JPH02504429A - リウマチ様関節炎の診断と治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ｉウマチ　　　界の鰺　と９１ １、ＬＪＬ 本発明は、個体におけるリウマチ様関節炎の診断に関する。本方法は、ウィルス ペプチドまたはタンパク質の存在が個体におけるリウマチ性関節炎の発生と関係 しているという発見に基づいている。

本発明はまた、抗ウィルス剤の投与によるリウマチ様関節炎の治療に関わる。

２、主里坐責且 ２．１．ユ立ヱ土様聚里玄 ２．１．１．　＋ウマチ　　　ニ′の リウマチ様関節炎（ＲＡ）は、未知の病因による慢性全身性疾患であり、その組 織病理は溝膜細胞の増殖、関節の軟骨及び骨の破壊、および単核細胞の浸潤によ って特徴付けられる。その深刻で、衰弱をもたらす続発症は関節の結合組織の型 爛と破壊に由来する。

自己免疫性ＭＲＬ／１７ウス系統（？Ｉｕｒｐｈｙ、　Ｅ、　Ｄ。

およびＲｏｔｈｓ、　Ｊ、　Ｂ、、　１９７Ｂ、　「自己免疫疾患の遺伝的制４ ＢＪ　、Ｒｏｓｅ、　Ｎ、　Ｒ，’ｆ５、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ−Ｈｏ ｌｌａｎｄ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ｐｐ、２０７−２１９）は、自然発生的なりウマチ様関節 炎一様の疾病にかかる（Ｈａｎｇ＋　Ｌ−Ｍ、１９８２．　Ｊ。

Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５５：１６９０−１７０１）。これらのマウスの関節内 に起こる病理変化は、三段階に分けることができる（０’５ｕｌｌｉｖａｎ、　 Ｆ、χ、−ら−１１９８５，Ａｒｔｈｒ、　Ｒｈｅｕｍ、　２８　：　５２９− ５３６）、第一段階は７から１３週齢の間に起こり、関節陥凹内での滑脱細胞の 増殖からなる。第二段階は、ガン化した開業細胞に類領した外観を有する滑脱細 胞の引き続いての増殖によって特徴付けられる。最初の破壊的変化は第二段階で 起こり、周縁の度爛を含む、それに続いてまもなく、関節の軟骨および半月軟骨 の進行性の破壊が起こる。最終段階は、溝膜細胞増殖の減少、広範な軟骨の破壊 、癒痕組織および線維軟骨の形成、および溝膜間質の単核および多形核炎症細胞 による中程度の浸潤によって特徴付けられる。

ＭＲＬ／１疾病の進行中を通じて、炎症細胞の浸潤や滲出と組織破壊の間には顕 著な解離がある。関節の軟骨および軟骨下の骨の庚爛は、ガン化したように見え る滑層管壁細胞の増殖、付着および侵入と、始めは関連しており、ヒトＲＡにつ いて記述された（Ｆａｓｓ−ｂｅｎｄｅｒ、　）１．−Ｇ、、　１９８３．　Ｃ ｏｌＣｏ１１ａ　Ｒｅ１．　Ｒｅｓ、　３：１４１−１５５）本来は非炎症性の 関節破壊と類似している。ＭＲＬ関節炎およびヒ）ＲＡにおける典型的な関節の 度爛は、おもに増殖した滑脱細胞に隣接した領域に起こり、このことは、細胞外 マトリクス、特に軟骨および骨のコラーゲンの成分分解能を有する増殖細胞から 酵素が放出されることを示唆するＣＫｒａｎｅ、　Ｓ、　ＬおよびＡｍｅｎｔｏ 、　　Ｅ、　　Ｐ、＋　　１９８３．　　Ｊ、　　Ｒｈｅｕｍａｔ、　　１０（ Ｓｕｐｐ、１１）ニア−１２）。この点に関しては、コラーゲンの潜在的な主要 な役割およびその調節が広く研究されている（Ｈａｒｒｉｓ。

Ｅ、Ｄ−ｉ、１９８４．　ＣｏｌＣｏ１１ａ　Ｒｅ１．　Ｒｅｓ、　４：４９３ −５１２）。

滑脱細胞によるコラゲナーゼおよびプロスタグランジンＥ２生産の増大を引き起 こす物質が同定され、単核細胞因子またはＭＣＦと名付けられた（Ｄａｙｅｒ、 　Ｊ、　Ｍ。

−ラ−２１９８１，ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、　１２４：２５３−２５６）。

リウマチ様滑脱に由来する細胞の間の多くの細胞相互作用が記述されているが、 根本の関節破壊の正確なメカニズムは未知のままである。なぜ滑脱細胞は炎症細 胞の浸潤がないと増殖するのか（０’５ｕｌｌｉｖａｎ、　Ｆ、　Ｘ−１４，１ ９８５，Ａｒｔｈｒ、　Ｒｈｅｕｍ、　２８：５２９−５３６．　Ｆａｓｓｂｅ ｎｄｅｒ、　Ｈ，Ｇ、、　１９８３．　ＣｏｌＣｏ１１ａ　Ｒｅ１．　Ｒｅｓ、 　３：１４１−１５５）、そしてこれらの細胞がなぜ付着し始め、続いて軟骨や 骨の結合組織マトリクスを破壊するのかは、当分野において重大な疑問のままで あった。

細胞の付着のメカニズムはとりわけ興味深いが、これは特に軟骨や骨の魔爛が、 ＭＲＬ／１マウスにおいて、疾病の初期の炎症段階に、増殖する滑層管壁細胞が 軟骨や骨のマトリクスに密接に接触しているように思われる領域にだけ起こるた めである（０’　５ｕｌｌｉｖａｎ。

Ｆ、χ、ら、１９８５．　Ａｒｔｈｒ、　Ｒｈｅｕｍ、　２８：５２９−５３６ ）　、同じことがヒトのりウマチ様関節炎の初期傷害についても事実として当て はまる（Ｆａｓｓｂｅｎｄｅｒ、　Ｈ，Ｇ、、　１９８３゜ＣｏｌＣｏ１１ａ　 Ｒｅ１．　Ｒｅｓ、　３：１４１−１５５）　＊これらの初期段階は、炎症性血 管新生バンヌスの存在および、可溶性媒介物質やタンパク質加水分解酵素の産生 によって特徴付けられるもっと後期の段階に観察された所見とは、はっきり区別 して考える必要がある　（Ｚｉｆｆ、　Ｍ、、　１９８３、　Ｊ、　Ｒｈｅｕｍ ａｔ、　１０　（Ｓｕｐｐ、　１１）：１３−２５；　Ｄｉｎｇｌｅ、　Ｊ、　 Ｔ。

、　１９３Ｂ、　Ｊ、　Ｒｈｅｕｍａｔ、　１０　（Ｓｕｐｐ、　１１）：３８ −４２）。

ヒト（Ｗｙｎｎｅ−Ｒｏｂｅｒｔｓ、　ｃ、　Ｒ，およびＡｎｄｅｒｓｏｎ、　 Ｃ，。

１９７８、　Ａｒｔｈｒ、　Ｒｈｅｕｍ、　７：２７９−２８６；　Ｇｈａｄｉ ａｌｌｙ、　Ｆ、　Ｎ、。

１９８０、　Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔ、　Ｐａｔｈ、　１：２４９−２６４）　 、ラット（Ｇｒａａｂａｅｋ、　Ｐ、　Ｍ、、　１９８４．　Ｌａｂ、　Ｉｎｖ ｅｓｔ、　５０：６９０−７０２）、及びマウス（Ｌｉｎｃｋ、　Ｇ、およびＰ ｏｒｔｅ、　Ａ、、　１９７８゜Ｃｅ１ｌ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｒｅｓ、　１８７： ２５１−２６１；　Ｌｉｎｃｋ、　Ｇ、およびＰｏｒｔｅ、　Ｌｌ　１９７８． 　Ｃｅ１ｌ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｒｅｓ、　１８５：２５１−２６１）の関節の正常 な滑層管壁の電子顕微鏡検査はタイプＡ細胞（マクロファージ様食細胞）および タイプＢ細胞（より線維芽細胞的な細胞）を明らかにした。ＭＲＬ／１マウス（ ０’５ｕｌｌｉｖａｎ、　Ｆ、　Ｘ、　４．１９８５．　Ａｒｔｈｒ。

Ｒｈｅｕｗｌ、　２８：５２９−５３６）ならびにヒトリウマチ様関節炎（Ｆａ ｓｓｂｅｎｄｅｒ、　Ｈ，ｃ、ｌ　１９８３．　ＣｏｌＣｏ１１ａ　Ｒｅ１．　 Ｒｅｓ、　３：１４１−１５５）において増殖する滑脱細胞は、ガン化を経てい ることが示唆された。

エプスタイン−パールウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、風疹ウィルス、レオウィル ス、およびバルボウィルス（Ｂｒｏｗｎ、　Ｋ、　Ａ、、１９８４．　Ｎａｔｕ ｒｅ　３０９：５８２）といったウィルスが、リウマチ性関節炎の病因と深く関 係している（Ｓｏｋｏｌｏｆｆ、　Ｌ、、１９８４．Ｉｎｔｌ、　Ｒｅｖ、　Ｅ ｘｐ、　Ｐａｔｈｏｌ、　２６二１１７−１１９：　　Ｓｍ１ｔｈ、　　Ｃ，Ａ 、、１９７９．　　Ｊ、　　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ、　　６（２）：１１３−１１ ６；　Ａｐｒｉｌ　７．１９８４．　Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ、　ｐｐ、７７２− ７７４；Ｂａｃｏｎ、　Ｐ、　Ａ、およびＴｕｎｎ、　Ｅ、　Ｊ、、　１９８６ ＋　ＱｕａｒｔｅｒｌｙＪ、　Ｍｅｄ、、　Ｎｅｗ　５ｅｒｉｅｓ　６Ｈ２３４ ）：８９７−８９９；　Ｓｎｙｄｅｒｍａｎ。

Ｒ−４，１９８７，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ａｎｄ　Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ　３０ （１０）：１１９１−１１９４を参照のこと）。ヤギの慢性関節炎は、レトロウ ィルス群のレンチウィルス構成員であるヤギ関節炎−脳炎ウィルス（ＣＡＥＶ） によって起こるようである（Ｃｒａｗｆｏｒｄ、　Ｔ、　Ｂ、　ｉ、１９８０． ５ｃｉｅｎｃｅ　２０７：９９７；Ｂａｎｋｓ、　Ｋ、　Ｌ、ｉ、１９８７．　 Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ａｎｄ　Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ　３０（９）：１０４６− １０５３；　Ｂｒａｓｓｆｉｅｌｄ、＾、Ｌ−Ｍ、１９８２．　Ａｒｔｈｒｉｔ ｉｓ　ａｎｄ　Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ　２５（８）：９３０−９３６）。

２．１．２．’ウマ　　　　二゛のンムリウマチ様関節炎（これを同意義で“Ｒ Ａ”とも呼ぶ）の病因は従来は未知であったが、その疾病の病理学的特徴を治療 する様々な療法が行なわれてきた。アスピリンを含むサリチル酸塩は、その抗− 炎症作用および鎮痛作用ゆえに用いられている。イブプロフェンおよび類憤化合 物は、サリチル酸塩の代わりに用いられる。インドメタシンは、別の抗−炎症、 鎮痛剤で、サリチル酸塩での治療には向いていない。金化合物は活動性の関節炎 症に対して前記の化合物とともに使用されるが、ＲＡの状態が進行している場合 には必ずしもいつも有効であるわけではない。さらに、有害な副反応が、金化合 物の使用によって引き起こされる。金化合物の代わりに用いられるＤ−ペニシラ ミンも、非常に有害な副反応を起こし得る。穏やかなものから中程度までの活動 性ＲＡの症状は、ヒドロキシクロロキンで治療できる。ただしその使用により不 可逆の網膜の損傷が起こり得る。コルチコステロイドの使用は、短期間の抗−炎 症効果をもたらすが、関節損傷の進行には作用しない（Ｂｅｒｋｏｗ、　Ｒ，ｉ 、１９８２．　Ｔｈｅ　？！ｅｒｃｋＭａｎｕａｌ、　７７９−７８６）。

２．２．レトロウィルス ＲＮＡ１ｉ瘍ウイルスは−１，）　Ｄ　Ｉ笈イ」≦弘科の腫瘍ウィルス亜科を構 成する。−ｐ　）　Ｏ＋２乙」≦Ｕまたはレトロウィルスは、エンベロープに包 まれたＲＮＡウィルスで（総説として以下を参照のこと、Ｗａｙｗａｒｄ、　Ｗ 、　Ｓ。

およびＮｅｅｌ＋　Ｂ、　Ｇ、＋　１９８Ｌ　Ｃｕｒｒ、　Ｔｏｐ、　Ｍｉｃｒ ｏｂｉｏｌ。

Ｔ＋＋＋ｍｕｎｏ１．９１：２１７−２７６）、それらの複製サイクルにおいて ＤＮＡ中間体を利用する。該ウィルス粒子は宿主細胞原形質膜に由来する外膜エ ンベロープによって囲まれたリボ核タンパク質コアからなる。ウィルスエンベロ ープの糟タンパク質は、外Ｎ膜から突き出ている。

該ウィルスゲノムは一本鎖ＲＮＡ分子からなる。

すべてのレトロウィルスの科および亜科は、ＲＮＡ依存ＤＮＡポリメラーゼまた は逆転写酵素といった酵素作用の結果としてＤＮＡ中間体を経て複製する。複製 サイクルはウィルスの細胞表層への吸着で始まり、続いて細胞膜への侵入、ウィ ルス粒子の脱外皮、さらにウィルスＲＮＡの放出が起こる。ウィルスＲＮＡは次 に、逆転写酵素によるＤＮＡ合成の鋳型となる。線状ＤＮＡ二本鎖の一部が核に 運ばれ、ここで共有結合で閉環した環状ＤＮＡ分子（プロウィルスＤＮＡ）に変 換され、次に宿主細胞のクロモソームＤＮＡに組み込まれる。組み込まれたプロ ウィルスＤＮＡは宿主ゲノムで複製し、ウィルス粒子に取り込むためにゲ人ムＲ ＮＡを生産し、さらにプロセシングを受は翻訳されてウィルスタンパク質を生産 するウィルスメツセンジャーＲＮＡを合成するための鋳型となる。ウィルス粒子 の構築は細胞質内細胞膜で行なわれる。未成熟な粒子は、膜を通って細胞外に出 芽し、ここで成熟する。

放出された粒子は次いで新たな怒染の一巡を始められる。

トリＲＮＡｌ１Ｉ瘍ウイルスはその病原性に基づいて二つのグループに分けられ る。早くガン化させるウィルスは、インビボで２−４週間以内に新生物を生じさ せることができ、インビトロで細胞を形態的にガン化するであろう（Ｇｒａｆ、 　Ｔ、およびＢｅｕｇ、　Ｈ，，１９７８，Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ 、　Ａｃｔａ　Ｒｅｖ、Ｃａｎｃｅｒ　５１６：２６９−２９９）、　１！慢に ガン化させるレトロウィルスは４−１２力月後に新生物を誘導し、組織培養細胞 をガン化しない（ｐｕｒｃｈａｓｅ。

Ｈ，Ｇ、　ら、１９７７、１ｎｆｅｃｔ、　Ｔｎｕｓｕｎ、　１５：４２３−４ ２８）。病原性の相違の根源は遺伝子にある二２、性のガン化レトロウィルスは 、緩慢な発ガンウィルスのゲノムには存在しないガン化遺伝子を有している。

トリ白血症ウィルスすなわちＡＬＶは緩慢にガン化を起こすレトロウィルスの原 型である。そのゲノムは５′から３′へ直線に並んだ又ｌ且、　ＬＬＬ、および 工且ヱ遺伝子からなる。ｍ遺伝子は、ウィルスコアの構造タンパク質または群− 特異的抗原をコードし、１土上は逆転写酵素をコードし、ｅｎｖはエンベロープ の糟タンパク質をコードする。

既知のレトロウィルスガン遺伝子、すなわちＶ−Ｏｎｃと同等なものが正常細胞 、すなわち、Ｃ−０ｎＣにも存在することが研究によって明らかにされた。ガン 遺伝子によってコードされるガン化タンパク質は、様々な細胞の位置や機能を包 含する（総説としては、Ｅｕｎｔｅｒ、　Ｔ、、　１９８４．　Ｓｃｉ、　Ａｍ ｅｒｉｃａｎ　２５１ニア０−７９を参照のこと）、これらのタンパク質は配列 や機能の類似性に基づいてグループ分けされる。例えば、ｒａｓタンパク質はＧ ＴＰ−結合性を有し、一方工１且および工１工（Ｈｅｍｐｎａｕｅｒ、　Ｍ、− Ｈ，および５ｉｐｐｅｌ、　Ａ、　Ｅ、、　１９８６、　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１． 　Ｂｉｏｌ、　６：６２−６９）はともにＤＮＡ−結合活性を持つ核タンパク質 をコードする。いくつかのガン化タンパク質は増殖因子やそのレセプターと関連 していることが分かっている。

ＮＩＨ３Ｔ３　　（マウス線維芽細胞）細胞において、ｒａｓによって誘導され る主要なタンパク質は、システィンプロテアーゼ、カテプシンしてある（Ｊｏｓ ｅｐｈ。

Ｌ、ら、Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｃｌｓ　Ｒｅｓ、　１５（７）：３１８６）。Ｈ− ｒａｓ−ガン化マウス線維芽細胞において、ｒａｓの発現の程度、転移の可能性 、および分泌されるカテブシンＬの総量の間には正の相関関係が見いだされた（ Ｄｅｎｈａｒｄｔ、Ｄ−Ｔ、ｉ、１９８７．　Ｏｎｃｏｇｅｎｅ　２：５５−５ ９）　、カーステンウィルス（ｒａｓガン遺伝子を運ぶ）でガン化されたマウス 線維芽細胞系統から排出される主要なタンパク質は、触媒として活性のアルカテ プシンし前駆体型であると思われる　（！’Ｉａｓｏｎ、　Ｒ，Ｗ、　　−ら− 、１９８７＋　Ｂｉｏｃｈｅ＋＋＋。

Ｊ、　２４８：４４９−４５４）。

ヒトＴ細胞白血病ウィルス（ＨＴ　Ｌ　Ｖ）は、ヒトＴ細胞に対して同性を示す 一連のヒトレトロウィルス群である。ＨＴＬＶ−１およびＨＴＬＶ−Ｉ［は、あ る種の白血病およびリンパ腫に関連している。ＨＴＬＶ−■は、成人下細胞白血 病（Ｇａｌｌｏ、　Ｒ，Ｃ，ａｎｄ　Ｗｏｎｇ−５ｔａａｌ、　Ｆ、、　１９８ ２．　Ｂｌｏｏｄ　６０：５４５；　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，、１９８４゜ｉｎ 　Ｃａｎｃｅｒ　５ｕｒｖｅｙｓ、　　Ｖｏｌ、　　３＋　　Ｆｒａｎｋｓ＋　 　Ｌ、　　！’１．、ｅｔ　ａｌ、、ｅｄｓ、、０ｘｆｃｒｄ　　ｔｌｎｉｖ、 Ｐｒｅｓｓ、０ｘｆｏｒｄ、ｐｐ、１１３−１５９）に原因として結びつけられ ている。ＨＴＬＶ−！Ｉは、毛細胞白血病のＴ細胞変種にかかった愚者で最初に 同定された　（Ｋａｌｙａｎａｒａｍａｎ、　Ｖ、　Ｓ、、　ｅｔ　、は、、１ ９８２＋　５ｃｉｅｎｃｅ　２１８：５７１）。いずれのウィルスとも、−＋’ ｙＹ上旦で感染したＴ細胞をガン化させる能力を持ち、さらにほかの細胞変化を 引き起こす（Ａｒｙａ、　Ｓ、　Ｋ、、　ｅｔ工１．。

１９８４、５ｃｉｅｎｃｅ　２２５：９２７−９３０、およびそこに記載された 参考文献を参照のこと）。

ＨＴＬＶ−１一様レトロウィルスは、進行性のを肺病である熱帯性痙撃性不全対 麻痺患者に由来するＴ細胞系統から単離された（Ｊａｃｏｂｓｏｎ、　Ｓ、、　 ｅｔ　ａｌ、＋　１９８ＬＮａｔｕｒｅ　３３１：５４０−５４３）。データは 、多発性硬化症がＨＴＬＶ−１に関連した新規レトロウィルスの存在に関係づけ られることを示唆している（Ｋｏｐｒｏｈｓｋｉ、　Ｈ０＋ｅｔａ１．、１９８ ５．　Ｎａｔｕｒｅ　３１８：１５４−１６０）が、その後の研究は、ＨＴＬＶ −１一様ウイルスの関与を立証できなかった（Ｈａｕｓｅｒ、　Ｓ、　Ｌ、、　 ｅｔ　ａｌ−＋　１９８６．　Ｎａｔｕｒｅ　３２２：１７６−１７７；　Ｋａ ｒｐａｓ、　Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８６．　Ｎａｔｕｒｅ　３２２：１ ７７−１７８）。

エイズの原因となる作因は、現在はヒト免疫不全ウィルスｌ型（ＨＩＶ−１）と 称され、以前はおそらくは同一のレトロウィルス亜群のウィルスを独立に単離し た　（Ｌｅｖｙ、　Ｊ、　Ａ、、　ｅｔ　ａｌ−＋　１９８４．５ｃｉｅｎｃｅ 　２２５：８４０）三つのグループによってＨＴ　Ｌ　Ｖ　ｍ　（Ｇａｌｌｏ、 　Ｒ，Ｃ。

＋　ｅｔ　ａｌ、＋　　１９８４＋　　５ｃｉｅｎｃｅ　２２４：５００；　Ｐ ｏｐｏｖｉｃ、　Ｍ、、旦ａ１．．　１９８４．　５ｃｉｅｎｃｅ　２２４：４ ９７）、　　ＬＡＶ　　（Ｂａｒｒｅ−Ｓｉｎｏｕｓｓｉ＋　　ｐ、ｌ　　ｅｔ 　ａｌ、＋　　１９８３．　５ｃｉｅｎｃｅ　２２０：８６８；　　Ｆｅｏｒｉ ｎｏ　、　Ｐ、　ｌ’１．、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８４．５ｃｉｅｎｃｅ　２ ２５：６９）、およびＡＲＶ　　（Ｌｅｖｙ、　Ｊ、　Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、、 　　１９８４．５ｃｉｅｎｃｅ　２２５：８４０）と称されたレトロウィルスで ある。

ＨＩＶ　（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ）のＦ（３’ｏｒｆ遺伝子）は、ガン遺伝子産物と 配列相同性のあるタンパク質をコードしていることが示されている。そのタンパ ク質はｒａｓタンパク質と共同してＧＴＰアーゼ、自己リン酸化およびＣＴＰ− 結合活性を示す（Ｇｕｙ、　Ｂ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８７．　Ｎａｔｕｒ ｅ　３３０：２６６−２６９）。

Ｐｅ１ｔｏｎ、　Ｂ、　Ｋ、、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８８＋　Ａｎｎａｌｓ　 Ｒｈｅｕ。

Ｄｉｓｅａｓｅｓ　４７：２０６−２０９は、逆転写酵素の生産およびＨＩＶ　 ｃＤＮＡプローブとのハイブリッド形成を用いて、ＲＡまたは全身性エリテマト ーデス（Ｓ　Ｌ　Ｅ）の患者にウィルス惑染の証拠を見いだすことはできなかっ たが、感染や疾病を引き起こすレンチウィルスがＲＡやＳＬＨにともなって起こ る病状と類似した多くの免疫病理学的特徴を示すため、レンチウィルスは、それ らの疾病に関連して研究されてきた。結果は、内在性のレンチウィルスや他のレ ンチウィルスゲノム物質が証明されなかった（１９７９．　Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏ ｌｏｇｙ　１２：２３４−２３９）ため、レンチウィルス感染が水平に伝搬され ることを示唆している（Ｙａｎｉｎ、　Ａ、＋ｅｔ　ａｌ−＋　１９８５＋　Ｖ ｉｒｏｌｏｇｙ１４５：３４０−３４５）、レンチウィルス類の一つであるビス ナウィルスは、主要な内部構造ポリペプチド、Ｐ２Ｏを含むことが示された。こ のポリペプチドは他のレンチウィルスに共通な群−特異的抗原決定基を持つが、 ガンウィルスや泡沫ウィルス（１９７９Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ　１２：２ ３４−２３９）といった他のレトロウィルスには見いだされていない。様々なウ ィルスゲノムのヌクレオチド配列分析（Ｃｈｉｕ、　Ｌ　Ｍ、、　ｅｔ　ａｌ、 、　１９８５．　Ｎａｔｕｒｅ　３１７：３６６−３６８）は、ＨＴＬＶ−Ｉ［ １が最も密接にレンチウィルスＣＡＥｖに関連し、一方ＨＴＬＶ　　Ｔ＃よびＨ ＴＬＶ−ＩＩのゲノムはガン遺伝子亜科に最も密接に関連していることを証明し た。

特定のウィルスやウィルス様成分がＲＡにおける原因因子として確認されること はなかった。結局、ＲＡの診断方法は二次的な病理学的特徴の検査を中心として いる。さらに、ＲＡの治療は、こういった二次的な病理学的特徴を軽減すること に向けられている。

明らかに、必要とされるものは、その病気の原因を前折として、ＲＡ状態がある 個体に存在するかどうかを検定するためのよりよい方法である。さらに、ＲＡの 原因をいっそう明確に理解することによって、改善された治療プロトコールを得 ることができる。

３、主旦企亙亡 本発明は、個体におけるリウマチ様関節炎の診断方法に関する。本方法は、ウィ ルス性のペプチドやタンパク質の存在が個体におけるリウマチ様関節炎の発生に 関連しているという発見に基づいている。一般的に言えば、本発明はＲＡの罹患 が疑われる患者においてＲＡを診断する検定からなる。

もっと明確には、本発明は抗ウィルス剤を用いたリウマチ様関節炎の治療に関す る。このような治療は、該疾病の原因と関連していることがここに明らかになっ た生物学的な粒子に向けられている。

４、二皿坐互説 本発明は、下記の発明の詳細な説明および次のような図面を参照することによっ てより容易に理解されるであろう。

第１図は、ＨＴＬＶ−Ｉ　ｐ１９に対するモノクローナル抗体で染色され次にＦ 　）ＴＣ−標識ヤギー抗マウスＩｇＧで染色されたＲＡ患者の滑脱（２３３／３ １）のフレッシュ凍結切片を示す。５％以下の滑脱細胞が、特異的な細胞内およ び／または膜の染色を示した。　（Ｘ　４００）第２図は、ホルマリン固定ＲＡ 滑膜組織（Ｒ１８９２）のパラフィン切片を示す。これは銀増感免疫金染色法に よって標識された、ＨＴＬＶ−１ｐ１９に対するモツクローナル抗体で染色され た。骨の慶爛部位に隣接した滑脱細胞の特異的染色が示されている。（Ｘ２５０ ）第３図は、ＲＡに苦しむ患者からの試料で観察された典型的なレトロウィルス 構造を示す電子顕微鏡写真である。このＲＡ患者の血清は、ＨＴＬＶ−１および ＨＴＬＶ−ＩＩに対する抗体に対して陰性であった。（Ｘ２８５、０００） ５、主里企且史星説里 本発明は、個体においてリウマチ様関節炎を診断するだめの方法を与える。本発 明はまた、抗ウィルス剤の投与によってリウマチ様関節炎を治療するための方法 を与える。

一般的に言えば、リウマチ様関節炎を持つ個体が、ＨＴＬＶ関連タンパク賞配列 のようなレトロウィルスのタンパク質配列を有することが発見された。このタン パク質配列は、増殖し、ガン化したように見える滑脱細胞および、関節の免疫応 答や炎症と関連している。これらのタンパク質配列は、ＨＴＬＶのタンパク質決 定基に対して指向する抗体によって認識されるエピトープからなる。リウマチ様 関節炎にともなうＨＴＬＶ−関連ペプチドまたはタンパク質の検出は、１）個体 におけるリウマチ様関節炎の診断、および２）抗ウィルス剤の投与によるリウマ チ様関節炎の治療、のだめの手段を与える。

より明確には、本発明の望ましい実施態様は、リウマチ様関節炎の診断方法に関 するものであり、これは個体においてＨＴＬＶタンパク質といったレトロウィル スタンパク質エピトープのようなエピトープからなるペプチドまたはタンパク質 を検出することによる。

このような方法は以下の各項からなり：ａ）個体から試料を得ること； ｂ）該試料をレトロウィルスタンパク質に向けられた抗体に、該抗体がエピトー プに結合できる反応条件を接触させること； Ｃ）未結合の抗体分子を試料から除去すること；ｄ）結合した抗体の存在につい て該試料を試験すること、 ここにおいて、抗体の結合は個体におけるリウマチ様関節炎の存在を示す。

望ましい実施態様において、ＨＴＬＶのエピトープ糟タンパク質に向けられたモ ノクローナル抗体を用いた。

モノクローナル抗体を標識することができる。あるいは、その方法は、抗体の標 識された結合パートナ−をさらに加えることからなることもある。

本発明に用いたモノクローナル抗体は、抗−ＨＴＬＶ　　Ｉ　　ｐ１９、ｐ２４ 、オヨび抗−ＨＴ　Ｌ　Ｖ　　ｍ　　ｐ　２４＃　ヨる一群から選択するのが望 ましい。しかしながら、本方法の実施に際しては、ＨＴＬＶに対する親和性を有 するあらゆるモノクローナル抗体を利用できる。望ましい抗体はＤｕｐｏｎｔ（ Ｂｉｌ］ｅｒｉｃａ、　ＭＡ）から市販されており、抗−ＨＴＬＶ　　１　　ｐ １９、抗−ＨＴＬＶ　　Ｉ　　ｐ２４、抗−ＨＴＬＶ　Ｉ［ｌ　ｐ１５／１７、 抗−ＨＴＬＶ　Ｉ［Ｉ　Ｐ２４および抗−ＨＴＬＶ　　Ｉ［Ｉ　　ｇｐ１２０、 ならびに抗−ＨＴＬＶ逆転写酵素として同定されている。

ＨＴＬＶタンパク質エピトープのようなエピトープからなるペプチドやタンパク 質は、１）複合体を形成しておらず、２）上述の一群からの生物学的な物質と複 合することができ、３）ウィルスと結合することができ、さらに４）ＨＴＬＶＩ 、ＨＴＬＶＩ［［、新規のＨＴＬＶＩｎ−関連タンパク質または新規ＨＴＬＶ− Ｉ−関連レトロウィルスといったタンパク質であってよい。もっと明確には、抗 体は、）ＩＴＬＶ　　Ｉ　　ｐ１９、ＨＴＬＶ　　Ｉ　　ｐ２４、ＨＴ　Ｌ　Ｖ 　　ｍ　　ｐ　１５／１７、ＨＴＬＶ　　Ｉ［Ｉｐ２４およびＨＴＬＶ　　Ｉｌ ｌ　　ｇｐ１２０、ならびに抗−ＨＴＬＶ逆転写酵素からなる一群から選択され るＨＴＬＶタンパク質に向けられてよい。

本発明のこの実施態様にしたがって検出されるペプチドまたはタンパク質に関し て、非複合タンパク質は他のいかなる生物学的物質とも共有結合によってもイオ ン結合によっても結合してないタンパク質である。

他の場合、タンパク質は共有結合またはイオン結合によって他の生物学的物質と 複合している。さらに、該タンパク質は、ウィルス複製タンパク譬または宿主ゲ ノムに挿入されたウィルスゲノム素材から生産されるタンパク質と関連付けられ る。

検定される試料は、滑脱細胞、組織および滑液、さらに滑脱組織や滑液の近傍の 半月および関節の軟骨や軟骨に近い骨といった他の関節構成要素を含むがこれに 限定されない。

本発明において、アッセイに適した試料は、滑脱試料であり、ここで滑脱試料は 滑脱細胞および滑液からなる一群から選択される。しかしながら、罹患した個体 に由来する他の起源の生物学的試料が使用できる（すなわち、単核末梢血液細胞 ）。

標識された複合体のアッセイは望ましくは以下によって成し遂げられる：１）ａ ）免疫蛍光法（第１図）、ｂ）免疫−パーオキシダーゼ法、およびＣ）銀増悪免 疫金染色（第２図）といった染色法、および２）電子顕微鏡による微細構造解析 （第３図に示されたような）。さらに、免疫細胞学、イムノブロッティングおよ びＥＬＩＳＡ（酵素−結合イムノソルベントアツセイ）法も用いられる。

発明の別の実施態様において、プローブとしてＨＴＬＶタンパク質のようなレト ロウィルスタンパク質をコードする標識核酸配列を用いて、五速ｊ８１１Ωハイ ブリッド形成のアンセイによって、患者においてリウマチ様関節炎を診断できる 。このような核酸プローブは、エンベロープ糖タンパク賞、コアタンパク質、ポ リメラーゼ、逆転写酵素または他のレトロウィルス特異的タンパク質の少なくと も一部をコードし得るＤＮＡ、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡ配列を含むがこれに限定 されない。

もっと明確には、以下からなる、患者におけるリウマチ様関節炎の診断方法が明 らかにされている；（ａ）　　患者から組織試料を分離すること（ロ）プローブ を試料中の＠酸に対してハイブリッド形成させられる条件下で、該組織試料をレ トロウィルス遺伝子に特異的な核酸プローブと接触させること （Ｃ）　　未結合のプローブを除去すること：および（ｄ）　　プローブのハイ ブリッド形成を検出すること、ここにおいて、プローブのハイブリッド形成は患 者におけるリウマチ様関節炎を示す。特に、レトロウィルス遺伝子はＨＴＬＶ遺 伝子である。

あるいは、診断方法は、愚者からの核酸試料の分離と、それに続くレトロウィル ス遺伝子に特異的な核酸プローブに対するハイブリッド形成を含んでよい。この ような方法は、特に、ノーザンまたはサザンハイプリソド形成手順または細胞ド ツトプロットハイブリッド形成法を含んでよい。

本発明の別の実施Ｂ様は、患者に対して抗ウィルス剤を投与することによる、患 者におけるリウマチ様関節炎の治療方法である。抗ウィルス剤は、アシクロビア 、ホスホツギ酸、リバビリン、゛アンチセンス”オリゴデオキシヌクレオチド、 プロテアーゼインヒビター、２”、　　３’−ジデオキシヌクレオシド、メチル 亜リン酸オリゴヌクレオチドおよびインターツユロンからなる一部から選択する のが望ましい。さらに、上記２′。

３′−ジデオキシヌクレオシドは、３′−アジド−２′、　　３’−ジデオキシ チミシンおよび２′、　　３”−ジデオキシシチジンからなる一部から選択され る。

６、皇」Ｌ± ６．１．レトロウィルス　ンバク　に・するモノクロール　　　の　　　　　　 　　・　１ ６・１・１・　　　　　　、　　　　　　の　　　蛍　汎６．１．１．１．免Ｊ Ｌｔ虹法 ４−６μ釦の厚さの組織切片を凍結し固定されていない生検試料から、クリオス タット切片作成により調製する。風乾された切片は、適当なモノクローナル抗体 とともにインキュベートされる。制御のために、切片は前免疫血清由来のイムノ グロブリン（１ｇ）とともにインキュベートされる。室温の加温チャンバー内で ３０分インキュベートした後、切片はリン酸緩衝塩類液（ＰＢＳ、ｐＨ７，４） で３回すすぎ、第二段階ではこの切片を、ウサギ抗マウスＩｇと複合した１：３ ０希釈フルオレセイン−イソチオシアネート　（ＦＩＴＣ）で３０分間重層する 。最終的に、該スライドは、非特異的に付着した試薬類を除去するために徹底的 に洗浄され、９０％グリセロール／１０％ＰＢＳでカバーガラス下にシールされ る。染色の局在を、ＦＩＴＣのためのに２フイルターシステムを装備したＬｅｉ ｔｚ−蛍光顕微鏡を用いて観察し写真撮影する。

６．１．１．２．　　　パーオキシ゛−ゼ注パラフィン切片は、キシレンおよび アルコール中でパラフィンを除去する。トリプシン消化（０，１［／ｄ、トリス −ＨＣＬ、６０分）後、該切片は０．３％過酸化水素で処理して内在するパーオ キシダーゼ活性を失活させ、０．０５％サポニンですすぐ（各々２×１５分）。

つぎに、切片は０．２％ＢＳＡ／ＰＢＳで１：５に希釈された正常血清で前処理 し、洗浄し、最初の抗体と４°Ｃで一部インキユベートした。洗浄した後、ＶＥ ＣＴＡＳＴＡＩＮ−ＡＢＣキット　（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｉａｂ、、　Ｉｎｃ、、　 Ｂｕｒ−１ｉｎｇａｍｅ、　ＣＡ）を利用して、記載（）ｔｓＵ　ｅｔ　ａｌ、 、　１９８ＬＪ、　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ、　Ｃｙｔｏｃｈｅｍ　２９：５５７− ５８０）のようにＡＢＣ技法が利用される。

６．１．１．３．　　Ｐｈ感　　　へ　（ＴＧＧＳ）バラフィイン切片は上述の ようにパラフィンを除去し水和する。切片は５％熱失活阻止血清（ヤギ）と３０ 分インキュベートし、続いてモノクローナル抗体と４°Ｃで一部インキユベート する。完全に洗浄したスライドを、０．１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ、ｐＨ７，３で１ ：４０に希釈された全複合抗体（Ａｕｒｏｐｒｏｂｅ　Ｌ？ｌヤギ抗体マウスＩ ｇＧ（Ｊａｎｓｓｅｎ、　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ、　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、　０１ｅｎ ＋　Ｂｅ１ｇ１ｕ＋＋＋））で覆い、室温で２時間インキュベートする。

ＰＢＳ　（および蒸留水で洗浄した後、）新調製した銀増悪試薬（Ｉｎｔｅｎ　 ＳＥ　１１（Ｊａｎｓｓｅｎ、　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ、　Ｐｒｏ−ｄｕｃｔｓ、　 　０１ｅｎ＋　Ｂｅｌｇｉｕｍ））で切片を覆い、反応を光学顕微鏡下でモニタ ーする。

５−１５分後、蒸留水での洗浄により反応を止め、切片はへマトキシリネオシン で逆染色し、きれいにした後スライドに固定する。

６−１．２．□ 免疫電子顕微鏡検査を溝膜生検で行なうときは、試験片は２枚のかみそりの刃、 またはクリオスタットで、０．２−０．５ｍｍの厚さに切断される。それらは、 ４°Ｃで２０分間、０．１６Ｍカコジル酸バッファー、ｐＨ７，４中の１％グル タルアルデヒドで固定され［Ｒ，Ｆｌｅｉｓｃｈ−ｍａｊｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、 　Ｊ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｄｅｒｍａｔ、　７５：］８９Ｊ９１（１９８０）コ 、０．１５Ｍ　）リス−ＨＣｌバッファー、ｐＨ７，５で数回洗浄して過剰なグ ルタルアルデヒドを除去した後、同へソファー中で４°Ｃで保存される。モノク ローナル抗体とのインキュベーションは、Ｐ　Ｂ　Ｓ、　　ｐＨ７，２で１：５ に希釈されたフェリチン標識ウサギ抗マウスＩｇ抗体の共存下で、４°Ｃで２４ 時間行なわれる。試料は、０．１　Ｍ　）リス−ＨＣｌバッファー、ｐＨ７，５ を用いて、４°Ｃで２４時間すすぎ、０．１６Ｍカコジル酸パンファー、ｐ）（ ７，５で３回洗浄し、０．１６Ｍカコジル酸八２ファー１ｐＨ７，４中の３％グ ルタルアルデヒドで２時間固定される。対照試料は、ウサギ抗マウスＩｇフェリ チン標識抗体でのみ処理する。試料は四酸化オスミウムで後固定され、等級を付 されたアルコールを通し、アラルダイトに包埋される。そのブロックは、ＬＫＢ ウルトラドーム−４ミクロトームで１片にされ、およそ５００−６００人　（オ ングストローム）の厚さの標本は、染色されないままか、または酢酸ウラニルの 飽和溶液で染色される。グリッドは、Ｈｉｔａｃｈｉ　ＨＬｆ−１２ＡまたはＰ ｈ１ｌｌｉｐｓ　３００電子顕微鏡で調べられる。

６．１．３．免皇豊皿！ 例えば単離された溝膜細胞や単核末梢血液細胞といった他の細胞を、リン酸緩衝 ４％パラホルムアルデヒドで、４℃２時間、溶液を一回交換して固定する［Ｇａ ｙ　ｅｔ　ａｌ、、　ＣｏｌＣｏ１１ａ　Ｒｅ１．　Ｒｅｓ、　１：３７０−３ ７７（１９８１）］。

つぎに、細胞を４％シー！糟を含むＰＢＳで、４°Ｃ３６時閲、何回も交換しな がら洗浄する。

最後の洗浄は、４％ショ糟および５％グリセロールを含むＰＢＳで、１時間行な う。細胞ペレットを、つぎに、コルクかプラスチックの支え用の裏板のついたＯ ＣＴ凍結凍結中地中き、液体窒素の小容器中に置いたメチルブタン（イソペンタ ン）の広口ビンにそれらを沈めることによってすばやく凍結させる。凍結された 細胞は、ついで、アルミニウムホイルに包み、密閉容器内で一２０度で保存する 。８μｍの厚さの凍結切片を切り出し、アルブミンでコートしたスライドに載せ 、少なくとも５分間風乾する。つぎに、スライドを氷冷したＮａＢＨａのＰＢＳ 溶液（１０ｍｇ／１００ｍ）に入れ、−回交換して１時間おく。この手順の後、 スライドをＰＢＳ中で３０分間づつ３回換えて４°Ｃで洗浄する。

細胞切片は、４°Ｃで一晩または室温で２時間、加湿容器内で適当なモノクロー ナル抗体と反応させる。スライドをＰＢＳで完全に洗浄し、ついで、さらに２時 間第二の抗体（ヤギまたはウサギ抗マウスＩｇ）とともにインキュベートする。

このあと、冷ＰＢＳで洗浄し、Ｆａｂ−パーオキシダーゼ−抗−パーオキシダー ゼ（Ｆａｂ−ＰＡＰ）を用いて３時間、第三の抗体処理を行なう。Ｆａｂ−ＰＡ ＰｌＳ液をＰＢＳによる洗浄で除き、組織切片を、４０■３，３−ジアミノベン ジジン四塩酸および１５μ！の５％Ｈ２Ｏ２を含む１５０ｄの０゜１Ｍ）リス、 ｐＨ７，６中で１５−１８分間インキュベートする。つぎに、スライドを冷ＰＢ Ｓで洗浄し、１％四酸化オスミウムで室温１時間染色する。染色されたスライド は再び冷ＰＢＳですすぎ、アセトンで脱水して、マラグラス（７０％）に包埋さ れ、電子顕微鏡を使用する検査のための超薄切片が作成される。

６．２．イム　プロー−イン゛ タンパク質のイムノプロット分析は、免疫蛍光での検討でみられた抗体の反応性 をｉ認するために行なう。初代培養溝膜細胞は、１０％熱失活ウシつ児血清を添 加したＲ　Ｐ　Ｍ　Ｔ−１６４０培地で生育させる。二連の培養皿からの粘着細 胞は、以下のように処理される：（１）一方の培養皿はＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ 中の０．２５％トリプシンの処理によって細胞を離れさせる。集めた細胞は培養 皿あたりの総細胞数を測定するために計数される。（２）二連の細胞培養皿のも う一方は、トリプシン処理をせず、ＰＢＳで洗浄し、細胞は直接、５ＤＳ−ポリ アクリルアミドゲル電気泳動試料用バッファー（０，１％ＳＤＳ／４Ｍ尿素）中 に、最終濃度が一試料バンファーあたり１０’細胞となるように、集める。可？ ８過細胞タンパク質（１０Ｓ細胞と等量）が、ポリアクリルアミドゲルで電気泳 動的に分離され、ニトロセルロースに移される。非特異的な抗体結合を抑えるた めに、それぞれのプロットは１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）？容液中でブレ インキュベートする。モノクローナル抗体は１％ＢＳＡ溶液で希釈し、プロット とともにインキュベートして抗体結合させる。結合した抗体はパーオキシダーゼ −複合ヤギ−抗−マウス抗体（同じく１％ＢＳＡ溶液で希釈）とのインキュベー ションにより検出され、４−クロロ−１−ナフトールにより可視化される。二連 の一方のプロットは、アミドブラック溶液で染色し、転移された総タンパク質な らびに分子量マーカーを可視化する。

高度に精製されたレトロウィルスタンパク質保存溶液を０．０２Ｍ　ＮａｚＣＯ ３（ｐＨ９１０）で新たに希釈し、９６ウエルマイクロタイタープレート（Ｄｙ ｎａｔｅｃｈ　１ｍｍｕｌｏｎ）にその希釈物を一晩コートする。つぎにウェル は未結合のタンパク質を除くため、０．０５％トゥイーン２０．８よび１％メチ ルオレイトを含むリン酸緩衝塩類液（ＰＢＳ−）ウィーン）で３回洗浄する。プ レートはＰＢＳ（ＰＢＳ−ＢＳＡ）中の０．５％ウシ血清アルブミンでブロック され、続いてＰＢＳ−トウィーンで洗浄される。

６．３．２．２１３月１１ リウマチ様関節炎患者の血清を採血により得る。ネガティブコントロールとして 、単一ロットのプールされたヒト血清を使用する。

患者の血清をＰＢＳで１　：　１．　１　　：　１０．　１　：　１００に希釈 し、各々の希釈液の５０μ！を二連のウェルに加え、３７°Ｃで１時間インキュ ベートする。つぎに、ウェルをＰＢＳ−トウィーンで三回洗浄し、１　：　５０ ０に希釈したホースラディツシュパーオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合ヤギ抗−ヒト イムノグロプリン（Ｎｅｗ　ＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎ ｇ　Ｓｙｓｔｅｍ　ＮＥＩ−６０２）　５０ｕ　Ｒを各々のウェルに添加して３ ７°Ｃで１時間インキュベートする。

未結合のパーオキシダーゼ複合抗体を除去するために５回洗浄した後、５０μ！ の新調製基質（０−フェニレンジアミン）をウェルに添加し、３７°Ｃで１５分 インキュベートする。つぎに、４．５Ｍ硫酸で反応を止め、各々の試料の４９２ ｎ＋１１の吸光度を自動化ＥＬＩＳＡリーダー（Ｔｉｔｅｒ　Ｔｅｋ　Ｍｕｌｔ ｉｓｃａｎ）で読みとる。

あるいは、　″ｓ１−標識ヒツジ抗ヒトイムノグロブリン（比活性、５−２０． ！ＩＣ／　μｇ、　Ａｍｅｒｓｈａｍ、　ＡｒｌｉｎＡｒｌｌｎ　Ｈｅｉｇｈｔ ｓ、北、）を希釈し、ウェルあたり５０．０００カウントを与えるように分画し 、ついで得られたウェルを３７°Ｃでもう１時間インキュベートする。結合しな かった放射活性をＰＢＳプラス０．０５％トゥイーンで、大規模な洗浄によって 除去し、各ウェルの放射活性をＢａｃｋｍａｎ　５５００ガンマカウンターで計 数する。

ｂ、４．＋ウマチ　矢　界の鰺　に矢する　田リウマチ様関節炎の、レトロウィ ルスとりわけＨＴＬＶ関連の病因の診断が、好結果であることが判明している。

ある研究において、レトロウィルス産物が初期の破壊性リウマチ様関節炎患者の 新鮮な滑Ｍ組織の約９０％に発現することが、ＨＴＬＶ　　Ｉ　　ｐ１９および Ｐ２４に対するモノクローナル抗体を利用した免疫蛍光法により確認された。別 の研究においては、レトロウィルス産物の発現は、ＨＴＬＶ　　１　　ｐ１９お よびｐ２４、ならびにＨＴ　Ｖ　−Ｉ　　ｐ１５／１７に対するモノクローナル 抗体を利用した免疫蛍光法により、新鮮な固定されていない滑脱組織試料の約７ ０％に観察された。リウマチ様関節炎疾患を有しない患者にはレトロウィルス産 物の発現を認めなかった。銀増悪免疫金染色を、ホルマリンで固定されパラフィ ン包埋されたりウマチ様関節炎滑膜組織に用いたときは、患者組織の４０％がポ ジティブに染色され、一方テストしたすべてのりウマチ様関節炎ではない横腹組 織には特異的な染色は検出されなかった。

ＨＴＬＶ　　ＩまたはＨＩＶ−１にたいする抗体は、ＥＬ　Ｔ　ＳＡまたはウェ スタンイムノブロッティング技法によっては、ＲＡ！！、者の血清に観察されな かった。

しかしながら、あるＲＡの症例においては、血清におけるＥＬＩＳＡまたはウェ スタンプロットによる否定的な結果にもかかわらず、免疫電子顕微鏡検査のため の免疫金技法による溝膜組織試験は、典型的なレトロウィルス構造の存在を示し た（第３図）。約６５ｎｍの直径を有する構造は、ＨＩ　Ｖ　−Ｔ　　ｐ１５／ １７に特異的な抗体で標識された二重膜で囲まれた高電子密度のコアを含んでい た。

ＨＩＶ−１の逆転写酵素に特異的なモノクローナル抗体（Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｐ ｒｏｄｕｃｔｓ、　Ｉｎｃ、＋　Ｂｕｆｆａｌｏ、　ＮＹ）を用いることによっ てＲＡ患者からの滑Ｍ組織の約７０％に逆転写酵素が検出できた。

６．５．１人■泊！ 本発明においてリウマチ様関節炎の治療には３′−アジド−２′、３−ジデオキ シチミジン（Ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ）のような抗ウィルス剤が用いられる。この 薬剤はＨＴＬＶ−１やＨＴＬＶ−Ｉ［［のような多くのヒトあるいは動物のレト ロウィルスに対してインビトロで活性があることが示されており、また逆転写酵 素活性に関するあるいはｐ２４コア抗原（ｇａｇ蛋白）のようなレトロウィルス 抗原に関するその細胞病理学的効果について特に調べられている。０．１３．！ ／　ｇ　／ｍＬのｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅがあるＨＩＶの株（ＨＴＬＶ−ｍＢ）と ともに用いられたとき、ｐ２４コア抗原の発現は検出できなかった。

Ｚｉｄｏｖｕｃｌｉｎｅは経口投与される。現時点において米国内ではこの薬剤 の非経口投与用の剤型は市販されていないが、該薬剤は静脈内注入によっても投 与されている。Ｚｉｃｌｏｖｕｄｉｎｅの最初の経口用量としては２００■づつ ４時間毎に１日６回の投与が現時点では推奨される：しかじ、この推奨は限られ た実験に基づいており、全通容量ならびに投与の時間表は完全に確立されてはい ない。この用量は７０ｋｇの患者に対し４時間毎に２．９■／ｋｇの投与に対応 する。臨床試験では、ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅは通常４時間毎に２５０■（２，３ −５，９■／ｋｇ）の用量で経口投与されるが、４時間毎に１５■／ｋｇにおよ ぶ経口投与は限られた数の患者に対して短期間（つまり４週間）用いられた。

リバビリンもまたＲＡの治療に試みられた。この薬剤はＴ細胞（Ｔ−白血球）を 刺激し、また抗原に誘導される増殖を用量依存的に阻害することが示されている 。さらに、リバビリンはレトロウィルス科を含む多くのＲＮＡウィルスおよびＨ ＴＬＶ−１１１亜科に対して抗ウィルス活性を示す。

リバビリンはＶｉｒａｔｅｋ微粒子９霧器（ＳＰＡＣ）モデル５ＰＡＧ−２を用 いて、溶液として経鼻あるいは経口吸入によってのみ投与される。６ｇのりバビ リンは無菌粉末として５０　１００ｍＬの無菌水に溶解することによって再構成 する。ついでこの溶液を無菌の５００−Ｉｌｌしフラスコに移す。このフラスコ は５ＰＡＧ−２噴霧器のりザーバーとなる。この溶液は吸入用にさらに無菌水で 希釈され最終容量３００畦の２０ＴＩ！ｇ／ｍＨの溶液にされる。添加物を含む 希釈剤はりバビリンの再構成には用いることができない。さらに、リハ′ビリン ？容液には、その投与前にいかなる微粒子や変色も含まれていてはならない。

ひとたび溶液が正しく再構成されれば、噴霧療法は５ＰＡＣ−２噴霧器から酸素 フード、顔面マスク、または酸素テントによってより望ましい状態で行なわれる 。

２０■／ｄのりバピリンン容液を５ＰＡＣ−２リザーバー中の初発溶液として用 いるとき、５ＰＡＣ−２噴霧器はＬあたり約１９０μｇのりバビリンを含む霧を 放つ。

リバビリン用量の推奨される投与は以下の式にしたがって呼吸器に到達する： されたリバビリン濃度）　ｘＯ，７（呼吸器内に定着した吸入量の割合） もっと明確には、分あたり１２．５Ｌの霧という割合で、該薬剤での吸入治療が １６−１８時間施された。次に治療第三日および第三日は一日１２時間（−日当 り４時間を３回）、治療第四日（最終日）には日時間、投与が続けられた。

アシクロビアはＲＡ治療のための別の候補である。

この薬剤は、経口アシクロビア治療において、免疫の弱まった個体の炎症や痛み を軽減し、新たな病変を防ぎ、病変の治癒を促進すると思われた。さらに、アシ クロビアの主要な治療効果はりウマチ捧関節炎の進行をくい止めることにあると 思われる。経口のアシクロビアの使用は最近になってはじめて用いられたが、そ れは１）新たな病変を防ぎ、２）おそらく痛みの持続期間を減少させ、さらに３ ）病変の治癒をもたらす、とおもわれる。

アシクロビアナトリウムの投与において、ゆっくりとした静脈内注入が必要とさ れる。早い静脈内注入（１０分以下）や早い静脈注射による投与は行なうべきで ない。

アシクロビアナトリウムを再構成するために、その５００■を１０　ａｆｔの注 射用蒸留水に加える。あるいは、５００■のアシクロビアナトリウムをベンジル アルコールを含む注射用のパラベンを含まない静菌水に加える。これらの再構成 溶液は、１２時間以内に使用すべきである。

アシクロビアの経口投与を行なう前には、薬剤が完全に溶解するよう、溶液を振 らなければならない。ふつう、再構成溶液の必要量は５０−１２５ｄの両用でき る静脈内注入溶液で希釈される。希釈溶液を用いたゆっくりとした静脈内注入は 、注入を１時間以下で行なうと起こる可能性のある腎臓への有害な影響の危険を 避けるために１時間以上にわたって行う。

目覚めている間４時間毎、−日５回１０日間、２００■のアシクロビアの経口投 与が、推奨される成人投与適量である。再発の時は、推奨される成人通量は２０ ０■を一日３回２６週間までである。いくつかの例では、２００■−日５回２６ 週間までの投与量が要求される。再発の間欠的な治療は、２００■目覚めている 間４時間毎−日５回５日間の投与量を必要としよう。

正常な腎機能（すなわちクレアチニンクリアランスが１．７３ｒｄあたり５０ｍ ／分以上）を持つ成人のアシクロビア静脈内投与量は、５■／ｋｇ８時間毎（− 日１５■／ｋｇ）　７日から１０日である。

さらに、本発明は、ガン化した横腹管壁細胞の軟骨や骨への付着を阻害し、それ によって関節の庚爛や破壊を抑制する薬剤を患者に投与することからなる、患者 におけるリウマチ様関節炎の治療方法に関する。該薬剤は細胞付着レセプターに 結合するペプチド配列である。

上記実施例やここに記述された抗ウィルス剤または治療方式はそれぞれ単に発明 の説明として意図されているので、本発明はこれらによって範囲を限定されるこ とを意図しない。さらに個体においてＲＡ症状があるかどうかを決定するあらゆ る方法、また本文中前に書かれたのと機能的に同等な抗ウィルス剤によるＲＡの あらゆる治療方法が、本発明の範囲内にあることを意図する。ここに示し記述さ れたものに加えて様々な本発明の改変が、前述の記述や付随する明細書から当業 者に明らかになるであろう。このような改変は添付の請求の範囲の範囲内にある ことを意図する。

ＦＩＧ、　Ｉ ＦＩＧ、　２ ＦＩＧ、　３ 国際調査報告 ■ ＰＣＴ／ＩＪＳＢ９１０２２ユ９ ｘｔ：ａｃｈ＊ｅｒ＋７　ｔｏ、Ｆｏｒｍ　ＰＣＴ／ＩＰＥＡ／２１０５ｅｃｏ ｎ６５ｈｅｅｔヱＣ１ａｓｓｉｆｘｃａｔｘｏｎ ４３Ｓ１５−７．　２Ｅｈ　　４３６１５０６．５２５，５３０．　８０１．　 １ｔｏｓｉ　　５１４／２．　４４−：ｉｌ：ｒ＋−、、Ｃ１，＋４＋　　１６ １Ｋ　　３１／７０．　３７１０２：　　Ｃｌ２Ｑ　　ｌ／６８．　７０：ＧＯ ＩＮ３３７５４８．５５３．５６４ Ｍｅｄｌｉｒ＋ｅ＋　　Ｒｈｅｕｒａｔｏｉｄ　　（ｗ）　　ａｒｔｈｒｉｔｉ ｓ　　ａｎｄ　ｆｒｅｔｒｃｖｉｒン　ｏｒ　　ｍｖｏｒ　ＬＡＶ　ｏｒ　ＲＩ Ｖ） ！’、ｅｃｌｌｉｒ＋ｅ　　ａｎｄ　　Ｂｉｏｓｉｓ：　　ａｒｔｈｒｉｔｉ？ 　　ａｎｄ　　５ｙｎｏｖｉ　　（２ｗｌｃｅｌｌ？　　ａｎｄ　ｆａｔｔａｅ ｈ？　　ｏｒ　　ａ６ｈｅｒン　ｏｒ　　ａｄｈｅｓｉ？ｌ　　ａｎａｒｅｅｅ ｐｔ口；？ ＰＣＴ／ＵＳ８９１０２２１９

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．以下のことを有してなる個体におけるリウマチ様関節炎の診断方法： ａ）個体から試料を得ること； ｂ）該試料をレトロウイルスタンパク質に向けられた抗体に、該抗体がエピトー プに結合できる反応条件で接触させること； ｃ）未結合の抗体分子を試料から除去すること；および ｄ）結合した抗体の存在について該試料を試験すること、 ここにおいて、抗体の結合は個体におけるリウマチ様関節炎の存在を示す。 ２．抗体が標識されている請求の範囲第１項の方法。 ３．抗体に特異的に結合する標識されたパートナーをさらに添加することからな る請求の範囲第１項の方法。 ４．該抗体がモノクローナル抗体である請求の範囲第１項の方法。 ５．該抗体が抗一ＨＴＬＶ　Ｉ　ｐ１９、抗−ＨＴＬＶ　Ｉｐ２４、抗−ＨＴＬ Ｖ　ＩＩＩ　ｐ１５／１７、抗−ＨＴＬＶＩＩＩ　ｐ２４、抗−ＨＴＬＶ　ＩＩ Ｉ　ｇｐ１２０および抗−ＨＴＬＶ逆転写酵素からなる群から選択される請求の 範囲第１項の方法。 ６．該レトロウイルスタンパク質がＨＴＬＶタンパク質である請求の範囲第１項 の方法。 ７．該ＨＴＬＶタンパク質がＨＴＬＶ　Ｉ　ｐ１９、ＨＴＬＶ１　Ｉ　ｐ２４、 ＨＴＬＶ　ＩＩＩ　ｐ１５／１７、ＨＴＬＶＩＩＩ　ｐ２４、ＨＴＬＶ　ＩＩＩ 　ｇｐ１２０および抗−ＨＴＬＶ逆転写酵素からなる群から選択される請求の範 囲第６項の方法。 ８．該試料が滑膜細胞、滑膜組織及び滑液からなる一群から選択される滑膜試料 である請求の範囲第１項の方法。 ９．該試料が末梢血液細胞である請求の範囲第１項の方法。 １０．（ｄ）段階が電子顕微鏡による超微細構造解析によって行なわれる請求の 範囲第１項の方法。 １１．電子顕微鏡による該微細構造解析が免疫電子顕微鏡検査によって行なわれ る請求の範囲第１０項の方法。 １２．（ｄ）段階が免疫蛍光分析によって行なわれる請求の範囲第１項の方法。 １３．（ｄ）段階が免疫パーオキシダーゼ法によって行なわれる請求の範囲第１ 項の方法。 １４．（ｄ）段階が銀増感免疫金染色によって行なわれる請求の範囲第１項の方 法。 １５．（ｄ）段階が免疫細胞学によって行なわれる請求の範囲第１項の方法。 １６．（ｄ）段階がイムノプロッティングによって行なわれる請求の範囲第１項 の方法。 １７．（ｄ）段階がＥＬＩＳＡによって行なわれる請求の範囲第１項の方法。 １８．以下のことを有してなる患者におけるリウマチ様関節炎の診断方法： （ａ）患者から組織試料を得ること （ｂ）プローブを（ａ）段階の該組織試料中の核酸に対してハイブリッド形成さ せられる条件下で、（ａ）段階の該組織試料をレトロウイルス遺伝子に特異的な 核酸プローブと接触させること （ｃ）未結合の（ｂ）段階の該プローブを除去すること；および （ｄ）プローブのハイブリッド形成を検出すること、ここにおいて、該プローブ の該ハイブリッド形成は患者におけるリウマチ様関節炎を示す。 １９．（ｂ）段階の該レトロウイルス遺伝子がＨＴＬＶ遺伝子である請求の範囲 第１８項の方法。 ２０．以下のことを有してなる患者におけるリウマチ様関節炎の診断方法： （ａ）患者から組織試料を得ること （ｂ）（ａ）段階の該組織試料から核酸試料を単離すること （ｃ）プローブを（ｂ）段階の当該の単離された核酸試料に対してハイブリツド 形成させられる条件下で、（ｂ）段階の該核酸試料をレトロウイルスｍＲＮＡ配 列に特異的な核酸プローブと接触させること（ｄ）未結合の（ｃ）段階の該プロ ーブを除去すること；および （ｅ）（ｃ）段階の該プローブの該ハイブリッド形成を検出すること、 ここにおいて、該プローブの該ハイブリッド形成は患者におけるリウマチ様関節 炎を示す。 ２１．以下のことを有してなる患者におけるリウマチ様関節炎の診断方法： （ａ）患者から組織試料を得ること （ｂ）（ａ）段階の該組織試料から核酸試料を単離すること （ｃ）プローブを（ｂ）段階の当該の単離された核酸試料に対してハイブリッド 形成させられる条件下で、（ｂ）段階の該核酸試料をレトロウイルスｍＲＮＡ配 列に特異的な核酸プローブと接触させること２２．（ｃ）段階の該レトロウイル ス遺伝子がＨＴＬＶ遺伝子である請求の範囲第２０項の方法。 ２３．（ｃ）段階の該レトロウイルスｍＲＮＡ配列がＨＴＬＶｍＲＮＡ配列であ る請求の範囲第２１項の方法。 ２４．患者におけるリウマチ様関節炎を軽減するために、該患者に有効量の抗ウ イルス剤を投与することを有してなる、リウマチ様関節炎を有する患者の治療の 構成。 ２５．該抗ウイルス剤がアシクロビア、ホスホノギ酸、リバビリン、“アンチセ ンス”オリゴデオキシヌクレオチド、プロテアーゼインヒビター、２′，３′− ジデオキシヌクレオシド、およびメチル亜リン酸オリゴヌクレオチドからなる群 から選択される、請求の範囲第２３項の構成。 ２６．該２′，３′−ジデオキシヌクレオシドが３′−アジドー２′，３′−ジ デオキシチミジンおよび２′，３′−ジデオキシシチジンからなる群から選択さ れる請求の範囲第２５項の構成。 ２７．該３′−アジド−２′，３′−ジデオキシチミジンが、該患者の体重ｋｇ あたり約２ｍｇの該３′−アジド−２′，３′−ジデオキシチミジンから約１５ ｍｇの３′−アジド−２′，３′−ジデオキシチミジンまでの用量で投与される 、請求の範囲第２６項の構成。 ２８．ガン化した滑膜管壁細胞の軟骨や骨への付着を阻害し、それによって関節 の糜爛や破壊を抑制することのできる薬剤の有効量を投与することからなる、患 者におけるリウマチ様関節炎の治療の構成。 ２９．該薬剤が細胞付着レセプターに結合するペプチド配列である請求の範囲第 ２８項の構成。