものを負荷してもよい。
　以下、実施例によって本発明を更に具体的に説明するが、これらの実施例は本発明を限定するものでない。

ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ９−ＦＬＡＧ、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ７−ＦＬＡＧ、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＦＬＡＧの作成と転写活性化能の検定
　ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製）にカリフラワーモザイクウイルス由来３５Ｓ転写プロモーター、ＦＬＡＧペプチド、Ｎｏｓ転写ターミネーターが組み込まれたベクター（本ベクターを「ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＦＬＡＧ」と呼ぶ）［Ｂｉｏｓｃｉ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　６８（９）：１９６６（２００４）］を用いて、３５Ｓ転写プロモーター支配下で、シロイヌナズナのＰＲＲ９（ＴＡＩＲ　ｌｏｃｕｓ：Ａｔ２ｇ４６７９０、配列番号９）、ＰＲＲ７（ＴＡＩＲ　ｌｏｃｕｓ：Ａｔ５ｇ０２８１０、配列番号７）、あるいはＰＲＲ５（ＴＡＩＲ　ｌｏｃｕｓ：Ａｔ５ｇ２４４７９、配列番号５）とＦＬＡＧペプチド（Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ：配列番号２２）をタンデムな形で連結させ、融合タンパク質を発現できるベクター（ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ９−ＦＬＡＧ、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ７−ＦＬＡＧ、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＦＬＡＧ）を以下のようにして構築した。
　ＰＲＲ５遺伝子は、夜明けより６時間後に発現ピークを迎えるため、その時間にシロイヌナズナを凍結サンプリングし、そこからｍＲＮＡおよびｃＤＮＡの作成を行った。植物からのＲＮＡの抽出は、ＲＮｅａｓｙ　Ｐｌａｎｔ　Ｍｉｎｉｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）によって行った。逆転写反応によるｃＤＮＡの合成は、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ　ＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いて、オリゴｄＴ２０をプライマーとして行った。そのｃＤＮＡプールを鋳型にし、プライマー（５’−ＡＣＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＡＣＴＡＧＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＴＡＧ−３’：配列番号２３、５’−ＧＴＴＧＧＡＴＣＣＴＣＴＧＧＡＧＣＴＴＧＴＧＴＧＧＡＴＴＧＧ−３’：配列番号２４）によって、ＰＲＲ５のｃＤＮＡをＰＣＲ反応により増幅した。ＰＣＲ反応はＰｒｉｍｅ　Ｓｔａｒ酵素を用い、９４°Ｃで２分間おいた後、９４°Ｃ、１５秒間、５５°Ｃ、２０秒間、７２°Ｃ、２分間を１サイクルとして、３５サイクル行った。増幅したＰＲＲ５ｃＤＮＡ断片は、制限酵素Ｘｂａ　Ｉ（Ｔａｋａｒａ社製）とＢａｍＨ　Ｉ（Ｔａｋａｒａ社製）で３７°Ｃにて５時間処理した。またｐＢＳ−３５Ｓ：：ＦＬＡＧもＸｂａ　ＩとＢａｍＨ　Ｉで同様に処理した。制限酵素処理したＰＲＲ５ｃＤＮＡとｐＢＳ−３５Ｓ：：ＦＬＡＧをライゲーション反応によって連結し、大腸菌ＤＨ５α（Ｔａｋａｒａ社製）に形質転換し、形質転換体よりベクター（ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＦＬＡＧ）を回収した。
　同様に、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ７−ＦＬＡＧ、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ９−ＦＬＡＧを作成した。尚、クローニングにもちいたｍＲＮＡは、夜明けより３時間後のシロイヌナズナであり、ＰＲＲ７のｃＤＮＡは、プライマー（５’−ＣＴＴＡＴＣＴＡＧＡＡＴＧＡＡＴＧＣＴＡＡＴＧＡＧＧＡＧＧＧ−３’：配列番号２５、５’−ＧＡＧＴＣＣＡＴＧＧＴＧＣＴＡＴＣＣＴＣＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＴＧＴＣ−３’：配列番号２６）、ＰＲＲ９のｃＤＮＡはプライマー（５’−ＣＡＡＡＴＣＴＡＧＡＡＴＧＧＧＧＧＡＧＡＴＴＧＴＧＧ−３’：配列番号２７、５’−ＧＡＡＧＴＣＣＡＴＧＧＴＴＧＡＴＴＴＴＧＴＡＧＡＣＧＣＧＴＣＴＧ−３’：配列番号２８）をもちいてＰＣＲ反応によって増幅した。増幅したＰＲＲ７ｃＤＮＡとＰＲＲ９ｃＤＮＡ断片は、制限酵素Ｘｂａ　Ｉ（Ｔａｋａｒａ社製）とＮｃｏ　Ｉ（Ｔａｋａｒａ社製）で３７°Ｃにて５時間処理した。またｐＢＳ−３５Ｓ：：ＦＬＡＧもＸｂａ　ＩとＮｃｏ　Ｉで同様に処理した。制限酵素処理したＰＲＲ９ｃＤＮＡあるいはＰＲＲ７ｃＤＮＡとｐＢＳ−３５Ｓ：：ＦＬＡＧをライゲーション反応によって連結し、大腸菌ＤＨ５α（Ｔａｋａｒａ社製）に形質転換し、形質転換体よりベクター（ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ９−ＦＬＡＧ、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ７−ＦＬＡＧ）を回収した。
　シロイヌナズナでの一過的な発現系を用いて、ＰＲＲ９、ＰＲＲ７、ＰＲＲ５タンパク質がＣＣＡ１プロモーターをどのように制御するかを観察した。ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ９−ＦＬＡＧ、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ７−ＦＬＡＧ、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＦＬＡＧベクター（エフェクターベクター）と、ＣＣＡ１プロモーター支配下でＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ遺伝子を発現させるベクターＣＣＡ１：：ＬＵＣ（レポーターベクター）、３５Ｓプロモーター支配下でＲｅｎｉｌｌａ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅを発現させるベクター３５Ｓ：：ＲＬＵＣ（リファレンスベクター）をそれぞれ０．８μｇずつ混合し、１μＭ直径の金粒子にコーティングし、Ｐａｒｔｉｃｌｅ　Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、発芽後２週間、１２時間明（白色光）１２時間暗で生育したシロイヌナズナに一過的に導入した。導入後１２時間以降の特定の時間（明期に入って２時間後）で、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性とＲｅｎｉｌｌａ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性をＹａｍａｇｕｃｈｉらの方法に従って測定し［Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ，５５：６５２（２００８）］、Ｌｕｃｉｆｅａｓｅ活性／Ｒｅｎｉｌｌａ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性（Ｃｏｎｔｒｏｌ実験値を１とする）をＣＣＡ１プロモーター活性として評価した。その結果、ＰＲＲ９−ＦＬＡＧ、ＰＲＲ７−ＦＬＡＧ、ＰＲＲ５−ＦＬＡＧタンパク質の導入は、ＦＬＡＧタンパク質の導入時（Ｃｏｎｔｒｏｌ）よりもＣＣＡ１プロモーターを抑制化することが分かった（図２）。なお、植物体内でＰＲＲ９、ＰＲＲ７、ＰＲＲ５タンパク質はＣＣＡ１プロモーターに物理的に相互作用しているため（Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　ｖｏｌ．２２，５９４−６０５，２０１０）、ＰＲＲ９、ＰＲＲ７、ＰＲＲ５タンパク質はＣＣＡ１プロモーターに対して転写抑制化因子として機能していると考えられる。

ＰＲＲ５−ＶＰ３２、ＰＲＲ９−ＶＰ３２、ＰＲＲ７−ＶＰ３２、ＰＲＲ３−ＶＰ３２、およびＰＲＲ１−ＶＰ３２の作成と転写活性化能の検定
　ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製）にカリフラワーモザイクウイルス由来３５Ｓ転写プロモーターとＮｏｓ転写ターミネーターが組み込まれたベクター（本ベクターを「ｐＢＳ−３５Ｓ」と呼ぶ）［Ｂｉｏｓｃｉ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　６８（９）：１９６６（２００４）］を用いて、３５Ｓ転写プロモーター支配下で、シロイヌナズナのＰＲＲ５（ＴＡＩＲ　ｌｏｃｕｓ：Ａｔ５ｇ２４４７９、配列番号５）とヘルペスウイルス由来の転写因子の転写活性化ドメインＶＰ１６（ＧｅｎｅＢａｎｋ：ＡＣＭ６２２７１のアミノ酸配列の４１３位から４９０位までのアミノ酸配列によりコードされる塩基配列（配列番号１１））をタンデムな形で連結させ、融合タンパク質を発現できるベクター（ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２）を以下のようにして構築した。
　ＶＰ１６のｃＤＮＡは、ｐＶＰ１６（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）を鋳型にし、プライマーＡ（５’−ＧＴＴＴＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＡＡＧＴＣＧＣＣＣＣＣＣＣＧ−３’：配列番号２９と５’−ＣＴＴＴＡＡＧＣＴＴＣＧＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＡＣＣＧＴＡＣＴＣＧＴＣ−３’：配列番号３０）あるいはプライマーＢ（５’−ＣＴＴＴＡＡＧＣＴＴＡＡＡＧＴＣＧＣＣＣＣＣＣＣＧ−３’：配列番号３１と５’−ＣＧＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＴＴＡＣＧＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＡＣＣＧＴＡＣＴＣＧＴＣ−３’：配列番号３２）によってＰＣＲ反応により増幅した。前者のＶＰ１６のｃＤＮＡを便宜的にＶＰ１６−１、後者をＶＰ１６−２と呼ぶ。反応はＰｒｉｍｅ　Ｓｔａｒ酵素（Ｔａｋａｒａ社製）を用い、９４°Ｃで２分間おいた後、９４°Ｃ、１５秒間、５５°Ｃ、２０秒間、７２°Ｃ、３０秒間を１サイクルとして、３５サイクル行った。増幅したＶＰ１６−１を制限酵素Ｎｃｏ　Ｉ（Ｔａｋａｒａ社製）とＨｉｎｄ　ＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）で、ＶＰ１６−２をＨｉｎｄ　ＩＩＩとＮｏｔ　Ｉ（Ｔａｋａｒａ社製）で３７°Ｃにて５時間処理した。またｐＢＳ−３５ＳをＮｃｏ　ＩとＮｏｔ　Ｉで３７°Ｃにて５時間処理した。制限酵素処理したＶＰ１６−１、ＶＰ１６−２、ｐＢＳ−３５Ｓをライゲーション反応で連結させた。ライゲーション反応は、Ｌｉｇａｔｉｏｎ　Ｈｉｇｈ　ｖｅｒ２（Ｔａｋａｒａ社製）を用い、条件は添付書類に従った。ライゲーションしたＤＮＡ溶液を大腸菌ＤＨ５αにヒートショック法によって形質転換した。形質転換されたＤＨ５αの選抜は、アンピシリン（５０μｇ／ｍＬ）を含むＬｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ寒天培地で行った。得られた形質転換体をアンピシリン（５０μｇ／ｍＬ）を含むＬｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ液体培地で培養した後、それよりベクター（本ベクターを「ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＶＰ３２」とする）を回収した。
　ＰＲＲ５遺伝子は、夜明けより６時間後に発現ピークを迎えるため、その時間にシロイヌナズナを凍結サンプリングし、そこからｍＲＮＡおよびｃＤＮＡの作成を行った。植物からＲＮＡの抽出は、ＲＮｅａｓｙ　Ｐｌａｎｔ　Ｍｉｎｉｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）によって行った。逆転写反応によるｃＤＮＡの合成は、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ　ＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いて、オリゴｄＴ２０をプライマーとして行った。そのｃＤＮＡプールを鋳型にし、プライマー（５’−ＡＣＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＡＣＴＡＧＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＴＡＧ−３’：配列番号２３、５’−ＧＴＴＧＧＡＴＣＣＴＣＴＧＧＡＧＣＴＴＧＴＧＴＧＧＡＴＴＧＧ−３’：配列番号２４）によって、ＰＲＲ５のｃＤＮＡをＰＣＲ反応により増幅した。ＰＣＲ反応はＰｒｉｍｅ　Ｓｔａｒ酵素を用い、９４°Ｃで２分間おいた後、９４°Ｃ、１５秒間、５５°Ｃ、２０秒間、７２°Ｃ、２分間を１サイクルとして、３５サイクル行った。増幅したＰＲＲ５ｃＤＮＡ断片は、制限酵素Ｘｂａ　Ｉ（Ｔａｋａｒａ社製）とＢａｍＨ　Ｉ（Ｔａｋａｒａ社製）で３７°Ｃにて５時間処理した。またｐＢＳ−３５Ｓ：：ＶＰ３２もＸｂａ　ＩとＢａｍＨ　Ｉで同様に処理した。制限酵素処理したＰＲＲ５ｃＤＮＡとｐＢＳ−３５Ｓ：：ＶＰ３２をライゲーション反応によって連結し、大腸菌ＤＨ５α（Ｔａｋａｒａ社製）に形質転換し、形質転換体よりベクター（ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２、図３）を回収した。
　次に、シロイヌナズナでの一過的な発現系を用いて、ＰＲＲ５−ＶＰ３２タンパク質がＣＣＡ１プロモーターをどのように制御するかを観察した。ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２ベクター（エフェクターベクター）と、ＣＣＡ１プロモーター支配下でＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ遺伝子を発現させるベクターＣＣＡ１ｍｉｎ−３５Ｓ：：ＬＵＣ［レポーターベクター：ＣＣＡ１プロモーターの−４０６ｎｔから−２９９ｎｔ（０ｎｔは翻訳開始点）までをプライマー５’−ＡＣＧＣＣＡＡＧＣＴＡＡＧＣＴＴＣＴＡＧＴＡＴＧＴＴＧＡＣＡＴＡＴＧＧＣ−３’（配列番号３５）、５’−ＧＡＡＧＧＧＴＣＴＴＧＣＧＡＴＡＴＣＧＣＴＡＣＧＧＡＡＡＴＧＧＡＧＡＡＡＴＣ−３’（配列番号３６）を用いて増幅してＣＣＡ１ｍｉｎを得、ＣＣＡ１ｍｉｎをＩｎｆｕｓｉｏｎ反応（Ｔａｋａｒａ社製）によって、ＣａＭＶ３５Ｓプロモーター最小領域の上流Ｈｉｎｄ　ＩＩＩとＥｃｏＲ　Ｖ制限酵素サイトにクローニングすることによって作製］、３５Ｓプロモーター支配下でＲｅｎｉｌｌａ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅを発現させるベクター３５Ｓ：：ＲＬＵＣ（リファレンスベクター）をそれぞれ０．８μｇずつ混合し、１μＭ直径の金粒子にコーティングし、Ｐａｒｔｉｃｌｅ　Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、発芽後２週間、１２時間明（白色光）：１２時間暗で生育したシロイヌナズナに一過的に導入した。導入後１２時間以降の特定の時間（明期に入って２時間後）で、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性とＲｅｎｉｌｌａ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性をＹａｍａｇｕｃｈｉらの方法に従って測定し［Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ，５５：６５２（２００８）］、Ｌｕｃｉｆｅａｓｅ活性／Ｒｅｍｉｎ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性をＣＣＡ１プロモーター活性として評価した。その結果、ＰＲＲ５−ＶＰ３２タンパク質の導入は、ＶＰ３２タンパク質の導入時よりも効果的にＣＣＡ１プロモーターを活性化することが分かった（図４）。なお、植物体内でＰＲＲ５タンパク質はＣＣＡ１プロモーターに物理的に相互作用しているため（Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　ｖｏｌ．２２，５９４−６０５，２０１０）、ＰＲＲ５−ＶＰ３２タンパク質はＣＣＡ１プロモーターに対して転写活性化因子として機能していると考えられる。
　ＰＲＲ５遺伝子の相同遺伝子は、シロイヌナズナにおいて４種類存在する（ＰＲＲ９，ＰＲＲ７，ＰＲＲ３，ＴＯＣ１）。そこで、これらの遺伝子のコードするタンパク質にＶＰ３２を融合させたもの（ＰＲＲ−ＶＰ３２）もＰＲＲ５−ＶＰ３２と同様にＣＣＡ１プロモーターを活性化できるかどうかを実験した。
　ＰＲＲ９はプライマー（５’−ＣＡＣＣＡＴＧＧＧＧＧＡＧＡＴＴＧＴＧＧＴＴＴＴＡＡＧ−３’：配列番号３７、（５’−ＴＧＡＴＴＴＴＧＴＡＧＡＣＧＣＧＴＣＴＧ−３’：配列番号３８）を用いてＰＣＲ反応で増幅し、ｐＥＮＴＲ−ＤＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）にＴＯＰＯクローニングした（ベクター名：ｐＥＮＴＲ−ＤＴＯＰＯ−ＰＲＲ９）。
　ＰＲＲ７はプライマー（５’−ＣＡＣＣＡＴＧＡＡＴＧＣＴＡＡＴＧＡＧＧＡＧＧＧ−３’：配列番号３９、５’−ＧＣＴＡＴＣＣＴＣＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＴＧＴＣ−３’：配列番号４０）を用いてＰＣＲ反応で増幅し、ｐＥＮＴＲ−ＤＴＯＰＯにクローニングした（ベクター名：ｐＥＮＴＲ−ＤＴＯＰＯ−ＰＲＲ７）。
　ＰＲＲ３はプライマー（５’−ＣＡＣＣＡＴＧＴＧＴＴＴＴＡＡＴＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＣＴＧＧＴＧＡＴＧ−３’：配列番号４１、５’−ＡＴＴＧＴＣＴＴＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＴＴＴＡＴＧＡＴＣ−３’：配列番号４２）を用いて、ＰＣＲ反応で増幅し、ｐＥＮＴＲ−ＤＴＯＰＯにクローニングした（ベクター名：ｐＥＮＴＲ−ＤＴＯＰＯ−ＰＲＲ３）。
　ＴＯＣ１はプライマー（５’−ＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＴＴＧＡＡＣＧＧＴＧＡＧＴＧ−３’：配列番号４３、５’−ＡＧＴＴＣＣＣＡＡＡＧＣＡＴＣＡＴＣＣ−３’：配列番号４４）を用いてＰＣＲ増幅し、ｐＥＮＴＲ−ＤＴＯＰＯにクローニングした（ベクター名：ｐＥＮＴＲ−ＤＴＯＰＯ−ＴＯＣ１）。
　一方、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２をＸｂａ　Ｉ／Ｂａｍ　ＨＩで消化し、ＰＲＲ５配列をゲル泳動法によって除いたのち、ベクター部分（ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＶＰ３２）をＴ４ポリメラーゼ（Ｔａｋａｒａ社製）によって平滑化した。その平滑末端にＧａｔｅｗａｙ　Ｖｅｃｔｏｒ　Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍを用いてＲｅａｄｉｎｇ　Ｆｒａｍｅ　Ｃａｓｓｅｔｔｅ　Ｂ　ＤＮＡ断片をライゲーション反応によって導入した（ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＶＰ３２−ＧＷ）。ＬＲ反応キット（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ社製）を用いて、上記で作成した各ｐＥＮＴＲ−ＤＴＯＰＯ−ＰＲＲから各ＰＲＲ遺伝子配列を、ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＶＰ３２−ＧＷにクローニングした（ｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ−ＶＰ３２）。これらをエフェクターベクターとし、シロイヌナズナの一過的発現系を用いてＣＣＡ１プロモーター活性を検定した。その結果、ＰＲＲ９−ＶＰ３２、ＰＲＲ７−ＶＰ３２、ＴＯＣ１−ＶＰ３２は一過的な過剰発現はＣＣＡ１プロモーターを活性化できた（図４）。

ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現シロイヌナズナの取得
　上記のｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２ベクターＤＮＡを、Ｘｂａ　ＩとＮｏｔ　Ｉで３７°Ｃにて５時間処理し、アガロースゲル内で電気泳動した。ゲル内のＰＲＲ５−ＶＰ３２断片は、ＥｔＢｒ染色により、ＵＶ光下で可視化し、その断片を含むゲルをカミソリで切り出した。ゲルからＤＮＡをＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ社製）を用いて精製した。そのＰＲＲ５−ＶＰ３２断片をバイナリーベクターｐＳＫ１［ＤＮＡ　Ｒｅｓ．６：４０７，（１９９９）］のＸｂａ　ＩとＮｏｔ　Ｉ制限酵素サイトにクローニングし、得られたベクター（ｐＳＫ１−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２）をアグロバクテリウム・チュメファシエンスＥＨＡ１０５にヒートショック法で形質転換した。形質転換体の選抜は、リファンピシリン（２５μｇ／ｍＬ）とカナマイシン（２５μｇ／ｍＬ）を含むＬｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ寒天培地で行った。得られた形質転換ＥＨＡ１０５をリファンピシリン（２５μｇ／ｍＬ）とカナマイシン（２５μｇ／ｍＬ）を含むＬｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ液体培地で３０°Ｃ、２４時間培養し、シロイヌナズナに感染させた。感染はバキュームインフィルトレーション法［ＣＲ　Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｐａｒｉｓ，Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１６：１１９４（１９９３）］を採用した。バーミュキュライトと培養土を１：１で混合した土壌で、シロイヌナズナを生育させ、その花芽分裂組織を中心にｐＳＫ１−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２を保持するＥＨＡ１０５培養液を直接浸し、デシケーターに入れ、バキュームポンプで６０~７０ｍｍＨｇになるまで吸引後、１０分間、室温に放置した。鉢をトレーに移しラップで覆い湿度を保った。翌日ラップを取り、植物をそのまま生育させ種子を収穫した。その種子をハイグロマイシン２５μｇ／ｍＬを含むＭｕｒａｓｈｉｇｅ−Ｓｋｏｏｇ寒天培地に蒔種し、生育可能な個体を形質転換植物として取得した。取得した植物のうち、ＰＲＲ５−ＶＰ３２のｍＲＮＡの発現が過剰に認められる植物を選抜した。
　ｍＲＮＡの定量は、以下の方法で行った。植物からＲＮＡの抽出は、ＲＮｅａｓｙ　Ｐｌａｎｔ　Ｍｉｎｉｋｉｔによって行った。逆転写反応によるｃＤＮＡの合成は、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ　ＩＩによって行った。定量的ＰＣＲは、ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｅｘｔａｑ　ＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を反応ｍｉｘｔｕｒｅとし、プライマー（５’−ＣＴＴＣＡＴＣＣＴＴＣＴＡＧＴＧＣＣ−３’：配列番号３３と５’−ＧＴＣＧＴＴＴＣＴＴＣＴＴＧＧＡＧＣ−３’：配列番号３４）を用いて行い、ＰＣＲ産物の検出と定量は、ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭ　７０００　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ（ＡＢＩ社製）を用いた。選抜したＰＲＲ５−ＶＰ３２発現組み換え体を、自家受粉させ、組み換えＤＮＡ部位をホモに持つ植物をさらに選抜した。選抜は、ハイグロマイシン２５μｇ／ｍＬを含むＭｕｒａｓｈｉｇｅ−Ｓｋｏｏｇ寒天培地で生育する植物を指標として行った。

ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現シロイヌナズナのバイオマス
　３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２が相同染色体にホモで形質転換されたシロイヌナズナ、ｐｒｒ９　ｐｒｒ７　ｐｒｒ５三重変異体、および野生株を１６時間明／８時間暗条件下、１／２希釈したＭＧＲＬ水耕液［Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，９９：２６３，（１９９２）］を用いて、ロックウール上で生育させた。３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現体の花芽形成時期は、野生株より若干遅れ、花芽が形成時の葉の枚数は増加していたが、ｐｒｒ９　ｐｒｒ７　ｐｒｒ５三重変異体ほどではなかった（図５）。花芽形成時期の大幅な遅延が起こらないことは、植物の成熟の遅延が起こらないことを意味し、バイオマテリアルの獲得にとっては有益な形質であるといえる。
　また、３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２が相同染色体にホモで形質転換されたシロイヌナズナと、野生株を１６時間明／８時間暗条件下、１／２希釈したＭＧＲＬ水耕液［Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，９９：２６３，（１９９２）］を用いて、ロックウール上で生育させ、花茎の高さが８ｃｍになった時点（生育ステージが同じ）でこれらの植物体の写真を撮影した。一個体あたりの葉の合計面積を、Ｉｍａｇｅ　Ｊ（ｈｔｔｐ：／／ｒｓｂｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を用いて測定したところ、３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体は野生株に比べて葉面積が約２倍大きかった（図６）。また、発芽後３８日の時点（生育日数が同じ）で一個体あたりの葉の合計面積を、Ｉｍａｇｅ　Ｊを用いて測定したところ、ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体の葉の面積は、野生型のそれに比べて１．７~１．８倍増加していた（図７）。さらに花茎が２０ｃｍほどになった時点で、地上にもっとも近い腋芽から二番目の腋芽の間をカミソリで切断し、染色液（０．５％アルシアンブルー、１．０％サフラニン）に５分間浸し、水で脱色した後、断面を顕微鏡下で観察した（図８）。花茎の断面積を、Ｉｍａｇｅ　Ｊを用いて測定したところ、ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現植物体の花茎の断面積は、野生型のそれに比べて４倍以上に増えていた。その原因として、花茎をつくる細胞数の増大、さらには花茎そのものをつくる茎頂分裂組織の増大が示唆される。なお、これらの表現型は、独立した形質転換体（組み替えＤＮＡ部位が染色体上で異なる系統）で同様に観察された。

ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現シロイヌナズナの環境ストレス耐性
（１）　ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現体の塩ストレス耐性
　３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２が相同染色体にホモで形質転換されたシロイヌナズナと、野生株を１６時間明／８時間暗条件下、ＭＳ培地で６日間生育させた後、塩ストレス培地に移した。用いた培地は、通常ＭＳ培地あるいは０．２Ｍ　ＮａＣｌを含んだＭＳ培地である。移植後５日目でそれらの植物体の写真を撮影した。野生株の葉は白化していたが、３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２は未だ緑のままであった。つまり、３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２は野生株と比較してより強い塩耐性能を持つことがわかった（図９）。
（２）　ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現体の乾燥ストレス耐性
　３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２が相同染色体にホモで形質転換されたシロイヌナズナと、野生株を１６時間明／８時間暗条件下、バーミュキュライトと培養土を１：１で混合した土壌で３８日間生育させた。その植物体の本葉を切り取り、２５°Ｃの室内に１４時間放置した後、それらの植物体の写真を撮影した。３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２の切除葉は野生株のそれと比べて、水分を多く含んだ状態であった（図１０）。
（３）　ＰＲＲ５−ＶＰ３２発現体の低温ストレス耐性
　３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２が相同染色体にホモで形質転換されたシロイヌナズナと、野生株を１６時間明／８時間暗条件下、バーミュキュライトと培養土を１：１で混合した土壌で２６日間生育させ、−５°Ｃに設定した恒温恒湿器（ＳＡＮＹＯ，Ａｔｍｏｓ　Ｃｈａｍｂｅｒ）に２４時間入れた後、再度通常生育条件に戻した。その５日後に植物体の写真を撮影した。３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＶＰ３２は、野生株に比べて低温ストレスにも耐性になっていた（図１１）。

ＰＲＲ５発現イネの取得
　実施例１で作成したｐＢＳ−３５Ｓ：：ＰＲＲ５−ＦＬＡＧを鋳型とし、プライマー（５’−ＡＧＡＡＧＴＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡＴＧＡＣＴＡＧＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧ−３’：配列番号４５）と（５’−ＴＣＧＡＧＣＴＣＧＧＴＡＣＣＣＴＴＡＣＴＴＧＴＣＧＴＣＡＴＣＧＴＣＴＴＴＧ−３’：配列番号４６）、Ｐｒｉｍｅ　Ｓｔａｒ酵素を用い、ＰＣＲ反応によって、ＰＲＲ５−ＦＬＡＧ配列を増幅し、Ｉｎｆｕｓｉｏｎ反応（Ｔａｋａｒａ社製）で、ｐＡＣＴベクター（Ｈｉｒｏｓｅ　ｅｔ　ａｌ．，Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，ｖｏｌ．４８，５２３−５３９，２００７）のＸｂａ　ＩとＳｍａ　Ｉ制限酵素サイトの間に入れた（ｐＡＣＴ：：ＰＲＲ５−ＦＬＡＧ）。
　ｐＡＣＴ：：ＰＲＲ５−ＦＬＡＧベクターをアグロバクテリウムＥＨＡ１０５に形質転換した。形質転換されたアグロバクテリウムをアグロバクテリウム法により、イネのカルスに感染させた。籾を取り除いた完熟種子１００~１２０粒を、次亜塩素酸ナトリウムを含む滅菌用溶液に浸して３０分ゆっくり撹拌し、滅菌した。滅菌水で十分に洗浄した種子を無菌的にカルス誘導培地（Ｎ６Ｄ培地：Ｈｉｒｏｓｅ　ｅｔ　ａｌ．，Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，ｖｏｌ．４８，５２３−５３９，２００７）に１０種子／シャーレで置床し、２８℃，１２．５時間明／２４℃，１１．５時間暗で培養した。３週間後、種子の胚乳とシュート部分を除去し、胚盤由来カルスのみを新たなカルス誘導培地（Ｎ６Ｄ培地）へ移し、３日間培養した。同日に、形質転換されたアグロバクテリウムをカナマイシン５０μｇ／ｍｌを含むＡＢ培地（Ｈｉｒｏｓｅ　ｅｔ　ａｌ．，Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，ｖｏｌ．４８，５２３−５３９，２００７）に塗布し、２８℃、遮光下で培養した。３日後、ＡＢ培地上で増殖したアグロバクテリウムをかき取り、アセトシリンゴン２０μｇ／ｍｌを含む共存培地（ＡＡＭ液：Ｈｉｒｏｓｅ　ｅｔ　ａｌ．，Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，ｖｏｌ．４８，５２３−５３９，２００７）に懸濁し、ＯＤ６００＝０．１５~０．２に調整した。３日間前培養したカルスをこのアグロバクテリウム懸濁液に浸して、１．５分間転倒撹拌した。余分なアグロバクテリウム懸濁液を除いた後、アセトシリンゴン２０μｇ／ｍｌを含む共存培養培地（２Ｎ６−ＡＳ培地：Ｈｉｒｏｓｅ　ｅｔ　ａｌ．，Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，ｖｏｌ．４８，５２３−５３９，２００７）上に１０カルス／シャーレで置床した。２８℃、遮光下で培養し、アグロバクテリウムとカルスを共存培養した。３日後、増殖したアグロバクテリウムを除去するために、カルスを５０ｍｌチューブ２本に集め、滅菌水を注ぎ、ローテーターで撹拌（５分間）を３回、カルベニシリン５００μｇ／ｍｌを含む滅菌水で撹拌（５分間）を３回行った。これをカルベニシリン５００μｇ／ｍｌ、ハイグロマイシン５０μｇ／ｍｌを含む選抜培地（Ｎ６Ｄ培地）へ１０カルス／シャーレで置床し、２８℃、３週間培養した。その後、全てのカルスをカルベニシリン２５０μｇ／ｍｌ、ハイグロマイシン５０μｇ／ｍｌを含む再分化培地に移し、再分化してくるまで３週間毎に培地を更新した。再分化培地へ移してから約１ヶ月半後、２ｃｍ前後に再分化したシュートが得られた。これをカルベニシリン２００μｇ／ｍｌ、ハイグロマイシン５０μｇ／ｍｌを含むホルモンフリー培地を注ぎ固めたアグリポットに移して発根を促し、約１２ｃｍ前後まで生育させた。
　このシュートの細胞の核ゲノムには、ＡＣＴ−ＰＲＲ５−ＦＬＡＧが導入されており、実際にＰＲＲ５−ＦＬＡＧタンパクが発現していることをウェスタンブロッティングで確認した。同様にｐＡＣＴベクターがゲノムに導入されたシュートを得た。

ＰＲＲ５発現イネのバイオマス
　ｐＡＣＴ−ＰＲＲ５−ＦＬＡＧまたはｐＡＣＴが導入されたシュートを、同時期に土（赤玉土、緩行性肥料てまいらず１ｇ／１個体）に植え替え、その後短日条件下（１２月から３月）、３０℃、１２時間明／２５℃，１２時間暗の温室で生育させた。光は日光と電灯の混合とした。ｐＡＣＴ−ＰＲＲ５−ＦＬＡＧが導入されたイネは、ｐＡＣＴが導入されたイネよりも茎の数が多く、背丈が高い形質を示した（図１２）。つまりバイオマスが増大していた。なおこの表現型は、独立した形質転換体（組み替えＤＮＡ部位が染色体上で異なる系統）で同様に観察された。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書に組み入れるものとする。

　本発明によれば、バイオマスが増大し、かつ環境ストレス耐性が向上した形質転換植物が得られる。植物のバイオマスの増大は、バイオ燃料の増産につながり、また、環境ストレス耐性の付与は、過酷な環境下（乾燥、低温、高塩など）での植物の生育を可能にさせる。また、本発明の形質転換体は、ＰＲＲ遺伝子群の多重変異体の煩雑な作成工程を行なうことなく、簡便かつ容易に作出できる。

Claims

　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチド、または該融合ポリヌクレオチドを含む組み換えベクターを導入したことを特徴とする、形質転換植物。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項１に記載の形質転換植物。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、請求項１に記載の形質転換植物。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｇ）~（ｉ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項１~３のいずれかに記載の形質転換植物。
　（ｇ）　配列番号１１に示す塩基配列からなるからなるポリヌクレオチド
　（ｈ）　配列番号１１に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｉ）　配列番号１１に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
植物が長日性植物である、請求項１~４のいずれかに記載の形質転換植物。
植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチドを含む組み換えベクターを導入したことを特徴とする、形質転換植物。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項６に記載の形質転換植物。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、請求項６に記載の形質転換植物。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
植物が短日性植物である、請求項６~８のいずれかに記載の形質転換植物。
　バイオマスが増量した、請求項１~９のいずれかに記載の形質転換植物。
　環境ストレス耐性が付与された、請求項１~９のいずれかに記載の形質転換植物。
　環境ストレスが、乾燥ストレス、低温ストレス、及び塩ストレスから成る群から選択される少なくとも１種以上である、請求項１１に記載の形質転換植物。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチド、または該融合ポリヌクレオチドを含む組み換えベクターを植物細胞に導入し、該植物細胞から植物体を再生することを特徴とする、形質転換植物の作出方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項１３に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、請求項１３に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｇ）~（ｉ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項１３~１５のいずれかに記載の方法。
　（ｇ）　配列番号１１に示す塩基配列からなるからなるポリヌクレオチド
　（ｈ）　配列番号１１に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｉ）　配列番号１１に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
植物が長日性植物である、請求項１３~１６のいずれかに記載の方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチドを含む組み換えベクターを植物細胞に導入し、該植物細胞から植物体を再生することを特徴とする、形質転換植物の作出方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項１８に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、請求項１８に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
植物が短日性植物である、請求項１８~２０のいずれかに記載の方法。
　形質転換植物が、バイオマスが増量した形質転換植物である、請求項１３~２１のいずれかに記載の方法。
　形質転換植物が、環境ストレス耐性を有する形質転換植物である、請求項１３~２１のいずれかに記載の方法。
　環境ストレスが、乾燥ストレス、低温ストレス、及び塩ストレスから成る群から選択される少なくとも１種以上である、請求項２３に記載の方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチドを植物内で過剰発現させることを特徴とする、植物のバイオマスを増大させる方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項２５に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、請求項２５に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｇ）~（ｉ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項２５~２７のいずれかに記載の方法。
　（ｇ）　配列番号１１に示す塩基配列からなるからなるポリヌクレオチド
　（ｈ）　配列番号１１に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｉ）　配列番号１１に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
植物が長日性植物である、請求項２５~２８のいずれかに記載の方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを植物内で過剰発現させることを特徴とする、植物のバイオマスを増大させる方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項３０に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、請求項３０に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
植物が短日性植物である、請求項３０~３２のいずれかに記載の方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１種の転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドとの融合ポリヌクレオチドを植物内で過剰発現させることを特徴とする、植物に環境ストレス耐性を付与する方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項３４に記載の方法。
　（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
　（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、請求項３４に記載の方法。
　（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
　（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　転写因子の転写活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｇ）~（ｉ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項３４~３６のいずれかに記載の方法。
　（ｇ）　配列番号１１に示す塩基配列からなるからなるポリヌクレオチド
　（ｈ）　配列番号１１に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　（ｉ）　配列番号１１に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＰＲＲポリヌクレオチドに融合させることによりＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制解除活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　植物が長日性植物である、請求項３４~３７のいずれかに記載の方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを植物内で過剰発現させることを特徴とする、植物に環境ストレス耐性を付与する方法。
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ａ）~（ｃ）のいずれかのポリヌクレオチドである、請求項３９に記載の方法。
（ａ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
（ｂ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
（ｃ）　配列番号１、３、５、７、又は９に示す塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
　植物の疑似レスポンスレギュレータ（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）遺伝子の共通モチーフである擬似レシーバードメイン（Ｐｓｅｕｄｏ−Ｒｅｖｅｉｖｅｒ　ｄｏｍａｉｎ）およびＣＣＴモチーフ（ＣＣＴ−ｍｏｔｉｆ）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、以下の（ｄ）~（ｆ）のいずれかのタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、請求項３９に記載の方法。
（ｄ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列からなるタンパク質
（ｅ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
（ｆ）　配列番号２、４、６、８、又は１０に示すアミノ酸配列に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＣＣＡ１（ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｌｏｃｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　１）遺伝子またはＬＨＹ（ｌａｔｅ　ｅｌｏｎｇａｔｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ）遺伝子の転写抑制活性を有するタンパク質
　植物が短日性植物である、請求項３９~４１のいずれかに記載の方法。
　環境ストレスが、乾燥ストレス、低温ストレス、及び塩ストレスから成る群から選択される少なくとも１種以上である、請求項３４~４２のいずれかに記載の方法。