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KR900701151A - 아세틸- CoA 가수분해효소의 정제 및 특성확인 - Google Patents

아세틸- CoA 가수분해효소의 정제 및 특성확인

Info

Publication number
KR900701151A
KR900701151A KR1019900700452A KR900700452A KR900701151A KR 900701151 A KR900701151 A KR 900701151A KR 1019900700452 A KR1019900700452 A KR 1019900700452A KR 900700452 A KR900700452 A KR 900700452A KR 900701151 A KR900701151 A KR 900701151A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
acetyl
activity
coa hydrolase
enzyme
unit
Prior art date
Application number
KR1019900700452A
Other languages
English (en)
Inventor
에이. 스미스 잔
에스. 리 팡-옌
Original Assignee
원본미기재
더 제너랄 호스피탈 코오퍼레이션
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 원본미기재, 더 제너랄 호스피탈 코오퍼레이션 filed Critical 원본미기재
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
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    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
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    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
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Abstract

내용 없음

Description

아세틸- CoA 가수분해효소의 정제 및 특성확인
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 효모의 아테틸-CoA 가수분해효소의 7EAE-세파로스(0.05 내지 0.SMKCl) 크로마토크래피를 도시한다.
제2도는 효모 아세 틸-CoA 가수될해효소의 세파로스 CL-4B 크로마토그래피를 도시 한다.
제3도는 효모 아세틸-CoA 가수분해효소의 히드륵실아파타이트 크로마토그래피 분석을 도시한다.

Claims (12)

  1. 다음의 특징: (a) 약 64,000±5,000 달톤의 분자량: (b) 약 5.8에서의 등전절: (c) 8.0에서의 PH 최적:(d) 37℃내지 42℃의 온도에서의 최대 활성, 이 때에 1 유니트의 아세틸 CoA 가수분해효소 활성은 1 유니트외 아세힐기 전이효소 활성을 저해할 수 있는 효소의 양으로서 균정되며, 1 유니트의 아세틸기 전이효소 활성은 표준 조건하애서 아세틸기 전이효소 표준 효소측정에 의하여, Ipmoℓ의 (3H) 아세틸기를 [3H] 아세틸 보효소 A로부터 ACTH(1-24)에 전이시킬 수 있는 효소의 양으로서 규정한다; (e) 70℃에서 1분후에 일어나는 비가역 변성: (f) 기질 특이성 의존성; 및 (9) 디에틸 퍼로카보네이트률 사용한 화학적 변형에 의한 비활성화 성질을 가지는, 실질적으로 정렉된 아새틸-CoA 가수분해효소.
  2. 제1항에 있어서, 20보다 큰 효소 활성율 가지며, 이 때에 1 유니트의 아세틸 CoA 가수분해효소 활성은 1 유니트의 아세틸기 전이효소 활성을 저해할 수 있는 효소외 양으로서 규정되고, 1유니트의 아세틸기 전이효소 활성은 표준 조절하에서 아세틸기 전이효소 표준 효소측정에 의하여, Ipmoℓ의 (3H) 아세틸 기를 (3H) 아세 틸 보효소 A로부더 ACT퍼(1-24)에 전이시킬 수 있는 효소의 양으로서 특정되는 것을 툭징으로 하는 아세틸-CoA 가수분해효소.
  3. 제1항에 있어서, 50보다 큰 효소 활성을 가지며, 이 때에 1 유니트의 아세틸 CoA 가수분해료소 활성은 1'유니트의 아세틸기 전이효소 활성을 저해할 수 있는 효소외 양으로서 규정되고, 1유니트의 아세틸기 전이효소 활성은 표준 조건하에서 아세틸기 전이효소 표준 효소측정에 의하여, Ipmoℓ의 (3H) 아세틸 기를 (3H) 아세틸 보효소 A로부터 ACTH(1-24)에 전이시킬 수 있는 효소의 양으로서 규정되는 것을 특징으로 하는 아세틸-CoA 가수분해효소.
  4. 제1항에 있어서, 1,000보다 큰 효소 활성을 가지며 이 때에 1유니트의 아세틸 CoA 가수분해효소 활성은 1 유니트의 아세틸기 전이효소 활성을 저해할 수 있는 효소의 양으로서 규정되고, 1 유니트의 아세틸기 전이효소 활성은 표준 조건하에서 아세틸기 전이효소 표준 효소측정에 의하여, Ipmoℓ의 (3H) 아세틸기를 (3H) 아세틸 보효소 A로부터 ACTH(1-24)에 전이시킬 수 있는 효소의 양으로서 규정되는 것을 특징으로 하는아세 틸-CoA 가수분해효소.
  5. 제1항에 있어서, 3000보다 큰 효소 왑성을 가지며, 이 때에 1 유니트의 아세틸 CoA 가수분해효소 활성은 1 유니트의 아세틸기 전이효소 활성을 저해할 수 있는 효소의 양으로서 규정되고, 1 유니트외 아세틸기 전이효소 활성은 표준 조건하에서 아세틸기 전이효소 표준 효소측정에 의하여, Ipmoℓ의 (³H) 아세틸 기를 (³H) 아세틸 보효소 A로부터 ACT퍼(1-24)에 전이시킬 수 있는 효소의 양으로서 규정되는 것을 특징으로 하는 아세틸-CoA 가수분해효소.
  6. 실질적으로 정재된 아세틸-CoA 가수분해효소를 아세틸-CoA 가수분해효소 함유 샘플로부터 회수하는 방법으로서, (a) 상기 아세틸-CoA 가수분해효소 함유 샘플로부터 미정제 아세틸-CoA가수분해효소를 회수 하는 단계; (b) 단계 (a)로부터의 상기 미정재 아세틸-CoA 가수분해효소에 대하여 이온 교환을 수행하여 아세틸-CoA 가수분해료소의 활성분획을 얻는 단계, 이때에 유니트의 아세틸-CoA 가수분해효소 활성은 1 유니트의 아세틸기 전이효소 활성을 저해할 수 있는 효소의 양으로서 규정되며, 1 유니트의 아세틸기 전이효소를 성온 표준 조건하에서 아세릴기 전이효소표준 효소 측정에 외하여, Ipmoℓ의 (³H) 아세틸 기를 (³H) 아세틸 보효소 A로부터 ACTH(1-24)에 전이시킬 수 있는 효소의 양으로서 규정한다; 그리고 (c) 단계 (b)로부터의 아세틸-CoA 가수분해효소의 상기 활성분획을 흡착 히드록실아파타이트 크로마토그래퍼에 적용하여 실질적으로 정제된 아세틸-CoA 가수분해효소를 얻는 단계로 이루어지는 방법.
  7. (a) 상기 아세틸-CoA 가수분해효소 함유 샘플로부터 미정제 아세틸-CoA 가수분해효소를 회수하는 단계; (b) 단계 (a)로부터의 상기 미정제 아세틸-CoA 가수분해효소에 대하여 이온교환을 수행하여 아세틴-CoA 가수분해효소의 활성 분획을 얻는 단계, 이때에 1 유니트의 아세틸 CoA 가수분해효소를 활성은 1 유니트의 아세틸기 전이효소 활성을 저해할 수 있는 효소의 양으로서 규정되며, 1 유니트의 아세틸기 전이효소 활성은 표준 조건하에서 아세틸기 전이효소 표준 효소 측정에 의하여, Ipmoℓ의 (³H) 아세틸 기를 [³H]리 아세틸 보효소 A로부터 ACTH(1-24)에 전이시킬 수 있는 효소의 양으로서 규정한다; 그리고 (c) 단계 (b)로 부터의 아세틸-CoA 가수분해효소의 상기 활성분획을 흡착 히드록실아파타이트 크로마토그래퍼에 적용하여 실질적으로 정제된 아세틸-CoA 가수분해효소를 얻는 단계로 이루어지는 방법에 의하여 얻을 수 있으며, 분자량이 약 64,000 달론이고, 1000보다 큰 효소 활성을 가지며, 이 때에 1 유니트의 아세틸 CoA 가수분해효소 활성은 표준 조건하에서 1유니트의 아세틸기 전이효소 활성을 저해할 수 있는 효소의 양으로서 규정되는 것을 특징으로 하는 아세틸-CoA 가수 분해효소.
  8. 본질적으로 다음의 아미노산 서열 ; Phe-Asn-Leu-Phe-Val-Gly-Ala-Ser-Ala-Gly-Pro-Glu-Glu-Asn-(Arg)로 이루어지는 아세틸-CoA의 펩티드 단편.
  9. 본질적으로 다음의 아미노산 서열; Val-Val-Ala-lle-Val-Glu-Ser-Thr-Met-Arg- : Leu로 이루어지는 아세틸-CoA의 펩티드 단편.
  10. 아세틸-CoA 가수분해효소를 코드하는 유전 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자.
  11. 제10항의 재조할 DNA 분자를 코드화하는 유전 서열에 의해 형질전환된 세포를 포함하는 식물.
  12. 제10항의 재조합 DNA분자를 코드화하는 유전 서열로 식물을 형질전환하는 것으로 이루어지는, 살초제 내성이 중가된 식물의 제조방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019900700452A 1988-07-01 1989-06-13 아세틸- CoA 가수분해효소의 정제 및 특성확인 KR900701151A (ko)

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US29700389A 1989-01-13 1989-01-13
US297,003 1989-01-13
PCT/US1989/002553 WO1990000003A1 (en) 1988-07-01 1989-06-13 Purification and characterization of an acetyl-coa hydrolase

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Patent event code: PA01091R01D

Comment text: Patent Application

Patent event date: 19900302

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