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KR20200074545A - Cd8+ 메모리 t 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

Cd8+ 메모리 t 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDF

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KR20200074545A
KR20200074545A KR1020180163063A KR20180163063A KR20200074545A KR 20200074545 A KR20200074545 A KR 20200074545A KR 1020180163063 A KR1020180163063 A KR 1020180163063A KR 20180163063 A KR20180163063 A KR 20180163063A KR 20200074545 A KR20200074545 A KR 20200074545A
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한국과학기술원
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Abstract

본 발명은 본 발명은 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 상기 조성물은 간에 존재하는 CD8+ 메모리 T 세포 중에서 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포가 조직 상주 집단(Subpopulation)인 것에 기초하여, 상기 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에만 특이적으로 높은 수준으로 존재하는 HIF-2α의 발현 수준 또는 활성을 억제함으로써 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 사멸을 유도하거나, 그 기능을 효과적으로 억제할 수 있다. 나아가, 이와 같은 효과를 통해 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방, 개선 또는 치료에 매우 유용하게 적용될 수 있다.

Description

CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물{A PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING CD8+ MEMORY T CELL MEDIATED DISEASES}
본 발명은 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
간은 면역 내성이 있는 기관으로서, 조직 적합성 복합체, 부정합 간 동종 이식의 경우에도 거부 반응 없이 생존할 수 있으며, HBV(Hepatitis B virus) 및 HCV(Hepatitis C virus)가 지속적으로 만성 감염을 쉽게 일으킬 수 있는 독특한 면역학적 측면을 갖는 기관이다.
한편, 최근 이펙터 메모리 T (Effector memory T; TEM) 세포 또는 CD45RA+ 이펙터 메모리 T (CD45RA+ effector memory; TTEMRA) 세포의 표현형을 나타내는, 재순환하지 않는 조직 상주 기억 T (Non-recirculating tissue-resident memory T; TRM) 세포가 다양한 말초 기관에서 발견되었다. αE인테그린(αEintegrin, CD103)의 유무에 관계없이 CD69가 발현되고, 스핑고신-1-인산 수용체(Sphingosine-1-phosphate receptor; S1PR1)와 쿠루펠-유사 인자(Kruppel-like factor 2; KLF2)가 적게 존재하는 특징을 가지는 상기 TRM 세포는 재발된 병원체에 신속하게 반응한다. 또한, 상기 TRM 세포는 피부, 폐, 위장관 및 생식기, 뇌, 신장 등 비 림프 성 조직에서 흔히 발견되며, 쥐와 사람의 간에서 발견된다.
한편, CD69와 함께 TRM 세포를 확인하기 위한 중요한 표지자 중 하나인 CD103은 간 세포와 같은 상피세포에서 발현되는 E-카드헤린(E-cadherin)을 인식하기 위해 β7 인테그린과 이종 이량체를 형성하는 αE 인테그린으로서, 돌기세포, 선천적인 림프 세포, 비만 세포 및 T 세포를 포함한 다양한 면역 세포에서 발견되며, CD8+ T 세포에서 조직 위치 및 변형 성장 인자-β(transforming growth factor-β; TGF-β)에 대한 노출에 따라 발현이 증가된다. 마우스 간의 TRM 세포는 CD103을 발현하지 않지만, 세포 독성이 감소되어 있는 것으로 알려진 인간 간의 CD69+CD8+ 메모리 T 세포의 약 95%는 CD103- 세포 서브세트이고, 나머지 5%는 CD103+ 세포 서브세트로 구성되어 있다. 상기 CD103+ 세포 서브세트의 경우, TEM 표현형을 나타내고, HBV 자극에 의해 자극되는 경우 인터루킨-2(Interleukin-2; IL-2)와 같은 사이토카인을 생산한다.
이와 같이, CD69+CD8+ 메모리 T 세포의 서브세트 중 CD103+ 의 특징을 가지는 세포의 특징에 대한 연구가 다양하게 진행된 반면, 현재까지 CD103- 의 특징을 가지는 세포의 특징과 이와 관련된 질환의 예방 또는 치료에 대한 연구는 아직까지 미비한 실정이다.
본 발명의 일 목적은 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 CD8+ T 세포 매개성 질환 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 CD8+ T 세포 노화 측정용 조성물 및 이를 포함하는 키트를 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명자들은 간에서 HIF-2α(Hypoxia Inducible Factors 2α) 단백질이 높은 수준으로 존재하는 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포가 조직 상주 기억 T 세포인 것에 착안하여, 상기 HIF-2α 단백질의 발현 또는 활성을 특이적으로 억제하는 경우, 간의 CD8+ T 세포 중에서 주로 기능하는 집단인 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 사멸을 유도하거나, 그 기능을 억제시킴으로써 CD8+ 메모리 T 세포 관련 질환을 예방 또는 치료할 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다. 나아가, 상기 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포는 텔로미어의 길이가 짧고, 말단이 분화되어 있으므로, HIF-2α 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자가 존재하는 수준을 측정함으로써 CD8+ 메모리 T 세포의 노화를 측정할 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 일 구현 예는 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 HIF-2α(Hypoxia Inducible Factors 2α) 단백질의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함한다.
본 발명의 상기 HIF-2α 단백질은 EPAS1 유전자에 의해 암호화되는 단백질로서, 저산소 상태에서 이용 가능한 산소가 감소하는 현상에 반응하는 전사 인자(Transcriptional factor) 활성을 갖는다. 상기 HIF-2α 단백질은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있고, 상기 EPAS1 유전자는 서열번호 2로 표시되는 염기 서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 억제제는 CD8+ T 세포의 집단 중에서, CD8+CD103-CD69+ 메모리 T 세포의 선택적인 사멸을 유도하거나, 그 기능을 효과적으로 억제할 수 있다.
본 발명의 상기 CD8+CD103-CD69+ 메모리 T 세포는, CD8+ T 세포 중에서 주로 기능하는 집단으로서, CD8+CD103+CD69+ 메모리 T 세포에 비하여, 세포 내 HIF-2α 단백질이 높은 수준으로 존재한다는 특징을 갖는다. 또한, 상기 세포는 TCR(T cell receptor) 자극에 의한 활성을 유지하며 세포가 잘 사멸되지 않으며, 세포의 말단이 분화되어 있고 텔로미어의 길이가 짧은 특징을 갖는다. 따라서, CD8+CD103-CD69+ 메모리 T 세포에 높은 수준으로 존재하는 HIF-2α 단백질의 발현 또는 활성을 억제함으로써 CD8+ 메모리 T 세포의 선택적인 사멸을 유도하거나, 그 기능을 효과적으로 억제함으로써 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료 효과가 발휘되도록 할 수 있다.
본 발명의 상기 억제제는 HIF-2α 단백질의 발현 또는 활성을 억제할 수 있는 것이라면 모두 포함될 수 있고, 예를 들면 올리고뉴클레오티드, 항체, 항원 결합 단편, 앱타머 및 화학 물질로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 화학 물질은 하기 화학식 1 내지 7로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것일 수 있고, 바람직하게는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
[화학식 1]
Figure pat00001
[화학식 2]
Figure pat00002
[화학식 3]
Figure pat00003
[화학식 4]
Figure pat00004
[화학식 5]
Figure pat00005
[화학식 6]
Figure pat00006
[화학식 7]
Figure pat00007
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 (S)-3-((2,2-디플루오르-1-하이드록시-7-(메틸설포닐)-2,3-디하이드로-1H-인덴-4-일)옥시)-5-플루오르벤조니트릴 ((S)-3-((2,2-difluoro-1-hydroxy-7-(methylsulfonyl)-2,3-dihydro-1H-inden-4-yl)oxy)-5-fluorobenzonitrile), 상기 화학식 2로 표시되는 화합물은 7-((디플루오르메틸)설포닐)-2,2-디플루오르-4-(3-플루오르-5-이소시아노페녹시)-2,3-디하이드로-1H-인덴-1-올(7-((difluoromethyl)sulfonyl)-2,2-difluoro-4-(3-fluoro-5-isocyanophenoxy)-2,3-dihydro-1H-inden-1-ol), 상기 화학식 3으로 표시되는 화합물은 7-(에틸설포닐)-2,2-디플루오르-4-(3-플루오르-5-이소시아노페녹시)-2,3-디하이드로-1H-인덴-1-올(7-(ethylsulfonyl)-2,2-difluoro-4-(3-fluoro-5-isocyanophenoxy)-2,3-dihydro-1H-inden-1-ol), 상기 화학식 4로 표시되는 화합물은 2,2-디플루오르-4-(3-플루오르-5-이소시아노페녹시)-7-(메틸설포닐)-2,3-디하이드로-1H-인덴-1-올(2,2-difluoro-4-(3-fluoro-5-isocyanophenoxy)-7-(methylsulfonyl)-2,3-dihydro-1H-inden-1-ol), 상기 화학식 5로 표시되는 화합물은 2,2-디플루오르-4-(3-플루오르-5-이소시아노페녹시)-7-(메틸설포닐)-2,3-디하이드로-1H-인덴-1-아민(2,2-difluoro-4-(3-fluoro-5-isocyanophenoxy)-7-(methylsulfonyl)-2,3-dihydro-1H-inden-1-amine), 상기 화학식 6으로 표시되는 화합물은 3-((2-클로로-2-플루오르-1-하이드록시-7-(메틸설포닐)-2,3-디하이드로-1H-인덴-4-일)옥시)-5- 플루오르벤조니트릴(3-((2-chloro-2-fluoro-1-hydroxy-7-(methylsulfonyl)-2,3-dihydro-1H-inden-4-yl)oxy)-5-fluorobenzonitrile) 및 상기 화학식 7로 표시되는 화합물은 3-((2-클로로-2-플루오르-7-(메틸설포닐)-1-옥소-2,3-디하이드로-1H-인덴-4-일)옥시)-5-플루오르벤조니트릴(3-((2-chloro-2-fluoro-7-(methylsulfonyl)-1-oxo-2,3-dihydro-1H-inden-4-yl)oxy)-5-fluorobenzonitrile) 일 수 있다.
본 발명의 상기 올리고뉴클레오티드는 예를 들면, 상기 HIF-2α의 mRNA에 특이적으로 결합할 수 있는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 앱타머(aptamer), shRNA 및 siRNA 등 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 올리고뉴클레오티드는 수개 내지 수십 개의 염기 서열이 공유결합을 통해 중합되어 형성된 중합체로서, mRNA에 상보적으로 결합되어 mRNA를 분해하거나, mRNA가 단백질로 번역되는 것을 방해하는 기능을 할 수 있는 것일 수 있다. 본 발명의 상기 올리고뉴클레오티드는 HIF-2α의 mRNA의 염기 서열인 서열번호 2를 참조하여 당해 기술 분야에서 통상이 지식을 가진 자가 공지되어 있는 방법에 의해 쉽게 제작될 수 있다.
본 발명의 상기 억제제는 HIF-2α 단백질의 활성을 억제할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 앱타머로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 구체적으로, 본 발명의 상기 단백질의 활성을 억제하는 것은, 상기 HIF-2α 단백질이 갖는 전사 인자로서의 기능을 억제할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명의 상기 항체는 면역학적으로 특정 항원과 반응성을 갖는 면역 글로불린 분자를 포함하는 단백질 분자로, 체내에 특정 항원이 침입한 경우 이를 특이적으로 인식하여 반응하는 항원 수용체 역할을 하는 단백질 분자를 의미한다. 나아가, 본 발명의 항체에는 인간화 항체 등의 특수 항체 및 인간 항체 등도 포함하며, 신규한 항체 외에 이미 당해 기술분야에서 공지된 항체들도 포함될 수 있다. 상기 항체는 HIF-2α 단백질을 특이적으로 인식하는 결합의 특성을 갖는 한, 2개의 중쇄와 2개의 경쇄 의 전체 길이를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라, 항체 분자의 기능적인 단편을 포함한다. 항체의 분자의 기능적인 단편이란, 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며, Fab, F(ab'), F(ab')2 및 Fv 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 상기 항체는 상기 HIF-2α 단백질의 아미노산 서열인 서열번호 1을 참조하여 당해 기술 분야에서 통상이 지식을 가진 자가 공지되어 있는 방법에 의해 쉽게 제작될 수 있다.
본 발명의 상기 앱타머는 단일 가닥 뉴클레오티드를 의미하는 것으로, 소정의 표적 분자에 대한 결합 활성을 갖는 핵산 분자를 의미한다. 상기 앱타머는 그 염기 서열에 따라 다양한 3차원 구조를 가질 수 있으며, 항원-항체 반응과 같이 특정 물질에 대한 높은 친화력을 가질 수 있고, 표적 분자에 결합되어 표적 분자의 활성을 저해하는 역할을 할 수 있다. 본 발명의 상기 앱타머는 상기 HIF-2α 단백질의 아미노산 서열인 서열번호 1을 참조하여 당해 기술 분야에서 통상이 지식을 가진 자가 공지되어 있는 방법에 의해 쉽게 제작될 수 있다.
본 발명의 상기 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환이란, CD8+ 메모리 T 세포가 정상 조직을 공격함으로써 발생될 수 있는 질환으로서, 예를 들면 간에서 비 정상적인 수준으로 존재하거나, 간에 과도하게 축적된 CD8+ 메모리 T 세포에 의해 유발된 간 질환일 수 있고, 바람직하게는 상기 간 질환은 원발성 담즙성 간경변(primary biliary cirrhosis), 원발성 경화성 담관염(primary sclerosing cholangitis), 자가 면역성 간염(Autoimmune hepatitis), 비 알코올성 지방간 질환(Human Nonalcoholic Fatty Liver Disease), 급성 간염(acute hepatitis) 및 간 섬유화(Hepatic Fibrogenesis)로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환이 발생될 수 있는 간은 면역 반응과 관련된 매우 독특한 세포 집단을 갖는 기관으로서, 쿠퍼 세포(Kupffer cell), 자연 살해 세포(Natural killer cell) 및 점막 관련 불변 T 세포(mucosal-associated invariant T cell)와 같은 세포들이 축적될 수 있다. 이와 같은 이유로, CD8+ 메모리 T 세포에 의한 항원 제시가 간에서 국소적으로 일어나는 경우 자가 면역 반응이 유도될 수 있다(Nat Rev Dis Primers. 2018 Apr 12;4:18017 참고). 또한, 간에 축적된 CD8+ 메모리 T 세포는 정상인에 비하여 염증성 사이토카인을 매우 높은 수준으로 생성시켜 원발성 담즙성 간경변을 유도할 수 있다(Gastroenterology. 2014 Jul;147(1):221-232 참고). 또한, 정상인에 비하여 원발성 담즙성 간경변, 비 알코올성 지방간과 같은 질환에서 높은 수준으로 CD8+ 메모리 T 세포가 존재한다(Annu Rev Pathol. 2013 Jan 24;8:303-30, Biomed Res Int. 2017, 2017 : 6862439 및 Hepatology. 2014 Apr;59(4):1393-405 참고). 나아가, 쥐에서 CD8+ T 세포의 증가는 쥐의 간 섬유화와 관련이 있다(Gastroenterology. 2004 Sep;127(3):870-82 참고). 상기 약학 조성물은 CD8+ 메모리 T 세포의 집단에서 주로 기능하는 CD8+CD103-CD69+ 메모리 T 세포를 특이적으로 표적하여, 세포의 사멸을 유도하거나 그 기능을 억제할 수 있기 때문에, CD8+ T 세포에 의해 매개된 상기와 같은 질환의 예방 또는 치료에 매우 효과적으로 사용될 수 있다.
한편, 본 발명의, "예방"은 본 발명의 약학 조성물을 이용하여 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환으로 인해 발생한 증상을 차단하거나, 그 증상을 억제 또는 지연시키는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의, "치료"는 본 발명의 약학 조성물을 이용하여 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환으로 인해 발생한 증상이 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 캡슐, 정제, 과립, 주사제, 연고제, 분말 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사 용액의 형태로 제형화되어 사용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등이 사용될 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등이 혼합되어 사용될 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형화할 수 있다.
한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말디톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항 응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다.
본 발명의 상기 "비경구"란, 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입기술을 포함한다. 본 발명의 약학 조성물은 또한 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여 시간, 투여 경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약무 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 50mg/kg 또는 0.001 내지 50mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 의약 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형화될 수 있다.
본 발명의 다른 구현 예는 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 상기 식품 조성물은, 상기 약학 조성물에 기재된 HIF-2α 단백질의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하여 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방 또는 개선 효과를 발휘할 수 있다. 따라서, HIF-2α, 발현 또는 활성 억제제, CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환 및 예방과 관련된 내용은 반복 기재에 따른 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
한편, 본 발명의, "개선"은 본 발명의 식품 조성물을 이용하여 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환으로 인해 발생한 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 억제제를 유효성분으로 포함하는 식품 조성물은 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 과자, 떡, 빵 등의 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 상기 억제제가 식품 조성물에 포함될 때 그 양은 전체 중량의 0.1 내지 50%의 비율로 첨가할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 식품 조성물이 음료 형태로 제조되는 경우 지시된 비율로 상기 식품 조성물을 포함하는 것 외에 특별한 제한점은 없으며, 통상의 음료와 같이 다양한 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 구체적으로, 천연 탄수화물로서 포도당 등의 모노사카라이드, 과당 등의 디사카라이드, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜 등을 포함할 수 있다. 상기 향미제로서는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등) 등일 수 있다.
본 발명의 상기 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 성분은 독립적 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 본 발명의 핵심적인 요소에 해당하지 아니하지만, 본 발명의 식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 50 중량부의 범위에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현 예는 CD8+ T 세포 매개성 질환 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명의 상기 스크리닝 방법은 우선, CD8+ 메모리 T 세포 또는 그 배양액에 목적하는 후보물질을 처리하는 단계를 포함한다.
본 발명의 상기 CD8+ 메모리 T 세포 집단의 표현형은 CD69+CD103-CD8+의 표현형을 나타내는 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포일 수 있고, 상기 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포는 세포의 말단이 분화되어 있고, 텔로미어의 길이가 짧은 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포는 생물학적 시료로부터 유세포분석기를 통해 선별되어, 시험관 내에서 배양됨으로써 얻어지는 것일 수 있다.
본 발명의 상기 생물학적 시료는 개체로부터 얻어지거나 개체로부터 유래된 임의의 물질, 생물학적 체액, 조직 또는 세포를 의미하는 것으로, 예를 들면, 전혈(whole blood), 백혈구(leukocytes), 말초혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cells), 백혈구 연층(buffy coat), 혈장(plasma) 및 혈청(serum)을 포함하는) 혈액, 객담(sputum), 눈물(tears), 점액(mucus), 세비액(nasal washes), 비강 흡인물(nasal aspirate), 호흡(breath), 소변(urine), 정액(semen), 침(saliva), 복강 세척액(peritoneal washings), 골반 내 유체액(pelvic fluids), 낭종액(cystic fluid), 뇌척수막 액(meningeal fluid), 양수(amniotic fluid), 선액(glandular fluid), 췌장액(pancreatic fluid), 림프액(lymph fluid), 흉수(pleural fluid), 유두 흡인물(nipple aspirate), 기관지 흡인물(bronchial aspirate), 활액(synovial fluid), 관절 흡인물(joint aspirate), 기관 분비물(organ secretions), 세포(cell), 세포 추출물(cell extract) 또는 뇌척수액(cerebrospinal fluid)을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 후보물질은 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환을 치료하기 위한 활성이 존재하는지 여부에 대해 테스트하기 위한 약제를 의미하며, 단백질, 올리고펩티드, 소형 유기 분자, 다당류, 폴리뉴클레오타이드 및 광범위한 화합물 등의 임의 분자를 포함한다. 이러한 후보 물질은 또한 천연 물질뿐만 아니라 합성 물질을 모두 포함한다.
본 발명의 상기 스크리닝 방법은, 상기 후보물질의 처리 후 상기 CD8+ 메모리 T 세포 또는 그 배양액에서 HIF-2α 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 확인하는 단계를 포함한다.
본 발명의 상기 HIF-2α 단백질이 존재하는 수준을 확인하는 단계는 상기 단백질에 특이적인 항체를 포함하는 단백질 수준을 측정하는 제제를 이용하여, 웨스턴 블롯, ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), 방사선 면역 분석법 (radioimmunoassay, RIA), 방사선 면역 확산법 (radioimmunodiffusion), 오우크테로니(ouchterlony) 면역확산법, 로케트 (rocket) 면역 전기 영동, 면역 침전 분석법 (immunoprecipitation assay), 보체 고정 분석법 (complement fixation assay), 유세포분석(FACS) 및 단백질 칩 (protein chip)등에 의해 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 상기 항체는 HIF-2α의 아미노산 서열인 서열번호 1을 참조하여 당해 기술 분야에서 통상이 지식을 가진 자가 공지되어 있는 방법에 의해 쉽게 제작될 수 있다.
본 발명의 상기 HIF-2α 단백질을 암호화하는 유전자가 존재하는 수준을 확인하는 단계는 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머(primer) 쌍, 프로 (probe), 안티센스(anti-sense) 뉴클레오티드를 이용하여, 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction), 형광상관분석법(fluorescence correlation spectroscopy), 마이크로어레이(microarray), 칩어세이(chip-assay) 등에 의해 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 상기 프라이머 쌍, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드는 HIF-2α를 암호화하는 염기서열인 서열번호 2를 참조하여 당해 기술 분야에서 통상이 지식을 가진 자가 공지되어 있는 방법에 의해 쉽게 제작될 수 있다.
본 발명의 상기 스크리닝 방법은, 상기 후보물질의 처리 후 측정된 HIF-2α 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준이 후보물질 처리 전에 비하여 감소한 경우 상기 후보물질을 CD8+ T 세포 매개성 질환 치료제로 판단하는 단계를 더 포함한다.
본 발명의 스크리닝 방법에서, 상기 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포, CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환, HIF-2α 등과 관련된 내용은 반복 기재에 따른 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 또 다른 구현 예는 CD8+ T 세포 노화 측정용 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 노화 측정용 조성물은 HIF-2α 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자가 존재하는 수준을 측정하는 제제를 포함한다.
본 발명의 상기 노화 측정용 조성물은, 상기 약학 조성물에 기재된 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에서 높은 수준으로 발현되는 HIF-2α 단백질 또는 그를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 확인하여 텔로미어의 길이가 짧아져 있고, 말단이 분화된 특징을 갖는 노화된 CD8+ 메모리 T 세포를 측정할 수 있다.
본 발명의 상기 노화 측정용 조성물에서, 상기 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포, HIF-2α 등과 관련된 내용은 반복 기재에 따른 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 또 다른 구현 예는 CD8+ T 세포 노화 측정용 키트를 제공한다.
본 발명의 상기 노화 측정용 키트는, 상기 약학 조성물에 기재된 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에서 높은 수준으로 발현되는 HIF-2α 단백질 또는 그를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 확인하여 텔로미어의 길이가 짧아져 있고, 말단이 분화된 특징을 갖는 노화된 CD8+ 메모리 T 세포를 측정하는 노화 측정용 조성물을 포함한다.
본 발명의 상기 노화 측정용 키트에서, 상기 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포, HIF-2α 등과 관련된 내용은 반복 기재에 따른 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 상기 키트는 상기 키트는 RT-PCR 키트, DNA 칩 키트, 마이크로어레이 또는 단백질 칩 키트일 수 있고, 상기 노화 측정용 조성물을 사 용하여 당업계에서 사용되는 통상의 방법에 따라 제조할 수 있다.
본 발명의 상기 키트는 상기 노화 측정용 조성물 외에, 분석 방법에 적합한 1종 이상의 다른 구성성분 조성물, 용액, 또는 장치가 더 포함될 수 있다.
[서열목록]
서열번호 1: HIF-2 alpha 아미노산 서열
MTADKEKKRSSSERRKEKSRDAARCRRSKETEVFYELAHELPLPHSVSSHLDKASIMRLA
ISFLRTHKLLSSVCSENESEAEADQQMDNLYLKALEGFIAVVTQDGDMIFLSENISKFMG
LTQVELTGHSIFDFTHPCDHEEIRENLSLKNGSGFGKKSKDMSTERDFFMRMKCTVTNRG
RTVNLKSATWKVLHCTGQVKVYNNCPPHNSLCGYKEPLLSCLIIMCEPIQHPSHMDIPLD
SKTFLSRHSMDMKFTYCDDRITELIGYHPEELLGRSAYEFYHALDSENMTKSHQNLCTKG
QVVSGQYRMLAKHGGYVWLETQGTVIYNPRNLQPQCIMCVNYVLSEIEKNDVVFSMDQTE
SLFKPHLMAMNSIFDSSGKGAVSEKSNFLFTKLKEEPEELAQLAPTPGDAIISLDFGNQN
FEESSAYGKAILPPSQPWATELRSHSTQSEAGSLPAFTVPQAAAPGSTTPSATSSSSSCS
TPNSPEDYYTSLDNDLKIEVIEKLFAMDTEAKDQCSTQTDFNELDLETLAPYIPMDGEDF
QLSPICPEERLLAENPQSTPQHCFSAMTNIFQPLAPVAPHSPFLLDKFQQQLESKKTEPE
HRPMSSIFFDAGSKASLPPCCGQASTPLSSMGGRSNTQWPPDPPLHFGPTKWAVGDQRTE
FLGAAPLGPPVSPPHVSTFKTRSAKGFGARGPDVLSPAMVALSNKLKLKRQLEYEEQAFQ
DLSGGDPPGGSTSHLMWKRMKNLRGGSCPLMPDKPLSANVPNDKFTQNPMRGLGHPLRHL
PLPQPPSAISPGENSKSRFPPQCYATQYQDYSLSSAHKVSGMASRLLGPSFESYLLPELT
RYDCEVNVPVLGSSTLLQGGDLLRALDQAT
서열번호 2: EPAS1 유전자
1 acactcgcga gcggaccgcc acacgggtcc ggtgcccgct gcgcttccgc cccagcgctc
61 ctgaggcggc cgtacaatcc tcggcagtgt cctgagactg tatggtcagc tcagcccggc
121 ctccgactcc ttccgactcc cagcattcga gccacttttt tttttctttg aaaactcaga
181 aaagtgactc cttttccagg gaaaaaggaa cttgggttcc cttctctccg tcctcttttc
241 gggtctgaca gcctccaccc actccttccc cggaccccgc ctccgcgcgc aggttcctcc
301 cagtcacctt tctccacccc cgcccccgca cctagcccgc cgcgcgccac cttccacctg
361 actgcgcggg gcgctcggga cctgcgcgca cctcggacct tcaccacccg cccgggccgc
421 ggggagcgga cgagggccac agccccccac ccgccaggga gcccaggtgc tcggcgtctg
481 aacgtctcaa agggccacag cgacaatgac agctgacaag gagaagaaaa ggagtagctc
541 ggagaggagg aaggagaagt cccgggatgc tgcgcggtgc cggcggagca aggagacgga
601 ggtgttctat gagctggccc atgagctgcc tctgccccac agtgtgagct cccatctgga
661 caaggcctcc atcatgcgac tggcaatcag cttcctgcga acacacaagc tcctctcctc
721 agtttgctct gaaaacgagt ccgaagccga agctgaccag cagatggaca acttgtacct
781 gaaagccttg gagggtttca ttgccgtggt gacccaagat ggcgacatga tctttctgtc
841 agaaaacatc agcaagttca tgggacttac acaggtggag ctaacaggac atagtatctt
901 tgacttcact catccctgcg accatgagga gattcgtgag aacctgagtc tcaaaaatgg
961 ctctggtttt gggaaaaaaa gcaaagacat gtccacagag cgggacttct tcatgaggat
1021 gaagtgcacg gtcaccaaca gaggccgtac tgtcaacctc aagtcagcca cctggaaggt
1081 cttgcactgc acgggccagg tgaaagtcta caacaactgc cctcctcaca atagtctgtg
1141 tggctacaag gagcccctgc tgtcctgcct catcatcatg tgtgaaccaa tccagcaccc
1201 atcccacatg gacatccccc tggatagcaa gaccttcctg agccgccaca gcatggacat
1261 gaagttcacc tactgtgatg acagaatcac agaactgatt ggttaccacc ctgaggagct
1321 gcttggccgc tcagcctatg aattctacca tgcgctagac tccgagaaca tgaccaagag
1381 tcaccagaac ttgtgcacca agggtcaggt agtaagtggc cagtaccgga tgctcgcaaa
1441 gcatgggggc tacgtgtggc tggagaccca ggggacggtc atctacaacc ctcgcaacct
1501 gcagccccag tgcatcatgt gtgtcaacta cgtcctgagt gagattgaga agaatgacgt
1561 ggtgttctcc atggaccaga ctgaatccct gttcaagccc cacctgatgg ccatgaacag
1621 catctttgat agcagtggca agggggctgt gtctgagaag agtaacttcc tattcaccaa
1681 gctaaaggag gagcccgagg agctggccca gctggctccc accccaggag acgccatcat
1741 ctctctggat ttcgggaatc agaacttcga ggagtcctca gcctatggca aggccatcct
1801 gcccccgagc cagccatggg ccacggagtt gaggagccac agcacccaga gcgaggctgg
1861 gagcctgcct gccttcaccg tgccccaggc agctgccccg ggcagcacca cccccagtgc
1921 caccagcagc agcagcagct gctccacgcc caatagccct gaagactatt acacatcttt
1981 ggataacgac ctgaagattg aagtgattga gaagctcttc gccatggaca cagaggccaa
2041 ggaccaatgc agtacccaga cggatttcaa tgagctggac ttggagacac tggcacccta
2101 tatccccatg gacggggaag acttccagct aagccccatc tgccccgagg agcggctctt
2161 ggcggagaac ccacagtcca ccccccagca ctgcttcagt gccatgacaa acatcttcca
2221 gccactggcc cctgtagccc cgcacagtcc cttcctcctg gacaagtttc agcagcagct
2281 ggagagcaag aagacagagc ccgagcaccg gcccatgtcc tccatcttct ttgatgccgg
2341 aagcaaagca tccctgccac cgtgctgtgg ccaggccagc acccctctct cttccatggg
2401 gggcagatcc aatacccagt ggcccccaga tccaccatta cattttgggc ccacaaagtg
2461 ggccgtcggg gatcagcgca cagagttctt gggagcagcg ccgttggggc cccctgtctc
2521 tccaccccat gtctccacct tcaagacaag gtctgcaaag ggttttgggg ctcgaggccc
2581 agacgtgctg agtccggcca tggtagccct ctccaacaag ctgaagctga agcgacagct
2641 ggagtatgaa gagcaagcct tccaggacct gagcgggggg gacccacctg gtggcagcac
2701 ctcacatttg atgtggaaac ggatgaagaa cctcaggggt gggagctgcc ctttgatgcc
2761 ggacaagcca ctgagcgcaa atgtacccaa tgataagttc acccaaaacc ccatgagggg
2821 cctgggccat cccctgagac atctgccgct gccacagcct ccatctgcca tcagtcccgg
2881 ggagaacagc aagagcaggt tccccccaca gtgctacgcc acccagtacc aggactacag
2941 cctgtcgtca gcccacaagg tgtcaggcat ggcaagccgg ctgctcgggc cctcatttga
3001 gtcctacctg ctgcccgaac tgaccagata tgactgtgag gtgaacgtgc ccgtgctggg
3061 aagctccacg ctcctgcaag gaggggacct cctcagagcc ctggaccagg ccacctgagc
3121 caggccttct acctgggcag cacctctgcc gacgccgtcc caccagcttc actctctccg
3181 tctgtttttg caactaggta tttctaacgc cagcacacta tttacaagat ggacttacct
3241 ggcagacttg cccaggtcac caagcagtgg cctttttctg agatgctcac tttattatcc
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본 발명에 따른 조성물은 간에 존재하는 CD8+ 메모리 T 세포 중에서 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포가 조직 상주 집단(Subpopulation)인 것에 기초하여, 상기 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에만 특이적으로 높은 수준으로 존재하는 HIF-2α의 발현 수준 또는 활성을 억제함으로써 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 사멸을 유도하거나, 상기 세포의 기능을 효율적으로 억제시킬 수 있다. 나아가, 이와 같은 효과를 통해 CD8+ 메모리 T 세포 매개성 질환의 예방, 개선 또는 치료에 매우 유용하게 적용될 수 있다.
도 1 및 도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 만성 HBV 감염이 있는 이식 환자의 LSMCs에서 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 항원 특이성을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 다양한 바이러스 감염이 있는 환자의 LSMCs에서 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 항원 특이성을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 4 및 도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 비 간염 바이러스 특이성을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 6 내지 도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에서 특이적으로 발현되는 유전자의 종류를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 CD69+CD8+ 메모리 T 세포에서 특이적으로 발현되는 유전자의 발현을 중합효소연쇄반응을 통해 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 12는 본 발명의 일 실시예에 따른 HIF-2α 단백질이 CD69+CD103+CD8+ 메모리 T 세포에 비하여, CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에 특이적으로 높은 수준으로 존재하는 것을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 13의 A 및 B는 본 발명의 일 실시예에 따른 HIF-2α 억제제(PT-2385) 처리에 의해 만성 HBV 감염 환자의 LSMCs로부터 분리된 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 선택적 사멸과, 그 기능의 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 14는 본 발명의 일 실시예에 따른 급성 바이러스 감염에서 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 표현형을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
하기 실시예는 세브란스 병원(서울, 한국)의 기관 검토위원회에서 검토 및 승인되었으며, 헬싱키 선언의 원칙에 따라 수행하였으며, 모든 연구 대상자의 동의를 얻었다.
[준비예 1] 간 관류액 및 말초 혈액으로부터 단핵 세포 분리
6명의 만성 HBV 감염이 있는 간 이식 환자로부터 간 관류액 및 말초 혈액을 채취한 뒤에 여과하였다. 그런 다음, 여과된 간 관류액과 말초 혈액을 원심분리하였다. 이후, Ficoll-Paque(GE Healthcare, USA)로 간 시누소이드 단핵 세포(liver sinusoidal mononuclear cell; LSMCs, 이하, 'LSMCs'라 함)와 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cells; PBMCs, 이하, 'PBMCs'라함)를 분리하고, 우태아 혈청(fetal bovine serum; FBS)을 포함하는 10 % 디메틸 설폭사이드(Dimethyl sulfoxide; DMSO) (Sigma-Aldrich, USA)를 사용하여, 상기 분리된 LSMCs 및 PBMCs를 동결시켰다.
[준비예 2] 조직 침윤 림프구 분석을 위한 종양 조직의 준비
4명의 급성 A형 간염 환자는 코어 니들 생검에 의하여 채취하였고, 5명의 만성 HBV 환자는 간 이식을 하는 동안 채취하였다.
면역 형광 염색을 위하여, 상기 조직들을 4 %의 파라포름 알데히드로 2시간 동안 고정시킨 뒤, 20%의 수크로스가 포함된 PBS(phosphate-buffered saline)로 탈수시켰다. 그런 다음, FSC 22 동결 절편 화합물 (Leica)에 박혀있는 상기 조직을 -70 ℃의 냉동고에 보관하였다.
또한, 유세포 분석(Flow cytometry)을 위해, 종양 해리 키트(Miltenyi Biotec, 독일) 및 GentleMACSTM 디소시에이터(Dissociator)를 사용하여, 상기 조직으로부터 단핵 세포 현탁액을 제조하였다.
[준비예 3] T 세포 분리
CD8+ T 세포 분리 키트(Miltenyi Biotec, 독일)를 사용하여, LSMCs PBMCs로부터 CD8+ T 세포를 분리하였다. 그리고, CD69+ 마이크로 비드 키트 Ⅱ(Miltenyi Biotec, 독일)를 사용하여, 상기 분리된 CD8+ T 세포로부터 CD69+CD8+ T 세포를 추가로 분리하였다.
[실시예 1] 만성 HBV 감염이 있는 간 이식 환자의 LSMCs에서 CD69 + CD103 - CD8 + 메모리 T 세포의 항원 특이성 확인
인간 백혈구 항원(Human leukocyte antigen; HLA) 클래스 I 펜타머(pentamers)를 사용하여 만성 HBV 감염이 있는 간 이식 환자로부터 분리된 LSMCs의 항원 특이성을 확인하였다.
실온에서 15분 동안 HLA 클래스 I 멀티머를 이용하여, 해동된 LSMCs를 염색하였다. 그런 다음, 형광이 결합되어 있는 측정하고자 하는 항원에 특이적인 항체들을 상기 세포들과 함께 실온에서 10분 동안 반응시켰다.
LSR Ⅱ 다색 유세포분석기(multicolor flow cytometer)(BD Biosciences, USA)를 이용하여 분석을 수행하였으며, 모든 CD8+ T 세포의 게이팅은 TCRγ/δ+γδ T 세포 및 TCRα7.2+CD161+ 점막-관련 불변 T(mucosal-associated invariant T; MAIT) 세포가 제외될 수 있도록 하였다.
이렇게 얻어진 결과 데이터의 분석은 FlowJo 소프트웨어(Treestar)를 이용하였으며, 그 결과를 도 1 및 2에 나타내었다.
도 1에 도시된 바와 같이, HBV에 특이적인 LSMCs의 CD69+CD8+ T 세포의 집단에서 CD103- 세포 서브세트 및 CD103+ 세포 서브세트 모두가 존재하는 것을 확인하였다.
또한, 도 2에 도시된 바와 같이, HBV에 특이적인 LSMCs의 CD69+CD8+ T 세포의 집단 중에서 CD103+ 세포 서브세트와 비교하여, CD103- 세포 서브세트에서 T 세포의 말단 분화와 관련된 지표인 TEMRA 세포, CD57+ 세포 및 T-betlowEomeshi 세포가 존재하는 빈도가 더욱 높은 것을 확인하였다.
한편, 인플루엔자 A 바이러스(influenza A virus, IAV), 호흡기 세포 융합 바이러스(respiratory syncytial virus, RSV), 거대 세포 바이러스(cytomegalovirus, CMV) 및 엡스타인 바 바이러스(Epstein-Barr virus, EBV)와 같은 비 간염 바이러스(non-hepatotropic virus)에 특이적인 LSMCs로부터 분리된 CD69+CD8+ T 세포의 서브세트를 확인한 결과, 도 3에 도시된 바와 같이, CD103- 세포 서브세트만이 특이적으로 존재하는 것을 확인하였다.
상기 결과를 통해, CD103- 세포 서브세트는 복제학적으로 노화된 T 세포이며, CD103+ 세포 서브세트에 비하여 세포 증식이 적은 반면, 세포 사멸도 잘 일어나지 않음으로써 CD69+CD8+ 메모리 T 세포 서브세트에서 다수로 존재할 수 있고, CD103- 세포 서브세트는 간염 바이러스뿐만 아니라, 비 간염 바이러스 특이성이 있음을 알 수 있다.
[실시예 2] 간 조직에서 분리된 CD69 + CD8 + 메모리 T 세포의 항원 특이성 확인
상기 실시예 1에서 확인된 CD103- 세포 서브세트가 가지는 비 간염 바이러스 특이성이 HBV 감염에 특이적인 것인지 확인하기 위하여, 상기 준비예 2에서 조직으로부터 분리된 CD69+CD8+ 메모리 T 세포에서 상기 실시예 1에 기재된 방법과 동일한 방법으로 유세포 분석을 수행하였다.
도 4에 도시된 바와 같이, CD69+CD8+ 메모리 T 세포 중에서 CD103- 세포 서브세트는 지배적인 집단으로서, CXCR6를 발현하는 것으로 확인되었다. 또한, 상기 CD103- 세포 서브세트에 CCR7-CD45RA+ TEMRA 세포가 응집되어 있는 것을 확인하였다. 이와 같은 결과는 간 관류액에서 분리된 세포에서 확인된 결과와 일치하였다.
또한, 도 5에 도시된 바와 같이, CMV에 특이적인 CD69+CD8+ 메모리 T 세포는 모두 CD103- 세포 서브세트인 반면, HBV에 특이적인 CD69+CD8+ 메모리 T 세포는 CD103- 세포 서브세트와 CD103+ 세포 서브세트가 모두 존재하였다.
상기 결과를 통해, CD69+CD8+ 메모리 T 세포 집단 중에서, HBV에는 CD103- 세포 서브세트와 CD103+ 세포 서브세트가 모두가 특이적인 반면, 비 간염 바이러스에는 CD103- 세포 서브세트만이 특이적인 것임을 알 수 있다.
[실시예 3] CD69 + CD103 - CD8 + 메모리 T 세포 내 존재하는 유전자의 종류 확인
CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에 존재하는 유전자의 종류를 확인하기 위하여, RNA 시퀀싱 및 마이크로 어레이를 통한 전사체 분석(transcriptome analysis)을 수행하였다.
RNeasy 키트(Qiagen, German)를 사용하여, LSMCs로부터 분류된 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포 및 CD69-CD103-CD8+ 메모리 T 세포로부터 전체 RNA를 각각 추출하였다. 그런 다음, 상기 각각의 전체 RNA를 정제, 증폭시킨 뒤에 역전사 과정을 통해 cDNA들을 합성하였다. 그런 다음, TruSeq RNA 접근 라이브러리 프렙 키트(Access library prep kit, Illumina, USA)를 사용하여 상기 cDNA들을 시퀀싱을 위한 라이브러리로 제작하였다. RNA 시퀀싱 분석은 Magrogen Inc.(Korea) 에서 수행하였으며, 구체적인 조건은 다음과 같다. 시퀀싱을 위한 기기는 HiSeq2500(Illumina, USA)를 사용하였다. 상기 시퀀싱 조건은 RAW 리드는 HISAT2 패키지를 통해 참조 게놈(UCSC.hg38)에 정렬되는 조건으로 설정되도록 하고, StringTie 패키지를 이용하여 정렬된 리드에서 사본 어셈블리를 생성하였으며, 유전자의 발현 프로파일은 백만 매핑 리드당 전사체의 킬로베이스당 단편으로 제시될 수 있도록 하였다.
또한, LSMC로부터 분류된 HLA-A*0201-CMVpp65495 펜타머+CD8+ T 세포로부터 전체 RNA를 추출하고, 역전사 과정을 통해 cDNA를 합성하였다. 그런 다음, 합성된 cDNA를 Cy3 염료로 표지하고, Agilent Human 4 X 44K 마이크로 어레이에 혼성화시켰다.
DEGseq R 패키지를 사용하여 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포와 CD69+CD103+CD8+ 메모리 T 세포 집단 내에서 발현의 차이가 나는 유전자를 식별하였다. 여기서, DEG로부터 기능적 에노테이션 정보를 얻기 위하여 DAVID 웹 툴을 사용하였다.
또한 GSEA(Gene set enrichment analysis)를 수행함으로써, CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포와 CD69+CD103+CD8+ 메모리 T 세포간의 표지 유전자 세트를 확인하였으며, 이렇게 확인된 유전자를 기 공개된 조직 상주 유전자 세트(tissue-resident gene sets) 및 최종 분화된 T 세포 유전자 세트(terminally differentiated T-cell gene sets)와 비교하였다.
도 6 내지 도 9에서 보는 바와 같이, CD69-CD103-CD8+ 메모리 T 세포에 비하여, CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포가 조직 거주와 최종 분화를 나타내는 유전적 특성을 더 많이 나타내었다(도 6). 또한, DEGs 분석을 통해 확인한 결과, CD69-CD103-CD8+ 메모리 T 세포에 비하여, CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에서 190개의 유전자가 현저하게 상승되었고, 751개의 유전자가 감소된 것을 확인하였다(도 7). 또한, 유전자 온톨로지 분석 및 히트맵 분석 결과, CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에서 케모카인의 활성이 증가되었으며, 림프구 활성화의 감소를 확인할 수 있었다(도 8 및 도 9).
도 10에서 보는 바와 같이, CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 RNA 시퀀싱 분석 결과와, 간 시누소이드 CMV-특이적 T 세포(liver sinusoidal CMV-specific T cell)의 마이크로어레이 분석 결과에서 유의미하게 발현이 증가된 12개의 중첩 유전자 리스트를 도출해내었다. 상기 12개의 중첩 유전자 중에서 HIF-2α단백질을 암호화하는 EPAS1 유전자만이 유일한 전사 인자에 해당함을 확인하였다.
상기 결과를 통해 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에서, 전사 인자인 HIF-2α 단백질과 그를 암호화하는 EPAS1 유전자의 발현이 특이적으로 높게 존재하는 것을 알 수 있다.
[실시예 4] CD69 + CD8 + 메모리 T 세포에 특이적으로 존재하는 유전자의 검증
PBMC의 전체 CD8+ 메모리 T 세포, LSMCS의 CD69+CD8+ 메모리 T 세포 및 LSMCs의 CD69-CD8+ 메모리 T 세포에서, HIF 표적 유전자, NDRG1 및 SLC2A1 유전자가 존재하는 수준을 정량적으로 확인하여, 그 결과를 도 11에 나타내었다. 여기서, 상기 각 세포들에서의 전체 RNA 추출을 위하여 RNeasy 키트(Qiagen, German)를 사용하였으며, 상기 유전자가 존재하는 수준을 정량적으로 확인하기 위해 상기 실시예 2에 기재된 실시간 정량 PCR과 동일한 방법을 수행하였다.
도 11에서 보는 바와 같이, PBMC의 전체 CD8+ 메모리 T 세포와 LSMCs의 CD69-CD8+ 메모리 T 세포에 비하여, CD69+CD8+ 메모리 T 세포에 특이적으로 HIF 표적 유전자인 HIF1A 유전자 및 EPAS1 유전자 중에서 EPAS1 유전자와 NDRG1 및 SLC2A1 유전자가 높은 수준으로 존재하는 것을 확인하였다.
[실시예 5] CD69 + CD103 - CD8 + 메모리 T 세포에서 HIF-2α의 존재 수준 검증
LSMCs의 CD69+CD8+ 메모리 T 세포의 CD103- 세포 서브세트와 CD103+ 세포 서브세트 중 어떠한 서브세트에 EPAS1 유전자에 의해 암호화되는 HIF-2α 단백질이 더 높은 수준으로 존재하는지 확인하기 위하여 상기 실시예 1에 기재된 방법과 동일한 유세포 분석을 수행하고, 그 결과를 도 12에 나타내었다.
도 12에서 보는 바와 같이, CD69+CD103+CD8+ 메모리 T 세포에 비하여 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포에서 특이적으로 HIF-2α 단백질이 존재하는 것을 확인하였다.
[실시예 6] 만성 HBV 감염 환자의 LSMCs로부터 분류된 CD69 + CD8 + 메모리 T 세포에서 활성 유지 및 세포 사멸 확인
만성 HBV 감염 환자로부터 얻어진 LSMCs의 CD69+CD8+ 메모리 T 세포의 CD103- 세포 서브세트와 CD103+ 세포 서브세트에서 TCR(T cell receptor) 반응성을 확인하였다. 세포를 자극하기 위하여, LSMCs 및 10%의 우태아혈청이 포함된 RPMI 배양액에 1μg/mL의 HBVcore 중첩 펩타이드를 처리하고, 1시간 동안 배양하였으며, Brefeldin A(BD Biosciences), monensin(BD Biosciences) 및 CD107a 항체(PE- 또는 FITC- 접합)를 추가로 첨가한 뒤, 5시간 동안 더 배양하였다. 그런 다음, 상기 배양이 완료된 세포를 세척한 뒤, 특정 표면 마커에 대한 형광이 접합되어 있는 항체를 넣고 배양하였다. 그런 다음, 상기 배양된 세포에서 세포 투과성을 수행하고, 세포 내 사이토카인(IFN-γ, IL-2, TNF-α)을 염색한 뒤, 유동세포계측법 분석을 수행하여, 그 결과를 도 13의 A 및 B에 나타내었다.
도 13의 A에서 보는 바와 같이, HIF-2α의 길항제인 PT-2385를 투여하는 경우, HBVcore 중첩 펩타이드로 자극된 CD69+CD8+메모리 T 세포 중에서, CD103+ 세포 서브세트에 비하여 CD103- 세포 서브세트에서 IFN-γ+ TNF+ 또는 IL-2+ 세포의 빈도가 현저하게 낮은 것을 확인하였다.
또한, 도 13의 B에서 보는 바와 같이, CD103- 세포 서브세트에서 HBVcore 중첩 펩타이드에 의해 유도된 사이토카인의 생성은 PT-2385의 투여에 의해 억제될 수 있으나, CD103+ 세포 서브세트에서는 PT-2385의 투여에도 불구하고 사이토카인의 생성이 억제되지 않았다.
상기 결과를 통해, CD8+ 메모리 T 세포에서 주로 기능을 담당하는 집단인 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 활성 유지와 세포의 생존에 HIF-2α가 필수적인 것임을 알 수 있다.
[실시예 7] 급성 바이러스 감염에서 CD69 + CD103 - CD8 + 메모리 T 세포의 표현형 확인
A형 급성 바이러스 감염 환자로부터 얻어진 LSMCs에서 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 빈도와 표현형을 상기 실시예 1에서와 동일한 방법을 통해 확인하여, 그 결과를 도 14에 나타내었다.
도 14에서 보는 바와 같이, 급성 A형 바이러스에 감염된 환자의 간으로부터 얻어진 CD69+CD8+ 메모리 T 세포의 95% 이상은 CD103- 세포 서브세트 인 것을 확인하였다. 또한, CD103+ 세포 서브세트에 비하여, 상기 CD103- 세포 서브세트에서는 TEMRA 세포 및 HIF-2α 단백질이 존재하는 수준이 증가되어 있는 것을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 급성 바이러스 감염 동안 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 특징이 유지되고 있는 것을 알 수 있다. 나아가, HIF-2α 단백질을 암호화하는 유전자를 억제하는 약물에 의한 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포의 사멸을 유도를 통해 급성 바이러스 감염과 같은 질환을 치료할 수 있음을 알 수 있다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> Korea Advanced Institute of science and technology <120> A PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING CD8+ MEMORY T CELL MEDIATED DISEASES <130> PDPB187266 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 870 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Thr Ala Asp Lys Glu Lys Lys Arg Ser Ser Ser Glu Arg Arg Lys 1 5 10 15 Glu Lys Ser Arg Asp Ala Ala Arg Cys Arg Arg Ser Lys Glu Thr Glu 20 25 30 Val Phe Tyr Glu Leu Ala His Glu Leu Pro Leu Pro His Ser Val Ser 35 40 45 Ser His Leu Asp Lys Ala Ser Ile Met Arg Leu Ala Ile Ser Phe Leu 50 55 60 Arg Thr His Lys Leu Leu Ser Ser Val Cys Ser Glu Asn Glu Ser Glu 65 70 75 80 Ala Glu Ala Asp Gln Gln Met Asp Asn Leu Tyr Leu Lys Ala Leu Glu 85 90 95 Gly Phe Ile Ala Val Val Thr Gln Asp Gly Asp Met Ile Phe Leu Ser 100 105 110 Glu Asn Ile Ser Lys Phe Met Gly Leu Thr Gln Val Glu Leu Thr Gly 115 120 125 His Ser Ile Phe Asp Phe Thr His Pro Cys Asp His Glu Glu Ile Arg 130 135 140 Glu Asn Leu Ser Leu Lys Asn Gly Ser Gly Phe Gly Lys Lys Ser Lys 145 150 155 160 Asp Met Ser Thr Glu Arg Asp Phe Phe Met Arg Met Lys Cys Thr Val 165 170 175 Thr Asn Arg Gly Arg Thr Val Asn Leu Lys Ser Ala Thr Trp Lys Val 180 185 190 Leu His Cys Thr Gly Gln Val Lys Val Tyr Asn Asn Cys Pro Pro His 195 200 205 Asn Ser Leu Cys Gly Tyr Lys Glu Pro Leu Leu Ser Cys Leu Ile Ile 210 215 220 Met Cys Glu Pro Ile Gln His Pro Ser His Met Asp Ile Pro Leu Asp 225 230 235 240 Ser Lys Thr Phe Leu Ser Arg His Ser Met Asp Met Lys Phe Thr Tyr 245 250 255 Cys Asp Asp Arg Ile Thr Glu Leu Ile Gly Tyr His Pro Glu Glu Leu 260 265 270 Leu Gly Arg Ser Ala Tyr Glu Phe Tyr His Ala Leu Asp Ser Glu Asn 275 280 285 Met Thr Lys Ser His Gln Asn Leu Cys Thr Lys Gly Gln Val Val Ser 290 295 300 Gly Gln Tyr Arg Met Leu Ala Lys His Gly Gly Tyr Val Trp Leu Glu 305 310 315 320 Thr Gln Gly Thr Val Ile Tyr Asn Pro Arg Asn Leu Gln Pro Gln Cys 325 330 335 Ile Met Cys Val Asn Tyr Val Leu Ser Glu Ile Glu Lys Asn Asp Val 340 345 350 Val Phe Ser Met Asp Gln Thr Glu Ser Leu Phe Lys Pro His Leu Met 355 360 365 Ala Met Asn Ser Ile Phe Asp Ser Ser Gly Lys Gly Ala Val Ser Glu 370 375 380 Lys Ser Asn Phe Leu Phe Thr Lys Leu Lys Glu Glu Pro Glu Glu Leu 385 390 395 400 Ala Gln Leu Ala Pro Thr Pro Gly Asp Ala Ile Ile Ser Leu Asp Phe 405 410 415 Gly Asn Gln Asn Phe Glu Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Lys Ala Ile Leu 420 425 430 Pro Pro Ser Gln Pro Trp Ala Thr Glu Leu Arg Ser His Ser Thr Gln 435 440 445 Ser Glu Ala Gly Ser Leu Pro Ala Phe Thr Val Pro Gln Ala Ala Ala 450 455 460 Pro Gly Ser Thr Thr Pro Ser Ala Thr Ser Ser Ser Ser Ser Cys Ser 465 470 475 480 Thr Pro Asn Ser Pro Glu Asp Tyr Tyr Thr Ser Leu Asp Asn Asp Leu 485 490 495 Lys Ile Glu Val Ile Glu Lys Leu Phe Ala Met Asp Thr Glu Ala Lys 500 505 510 Asp Gln Cys Ser Thr Gln Thr Asp Phe Asn Glu Leu Asp Leu Glu Thr 515 520 525 Leu Ala Pro Tyr Ile Pro Met Asp Gly Glu Asp Phe Gln Leu Ser Pro 530 535 540 Ile Cys Pro Glu Glu Arg Leu Leu Ala Glu Asn Pro Gln Ser Thr Pro 545 550 555 560 Gln His Cys Phe Ser Ala Met Thr Asn Ile Phe Gln Pro Leu Ala Pro 565 570 575 Val Ala Pro His Ser Pro Phe Leu Leu Asp Lys Phe Gln Gln Gln Leu 580 585 590 Glu Ser Lys Lys Thr Glu Pro Glu His Arg Pro Met Ser Ser Ile Phe 595 600 605 Phe Asp Ala Gly Ser Lys Ala Ser Leu Pro Pro Cys Cys Gly Gln Ala 610 615 620 Ser Thr Pro Leu Ser Ser Met Gly Gly Arg Ser Asn Thr Gln Trp Pro 625 630 635 640 Pro Asp Pro Pro Leu His Phe Gly Pro Thr Lys Trp Ala Val Gly Asp 645 650 655 Gln Arg Thr Glu Phe Leu Gly Ala Ala Pro Leu Gly Pro Pro Val Ser 660 665 670 Pro Pro His Val Ser Thr Phe Lys Thr Arg Ser Ala Lys Gly Phe Gly 675 680 685 Ala Arg Gly Pro Asp Val Leu Ser Pro Ala Met Val Ala Leu Ser Asn 690 695 700 Lys Leu Lys Leu Lys Arg Gln Leu Glu Tyr Glu Glu Gln Ala Phe Gln 705 710 715 720 Asp Leu Ser Gly Gly Asp Pro Pro Gly Gly Ser Thr Ser His Leu Met 725 730 735 Trp Lys Arg Met Lys Asn Leu Arg Gly Gly Ser Cys Pro Leu Met Pro 740 745 750 Asp Lys Pro Leu Ser Ala Asn Val Pro Asn Asp Lys Phe Thr Gln Asn 755 760 765 Pro Met Arg Gly Leu Gly His Pro Leu Arg His Leu Pro Leu Pro Gln 770 775 780 Pro Pro Ser Ala Ile Ser Pro Gly Glu Asn Ser Lys Ser Arg Phe Pro 785 790 795 800 Pro Gln Cys Tyr Ala Thr Gln Tyr Gln Asp Tyr Ser Leu Ser Ser Ala 805 810 815 His Lys Val Ser Gly Met Ala Ser Arg Leu Leu Gly Pro Ser Phe Glu 820 825 830 Ser Tyr Leu Leu Pro Glu Leu Thr Arg Tyr Asp Cys Glu Val Asn Val 835 840 845 Pro Val Leu Gly Ser Ser Thr Leu Leu Gln Gly Gly Asp Leu Leu Arg 850 855 860 Ala Leu Asp Gln Ala Thr 865 870 <210> 2 <211> 5155 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 acactcgcga gcggaccgcc acacgggtcc ggtgcccgct gcgcttccgc cccagcgctc 60 ctgaggcggc cgtacaatcc tcggcagtgt cctgagactg tatggtcagc tcagcccggc 120 ctccgactcc ttccgactcc cagcattcga gccacttttt tttttctttg aaaactcaga 180 aaagtgactc cttttccagg gaaaaaggaa cttgggttcc cttctctccg tcctcttttc 240 gggtctgaca gcctccaccc actccttccc cggaccccgc ctccgcgcgc aggttcctcc 300 cagtcacctt tctccacccc cgcccccgca cctagcccgc cgcgcgccac cttccacctg 360 actgcgcggg gcgctcggga cctgcgcgca cctcggacct tcaccacccg cccgggccgc 420 ggggagcgga cgagggccac agccccccac ccgccaggga gcccaggtgc tcggcgtctg 480 aacgtctcaa agggccacag cgacaatgac agctgacaag gagaagaaaa ggagtagctc 540 ggagaggagg aaggagaagt cccgggatgc tgcgcggtgc cggcggagca aggagacgga 600 ggtgttctat gagctggccc atgagctgcc tctgccccac agtgtgagct cccatctgga 660 caaggcctcc atcatgcgac tggcaatcag cttcctgcga acacacaagc tcctctcctc 720 agtttgctct gaaaacgagt ccgaagccga agctgaccag cagatggaca acttgtacct 780 gaaagccttg gagggtttca ttgccgtggt gacccaagat ggcgacatga tctttctgtc 840 agaaaacatc agcaagttca tgggacttac acaggtggag ctaacaggac atagtatctt 900 tgacttcact catccctgcg accatgagga gattcgtgag aacctgagtc tcaaaaatgg 960 ctctggtttt gggaaaaaaa gcaaagacat gtccacagag cgggacttct tcatgaggat 1020 gaagtgcacg gtcaccaaca gaggccgtac tgtcaacctc aagtcagcca cctggaaggt 1080 cttgcactgc acgggccagg tgaaagtcta caacaactgc cctcctcaca atagtctgtg 1140 tggctacaag gagcccctgc tgtcctgcct catcatcatg tgtgaaccaa tccagcaccc 1200 atcccacatg gacatccccc tggatagcaa gaccttcctg agccgccaca gcatggacat 1260 gaagttcacc tactgtgatg acagaatcac agaactgatt ggttaccacc ctgaggagct 1320 gcttggccgc tcagcctatg aattctacca tgcgctagac tccgagaaca tgaccaagag 1380 tcaccagaac ttgtgcacca agggtcaggt agtaagtggc cagtaccgga tgctcgcaaa 1440 gcatgggggc tacgtgtggc tggagaccca ggggacggtc atctacaacc ctcgcaacct 1500 gcagccccag tgcatcatgt gtgtcaacta cgtcctgagt gagattgaga agaatgacgt 1560 ggtgttctcc atggaccaga ctgaatccct gttcaagccc cacctgatgg ccatgaacag 1620 catctttgat agcagtggca agggggctgt gtctgagaag agtaacttcc tattcaccaa 1680 gctaaaggag gagcccgagg agctggccca gctggctccc accccaggag acgccatcat 1740 ctctctggat ttcgggaatc agaacttcga ggagtcctca gcctatggca aggccatcct 1800 gcccccgagc cagccatggg ccacggagtt gaggagccac agcacccaga gcgaggctgg 1860 gagcctgcct gccttcaccg tgccccaggc agctgccccg ggcagcacca cccccagtgc 1920 caccagcagc agcagcagct gctccacgcc caatagccct gaagactatt acacatcttt 1980 ggataacgac ctgaagattg aagtgattga gaagctcttc gccatggaca cagaggccaa 2040 ggaccaatgc agtacccaga cggatttcaa tgagctggac ttggagacac tggcacccta 2100 tatccccatg gacggggaag acttccagct aagccccatc tgccccgagg agcggctctt 2160 ggcggagaac ccacagtcca ccccccagca ctgcttcagt gccatgacaa acatcttcca 2220 gccactggcc cctgtagccc cgcacagtcc cttcctcctg gacaagtttc agcagcagct 2280 ggagagcaag aagacagagc ccgagcaccg gcccatgtcc tccatcttct ttgatgccgg 2340 aagcaaagca tccctgccac cgtgctgtgg ccaggccagc acccctctct cttccatggg 2400 gggcagatcc aatacccagt ggcccccaga tccaccatta cattttgggc ccacaaagtg 2460 ggccgtcggg gatcagcgca cagagttctt gggagcagcg ccgttggggc cccctgtctc 2520 tccaccccat gtctccacct tcaagacaag gtctgcaaag ggttttgggg ctcgaggccc 2580 agacgtgctg agtccggcca tggtagccct ctccaacaag ctgaagctga agcgacagct 2640 ggagtatgaa gagcaagcct tccaggacct gagcgggggg gacccacctg gtggcagcac 2700 ctcacatttg atgtggaaac ggatgaagaa cctcaggggt gggagctgcc ctttgatgcc 2760 ggacaagcca ctgagcgcaa atgtacccaa tgataagttc acccaaaacc ccatgagggg 2820 cctgggccat cccctgagac atctgccgct gccacagcct ccatctgcca tcagtcccgg 2880 ggagaacagc aagagcaggt tccccccaca gtgctacgcc acccagtacc aggactacag 2940 cctgtcgtca gcccacaagg tgtcaggcat ggcaagccgg ctgctcgggc cctcatttga 3000 gtcctacctg ctgcccgaac tgaccagata tgactgtgag gtgaacgtgc ccgtgctggg 3060 aagctccacg ctcctgcaag gaggggacct cctcagagcc ctggaccagg ccacctgagc 3120 caggccttct acctgggcag cacctctgcc gacgccgtcc caccagcttc actctctccg 3180 tctgtttttg caactaggta tttctaacgc cagcacacta tttacaagat ggacttacct 3240 ggcagacttg cccaggtcac caagcagtgg cctttttctg agatgctcac tttattatcc 3300 ctatttttaa agtacacaat tgttttacct gttctgaaat gttcttaaat tttgtaggat 3360 ttttttcctc cccaccttca atgacttcta atttatatta tccataggtt tctctccctc 3420 cttctccttc tcacacacaa ctgtccatac taacaagttt ggtgcatgtc tgttcttctg 3480 tagggagaag ctttagcttc attttactaa aaagattcct cgttattgtt gttgccaaag 3540 agaaacaaaa atgattttgc tttccaagct tggtttgtgg cgtctccctc gcagagccct 3600 tctcgtttct tttttaaact aatcaccata ttgtaaattt cagggttttt ttttttttgt 3660 ttaagctgac tctttgctct aattttggaa aaaaagaaat gtgaagggtc aactccaacg 3720 tatgtggtta tctgtgaaag ttgcacagcg tggcttttcc taaactggtg tttttccccc 3780 gcatttggtg gattttttat tattattcaa aaacataact gagtttttta aaagaggaga 3840 aaatttatat ctgggttaag tgtttatcat atatatgggt actttgtaat atctaaaaac 3900 ttagaaacgg aaatggaatc ctgctcacaa aatcacttta agatcttttc gaagctgtta 3960 atttttctta gtgttgtgga cactgcagac ttgtccagtg ctcccacggc ctgtacggac 4020 actgtggaag gcctccctct gtcggctttt tgccatctgt gatatgccat aggtgtgaca 4080 atccgagcag tggagtcatt cagcgggagc actgcgcgct atcccctcac attctctatg 4140 tactatgtat gtatgtatta ttattattgc tgccaagagg gtctgatggc acgttgtggg 4200 gtcggggggt ggggcgggga agtgctctaa cttttcttaa ggttttgttg ctagcccttc 4260 aagtgcactg agctatgtga ctcggatggt ctttcacacg gcacatttgg acatttccag 4320 aactaccatg agatggttta gacgggaatt catgcaaatg aggggtcaaa aatggtatag 4380 tgaccccgtc cacgtcctcc aagctcacga ccttggagcc ccgtggagct ggactgagga 4440 ggaggctgca cagcgggaga gcagctggtc cagaccagcc ctgcagcccc cactcagccg 4500 gcagccagat ggccccgcaa ggcctccagg gatggcccct agccacaggc cctggctgag 4560 gtctctgggt cggtcagtga catgtaggta ggaagcactg aaaatagtgt tcccagagca 4620 ctttgcaact ccctgggtaa gagggacgac acctctggtt tttcaatacc aattacatgg 4680 aacttttctg taatgggtac aatgaagaag tttctaaaaa cacacacaaa gcacattggg 4740 ccaactattt agtaagcccg gatagactta ttgccaaaaa caaaaaatag ctttcaaaag 4800 aaatttaagt tctatgagaa attccttagt catggtgttg cgtaaatcat attttagctg 4860 cacggcatta ccccacacag ggtggcagaa cttgaagggt tactgacgtg taaatgctgg 4920 tatttgattt cctgtgtgtg ttgccctggc attaagggca ttttaccctt gcagttttac 4980 taaaacactg aaaaatattc caagcttcat attaacccta cctgtcaacg taacgatttc 5040 atgaacgtta ttatattgtc gaattcctac tgacaacatt ataactgtat gggagcttaa 5100 ctttataagg aaatgtattt tgacactggt atcttattaa agtattctga tccta 5155

Claims (19)

  1. HIF-2α(Hypoxia Inducible Factors 2α) 단백질의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 억제제는 CD8+ T 세포의 집단 중에서, CD8+CD103-CD69+ 메모리 T 세포의 선택적인 사멸을 유도하거나, 그 기능이 억제되도록 하는 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 억제제는 상기 HIF-2α의 mRNA가 존재하는 수준을 낮출 수 있는 올리고뉴클레오티드인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 억제제는 화학 물질인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 화학 물질은 하기 화학식 1 내지 7로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00008

    [화학식 2]
    Figure pat00009

    [화학식 3]
    Figure pat00010

    [화학식 4]
    Figure pat00011

    [화학식 5]
    Figure pat00012

    [화학식 6]
    Figure pat00013

    [화학식 7]
    Figure pat00014
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 CD8+ T 세포 매개성 질환은 CD8+ T 세포에 의해 유발된 간 질환인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제 6항에 있어서,
    상기 간 질환은 원발성 담즙성 간경변, 원발성 경화성 담관염, 자가 면역성 간염, 비 알코올성 지방간 질환, 급성 간염 및 간 섬유화로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. HIF-2α(Hypoxia Inducible Factors 2α) 단백질의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 CD8+ T 세포 매개성 질환은 CD8+ T 세포에 의해 유발된 간 질환인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  10. 제 9항에 있어서,
    상기 간 질환은 원발성 담즙성 간경변, 원발성 경화성 담관염, 자가 면역성 간염, 비 알코올성 지방간 질환, 급성 간염 및 간 섬유화로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  11. CD8+ 메모리 T 세포 또는 그 배양액에 목적하는 후보물질을 처리하는 단계; 및
    상기 후보물질의 처리 후 HIF-2α 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 확인하는 단계를 포함하는, CD8+ T 세포 매개성 질환 치료제의 스크리닝 방법.
  12. 제 11항에 있어서,
    상기 CD8+ 메모리 T 세포는 CD69+CD103-CD8+ 메모리 T 세포인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환 치료제의 스크리닝 방법.
  13. 제 11항에 있어서,
    상기 후보물질의 처리 후 측정된 HIF-2α 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준이 후보물질 처리 전에 비하여 감소한 경우 상기 후보물질을 CD8+ T 세포 매개성 질환의 치료제로 판단하는 단계를 포함하는, CD8+ T 세포 매개성 질환 치료제의 스크리닝 방법.
  14. 제 11항에 있어서,
    상기 CD8+ T 세포 매개성 질환은 CD8+ T 세포에 의해 유발된 간 질환인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환 치료제의 스크리닝 방법.
  15. 제 14항에 있어서,
    상기 간 질환은 원발성 담즙성 간경변, 원발성 경화성 담관염, 자가 면역성 간염, 비 알코올성 지방간 질환, 급성 간염 및 간 섬유화로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것인, CD8+ T 세포 매개성 질환 치료제의 스크리닝 방법.
  16. HIF-2α 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자가 존재하는 수준을 측정하는 제제를 포함하는 CD8+ T 세포 노화 측정용 조성물.
  17. 제 16항에 있어서,
    상기 단백질이 존재하는 수준을 측정하는 제제는 HIF-2α 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 것인, CD8+ T 세포 노화 측정용 조성물.
  18. 제 16항에 있어서,
    상기 유전자가 존재하는 수준을 측정하는 제제는 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머(primer) 쌍, 프로 (probe) 또는 안티센스(anti-sense) 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것인, CD8+ T 세포 노화 측정용 조성물.
  19. 제 16항 내지 제 18항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, CD8+ T 세포 노화 측정용 키트.
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