TW202136510A - 用於抑制ｓｃｎ９ａ表現之增強型寡核苷酸 - Google Patents
用於抑制ｓｃｎ９ａ表現之增強型寡核苷酸 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202136510A TW202136510A TW109144887A TW109144887A TW202136510A TW 202136510 A TW202136510 A TW 202136510A TW 109144887 A TW109144887 A TW 109144887A TW 109144887 A TW109144887 A TW 109144887A TW 202136510 A TW202136510 A TW 202136510A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- antisense oligonucleotide
- pharmaceutically acceptable
- acceptable salt
- pain
- present
- Prior art date
Links
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 320
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims description 9
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 20
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims abstract description 342
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims abstract description 342
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 claims abstract description 92
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims abstract description 89
- 230000036407 pain Effects 0.000 claims abstract description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 48
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 23
- 101000654386 Homo sapiens Sodium channel protein type 9 subunit alpha Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102100031367 Sodium channel protein type 9 subunit alpha Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 197
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 196
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 138
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 102
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 49
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 24
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 claims description 21
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 17
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 claims description 17
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 13
- 208000019865 paroxysmal extreme pain disease Diseases 0.000 claims description 12
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 claims description 11
- 208000001294 Nociceptive Pain Diseases 0.000 claims description 11
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 11
- 102000048004 human SCN9A Human genes 0.000 claims description 11
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 claims description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 10
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims description 9
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 206010044652 trigeminal neuralgia Diseases 0.000 claims description 6
- 208000009935 visceral pain Diseases 0.000 claims description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 230000006837 decompression Effects 0.000 claims description 5
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 claims description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010036376 Postherpetic Neuralgia Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000012790 cranial neuralgia Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 3
- 208000008930 Low Back Pain Diseases 0.000 claims description 3
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 3
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 159000000000 sodium salts Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 206010033553 Palmar-plantar erythrodysaesthesia syndrome Diseases 0.000 claims 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 abstract description 11
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 11
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 134
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 115
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 95
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 93
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 93
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 75
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 62
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 39
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 37
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 35
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 24
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 23
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 16
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 15
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 11
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 11
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 11
- -1 SCN9A in humans Chemical class 0.000 description 11
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 10
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 8
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 8
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 8
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 8
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 8
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 7
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 6
- 102000018674 Sodium Channels Human genes 0.000 description 6
- 108010052164 Sodium Channels Proteins 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 241000380131 Ammophila arenaria Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 5
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 5
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 4
- 102100026031 Beta-glucuronidase Human genes 0.000 description 4
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 4
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 4
- 101000933465 Homo sapiens Beta-glucuronidase Proteins 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 101150088517 TCTA gene Proteins 0.000 description 4
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 4
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 4
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000615657 Homo sapiens MAM domain-containing glycosylphosphatidylinositol anchor protein 2 Proteins 0.000 description 3
- 101001051871 Homo sapiens MORC family CW-type zinc finger protein 4 Proteins 0.000 description 3
- 101000578932 Homo sapiens Membrane-associated guanylate kinase, WW and PDZ domain-containing protein 2 Proteins 0.000 description 3
- 101000973623 Homo sapiens Neuronal growth regulator 1 Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 102100021319 MAM domain-containing glycosylphosphatidylinositol anchor protein 2 Human genes 0.000 description 3
- 102100024826 MORC family CW-type zinc finger protein 4 Human genes 0.000 description 3
- 108091027974 Mature messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 102100028328 Membrane-associated guanylate kinase, WW and PDZ domain-containing protein 2 Human genes 0.000 description 3
- 102100022223 Neuronal growth regulator 1 Human genes 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 102100021087 Regulator of nonsense transcripts 2 Human genes 0.000 description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 3
- 101150080511 Scn9a gene Proteins 0.000 description 3
- 101710028540 UPF2 Proteins 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 3
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000000746 body region Anatomy 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 3
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 3
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 3
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 108010052833 ribonuclease HI Proteins 0.000 description 3
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 3
- 102100038687 5'-nucleotidase domain-containing protein 3 Human genes 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100028323 ADP-ribose glycohydrolase MACROD2 Human genes 0.000 description 2
- 241000023308 Acca Species 0.000 description 2
- 102100021029 Activating signal cointegrator 1 complex subunit 3 Human genes 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100033152 BTB/POZ domain-containing protein KCTD20 Human genes 0.000 description 2
- 102100040750 CUB and sushi domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100028002 Catenin alpha-2 Human genes 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 2
- 102100040495 Contactin-associated protein-like 5 Human genes 0.000 description 2
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091062167 DNA cytosine Proteins 0.000 description 2
- 102100022302 DNA polymerase beta Human genes 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102100036966 Dipeptidyl aminopeptidase-like protein 6 Human genes 0.000 description 2
- 102100028686 Diphthine methyl ester synthase Human genes 0.000 description 2
- 102100032449 EGF-like repeat and discoidin I-like domain-containing protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 102100034477 H(+)/Cl(-) exchange transporter 3 Human genes 0.000 description 2
- 101150055682 HK gene Proteins 0.000 description 2
- 101000604531 Homo sapiens 5'-nucleotidase domain-containing protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000578915 Homo sapiens ADP-ribose glycohydrolase MACROD2 Proteins 0.000 description 2
- 101000784211 Homo sapiens Activating signal cointegrator 1 complex subunit 3 Proteins 0.000 description 2
- 101001135509 Homo sapiens BTB/POZ domain-containing protein KCTD20 Proteins 0.000 description 2
- 101000892017 Homo sapiens CUB and sushi domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000859073 Homo sapiens Catenin alpha-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000642971 Homo sapiens Cohesin subunit SA-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000749883 Homo sapiens Contactin-associated protein-like 5 Proteins 0.000 description 2
- 101000902539 Homo sapiens DNA polymerase beta Proteins 0.000 description 2
- 101000804935 Homo sapiens Dipeptidyl aminopeptidase-like protein 6 Proteins 0.000 description 2
- 101000837321 Homo sapiens Diphthine methyl ester synthase Proteins 0.000 description 2
- 101001016381 Homo sapiens EGF-like repeat and discoidin I-like domain-containing protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000710223 Homo sapiens H(+)/Cl(-) exchange transporter 3 Proteins 0.000 description 2
- 101001081606 Homo sapiens Islet cell autoantigen 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000893526 Homo sapiens Leucine-rich repeat transmembrane protein FLRT2 Proteins 0.000 description 2
- 101001001917 Homo sapiens PRKR-interacting protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001048934 Homo sapiens Protein FAM189A1 Proteins 0.000 description 2
- 101000620365 Homo sapiens Protein TMEPAI Proteins 0.000 description 2
- 101000606537 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase delta Proteins 0.000 description 2
- 101000709102 Homo sapiens SMC5-SMC6 complex localization factor protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000868088 Homo sapiens Serine-rich coiled-coil domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000697608 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 38-like Proteins 0.000 description 2
- 101000885387 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase DCLK2 Proteins 0.000 description 2
- 101000987295 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PAK 5 Proteins 0.000 description 2
- 101000983111 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PAK 6 Proteins 0.000 description 2
- 101001125059 Homo sapiens Sodium/potassium-transporting ATPase subunit beta-1-interacting protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000800616 Homo sapiens Teneurin-3 Proteins 0.000 description 2
- 101000789849 Homo sapiens Ubiquitin-like-conjugating enzyme ATG10 Proteins 0.000 description 2
- 101000964390 Homo sapiens Zinc finger protein 280D Proteins 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 2
- 102100027640 Islet cell autoantigen 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710059175 KIAA1958 Proteins 0.000 description 2
- 102100040899 Leucine-rich repeat transmembrane protein FLRT2 Human genes 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 239000012580 N-2 Supplement Substances 0.000 description 2
- 102100036319 PRKR-interacting protein 1 Human genes 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100026106 Probable guanine nucleotide exchange factor MCF2L2 Human genes 0.000 description 2
- 102100023838 Protein FAM189A1 Human genes 0.000 description 2
- 102100022429 Protein TMEPAI Human genes 0.000 description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100039666 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase delta Human genes 0.000 description 2
- 108010029031 Regulatory-Associated Protein of mTOR Proteins 0.000 description 2
- 102100040969 Regulatory-associated protein of mTOR Human genes 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 102100032662 SMC5-SMC6 complex localization factor protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 102000005806 Serine Peptidase Inhibitor Kazal-Type 5 Human genes 0.000 description 2
- 108010005020 Serine Peptidase Inhibitor Kazal-Type 5 Proteins 0.000 description 2
- 102100032880 Serine-rich coiled-coil domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100027898 Serine/threonine-protein kinase 38-like Human genes 0.000 description 2
- 102100039775 Serine/threonine-protein kinase DCLK2 Human genes 0.000 description 2
- 102100026840 Serine/threonine-protein kinase PAK 6 Human genes 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- 102100029417 Sodium/potassium-transporting ATPase subunit beta-1-interacting protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 208000027520 Somatoform disease Diseases 0.000 description 2
- 241000169093 Tacca Species 0.000 description 2
- 102100033191 Teneurin-3 Human genes 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100028060 Ubiquitin-like-conjugating enzyme ATG10 Human genes 0.000 description 2
- 102100022848 Uncharacterized protein KIAA1958 Human genes 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 102100040319 Zinc finger protein 280D Human genes 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 210000005153 frontal cortex Anatomy 0.000 description 2
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000000111 isothermal titration calorimetry Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 2
- 208000027753 pain disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001314 paroxysmal effect Effects 0.000 description 2
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 239000003186 pharmaceutical solution Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 2
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical compound COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 1
- XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-hydroxypyrimidine Chemical compound NC1=NC=CC(O)=N1 XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 2-aminopurine Chemical compound NC1=NC=C2N=CNC2=N1 MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBJGQJWNMZDFKL-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-7h-purin-6-amine Chemical compound NC1=NC(Cl)=NC2=C1NC=N2 HBJGQJWNMZDFKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 5-bromouracil Chemical compound BrC1=CNC(=O)NC1=O LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CC1=CNC(=S)NC1=O ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)N=C1N QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VKKXEIQIGGPMHT-UHFFFAOYSA-N 7h-purine-2,8-diamine Chemical compound NC1=NC=C2NC(N)=NC2=N1 VKKXEIQIGGPMHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032292 A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 17 Human genes 0.000 description 1
- 102100027401 A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 3 Human genes 0.000 description 1
- 108091005674 ADAMTS17 Proteins 0.000 description 1
- 108091005661 ADAMTS3 Proteins 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102100034281 Ankyrin repeat domain-containing protein 24 Human genes 0.000 description 1
- 101100421761 Arabidopsis thaliana GSNAP gene Proteins 0.000 description 1
- 102100022754 BTB/POZ domain-containing protein KCTD16 Human genes 0.000 description 1
- 208000008035 Back Pain Diseases 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 102100037674 Bis(5'-adenosyl)-triphosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 101710115366 CEP83 Proteins 0.000 description 1
- 102100029758 Cadherin-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100030297 Calcium uptake protein 1, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102100032582 Calcium-dependent secretion activator 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000011068 Cdc42 Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100034754 Centrosomal protein of 83 kDa Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100040451 Connector enhancer of kinase suppressor of ras 3 Human genes 0.000 description 1
- 241000761389 Copa Species 0.000 description 1
- 102400000011 Cytochrome b-c1 complex subunit 9 Human genes 0.000 description 1
- 101800000778 Cytochrome b-c1 complex subunit 9 Proteins 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102100023196 E3 ubiquitin-protein ligase MARCHF8 Human genes 0.000 description 1
- 102100022207 E3 ubiquitin-protein ligase parkin Human genes 0.000 description 1
- 102100035183 ERC protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100030013 Endoribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102100026979 Exocyst complex component 4 Human genes 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102100022631 Glutamate receptor ionotropic, NMDA 2C Human genes 0.000 description 1
- 102100023911 Growth factor receptor-bound protein 14 Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101000780118 Homo sapiens Ankyrin repeat domain-containing protein 24 Proteins 0.000 description 1
- 101000974729 Homo sapiens BTB/POZ domain-containing protein KCTD16 Proteins 0.000 description 1
- 101000794580 Homo sapiens Cadherin-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000991050 Homo sapiens Calcium uptake protein 1, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000867747 Homo sapiens Calcium-dependent secretion activator 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000749829 Homo sapiens Connector enhancer of kinase suppressor of ras 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000978729 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase MARCHF8 Proteins 0.000 description 1
- 101000619542 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase parkin Proteins 0.000 description 1
- 101000876444 Homo sapiens ERC protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000911699 Homo sapiens Exocyst complex component 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000972846 Homo sapiens Glutamate receptor ionotropic, NMDA 2C Proteins 0.000 description 1
- 101000904875 Homo sapiens Growth factor receptor-bound protein 14 Proteins 0.000 description 1
- 101000852539 Homo sapiens Importin-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000659224 Homo sapiens Inactive polyglycylase TTLL10 Proteins 0.000 description 1
- 101000994815 Homo sapiens Interleukin-1 receptor accessory protein-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001003147 Homo sapiens Interleukin-11 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001045822 Homo sapiens Kelch-like protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001054659 Homo sapiens Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000956612 Homo sapiens Lysophospholipase-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001133059 Homo sapiens Mucin-19 Proteins 0.000 description 1
- 101001024703 Homo sapiens Nck-associated protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 101001108364 Homo sapiens Neuronal cell adhesion molecule Proteins 0.000 description 1
- 101001023729 Homo sapiens Neuropilin and tolloid-like protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000602930 Homo sapiens Nuclear receptor coactivator 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000601274 Homo sapiens Period circadian protein homolog 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000842043 Homo sapiens Phenylalanine-tRNA ligase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101001001531 Homo sapiens Phosphatidylinositol 5-phosphate 4-kinase type-2 alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000829541 Homo sapiens Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 13 Proteins 0.000 description 1
- 101000888117 Homo sapiens Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000996830 Homo sapiens Protein N-terminal asparagine amidohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 101000613336 Homo sapiens Protocadherin gamma-A3 Proteins 0.000 description 1
- 101000602014 Homo sapiens Protocadherin gamma-B1 Proteins 0.000 description 1
- 101000695844 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase zeta Proteins 0.000 description 1
- 101001132698 Homo sapiens Retinoic acid receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 101000649931 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase VRK2 Proteins 0.000 description 1
- 101000684820 Homo sapiens Sodium channel protein type 3 subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000694017 Homo sapiens Sodium channel protein type 5 subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000630720 Homo sapiens Supervillin Proteins 0.000 description 1
- 101000714470 Homo sapiens Synaptotagmin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000653597 Homo sapiens TBC1 domain family member 23 Proteins 0.000 description 1
- 101000666331 Homo sapiens Teneurin-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000626552 Homo sapiens Transmembrane protein 183A Proteins 0.000 description 1
- 101000658486 Homo sapiens Tubulin polyglutamylase TTLL5 Proteins 0.000 description 1
- 101000982047 Homo sapiens Unconventional myosin-XIX Proteins 0.000 description 1
- 101000650136 Homo sapiens WAS/WASL-interacting protein family member 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000667303 Homo sapiens WD repeat-containing protein 17 Proteins 0.000 description 1
- 101000744897 Homo sapiens Zinc finger homeobox protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000988424 Homo sapiens cAMP-specific 3',5'-cyclic phosphodiesterase 4B Proteins 0.000 description 1
- 101000744322 Homo sapiens eIF5-mimic protein 1 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100036340 Importin-5 Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- 108091006081 Inositol-requiring enzyme-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100034413 Interleukin-1 receptor accessory protein-like 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100020787 Interleukin-11 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100022120 Kelch-like protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100027000 Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100028263 Limbic system-associated membrane protein Human genes 0.000 description 1
- 101710162762 Limbic system-associated membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038490 Lysophospholipase-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034257 Mucin-19 Human genes 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036946 Nck-associated protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 102100021852 Neuronal cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 102100035485 Neuropilin and tolloid-like protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 102100037226 Nuclear receptor coactivator 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102100037630 Period circadian protein homolog 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029354 Phenylalanine-tRNA ligase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102100036146 Phosphatidylinositol 5-phosphate 4-kinase type-2 alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100023209 Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 13 Human genes 0.000 description 1
- 102100039225 Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 18 Human genes 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710180313 Protease 3 Proteins 0.000 description 1
- 101710180012 Protease 7 Proteins 0.000 description 1
- 102100034233 Protein N-terminal asparagine amidohydrolase Human genes 0.000 description 1
- 102100040922 Protocadherin gamma-A3 Human genes 0.000 description 1
- 102100037555 Protocadherin gamma-B1 Human genes 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 102100028508 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase zeta Human genes 0.000 description 1
- 102100033909 Retinoic acid receptor beta Human genes 0.000 description 1
- 102100025290 Ribonuclease H1 Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102100028234 Serine/threonine-protein kinase VRK2 Human genes 0.000 description 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100023720 Sodium channel protein type 3 subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100027198 Sodium channel protein type 5 subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026344 Supervillin Human genes 0.000 description 1
- 102100036417 Synaptotagmin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100029850 TBC1 domain family member 23 Human genes 0.000 description 1
- 108091007288 TRIM66 Proteins 0.000 description 1
- 102100038123 Teneurin-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100024912 Transmembrane protein 183A Human genes 0.000 description 1
- 102100025033 Tripartite motif-containing protein 66 Human genes 0.000 description 1
- 102100034856 Tubulin polyglutamylase TTLL5 Human genes 0.000 description 1
- 102100026769 Unconventional myosin-XIX Human genes 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100027539 WAS/WASL-interacting protein family member 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100039745 WD repeat-containing protein 17 Human genes 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 102100039968 Zinc finger homeobox protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003502 anti-nociceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 108010005713 bis(5'-adenosyl)triphosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100029168 cAMP-specific 3',5'-cyclic phosphodiesterase 4B Human genes 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 108010051348 cdc42 GTP-Binding Protein Proteins 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000009352 congenital transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000009274 differential gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 102100039119 eIF5-mimic protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000002964 excitative effect Effects 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000285 glutaminergic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 125000000625 hexosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000004777 loss-of-function mutation Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- MRWXACSTFXYYMV-FDDDBJFASA-N nebularine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC=C2N=C1 MRWXACSTFXYYMV-FDDDBJFASA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 210000001769 parahippocampal gyrus Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 210000005223 peripheral sensory neuron Anatomy 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 239000002212 purine nucleoside Substances 0.000 description 1
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
- C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/334—Modified C
- C12N2310/3341—5-Methylcytosine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本發明涉及能夠調節目標細胞中 SCN9A 的表現之反義寡核苷酸。該反義寡核苷酸與 SCN9A mRNA 雜交。本發明進一步涉及該反義寡核苷酸之結合體及醫藥組成物，以及用於預防或治療如周邊疼痛等疼痛之方法。
Description
本發明涉及與人 SCN9A 互補的反義寡核苷酸 (ASO)，用於抑制 SCN9A 核酸之表現。SCN9A 編碼電位閘控型鈉通道 Nav
1.7。SCN9A 表現之抑制可用於預防或治療疼痛。
電位閘控型鈉通道 (Nav
s) 在興奮性組織中起重要作用，其活化和開啟產生動作電位的初始相位。Nav
s 在整個開啟、關閉及不活化狀態下的循環以及其與其他離子通道的活性之緊密編排關係導致對細胞內離子濃度的精確控制。
Nav
1.7 為電壓活化的離子通道，幾乎只在小細胞周邊感覺神經中表達。在感覺神經元中條件式剔除 Nav
1.7 的小鼠表現出抗傷害感受性表型 (Nassar 等人，2004, Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 年 8 月 24 日;101(34):12706-11)。Nav
1.7 在人的疼痛感中之作用透過自發性疼痛綜合症遺傳性紅斑肢痛症 (IEM) (Yang 等人，J Med Genet. 2004;41(3):171–4) 與陣發性極度疼痛疾患 (PEPD) (Fertleman 等人，J Neurol Neurosurg Psychiatry.2006 年 11 月；77(11):1294-5) 和這些病患的 Nav
1.7 中之功能獲得型突變 (Cummins 等人，J Neurosci. 2004;24(38):8232–8236) 之間的相關性展示。透過識別導致先天性對疼痛不敏感之功能喪失型突變 (Cox 等人，Nature AAA.2006;7121:894–8)，產生了對 Nav
1.7 的進一步支持。這些發現導致了許多用於識別 Nav
1.7 調節劑之小分子藥物發現計畫，然而，發現具有高選擇性且良好 PK/PD 特性的良好化合物似乎具有挑戰性。
US2016024208 揭示了 Nav
1.7 之人抗體。
WO02083945 意指用於治療乳腺癌的具有對 SCN5A 和隨選地 SCN9A 的特定區域的反義序列之合成寡核苷酸。
US2007/212685 意指識別鎮痛劑之方法，並提及將調節 SCN9A 細胞中的基因表現或基因轉錄水平之特定化合物包括反義核酸。
US2010273857A 意指用於透過局部投予抑制編碼 Nav
1.7 通道的胺基酸序列的表現或以其他方式抑制 Nav
1.7 通道的功能的 siRNA 分子來治療疼痛之方法、序列及核酸分子，並報告了 Nav
1.7 通道水平及/或功能的局部抑制將在背根神經節的周邊感覺神經元中發生。
WO12162732 涉及用於調節鈉通道，特別是電位閘控型鈉通道的新型篩選測定法。
KR20110087436 揭示了 SCN9A 反義寡核苷酸。
Mohan等人
揭示了標定 Nav
1.7 的反義寡核苷酸，並表徵了囓齒動物中脊髓和背根神經節 (DRG) 中 ASO 的藥效動力學活性 (Pain (2018) 第 159 卷第 1 號, 第 139 – 149 頁)。
WO18051175 揭示了標定人 SCN9A 前 mRNA 的一部分之 SCN9A 反義肽核酸寡核苷酸。肽核酸衍生物有效誘導細胞中 SCN9A mRNA 的剪接變體，並且可用於治療涉及 Nav
1.7 活性的疼痛或病症。
WO19243430 揭示了標定 SCN9A 的 LNA 缺口體反義寡核苷酸。
因此，需要有效抑制編碼如人類中的 SCN9A 等核酸的電位閘控型鈉離子通道的表現之反義寡核苷酸療法，如用於預防或治療疼痛。本發明的目的
本發明識別了新穎的寡核苷酸，其能夠抑制 SCN9A 的表現並且可以用於如預防或治療疼痛的藥品中，如鎮痛劑。本發明之化合物可以用於預防或治療周邊疼痛。
本發明提供與 SCN9A 核酸互補並能夠抑制其表現之反義寡核苷酸，及其在藥品中之用途。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其與選自以下核苷酸之人 SCN9A 前 mRNA (如 SEQ ID NO: 1 所示) 的區域互補 (如完全互補)：SEQ ID NO: 1 之核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 – 151847 及 151949 - 152006。
本發明之反義寡核苷酸的長度通常為 12 至 24 個核苷酸，並且包含至少 12 個核苷酸之連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列與選自以下核苷酸之人 SCN9A 前 mRNA (如 SEQ ID NO: 1 所示) 的區域互補 (如完全互補)：SEQ ID NO: 1 之核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 – 151847 及 151949 - 152006。
本發明提供一種長度為 10 至 30 個核苷酸之反義寡核苷酸，其包含長度為 10 至 30 個核苷酸之連續核苷酸序列，其中，該連續核苷酸序列與選自由 SEQ ID NO: 28 - SEQ ID NO: 52 所組成之群組或其至少 14 個連續核苷酸的序列 100% 相同。
本發明提供一種長度為 10 至 30 個核苷酸之反義寡核苷酸，其包含長度為 10 至 30 個核苷酸之連續核苷酸序列，其中，該連續核苷酸序列與選自由 SEQ ID NO: 28 - SEQ ID NO: 52 所組成之群組或其至少 15 個連續核苷酸的序列 100% 相同。
本發明提供一種長度為 10 至 30 個核苷酸之反義寡核苷酸，其包含長度為 10 至 30 個核苷酸之連續核苷酸序列，其中，該連續核苷酸序列與選自由 SEQ ID NO: 28 - SEQ ID NO: 52 所組成之群組或其至少 16 個連續核苷酸的序列 100% 相同。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列與選自由 SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38 及 SEQ ID NO: 39 所組成之群組或其至少 14 個連續核苷酸的序列 100% 相同。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列選自由 SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38 及 SEQ ID NO: 39 所組成之群組。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列與 SEQ ID NO: 29 或其至少 14 個、15 個、16 個或 17 個連續核苷酸 100% 相同。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列與 SEQ ID NO: 31 或其至少 14 個、15 個、16 個、17 個或 18 個連續核苷酸 100% 相同。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列與 SEQ ID NO: 33 或其至少 14 個、15 個、16 個、17 個、18 個或 19 個連續核苷酸 100% 相同。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列與 SEQ ID NO: 39 或其至少 14 個、15 個、16 個、17 個或 18 個連續核苷酸 100% 相同。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列與 SEQ ID NO: 47 或其至少 14 個、15 個、16 個、17 個或 18 個連續核苷酸 100% 相同。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其包含連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列與 SEQ ID NO: 48 或其至少 14 個、15 個、16 個、17 個或 18 個連續核苷酸 100% 相同。
本發明提供一種反義寡核苷酸，其包含化合物的連續核苷酸，該化合物選自由化合物識別號 ＃ 29_15、29_10、29_22、39_6、39_1、39_2、39_7、31_1、31_3、31_4、31_5、33_1、33_2、33_3、47_1、48_8、29_24、29_25、29_26、39_9、39_10、48_10、29_35、29_34、39_17、39_18、39_19、39_20 及 29_11 所組成之群組。
在某些實施例中，該反義寡核苷酸不是選自由化合物識別號 29_33、39_13、48_9、29_33、39_13、48_9、29_33、39_13 及 48_9 所組成之群組之反義寡核苷酸。
本發明提供選自表 1 所列的群組中的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供選自表 3 所列的群組中的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 1 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 29_15 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 2 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 29_10 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 3 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 29_22 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 4 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_6 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 5 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_1 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 6 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_2 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 7 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_7 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 8 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 31_1 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 9 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 31_3 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 10 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 31_4 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 11 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 31_5 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 12 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 33_1 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 13 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 33_2 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 14 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 33_3 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 15 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 47_1 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 16 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 48_8 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 17 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 29_24 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 18 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 29_25 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 19 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 29_26 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 20 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_9 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 21 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_10 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 22 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 48_10 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 23 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 29_35 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 24 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 29_34 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 25 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_17 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 26 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_18 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 27 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_19 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 28 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 39_20 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供圖 29 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。本發明提供化合物識別號 29_11 的反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽。
表
1.
化合物表
– HELM
標注格式
| 序列識別號 | 化合物識別號 # | HELM 標注 寫成 5’ – 3’。 | 例示性化合物–見圖： |
| 29 | 29_15 | [LR](G)[sP].[LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 1 |
| 29 | 29_10 | [LR](G)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 2 |
| 29 | 29_22 | [LR](G)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 3 |
| 39 | 39_6 | [LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 4 |
| 39 | 39_1 | [LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](A)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 5 |
| 39 | 39_2 | [LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](A)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 6 |
| 39 | 39_7 | [LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 7 |
| 31 | 31_1 | [LR]([5meC])[sP].[LR](A)[sP].[dR](G)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC]) | 8 |
| 31 | 31_3 | [LR]([5meC])[sP].[LR](A)[sP].[dR](G)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC]) | 9 |
| 31 | 31_4 | [LR]([5meC])[sP].[LR](A)[sP].[dR](G)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC]) | 10 |
| 31 | 31_5 | [LR]([5meC])[sP].[LR](A)[sP].[dR](G)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC]) | 11 |
| 33 | 33_1 | [LR]([5meC])[sP].[LR](A)[sP].[dR](G)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 12 |
| 33 | 33_2 | [LR]([5meC])[sP].[LR](A)[sP].[dR](G)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 13 |
| 33 | 33_3 | [LR]([5meC])[sP].[LR](A)[sP].[dR](G)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[LR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 14 |
| 47 | 47_1 | [LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[dR](A)[sP].[LR]([5meC])[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](T) | 15 |
| 48 | 48_8 | [LR]([5meC])[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](T)[sP].[dR](G)[sP].[dR](C)[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](C)[sP].[dR](T)[sP].[LR](A) | 16 |
| 29 | 29_24 | [LR](G)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 17 |
| 29 | 29_25 | [LR](G)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[mR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 18 |
| 29 | 29_26 | [LR](G)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 19 |
| 39 | 39_9 | [LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 20 |
| 39 | 39_10 | [LR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[mR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[mR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 21 |
| 48 | 48_10 | [LR]([5meC])[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[mR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](T)[sP].[dR](G)[sP].[dR](C)[sP].[dR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[mR](U)[sP].[dR](C)[sP].[LR](T)[sP].[LR](A) | 22 |
| 29 | 29_35 | [LR](G)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[mR](U)[sP].[LR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 23 |
| 29 | 29_34 | [LR](G)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](A)[sP].[mR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[mR](U)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR](A) | 24 |
| 39 | 39_17 | [LR](T)[sP].[mR](U)[sP].[LR]([5meC])[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[mR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 25 |
| 39 | 39_18 | [LR](T)[sP].[mR](U)[sP].[LR]([5meC])[sP].[mR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 26 |
| 39 | 39_19 | [LR](T)[sP].[mR](U)[sP].[LR]([5meC])[sP].[mR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[mR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 27 |
| 39 | 39_20 | [mR](U)[sP].[LR](T)[sP].[LR]([5meC])[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](C)[sP].[LR]([5meC])[sP].[LR]([5meC]) | 28 |
| 29 | 29_11 | [LR](G)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](T)[sP].[LR](A)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](A)[sP].[dR](C)[sP].[dR](C)[sP].[dR](A)[sP].[dR](T)[sP].[dR](T)[sP].[LR](T)[sP].[dR](C)[sP].[LR](A) | 29 |
Helm 註解鍵：
[LR](G) 為 β-D-氧基-LNA 鳥嘌呤核苷，
[LR](T) 為 β-D-氧基-LNA 胸腺嘧啶核苷，
[LR](A) 為 β-D-氧基-LNA 腺嘌呤核苷，
[LR]([5meC] 為 β-D-氧基-LNA 5-甲基胞嘧啶核苷，
[dR](G) 為 DNA 鳥嘌呤核苷，
[dR](T) 為 DNA 胸腺嘧啶核苷，
[dR](A) 為 DNA 腺嘌呤核苷，
[dR]([C] 為 DNA 胞嘧啶核苷，
[mR](G) 為 2'-O-甲基 RNA 鳥嘌呤核苷，
[mR](U) 為 2'-O-甲基 RNA DNA 尿嘧啶核苷，
[mR](A) 為 2'-O-甲基 RNA DNA 腺嘌呤核苷，
[mR]([C] 為 2'-O-甲基 RNA DNA 胞嘧啶核苷，
[sP] 為硫代磷酸酯核苷間鍵結。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸可包含一個或多個結合體基團，即，該反義寡核苷酸可以為反義寡核苷酸結合體。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸由連續核苷酸序列組成。
本發明提供醫藥組成物，其包含本發明之反義寡核苷酸和醫藥上可接受之稀釋劑、載體、鹽及/或佐劑。
本發明提供一種本發明之反義寡核苷酸之醫藥上可接受之鹽。在某些實施例中，醫藥上可接受之鹽選自由鈉鹽、鉀鹽及銨鹽所組成之群組。
本發明提供一種本發明之反義寡核苷酸之醫藥溶液，其中，該醫藥溶液包含本發明之反義寡核苷酸和醫藥上可接受之溶劑，如磷酸鹽緩衝生理鹽水。
本發明提供固體粉末形式如凍乾粉末形式之本發明之反義寡核苷酸。
本發明提供一種結合體，其包含根據本發明之反義寡核苷酸以及至少一個共價連附於該反義寡核苷酸之結合體部分。
本發明提供一種本發明之反義寡核苷酸之醫藥上可接受之鹽或根據本發明之結合體。
本發明提供一種根據本發明之反義寡核苷酸之醫藥上可接受之鹽，其中，該醫藥上可接受之鹽為鈉鹽或鉀鹽。
本發明提供一種醫藥組成物，其包含本發明之反義寡核苷酸或本發明之結合體，或本發明之鹽以及醫藥上可接受之稀釋劑、溶劑、載體、鹽及/或佐劑。
本發明提供一種抑制在正在表現 SCN9A 的目標細胞中 SCN9A 表現之方法，該方法包含向該細胞投予有效量的本發明之反義寡核苷酸或本發明之結合體，或本發明之鹽或本發明之組成物。該方法可以為體內
方法或體外
方法。
本發明提供一種用於治療或預防正在罹患或很可能罹患疼痛的受試者 (諸如人) 的疼痛之方法，該方法包含投予治療上或預防上有效量的本發明之反義寡核苷酸、或本發明之結合體、或本發明之鹽、或本發明之組成物，以便預防或減輕該疼痛。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸、或本發明之結合體、或本發明之鹽或本發明之組成物用於治療慢性疼痛、神經性疼痛、炎性疼痛或自發性疼痛。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸、或本發明之結合體、或本發明之鹽或本發明之組成物用於治療傷害感受性疼痛。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸、或本發明之結合體、或本發明之鹽或本發明之組成物用於治療由選自糖尿病神經病變、癌症、顱神經痛、皰疹後神經痛和術後神經痛所組成之群組的疾患引起的或與之相關聯的疼痛。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸、或本發明之結合體、或本發明之鹽或本發明之組成物用於治療由遺傳性紅斑肢痛症 (EIM) 或陣發性極度疼痛疾患 (PEPD) 或三叉神經痛引起或與之相關聯的疼痛。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸、或本發明之結合體、或本發明之鹽或本發明之組成物用於治療神經性疼痛、慢性疼痛及傷害感受性疼痛 (例如神經減壓) 或神經性疼痛 (例如糖尿病神經病變)、內臟疼痛或混合性疼痛的一般治療。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸、或本發明之結合體、或本發明之鹽或本發明之組成物用於治療下腰疼痛或炎症性關節炎。
本發明提供用於藥品中之本發明之反義寡核苷酸、或本發明之結合體或本發明之組成物或鹽。
在又一方面，本發明提供藉由向正在表現 SCN9A 的目標細胞投予有效量的本發明之反義寡核苷酸或組成物來抑制該細胞中 SCN9A 的表現之方法。在又一方面，本發明提供一種藉由向正在表現 SCN9A 的目標細胞投予有效量的本發明之反義寡核苷酸或組成物而在體內或體外抑制該細胞中 SCN9A 表現之方法。該細胞可以例如為人類細胞，如神經元細胞、如周邊神經細胞或原代神經元細胞。
在又一方面，本發明提供用於治療或預防選自由如周邊疼痛等疼痛所組成之群組的疾病之方法，該方法包含向罹患或易患如周邊疼痛等疼痛的受試者投予治療上或預防上有效量的本發明之反義寡核苷酸。
在又一方面，本發明提供用於製造以治療或預防如周邊疼痛等疼痛之藥物的本發明之反義寡核苷酸、結合體或醫藥組成物。
在又一方面，本發明提供用於製造鎮痛劑的本發明之反義寡核苷酸、結合體或醫藥組成物。
本發明提供用於治療如周邊疼痛等疼痛的本發明之反義寡核苷酸。
本發明提供用作鎮痛劑的本發明之反義寡核苷酸。
在又一方面，本發明提供用於治療或預防疼痛之方法，該方法包含向罹患或易患疼痛的受試者投予治療上或預防上有效量的本發明之反義寡核苷酸。
在又一方面，本發明提供用於治療或預防周邊疼痛之方法，該方法包含向罹患或易患周邊疼痛的受試者投予治療上或預防上有效量的本發明之反義寡核苷酸。
序列表
隨本申請呈送的序列表藉由引用方式併入本文。序列表中列出的反義寡核苷酸序列基序示出為 DNA 序列。應當指出，在本文揭示的某些測試的化合物中，使用了 2’-O-甲基 RNA 核苷，在適當位置具有尿嘧啶或胸腺嘧啶鹼基。
界定
寡核苷酸
本文所用的「寡核苷酸」一詞的定義如同具有通常技術者所知，是指包含兩個或多個共價連結核苷的分子。該等共價鍵結核苷亦可稱為核酸分子或寡聚物。寡核苷酸通常是在實驗室中製作，先經固相化學合成後再加以純化和分離。提及寡核苷酸的序列時，是指共價連結核苷酸或核苷的核鹼基部分或其修飾的序列或順序。本發明之寡核苷酸為人造的，且為化學合成的，通常經過純化或分離。本發明之寡核苷酸可包含一個或多個修飾核苷，如 2’ 糖修飾核苷。本發明之寡核苷酸可包含一個或多個修飾核苷間鍵結，如一個或多個硫代磷酸酯核苷間鍵結。
反義寡核苷酸
本文所用的「反義寡核苷酸」定義為能夠藉由與目標核酸雜交，具體地與目標核酸上的連續序列雜交而調節目標基因之表現的寡核苷酸。反義寡核苷酸實質上並非雙股，因此不是 siRNA 或 shRNA。本發明之反義寡核苷酸較佳的是單股。應知，只要跨寡核苷酸全長的序列內或序列間自補程度低於 50%，本發明之單股寡核苷酸便可形成髮夾或分子間雙鏈體結構 (同一寡核苷酸的兩個分子之間的雙鏈體)。
在某些實施例中，本發明之單股反義寡核苷酸可以不包含未修飾的 RNA 核苷。
有利的是，本發明之反義寡核苷酸含有一個或多個修飾核苷或核苷酸，例如 2’ 糖修飾核苷。此外，有利的是，該未經修飾的核苷是 DNA 核苷。
連續核苷酸序列
「連續核苷酸序列」一詞意指反義寡核苷酸的與目標核酸互補的區域。在本文中，此詞可與「連續核鹼基序列」和「寡核苷酸模體序列」交替使用。在某些實施例中，該寡核苷酸的全部核苷組成該連續核苷酸序列。在某些實施例中，該寡核苷酸包含該連續核苷酸序列，如 F-G-F’ 缺口體區域，且可隨選包含一個或多個其他核苷酸，例如可用於將官能基團 (例如，結合體基團) 連附至該連續核苷酸序列之核苷酸連接子區域。該核苷酸連接子區域可與目標核酸互補或不互補。在某些實施例中，該反義寡核苷酸的該核鹼基序列為該連續核苷酸序列。
核苷酸和核苷
核苷酸和核苷為寡核苷酸及聚核苷酸的建構組元，在本發明中，包括自然產生及非自然產生核苷酸和核苷。在本質上，例如 DNA 及 RNA 核苷酸等核苷酸包含核糖部分、核鹼基部分以及一個或多個磷酸根 (核苷中則無磷酸根)。核苷及核苷酸亦可互換稱為「單元」或「單體」。
修飾核苷
本文中所用的「修飾核苷」或「核苷修飾」一詞意指藉由導入糖部分或 (核) 鹼基部分的一個或多個修飾，對照相等 DNA 或 RNA 核苷進行修飾的核苷。有利的是，本發明之反義寡核苷酸之修飾核苷中的一個或多個包含修飾糖部分。「修飾核苷」一詞在本文中亦可與「核苷類似物」或修飾「單元」或修飾「單體」等詞互換使用。本文中將具有未修飾 DNA 或 RNA 糖部分的核苷稱為 DNA 或 RNA 核苷。在 DNA 或 RNA 核苷的鹼基區域中包含修飾的核苷，若允許瓦特生克立克 (Watson Crick) 鹼基配對，則大體上仍稱為 DNA 或 RNA。
修飾核苷間鍵結
「修飾核苷間鍵結」一詞，如具有通常技術者所知之定義，是指除磷酸二酯 (PO) 鍵結以外，可將兩個核苷共價耦接在一起的鍵結。因此，本發明之寡核苷酸可包含一個或多個修飾核苷間鍵結，如一個或多個硫代磷酸酯核苷間鍵結，或一個或多個二硫代磷酸酯核苷間鍵結。
在某些實施例中，該寡核苷酸或其連續核苷酸序列中的至少 50% 的該核苷間鍵結為硫代磷酸酯，該寡核苷酸或其連續核苷酸序列中的如至少 60%，如至少 70%，如至少 75%，如至少 80% 或如至少 90% 的該核苷間鍵結為硫代磷酸酯。在某些實施例中，該寡核苷酸或其連續核苷酸序列中的所有該核苷間鍵結均為硫代磷酸酯。
在某些有利的實施例中，該寡核苷酸的該連續核苷酸序列的所有該核苷間鍵結均為硫代磷酸酯，或該寡核苷酸的所有該核苷間鍵結均為硫代磷酸酯鍵結。
應知，如 EP 2 742 135 中所揭露，反義寡核苷酸可包含其他核苷間鍵結 (磷酸二酯、硫代磷酸酯及二硫代磷酸酯除外)，例如磷酸烷酯/磷酸甲酯核苷間，其依據 EP 2 742 135 可例如耐受於缺口區域中不同狀態之 DNA 硫代磷酸酯。
核鹼基
「核鹼基」一詞包括存在於核苷及核苷酸中的嘌呤 (例如腺嘌呤及鳥嘌呤) 和嘧啶 (例如脲嘧啶、胸腺嘧啶及胞嘧啶) 部分，其在核酸雜交中形成氫鍵。在本發明範圍內，核鹼基一詞亦包含與自然產生核鹼基不同但在核酸雜交過程中具有功能性的修飾核鹼基。於本說明書中，「核鹼基」意指例如腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸苷、脲嘧啶、黃嘌呤和次黃嘌呤等自然產生核鹼基以及非自然產生變體。此類變體例如是 Hirao 等人 (2012) Accounts of Chemical Research vol 45 page 2055 以及 Bergstrom (2009) Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry Suppl. 37 1.4.1 中所描述的變體。
在某些實施例中，該核鹼基部分藉由將嘌呤或嘧啶改變為修飾嘌呤或嘧啶而被修飾，如取代嘌呤或取代嘧啶，如選自異胞嘧啶、偽異胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-噻唑並-胞嘧啶、5-丙炔基-胞嘧啶、5-丙炔基-脲嘧啶、5-溴脲嘧啶、5-噻唑並-脲嘧啶、2-硫基-脲嘧啶、2’硫基-胸腺嘧啶、肌苷、二胺基嘌呤、6-胺基嘌呤、2-胺基嘌呤、2,6-二胺基嘌呤及 2-氯-6-胺基嘌呤的核鹼基。
該核鹼基部分可用每一對應的核鹼基的字母代碼表示，例如 A、T、G、C 或 U，其中各字母可隨選包括對等功能的修飾核鹼基。例如，在例示的寡核苷酸中，該核鹼基部分選自 A、T、G、C 及 5-甲基胞嘧啶。隨選的是，5-甲基胞嘧啶 LNA 核苷可用於 LNA 缺口體。
修飾寡核苷酸
「修飾寡核苷酸」一詞描述包含一個或多個糖修飾核苷及/或修飾核苷間鍵結的寡核苷酸。「嵌合寡核苷酸」一詞在文獻中用於描述包含糖修飾核苷和DNA核苷的寡核苷酸。本發明之反義寡核苷酸有利地為嵌合寡核苷酸。
互補性
「互補性」一詞是用來形容核苷/核苷酸的瓦特生克立克 (Watson-Crick) 鹼基配對能力。瓦特生克立克 (Watson-Crick) 鹼基對是鳥嘌呤 (G) - 胞嘧啶 (C) 及腺嘌呤 (A) - 胸腺嘧啶 (T)/脲嘧啶 (U)。應知寡核苷酸可包含具有修飾核鹼基的核苷，例如 5-甲基胞嘧啶經常用來取代胞嘧啶，因此互補性一詞包括非修飾核鹼基與修飾核鹼基之間的瓦特生克立克 (Watson-Crick) 鹼基配對 (見例如 Hirao 等人 (2012) Accounts of Chemical Research vol 45 page 2055 以及 Bergstrom (2009) Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry Suppl 37 1.4.1)。
本文所用的「% 互補」一詞意指核酸分子 (例如寡核苷酸) 中的連續核苷酸序列中與參考序列 (例如目標序列或序列模體) 互補的核苷酸所佔的比例 (百分比)，該核酸分子橫跨該連續核苷酸序列。互補性百分率的計算方式是先算出兩個序列間互補 (形成瓦特生克立克 (Watson-Crick) 鹼基對) 的對齊核鹼基 (當對齊於目標序列 5’-3’ 及寡核苷酸序列 3’-5’) 的數目，將該數字除以該寡核苷酸中的核苷酸總數，再乘以 100。在該等比對中，未對齊 (形成鹼基對) 的核鹼基/核苷酸稱為錯配。計算連續核苷酸序列的 % 互補性時不可進行插入和刪除。應知在判定互補性時，只要核鹼基形成瓦特生克立克 (Watson-Crick) 鹼基配對的功能留存，即可不考量核鹼基的化學修飾 (例如在計算 % 相同度時，5’-甲基胞嘧啶與胞嘧啶視為相同)。
「完全互補」意指具有 100% 互補性。
相同度
本文所用的「相同度」一詞意指核酸分子 (例如寡核苷酸) 中的連續核苷酸序列中與參考序列 (例如序列模體) 完全相同的核苷酸所佔的比例 (以百分比表達)，該核酸分子橫跨該連續核苷酸序列。相同度百分比的計算方式是，算出兩個序列 (在本發明之化合物的連續核苷酸序列中及在參考序列中) 之間相同 (為一個匹配) 的對齊核鹼基的數目，將該數字除以寡核苷酸中的核苷酸總數，再乘以 100。因此，相同度百分比 = (匹配數 x 100)/對齊區域 (例如連續核苷酸序列) 長度。計算連續核苷酸序列的相同度百分比時不可對序列進行插入和刪除。應知在判定相同度時，只要核鹼基形成瓦特生克立克 (Watson-Crick) 鹼基配對的功能留存，即可不考量核鹼基的化學修飾 (例如在計算 % 相同度時，5’-甲基胞嘧啶與胞嘧啶視為相同)。
雜交
本文所用的「雜交」一詞理解為兩股核酸鏈 (例如一股寡核苷酸及一股目標核酸) 在相對股上的鹼基對之間形成氫鍵，從而形成雙鏈體 (duplex)。兩股核酸之間的結合親和力是指雜交的強度。其通常用融化溫度 (Tm
) 來描述，該融化溫度的定義是一半寡核苷酸與目標核酸形成雙鏈體時的溫度。在生理條件下，Tm
並非確實與親和力成比例 (Mergny 與 Lacroix，2003 年，Oligonucleotides 13:515–537)。標準狀態吉布斯自由能 ΔG° 更能準確代表結合親和力，並且與反應的離解常數 (Kd
) 之間具有 ΔG° = -RTln(Kd
) 的關係，其中 R 是氣體常數，而 T 是絕對溫度。因此，寡核苷酸與該目標核酸之間的反應的非常低的 ΔG° 體現該寡核苷酸與該目標核酸之間的強勢雜交。ΔG° 是與含水濃度為 1M、pH 為 7、溫度為 37℃ 的反應關聯的能量。寡核苷酸與目標核酸的雜交是自發性反應，而自發性反應的 ΔG° 小於零。ΔG° 可經由實驗來測量：例如，利用如 Hansen 等人 1965 年在 Chem.Comm.36–38 及 Holdgate 等人 2005 年在 Drug Discov Today 中所描述的等溫滴定微量熱法 (ITC)。具有通常技術者應知，市面上可購得用於測量 ΔG° 的商用設備。ΔG° 亦可透過數值方式進行估計，例如藉由利用 SantaLucia 於 1998 年在 Proc Natl Acad Sci USA. 95: 1460–1465 中所描述的最近鄰模型或利用 Sugimoto 等人於 1995 年在 Biochemistry 34:11211–11216 中及 McTigue 等人於 2004 年在 Biochemistry 43:5388–5405 中所描述的適當取得的熱動力學參數。為了能夠經由雜交調節本發明之寡核苷酸的預期核酸目標，將長度為 10-30 個核苷酸的寡核苷酸以低於 -10 千卡的估計 ΔG° 值雜交至目標核酸。在某些實施例中，雜交的程度或強度藉由標準狀態吉布斯自由能 ΔG° 來測量。長度為 8 至 30 個核苷酸的寡核苷酸可以低於 -10 千卡範圍的估計 ΔG° 值雜交至目標核酸，例如低於 -15 千卡，例如低於 -20 千卡，及例如低於 -25 千卡。在某些實施例中，該寡核苷酸以 -10 至 -60 kcal，如 -12 至 -40 kcal，如 -15 至 -30 kcal 或 -16 至 -27 kcal，如 -18 至 -25 kcal 的估計 ΔG° 值與目標核酸雜交。
目標
本文所用的「目標」一詞用於意指人類鈉電位閘控型通道 α 亞基 9 (SCN9A)，以及如本文 SEQ ID NO: 1 所示的編碼人 SCN9A 的核酸。SCN9A 核酸編碼被稱為 Nav
1.7 的鈉離子離子通道的 α 亞基。
目標核酸
根據本發明，目標核酸是將人 SCN9A 編碼的核酸且可例如為基因、RNA、mRNA 及前 mRNA、成熟 mRNA 或 cDNA 序列。因此該目標可稱為 SCN9A 目標核酸。對於體外和體內使用，較佳的目標核酸是編碼 SCN9A 的前 mRNA 或 mRNA。若在研究或診斷中採用本發明之寡核苷酸，則該目標核酸可為 cDNA 或衍生自 DNA 或 RNA 的合成核酸。
較佳的目標基因是人 SCN9A，例如人 SCN9A 前 mRNA (參閱如本文 SEQ ID NO: 1 所示的表 2 中提供的遺傳坐標)。
表 2
: 人類及食蟹獼猴 SCN9A 目標基因的基因組及組裝資訊
| 基因組學座標 | 例示性序列 | |||||
| 物種 | 染色體 | 股 | 開始 | 結束 | 組裝 | |
| 人 | 2 | 加速 | 166195185 | 166375993 | GRCh38.p12 | SEQ ID NO: 1 |
| 食蟹猴 | 12 | 加速 | 55049339 | 55256120 | Macaca_fascicularis_5 | SEQ ID NO: 2 |
在某些實施例中，目標核酸是 SEQ ID NO: 1 的轉錄變體，即從人類染色體基因座 (如表 2 中識別的坐) 編碼的 SCN9A 基因轉錄的轉錄。
目標序列
本文所用的「目標序列」一詞意指存在於目標核酸中的核苷酸的序列，其包含與本發明之反義寡核苷酸互補的核鹼基序列。在某些實施例中，該目標序列由目標核酸上的區域組成，該區域的核鹼基序列與本發明之反義寡核苷酸的連續核苷酸序列互補。該目標核酸的此一區域也可互換地稱為目標核苷酸序列、目標序列或目標區域。在某些實施例中，該目標序列比單一反義寡核苷酸的互補序列更長，且可能例如代表該目標核酸的由本發明之數種反義寡核苷酸所標定的較佳的區域。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列與選自由 SEQ ID NO: 1 之核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組之目標序列互補，如完全互補。
本發明之反義寡核苷酸包含與該目標核酸互補和雜交的連續核苷酸序列，如本文所述之目標序列。
與該反義寡核苷酸互補的目標序列通常包含至少 10 個核苷酸的連續核鹼基序列。該連續核苷酸序列的長度在 10 至 30 個核苷酸之間，如 12 至 30 個核苷酸 (如 14 至 20 個)，如 15 至 18 個連續核苷酸 (如 15 個、16 個、17 個連續核苷酸)。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸在反義寡核苷酸之全部長度上與目該目標序列完全互補。
目標細胞
本文所用的「目標細胞」一詞是指正在表達目標核酸的細胞。在某些實施例中，該目標細胞可以為體內或體外的。在某些實施例中，該目標細胞為哺乳動物細胞 (如囓齒動物細胞、小鼠細胞或大鼠細胞)，或靈長類動物細胞 (如猴子細胞或人類細胞等)。
一般而言，該目標細胞表達 SCN9A mRNA，如 SCN9A 前 mRNA 或 SCN9A 成熟 mRNA。為了進行實驗評估，可以使用表達包含目標序列的核酸的目標細胞。
SCN9A mRNA 的複 A 尾部在反義寡核苷酸標定上通常予以忽略。
本發明之反義寡核苷酸通常能夠例如在體內
或體外
在正在表現 SCN9A 目標核酸 (目標細胞) 的細胞中抑製 SCN9A 目標核酸的表現。
本發明之反義寡核苷酸之核鹼基之連續序列與如在該反義寡核苷酸的長度上測量的如 SEQ ID NO: 1 的 SCN9A 目標核酸互補，如完全互補，隨選不包括可以將該反義寡核苷酸連結至隨選官能團 (如結合體) 的核苷酸基連接子區域，或其他非互補的端核苷酸 (例如區域 D’ 或 D'’)。目標核酸可以例如為編碼 SCN9A 的信使 RNA，如成熟的 mRNA 或前 mRNA。
自然產生變體
「自然產生變體」一詞意指與該目標核酸源自相同基因座但可有差異的 SCN9A 基因或轉錄的變體，該差異可例如是出於基因碼簡併造成多重密碼子編碼同一個胺基酸，或因前 mRNA 的選擇性剪接，或多態性的存在，例如單核苷酸多態性 (SNP) 及等位基因變體。在與該寡核苷酸有充分互補序列的條件下，本發明之寡核苷酸可因此標定目標核酸及其自然產生變體。
在某些實施例中，該自然產生的變體與哺乳動物 SCN9A 目標核酸具有至少 95%，如至少 98% 或至少 99% 的同源性，如選自由 SEQ ID NO: 1 所組成之群組的目標核酸。在某些實施例中，該自然產生的變體與 SEQ ID NO: 1 的人 SCN9A 目標核酸具有至少 99% 的同源性。
表現的抑制
本文所用的「表現的抑制」一詞應理解為寡核苷酸抑制目標細胞中 SCN9A 的量或活性的能力的總稱。可以藉由測量 SCN9A 前 mRNA 或 SCN9A mRNA 的水平，或藉由測量細胞中 SCN9A 或 SCN9A 活性的水平來判定活性的抑制。因此可以在體外
或體內
判定表現的抑制。亦可以藉由測量 Nav
1.7 活性或蛋白質水平來判定 SCN9A 表現的抑制。
一般而言，藉由比較對目標細胞施予有效量的該反義寡核苷酸而產生的活性抑制，並將該水平與不施予該反義寡核苷酸而從目標細胞獲得的參考水平或已知的參考水平 (例如在施予有效量的該反義寡核苷酸之前的表現水平或預定的或其他已知的表現水平) 進行比較 (對照實驗) 來判定表現抑制。
例如，對照實驗可以為動物或人，或用鹽水組成物或參考寡核苷酸處理的目標細胞 (通常是加擾的對照)。
抑制 (inhibition) 或抑制 (inhibit) 一詞亦可以稱為下調、減少、壓制、減輕、降低該 SCN9A 的表現。
表現的抑制可以例如藉由降解前 mRNA 或 mRNA (例如使用 RNaseH (核糖核酸酶) 招募寡核苷酸，如缺口體) 而發生。
高親和力修飾核苷
高親和力修飾核苷是一種修飾核苷酸，當併入該反義寡核苷酸中時，提昇該反義寡核苷酸對其互補目標的親和力，例如以融化溫度 (Tm) 所測定者。本發明之高親和力修飾核苷優選地導致每一修飾核苷的融化溫度增加 +0.5 至 +12℃，更優選的是 +1.5 至 +10℃，最優選的是 +3 至 +8℃。此技術領域中已有眾多已知的高親和力修飾核苷，包括例如許多 2’ 取代核苷以及鎖核酸 (LNA) (參閱例如 Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 及 Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213)。
糖修飾
本發明之反義寡核苷酸可包含一個或多個具有修飾糖部分的核苷，亦即與 DNA 及 RNA 中的核糖部分相較為經過修飾的糖部分。
目前已製成了眾多包含經修飾核糖部分的核苷，主要目的為改善寡核苷酸的特定特性，例如親和力及/或核酸酶抗性。
此種修飾包括對核糖環結構的修飾，例如取代為己糖環 (HNA)，或通常在核糖環 (LNA) 上的 C2 與 C4 碳原子之間具有雙自由基橋，或通常在 C2 與 C3 碳原子之間無鍵的未連結核糖環 (例如 UNA)。其他糖修飾核苷包括，例如，雙環己糖核酸 (WO2011/017521) 或三環核酸 (WO2013/154798)。修飾核苷也包括將糖部分取代為非糖部分的核苷，例如胜肽核酸 (PNA) 或嗎啉基核酸的情形。
糖修飾也包括經由將核糖環上的取代基團改變為除在 DNA 及 RNA 核苷中自然存有的氫或 2’-OH 基團以外的基團來進行修飾。取代基可例如在 2’、3’、4’ 或 5’位置導入。
2’
糖修飾核苷
2’ 糖修飾核苷是在 2’ 位置 (2’ 取代的核苷) 具有非 H 或 –OH 的取代基的核苷或包含能夠在核糖環中的 2’ 碳與第二碳之間形成架橋的 2’ 連結雙自由基的核苷，如 LNA (2’ – 4’ 雙自由基架橋) 核苷。
更確切地，2’ 糖取代核苷的開發頗受關注，目前已發現許多 2’ 取代核苷在併入反義寡核苷酸中時具有助益特性。例如，2’ 修飾糖可加強該寡核苷酸的結合親和力及/或增加該反義寡核苷酸的核酸酶抗性。2’ 取代修飾核苷的實例包括 2’-O-烷基-RNA、2’-O-甲基-RNA、2’-烷氧基-RNA、2’-O-甲氧基乙基-RNA (MOE)、2’-胺基-DNA、2’-氟基-RNA 及 2’-F-ANA 核苷。對於進一步的實例，請參閱例如 Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 及 Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213 以及 Deleavey 與 Damha, Chemistry and Biology 2012, 19, 937。以下為 2’ 取代修飾核苷的圖解。
在本發明中，2’ 取代糖修飾核苷並不包括 2’ 橋接核苷，如 LNA。
鎖核酸核苷
(LNA
核苷
)
「LNA 核苷」是一種 2’- 修飾核苷，該 2’- 修飾核苷包含連結該核苷的核糖環之 C2’ 與 C4’ 的雙自由基 (此雙自由基亦稱為「2’ - 4’ 架橋」)，其可限制或鎖定該核糖環的構造。該等核苷於文獻中也稱為橋接核酸或雙環核酸 (BNA)。鎖定核糖的構造，可在將 LNA 併入反義寡核苷酸中而產生互補 RNA 或 DNA 分子時提昇雜交親和力 (雙鏈體穩定化)。藉由測量反義寡核苷酸/補充劑雙鏈體的融化溫度，可對此進行常規的判定。
非限制性地，例示性 LNA 核苷於 WO 99/014226、WO 00/66604、WO 98/039352、WO 2004/046160、WO 00/047599、WO 2007/134181、WO 2010/077578、WO 2010/036698、WO 2007/090071、WO 2009/006478、WO 2011/156202、WO 2008/154401、WO 2009/067647、WO 2008/150729、Morita 等人，Bioorganic & Med.Chem.Lett.12, 73-76, Seth 等人 J. Org.Chem. 2010, Vol 75(5) pp. 1569-81 及 Mitsuoka 等人，Nucleic Acids Research 2009, 37(4), 1225-1238 以及 Wan 與 Seth，J. Medical Chemistry 2016, 59, 9645−9667 中揭露。
方案 1 中揭露了其他非限制性例示 LNA 核苷。
方案 1：
特定 LNA 核苷為 β-D-氧基-LNA、6’-甲基-β-D-氧基 LNA，如 (S)-6’-甲基-β-D-氧基-LNA (ScET) 及 ENA。具有特定優勢的 LNA 為 β-D-氧基-LNA。
帶有
HELM
標注的例示性核苷
DNA 核苷
β-D-氧基-LNA 核苷
2’-O-甲基核苷
具有
HELM
標註的例示性硫代磷酸酯核苷間鍵結
虛線代表每個核苷與 5’ 或 3’ 硫代磷酸酯核苷間鍵結之間的共價鍵。在 5’ 端核苷處，5’ 虛線代表與氫原子鍵結的鍵 (形成 5’ 端-OH 基)。在 3’ 端核苷處，3’ 虛線代表與氫原子鍵結的鍵 (形成 3’ 端-OH 基)。
RNase H
活性與招募
反義寡核苷酸的 RNase H 活性是指當其與互補 RNA 分子在雙鏈體中時，招募 RNase H 的能力。WO01/23613 提供用於在體外用於判定 RNase H 活性的方法，其可用於判定招募 RNase H 的能力。一般而言，若反義寡核苷酸在提供互補的目標核酸序列時，其初始速率 (以 pmol/l/分計) 至少為使用與被測的修飾寡核苷酸具有同一鹼基序列的反義寡核苷酸時判定的初始速率的 5%，如至少 10% 或 20% 以上，則被認為能夠招募 RNase H，但在反義寡核苷酸中所有單體之間僅包含具有硫代磷酸酯鍵結的 DNA 單體，並使用 WO01/23613 的實例 91 - 95 提供的方法 (藉由引用併入本文)。為了用於判定 RNase H 活性，重組人 RNase H1 (與大腸桿菌中表達的 His 標籤融合的重組人 RNASEH1) 可從 Creative Biomart® 獲得。
缺口體
本發明之反義寡核苷酸，或其連續核苷酸序列，可為一缺口體，亦稱為缺口體反義寡核苷酸或缺口體設計。缺口體常用於透過 RNase H 介導的降解來抑制目標核酸。缺口體包含至少三個有區別的結構區域， 5’-側翼、缺口和 3’-側翼，F-G-F’ 在 ‘5 -＞ 3’ 方向。該「缺口」區域 (G) 包含一段能夠使缺口體招募 RNase H 的連續 DNA 核苷酸。該缺口區域側接包含一或多個糖修飾核苷 (有利的是高親和力糖修飾核苷) 的 5’ 側翼區域 (F)，且側接包含一或多個糖修飾核苷 (有利的是高親和力糖修飾核苷) 的 3’ 側翼區域 (F’)。區域 F 及 F’ 中的一個或多個糖修飾核苷提昇缺口體對於目標核酸的親和力 (即增加型糖修飾核苷的親和力)。在某些實施例中，區域 F 及 F’ 中的一或多個糖修飾核苷是 2’ 糖修飾核苷，例如高親和力 2’ 糖修飾，例如獨立選自 LNA 及 2’-MOE。
在缺口體設計中，缺口區域的 5’ 及 3’ 多數核苷為 DNA 核苷，且位置分別鄰近 5’ (F) 或 3’ (F’) 區域的糖修飾核苷。該側翼可進一步定義為在距離該缺口區域最遠之端具有至少一個糖修飾核苷，即在 5’ 側翼的 5’ 端及在 3’ 側翼的 3’ 端。
區域 F-G-F’ 形成一個連續核苷酸序列。本發明之反義寡核苷酸，或其連續核苷酸序列，可包含式 F-G-F’ 的缺口體 (gapmer) 區域。
該缺口體設計 F-G-F’ 的整體長度可為，例如 12 至 32 個核苷，例如 13 至 24 個，例如 14 至 22 個核苷，例如 14 至 17 個，例如 16 至 18 個核苷。
舉例而言，本發明之缺口體寡核苷酸可由下式代表：
F1-8
-G5-16
-F’1-8
，例如
F1-8
-G7-16
-F’2-8
附帶條件是該缺口體區域 F-G-F’ 的整體長度為至少 12 個，例如至少 14 個核苷酸。
在本發明之方面中，反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列由式 5'-F-G-F'-3’ 的缺口體組成或包含該缺口體，其中區域 F 和 F’ 獨立地包含 1-8 個核苷或由其組成，其中 1-4 個核苷是經 2’ 糖修飾的，並界定了 F 和 F’ 區域的 5’端和 3’ 端，而 G 為介於能夠招募 Rnase H 的 6 至 16 個核苷之間的區域。
以下進一步定義了區域 F 、G 和 F'，並且可以將其合併到 F-G-F’ 公式中。
LNA
缺口體
LNA 缺口體是指其中區域 F 及 F’ 中任一者或兩者都包含或具有 LNA 核苷的缺口體。β-D-氧基缺口體是指其中區域 F 及 F’ 中任一者或兩者都包含或具有 β-D-氧基 LNA 核苷的缺口體。
在某些實施例中，該 LNA 缺口體系如下式：[LNA]1–5
-[區域 G] -[LNA]1-5
， 其中區域 G 為或包含能夠招募 RNase H 的連續 DNA 核苷的區域。
MOE
缺口體
MOE 缺口體是其中區域 F 及 F’ 由 MOE 核苷所構成的缺口體。在某些實施例中，該 MOE 缺口體的設計為 [MOE]1-8
-[區域 G]5-16
-[MOE]1-8
，如 [MOE]2-7
-[區域 G]6-14
-[MOE]2-7
，如 [MOE]3-6
-[區域 G]8-12
-[MOE]3-6
，其中區域 G 在缺口體定義中界定。具有 5-10-5 設計 (MOE-DNA-MOE) 的 MOE 缺口體已廣泛用於本技術領域中。
混合型翼缺口體
混合型翼缺口體是一種 LNA 缺口體，其中區域 F 及 F’ 中的一者或兩者包含 2’ 取代核苷，如獨立選自由 2’-O-烷基-RNA 單元、2’-O-甲基-RNA、2’-胺基-DNA 單元、2’-氟基-DNA 單元、2’-烷氧基-RNA、MOE 單元、阿糖基核酸 (ANA) 單元及 2’-氟基-ANA 單元所組成之群組的 2’ 取代核苷，如 MOE 核苷。在某些實施例中，其中區域 F 及 F’ 中的至少一個或區域 F 及 F’ 兩者均包含至少一個 LNA 核苷，區域 F 及 F’ 的其餘核苷為獨立選自由 MOE 及 LNA 所組成之群組。在某些實施例中，其中區域 F 及 F’ 中的至少一個或區域 F 及 F’ 兩者均包含至少兩個 LNA 核苷，區域 F 及 F’ 的其餘核苷為獨立選自以 MOE 及 LNA 所組成之群組。在某些混合型翼的實施例中，區域 F 及 F’ 中的一或兩者可進一步包含一或多個 DNA 核苷。
交替側翼缺口體
側翼區域可包含 LNA 及 DNA 核苷兩者，並且由於其包含 LNA-DNA-LNA 核苷的交替模體，因此稱為「交替側翼」。包含此種交替側翼的缺口體稱為「交替側翼缺口體」。因此，「選擇性側翼缺口體」是指 LNA 缺口體寡核苷酸，其中至少一個側翼 (F 或 F’) 在一個或多個 LNA 核苷之外還包含 DNA。在某些實施例中，區域 F 或 F’ 中的至少一個或兩個包含 LNA 核苷及 DNA 核苷這兩者。在該等實施例中，側翼區域 F 或 F’，或 F 和 F’ 兩者，包含至少三個核苷，其中 F 及/或 F’ 區域的 5’ 及 3’ 多數核苷為 LNA 核苷。
寡核苷酸中的區域
D’
或
D’’
本發明之反義寡核苷酸可在某些實施例中包含寡核苷酸的連續核苷酸序列或由該連續核苷酸序列組成，其與該目標核酸互補，如缺口體區域 F-G-F’ 以及進一步的 5’ 及/或 3’ 核苷。該進一步的 5’ 及/或 3’ 核苷可與或不與該目標核酸為完全互補。該等進一步的 5’ 及/或 3’ 核苷本文中可稱為區域 D’ 及 D’’。
區域 D’ 或 D’’ 的加入可用於將該連續核苷酸序列，例如缺口體，連接至結合體部分或另一官能基團。當用於接合該連續核苷酸序列與結合體部分時，其可做為生物可切斷型連接子。或者其可用於提供核酸外切酶保護或促進合成或製造。
區域 D’ 及 D’’ 可分別連附至區域 F 的 5’ 端或區域 F’ 的 3’ 端，以分別產生下式的設計：D’-F-G-F’、F-G-F’-D’’ 或 D’-F-G-F’-D’’。在此例子中，F-G-F’ 是該反義寡核苷酸的缺口體部位，且區域 D’ 或 D’’ 組成該反義寡核苷酸的一個分離部分。
區域 D’ 或 D’’ 可獨立包含或具有 1、2、3、4 或 5 個外加核苷酸，其可與該目標核酸為互補或不為互補。鄰接 F 或 F’ 區域的核苷酸並非糖修飾核苷酸，例如 DNA 或 RNA 或其鹼基修飾版本。D’ 或 D’’ 區域可做為對核酸酶易感的生物可切斷型連接子 (見連接子定義)。在某些實施例中，該外加 5’ 及/或 3’ 端核苷酸是與磷酸二酯鍵結連結，且為 DNA 或 RNA。適用為區域 D’ 或 D’’ 的核苷酸基生物可切斷型連接子可參照 WO2014/076195 的揭露，舉例而言可包括磷酸二酯連結 DNA 二核苷酸。生物可切斷型連接子在聚寡核苷酸構造中的使用可參照 WO2015/113922 的揭露，在該案中其為用於連結單一反義寡核苷酸中的多重反義構造 (例如缺口體區域)。
在一個實施例中，本發明之反義寡核苷酸除包含組成該缺口體的該連續核苷酸序列之外，還包含區域 D’ 及/或 D’’。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸可由下式代表：
F-G-F’；特別是 F1-8
-G5-16
-F’2-8
D’-F-G-F’；特別是 D’1-3
-F1-8
-G5-16
-F’2-8
F-G-F’-D’’；特別是 F1-8
-G5-16
-F’2-8
-D’’1-3
D’-F-G-F’-D’’；特別是 D’1-3
- F1-8
-G5-16
-F’2-8
-D’’1-3
在某些實施例中，該位在區域 D’ 與區域 F 之間的核苷間鍵結是磷酸二酯鍵結。在某些實施例中，該位在區域 F’ 與區域 D’’ 之間的核苷間鍵結是磷酸二酯鍵結。
結合體
本文所用的結合體一詞意指共價連結至非核苷酸部分 (結合體部分或區域 C 或第三區域) 的反義寡核苷酸。結合體部分可以隨選透過連接子基團 (如區域 D’ 或 D’) 共價連接至反義寡核苷酸。
Manoharan 在 Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications, S.T. (Crooke 編輯, 第 16 章, Marcel Dekker, Inc., 2001 和 Manoharan, Antisense and Nucleic Acid Drug Development, 2002, 12, 103) 的綜合評論中亦報導了反義寡核苷酸結合體及其合成。
在某些實施例中，非核苷酸部分 (結合體部分) 選自由碳水化合物 (例如 GalNAc)、細胞表面受體配體、原料藥、荷爾蒙、親脂性物質、聚合物、蛋白質、胜肽、毒素 (例如細菌毒素)、維他命、病毒蛋白質 (例如衣殼) 或其組合所組成之群組。
連接子
鍵結或連接子是兩個原子之間的連接，用以將一個關注中的化學基團或區段經由一或多個共價鍵連結至另一個關注中的化學基團或區段。結合體部分可直接或經由連結部分 (例如連接子或繫鏈) 連附至該反義寡核苷酸。連接子將第三區域，例如結合體部分 (區域 C)，共價連接至第一區域，例如與該目標核酸互補的反義寡核苷酸或連續核苷酸序列 (區域 A)。
在本發明之某些實施例中，本發明之結合體或反義寡核苷酸結合體可隨選包含連接子區域 (第二區域或區域 B 及/或區域 Y)，其位在與該目標核酸互補的該反義寡核苷酸或該連續核苷酸序列 (區域 A 或第一區域) 與結合體部分 (區域 C 或第三區域) 之間。
區域 B 意指包含或具有一個生理不安定鍵的生物可切斷型連接子，該生理不安定鍵在哺乳動物體內常態存在或與之類似的條件下會成為可切斷的鍵。生理不安定連接子經歷化學轉換 (例如，切斷) 的條件包括化學條件，例如 pH、溫度、氧化或還原條件或作用劑，以及哺乳動物細胞內所常態存在或與之類似的鹽濃度。哺乳動物細胞內條件亦包括通常存在於哺乳動物細胞中的酵素活性，例如蛋白分解酶或水解酶或核酸酶的活性。在一個實施例中，生物可切斷型連接子容易受到 S1 核酸酶切斷。在某些實施例中，核酸酶敏感性連接子包含 1 至 5 個核苷，如包含至少兩個連續磷酸二酯鍵的一個或多個 DNA 核苷。在 WO 2014/076195 中更詳細地闡述了包含磷酸二酯的可生物裂解的連接子。
區域 Y 意指未必為生物可切斷型但主要功能是將結合體部分 (區域 C 或第三區域) 共價連接至反義寡核苷酸 (區域 A 或第一區域) 的連接子。區域 Y 連接子可包含鏈結構或重複單元的低聚物，如乙二醇、胺基酸單元或胺基烷基團。本發明之反義寡核苷酸結合體可由以下區域元素建構：A-C、A-B-C、A-B-Y-C、A-Y-B-C 或 A-Y-C。在某些實施例中，該連接子 (區域 Y) 為胺基烷基，如 C2 至 C36 胺基烷基團，包括，例如 C6 至 C12 胺基烷基團。在某些實施例中，該連接子 (區域 Y) 為 C6 胺基烷基團。在某些實施例中，該連接子為 NA。
治療
本文所用的「治療」一詞意指治療既有疾病 (例如本文所提及之疾病或疾患)，或防範疾病，即預防。因此應知，本文中所意指的治療，於某些實施例中，是預防性的。
本發明之反義寡核苷酸
本發明之反義寡核苷酸是一種標定 SCN9A 的反義寡核苷酸。
反義寡核苷酸
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸能夠藉由抑制或下調目標而調節該目標的表現。優選的是，此種調節相較於目標的正常表現水平可產生至少 20% 的表現抑制，更優選的是相較於目標的正常表現水平產生至少 30%、至少 40%、至少 50% 的表現抑制。在某些實施例中，在將 0.031 µM、0.1 µM 和 0.4 µM 反義寡核苷酸應用於 SK-N-AS 細胞後，本發明之反義寡核苷酸可以能夠在體外將 SCN9A mRNA 的表現水平抑制至少 60% 或 70%。在某些實施例中，在將 0.031 µM、0.1 µM 和 0.4 µM 寡核苷酸應用於 SK-N-AS 細胞後，本發明之反義寡核苷酸可以能夠在體外將 SCN9A 蛋白質的表現水平抑制至少 50%。適合的是，實例提供可用於測量 SCN9A RNA 或蛋白質抑制的測定 (例如參閱實例 1 和 3)。在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸可以以不超過 1 µM，更優選地不超過 0.5 µM 的最大有效濃度的一半 (EC50) 抑制細胞中目標 RNA 或蛋白質的表現水平。例如，反義寡核苷酸可以在將寡核苷酸應用於 SK-N-AS 細胞後，以不超過 0.3 µM，如不超過 0.20 µM、不超過 0.15 µM、不超過 0.10 µM、不超過 0.08 µM、不超過 0.07 µM、不超過 0.06、0.05、0.04 或 0.03 µM 的 EC50 抑制 SCN9A mRNA (或蛋白質) 的表現水平。在某些實施例中，在 SK-N-AS 細胞中，反義寡核苷酸可以能夠以 0.03 µM 至 0.15 µM 的範圍，如 0.05 至 0.10 µM 的範圍，如約 0.07 µM，的 EC50 抑制 SCN9A mRNA 的表現水平。適合的是，這可以在實例 3 中提供的測定中進行評估。
本發明之反義寡核苷酸的特徵還在於對目標核酸 (如 SCN9A mRNA) 的高選擇性。在某些實施例中，例如當以約 50 倍於其在 SK-N-AS 細胞中 EC50 的濃度應用於目標細胞時，反義寡核苷酸可以在表現包含目標序列的核酸的目標細胞中減少少數或不減少非目標核酸的表現，如不超過 20 個非目標基因，不超過 15 個非目標基因，不超過 12 個非目標基因，不超過 10 個非目標基因，不超過 8 個、7 個、6 個、5 個、4 個、3 個、2 個或 1 個非目標基因，或無非目標基因。應知「非目標基因」包括不是 SCN9A 基因或基因轉錄的任何基因或基因轉錄，例如 mRNA，但是其表現被反義寡核苷酸減少。優選的是，當以約 3 µM 的濃度應用於人類神經元細胞，例如
人類 iCell GlutaNeuron (參閱表 10) 時，反義寡核苷酸可減少不超過 5 個標基因 (如不超過 3 個標基因、如不超過 1 個非目標基因、如無非目標基因) 的表現。實例 4 中提供用於評估反義寡核苷酸的選擇性的適合的測定。在某些實施例中，非目標基因可以被定義為當在實例 4 的測定中進行測試時相對於具有調整後的 p 值 ＜ 0.05 的對照條件具有減少的表現，可選地亦基於結合親和力預測在預測的非目標基因的前 1% 中或能夠以 1 個錯配與對應的未剪接轉錄結合。
藉由反義寡核苷酸的連續核苷酸序列與目標核酸之間的雜交來觸發目標調節。在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸包含反義寡核苷酸與目標核酸之間的錯配。儘管存在錯配，但與目標核酸的雜交仍可能足以顯示出 SCN9A 表現的所期望的調節。可以有利地藉由增加反義寡核苷酸中核苷酸的數量及/或增加能夠增加與目標，如存在於反義寡核苷酸序列內包括 LNA 的 2’ 糖修飾核苷的結合親和力的修飾核苷的數量來補償由錯配導致的減少的結合親和力。
本發明之一方面涉及一種反義寡核苷酸，其包含長度為 10 至 30 個與 SCN9A 前 mRNA 具有至少 90% 的互補性的核苷酸的連續核苷酸序列，如 SEQ ID NO: 1，或由此衍生的轉錄變體。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 10 個至 30 個核苷酸的連續序列，該序列與該目標核酸或目標序列的區域至少 90% 互補，如至少 91%、如至少 92%、如至少 93%、如至少 94%、如至少 95%、如至少 96%、如至少 97%、如至少 98%，或 100% 互補。
有利的是，若本發明之反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列與目標核酸之區域完全互補 (100% 互補)，或者，在某些實施例中，反義寡核苷酸與目標核酸之間可包含一或兩組錯配。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 10 至 30 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域至少 90% 互補，如完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 14 至 20 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 15 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 16 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 17 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 18 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 19 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 20 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 21 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含長度為 22 個核苷酸的連續核苷酸序列，與選自由 SEQ ID NO: 1 的核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 - 151847 及 151949 - 152006 所組成之群組的 SEQ ID NO: 1 中存在的目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含與選自由 SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26 及 SEQ ID NO: 27 所組成之群組之目標核酸的區域至少 90% 互補 (如至少 95% 互補) 的連續核苷酸序列。
在某些實施例中，反義寡核苷酸包含與選自由 SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26 及 SEQ ID NO: 27 所組成之群組之目標核酸的區域完全 (或 100%) 互補的連續核苷酸序列。
本發明之反義寡核苷酸包含與目標核酸的區域互補或雜交的連續核苷酸序列，如本文所述之目標序列。
與治療性反義寡核苷酸互補或雜交的目標核酸序列通常包含一段至少 10 個核苷酸的連續核鹼基。連續核苷酸序列具有 12 個至 70 個之間的核苷酸，如 12 個至 50 個連續核苷酸、如 13 個至 30 個連續核苷酸、如 14 個至 25 個連續核苷酸、如 14 個至 20 個連續核苷酸。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列包含長度為 10 個至 30 個核苷酸或由其組成，如長度為 12 個至 25 個核苷酸、如 11 個至 22 個核苷酸、如 12 個至 20 個核苷酸、如 14 個至 18 個或 14 個至 16 個連續核苷酸。
在某些實施例中，反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列包含 22 個或更少之核苷酸或由其組成，如 20 個或更少之核苷酸，如 18 個或更少之核苷酸，如 14 個、15 個、16 個或 17 個核苷酸。應知在本文中給定之所有範圍均包括範圍端點。據此，若描述反義寡核苷酸包括 10 個至 30 個核苷酸，則均包括 10 個及 30 個核苷酸。
在某些實施例中，該連續核苷酸序列在長度上包含或具有 10 個、11 個、12 個、13 個、14 個、15 個、16 個、17 個、18 個、19 個、20 個、21 個、22 個、23 個、24 個、25 個、26 個、27 個、28 個、29 個或 30 個連續核苷酸。
在某些實施例中，反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列包含選自 SEQ ID NO: 28-52 的序列或由其組成。
在某些實施例中，連續核苷酸序列的長度包含 12 個、13 個、14 個、15 個、16 個、17 個、18 個、19 個、20 個、21 個或 22 個連續核苷酸或由其組成。
在有利的實施例中，反義寡核苷酸包含一個或多個糖修飾核苷，如一個或多個 2’ 糖修飾核苷，如一個或多個獨立選自由 2'-O-烷基-RNA、2'-O-甲基-RNA、2'-烷氧基-RNA、2'-O-甲氧基乙基-RNA、2'-氨基-DNA、2'-氟-DNA、阿拉伯核酸 (ANA)、2' -氟-ANA和 LNA 核苷所組成之群組之 2'糖修飾核苷。若修飾核苷中的一個或多個為鎖核酸 (LNA)，則是有利的。
在某些實施例中，連續核苷酸序列包含 LNA 核苷。
在某些實施例中，連續核苷酸序列包含 LNA 核苷和 DNA 核苷。
在某些實施例中，連續核苷酸序列包含 LNA 核苷和 DNA 核苷以及 2'-O-甲基 RNA 核苷。
在某些實施例中，連續核苷酸序列包含 LNA 核苷、DNA 核苷和 2'-O-甲基 RNA 核苷，並且連續核苷酸鍵結的每個核苷之間的核苷鍵結為硫代磷酸酯核苷鍵結。
在某些實施例中，連續核苷酸序列包含 LNA 核苷、DNA 核苷和 2'-O-甲基 RNA 核苷，並且連續核苷酸鍵結的每個核苷之間的核苷鍵結為硫代磷酸酯核苷鍵結。
在某些實施例中，連續核苷酸序列包含 2'-O-甲氧基乙基 (2'MOE) 核苷。
在某些實施例中，連續核苷酸序列包含 2'-O-甲氧基乙基 (2'MOE) 核苷和 DNA 核苷。
有利的是，反義寡核苷酸之 3' 最末端核苷或其連續核苷酸序列為 2’ 糖修飾核苷。
有利的是，反義寡核苷酸包含至少一個修飾核苷間鍵結，如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯。
在某些實施例中，連續核苷酸序列中的至少一個核苷間鍵結為硫代磷酸酯核苷間鍵結。
在某些實施例中，連續核苷酸序列中的至少一個核苷間鍵結為二硫代磷酸酯核苷間鍵結。
在某些實施例中，連續核苷酸序列中的至少一個核苷間鍵結為磷酸雙酯核苷間鍵結。
在某些實施例中，連續核苷酸序列內的所有核苷間鍵結都為硫代磷酸酯核苷間鍵結。
在某些實施例中，反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列內至少 75% 的核苷間鍵結為硫代磷酸酯核苷間鍵結。
在某些實施例中，反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列內所有核苷間鍵結為硫代磷酸酯核苷間鍵結。
在本發明之有利的實施例中，本發明之反義寡核苷酸能夠招募 RNase H，如 RNase H1。在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列是缺口體。
在某些實施例中，反義寡核苷酸或其連續核苷酸序列包含式 5’-F-G-F’-3 的缺口體或由其組成。
在某些實施例中，區域 G 由 6 至 16 個 DNA 核苷組成。
在某些實施例中，區域 F 和 F’ 各自包含至少一個 LNA 核苷。
表 3 ：
本發明提供以下反義寡核苷酸化合物
| SEQ ID NO: | 模體 | 化合物 | CMP 識別號 | ∆G° | 初始 SEQ ID NO: 1 |
| 28 | CAAAGCTCGTGTAG | CAAagctcgtGTAG | 28_1 | -18.2 | 82676 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaataccatTTCA | 29_1 | -19.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTaataccatTTCA | 29_2 | -19.8 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTAataccattTCA | 29_3 | -20.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccatU TCA | 29_4 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccatTtCA | 29_5 | -18.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTtaataccatTTCA | 29_6 | -18.6 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTaataccatTTCA | 29_7 | -19.0 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTaataccatTTCA | 29_8 | -19.8 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTaataccattTCA | 29_9 | -19.0 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTAataccattTCA | 29_10 | -19.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccattTcA | 29_11 | -15.9 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtAataccattTCA | 29_12 | -19.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccAttTCA | 29_13 | -18.7 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccattTC A | 29_14 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTAataccatttCA | 29_15 | -19.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTaataccaTttCA | 29_16 | -18.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTaataccatTtCA | 29_17 | -18.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTaataccatTtCA | 29_18 | -18.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtAataccatTtCA | 29_19 | -18.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTAataccatTtCA | 29_20 | -19.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTaataccaTTtCA | 29_21 | -18.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtttAataccatTTCA | 29_22 | -18.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTtAataccatTTCA | 29_23 | -18.7 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTtAataccattTCA | 29_24 | -16.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTA ataccattTCA | 29_25 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTaataccattTCA | 29_26 | -17.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAAtaccattTCA | 29_27 | -19.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAatA ccattTCA | 29_28 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccA ttTCA | 29_29 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccattTCA | 29_30 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccattTCa | 29_31 | -17.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | G TtTTAataccattTCA | 29_32 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccattTCA | 29_33 | -18.6 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAA taccatU TCA | 29_34 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTU AataccattTCA | 29_35 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GtU TTAataccattTCA | 29_36 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GtU TTAataccatU TCA | 29_37 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GU tTTAataccattTCA | 29_38 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GU tTTAataccatU TCA | 29_39 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GUU TTAataccattTCA | 29_40 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GUU TTAataccatU TCA | 29_41 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTAataccatttCA | 29_42 | -18.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTAataccatttCA | 29_43 | -19.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaAtaccatttCA | 29_44 | -18.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTaAtaccatttCA | 29_45 | -18.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTaAtaccatttCA | 29_46 | -18.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtAAtaccatttCA | 29_47 | -18.7 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTAAtaccatttCA | 29_48 | -18.9 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTAAtaccatttCA | 29_49 | -19.7 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTAAtaccatttCA | 29_50 | -19.7 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaaTaccatttCA | 29_51 | -18.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaaTaccatttCA | 29_52 | -19.0 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTaaTaccatttCA | 29_53 | -18.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTaaTaccatttCA | 29_54 | -18.9 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTaaTaccatttCA | 29_55 | -18.9 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTAaTaccatttCA | 29_56 | -19.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTAaTaccatttCA | 29_57 | -20.0 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTAaTaccatttCA | 29_58 | -20.0 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaATaccatttCA | 29_59 | -19.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTtaATaccatttCA | 29_60 | -18.8 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaATaccatttCA | 29_61 | -20.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtttAATaccatttCA | 29_62 | -18.8 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttAATaccatttCA | 29_63 | -19.6 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTAATaccatttCA | 29_64 | -20.6 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccaTttCA | 29_65 | -18.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTaataccaTttCA | 29_66 | -18.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccATttCA | 29_67 | -19.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTAataccatTtCA | 29_68 | -18.7 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccAtTtCA | 29_69 | -18.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaataccaTTtCA | 29_70 | -18.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccaTTtCA | 29_71 | -19.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTaataccaTTtCA | 29_72 | -19.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccatTTCA | 29_73 | -19.9 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttAataccatTTCA | 29_74 | -19.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtAataccatTTCA | 29_75 | -20.0 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaataccAtTTCA | 29_76 | -19.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccAtTTCA | 29_77 | -20.0 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTaataccaTTtCA | 29_78 | -19.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtttaataccATTtCA | 29_79 | -18.6 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaataccATTtCA | 29_80 | -19.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccATTtCA | 29_81 | -20.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccattTCA | 29_82 | -19.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTaataccattTCA | 29_83 | -18.2 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTaataccattTCA | 29_84 | -19.0 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaAtaccattTCA | 29_85 | -18.6 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTtaAtaccattTCA | 29_86 | -18.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaAtaccattTCA | 29_87 | -19.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTaAtaccattTCA | 29_88 | -18.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTaAtaccattTCA | 29_89 | -19.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTaAtaccattTCA | 29_90 | -19.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtttAAtaccattTCA | 29_91 | -18.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttAAtaccattTCA | 29_92 | -18.9 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTtAAtaccattTCA | 29_93 | -18.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtAAtaccattTCA | 29_94 | -19.7 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTttTAAtaccattTCA | 29_95 | -19.9 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaataccAttTCA | 29_96 | -18.3 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaataccaTtTCA | 29_97 | -18.7 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccaTtTCA | 29_98 | -19.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTtTaataccaTtTCA | 29_99 | -19.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTTaataccaTtTCA | 29_100 | -19.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtttaataccATtTCA | 29_101 | -18.8 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTttaataccATtTCA | 29_102 | -19.6 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTtTtaataccATtTCA | 29_103 | -19.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GTTTtaataccATtTCA | 29_104 | -20.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | G ttTTAataccattTCA | 29_105 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | gttTTAataccattTCA | 29_106 | -18.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GtttTAataccattTCA | 29_107 | -17.8 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAA taccattTCA | 29_108 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAaTaccattTCA | 29_109 | -19.5 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAatAccattTCA | 29_110 | -18.8 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccaTtTCA | 29_111 | -19.1 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccatTTCA | 29_112 | -19.4 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccatttCA | 29_113 | -17.6 | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccaU tTCA | 29_114 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAA taccaU tTCA | 29_115 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAataccaUU TCA | 29_116 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAaU accattTCA | 29_117 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAAU accattTCA | 29_118 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAaU accaU tTCA | 29_119 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttTTAaU accaUU TCA | 29_120 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GttU TAataccattTCA | 29_121 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GtU TTAA taccattTCA | 29_122 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GtU TTAA taccatU TCA | 29_123 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GtU TTAataccaU tTCA | 29_124 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GtU TTAA taccaU tTCA | 29_125 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GtU TTAaU accattTCA | 29_126 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GtU TTAAU accattTCA | 29_127 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GU tTTAA taccattTCA | 29_128 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GU tTTAataccaU tTCA | 29_129 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GU tTTAaU accattTCA | 29_130 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GUU TTAA taccattTCA | 29_131 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GUU TTAataccaU tTCA | 29_132 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GUU TTAataccaUU TCA | 29_133 | NA | 97704 |
| 29 | GTTTTAATACCATTTCA | GUU TTAaU accattTCA | 29_134 | NA | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTttaataccatTtCA | 30_1 | -18.1 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGttTtaataccatTtCA | 30_2 | -18.1 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTttaataccattTCA | 30_3 | -18.8 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTTtaataccatTtCA | 30_4 | -18.9 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTtTaataccatTtCA | 30_5 | -18.9 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGttTtaataccattTCA | 30_6 | -18.8 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTttaataccaTTtCA | 30_7 | -19.1 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTttaataccAttTCA | 30_8 | -18.9 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTttaataccaTttCA | 30_9 | -18.3 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTtTaataccaTttCA | 30_10 | -19.0 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTTtaataccaTttCA | 30_11 | -19.1 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGttTtaataccaTTtCA | 30_12 | -19.1 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTttaataccATttCA | 30_13 | -19.1 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtTTtaataccatttCA | 30_14 | -18.6 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGttttaataccATttCA | 30_15 | -18.8 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGttTTaataccatttCA | 30_16 | -19.1 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGttTtaataccaTttCA | 30_17 | -18.3 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtttTaaTaccatttCA | 30_18 | -19.1 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGttttAATaccatttCA | 30_19 | -19.8 | 97704 |
| 30 | AGTTTTAATACCATTTCA | AGtttTaATaccatttCA | 30_20 | -20.3 | 97704 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgtTttaataccatTTC | 31_1 | -18.2 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgTtTtaataccatTTC | 31_2 | -18.9 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgtTtTaataccattTC | 31_3 | -18.1 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgTttTaataccattTC | 31_4 | -18.5 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgTttTaataccaTtTC | 31_5 | -18.9 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgTTttaataccattTC | 31_6 | -18.6 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgtTtTaataccatTTC | 31_7 | -19.0 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgtTTtaataccatTTC | 31_8 | -19.0 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAGtTttaataccattTC | 31_9 | -18.8 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgTtTtaataccattTC | 31_10 | -18.1 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgtTTtaataccattTC | 31_11 | -18.2 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAGttTtaataccattTC | 31_12 | -18.8 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgTTttaataccaTtTC | 31_13 | -19.0 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgTtttaataccatTTC | 31_14 | -18.6 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgtTTtaataccaTtTC | 31_15 | -18.7 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAGtTttaataccAttTC | 31_16 | -18.9 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgtTttaataccATtTC | 31_17 | -18.7 | 97705 |
| 31 | CAGTTTTAATACCATTTC | CAgttTTAAtaccattTC | 31_18 | -20.3 | 97705 |
| 32 | TCAGTTTTAATACCATT | TCAGttTtaataccaTT | 32_1 | -18.8 | 97707 |
| 32 | TCAGTTTTAATACCATT | TCaGTtTTaataccaTT | 32_2 | -19.1 | 97707 |
| 32 | TCAGTTTTAATACCATT | TCAGtttTaataccaTT | 32_3 | -19.2 | 97707 |
| 32 | TCAGTTTTAATACCATT | TCAGttTTaataccaTT | 32_4 | -20.0 | 97707 |
| 32 | TCAGTTTTAATACCATT | TCAgttTTaataccaTT | 32_5 | -18.6 | 97707 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgtTttAataccatTtCA | 33_1 | -20.1 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgTtttaataccatTtCA | 33_2 | -20.4 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgtTttaataccAtTtCA | 33_3 | -20.1 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgtTttaataccatTtCA | 33_4 | -20.0 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgtTttAataccatttCA | 33_5 | -19.8 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgtTttaataccaTttCA | 33_6 | -20.2 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgtTttaAtaccatttCA | 33_7 | -20.0 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgtTttaataccAtttCA | 33_8 | -19.8 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgTtttAataccatttCA | 33_9 | -20.2 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgTtTtaataccatttCA | 33_10 | -20.4 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgTtttaataccAtttCA | 33_11 | -20.1 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgttTtaataccatttCA | 33_12 | -19.7 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgttTtaataccatTtCA | 33_13 | -20.0 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgTtTtaataccAtttCA | 33_14 | -20.4 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgttTtAataccatTtCA | 33_15 | -20.1 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgttttAataccatttCA | 33_16 | -19.5 | 97712 |
| 33 | CAGTTTTAATACCATTTCA | CAgttTtAAtaccatttCA | 33_17 | -20.4 | 97712 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCaGTttTaataccatTT | 34_1 | -19.1 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCAgtTtTaataccatTT | 34_2 | -19.0 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCaGTtTtaataccatTT | 34_3 | -18.7 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCagTtTTaataccatTT | 34_4 | -18.2 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCaGttTTaataccatTT | 34_5 | -18.4 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCaGttTtaataccaTTT | 34_6 | -18.1 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCAgTtTTaataccatTT | 34_7 | -20.1 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCAGttTtaataccatTT | 34_8 | -19.6 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCagTttTAataccatTT | 34_9 | -18.5 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCaGtttTAataccatTT | 34_10 | -18.7 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCaGTtTTaataccatTT | 34_11 | -19.9 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCAGtttTaataccatTT | 34_12 | -20.1 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCaGtttTaataccaTTT | 34_13 | -18.5 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCAGtTtTaataccatTT | 34_14 | -20.4 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCaGttTTaataccaTTT | 34_15 | -19.3 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCaGTttTAataccatTT | 34_16 | -20.3 | 97714 |
| 34 | TCAGTTTTAATACCATTT | TCAgttTtaataccatTT | 34_17 | -18.2 | 97714 |
| 35 | ATCAGTTTTAATACCATT | ATCaGttTTaataccaTT | 35_1 | -19.6 | 97715 |
| 36 | CACATAATTTATTCCCTTT | CAcAtaatttattcccTTT | 36_1 | -20.0 | 103232 |
| 36 | CACATAATTTATTCCCTTT | CAcaTaatttattccctTT | 36_2 | -19.8 | 103232 |
| 36 | CACATAATTTATTCCCTTT | CAcAtaatttattccCtTT | 36_3 | -19.9 | 103232 |
| 36 | CACATAATTTATTCCCTTT | CAcAtaatttattcCctTT | 36_4 | -19.7 | 103232 |
| 36 | CACATAATTTATTCCCTTT | CAcataatttattCcctTT | 36_5 | -19.7 | 103232 |
| 37 | TCACATAATTTATTCCCTT | TCacAtaatttattcCcTT | 37_1 | -19.8 | 103233 |
| 37 | TCACATAATTTATTCCCTT | TCacataatttattcCcTT | 37_2 | -19.8 | 103233 |
| 37 | TCACATAATTTATTCCCTT | TCacAtaatttattCccTT | 37_3 | -19.9 | 103233 |
| 37 | TCACATAATTTATTCCCTT | TCacataatttattCccTT | 37_4 | -19.9 | 103233 |
| 37 | TCACATAATTTATTCCCTT | TCaCataatttattcccTT | 37_5 | -19.8 | 103233 |
| 38 | TTCACATAATTTATTCCCT | TTcacataatttattCcCT | 38_1 | -20.2 | 103234 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatttATtcCC | 39_1 | -19.5 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtATtcCC | 39_2 | -19.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataatttatTcCC | 39_3 | -18.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcACataatttatTcCC | 39_4 | -19.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcaCataatttattCCC | 39_5 | -21.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCAcataatttattcCC | 39_6 | -21.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatttatTcCC | 39_7 | -19.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCAcataatttatTcCC | 39_8 | -21.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCAcataatttatTcCC | 39_9 | -19.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCA cataatttatTC CC | 39_10 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCaC ataatttatTC CC | 39_11 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCAC ataatttatTcCC | 39_12 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatTcCC | 39_13 | -18.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatTCCC | 39_14 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataattU atTcCC | 39_15 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacaU aatttatTcCC | 39_16 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TU CacataatttatTC CC | 39_17 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TU CA cataatttatTcCC | 39_18 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TU CA cataatttatTC CC | 39_19 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | U TCacataatttatTcCC | 39_20 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTtattcCC | 39_21 | -19.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataattTattcCC | 39_22 | -18.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataattTattcCC | 39_23 | -19.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTtTattcCC | 39_24 | -19.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTTattcCC | 39_25 | -19.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTTattcCC | 39_26 | -20.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttAttcCC | 39_27 | -18.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtAttcCC | 39_28 | -18.6 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTtAttcCC | 39_29 | -19.5 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataattTAttcCC | 39_30 | -20.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTtTAttcCC | 39_31 | -20.5 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTTAttcCC | 39_32 | -20.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataatttaTtcCC | 39_33 | -18.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttaTtcCC | 39_34 | -19.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtaTtcCC | 39_35 | -18.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTtaTtcCC | 39_36 | -19.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataattTaTtcCC | 39_37 | -19.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataattTaTtcCC | 39_38 | -19.5 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTtTaTtcCC | 39_39 | -19.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTTaTtcCC | 39_40 | -20.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTTaTtcCC | 39_41 | -21.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataatttATtcCC | 39_42 | -19.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttATtcCC | 39_43 | -20.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTtATtcCC | 39_44 | -20.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataattTATtcCC | 39_45 | -21.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttatTcCC | 39_46 | -19.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtatTcCC | 39_47 | -18.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTtatTcCC | 39_48 | -19.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataattTatTcCC | 39_49 | -19.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataattTatTcCC | 39_50 | -19.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTtTatTcCC | 39_51 | -19.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTTatTcCC | 39_52 | -20.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTTatTcCC | 39_53 | -21.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatttAtTcCC | 39_54 | -18.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataatttAtTcCC | 39_55 | -18.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttAtTcCC | 39_56 | -19.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtAtTcCC | 39_57 | -19.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTtAtTcCC | 39_58 | -19.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataattTAtTcCC | 39_59 | -20.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatttaTTcCC | 39_60 | -19.5 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataatttaTTcCC | 39_61 | -19.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttaTTcCC | 39_62 | -20.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtaTTcCC | 39_63 | -19.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTTtaTTcCC | 39_64 | -20.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataattTaTTcCC | 39_65 | -20.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTtTaTTcCC | 39_66 | -20.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTTaTTcCC | 39_67 | -21.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatttATTcCC | 39_68 | -20.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttATTcCC | 39_69 | -20.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtATTcCC | 39_70 | -20.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtC acataatttatTcCC | 39_71 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtcacataatttatTcCC | 39_72 | -17.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTC acataatttatTcCC | 39_73 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatttattCCC | 39_74 | -20.6 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataatttattCCC | 39_75 | -20.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttattCCC | 39_76 | -21.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtattCCC | 39_77 | -20.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataattTattCCC | 39_78 | -21.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatttAttCCC | 39_79 | -20.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttAttCCC | 39_80 | -21.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtAttCCC | 39_81 | -21.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatttaTtCCC | 39_82 | -21.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcAcataatttaTtCCC | 39_83 | -21.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataaTttaTtCCC | 39_84 | -21.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcacataatTtaTtCCC | 39_85 | -21.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcaCataatttattcCC | 39_86 | -18.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcaCataatttAttcCC | 39_87 | -19.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcACataatttAttcCC | 39_88 | -19.5 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcaCataatttaTtcCC | 39_89 | -19.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcACataatttaTtcCC | 39_90 | -19.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcaCataatttatTcCC | 39_91 | -19.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcaCataatttAtTcCC | 39_92 | -19.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcaCataatttaTTcCC | 39_93 | -20.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTcACataatttaTTcCC | 39_94 | -20.7 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatTcC C | 39_95 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatTccC | 39_96 | -16.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatTcCC | 39_97 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatTcCc | 39_98 | -16.5 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatttattcCC | 39_99 | -19.5 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatTtattcCC | 39_100 | -19.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataattTattcCC | 39_101 | -20.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatTTattcCC | 39_102 | -21.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatttAttcCC | 39_103 | -19.6 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatTtAttcCC | 39_104 | -19.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataattTAttcCC | 39_105 | -21.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatttaTtcCC | 39_106 | -19.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatTtaTtcCC | 39_107 | -20.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataattTaTtcCC | 39_108 | -20.6 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatttATtcCC | 39_109 | -20.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatTtatTcCC | 39_110 | -20.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataattTatTcCC | 39_111 | -20.6 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatttAtTcCC | 39_112 | -19.9 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatTtAtTcCC | 39_113 | -20.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCacataatttaTTcCC | 39_114 | -20.8 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | ttCacataatttatTcCC | 39_115 | -18.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCA cataatttatTcCC | 39_116 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCaC ataatttatTcCC | 39_117 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacA taatttatTcCC | 39_118 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacAtaatttatTcCC | 39_119 | -18.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacaTaatttatTcCC | 39_120 | -19.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataattTatTcCC | 39_121 | -19.1 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttA tTcCC | 39_122 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttAtTcCC | 39_123 | -18.4 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttaTTcCC | 39_124 | -19.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttattcCC | 39_125 | -18.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatTC CC | 39_126 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacA taatttatTC CC | 39_127 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttA tTC CC | 39_128 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCaCA taatttatTcCC | 39_129 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCA cataatttA tTcCC | 39_130 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatTCC C | 39_131 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatTCCC | 39_132 | -21.3 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatU cCC | 39_133 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttatU CCC | 39_134 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttaU TcCC | 39_135 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttaU TC CC | 39_136 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatttAU TcCC | 39_137 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCaC ataatttaU TcCC | 39_138 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacA taatttaU TcCC | 39_139 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataattUA tTcCC | 39_140 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCA cataattU atTcCC | 39_141 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCacataatU tatTcCC | 39_142 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCaCataatttattcCC | 39_143 | -20.2 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCaCataatttaTtcCC | 39_144 | -20.6 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TTCaCataatttatTcCC | 39_145 | -20.5 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TtCaCataatttatTcCC | 39_146 | -19.0 | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TU CacataatttatTcCC | 39_147 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TU CaC ataatttatTcCC | 39_148 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TU CacA taatttatTcCC | 39_149 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TU CacataatttA tTcCC | 39_150 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TU CacataatttaU TcCC | 39_151 | NA | 103235 |
| 39 | TTCACATAATTTATTCCC | TU CacataattU atTcCC | 39_152 | NA | 103235 |
| 40 | ACATAATTTATTCCCTTTTT | ACataatttattccCtttTT | 40_1 | -19.7 | 103238 |
| 40 | ACATAATTTATTCCCTTTTT | ACataatttattccCtTtTT | 40_2 | -20.0 | 103238 |
| 40 | ACATAATTTATTCCCTTTTT | ACataatttattcCctttTT | 40_3 | -19.5 | 103238 |
| 40 | ACATAATTTATTCCCTTTTT | ACataatttattcCctTtTT | 40_4 | -19.8 | 103238 |
| 40 | ACATAATTTATTCCCTTTTT | ACataatttattcCcTttTT | 40_5 | -20.0 | 103238 |
| 40 | ACATAATTTATTCCCTTTTT | ACataatttattCcctTtTT | 40_6 | -19.8 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttattccctTTTT | 41_1 | -19.8 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaATtTattccctTtTT | 41_2 | -20.8 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttattccCttTTT | 41_3 | -19.9 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttattccCtTtTT | 41_4 | -19.4 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttattccCtttTT | 41_5 | -19.1 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttatTccCtttTT | 41_6 | -19.5 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttatTccCtTtTT | 41_7 | -19.8 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttattcCcttTTT | 41_8 | -19.7 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttattcCcTttTT | 41_9 | -19.4 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttattcCctTtTT | 41_10 | -19.2 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttatTcCctttTT | 41_11 | -19.2 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttatTcCctTtTT | 41_12 | -19.5 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttatTcCcTttTT | 41_13 | -19.8 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttattCcctTtTT | 41_14 | -19.3 | 103238 |
| 41 | CATAATTTATTCCCTTTTT | CAtaatttattCcCtttTT | 41_15 | -19.9 | 103238 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACAtaatttattcccTtTT | 42_1 | -19.7 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACAtaatttattccctTTT | 42_2 | -20.0 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACataatTtattcccTTTT | 42_3 | -19.9 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACataatttattccCtTTT | 42_4 | -19.5 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACataatttattccCTtTT | 42_5 | -19.8 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACaTaatttattccCttTT | 42_6 | -19.5 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACAtaatttattccCttTT | 42_7 | -20.1 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACAtaatttattcCcttTT | 42_8 | -19.9 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACataatttattcCcTtTT | 42_9 | -19.0 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACataatttattcCctTTT | 42_10 | -19.3 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACaTaatttattcCcTtTT | 42_11 | -19.8 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACaTaatttattcCcttTT | 42_12 | -19.3 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACAtaatttattCccttTT | 42_13 | -20.0 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACataatttattCccTtTT | 42_14 | -19.0 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACaTaatttattCccTtTT | 42_15 | -19.9 | 103239 |
| 42 | ACATAATTTATTCCCTTTT | ACataatttattCcCttTT | 42_16 | -19.4 | 103239 |
| 43 | CACATAATTTATTCCCTTTT | CAcAtaatttattcccttTT | 43_1 | -20.0 | 103239 |
| 43 | CACATAATTTATTCCCTTTT | CAcataatTtattcccttTT | 43_2 | -20.3 | 103239 |
| 43 | CACATAATTTATTCCCTTTT | CAcAtaatTtattcccTtTT | 43_3 | -20.8 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CATaatttattccctTTT | 44_1 | -19.7 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttattccCtTTT | 44_2 | -18.9 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttattccCTtTT | 44_3 | -19.3 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttatTccCttTT | 44_4 | -18.4 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CATaatttattccCttTT | 44_5 | -19.8 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaATttattccCtTTT | 44_6 | -20.5 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttattcCctTTT | 44_7 | -18.7 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttattcCcTTTT | 44_8 | -19.7 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttatTcCcttTT | 44_9 | -18.2 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CATaatttattcCcttTT | 44_10 | -19.5 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttatTcCcTtTT | 44_11 | -18.8 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttatTcCctTTT | 44_12 | -19.1 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttattCcctTTT | 44_13 | -18.8 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttattCccTTTT | 44_14 | -19.8 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttatTCccttTT | 44_15 | -18.9 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttattCcCttTT | 44_16 | -18.8 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttattCcCtTTT | 44_17 | -19.7 | 103239 |
| 44 | CATAATTTATTCCCTTTT | CAtaatttattCcCTtTT | 44_18 | -20.0 | 103239 |
| 45 | TCACATAATTTATTCCCTTT | TCacAtaatttattccctTT | 45_1 | -20.0 | 103240 |
| 46 | CACATAATTTATTCCCTT | CAcAtaatttattccCTT | 46_1 | -19.8 | 103241 |
| 46 | CACATAATTTATTCCCTT | CAcaTaatttattcCcTT | 46_2 | -19.7 | 103241 |
| 46 | CACATAATTTATTCCCTT | CAcaTaatttattCccTT | 46_3 | -19.8 | 103241 |
| 46 | CACATAATTTATTCCCTT | CACataatttattcCcTT | 46_4 | -19.9 | 103241 |
| 46 | CACATAATTTATTCCCTT | CACataatttattCccTT | 46_5 | -20.0 | 103241 |
| 47 | TCACATAATTTATTCCCT | TCaCataatttattccCT | 47_1 | -19.5 | 103242 |
| 47 | TCACATAATTTATTCCCT | TCacataatttaTtccCT | 47_2 | -19.3 | 103242 |
| 47 | TCACATAATTTATTCCCT | TCacAtaatttattCcCT | 47_3 | -19.7 | 103242 |
| 47 | TCACATAATTTATTCCCT | TCacataatttattCcCT | 47_4 | -19.6 | 103242 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CTcAtactgcTctttcTA | 48_1 | -21.7 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CTCatactgctCtttcTA | 48_2 | -23.3 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCAtactgctCtttcTA | 48_3 | -22.9 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtttCTA | 48_4 | -23.1 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctctttcTA | 48_5 | -20.5 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactGctCtttcTA | 48_6 | -21.8 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCttTcTA | 48_7 | -21.8 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtttctA | 48_8 | -19.5 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtttcTA | 48_9 | -21.5 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCA tactgctCttU cTA | 48_10 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | C tCatactgctCtttcTA | 48_11 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | ctCatactgctCtttcTA | 48_12 | -20.9 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CTcatactgcTctttcTA | 48_13 | -21.7 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CTcAtactgctcTttcTA | 48_14 | -21.6 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CTcAtactgctctTtcTA | 48_15 | -21.4 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CTcAtactgctcttTcTA | 48_16 | -21.5 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtC atactgctCtttcTA | 48_17 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtcatactgctCtttcTA | 48_18 | -20.8 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctC tttcTA | 48_19 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCA tactgctCtttcTA | 48_20 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCaTactgctCtttcTA | 48_21 | -22.3 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatA ctgctCtttcTA | 48_22 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatActgctCtttcTA | 48_23 | -21.6 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactG ctCtttcTA | 48_24 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgC tCtttcTA | 48_25 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgcTCtttcTA | 48_26 | -22.7 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCTttcTA | 48_27 | -22.6 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtTtcTA | 48_28 | -21.8 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtttC TA | 48_29 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtttcTA | 48_30 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtttcTa | 48_31 | -20.4 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCA tactgctCtttC TA | 48_32 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtttCU A | 48_33 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCttU cTA | 48_34 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtU tcTA | 48_35 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCA tactgctCtU tcTA | 48_36 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCtUUC TA | 48_37 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCU ttcTA | 48_38 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCA tactgctCU ttcTA | 48_39 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCU tUC TA | 48_40 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCUU tC TA | 48_41 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgctCUUU cTA | 48_42 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgcU CtttcTA | 48_43 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCatactgCtCtttcTA | 48_44 | -22.6 | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCaU actgctCtttcTA | 48_45 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCaU actgctCtttC TA | 48_46 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCaU actgctCttU cTA | 48_47 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCaU actgctCtU tcTA | 48_48 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CtCaU actgctCU ttcTA | 48_49 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CU CA tactgctCtttcTA | 48_50 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CU CatactgctCtttC TA | 48_51 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CU CatactgctCtU tC TA | 48_52 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CU CatactgctCU ttcTA | 48_53 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CU CatactgctCU ttC TA | 48_54 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CU CatactgctCU tU cTA | 48_55 | NA | 151831 |
| 48 | CTCATACTGCTCTTTCTA | CU CatactgctCUU tcTA | 48_56 | NA | 151831 |
| 49 | TCATACTGCTCTTTCTA | TCatactgctcTttcTA | 49_1 | -19.4 | 151831 |
| 49 | TCATACTGCTCTTTCTA | TCAtactgctcTttcTA | 49_2 | -20.8 | 151831 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GATagtatcAaccCAT | 50_1 | -20.5 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatcAAccCAT | 50_2 | -19.4 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatcaAccCAT | 50_3 | -19.1 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GATagtatcAAcCcAT | 50_4 | -19.8 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GATagtatcAacCcAT | 50_5 | -19.2 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GATagtatcAACccAT | 50_6 | -20.3 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GATagtatcAaCccAT | 50_7 | -19.3 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatcAACcCAT | 50_8 | -20.6 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatcAaCcCAT | 50_9 | -19.6 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatcAACCcAT | 50_10 | -20.9 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatCAAcccAT | 50_11 | -19.5 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatCAaccCAT | 50_12 | -20.9 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatCaAccCAT | 50_13 | -19.8 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatCaaccCAT | 50_14 | -19.4 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatCAacCcAT | 50_15 | -19.6 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatCAACccAT | 50_16 | -20.7 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatCAaCccAT | 50_17 | -19.7 | 151949 |
| 50 | GATAGTATCAACCCAT | GAtagtatCaaCCcAT | 50_18 | -20.5 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtaTcAAccCAT | 51_1 | -20.7 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtaTcaAccCAT | 51_2 | -20.4 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatcAAccCAT | 51_3 | -20.2 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtaTcaaccCAT | 51_4 | -20.0 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtaTcAaccCAT | 51_5 | -20.1 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatcaAccCAT | 51_6 | -19.9 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGaTAgtatcaacCcAT | 51_7 | -20.7 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGAtagtatcaacCcAT | 51_8 | -19.9 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGAtagtatcaACccAT | 51_9 | -20.8 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatcAaCcCAT | 51_10 | -20.4 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatcAaCCcAT | 51_11 | -20.6 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtaTCAacccAT | 51_12 | -20.8 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatCAAcccAT | 51_13 | -20.3 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatCaAccCAT | 51_14 | -20.6 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatCaaccCAT | 51_15 | -20.2 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatCAacCcAT | 51_16 | -20.3 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtaTCaacCcAT | 51_17 | -20.0 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtaTCaACccAT | 51_18 | -20.9 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatCAaCccAT | 51_19 | -20.4 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtaTCaaCccAT | 51_20 | -20.1 | 151949 |
| 51 | TGATAGTATCAACCCAT | TGatagtatCaaCcCAT | 51_21 | -20.9 | 151949 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTgATgcttctaaATCA | 52_1 | -20.5 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTgatgcttcTaaATCA | 52_2 | -19.2 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGAtgcttctaaaTCA | 52_3 | -19.8 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGatgcttctaaATCA | 52_4 | -19.3 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTgATgcttctaaaTCA | 52_5 | -19.3 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGAtgcttctaaAtCA | 52_6 | -19.0 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGaTgcttctaaaTCA | 52_7 | -19.1 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTgaTgcttctaaATCA | 52_8 | -19.1 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGatgcttcTaaATCA | 52_9 | -20.2 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGaTgcttctaaATCA | 52_10 | -20.2 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGatgcttCtaaATCA | 52_11 | -20.3 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTgatgcttCTAaatCA | 52_12 | -19.7 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGatgcttCTaaatCA | 52_13 | -19.6 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGatgcttCtAaaTCA | 52_14 | -19.2 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTGatgcttCtaAaTCA | 52_15 | -19.5 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTgatgctTCtaAaTCA | 52_16 | -19.4 | 151990 |
| 52 | TTGATGCTTCTAAATCA | TTgatgcttCtaaATCA | 52_17 | -19.2 | 151990 |
其中無下劃線的大寫字母為 β-D-氧基 LNA 核苷，小寫字母v DNA 核苷，所有 LNA C是 5-甲基胞嘧啶，所有核苷間鍵結為硫代磷酸酯核苷間鍵結，並且帶下劃線的大寫字母為 2'-O-甲基 RNA 核苷。
醫藥上可接受之
鹽
在又一方面，本發明提供反義寡核苷酸或其結合體之醫藥上可接受之鹽，如醫藥上可接受之鈉鹽、銨鹽或鉀鹽。
製造方法
在又一方面，本發明提供用以製造本發明反義寡核苷酸之方法，該方法包含使核苷酸單元進行反應，藉此在反義寡核苷酸中形成包含共價連結的連續核苷酸單元。優選的是，該方法使用亞磷醯胺化學方法 (參閱例如 Caruthers 等人，1987 年，Methods in Enzymology vol. 154, 第 287-313 頁)。在又一實施例中，該方法進一步包含使連續核苷酸序列與一接合部分 (配體) 反應，以使結合體部分共價連附至反義寡核苷酸。在又一方面，提供一種用以製造本發明之組成物之方法，該方法包含將本發明之反義寡核苷酸或結合的反義寡核苷酸與醫藥上可接受之稀釋劑、溶劑、載體、鹽及/或佐劑混合。
醫藥
組成物
在又一方面，本發明提供醫藥組成物，其包含任一上述反義寡核苷酸及/或反義寡核苷酸結合體或其鹽以及醫藥上可接受之稀釋劑、載體、鹽及/或佐劑。醫藥上可接受之稀釋劑包括磷酸鹽緩衝生理鹽水 (PBS)，而醫藥上可接受之鹽包括但不限於鈉鹽及鉀鹽。在某些實施例中，醫藥上可接受之稀釋劑為無菌磷酸鹽緩衝生理鹽水或無菌碳酸鈉緩衝液。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸為醫藥上可接受之稀釋劑中的溶液形式，例如溶解在 PBS 或碳酸鈉緩衝液中。在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸或其醫藥上可接受之鹽為固體形式，如粉末 (如凍乾粉末)。在某些實施例中，反義寡核苷酸可以在溶液中預先配製，或者在某些實施例中，可以為乾粉形式 (例如凍乾粉)，其可以在給藥前溶解在醫藥上可接受之稀釋劑中。
適合的是，例如，反義寡核苷酸可以溶解在濃度為 0.1 ~ 100 mg/ml，如 1 ~ 10 mg/ml 醫藥上可接受之稀釋劑中。
在某些實施例中，本發明之寡核苷酸以 0.5 - 100 mg，如 1 mg - 50 mg 或 2 - 25 mg 之間的單位劑量配製。
在某些實施例中，反義寡核苷酸以 50 ~ 300 µM 的濃度用於醫藥上可接受之稀釋劑。
本發明之反義寡核苷酸或反義寡核苷酸結合體可與醫藥上可接受之有效或惰性物質混合，用以製備醫藥組成物或製劑。組成物及用以形成醫藥組成物製劑的方法取決於若干標準，包括但不限於，給藥途徑、疾病程度或要投予的劑量。
醫藥組成物，如溶液，可以藉由常規的滅菌技術進行滅菌，或者可以進行無菌過濾。如此製成的溶液可經包裝後直接使用，或經凍乾，使用前先將凍乾製劑與無菌水性載體結合再行給藥。製劑的 pH 通常為介於 3 和 11 之間，更佳的是介於 5 和 9 之間或是介於 6 和 8 之間，最佳的是介於 7 和 8 之間，例如 7 至 7.5。製成的固態組成物可分為單劑包裝，每劑中包含固定數量的上述作用劑，例如為藥錠或膠囊的密封包裝。也可將固態組成物裝入容器中，以利靈活調整用量，例如裝入便於局部施用乳霜或軟膏的擠壓管。
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸或反義寡核苷酸結合體為前驅藥。特別在反義寡核苷酸結合體方面，待前驅藥遞送至如目標細胞等作用位置之後，便將結合體部分自反義寡核苷酸上裂解。
應用
本發明之反義寡核苷酸可於例如診斷學、治療法及預防法等領域用作研究試劑。
在研究中，可以使用此種反義寡核苷酸來特定調節 Nav
1.7 或在某些方面 Nav
1.8 蛋白質在細胞 (例如體外
細胞培養) 及實驗動物中的合成，從而促進目標的功能分析，或評估以其做為治療介入目標的實用性。一般而言，目標調節藉由調降或抑制產生此蛋白質的 mRNA 而實現，從而預防蛋白質形成，或藉由對致使基因或 mRNA 產生此蛋白質的調節劑進行調降或抑制。
若在研究或診斷中採用本發明之反義寡核苷酸，則目標核酸可為 cDNA 或衍生自 DNA 或 RNA 的合成核酸。
本發明提供一種在體內
或體外
用以調節正在表現 SCN9A 的目標細胞中之 SCN9A 表現的方法，該方法包含向細胞投予有效量的本發明之反義寡核苷酸。
在某些實施例中，該目標細胞是哺乳動物細胞，特別是人類細胞。該目標細胞可為體外細胞培養或為哺乳動物組織中的體內細胞形成部分。在優選的實施例中，目標細胞存在於周邊神經系統中，如背根神經節。
在診斷學上，藉由北方墨點法、原位
雜交或類似技術，可以使用寡核苷酸偵測並定量細胞及組織內的 SCN9A 表現。
治療
應用
可向動物或人投予本發明之反義寡核苷酸或本發明之反義寡核苷酸結合體、鹽或醫藥組成物，以預防或治療疼痛，如慢性疼痛、神經性疼痛、炎性疼痛、自發性疼痛或傷害感受性疼痛。本發明之反義寡核苷酸或本發明之結合體、鹽或醫藥組成物可以用作局部鎮痛劑。
可以用本發明之反義寡核苷酸或本發明之反義寡核苷酸結合體、鹽或醫藥組成物治療的疼痛可以為周邊神經系統中的疼痛信號。與具有顯著的周邊組分的疼痛相關聯的適應症包括例如糖尿病神經病變、癌症、顱神經痛、皰疹後神經痛和術後神經痛。
使用本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體、醫藥組成物或鹽可以預防、治療或緩解的疼痛可以例如選自由與遺傳性紅斑肢痛症 (EIM) 相關聯的疼痛、陣發性極度疼痛疾患 (PEPD)、三叉神經痛、神經性疼痛、慢性疼痛、以及傷害感受性疼痛 (例如神經減壓)、神經性疼痛 (例如糖尿病神經病變)、內臟痛或混合性疼痛的一般治療所組成之群組。
本發明提供用於預防或治療如慢性疼痛、神經性疼痛、炎性疼痛、自發性疼痛或傷害感受性疼痛等疼痛的本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體、組成物或鹽。
本發明進一步涉及本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體或醫藥組成物在製造用以治療或預防如慢性疼痛、神經性疼痛、炎性疼痛、自發性疼痛或傷害感受性疼痛等疼痛的藥物中之用途。
本發明提供用作局部鎮痛劑的本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體、醫藥組成物或鹽。
本發明提供本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體、醫藥組成物或鹽在製造局部鎮痛劑中之用途。
本發明提供用於預防或治療與與遺傳性紅斑肢痛症 (EIM) 相關聯的疼痛、陣發性極度疼痛疾患 (PEPD)、三叉神經痛、神經性疼痛、慢性疼痛、以及傷害感受性疼痛 (例如神經減壓)、神經性疼痛 (例如糖尿病神經病變)、內臟痛或混合性疼痛的一般治療的本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體、醫藥組成物或鹽。
本發明進一步涉及本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體或醫藥組成物在製造用於治療或預防與遺傳性紅斑肢痛症 (EIM) 相關聯的疼痛、陣發性極度疼痛疾患 (PEPD)、三叉神經痛、神經性疼痛、慢性疼痛、以及傷害感受性疼痛 (例如神經減壓)、神經性疼痛 (例如糖尿病神經病變)、內臟痛或混合性疼痛的一般治療的藥物中之用途。
治療
方法
本發明提供用於治療或預防正在罹患或很可能罹患疼痛的受試者 (諸如人) 的疼痛之方法，該方法包含向正在罹患或易患疼痛 (如慢性疼痛、神經性疼痛、炎性疼痛、自發性疼痛或傷害感受性疼痛) 的受試者投予治療上或預防上有效量的本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體或醫藥組成物。
舉例而言，治療方法可以在正在罹患選自由糖尿病神經病變、癌症、顱神經痛、皰疹後神經痛和術後神經痛的適應症所組成之群組的受試者中進行。
本發明之方法可以用於治療和緩解疼痛，如與遺傳性紅斑肢痛症 (EIM) 相關聯的疼痛、陣發性極度疼痛疾患 (PEPD)、三叉神經痛、神經性疼痛、慢性疼痛、以及傷害感受性疼痛 (例如神經減壓)、神經性疼痛 (例如糖尿病神經病變)、內臟痛或混合性疼痛的一般治療。
本發明之方法優選地用於治療或預防由 Nav
1.7 介導的疼痛。
給藥
本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體或醫藥組成物可以藉由腸胃外給藥來投予。
在某些實施例中，給藥途徑是皮下或靜脈內的。
在在某些實施例中，給藥途徑選自由靜脈內、皮下、肌內、腦內、硬膜外、腦室內、眼內、鞘內給藥和經椎間孔給藥。
在某些有利的實施例中，給藥為透過鞘內給藥，或硬膜外給藥或經椎間孔給藥。
有利的是，鞘內投予本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體或醫藥組成物。
本發明亦提供本發明之反義寡核苷酸或其反義寡核苷結合體 (如本發明之醫藥鹽或組成物) 在製造用以預防或治療疼痛的藥物中之用途，其中藥物為用於鞘內給藥的劑型。
本發明亦提供如所述的本發明之反義寡核苷酸或反義寡核苷酸結合體在製造用以預防或治療疼痛的藥物中之用途，其中藥物為用於鞘內給藥的劑型。
本發明亦提供用作預防或治療疼痛的藥物的本發明之反義寡核苷酸或其反義寡核苷結合體 (如本發明之醫藥鹽或組成物)，其中藥物為用於鞘內給藥的劑型。
本發明亦供了用作預防或治療疼痛的藥物的本發明之反義寡核苷酸或反義寡核苷酸結合體，其中藥物為用於鞘內給藥的劑型。
組合療法
在某些實施例中，本發明之反義寡核苷酸、反義寡核苷酸結合體或醫藥組成物用以與另一治療劑進行組合治療。該治療劑可例如為用以照護上述疾病或疾患的標準品。在某些實施例中，本發明之化合物與小分子鎮痛劑組合使用，該小分子鎮痛劑可以與本發明之化合物或組成物同時地或獨立於本發明之化合物或組成物之給藥而投予。本發明之化合物與小分子鎮痛劑組合治療的一個優點為，小分子鎮痛劑具有快速開始緩解疼痛的藥效，通常作用時間短 (幾小時-幾天)，而本發明之化合物具有延遲發作之藥效 (通常幾天或甚至一週以上)，但作用時間長 (幾週至幾個月，例如 2 +、3 + 或 4 個月+)。
實例
實例
1
：在單一濃度下測試目標
SCN9A
的反義寡核苷酸在一個或多個
SK-N-AS
細胞株中的體外
功效
根據供應商的建議，SK-N-AS 細胞已存放在潮濕的培養箱中。表 4 中報告了廠商和推薦的培養條件。
表
4
| 細胞株 | 廠商 | 培養條件 | 種晶密度 ( 細胞 / 孔 ) | 寡核苷酸之前的孵育時間 ( 小時 ) | 具有寡核苷酸的孵育時間 ( 小時 ) |
| SK-N-AS (ECACC - 94092302) | 歐洲認證細胞培養物保藏中心 (ECACC) | 在主動蒸發孵育箱 (熱量 C10) 中，37°C、5% CO2 、相對濕度為 95% | 在 SK-N-AS 培養基中以 95 µL 接種的 9300 個細胞 | 24 | 72 |
對於測定，將細胞接種到培養基中的 96 多孔板中，並按表 4 所示進行孵育，然後加入溶解在 5 µL PBS 中的反義寡核苷酸。下表 6 給出了反義寡核苷酸之最終濃度。
加入反義寡核苷酸 72 小時後收穫細胞 (參閱表 4)。根據製造商的說明，使用 PureLink™ Pro 96 RNA 純化套組 (Thermo Fisher Scientific) 提取 RNA，並在50 µL 水中洗脫。隨後用不含 DNase/RNase 的水 (Gibco) 將 RNA 稀釋 10 倍，並加熱至 90°C 1 分鐘。
對於基因表現分析，在雙工設置中使用 qScript™ XLT 一步 RT-qPCR ToughMix®, Low ROX™ (Quantabio) 進行一步 RT-qPCR。表 5 核對了用於 qPCR 的引子測定，用於目標和內源性對照。
表
5
| 內源性對照測定 | 內源性對照廠商 | 內源性對照螢光團 | 目標測定 | 目標廠商 | 目標螢光團 |
| GUSB: Hs.PTv.27737538 | IDT (集成 DNA 技術) | HEX-ZEN | SCN9A：Hs.PT.58.20989243 | IDT | FAM-ZEN |
表 6 ：
相對的人 SCN9A mRNA 表現水平示出為對照 (PBS 處理的細胞) 的百分比
| CMP 識別號 | 對照 (µM) | NAV1.7 qPCR SP 探針 1 SK-N-AS: AP011352 | CMP 識別號 | 對照 (µM) | NAV1.7 qPCR SP 探針 1 SK-N-AS: AP011352 | CMP 識別號 | 對照 (µM) | NAV1.7 qPCR SP 探針 1 SK-N-AS: AP011352 2 |
| 28_1 | 0.1 | 94.1 | 33_17 | 0.1 | 67.2 | 39_96 | 0.031 | 93 |
| 28_1 | 0.4 | 55.2 | 33_17 | 0.4 | 23.6 | 39_96 | 0.1 | 88.3 |
| 29_1 | 0.031 | 81.7 | 33_2 | 0.031 | 87.9 | 39_96 | 0.4 | 58 |
| 29_1 | 0.1 | 48.9 | 33_2 | 0.1 | 56.1 | 39_97 | 0.031 | 99.8 |
| 29_1 | 0.4 | 17.6 | 33_2 | 0.4 | 20.4 | 39_97 | 0.1 | 72.2 |
| 29_10 | 0.031 | 90.2 | 33_3 | 0.031 | 85.1 | 39_97 | 0.4 | 45.1 |
| 29_10 | 0.1 | 48.8 | 33_3 | 0.1 | 59.2 | 39_98 | 0.031 | 100 |
| 29_10 | 0.4 | 16.9 | 33_3 | 0.4 | 20.9 | 39_98 | 0.1 | 82.7 |
| 29_100 | 0.031 | 88.4 | 33_4 | 0.031 | 87.3 | 39_98 | 0.4 | 48.2 |
| 29_100 | 0.1 | 65.6 | 33_4 | 0.1 | 64.5 | 39_99 | 0.031 | 93.6 |
| 29_100 | 0.4 | 29.4 | 33_4 | 0.4 | 21 | 39_99 | 0.1 | 73.6 |
| 29_101 | 0.031 | 90.1 | 33_5 | 0.031 | 89.1 | 39_99 | 0.4 | 32.6 |
| 29_101 | 0.1 | 61.2 | 33_5 | 0.1 | 67.6 | 40_1 | 0.031 | 101 |
| 29_101 | 0.4 | 27.7 | 33_5 | 0.4 | 21.7 | 40_1 | 0.1 | 94.9 |
| 29_102 | 0.031 | 86 | 33_6 | 0.031 | 90.8 | 40_1 | 0.4 | 90.3 |
| 29_102 | 0.1 | 62.6 | 33_6 | 0.1 | 73.7 | 40_2 | 0.031 | 101 |
| 29_102 | 0.4 | 25.8 | 33_6 | 0.4 | 25.3 | 40_2 | 0.1 | 83.2 |
| 29_103 | 0.031 | 94.3 | 33_7 | 0.031 | 90.1 | 40_2 | 0.4 | 58.1 |
| 29_103 | 0.1 | 76.8 | 33_7 | 0.1 | 82.3 | 40_3 | 0.031 | 103 |
| 29_103 | 0.4 | 43.5 | 33_7 | 0.4 | 38.3 | 40_3 | 0.1 | 102 |
| 29_104 | 0.031 | 88 | 33_8 | 0.031 | 93.1 | 40_3 | 0.4 | 81.9 |
| 29_104 | 0.1 | 77.5 | 33_8 | 0.1 | 69.5 | 40_4 | 0.031 | 92.6 |
| 29_104 | 0.4 | 54.5 | 33_8 | 0.4 | 29.2 | 40_4 | 0.1 | 88.1 |
| 29_105 | 0.031 | 90.3 | 33_9 | 0.031 | 85 | 40_4 | 0.4 | 62.1 |
| 29_105 | 0.1 | 72 | 33_9 | 0.1 | 58.2 | 40_5 | 0.031 | 99.2 |
| 29_105 | 0.4 | 32.3 | 33_9 | 0.4 | 17.2 | 40_5 | 0.1 | 86.7 |
| 29_106 | 0.031 | 97.9 | 34_1 | 0.031 | 88.4 | 40_5 | 0.4 | 71.6 |
| 29_106 | 0.1 | 80.3 | 34_1 | 0.1 | 63.4 | 40_6 | 0.031 | 97.5 |
| 29_106 | 0.4 | 58.4 | 34_1 | 0.4 | 28.9 | 40_6 | 0.1 | 91 |
| 29_107 | 0.031 | 90.1 | 34_10 | 0.031 | 94.5 | 40_6 | 0.4 | 68 |
| 29_107 | 0.1 | 80 | 34_10 | 0.1 | 65.7 | 41_1 | 0.031 | 98.7 |
| 29_107 | 0.4 | 30.8 | 34_10 | 0.4 | 29.4 | 41_1 | 0.1 | 100 |
| 29_108 | 0.031 | 94.4 | 34_11 | 0.031 | 95 | 41_1 | 0.4 | 69.5 |
| 29_108 | 0.1 | 73.5 | 34_11 | 0.1 | 73.4 | 41_10 | 0.031 | 101 |
| 29_108 | 0.4 | 34.7 | 34_11 | 0.4 | 37.2 | 41_10 | 0.1 | 89 |
| 29_109 | 0.031 | 87.6 | 34_12 | 0.031 | 90 | 41_10 | 0.4 | 66.3 |
| 29_109 | 0.1 | 60.2 | 34_12 | 0.1 | 69.9 | 41_11 | 0.031 | 93.7 |
| 29_109 | 0.4 | 27.5 | 34_12 | 0.4 | 29 | 41_11 | 0.1 | 79 |
| 29_11 | 0.031 | 85.1 | 34_13 | 0.031 | 90.9 | 41_11 | 0.4 | 59.3 |
| 29_11 | 0.1 | 56.6 | 34_13 | 0.1 | 70.8 | 41_12 | 0.031 | 99.8 |
| 29_11 | 0.4 | 21.4 | 34_13 | 0.4 | 29.8 | 41_12 | 0.1 | 98.4 |
| 29_110 | 0.031 | 91.3 | 34_14 | 0.031 | 98.6 | 41_12 | 0.4 | 82.6 |
| 29_110 | 0.1 | 65.9 | 34_14 | 0.1 | 74.8 | 41_13 | 0.031 | 101 |
| 29_110 | 0.4 | 43.5 | 34_14 | 0.4 | 52 | 41_13 | 0.1 | 79.4 |
| 29_111 | 0.031 | 102 | 34_15 | 0.031 | 97.4 | 41_13 | 0.4 | 62.6 |
| 29_111 | 0.1 | 81.7 | 34_15 | 0.1 | 76.7 | 41_14 | 0.031 | 96.9 |
| 29_111 | 0.4 | 51 | 34_15 | 0.4 | 34.5 | 41_14 | 0.1 | 87.8 |
| 29_112 | 0.031 | 90.2 | 34_16 | 0.031 | 91.6 | 41_14 | 0.4 | 66.9 |
| 29_112 | 0.1 | 61.1 | 34_16 | 0.1 | 75.6 | 41_15 | 0.031 | 104 |
| 29_112 | 0.4 | 23.3 | 34_16 | 0.4 | 41.4 | 41_15 | 0.1 | 86.1 |
| 29_113 | 0.031 | 82.6 | 34_17 | 0.031 | 103 | 41_15 | 0.4 | 62.6 |
| 29_113 | 0.1 | 74 | 34_17 | 0.1 | 74.8 | 41_2 | 0.031 | 91.6 |
| 29_113 | 0.4 | 17.6 | 34_17 | 0.4 | 38.7 | 41_2 | 0.1 | 75.1 |
| 29_114 | 0.031 | 84.7 | 34_2 | 0.031 | 83.2 | 41_2 | 0.4 | 38.9 |
| 29_114 | 0.1 | 58.7 | 34_2 | 0.1 | 65.2 | 41_3 | 0.031 | 102 |
| 29_114 | 0.4 | 22.5 | 34_2 | 0.4 | 25.4 | 41_3 | 0.1 | 96.5 |
| 29_115 | 0.031 | 91.9 | 34_3 | 0.031 | 90.3 | 41_3 | 0.4 | 70.7 |
| 29_115 | 0.1 | 74.8 | 34_3 | 0.1 | 65.7 | 41_4 | 0.031 | 98.1 |
| 29_115 | 0.4 | 32.1 | 34_3 | 0.4 | 38.7 | 41_4 | 0.1 | 84.6 |
| 29_116 | 0.031 | 87.9 | 34_4 | 0.031 | 86.5 | 41_4 | 0.4 | 62.9 |
| 29_116 | 0.1 | 57.1 | 34_4 | 0.1 | 57.3 | 41_5 | 0.031 | 99.3 |
| 29_116 | 0.4 | 25.8 | 34_4 | 0.4 | 18 | 41_5 | 0.1 | 96.4 |
| 29_117 | 0.031 | 91.5 | 34_5 | 0.031 | 85.2 | 41_5 | 0.4 | 97.2 |
| 29_117 | 0.1 | 65.3 | 34_5 | 0.1 | 63.5 | 41_6 | 0.031 | 103 |
| 29_117 | 0.4 | 31.9 | 34_5 | 0.4 | 25.4 | 41_6 | 0.1 | 83.9 |
| 29_118 | 0.031 | 91.1 | 34_6 | 0.031 | 93.6 | 41_6 | 0.4 | 73.7 |
| 29_118 | 0.1 | 71 | 34_6 | 0.1 | 66.1 | 41_7 | 0.031 | 100 |
| 29_118 | 0.4 | 39.6 | 34_6 | 0.4 | 40.1 | 41_7 | 0.1 | 92.7 |
| 29_119 | 0.031 | 89.1 | 34_7 | 0.031 | 102 | 41_7 | 0.4 | 62 |
| 29_119 | 0.1 | 74.3 | 34_7 | 0.1 | 91.5 | 41_8 | 0.031 | 94.3 |
| 29_119 | 0.4 | 43.7 | 34_7 | 0.4 | 64.3 | 41_8 | 0.1 | 96.5 |
| 29_12 | 0.031 | 75 | 34_8 | 0.031 | 97.1 | 41_8 | 0.4 | 67.9 |
| 29_12 | 0.1 | 45.2 | 34_8 | 0.1 | 65.5 | 41_9 | 0.031 | 96.9 |
| 29_12 | 0.4 | 17.2 | 34_8 | 0.4 | 34.7 | 41_9 | 0.1 | 80.4 |
| 29_120 | 0.031 | 86 | 34_9 | 0.031 | 91.5 | 41_9 | 0.4 | 47.3 |
| 29_120 | 0.1 | 69.8 | 34_9 | 0.1 | 66.3 | 42_1 | 0.031 | 99.3 |
| 29_120 | 0.4 | 36.4 | 34_9 | 0.4 | 27.8 | 42_1 | 0.1 | 93.4 |
| 29_121 | 0.031 | 89.9 | 35_1 | 0.031 | 90.5 | 42_1 | 0.4 | 78 |
| 29_121 | 0.1 | 66.3 | 35_1 | 0.1 | 72.5 | 42_10 | 0.031 | 104 |
| 29_121 | 0.4 | 26.7 | 35_1 | 0.4 | 44.3 | 42_10 | 0.1 | 94.7 |
| 29_122 | 0.031 | 90.7 | 36_1 | 0.031 | 94.5 | 42_10 | 0.4 | 74.3 |
| 29_122 | 0.1 | 78.5 | 36_1 | 0.1 | 87.6 | 42_11 | 0.031 | 94.4 |
| 29_122 | 0.4 | 49.1 | 36_1 | 0.4 | 55.6 | 42_11 | 0.1 | 74.9 |
| 29_123 | 0.031 | 92.7 | 36_2 | 0.031 | 94.9 | 42_11 | 0.4 | 39.5 |
| 29_123 | 0.1 | 85 | 36_2 | 0.1 | 89.3 | 42_12 | 0.031 | 103 |
| 29_123 | 0.4 | 56.1 | 36_2 | 0.4 | 62.4 | 42_12 | 0.1 | 79.9 |
| 29_124 | 0.031 | 91.7 | 36_3 | 0.031 | 96.5 | 42_12 | 0.4 | 46.9 |
| 29_124 | 0.1 | 75.4 | 36_3 | 0.1 | 84.8 | 42_13 | 0.031 | 110 |
| 29_124 | 0.4 | 51.2 | 36_3 | 0.4 | 53.1 | 42_13 | 0.1 | 87.7 |
| 29_125 | 0.031 | 99 | 36_4 | 0.031 | 93.7 | 42_13 | 0.4 | 55 |
| 29_125 | 0.1 | 91.7 | 36_4 | 0.1 | 78.9 | 42_14 | 0.031 | 99.8 |
| 29_125 | 0.4 | 79.3 | 36_4 | 0.4 | 53.3 | 42_14 | 0.1 | 91.8 |
| 29_126 | 0.031 | 95.5 | 36_5 | 0.031 | 92.8 | 42_14 | 0.4 | 65.6 |
| 29_126 | 0.1 | 94.6 | 36_5 | 0.1 | 84.5 | 42_15 | 0.031 | 95.9 |
| 29_126 | 0.4 | 90.4 | 36_5 | 0.4 | 76.3 | 42_15 | 0.1 | 78.9 |
| 29_127 | 0.031 | 108 | 37_1 | 0.031 | 100 | 42_15 | 0.4 | 48.3 |
| 29_127 | 0.1 | 102 | 37_1 | 0.1 | 71.2 | 42_16 | 0.031 | 99.1 |
| 29_127 | 0.4 | 58.9 | 37_1 | 0.4 | 33.4 | 42_16 | 0.1 | 85 |
| 29_128 | 0.031 | 93.3 | 37_2 | 0.031 | 99.2 | 42_16 | 0.4 | 66.1 |
| 29_128 | 0.1 | 80.6 | 37_2 | 0.1 | 87 | 42_2 | 0.031 | 99.2 |
| 29_128 | 0.4 | 52.9 | 37_2 | 0.4 | 48.7 | 42_2 | 0.1 | 92.4 |
| 29_129 | 0.031 | 95.2 | 37_3 | 0.031 | 85.1 | 42_2 | 0.4 | 78.6 |
| 29_129 | 0.1 | 78.8 | 37_3 | 0.1 | 63.6 | 42_3 | 0.031 | 90.3 |
| 29_129 | 0.4 | 51.7 | 37_3 | 0.4 | 32.7 | 42_3 | 0.1 | 70.6 |
| 29_13 | 0.031 | 81.4 | 37_4 | 0.031 | 93.6 | 42_3 | 0.4 | 36.9 |
| 29_13 | 0.1 | 55.5 | 37_4 | 0.1 | 71.4 | 42_4 | 0.031 | 99.8 |
| 29_13 | 0.4 | 29.4 | 37_4 | 0.4 | 44 | 42_4 | 0.1 | 83.3 |
| 29_130 | 0.031 | 94.5 | 37_5 | 0.031 | 91.8 | 42_4 | 0.4 | 60.8 |
| 29_130 | 0.1 | 93.8 | 37_5 | 0.1 | 64.4 | 42_5 | 0.031 | 100 |
| 29_130 | 0.4 | 84.2 | 37_5 | 0.4 | 30.9 | 42_5 | 0.1 | 83.4 |
| 29_131 | 0.031 | 90.2 | 38_1 | 0.031 | 99.4 | 42_5 | 0.4 | 61.1 |
| 29_131 | 0.1 | 74.2 | 38_1 | 0.1 | 69.5 | 42_6 | 0.031 | 92.6 |
| 29_131 | 0.4 | 48.3 | 38_1 | 0.4 | 45.6 | 42_6 | 0.1 | 77.4 |
| 29_132 | 0.031 | 94.7 | 39_1 | 0.031 | 94.2 | 42_6 | 0.4 | 42.7 |
| 29_132 | 0.1 | 84.3 | 39_1 | 0.1 | 60.6 | 42_7 | 0.031 | 102 |
| 29_132 | 0.4 | 59.8 | 39_1 | 0.4 | 34.1 | 42_7 | 0.1 | 94.7 |
| 29_133 | 0.031 | 102 | 39_10 | 0.031 | 85.2 | 42_7 | 0.4 | 80.1 |
| 29_133 | 0.1 | 79.9 | 39_10 | 0.1 | 59.1 | 42_8 | 0.031 | 103 |
| 29_133 | 0.4 | 57.3 | 39_10 | 0.4 | 25.8 | 42_8 | 0.1 | 92.2 |
| 29_134 | 0.031 | 93 | 39_100 | 0.031 | 88.8 | 42_8 | 0.4 | 72.4 |
| 29_134 | 0.1 | 90.1 | 39_100 | 0.1 | 62.2 | 42_9 | 0.031 | 98.5 |
| 29_134 | 0.4 | 83.6 | 39_100 | 0.4 | 34.6 | 42_9 | 0.1 | 83.6 |
| 29_14 | 0.031 | 82.9 | 39_101 | 0.031 | 90.4 | 42_9 | 0.4 | 60.4 |
| 29_14 | 0.1 | 47.3 | 39_101 | 0.1 | 71.7 | 43_1 | 0.031 | 91.9 |
| 29_14 | 0.4 | 14.3 | 39_101 | 0.4 | 44.2 | 43_1 | 0.1 | 88.3 |
| 29_15 | 0.031 | 79.3 | 39_102 | 0.031 | 92 | 43_1 | 0.4 | 63.9 |
| 29_15 | 0.1 | 52.7 | 39_102 | 0.1 | 68.1 | 43_2 | 0.031 | 99.2 |
| 29_15 | 0.4 | 18.6 | 39_102 | 0.4 | 42.5 | 43_2 | 0.1 | 85.8 |
| 29_16 | 0.031 | 78 | 39_103 | 0.031 | 94.4 | 43_2 | 0.4 | 60.6 |
| 29_16 | 0.1 | 52 | 39_103 | 0.1 | 76.5 | 43_3 | 0.031 | 95.8 |
| 29_16 | 0.4 | 22.2 | 39_103 | 0.4 | 45.5 | 43_3 | 0.1 | 65.3 |
| 29_17 | 0.031 | 77.7 | 39_104 | 0.031 | 90.1 | 43_3 | 0.4 | 35.3 |
| 29_17 | 0.1 | 46.9 | 39_104 | 0.1 | 77 | 44_1 | 0.031 | 94.6 |
| 29_17 | 0.4 | 16.1 | 39_104 | 0.4 | 51.5 | 44_1 | 0.1 | 93.3 |
| 29_18 | 0.031 | 78.3 | 39_105 | 0.031 | 92.5 | 44_1 | 0.4 | 60.4 |
| 29_18 | 0.1 | 44.7 | 39_105 | 0.1 | 76 | 44_10 | 0.031 | 92.2 |
| 29_18 | 0.4 | 14.1 | 39_105 | 0.4 | 54.7 | 44_10 | 0.1 | 80.4 |
| 29_19 | 0.031 | 89.6 | 39_106 | 0.031 | 102 | 44_10 | 0.4 | 53.5 |
| 29_19 | 0.1 | 57.1 | 39_106 | 0.1 | 80.1 | 44_11 | 0.031 | 98 |
| 29_19 | 0.4 | 25.8 | 39_106 | 0.4 | 48 | 44_11 | 0.1 | 82.6 |
| 29_2 | 0.031 | 87.4 | 39_107 | 0.031 | 90.7 | 44_11 | 0.4 | 72.8 |
| 29_2 | 0.1 | 49 | 39_107 | 0.1 | 80.4 | 44_12 | 0.031 | 99 |
| 29_2 | 0.4 | 15.9 | 39_107 | 0.4 | 56.1 | 44_12 | 0.1 | 87.2 |
| 29_20 | 0.031 | 84.9 | 39_108 | 0.031 | 100 | 44_12 | 0.4 | 67.3 |
| 29_20 | 0.1 | 58.2 | 39_108 | 0.1 | 75 | 44_13 | 0.031 | 88.6 |
| 29_20 | 0.4 | 23.1 | 39_108 | 0.4 | 53.4 | 44_13 | 0.1 | 85.1 |
| 29_21 | 0.031 | 86.7 | 39_109 | 0.031 | 101 | 44_13 | 0.4 | 61.6 |
| 29_21 | 0.1 | 57.4 | 39_109 | 0.1 | 95.1 | 44_14 | 0.031 | 99.3 |
| 29_21 | 0.4 | 25.5 | 39_109 | 0.4 | 100 | 44_14 | 0.1 | 85 |
| 29_22 | 0.031 | 89.6 | 39_11 | 0.031 | 87.4 | 44_14 | 0.4 | 54.2 |
| 29_22 | 0.1 | 50.7 | 39_11 | 0.1 | 61.7 | 44_15 | 0.031 | 95.3 |
| 29_22 | 0.4 | 19.8 | 39_11 | 0.4 | 30.4 | 44_15 | 0.1 | 89.4 |
| 29_23 | 0.031 | 85.3 | 39_110 | 0.031 | 83.8 | 44_15 | 0.4 | 67.5 |
| 29_23 | 0.1 | 53 | 39_110 | 0.1 | 79.3 | 44_16 | 0.031 | 94.7 |
| 29_23 | 0.4 | 20.8 | 39_110 | 0.4 | 48.3 | 44_16 | 0.1 | 93.7 |
| 29_24 | 0.031 | 92.5 | 39_111 | 0.031 | 91.9 | 44_16 | 0.4 | 59.4 |
| 29_24 | 0.1 | 56.8 | 39_111 | 0.1 | 79.8 | 44_17 | 0.031 | 102 |
| 29_24 | 0.4 | 20.5 | 39_111 | 0.4 | 50.4 | 44_17 | 0.1 | 92.6 |
| 29_25 | 0.031 | 78.2 | 39_112 | 0.031 | 95.6 | 44_17 | 0.4 | 67.6 |
| 29_25 | 0.1 | 41.3 | 39_112 | 0.1 | 78.1 | 44_18 | 0.031 | 97.9 |
| 29_25 | 0.4 | 10.6 | 39_112 | 0.4 | 48.4 | 44_18 | 0.1 | 84.7 |
| 29_26 | 0.031 | 84.2 | 39_113 | 0.031 | 90.7 | 44_18 | 0.4 | 59.7 |
| 29_26 | 0.1 | 53.2 | 39_113 | 0.1 | 82.1 | 44_2 | 0.031 | 103 |
| 29_26 | 0.4 | 14.1 | 39_113 | 0.4 | 59.4 | 44_2 | 0.1 | 93.6 |
| 29_27 | 0.031 | 90.6 | 39_114 | 0.031 | 92.5 | 44_2 | 0.4 | 67.4 |
| 29_27 | 0.1 | 56.1 | 39_114 | 0.1 | 72.3 | 44_3 | 0.031 | 101 |
| 29_27 | 0.4 | 24.1 | 39_114 | 0.4 | 53.9 | 44_3 | 0.1 | 90.5 |
| 29_28 | 0.031 | 84.9 | 39_115 | 0.031 | 98.7 | 44_3 | 0.4 | 66.9 |
| 29_28 | 0.1 | 49.5 | 39_115 | 0.1 | 90.4 | 44_4 | 0.031 | 104 |
| 29_28 | 0.4 | 19.4 | 39_115 | 0.4 | 75.4 | 44_4 | 0.1 | 91.6 |
| 29_29 | 0.031 | 84 | 39_116 | 0.031 | 88.5 | 44_4 | 0.4 | 68.4 |
| 29_29 | 0.1 | 60.5 | 39_116 | 0.1 | 64.5 | 44_5 | 0.031 | 98.1 |
| 29_29 | 0.4 | 23.4 | 39_116 | 0.4 | 29.3 | 44_5 | 0.1 | 85.7 |
| 29_3 | 0.031 | 82.3 | 39_117 | 0.031 | 87.5 | 44_5 | 0.4 | 59.1 |
| 29_3 | 0.1 | 45.9 | 39_117 | 0.1 | 71.2 | 44_6 | 0.031 | 88.7 |
| 29_3 | 0.4 | 16.5 | 39_117 | 0.4 | 33.1 | 44_6 | 0.1 | 80.7 |
| 29_30 | 0.031 | 85.1 | 39_118 | 0.031 | 100 | 44_6 | 0.4 | 37.4 |
| 29_30 | 0.1 | 38.4 | 39_118 | 0.1 | 84.4 | 44_7 | 0.031 | 102 |
| 29_30 | 0.4 | 17.7 | 39_118 | 0.4 | 39.8 | 44_7 | 0.1 | 85.7 |
| 29_31 | 0.031 | 83.5 | 39_119 | 0.031 | 81.6 | 44_7 | 0.4 | 65.7 |
| 29_31 | 0.1 | 46 | 39_119 | 0.1 | 66 | 44_8 | 0.031 | 95.4 |
| 29_31 | 0.4 | 13.9 | 39_119 | 0.4 | 29.9 | 44_8 | 0.1 | 82.1 |
| 29_32 | 0.031 | 82.6 | 39_12 | 0.031 | 92.7 | 44_8 | 0.4 | 46.1 |
| 29_32 | 0.1 | 43.4 | 39_12 | 0.1 | 60.9 | 44_9 | 0.031 | 106 |
| 29_32 | 0.4 | 19.5 | 39_12 | 0.4 | 32.4 | 44_9 | 0.1 | 89.5 |
| 29_33 | 0.031 | 74.8 | 39_120 | 0.031 | 82.4 | 44_9 | 0.4 | 62.3 |
| 29_33 | 0.1 | 39.3 | 39_120 | 0.1 | 66.4 | 45_1 | 0.031 | 94 |
| 29_33 | 0.4 | 10.4 | 39_120 | 0.4 | 28.7 | 45_1 | 0.1 | 73.6 |
| 29_34 | 0.031 | 89.6 | 39_121 | 0.031 | 91.1 | 45_1 | 0.4 | 45.7 |
| 29_34 | 0.1 | 54.9 | 39_121 | 0.1 | 68.8 | 46_1 | 0.031 | 99.4 |
| 29_34 | 0.4 | 21.2 | 39_121 | 0.4 | 43 | 46_1 | 0.1 | 72 |
| 29_35 | 0.031 | 81.6 | 39_122 | 0.031 | 86.2 | 46_1 | 0.4 | 48.7 |
| 29_35 | 0.1 | 52 | 39_122 | 0.1 | 70.7 | 46_2 | 0.031 | 92.9 |
| 29_35 | 0.4 | 13.5 | 39_122 | 0.4 | 45.3 | 46_2 | 0.1 | 71.6 |
| 29_36 | 0.031 | 84.3 | 39_123 | 0.031 | 91.3 | 46_2 | 0.4 | 40.1 |
| 29_36 | 0.1 | 52.5 | 39_123 | 0.1 | 77.3 | 46_3 | 0.031 | 100 |
| 29_36 | 0.4 | 20.7 | 39_123 | 0.4 | 43 | 46_3 | 0.1 | 78.7 |
| 29_37 | 0.031 | 87.1 | 39_124 | 0.031 | 97.2 | 46_3 | 0.4 | 49.1 |
| 29_37 | 0.1 | 57.2 | 39_124 | 0.1 | 74.5 | 46_4 | 0.031 | 95.4 |
| 29_37 | 0.4 | 24.1 | 39_124 | 0.4 | 51.1 | 46_4 | 0.1 | 69.3 |
| 29_38 | 0.031 | 84.1 | 39_125 | 0.031 | 97.7 | 46_4 | 0.4 | 45.5 |
| 29_38 | 0.1 | 50.6 | 39_125 | 0.1 | 93.1 | 46_5 | 0.031 | 95.3 |
| 29_38 | 0.4 | 17.6 | 39_125 | 0.4 | 62.6 | 46_5 | 0.1 | 81.5 |
| 29_39 | 0.031 | 89.4 | 39_126 | 0.031 | 84.4 | 46_5 | 0.4 | 52.1 |
| 29_39 | 0.1 | 53.8 | 39_126 | 0.1 | 65.2 | 47_1 | 0.031 | 80 |
| 29_39 | 0.4 | 22.1 | 39_126 | 0.4 | 31.1 | 47_1 | 0.1 | 60.2 |
| 29_4 | 0.031 | 80.2 | 39_127 | 0.031 | 89.9 | 47_1 | 0.4 | 29.2 |
| 29_4 | 0.1 | 43 | 39_127 | 0.1 | 69 | 47_2 | 0.031 | 96.2 |
| 29_4 | 0.4 | 12.2 | 39_127 | 0.4 | 29.8 | 47_2 | 0.1 | 84.1 |
| 29_40 | 0.031 | 77.3 | 39_128 | 0.031 | 88.8 | 47_2 | 0.4 | 61.6 |
| 29_40 | 0.1 | 50 | 39_128 | 0.1 | 70.2 | 47_3 | 0.031 | 103 |
| 29_40 | 0.4 | 14.8 | 39_128 | 0.4 | 37.5 | 47_3 | 0.1 | 65.7 |
| 29_41 | 0.031 | 90.8 | 39_129 | 0.031 | 95.3 | 47_3 | 0.4 | 31.2 |
| 29_41 | 0.1 | 55.2 | 39_129 | 0.1 | 72.4 | 47_4 | 0.031 | 89.2 |
| 29_41 | 0.4 | 22.7 | 39_129 | 0.4 | 45.1 | 47_4 | 0.1 | 74.7 |
| 29_42 | 0.031 | 91.1 | 39_13 | 0.031 | 91.6 | 47_4 | 0.4 | 42.3 |
| 29_42 | 0.1 | 63.5 | 39_13 | 0.1 | 67.4 | 48_1 | 0.031 | 92.8 |
| 29_42 | 0.4 | 24.2 | 39_13 | 0.4 | 35.2 | 48_1 | 0.1 | 72.1 |
| 29_43 | 0.031 | 86.4 | 39_130 | 0.031 | 93.6 | 48_1 | 0.4 | 42 |
| 29_43 | 0.1 | 60.5 | 39_130 | 0.1 | 86.2 | 48_10 | 0.031 | 98.2 |
| 29_43 | 0.4 | 19.8 | 39_130 | 0.4 | 57.5 | 48_10 | 0.1 | 66.2 |
| 29_44 | 0.031 | 93.8 | 39_131 | 0.031 | 89.9 | 48_10 | 0.4 | 44.8 |
| 29_44 | 0.1 | 88.4 | 39_131 | 0.1 | 70.1 | 48_11 | 0.031 | 94.5 |
| 29_44 | 0.4 | 46.9 | 39_131 | 0.4 | 34.7 | 48_11 | 0.1 | 79.2 |
| 29_45 | 0.031 | 91.6 | 39_132 | 0.031 | 90.3 | 48_11 | 0.4 | 54.6 |
| 29_45 | 0.1 | 77.1 | 39_132 | 0.1 | 72.6 | 48_12 | 0.031 | 97.5 |
| 29_45 | 0.4 | 36.7 | 39_132 | 0.4 | 34.8 | 48_12 | 0.1 | 92.9 |
| 29_46 | 0.031 | 83.8 | 39_133 | 0.031 | 94.8 | 48_12 | 0.4 | 73.8 |
| 29_46 | 0.1 | 65.4 | 39_133 | 0.1 | 74 | 48_13 | 0.031 | 96.5 |
| 29_46 | 0.4 | 33.6 | 39_133 | 0.4 | 48.3 | 48_13 | 0.1 | 85.9 |
| 29_47 | 0.031 | 86.6 | 39_134 | 0.031 | 94 | 48_13 | 0.4 | 58.7 |
| 29_47 | 0.1 | 69.7 | 39_134 | 0.1 | 64.7 | 48_14 | 0.031 | 95 |
| 29_47 | 0.4 | 41.9 | 39_134 | 0.4 | 30.2 | 48_14 | 0.1 | 71.5 |
| 29_48 | 0.031 | 105 | 39_135 | 0.031 | 89 | 48_14 | 0.4 | 48.7 |
| 29_48 | 0.1 | 75.2 | 39_135 | 0.1 | 69.2 | 48_15 | 0.031 | 95.8 |
| 29_48 | 0.4 | 42.3 | 39_135 | 0.4 | 39.2 | 48_15 | 0.1 | 78.5 |
| 29_49 | 0.031 | 96.6 | 39_136 | 0.031 | 96.9 | 48_15 | 0.4 | 40.9 |
| 29_49 | 0.1 | 67.5 | 39_136 | 0.1 | 70.7 | 48_16 | 0.031 | 99.5 |
| 29_49 | 0.4 | 45.2 | 39_136 | 0.4 | 33 | 48_16 | 0.1 | 100 |
| 29_5 | 0.031 | 89.4 | 39_137 | 0.031 | 97 | 48_16 | 0.4 | 101 |
| 29_5 | 0.1 | 55.6 | 39_137 | 0.1 | 77.6 | 48_17 | 0.031 | 98.8 |
| 29_5 | 0.4 | 17.7 | 39_137 | 0.4 | 44.7 | 48_17 | 0.1 | 91.3 |
| 29_50 | 0.031 | 97 | 39_138 | 0.031 | 91.1 | 48_17 | 0.4 | 71.7 |
| 29_50 | 0.1 | 72.1 | 39_138 | 0.1 | 70.1 | 48_18 | 0.031 | 99.7 |
| 29_50 | 0.4 | 44.8 | 39_138 | 0.4 | 44.1 | 48_18 | 0.1 | 87.9 |
| 29_51 | 0.031 | 89.6 | 39_139 | 0.031 | 93.4 | 48_18 | 0.4 | 81.5 |
| 29_51 | 0.1 | 73.7 | 39_139 | 0.1 | 75.4 | 48_19 | 0.031 | 93.8 |
| 29_51 | 0.4 | 43.3 | 39_139 | 0.4 | 44.2 | 48_19 | 0.1 | 75 |
| 29_52 | 0.031 | 89.8 | 39_14 | 0.031 | 93 | 48_19 | 0.4 | 41 |
| 29_52 | 0.1 | 80.3 | 39_14 | 0.1 | 61.5 | 48_2 | 0.031 | 84.6 |
| 29_52 | 0.4 | 53.5 | 39_14 | 0.4 | 28.8 | 48_2 | 0.1 | 59.7 |
| 29_53 | 0.031 | 95.9 | 39_140 | 0.031 | 97.1 | 48_2 | 0.4 | 31.4 |
| 29_53 | 0.1 | 85.3 | 39_140 | 0.1 | 75.4 | 48_20 | 0.031 | 93.2 |
| 29_53 | 0.4 | 49.2 | 39_140 | 0.4 | 49.8 | 48_20 | 0.1 | 70.7 |
| 29_54 | 0.031 | 94.2 | 39_141 | 0.031 | 87.9 | 48_20 | 0.4 | 46.4 |
| 29_54 | 0.1 | 81.4 | 39_141 | 0.1 | 66.2 | 48_21 | 0.031 | 95.9 |
| 29_54 | 0.4 | 55.4 | 39_141 | 0.4 | 32.7 | 48_21 | 0.1 | 75.4 |
| 29_55 | 0.031 | 102 | 39_142 | 0.031 | 89.1 | 48_21 | 0.4 | 51.6 |
| 29_55 | 0.1 | 85.4 | 39_142 | 0.1 | 73.1 | 48_22 | 0.031 | 96.1 |
| 29_55 | 0.4 | 57.1 | 39_142 | 0.4 | 44.8 | 48_22 | 0.1 | 69.7 |
| 29_56 | 0.031 | 89.9 | 39_143 | 0.031 | 91 | 48_22 | 0.4 | 47.9 |
| 29_56 | 0.1 | 76.7 | 39_143 | 0.1 | 79.3 | 48_23 | 0.031 | 104 |
| 29_56 | 0.4 | 41.6 | 39_143 | 0.4 | 42.6 | 48_23 | 0.1 | 80.5 |
| 29_57 | 0.031 | 89.3 | 39_144 | 0.031 | 95.3 | 48_23 | 0.4 | 56.3 |
| 29_57 | 0.1 | 86 | 39_144 | 0.1 | 78.7 | 48_24 | 0.031 | 89.5 |
| 29_57 | 0.4 | 72.6 | 39_144 | 0.4 | 62.1 | 48_24 | 0.1 | 74.8 |
| 29_58 | 0.031 | 96.6 | 39_145 | 0.031 | 97.1 | 48_24 | 0.4 | 44.4 |
| 29_58 | 0.1 | 94.1 | 39_145 | 0.1 | 81 | 48_25 | 0.031 | 99.3 |
| 29_58 | 0.4 | 77.2 | 39_145 | 0.4 | 60.8 | 48_25 | 0.1 | 75.8 |
| 29_59 | 0.031 | 95.5 | 39_146 | 0.031 | 91.2 | 48_25 | 0.4 | 54.3 |
| 29_59 | 0.1 | 93.1 | 39_146 | 0.1 | 62.1 | 48_26 | 0.031 | 87.8 |
| 29_59 | 0.4 | 52.7 | 39_146 | 0.4 | 31.9 | 48_26 | 0.1 | 78.6 |
| 29_6 | 0.031 | 80.8 | 39_147 | 0.031 | 91.6 | 48_26 | 0.4 | 38.9 |
| 29_6 | 0.1 | 45 | 39_147 | 0.1 | 66.1 | 48_27 | 0.031 | 92.2 |
| 29_6 | 0.4 | 12 | 39_147 | 0.4 | 29.6 | 48_27 | 0.1 | 67.4 |
| 29_60 | 0.031 | 101 | 39_148 | 0.031 | 89.5 | 48_27 | 0.4 | 38.5 |
| 29_60 | 0.1 | 76.1 | 39_148 | 0.1 | 69.7 | 48_28 | 0.031 | 94.4 |
| 29_60 | 0.4 | 57.4 | 39_148 | 0.4 | 36.9 | 48_28 | 0.1 | 66.1 |
| 29_61 | 0.031 | 95.6 | 39_149 | 0.031 | 101 | 48_28 | 0.4 | 43.6 |
| 29_61 | 0.1 | 85.6 | 39_149 | 0.1 | 72.5 | 48_29 | 0.031 | 92.9 |
| 29_61 | 0.4 | 64.2 | 39_149 | 0.4 | 37.6 | 48_29 | 0.1 | 70.1 |
| 29_62 | 0.031 | 98.9 | 39_15 | 0.031 | 80.7 | 48_29 | 0.4 | 43.7 |
| 29_62 | 0.1 | 77.5 | 39_15 | 0.1 | 65.2 | 48_3 | 0.031 | 90.2 |
| 29_62 | 0.4 | 46.5 | 39_15 | 0.4 | 30.4 | 48_3 | 0.1 | 67.4 |
| 29_63 | 0.031 | 94.6 | 39_150 | 0.031 | 101 | 48_3 | 0.4 | 38.3 |
| 29_63 | 0.1 | 81.6 | 39_150 | 0.1 | 75.5 | 48_30 | 0.031 | 97.4 |
| 29_63 | 0.4 | 58.8 | 39_150 | 0.4 | 45.4 | 48_30 | 0.1 | 74.6 |
| 29_64 | 0.031 | 96.3 | 39_151 | 0.031 | 87.7 | 48_30 | 0.4 | 42.3 |
| 29_64 | 0.1 | 68 | 39_151 | 0.1 | 71.5 | 48_31 | 0.031 | 94.4 |
| 29_64 | 0.4 | 40.9 | 39_151 | 0.4 | 35.9 | 48_31 | 0.1 | 74.4 |
| 29_65 | 0.031 | 85.4 | 39_152 | 0.031 | 94 | 48_31 | 0.4 | 43.7 |
| 29_65 | 0.1 | 62.2 | 39_152 | 0.1 | 60.9 | 48_32 | 0.031 | 93.7 |
| 29_65 | 0.4 | 23.1 | 39_152 | 0.4 | 38.4 | 48_32 | 0.1 | 70.3 |
| 29_66 | 0.031 | 89.2 | 39_16 | 0.031 | 87.4 | 48_32 | 0.4 | 47.8 |
| 29_66 | 0.1 | 83.2 | 39_16 | 0.1 | 61.5 | 48_33 | 0.031 | 94.1 |
| 29_66 | 0.4 | 45.9 | 39_16 | 0.4 | 31.5 | 48_33 | 0.1 | 76.9 |
| 29_67 | 0.031 | 90 | 39_17 | 0.031 | 88.4 | 48_33 | 0.4 | 50.5 |
| 29_67 | 0.1 | 75.3 | 39_17 | 0.1 | 60.1 | 48_34 | 0.031 | 100 |
| 29_67 | 0.4 | 36.7 | 39_17 | 0.4 | 26.4 | 48_34 | 0.1 | 105 |
| 29_68 | 0.031 | 87.4 | 39_18 | 0.031 | 88.6 | 48_34 | 0.4 | 103 |
| 29_68 | 0.1 | 58.8 | 39_18 | 0.1 | 54.5 | 48_35 | 0.031 | 91.3 |
| 29_68 | 0.4 | 24 | 39_18 | 0.4 | 25.9 | 48_35 | 0.1 | 73.7 |
| 29_69 | 0.031 | 91.5 | 39_19 | 0.031 | 87.9 | 48_35 | 0.4 | 45.6 |
| 29_69 | 0.1 | 74.4 | 39_19 | 0.1 | 54.5 | 48_36 | 0.031 | 96.3 |
| 29_69 | 0.4 | 39.5 | 39_19 | 0.4 | 24.1 | 48_36 | 0.1 | 73.5 |
| 29_7 | 0.031 | 83.1 | 39_2 | 0.031 | 86 | 48_36 | 0.4 | 54.7 |
| 29_7 | 0.1 | 51.8 | 39_2 | 0.1 | 58.9 | 48_37 | 0.031 | 95.8 |
| 29_7 | 0.4 | 14.8 | 39_2 | 0.4 | 35 | 48_37 | 0.1 | 76.5 |
| 29_70 | 0.031 | 102 | 39_20 | 0.031 | 86.3 | 48_37 | 0.4 | 51.9 |
| 29_70 | 0.1 | 62.1 | 39_20 | 0.1 | 57.6 | 48_38 | 0.031 | 81.9 |
| 29_70 | 0.4 | 27.7 | 39_20 | 0.4 | 28.8 | 48_38 | 0.1 | 69.5 |
| 29_71 | 0.031 | 90.7 | 39_21 | 0.031 | 102 | 48_38 | 0.4 | 37.7 |
| 29_71 | 0.1 | 62.2 | 39_21 | 0.1 | 78.8 | 48_39 | 0.031 | 92.3 |
| 29_71 | 0.4 | 31.2 | 39_21 | 0.4 | 59.6 | 48_39 | 0.1 | 72.5 |
| 29_72 | 0.031 | 94.6 | 39_22 | 0.031 | 95.8 | 48_39 | 0.4 | 49.7 |
| 29_72 | 0.1 | 62.2 | 39_22 | 0.1 | 88.8 | 48_4 | 0.031 | 84.4 |
| 29_72 | 0.4 | 31.9 | 39_22 | 0.4 | 58 | 48_4 | 0.1 | 65.7 |
| 29_73 | 0.031 | 84.6 | 39_23 | 0.031 | 102 | 48_4 | 0.4 | 38.8 |
| 29_73 | 0.1 | 62.2 | 39_23 | 0.1 | 78.4 | 48_40 | 0.031 | 91.7 |
| 29_73 | 0.4 | 28.4 | 39_23 | 0.4 | 54.7 | 48_40 | 0.1 | 76.7 |
| 29_74 | 0.031 | 83.4 | 39_24 | 0.031 | 102 | 48_40 | 0.4 | 51.7 |
| 29_74 | 0.1 | 60.3 | 39_24 | 0.1 | 82.4 | 48_41 | 0.031 | 90.5 |
| 29_74 | 0.4 | 21.3 | 39_24 | 0.4 | 59.8 | 48_41 | 0.1 | 76 |
| 29_75 | 0.031 | 82.6 | 39_25 | 0.031 | 99.1 | 48_41 | 0.4 | 50.9 |
| 29_75 | 0.1 | 63.2 | 39_25 | 0.1 | 84.4 | 48_42 | 0.031 | 88.5 |
| 29_75 | 0.4 | 36 | 39_25 | 0.4 | 54.8 | 48_42 | 0.1 | 70.8 |
| 29_76 | 0.031 | 93.9 | 39_26 | 0.031 | 95.8 | 48_42 | 0.4 | 46.9 |
| 29_76 | 0.1 | 68.5 | 39_26 | 0.1 | 79.7 | 48_43 | 0.031 | 95.5 |
| 29_76 | 0.4 | 34.4 | 39_26 | 0.4 | 59.6 | 48_43 | 0.1 | 75 |
| 29_77 | 0.031 | 103 | 39_27 | 0.031 | 93.2 | 48_43 | 0.4 | 44.8 |
| 29_77 | 0.1 | 84.5 | 39_27 | 0.1 | 91.1 | 48_44 | 0.031 | 93.9 |
| 29_77 | 0.4 | 61.1 | 39_27 | 0.4 | 78.4 | 48_44 | 0.1 | 78.1 |
| 29_78 | 0.031 | 95.3 | 39_28 | 0.031 | 104 | 48_44 | 0.4 | 59.4 |
| 29_78 | 0.1 | 63.7 | 39_28 | 0.1 | 90.9 | 48_45 | 0.031 | 99.2 |
| 29_78 | 0.4 | 31.6 | 39_28 | 0.4 | 65.9 | 48_45 | 0.1 | 82.6 |
| 29_79 | 0.031 | 92.8 | 39_29 | 0.031 | 98.6 | 48_45 | 0.4 | 53.7 |
| 29_79 | 0.1 | 71.6 | 39_29 | 0.1 | 87.9 | 48_46 | 0.031 | 93.5 |
| 29_79 | 0.4 | 31.7 | 39_29 | 0.4 | 73.7 | 48_46 | 0.1 | 84.2 |
| 29_8 | 0.031 | 82.3 | 39_3 | 0.031 | 96.6 | 48_46 | 0.4 | 64.7 |
| 29_8 | 0.1 | 52.3 | 39_3 | 0.1 | 61.5 | 48_47 | 0.031 | 93.5 |
| 29_8 | 0.4 | 19.5 | 39_3 | 0.4 | 27.8 | 48_47 | 0.1 | 83.6 |
| 29_80 | 0.031 | 95.7 | 39_30 | 0.031 | 104 | 48_47 | 0.4 | 68.1 |
| 29_80 | 0.1 | 71.9 | 39_30 | 0.1 | 97.1 | 48_48 | 0.031 | 96.6 |
| 29_80 | 0.4 | 30.4 | 39_30 | 0.4 | 76.1 | 48_48 | 0.1 | 90.4 |
| 29_81 | 0.031 | 96.9 | 39_31 | 0.031 | 95.7 | 48_48 | 0.4 | 78.1 |
| 29_81 | 0.1 | 88.7 | 39_31 | 0.1 | 93.2 | 48_49 | 0.031 | 96.9 |
| 29_81 | 0.4 | 51 | 39_31 | 0.4 | 75.7 | 48_49 | 0.1 | 88.6 |
| 29_82 | 0.031 | 83.7 | 39_32 | 0.031 | 95.1 | 48_49 | 0.4 | 66 |
| 29_82 | 0.1 | 59 | 39_32 | 0.1 | 91.9 | 48_5 | 0.031 | 93.5 |
| 29_82 | 0.4 | 16.2 | 39_32 | 0.4 | 68.3 | 48_5 | 0.1 | 72.6 |
| 29_83 | 0.031 | 89.9 | 39_33 | 0.031 | 91.5 | 48_5 | 0.4 | 41 |
| 29_83 | 0.1 | 62.2 | 39_33 | 0.1 | 86 | 48_50 | 0.031 | 89 |
| 29_83 | 0.4 | 21.7 | 39_33 | 0.4 | 49.2 | 48_50 | 0.1 | 79.7 |
| 29_84 | 0.031 | 83.2 | 39_34 | 0.031 | 94.4 | 48_50 | 0.4 | 39.1 |
| 29_84 | 0.1 | 48.3 | 39_34 | 0.1 | 83.4 | 48_51 | 0.031 | 87.5 |
| 29_84 | 0.4 | 11.3 | 39_34 | 0.4 | 69.5 | 48_51 | 0.1 | 69.8 |
| 29_85 | 0.031 | 98 | 39_35 | 0.031 | 91.9 | 48_51 | 0.4 | 36.8 |
| 29_85 | 0.1 | 76.2 | 39_35 | 0.1 | 87.4 | 48_52 | 0.031 | 91.8 |
| 29_85 | 0.4 | 45.8 | 39_35 | 0.4 | 65.8 | 48_52 | 0.1 | 78.5 |
| 29_86 | 0.031 | 100 | 39_36 | 0.031 | 95.6 | 48_52 | 0.4 | 52.7 |
| 29_86 | 0.1 | 84.2 | 39_36 | 0.1 | 92.1 | 48_53 | 0.031 | 94.5 |
| 29_86 | 0.4 | 58.4 | 39_36 | 0.4 | 75.8 | 48_53 | 0.1 | 69.6 |
| 29_87 | 0.031 | 95.3 | 39_37 | 0.031 | 91.1 | 48_53 | 0.4 | 43.6 |
| 29_87 | 0.1 | 88.1 | 39_37 | 0.1 | 89.7 | 48_54 | 0.031 | 89 |
| 29_87 | 0.4 | 54.5 | 39_37 | 0.4 | 55.8 | 48_54 | 0.1 | 69.1 |
| 29_88 | 0.031 | 93.7 | 39_38 | 0.031 | 101 | 48_54 | 0.4 | 49.3 |
| 29_88 | 0.1 | 74.6 | 39_38 | 0.1 | 83.4 | 48_55 | 0.031 | 93.1 |
| 29_88 | 0.4 | 36.7 | 39_38 | 0.4 | 76.1 | 48_55 | 0.1 | 72.6 |
| 29_89 | 0.031 | 88 | 39_39 | 0.031 | 98.2 | 48_55 | 0.4 | 51.6 |
| 29_89 | 0.1 | 71.9 | 39_39 | 0.1 | 95 | 48_56 | 0.031 | 90.1 |
| 29_89 | 0.4 | 41.6 | 39_39 | 0.4 | 67.7 | 48_56 | 0.1 | 81.2 |
| 29_9 | 0.031 | 82.7 | 39_4 | 0.031 | 84 | 48_56 | 0.4 | 46.2 |
| 29_9 | 0.1 | 41.2 | 39_4 | 0.1 | 63.2 | 48_6 | 0.031 | 79.2 |
| 29_9 | 0.4 | 11.8 | 39_4 | 0.4 | 30.4 | 48_6 | 0.1 | 69.3 |
| 29_90 | 0.031 | 82.2 | 39_40 | 0.031 | 93.6 | 48_6 | 0.4 | 42.1 |
| 29_90 | 0.1 | 72.3 | 39_40 | 0.1 | 80.9 | 48_7 | 0.031 | 92.6 |
| 29_90 | 0.4 | 44.9 | 39_40 | 0.4 | 61.6 | 48_7 | 0.1 | 67.9 |
| 29_91 | 0.031 | 96.3 | 39_41 | 0.031 | 90.3 | 48_7 | 0.4 | 48.7 |
| 29_91 | 0.1 | 84.2 | 39_41 | 0.1 | 71.4 | 48_8 | 0.031 | 85.6 |
| 29_91 | 0.4 | 40.9 | 39_41 | 0.4 | 46.8 | 48_8 | 0.1 | 66.5 |
| 29_92 | 0.031 | 97.2 | 39_42 | 0.031 | 88.6 | 48_8 | 0.4 | 38.4 |
| 29_92 | 0.1 | 79.1 | 39_42 | 0.1 | 62.6 | 48_9 | 0.031 | 91.6 |
| 29_92 | 0.4 | 48 | 39_42 | 0.4 | 43.5 | 48_9 | 0.1 | 70.6 |
| 29_93 | 0.031 | 96 | 39_43 | 0.031 | 89.1 | 48_9 | 0.4 | 40 |
| 29_93 | 0.1 | 87.5 | 39_43 | 0.1 | 79.3 | 49_1 | 0.031 | 100 |
| 29_93 | 0.4 | 60.8 | 39_43 | 0.4 | 45.6 | 49_1 | 0.1 | 85.7 |
| 29_94 | 0.031 | 99 | 39_44 | 0.031 | 88 | 49_1 | 0.4 | 64.9 |
| 29_94 | 0.1 | 86.3 | 39_44 | 0.1 | 69.3 | 49_2 | 0.031 | 98.1 |
| 29_94 | 0.4 | 63.5 | 39_44 | 0.4 | 45.5 | 49_2 | 0.1 | 82.4 |
| 29_95 | 0.031 | 91.7 | 39_45 | 0.031 | 92 | 49_2 | 0.4 | 60.8 |
| 29_95 | 0.1 | 71.6 | 39_45 | 0.1 | 63.9 | 50_1 | 0.031 | 104 |
| 29_95 | 0.4 | 38.3 | 39_45 | 0.4 | 43 | 50_1 | 0.1 | 91.6 |
| 29_96 | 0.031 | 93.7 | 39_46 | 0.031 | 95.7 | 50_1 | 0.4 | 66.8 |
| 29_96 | 0.1 | 59 | 39_46 | 0.1 | 83.4 | 50_10 | 0.031 | 98.6 |
| 29_96 | 0.4 | 24.7 | 39_46 | 0.4 | 49.5 | 50_10 | 0.1 | 75.3 |
| 29_97 | 0.031 | 90.8 | 39_47 | 0.031 | 95.6 | 50_10 | 0.4 | 46.8 |
| 29_97 | 0.1 | 62.5 | 39_47 | 0.1 | 88.4 | 50_11 | 0.031 | 101 |
| 29_97 | 0.4 | 26.7 | 39_47 | 0.4 | 61.3 | 50_11 | 0.1 | 95.7 |
| 29_98 | 0.031 | 94.4 | 39_48 | 0.031 | 106 | 50_11 | 0.4 | 99.1 |
| 29_98 | 0.1 | 66.2 | 39_48 | 0.1 | 97.7 | 50_12 | 0.031 | 98.1 |
| 29_98 | 0.4 | 30.8 | 39_48 | 0.4 | 80.6 | 50_12 | 0.1 | 89.8 |
| 29_99 | 0.031 | 78.4 | 39_49 | 0.031 | 92.1 | 50_12 | 0.4 | 75.4 |
| 29_99 | 0.1 | 62 | 39_49 | 0.1 | 80.1 | 50_13 | 0.031 | 105 |
| 29_99 | 0.4 | 26.9 | 39_49 | 0.4 | 52.9 | 50_13 | 0.1 | 86.9 |
| 30_1 | 0.031 | 94.8 | 39_5 | 0.031 | 89 | 50_13 | 0.4 | 80.9 |
| 30_1 | 0.1 | 92.8 | 39_5 | 0.1 | 62.2 | 50_14 | 0.031 | 102 |
| 30_1 | 0.4 | 78.8 | 39_5 | 0.4 | 37.5 | 50_14 | 0.1 | 92.7 |
| 30_10 | 0.031 | 86 | 39_50 | 0.031 | 97.9 | 50_14 | 0.4 | 73.5 |
| 30_10 | 0.1 | 72.8 | 39_50 | 0.1 | 78.8 | 50_15 | 0.031 | 102 |
| 30_10 | 0.4 | 33.9 | 39_50 | 0.4 | 67.7 | 50_15 | 0.1 | 100 |
| 30_11 | 0.031 | 91.7 | 39_51 | 0.031 | 98.5 | 50_15 | 0.4 | 91.4 |
| 30_11 | 0.1 | 74.7 | 39_51 | 0.1 | 97.4 | 50_16 | 0.031 | 92.3 |
| 30_11 | 0.4 | 30.5 | 39_51 | 0.4 | 62.7 | 50_16 | 0.1 | 91.5 |
| 30_12 | 0.031 | 101 | 39_52 | 0.031 | 89.3 | 50_16 | 0.4 | 95.3 |
| 30_12 | 0.1 | 81.8 | 39_52 | 0.1 | 88.7 | 50_17 | 0.031 | 99.2 |
| 30_12 | 0.4 | 47.5 | 39_52 | 0.4 | 62.3 | 50_17 | 0.1 | 95.4 |
| 30_13 | 0.031 | 96.8 | 39_53 | 0.031 | 100 | 50_17 | 0.4 | 96.4 |
| 30_13 | 0.1 | 80.5 | 39_53 | 0.1 | 84.9 | 50_18 | 0.031 | 99.2 |
| 30_13 | 0.4 | 38.2 | 39_53 | 0.4 | 69.3 | 50_18 | 0.1 | 88.6 |
| 30_14 | 0.031 | 96.1 | 39_54 | 0.031 | 102 | 50_18 | 0.4 | 76.8 |
| 30_14 | 0.1 | 78.2 | 39_54 | 0.1 | 81 | 50_2 | 0.031 | 99.2 |
| 30_14 | 0.4 | 39 | 39_54 | 0.4 | 53.9 | 50_2 | 0.1 | 93.3 |
| 30_15 | 0.031 | 99.1 | 39_55 | 0.031 | 94.4 | 50_2 | 0.4 | 87.1 |
| 30_15 | 0.1 | 83.3 | 39_55 | 0.1 | 83.6 | 50_3 | 0.031 | 94 |
| 30_15 | 0.4 | 58.7 | 39_55 | 0.4 | 60.8 | 50_3 | 0.1 | 85.7 |
| 30_16 | 0.031 | 95.6 | 39_56 | 0.031 | 92.8 | 50_3 | 0.4 | 68.2 |
| 30_16 | 0.1 | 69.9 | 39_56 | 0.1 | 81.6 | 50_4 | 0.031 | 88.4 |
| 30_16 | 0.4 | 27.3 | 39_56 | 0.4 | 67.2 | 50_4 | 0.1 | 86.9 |
| 30_17 | 0.031 | 97.9 | 39_57 | 0.031 | 95.1 | 50_4 | 0.4 | 65.1 |
| 30_17 | 0.1 | 86.9 | 39_57 | 0.1 | 85.9 | 50_5 | 0.031 | 98.8 |
| 30_17 | 0.4 | 58.6 | 39_57 | 0.4 | 57.4 | 50_5 | 0.1 | 85.1 |
| 30_18 | 0.031 | 92 | 39_58 | 0.031 | 99.5 | 50_5 | 0.4 | 54.7 |
| 30_18 | 0.1 | 71.4 | 39_58 | 0.1 | 96 | 50_6 | 0.031 | 101 |
| 30_18 | 0.4 | 30.7 | 39_58 | 0.4 | 71 | 50_6 | 0.1 | 88.3 |
| 30_19 | 0.031 | 92.5 | 39_59 | 0.031 | 89.7 | 50_6 | 0.4 | 65.1 |
| 30_19 | 0.1 | 71 | 39_59 | 0.1 | 86.8 | 50_7 | 0.031 | 102 |
| 30_19 | 0.4 | 36.9 | 39_59 | 0.4 | 65.2 | 50_7 | 0.1 | 96.7 |
| 30_2 | 0.031 | 102 | 39_6 | 0.031 | 89.2 | 50_7 | 0.4 | 78.3 |
| 30_2 | 0.1 | 100 | 39_6 | 0.1 | 56 | 50_8 | 0.031 | 106 |
| 30_2 | 0.4 | 95.2 | 39_6 | 0.4 | 29.1 | 50_8 | 0.1 | 101 |
| 30_20 | 0.031 | 98.2 | 39_60 | 0.031 | 104 | 50_8 | 0.4 | 88.1 |
| 30_20 | 0.1 | 68.6 | 39_60 | 0.1 | 95.8 | 50_9 | 0.031 | 99.9 |
| 30_20 | 0.4 | 25.4 | 39_60 | 0.4 | 64.4 | 50_9 | 0.1 | 90.8 |
| 30_3 | 0.031 | 104 | 39_61 | 0.031 | 92.5 | 50_9 | 0.4 | 89.1 |
| 30_3 | 0.1 | 104 | 39_61 | 0.1 | 77.4 | 51_1 | 0.031 | 105 |
| 30_3 | 0.4 | 92.8 | 39_61 | 0.4 | 54.5 | 51_1 | 0.1 | 98 |
| 30_4 | 0.031 | 111 | 39_62 | 0.031 | 96.9 | 51_1 | 0.4 | 108 |
| 30_4 | 0.1 | 103 | 39_62 | 0.1 | 89.5 | 51_10 | 0.031 | 95.8 |
| 30_4 | 0.4 | 96.6 | 39_62 | 0.4 | 70.7 | 51_10 | 0.1 | 94.1 |
| 30_5 | 0.031 | 98.8 | 39_63 | 0.031 | 97.5 | 51_10 | 0.4 | 90.3 |
| 30_5 | 0.1 | 98.4 | 39_63 | 0.1 | 85.2 | 51_11 | 0.031 | 102 |
| 30_5 | 0.4 | 94.2 | 39_63 | 0.4 | 61.9 | 51_11 | 0.1 | 95.3 |
| 30_6 | 0.031 | 106 | 39_64 | 0.031 | 94.8 | 51_11 | 0.4 | 89.3 |
| 30_6 | 0.1 | 104 | 39_64 | 0.1 | 93.2 | 51_12 | 0.031 | 98.2 |
| 30_6 | 0.4 | 104 | 39_64 | 0.4 | 77.9 | 51_12 | 0.1 | 100 |
| 30_7 | 0.031 | 102 | 39_65 | 0.031 | 92.7 | 51_12 | 0.4 | 94.9 |
| 30_7 | 0.1 | 101 | 39_65 | 0.1 | 78.9 | 51_13 | 0.031 | 107 |
| 30_7 | 0.4 | 101 | 39_65 | 0.4 | 53.3 | 51_13 | 0.1 | 107 |
| 30_8 | 0.031 | 89 | 39_66 | 0.031 | 93.2 | 51_13 | 0.4 | 113 |
| 30_8 | 0.1 | 64.4 | 39_66 | 0.1 | 91.7 | 51_14 | 0.031 | 95.8 |
| 30_8 | 0.4 | 31.5 | 39_66 | 0.4 | 71.7 | 51_14 | 0.1 | 88.7 |
| 30_9 | 0.031 | 90.1 | 39_67 | 0.031 | 95.6 | 51_14 | 0.4 | 80.7 |
| 30_9 | 0.1 | 81.3 | 39_67 | 0.1 | 90.5 | 51_15 | 0.031 | 101 |
| 30_9 | 0.4 | 41.9 | 39_67 | 0.4 | 75.2 | 51_15 | 0.1 | 91.9 |
| 31_1 | 0.031 | 87.5 | 39_68 | 0.031 | 88.3 | 51_15 | 0.4 | 88.6 |
| 31_1 | 0.1 | 56.9 | 39_68 | 0.1 | 93.2 | 51_16 | 0.031 | 101 |
| 31_1 | 0.4 | 20.8 | 39_68 | 0.4 | 58.8 | 51_16 | 0.1 | 104 |
| 31_10 | 0.031 | 102 | 39_69 | 0.031 | 104 | 51_16 | 0.4 | 83.3 |
| 31_10 | 0.1 | 64.2 | 39_69 | 0.1 | 105 | 51_17 | 0.031 | 96.7 |
| 31_10 | 0.4 | 28.5 | 39_69 | 0.4 | 83.6 | 51_17 | 0.1 | 101 |
| 31_11 | 0.031 | 84.9 | 39_7 | 0.031 | 82.4 | 51_17 | 0.4 | 97.9 |
| 31_11 | 0.1 | 63.1 | 39_7 | 0.1 | 54.4 | 51_18 | 0.031 | 103 |
| 31_11 | 0.4 | 23.9 | 39_7 | 0.4 | 22.9 | 51_18 | 0.1 | 97.8 |
| 31_12 | 0.031 | 93.6 | 39_70 | 0.031 | 98.3 | 51_18 | 0.4 | 89.1 |
| 31_12 | 0.1 | 70.7 | 39_70 | 0.1 | 90.1 | 51_19 | 0.031 | 99.7 |
| 31_12 | 0.4 | 36.3 | 39_70 | 0.4 | 71.8 | 51_19 | 0.1 | 104 |
| 31_13 | 0.031 | 88.2 | 39_71 | 0.031 | 104 | 51_19 | 0.4 | 87.6 |
| 31_13 | 0.1 | 56 | 39_71 | 0.1 | 97.6 | 51_2 | 0.031 | 98.6 |
| 31_13 | 0.4 | 24 | 39_71 | 0.4 | 84.9 | 51_2 | 0.1 | 101 |
| 31_14 | 0.031 | 93.6 | 39_72 | 0.031 | 96.9 | 51_2 | 0.4 | 92.2 |
| 31_14 | 0.1 | 58.4 | 39_72 | 0.1 | 105 | 51_20 | 0.031 | 101 |
| 31_14 | 0.4 | 24.8 | 39_72 | 0.4 | 83.8 | 51_20 | 0.1 | 103 |
| 31_15 | 0.031 | 90.7 | 39_73 | 0.031 | 85.7 | 51_20 | 0.4 | 103 |
| 31_15 | 0.1 | 62.4 | 39_73 | 0.1 | 74.9 | 51_21 | 0.031 | 102 |
| 31_15 | 0.4 | 31.4 | 39_73 | 0.4 | 38.3 | 51_21 | 0.1 | 92.7 |
| 31_16 | 0.031 | 93.9 | 39_74 | 0.031 | 93.3 | 51_21 | 0.4 | 79.8 |
| 31_16 | 0.1 | 61.4 | 39_74 | 0.1 | 82.1 | 51_3 | 0.031 | 99 |
| 31_16 | 0.4 | 31.2 | 39_74 | 0.4 | 57.6 | 51_3 | 0.1 | 99.7 |
| 31_17 | 0.031 | 84.7 | 39_75 | 0.031 | 95.8 | 51_3 | 0.4 | 83.6 |
| 31_17 | 0.1 | 62.7 | 39_75 | 0.1 | 63.8 | 51_4 | 0.031 | 111 |
| 31_17 | 0.4 | 30 | 39_75 | 0.4 | 29 | 51_4 | 0.1 | 92.3 |
| 31_18 | 0.031 | 82.2 | 39_76 | 0.031 | 97.2 | 51_4 | 0.4 | 86.7 |
| 31_18 | 0.1 | 65.1 | 39_76 | 0.1 | 78.5 | 51_5 | 0.031 | 102 |
| 31_18 | 0.4 | 26.2 | 39_76 | 0.4 | 51.8 | 51_5 | 0.1 | 95.4 |
| 31_2 | 0.031 | 90.3 | 39_77 | 0.031 | 95.1 | 51_5 | 0.4 | 104 |
| 31_2 | 0.1 | 53.5 | 39_77 | 0.1 | 84.1 | 51_6 | 0.031 | 95.9 |
| 31_2 | 0.4 | 20 | 39_77 | 0.4 | 61.9 | 51_6 | 0.1 | 89.2 |
| 31_3 | 0.031 | 87.1 | 39_78 | 0.031 | 97.1 | 51_6 | 0.4 | 74.1 |
| 31_3 | 0.1 | 44.3 | 39_78 | 0.1 | 77.5 | 51_7 | 0.031 | 94.1 |
| 31_3 | 0.4 | 12.3 | 39_78 | 0.4 | 47.9 | 51_7 | 0.1 | 76.4 |
| 31_4 | 0.031 | 89.1 | 39_79 | 0.031 | 94.7 | 51_7 | 0.4 | 47.6 |
| 31_4 | 0.1 | 54.3 | 39_79 | 0.1 | 78.5 | 51_8 | 0.031 | 99.5 |
| 31_4 | 0.4 | 17.7 | 39_79 | 0.4 | 45.1 | 51_8 | 0.1 | 83.9 |
| 31_5 | 0.031 | 86.2 | 39_8 | 0.031 | 89 | 51_8 | 0.4 | 60.5 |
| 31_5 | 0.1 | 52.5 | 39_8 | 0.1 | 60.6 | 51_9 | 0.031 | 104 |
| 31_5 | 0.4 | 31.6 | 39_8 | 0.4 | 30.8 | 51_9 | 0.1 | 84.7 |
| 31_6 | 0.031 | 82.6 | 39_80 | 0.031 | 102 | 51_9 | 0.4 | 70 |
| 31_6 | 0.1 | 59.3 | 39_80 | 0.1 | 92.5 | 52_1 | 0.031 | 105 |
| 31_6 | 0.4 | 19.1 | 39_80 | 0.4 | 64.3 | 52_1 | 0.1 | 94.6 |
| 31_7 | 0.031 | 89.5 | 39_81 | 0.031 | 101 | 52_1 | 0.4 | 110 |
| 31_7 | 0.1 | 55.1 | 39_81 | 0.1 | 83.4 | 52_10 | 0.031 | 98.4 |
| 31_7 | 0.4 | 21.8 | 39_81 | 0.4 | 62.3 | 52_10 | 0.1 | 97.5 |
| 31_8 | 0.031 | 80.8 | 39_82 | 0.031 | 103 | 52_10 | 0.4 | 101 |
| 31_8 | 0.1 | 61.8 | 39_82 | 0.1 | 77.5 | 52_11 | 0.031 | 103 |
| 31_8 | 0.4 | 25.2 | 39_82 | 0.4 | 57.9 | 52_11 | 0.1 | 98.3 |
| 31_9 | 0.031 | 90.9 | 39_83 | 0.031 | 101 | 52_11 | 0.4 | 99.4 |
| 31_9 | 0.1 | 68.7 | 39_83 | 0.1 | 84.7 | 52_12 | 0.031 | 98.2 |
| 31_9 | 0.4 | 28.7 | 39_83 | 0.4 | 54 | 52_12 | 0.1 | 95 |
| 32_1 | 0.031 | 90.8 | 39_84 | 0.031 | 98.6 | 52_12 | 0.4 | 75.3 |
| 32_1 | 0.1 | 80.3 | 39_84 | 0.1 | 92.7 | 52_13 | 0.031 | 101 |
| 32_1 | 0.4 | 41.4 | 39_84 | 0.4 | 68 | 52_13 | 0.1 | 101 |
| 32_2 | 0.031 | 110 | 39_85 | 0.031 | 92.2 | 52_13 | 0.4 | 92.3 |
| 32_2 | 0.1 | 100 | 39_85 | 0.1 | 87.7 | 52_14 | 0.031 | 91.2 |
| 32_2 | 0.4 | 68.9 | 39_85 | 0.4 | 59.4 | 52_14 | 0.1 | 94 |
| 32_3 | 0.031 | 94.9 | 39_86 | 0.031 | 97.7 | 52_14 | 0.4 | 107 |
| 32_3 | 0.1 | 73.6 | 39_86 | 0.1 | 74.7 | 52_15 | 0.031 | 101 |
| 32_3 | 0.4 | 32.8 | 39_86 | 0.4 | 36.8 | 52_15 | 0.1 | 99.8 |
| 32_4 | 0.031 | 89.3 | 39_87 | 0.031 | 99 | 52_15 | 0.4 | 108 |
| 32_4 | 0.1 | 83.9 | 39_87 | 0.1 | 93.5 | 52_16 | 0.031 | 101 |
| 32_4 | 0.4 | 55.2 | 39_87 | 0.4 | 71.8 | 52_16 | 0.1 | 97 |
| 32_5 | 0.031 | 97.4 | 39_88 | 0.031 | 94.4 | 52_16 | 0.4 | 85.3 |
| 32_5 | 0.1 | 72.6 | 39_88 | 0.1 | 86.4 | 52_17 | 0.031 | 99.8 |
| 32_5 | 0.4 | 32.1 | 39_88 | 0.4 | 48.9 | 52_17 | 0.1 | 95.2 |
| 33_1 | 0.031 | 76.2 | 39_89 | 0.031 | 99.6 | 52_17 | 0.4 | 88.4 |
| 33_1 | 0.1 | 53.2 | 39_89 | 0.1 | 80.6 | 52_2 | 0.031 | 95.8 |
| 33_1 | 0.4 | 17.9 | 39_89 | 0.4 | 55.2 | 52_2 | 0.1 | 94 |
| 33_10 | 0.031 | 94.6 | 39_9 | 0.031 | 81.7 | 52_2 | 0.4 | 88.4 |
| 33_10 | 0.1 | 60 | 39_9 | 0.1 | 58.6 | 52_3 | 0.031 | 100 |
| 33_10 | 0.4 | 25 | 39_9 | 0.4 | 23.3 | 52_3 | 0.1 | 100 |
| 33_11 | 0.031 | 82 | 39_90 | 0.031 | 98.2 | 52_3 | 0.4 | 85.7 |
| 33_11 | 0.1 | 68.6 | 39_90 | 0.1 | 74.3 | 52_4 | 0.031 | 104 |
| 33_11 | 0.4 | 30.1 | 39_90 | 0.4 | 52.3 | 52_4 | 0.1 | 98.3 |
| 33_12 | 0.031 | 101 | 39_91 | 0.031 | 87 | 52_4 | 0.4 | 93.9 |
| 33_12 | 0.1 | 88.9 | 39_91 | 0.1 | 65.1 | 52_5 | 0.031 | 101 |
| 33_12 | 0.4 | 61.2 | 39_91 | 0.4 | 34.4 | 52_5 | 0.1 | 104 |
| 33_13 | 0.031 | 95.6 | 39_92 | 0.031 | 98 | 52_5 | 0.4 | 107 |
| 33_13 | 0.1 | 88.8 | 39_92 | 0.1 | 85.8 | 52_6 | 0.031 | 111 |
| 33_13 | 0.4 | 35 | 39_92 | 0.4 | 58.4 | 52_6 | 0.1 | 94.9 |
| 33_14 | 0.031 | 92.4 | 39_93 | 0.031 | 99.7 | 52_6 | 0.4 | 103 |
| 33_14 | 0.1 | 65.7 | 39_93 | 0.1 | 79 | 52_7 | 0.031 | 102 |
| 33_14 | 0.4 | 32.6 | 39_93 | 0.4 | 51.8 | 52_7 | 0.1 | 106 |
| 33_15 | 0.031 | 94.1 | 39_94 | 0.031 | 99.4 | 52_7 | 0.4 | 108 |
| 33_15 | 0.1 | 61.2 | 39_94 | 0.1 | 81.3 | 52_8 | 0.031 | 97.7 |
| 33_15 | 0.4 | 26.5 | 39_94 | 0.4 | 52.5 | 52_8 | 0.1 | 92.6 |
| 33_16 | 0.031 | 89.7 | 39_95 | 0.031 | 107 | 52_8 | 0.4 | 84.5 |
| 33_16 | 0.1 | 67.1 | 39_95 | 0.1 | 86.9 | 52_9 | 0.031 | 100 |
| 33_16 | 0.4 | 30.4 | 39_95 | 0.4 | 59.8 | 52_9 | 0.1 | 93.2 |
| 52_9 | 0.4 | 92.9 |
實例
2
：
對從實例
1
中所選化合物的凋亡蛋白酶分析
在 DMEM 中培養小鼠 3T3 細胞，並且在 MEM 中培養 HepG2 細胞。所有培養基補充有 10% (v/v) 胎牛血清。在 37°C 和 5% CO2
下培養細胞。轉染前一天，以導致轉染時細胞融合度達到 60% ~ 70% 的密度將細胞裝入 96 孔板中的無抗生素的 100 µL 生長培養基中。Lipofectamine® 2000 (Invitrogen) 用於 96 孔板中的轉染。將反義寡核苷酸在 Opti-MEM™ (Invitrogen) 中稀釋至總體積為 25 µL 的所需濃度，並與 25 µL 轉染複合物 (0.25 µL Lipofectamine®2000 和 24.75 µL Opti-MEM™) 混合。孵育 20 分鐘後，將 50 µL 無抗生素培養基加入至溶液中並混合。從孔中除去培養基後，將 100 µL 反義寡核苷酸：轉染劑溶液加入至細胞中，並孵育 24 小時 (LNA-ASO 轉染)。所有轉染均以三份進行。寡核苷酸轉染後 24 小時，根據 VICTOR3™ 酶標儀 (Perkin Elmer) 上的說明，使用 凋亡蛋白酶-Glo®3/7 測定法 (Promega) 判定凋亡蛋白酶-3/7 活性。凋亡蛋白酶分析結果示於表 7。
實例
3
：在濃度反應測定中在體外
測試標定
SCN9A
的反義寡核苷酸在
SK-N-AS
細胞株中的效能
根據供應商的建議，SK-N-AS 細胞保存在潮濕的孵育箱中。實例 1 的表 4 中報告了廠商和推薦的培養條件。
對於測定，將細胞接種到培養基中的 96 多孔板中，並按表 4 所示進行孵育，然後加入溶解在 5 µL PBS 中的反義寡核苷酸。對於濃度反應實驗，將表 9 中的寡核苷酸以 10 步 3.16 倍 (½log) 稀釋液稀釋至 31.6 µM 至 0.001 µM 的細胞生長培養基中的最終濃度。這允許每 96 孔板測試 8 種化合物，留下 16 孔作為 PBS 對照。
加入反義寡核苷酸 72 小時後收穫細胞 (參閱表 4)。根據製造商的說明，使用 PureLink™ Pro 96 RNA 純化套組 (Thermo Fisher Scientific) 提取 RNA，並在50 µL 水中洗脫。隨後用不含 DNase/RNase 的水 (Gibco) 將 RNA 稀釋 10 倍，並加熱至 90°C 1 分鐘。
對於基因表現分析，在雙工設置中使用 qScript™ XLT 一步 RT-qPCR ToughMix®, Low ROX™ (Quantabio) 進行一步 RT-qPCR。表 8 核對了用於 qPCR 的引子測定，用於目標和內源性對照。
表
8
| 內源性對照測定 | 內源性對照廠商 | 內源性對照螢光團 | 目標測定 | 目標廠商 | 目標螢光團 |
| GUSB: Hs.PTv.27737538 | IDT | HEX-ZEN | SCN9A： Hs.PT.5840099024 | IDT | FAM-ZEN |
基於每個 qPCR 板上包括的標準曲線計算 SCN9A mRNA 的數量。用於標準曲線的輸入 RNA 為來自同一細胞板 (如上所述) 上經 PBS 處理的孔的 RNA。將數量標準化為在同一孔 (GUSB) 中執行的內源性對照基因測定的計算數量。相對目標數量 = 數量_目標基因 (SCN9A)/數量_內源性控制基因 (GUSB)。藉由用同一板上的所有經 PBS 處理的孔的中值相除，計算每個孔的 RNA 敲低。標準化目標數量 = (相對目標數量/[平均]相對目標數量] _pbs_孔)* 100。
為了生成表 9 中的 EC50 值，使用四參數 S 型劑量反應模型，從 SCN9A 的標準化目標量擬合曲線。
表 9.
在濃度反應實驗中測試的化合物的 EC50。
| CMP 識別號 | NAV1.7 qPCR 探針 2 SK-N-AS GMean EC50 (µM©) |
| 29_33 | 0.02858 |
| 29_25 | 0.04035 |
| 39_9 | 0.04910 |
| 39_19 | 0.04947 |
| 31_4 | 0.05136 |
| 39_18 | 0.05207 |
| 534_1 | 0.05489 |
| 33_1 | 0.06123 |
| 39_10 | 0.06259 |
| 29_15 | 0.06407 |
| 29_22 | 0.06462 |
| 39_7 | 0.06614 |
| 29_10 | 0.06925 |
| 39_17 | 0.06998 |
| 31_1 | 0.07083 |
| 33_2 | 0.07392 |
| 29_26 | 0.07477 |
| 39_20 | 0.07490 |
| 31_3 | 0.07884 |
| 29_34 | 0.07905 |
| 29_11 | 0.08061 |
| 29_35 | 0.08138 |
| 31_5 | 0.08303 |
| 533_1 | 0.08414 |
| 29_29 | 0.08432 |
| 33_3 | 0.08799 |
| 39_13 | 0.09649 |
| 29_24 | 0.09668 |
| 39_6 | 0.09912 |
| 39_2 | 0.10601 |
| 532_1 | 0.10894 |
| 47_1 | 0.10983 |
| 39_1 | 0.11236 |
| 48_9 | 0.11620 |
| 48_10 | 0.13282 |
| 48_8 | 0.15498 |
| 517_8 | 0.18771 |
| 521_4 | 0.20459 |
實例
4
：測試化合物的選擇性和潛在的非目標輪廓
測試了所選化合物 (31_1、39_9 和 29_25) 影響除預期 SCN9A 目標外的其他目標的傾向。
使用以下材料：
人類 iCell GlutaNeurons, 幹細胞技術 GNC-301-030-001, Lot #101442 (R1034)
RhLaminin-521、Biolamina #LN521、100 µg/mL
Brainphys 神經元培養基, 幹細胞技術 #05790
iCell 神經補充劑 B #M1029
iCell 神經系統補充劑 #M1031
N2 補充劑 100x, Thermo Fisher Scientific #17502-048
24-孔培養板, Costar #3524
來自 Engelbreth-Holm-Swarm 鼠肉瘤基底膜的層粘連蛋白, Sigma #L2020, 1 mg/mL
治療化合物：31_1、39_9 和 29_25，PBS 中 5 mM 的存量，+ 4°C
具有 Ca2+/Mg2+ 的 10x HBSS, Gibco #14065-049
RLT plus 裂解緩衝液，Qiagen ＃1053393 + 1% b-mEtOH，Sigma ＃M7522
根據製造商的方案 (幹細胞技術) 藉由解凍人類 iCell GlutaNeurons 的冷凍細胞懸液，製備人類 iPSC 衍生的皮質麩胺酸能神經元 (hGNs)。將剛解凍的細胞重懸於生長培養基 (96 mL BrainPhys 神經元培養基；2 mL iCell 神經補充劑 B；1 mL iCell 神經系統補充劑；1 mL N2 補充劑，100x) 中，並接種在 24 孔板中到接種密度為 375,000 細胞/孔。藉由在每孔中加入 400 µL/孔的 1xHBSS 和 10 µg/mL 層黏連蛋白-521，將 24 孔板剛塗有層黏連蛋白，並在 37°C 下孵育 4 小時。表 10 中總結了細胞培養條件。在培養的第一週，每天更換 50% 的培養基。在開始加入化合物的第一週 (第 14 天) 之後，每兩天更換 50% 的培養基。
表
10
| 細胞株 | 廠商 | 培養條件 | 種晶密度 ( 細胞 / 孔 ) | 寡核苷酸之前的孵育時間 ( 天數 ) | 具有寡核苷酸的孵育時間 ( 小時 ) |
| 人類 iCell GlutaNeurons | 幹細胞技術 GNC-301-030-001 | 在主動蒸發孵育箱中，37°C、5% CO2 、相對濕度為 95%。 | 375.000 個細胞/孔，24 孔板。剛塗有層粘連蛋白。 | 14 | 72 |
細胞培養 14 天後，將測試化合物 (31_1、39_9 和 29_25) 直接加入至細胞生長培養基中，達到其最終濃度：3 µM 和 30 µM。這些濃度大致相當於 SK-N-AS 細胞中 SCN9a 的 EC50 值的 50 倍和 500 倍。孵育 72 小時後，移除培養基，並將細胞溶解於 600 µL/孔的 1% b-mEtoH/RLT 緩衝液中，然後在-80°C 下存放直至總 RNA 分離。
RNA
定序分析：
使用 RNeasy 迷你套組 (Qiagen) 從 iPSC 衍生的麩胺酸能神經元中分離總 RNA，並根據製造商的說明使用 TruSeq Stranded mRNA 套組 (Illumina) 進一步加工成定序庫。在 NovaSeq 儀器 (Illumina) 上對庫定序 (2x50bp)。為了估計基因表現水平，藉由使用短閱讀比對儀 GSNAP 將配對端的 RNASeq 讀數定位到人類基因組 (hg19) 上。藉由應用 SAMtools 1.5 版和自定義的內部工具，將基因的所有 RefSeq 轉錄變體的定位讀取合併為單個值，每個基因的讀取計數。隨後，根據 Mortazavi 等人的方法 (Nat Methods 2008 年 7 月; 5(7):621-8)，藉由定序庫大小和基因長度將讀取計數標準化，表示為 rpkms (每百萬定序讀數每千鹼基轉錄的定位讀數)。衍生出了負二項式迴歸模型，以校正包括協變量的潛在混雜因素。差異基因表現分析的感興趣的對比是：針對媒介物的在兩種不同的濃度 (3 µM 和 30 µM) 下的每個 LNA。每個條件重複 4 次。使用 DESeq2 包 (Love MI 等人, Genome Biology 2014;15:550等
) 在 R 中進行實施。
執行兩次分析。第一次分析考慮了與調整後的 (調整的) p 值/FDR 閾值為 0.05 的對照相比，表現發生變化的所有基因。第二次分析集中在非目標候選基因上，非目標候選基因被定義為下調的基因 (定義為 logFC ＜ 0 且調整後的 p 值 ＜ 0.05)，並且 (i) 基於結合親和力預測在預測的非目標基因的前 1%，或 (ii) 與對應的未剪接的轉錄具有 1 個錯配。
表 11 總結了兩次分析的總體結果，而表 12 和表 13 分別示出了第一次和第二次分析結果的更多詳細資訊。數據示出了化合物 31_1 和 39_9 對 SCN9A 敲除具有很高的選擇性。在 3 uM 時，化合物 31_1 具有零個候選非目標基因。
表 11.
用 3 µM 或 30 µM 的化合物孵育後，下調或上調的基因總數。
*
示出與具有調整後的 p 值 ＜ 0.05 的對照條件相比表現減少的，並且 (i) 基於結合親和力預測在預測的非目標基因中前 1%；或者 (ii) 可以以 1 個錯配與對應的未剪接轉錄結合的基因。
†示出表現水平與調整後的 p 值 ＜ 0.05 的對照之間的差異的基因。
| CMP 識別號 | 候選非目標基因 * | 全局轉錄組影響評估 † | ||
| 3 uM | 30 uM | 3 uM | 30 uM | |
| 31_1 | 0 | 11 | 下調：5 上調：1 | 下調：106 上調：70 |
| 39_9 | 1 | 8 | 下調：3 上調：0 | 下調：23 上調：5 |
| 29_25 | 36 | 80 | 下調：268 上調：64 | 下調：1719 上調：1278 |
表 12
. 3 uM 指示的化合物的基因失調。
| CMP 識別號 | 下調 | 上調 | ||
| 基因符號 | % KD | 基因符號 | 增加 % | |
| 31_1 | (SCN9A) | -99 | GRIN2C | 84 |
| UPF2 | 31 | |||
| IPO5 | 22 | |||
| COPA | 15 | |||
| NETO2 | 16 | |||
| 39_9 | (SCN9A) | -96 | 0 | - |
| MORC4 | 92 | |||
| NEGR1 | 22 | |||
| 29_25 | 268 | - | 64 | - |
表 13
*被定義為(i) 基於結合親和力預測在預測的非目標基因的前 1%，或者 (ii) 可以以 1 個錯配結合對應的未剪接轉錄的下調基因 (被定義為 logFC ＜ 0，和調整後的 p 值 ＜ 0.05)。
| CMP 識別號 | 非目標候選基因 * | |||
| 3uM | 30uM | |||
| 基因符號 | %KD | 基因符號 | %KD | |
| 31_1 | (SCN9A) | -99 | (SCN9A) | -100 |
| TBC1D23 | 55 | |||
| CEP83 | 51 | |||
| MDGA2 | 36 | |||
| ZFHX4 | 33 | |||
| PAK5 | 31 | |||
| LYPLAL1 | 29 | |||
| MAGI2 | 28 | |||
| TRIM66 | 26 | |||
| LPP | 23 | |||
| TMEM183A | 19 | |||
| LSAMP | 19 | |||
| 39_9 | (SCN9A) | -96 | (SCN9A) | -98 |
| MORC4 | 92 | MORC4 | 98 | |
| NEGR1 | 22 | NEGR1 | 68 | |
| FARS2 | 56 | |||
| ADAMTS17 | 74 | |||
| EXOC4 | 29 | |||
| MUC19 | 59 | |||
| SCN3A | 17 | |||
| SYT1 | 17 | |||
| 29_25 | (SCN9A) | -98 | (SCN9A) | -99 |
| DPP6 | 93 | NT5DC3 | 97 | |
| CSMD1 | 90 | MACROD2 | 95 | |
| UPF2 | 87 | CSMD1 | 94 | |
| PRKRIP1 | 78 | CTNNA2 | 93 | |
| KCTD20 | 75 | FAM189A1 | 93 | |
| CAT | 70 | MDGA2 | 93 | |
| NT5DC3 | 69 | ATG10 | 93 | |
| NF2 | 68 | UPF2 | 92 | |
| MACROD2 | 64 | ADAMTS3 | 88 | |
| MDGA2 | 58 | FLRT2 | 84 | |
| FAM189A1 | 53 | GALNT18 | 84 | |
| ATG10 | 49 | CNTNAP5 | 82 | |
| CLCN3 | 49 | MAGI2 | 81 | |
| CTNNA2 | 45 | CNKSR3 | 81 | |
| PTPRD | 44 | PRKRIP1 | 79 | |
| FLRT2 | 41 | SLF2 | 72 | |
| CNTNAP5 | 40 | CCSER1 | 72 | |
| TENM3 | 39 | PRKN | 72 | |
| NKAIN2 | 39 | POLB | 71 | |
| WAC | 38 | NTAN1 | 70 | |
| MAGI2 | 36 | PCDHGB1 | 70 | |
| RPTOR | 36 | IL1RAPL1 | 67 | |
| SLF2 | 34 | LTBP1 | 67 | |
| DPH5 | 31 | PTPRD | 66 | |
| KIAA1958 | 29 | KIAA1958 | 65 | |
| EPCAM-DT | 28 | SPINK5 | 65 | |
| SPINK5 | 27 | TENM4 | 62 | |
| POLB | 26 | TENM3 | 61 | |
| ICA1 | 26 | LINC01876 | 56 | |
| STK38L | 25 | EPCAM-DT | 55 | |
| STAG1 | 23 | TTLL5 | 54 | |
| ZNF280D | 23 | ERN1 | 54 | |
| EDIL3 | 21 | ERC2 | 52 | |
| CCSER1 | 21 | ZNF280D | 52 | |
| ASCC3 | 18 | STAG1 | 50 | |
| DCLK2 | 17 | KCTD16 | 50 | |
| NCKAP5 | 50 | |||
| PTPRZ1 | 49 | |||
| SVIL | 47 | |||
| MARCHF8 | 46 | |||
| PCDHGA3 | 44 | |||
| BZW2 | 41 | |||
| EDIL3 | 40 | |||
| GRB14 | 39 | |||
| DCLK2 | 36 | |||
| DCC | 33 | |||
| XDH | 33 | |||
| PAK5 | 31 | |||
| STK38L | 31 | |||
| PER3 | 30 | |||
| NCOA2 | 29 | |||
| GALNT13 | 29 | |||
| KLHL2 | 27 | |||
| CADPS | 26 | |||
| WDR17 | 26 | |||
| VRK2 | 26 | |||
| DMD | 23 | |||
| MICU1 | 20 | |||
| CDC42 | 19 | |||
| NRCAM | 18 | |||
| ASCC3 | 17 | |||
| ANKRD24 | 16 | |||
| CDH4 | 14 | |||
| IL11RA | 14 | |||
| DPP6 | 96 | |||
| KCTD20 | 95 | |||
| CAT | 94 | |||
| NF2 | 93 | |||
| FHIT | 93 | |||
| NKAIN2 | 89 | |||
| RPTOR | 85 | |||
| CLCN3 | 70 | |||
| ICA1 | 70 | |||
| WAC | 67 | |||
| PIP4K2A | 48 | |||
| DPH5 | 45 | |||
| RARB | 45 | |||
| WIPF3 | 33 | |||
| PDE4B | 27 | |||
| MYO19 | 20 |
實例
5
：
化合物
31_1
的體內
測試
本研究的目的為評估耐受性並優化化合物 31_1 向食蟹獼猴 (獼猴
) 的背根神經節 (DRG) 的輸送，比較高沖洗量與低沖洗量 (鞘內註射劑量後) 以及在幾個時間點獲得 DRG 的藥物動力學 (PK) 和藥效動力學 (PD) 讀數。劑量水平保持「適應性」 (即，交錯劑量，並基於新出現的發現調整劑量)。選擇給藥途徑是因為這是預期的人類治療途徑，並且可以將化合物最佳遞送至 DRG 的途徑。
方法
在可以基於現有的社會群體和分層體重的情況下，將研究動物分為六個群組，分別表示為第 1 至 6 群組 (每個群組中有三隻研究動物)。
藉由鞘內團注 1.0 mL 的化合物 31_1 溶液，然後沖洗 0.5 mL/kg 體重 (第 1 組和第 2 群組) 或 0.1 mL/kg (第 3 組至第 6 組) 的人工腦脊液 (aCSF)，對動物給藥。詳細資訊，請參閱表 14。在給藥前，收集至少 0.5 mL CSF (可行時達到最大劑量)，並用於 CSF 分析。
第 1 群組和第 5 群組：給藥階段第 43 天的最終犧牲。第 2 群組、第 3 群組和第 4 群組：給藥階段第 15 天的最終犧牲。第 6 群組：給藥階段第 64 天的最終犧牲。
組織收集
犧牲時，從脊柱區域 (腰部、胸部、頸部) 的每個水平處的每側 (左側、右側) 收集兩對 DRG，記錄所有 DRG 樣品的確切重量。從脊髓中，從腰部、胸部和頸部區域解剖出兩個樣品 (最大 50 mg，記錄了確切的重量)。從以下大腦區域中的每個解剖出四個樣品 (最大 50 mg，記錄了確切的重量)：額葉皮層、枕葉皮層、小腦、海馬迴。將所有樣品放入適當標記的 2.0 mL Precellys 均質管中，在液氮中速凍並存放在- 70°C 或更低的溫度下，直到進一步分析為止。
將樣品均質化用於生物分析。將所有組織冷凍接收在 Precellys 試管中，並將 800 µl 冰冷的細胞分裂緩衝液 (PARIS 套組，目錄 # AM1921，Life Technologies 的 Ambion) 加入至每個試管中。將樣品在 Precellys 勻漿器上勻漿 (程序取決於組織類型)。將勻漿等分，例如藉由 hELISA 進行 RNA 分離和暴露分析。
藉由
hELISA
進行的暴露分析
材料與方法
試劑和材料在表 15 中示出。使勻漿達到室溫 (RT) 並劇烈震盪，然後加入至稀釋板。作為 hELISA 的參考標準品，將化合物 31_1 從未給藥的樣品中攙入勻漿池中。製備攙入 (spike-in) 濃度，使其接近樣品的反義寡核苷酸 (ASO) 含量 (通常在 10 倍以內)。
將樣品在 5×SSCT 緩衝液中稀釋。對於 CSF 早期時間點，稀釋因子的範圍從 5 倍 (低濃度血漿) 到 10,000 倍稀釋。將組織樣品稀釋至少 10 倍。在每個板上執行匹配樣品基質和稀釋因子的合適的標準品。以所期望的設定將樣品和標準品加入至稀釋板中，並製成稀釋系列。將 300 μL 樣品/標準品加上捕獲檢測溶液加入至第一孔中，並將 150 μL 捕獲檢測溶液加入至其餘的孔中。藉由依次轉染 150 μL 液體 (6 步) 製成標準品和樣品的兩倍稀釋系列樣品。將稀釋的樣品於室溫下在稀釋板上孵育 30 分鐘。
表 15.
用於化合物 31_1 的 hELISA 分析的試劑。
| 試劑表 |
| 稀釋板：具有圓底的聚丙烯 96 孔板。 |
| Roche StreptaWell 高結合 96 孔板孔隙：種類編號 11989685001。 |
| 5 x SSCT 緩衝液，pH 7.0: 750 mM NaCl 和 75 mM 檸檬酸鈉，包含 0.05% (v/v) Tween-20。 |
| 2 x SSCT 緩衝液，pH 7.0: 300 mM NaCl 和 30 mM 檸檬酸鈉，包含 0.05% (v/v) Tween-20。 |
| 基質 (AP): Blue Phos 基質，KPL 產品代碼 50-88-00。 |
| 抗-長葉毛地黃配質-AP，Fab 片段：Roche Applied Science, 種類編號 11 093 274 910. |
| PBST, pH 7.2: 磷酸鹽緩衝生理鹽水，包含 0.05% (v/v) Tween-20。 |
| 化合物識別號 # 31_1 |
| 5’-生物素化捕獲探針 (表 16) |
| 3’-長葉毛地黃配質-結合檢測探針 (表 16) |
| 捕獲檢測溶液：捕獲探針 35 nM 和偵測探針 35 nM 在 5xSSCT 緩衝液中的溶液 (表 16)。 |
表 16
.用於化合物 31_1 的 hELISA 定量的探針。
| 類型 | 修飾 | 鹼基序列 | 糖修飾 |
| 捕獲探針 | 5'-生物素結合的 | 5'-GAAATGGT-3' | 完全 LNA 修飾的 |
| 檢測探針 | 3’-長葉毛地黃配質-結合的 | 5'-TAAAAETG-3' | 完全 LNA 修飾的 |
接著，將 100 μL 液體從稀釋板轉染至抗生蛋白鏈菌素板。將板在室溫下溫和攪拌 (板搖床) 孵育 1 小時。吸孔並用 300 μL 2 x SSCT 緩衝液洗滌 3 次。向每個孔中，加入在 PBST (當天製得) 中以 1:4000 稀釋的 100 μL 抗 DIG-AP (在同一天製得)，並在室溫下輕輕攪拌孵育 1 小時。
然後吸孔並用 300 μL 2 x SSCT 緩衝液洗滌 3 次。最後，將 100 μL 剛製備的基質 (AP) 溶液加入至每個孔中。
在溫和攪拌下孵育 30 分鐘後，以 615 nm 用分光光度法測量顯色反應的強度。原始數據從讀取器 (Gen5 2.0 軟體) 匯出為 excel 格式，並在 excel 中進行進一步分析。使用 GraphPad Prism 6 軟體和邏輯 4PL 迴歸模型生成標準曲線。將數據點報告為技術重複的平均值。
結果
數據示出，高沖洗量和低沖洗量兩者在所有腰部、頸部和胸部區域中的食蟹獼猴 DRG 中產生化合物 31_1 的高暴露 (圖 30)。此外，暴露與右側和左側 DRG 無顯著差異。低沖洗量導致在所有分析的大腦區域 (額葉皮層、小腦和海馬迴) 中低得多的暴露量，而高沖洗量導致在所有大腦區域中較高的暴露量(圖 30)。
在給藥時間點後的第 14 天達到最高的測量的暴露量，其中腰部 DRG 中的 C最大
超過 1000 nM (圖 31)。
藉由
RNA
定序進行表現分析
根據製造商方案，使用 PARIS 套組 (目錄 # AM1921，Life Technologies 的 Ambion) 從組織勻漿中分離 RNA。
使用核醣體耗竭方案進行定序，並獲得 2000 萬個配對端 (PE) 讀數 (2x101 bp)。在品質評估後進行數據分析，包括移除短讀 (讀數 ＜ 50 個核苷酸) 和低於 Q30 的品質。將 PE 讀數定位到食蟹獼猴基因組 (參考序列 Macaca_fascicularis_5.0 (macFas5)，可從 UCSC 基因組瀏覽器下載)，並且使用軟體 CLC Genomic Workbench 20 版進行基因表現分析。
在先前的研究中已經發現了一組表現與經鹽處理的動物中 SCN9A 表現相關的基因。這組基因表示為「HK基因」，每個 HK 基因的表現與 SCN9A 的表現之間的 Pearson 相關性大於 0.95。計算經鹽處理的動物中 HK 基因的幾何平均值，並用 GMHK
表示。在每個樣品中，GMHK
用於藉由下式 (公式I) 使 SCN9A (X) 的表現標準化，其中 X鹽
是經鹽處理的動物中 SCN9A 的表現：
標準化的 SCN9A 表現 (鹽 %) =
鑑於腰部 DRG 的高測量暴露量以及化合物的功效，可以期望有效抑制目標。
表 7 ：
凋亡蛋白酶分析結果
| CMP 識別號 | Caspase_Activation_Assay_BALB3T3_Clone_A31：AP013716；CASPASE_ACTIVATION_SCORE；CONCENTRATION (µM) | Caspase_Activation_Assay_BALB3T3_Clone_A31：AP013716；PCT_POS_CTRL；CONCENTRATION (µM) | Caspase_Activation_Assay_BALB3T3_Clone_A31：AP013716；均值；PCT_POS_CTRL | Caspase_Activation_Assay_BALB3T3_Clone_A31：AP013716；均值；CASPASE_ACTIVATION_SCORE | Caspase_Activation_Assay_Hep G2: AP012864;CASPASE_ACTIVATION_SCORE;CONCENTRATION (µM) | Caspase_Activation_Assay_Hep G2: AP012864；均值；PCT_POS_CTRL | Caspase_Activation_Assay_Hep G2: AP012864;PCT_POS_CTRL;CONCENTRATION (µM) | Caspase_Activation_Assay_Hep G2: AP012864；均值；CASPASE_ACTIVATION_SCORE |
| 29_33 | 0,1 | 0,1 | 18,9 | 0 | 0,1 | 45,6 | 0,1 | 2 |
| 48_9 | 0,1 | 0,1 | 8,9 | 0 | 0,1 | 11,3 | 0,1 | 0,25 |
| 39_13 | 0,1 | 0,1 | -2,8 | 0 | 0,1 | -2,2 | 0,1 | 0 |
| 39_14 | 0,1 | 0,1 | -4,5 | 0 | 0,1 | -3,5 | 0,1 | 0 |
| 29_11 | 0,1 | 0,1 | 20,8 | 0,5 | 0,1 | 36,2 | 0,1 | 1 |
| 29_14 | 0,1 | 0,1 | 14,7 | 0 | 0,1 | 40,4 | 0,1 | 2 |
| 48_5 | 0,1 | 0,1 | 1,8 | 0 | 0,1 | 6,3 | 0,1 | 0 |
| 39_20 | 0,1 | 0,1 | -10,0 | 0 | 0,1 | -4,0 | 0,1 | 0 |
| 39_19 | 0,1 | 0,1 | -13,0 | 0 | 0,1 | -5,2 | 0,1 | 0 |
| 39_18 | 0,1 | 0,1 | -13,0 | 0 | 0,1 | -5,6 | 0,1 | 0 |
| 39_17 | 0,1 | 0,1 | -7,0 | 0 | 0,1 | -3,9 | 0,1 | 0 |
| 39_15 | 0,1 | 0,1 | -11,2 | 0 | 0,1 | -4,9 | 0,1 | 0 |
| 39_16 | 0,1 | 0,1 | -12,5 | 0 | 0,1 | -5,3 | 0,1 | 0 |
| 29_41 | 0,1 | 0,1 | 2,5 | 0 | 0,1 | 56,4 | 0,1 | 2 |
| 29_34 | 0,1 | 0,1 | 7,9 | 0 | 0,1 | 22,8 | 0,1 | 0,5 |
| 29_37 | 0,1 | 0,1 | 4,5 | 0 | 0,1 | 46,1 | 0,1 | 2 |
| 29_39 | 0,1 | 0,1 | 5,7 | 0 | 0,1 | 51,2 | 0,1 | 2 |
| 29_40 | 0,1 | 0,1 | 0,3 | 0 | 0,1 | 57,8 | 0,1 | 2 |
| 29_4 | 0,1 | 0,1 | 45,8 | 2 | 0,1 | 81,3 | 0,1 | 3 |
| 29_35 | 0,1 | 0,1 | 10,1 | 0 | 0,1 | 38,9 | 0,1 | 1 |
| 29_36 | 0,1 | 0,1 | 5,9 | 0 | 0,1 | 51,3 | 0,1 | 2 |
| 29_38 | 0,1 | 0,1 | 6,0 | 0 | 0,1 | 50,0 | 0,1 | 2 |
| 48_10 | 0,1 | 0,1 | 17,8 | 0 | 0,1 | 2,7 | 0,1 | 0 |
| 39_12 | 0,1 | 0,1 | -4,9 | 0 | 0,1 | -4,3 | 0,1 | 0 |
| 39_11 | 0,1 | 0,1 | -4,9 | 0 | 0,1 | -3,7 | 0,1 | 0 |
| 39_10 | 0,1 | 0,1 | -7,7 | 0 | 0,1 | -4,1 | 0,1 | 0 |
| 39_9 | 0,1 | 0,1 | -11,1 | 0 | 0,1 | -5,1 | 0,1 | 0 |
| 29_32 | 0,1 | 0,1 | 4,5 | 0 | 0,1 | 53,6 | 0,1 | 2 |
| 29_31 | 0,1 | 0,1 | 18,7 | 0 | 0,1 | 45,5 | 0,1 | 2 |
| 29_30 | 0,1 | 0,1 | 12,9 | 0 | 0,1 | 47,3 | 0,1 | 2 |
| 29_13 | 0,1 | 0,1 | 23,7 | 0,5 | 0,1 | 82,8 | 0,1 | 3 |
| 29_29 | 0,1 | 0,1 | 16,0 | 0 | 0,1 | 33,5 | 0,1 | 1 |
| 29_28 | 0,1 | 0,1 | 7,1 | 0 | 0,1 | 54,6 | 0,1 | 2 |
| 29_27 | 0,1 | 0,1 | 12,1 | 0 | 0,1 | 59,6 | 0,1 | 2 |
| 29_26 | 0,1 | 0,1 | 4,7 | 0 | 0,1 | 3,7 | 0,1 | 0 |
| 29_25 | 0,1 | 0,1 | 3,8 | 0 | 0,1 | 17,6 | 0,1 | 0 |
| 29_24 | 0,1 | 0,1 | 1,6 | 0 | 0,1 | 4,8 | 0,1 | 0 |
| 48_8 | 0,1 | 0,1 | 4,9 | 0 | 0,1 | 9,6 | 0,1 | 0 |
| 48_4 | 0,1 | 0,1 | 21,1 | 0,5 | 0,1 | 20,7 | 0,1 | 0,5 |
| 48_7 | 0,1 | 0,1 | 13,6 | 0 | 0,1 | 37,3 | 0,1 | 1 |
| 48_6 | 0,1 | 0,1 | 8,6 | 0 | 0,1 | 53,3 | 0,1 | 2 |
| 48_3 | 0,1 | 0,1 | 30,0 | 1 | 0,1 | 13,2 | 0,1 | 0 |
| 48_2 | 0,1 | 0,1 | 32,8 | 1 | 0,1 | 53,9 | 0,1 | 2 |
| 47_1 | 0,1 | 0,1 | -12,2 | 0 | 0,1 | -4,4 | 0,1 | 0 |
| 33_3 | 0,1 | 0,1 | 17,2 | 0 | 0,1 | 21,7 | 0,1 | 0,5 |
| 33_2 | 0,1 | 0,1 | 23,4 | 0,5 | 0,1 | 38,8 | 0,1 | 1 |
| 33_1 | 0,1 | 0,1 | 22,1 | 0,5 | 0,1 | 39,0 | 0,1 | 1 |
| 31_5 | 0,1 | 0,1 | 4,6 | 0 | 0,1 | 6,7 | 0,1 | 0 |
| 31_4 | 0,1 | 0,1 | 5,7 | 0 | 0,1 | 28,0 | 0,1 | 1 |
| 31_3 | 0,1 | 0,1 | 16,8 | 0 | 0,1 | 18,0 | 0,1 | 0 |
| 31_2 | 0,1 | 0,1 | 12,2 | 0 | 0,1 | 51,2 | 0,1 | 2 |
| 31_1 | 0,1 | 0,1 | 14,6 | 0 | 0,1 | 21,4 | 0,1 | 0,5 |
| 48_1 | 0,1 | 0,1 | 31,1 | 1 | 0,1 | 19,3 | 0,1 | 0 |
| 39_5 | 0,1 | 0,1 | -9,2 | 0 | 0,1 | -4,7 | 0,1 | 0 |
| 39_4 | 0,1 | 0,1 | -5,1 | 0 | 0,1 | -3,4 | 0,1 | 0 |
| 39_8 | 0,1 | 0,1 | -6,5 | 0 | 0,1 | -3,2 | 0,1 | 0 |
| 39_3 | 0,1 | 0,1 | -13,3 | 0 | 0,1 | -5,2 | 0,1 | 0 |
| 39_7 | 0,1 | 0,1 | -5,2 | 0 | 0,1 | -1,8 | 0,1 | 0 |
| 39_2 | 0,1 | 0,1 | 4,4 | 0 | 0,1 | 2,3 | 0,1 | 0 |
| 39_1 | 0,1 | 0,1 | -6,8 | 0 | 0,1 | -3,6 | 0,1 | 0 |
| 39_6 | 0,1 | 0,1 | -6,6 | 0 | 0,1 | -3,4 | 0,1 | 0 |
| 29_23 | 0,1 | 0,1 | 8,6 | 0 | 0,1 | 61,8 | 0,1 | 3 |
| 29_22 | 0,1 | 0,1 | 18,7 | 0 | 0,1 | 38,6 | 0,1 | 1 |
| 29_2 | 0,1 | 0,1 | 49,0 | 2 | 0,1 | 128,6 | 0,1 | 3 |
| 29_8 | 0,1 | 0,1 | 32,8 | 1 | 0,1 | 128,8 | 0,1 | 3 |
| 29_7 | 0,1 | 0,1 | 33,9 | 1 | 0,1 | 49,3 | 0,1 | 2 |
| 29_6 | 0,1 | 0,1 | 37,6 | 1 | 0,1 | 79,1 | 0,1 | 3 |
| 29_1 | 0,1 | 0,1 | 76,4 | 3 | 0,1 | 107,9 | 0,1 | 3 |
| 29_3 | 0,1 | 0,1 | 42,9 | 2 | 0,1 | 87,0 | 0,1 | 3 |
| 29_10 | 0,1 | 0,1 | 36,7 | 1 | 0,1 | 39,4 | 0,1 | 1 |
| 29_12 | 0,1 | 0,1 | 24,3 | 0,5 | 0,1 | 101,8 | 0,1 | 3 |
| 29_9 | 0,1 | 0,1 | 33,5 | 1 | 0,1 | 82,7 | 0,1 | 3 |
| 29_21 | 0,1 | 0,1 | 17,0 | 0 | 0,1 | 43,3 | 0,1 | 2 |
| 29_20 | 0,1 | 0,1 | 16,0 | 0 | 0,1 | 59,2 | 0,1 | 2 |
| 29_19 | 0,1 | 0,1 | 7,9 | 0 | 0,1 | 90,1 | 0,1 | 3 |
| 29_18 | 0,1 | 0,1 | 12,5 | 0 | 0,1 | 74,8 | 0,1 | 3 |
| 29_17 | 0,1 | 0,1 | 17,3 | 0 | 0,1 | 63,1 | 0,1 | 3 |
| 29_5 | 0,1 | 0,1 | 30,9 | 1 | 0,1 | 82,5 | 0,1 | 3 |
| 29_16 | 0,1 | 0,1 | 18,7 | 0 | 0,1 | 55,4 | 0,1 | 2 |
| 29_15 | 0,1 | 0,1 | 16,9 | 0 | 0,1 | 18,2 | 0,1 | 0 |
表 14
.動物組和劑量。
| 組 編號 | 治療 編碼 * | 組 説明 | 劑量水平 (mg) | 劑量體積 (mL) | 動物 / 組 | 以下時間後屍體剖檢 | |||
| 沖洗量 | 雌性 | 2 週 | 6 週 | 9 週 | |||||
| 1 | G1 | 對照 | 0 | 1 mL | 0.5 mL/kg | 3 | - | 3 | |
| 4 | G2 | 高劑量 + 高沖洗量 | 16 mg | 1 mL | 0.5 mL/kg | 3 | 3 | - | |
| 3 | G3 | 高劑量 + 低沖洗量 | 16 mg | 1 mL | 0.1 mL/kg | 3 | 3 | - | |
| 2 | G4 | 低劑量 + 低沖洗量 | 8 mg | 1 mL | 0.1 ml/kg | 3 | 3 | - | |
| 5 | G5 | 高劑量 + 低沖洗量 | 16 mg | 1 mL | 0.1 ml/kg | 3 | - | 3 | |
| 6 | G6 | 高劑量 + 低沖洗量 | 16 mg | 1 mL | 0.1 ml/kg | 3 | - | - | 3 |
圖 1 化合物識別號 # 29_15
圖 2 化合物識別號 # 29_10
圖 3 化合物識別號 # 29_22
圖 4 化合物識別號 # 39_6
圖 5 化合物識別號 # 39_1
圖 6 化合物識別號 # 39_2
圖 7 化合物識別號 # 39_7
圖 8 化合物識別號 # 31_1
圖 9 化合物識別號 # 31_3
圖 10 化合物識別號 # 31_4
圖 11 化合物識別號 # 31_5
圖 12 化合物識別號 # 33_1
圖 13 化合物識別號 # 33_2
圖 14 化合物識別號 # 33_3
圖 15 化合物識別號 # 47_1
圖 16 化合物識別號 # 48_8
圖 17 化合物識別號 # 29_24
圖 18 化合物識別號 # 29_25
圖 19 化合物識別號 # 29_26
圖 20 化合物識別號 # 39_9
圖 21 化合物識別號 # 39_10
圖 22 化合物識別號 # 48_10
圖 23 化合物識別號 # 29_35
圖 24 化合物識別號 # 29_34
圖 25 化合物識別號 # 39_17
圖 26 化合物識別號 # 39_18
圖 27 化合物識別號 # 39_19
圖 28 化合物識別號 # 39_20
圖 29 化合物識別號 # 29_11
圖 30 低沖洗量與高沖洗量。圖表示出了在給藥 16 mg 化合物後，作為高 (左) 和低 (右) 沖洗量函數的暴露。每個 DRG 數據點來自一個食蟹獼猴 (N = 3) 的兩個 DRG 的合併。所有數據點均來自在單劑 16 mg 劑量的化合物識別號 ＃ 31_1 後 14 天犧牲的食蟹獼猴。
圖 31 背根神經節的暴露量隨著給藥後天數的變化而變化。每個數據點是來自食蟹獼猴 (N = 3) 的兩個 DRG 的合併。所有數據均來自低沖洗量群組和單劑 16 mg 的化合物識別號 ＃ 31_1。
Claims (44)
- 一種長度為 10 至 30 個核苷酸之反義寡核苷酸，其包含長度為 10 至 30 個核苷酸之連續核苷酸序列，該連續核苷酸序列與選自以下核苷酸之人 SCN9A 前 mRNA 的區域完全互補：SEQ ID NO: 1 之核苷酸 97704 - 97732、103232 - 103259、151831 – 151847 及 151949 - 152006。
- 如請求項 1 之反義寡核苷酸，其中，該連續核苷酸序列與選自由 SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 47 及 SEQ ID NO: 48 所組成之群組的序列 100% 相同。
- 如請求項 1 或 2 之反義寡核苷酸，其中，該連續核苷酸序列與選自由 SEQ ID NO: 28 - SEQ ID NO: 52 所組成之群組或其至少 14 個連續核苷酸的序列100% 相同。
- 如請求項 1 之反義寡核苷酸，其中，該反義寡核苷酸不是選自由化合物識別號 29_33、39_13、48_9、29_33、39_13、48_9、29_33、39_13 及 48_9 所組成之群組的反義寡核苷酸。
- 一種反義寡核苷酸，其中，該反義寡核苷酸選自表 1 或表 3 中列出的化合物。
- 一種如圖 1 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 2 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 3 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 4 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 5 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 6 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 7 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 8 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 9 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 10 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 11 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 12 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 13 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 14 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 15 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 16 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 17 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 18 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 19 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 20 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 21 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 22 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 23 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 24 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 25 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 26 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 27 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 28 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種如圖 29 所示之反義寡核苷酸，或其醫藥上可接受之鹽。
- 一種結合體，其包含如請求項 1 至 34 中任一項之反義寡核苷酸，以及至少一個共價連接至該反義寡核苷酸之結合體部分。
- 一種如請求項 1 至 34 中任一項之反義寡核苷酸或如請求項 35 之結合體之醫藥上可接受之鹽。
- 如請求項 36 之醫藥上可接受之鹽，其中，該醫藥上可接受之鹽為鈉鹽或鉀鹽。
- 一種醫藥組成物，其包含如請求項 1 至 34 中任一項之反義寡核苷酸，或如請求項 35 之結合體，或如請求項 36 或 37 之醫藥上可接受之鹽，以及醫藥上可接受之稀釋劑、溶劑、載劑、鹽類及/或佐劑。
- 一種用於抑制正在表現 SCN9A 的目標細胞中之 SCN9A 表現之體外方法，該方法包含向該細胞投予有效量之如請求項 1至34 中任一項之反義寡核苷酸、或如請求項 35 之結合體、或如請求項 36 或 37 之醫藥上可接受之鹽。
- 一種如請求項 1 至 34 中任一項之反義寡核苷酸、或如請求項 35 之結合體、或如請求項 36 或 37 之醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製備供抑制 SCN9A 表現用之藥物。
- 一種如請求項 1 至 34 中任一項之反義寡核苷酸、或如請求項 35 之結合體、或如請求項 36 或 37 之醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製備供治療或預防罹患或很可能罹患疼痛的個體諸如人的疼痛從而諸如預防或減輕該疼痛用之藥物。
- 如請求項 41 之用途，其中，該疼痛為 a. 慢性疼痛、神經性疼痛、發炎性疼痛、自發性疼痛；或 b. 傷害感受性疼痛；或 c. 由選自由糖尿病神經病變、癌症、顱神經痛、皰疹後神經痛及術後神經痛所組成之群組的疾患引起的或與之相關聯的疼痛；或 d. 由遺傳性肢端紅痛症 (EIM) 或陣發性極度疼痛疾患 (PEPD) 或三叉神經痛引起或與之相關聯的疼痛；或 e. 神經性疼痛、慢性疼痛，以及傷害感受性疼痛 (例如神經減壓)、或神經性疼痛 (例如糖尿病神經病變)、內臟疼痛、或混合性疼痛的一般治療；或 f. 下背疼痛、或發炎性關節炎。
- 一種如請求項 1 至 34 中任一項之反義寡核苷酸、或如請求項 35 之結合體、或如請求項 36 或 37 之醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製備供治療、預防或減輕疼痛諸如如請求項 42 之 a、b、c、d、e 或 f 部分所限定之疼痛用之藥物。
- 如請求項 43 之用途，其中，該疼痛是下背疼痛、或發炎性關節炎。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP19218780.5 | 2019-12-20 | ||
| EP19218780 | 2019-12-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202136510A true TW202136510A (zh) | 2021-10-01 |
Family
ID=69104237
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW109144887A TW202136510A (zh) | 2019-12-20 | 2020-12-18 | 用於抑制ｓｃｎ９ａ表現之增強型寡核苷酸 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210214727A1 (zh) |
| EP (1) | EP4077672A1 (zh) |
| JP (1) | JP7288052B2 (zh) |
| CN (1) | CN114829603A (zh) |
| AR (1) | AR120817A1 (zh) |
| TW (1) | TW202136510A (zh) |
| WO (1) | WO2021123086A1 (zh) |
Family Cites Families (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3756313B2 (ja) | 1997-03-07 | 2006-03-15 | 武 今西 | 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体 |
| DE04020014T1 (de) | 1997-09-12 | 2006-01-26 | Exiqon A/S | Bi-zyklische - Nukleosid,Nnukleotid und Oligonukleotid-Analoga |
| EP1152009B2 (en) | 1999-02-12 | 2017-09-06 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Novel nucleosides and oligonucleotide analogues |
| PT1178999E (pt) | 1999-05-04 | 2007-06-26 | Santaris Pharma As | Análogos de l-ribo-lna |
| US6617442B1 (en) | 1999-09-30 | 2003-09-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Human Rnase H1 and oligonucleotide compositions thereof |
| US7393657B2 (en) | 2001-04-12 | 2008-07-01 | Imperial College Innovations Limited | Diagnosis and treatment of cancer: I |
| US7659082B2 (en) | 2002-02-19 | 2010-02-09 | Xenon Pharmaceuticals Inc. | Methods for identifying analgesic agents |
| PT2284266E (pt) * | 2002-11-14 | 2013-12-17 | Thermo Fisher Scient Biosciences Inc | Siarn contra tp53 |
| DK2284269T3 (en) | 2002-11-18 | 2017-10-23 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Antisense design |
| DE602007009487D1 (de) | 2006-01-27 | 2010-11-11 | Isis Pharmaceutical Inc | 6-modifizierte bicyclische nukleinsäureanaloga |
| AU2007249349B2 (en) | 2006-05-11 | 2012-03-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-Modified bicyclic nucleic acid analogs |
| US7666854B2 (en) | 2006-05-11 | 2010-02-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs |
| US8278425B2 (en) | 2007-05-30 | 2012-10-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs |
| ES2386492T3 (es) | 2007-06-08 | 2012-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos carbocíclicos |
| WO2009006478A2 (en) | 2007-07-05 | 2009-01-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs |
| WO2009033027A2 (en) | 2007-09-05 | 2009-03-12 | Medtronic, Inc. | Suppression of scn9a gene expression and/or function for the treatment of pain |
| US8546556B2 (en) | 2007-11-21 | 2013-10-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc | Carbocyclic alpha-L-bicyclic nucleic acid analogs |
| WO2010036698A1 (en) | 2008-09-24 | 2010-04-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides |
| EP2462153B1 (en) | 2009-08-06 | 2015-07-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs |
| KR20110087436A (ko) | 2010-01-26 | 2011-08-03 | 주식회사 씨티아이바이오 | 전위차 나트륨 이온 채널 아형 9(에스씨엔 9에이)의 안티센스 올리고핵산 |
| WO2011156202A1 (en) | 2010-06-08 | 2011-12-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted 2 '-amino and 2 '-thio-bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| WO2012162732A1 (en) | 2011-06-02 | 2012-12-06 | The University Of Queensland | Assays for sodium ion channel modulators and uses thereof |
| EP2742136B1 (en) | 2011-08-11 | 2017-09-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped oligomeric compounds comprising 5'-modified deoxyribonucleosides in the gap and uses thereof |
| EP2850092B1 (en) | 2012-04-09 | 2017-03-01 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Tricyclic nucleic acid analogs |
| KR20150083920A (ko) | 2012-11-15 | 2015-07-20 | 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 | 항 apob 안티센스 접합체 화합물 |
| WO2014159595A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Human antibodies to nav1.7 |
| WO2015113922A1 (en) | 2014-01-30 | 2015-08-06 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Poly oligomer compound with biocleavable conjugates |
| EP3430141B1 (en) * | 2016-03-14 | 2020-12-30 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Oligonucleotides for reduction of pd-l1 expression |
| WO2018007980A1 (en) * | 2016-07-06 | 2018-01-11 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of pain related disorders |
| US20190218255A1 (en) | 2016-09-16 | 2019-07-18 | Olipass Corporation | Scn9a antisense oligonucleotides |
| US20220119811A1 (en) * | 2018-01-12 | 2022-04-21 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Alpha-synuclein antisense oligonucleotides and uses thereof |
| WO2019141723A1 (en) * | 2018-01-18 | 2019-07-25 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides targeting srebp1 |
| JP7379387B2 (ja) * | 2018-06-05 | 2023-11-14 | エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー | Ａｔｘｎ２発現を制御するためのオリゴヌクレオチド |
| EP3810776A1 (en) | 2018-06-22 | 2021-04-28 | F. Hoffmann-La Roche AG | Oligonucleotides for modulating scn9a expression |
-
2020
- 2020-12-18 US US17/127,099 patent/US20210214727A1/en not_active Abandoned
- 2020-12-18 EP EP20835789.7A patent/EP4077672A1/en active Pending
- 2020-12-18 WO PCT/EP2020/086916 patent/WO2021123086A1/en unknown
- 2020-12-18 AR ARP200103550A patent/AR120817A1/es not_active Application Discontinuation
- 2020-12-18 CN CN202080088253.2A patent/CN114829603A/zh active Pending
- 2020-12-18 JP JP2021523913A patent/JP7288052B2/ja active Active
- 2020-12-18 TW TW109144887A patent/TW202136510A/zh unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114829603A (zh) | 2022-07-29 |
| JP7288052B2 (ja) | 2023-06-06 |
| US20210214727A1 (en) | 2021-07-15 |
| WO2021123086A1 (en) | 2021-06-24 |
| EP4077672A1 (en) | 2022-10-26 |
| JP2022517475A (ja) | 2022-03-09 |
| AR120817A1 (es) | 2022-03-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2022202991A1 (en) | Organic compositions to treat KRAS-related diseases | |
| JP2024056820A (ja) | Ｓｃｎ９ａ発現を調節するためのオリゴヌクレオチド | |
| JP7155302B2 (ja) | Ａｔｘｎ３を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド | |
| JP7060525B2 (ja) | Ｈｔｒａ１の発現を調節するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド | |
| TW201200138A (en) | Treatment of Atonal homolog 1 (ATOH1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ATOH1 | |
| TW201210611A (en) | Treatment of Nicotinamide Phosphoribosyltransferase (NAMPT) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to NAMPT | |
| TW202219273A (zh) | 靶向ｒｎａ結合蛋白位點之寡核苷酸 | |
| TW201202418A (en) | Treatment of Methionine Sulfoxide Reductase A (MSRA) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to MSRA | |
| KR20200104347A (ko) | 포스포로디티오에이트 인터뉴클레오시드 연결을 포함하는 갭머 올리고뉴클레오티드 | |
| CN112513062A (zh) | 含有寡聚核苷酸的小细胞肺癌治疗药 | |
| TW201907008A (zh) | 用於調節htra1表現之反義寡核苷酸 | |
| JP2023542889A (ja) | 複数の標的を介して疼痛を処置するための治療用組成物 | |
| TW202136510A (zh) | 用於抑制ｓｃｎ９ａ表現之增強型寡核苷酸 | |
| EP4404941A1 (en) | Therapeutics for haploinsufficiency conditions | |
| JP2021534759A (ja) | Ｍｉｃｒｏｒｎａ−１３４バイオマーカー | |
| CN116670276A (zh) | 用于通过多个靶标治疗疼痛的治疗组合物 | |
| WO2025067482A1 (zh) | 调控atxn2表达的dsrna分子 | |
| JP2024506709A (ja) | Ｕｂｅ３ａアンチセンス治療剤 | |
| WO2021231204A1 (en) | Complement component 4 inhibitors for treating neurological diseases, and related compositons, systems and methods of using same | |
| WO2022230987A1 (ja) | ｍｉＲ－３３ｂ阻害物質による筋疾患の予防又は治療 | |
| WO2021231210A1 (en) | Complement component c1r inhibitors for treating a neurological disease, and related compositions, systems and methods of using same | |
| EP4149486A1 (en) | Complement component c1s inhibitors for treating a neurological disease, and related compositions, systems and methods of using same |