JPH09249688A - クロマノール配糖体およびその製造方法、並びにそれを用いた抗酸化剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 クロマン環を有する化合物（２−置換アルコ
ール）に糖を結合させることにより、水溶性に優れたク
ロマノール配糖体を提供する。 【解決手段】 本発明のクロマノール配糖体は、一般式
（１） 【化１】 （ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ およびＲ⁴ は同一ま
たは異なる水素原子または低級アルキル基を表わし、Ｒ
⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級アシル基を表
わし、糖残基中の水酸基の水素原子は低級アルキル基ま
たは低級アシル基で置換されていてもよく、およびｎは
０〜４の整数である）で表わされるものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なクロマノー
ル配糖体およびその製造方法、並びにそれを用いた抗酸
化剤に関するものである。詳しく述べると、公知の抗酸
化剤として知られる、一般式（２）

【０００２】

【化３】

【０００３】（ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ および
Ｒ⁴ は同一または異なる水素原子または低級アルキル基
を表わし、Ｒ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級
アシル基を表わし、およびｎは０〜４の整数である）で
表される２−置換アルコール（以下、単に「２−置換ア
ルコール」ともいう）に糖を結合させることにより得ら
れる化学的安定性に優れた新規な水溶性クロマノール配
糖体およびその製造方法、並びにそれを用いた水溶性抗
酸化剤に関するものである。

【０００４】

【従来の技術】近年、活性酸素やフリーラジカルが生体
に障害を与え、それが種々の疾病をはじめ発ガン、さら
には老化にもつながることが次第に明らかになってきて
いる。そこで、活性酸素やフリーラジカルによる障害を
効率よく防御することができる抗酸化剤の開発は、化粧
品、医薬品、食品など多くの分野において注目を集めて
いる。

【０００５】現在、多くの抗酸化剤が知られているが、
特にビタミンＥはその優れた抗酸化活性より、食品、化
粧品、医薬品分野において多用されている。しかしなが
ら、ビタミンＥは水に不溶な粘性油状物のため注射剤ま
たは溶液剤として使用するには界面活性剤等を用いて可
溶化させねばならず、本来不用な物を大量に混入する結
果となり問題が生じる。また、界面活性剤などでは高濃
度のビタミンＥ水溶液を作ることは不可能である。つま
りビタミンＥの優れた抗酸化活性を保持した水溶性のビ
タミンＥ類似化合物が必要とされている。

【０００６】特開平７−１１８２８７号公報において、
優れた水溶性を有するビタミンＥ類似化合物（クロマノ
ール配糖体）および酵素法によるその製造方法が示され
ている。上記公報の製造方法において２−置換アルコー
ルにガラクトースをβ結合で結合させる場合の簡単な記
載がされているものの、実施例においてその物の物性、
製法、抗酸化活性などは一切示されていない。また、生
体に投与した場合においては、上記公報に示される２−
置換アルコールにグルコースがα結合したもの（以下、
グルコース型配糖体という）と、β結合によりガラクト
ースが結合したもの（以下、ガラクトース型配糖体）と
では生体内の糖質分解酵素の局在場所および活性などの
違いから配糖体のグリコシド結合の安定性が異なること
は常識であり、また、生体組織のレセプターの問題など
からも、両者の生体組織への取り込まれ方は異なる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明の目的
は、生体内において公知のグルコース型配糖体とは生体
内において異なる安定性および生体組織への取り込まれ
方を示す新規なガラクトース型配糖体およびその製造方
法、並びにそれを用いた水溶性抗酸化剤を提供するもで
ある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上記目的は、（Ａ） 一
般式（１）

【０００９】

【化４】

【００１０】（ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ および
Ｒ⁴ は同一または異なる水素原子または低級アルキル基
を表わし、Ｒ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級
アシル基を表わし、糖残基中の水酸基の水素原子は低級
アルキル基または低級アシル基で置換されていてもよ
く、およびｎは０〜４の整数である）で表わされるクロ
マノール配糖体により達成される。

【００１１】また、上記目的は、（Ｂ） 一般式（２）

【００１２】

【化５】

【００１３】（ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ および
Ｒ⁴ は同一または異なる水素原子または低級アルキル基
を表わし、Ｒ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級
アシル基を表わし、およびｎは０〜４の整数を表す）で
表わされる２−置換アルコール及び、β−ガラクトシル
糖化合物を含有する溶液にβ−ガラクトシダーゼ（ＥＣ
３．２．１．２３）を作用させることを特徴とする上記
（Ａ）に示す一般式（１）で示されるクロマノール配糖
体の製造方法によっても達成される。

【００１４】さらに、上記目的は、（Ｃ） 上記（Ａ）
に示す一般式（１）で表わされるクロマノール配糖体を
有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤により達成さ
れる。

【００１５】

【発明の実施の形態】本発明に係わるクロマノール配糖
体（上記一般式（１））の酵素法による合成に用いられ
る酵素としては、β−ガラクトシダーゼが挙げられる。
β−ガラクトシダーゼとしては、ほぼ全ての起源由来の
ものを用いることができ、例えば、東洋紡績株式会社
製、オリエンタル酵母工業製、シグマ（ＳＩＧＭＡ）製
のエシェリキア コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ）由来のβ−ガラクトシダーゼ、東洋紡績株式会社
製のアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓ
ｐ．）由来のβ−ガラクトシダーゼ、シグマ（ＳＩＧＭ
Ａ）製のウシ肝臓（ｂｏｖｉｎｅ ｌｉｖｅｒ）、ウシ
睾丸（ｂｏｖｉｎｅ ｔｅｓｔｅｓ）、アスペルギルス
ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、ア
スペルギルス オリーザ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏ
ｒｙｚａｅ）、サッカロミセス フラギリス（Ｓａｃｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、タチナタマ
メ（Ｊａｃｋｂｅａｎ）由来のβ−ガラクトシダーゼな
どが挙げられる。添加される酵素量としては、例えば、
上述した東洋紡績株式会社製のエシェリキア コリ（Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）由来のβ−ガラクト
シダーゼを反応液３ｍｌに添加する場合、５から７０
Ｕ、好ましくは１０〜４０Ｕである。酵素量が５Ｕ未満
の場合には、酵素による触媒作用が少なく、また酵素量
が７０Ｕを越える場合には、過度の添加に見合うだけの
効果が得られず不経済である。上述した東洋紡績株式会
社製のアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓ
ｐ．）由来のβ−ガラクトシダーゼを反応液３ｍｌに添
加する場合、０．１〜２０Ｕ、好ましくは０．５〜１５
Ｕである。酵素量が０．１Ｕ未満の場合には、酵素によ
る触媒作用が少なく、また酵素量が２０Ｕを越える場合
には、過度の添加に見合うだけの効果が得られず不経済
である。なお、ここでの上述したエシェリキア コリ由
来のβ−ガラクトシダーゼの１Ｕは、基質にｏ−ニトロ
フェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドを用い、ｐＨ
７．３、３７℃において１分間に１μｍｏｌのｏ−ニト
ロフェノールを生成する酵素量であり、上述したアスペ
ルギルス属由来のβ−ガラクトシダーゼの１Ｕは、基質
にｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドを
用い、ｐＨ５．０、３７℃において１分間に１μｍｏｌ
のｏ−ニトロフェノールを生成する酵素量である。

【００１６】次に、本発明に係わるクロマノール配糖体
（上記一般式（１））を酵素法により合成するための条
件としては、まず、２−置換アルコール（上記一般式
（２））をβ−ガラクトシル糖化合物（本明細書では、
単に「糖」ともいう）溶液に溶解させることが望まし
く、そのためには水に対する溶解度が非常に低い２−置
換アルコールを溶解し得る有機溶媒を添加する必要があ
る。さらに、添加されうる有機溶媒としては、β−ガラ
クトシダーゼの転移活性を効率よく発現させることがで
きるものでなければならず、例えば、ジメチルスルホキ
シド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、メタノール、エ
タノール、アセトンおよびアセトニトリルなどが挙げら
れ、上述したエシェリキア コリ由来のβ−ガラクトシ
ダーゼの転移活性を高めるためにはジメチルスルホキシ
ドが好ましく、上述したアスペルギルス属由来のβ−ガ
ラクトシダーゼの転移活性を高めるためにはジメチルス
ルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、メタノー
ル、エタノールおよびアセトニトリルが好ましい。上述
した２種類のβ−ガラクトシダーゼを用いる場合、添加
する有機溶媒の濃度は、１〜５０（ｖ／ｖ）％、好まし
くは反応効率を考えると５〜４０（ｖ／ｖ）％である。
この有機溶媒濃度が１（ｖ／ｖ）％未満の場合には、所
望とする２−置換アルコール（上記一般式（２））を糖
溶液に溶解させることが難しく、また５０（ｖ／ｖ）％
を越える場合には、酵素の安定性が低下し、転移効率が
悪くなるため好ましくない。

【００１７】また、本発明に係わるクロマノール配糖体
（上記一般式（１））を酵素法により合成する際に原料
として用いられる２−置換アルコール（一般式（２））
は、公知物質であり、特公平１−４３７５５号、特公平
１−４９１３５号等の方法により、得ることができる。
また、例えば、一般式（２）においてＲ¹ ＝Ｒ² ＝Ｒ³
＝Ｒ⁴ ＝ＣＨ₃ 、Ｒ⁵ ＝Ｈ、ｎ＝１とする２−置換アル
コールの１種は、トロロックス（Ｔｒｏｌｏｘ）を水素
化リチウムアルミニウムの存在下においてジエチルエー
テル中で加熱還流処理することなどにより容易に得るこ
とができる。２−置換アルコール（上記一般式（２））
の濃度は、反応液中において飽和濃度もしくはそれに近
い濃度にすることが望ましい。これにより、実際上（お
よび理論上）最大の収率を得ることができるためであ
る。

【００１８】さらに、本発明に係わるクロマノール配糖
体（上記一般式（１））を酵素法により合成する際に用
いられるβ−ガラクトシル糖化合物の種類は、乳糖（ラ
クトース）、ｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシド、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラ
ノシドおよびガラクトースがβ−１，４−グリコシド結
合で結ばれた構造を持つ糖残基が２〜５位のオリゴ糖が
挙げられ、好ましくは価格の面などから考慮して、乳糖
である。乳糖の濃度は、５〜５０（ｗ／ｖ）％、好まし
くは１０〜５０（ｗ／ｖ）％である。乳糖の濃度が５
（ｗ／ｖ）％未満では、糖が不足するため２−置換アル
コールからクロマノール配糖体への高い転移率を得るこ
とができない。また乳糖の溶解度の面から５０（ｗ／
ｖ）％を越える乳糖溶液の調製は難しい。

【００１９】さらに、本発明に係わるクロマノール配糖
体（上記一般式（１））を酵素法により合成する際の反
応系のｐＨは、上述したエシェリキア コリ由来のβ−
ガラクトシダーゼを用いる場合５．０〜７．５、好まし
くは５．５〜７．０であり、上述したアスペルギルス属
由来のβ−ガラクトシダーゼを用いる場合３．０〜７．
５、好ましくは３．５〜７．０である。ｐＨが上記範囲
を外れる場合には、上述した酵素が失活するなど好まし
くない。

【００２０】さらに、本発明に係わるクロマノール配糖
体（上記一般式（１））を酵素法により合成する際の反
応温度は、上述したエシェリキア コリ由来のβ−ガラ
クトシダーゼを用いる場合、２０〜６０℃、好ましくは
３０〜５０℃であり、上述したアスペルギルス属由来の
β−ガラクトシダーゼを用いる場合、２０〜７０℃、好
ましくは３０〜６０℃である。反応温度が上記範囲を下
回る場合には、上述した酵素の活性が低下し、十分な転
移率を確保するのに長時間を要するため経済的でなく、
また、反応温度が上記範囲を上回る場合には、上述した
酵素が失活するため好ましくない。

【００２１】また、本発明に係わるクロマノール配糖体
（上記一般式（１））を酵素法により合成する際の反応
時間は、上述した２種類のβ−ガラクトシダーゼを用い
る場合、２〜４０時間、好ましくは１０〜３０時間であ
る。反応時間が２時間未満の場合には、反応が平衡近く
に達していないため、十分な転移率を得ることができ
ず、４０時間を越える場合には、これに見合うだけのさ
らなる効果が期待できない。

【００２２】ただし、上述した酵素法による合成の際の
こうした条件は、使用する酵素量により若干の影響を受
ける。

【００２３】次に反応終了後、反応液をＸＡＤ（オルガ
ノ株式会社製）を担体として用いたカラムクロマトグラ
フィーで処理することにより、高純度のクロマノール配
糖体（一般式（１））が得られる。

【００２４】なお、上述の一般式（１）〜（２）におい
て、式中のＲ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ およびＲ⁴ は、同一または
異なる水素原子または低級アルキル基であって、このう
ち低級アルキル基としては、好ましくは炭素原子数が１
〜８のアルキル基、最も好ましくは炭素原子数が１〜６
のアルキル基であり、具体的には、メチル基、エチル
基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチ
ル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、ヘプ
チル基、及びオクチル基等が挙げられ、これらのうち、
メチル基及びエチル基が好ましい。また同様にＲ⁵ は水
素原子、低級アルキル基または低級アシル基であり、こ
のうち低級アルキル基としては、好ましくは炭素原子数
が１〜８のアルキル基、最も好ましくは炭素原子数が１
〜６のアルキル基であり、具体例としては上記と同様の
ものが挙げられる。また、低級アシル基としては、炭素
原子数が１〜１０のアシル基、最も好ましくは炭素原子
数が１〜７のアシル基であり、具体的には、ホルミル
基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、バレリ
ル基、カプロイル基、及びベンゾイル基（Ｃ₆ Ｈ₅ ＣＯ
−）などが挙げられ、これらのうち、ホルミル基、アセ
チル基、プロピオニル基及びブチリル基が好ましい。さ
らに同様に糖残基の水酸基の水素原子は、低級アルキル
基または低級アシル基で置換されていてもよく、かかる
低級アルキル基としては、好ましくは炭素原子数が１〜
８のアルキル基、最も好ましくは炭素原子数が１〜６の
アルキル基であり、低級アシル基としては、炭素原子数
が１〜１０のアシル基、最も好ましくは炭素原子数が１
〜７のアシル基であり、アルキル基及びアシル基の具体
例としては上記と同様のものが挙げられる。さらに、ｎ
は０〜４、好ましくは１〜３の整数である。

【００２５】このようにして得られたクロマノール配糖
体（一般式（１））の水に対する溶解度は、トコフェロ
ールの２位のイソプレノイド側鎖をカルボキシル基に置
換した６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル
クロマン−２−カルボン酸（以下、単にトロロックスと
もいう）、２−置換アルコールに比べ著しく高いもので
ある。

【００２６】さらに、得られたクロマノール配糖体（一
般式（１））は、ヘキサン−イソプロピルアルコール溶
液中における高度不飽和脂肪酸メチルエステルの脂質過
酸化速度の測定で明らかなように、トコフェロールと同
等の抗酸化活性を有している。またクロマノール配糖体
（一般式（１））は、水溶性の抗酸化剤として知られる
アスコルビン酸などに比べて、顕著な酸化速度の抑制作
用を奏するものである。例えば、生体膜をモデルとし
て、脂溶性ラジカル発生剤を内部に含有したリポソーム
を調製し、酸化反応を促進させた際、水相にクロマノー
ル配糖体（一般式（１））を存在させておくことで、ア
スコルビン酸などよりも顕著に酸化反応を抑制すること
ができる。また、クロマノール配糖体（一般式（１））
は、クロマン環をもっていることにより、一重項酸素な
ど様々な活性酸素の消去能をも有している。

【００２７】また、得られたクロマノール配糖体（一般
式（１））は、その高い溶解性（水溶性）および優れた
抗酸化活性から活性酸素が関与する様々な疾病に効果の
ある注射剤または内服薬などの溶解剤などの抗酸化剤の
有効成分として利用することができ、この場合には、該
クロマノール配糖体（一般式（１））の水溶液をそのま
ま抗酸化剤として使用できるほか、該溶液に、相互に反
応性のない他の有効成分を適当量配合して用いてもよ
い。

【００２８】

【実施例】次に、実施例等により本発明を説明するが、
これらにより本発明の範囲がなんら制限されるものでな
いことはいうまでもない。

【００２９】参考例１ （１）エシェリキア コリ由来のβ−ガラクトシダーゼ
の活性測定 １００ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ７．３）２．５ｍｌ、
３．３６Ｍ メルカプトエタノール溶液０．１ｍｌ、３
０ｍＭ ＭｇＣｌ₂ 溶液（ｐＨ７．３）０．１ｍｌ、３
４ｍＭ ｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シド溶液０．２ｍｌをキュベット（ｄ＝１．０ｃｍ）に
いれ、３７℃に制御された分光光度計にセットした。５
分間インキュベートした後、酵素溶液０．１ｍｌを加え
４１０ｎｍの吸光度変化を求めた。なお、１Ｕは、上記
条件において１分間に１μｍｏｌのｏ−ニトロフェノー
ルを生成する酵素量とした。

【００３０】（２）アスペルギルス属由来のβ−ガラク
トシダーゼの活性測定 １００ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）１．０ｍｌに２
０ｍＭ ｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シド溶液０．２ｍｌを加え、３７℃で５分間インキュベ
ートした後、酵素溶液０．５ｍｌを加え、同温度条件下
において１５分間インキュベートした。そして、０．２
Ｍ Ｎａ₂ ＣＯ₃ 溶液２．０ｍｌを加えて反応を停止さ
せ、４１０ｎｍの吸光度を測定した。なお、１Ｕは、上
記条件において１分間に１μｍｏｌのｏ−ニトロフェノ
ールを生成する酵素量とした。

【００３１】実施例１ ５０ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ６．５）で調製した４０
（ｗ／ｖ）％乳糖溶液１６０ｍｌに対し、ジメチルスル
ホキシドで調製した５（ｗ／ｖ）％の式（３）

【００３２】

【化６】

【００３３】で示される２−置換アルコール溶液３２ｍ
ｌおよび１６００Ｕの東洋紡績株式会社製のエシェリキ
ア コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）由来の
β−ガラクトシダーゼを加え、４０℃において２０時間
反応させた。このときの２−置換アルコールのクロマノ
ール配糖体への転換率はモル比で約２０％であった。

【００３４】この反応液を３０％メタノール溶液で平衡
化したＸＡＤ−４（オルガノ株式会社製）カラムにアプ
ライし、非吸着物を３０％メタノールで溶出後、８０％
メタノールでクロマノール配糖体を溶出させた。次に得
られたクロマノール配糖体画分をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝５：１、ｖ
／ｖ）処理することで高純度のクロマノール配糖体であ
る式（４）

【００３５】

【化７】

【００３６】で示される２−（α−Ｄ−グルコピラノシ
ル）メチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−
６−オール[2-(α−D-glucopyranosyl)methyl-2,5,7,8-
tetramethylchroman-6-ol]（一般式（１）のｎ＝１、Ｒ
¹ ＝Ｒ² ＝Ｒ³ ＝Ｒ⁴ ＝ＣＨ₃、R⁵ ＝Ｈに相当する）を
約３００ｍｇ得た。

【００３７】得られた上記式（４）に示されるクロマノ
ール配糖体の赤外線吸収スペクトルを図１に示す。

【００３８】また、上記式（４）に示されるクロマノー
ル配糖体の ¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、質量分析およ
び旋光度の結果は以下の通りである。

【００３９】¹Ｈ−ＮＭＲ δ（２７０ＭＨｚ， ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆ ） １．２１および１．２４（ｓ，３Ｈ）、
１．６７から１．７３（ｍ，１Ｈ）、１．９０から１．
９３（ｍ，１Ｈ）、１．９８（ｓ，３Ｈ）、２．０２
（ｓ，３Ｈ）、２．０５（ｓ，３Ｈ）、２．５０（ｂｒ
ｏａｄ ｔ，２Ｈ）、３．１７から４．７８（ｍ，１３
Ｈ）、７．３８（ｓ，１Ｈ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ δ（６７．８ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆ 、
プロトンデカップリングスペクトル） １１．７、１
１．８、１２．６、１９．７および１９．８、２２．２
および２２．５、２８．０および２８．１、６０．３お
よび６０．４、６８．１、７０．５、７３．１および７
３．２、７３．４、７３．９および７４．０、７５．１
および７５．２、１０４．０および１０４．２、１１
６．８、１２０．２、１２０．８、１２２．５、１４
４．２、１４５．２ 質量スペクトル（ＦＡＢ） ｍ／ｚ ３９８ （分
子イオンピーク）

【００４０】

【外１】

【００４１】実施例２ ５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で調製した４０
（ｗ／ｖ）％乳糖溶液１６０ｍｌに対し、ジメチルスル
ホキシドで調製した５（ｗ／ｖ）％の式（３）

【００４２】

【化８】

【００４３】で示される２−置換アルコール溶液３２ｍ
ｌおよび１０００Ｕの東洋紡績株式会社製のアスペルギ
ルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）由来のβ−
ガラクトシダーゼを加え、５０℃において２０時間反応
させた。このときの２−置換アルコールのクロマノール
配糖体への転換率はモル比で約７％であった。

【００４４】この反応液を３０％メタノール溶液で平衡
化したＸＡＤ−４（オルガノ株式会社製）カラムにアプ
ライし、非吸着物を３０％メタノールで溶出後、８０％
メタノールでクロマノール配糖体を溶出させた。次に得
られたクロマノール配糖体画分をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝５：１、ｖ
／ｖ）処理することで高純度のクロマノール配糖体であ
る式（５）

【００４５】

【化９】

【００４６】で示される２−（α−Ｄ−グルコピラノシ
ル）メチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−
６−オール[2-(α−D-glucopyranosyl)methyl-2,5,7,8-
tetramethylchroman-6-ol]（一般式（１）のｎ＝１、Ｒ
¹ ＝Ｒ² ＝Ｒ³ ＝Ｒ⁴ ＝ＣＨ₃、Ｒ⁵ ＝Ｈに相当する）
を約９０ｍｇ得た。

【００４７】得られた上記式（５）に示されるクロマノ
ール配糖体の赤外線吸収スペクトルを図２に示す。

【００４８】また、上記式（５）に示されるクロマノー
ル配糖体の ¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ、質量分析およ
び旋光度の結果は以下の通りである。

【００４９】¹Ｈ−ＮＭＲ δ（２７０ＭＨｚ， ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆ ） １．２１および１．２４（ｓ，３Ｈ）、
１．６７から１．７３（ｍ，１Ｈ）、１．９０から１．
９３（ｍ，１Ｈ）、１．９８（ｓ，３Ｈ）、２．０２
（ｓ，３Ｈ）、２．０５（ｓ，３Ｈ）、２．５０（ｂｒ
ｏａｄ ｔ，２Ｈ）、３．１７から４．７８（ｍ，１３
Ｈ）、７．３８（ｓ，１Ｈ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ δ（６７．８ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆ 、
プロトンデカップリングスペクトル） １１．７、１
１．８、１２．６、１９．７および１９．８、２２．２
および２２．５、２８．０および２８．１、６０．３お
よび６０．４、６８．１、７０．５、７３．１および７
３．２、７３．４、７３．９および７４．０、７５．１
および７５．２、１０４．０および１０４．２、１１
６．８、１２０．２、１２０．８、１２２．５、１４
４．２、１４５．２ 質量スペクトル（ＦＡＢ） ｍ／ｚ ３９８ （分
子イオンピーク）

【００５０】

【外２】

【００５１】実施例３ 実施例１および実施例２によって得られた式（４）、式
（５）に示されるクロマノール配糖体の抗酸化活性をリ
ノール酸メチルのラジカル連鎖自動酸化反応の抑制によ
り評価した。１３２μｍｏｌのリノール酸メチル、１
６．５μｍｏｌの脂溶性ラジカル発生剤（２，２′−ア
ゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル））、０．１
μｍｏｌの式（４）、式（５）に示されるクロマノール
配糖体、ブチルヒドロキシトルエンまたはα−トコフェ
ロールからなるヘキサン／イソプロピルアルコール
（１：１、ｖ／ｖ）溶液１．１ｍｌを３７℃でインキュ
ベートし、経時的にサンプリングし、高速液体クロマト
グラフィーでリノール酸メチルハイドロパーオキサイド
の生成量を測定した。図３に示すように、式（４）およ
び式（５）に示されるクロマノール配糖体の抗酸化活性
は、ブチルヒドロキシトルエン以上であり、またα−ト
コフェロールと同等であることがわかる。

【００５２】実施例４ 実施例１および実施例２によって得られた式（４）、式
（５）に示されるクロマノール配糖体の抗酸化活性を多
重層リポソームのラジカル連鎖自動酸化反応の抑制によ
り評価した。５．５μｍｏｌの卵黄ホスファチジルコリ
ン、１．１μｍｏｌの脂溶性ラジカル発生剤（２，２′
−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）を０．
５ｍＭ ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ″，
Ｎ″−五酢酸（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅ
−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ″，Ｎ″−ｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ
ａｃｉｄ）を含んだ１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．４）１ｍｌに懸濁させ多重層リポソームを調製
し、これに上記緩衝液で調製した１００μＭの式
（４）、式（５）に示されるクロマノール配糖体または
アスコルビン酸を０．１ｍｌ加えた。そして、５０℃で
インキュベートし、経時的にサンプリングし、高速液体
クロマトグラフィーでホスファチジルコリンハイドロパ
ーオキサイドの生成量を測定した。

【００５３】図４に示すように、式（４）および式
（５）に示されるクロマノール配糖体はアスコルビン酸
より、明らかに効果的な抗酸化剤であることがわかる。

【００５４】実施例５ 実施例１および実施例２によって得られた式（４）、式
（５）に示されるクロマノール配糖体の水に対する溶解
度を評価した。過剰量の式（４）または式（５）に示さ
れるクロマノール配糖体を水１ｍｌに加え、２５℃でイ
ンキュベートし、２０時間、撹拌（２００ｒｐｍ）後、
サンプレップＣ０２−ＬＧに液を移し、遠心分離（４１
００×ｇ、１０分、２０℃）することにより不溶物を除
去し、水溶液中のクロマノール配糖体の溶解量を高速液
体クロマトグラフィーで測定した。また比較として、ト
ロロックス（Ｔｒｏｌｏｘ、アルドリッチケミカルカン
パニー社（Aldrich Chemical Company,Inc.)製）、式
（３）で示される２−置換アルコールも同様に評価し
た。

【００５５】

【表１】

【００５６】表１に示すように式（４）および式（５）
に示されるクロマノール配糖体の優れた水に対する溶解
性が明らかになった。

【００５７】実施例６ マウスのＴリンパ腫株ＥＬ−４細胞をＲＰＭＩ−１６４
０＋１０％牛胎仔血清＋ＨＥＤＥＳ緩衝液（２５ｍＭ）
系培養液（以下、「完全培養液」と略称する）中で３７
℃、５％ＣＯ₂ 雰囲気下で継代培養し、細胞密度が２×
１０⁵ 個／ｍｌになるように調整した。このようにして
培養されたＥＬ−４細胞培養液の上清を除去し、これに
実施例１と同様にして調製したクロマノール配糖体（一
般式（４））溶液を完全培養液中の最終濃度が１ｍＭに
なるように加え、Ｘ線を照射するまでの３０分間、上記
と同様の条件下で細胞培養を行った。クロマノール配糖
体を含む培養液中で所定時間培養した後、３Ｇｙの放射
線を０．９２Ｇｙ／分の線量率で照射した。放射線照射
終了直後、細胞を遠心沈降（４００ｇ×５分）させ、Ｒ
ＰＭＩ−１６４０で２回洗浄し、完全培養液で再浮遊さ
せて培養した。これに、サイトカラシンＢのＤＭＳＯ溶
液（２ｍｇ／ｍｌ濃度）を最終濃度が３μｇ／ｍｌにな
るように添加し、２０時間培養後に２核細胞中の小核保
有細胞の頻度（小核誘発頻度）を測定し、細胞の放射線
損傷の頻度を表わす尺度とした。また、クロマノール配
糖体の処理濃度を０ｍＭとした以外は上記操作を繰り返
すことにより得られた小核誘発頻度（比較例１）を基準
として下記式より小核誘発抑制率を計算した。この際、
上記細胞は１群４〜５連で放射線照射実験を行い、結果
はこれらの平均値として表わした。結果を表２に示す。

【００５８】

【数１】

【００５９】

【表２】

【００６０】表２より示されるように、小核誘発頻度
は、一般式（４）で表わされるクロマノール配糖体で処
理した（実施例６）場合、処理しなかった（比較例１）
場合に比べて有意に小さく、これより、本発明のクロマ
ノール配糖体は優れた放射線防護作用を有することが示
された。

【００６１】

【発明の効果】本発明のクロマノール配糖体（一般式
（１））は、生体内において公知のグルコース型配糖体
とは生体内において異なる安定性および生体組織への取
り込まれ方を示す新規なガラクトース型配糖体であり、
トロロックス、２−置換アルコールに比べ著しく高い溶
解性（約１０００倍以上）を有し、かつビタミンＣより
優れた抗酸化活性効果を奏する。

【００６２】次に、本発明のガラクトース型配糖体は、
高濃度の有機溶媒存在下においても安定で、かつ、転移
活性の高い酵素を用いることにより効率的に合成するこ
とができる。

【００６３】また、本発明の製造方法により安価に供給
されるガラクトース型配糖体の優れた特性を活用するこ
とで、食品、化粧品および医薬品等に適用し得る水溶性
抗酸化剤の有効成分としての利用が図れる。

【００６４】さらに、本発明のガラクトース型配糖体
は、優れた放射線防護作用を有するものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例１で得られた式（４）に示されるクロ
マノール配糖体の赤外線吸収スペクトルである。

【図２】 実施例２で得られた式（５）に示されるクロ
マノール配糖体の赤外吸収スペクトルである。

【図３】 実施例１および実施例２によって得られた式
（４）、式（５）に示されるクロマノール配糖体、ブチ
ルヒドロキシトルエンおよびα−トコフェロールの抗酸
化活性をリノール酸メチルのラジカル連鎖自動酸化反応
の抑制により評価すべく、経時的にリノール酸メチルハ
イドロパーオキサイドの生成量を測定した結果を示すグ
ラフである。

【図４】 実施例１および実施例２によって得られた式
（４）、式（５）に示されるクロマノール配糖体および
アスコルビン酸の抗酸化活性を多重層リポソームのラジ
カル連鎖自動酸化反応の抑制により評価すべく、経時的
にホスファチジルコリンハイドロパーオキサイドの生成
量を測定した結果を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 19/60 Ｃ１２Ｐ 19/60 // Ａ２３Ｌ 3/3562 Ａ２３Ｌ 3/3562

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（１） 【化１】 （ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ およびＲ⁴ は同一ま
   たは異なる水素原子または低級アルキル基を表わし、Ｒ
   ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級アシル基を表
   わし、糖残基中の水酸基の水素原子は低級アルキル基ま
   たは低級アシル基で置換されていてもよく、およびｎは
   ０〜４の整数である）で表わされるクロマノール配糖
   体。
2. 【請求項２】 一般式（２） 【化２】 （ただし、式中、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ³ およびＲ⁴ は同一ま
   たは異なる水素原子または低級アルキル基を表わし、Ｒ
   ⁵ は水素原子、低級アルキル基または低級アシル基を表
   わし、およびｎは０〜４の整数である）で表わされる２
   −置換アルコール及び、β−ガラクトシル糖化合物を含
   有する溶液にβ−ガラクトシダーゼ（ＥＣ３．２．１．
   ２３）を作用させることを特徴とする請求項１に記載の
   一般式（１）で示されるクロマノール配糖体の製造方
   法。
3. 【請求項３】 請求項１に記載の一般式（１）で表わさ
   れるクロマノール配糖体を有効成分とすることを特徴と
   する抗酸化剤。