ES2643887T3

ES2643887T3 - Combinación de anticuerpos anti-KIR y anticuerpos anti-PD-1 para tratar el cáncer

Info

Publication number: ES2643887T3
Application number: ES13774596.4T
Authority: ES
Inventors: Robert F. Graziano; Ashok K. Gupta; Su Young KIM; Jon WIGGINTON
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2012-10-02
Filing date: 2013-10-02
Publication date: 2017-11-27
Anticipated expiration: 2033-10-02
Also published as: MX2015003985A; IL237960B; JP6239628B2; AU2013327116A1; JP2018058849A; JP2019163299A; DK2904011T3; EP3263601B1; JP2015532292A; IL237960A0; BR112015007184A2; EA038920B1; CA2887027C; CY1119799T1; JP6533270B2; AU2013327116B2; PT2904011T; EA201590671A1; AU2013327116C1; RS56624B1

Abstract

Un anticuerpo anti-KIR que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5, y un anticuerpo anti-PD-1 que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 21, para su uso en un método para el tratamiento del cáncer en un paciente humano, en donde el método comprende al menos un ciclo de administración, en el que el ciclo es un período de ocho semanas, en el que para cada uno de los al menos un ciclo, se administran dos dosis del anticuerpo anti-KIR a una dosis de 0,1, 0,3, 1, 3, 6 o 10 mg/kg y se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-PD-1 a una dosis de 3 mg/kg.

Description

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DESCRIPCION

Combinacion de anticuerpos anti-KIR y anticuerpos anti-PD-1 para tratar el cancer Antecedentes

Los linfocitos citoliticos naturales (NK) constituyen el 15 % de los linfocitos de sangre periferica y desempenan un papel importante en la capacidad del sistema inmunitario innato para combatir infecciones viricas y tambien el cancer (Purdy AK et. al., Cancer Biol Ther 2009; 8:13-22). Los linfocitos NK se unen a las celulas diana a traves de multiples receptores, incluyendo receptores de citotoxicidad natural (RCN), el receptor Fc de CD16, NKG2D y otros. La union del ligando al receptor inicia la fosforilacion de tirosinas y la captacion de moleculas de senalizacion accesorias. Esta cascada da como resultado la activacion del linfocito NK, la liberacion de granulos preformados que contienen perforina y granzimas en la celula diana, y apoptosis. La liberacion simultanea de citosinas y quimiocinas da como resultado un entorno microambiental que capta otras celulas inmunitarias. Los linfocitos nK tienen la capacidad de unirse a cada celula en el cuerpo (Murphy WJ, et. al., Biol Blood Marrow Transplant 2012: 18:S2-S7). Sin embargo, la union de celulas normales no da como resultado actividad citotoxica debido a la capacidad de los linfocitos NK para utilizar de forma simultanea un conjunto distinto de receptores para unirse a moleculas de complejo principal de histocompatibilidad (MHC) de clase I. La union del antigeno leucocitario humano (HLA) E al receptor heterodimerico NKG2A/CD94, o de las moleculas HLA-A, B y C a receptores de tipo Ig de linfocitos citoliticos inhibidores (los KIR), da como resultado la fosforilacion de tirosinas, la captacion de los adaptadores de senalizacion SHP-1 o SHP-2, y senalizacion aguas abajo. El resultado final es una senal dominante que suprime las senales de activacion normales. Por lo tanto, la interaccion KIR/HLA puede afectar la sensibilidad de los linfocitos NK y tambien el desarrollo del numero total de linfocitos NK sensibles maduras, conocido como capacitacion (licensing).

Existen siete KIR inhibidores y siete KIR activadores, que es un factor que da como resultado en la diversidad de la herencia y expresion del KIR. KIR tambien se expresa en linfocitos T citoliticos naturales (NKT) y un pequeno subconjunto de linfocitos T (Uhrberg M, et. al., J. Immunol. 2001; 166:3923-3932). Por lo tanto, mecanicamente, el bloqueo del KIR inhibidor podria inducir efectos antitumorales al permitir la activacion de linfocitos NK y posiblemente tambien algunos linfocitos T.

La evidencia que sustenta la implicacion de los linfocitos NK en la respuesta antitumoral proviene del contexto de trasplante de celulas madre hematopoyeticas (TCMH). Dada la diversidad tanto del KIR como del HLA, no es sorprendente que el KIR en los linfocitos NK del donante puedan no interactuar con el HLA del hospedador, denominado como una falta de coincidencia de KIR. El descubrimiento de que los pacientes de LMA trasplantados con linfocitos NK de donantes con KIR no coincidente tuvieron tasas de recaida mas bajas (el 3 % frente al 47 %, p < 0,01) y riesgo reducido de recaida (riesgo relativo 0,48, CI del 95 % 0,29-0,78) dio sustento cientifico al papel de los linfocitos NK en la respuesta antitumoral (Ruggeri L, et. al., Blood. 2007; 110:433-440).

En el melanoma, determinadas combinaciones de KIR y HLA pueden proporcionar un entorno mas inmunosupresor, dado que determinadas combinaciones se ven mas frecuentemente en pacientes metastasicos en comparacion con pacientes no metastasicos (Naumova E, et. al., Cancer Immunol Immunother 2005; 54:172-178). La no coincidencia del KIR ha mostrado ser un marcador de pronostico favorable para pacientes de neuroblastoma de alto riesgo sometidos a TCMH autologo (Delgado DC, et. al., Cancer Res 2010; 70:9554-9561). El sustento experimental para el papel importante de los linfocitos NK en tumores solidos proviene de estudios en murinos en los cuales ratones que carecen de linfocitos T aun podian erradicar grandes tumores solidos despues de la activacion de linfocitos NK por la adicion de IL-15 (Liu RB, et. al., Cancer Res 2012; 72:1964-1974).

Muerte Celular Programada 1 (PD-1) es un receptor de senalizacion de superficie celular que desempena un papel critico en la regulacion de la activacion y tolerancia de linfocitos T (Keir ME, et. al., Annu Rev Immunol 2008; 26:677704). Es una proteina de transmembrana de tipo I y, junto con BTLA, CTLA-4, ICOS y CD28, comprende la familia CD28 de receptores co-estimuladores de linfocitos T. PD-1 se expresa principalmente en linfocitos T activados, linfocitos B y celulas mieloides (Dong H, et. al., Nat Med 1999; 5:1365-1369). Tambien se expresa en linfocitos citoliticos naturales (NK) (Terme M, et. al., Cancer Res 2011; 71:5393-5399). La union de PD-1 por parte de sus ligandos, PD-L1 y PD-L2, da como resultado la fosforilacion del resto tirosina en el dominio inhibidor de tirosina de receptor inmunitario intracelular proximal, seguido de la captacion de la fosfatasa SHP-2, eventualmente dando como resultado la regulacion negativa de la activacion de linfocitos T. Un papel importante de PD-1 es limitar la actividad de linfocitos T en tejidos perifericos en el momento de una respuesta inflamatoria a infeccion, limitando asi el desarrollo de autoinmunidad (Pardoll DM., Nat Rev Cancer 2012; 12:252-264). La evidencia de este papel regulador negativo proviene del descubrimiento de que ratones deficientes en PD-1 desarrollan enfermedades autoinmunitarias tipo lupus, incluyendo artritis y nefritis, junto con cardiomiopatia (Nishimura H, et. al., Immunity 1999; 11:141-151 y Nishimura H, et. al., Science 2001; 291:319-322). En un contexto tumoral, la consecuencia es el desarrollo de resistencia inmunitaria dentro del microambiente tumoral. PD-1 se expresa de forma elevada en linfocitos infiltrantes de tumor y sus ligandos estan regulados de forma positiva en la superficie celular de muchos tumores diferentes (Dong H, et. al., Nat Med 2002; 8:793-800). Multiples modelos de cancer de murino han demostrado que la union de ligando a PD-1 da como resultado evasion inmunitaria. Ademas, el bloqueo de esta

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interaction da como resultado actividad antitumoral (Topalian SL, et. al., New Eng J Med 2012; 366(26):2443-2454; Topalian SL, et. al., Curr Opin Immunol 2012; 24:207-212; Brahmer JR, et. al., New Eng J Med 2012; 366(26):2455- 2465; Hamid O. et. al., New Eng J Med 2013; 369:134-144; Hamid O y Carvajal RD, Expert Opin Biol Ther 2013; 13(6):847-861). El uso de anticuerpos anti-KIR en la terapia de combination se sugiere en el documento WO2006/072625. Los pacientes con tumores solidos metastasicos o resistentes tienen un pronostico muy malo (Rosenberg SA, et. al., Cancer Immunotherapy in Cancer: Principles & Practice of Oncology (Eds DeVita VT, Lawrence TS y Rosenberg SA) 2011; 332-344 (Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfia PA)). A pesar de los avances en la terapia multimodal, los aumentos de la supervivencia general en esta poblacion de pacientes han sido limitados. Por consiguiente, es un objeto de la presente invention proporcionar metodos mejorados para tratar sujetos con tales tumores (por ejemplo, tumores solidos resistentes avanzados).

Resumen

En el presente documento se proporcionan metodos para tratar el cancer, por ejemplo, tumores solidos resistentes avanzados, en un paciente humano, que comprenden administrar al paciente una combinacion de un anticuerpo anti-KIR y un anticuerpo anti-PD-1, en los que la combinacion se administra (o es para la administration) de acuerdo con un pauta posologica clinica particular (es decir, a una cantidad de dosis particular y de acuerdo con un programa de dosificacion especifico). En una realization no limitativa, el paciente humano padece un tumor (por ejemplo, un tumor solido resistente avanzado) seleccionado del grupo que consiste en cancer pulmonar no microcitico (CPSM), carcinoma de celulas renales (CCR), melanoma, cancer colorrectal y carcinoma ovarico seroso. Se describen otros tumores que pueden tratarse en la siguiente Description Detallada.

Un anticuerpo anti-KIR a modo de ejemplo es lirilumab (tambien denominado anteriormente BMS-986015 o IPH2102), que comprende las cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias mostradas en SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente, o fragmentos de union a antigeno y variantes de los mismos. En otras realizaciones, el anticuerpo comprende las regiones determinantes de complementariedad (las CDR) de la cadena pesada y ligera, o regiones variables (la VR) de lirilumab. Por consiguiente, en una realizacion, el anticuerpo comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la region variable de la cadena pesada (VH) de lirilumab que tiene la secuencia mostrada en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la region variable de la cadena ligera (VL) de LIRILUMAB que tiene la secuencia mostrada en SEQ ID NO: 5. En otra realizacion, el anticuerpo comprende secuencias de la cadena pesada de CDR1, CDR2 y CDR3, como se expone en las SEQ ID NO: 7, 8 y 9, respectivamente, y secuencias de la cadena ligera de CDR1, CDR2 y CDR3, como se expone en las SEQ ID NO: 10, 11 y 12, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo comprende regiones VH y/o VL que tienen las secuencias de aminoacidos expuestas en SEQ ID NO: 3 y/o SEQ ID NO: 5, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo comprende las regiones VH y/o VL codificadas por las secuencias de acido nucleico expuestas en SEQ ID NO: 4 y/o SEQ ID NO: 6, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo compite por la union con, y/o se une al mismo epitopo en KIR que los anticuerpos mencionados anteriormente. En otra realizacion, el anticuerpo tiene al menos aproximadamente el 90 % de identidad de secuencia de aminoacidos de la region variable con los anticuerpos mencionados anteriormente (por ejemplo, al menos aproximadamente el 90 %, 95 % o 99 % de identidad de region variable con SEQ ID NO: 3 o SEQ ID No: 5).

Un anticuerpo anti-PD-1 a modo de ejemplo es nivolumab (denominado 5C4 en el documento WO 2006/121168; tambien conocido como BMS-936558, MDX-1106 u ONO-4538), que comprende cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias mostradas en las SEQ ID NO: 17 y 18, respectivamente, o fragmentos de union a antigeno y variantes de los mismos. En otras realizaciones, el anticuerpo comprende las CDR o las VR de las cadenas pesada y ligera de nivolumab. Por consiguiente, en una realizacion, el anticuerpo comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la region VH de lirilumab que tiene la secuencia mostrada en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la region VL de lirilumab que tiene la secuencia mostrada en SEQ ID NO: 21. En otra realizacion, el anticuerpo comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada que tienen las secuencias expuestas en las SEQ ID NO: 23, 24 y 25, respectivamente, y los dominios CDR1, cDr2 y CDR3 de la cadena ligera que tienen las secuencias mostradas en las SEQ ID NO: 26, 27 y 28, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo comprende regiones VH y/o VL que tienen las secuencias de aminoacidos expuestas en SEQ ID NO: 19 y/o SEQ ID NO: 21, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo comprende las regiones variables de la cadena pesada (VH) y/o variables de la cadena ligera (VL) codificadas por las secuencias de acido nucleico expuestas en SEQ ID NO: 20 y/o SEQ ID NO: 22, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo compite por la union con, y/o se une al mismo epitopo en PD-1, que los anticuerpos mencionados anteriormente. En otra realizacion, el anticuerpo tiene al menos aproximadamente el 90 % de identidad de secuencia de aminoacidos de la region variable con los anticuerpos mencionados anteriormente (por ejemplo, al menos aproximadamente el 90 %, 95 % o 99 % de identidad de region variable con SEQ ID NO: 19 o SEQ ID NO: 21).

Por consiguiente, en un aspecto, se proporcionan metodos para tratar el cancer (por ejemplo, tumores solidos resistentes avanzados) en un paciente humano, comprendiendo los metodos administrar al paciente una cantidad eficaz de cada uno de:

(a) un anticuerpo anti-KIR que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la

cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una

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region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5,

(b) un anticuerpo anti-PD-1 que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 21,

en el que el metodo comprende al menos un ciclo de administracion, en el que el ciclo es un periodo de ocho semanas, en el que para cada uno de por lo menos un ciclo, se administran dos dosis del anticuerpo anti-KIR a una dosis de 0.1-20 mg/kg de peso corporal y se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-PD-1 a una dosis de 0,1-20 mg/kg de peso corporal.

En determinadas realizaciones, cada dosis del anticuerpo anti-KIR se administra a 0,1, 0,3, 1, 3, 6, 10 o 20 mg/kg. En realizaciones preferentes, cada dosis del anticuerpo anti-KIR se administra a 0,3, 1 o 3 mg/kg.

En otras realizaciones, cada dosis del anticuerpo anti-PD-1 se administra a 0,1, 0,3, 1, 3, 6, 10 o 20 mg/kg de peso corporal. En realizaciones preferentes, cada dosis del anticuerpo anti-PD-1 se administra a 0,3, 1, 3 o 10 mg/kg. En realizaciones mas preferentes, el anticuerpo anti-PD-1 se administra a una dosis de 3 mg/kg.

En una realizacion, el anticuerpo anti-KIR y el anticuerpo anti-PD-1 se administran a las siguientes dosis:

(a) 0,1 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(b) 0,3 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(c) 1 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(d) 3 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(e) 6 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1; o

(f) 10 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1.

Por consiguiente, en una realizacion, la dosis del anticuerpo anti-KIR y/o anti-PD-1 se calcula por mg/kg de peso corporal. Sin embargo, en otra realizacion, la dosis del anticuerpo anti-KIR y/o anti-PD-1 es una dosis unica-fija que se fija independientemente del peso del paciente. Por ejemplo, el anticuerpo anti-KIR y/o anti-PD-1 se puede administrar a una dosis fija de 5, 20, 75, 200, 400, 750 o 1.500 mg, sin tener en cuenta el peso del paciente. En determinadas realizaciones, la dosis administrada del anticuerpo anti-PD-1 puede fijarse a 200 mg, mientras que el anticuerpo anti-KIR se administra a una dosis fija de 5, 20, 75, 200, 400 o 750 mg. En otra realizacion, las pautas posologicas se ajustan para proporcionar la respuesta deseada optima (por ejemplo, una respuesta eficaz).

En otra realizacion, el anticuerpo anti-PD-1 se administra en los dias 1, 15, 29 y 43 de cada ciclo. En otra realizacion, el anticuerpo anti-KIR se administra en los dias 1 y 29 de cada ciclo. En otra realizacion, el anticuerpo anti-PD-1 se administra antes de la administracion del anticuerpo anti-KIR los dias 1 y 29. En otra realizacion, el anticuerpo anti-KIR se administra dentro de los 30 minutos despues de la administracion del anticuerpo anti-PD-1. En otra realizacion, el tratamiento consiste en hasta 12 ciclos.

En una realizacion, el anticuerpo anti-PD-1 y el anticuerpo anti-KIR se administran como un tratamiento de eleccion (“primera linea”) (por ejemplo, el tratamiento inicial o primero). En otra realizacion, el anticuerpo anti-PD-1 y el anticuerpo anti-KIR se administran como una segunda linea de tratamiento (por ejemplo, despues de un tratamiento inicial con el mismo agente terapeutico, o con uno distinto, incluyendo despues de una recaida y/o cuando el primer tratamiento ha fracasado).

Los anticuerpos anti-KIR y anti-PD-1 pueden administrarse a un sujeto por cualquier medio adecuado. En una realizacion, los anticuerpos se formulan para la administracion intravenosa. En otra realizacion, los anticuerpos se administran de forma simultanea (por ejemplo, en una unica formulacion o de forma simultanea como formulaciones distintas). Como alternativa, en otra realizacion, los anticuerpos se administran de forma secuencial (por ejemplo, como formulaciones distintas).

La eficacia de los metodos de tratamiento proporcionados en el presente documento se puede evaluar usando cualquier medio adecuado. En una realizacion, el tratamiento produce al menos un efecto terapeutico seleccionado del grupo que consiste en reduccion del tamano de un tumor, reduccion del numero de lesiones metastasicas a lo largo del tiempo, respuesta total, respuesta parcial y enfermedad estable.

Tambien se proporcionan kits que incluyen una composicion farmaceutica que contiene un anticuerpo anti-KIR, tal como lirilumab, y un anticuerpo anti-PD-1, tal como nivolumab, y un transportador farmaceuticamente aceptable, en una cantidad terapeuticamente eficaz adaptada para su uso en los metodos descritos en el presente documento. En una realizacion, el kit comprende:

(a) una dosis de un anticuerpo anti-KIR que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5;

(b) una dosis de un anticuerpo anti-PD-1 que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region

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variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 21; y

(c) instrucciones para usar el anticuerpo anti-KIR y el anticuerpo anti-PD-1 en un metodo de la invencion.

En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo anti-KIR, comprendiendo el anticuerpo anti-KIR los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5, para la coadministracion con un anticuerpo anti-PD-1 que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 21, en por lo menos un ciclo, en el que para cada ciclo se administran dos dosis del anticuerpo anti-KIR a una dosis de 0,1, 0,3, 1, 3, 6 o 10 mg/kg y se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-PD-1 a una dosis de 3 mg/kg.

En otro aspecto de la invencion, el anticuerpo anti-PD-1 en cualquiera de las realizaciones mencionadas anteriormente se reemplaza por, o se combina con, un anticuerpo anti-PD-L1 o anti-PD-L2. Se describen anticuerpos anti-PD-L1 a modo de ejemplo en los documentos WO 2007/005874, WO 2010/077634 y WO 2011/066389, y se describen anticuerpos anti-PD-L2 a modo de ejemplo en el documento WO 2004/007679. Por consiguiente, la invencion tambien presenta metodos, composiciones y kits para tratar tumores en pacientes humanos usando las dosificaciones clinicamente eficaces descritas anteriormente de un anticuerpo anti-KIR combinado con las dosificaciones clinicamente eficaces descritas anteriormente de un anticuerpo anti-PD-1, en los que la dosificacion del anticuerpo PD-1 se reemplaza por la misma dosificacion de un anticuerpo anti-PD-L1 o anti- PD-L2.

Breve descripcion de los dibujos

La figura 1 muestra la inhibition del crecimiento tumoral in vivo usando un tratamiento en combination de un

anticuerpo anti-KIR y un anticuerpo anti-PD-1 en un modelo de tumor solido de murino.

La figura 2 es un esquema que ilustra las partes de un ensayo clinico de fase I.

Descripcion detallada

I. Definiciones

Segun se usa en el presente documento, el termino “sujeto” o “paciente” es un paciente de cancer humano (por ejemplo, un paciente que tiene un tumor, tal como un tumor solido resistente avanzado, o una neoplasia maligna hematologica).

Segun se usa en el presente documento, “tratamiento eficaz” se refiere a un tratamiento que produce un efecto beneficioso, por ejemplo, la mejoria de al menos un sintoma de una enfermedad o trastorno. Un efecto beneficioso puede tener la forma de una mejora con respecto a los valores iniciales, es decir, una mejora con respecto a una medicion u observation hecha antes del inicio de la terapia de acuerdo con el metodo. Un efecto beneficioso tambien puede tener la forma de detener, ralentizar, retardar o estabilizar una progresion nociva de un marcador de tumor solido. Tratamiento eficaz puede referirse al alivio de al menos un sintoma de un tumor solido. Tal tratamiento eficaz puede, por ejemplo, reducir el dolor del paciente, reducir el tamano y/o el numero de lesiones, puede reducir o prevenir la metastasis de un tumor, y/o puede ralentizar el crecimiento de un tumor.

La expresion “cantidad eficaz” se refiere a una cantidad de una gente que proporciona el resultado biologico, terapeutico y/o profilactico deseado. El resultado puede ser la reduction, mejoria, atenuacion, reduction, retraso y/o alivio de uno o mas de los signos, sintomas o causas de una enfermedad, o cualquier otra alteration deseada de un sistema biologico. En referencia a tumores solidos, una cantidad eficaz comprende una cantidad suficiente para provocar que un tumor se retraiga y/o para disminuir la velocidad de crecimiento del tumor (tal como para suprimir el crecimiento tumoral) o para prevenir o retrasar otra proliferation celular no deseada. En algunas realizaciones, una cantidad eficaz es una cantidad suficiente para retrasar el desarrollo de un tumor. En algunas realizaciones, una cantidad eficaz es una cantidad suficiente para prevenir o retrasar la recidiva de un tumor. Una cantidad eficaz puede administrarse en una o mas administraciones. La cantidad eficaz del farmaco o composition puede: (i) reducir el numero de celulas cancerosas; (ii) reducir el tamano tumoral; (iii) inhibir, retrasar, ralentizar hasta cierto punto y puede detener la infiltracion de celulas cancerosas en organos perifericos; (iv) inhibir (es decir, ralentizar hasta cierto punto y puede detener la metastasis de un tumor; (v) inhibir el crecimiento tumoral; (vi) prevenir o retrasar la aparicion y/o recidiva de un tumor; y/o (vii) aliviar hasta cierto punto uno o mas de los sintomas asociados con el cancer. En un ejemplo, una “cantidad eficaz” es la cantidad de anticuerpo anti-KIR y la cantidad de anticuerpo anti- PD-1, en combinacion, que se ha probado clinicamente que efectua una disminucion significativa del cancer o que retarda la progresion del cancer, tal como un tumor solido avanzado.

Segun se usa en el presente documento, las expresiones “dosis unica”, “dosis fija” y “dosis unica-fija” se usan indistintamente y se refieren a una dosis que se administra a un paciente independientemente del peso o area de

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superficie corporal (ASC) del paciente. Por lo tanto, la dosis fija o unica no se proporciona como una dosis en mg/kg, sino mas bien como una cantidad absoluta del agente (por ejemplo, el anticuerpo anti-KIR y/o anticuerpo anti-PD-1).

Segun se usa en el presente documento, una “dosis basada en el area de superficie corporal (ASC)" se refiere a una dosis (por ejemplo, del anticuerpo anti-KIR y/o anticuerpo anti-PD-1) que se ajusta al area de superficie corporal (ASC) del paciente individual. Una dosis basada en el aSc puede proporcionarse como mg/kg de peso corporal. Se han publicado diversos calculos para llegar a el ASC sin medicion directa, de los cuales el mas ampliamente usado es la formula de Du Bois (vease Du Bois D, Du Bois EF (junio de 1916) Archives of Internal Medicine 17 (6):863-71 y Berbraecken, J. et. al. (abril de 2006), Metabolism - Clinical and Experimental 55 (4):515-24). Otras formulas a modo de ejemplo del ASC incluyen la formula de Mosteller (Mosteller rD, N. Engl J Med., 1987; 317:1098), la formula de Haycock (Haycock GB, et. al., JPediatr 1978, 93:62-66), la formula de Gehan y George (Gehan EA, George SL, Cancer Chemother Rep 1970, 54:225-235), la formula de Boyd (Current, jD (1998), The Internet Journal of Anesthesiology 2 (2) y Boyd, Edith (1935), University of Minnesota. The Institute of Child Welfare, Series monografica, N.° x. London: Oxford University Press), la formula de Fujimoto (Fujimoto S, et. al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50), la formula de Takahira (Fujimoto S, et. al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50) y la formula de Schlich (Schlich E, et. al., Ernahrungs Umschau 2010;57:178-183).

El termino “anticuerpo" describe polipeptidos que comprenden al menos un sitio de union a antigeno obtenido de anticuerpo (por ejemplo, region VH/VL o Fv, o CDR). Los anticuerpos incluyen formas conocidas de anticuerpos. Por ejemplo, el anticuerpo puede ser un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo biespecifico o un anticuerpo quimerico. El anticuerpo tambien puede ser un Fab, Fab'2, ScFv, SMIP, Affibody®, nanocuerpo o un anticuerpo de dominio. El anticuerpo tambien puede ser de cualquiera de los siguientes isotipos: IgG 1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD e IgE. El anticuerpo puede ser un anticuerpo de origen natural o puede ser un anticuerpo que se haya alterado (por ejemplo, por mutacion, delecion, sustitucion, conjugacion a una fraccion que no es de anticuerpo). Por ejemplo, un anticuerpo puede incluir uno o mas aminoacidos variantes (en comparacion con un anticuerpo de origen natural) que cambie una propiedad (por ejemplo, una propiedad funcional) del anticuerpo. Por ejemplo, se conocen en la tecnica numerosas de tales alteraciones las cuales afectan, por ejemplo, la semivida, la funcion efectora y/o respuestas inmunitarias frente al anticuerpo en un paciente. El termino anticuerpo tambien incluye construcciones polipeptidicas artificiales que comprenden al menos un sitio de union a antigeno obtenido de anticuerpo.

Segun se usa en el presente documento, un “receptor de tipo Ig de linfocitos citoliticos”, “receptor inhibidor de linfocitos citoliticos” o “KIR”, se refiere a una proteina o polipeptido codificado por un gen que es un miembro de la familia de genes KIR o por un ADNc preparado a partir de tal gen. Una revision detallada de la familia de genes KIR, incluyendo la nomenclatura de los genes KIR y de los productos de los KIR, y numeros de referencia de GenBank para los KIR a modo de ejemplo, es “The KIR Gene Cluster” (El agrupamiento de genes KIR) por M. Carrington y P. Norman, disponible en el sitio web de la NCBI llamado “Bookshelf” (accesible a traves de la direccion de internet ncbi.nlm.nih.gov/books). Las secuencias de genes de KIR y los ADNc, asi como sus productos proteicos, estan disponibles en bases de datos publicas, incluyendo GenBank. Los ejemplos no limitativos de entradas de GenBank de los KIR humanos tienen los siguientes numeros de referencia: KIR2DL1: numero de referencia de GenBank U24076, NM_014218, AAR16197 o L41267; KIR2DL2: numero de referencia de GenBank U24075 o L76669; KIR2DL3; numero de referencia de GenBank U24074 o L41268; KIR2DL4: numero de referencia de GenBank X97229; KIR2DS1: numero de referencia de GenBank X89892; KIR2DS2: numero de referencia de GenBank L76667; KIR2DS3: numero de referencia de GenBank NM_012312 o L76670 (variante de corte y empalme); KIR3DL1: numero de referencia de GenBank L41269; y KIR2DS4; numero de referencia de GenBank AAR26325. Un KIR puede comprender de 1 a 3 dominios extracelulares y puede tener una cola citoplasmatica larga (es decir, mas de 40 aminoacidos) o corta (es decir, menos de 40 aminoacidos). Como se describio anteriormente en el presente documento, estas caracteristicas determinan la nomenclatura de un KIR. Las moleculas KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3 y KIR2DS4 a modo de ejemplo comprenden polipeptidos que tienen las siguientes secuencias de aminoacidos respectivas:

Dominio extracelular de KIR2DLI:

HEGVHRKPSLLAHPGXLVKSEETVILQCWSDVMFEHFLLHREGMFNDTLRLI

GEHHDGVSKANFSISRMTQDLAGTYRCYGSVTHSPYQVSAPSDPLDIVIIGLY

EKPSLSAQXGPTVLAGENVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHERRLPAGPKVN

GTFQADFPLGPATHGGTYRCFGSFHDSPYEWSKSSDPLLVSVTGNPSNSWPSP TEPSSKTGNPRHLH

(SEQ ID NO: 13), en donde “X” en la posicion 16 es P o R y en donde “X” en la posicion 114 es P o L,

representando variantes alelicas.

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Dominio extracelular de KIR2DL2:

HEGYHRKPSLLAHPGRLVKSEETVILQCWSDVRFEHFLLHREGKFKDTLHLIG EHHDGVSKANFSIGPMMQDLAGTYRCYGSVTHSPYQLSAPSDPLDIVITGLYE KPSLSAQPGPTVLAGESVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHECRFSAGPKVNGT FQADFPLGPATHGGTYRCFGSFRDSPYEWSNSSDPLLVSVIGNPSNSWPSPTEP SSKTGNPRHLH (SEQ ID NO: 14)

Dominio extracelular de KIR2DL3:

HEGVHRKPSLLAHPGPLVKSEETVILQCWSDVRFQHFLLHREGKFKDTLHLIG EHHDGVSKANFSIGPMMQDLAGTYRCYGSVTHSPYQLSAPSDPLDIVITGLYE KPSLSAQPGPTVLAGESVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHERRFSAGPKVNGT FQADFPLGPATHGGTYRCFGSFRDSPYEWSNSSDPLLVSVTGNPSNSWPSPTE PSSETGNPRHLH (SEQ ID NO: 15)

Dominio extracelular de KIR2DS4:

QEGVHRKPSFLALPGHLVKSEETVILQCWSDVMFEHFLLHREGKFNNTLHLIG EHHDGVSKANFSIGPMMPVLAGTYRCYGSVPHSPYQLSAPSDPLDMV (SEQ ID NO: 16)

El termino “KIR2DL2/3” se refiere a cualquiera o ambos de los receptores KIR2DL2 y KIR2DL3. Estos dos receptores tienen una homologia muy alta, estan codificados por formas alelicas del mismo gen y la tecnica los considera como similares desde el punto de vista funcional.

Segun se usa en el presente documento, las expresiones “Muerte Programada 1", “Muerte Celular Programada 1", “proteina PD-1”, “PD-1”, “PD1”, “PDCD1”, “hPD-1” y “hPD-1” se usan indistintamente, e incluyen variantes, isoformas, especies homologas de la PD-1 humana, y analogos que tienen al menos un epitopo comun con PD-1. La secuencia de PD-1 completa se puede encontrar con el n.° de referencia de GenBank U64863 (SEQ ID NO: 29).

La proteina Muerte Programada 1 (PD-1) es un miembro inhibidor de la familia CD28 de receptores, que tambien incluye a CD28, CTLA-4, ICOS y BTLA. PD-1 se expresa en linfocitos B activados, linfocitos T y celulas mieloides (Agata et. al., citado anteriormente; Okazaki et. al. (2002) Curr. Opin. Immunol. 14:391779-82; Bennett et. al. (2003) J Immunol 170:711-8). Los miembros iniciales de la familia, CD28 e ICOS, se descubrieron por los efectos funcionales de aumento de la proliferation de linfocitos T despues de la adicion de anticuerpos monoclonales (Hutloff et. al. (1999) Nature 397:263-266; Hansen et. al. (1980) Immunogenics 10:247-260). PD-1 se descubrio a traves de la exploration de la expresion diferencial en celulas apoptoticas (Ishida et. al. (1992) EMBO J 11:3887-95). Los demas miembros de la familia, CTLA-4 y BTLA, se descubrieron a traves de la exploracion de la expresion diferencial en linfocitos T citotoxicos y linfocitos TH1, respectivamente. CD28, ICOS y CTLA-4 tienen todos un resto de cisteina no emparejado que permite la homodimerizacion. En contraste, se sugiere que PD-1 existe como un monomero, que carece del resto de cisteina no emparejado caracteristico en otros miembros de la familia de CD28.

El gen PD-1 es una proteina transmembrana de tipo 1 de 55 kDa que es parte de la superfamilia de genes de Ig (Agata et. al., (1996) Int. Immunol 8:765-72). PD-1 contiene un motivo de tirosina inhibidor inmunorreceptor (ITIM) proximal de membrana y un motivo de cambio basado en tirosina (ITSM) distal de membrana (Thomas, M.L. (1995) J Exp Med 181:1953-6; Vivier, E y Daeron, M (1997) Immunol Today 18:286-91). Aunque es estructuralmente similar a CTLA-4, PD-1 carece del motivo MYPPPY que es critico para la union a B7-1 y B7-2. Se han identificado dos ligandos para PD-1, PD-L1 y PD-L2, que han mostrado regular de forma negativa la activation de linfocitos T despues de la union a PD-1 (Freeman et. al. (2000) J Exp Med 192:1027-34; Latchman et. al. (2001) Nat Immunol 2:261-8; Carter et. al. (2002) Eur J Immunol 32:634-43). Tanto PD-L1 como PD-L2 son homologos de B7 que se unen a PD-1, pero no se unen a otros miembros de la familia CD28. PD-L1 es abundante en diversos canceres humanos (Dong et. al. (2002) Nat. Med. 8:787-9). La interaction entre PD-1 y PD-L1 da como resultado una disminucion de linfocitos infiltrantes de tumor, una disminucion de la proliferacion mediada por receptores de linfocitos T y la evasion inmunitaria de las celulas cancerosas (Dong et. al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et. al.

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(2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et. al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100). La inmunosupresion puede invertirse inhibiendo la interaccion local de PD-1 con PD-L1 y el efecto es aditivo cuando la interaction de pD-1 con PD-L2 tambien se bloquea (Iwai et. al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown et. al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66).

En concordancia con que PD-1 es un miembro inhibidor de la familia CD28, los animales deficientes en PD-1 desarrollan diversos fenotipos autoinmunitarios, incluyendo cardiomiopatia autoinmunitaria y un sindrome de tipo lupus con artritis y nefritis (Nishimura et. al. (1999) Immunity 11:141-51; Nishimura et. al. (2001) Science 291:31922). Ademas, se ha descubierto que PD-1 desempena un papel en la encefalomielitis autoinmunitaria, el lupus eritematoso sistemico, la enfermedad de injerto contra el hospedador (EICH), la diabetes tipo I y la artritis reumatoide (Salama et. al. (2003) J Exp Med 198:71-78; Prokunina y Alarcon-Riquelme (2004) Hum Mol Genet 13:R143; Nielsen et. al. (2004) Lupus 13:510). En una linea de tumor de linfocitos B de murino, el ITSM de PD-1 mostro ser esencial para bloquear el flujo de Ca2+ mediado por BCR y la fosforilacion por tirosinas de moleculas efectoras aguas abajo (Okazaki et. al. (2001) PNAS 98:13866-71).

lla. Anticuerpos anti-KIR

Los anticuerpos anti-KIR humano (o dominios VH/VL obtenidos de los mismos) adecuados para usarse en la invention pueden generarse usando metodos bien conocidos en la tecnica. Como alternativa, se pueden usar anticuerpos anti-KIR reconocidos en la tecnica. En realizaciones preferentes, el anticuerpo anti-KIR reacciona de forma cruzada con multiples receptores KIR inhibidores y potencia la citotoxidad de linfocitos NK que portan uno o mas de estos receptores. Por ejemplo, el anticuerpo anti-KIR puede unirse a cada uno de KIR2D2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3, y potenciar la actividad de linfocitos NK al reducir, neutralizar y/o invertir la inhibicion de la citotoxicidad de linfocitos NK mediada por cualquiera o todos estos KIR. En realizaciones adicionales, el anticuerpo anti-KIR no se une a KIR2DS4 y/o KIR2DS3. Por ejemplo, se pueden usar los anticuerpos monoclonales 1-7F9 (tambien conocidos como IPH2101), 14F1, 1-6F1 y 1-6F5, descritos en el documento WO 2006/003179. Tambien se pueden usar anticuerpos que compitan con cualquiera de estos anticuerpos reconocidos en la tecnica por la union a KIR. Los anticuerpos anti-KIR reconocidos en la tecnica adicionales que pueden utilizarse incluyen, por ejemplo, los descritos en los documentos WO 2005/003168, WO 2005/009465, WO 2006/072625, WO 2006/072626, WO 2007/042573, WO 2008/084106, WO 2010/065939, WO 2012/071411 y WO/2012/160448.

Un ejemplo de anticuerpo anti-KIR a modo de ejemplo es lirilumab (tambien denominado BMS-986015, IPH2102 o en el documento WO 2008/084106 denominado 1-7F9(S241P)) que comprende las cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias mostradas en las SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente, o fragmentos de union a antigeno y variantes de los mismos. Lirilumab es un anticuerpo anti-KIR completamente humano que comprende las mismas regiones variables de la cadena pesada y ligera que 1-7F9 (descrito en el documento Wo 2006/003179) y de esta manera se une al mismo epitopo que 1-7F9, pero difiere de 1-7F9 en que (1) se prepara en celulas de ovario de hamster chino (CHO), mientras que 1-7F9 se prepara a partir de celulas de hibridoma, y (2) se ha introducido una mutation estabilizadora en la bisagra (S231P) en lirilumab (documento WO 2008/084106).

En otras realizaciones, el anticuerpo comprende las CDR o regiones variables de la cadena pesada y ligera de lirilumab. Por consiguiente, en una realization, el anticuerpo comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la region VH de lirilumab que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la region VL de lirilumab que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5. En otra realizacion, el anticuerpo comprende dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada que tienen las secuencias expuestas en las sEq ID NO: 7, 8 Y 9, respectivamente, y dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera que tienen las secuencias expuestas en las SEQ ID NO: 10, 11 y 12, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo comprende regiones VH y/o VL que tienen las secuencias de aminoacidos expuestas en SEQ ID NO:3 y/o SEQ ID NO: 5, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo comprende las regiones variable de la cadena pesada (VH) y/o variable de la cadena ligera (VL) codificadas por las secuencias de acido nucleico expuestas en SEQ ID NO: 4 y/o SEQ ID NO: 6, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo compite por la union con, y/o se une al mismo epitopo en KIR que, los anticuerpos mencionados anteriormente. En otra realizacion, el anticuerpo tiene al menos aproximadamente el 90 % de identidad de secuencia de aminoacidos de region variable con los anticuerpos mencionados anteriormente (por ejemplo, al menos aproximadamente el 90 %, 95 % o 99 % de identidad de region variable con SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 5).

llb. Anticuerpos anti-PD-1

Los anticuerpos anti-PD-1 humanos (o dominios VH y/o VL derivados de los mismos) adecuados para usarse en la invencion pueden generarse usando metodos bien conocidos en la tecnica. Como alternativa, se pueden usar anticuerpos anti-PD-1 reconocidos en la tecnica. Por ejemplo, se pueden usar los anticuerpos monoclonales 5C4 (denominado aqui nivolumab), 17D8, 2D3, 4H1, 4A11, 7D3, y 5F4, descritos en el documento WO 2006/121168, cuyas ensenanzas se incorporan en la presente por referencia. Otros anticuerpos PD-1 conocidos incluyen lambrolizumab (MK-3475), descrito como h409A11 en el documento WO 2008/156712, y AMP-514 descrito en el documento WO 2012/145493. Los anticuerpos PD-1 conocidos adicionales y otros inhibidores de PD-1 incluyen aquellos descritos en el documento WO 2009/014708 y el documento WO 2009/114335. Tambien se pueden usar

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anticuerpos reconocidos en la tecnica que compitan con cualquiera de estos anticuerpos por union a PD-1.

Un ejemplo de anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab, que comprende cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias mostradas en las SEQ ID NO: 17 y 18, respectivamente, o fragmentos de union a antigeno y variantes del mismo. En otras realizaciones, el anticuerpo comprende las CDR de las cadenas pesada y ligera o regiones variables de nivolumab. Por consiguiente, en una realizacion, el anticuerpo comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la VH de nivolumab que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la VL de nivolumab que tiene las secuencias expuestas en SEQ ID NO: 21. En otra realizacion, el anticuerpo comprende dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada que tienen las secuencias mostradas en las SEQ ID NO: 23, 24 y 25, respectivamente, y dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera que tienen las secuencias expuestas en las SEQ ID NO: 26, 27 y 28, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo comprende regiones VH y/o VL que tienen las secuencias de aminoacidos mostradas en SEQ ID NO: 19 y/o SEQ ID NO: 21, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo comprende las regiones variable de la cadena pesada (VH) y/o variable de la cadena ligera (VL) codificadas por las secuencias de acido nucleico expuestas en SEQ ID NO: 20 y/o SEQ ID NO: 22, respectivamente. En otra realizacion, el anticuerpo compite por la union con y/o se une al mismo epitopo en PD-1 que los anticuerpos mencionados anteriormente. En otra realizacion, el anticuerpo tiene al menos aproximadamente el 90 % de identidad de secuencia de aminoacidos de la region variable con los anticuerpos mencionados anteriormente (por ejemplo, al menos aproximadamente el 90 %, 95 % o 99 % de identidad de region variable con SEQ ID nO: 19 o SEQ ID NO: 21).

III. Composiciones farmaceuticas

Las composiciones farmaceuticas adecuadas para la administration a pacientes humanos se formulan normalmente para la administracion parenteral, por ejemplo, en un vehiculo liquido, o son adecuadas para su reconstitution en solution o suspension liquida para la administracion intravenosa.

En general, tales composiciones comprenden normalmente un transportador farmaceuticamente aceptable. Segun se usa en el presente documento, la expresion “farmaceuticamente aceptable" significa aprobado por un organismo de control o que aparece en la Farmacopea de Estados Unidos u otra farmacopea generalmente reconocida para uso en animales, particularmente en seres humanos. El termino “transportador" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehiculo con el cual se administra el compuesto. Estos transportadores farmaceuticos pueden ser liquidos esteriles, tales como agua y aceites, incluyendo los de origen de petroleo, animal, vegetal o sintetico, tales como aceite de cacahuate, aceite de soja, aceite mineral, aceite de ajonjoli, ricinoleato de polietilenglicol glicerilo y similares. Puede emplearse como trasportador agua o solucion salina acuosa y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol, particularmente para soluciones inyectables (por ejemplo, que comprendan un anticuerpo anti-KIR o anti- PD-1). Las composiciones liquidas para administracion parenteral pueden formularse para la administracion por inyeccion o infusion continua. Las vias de administracion por inyeccion o infusion incluyen la intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intratecal y subcutanea. En una realizacion, los anticuerpos anti-KIR y/o anti-PD-1 se administran por via intravenosa (por ejemplo, por separado o juntos, cada uno, por ejemplo, durante el transcurso de una hora, 90 minutos o dos horas).

IV. Poblaciones de pacientes

En el presente documento se proporcionan metodos eficaces para tratar el cancer (por ejemplo, tumores solidos resistentes avanzados o neoplasias malignas hematologicas) en un paciente humano, usando una combination de un anticuerpo anti-KIR y un anticuerpo anti-PD-1.

Debido a que estos metodos funcionan al potenciar una respuesta inmunitaria al bloquear receptores inhibidores en linfocitos T y linfocitos NK, son aplicables a una muy amplia variedad de canceres. En una realizacion, el paciente humano padece cancer pulmonar no microcitico (CpnM), carcinoma de celulas renales (CCR), melanoma (por ejemplo, melanoma maligno cutaneo o intraocular), cancer colorrectal o carcinoma ovarico seroso. Los ejemplos de canceres adicionales que pueden tratarse usando una combinacion de un anticuerpo anti-PD-1 y un anticuerpo anti- KIR incluyen cancer de higado, cancer de hueso, cancer pancreatico, cancer de piel, cancer de cabeza o cuello, cancer de mama, cancer de pulmon, cancer uterino, cancer de colon, cancer rectal, cancer de la region anal, cancer de estomago, cancer testicular, cancer uterino, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cuello uterino, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, linfoma no Hodgkin, cancer del esofago, cancer del intestino delgado, cancer del sistema endocrino, cancer de la glandula tiroidea, cancer de la glandula paratiroidea, cancer de la glandula suprarrenal, sarcoma de tejido blando, cancer de la uretra, cancer del pene, tumores solidos de la infancia, linfoma linfocitico, cancer de la vejiga, cancer del rinon o ureter, carcinoma de la pelvis renal, neoplasma del sistema nervioso central (SNC), linfoma de SNC primario, angiogenesis tumoral, tumor de la medula espinal, glioma de tronco encefalico, adenoma hipofisario, sarcoma de Kaposi, cancer epidermoide, cancer de celulas escamosas, canceres inducidos de forma ambiental, incluyendo los inducidos por asbesto, neoplasias malignas hematologicas incluyendo, por ejemplo, mieloma multiple, linfoma de linfocitos B, linfoma de Hodgkin/linfoma de linfocitos B mediastinico primario, linfomas no Hodgkin, linfoma mieloide agudo, leucemia mielogena cronica, leucemia linfoide cronica, linfoma folicular, linfoma de linfocitos B grandes difuso, linfoma de Burkitt, linfoma de celulas grandes inmunoblastico, linfoma linfoblastico de precursores B, linfoma de celulas de

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manto, leucemia linfoblastica aguda, micosis fungoide, linfoma de celulas grandes anaplasico, linfoma de linfocitos T y linfoma linfoblastico de precursores T, y cualquiera de las combinaciones de dichos canceres. La presente invention tambien es aplicable al tratamiento de canceres metastasicos.

Los pacientes pueden analizarse o seleccionados para uno o mas de los atributos clinicos descritos anteriormente antes de, durante o despues del tratamiento.

V. Terapia de combination

Las terapias de combinacion proporcionadas en el presente documento implican la administration de un anticuerpo anti-KIR y de otro anticuerpo que bloquea un receptor inmunitario inhibidor (por ejemplo, un receptor que despues de la union a su ligando natural inhibe/neutraliza una actividad, tal como una actividad citotoxica), tal como un anticuerpo anti-PD-1, para tratar sujetos aquejados de cancer (por ejemplo, tumores solidos resistentes avanzados).

En una realization, la invencion proporciona un anticuerpo anti-KIR y un anticuerpo anti-PD-1 en combinacion para tratar sujetos que tengan un tumor solido (por ejemplo, un tumor solido resistente avanzado). En una realizacion particular, el anticuerpo anti-KIR es lirilumab. En otra realizacion, el anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab.

Segun se usa en el presente documento, la administracion adjunta o combinada (coadministracion) incluye la administracion simultanea de los compuestos en la misma forma farmaceutica, o en una distinta, o la administracion separada de los compuestos (por ejemplo, administracion secuencial). Asi, los anticuerpos anti-KIR y anti-PD-1 pueden administrarse de forma simultanea en una formulation unica. Como alternativa, los anticuerpos anti-KIR y anti-PD-1 pueden formularse para la administracion separada y se administran de forma simultanea o secuencial.

Por ejemplo, el anticuerpo anti-PD-1 puede administrarse (por ejemplo, inmediatamente seguido por) la administracion del anticuerpo anti-KIR, o viceversa. En una realizacion, el anticuerpo anti-PD-1 se administra antes de la administracion del anticuerpo anti-KIR en los dias 1 y 29. En otra realizacion, el anticuerpo anti-KIR se administra dentro de los 30 minutos despues de la administracion del anticuerpo anti-PD-1. Tal administracion simultanea o secuencial preferentemente da como resultado que ambos anticuerpos esten presentes de forma simultanea en los pacientes tratados.

VI. Protocolos de tratamiento

Los protocolos de tratamiento adecuados para tratar un paciente humano aquejado de cancer incluyen, por ejemplo, administrar al paciente una cantidad eficaz de cada uno de:

(a) un anticuerpo anti-KIR que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5,

(b) un anticuerpo anti-PD-1 que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tienen la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 21,

en los que el metodo comprende al menos un ciclo de administracion, en donde el ciclo es un periodo de ocho semanas, en el que para cada uno de los al menos un ciclo, se administran dos dosis de anticuerpo anti-KIR a una dosis de 0.1-20 mg/kg de peso corporal y se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-PD-1 a una dosis de 0,120 mg/kg de peso corporal.

(a) 0,1 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(b) 0,3 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(c) 1 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(d) 3 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(e) 6 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1; o

(f) 10 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1.

En otra realizacion, la dosis del anticuerpo anti-KIR y/o anti-PD-1 se varia con el tiempo. Por ejemplo, el anticuerpo anti-KIR y/o el anticuerpo anti-PD-1 pueden administrarse inicialmente a una dosis alta y pueden reducirse a lo largo

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del tiempo. En otra realizacion, el anticuerpo anti-KIR y/o el anticuerpo anti-PD-1 se administran inicialmente a una dosis baja y se aumenta a los largo del tiempo.

En otra realizacion, la cantidad de los anticuerpos anti-KIR y/o anti-PD-1 administrada es constante para cada dosis. En otra realizacion, la cantidad de anticuerpo administrada varia con cada dosis. Por ejemplo, la dosis de mantenimiento (o continuation) del anticuerpo puede ser mas alta o la misma que la dosis de carga que es la que se administra primero. En otra realizacion, la dosis de mantenimiento del anticuerpo puede ser mas baja o igual a la dosis de carga.

En otra realizacion, los anticuerpos anti-KIR y/o anti-PD-1 se formulan para administration intravenosa. En una realizacion, el anticuerpo anti-PD-1 se administra en los dias 1, 15, 29 y 43 de cada ciclo. En otra realizacion, el anticuerpo anti-KIR se administra los dias 1 y 29 de cada ciclo.

En otras realizaciones, los anticuerpos anti-KIR y/o anti-PD-1 se administran una vez por semana, una vez cada tres o dos semanas, una vez al mes o mientras se observe un beneficio clinico, o hasta que haya una respuesta completa, enfermedad progresiva confirmada o toxicidad que no se pueda controlar.

En otra realizacion, un ciclo de administracion es de ocho semanas, el cual puede repetirse, segun sea necesario. En otra realizacion, el tratamiento consiste en hasta 12 ciclos.

En otra realizacion, se administran 4 dosis del anticuerpo anti-PD-1 por ciclo de ocho semanas. En otra realizacion, se administran 2 dosis del anticuerpo anti-KIR por ciclo de ocho semanas.

En otra realizacion, el anticuerpo anti-PD-1 y el anticuerpo anti-KIR se administran como una primera linea de tratamiento (por ejemplo, el tratamiento inicial o primero). En otra realizacion, el anticuerpo anti-PD-1 y el anticuerpo anti-KIR se administran como una segunda linea de tratamiento (por ejemplo, despues del tratamiento inicial o primero, incluyendo despues de la caida y/o cuando el primer tratamiento haya fracasado).

En otro aspecto, la invention presenta cualquiera de las realizaciones mencionadas anteriormente, en las que el anticuerpo anti-PD-1 se reemplaza con, o se combina con, un anticuerpo anti-PD-L1 o anti-PD-L2.

VII. Resultados

Con respecto a las lesiones diana, las respuestas a la terapia pueden incluir:

Respuesta completa (RC) (RECIST V1.1): Desaparicion de todas las lesiones diana. Cualquier ganglio linfatico patologico (ya sea diana o no diana) debe tener reduction del eje corto hasta < 10 mm.

Respuesta parcial (RP) (RECIST V1.1): Al menos una disminucion del 30 % en la suma de los diametros de lesiones diana, tomando como referencia los diametros de suma de medida inicial.

Enfermedad progresiva (EP) (RECIST V1.1): Al menos un aumento del 20 % en la suma de los diametros de lesiones diana, tomando como referencia la suma mas pequena en el estudio (esto incluye la suma de medida inicial si es la mas pequena en el estudio). Ademas del aumento relativo del 20 %, la suma tambien debe demostrar un aumento absoluto de al menos 5 mm (Nota: la aparicion de una o mas lesiones nuevas tambien se considera progresion).

Enfermedad estable (EE) (RECIST V1.1): Ni retraction suficiente para calificar para RC ni aumento suficiente para calificar para RP, tomando como referencia los diametros de suma mas pequenos mientras se esta en el estudio.

Respuesta completa inmuno-relacionada (RCir) (irRECIST): Desaparicion de todas las lesiones diana. Cualquier ganglio linfatico patologico (ya sea diana o no diana) debe tener una reduccion del eje corto hasta < 10 mm.

Respuesta parcial inmuno-relacionada (RPir) (irRECIST): Una disminucion de al menos el 30 % en la suma de diametros de lesiones dianas y todas las nuevas lesiones medibles (es decir, Cambio Porcentual de la Carga Tumoral), tomando como referencia los diametros de suma de medida inicial. Nota: la aparicion de nuevas lesiones medibles se factoriza en la Carga Tumoral global, pero no califica automaticamente como enfermedad progresiva hasta que la suma de los diametros aumente en > 20 % cuando se compara con la cifra minima.

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Enfermedad progresiva inmuno-relacionada (EPir) (irRECIST): Un aumento de al menos el 20 % de la Carga Tumoral (es decir, la suma de diametros de lesiones grandes, y cualquier lesion medible nueva) tomando como referencia la suma mas pequena en el estudio (esto incluye la suma de la medida de base si es la mas pequena del estudio). Ademas del aumento relativo del 20 %, la suma tambien debe demostrar un aumento absoluto de al menos 5 mm. Evaluaciones de tumor usando criterios inmuno- relacionados para enfermedad progresiva incorporan la contribution de nuevas lesiones medibles. Cada cambio en porcentaje neto en la carga tumoral por evaluation representa el tamano y la cinetica de crecimiento de lesiones tanto antiguas como nuevas a medida que aparecen.

Enfermedad estable inmuno- relacionada (EEir) (irRECIST): Ni retraccion suficiente para calificar para RPir ni aumento suficiente como para calificar para Eir, tomando como referencia los diametros de suma mas pequenos mientras se esta en el estudio.

Con respecto a lesiones no diana, las respuestas a terapia pueden incluir:

Respuesta completa (RC) (RECIST V1.1): Desaparicion de todas las lesiones no diana. Todos los ganglios linfaticos deben ser no patologicos en tamano (eje corto < 10 mm).

No-RC/no-EP (RECIST V1.1): Persistencia de una o mas lesiones no diana.

Enfermedad progresiva (EP) (RECIST V1.1): Progresion inequivoca de lesiones no diana existentes. La aparicion de una

: o mas lesiones nuevas tambien se considera progresion.

Respuesta completa inmuno-relacionada (RCir) (irRECIST): Desaparicion de todas las lesiones no diana. Todos los ganglios linfaticos deben ser no patologicos en tamano (eje corto <10 mm).

Enfermedad progresiva inmuno-relacionada (EPir) (irRECIST): Los aumentos del numero o tamano de lesiones no diana no constituyen enfermedad progresiva a menos que/hasta que la Carga Tumoral aumente el 20 % (es decir, la suma de los diametros en la cifra minima de lesiones objetivo y cualquiera de las lesiones medibles nuevas aumenta en la cantidad necesaria). Lesiones no diana no se consideran en la definition de Enfermedad Estable y Respuesta Parcial.

Los pacientes tratados de acuerdo con los metodos divulgados en el presente documento preferentemente experimentan mejora en al menos un signo de cancer. En una realization, la mejora se mide por una reduction en la cantidad y/o tamano de lesiones tumorales medibles. En otra realizacion, las lesiones pueden medirse en rayos x de pecho o peKculas de TC o RMN. En otra realizacion, se puede usar citologia o histologia para evaluar la sensibilidad a una terapia.

En una realizacion, el paciente tratado presenta una respuesta completa (RC), una respuesta parcial (RP), enfermedad estable (EE), enfermedad completa inmuno-relacionada (ECir), respuesta parcial inmuno-relacionada (RPir) o enfermedad estable inmuno-relacionada (EEir). En otra realizacion, el paciente tratado experimenta retraction de tumor y/o disminucion de la velocidad de crecimiento, es decir, supresion de crecimiento tumoral. En otra realizacion, se reduce o inhibe la proliferation celular no deseada. En otra realizacion mas, puede presentarse uno o mas de los siguientes: se puede reducir el numero de celulas cancerosas; el tamano tumoral se puede reducir; la infiltration de celulas cancerosas en organos perifericos se puede inhibir, retrasar, ralentizar o detener; la metastasis tumoral puede ralentizarse o inhibirse; se puede inhibir el crecimiento tumoral; la recidiva tumoral puede prevenirse o retrasarse; uno o mas de los sintomas asociados con el cancer pueden aliviarse hasta cierto punto.

En otras realizaciones, la administration de cantidades eficaces del anticuerpo anti-KIR y el anticuerpo anti-PID-1 de acuerdo con cualquiera de los metodos proporcionados en el presente documento, produce al menos un efecto terapeutico seleccionado del grupo que consiste en reduccion en tamano de un tumor, reduccion en el numero de lesiones metastasicas que aparecen a lo largo del tiempo, remision completa, remision parcial o enfermedad estable. En aun otras realizaciones, los metodos de tratamiento producen una tasa de beneficio clinico comparable (TBC = RC + RP + DT > 6 meses) mejor que la lograda por un anticuerpo anti-KIR o anticuerpo anti-PD-1 solo. En otras realizaciones, la mejora de la tasa de beneficio clinico es de aproximadamente del 20 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o mas, en comparacion con un anticuerpo anti-KIR o anticuerpo anti-PID-1 solo.

VIII. Kits y formas farmaceuticas unitarias

En el presente documento tambien se proporcionan kits que incluyen una composition farmaceutica que contiene un anticuerpo anti-KIR, tal como lirilumab, y un anticuerpo anti-PD-1, tal como nivolumab, y un transportador farmaceuticamente aceptable, en una cantidad terapeuticamente eficaz adaptada para su uso en los metodos anteriores. De forma opcional, los kits tambien pueden incluir instrucciones, por ejemplo, que comprendan pautas posologicas, para permitir a un practicante (por ejemplo, un medico, enfermera o paciente) administrar la

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composition contenida en los mismos para administrar la composition a un paciente que tenga cancer (por ejemplo, un tumor solido). El kit tambien puede incluir una jeringa.

Opcionalmente, los kits incluyen multiples envases de las composiciones farmaceuticas de dosis unica conteniendo cada uno una cantidad eficaz del anticuerpo anti-KIR o anti-PD-1 para una individual administration en conformidad con los metodos proporcionados anteriormente. Los instrumentos o dispositivos necesarios para administrar la composicion (o composiciones) farmaceuticas tambien pueden estar incluidos en los kits. Por ejemplo, un kit puede proporcionar una o mas jeringas prerrellenadas que contengan una cantidad del anticuerpo anti-KIR o anti-PD-1.

En una realization, la presente invention proporciona un kit para tratar un cancer en un paciente humano, comprendiendo el kit:

(a) una dosis de un anticuerpo anti-KIR que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5.

(b) una dosis de un anticuerpo anti-PD-1 que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 21, y

(c) instrucciones para el uso del anticuerpo anti-KIR y el anticuerpo anti-PD-1 en los metodos descritos en el presente documento.

Los siguientes ejemplos son simplemente ilustrativos y no se deben considerar de ningun modo como limitativos del alcance de la presente divulgacion.

Ejemplos

Ejemplo 1: Farmacologia preclinica del anticuerpo anti-PD-1 (nivolumab)

Nivolumab es un anticuerpo monoclonal de isotipo IgG4 (kappa) completamente humano que se une a PD-1 con alta afinidad y especificidad, impidiendo asi la union a sus ligandos PD-L1 y PD-L2 (vease el documento WO 2006/121168). La Kd para la union de nivolumab a PD-1 se ha determinado como de aproximadamente 10-9 M medida por analisis de resonancia de plasmon superficial (Biacore) (vease el documento WO 2006/121168), y alrededor de 2,9 x 10-12 M segun se determina por interferometria de biocapa (ForteBio). Nivolumab no se une a otros miembros de la familia relacionados, tales como BTLA, CTLA-4, ICOS o CD28. Pruebas preclinicas de nivolumab demostraron que la union a PD-1 da como resultado la proliferation de linfocitos T potenciada y la liberation de interferon gama (IFN-gamma) in vitro (vease el documento WO 2006/121168). Las secuencias de aminoacidos de la cadena pesada y ligera de nivolumab se proporcionan en las SEQ ID NO: 17 y 18 respectivamente.

Ejemplo 2: Baja toxicidad in vivo del anticuerpo anti-PD-1 (nivolumab)

Los estudios de toxicologia en macacos confirmaron que nivolumab era bien tolerado a dosis de hasta 50 mg/kg proporcionadas dos veces por semana para 27 dosis. Los hallazgos relacionados con el farmaco se limitaron a una disminucion reversible en triyodotironina (T3) del 28 %, sin anomalias concomitantes en otros marcadores de la funcion tiroidea (datos no mostrados).

Ejemplo 3: Farmacologia clinica y seguridad de los anticuerpos anti-PD-1.

A partir de mayo de 2011 se trataron 273 sujetos con nivolumab en cuatro estudios de Fase I. Uno fue un estudio de sujetos con infection por hepatitis C activa, dos fueron estudios de aumento escalonado de la dosis en sujetos con neoplasias malignas avanzadas, y el otro fue un estudio en combination con Ipilimumab. Un total de 273 sujetos recibieron una o mas dosis de nivolumab a dosis de 0,3 a 10 mg/kg. Ninguna dosis maxima tolerada (DMT) fue M/56082-EP alcanzada. No hubo patron de incidencia, gravedad o relation de acontecimientos adversos (los AA) con la dosis o con el tipo de tumor. Veintitres sujetos (8,4 %) tuvieron acontecimientos adversos graves (los AAG) relacionados con nivolumab.

En un estudio (CA209001), 39 sujetos recibieron una unica dosis de nivolumab a 0,3, 1, 3 o 10 mg/kg con una posibilidad de retratamiento a los tres meses. Todos los sujetos tuvieron al menos un AA, y de ellos, 35 (88 %) estaban relacionados con el tratamiento. Los AA mas frecuentes, independientemente de la causalidad fueron fatiga (56 %), nauseas (44 %), proteinuria (38 %), estrenimiento (33 %), dolor de espalda (33 %), sequedad de boca (28 %), vomito (28 %), sarpullido (26 %), disnea (26 %) y anorexia (23 %). Se informaron los Aa relacionados con el tratamiento en 35 de 39 (90 %) de los sujetos. De ellos, 11 experimentaron AA de grado 3, y un sujeto tuvo un recuento linfocitario reducido de grado 4. Hubo 68 AAG y tres estuvieron relacionados con el tratamiento (anemia de grado 2, hipotiroidismo de grado 2 y colitis de grado 3). Entre los 12 fallecimientos, ninguna se considero relacionada con nivolumab.

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En un estudio de Fase I mas grande (CA209003) que todavia esta en curso, 169 sujetos recibieron multiples dosis de nivolumab a 0,1, 0,3, 1, 3 y 10 mg/kg, a un intervalo de cada dos semanas. Ciento cuarenta (83 %) sujetos comunicaron al menos un AA, el mas comun de los cuales no difirio claramente de los enumerados anteriormente. Esto concuerda con la experiencia de seguridad observada en la administracion de unica dosis de nivolumab. Los AA relacionados con el tratamiento mas comunes fueron fatiga (22 %), sarpullido (15 %), prurito (11 %), diarrea (9 %) y nauseas (8 %). Sesenta y cinco (38 %) sujetos experimentaron AA de grado 3 o 4 y, de ellos, 23 sujetos tuvieron AA relacionados con el tratamiento. Cincuenta y ocho (34 %) sujetos comunicaron AAG, todos los cuales se presentaron en los grupos de tratamiento de 1, 3 o 10 mg/kg y, de ellos, 16 (9 %) sujetos tuvieron AAG que estuvieron relacionados con el tratamiento. Los tipos de AAG relacionados con el tratamiento incluyeron endocrinopatias (hipertiroidismo, hipofisitis, insuficiencia corticosuprarrenal secundaria, lipasa aumentada), toxicidades gastrointestinales (dolor abdominal, nauseas, vomito, deshidratacion, diarrea, colitis), hepatotoxicidades (hepatitis, ALT, AST y fosfatasa alcalina aumentadas), toxicidades pulmonares (disnea, neumonitis, sindrome de dificultad respiratoria aguda) y otras toxicidades (fatiga, celulitis, reaccion relacionada con infusion, mioclonia, neoplasia maligna, sindrome mielodisplasico). Al 30 de noviembre de 2011, se habian comunicado 33 fallecimientos; dos sujetos a la dosis de 0,1 mg/kg, ocho sujetos a la dosis de 1 mg/kg, tres sujetos a la dosis de 3 mg/kg y 20 sujetos a la dosis de 10 mg/kg. Treinta fallecimientos se consideraron secundarias a la evolucion de la enfermedad y una se informo como debida a miocardiopatia isquemica y no se considero relacionada con el farmaco. Dos sujetos tuvieron fallecimientos relacionadas con el farmaco. Un sujeto, tratado con 10 mg/kg, tuvo neumonitis de grado 4 y fallecio con septicemia de grado 5. El otro sujeto, tratado con 1 mg/kg, desarrollo neumonitis de grado 3 y sindrome de dificultad respiratoria aguda de grado 4 y fallecio con septicemia de grado 5. Ningun sujeto recibio esteroides hasta que los sintomas pulmonares fueron graves. Se conocen en la tecnica algoritmos de abordaje, incluyendo el uso de agentes inmunosupresores tales como corticosteroides e infliximab, para tratar la neumonitis y el sindrome de dificultad respiratoria aguda.

Los resultados preliminares demostraron actividad clinica en ambos de los ensayos mencionadas anteriormente. De los 39 sujetos en CA2009001, tres sujetos tuvieron respuesta parcial (carcinoma colorrectal, melanoma y carcinoma de celulas renales) y diez sujetos tuvieron enfermedad estable. En CA209003, 91 sujetos fueron evaluables para respuesta tumoral y se informaron respuestas completas o parciales a niveles de dosis de 1, 3 y 10 mg/kg en sujetos con cancer pulmonar no microcitico, carcinoma de celulas renales y melanoma. Los datos de estos ensayos clinicos en marcha se informaron recientemente en Topalian SL, et. al., New Eng J Med 2012; 366(26):2443-2454 (vease tambien el documento WO 2008/156712 (h409A11) y Hamid O et. al., New Eng J Med 2013; 369:134-144).

Ejemplo 4: Farmacocinetica del anticuerpo anti-PD-1 (nivolumab)

Un analisis farmacocinetico de dosis individual de 39 sujetos con cancer a los que se les administrado nivolumab a 0,3, 1, 3 y 10 mg/kg, revelo que el Tmax medio entre dosis individuales vario de 1,6 a 3 horas, con valores individuales variando de 0,9 a 7 horas. La farmacocinetica de nivolumab fue lineal en el intervalo de 0,3 a 10 mg/kg, con aumentos proporcionales a dosis en la concentration serica maxima (Cmax) y area bajo la curva de concentracion-tiempo desde tiempo cero a infinito (ABCinf), con variabilidad entre sujetos baja a moderada observada en cada nivel de dosis. La semivida de elimination terminal media de nivolumab fue de 17 a 25 dias, lo cual concuerda con la semivida de IgG4 endogena. Tanto la eliminacion como la distribution de nivolumab fueron independientes de la dosis (datos no mostrados).

Ejemplo 5: Ensayo clinico de Fase I con I PH-2101

I PH-2101 (conocido tambien como 1-7F9 y descrito en el documento WO 2006/003179) es un anticuerpo monoclonal anti-KIR completamente humano que se une especificamente, y con alta afinidad, a KIR2DL-1,2 y 3, y a KIR2DS-1 y 2, impidiendo asi la interaction entre KIR y HLA-C. Se ha finalizado un ensayo clinico de Fase I con I PH-2101 en pacientes de LMA. La administracion unica a las dosis de 0,0003, 0,003, 0,015, 0,075, 0,3, 1 y 3 mg/kg no alcanzo una dosis tolerada de grado maximo. Se encuentran en marcha dos estudios de Fase I y tres estudios de Fase II en pacientes con LMA o mieloma multiple. En estos estudios, se probaron diversos niveles de dosis de hasta 3 mg/kg a un intervalo de cada cuatro semanas y el numero maximo de ciclos administrados fue de seis. Los estudios de farmacocinetica sugirieron una semivida de 12-14 dias a dosis mas altas que 0,3 mg/kg. A una dosis de 0,075 mg/kg, se observo ocupacion de KIR completa (>90 %) durante menos de 7 dias. A una dosis de 0,3 mg/kg, la ocupacion de KIR disminuyo a menos del 90 %, empezando el dia 28. A una dosis de 3 mg/kg se logro una ocupacion de KIR completa sostenida durante cuatro semanas.

A partir del 1 de diciembre de 2011, estuvieron disponibles los datos de seguridad clinica de 136 pacientes de estos ensayos. Se comunicaron acontecimientos adversos (AA) en 128 de 136 (94 %) sujetos e incluyeron 183 de 734 (25 %) informes de que estaban posiblemente, probablemente o definitivamente relacionados con I PH-2101. Los AA que se comunicaron en mas de un sujeto incluyeron sintomas generales (escalofrios, fiebre, fatiga, debilidad), sintomas gastrointestinales (nauseas, vomito, diarrea), sintomas neurologicos (mareo, cefaleas, temblores), sintomas pulmonares (disnea), sintomas cutaneos (eritema, prurito, sarpullido), otros (sofocos, hipertension, espasmos musculares, mialgia) y anomalias en los analisis de laboratorio (hiperpotasemia, lipasa aumentada, recuentos de leucocitos disminuidos, neutrofilos y plaquetas). Estos acontecimientos fueron generalmente de Grado 1 y Grado 2 y tendieron a ser mas frecuentes a dosis mayores de 1 mg/kg. Solo un paciente con mieloma multiple

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experimento un acontecimiento adverso grave (AAG), el cual se debio a insuficiencia renal aguda. Aunque se considero relacionado con I PH-2101, el paciente tuvo tambien progresion de la enfermedad. En conjunto, IPH-2101 fue tolerable a dosis de 0,003 a 3 mg/kg.

Ejemplo 6: Farmacologia preclinica del anticuerpo anti-KIR (lirilumab)

Lirilumab es un anticuerpo monoclonal IgG4 completamente humano que se une espedficamente y con alta afinidad a un subconjunto de KIR, concretamente KIR2DL-1, 2 y 3, y KIR2DS-1 y 2. El analisis de resonancia de plasmon superficial demostro que la afinidad monovalente media de lirilumab por KIR2DL1 soluble recombinante fue de 2,04 x 10-8 M (d.t. 0,31 x l0-8) y la de KIR2DL3 fue de 3,01 x 10-10 M (d.t. 0,41 x 10-10). Las secuencias de aminoacidos de la cadena pesada y ligera de LIRILUMAB se proporcionan en las SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente.

Ejemplo 7: Falta de toxicidad del anticuerpo anti-KIR (lirilumab) en ratones

Ni lirilumab ni IPH-2101 se unen a linfocitos NK de primates no humanos u otras especies usadas tradicionalmente para pruebas de seguridad. Sin embargo, Ly49C/I son receptores inhibidores de murino que son funcionalmente homologos al KIR humano. No hubo hallazgos adversos en ratones tratados con lirilumab a 10 mg/kg una vez por semana durante cuatro semanas, o con el anticuerpo anti-Ly49 sustituto 5E6 F(ab')2 dos veces por semana durante 13 semanas (datos no mostrados).

Ejemplo 8: Farmacologia clinica y seguridad del anticuerpo anti-KIR (lirilumab)

Se describen anteriormente, en el ejemplo 5, los datos de seguridad para los 136 sujetos tratados con IPH-2101. Lirilumab comprende las mismas regiones variables de la cadena pesada y ligera que IPH-2101 (conocido tambien como 1-7F9) y, por lo tanto, se une al mismo epitopo que IPH-2101, pero difiere de IPH-2101 en que (1) se prepara en celulas de ovario de hamster chino (CHO), mientras que IPH-2101 se prepara a partir de celulas de hibridoma, y (2) se ha introducido en lirilumab una mutacion estabilizadora de la bisagra (S231P).

La evaluacion farmacodinamica preliminar de la ocupacion de KIR revelo que los tres sujetos que recibieron 0,015 mg/kg de lirilumab tuvieron saturacion completa de KIR2D (>90 % de ocupacion de KIR) durante menos de 1 semana. Los sujetos que recibieron 0,3 mg/kg tuvieron saturacion completa durante al menos 8 semanas, la cual se prolongo todavia mas en los que recibieron dosis mas altas. La mitad de los sujetos (0,015, 0,3, 1 y 3 mg/kg), incluyendo los tres en la ultima cohorte probada, tuvieron aumentos transitorios modestos de los niveles de interferon gamma (datos no mostrados).

Ademas, se ha finalizado un estudio de Fase I en sujetos con neoplasias malignas hematologicas avanzadas (Vey N et. al. (2012) Blood 120(22):4317-23), que incluia un anticuerpo relacionado, IPH2101 (tambien designado 1-7F9 en el documento WO 2006/003179), que tenia regiones variables identicas a las de lirilumab, pero que carecia de una mutacion de la bisagra S241P estabilizadora). A partir del 7 de mayo de 2012, veinte sujetos recibieron IPH2101 a niveles de dosis de 0,015, 0,3, 1, 3, 6 y 10 mg/kg. Seis sujetos tenian tumores solidos (4 ovaricos, 1 endometrial, 1 cancer de mama) y 14 tenian neoplasias hematologicas. Los sujetos en los tres niveles de dosis inferiores recibieron cuatro dosis proporcionadas a un intervalo de cada cuatro semanas. Los sujetos a los niveles de dosis mas altos de 3, 6 y 10 mg/kg recibieron una dosis. No hubo toxicidades limitativas de la dosis. No hubo una tendencia en la frecuencia de los AA en relacion al nivel de dosis. Dieciocho de 20 (90 %) sujetos informaron AA. La mayoria de los acontecimientos fueron de grado 1 (65 %) o grado 2 (23 %) de gravedad. De un total de 111 AA, 38 (34 %) se consideraron relacionados con lirilumab, los mas comunes de los cuales fueron fatiga (16 %), dolor de cabeza (13 %), prurito (11 %), astenia (5 %), estrenimiento (5 %), hipertension (5 %), edema periferico (5 %) y sarpullido (5 %). Solo hubo un acontecimiento de grado 3 que estuvo relacionado con lirilumab, que se presento en un sujeto que recibio una dosis a 6 mg/kg. Esto fue un aumento de la lipasa en un sujeto que entro en el estudio con un aumento de grado 2 de la lipasa que 22 dias mas tarde regreso a la medida incial. No hubo AAG.

Ejemplo 9: Farmacocinetica del anticuerpo anti-KIR (lirilumab)

Estan pendientes los resultados de farmacocinetica de un estudio de fase I en marcha. Sin embargo, un modelo de FC sugiere que el perfil FC de lirilumab es probable que sea comparable al de IPH-2101. En ensayos clinicos de fase I de IPH-2101 anteriores, en sujetos con LMA y mieloma multiple, se encontro un modelo de 2 compartimientos con eliminacion de primer orden para describir adecuadamente los datos con eliminacion dependiente de la dosis, de tal forma que la eliminacion disminuia con dosis crecientes. La semivida terminal a la dosis mas alta (3 mg/kg) se determino como de 18 dias, lo cual concuerda con los valores informados en la literatura.

Ejemplo 10: Inhibicion de crecimiento tumoral in vivo mediante tratamiento de combinacion con el anticuerpo anti- KIR y el anticuerpo anti-PD-1

Se llevo a cabo un experimento en un modelo de tumor solido de murino para analizar la hipotesis de que la combinacion de anti-KIR y anti-PD-1 potenciaria la eficacia antitumoral. El fundamento fue utilizar la manipulacion farmaceutica para regular de forma coordinada inmunidad innata y adaptiva, y recapitular la biologia observada en

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pacientes de posalotrasplante, quienes tienen una falta de coincidencia de KIR. Tanto nivolumab (anticuerpo anti- PD-1 humano) como lirilumab (anticuerpo anti-KIR humano) reconocen solo secuencias humanas. Por lo tanto, se usaron para probar esta hipotesis un anticuerpo contra PD-1 especifico de murino, un anticuerpo anti-Ly49 y un F(ab)2 que reconoce Ly49C/I (que es el homologo de KIR en ratones).

Se inyecto a los ratones la linea celular de carcinoma de colon murino MC38 singenica y, despues de la formacion de tumores palpables, se distribuyeron al azar en una de cuatro cohortes para recibir IgG de control, anticuerpo anti- Ly49, anticuerpo anti-PD-1 o ambos anticuerpos. Como se muestra en la Figura 1, los ratones tratados con un anticuerpo IgG de control tuvieron rapido crecimiento de tumores (vease el panel izquierdo superior de la Figura 1). Los ratones tratados con anticuerpo anti-Ly49 no difirieron significativamente de los animales de control (panel izquierdo inferior de la Figura 1). Los tratados con un anticuerpo anti-PD-1 de murino mostraron latencia en progresion tumoral y el 30 % de los ratones continuaron estando libres de tumor (vease el panel derecho superior de la Figura 1). Los tratados tanto con anticuerpos anti-Ly49 como anti-PD-1 tuvieron tambien latencia en la progresion tumoral y el 60 % de los ratones tuvieron remision de los tumores establecidos (vease el panel derecho inferior de la Figura 1). Estos resultados proporcionan evidencia preclinica de la capacidad de un anticuerpo anti-KIR para potenciar de forma sinergica (es decir, mas que aditivamente) la eficacia de un anticuerpo anti-PD-1 en un modelo de tumor solido en murino.

Ejemplo 11: Ensayo de Fase I en pacientes que tenian tumores solidos

Se lleva a cabo un ensayo de fase I del anticuerpo anti-KIR (lirilumab) y anticuerpo anti-PD-1 (nivolumab) en pacientes que tienen tumores solidos avanzados, para demostrar la eficacia, incluyendo un efecto sinergico, de administrar lirilumab y nivolumab como un tratamiento de combination (NCT01714739; Sanborn et. al., 2013).

1. Objetivos

Un objetivo del estudio es evaluar la seguridad y tolerabilidad de lirilumab proporcionado en combinacion con nivolumab e identificar las toxicidades limitativas de la dosis (las TLD) y la dosis tolerada maxima (DTM) de la combinacion, en sujetos con tumores solidos avanzados (metastasicos y/o no resecables).

Otros objetivos incluyen evaluar la actividad antitumoral preliminar de la combinacion de lirilumab y nivolumab en sujetos con tumores solidos avanzados, caracterizar la farmacocinetica (FC) de lirilumab y nivolumab cuando se coadministran, controlar la inmunogenicidad de lirilumab y nivolumab administrados como terapia de combinacion, y evaluar el efecto farmacodinamico en tejido tumoral en subconjuntos de linfocitos infiltrantes de tumor (LIT) de sujetos con melanoma tratados con lirilumab proporcionado en combinacion con nivolumab.

Los objetivos adicionales incluyen evaluar los efectos farmacodinamicos de lirilumab frente a la dosis y/o la exposition, proporcionado en combinacion con nivolumab, sobre biomarcadores en sangre periferica, incluyendo los compartimientos de linfocitos NK y linfocitos T, y proteinas sericas (citocinas y otros moduladores inmunitarios), evaluar la actividad farmacodinamica en tejido tumoral y sangre periferica en sujetos tratados con lirilumab y nivolumab que se someten a biopsias opcionales, explorar posibles asociaciones entre medidas de biomarcadores y actividad antitumoral, caracterizar mas la ocupacion de KIR y la funcion de los NK a multiples niveles de dosis de lirilumab, cuando se proporciona en combinacion con nivolumab, evaluar la posible asociacion de genotipos de KIR y HLA de sujetos con resultado clinico, y evaluar la supervivencia global con punto temporal de referencia a los tres anos despues del inicio de la terapia con la combinacion de lirilumab y nivolumab.

2. Diseno y duration del estudio

El estudio es un estudio sin ocultacion de fase I y se lleva a cabo en dos partes. La primera parte del estudio consiste en una evaluation del aumento progresivo de la dosis de la seguridad y tolerabilidad de lirilumab administrado con nivolumab, en sujetos con tumores solidos avanzados. La segunda parte del estudio incluye 6 cohortes de expansion de aproximadamente 16 sujetos cada uno, a ya sea la dosis maxima tolerada (DMT), dosis maxima administrada (DMA) o a una dosis alternativa. Esta parte esta restringida a la enfermedad.

Los sujetos finalizan hasta cuatro periodos del estudio: Cribado (hasta 28 dias), Tratamiento (hasta un maximo de 2 anos de terapia de estudio), Seguimiento Clinico (100 dias) y Seguimiento de la Supervivencia (hasta 3 anos despues de la primera dosis del farmaco de estudio). El periodo de tratamiento consiste en hasta 12 ciclos de tratamiento de ocho semanas. Cada ciclo de tratamiento comprende 4 dosis de nivolumab y 2 dosis de lirilumab. Nivolumab se administra los dias 1, 15, 29 y 43, y lirilumab se administra los dias 1 y 29 de cada ciclo de tratamiento. En los dias en donde se proporcionan ambos farmacos de estudio, nivolumab se proporciona primero, seguido por lirilumab dentro de los 30 minutos de finalization de la infusion de 60 minutos de nivolumab. Despues de cada ciclo de tratamiento, la decision de tratar un sujeto con ciclos adicionales de la terapia de estudio esta basada en la evaluacion del tumor (evaluacion realizada entre los dias 49 y 56, y finalizada antes de la primera dosis del siguiente ciclo). Las decisiones del tratamiento relacionadas con el tratamiento del sujeto estan basadas exclusivamente en criterios de respuesta inmunorrelacionada (ir), irRECIST (Wolchok JD, et. al., Clin Cancer Res 2009; 15:7412-7420). Los sujetos con respuesta total de irEF no confirmada, irEE, irRP o irRC no confirmada al final

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de un ciclo dado continuan al siguiente ciclo de tratamiento. A los sujetos se les permite generalmente continuar la terapia de estudio hasta la primera aparicion de cualquiera de los siguientes: 1) logro de irRC confirmada; 2) finalizacion del numero maximo de ciclos, 3) tener ir-EP confirmada, 4) deterioro clinico que sugiere que a partir del tratamiento no es probable ningun beneficio adicional, 5) intolerabilidad a la terapia o 6) el sujeto cumple los criterios para interrumpir la terapia de estudio. Los sujetos entran en el periodo De Seguimiento Clinico, con visitas programadas en los dias 30, 60 y 100, para controlar acontecimientos adversos.

Despues de la finalizacion del periodo de Seguimiento Clinico, los sujetos entran en el periodo de Seguimiento De Supervivencia. Durante este periodo, se realizan visitas clinicas o un contacto telefonico cada 3 meses para evaluar el estado de supervivencia. La duracion de este periodo es de hasta 3 anos despues de la primera dosis del farmaco de estudio. En la Figura 2 se muestra un esquema del estudio.

Los sujetos que estan en remision completa, pero que progresan durante el periodo de Seguimiento Clinico o el periodo de Seguimiento de Supervivencia, son aptos para recibir ambos farmacos de estudio, a las mismas dosis y el mismo programa que recibieron anteriormente. La terapia continua hasta que se logra irRC confirmada, o durante un periodo de un ano. Los sujetos deben de nuevo cumplir todos los criterios de elegibilidad. El farmaco de estudio se proporciona a traves de una extension del estudio, un estudio de continuation que requiere aprobacion por parte de la administration sanitaria y el comite de etica responsables, o a traves de otro mecanismo.

El Cribado dura hasta 28 dias. El Periodo de Tratamiento dura hasta 2 anos. El Periodo de Seguimiento Clinico dura 100 dias. El Periodo de Seguimiento de Supervivencia dura hasta 3 anos despues de la primera dosis del farmaco de estudio. El tiempo total en estudio para cualquier sujeto individual no excede los 3,1 anos. La duracion total del estudio es de 4,5 anos a partir del momento de la primera visita del primer sujeto hasta el seguimiento de supervivencia requerido del ultimo sujeto incluido en el estudio.

3. Aumento escalonado de dosis

Se usa un diseno de 6+3 para evaluar la seguridad de lirilumab proporcionado en combination con nivolumab. Las dosificaciones durante el aumento escalonado de la dosis se proporcionan a continuacion en la Tabla 1.

Tabla 1:: Dosis durante el aumento escalonado de la dosis

Nivel de dosis: Sujetos totales Lirilumab (IV; mg/kg) Nivolumab (IV; mg/kg)

1: n = aproximadamente 6-12 0,1 3

2: n = aproximadamente 6-12 0,3 3

3: n = aproximadamente 6-12 1
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4: n = aproximadamente 6-12 3 3

Total: n = aproximadamente 24-48

El periodo de observation de la Toxicidad Limitante de Dosis (TLD) dura 8 semanas (Ciclo 1). Se tratan seis sujetos a cada nivel de dosis con expansion hasta 9 sujetos si se observan dos toxicidades limitantes de dosis en los primeros 6 sujetos. Si se presentan 0 o 1 TLD en una cohorte de 6 sujetos, se trata una nueva cohorte de 6 sujetos en el siguiente nivel de dosis mas alto. Si se presentan 2 de 6 TLD, la cohorte se expande a 9 sujetos. Si 3 o mas de 6, o 3 o mas de 9 sujetos experimentan TLD dentro de una cohorte, entonces se determina que ese nivel de dosis ha excedido la dosis maxima tolerada (DMT). Si no se alcanza DMT en la cohorte 4, entonces cohortes adicionales a 6 mg/kg de lirilumab y 10 mg/kg de BMS 986015, proporcionados en combinacion con 3 mg/kg de nivolumab, se consideran basadas en la experiencia de seguridad anadida durante el aumento escalonado de la dosis.

Para explorar adicionalmente las senales de seguridad que aparecen durante el aumento escalonado de la dosis, se acumula un total de hasta 12 sujetos a cualquier nivel de dosis. La incorporation adicional solo se permite una vez que el nivel de dosis en la cohorte se haya evaluado y declarado seguro para el aumento escalonado de la dosis. Solo las TLD en los 6-9 sujetos iniciales incorporados en un nivel de dosis se evaluan formalmente en el aumento escalonado de la dosis y la determinacion posterior de la DMT. Sin embargo, se consideran en la seleccion de la dosis para expansion de cohortes los datos de seguridad de todos los sujetos tratados.

No se permite ningun aumento escalonado o reduction de dosis intra-sujeto. Los sujetos que se retiran del estudio durante el periodo TLD por razones que no son una TLD se reemplazan dentro del mismo nivel de dosis. Con el fin de tomar decisiones sobre el aumento escalonado de la dosis a partir de una perspectiva de seguridad, los sujetos se consideran evaluables si han recibido 3 de las 4 dosis de nivolumab programadas a lo largo del periodo de observacion de 8 semanas, solo si la dosis perdida fue secundaria a razones no medicas.

El aumento escalonado de la dosis es a base del numero de toxicidades limitativas de dosis (las TLD) experimentadas durante el Ciclo 1. Los 6 sujetos iniciales a cada nivel de dosis tienen evaluacion en sangre periferica de marcadores de EP.

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Todos los datos clinicos y de laboratorio disponibles, y la naturaleza, momento de inicio y tiempo de resolucion de las TLD observados durante el aumento escalonado de la dosis se revisan para determinar si deberia examinarse un programa de dosis alternativo, si se requiere. Si se establece un acuerdo, el programa alternativo se identifica mediante una enmienda del protocolo.

4. Expansion de cohortes

El fin de las expansiones de cohortes es acumular information adicional de seguridad, tolerabilidad, eficacia preliminar y farmacodinamica con respecto a la combination de lirilumab y nivolumab. Una vez que se caracteriza el perfil de seguridad de todas las dosis probadas y la DMT de la administration combinada de lirilumab y nivolumab se ha definido, la expansion de cohortes se inicia a la DMT, la dosis maxima administrada (DMA), o una dosis alterna. Seis cohortes de expansion se restringen a los tipos de tumor enumerados a continuation en la Tabla 2.

Tabla 2: Tipos de tumor elegibles para expansion de cohortes

Tipo de tumor: Sujetos totales

Histologia de cancer pulmonar no microcitico-de celulas escamosas: aproximadamente 16

Histologia de cancer pulmonar no microcitico-no de celulas escamosas: aproximadamente 16

Carcinoma de celulas renales con un componente de celulas claras: aproximadamente 16

Melanoma: aproximadamente 16

Cancer colorrectal: aproximadamente 16

Carcinoma ovarico seroso: aproximadamente 16

Total: aproximadamente 96

La evaluation continua de los acontecimientos de toxicidad en las expansiones de cohortes se lleva a cabo a lo largo de la inscription en las cohortes de expansion. Si la tasa de las TLD excede 33 %, los descubrimientos se discuten y se interrumpe una inscripcion adicional. Si una cohorte de expansion se discontinua debido a toxicidad, se inicia una nueva cohorte a un nivel de dosis mas bajo que anteriormente probado.

La evaluacion continua de los acontecimientos de toxicidad en las expansiones de cohortes se lleva a cabo a lo largo de la inscripcion en las cohortes de expansion. Si la tasa de las TLD excede 33 %, los descubrimientos se discuten y se interrumpe una inscripcion adicional. Si una cohorte de expansion se discontinua debido a toxicidad, se inicia una nueva cohorte a un nivel de dosis mas bajo que anteriormente probado.

5. Tratamientos

Los tratamientos de estudio incluyen nivolumab y lirilumab. La Tabla 1 indica el nivel de dosis a utilizar para cada panel. Las cohortes de expansion se tratan a la dosis probada mas alta o un nivel de dosis distinto segun se seleccione el patrocinador. Para las visitas de tratamiento en donde se administran tanto lirilumab como nivolumab, nivolumab se administra primero seguido de lirilumab dentro de 30 minutos despues de la finalization de la infusion de nivolumab.

6. Toxicidades limitativas de la dosis

Lirilumab tiene el potencial de aumentar la frecuencia y gravedad de los adversos anteriormente descritos asociados con nivolumab, o de desarrollar toxicidades nuevas. La toxicidad limitativa de la dosis (TLD) se determina a base de la incidencia, intensidad y duration de los acontecimientos adversos que estan relacionados con el farmaco en estudio, y que se presentan dentro de 56 dias (8 semanas, hasta la finalizacion del Ciclo 1) del inicio del farmaco de estudio. La gravedad de los acontecimientos adversos se clasifica de acuerdo con el cTCAEv4 del NCI. La TLD hepatica, no hematologica y hematologica se definen por separado como se describe a continuacion.

Cualquiera de los siguientes acontecimientos se considera una TLD hepatica:

• ALT o AST > 8X el LSN, independientemente de la duracion

• ALT o AST > 5X y < 8X el LSN, que fracasa en regresar a Grado 1 o menos dentro de 5 dias, a pesar de la intervention medica

• Bilirrubina total de Grado 3

• ALT o AST > 3X el LSN y bilirrubina total simultanea > 2X el LSN

Cualquiera de los siguientes acontecimientos se consideran una TLD No Hematologica:

• Dolor ocular de Grado 2 o reduction de la agudeza visual que requiere tratamiento sistemico

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• Dolor ocular de Grado 2 o reduccion de la agudeza visual que no responde a la terapia topica y que no mejora a Grado 1 al cabo de 2 semanas del inicio de la terapia topica

• Toxicidad No Hepatica o No Hematologica de Grado 3, con las siguientes excepciones:

Los siguientes acontecimientos No Hematologicos de Grado 3 no se consideran TLD:

• Anomalia electroliticas de Grado 3 que dura menos de 72 horas, no esta clinicamente complicada y se resuelve espontaneamente o responde a la intervencion medica convencional

• Aumento de Grado 3 en la amilasa o lipasa que no esta asociado con evidencia clinica o radiografica de pancreatitis

• Nauseas o vomito de Grado 3 que dura menos de 48 horas, y se resuelve a Grado 1 o menos ya sea espontaneamente o con intervencion medica convencional

• Fiebre de Grado 3 que dura menos de 72 horas, y no esta asociada con compromiso hemodinamico (incluyendo hipotension, o evidencia clinica o de laboratorio de deterioro por perfusion organica especifica)

• Endocrinopatia de Grado 3 que se controla bien por reemplazo hormonal

• Crecimiento tumoral transitorio de Grado 3 (definido como dolor, irritacion o sarpullido que se localiza en sitios de tumor conocido o sospechado)

• Fatiga de Grado 3

• Reaccion a infusion de Grado 3 que regresa a Grado 1 en menos de 6 horas Cualquiera de los siguientes acontecimientos se considera una TLD hematologica:

• Neutropenia de Grado 4 que dura mas de 5 dias

• T rombocitopenia de Grado 4

• Trombocitopenia de Grado 3 asociada con hemorragia clinicamente significativa

• Neutropenia febril de Grado 3 que dura mas de 48 horas

• Hemolisis de Grado 3

7. Directrices para la modificacion de la dosis

El aumento escalonado o reduccion de la dosis intrasujeto de lirilumab y BMS-986558 no se permite en este estudio, para permitir una mejor evaluacion de la seguridad y eficacia extendidas a niveles de dosis individuales.

Los sujetos que experimenten una TLD deben continuar con la terapia, hasta la resolucion de la toxicidad. Si el acontecimiento adverso se resuelve a grado 1 o menos, o hasta el valor inicial, en gravedad dentro de 28 dias, entonces la terapia se reanuda a las mismas dosis para ambos farmacos de estudio. Si la toxicidad se resuelve despues de 28 dias y el investigador considera que el sujeto esta obteniendo beneficio clinico, entonces el sujeto es apto para reanudar los farmacos de estudio. Si despues el sujeto experimenta una TLD posterior, que tambien se resuelve y el investigador continua considerando que el sujeto esta obteniendo beneficio clinico, entonces el sujeto es apto para reanudar los farmacos de estudio.

Se requiere a los sujetos discontinuar permanentemente ambos farmacos de estudio por lo siguiente:

• Cualquier acontecimiento adverso de grado 4, con exception de: anomalias electroliticas de grado 4 que se resuelven < 72 horas, neutropenia de grado 4 de < 5 dias de duration, o linfopenia de grado 4 de < 5 dias de duration.

Cualquier acontecimiento adverso con riesgo clinico se evalua caso por caso para determinar los riesgos y beneficios de continuar en terapia despues de la resolucion frente a interrumpir terapia permanentemente. Los acontecimientos de alto grado que implican el sistema nervioso central, ojos, higado o pulmon, normalmente requeririan interruption permanente, a menos que haya elementos del historial del individuo y de la evolution clinica que sugieran una probabilidad mas alta de beneficio con respecto a la de riesgo con terapia continua despues de la resolucion.

8. Evaluaciones de seguridad

Los acontecimientos adversos se evaluan continuamente durante el estudio y durante 100 dias despues del ultimo tratamiento. Los acontecimientos adversos se codifican usando la version mas actual de MedDRA y se revisan para posibles significados e importancia. Los acontecimientos adversos se evaluan de acuerdo con el CTCAE del NCI version 4.0. Deben seguirse los sujetos hasta que todos los acontecimientos adversos relacionados con el tratamiento hayan recuperado los valores iniciales o se consideren irreversibles por parte del investigador.

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9. Evaluaciones de la eficacia

La evaluation de la enfermedad con tomografia computada (TC) y/o formation de imagenes por resonancia magnetica (RM), segun sea adecuado, se realiza en la situation inicial y cada 8 semanas hasta progresion de la enfermedad confirmada, en la finalization del seguimiento o hasta que los sujetos se retiren del estudio. Las evaluaciones de la enfermedad en otros puntos de tiempo se realizan si el investigador esta preocupado acerca de la progresion tumoral. Las respuestas tumorales se determinan para poblaciones adecuadas de sujetos, segun se define por RECIST v1.1 (Eisenhauer EA, Eur J Cancer 2009; 45:228-247), asi como por criterios de respuesta inmunorrelacionada, irREClST (Wolchok JD, et al., Clin Cancer Res 2009; 15:7412-7420). Las decisiones de tratamiento relacionadas con el tratamiento de los sujetos se basan exclusivamente en criterios irRECIST. Las exploraciones y mediciones se recogen centralmente para ser revisados por radiologos independientes usando criterios irRECIST y/o RECIST v1.1, en una fecha posterior o en cualquier momento durante el estudio.

El investigador evalua los cambios en las mediciones tumorales y respuestas tumorales usando criterios irRECIST. Los investigadores tambien informan el numero y tamano de lesiones nuevas que aparecen mientras se esta en el estudio. Las evaluaciones de tumor en punto de tiempo se informan en el CRD a base de la evaluacion de los investigadores usando criterios irRECIST. Ademas, las evaluaciones de puntos de tiempo RECIST v1.1 se obtienen de forma programada.

10. Evaluaciones de eficacia exploratoria

Se recogen datos de supervivencia global hasta 3 anos a partir del inicio del tratamiento con farmaco de estudio. Se toman para todos los sujetos muestras de suero para evaluaciones la FC de lirilumab y/o nivolumab, tanto en el aumento escalonado de la dosis como en la expansion de cohortes. Las farmacocineticas de lirilumab se obtienen a partir de la concentration serica frente al tiempo. Los parametros farmacocineticos evaluados incluyen:

Cmax

Tmax

ABC(0-T)

ABC(INF)

Cmin

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Concentracion serica observada maxima Tiempo de concentracion serica observada maxima

Area bajo la curva de tiempo de concentracion en plasma a partir de tiempo cero a tiempo de ultima concentracion cuantificable

Area bajo la curva de tiempo de concentracion en plasma a partir de tiempo cero extrapolada a tiempo infinito

Concentracion serica minima observada

Area bajo la curva de concentracion-tiempo en un intervalo de dosificacion Eliminacion

Volumen de distribution en estado de equilibrio estacionario Semivida

Los valores de los parametros farmacocineticos de sujetos individuales se obtienen por metodos no compartimentales por un programa de analisis farmacocinetico validado. Para los analisis se usan los tiempos reales. Ademas, las concentraciones de fin de infusion y minimas (Cmin) de nivolumab se calculan en visitas especificadas.

Las muestras de suero se analizan para lirilumab y nivolumab por un inmunoensayo validado. Ademas, las muestras se depositan en bancos para el posible analisis farmacocinetico exploratorio mediante un metodo bioanalitico ortogonal (por ejemplo, LC/MS-MS).

11. Evaluaciones de biomarcadores exploratorios

Las farmacodinamicas de lirilumab y nivolumab en combination se evaluan al cuantificar biomarcadores de sangre periferica.

12. Evaluaciones para los pacientes durante el aumento escalonado de la dosis

Evaluacion funcional de linfocitos NK y linfocitos T y ocupacion de KIR: los CMSP de pretratamiento y en tratamiento se usan para investigar la relation entre la ocupacion de KIR (diana de lirilumab) y la funcion de linfocitos NK, medido por CD107a y la expresion de INFy intracelular, usando citometria de flujo en un ensayo de cocultivo con celulas diana sustitutas. Concretamente, se aislan linfocitos NK a partir de CMSP y se cocultivan con celulas diana (positivas para HLA clase I y negativas para HLA clase I) en presencia de exceso de lirilumab, para evaluar la induction de actividad citolitica de NK a partir de celulas positivas para KIR en funcion de la dosis, el tiempo despues de dosis, el grado de ocupacion de KIR y los niveles en circulation de lirilumab (FC). Entender la relacion entre la funcion de linfocitos NK con ocupacion de KIR y los niveles de lirilumab en circulacion es importante para establecer una dosificacion del farmaco optima y/o el momento para evaluar otros biomarcadores. Los CMSP tambien se usan para investigar los efectos de lirilumab y nivolumab en la funcion de los linfocitos T, segun se mide por la expresion de INFy intracelular usando citometria de flujo. Concretamente, se incuban subconjuntos de linfocitos T en placas recubiertas con anti-CD3 para evaluar la activation de linfocitos T en funcion de la dosis, el

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tiempo despues de dosis y los niveles en circulacion de lirilumab y nivolumab (FC). Entender la relacion entre la activacion de linfocitos T y diversas combinaciones de dosis de los niveles de lirilumab y nivolumab es importante para establecer una dosificacion de farmaco optima y/o el momento para evaluar otros biomarcadores. Estos estudios se realizan en los primeros seis sujetos en cada cohorte de dosis.

Inmunofenotipado de subconjuntos de linfocitos T y linfocitos NK: La proportion relativa de subconjuntos de linfocitos se evalua a partir de muestras de sangre periferica. Ademas, los CMSP se usan para caracterizar y cuantificar marcadores especificos de inhibicion y activacion en subconjuntos de linfocitos NK y linfocitos T mediante citometria de flujo policromatica. El inmunofenotipado de linfocitos T reg incluye, pero sin limitation: HLA-DR, CD3, CD4, FoxP3, PD-L1, PD-1, LAG-3, ICOS y CD25. El inmunofenotipado de linfocitos T de memoria/efectores incluye, pero sin limitacion: CCR7, CD45RA, CD27, CD28, CD3, CD4, CD8, Ki67, HLA-DR, PD-L1, PD-1, CTLA4 e ICOS. El inmunofenotipado de linfocitos NK incluye, pero sin limitacion: CD56, CD3, CD16, CD54, CD94, KIR, NKG2D, NKp30, NKp46, IL-21R, Ki67, CD25 y granzima B.

Analisis de modulation inmunitaria de factores solubles: se evaluan los niveles sericos pretratamiento y en tratamiento de quimiocinas, citocinas y otros mediadores inmunitarios por tecnicas que incluyen, pero sin limitacion, ELISA o ensayos multiplex. Los analitos incluyen marcadores de activacion inmunitaria, modulacion o inflamacion, tales como IFN-y, ligandos NKG2D solubles (es decir, MICA soluble) y sCD25.

Expresion de KIR en linfocitos NK: se determina una enumeration absoluta de celulas que expresan KIR-positivas a partir de muestras de sangre periferica recogidas pretratamiento y en tratamiento. Se usa citometria de flujo para evaluar no solo el porcentaje de celulas que expresan positivas para KIR (KIR2DL1/2/3) sino tambien para cuantificar la cantidad de expresion de KIR.

13. Evaluaciones para pacientes durante expansion de cohorte

Se obtienen muestras de sangre de todos los sujetos en la expansion de cohorte pretratamiento para aislar ADN para la determination de los genotipos KIR y HLA. Se usa reaction en cadena de la polimerasa (PCR) para definir los genotipos que luego se correlacionaran con un resultado clinico despues de lirilumab en combination con nivolumab.

14. Evaluaciones para sujetos sometidos a biopsias de tumor

Se obtiene sangre de todos los sujetos que consienten biopsias de tumor para obtener parejas de tumor/normal. Se obtienen biopsias de tumor pretratamiento y en tratamiento (al final de la semana 16) en un minimo de diez sujetos en la expansion de cohortes de melanoma. Si por cualquier razon un sujeto no puede someterse a la biopsia en tratamiento, la primera muestra no se incluye como parte del requisito de diez sujetos con muestras pretratamiento y en tratamiento emparejadas. Se les ofrece a los sujetos la oportunidad de someterse a biopsia postratamiento, cuando sea posible. A todos los demas sujetos tambien se les ofrece la oportunidad de someterse a biopsias de tumor. Se usan muestras tumorales para evaluar poblaciones de linfocitos infiltrantes de tumores especificos (linfocitos NK, linfocitos Treg, CTL) presentes antes de, durante y posiblemente despues de la terapia para evaluar el posible mecanismo de action y como un posible biomarcador de respuesta. La expresion de KIR de linfocitos asociados a tumor tambien se explora en muestras de ensayo tumorales. Ademas, se evaluan proteinas expresadas en tumor (es decir, PD-L1 y HLA clase I) por IHQ para determinar posibles asociaciones con respuesta clinica o efectos farmacodinamicos para la combinacion de lirilumab y nivolumab. Si hay una cantidad recogida aceptable de tejido, se crioconservan cortes de biopsias de tumor recogidas en pretratamiento y en tratamiento para el posible analisis futuro de expresion genica. Los genes de interes incluyen pero sin limitacion a PD-1, PD-L1, KIR y LAG-3. Se requiere la recogida simultanea de muestras de sangre periferica/suero y tejido tumoral (aunque limitadas en numero de biopsias de tumor) del mismo sujeto, para ayudar a entender y correlacionar los acontecimientos farmacodinamicos que resultan del bloqueo combinado de KIR y PD-1 e informar sobre posibles mecanismos o resultado clinico.

Un minimo de 10 sujetos en la cohorte de expansion de melanoma deben tener al menos una lesion lo suficientemente grande como para someterse a biopsias repetidas (biopsias pretratamiento, en tratamiento y posiblemente postratamiento) a traves de aguja gruesa (tamano minimo de calibre 16) o tener al menos dos lesiones distintas aptas para biopsias de aguja gruesa o por excision. Estas lesiones no deben ser las unicas lesiones diana o sitios del sujeto que hayan recibido radioterapia anterior. A los sujetos en todas las demas cohortes de expansion se les da la oportunidad de someterse a biopsias si se consideran en riesgo clinico aceptable. La longitud de la aguja gruesa es de mas de 5 mm. Se deben tomar al menos dos biopsias con aguja gruesa en cada punto de tiempo; pero la recogida de pociones adicionales se sugiere fuertemente, si el investigador lo considera clinicamente seguro. Tambien son aceptables las biopsias en sacabocados y por excision. El volumen tumoral minimo ideal es de 150 mm3. Se sugiere fuertemente una confirmation patologica en el momento de la biopsia del tumor para confirmar una recogida de tejido y calidad de biopsia adecuadas. Todas las biopsias recogidas deben tener un informe de patologia detallado presentado con la muestra de ensayo. En el momento del inicio del estudio se proporcionan instrucciones detalladas sobre la obtencion, procesamiento, etiquetado, manipulation, almacenamiento y transporte de estas muestras de ensayo en un manual de procedimientos separado. A los sujetos cuya biopsia de exploration

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produce una cantidad o calidad de tejido inadecuada se les permite continuar en el estudio. Estos sujetos se reemplazan para obtener 10 sujetos con biopsias pretratamiento. Si los sujetos tienen una respuesta al tratamiento, no son posibles biopsias en tratamiento y postratamiento.

15. Evaluaciones de inmunogenicidad

Se extraen muestras de suero para el analisis del desarrollo de AAF junto con el analisis de las concentraciones sericas de lirilumab y nivolumab, y se recogen de todos los sujetos predosis en los dias 1, 15 y 29 del Ciclo 1, dia 29 del Ciclo 2, dia 1 del Ciclo 3, fin del tratamiento, y todas las 3 visitas de seguimiento clinico. Estas muestras de suero se analizan para AAF mediante un inmunoensayo validado. Ademas, se guardan en bancos muestras de lirilumab y nivolumab para el posible analisis de inmunogenicidad exploratorio mediante un metodo bioanalitico ortogonal (por ejemplo, analisis de inmunocomplejos inmunitarios farmaco-AAF).

16. Acontecimientos adversos

Un acontecimiento adverso (AA) se define como cualquier nuevo suceso medico desafortunado o empeoramiento de una afeccion medica preexistente en un sujeto de investigacion clinica a quien se le administro un producto bajo investigacion (medicamento) y no necesariamente tiene una relacion causal con este tratamiento. Un Aa puede, por lo tanto, ser cualquier signo desfavorable y accidental (tal como un hallazgo anomalo de laboratorio), sintoma o enfermedad temporalmente asociada con el uso del producto en investigacion, se considere o no relacionado con el producto en investigacion.

Un medico determina la relacion causal con el farmaco de estudio y debe usarse para evaluar todos los acontecimientos adversos (AA). La relacion casual puede ser una de las siguientes:

Relacionada: Hay una relacion causal razonable entre la administracion de farmaco de estudio y el AA.

No relacionada: No hay una relacion causal razonable entre la administracion del farmaco de estudio y el AA.

La expresion “relacion causal razonable" significa que hay evidencia que sugiere una relacion causal.

Los acontecimientos adversos pueden informarse espontaneamente u obtenidos durante un interrogatorio no pautado, examen o evaluacion de un sujeto. (Para evitar sesgos en la presentacion de informes, los sujetos no deben interrogarse con respecto a la aparicion especifica de uno o mas AA).

Un acontecimiento adverso grave (AAG) es cualquier suceso medico adverso que en cualquier dosis:

• de como resultado el fallecimiento

• sea peligroso para la vida (definido como un acontecimiento en el cual el sujeto estaba en riesgo de fallecimiento en el momento del acontecimiento; no se refiere a un acontecimiento que hipoteticamente podria haber causado el fallecimiento si hubiera sido mas severo)

• requiera hospitalizacion del paciente o provoque prolongacion de la hospitalizacion existente

• de como resultado discapacidad/incapacidad persistente o significativa

• sea una anomalia congenita/defecto de nacimiento

• sea un acontecimiento medico importante (definido como un acontecimiento (o acontecimientos) medico que no sea inmediatamente peligroso para la vida o resulte en fallecimiento u hospitalizacion pero, a base del juicio medico y cientifico adecuado, ponga en riesgo al sujeto o requiera intervencion [por ejemplo, medica, quirurgica] para prevenir uno de los demas resultados graves enumerados en la definicion anterior). Los ejemplos de tales acontecimientos incluyen, pero sin limitacion, el tratamiento intensivo en un servicio de urgencias o domiciliario para broncoespasmo alergico; discrasias hematologicas o convulsiones que no resulten en hospitalizacion. Un posible dano hepatico inducido por farmaco (DHIF) tambien se considera un acontecimiento medico importante.

La transmision sospechosa de un agente infeccioso (por ejemplo, patogeno o no patogeno) a traves de un farmaco de estudio es un AAG. Aunque el embarazo, la sobredosis, el cancer y posible el dano hepatico inducido por farmaco (DHIF) no siempre son graves por definicion normativa, estos acontecimientos se manejan como AAG. Cualquier componente de un criterio valoracion del estudio que se considere relacionado con la terapia de estudio (por ejemplo, el fallecimiento es un criterio de valoracion, si el fallecimiento se produjo debido a anafilaxis, se informa anafilaxis) debe informarse como AAG.

Las hospitalizaciones posteriores no se consideran AAG:

- una visita al servicio de urgencias u otro servicio de hospital < 24 horas, que no da como resultado admision (a menos que se considere un acontecimiento medico importante o peligroso para la vida)

- cirugia programada, planeada antes de firmar el consentimiento

- admisiones segun protocolo para un procedimiento medico/quirurgico planeado

- evaluacion de salud rutinaria que requiere admision para valoracion inicial/analisis de tendencias del estado de

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salud (por ejemplo, colonoscopia de rutina)

- admision medica/quirurgica que no sea remediar un estado de salud deficiente y planeada antes de ingresar en el estudio. En estos casos se requiere documentation adecuada

- admision encontrada para otra circunstancia de vida que no que no tiene relation con el estado de salud y no requiera intervention medica/quirurgica (por ejemplo, falta de vivienda, insolvencia economica, descanso del cuidador, circunstancias familiares, administrates).

Despues del consentimiento escrito del sujeto para participar en el estudio, se recogen todos los AAG, ya sea relacionados o no relacionados con el farmaco de estudio, incluyendo aquellos que se piense esten asociados con procedimientos especificos de protocolo. Se recogen todos los AaG que se presentan durante el periodo cribado y dentro de los 100 dias a partir de la interruption de la dosificacion. Si es aplicable, se recogen los AAG que se refieren a cualquier procedimiento posterior especificado por protocolo (por ejemplo, una biopsia de piel de seguimiento). El investigador debe informar cualquier AAG que se presente despues de estos periodos de tiempo y que se considere que este relacionado con el farmaco de estudio o procedimiento especificado por protocolo. Debe rellenarse un informe de AAG para cualquier acontecimiento en donde exista duda con respecto a su estado o gravedad. Si el investigador cree que un AAG no esta relacionado con el farmaco de estudio, pero esta potencialmente relacionado con las condiciones del estudio (tales como el retiro de la terapia previa, o una complication de un procedimiento de estudio), la relacion debe especificarse en la section descriptiva del Formulario de Informe de los aAG). Los AAG, ya sea relacionados o no relacionados con el farmaco de estudio y los embarazos se comunican dentro de las 24 horas.

La recogida de information de AA no graves debe empezar en el inicio del farmaco de estudio. Information de AA no graves tambien se debe recoger desde el inicio de un periodo de rodaje con placebo u otro periodo de observation destinado a establecer un estado de punto de partida para los sujetos.

Los AA no graves deben seguirse hasta la resolution o estabilizacion, o informarse como AAG si se vuelven graves. Tambien se requiere seguimiento de los AA no graves que provoquen interrupcion o suspension del farmaco de estudio y para los que esten presentes al final del tratamiento de estudio, segun sea adecuado. Todos los AA no graves identificados se registran y describen en la pagina de AA no graves del CRD (en papel o electronico). La ejecucion de los CRD complementarios se solicita para los AA y/o anomalias de laboratorio que se informen/identifiquen durante el transcurso del estudio.

17. Consideraciones estadisticas

Aumento escalonado de la dosis: Ya que este es un ensayo de aumento escalonado de dosis de Fase I, el tamano de la muestra en cada dosis no puede determinarse exactamente, dado que depende del numero de toxicidades observadas. Se tratan aproximadamente entre 6 y 9 sujetos durante el aumento escalonado de la dosis en cada nivel de dosis, y se dosifican hasta 12 sujetos a niveles de dosis seleccionados. Usando un diseno 6+3 se aseguran 6 sujetos en cada dosis para evaluar una senal sobre los posibles efectos farmacodinamicos de los biomarcadores estudiados.

Expansion de cohorte: durante la expansion de cohorte, se incorporan aproximadamente 16 sujetos en cada uno de los 6 tipos de tumor y se tratan a la DMT, DMA anteriormente determinadas, o a una dosis alternativa. En una cohorte de expansion, si se observan 2 (12,5 %), 3 (18,8 %) o 4 (25 %) respuestas, entonces los limites inferiores de los intervalos de confianza unilaterales del 90 % para la tasa de respuesta objetiva son del 3,4 %, 7,1 % y 11,4 %, respectivamente. Ademas, se necesitaria observar 4 respuestas en 16 sujetos de forma que el intervalo de confianza del 80 % este completamente por arriba del 11 % para la tasa de respuesta. Estos calculos estan basados en el metodo de Clopper-Pearson para intervalos de confianza exactos. Ademas, si la tasa de respuesta objetiva (TRO) real en una cohorte de tipo de tumor/expansion es del 15 %, entonces con 16 pacientes en cada cohorte hay un 72 % de probabilidad de observar al menos 2 respuestas, y un 44 % de probabilidad de observar al menos 3 respuestas, y hay un 28 % de probabilidad de observar 0 o 1 respuesta (tasa falsa negativa). Si la TRO verdadera en un tipo de tumor es del 5 % en lugar del 15 %, entonces hay un 19 % y un 4 % de probabilidad, respectivamente, de que haya al menos 2 o al menos 3 respuestas en 16 sujetos (tasa falsa positiva).

Poblaciones para analisis:

• Conjunto de datos de todos los inscritos: sujetos que firmaron consentimiento informado firmado y registrados en el estudio.

• Conjunto de datos de todos los tratados: todos los sujetos que recibieron al menos una dosis de cualquier farmaco de estudio.

• Conjunto de datos evaluables por la respuesta: todos los sujetos tratados que reciben cualquier farmaco de estudio, tienen una evaluation de tumor de valoracion inicial con enfermedad medible y uno de los siguientes:

- al menos una evaluacion de tumor en tratamiento evaluable,

- progresion clinica, o

- fallecimiento antes de la primera evaluacion de tumor en tratamiento.

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• Conjunto de datos farmacocineticos de lirilumab: todos los sujetos que reciben al menos una dosis de lirilumab y tienen datos de concentration en suero adecuados para la FC de lirilumab.

• Conjunto de datos farmacocineticos de nivolumab: todos los sujetos que reciben al menos una dosis de nivolumab y tienen FC de nivolumab adecuada.

• Conjunto de datos de inmunogenicidad de lirilumab: todos los sujetos que reciben al menos una dosis de lirilumab y tienen al menos una muestra AAF disponible.

• Conjunto de datos de inmunogenicidad de nivolumab: todos los sujetos que reciben al menos una dosis de nivolumab y tienen por lo menos una muestra de AAF disponible.

• Conjunto de datos de biomarcadores: todos los sujetos tratados que tienen datos de biomarcadores disponibles.

Definiciones de Criterio: La seguridad es el criterio de valoracion principal en este estudio Fase I. Todos los sujetos que reciben al menos una dosis de lirilumab o nivolumab se evaluan para seguridad segun se mide por la aparicion de acontecimientos adversos, acontecimientos adversos graves, fallecimientos y anomalias de laboratorio, evaluados durante el tratamiento y durante 100 dias en seguimiento.

El objetivo principal (evaluar la seguridad y tolerabilidad de lirilumab proporcionado en combination con nivolumab y para identificar toxicidades limitativas de la dosis (las TLD) y la dosis maxima tolerada (DMT) de la combinacion) se mide por los siguientes criterios de valoracion principales.

a) Incidencia de acontecimientos adversos: todos los acontecimientos adversos no graves se recogen a partir del dia 1 hasta 100 dias despues de la ultima dosis del sujeto del farmaco de estudio o hasta que interrumpan el estudio. Todos los acontecimientos adversos graves se recogen a partir de la fecha del consentimiento escrito del sujeto hasta 100 dias despues de interrumpir la dosificacion o hasta que interrumpan el estudio.

b) Incidencia de anomalias en pruebas de laboratorio clinico, incluyendo hematologia y bioquimica serica, y anomalias en las pruebas tiroideas, evaluadas en puntos de tiempo concretos.

Las evaluaciones son a base de los informes de acontecimientos adversos y los resultados de mediciones de las constantes vitales, electrocardiogramas (ECG), examenes fisicos, estudios por formation de imagenes y pruebas de laboratorio clinico. Los acontecimientos adversos se clasifican usando la version mas actual del Medical Dictionary for Regulatory Activities (MedDRA); tanto los AA como las pruebas de laboratorio se clasifican usando Criterios Terminologicos Comunes para Acontecimientos Adversos (CTCAE, siglas del ingles Common Terminology Criteria for Adverse Events) v4 del Instituto Nacional del Cancer (NCI, siglas del ingles National Cancer Institute). Todos los sujetos que reciben terapia con farmaco de estudio se evaluan para la seguridad segun se mide por la tasa de acontecimientos adversos (AA) y acontecimientos adversos graves (AAG), y se evaluan durante el tratamiento y durante 100 dias de seguimiento.

El objetivo secundario de evaluar la actividad antitumoral preliminar es a base de criterios de valoracion descritos usando irRECIST (Wolchok JD, et. al., Clin Cancer Res 2009; 15:7412-7420) y RECIST v1.1 (Eisenhauer EA, Eur J Cancer 2009; 45:228-247). A efectos del abordaje terapeutico de pacientes, la toma de decisiones clinicas es a base de irRECIST exclusivamente. Por lo tanto, las evaluaciones de la respuesta tumoral en puntos de tiempo se registran en la CRD a base de las evaluaciones de los investigadores usando criterios de irRECIST. El analisis estadistico y los informes estan basados en ambos criterios.

La mejor respuesta global (MRG) es la mejor designation de respuesta registrada desde el inicio del tratamiento de estudio hasta el final del tratamiento tomando en cuenta cualquier necesidad de confirmation, con base en criterios RECIST v1.1 o irRECIST. Las determinaciones de RC o RP incluidas en la evaluation MRG se confirman mediante una segunda evaluacion (confirmatoria) consecutiva que cumple con los criterios para la respuesta que se realiza al menos 4 semanas despues de que se cumplen los criterios para respuesta. Lo anterior se determina a base de mediciones de tumor que se producen cada 8 dias durante el periodo de tratamiento (dia 1 del Ciclo hasta el dia 56 del Ciclo 12), y una vez durante el periodo de Seguimiento Clinico.

Los criterios de valoracion del nivel de estudio usado para evaluar este objetivo se definen como sigue:

Tasa de respuesta objetiva (TRO) se define como el numero total de sujetos cuya MRG es ya sea RC o RP dividido entre el numero total de sujetos en la poblacion de interes.

Duration de la Respuesta (DDR), calculada solo para sujetos con una MRG de CR o PR, se define como el numero de dias entre la fecha de primera respuesta y la fecha posterior de progresion de la enfermedad documentada objetivamente a base de los criterios (RECIST v1.1 o irRECIST) o fallecimiento, lo que ocurra primero. Para los sujetos que sigan vivos y no hayan progresado o recibido terapia posterior, la duracion de la respuesta se censura en la fecha de la ultima evaluacion tumoral. Los sujetos que reciben terapia posterior se censuran al inicio de la terapia posterior.

Tasa de Supervivencia Sin Progresion (TSSP) se define como la probabilidad de que un sujeto se mantenga sin progresion y sobreviva hasta 24 semanas. La probabilidad se calcula a base del numero de dias entre la primera dosis de farmaco de estudio y enfermedad progresiva o fallecimiento, segun se defina por cada criterio. Para los

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sujetos que sigan vivos y no hayan progresado, la SSP se censura en la fecha de la ultima evaluacion tumoral. Lo anterior se calcula a base de las mediciones tumorales que se producen cada 8 semanas durante el tratamiento y en puntos de tiempo planeados, durante el periodo de Seguimiento Clmico.

Farmacocinetica (FC): Concentration maxima de lirilumab Cmax, (|jg/ml), tiempo hasta la concentration maxima Tmax (h), Area bajo la curva ABCTAU (jg.h/ml), Area bajo la curva ABCinf (jg.h/ml), Elimination (L^a), Volumen de distribution (Veee), semivida (t1/2) y concentracion minima Cmin (jg/ml), se evaluan usando analisis no compartimental en todos los sujetos de estudio. Ademas, las concentraciones de fin de infusion y minima (Cmin) de nivolumab se calculan en visita especificada. Inmunogenicidad: La presencia de anticuerpos antifarmaco especificos frente a lirilumab y nivolumab se determina a partir de las mediciones en las semanas 1, 3, 5, 13, 17, fin de tratamiento, y en las 3 visitas de seguimiento clinico.

Biomarcadores: Mediciones de expresion de los TIL, PD-L1 y HLA clase I usando inmunohistoquimica en biopsias de tumor obligatorias a partir de un minimo de diez sujetos de expansion de cohorte de melanoma, incluyendo el valor inicial y cambios a partir de resultados del valor inicial.

Criterio (o criterios) exploratorio: Los biomarcadores de sangre periferica incluiran medidas de los genotipos de KIR y HLA, ocupacion de KIR, ensayos funcionales de linfocitos NK y T, factores solubles, expresion de KIR en linfocitos NK. La supervivencia global (SG) es un criterio de valoracion de eficacia exploratorio.

18. Analisis

Caracteristicas Demograficas y de la Medida Inicial: Se tabulan las distribuciones de la frecuencia de genero y raza. Se recogen resumenes estadisticos de edad, peso corporal y altura, y se obtiene el tadice de Masa Corporal (IMC).

Analisis de Eficacia: La mejor respuesta global individual (MRG), la duration de la respuesta y SSP se enumeran usando criterios RECIST v1.1 e irRECIST. Los resultados de MRG se tabulan por tipo de enfermedad y dosis. La tasa de respuesta objetiva (TRO) y la tasa SSP (por ejemplo, a las 24 semanas), y el intervalo de confianza correspondiente, se proporcionan por tipo de tumor y tratamiento. La duracion de la respuesta, la duracion de enfermedad estable y la SSP se estiman mediante la metodologia de Kaplan-Meier por tipo de enfermedad, dependiendo de la disponibilidad de datos. Las tasas se SSP a las 24 semanas se estiman de forma similar, a base de la metodologia K-M. La TRO, la duracion de la respuesta y el analisis de la SSP incluiran sujetos en la fase de expansion de cohorte y sujetos en aumento gradual de la dosis que coincidan con los de la expansion de cohorte por tipo de enfermedad y tratamiento. Los cambios individuales en la carga tumoral a lo largo del tiempo se presentan graficamente dentro de un tipo de enfermedad. La supervivencia global de referencia se evalua como parte del analisis de la eficacia exploratorio, mediante graficos de Kaplan-Meier y las medianas para cada tipo de tumor.

Analisis de Seguridad: Todos los acontecimientos adversos registrados se enumeran y tabulan por clase de organo, termino preferente y tratamiento. Las constantes vitales y resultados de las pruebas de laboratorio clinico se enumeran y resumen por tratamiento. Cualquier hallazgo significativo del examen fisico y los resultados de laboratorio clinico enumeran. Las lecturas de ECG se evaluan por parte del investigador y las anomalias, si estan presentes, son enumeran.

Analisis de Farmacocinetica: Los resumenes estadisticos se tabulan para los parametros farmacocineticos de lirilumab por dosis y dia/semana de estudio. Para describir la dependencia de la dosis de anti-KIR, se proporcionan graficas de dispersion de Cmax y ABC(TAU) frente a la dosis para cada dia medido. La proporcionalidad de dosis de lirilumab, cuando se coadministra con nivolumab, se evalua a base de un modelo de potencia. La concentracion de fin de infusion y minima (Cmin) de nivolumab se tabulan por resumenes estadisticos. Estos datos tambien se agrupan con otros conjuntos de datos para el analisis FC de la poblacion, que son parte de un informe separado.

Analisis de biomarcadores: El efecto farmacodinamico de lirilumab sobre los linfocitos infiltrantes de tumor (los TIL) y expresion de marcadores tumorales, incluyendo PD-L1 y HLA clase I, se evaluan por resumenes estadisticos, y se investigan graficamente para explorar patrones de cambio, por ejemplo, con exposition al farmaco, para sujetos en la cohorte de expansion de melanoma. Ademas, la correlation de los cambios de TIL y la expresion de marcadores tumorales con medidas de marcadores en sangre periferica se exploran graficamente o mediante metodos estadisticos adecuados a base de la disponibilidad de datos, para evaluar asociaciones.

Analisis de Biomarcadores Exploratorios: El efecto farmacodinamico de lirilumab en la ocupacion de KIR y la combination de nivolumab proporcionado con lirilumab sobre los marcadores en sangre periferica y las proteinas sericas se evaluan por resumenes estadisticos y se investigan graficamente para explorar patrones de cambio a lo largo del tiempo, y como los patrones difieren entre niveles de dosis y exposicion. Si hay una indication significativa en el patron a lo largo del tiempo, se realiza analisis adicional (por ejemplo, por modelo mixto lineal) para caracterizar la relation. Los efectos farmacodinamicos sobre los marcadores de tumor en cohortes que no son melanoma se evaluan de forma similar, dependiendo de la disponibilidad de datos. Tambien se exploran graficamente las asociaciones entre medidas de biomarcadores de sangre periferica y biopsia de tumor, y resultados clinicos, y se evaluan adicionalmente segun sea necesario mediante metodos tales como, pero sin limitation, regresion logistica, y se caracterizan mediante estadisticas adecuadas.

Otros analisis: Se proporciona un listado de todos los datos de inmunogenicidad disponibles. Ademas, se proporciona un listado de datos de inmunogenicidad de los sujetos con al menos un anticuerpo antifarmaco positivo (AAF) en cualquier punto de tiempo por tratamiento para cada analito. Se proporcionan la frecuencia de sujetos con al menos una evaluacion de AAF positiva, y la frecuencia de sujetos que desarrollan AAF despues de una 5 evaluacion de medida inicial negativa. Para examinar la relacion potencial entre inmunogenicidad y seguridad, la frecuencia y tipo de los AA de interes especial se examinan mediante estado de inmunogenicidad global. Se exploran las asociaciones entre concentraciones mmimas de lirilumab (o nivolumab) y las evaluaciones de AAF correspondientes.

10 Analisis provisionales: Los datos que emergen de este estudio son necesarios para las decisiones oportunas acerca de los ajustes de los procedimientos en partes posteriores del estudio. Por lo tanto, los datos se revisan antes del cierre final de la base de datos de estudio. Ademas se realizan analisis provisionales adicionales para fines administrativos o publicaciones. Los analisis solo consisten en listados, resumenes y graficas de los datos disponibles. No se realizan inferencias formales que requieran un ajuste al nivel de significacion estadfstica. Los 15 analisis de eficacia a base de datos provisionales usan la respuesta evaluable o todas las poblaciones tratadas dependiendo del fin del analisis.

RESUMEN DE SECUENCIAS

SEQ ID NO:

1

SECUENCIA

2

Secuencia de Aminoacidos de la Cadena Pesada Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab)

(CDR subrayadas)

QVQLVQSGAE: VKKPGSSVKV SCKASGGTFS FYAISWVRQA PGQGLEWMGG

FIPIFGAANY: AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSDD TAVYYCARIP

SGSYYYDYDM: DVWGQGTTVT VSSASTKGPS VFPLAPCSRS TSESTAALGC

LVKDYFPEPV: TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS VVTVPSSSLG

TKTYTCNVDH: KPSNTKVDKR VESKYGPPCP PCPAPEFLGG PSVFLFPPKP

KDTLMISRTP: EVTCVVVDVS QEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFN

STYRVVSVLT: VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ

VYTLPPSQEE: MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV

LDSDGSFFLY: SRLTVDKSRW QEGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSLGK

Secuencia de Aminoacidos de la Cadena Ligera Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab)

(CDR subrayadas)

EIVLTQSPVT LSLSPGERAT LSCRASQSVS ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSSPVTKSFN RGEC

3

SYLAWYQQKP

EDFAVYYCQQ

SVVCLLNNFY

LSKADYEKHK

GQAPRLLIYD RSNWMYTFGQ

PREAKVQWKV

VYACEVTHQG

Secuencia de Aminoacidos de la Region Variable de la Cadena Pesada (VH)

Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab) - (SEQ ID NO:17 del documento WO 2006/003179)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSFYAISWVRQAPGQGLEWMGGFIPIF

GAANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSDDTAVYYCARIPSGSYYYDYDMD

VWGQGTTVTVSS

Secuencia de Nucleotidos de la Region Variable de la Cadena Pesada (VH)

Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab) - (SEQ ID NO:18 del documento WO 2006/003179)

caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc

ggtgaaggtc tcctgcaagg cttctggagg caccttcagt ttctatgcta

tcagctgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg

ttcatcccta tctttggtgc agcaaactac gcacagaagt tccagggcag

agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac atggaactga

gcagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaatccct

agtgggagct actactacga ctacgatatg gacgtctggg gccaagggac

cacggtcacc gtctcctca

Secuencia de Aminoacidos de la Region Variable de la Cadena Ligera (VL)

Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab) - (SEQ ID NO:15 del documento WO 2006/003179)

EIVLTQSPVTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD

ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWMYTFGQ GTKLEIKRT

Secuencia de Nucleotidos de la Region Variable de la Cadena Ligera (VL)

Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab) - (SEQ ID NO:16 del documento WO 2006/003179)

gaaattgtgt tgacacagtc tccagtcacc ctgtctttgt ctccagggga

aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag

cctggtacca acagaaacct ggccaggctc ccaggctcct catctatgat

gcatccaaca gggccactgg catcccagcc aggttcagtg gcagtgggtc

tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct gaagattttg

cagtttatta ttgtcagcag cgtagcaact ggatgtacac ttttggccag

gggaccaagc tggagatcaa acgaact

Secuencia de Aminoacidos de la CDR1 de la Cadena Pesada Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab) - (de la Figura 15 del documento WO 2006/003179) (corresponde a los restos de aminoacido 31-35 de SEQ ID NO: 1)

imagen1

Secuencia de Aminoacidos de la CDR2 de la Cadena Pesada

Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab) - (de la Figura 15 del documento WO 2006/003179)

(corresponde a los restos de aminoacido 50-65 de SEQ ID NO: 1)

GFIPIFGAANYAQKFQ

Secuencia de Aminoacidos de la CDR3 de la Cadena Pesada

(corresponde a los restos de aminoacido 99-112 de SEQ ID NO: 1)

IPSGSYYYDYDMDV

10

Secuencia de Aminoacidos de la CDR1 de la Cadena Ligera

Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab) - (de la Figura 15 del documento WO 2006/003179) (corresponde a los restos de aminoacido 24-34 de SEQ ID NO: 3)

RASQSVSSYLA

11

Secuencia de Aminoacidos de la CDR2 de la Cadena Ligera

Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab) - (de la Figura 15 del documento WO 2006/003179) (corresponde a residuos de aminoacido 50-56 de SEQ ID NO: 3)

DASNRAT

Secuencia de Aminoacidos de la CDR3 de la Cadena Ligera

Acm Anti-KIR (IPH2102 / lirilumab) - (de la Figura 15 del documento WO 2006/003179) (corresponde a los restos de aminoacido 89-97 de SEQ ID NO: 3)

QQRSNWMYT

5

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: Dominio Extracelular de KIR2DL1

13: (SEQ ID NO: 23 del documento WO 2006/003179) HEGVHRKPSLLAHPGXLVKSEETVILQCWSDVMFEHFLLHREGMFNDT LRLIGEHHDGVSKANFSISRMTQDLAGTYRCYGSVTHSPYQVSAPSDPLD IVIIGLYEKPSLSAQXGPTVLAGENVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHER RLPAGPKVNGTFQADFPLGPATHGGTYRCFGSFHDSPYEWSKSSDPLLVS VTGNPSNSWPSPTEPSSKTGNPRHLH

: Dominio Extracelular de KIR2DL2

14: (SEQ ID NO:24 del documento WO 2006/003179) HEGVHRKPSLLAHPGRLVKSEETVILQCWSDVRFEHFLLHREGKFKDTLH LIGEHHDGVSKANFSIGPMMQDLAGTYRCYGSVTHSPYQLSAPSDPLDIV ITGLYEKPSLSAQPGPTVLAGESVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHECRF SAGPKVNGTFQADFPLGPATHGGTYRCFGSFRDSPYEWSNSSDPLLVSVI GNPSNSWPSPTEPSSKTGNPRHLH

15: Dominio Extracelular de KIR2DL3

: (SEQ ID NO:25 del documento WO 2006/003179) HEGVHRKPSLLAHPGPLVKSEETVILQCWSDVRFQHFLLHREGKFKDTLH LIGEHHDGVSKANFSIGPMMQDLAGTYRCYGSVTHSPYQLSAPSDPLDIV ITGLYEKPSLSAQPGPTVLAGESVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHERRF SAGPKVNGTFQADFPLGPATHGGTYRCFGSFRDSPYEWSNSSDPLLVSVT GNPSNSWPSPTEPSSETGNPRHLH

: Dominio Extracelular de KIR2DS4

16: (SEQ ID NO:38 del documento WO 2006/003179) QEGVHRKPSFLALPGHLVKSEETVILQCWSDVMFEHFLLHREGKFNNTLH LIGEHHDGVSKANFSIGPMMPVLAGTYRCYGSVPHSPYQLSAPSDPLDMV

17: Secuencia de Aminoacidos de la Cadena Pesada Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168)

: (region variable subrayada; region constante en negritas) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGL

EWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDT

AVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAA LGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWT VP S SSLGTKTYTCNVDHKP SNTKVDKRVE SKYGPP CPPCPAPEFLG

: GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKG LPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNV F S C SVMHEALHNHYTQKS LS LS LGK

18: Secuencia de Aminoacidos de la Cadena Ligera Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168)

: (region variable subrayada; region constante en negritas) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLI

YDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPR

TFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHK VYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Secuencia de Aminoacidos de la Region Variable de la Cadena Pesada (VH)

Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168)

(SEQ ID NO:4 del documento WO 2006/121168)

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAV IWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATND DYWGQGTLVTVSS__________________________________________

20

Secuencia de Nucleotidos de la Region Variable de la Cadena Pesada (VH) Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168)

(SEQ ID NO:60 del documento WO 2006/121168)

cag: gtg cag ctg gtg gag tct ggg gga ggc gtg gtc cag cct

ggg: agg tcc ctg aga etc gac tgt aaa geg tct gga ate acc

ttc: agt aac tct ggc atg cac tgg gtc ege cag get cca ggc

aag: ggg ctg gag tgg gtg gca gtt att tgg tat gat gga agt

aaa: aga tac tat gca gac tcc gtg aag ggc ega ttc acc ate

tcc: aga gac aat tcc aag aac aeg ctg ttt ctg caa atg aac

age: ctg aga gcc gag gac aeg get gtg tat tac tgt geg aca

aac tea: gac gac tac tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc gtc tcc

21

Secuencia de Aminoacidos de la Region Variable de la Cadena Ligera (VL)

Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168)

(SEQ ID NO:11 del documento WO 2006/121168)

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQ GTKVEIK

22

Secuencia de Nucleotidos de la Region Variable de la Cadena Ligera (VL)

Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168)

(SEQ ID NO: 67 del documento WO 2006/121168)

gaa att gtg ttg aca cag tct cca gcc acc ctg tct ttg cca ggg gaa aga gcc acc etc tcc tgc agg gcc agt cag

tct

agt

gtt

get

ggc

ttc

gtt

ggc

agt

ccc

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act

tat

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agt

agg

cca

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tac

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tac

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gcc

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tgt

acc

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etc

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ate

cag

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gcc

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ttc

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cag

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agt

age

agt

gaa

tac

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eta

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agt

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cag

tcc

ggg

cct

tgg

aaa

aac

tct

gaa

cct

agg

ggg

gat

egg

ggc cag gcc act aca gac ttt gca aeg ttc

23

Secuencia de Aminoacidos de la CDR1 de la Cadena Pesada Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168) (SEQ ID NO:18 de WO 2006/121168)

NSGMH

24

Secuencia de Aminoacidos de la CDR2 de la Cadena Pesada Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento 2006/121168) (SEQ ID NO: 25 del documento WO 2006/121168) VIWYDGSKRYYADSVKG

25

Secuencia de Aminoacidos de la CDR3 de la Cadena Pesada Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168) (SEQ ID NO:32 del documento WO 2006/121168)

NDDY

Secuencia de Aminoacidos de la CDR1 de la Cadena Ligera

Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en WO el documento 2006/121168)

(SEQ ID NO: 39 del documento WO 2006/121168)

RASQSVSSYLA

Secuencia de Aminoacidos de la CDR2 de la Cadena Ligera

Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168)

(SEQ ID NO:46 del documento WO 2006/121168)

DASNRAT

28

Secuencia de Aminoacidos de la CDR3 de la Cadena Ligera

Acm Anti-PD-1 (BMS936558; 5C4 en el documento WO 2006/121168)

(SEQ ID NO:53 del documento WO 2006/121168)

QQSSNWPRT

29

Secuencia de PD-1 completa (N.° de Referencia de GenBank: U64863)

agtttccctt ccgctcacct ccgcctgagc agtggagaag gcggcactct

ggtggggctg ctccaggcat gcagatccca caggcgccct ggccagtcgt ctgggcggtg ctacaactgg gctggcggcc aggatggttc ttagactccc cagacaggcc ctggaacccc cccaccttct tcccagccct gctcgtggtg

accgaagggg acaacgccac cttcacctgc agcttctcca acacatcgga gagcttcgtg ctaaactggt accgcatgag ccccagcaac cagacggaca agctggccgc cttccccgag gaccgcagcc agcccggcca ggactgccgc ttccgtgtca cacaactgcc caacgggcgt gacttccaca tgagcgtggt cagggcccgg cgcaatgaca gcggcaccta cctctgtggg gccatctccc tggcccccaa ggcgcagatc aaagagagcc tgcgggcaga gctcagggtg acagagagaa gggcagaagt gcccacagcc caccccagcc cctcacccag gccagccggc cagttccaaa ccctggtggt tggtgtcgtg ggcggcctgc tgggcagcct ggtgctgcta gtctgggtcc tggccgtcat ctgctcccgg gccgcacgag ggacaatagg agccaggcgc accggccagc ccctgaagga ggacccctca gccgtgcctg tgttctctgt ggactatggg gagctggatt tccagtggcg agagaagacc ccggagcccc ccgtgccctg tgtccctgag cagacggagt atgccaccat tgtctttcct agcggaatgg gcacctcatc ccccgcccgc aggggctcag ccgacggccc tcggagtgcc cagccactga ggcctgagga tggacactgc tcttggcccc tctgaccggc ttccttggcc accagtgttc tgcagaccct ccaccatgag cccgggtcag cgcatttcct caggagaagc aggcagggtg caggccattg caggccgtcc aggggctgag ctgcctgggg gcgaccgggg ctccagcctg cacctgcacc aggcacagcc ccaccacagg actcatgtct caatgcccac agtgagccca ggcagcaggt gtcaccgtcc cctacaggga gggccagatg cagtcactgc ttcaggtcct gccagcacag agctgcctgc gtccagctcc ctgaatctct gctgctgctg ctgctgctgc tgctgctgcc tgcggcccgg ggctgaaggc gccgtggccc tgcctgacgc cccggagcct cctgcctgaa cttgggggct ggttggagat ggccttggag cagccaaggt gcccctggca gtggcatccc gaaacgccct ggacgcaggg cccaagactg ggcacaggag tgggaggtac atggggctgg ggactcccca ggagttatct gctccctgca ggcctagaga agtttcaggg aaggtcagaa gagctcctgg ctgtggtggg cagggcagga aacccctccc acctttacac atgcccaggc agcacctcag gccctttgtg gggcagggaa gctgaggcag taagcgggca ggcagagctg gaggcctttc aggccagcca gcactctggc ctcctgccgc cgcattccac cccagcccct cacaccactc gggagaggga catcctacgg tcccaaggtc aggagggcag ggctggggtt gactcaggcc cctcccagct gtggccacct gggtgttggg agggcagaag tgcaggcacc tagggccccc catgtgccca ccctgggagc tctccttgga acccattcct gaaattattt aaaggggttg gccgggctcc caccagggcc tgggtgggaa ggtacaggcg ttcccccggg gcctagtacc cccgcgtggc ctatccactc ctcacatcca cacactgcac ccccactcct ggggcagggc caccagcatc caggcggcca gcaggcacct gagtggctgg gacaagggat cccccttccc tgtggttcta ttatattata attataatta aatatgagag catgct__________________________________________________

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo anti-KIR que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5, y

un anticuerpo anti-PD-1 que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 21, para su uso en un metodo para el tratamiento del cancer en un paciente humano,

en donde el metodo comprende al menos un ciclo de administracion, en el que el ciclo es un periodo de ocho semanas, en el que para cada uno de los al menos un ciclo, se administran dos dosis del anticuerpo anti-KIR a una dosis de 0,1, 0,3, 1, 3, 6 o 10 mg/kg y se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-PD-1 a una dosis de 3 mg/kg.
2. Los anticuerpos para el uso de la reivindicacion 1, en donde el anticuerpo anti-KIR y el anticuerpo anti-PD-1 son para administrarse en las siguientes dosis:

(a) 0,1 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(b) 0,3 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(c) 1 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(d) 3 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1;

(e) 6 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1; o

(f) 10 mg/kg de anticuerpo anti-KIR y 3 mg/kg de anticuerpo anti-PD-1.
3. Los anticuerpos para el uso de las reivindicaciones 1 o 2, en las que los anticuerpos anti-PD-1 y anti-KIR se formulan para administracion intravenosa.
4. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en las que el tratamiento consiste en hasta 12 ciclos.
5. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en las que el anticuerpo anti-PD-1 es para administrarse en los dias 1, 15, 29 y 43 de cada ciclo.
6. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en las que el anticuerpo anti-KIR es para administrarse en los dias 1 y 29 de cada ciclo; opcionalmente

(a) en las que el anticuerpo anti-PD-1 es para administrarse antes de la administracion del anticuerpo anti-KIR en los dias 1 y 29, o

(b) en las que el anticuerpo anti-PD-1 es para administrarse antes de la administracion del anticuerpo anti-KIR en los dias 1 y 29, y el anticuerpo anti-KIR es para administrarse dentro de los 30 minutos despues del anticuerpo anti-PD-1.
7. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en las que el tratamiento produce al menos un efecto terapeutico elegido entre reduction del tamano de un tumor, reduction del numero de lesiones metastasicas a lo largo del tiempo, respuesta completa, respuesta parcial y enfermedad estable.
8. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en las que el cancer es un tumor solido, o en particular un tumor solido resistente avanzado y se elige opcionalmente de cancer de cabeza o cuello, cancer pulmonar no microcitico (CPNM), carcinoma de celulas renales (CCR), melanoma, cancer colorrectal y carcinoma ovarico seroso.
9. Los anticuerpos para el uso de la reivindicacion 8, en la que el cancer es cancer de cabeza o cuello.
10. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en las que el cancer es una neoplasia maligna hematologica y se elige opcionalmente de mieloma multiple, linfoma de Hodgkin, linfoma folicular, linfoma de linfocitos B grandes difuso y linfoma de linfocitos T.
11. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en las que el anticuerpo anti-KIR comprende

(a) una CDR1 de la region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 7,

(b) una CDR2 de la region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 8,

(c) una CDR3 de la region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 9,

(d) una CDR1 de la region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 10,

(e) una CDR2 de la region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 11, y

(f) una CDR3 de la region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 12; y/o

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

en las que el anticuerpo anti-PD-1 comprende

(a) una CDR1 de la region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 23,

(b) una CDR2 de la region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 24,

(c) una CDR3 de la region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 25,

(d) una CDR1 de la region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 26,

(e) una CDR2 de la region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 27, y

(f) una CDR3 de la region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 28.
12. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en las que el anticuerpo anti-KIR comprende regiones variables de las cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias expuestas en las SEQ ID NO: 3 y 5, respectivamente; y/o

en las que el anticuerpo anti-PD-1 comprende regiones variables de las cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias expuestas en las SEQ ID NO: 19 y 21, respectivamente.
13. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en las que el anticuerpo anti-KIR comprende cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias expuestas en las SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente; y/o

en las que el anticuerpo anti-PD-1 comprende cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias expuestas en las SEQ ID NO: 17 y 18, respectivamente.
14. Los anticuerpos para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en las que:

(a) el anticuerpo anti-KIR y el anticuerpo anti-PD-1 son para administrate de forma simultanea en una formulacion unica; o

(b) el anticuerpo anti-KIR y el anticuerpo anti-PD-1 se formulan para la administracion separada; o

(c) el anticuerpo anti-KIR y el anticuerpo anti-PD-1 son para administrarse al mismo tiempo; o

(d) el anticuerpo anti-KIR y el anticuerpo anti-PD-1 son para administrarse de forma secuencial; o

(e) el anticuerpo anti-PD-1 es para administrarse en primer lugar seguido de la administracion del anticuerpo anti- KIR; o

(f) el anticuerpo anti-KIR es para administrarse en primer lugar seguido de la administracion del anticuerpo anti- PD-1.
15. Un kit para su uso en un metodo para el tratamiento del cancer en un paciente humano, comprendiendo el kit:

(a) una dosis de un anticuerpo anti-KIR que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5;

(b) una dosis de un anticuerpo anti-PD-1 que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 21; y

(c) instrucciones para el uso del anticuerpo anti-KIR y del anticuerpo anti-PD-1 de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-14.
16. Un anticuerpo anti-KIR que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 5, para su uso en el tratamiento de un sujeto, en donde el anticuerpo anti-KIR es para coadministrarse con un anticuerpo anti-PD-1 que comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 19, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 en una region variable de la cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 21, en al menos un ciclo, en donde para cada ciclo se administran dos dosis del anticuerpo anti-KIR a una dosis de 0,1, 0,3, 1, 3, 6 o 10 mg/kg y se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-PD-1 a una dosis de 3 mg/kg.