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CN119233973A - 一种药物化合物及其用途 - Google Patents

一种药物化合物及其用途 Download PDF

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CN119233973A
CN119233973A CN202380041926.2A CN202380041926A CN119233973A CN 119233973 A CN119233973 A CN 119233973A CN 202380041926 A CN202380041926 A CN 202380041926A CN 119233973 A CN119233973 A CN 119233973A
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CN
China
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alkyl
glycine
optionally substituted
independently
ligand
Prior art date
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Pending
Application number
CN202380041926.2A
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English (en)
Inventor
张禹
李冰
李曦
花海清
朱忠远
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yinen Biopharmaceutical Suzhou Co ltd
Original Assignee
Yinen Biopharmaceutical Suzhou Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Yinen Biopharmaceutical Suzhou Co ltd filed Critical Yinen Biopharmaceutical Suzhou Co ltd
Publication of CN119233973A publication Critical patent/CN119233973A/zh
Pending legal-status Critical Current

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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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Abstract

涉及一种化合物或其配体‑药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐。还涉及所述化合物或其配体‑药物偶联物的制备方法及其应用。

Description

一种药物化合物及其用途 技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种药物化合物及配体-药物偶联物，以及其用途。
背景技术
Toll样受体(TLR)的高度保守的模式识别受体蛋白家族被认为作为病原相关分子模式(PAMP)的受体参与先天性免疫。影响TLR活性的相关化合物可以影响用于以下疾病的治疗方法，包括自身免疫、炎症、变态反应、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主疾病、感染、癌症或免疫缺陷。因此本领域急需一种能够影响TLR活性的化合物或药物偶联物。
发明内容
本申请提供了一种化合物或其配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，所述化合物或配体-药物偶联物可以具有选自以下组的效果：抑制肿瘤生长、影响Toll样受体(TLR)功能、和影响免疫系统功能。
一方面，本申请提供了一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述化合物结构如式(II-a)所示：
其中，
R1为任选取代的氨基；
X1选自任选取代的-CH2-；
X3选自任选取代的-CH＝或-N＝；
R2选自氢和任选取代的C1-C6烷基，当所述R2包含亚甲基单元时，所述R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
W不存在，或W选自任选取代的C1-C6烷基，当所述W包含亚甲基单元时，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
B选自以下组：任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
所述B被一个或更多个任选取代的氨基取代，其中所述一个或更多个氨基各自独立地被氢或任选取代的C1-C6烷基取代；
环A选自：任选取代的脂环基、任选取代的脂杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
环A可以被m个RA-1取代，所述RA-1各自独立地选自任意基团；所述m选自1、2、3、4或5。
又一方面，本申请提供了一种配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(II-2A)所示的结构：
其中，
R1为任选取代的氨基；
X1选自任选取代的-CH2-；
X3选自任选取代的-CH＝或-N＝；
R2选自氢和任选取代的C1-C6烷基，当所述R2包含亚甲基单元时，所述R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
W不存在，或W选自任选取代的C1-C6烷基，当所述W包含亚甲基单元时，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
B选自以下组：任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
Z选自-N(RZ-1)-，其中RZ-1选自H或任选取代的C1-C6的烷基；
环A选自：任选取代的脂环基、任选取代的脂杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
RA-1选自氢、卤素、羟基、氨基、任选取代的C1-C6烷基，当所述RA-1包含亚甲基单元 时，所述RA-1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
m选自1、2或3；
通式中波浪线表示通过Z基团上的氮原子，与配体直接连接，或者通过接头单元与配体连接。
在一些实施方式中，本发明所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(II-2B)所示的结构：
其中，
R1为任选取代的氨基；
X1选自任选取代的-CH2-；
X3选自任选取代的-CH＝或-N＝；
R2选自氢和任选取代的C1-C6烷基，当所述R2包含亚甲基单元时，所述R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
W不存在，或W选自任选取代的C1-C6烷基，当所述W包含亚甲基单元时，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
B选自以下组：任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
Z选自-N(RZ-1)-，其中RZ-1选自H或任选取代的C1-C6的烷基；
环A选自：任选取代的脂环基、任选取代的脂杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
RA-1选自氢、卤素、羟基、氨基、任选取代的C1-C6烷基，当所述RA-1包含亚甲基单元时，所述RA-1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
m选自1、2或3；
通式中波浪线表示通过L基团上的氮原子或碳原子，与配体连接；
L为接头单元。
在一些实施方式中，本发明所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物为式(II-2C)所示的结构：
其中，
R1为任选取代的氨基；
X1选自任选取代的-CH2-；
X3选自任选取代的-CH＝或-N＝；
R2选自氢和任选取代的C1-C6烷基，当所述R2包含亚甲基单元时，所述R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
W不存在，或W选自任选取代的C1-C6烷基，当所述W包含亚甲基单元时，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
B选自以下组：任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
Z选自-N(RZ-1)-，其中RZ-1选自H或任选取代的C1-C6的烷基；
环A选自：任选取代的脂环基、任选取代的脂杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
RA-1选自氢、卤素、羟基、氨基、任选取代的C1-C6烷基，当所述RA-1包含亚甲基单元时，所述RA-1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
m选自1、2或3；
L为接头单元；
n为1到10的整数或小数；
Pc为配体。
在本发明某些优选实施方案中，所述的如式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构中的某些基团如下定义，未提及的基团同本申请任一方案所述。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，所述R1为-NH2。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，所述X1选自-CH2-或
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，所述X3选自-CH＝或-C(CH3)＝。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，R2选自任选被1、2或3个R2-1取代的C1-C6烷基；R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个R2-2取代，所述R2-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；其中，R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(R2-3)-替代，R2-3选自：氢或C1-C3的烷基。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，R2-1各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、羟基、氨基、-CN、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CH3或
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，R2选自 其中，R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-NH-替代。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，R2选自： 例如，R2选自
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，
W选自任选被1、2或3个Rw-1取代的C1-C6烷基；Rw-1各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个Rw-2取代，所述Rw-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨 基；
其中，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(Rw-3)-替代；Rw-3选自：氢或C1-C3的烷基。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，Rw-1各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、羟基、氨基、-CN、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CH3或
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，W选自 其中，W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-NH-替代。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，W选自 例如，W选自
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，B选自苯基和吡啶基，所述苯基和吡啶基各自独立地任选被1、2或3个RB-1取代，所述RB-1各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C1-C3的烷氧基。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，所述B选自优选地，所述B选自 例如，B选自
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，所述A选自：苯基、吡啶基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，所述A选自苯基和吡啶基。例如，环A选自苯基。例如，环A选自吡啶基。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，
RA-1为RA2-1-Lx-；
Lx选自：-(CH2)t-、-(CH2)tO-、-O(CH2)t-、-(CH2)tN(RL-1)-、-(CH2)tS-、-(CH2)tC(＝O)-、-(CH2)tN(RL-1)C(＝O)-、其中RL-1选自H或C1-C3的烷基，t选自0、1、2或3；
RA2-1选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6的烷基、脂环基、脂杂环基、芳基和杂芳基，其中所述C1-C6的烷基、脂环基、脂杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被1、2或3个RA2-2取代；RA2-2选自氢、卤素、羟基、氨基、和任选被1、2或3个RA2-3取代的C1-C6的烷基；RA2-3各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基和C1-C3的烷基；
其中，RA2-1的任意一个亚甲基单元可被以下结构替换：-O-、-S-、-S(＝O)2-、-NH-、-CO-、
m选自1、2或3。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，RA-1为RA2-1-Lx-；Lx为单键或-NHC(＝O)-。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，RA-1为RA2-1-Lx-；RA2-1各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、或任选被1、2或3个RA2-2取代的：C1-C6的烷基、 其中，RA2-1的任意一个亚甲基单元可被以下结构替换：-O-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-NH-、-C(O)-、
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，RA-1选自：氢、氟、氯、溴、碘、羟基、氨基、氰基、巯基、-CH3、-CH(＝O)、-C(＝O)OH、-OCH(＝O)、-SH(＝O)、-SH(＝O)2、-CH2CH3、-CH2OH、-OCH3、-NHCH3、-CH2NH2、-S(＝O)2NH2、-NHSH(＝O)2、-SCH3、-CH2SH、-S(＝O)CH3、-CH2SH(＝O)、-S(＝O)2CH3、-CH2SH(＝O)2、-NHCH(＝O)、-C(＝O)NH2、-CH2CH(＝O)、-CH2NHCH(＝O)、-C(＝O)NHCH3、
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，RA-1为RA2-1-Lx-，Lx为单键，RA2-1各自独立地选自任选被1、2或3个RA2-2取代的：苯基和吡啶基；RA2-2选自氢、卤素、羟基、氨基、和任选被1、2或3个RA2-3取代的C1-C6的烷基；RA2-3各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基；
优选地，R2A-1选自：
更优选地，RA-1选自：
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，RA-1为RA2-1-Lx-，Lx为单键，RA2-1选自优选地，RA2-2为-CH2OH。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，RA-1为RA2-1-Lx-，Lx为-NHC(＝O)-，RA2-1各自独立地选自任选被1、2或3个RA2-2取代的：苯基和吡啶基；RA2-2选自氢、卤素、羟基、氨基、和任选被1、2或3个RA2-3取代的C1-C6的烷基；RA2-3各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基；
优选地，R2A-1选自：
更优选地，R2A-1选自：
在一些实施方式中，式(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，Z选自-N(RZ-1)-，所述RZ-1选自H或任选被1、2或3个氟、氯、溴、碘、羟基或氨基取代的C1-C6的烷基；优选地，RZ-1选自H、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CH3；更优选地，RZ-1选自H。
在一些实施方式中，(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，所述结构单元选自：
其中，RZ-1、R2、W、RA-1分别如本申请(Ⅱ-2A)、(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)中任一方案所述。
在一些实施方式中，本申请提供一种化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述化合物可以包含式(II-a)所示的结构：
R1可以为任选取代的氨基，X1可以选自任选取代的-CH2-；X3可以选自任选取代的-CH-或-N-；
所述R2可以选自以下组：任选取代的任选取代的任选取代的和任选取代的所述R2各自独立地可以被一个或更多个R2-1取代，所述一个或更多个R2-1可以选自以下组：氢、氟、任选取代的甲基、任选取代的环丙基和任选取代的苯基；
W可以选自以下组：任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的和任选取代的
B可以选自以下组：任选取代的苯基、任选取代的萘基、任选取代的吡啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的噻吩基、任选取代的呋喃基、和任选取代的吡嗪基，B可以被一个或更多个任选取代的氨基取代；
A可以选自以下组：任选取代的苯基、任选取代的吡啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的噻吩基、任选取代的呋喃基、和任选取代的吡嗪基，A可以被一个或更多个RA-1取代，所述RA-1不存在、或可以包含：任选取代的CH3-、任选取代的CH(＝CH2)-、任选取代的HC(＝O)-、任选取代的HOC(＝O)-、任选取代的HC(＝O)O-、任选取代的NH2-、任选取代的HO-、任选取代的HS-、任选取代的HS(＝O)-、任选取代的HS(＝O)2-、任选取代的CH3CH2-、任选取代的CH2＝CH-、任选取代的HC≡C-、任选取代的HOCH2-、任选取代的CH3O-、任选取代的CH3NH-、任选取代的NH2CH2-、任选取代的HS(＝O)2-NH-、任选取代的NH2-S(＝O)2-、任选取代的HS-CH2-、任选取代的CH3S-、任选取代的HS(＝O)-CH2-、任选取代的CH3-S(＝ O)-、任选取代的HS(＝O)2-CH2-、任选取代的CH3-S(＝O)2-、任选取代的NH2C(＝O)-、任选取代的HC(＝O)NH-、任选取代的HC(＝O)CH2-、任选取代的HC(＝O)NHCH2-、任选取代的CH3NHC(＝O)-、任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的任选取代的和/或任选取代的一个或更多个RA-1各自独立地可以被一个或更多 个RA-2取代，RA-2可以包含氢、卤素、任选取代的甲基和/或任选取代的羟基，所述一个或更多个RA-2各自独立地可以被一个或更多个RA-3取代，所述RA-3可以包含任选取代的甲基和/或任选取代的羟基。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，接头单元L为-Tr-L3-L2-L1c-，
Tr选自和单键；
L1c选自
L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
L3选自单键或1-4个氨基酸构成的肽残基，所述肽残基为由选自以下组中的氨基酸形成的肽残基：缬氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、瓜氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、丝氨酸。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，接头单元L为-L3-L2-L1c-，
L1c选自
L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，接头单元L为-L3-L2-L1c-或-Tr-L3-L2-L1c-，所述L3端或Tr端与Z基团的氮原子相连，L1c端与配体相连。
在一些实施方式中，式(Ⅱ-2B)、(Ⅱ-2C)所示的结构，其中，接头单元L选自：
例如，接头单元L选自：
在一些实施方式中，所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物如式(II-2C-1)和(II-2C-2)所示：
其中，
RZ-1选自H或任选被1、2或3个氟、氯、溴、碘、羟基或氨基取代的C1-C6的烷基；
X4和X5各自独立地选自-CH＝和-N＝；
R2选自任选被1、2或3个R2-1取代的C1-C6烷基；R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个R2-2取代；R2-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(R2-3)-替代；R2-3选自：氢或C1-C3的烷基；
W选自任选被1、2或3个Rw-1取代的C1-C6烷基；Rw-1各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个Rw-2取代；Rw-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(Rw-3)-替代；Rw-3选自：氢或C1-C3的烷基；
RA-1选自RA2-1-Lx-；
Lx选自单键、C1-C6亚烷基、-O-、-S-、-C(O)-、-NH-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-C(O)-N(C1-C6烷基)-、或-N(C1-C6亚烷基)-C(O)-，
RA2-1为芳基、杂芳基或杂环基，优选苯基、吡啶基或异苯并呋喃酮基，且RA2-1任选地被一个或多个取代基RA2-2所取代，
其中RA2-2各自独立地选自-C1-C6烷基、氨基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C1-C6烷基氨基、-C1-C6烷基-NH(C1-C6烷基)、-C1-C6烷基-N(C1-C6烷基)2、羟基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基或-C(O)NReRf，且其中Re和Rf各自独立地选自H或C1-C6烷基，或者Re和Rf与它们所连接的氮原子共同形成5或6元含氮杂环，例如四氢吡咯基或哌啶基，所述5或6元含氮杂环任选地被一个或多个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氧代、氨基、-NH(C1-C6烷基)或-N(C1-C6烷基)2的取代基所取代；
L1c选自
L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-；
n为1到10的整数或小数；
Pc为配体。
在本发明某些优选实施方案中，式(II-2C-1)、(II-2C-2)所示的结构，其中，X4和X5各自独立地选自-CH＝和-N＝，RZ-1、R2、W、RA-1、L1c、L2、L3、Pc和n分别如本申请(Ⅱ-2C)中任一方案所述。
在一些实施方案中，本发明所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物选自以下结构式：
n为1到10的整数或小数；
Pc为配体。
在一些实施方案中，本发明所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物选自以下结构式：
其中，n为1到10的整数或小数。
在一些实施方式中，本发明化合物或其偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其选自：
其中，
RZ-1选自H或任选被1、2或3个氟、氯、溴、碘、羟基或氨基取代的C1-C6的烷基；
R2选自任选被1、2或3个R2-1取代的C1-C6烷基；R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个R2-2取代；R2-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(R2-3)-替代；R2-3选自：氢或C1-C3的烷基；
W选自任选被1、2或3个Rw-1取代的C1-C6烷基；Rw-1各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个Rw-2取代；Rw-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(Rw-3)-替代；Rw-3选自：氢或C1-C3的烷基；
RA-1选自RA2-1-Lx-；
Lx选自单键、C1-C6亚烷基、-O-、-S-、-C(O)-、-NH-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-C(O)-N(C1-C6烷基)-、或-N(C1-C6亚烷基)-C(O)-，
RA2-1为芳基、杂芳基或杂环基，优选苯基、吡啶基或异苯并呋喃酮基，且RA2-1任选地被一个或多个取代基RA2-2所取代，
其中RA2-2各自独立地选自-C1-C6烷基、氨基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C1-C6烷基氨基、-C1-C6烷基-NH(C1-C6烷基)、-C1-C6烷基-N(C1-C6烷基)2、羟基、-C1-C6烷氧基、 -C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基或-C(O)NReRf，且其中Re和Rf各自独立地选自H或C1-C6烷基，或者Re和Rf与它们所连接的氮原子共同形成5或6元含氮杂环，例如四氢吡咯基或哌啶基，所述5或6元含氮杂环任选地被一个或多个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氧代、氨基、-NH(C1-C6烷基)或-N(C1-C6烷基)2的取代基所取代。
在本发明某些优选实施方案中，式(Ⅱ-1A-1)、(Ⅱ-1A-2)、(Ⅱ-1A-3)、(Ⅱ-1A-4)、(Ⅱ-1A-5)和(Ⅱ-1A-6)所示的结构，其中，RZ-1、R2、W、RA-1分别如本申请(Ⅱ-1A)或(Ⅱ-2A)中任一方案所述。
又一个方面，本发明提供一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述化合物为式(II-3A)所示的结构：
其中，
R1为任选取代的NH2；
X1选自任选取代的-CH2-；
X3选自任选取代的-CH＝或-N＝；
R2选自氢和任选取代的C1-C6烷基；当所述R2包含亚甲基单元时，所述R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
W不存在，或W选自任选取代的C1-C6烷基；当所述W包含亚甲基单元时，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
B选自以下组：任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
Z选自-N(RZ-1)-，其中RZ-1选自H或任选取代的C1-C6的烷基；
环A选自：任选取代的脂环基、任选取代的脂杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
RA-1选自氢、卤素、羟基、氨基、任选取代的C1-C6烷基，当所述RA-1包含亚甲基单元时，所述RA-1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
m选自1、2或3；
Lw为-L3-L2-L1；
L1选自
L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
L3选自选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-半胱瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
在一些实施方式中，式(II-3C)所示的结构，其中，Lw选自
在本发明某些优选实施方案中，式(II-3A)所示的结构，其中，R1、X1、X3、R2、W、B、Z、RA-1和m分别如本申请(Ⅱ-2B)或(Ⅱ-2C)中任一方案所述。
在一些实施方式中，本发明化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中，所述化合物如式(II-3A-1)和(II-3A-2)所示：
其中，
RZ-1选自H或任选被1、2或3个氟、氯、溴、碘、羟基或氨基取代的C1-C6的烷基；
X4和X5各自独立地选自-CH＝和-N＝；
R2选自任选被1、2或3个R2-1取代的C1-C6烷基；R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个R2-2取代；R2-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(R2-3)-替代；R2-3选自：氢或C1-C3的烷基；
W选自任选被1、2或3个Rw-1取代的C1-C6烷基；Rw-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个Rw-2取代；Rw-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(Rw-3)-替代；Rw-3选自：氢或C1-C3的烷基；
RA-1选自RA2-1-Lx-；
Lx选自单键、C1-C6亚烷基、-O-、-S-、-C(O)-、-NH-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-C(O)-N(C1-C6烷基)-、或-N(C1-C6亚烷基)-C(O)-，
RA2-1为芳基、杂芳基或杂环基，优选苯基、吡啶基或异苯并呋喃酮基，且RA2-1任选地被一个或多个取代基RA2-2所取代，
其中RA2-2各自独立地选自-C1-C6烷基、氨基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C1-C6烷基氨基、-C1-C6烷基-NH(C1-C6烷基)、-C1-C6烷基-N(C1-C6烷基)2、羟基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基或-C(O)NReRf，且其中Re和Rf各自独立地选自H或C1-C6烷基，或者Re和Rf与它们所连接的氮原子共同形成5或6元含氮杂环，例如四氢吡咯基或哌啶基，所述5或6元含氮杂环任选地被一个或多个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氧代、氨基、-NH(C1-C6烷基)或-N(C1-C6烷基)2的取代基所取代；
Lw选自
在本发明某些优选实施方案中，式(II-3A-1)和(II-3A-2)所示的结构，其中，X4和X5各自独立地选自-CH＝和-N＝；R2、W、RZ-1和RA-1分别如本申请(Ⅱ-2B)或(Ⅱ-2C)中任一方案所述。
又一个方面，本发明提供了一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其选自：
又一个方面，本发明提供了一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述化合物包含式(Ⅲ-1A)所示的结构：
其中，
X选自-S-和-O-；
R1选自任选被一个或多个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；
其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(R1-2)-、-C(＝O)-和-NHC(＝O)-，R1-2选自：氢或C1-C6的烷基；
环A选自苯基或杂芳基；
R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被一个或多个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3烷基和C3-C6环烷基，所述C1-C3烷基和C1-C3环烷基各自独立地任选被一个或多个RV3取代，所述RV3各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(RV4)-、-C(＝O)-、-N(RV4)C(＝O)-、RV4选自H，C1-C6的烷基和
Y选自-N(RY1)-、-O-、-S-、
RY1选自氢和C1-C6的烷基；
q选自0、1、2或3；
p选自1、2、3、4、5、7和8。
又一个方面，本发明提供了一种配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(Ⅲ-2A)所示的结构：
其中，
X选自-S-和-O-；
R1选自任选被一个或多个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；
其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(R1-2)-、-C(＝O)-和-NHC(＝O)-，R1-2选自：氢或C1-C6的烷基；
环A选自苯基或杂芳基；
R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被一个或多个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3烷基和C3-C6环烷基，所述C1-C3烷基和C1-C3环烷基各自独立地任选被一个或多个RV3取代，所述RV3各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(RV4)-、-C(＝O)-、-N(RV4)C(＝O)-、RV4选自H，C1-C6的烷基和
Y选自-N(RY1)-、-O-、-S-、
RY1选自氢和C1-C6的烷基；
q选自0、1、2或3；
p选自1、2、3、4、5、7和8；
通式中波浪线表示通过Y基团上的氮原子或氧原子，与配体直接连接，或者通过接头单元与配体连接。
在一些实施方式中，本发明所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(Ⅲ-2B)所示的结构：
其中，
X选自-S-和-O-；
R1选自任选被一个或多个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；
其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(R1-2)-、-C(＝O)-和-NHC(＝O)-，R1-2选自：氢或C1-C6的烷基；
环A选自苯基或杂芳基；
R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被一个或多个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3烷基和C3-C6环烷基，所述C1-C3烷基和C1-C3环烷基各自独立地任选被一个或多个RV3 取代，所述RV3各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(RV4)-、-C(＝O)-、-N(RV4)C(＝O)-、RV4选自H，C1-C6的烷基和
Y选自-N(RY1)-、-O-、-S-、
RY1选自氢和C1-C6的烷基；
q选自0、1、2或3；
p选自1、2、3、4、5、7和8；
L为接头单元；
通式中波浪线表示通过L基团上的氮原子或碳原子，与配体连接。
在一些实施方式中，本发明所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(Ⅲ-2C)所示的结构：
其中，
X选自-S-和-O-；
R1选自任选被一个或多个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；
其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(R1-2)-、 -C(＝O)-和-NHC(＝O)-，R1-2选自：氢或C1-C6的烷基；
环A选自苯基或杂芳基；
R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被一个或多个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3烷基和C3-C6环烷基，所述C1-C3烷基和C1-C3环烷基各自独立地任选被一个或多个RV3取代，所述RV3各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(RV4)-、-C(＝O)-、-N(RV4)C(＝O)-、RV4选自H，C1-C6的烷基和
Y选自-N(RY1)-、-O-、-S-、
RY1选自氢和C1-C6的烷基；
q选自0、1、2或3；
p选自1、2、3、4、5、7和8；
L为接头单元；
n为1到10的整数或小数；
Pc为配体。
在本发明某些优选实施方案中，所述的如式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构中的某些基团如下定义，未提及的基团同本申请任一方案所述。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述R1选自任选被1、2或3个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟 基、氨基、-CH3、-CH2CH3和其中R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(CH3)-和-NH-。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述R1选自其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(CH3)-和-NH-。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述R1选自 例如，R1选自
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被1、2或3个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、-CH3、-CH2CH3和-OCH3。例如，R2选自H。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述环A选自苯基、吡啶基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述环A选自苯基或吡啶基。例如，环A选自苯基。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、-CH3、-CH2CH3和其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-NH-、-CO-、-NHCO-、
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述V选自其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-NH-、-CO-、-NHCO-、
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述V选自 例如，V选自
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述Y选自-NH-、-O-、-S-、
在一些实施方式中，式(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，所述结构单元选自：
优选地，其选自
其中，X选自-S-和-O-；R1、R2、V、Y分别如本申请(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)、(Ⅲ-2C)中任一方案所述。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-2B)、(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，接头单元L为-Tr-L3-L2-L1c-，
Tr选自 和单键；
L1c选自
L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
L3选自单键或1-4个氨基酸构成的肽残基，所述肽残基为由选自以下组中的氨基酸形 成的肽残基：缬氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-2B)、(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-2B)、(Ⅲ-2C)所示的结构，，其中，接头单元L为-L3-L2-L1c-，
L1c选自
L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-2B)、(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，接头单元L为-L3-L2-L1c-或-Tr-L3-L2-L1c-，所述L3端或Tr端与Z基团的氮原子相连，L1c端与配体相连。
在一些实施方式中，式(Ⅲ-2B)、(Ⅲ-2C)所示的结构，其中，接头单元L选自：
例如，L选自
在一些实施方式中，本发明所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物如式(Ⅲ-2C-1)和(Ⅲ-2C-2)所示：
其中，
X选自-S-和-O-；
R1选自任选被1、2或3个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；其中R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(CH3)-和-NH-；
R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被1、2或3个R2-1取代；所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基；
V选自C1-C8亚烷基，优选C1-C6亚烷基，其中所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基中的一个或多个碳原子可以任选地被选自N、O或S的杂原子所替换，并且所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、 C1-C6烷基、氧代、羟基、C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基或卤代C1-C6烷氧基；
Y选自-N(RY1)-；
RY1选自氢和C1-C6的烷基；
L为-L3-L2-L1c-或-Tr-L3-L2-L1c-；
Tr选自：
L1c选自
L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
L3选自选自以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-；
n为1到10的整数或小数；
Pc为配体。
在本发明某些优选实施方案中，式(Ⅲ-2C-1)、(Ⅲ-2C-2)所示的结构，其中，R1、R2、V、Y、L、n和Pc分别如本申请(Ⅱ-2C)中任一方案所述。
在一些实施方式中，本发明配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物选自以下结构式：
n为1到10的整数或小数；
Pc为配体。
在一些实施方式中，本发明所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物选自以下结构式：
n为1到10的整数或小数。
在一些实施方式中，本发明所述的化合物或其偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其选自：
其中，
X选自-S-和-O-；
R1选自任选被1、2或3个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；其中R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(CH3)-和-NH-；
R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被1、2或3个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基；
V选自C1-C8亚烷基，优选C1-C6亚烷基，其中所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基中的一个或多个碳原子可以任选地被选自N、O或S的杂原子所替换，并且所述C1-C8亚烷基和C1-C6 亚烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、C1-C6烷基、氧代、羟基、C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基或卤代C1-C6烷氧基；
Y选自-N(RY1)-；
RY1选自氢和C1-C6的烷基。
在本发明某些优选实施方案中，式(Ⅲ-2A-1)、(Ⅲ-2A-2)、(Ⅲ-2A-3)所示的结构，其中，R1、R2、V、Y分别如本申请(Ⅱ-2A)中任一方案所述。
又一个方面，本发明提供一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述化合物为式(Ⅲ-3A)所示的结构：
其中，
X选自-S-和-O-；
R1选自任选被一个或多个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；
其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(R1-2)-、-C(＝O)-和-NHC(＝O)-，R1-2选自：氢或C1-C6的烷基；
环A选自苯基或杂芳基；
R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被一个或多个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3烷基和C3-C6环烷基，所述C1-C3烷基和C1-C3环烷基各自独立地任选被一个或多个RV3取代，所述RV3各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(RV4)-、-C(＝O)-、-N(RV4)C(＝O)-、RV4选自H，C1-C6的烷基和
Y选自-N(RY1)-、-O-、-S-、
RY1选自氢和C1-C6的烷基；
q选自0、1、2或3；
p选自1、2、3、4、5、7和8；
LW为-Tr-L3-L2-L1，
Tr选自和单键；
；
L1选自
L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、甘氨酸-谷氨酰胺、甘氨酸-天冬氨酸-、甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
在本发明某些优选实施方案中，式(Ⅲ-3A)所示的结构，其中，R1、X2、环A、V、Y、Lw和q分别如本申请(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)中任一方案所述。
在一些实施方式中，本发明化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中，所述化合物如式(Ⅲ-3A-1)和(Ⅲ-3A-2)所示：
其中，
X选自-S-和-O-；
R1选自任选被1、2或3个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；其中R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(CH3)-和-NH-；
R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被1、2或3个R2-1取代；所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基；
V选自C1-C8亚烷基，优选C1-C6亚烷基，其中所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基中的一个或多个碳原子可以任选地被选自N、O或S的杂原子所替换，并且所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、C1-C6烷基、氧代、羟基、C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基或卤代C1-C6烷氧基；
Y选自-N(RY1)-；
RY1选自氢和C1-C6的烷基；
LW选自
在本发明某些优选实施方案中，式(Ⅲ-3A-1)、(Ⅲ-3A-2)所示的结构，其中，R1、R2、V、Y和Lw分别如本申请(Ⅲ-1A)、(Ⅲ-2A)、(Ⅲ-2B)或(Ⅲ-2C)中任一方案所述。
又一个方面，本发明提供了一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其选自：
另一方面，本发明提供了一种配体-药物偶联物，其包含配体和连接至配体的药物，其中所述药物为本申请任一项所述的化合物，优选地药物通过接头连接至配体，优选地配体为抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，本发明所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，n为2到8的整数或小数。例如，所述平均连接数n可以为3到8的整数或小数。例如，所述平均连接数n可以为1到2、2到3、3到4、4到5、5到6、6到7、7到8、8到9、9到10的整数或小数。
在一些实施方案中，本发明配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述Pc选自蛋白类激素、凝集素、生长因子、抗体或其他能与细胞、受体和/或抗原结合的分子。
在一些实施方案中，本发明所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，Pc为抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，本发明所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，Pc为嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体。
在一些实施方案中，本发明配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述Pc为靶向以下靶点的抗体：5T4，AGS-16，ANGPTL4，ApoE，CD19，CTGF，CXCR5，FGF2，MCPT8，MFI2，MS4A7，NCA，Sema5b，SLITRK6，STC2，TGF，0772P，5T4，ACTA2，ADGRE1，AG-7，AIF1，AKR1C1，AKR1C2，ASLG659，Axl，B7H3，BAFF-R，BCMA，BMPR1B，BNIP3，C1QA，C1QB，CA6，CADM1，CCD79b，CCL5，CCR5，CCR7，CD1lc，CD123，CD138，CD142，CD147，CD166，CD19，CD19,CD22，CD21，CD20，CD205，CD22，CD223，CD228，CD25，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD45，CD45(PTPRC)，CD46，CD47，CD49D(ITGA4)，CD56，CD66e，CD70，CD71，CD72，CD74，CD79a，CD79b， CD80，CDCP1，CDH11，CDllb，CEA，CEACAM5，c-Met，COL6A3，COL7A1，CRIPTO，CSF1R，CTSD，CTSS，CXCL11，CXCL10，DDIT4，DLL3，DLL4，DR5，E16，EFNA4，EGFR，EGFRvIII，EGLN，EGLN3，EMR2，ENPP3，EpCAM，EphA2，EphB2R，ETBR，FcRH2，FcRHl，FGFR2，FGFR3，FLT3，FOLR-α，GD2，GEDA，GPC-1，GPNMB，GPR20，GZMB，HER2，HER3，HLA-DOB，HMOX1，IFI6，IFNG，IGF-1R，IGFBP3，IL10RA1，IL-13R，IL-2，IL20Ra，IL-3，IL-4，IL-6，IRTA2，KISS1R，KRT33A，LIV-1，LOX，LRP-1，LRRC15，LUM，LY64，LY6E，Ly86，LYPD3，MDP，MMP10，MMP14，MMP16，MPF，MSG783，MSLN，MUC-1，NaPi2b，Napi3b，Nectin-4，Nectin-4，NOG，P2X5，pCAD，P-Cadherin，PDGFRA，PDK1，PD-L1，PFKFB3，PGF，PGK1，PIK3AP1，PIK3CD，PLOD2，PSCA，PSCAhlg，PSMA，PSMA，PTK7，P-钙黏着蛋白，RNF43，NaPi2b，ROR1，ROR2，SERPINE1，SLC39A6，SLTRK6，STAT1，STEAP1，STEAP2，TCF4，TENB2，TGFB1，TGFB2，TGFBR1，TNFRSF21，TNFSF9，Trop-2，TrpM4，Tyro7，UPK1B，VEGFA，WNT5A，表皮生长因子，短蛋白聚糖，间皮素，磷酸钠协同转运蛋白2B，密封蛋白18.2，内皮肽受体，黏蛋白(如黏蛋白1和黏蛋白16)，鸟苷酸环化酶C，整合素a4p7，整合素a5p6，滋养层细胞糖蛋白和组织因子。
在一些实施方案中，本发明配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述Pc为靶向GPC3、Trop2和HER2的抗体或其抗原结合片段；优选地，所述抗体选自：Trastuzumab、Pertuzumab、Sacituzumab和Codrituzumab。
在本申请中，所述抗体或其抗原结合片段的CDR可以是根据Kabat定义的。
在本申请中，所述抗体或其抗原结合片段可以包含LCDR1-3和HCDR1-3。其中，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列；所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:5-8中任一项所示的氨基酸序列；所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:9-12中任一项所示的氨基酸序列；所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的氨基酸序列；所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:17-20中任一项所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:21-24中任一项所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段包含与Trastuzumab相同的LCDR1-3和HCDR1-3。其中，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可以包含与Pertuzumab相同的LCDR1-3和HCDR1-3。其中，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可以包含与Sacituzumab相同的LCDR1-3和HCDR1-3。其中，所述LCDR1可可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述LCDR2可可以包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述LCDR3可可以包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；所述HCDR1可可以包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可以包含与Codrituzumab相同的LCDR1-3和HCDR1-3。其中，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列；所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述抗体或其抗原结合片段可以包含轻链可变区VL和重链可变区VH。其中，所述VL可可以包含SEQ ID NO:25-28中任一项所示的氨基酸序列，且所述VH可以包含SEQ ID NO:29-32中任一项所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可以包含与Trastuzumab相同的轻链可变区VL和重链可变区VH。其中，所述VL可以包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，且所述VH可以包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可以包含与Pertuzumab相同的轻链可变区VL和重链可变区VH。其中，所述VL可以包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列，且所述VH可以包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段以包含与Sacituzumab相同的轻链可变区VL和重链可变区VH。其中，所述VL可以包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，且所述VH可以包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段以包含与Codrituzumab相同的轻链可变区VL和重链可变区VH。其中，所述VL可以包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，且所述VH可以包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列。
本申请中，所述抗体或其抗原结合片段可以包含抗体轻链和抗体重链，其中，所述轻链可以包含SEQ ID NO:33-36中任一项所示的氨基酸序列，且所述重链可可以包含SEQ ID NO:37-40中任一项所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可以包含与Trastuzumab相同的抗体轻链和抗体重链，其中，所述轻链可以包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列，且所述重链可可以包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可以包含与Pertuzumab相同的抗体轻链和抗体重链，其中，所述轻链可以包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列，且所述重链可以包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可以包含与Sacituzumab相同的抗体轻链和抗体重链，其中，所述轻链可以包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，且所述重链可以包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列。
例如，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可以包含与Codrituzumab相同的抗体轻链和抗体重链，其中，所述轻链可以包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，且所述重链可以包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
在本发明某些优选实施方案中，本发明提供了以下的式(A)化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物，
其中：
RA-1选自RA2-1-Lx-；
Lx选自单键、C1-C6亚烷基、-O-、-S-、-C(O)-、-NH-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-C(O)-N(C1-C6烷基)-、或-N(C1-C6亚烷基)-C(O)-，优选地，Lx选自单键、-C(O)NH-或-NHC(O)-；
RA2-1为芳基、杂芳基或杂环基，优选苯基、吡啶基或异苯并呋喃酮基，且RA2-1任选地被 一个或多个取代基RA2-2所取代，
其中RA2-2各自独立地选自C1-C6烷基、氨基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C1-C6烷基氨基、-C1-C6烷基-NH(C1-C6烷基)、-C1-C6烷基-N(C1-C6烷基)2、羟基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基或-C(O)NReRf，且其中Re和Rf各自独立地选自H或C1-C6烷基，或者Re和Rf与它们所连接的氮原子共同形成5或6元含氮杂环，例如四氢吡咯基或哌啶基，所述5或6元含氮杂环任选地被一个或多个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氧代、氨基、-NH(C1-C6烷基)或-N(C1-C6烷基)2的取代基所取代，
R2选自-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6亚烷基羟基或卤代C1-C6烷基；
W选自-C1-C6亚烷基-、-O-C1-C6亚烷基-；
B为苯基，且B任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基，且
Z为-NH(RZ-1)，所述RZ-1选自H、-C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基。在一个特别优选的实施方案中，本发明提供了选自以下的式(A)化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物：
在本发明某些优选实施方案中，本发明提供了以下的式(A-1)化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物，
其中，RA-1、W、B、Z和R2如上文所定义，L为接头单元，优选L为如权利要求27-31任一项所定义的接头单元，其中的波浪线表示通过L基团上的氮原子或碳原子与配体相连。
在一个更优选的实施方案中，接头单元L选自：
在一个特别优选的实施方案中，本发明化合物选自以下化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物：
在本发明某些优选实施方案中，本发明提供了以下的式(A-2)的配体-药物偶联物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物，
其中，RA-1、W、B、Z和R2如上文所定义，L为如上文所定义的接头单元，n为1-10的整数或小数，优选n为2-8的整数或小数，Pc为配体，优选Pc为抗体或其抗原结合片段。
在一个更优选的实施方案中，Pc为靶向GPC3、Trop2和HER2的抗体或其抗原结合片段；优选地，所述抗体选自：Trastuzumab、Pertuzumab、Sacituzumab和Codrituzumab。
在本发明某些优选实施方案中，本发明提供了以下的式(B)化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物，
其中：
RY1选自氢和-C1-C6烷基；
Xe选自C1-C8亚烷基，优选C1-C6亚烷基，其中所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基中的一个或多个碳原子可以任选地被选自N、O或S的杂原子所替换，并且所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、C1-C6烷基、氧代、羟基、C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基或卤代C1-C6烷氧基，
X选自-O-或-S-，且
Rf选自C1-C6烷基，其中所述C1-C6烷基中的一个或多个碳原子可以任选地被选自N、O或S的杂原子所替换，并且所述C1-C6烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、氧代、羟基、C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-NH(C1-C6烷基)、或-C1-C6烷基-N(C1-C6烷基)2。
在一个更优选的实施方案中，本发明提供了选自以下的式(B)化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物：
在本发明某些优选实施方案中，本发明提供了以下的式(B-1)化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物，
其中，X、Xe、Rf和RY1如上文所定义，L为接头单元，优选L为如权利要求27-31任一项所定义的接头单元，其中的波浪线表示通过L基团上的氮原子或碳原子与配体相连。
在一个更优选的实施方案中，接头单元L选自：
例如，L选自
在一个特别优选的实施方案中，本发明化合物选自以下的化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物：
在本发明某些优选实施方案中，本发明提供了以下的式(B-2)的配体-药物偶联物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物，
其中，X、Xe、Rf和RY1如上文所定义，L为如上文所定义的接头单元，n为1-10的整数或小数，优选n为2-8的整数或小数，Pc为配体，优选Pc为抗体或其抗原结合片段。
在一个更优选的实施方案中，Pc为靶向GPC3、Trop2和HER2的抗体或其抗原结合片段； 优选地，所述抗体选自：Trastuzumab、Pertuzumab、Sacituzumab和Codrituzumab。
药物组合物
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本申请的化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂；或者，其包含本申请的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本申请所述的药物组合物除活性化合物外，可以含有一种或多种辅料，所述辅料可以选自以下组的成分：填充剂(稀释剂)、粘合剂、润湿剂、崩解剂和赋形剂等。根据给药方法的不同，组合物可以含有0.1至99重量％的活性化合物。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂。可以按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，所述组合物可以含有粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂或药学上可接受的润湿剂等，所述组合物还可以含有一种或多种选自以下组的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂。
水悬浮液可以含有活性物质和用于混合的适宜制备的水悬浮液的赋形剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂，例如一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。油混悬液可以通过使活性成分悬浮于植物油中配制而成。油悬浮液可以含有增稠剂。还可以加入上述的甜味剂和矫味剂。
药物组合物还可以是用于制备水混悬液的可分散粉末和颗粒提供活性成分，通过加入水混合分散剂、湿润剂、悬浮剂或防腐剂中的一种或多种。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。本申请的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。
药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后可以将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，可以按可保持本申请化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。例如，所述装置可以是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述本申请所述适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。或者，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本申请化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、本申请所述化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，和/或化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
预防和/或治疗肿瘤
另一方面，本申请提供了一种影响Toll样受体(TLR)功能的方法，包括施用本申请的化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐；或者，施用本申请的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，或者，施用本申请的药物组合物。
另一方面，本申请提供了一种调节免疫系统功能的方法，包括施用本申请的化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐；或者，施用本申请的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，或者，施用本申请的药物组合物。
另一方面，本申请提供了本申请的化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐；或者，本申请的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，或者，本申请的药物组合物制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗疾病和/或症状。
在一些实施方式中，本申请所述的用途或方法，所述疾病和/或症状包含与Toll样受体(TLR)信号转导相关的疾病和/或症状。
在一些实施方式中，本申请所述的用途或方法，所述疾病和/或症状选自以下组：肿瘤、自身免疫性疾病、炎症、败血病、过敏、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、免疫缺陷和病毒引起的感染。
在一些实施方式中，本申请所述的用途或方法，所述疾病和/或症状为选自与以下组表达相关的肿瘤：GPC3、Trop2和HER2。在一些实施方式中，所述疾病和/或症状为选自以下的肿瘤：黑色素瘤、肺癌、肝癌、基底细胞癌、肾癌、骨髓瘤、胆道癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、直肠癌、头颈癌、腹膜肿瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤、成神经细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌和甲状腺癌。
在一些实施方式中，本申请所述的用途或方法，所述疾病和/或症状选自以下组病毒引起的感染：登革热病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、寨卡病毒、HIV(人体免疫缺损病毒)、HBV(乙型肝炎病毒)、HCV(丙型肝炎病毒)、HPV(人乳头状瘤病毒)、RSV(呼吸道合胞病毒)、SARS-CoV(严重急性呼吸道综合征冠状病毒)、SARS-CoV-2(严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型)、MERS-CoV(中东呼吸综合征冠状病毒)和流感病毒。
本申请所述的化合物可以影响TLR的活性。所述活性的影响可以是本申请的化合物加入培养基中，相比于加入阴性对照或者对照药物，所述TLR的活性提高1％以上、2％以上、4％以上、5％以上、8％以上、10％以上、15％以上、18％以上、20％以上、25％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、或95％以上。例如，所述活性的影响可以是对于TLR的EC50值(nM)为10000以下、5000以下、4000以下、3000以下、2000以下、1000以下、500以下、400以下、300以下、200以下、150以下、120以下、110以下、100以下、99以下、98以下、97以下、95以下、90以下、80以下、75以下、70以下、65以下、62以下、60以下、50以下、40以下、30以下、25以下、23以下、22以下、20以下、19以下、18以下、18.5以下、17以下、15以下、12以下、10以下、9以下、8.5以下、7以下、6.7以下、6以下、5.9以下、5.5以下、5.0以下、4.8以下、4.5以下、4.4以下、4以下、3.5以下、3以下、2.5以下、2以下、1.5以下、1.0以下、0.5以下、0.3以下、0.29以下、0.25以下、0.21以下、0.20以下、0.18以下、0.17以下、0.15以下、0.12以下、0.10以下、0.09以下、0.08以下、0.07以下、0.06以下、0.05以下、0.04以下、0.03以下、0.02以下或0.01 以下。例如，所述免疫细胞可以包括但不限于颗粒白细胞和/或无颗粒白细胞，例如所述免疫细胞包括但不限于B细胞、T细胞、自然杀伤细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞和/或树突状细胞。例如所述免疫细胞包括PBMC细胞。例如，所述TLR包含人TLR。例如，所述TLR包含TLR7和/或TLR8。
本申请所述的化合物可以影响免疫细胞的细胞因子表达和/或释放的能力。所述活性的影响可以是本申请的化合物加入免疫细胞的培养基中或施用于受试者时，相比于加入阴性对照或者对照药物，所述免疫细胞的细胞因子表达和/或释放的能力提高1％以上、2％以上、4％以上、5％以上、8％以上、10％以上、15％以上、18％以上、20％以上、25％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、或95％以上。例如，所述免疫细胞可以包括但不限于颗粒白细胞和/或无颗粒白细胞，例如所述免疫细胞包括但不限于B细胞、T细胞、自然杀伤细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞和/或树突状细胞。例如所述免疫细胞包括PBMC细胞。例如，所述细胞因子可以是免疫细胞因子。例如，所述细胞因子可以是TNF-α和/或IFN-α
本申请所述的化合物可以影响免疫细胞的活性。所述活性的影响可以是本申请的化合物加入免疫细胞的培养基中，相比于加入阴性对照或者对照药物，所述免疫细胞的活性提高1％以上、2％以上、4％以上、5％以上、8％以上、10％以上、15％以上、18％以上、20％以上、25％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、或95％以上。例如，所述活性的影响可以是对于免疫细胞的EC50值(nM)为10000以下、5000以下、4000以下、3000以下、2000以下、1000以下、500以下、400以下、300以下、200以下、150以下、120以下、110以下、100以下、99以下、98以下、97以下、95以下、90以下、80以下、75以下、70以下、65以下、62以下、60以下、50以下、40以下、30以下、25以下、23以下、22以下、20以下、19以下、18以下、18.5以下、17以下、15以下、12以下、10以下、9以下、8.5以下、7以下、6.7以下、6以下、5.9以下、5.5以下、5.0以下、4.8以下、4.5以下、4.4以下、4以下、3.5以下、3以下、2.5以下、2以下、1.5以下、1.0以下、0.5以下、0.3以下、0.29以下、0.25以下、0.21以下、0.20以下、0.18以下、0.17以下、0.15以下、0.12以下、0.10以下、0.09以下、0.08以下、0.07以下、0.06以下、0.05以下、0.04以下、0.03以下、0.02以下或0.01以下。例如，所述免疫细胞可以包括但不限于颗粒白细胞和/或无颗粒白细胞，例如所述免疫细胞包括但不限于B细胞、T细胞、自然杀伤细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞和/或树突状细胞。例如所述免疫细胞包括PBMC细胞。
附图说明
图1：(a)不同浓度抗体-药物偶联物存在下来自人全血的TNF-α释放；(b)不同浓度抗体-药物偶联物存在下来自人全血的IFN-α释放。
图2：(a)对照ADC1、肿瘤细胞与人外周血单核细胞的共孵育试验的结果；(b)ADC6、肿瘤细胞与人外周血单核细胞的共孵育试验的结果。
图3：ADC-13与HepG2&PBMC共孵育实验的IFN-α释放。
图4：ADC-13与HepG2&PBMC共孵育实验的IL-6释放。
图5：ADC-13与HepG2&PBMC共孵育实验的TNF-α释放。
图6：hGPC3-MC38结肠癌动物模型中体内药效实验1的实验结果。
图7：hGPC3-MC38结肠癌动物模型中体内药效实验2的实验结果。
图8：不表达hGPC3的MC38/hTLR8KI鼠模型中肿瘤细胞再接种实验的结果。
术语定义
在本申请中，术语“Toll样受体”和“TLR”通常是指识别病原体相关分子模式(PAMP)并作为先天性免疫中关键信号传递元件的高度保守的哺乳动物模式识别受体家族的任何成员。TLR多肽共有特征性结构，其中包括具有富含亮氨酸重复的细胞外结构域、跨膜结构域和参与TLR信号传递的细胞内结构域。TLR包括但不限于人TLR。
在本申请中，术语“Toll样受体7”和“TLR7”是指与可公开获得的TLR7序列例如人类TLR7多肽的GenBank登录号AAZ99026、或鼠TLR7多肽的GenBank登录号AAK62676共有至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的核酸或多肽。
在本申请中，术语“Toll样受体8”和“TLR8”是指与可公开获得的TLR8序列例如人类TLR8多肽的GenBank登录号AAZ95441、或鼠TLR8多肽的GenBank登录号AAK62677共有至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的核酸或多肽。
在本申请中，术语“TLR激动剂”通常是直接或间接结合TLR(例如TLR7和/或TLR8)以诱导TLR信号传导的物质。TLR信号传导中的任何可检测出的差异可以表明激动剂刺激或活化TLR。信号传导差异可以表现为，靶基因表达的变化、信号转导组分的磷酸化的变化、下游元件如核因子-κB(NF-κB)的细胞内定位的变化、某些组分(如IL-1受体相关激酶(IRAK))与其它蛋白或细胞内结构的缔合的变化、或组分如激酶(如促分裂原活化蛋白激酶(MAPK))的生化 活性的变化。在本申请中，术语“卤素”通常是指氟、氯、溴、碘，例如可以是氟、氯。
在本申请中，术语“烷基”通常是指烷除去氢原子所衍生的残基。烷基可以是取代的或非取代的，替代或者非替代的。术语“烷基”通常指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其具有从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去氢原子所衍生的残基，其可以为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，例如含有1至12个碳原子，例如含有1至6个碳原子的链烷基。烷基的非限制性实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丙基、丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，替代或者非替代的，例如当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基可以独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代，例如可以是氢、氕、氘、氚、卤素、-NO2、-CN、-OH、-SH、-NH2、-C(O)H、-CO2H、-C(O)C(O)H、-C(O)CH2C(O)H、-S(O)H、-S(O)2H、-C(O)NH2、-SO2NH2、-OC(O)H、-N(H)SO2H或C1-6脂肪族基团。
在本申请中，术语“烷氧基”通常是指通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基，除非另有规定，C1-6烷氧基包括C1、C2、C3、C4、C5和C6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。
在本申请中，术语“亚烷基”通常指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其具有2个从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其可以为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，例如，术语“亚甲基”可以是指1个碳原子的基团除去两个氢原子所衍生的残基。亚甲基可以是取代的或非取代的，替代或者非替代的；例如含有1至12个碳原子，例如含有1至6个碳原子的亚烷基。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、1,1-亚乙基(-CH(CH3)-)、1,2-亚乙基(-CH2CH2)-、1,1-亚丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-亚丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)和1,5-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)等。亚烷基可以是取代的或非取代的，替代或者非替代的，例如当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基可以独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代，例如可以是氢、氕、氘、氚、卤素、-NO2、-CN、-OH、-SH、-NH2、-C(O)H、-CO2H、-C(O)C(O)H、-C(O)CH2C(O)H、-S(O)H、-S(O)2H、-C(O)NH2、-SO2NH2、-OC(O)H、 -N(H)SO2H或C1-6脂肪族基团。亚甲基或亚烷基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“烯基”通常是指含有一个或多个双键的直链或支链烃基。烯基的示例性实例包括烯丙基、高烯丙基、乙烯基、巴豆基、丁烯基、戊烯基和己烯基等。具有一个以上双键的C2-6链烯基的示例性实例包括丁二烯基、戊二烯基、己二烯基和己三烯基以及它们的支化形式。不饱和键(双键)的位置可以是在碳链的任何一个位置。烯基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“亚烯基”通常是指具有从烯烃的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基。例如，可以是亚烯丙基、亚乙烯基、亚丁烯基、亚戊烯基和亚己烯基等。亚烯基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“炔基”通常是指不饱和直链或支链炔基，例如乙炔基、1-丙炔基、炔丙基、丁炔基等。炔基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“亚炔基”通常是指具有从炔烃的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基。例如，可以是亚乙炔基、亚丙炔基、亚炔丙基、亚丁炔基等。亚炔基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“芳基”通常是指具有芳环上除去一个氢原子所衍生的残基。术语“芳环”可以指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)，可以为6至10元，例如苯和萘。所述芳环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环。芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以为一个或多个以下基团，其独立地选自以下组：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、和杂环烷硫基。芳基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“亚芳基”通常是指具有从芳环的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基。例如，可以是亚苯基和亚萘基。亚芳基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“杂芳基”通常是指具有从杂芳环的碳原子上除去一个氢原子所衍生的残基。术语“杂芳环”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子可以选自以下组：氧、硫和氮。杂芳基可以为5至10元，可以为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以为一个或多个以下基团，其独立 地选自以下组：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、和杂环烷硫基。杂芳基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“亚杂芳基”通常是指具有从杂芳环的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基。例如，可以是亚呋喃基、亚噻吩基、亚吡啶基、亚吡咯基、亚嘧啶基、亚吡嗪基、亚咪唑基、亚四唑基等。亚杂芳基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“脂环基”通常是指具有从脂肪环的相同碳原子或多个不同的碳原子上除去氢原子所衍生的残基。术语“环烷”通常指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃，碳环包含3至20个碳原子，可以包含3至12个碳原子，可以包含3至10个碳原子，可以包含3至8个碳原子。脂环基的非限制性实例包括环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环戊烯基、环己烷基、环己烯基、环己二烯基、环庚烷基、环庚三烯基、环辛烷基等；多环碳环可以包括螺环、稠环和桥环的碳环。脂环基可以是取代的或非取代的。在本申请中，术语“碳环基”通常是指具有碳环的碳原子上除去一个氢原子所衍生的残基。术语“碳环”通常指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃，碳环包含3至20个碳原子，可以包含3至12个碳原子，可以包含3至10个碳原子，可以包含3至8个碳原子。单环碳环的非限制性实例包括环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己烯、环己二烯、环庚烷、环庚三烯、环辛烷等；多环碳环可以包括螺环、稠环和桥环的碳环。碳环基可以是取代的或非取代的。在某些情形下，脂环和碳环可以相互替代使用。
在本申请中，术语“部分不饱和的”通常是指环状结构中环分子间至少含一个双键或三键。术语“部分不饱和”涵盖带有多处不饱和的环状结构，但并非意在包括本申请所定义的芳环或杂芳环。术语"不饱和的"表示部分具有一个或多个不饱和度。
在本申请中，术语“亚脂环基”通常是指具有从脂环的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基。例如，可以是亚环丙烷基、亚环丁烷基、亚环戊烷基、亚环戊烯基、亚环己烷基、亚环己烯基、亚环己二烯基、亚环庚烷基、亚环庚三烯基、亚环辛烷基等；多环碳环可以包括螺环、稠环和桥环的碳环。亚脂环基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“脂杂环基”通常是指稳定的不具有芳香性的3元-7元单环碳环结构，融合(稠合)的7元-10元双环杂环结构或桥联的6元-10元双环杂环结构，这些环状结构即可以是饱和的，也可以是部分饱和的，除碳原子外，这些环状结构中还含有一个或多个杂原子，其中杂原子可以选自以下组：氧、硫和氮。例如是含有1-4个上述定义的杂原子。当用 来表示脂杂环环状结构上的原子时，术语“氮”可以包括发生过取代反应的氮。例如，脂杂环基可以包含“杂环烷基”，杂环烷基可以指稳定的不具有芳香性的3元-7元单环烷结构，融合的7元-10元双环杂环结构或桥联的6元-10元双环杂环结构，除碳原子外，这些环状结构中还含有一个或多个杂原子，其中杂原子可以选自以下组：氧、硫和氮。例如是含有1-4个上述定义的杂原子。杂环烷基可以是取代的或非取代的。脂杂环基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“亚脂杂环基”通常是指具有从脂杂环的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基。亚脂杂环基可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“成环原子”通常是指环状结构上包含的原子。例如，成环原子可以是苯环上的碳原子，可以是吡啶环上的氮原子。当成环原子上连接氢原子时，成环原子可以是取代的或非取代的。
在本申请中，术语“各自独立地”通常是指变量适用于任何一种情况，而不考虑在相同化合物中具有相同或不同定义的变量存在与否。例如其中的变量可以是指化合物的取代基种类、数量或化合物中原子的种类等。例如，在化合物中出现2次R并且R被定义为“独立地碳或氮”时，两个R可以均为碳，两个R可以均为氮，或一个R可以为碳而另一个R为氮。
在本申请中，术语“任选”或“任选地”通常意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明可以包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
在本申请中，术语“取代的”通常指基团中的一个或多个氢原子，例如为最多5个，例如为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
在本申请中，术语0个或多个(例如，0个或1个以上、0个或1个、0个)亚甲基单元被“替代”通常指当所述结构包含1个或多个亚甲基单元时，所述一个或多个亚甲基单元可以不被替代，或被一个或多个不是亚甲基的基团(例如-NHC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-NH-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-PH-、-P(＝O)H-、-NHSO2-、-SO2NH-、-C(＝S)-、-C(＝NH)-、-N＝N-、-C＝N-、-N＝C-或-C(＝N2)-)所替代。
在本申请中，基团X与基团Y的“连接”通常可以处于任一定向，任一定向通常是指在基团X用于连接体Y和基团Z时，所述基团X的两个或更多个连接位点可以任意地与基团Y或基 团Z连接。
在本申请中，术语“化合物”通常指具有两种或两种以上不同元素的物质。例如，本申请的化合物可以是有机化合物，例如本申请的化合物可以是分子量500以下的化合物，可以是分子量1000以下的化合物，也可以是分子量1000以上的化合物，也可以是10000以上、100000以上的化合物。在本申请中，化合物还可以是指通过化学键相连的化合物，例如可以是一个或多个分子量1000以下的分子通过化学键与生物大分子相连的化合物，所述生物大分子可以是高聚糖、蛋白、核酸、多肽等。例如本申请的化合物可以包括蛋白质与一个或多个分子量1000以下的分子相连的化合物，可以是包括蛋白质与一个或多个分子量10000以下的分子相连的化合物，可以是包括蛋白质与一个或多个分子量100000以下的分子相连的化合物。
在本申请中，如本领域技术人员可知的，“烷基”、“烯基”、“环烷基”等之类的术语可以在名称前加一个标识表示在特定情况下基团中存在的原子数，例如，C1-C4烷基，C3-C7环烷氧基，C1-C4烷基羰基氨基等，“C”后所跟下标数字表示在基团中存在的碳原子数。例如，C3烷基是指具有三个碳原子的烷基(例如，正丙基，异丙基)；C1-10中，基团的成员可具有落入1-10范围内的任何数目的碳原子。
基团中的一个或多个氢原子，例如为最多5个，例如为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
在本申请中，本申请的化合物包含化合物的其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、和/或非对映异构体。在本申请中，术语“非对映异构体”通常是指具有两个或更多个手性中心并且其分子不是彼此的镜像的立体异构体。非对映异构体可以具有不同的物理性质，例如、熔点、沸点、波谱性质和反应性。在本申请中，术语“互变异构体”或“互变异构形式”可互换使用，通常是指可通过低能垒(low energy barrier)互相转化的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(protontautomer)(也称为质子移变互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移进行的互相转化，诸如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体(valence tautomer)包括通过一些成键电子的重组进行的互相转化。在本申请中，术语“内消旋体”通常是指分子内含有不对称性的原子，但具有对称因素而使分子内总旋光度为零。术语"外消旋体"或"外消旋混合物"是指由等摩尔量的两种对映异构体物质构成的组合物。
在本申请中，本申请的化合物的某些原子可能以一种以上的同位素形式出现。例如，氢 可能以氕(1H)、氘(2H)和氚(3H)的形式存在，碳可能以三种不同的同位素(12C、13C和14C)自然存在。可并入本申请化合物中的同位素示例还包括但不限于15N、18O、17O、18F、32P、33P、129I、131I、123I、124I、125I，或者类似的同位素。因此，相对于这些同位素的自然丰度，本申请的化合物可富集在一种或多种这些同位素中。如本领域技术人员所知，此类同位素富集化合物可用于多种用途。例如，用重同位素如氘(2H)替代可能会提供某些治疗优势，这可以是由于更高的代谢稳定性。例如，氘(2H)的自然丰度约为0.015％。因此，自然界中大约每6500个氢原子，就有一个氘原子。因此，本申请的含氘化合物在一个或多个位置(视情况而定)的氘丰度大于0.015％。除非另有指明，否则本申请所述的结构还可以包括仅在是否存在一个或多个同位素富集原子方面存在差别的化合物。举例而言，除了氢原子被氘或氚所取代，或碳原子被碳13或碳14所取代之外，其余部分均与本申请结构一致的化合物均在本申请的范围之内。
在本申请中，术语化合物或配体-药物偶联物的“异构体”通常包含其互变异构体、内消旋体、外消旋体、立体异构体、对映异构体、非对映异构体或其混合物。
在本申请中，术语“配体-药物偶联物”通常是指配体通过稳定的连接单元与具有生物活性的细胞毒性药物相连。在本申请中“配体-药物偶联物”可以为抗体-药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)，所述ADC可以是指把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的连接单元与具有生物活性的细胞毒性药物相连。
在本申请中，术语“配体”通常指能识别和结合目标细胞相关的抗原或受体的大分子化合物。配体的作用可以是将药物呈递给与配体结合的目标细胞群，这些配体包括但不限于蛋白类激素、凝集素、生长因子、抗体或其他能与细胞、受体和/或抗原结合的分子。在本申请中，配体可以表示为Pc，配体抗原通过配体上的杂原子与连接单元形成连接键，可以为抗体或其抗原结合片段(Ab)，所述抗体可以选自嵌合抗体、人源化抗体、全人抗体或鼠源抗体；所述抗体可以是单克隆抗体。例如所述抗体可以是，靶向以下靶点的抗体：HER2、TROP2或GPC3。例如所述抗体可以是靶向以下靶点的抗体：5T4，AGS-16，ANGPTL4，ApoE，CD19，CTGF，CXCR5，FGF2，MCPT8，MFI2，MS4A7，NCA，Sema5b，SLITRK6，STC2，TGF，0772P，5T4，ACTA2，ADGRE1，AG-7，AIF1，AKR1C1，AKR1C2，ASLG659，Axl，B7H3，BAFF-R，BCMA，BMPR1B，BNIP3，C1QA，C1QB，CA6，CADM1，CCD79b，CCL5，CCR5，CCR7，CD1lc，CD123，CD138，CD142，CD147，CD166，CD19，CD19,CD22，CD21，CD20，CD205，CD22，CD223，CD228，CD25，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD45， CD45(PTPRC)，CD46，CD47，CD49D(ITGA4)，CD56，CD66e，CD70，CD71，CD72，CD74，CD79a，CD79b，CD80，CDCP1，CDH11，CDllb，CEA，CEACAM5，c-Met，COL6A3，COL7A1，CRIPTO，CSF1R，CTSD，CTSS，CXCL11，CXCL10，DDIT4，DLL3，DLL4，DR5，E16，EFNA4，EGFR，EGFRvIII，EGLN，EGLN3，EMR2，ENPP3，EpCAM，EphA2，EphB2R，ETBR，FcRH2，FcRHl，FGFR2，FGFR3，FLT3，FOLR-α，GD2，GEDA，GPC-1，GPNMB，GPR20，GZMB，HER2，HER3，HLA-DOB，HMOX1，IFI6，IFNG，IGF-1R，IGFBP3，IL10RA1，IL-13R，IL-2，IL20Ra，IL-3，IL-4，IL-6，IRTA2，KISS1R，KRT33A，LIV-1，LOX，LRP-1，LRRC15，LUM，LY64，LY6E，Ly86，LYPD3，MDP，MMP10，MMP14，MMP16，MPF，MSG783，MSLN，MUC-1，NaPi2b，Napi3b，Nectin-4，Nectin-4，NOG，P2X5，pCAD，P-Cadherin，PDGFRA，PDK1，PD-L1，PFKFB3，PGF，PGK1，PIK3AP1，PIK3CD，PLOD2，PSCA，PSCAhlg，PSMA，PSMA，PTK7，P-钙黏着蛋白，RNF43，NaPi2b，ROR1，ROR2，SERPINE1，SLC39A6，SLTRK6，STAT1，STEAP1，STEAP2，TCF4，TENB2，TGFB1，TGFB2，TGFBR1，TNFRSF21，TNFSF9，Trop-2，TrpM4，Tyro7，UPK1B，VEGFA，WNT5A，表皮生长因子，短蛋白聚糖，间皮素，磷酸钠协同转运蛋白2B，密封蛋白18.2，内皮肽受体，黏蛋白(如黏蛋白1和黏蛋白16)，鸟苷酸环化酶C，整合素a4p7，整合素a5p6，滋养层细胞糖蛋白，或组织因子。
在本申请中，术语“细胞毒性药物”通常指毒性药物，所述细胞毒性药物可以在肿瘤细胞内具有较强破坏其正常生长的化学分子。细胞毒性药物可以在足够高的浓度下杀死肿瘤细胞。所述“细胞毒性药物”可以包括毒素，如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32或Lu的放射性同位素)，毒性药物，化疗药物，抗生素和核溶酶，例如，可以是毒性药物，包括但不限于喜树碱衍生物，例如，可以是喜树碱衍生物依沙替康(化学名：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]咪唑并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮)。
在本申请中，术语“接头单元”或“接头结构”通常指指一端与配体连接而另一端与细胞毒性药物相连的化学结构片段或键，也可以连接其他接头后再与细胞毒性药物相连。所述直接或间接连接配体可以是指所述基团通过共价键直接连接配体，也可以是通过接头结构连接配体。例如，接头结构可以是本申请所述的-Lax-Lb-Lc-和或-La-Lb-Lc-所示的结构。例如，可以使用包含酸不稳定接头结构(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接头结构、光不稳定接头 结构、二甲基接头结构、或含二硫化物接头结构的化学结构片段或键作为接头结构。
在本申请中，术语某个结构“任选地与其它分子部分相连接”通常是指该结构不与任何其它化学结构相连接，或者该结构与一个或多个不同于该结构的其它化学结构(例如本申请所述的配体)相连接(例如，通过化学键连接、或通过接头结构连接)。
在本申请中，术语“抗体或其抗原结合片段”通常是指免疫学上的结合试剂延伸至来自所有物种的所有抗体，包括二聚体、三聚体和多聚体抗体；双特异性抗体；嵌合抗体；全人源抗体；人源化抗体；重组和改造的抗体以及它们的片段。术语“抗体或其片段”可以指具有抗原结合区的任意抗体样分子，该术语包括小分子物质片段如Fab′、Fab、F(ab′)2、单结构域抗体(DABs)、Fv、scFv(单链Fv)、线性抗体、双抗体等等。术语“抗原结合片段”可以指抗体的保持特异性结合抗原的能力的一个或多个片段。例如，可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。制备和使用各种基于抗体的构建物和片段的技术在本领域中是公知的。所述抗体可以包括：抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗TROP2抗体、抗Claudin 18.2抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体或抗Mesothelin抗体中一个或多个。
术语“CDR”是指抗体可变序列内的互补决定区。在重链和轻链的各个可变区中存在3个CDR，其对于各个重链和轻链可变区被命名为HCDR1、HCDR2和HCDR3或LCDR1、LCDR2和LCDR3。本发明的所述抗体的可变区CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多公知的方案的任何方案来确定，包括基于抗体的三维结构和CDR环的拓扑学的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342:877-883；Al-Lazikani等人,“Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))基于抗体序列可变性的Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest，第4版，U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))，AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，国际ImMunoGeneTics database(IMGT)(1999 Nucleic Acids Research,27,209-212)，以及基于利用大量晶体结构的近邻传播聚类(affinity propagation clustering)的North CDR定义。本发明抗体的CDR可以由本领域的技术人员根据 本领域的任何方案(例如不同的指派系统或组合)确定边界。
术语“载药量”通常是指每个配体上加载的细胞毒性药物平均数量，也可以表示为细胞毒性药物和抗体量的比值，细胞毒性药物载量的范围可以是每个配体(Ab)连接0-12个，例如1-10个细胞毒性药物。在本申请的实施方式中，载药量表示为Na，示例性的可以为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10的均值。可用常规方法如UV/可见光光谱法，质谱，ELISA试验和HPLC特征鉴定偶联反应后每个ADC分子的载药量。
在本申请中，术语“药物组合物”通常是指含有一种或多种本申请所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物可以是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。常规的药物组合物的制备可以见中国药典。药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液，例如1,3-丁二醇中制备的溶液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。例如，可使用包括合成甘油单或二酯在内的任何调和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制备注射剂。
在本申请中，术语“药学上可接受的盐”或“可药用的盐”通常是指本申请化合物或配体-药物偶联物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时可以具有安全性和/或有效性，且可以具有应有的生物活性，本申请配体-药物偶联物可以与酸形成盐，药学上可接受的盐的非限制性实例包括：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、柠檬酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、草酸盐、硝酸盐、梨酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、水杨酸盐、柠檬酸氢盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。
在本申请中，术语“偶联物”通常是指本申请的化合物通过一个或多个化学反应而制备的化合物，或者通过诸如桥接(bridge)，间隔物(spacer)，或连接部分等的一个或多个连接结构彼此连接。
在本申请中，术语“药学上可接受的载体”通常是指给予治疗剂，例如抗体或多肽、基因和其它治疗剂的载体或载剂。该术语指本身不诱导对接受组合物的个体有害的抗体产生并且可以给予而不产生过度毒性的任何药物载体。合适的载体可以是大的、代谢缓慢的大分子，例如蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、多聚氨基酸、氨基酸共聚物、脂质聚集物和灭活的 病毒颗粒。本领域技术人员熟知这些载体。治疗组合物中药学上可接受的载体可包括液体，例如水、盐水、甘油和乙醇。这些载体中也可存在辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。
在本申请中，术语“治疗(treatment)”和“治疗(treating)”通常是指获得有益或希望的结果的方法，所述有益或希望的结果包括但不限于治疗益处。治疗益处包括但不限于根除、抑制、减少或改善所治疗的潜在障碍。另外，治疗益处是通过根除抑制、减少或改善与潜在的障碍相关的一种或多种生理症状实现的，从而在患者中观察到改善，但是患者仍然可能患有潜在障碍。
在本申请中，术语“预防(prevention)”和“预防(preventing)”通常是指获得有益或希望的结果的方法，所述有益或希望的结果包括但不限于预防益处。为了预防益处，可以向处于患上特定疾病的风险的患者或向报告具有疾病的一种或多种生理症状的患者施用药物组合物，即使尚未诊断出该疾病。
术语“治疗有效量”、“治疗有效剂量”和“有效量”是指本发明配体-药物偶联物单独或与其它治疗药物组合给予细胞、组织或受试者时，有效预防或改善一种或多种疾病或病况的症状或该疾病或病况的发展的量。治疗有效剂量还指足以导致症状改善的剂量，例如治疗、治愈、预防或改善相关医学病况或者提高这类病况的治疗、治愈、预防或改善的速度的量。当对个体施用单独给予的活性成分时，治疗有效剂量仅是指该成分。当组合施用时，治疗有效剂量是指引起治疗效果的活性成分的综合量，不论是组合、依次给予还是同时给予。治疗剂的有效量将导致诊断标准或参数提高至少10％，通常至少20％，优选至少约30％，更优选至少40％，最优选至少50％。
在本申请中，术语“受试者”或“患者”通常是指人类(即，任何年龄组的男性或女性，例如，小儿对象(例如，婴儿、儿童、青少年)或成人对象(例如，年轻人、中年人或老年人))和/或其他灵长类动物(例如，食蟹猴、恒河猴)；哺乳动物，包括商业上相关的哺乳动物，如牛、猪、马、绵羊、山羊、猫和/或犬；和/或鸟类，包括商业上相关的鸟类，如鸡、鸭、鹅、鹌鹑和/或火鸡。
在本申请中，术语“包含”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。术语“以上”、“以下”通常是指包含本数的情况。
在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、 6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
具体实施方式
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
合成技术方案
为了完成本申请的合成目的，本申请提供的化合物可以通过以下技术方案制备得到。
提供溴代条件的试剂包括但不限于溴水，N-溴代琥珀酰亚胺，二溴海因，三溴化磷，液溴，液溴/三苯基磷，氢溴酸，四溴化碳；
钛催化剂包括但不限于钛酸四异丙酯，三异丙氧基氯化钛，四氯化钛，三异丙醇甲基钛；
钯催化剂包括但不限于四三苯基膦钯，醋酸钯，氯化钯，双(三苯基膦)二氯化钯，三(二亚苄基丙酮)二钯，双(二亚苄基丙酮)二钯，双(乙腈)二氯化钯，[1,1’-双{二苯基膦基}二茂铁]二氯化钯，[1,1’-双{二苯基膦基}二茂铁]二氯化钯二氯甲烷复合物，二苯腈二氯化钯，1,4-双(二苯基膦)丁烷-氯化钯，烯丙基氯化钯二聚物，烯丙基环戊二烯基钯；
硼酸酯二聚体包括但不限于联硼酸频那醇酯，联硼酸新戊二醇酯，双联(2-甲基-2,4-戊二醇)硼酸酯，双联邻苯二酚硼酸酯，双(二异丙基-L-酒石酸二乙酯)二硼酸酯，双[(-)蒎烷二醇]二硼酯，双(1S,2S,3R,5S)(+)-蒎烷二醇二硼酯，四次甲氨基乙硼烷，双(N,N,N’,N’-四甲基-D-酒石酰胺二醇酸根)二硼，四羟基二硼，双(N,N,N’,N’-四甲基-L-酒石酰胺二醇酸根)二硼，双(二异丙基-D-酒石酸甘醇酸)二硼酸酯，双联(D-酒石酸二乙酯)硼酸酯，双联(2,4-二甲基-2,4-戊二醇)硼酸酯，双联(L-酒石酸二乙酯)硼酸酯，4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼环戊烷-2-基硼酸；
金属铜盐包括但不限于硫酸铜，五水硫酸铜，硫酸亚铜，氯化铜，氯化亚铜，碳酸铜，磷酸铜，乙酸铜及其水合物，草酸铜，氟硼酸铜及其水合物，二甲醇铜，酒石酸铜，甲酸铜，碘化亚铜，三氟乙酸铜，三氟甲磺酸铜，碱式碳酸铜，溴化铜，溴化亚铜，氧化亚铜；
配体可选自任意Ullmann反应常用的配体，包括但不限于L-脯氨酸，酪氨酸，苯基丙氨酸，1,10-菲洛啉，N,N’-二甲基乙二胺，乙二醇，1,1’-联萘-2,2’二酚，2-羰基环己基羧酸乙酯， 水杨醛腙；
缩合剂可以选自4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化吗啉盐、1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N,N'-二环己基碳化二亚胺、N,N'-二异丙基碳二酰亚胺、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯、1-羟基苯并三唑、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑))-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鑰六氟磷酸盐或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，优选4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化吗啉盐或1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；
提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱，所述的有机碱包括但不限于三乙胺，二乙胺，N-甲基吗啉，吡啶，六氢吡啶，N,N-二异丙基乙胺，正丁基锂，二异丙基氨基锂，醋酸钾，叔丁醇钠，叔丁醇钾等；所述无机碱包括但不限于氢化钠，碳酸钾，碳酸钠，碳酸铯，氢氧化钠，氢氧化锂，磷酸钠，磷酸钾；
提供酸性条件的试剂包括质子酸和路易斯酸，所述质子酸包括但不限于盐酸，硫酸，硝酸，亚硝酸，亚硫酸，磷酸，亚磷酸，甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、柠檬酸、苯甲酸，对甲基苯磺酸，对硝基苯甲酸，甲磺酸，三氟甲磺酸，三氟乙酸；所述路易斯酸包括但不限于三氟化硼，氯化锌，氯化镁，氯化铝，氯化锡，氯化铁；
氢化条件包括但不限于：Pb/C/氢气，Pt/C/氢气，氯化钯/氢气，兰尼镍/氢气，氢氧化钯碳/氢气，氢氧化钯/氢气；
提供氧化条件的试剂包括但不限于戴斯马丁氧化剂、双氧水、亚氯酸钠、次氯酸钠、高氯酸钾；
提供还原条件的试剂包括但不限于氢化钠，氢化钙，氢化锂，氢化铝锂，硼氢化钠，硼氢化锂，三乙基硼氢化钠，三乙酰氧基硼氢化钠，氰基硼氢化钠；
提供氧化条件的试剂包括但不限于戴斯马丁氧化剂、双氧水、亚氯酸钠、次氯酸钠、高氯酸钾；
提供硝化条件的试剂包括但不限于稀硝酸、浓硝酸、浓硫酸/硝酸、硝酸/乙酸酐；
提供硼氢化的试剂包括但不限于硼烷-四氢呋喃、硼烷-二甲硫醚、儿茶酚硼烷、频哪醇硼烷、9-硼双环[3.3.1]壬烷、二异戊基硼烷、二环己基硼烷、1，1，2-三甲基丙基硼烷、一氯硼烷、二氯硼烷、一溴硼烷、二溴硼烷；提供氧化条件的试剂包括但不限于戴斯马丁氧化剂、双氧水、亚氯酸钠、次氯酸钠、高氯酸钾；
碱性缓冲液选自pH 7到11的下列缓冲液，柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，磷酸-磷酸钠缓冲液，磷酸-磷酸钾缓冲液，磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液，磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液，琥珀酸-琥珀酸钠缓冲液，醋酸-醋酸钠缓冲液，硼酸-硼砂缓冲液，硼酸-硼酸钾缓冲液，硼砂-氢氧化钠缓冲液，组氨酸-盐酸缓冲液，甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，精氨酸-盐酸缓冲液，碳酸氢钠-碳酸钠缓冲液，碳酸氢钾-碳酸钾缓冲液，Tris-盐酸缓冲液，氨水-氯化铵缓冲液，巴比妥钠-盐酸缓冲液，硼砂-碳酸钠缓冲液，硼酸-氯化钾缓冲液，或上述两种及两种以上缓冲液的组合。
此外，在本申请中化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或质谱(MS)来确定的。NMR的测定是用Quan tum-I核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-D)、氘代氯仿(CDC13)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以10_6(ppm)作为单位给出。
MS的测定用Angilent 6230 ESI-TOF质谱仪(生产商:安捷伦,c型号:6230)。
UPLC的测定用Waters AcquityUPLCSQD液质联用仪(Poroshell 120 EC-C18，2.1mm x 50mm，1.9微米色谱柱)。
HPLC的测定使用安捷伦1260高压液相色谱仪(TOSOH G3000 SW SEC色谱柱)。
UV的测定使用Thermonanodrop2000紫外分光光度计。
酶联免疫测定用EnVision酶标仪(PerkinElmer公司)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm0.2mm,薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm0.5mm娃胶板。
柱层析一般使用烟台黄海200～300目硅胶为载体。
本申请的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCRGmbH&Co.KG，AcrosOrgannics，AldrichChemicalCompany,韶远化学科技(AccelaChemBioInc)、达瑞化学品等公司。
实施例中如无特殊说明，反应均在氩气氛或氮气氛下进行。氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
实施例中如无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
实施例中如无特殊说明，反应的温度为室温。室温为最适宜的反应温度，温度范围是20℃～30℃。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂的体系包括：A:二氯甲 烷和异丙醇体系，B:二氯甲烷和甲醇体系，C:石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和酸性或碱性试剂等进行调节。
本公开部分化合物是通过TOF-LC/MS来表征的。TOF-LC/MS使用安捷伦6230飞行时间质谱仪和安捷伦1290-Infinity超高效液相色谱仪。
本申请的示例性制备路线如下：
技术方案1
第一步：通式(P1)化合物与溴乙腈在加热条件下反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物与通式(Y1)化合物在常温条件下反应，得到通式(P3)化合物；
第三步：通式(P3)化合物在还原条件下，得到通式(P4)化合物；
第四步：通式(P4)化合物脱除保护基PG，得到通式(P5)化合物；
第五步：通式(P5)化合物与通式(Y2)化合物在任选缩合剂存在下，任选在碱性条件下反应，得到通式(P6)所示的化合物；
第六步：通式(P6)化合物与通式(Y3)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通式(P7)化合物；
其中：
PG可以为常见羧基的保护基；
X选自：-O-、-S-和-NR-；
B环为任选取代的芳基或杂芳基；
-B(OR)2为硼酸酯基单体，其中两个R可以连接形成杂环、杂桥环或杂螺环，且环上可任选被C1-C6烷基、芳基、杂芳基、羧基或酰氧基C1-C6烷基取代；
其中各R独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、 杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基。
技术方案2
第一步：通式(P1)化合物与通式(Y1)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物脱除保护基PG，得到通式(P3)化合物；
其中：
PG可以为常见氨基的保护基；
X选自：-O-、-S-和-NR-；
B环为任选取代的芳基或杂芳基；
-B(OR)2为硼酸酯基单体，其中两个R可以连接形成杂环、杂桥环或杂螺环，且环上可任选被C1-C6烷基、芳基、杂芳基、羧基或酰氧基C1-C6烷基取代；
其中各R独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基。
技术方案3
第一步：通式(P1)化合物在任选酸性或碱性条件下，上保护基PG，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物在任选钯试剂催化条件下与硼酸酯二聚体作用反应，得到通式(P3)化合物；
第三步：通式(P3)化合物与通式(Y1)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通式(P4)化合物；
第四步：通式(P4)化合物脱除保护基PG，得到通式(P5)化合物；
其中：
PG可以为常见氨基的保护基；
R2可以为氢或常见氨基的保护基；
X选自：-O-、-S-和-NR-；
B环为任选取代的芳基或杂芳基；
-B(OR)2为硼酸酯基单体，其中两个R可以连接形成杂环、杂桥环或杂螺环，且环上可任选被C1-C6烷基、芳基、杂芳基、羧基或酰氧基C1-C6烷基取代；
其中各R独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基。
技术方案4
第一步：通式(P1)化合物在在任选钯试剂催化条件下发生羰基插入反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物在任选酸性或碱性条件下，上保护基PG1，得到通式(P3)化合物；
第三步：通式(P3)化合物在任选碱性条件下，水解酯基，得到通式(P4)化合物；
第四步：通式(P4)化合物与通式(Y1)化合物在任选缩合剂存在下，任选在碱性条件下反应，得到通式(P5)所示的化合物；
第四步：通式(P5)化合物脱除保护基PG1和PG2，得到通式(P6)化合物；
其中：
PG1和PG2可以为常见氨基的保护基；
X选自：-O-、-S-和-NR-；
Y选自：-O-、-S-和-NR-；
R独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R2任选自C1-C6烷基；
B环独立选自任选取代的芳基或杂芳基；
Z选自不存在、C1-C6亚烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基和卤素取代的C1-C6亚烷基。
技术方案5
第一步：通式(P1)化合物与通式(Y1)化合物在任选还原条件下发生还原胺化反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物与通式(Y2)化合物在任选缩合剂存在下，任选在碱性条件下反应，得到通式(P3)所示的化合物；
第三步：通式(P3)化合物与通式(Y3)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通式(P4)化合物；
第四步：通式(P4)化合物脱除保护基PG，得到通式(P5)化合物；
其中：
PG可以为常见氨基的保护基；
B环为任选取代的芳基或杂芳基；
-B(OR)2为硼酸酯基单体，其中两个R可以连接形成杂环、杂桥环或杂螺环，且环上可任选被C1-C6烷基、芳基、杂芳基、羧基或酰氧基C1-C6烷基取代；
其中各R独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
Z选自不存在、C1-C6亚烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基和卤素取代的C1-C6亚烷基。
技术方案6
第一步：通式(P1)化合物在硝化条件下反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物在还原条件下，得到通式(P3)化合物；
第三步：通式(P3)化合物与通式(Y1)化合物在任选缩合剂存在下，任选在碱性条件 下反应，得到通式(P4)所示的化合物；
第四步：通式(P4)化合物在加热条件下发生关环反应，得到通式(P5)化合物；
第五步：通式(P5)化合物在氧化条件下，得到通式(P6)化合物；
第六步：通式(P6)化合物在三氯氧磷存在下，得到通式(P7)化合物；
第七步：通式(P7)化合物与通式(Y2)化合物在加热条件下反应，得到通式(P8)化合物；
第八步：通式(P8)化合物与通式(Y3)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通式(P9)化合物；
第九步：通式(P9)化合物在还原条件下，得到通式(P10)化合物；
第十步：通式(P10)化合物脱除保护基PG1和PG2，得到通式(P11)化合物；
其中：
PG1和PG2可以为常见氨基的保护基；
X选自：-O-和-S-；
Z选自不存在、C1-C6亚烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基和卤素取代的C1-C6亚烷基。
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；其中，当R1包含亚甲基单元时，所述R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或所述R1的所述亚甲基单元各自独立地被选自以下组替代：-O-、-S-和任选取代的-NH-。
技术方案7
第一步：通式(P1)化合物与通式(Y1)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物脱除保护基PG1和PG2，得到通式(P3)化合物；
其中：
PG1和PG2可以为常见氨基的保护基；
X选自：-O-和-S-；
Y选自：-O-和-NH-；
Z选自不存在、C1-C6亚烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基和卤素取代的C1-C6亚烷基。
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；其中，当R1包含亚甲基单元时，所述R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或所述R1的所述亚甲基单元各自独立地被选自以下组替代：-O-、-S-和任选取代的-NH-。
技术方案8
第一步：通式(P1)化合物在任选钯试剂催化条件下发生羰基插入反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物在还原条件下，得到通式(P3)化合物；
第三步：通式(P3)化合物与通式(Y1)化合物在碱性条件下发生取代反应，得到通式(P4)化合物；
第四步：通式(P4)化合物脱除保护基PG1和PG2，得到通式(P5)化合物；
其中：
PG1和PG2可以为常见氨基的保护基；
X选自：-O-和-S-；
R2选自：卤素、甲烷磺酰氧基、对甲苯磺酰氧基；
Z选自不存在、C1-C6亚烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基和卤素取代的 C1-C6亚烷基。
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；其中，当R1包含亚甲基单元时，所述R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或所述R1的所述亚甲基单元各自独立地被选自以下组替代：-O-、-S-和任选取代的-NH-。
技术方案9
第一步：通式(P1)化合物在任选钯试剂催化条件下发生Heck反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物在硼氢化及氧化条件下，得到通式(P3)化合物；
第三步：通式(P3)化合物与通式(Y1)化合物在碱性条件下发生取代反应，得到通式(P4)化合物；
第四步：通式(P4)化合物脱除保护基PG1和PG2，得到通式(P5)化合物；
其中：
PG1和PG2可以为常见氨基的保护基；
X选自：-O-和-S-；
R2选自：卤素、甲烷磺酰氧基、对甲苯磺酰氧基；
Z选自不存在、C1-C6亚烷基、亚芳基、亚杂芳基、亚环烷基、亚杂环烷基和卤素取代的C1-C6亚烷基。
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；其中，当R1 包含亚甲基单元时，所述R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或所述R1的所述亚甲基单元各自独立地被选自以下组替代：-O-、-S-和任选取代的-NH-。
技术方案10
第一步：通式(P1)化合物与氨基乙腈在加热条件下反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物与通式(Y1)化合物在任选缩合剂存在下，任选在碱性条件下反应，得到通式(P3)所示的化合物；
第六步：通式(P3)化合物与通式(Y2)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通式(P4)化合物；
其中：
B环为任选取代的芳基或杂芳基；
-B(OR)2为硼酸酯基单体，其中两个R可以连接形成杂环、杂桥环或杂螺环，且环上可任选被C1-C6烷基、芳基、杂芳基、羧基或酰氧基C1-C6烷基取代；
其中各R独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R1、R2和R3独立选自氢、氕、氘、氚、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基。
技术方案11
第一步：通式(P1)化合物与通式(Y1)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物脱除保护基PG1和PG2，得到通式(P3)化合物；
其中：
PG1可以为常见氨基的保护基；
B环为任选取代的芳基或杂芳基；
-B(OR)2为硼酸酯基单体，其中两个R可以连接形成杂环、杂桥环或杂螺环，且环上可任选被C1-C6烷基、芳基、杂芳基、羧基或酰氧基C1-C6烷基取代；
其中各R独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R1、R2和R3独立选自氢、氕、氘、氚、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基。
技术方案12
第一步：通式(P1)化合物与通式(Y1)化合物在任选碱性条件下发生反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物与通式(Y2)化合物在任选碱性条件下发生反应，得到通式(P3)化合物；
第三步：通式(P3)化合物脱除保护基PG2，得到通式(P4)化合物；
第四步：通式(P5)化合物与通式(P4)化合物在任选缩合剂存在下，任选在碱性条件下反应，得到通式(P6)所示的化合物；
第五步：通式(P6)化合物与通式(Y3)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通 式(P7)化合物；
第六步：通式(P7)化合物脱除保护基PG1，得到通式(P8)化合物；
其中：
PG1和PG2可以为常见氨基的保护基；
X独立选自卤素、甲烷磺酰氧基和对甲苯磺酰氧基；
A环和B环独立选自任选取代的芳基或杂芳基；
-B(OR)2为硼酸酯基单体，其中两个R可以连接形成杂环、杂桥环或杂螺环，且环上可任选被C1-C6烷基、芳基、杂芳基、羧基或酰氧基C1-C6烷基取代；
其中各R独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R1为任选取代的C1-C6烷基；
Z选自任选取代的C1-C6亚烷基、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚杂环烷基。
技术方案13
第一步：通式(P1)化合物与通式(Y1)化合物在任选碱性条件下发生反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物与通式(Y2)化合物在任选碱性条件下发生反应，得到通式(P3)化合物；
第三步：通式(P3)化合物脱除保护基PG2，得到通式(P4)化合物；
第四步：通式(P5)化合物与通式(P4)化合物在任选缩合剂存在下，任选在碱性条件下反应，得到通式(P6)所示的化合物；
第五步：通式(P6)化合物与通式(Y3)化合物在任选钯试剂催化条件下反应，得到通式(P6)化合物；
第六步：通式(P4)化合物脱除保护基PG1，得到通式(P7)化合物；
其中：
PG2可以为常见氨基的保护基；
X独立选自卤素、甲烷磺酰氧基和对甲苯磺酰氧基；
A环和B环独立选自任选取代的芳基或杂芳基；
-B(OR)2为硼酸酯基单体，其中两个R可以连接形成杂环、杂桥环或杂螺环，且环上可任选被C1-C6烷基、芳基、杂芳基、羧基或酰氧基C1-C6烷基取代；
其中各R独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R1为任选取代的C1-C6烷基；
Z选自任选取代的C1-C6亚烷基、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚杂环烷基。
技术方案14
第一步：通式(P1)化合物在在任选钯试剂催化条件下发生羰基插入反应，得到通式(P2)化合物；
第二步：通式(P2)化合物在任选碱性条件下，水解酯基，得到通式(P3)化合物；
第三步：通式(P3)化合物与通式(Y1)化合物在任选缩合剂存在下，任选在碱性条件下反应，得到通式(P4)所示的化合物；
第四步：通式(P4)化合物在还原条件下还原硝基，或在任选碱性或酸性条件下脱除保护基PG，得到通式(P5)化合物；
其中：
B环为任选取代的芳基或杂芳基；
Z选自任选取代的C1-C6亚烷基、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚杂环烷基；
R1独立选自氢、氕、氘、氚、氧、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基；
R2任选自硝基或-NH-PG，PG可以为常见氨基的保护基；
R任选自C1-C6烷基；
Y选自：-O-、-S-和-NR-；
R3任选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C6烷基、和卤素取代的C1-C6烷氧基。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的化合物、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
实施例1
化合物1
步骤1取500mL三口瓶，加入EA(180mL)和1A(30g，79.7mmol，1eq)，然后室温下滴加溴乙腈(5.73g，47.7mmol，0.6eq)，滴完后升温至85℃反应过夜。冷却反应液，直接过滤，用50mL EA洗滤饼，滤液旋干，得到暗红色固体粗品1B(9g)，直接投下一步，不计收率。
步骤2将上一步得到的1B(9g，21.74mmol，1eq)用甲苯(90mL)溶解(未溶清)，室温下向其中加入1C(5g，21.74mmol，1eq)，加完后室温搅拌过夜。旋干甲苯，柱层析(PE:EA＝20:1 to 10:1)，减压旋干，加PE(50mL)打浆过滤，得到浅黄色片状晶体1D(5g，收率62.5％)。
步骤3在250mL三口瓶中，将1D(5g，13.6mmol，1eq)加入到冰醋酸(50mL)中，升至内温60-65℃左右，开始缓慢分批加铁粉(3.8g，68mmol，5eq)，加完后升至内温85℃反应2小时。冷却至60℃左右，加入DCM(50mL)稀释反应液，然后垫硅藻土趁热过滤， 用DCM(100mL)洗滤饼，减压旋干滤液，得到暗红色油状物，用DCM(50mL)稀释，倾入到饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)中，DCM萃取(100mL×4)，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩。旋干后加PE:EA＝2:1(30mL)打浆过滤，得到类白色粉末1E(4.5g，收率97％)。MS-ESI:m/z 337.1[M+H]+。
步骤4在100mL单口瓶中加入4N的HCl/Dioxane(40mL)，然后加入1E(4.5g，13.4mmol，1eq)，室温搅拌过夜。LCMS检测原料反应完，直接旋干得到类白色粉末1F(4.2g，收率99％)。MS-ESI:m/z 281.0[M+H]+。
步骤5在250mL三口瓶中，加入DMF(60mL)、1F(3g，9.45mmol，1eq)，0℃下加入HBTU(4.3g，11.34mmol，1.2eq)和DIEA(4.88g，37.79mmol，4eq)，加完后搅拌10分钟，滴加二丙胺(1.86g，18.42mmol，1.95eq)，滴完后升至室温搅拌过夜。将反应液倾入到水(240mL)中，EA萃取(100mL×5)，饱和食盐水反洗(50mL×2)，硫酸钠干燥，旋干，拌硅胶过柱，得到暗红色固体1G(3g，收率87.5％)。MS-ESI:m/z 364.2[M+H]+。
步骤6在25mL三口瓶中，加入Dioxane(5mL)和水(0.5mL)的混合溶剂，加入1G(200mg，0.55mmol，1eq)、1H(121mg，0.55mmol，1eq)和无水磷酸钾(350mg，1.65mmol，3eq)，然后氩气置换2次，加入Pd(PPh3)4(50mg)，再次氩气置换2次，升至85℃反应3小时。冷却后加硫酸钠干燥反应液，除掉水分，直接薄层色谱纯化，得到暗黄色粉末1(25mg，收率12％)。
MS-ESI:m/z 377.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.36(d,J＝8.6Hz,2H),7.25(d,J＝8.2Hz,1H),7.15(d,J＝1.9Hz,1H),7.11(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.79–6.67(m,3H),6.62(d,J＝8.6Hz,2H),5.22(s,2H),3.30–3.25(m,4H),2.70(s,2H),1.63–1.48(m,4H),0.82(brs,6H).
化合物2
步骤1在25mL三口瓶中，加入Dioxane(5mL)和水(0.5mL)的混合溶剂，加入1G(200mg，0.55mmol，1eq)、2A(121mg，0.55mmol，1eq)和无水磷酸钾(350mg，1.65 mmol，3eq)，然后氩气置换2次，加入Pd(PPh3)4(50mg)，再次氩气置换2次，升至85℃反应3小时。冷却后加硫酸钠干燥反应液，除掉水，柱层析(DCM:MeOH＝100:0 to 10:1)得到浅黄色粉末2(23mg，收率11％)。
MS-ESI:m/z 378.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.04(d,J＝2.0Hz,1H),7.93(d,J＝2.5Hz,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.34–7.23(m,2H),7.16(t,J＝2.3Hz,1H),6.82(s,1H),5.43(s,2H),3.31–3.26(m,4H),2.89(s,2H),1.61–1.51(m,4H),0.83(brs,6H).
化合物3
步骤1在25mL三口瓶中，加入Dioxane(10mL)和水(1mL)的混合溶剂，加入1G(400mg，1.1mmol，1eq)、3A(151mg，1.1mmol，1eq)和无水磷酸钾(700mg，3.29mmol，3eq)，然后氩气置换2次，加入Pd(PPh3)4(100mg)，再次氩气置换2次，升至85℃反应3小时。冷却后加5g硫酸钠干燥反应液，直接拌硅胶，柱层析，得到的粗品制备纯化，得到浅黄色粉末3(45mg，收率11％)。
MS-ESI:m/z 377.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.72–7.60(m,3H),7.59–7.37(m,3H),7.37–7.12(m,1H),7.08(s,1H),3.47(brs,4H),3.36(s,2H),1.77–1.63(m,4H),0.95(brs,6H).
化合物4
步骤1将4A(2g，9.66mmol，1eq)用甲苯(40mL)溶解，室温下向其中加入三乙胺(2.44g，24.15mmol，2.5eq)、DPPA(3.19g，11.59mmol，1.2eq)、叔丁醇(7.16g，96.6mmol，10eq)，加完后升至100℃搅拌过夜。将反应液倾入到50mL水中，EA萃取(50mL×3)，硫酸钠干燥有机相，减压浓缩，拌硅胶，柱层析(PE：EA＝5:1)，得到类白色固体4B(0.6g，收率22.3％)。
步骤2将1G(2g，5.49mmol，1eq)用DCM(40mL)溶解，室温下向其中加入三乙胺(1.67g，16.47mmol，3eq)，然后滴加Boc2O(1.8g，8.24mmol，1.5eq)，加完后室温搅拌过夜。将反应液倾入到50mL水中，DCM萃取(50mL×3)，硫酸钠干燥有机相，减压浓缩，拌硅胶，柱层析(PE：EA＝5:1)，得到浅黄色固体4C(1.2g，收率49％)。
步骤3将4C(1.2g，2.58mmol，1eq)用Dioxane(20mL)溶解，加入联硼酸频那醇酯(722mg，2.84mmol，1.1eq)和AcOK(507mg，5.17mmol，2eq)，氩气置换两次，然后一次性加入Pd(dppf)Cl2(0.2g)，加完后，氩气再置换两次，升温至85℃反应3小时。LCMS检测原料反应完全，冷却至室温，直接将反应液倾入硅胶柱中，用PE:EA＝2:1冲出产物，得到黄色固体4D(600mg，收率45％)。MS-ESI:m/z 512.3[M+H]+。
步骤4将4B(359mg，1.29mmol，1.2eq)和4D(550mg，1.08mmol，1eq)加入到Dioxane(10mL)和水(1mL)的混合溶剂中，加入碳酸钠(285mg，2.69mmol，2.5eq)，氩气置换两次，然后一次性加入Pd(dppf)Cl2(100mg)，加完后，氩气再置换两次，升温至85℃反应3小时。LCMS检测原料反应完全，冷却至室温，加硫酸钠干燥反应液，直接拌硅胶柱层析纯化，得到黄色固体4E(100mg，收率15.9％)。MS-ESI:m/z 583.3[M+H]+。
步骤5将4E(100mg，0.17mmol，1eq)溶于EA(5mL)，冰水浴下加入4N的盐酸 二氧六环(1mL)，室温搅拌过夜。减压浓缩后送制备，冻干，得到黄色固体4(22mg，收率27％)。
MS-ESI:m/z 383.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.35(d,J＝1.7Hz,1H),7.30(d,J＝8.1Hz,1H),7.26(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.05(d,J＝1.5Hz,1H),6.81(s,1H),6.25(d,J＝1.6Hz,1H),4.52–4.38(m,2H),3.46–3.37(m,4H),1.73–1.60(m,4H),0.91(brs,6H).
化合物5
步骤1将5A(280mg，0.98mmol，1eq)和4D(500mg，0.98mmol，1eq)加入到Dioxane(10mL)和水(2mL)的混合溶剂中，加入碳酸钠(259mg，2.44mmol，2.5eq)，氩气置换两次，然后一次性加入Pd(dppf)Cl2(100mg)，加完后，氩气再置换两次，升温至95℃反应3小时，LCMS检测原料反应完全，冷却至室温，加硫酸钠干燥反应液，直接薄层色谱纯化，得到黄色固体5B(200mg，收率35％)。MS-ESI:m/z 591.4[M+H]+。
步骤2将5B(200mg，0.33mmol，1eq)溶于EA(5mL)，冰水浴下加入4N的盐酸二氧六环(0.5mL)，室温搅拌过夜。LCMS检测原料反应完，减压浓缩，送制备，冻干，得到黄色固体5(25mg，收率19％)。
MS-ESI:m/z 391.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.20(d,J＝7.9Hz,1H),7.05–6.96(m,2H),6.90(dd,J＝8.0,1.9Hz,1H),6.78(s,1H),6.63–6.53(m,3H),4.69–4.48(m,2H),3.85(s,2H),3.45–3.36(m,4H),1.75–1.57(m,4H),0.90(brs,6H).
化合物6
步骤1取50mL高压釜，加入甲醇(20mL)和1G(1.2g，3.29mmol，1eq)、三乙胺(1g，9.88mmol，3eq)，氩气吹扫后，加入Pd(dppf)Cl2(0.2g)，然后迅速密封，氩气置换两次，通入CO(60psi)，升温至80℃反应40小时。LCMS检测剩余少量原料，过滤，减压浓缩，得到暗红色油状粗品6A(1.5g)，直接投下一步，不计收率。MS-ESI:m/z 344.2[M+H]+。
步骤2将上一步得到的粗品6A(1.5g，4.37mmol，1eq)用DCM(30mL)溶解，室温下向其中加入三乙胺(1.33g，13.10mmol，3eq)，然后滴加Boc2O(1.43g，6.55mmol，1.5eq)，加完后室温搅拌过夜。将反应液倾入到水(50mL)中，DCM萃取(50mL×3)，硫酸钠干燥有机相，减压浓缩，柱层析(PE：EA＝5:1)得到浅黄色固体6B(0.4g，两步收率27.6％)。MS-ESI:m/z 444.3[M+H]+。
步骤3将6B(400mg，0.9mmol，1eq)加入到水(5mL)和THF(5mL)的混合溶剂中，室温下加入一水合氢氧化锂(56.77mg，1.35mmol，1.5eq)，室温搅拌过夜。TLC检测原料反应完，用饱和柠檬酸调至pH＝5，乙酸乙酯萃取反应液(10mL×2)，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，得到黄色粉末6C(350mg，收率90％)。
步骤4将6C(150mg，0.35mmol，1eq)加入到DCM(5mL)中，室温下加入HATU(159mg，0.42mmol，1.2eq)，搅拌10分钟，然后加入NMM(89mg，0.873mmol，2eq)和6D(73mg，0.35mmol，1eq)，室温搅拌过夜。TLC检测原料反应完，反应液倾入到水(15mL)中，EA萃取(30mL×4)，合并有机相，减压浓缩，直接薄层色谱纯化，得到类白色粉末6E(50mg，收率23％)。MS-ESI:m/z 620.4[M+H]+。
步骤5将6E(50mg，0.08mmol，1eq)溶于乙酸乙酯(5mL)，冰水浴下加入盐酸二氧六环(4N，0.5mL)，室温搅拌过夜。LCMS检测原料反应完，减压浓缩，直接薄层色谱纯化，得到浅黄色粉末6(24mg，收率70.8％)。
MS-ESI:m/z 420.6[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.66(d,J＝2.0Hz,1H),7.55(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,1H),7.41–7.36(m,2H),6.89(s,1H),6.78–6.71(m,2H),4.58(s,2H),3.47–3.38(m,4H),1.76–1.60(m,4H),1.07–0.77(m,6H).
化合物7
步骤1在一个100mL瓶中加入6C(300mg，0.70mmol)，在0℃下，加入DMF(10mL)，7A(174mg，0.84mmol)，DIEA(271mg，2.10mmol)和HATU(372mg，0.98mmol)，反应在室温下搅拌16小时，LCMS显示原料消失。反应加入水(100mL)，用EA(100mL×3)萃取，有机相旋干，柱层析纯化(EA:PE＝0～20％)，得到淡黄色油状液体7B(300mg，收率69％)。MS-ESI:m/z 620.4[M+H]+。
步骤2在一个100mL瓶中加入7B(300mg，0.48mmol)，在0℃下，加入DCM(8mL)和TFA(2mL)，反应在室温下搅拌16小时，LCMS显示原料消失。反应旋干，反相柱层析纯化(NH4HCO3)，得到淡黄色固体7(70mg，收率34％)。
MS-ESI:m/z 420.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),7.60(d,J＝1.8Hz,1H),7.43(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),7.14(t,J＝2.0Hz,1H),6.94(t,J＝7.9Hz,1H),6.91–6.81(m,3H),6.77(s,1H),6.33–6.26(m,1H),5.04(s,2H),3.31–3.26(m,4H),2.71(s,2H),1.64–1.49(m,4H),0.83(brs,6H).
化合物8
步骤1将8A(1g，8.4mmol)溶于DCM(20mL)中，加入DMAP(102mg，0.84mmol)和Boc2O(2.2g，10.1mmol)，室温搅拌过夜。浓缩后柱层析纯化(PE:EA＝1:1)得到白色固体8B(1.2g，收率65％，纯度95％)。MS-ESI:m/z 220.0[M+H]+。
步骤2将8B(500mg，2.27mmol)溶于MeOH/NH3 .H2O(5mL，v/v＝4/1)中，室温下加入Raney Ni(100mg)，抽换H2三次，室温搅拌过夜。过滤浓缩后，得到绿色固体8C(450mg，收率85％，纯度84％)。MS-ESI:m/z 224.2[M+H]+。
步骤1将6C(300mg，0.7mmol)和8C(156mg，0.7mmol)溶于DMF(3mL)中，加入DIEA(271mg，2.1mmol)和HATU(320mg，0.84mmol)，室温搅拌过夜。反应液直接用HPLC(MeCN/H2O)制备得到淡黄色固体8D(200mg，收率45％，纯度85％)。MS-ESI:m/z 635.4[M+H]+。
步骤4将8D(200mg，0.3mmol)溶于DCM(5mL)中，加入TFA(180mg，1.5mmol)，室温搅拌3小时。加水稀释，用NaHCO3调pH至8～9，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×3)。收集有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。用HPLC(MeCN/H2O)制备得到黄色固体8(52.8mg，收率35％，纯度95.23％)。
MS-ESI:m/z 435.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.90–7.77(m,2H),7.64–7.58(m,1H),7.52–7.44(m,1H),7.40(dd,J＝8.1,3.3Hz,1H),7.10(s,1H),6.90–6.84(m,1H),4.55–4.47(m,2H),3.47–3.36(m,4H),3.34–3.32(m,2H),1.78–1.56(m,4H),1.11–0.71(m,6H).
化合物9
步骤1将6C(300mg，0.7mmol)溶于DMF(3mL)中，加入9A(155mg，0.7mmol)，DIEA(211mg，2.1mmol)和HATU(320mg，0.84mmol)，室温搅拌过夜。反应液直接用HPLC(MeCN/H2O)制备得到白色固体9B(250mg，收率55％，纯度90％)。MS-ESI:m/z 634.4[M+H]+。
步骤2将9B(250mg，0.4mmol)溶于DCM(5mL)中，加入TFA(135mg，1.2mmol)，室温反应3小时。加水稀释，用NaHCO3调pH至8～9，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×3)。 收集有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。用HPLC(MeCN/H2O)制备得到淡黄色固体9(26.3mg，收率15％，纯度99.59％)。
MS-ESI:m/z 434.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.61(d,J＝1.8Hz,1H),7.48(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),7.39(d,J＝8.2Hz,1H),7.06(t,J＝7.7Hz,1H),6.87(s,1H),6.74(t,J＝2.0Hz,1H),6.71–6.66(m,1H),6.62(ddd,J＝8.0,2.4,1.0Hz,1H),4.49(s,2H),3.46–3.37(m,4H),1.76–1.57(m,4H),1.11–0.72(m,6H).
化合物10
步骤1将10A(5g，22.60mmol，1eq)加入到DCM(100mL)中，室温下加入正丙胺(4.01g，67.80mmol，3eq)，加完后室温搅拌过夜。保持室温下，缓慢加氰基硼氢化钠(2.84g，45.20mmol，2eq)，加完后室温搅拌过夜。将反应液倾入到100mL水中，分液，水相用DCM萃取(100mL×2)，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，拌硅胶过层析柱(DCM:MeOH＝50:1 to 10:1)，得到白色固体10B(3g，收率为50.3％)。
步骤2将1F(1g，3.15mmol，1eq)用DMF(20mL)溶解，降温至0℃左右向其中加入HBTU(1.43g，3.78mmol，1.2eq)和DIEA(1.63g，12.60mmol，4eq)，保持0℃搅拌10分钟，向上述反应液中加入10B(1g，3.78mmol，1.2eq)，加完后室温搅拌过夜。将反应液倾入到水(60mL)中，EA萃取(50mL×5)，合并有机相，饱和食盐水反洗(50mL×2)， 硫酸钠干燥，减压浓缩，拌硅胶，柱层析(DCM:MeOH＝20:1 to 10:1)，减压浓缩，得到黄色固体10C(550mg，收率30％)。MS-ESI:m/z 527.2[M+H]+。
步骤3将10C(550mg，1.04mmol，1eq)加入到Dioxane(20mL)和水(2mL)的混合溶剂中，加入10D(243mg，1.04mmol，1eq)和无水磷酸钾(664mg，3.13mmol，3eq)，氩气置换2次后，加入Pd(PPh3)4(110mg)，氩气置换2次，升温至90℃反应3小时。LCMS检测原料反应完全，将反应液倾入到50mL水中，EA萃取(50mL×3)，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析(PE:EA＝2:1 to 0:1)，得到白色固体10E(200mg，收率34.7％)。MS-ESI:m/z 554.4[M+H]+。
步骤4将10E(200mg，0.36mmol，1eq)加入到甲醇(10mL)中，在室温下缓慢分批加入硼氢化钠(41mg，1.08mmol，3eq)，加完后保持室温反应2小时。LCMS检测原料反应完，将反应液用饱和氯化铵水溶液(5mL)淬灭，减压浓缩除去溶剂，直接薄层色谱纯化，得到白色固体10F(160mg，收率80％)。MS-ESI:m/z 556.3[M+H]+。
步骤5将10F(160mg，0.28mmol，1eq)溶于EA(5mL)，冰水浴下加入4N的盐酸二氧六环(0.5mL)，室温搅拌过夜。LCMS检测原料反应完，减压浓缩，送制备，冻干，得到白色粉末10(30mg，收率23％)。
MS-ESI:m/z 456.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.88(d,J＝2.2Hz,1H),8.66(d,J＝1.9Hz,1H),8.34(s,1H),7.84–7.56(m,3H),7.56–7.18(m,4H),7.16(s,1H),4.81(s,2H),4.78(s,2H),3.55–3.45(m,2H),3.45–3.33(m,2H),1.76–1.63(m,2H),0.92(s,3H).
化合物11
步骤1将11A(1g，4.97mmol，1eq)用DMF(20mL)溶解，室温下向其中加入DIEA (1.93g，14.92mmol，3eq)、HATU(2.08g，5.47mmol，1.1eq)，加完后室温下搅拌5分钟，然后加入11B(0.434g，4.97mmol，1eq)，加完后室温搅拌过夜。将反应液倾入到60mL水中，EA萃取(50mL×3)，硫酸钠干燥有机相，减压浓缩，拌硅胶，柱层析(PE:EA＝5:1)，得到白色固体11C(1g，收率74.6％)。MS-ESI:m/z 270.0[M+H]+。
步骤2将11C(0.9g，3.33mmol，1eq)用Dioxane(20mL)溶解，加入联硼酸频那醇酯(931mg，3.67mmol，1.1eq)和AcOK(654mg，6.66mmol，2eq)，氩气置换两次，然后一次性加入Pd(dppf)Cl2(0.2g)，加完后，氩气再置换两次，升温至85℃反应3小时。LCMS检测原料反应完全，冷却至室温，直接将反应液上样，硅胶柱(PE:EA＝2:1)纯化，得到浅黄色固体11D(300mg，收率28.3％)。MS-ESI:m/z 318.3[M+H]+。
步骤3将10C(300mg，0.569mmol，1eq)和11D(180.4mg，0.569mmol，1eq)加入到Dioxane(10mL)和水(1mL)的混合溶剂中，加入碳酸钠(150.71mg，1.42mmol，2.5eq)，氩气置换两次，然后一次性加入Pd(dppf)Cl2(50mg)，加完后，氩气再置换两次，升温至85℃反应3小时。LCMS检测原料反应完全，冷却至室温，加硫酸钠干燥反应液，直接拌硅胶柱层析纯化，得到黄色固体11E(100mg，收率27.6％)。MS-ESI:m/z 638.4[M+H]+。
步骤4将11E(100mg，0.157mmol，1eq)溶于EA(5mL)，冰水浴下加入4N的盐酸二氧六环(1mL)，室温搅拌过夜。LCMS检测原料反应完，减压浓缩，送制备，冻干，得到黄色固体11(30mg，收率35.7％)。
MS-ESI:m/z 538.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.80(d,J＝7.9Hz,2H),7.76–7.66(m,4H),7.66–7.30(m,3H),7.25(s,2H),7.14(s,1H),4.78(s,2H),4.45(d,J＝47.8Hz,1H),3.84–3.58(m,3H),3.58–3.32(m,5H),2.19–1.90(m,2H),1.75–1.63(m,2H),0.91(s,3H).
化合物12
步骤1将12A(1g，4.69mmol，1eq)用Dioxane(20mL)溶解，加入联硼酸频那醇酯(1.31g，5.16mmol，1.1eq)和AcOK(921.4mg，9.39mmol，2eq)，氩气置换两次，然后一次性加入Pd(dppf)Cl2(0.1g)，加完后，氩气再置换两次，升温至85℃反应3小时。LCMS检测原料反应完全，冷却至室温，直接将反应液上样，硅胶柱(PE:EA＝10:1)纯化，得到白色固体12B(300mg，收率24.6％)。MS-ESI:m/z 261.2[M+H]+。
步骤2将10C(250mg，0.474mmol，1eq)和12B(247mg，0.948mmol，2eq)加入到Dioxane(10mL)和水(1mL)的混合溶剂中，加入磷酸钾(302mg，1.42mmol，3eq)，氩气置换两次，然后一次性加入Pd(dppf)Cl2(50mg)，加完后，氩气再置换两次，升温至85℃反应3小时。LCMS检测原料反应完全，冷却至室温，加硫酸钠干燥反应液，直接拌硅胶柱层析纯化，得到黄色固体12C(100mg，收率36.4％)。MS-ESI:m/z 581.2[M+H]+。
步骤3将12C(100mg，0.172mmol，1eq)溶于EA(5mL)，冰水浴下加入4N的盐酸二氧六环(1mL)，室温搅拌过夜。LCMS检测原料反应完，减压浓缩，送制备，冻干，得到黄色固体12(23mg，收率28％)。
MS-ESI:m/z 481.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.17(s,1H),8.10(d,J＝8.1Hz,1H),7.84–7.70(m,3H),7.70–7.27(m,3H),7.27–7.06(m,3H),5.47(s,2H),4.77(s,2H),3.54–3.44(m,2H),3.44–3.32(m,2H),1.77–1.64(m,2H),0.92(s,3H).
化合物13
步骤1将13A(5g，22.60mmol，1eq)加入到DCM(100mL)中，室温下加入正丙胺(4.01g，67.80mmol，3eq)，加完后室温搅拌过夜。保持室温下，缓慢加氰基硼氢化钠(2.84g，45.20mmol，2eq)，加完后室温搅拌过夜。将反应液倾入到100mL水中，分液，水相用DCM萃取(100mL×2)，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，拌硅胶过层析柱(DCM:MeOH＝50:1-10:1)，得到白色固体13B(1.5g，收率为25.1％)。MS-ESI:m/z 265.2[M+H]+。
步骤2将1F(2g，6.30mmol，1eq)用DMF(40mL)溶解，降温至0℃左右向其中加入HBTU(2.86g，7.56mmol，1.2eq)和DIEA(3.26g，25.20mmol，4eq)，保持0℃搅拌10分钟，向上述反应液中加入13B(2g，7.56mmol，1.2eq)，加完后室温搅拌过夜。LCMS检测原料1F反应完，将反应液倾入到水(120mL)中，EA萃取(100mL×5)，合并有机相，饱和食盐水反洗(100mL×2)，硫酸钠干燥，减压浓缩，拌硅胶，柱层析(DCM:MeOH＝20:1-10:1)，减压浓缩，得到黄色固体13C(1.2g，收率36.1％)。MS-ESI:m/z 527.2[M+H]+。
步骤3将13C(1.2g，2.28mmol，1eq)加入到Dioxane(40mL)和水(4mL)的混合溶剂中，加入10D(530.3mg，2.28mmol，1eq)和无水磷酸钾(1.45g，6.83mmol，3eq)，氩气置换2次后，加入Pd(PPh3)4(220mg)，氩气置换2次，升温至90℃反应3小时。LCMS检测原料反应完全，将反应液倾入到100mL水中，EA萃取(100mL×3)，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析(PE:EA＝2:1–0:1)，得到白色固体13D(250mg，收率19.9％)。MS-ESI:m/z 554.3[M+H]+。
步骤4将13D(250mg，0.45mmol，1eq)加入到甲醇(10mL)中，在室温下缓慢分批加入硼氢化钠(51.3mg，1.35mmol，3eq)，加完后保持室温反应2小时。将反应液用5mL饱和氯化铵水溶液淬灭，减压浓缩除去溶剂，直接薄层色谱纯化，得到白色固体13E(124mg，收率49.4％)。MS-ESI:m/z 556.2[M+H]+。
步骤5将13E(124mg，0.22mmol，1eq)溶于EA(5mL)，冰水浴下加入4N的盐酸 二氧六环(0.5mL)，室温搅拌过夜。LCMS检测原料反应完，减压浓缩，用饱和NaHCO3溶液调节pH＝8，用EA(10ml×3)，浓缩后拌样过柱(DCM:MeOH＝30:1–10:1)，冻干，得到白色粉末13(25mg，收率24.6％)。
MS-ESI:m/z 456.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(d,J＝2.0Hz,1H),8.50(s,1H),7.99(s,1H),7.32(s,1H),7.28–7.26(d,J＝7.7Hz,1H),6.99–6.97(d,J＝7.6Hz,1H),6.86(s,2H),6.47–6.45(d,J＝8.1Hz,3H),5.08(s,2H),4.61(s,2H),4.48(s,2H),3.32–3.21(m,2H),2.79(s,2H),1.56–1.52(m,2H),1.23(s,1H),0.85–0.81(m,3H).
化合物14
步骤1室温下，向一个250毫升三口瓶中加入14A(4.5g，20.2mmol)和丙酸(100mL)。将反应液加热至125℃，控制内温在120-130℃逐滴加入HNO3(3.2g，50.8mmol)。反应在125℃搅拌1小时，LCMS显示反应完成。将反应液冷却至室温，缓慢倒入乙醇中(500mL)，过滤，滤饼依次用乙醇(100mL)，水(100mL)，乙醇(100mL)淋洗。收集滤饼烘干，得到黄色固体14B(3g，收率55.6％)。MS-ESI:m/z 269.0[M+H]+。
步骤2室温下，向一个250mL单口瓶中加入14B(3g，11.2mmol)，加入EtOH(50mL)和H2O(10mL)溶解后，依次加入NH4Cl(1.8g，33.6mmol)和铁粉(3.1g，56mmol)。反应在80℃下搅拌2小时，LCMS显示反应完成。反应液趁热过滤，滤液加入乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×3)；收集有机相，用饱 和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗品经柱层析纯化(PE/EA＝10:1 to 3:1)得到黄色固体14C(2g，收率75％)。MS-ESI:m/z 241.0[M+H]+。
步骤3向一个100mL三口瓶中加入14C(2g，8.4mmol)、DCM(20mL)和TEA(1.3g，12.6mmol)。冰浴下，缓慢加入正戊酰氯(1.2g，10.1mmol)，反应在25℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完成，将反应液倒入水中(20mL)，EA萃取(50mL×3)，收集有机相用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩后，粗品经柱层析(PE/EA＝3/1)纯化，分离得黄色油状液体14D(1.5g，收率55.6％)。MS-ESI:m/z 323.0[M+H]+。
步骤4室温下，向一个250mL单口瓶中加入14D(1.5g，4.7mmol)和吡啶(50mL)，再加入P2S5(9g，47mmol)。反应在120℃下搅拌过夜。反应液旋干后倒入水中(100mL)，EA萃取(3×100mL)，收集有机相用饱和食盐水(100mL)，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩后，粗品经柱层析纯化(PE/EA＝10/1)，得黄色固体14E(1g，收率66.7％)。MS-ESI:m/z 321.0[M+H]+。
步骤5室温下，向一个250mL单口瓶中加入14E(2.6g，8.1mmol)和CHCl3(50mL)，在冰浴下缓慢加入m-CPBA(3.3g，16.2mmol)，反应在25℃下搅拌过夜。反应液倒入DCM中(200mL)，依次用5％硫代硫酸钠(50mL)，饱和碳酸氢钠(50mL)，饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩后，粗品经层析柱纯化(PE:EA＝3:1)，得黄色油状液体14F(2g，收率73.5％)。MS-ESI:m/z 337.0[M+H]+。
步骤6在一个100mL三口瓶中加入14F(2g，5.95mmol)，在冰浴下，缓慢加入POCl3(27g，178.5mmol)。保持内温在15℃，缓慢滴加DIEA(2.3g，17.85mmol)，反应在100℃下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，将反应液降温至室温，减压旋干溶剂后缓慢倒入冰水(100mL)中，用碳酸钾固体将pH调至9，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×3)。收集有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，旋干后，柱层析纯化(PE/EA＝10:1)，得黄色油状液体14G(1.8g，收率85.7％)。MS-ESI:m/z 355.0[M+H]+。
步骤7室温下，向一个100mL单口瓶中加入14G(1.8g，5.1mmol)和甲苯(20mL)，室温下依次加入14H(8.5g，51mmol)和2-Chlorobenzoic acid(799mg，5.1mmol)。反应在120℃下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，减压旋干溶剂，加入100mL水，EA萃取(3×100mL)，收集有机相用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩后，粗品经反相柱层析纯化(中性方法分离体系)，得黄色固体14I(2g，收率80％)。MS-ESI:m/z 486.1[M+H]+。
步骤8室温下，向一个100mL单口瓶中加入14I(0.5g，1.03mmol)和DMF(20mL)， 室温下依次加入14J(377mg，2.06mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(75mg，0.103mmol)和Cu2O(442mg，3.09mmol)。反应在110℃及N2保护下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，往反应液加入100mL水，EA萃取(100mL×3)，收集有机相用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩后，粗品经柱层析(PE:EA＝3:1)分离得黄色油状液体14K(0.3g，收率49.5％)。MS-ESI:m/z 589.3[M+H]+。
步骤9室温下，向一个100mL单口瓶中加入14K(0.3g，0.51mmol)和THF(20mL)，室温下加入Pd/C(50mg)。H2置换3次后，反应在25℃下搅拌过夜。LCMS显示反应完成，反应液经硅藻土过滤，THF淋洗(3×20mL)，滤液减压旋干，粗品经层析柱(PE/EA＝5/1)分离得黄色油状液体14L(0.2g，收率66.7％)。MS-ESI:m/z 593.3[M+H]+。
步骤10室温下，向一个100mL单口瓶中加入14L(200mg，0.34mmol)，冰浴下缓慢加入TFA(5mL)。反应在80℃下搅拌15分钟。LCMS显示反应完成，减压旋干溶剂，反相柱层析纯化(中性方法分离体系)，得白色固体14(77.6mg，收率66.9％)
MS-ESI:m/z 343.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.57(d,J＝8.3Hz,1H),7.49–7.42(m,1H),7.18(d,J＝7.2Hz,1H),3.23–3.15(m,2H),3.11–3.02(m,2H),2.72(t,J＝6.7Hz,2H),1.97–1.85(m,2H),1.76–1.65(m,2H),1.64–1.46(m,6H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物15
步骤1将15A(5g，23.14mmol，1eq)用乙腈(100mL)溶解，0℃下向其中加入N- 羟基氨基甲酸叔丁酯15B(4.01g，30.09mmol，1.3eq)，然后缓慢滴加DBU(3.52g，23.14mmol，1eq)，加完后升至室温下搅拌3小时。LCMS检测15A反应完，减压浓缩，然后加入饱和碳酸钾溶液(100mL)，DCM萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水(50mL)反洗一次，硫酸钠干燥有机相，减压浓缩，拌硅胶，柱层析(PE：EA＝5:1)得到白色固体15C(4.5g，收率72.5％)。MS-ESI:m/z 291.0[M+Na]+。
步骤2将15C(4.5g，16.77mmol，1eq)用DMF(50mL)溶解，冷却至0℃，一次性加入NaH(671mg，16.77mmol，1eq，60％)，保持0℃搅拌10分钟，然后滴入碘丙烷(3.14g，18.45mmol，1.1eq)，加完后，升至室温反应过夜。LCMS检测原料15C反应完全，将反应液倾入冰水(150mL)中，EA萃取(100mL×3)，合并有机相，用10％的柠檬酸水溶液(100mL)洗一次，饱和碳酸氢钠(100mL)洗一次，饱和食盐水(100mL)反洗一次，硫酸钠干燥有机相，减压浓缩，拌硅胶，柱层析(PE：EA＝5:1)得到黄色固体15D(4.5g，收率86.4％)。MS-ESI:m/z 333.2[M+Na]+。
步骤3将15D(4.5g，14.52mmol，1eq)溶于EA(50mL)，冰水浴下加入4N的盐酸二氧六环(50mL)，室温搅拌过夜。LCMS检测15D反应完，直接过滤，EA(100mL)淋洗滤饼，将滤饼快速转移到瓶中，真空干燥得到黄色固体15E(2.5g，收率83.3％)。MS-ESI:m/z 211.2[M+H]+。
步骤2步骤4将1F(3g，9.45mmol，1eq)和15E(2.5g，10.39mmol，1.1eq)加入到DMA(30mL)和DCM(30mL)的混合溶剂中，氩气置换两次，然后一次性加入EDCI(7.24g，37.79mmol，4eq)，加完后，氩气再置换两次，室温反应过夜。LCMS检测原料反应完全，将反应液倾入到100mL水中，DCM萃取(100mL×3)，合并有机相，饱和食盐水(100mL)反洗，加硫酸钠干燥有机相，旋干，拌硅胶柱层析得到黄色固体15F(1.9g，收率42.5％)。MS-ESI:m/z 473.1[M+H]+。
步骤5将15F(1.9g，4.01mmol，1eq)加入到Dioxane(50mL)和水(5mL)的混合溶剂中，加入10D(936mg，4.01mmol，1eq)和无水磷酸钾(2.56g，12.04mmol，3eq)，氩气置换2次后，加入Pd(PPh3)4(200mg)，氩气置换2次，升温至85℃反应3小时。LCMS检测原料反应完全，将反应液倾入到水(150mL)中，EA萃取(150mL×3)，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析(DCM：MeOH＝20：1)得到暗红色固体15G(900mg，收率45％)。MS-ESI:m/z 500.2[M+H]+。
步骤6将15G(700mg，1.4mmol，1eq)加入到甲醇(20mL)中，在室温下缓慢分批 加入硼氢化钠(32mg，0.84mmol，0.6eq)，加完后保持室温反应2小时。将反应液用饱和氯化铵水溶液(50mL)萃灭，DCM萃取(50mL×3)，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析(DCM：MeOH＝20：1)得到浅黄色固体15H(200mg，收率22.2％)。MS-ESI:m/z 502.2[M+H]+。
步骤7将15H(200mg，0.31mmol，1eq)溶于甲醇(10mL)，加入Raney Ni(0.1g)，氢气置换两次，通氢气室温下搅拌3小时。LCMS检测15H反应完，垫硅藻土过滤，旋干，加石油醚(10mL)和甲醇(2mL)打浆，过滤，得到黄色固体15(28mg，收率14.9％)。
MS-ESI:m/z 472.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(d,J＝2.2Hz,1H),8.52(d,J＝2.0Hz,1H),8.02(s,1H),7.41(d,J＝8.2Hz,1H),7.36(d,J＝1.9Hz,1H),7.29(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),7.09(s,1H),6.89(d,J＝8.1Hz,2H),6.83(s,2H),6.41(d,J＝8.2Hz,2H),5.37(t,J＝5.8Hz,1H),5.16(s,2H),4.69–4.52(m,4H),3.63(t,J＝7.0Hz,2H),2.77(s,2H),1.71–1.58(m,2H),0.90(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物16
步骤1室温下，向一个100mL单口瓶中加入16A(0.5g，1.03mmol)和DMF(20mL)，室温下依次加入16B(348mg，2.06mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(75mg，0.103mmol)和Cu2O(442mg，3.09mmol)，在110℃及N2保护下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液加入100mL水，EA萃取(3×100mL)，收集有机相用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析柱(PE/EA＝3/1)分离得黄色油状液体16C(0.3g，收率：50.8％)。MS-ESI:m/z 575.3[M+H]+。
步骤2室温下，向一个100mL单口瓶中加入16C(0.3g，0.52mmol)和THF(20mL)，室温下加入Pd/C(50mg)，H2置换3次后，在25℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液经硅藻土过滤，THF淋洗(3×20mL)，滤液减压旋干，粗品经层析柱(PE/EA＝5/1)分离得黄色油状液体16D(0.2g，收率：66.2％)。MS-ESI:m/z 579.4[M+H]+。
步骤3室温下，向一个100mL单口瓶中加入16D(200mg，0.35mmol)，冰浴下缓慢加入TFA(5mL)，在80℃下搅拌15分钟，LCMS显示反应完成。减压旋干溶剂，反相柱层 析纯化(中性方法分离体系)得白色固体16(59.4mg，收率：52.6％)。MS-ESI:m/z 329.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.58(dd,J＝8.4,1.3Hz,1H),7.47(dd,J＝8.4,7.2Hz,1H),7.22(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),3.24–3.17(m,2H),3.17–3.10(m,2H),2.88–2.81(m,2H),1.97–1.87(m,2H),1.83–1.67(m,4H),1.58–1.46(m,2H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物17
步骤1室温下，向一个100mL单口瓶中加入17A(0.5g，1.03mmol)和DMF(20mL)，室温下依次加入17B(203mg，2.06mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(75mg，0.103mmol)和Cu2O(442mg，3.09mmol)，在110℃及N2保护下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液加入100mL水，EA萃取(3×100mL)，收集有机相用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析柱(PE/EA＝3/1)分离得黄色油状液体17C(0.3g，收率：48.4％)。MS-ESI:m/z 603.4[M+H]+。
步骤2室温下，向一个100mL单口瓶中加入17C(0.3g，0.50mmol)和THF(20mL)，室温下加入Pd/C(50mg)，H2置换3次后，在25℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液经硅藻土过滤，THF淋洗(3×20mL)，滤液减压旋干，粗品经层析柱(PE/EA＝5/1)分离得黄色油状液体17D(0.2g，收率：66.2％)。MS-ESI:m/z 607.4[M+H]+。
步骤3室温下，向一个100mL单口瓶中加入17D(200mg，0.33mmol)，冰浴下缓慢加入TFA(5mL)，在80℃下搅拌15分钟，LCMS显示反应完成。减压旋干，反相柱层析纯化(中性方法分离体系)得白色固体17(51.4mg，收率：43.7％)。MS-ESI:m/z 357.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.58(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.46(dd,J＝8.4,7.2Hz,1H),7.20(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),3.25–3.18(m,2H),3.13–3.07(m,2H),2.78–2.71(m,2H),1.98–1.87(m,2H),1.78–1.67(m,2H),1.62–1.39(m,8H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物18
步骤1室温下，向一个250mL三口瓶中加入18A(10g，44.8mmol)和丙酸(200mL)，将反应液加热至125℃，控制内温在120-130℃逐滴加入HNO3(8.6g，136.6mmol)，在125℃搅拌1小时，LCMS显示反应完成。将反应液冷却至室温，缓慢倒入乙醇中(200mL)，过滤，滤饼依次用乙醇(100mL)，水(100mL)，乙醇(100mL)淋洗。收集滤饼烘干，得黄色固体18B(7g，收率：58％)。MS-ESI:m/z 269.0[M+H]+。
步骤2室温下，向一个250mL单口瓶中加入18B(7g，26.1mmol)，加入EtOH(100mL)和H2O(20mL)溶解后，依次加入NH4Cl(4.23g，78.3mmol)和Fe粉(7.31g，130.5mmol)，在80℃下搅拌2小时，LCMS显示反应完成。反应液趁热过滤，滤液加入乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(3×100mL)，收集有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗品经柱层析纯化(DCM/MeOH＝10:1)得黄色固体18C(4.5g，收率：72％)。MS-ESI:m/z 239.0[M+H]+。
步骤3向一个250mL三口瓶中加入18C(2.2g，9.2mmol)和DCM(100mL)再加入TEA(1.4g，13.8mmol)。在冰浴下，缓慢加入18D(1.35g，11.04mmol)，在25℃下搅拌1小时，LCMS显示反应完成。将反应液倒入水中(20mL)，EA萃取(3×50mL)，收集有机相用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析柱(PE/EA＝3/1)分离得黄色固体18E(1.6g，收率：53.5％)。MS-ESI:m/z 325.0[M+H]+。
步骤4室温下，向一个250mL单口瓶中加入18E(2.8g，8.6mmol)和吡啶(120mL)，再加入P2S5(16.4g，86mmol)，在120℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液旋干溶剂后倒入水中(100mL)，EA萃取(3×100mL)，收集有机相用饱和食盐水(100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析分离(PE/EA＝10/1)，得黄色固体18F(0.5g，收率： 18.5％)。MS-ESI:m/z 323.0[M+H]+。
步骤5室温下，向一个250mL单口瓶中加入18F(0.5g，1.55mmol)和CHCl3(10mL)，在冰浴下缓慢加入m-CPBA(0.53g，3.1mmol)，在25℃下搅拌2小时，LCMS显示反应完成。将反应液倒入DCM中(50mL)，依次用5％硫代硫酸钠(50mL)，饱和碳酸氢钠(50mL)，饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析柱(PE/EA＝3/1)分离得黄色油状液体18G(0.43g，收率：82.6％)。MS-ESI:m/z 339.0[M+H]+。
步骤6在一个50mL单口瓶中加入18G(0.43g，1.27mmol)，在冰浴下，缓慢加入POCl3(5.1g，33.1mmol)。保持内温在15℃，缓慢滴加DIPEA(0.43g，3.31mmol)，在100℃下搅拌2小时，LCMS显示反应完成。反应液降温至室温，减压旋干溶剂后缓慢倒入冰水(50mL)中，用碳酸钾固体将pH调制至9，水相用乙酸乙酯萃取(3×30mL)。收集有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化(PE/EA＝10:1)，得黄色油18H(0.32g，收率：71.1％)。MS-ESI:m/z 357.0[M+H]+。
步骤7室温下，向一个50mL单口瓶中加入18H(0.32g，0.9mmol)和甲苯(5mL)，室温下依次加入2,4-二甲氧基苄胺(1.5g，9mmol)和2-氯苯甲酸(0.14g，0.9mmol)，在120℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。减压旋干溶剂，加入10mL水，EA萃取(3×30mL)，收集有机相用饱和食盐水(30mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经反相柱层析纯化(中性方法分离体系)柱分离得黄色固体18I(0.14g，收率：32.5％)。MS-ESI:m/z 488.0[M+H]+。
步骤8室温下，向一个50mL单口瓶中加入18I(0.14g，0.28mmol)和DMF(5mL)，室温下依次加入18J(0.102g，0.56mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(0.02g，0.028mmol)和Cu2O(0.12g，0.84mmol)，在110℃及N2保护下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液加入20mL水，EA萃取(3×30mL)，收集有机相用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析柱(PE/EA＝3/1)分离得黄色油状液体18K(0.12g，收率：70.5％)。MS-ESI:m/z 591.2[M+H]+。
步骤9室温下，向一个50mL单口瓶中加入18K(0.12g，0.2mmol)和THF(10mL)，室温下加入Pd/C(50mg)。H2置换3次后，在25℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液经硅藻土过滤，THF淋洗(3×20mL)，滤液减压旋干，粗品经层析柱(PE/EA＝5/1)分离得黄色油状液体18L(0.1g，收率：83.3％)。MS-ESI:m/z 595.3[M+H]+。
步骤10室温下，向一个50mL单口瓶中加入18L(0.1g，0.17mmol)，冰浴下缓慢加入TFA(3mL)，在80℃下搅拌15分钟，LCMS显示反应完成。减压旋干溶剂，反相柱层析 纯化(中性方法分离体系)得白色固体18(18mg，收率：31.1％)。MS-ESI:m/z 345.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.59(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.49(dd,J＝8.4,7.2Hz,1H),7.23(dd,J＝7.2,1.3Hz,1H),4.98(s,2H),3.77(q,J＝7.0Hz,2H),3.19–3.11(m,2H),2.78(t,J＝6.9Hz,2H),1.82–1.70(m,2H),1.69–1.55(m,4H),1.33(t,J＝7.0Hz,3H).
化合物19
步骤1向一个250mL三口瓶中加入19A(2g，8.4mmol)和DCM(100mL)再加入TEA(1.27g，12.6mmol)。冰浴下，缓慢加入19B(1.21g，10.08mmol)，在25℃下搅拌1小时，LCMS显示反应完成。将反应液倒入水中(20mL)，EA萃取(3×50mL)，收集有机相用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析柱(PE/EA＝3/1)分离得黄色固体19C(1.4g，收率：51.8％)。MS-ESI:m/z 323.0[M+H]+。
步骤2室温下，向一个100mL单口瓶中加入19C(1.4g，4.3mmol)和吡啶(60mL)，再加入P2O5(6.1g，43mmol)，在120℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。将反应液旋干溶剂后倒入水中(100mL)，EA萃取(3×50mL)，收集有机相用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析分离(PE/EA＝10/1)得黄色固体19D(0.5g，收率：37.8％)。MS-ESI:m/z 305.1[M+H]+。
步骤3室温下，向一个50mL单口瓶中加入19D(0.5g，1.6mmol)和CHCl3(10mL)，在冰浴下缓慢加入m-CPBA(0.65g，3.2mmol)，在25℃下搅拌2小时，LCMS显示反应完 成。将反应液倒入DCM中(50mL)，依次用5％硫代硫酸钠(50mL)，饱和碳酸氢钠(50mL)，饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析柱(PE/EA＝3/1)分离得黄色油状液体19E(0.4g，收率：76％。MS-ESI:m/z 321.0[M+H]+。
步骤4在一个250mL三口瓶中加入19E(0.4g，1.25mmol)，在冰浴下，缓慢加入POCl3(5.75g，37.5mmol)。保持内温在15℃，缓慢滴加DIPEA(0.48g，3.75mmol)，在100℃下搅拌2小时，LCMS显示反应完成。反应液降温至室温，减压旋干溶剂后缓慢倒入冰水(50mL)中，用碳酸钾固体将pH调制至9，水相用乙酸乙酯萃取(3×30mL)。收集有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化(PE/EA＝10:1)，得黄色油状液体19F(0.35g，收率：83.3％)。MS-ESI:m/z 339.0[M+H]+。
步骤5室温下，向一个50mL单口瓶中加入19F(0.35g，1.04mmol)和甲苯(5mL)，室温下依次加入2,4-二甲氧基苄胺(1.74g，10.4mmol)和2-氯苯甲酸(0.16g，1.04mmol)，在120℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。减压旋干溶剂，加入10mL水，EA萃取(3×30mL)，收集有机相用饱和食盐水(30mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经反相柱层析纯化(中性方法分离体系)柱分离得黄色固体19G(0.2g，收率41.1％)。MS-ESI:m/z 470.0[M+H]+。
步骤6室温下，向一个50mL单口瓶中加入19G(0.2g，0.43mmol)和DMF(5mL)，室温下依次加入19H(0.16g，0.86mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(0.03g，0.043mmol)和Cu2O(0.18g，1.29mmol)，在110℃及N2保护下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液加入20mL水，EA萃取(3×30mL)，收集有机相用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析柱(PE/EA＝3/1)分离得黄色油状液体19I(0.12g，收率49.4％)。MS-ESI:m/z 573.4[M+H]+。
步骤7室温下，向一个50mL单口瓶中加入19I(0.12g，0.21mmol)和THF(10mL)，室温下加入Pd/C(50mg)。H2置换3次后，在25℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液经硅藻土过滤，THF淋洗(3×20mL)，滤液减压旋干，粗品经层析柱(PE/EA＝5/1)分离得黄色油状液体19J(96mg，收率：80％)。MS-ESI:m/z 577.4[M+H]+。
步骤8室温下，向一个50mL单口瓶中加入19J(0.096g，0.17mmol)，冰浴下缓慢加入TFA(3mL)，在80℃下搅拌15分钟，LCMS显示反应完成。减压旋干溶剂，反相柱层析纯化(中性方法分离体系)得白色固体19(22mg，收率：40.5％)。MS-ESI:m/z 327.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.54(dd,J＝8.5,1.2Hz,1H),7.45(dd,J＝8.5,7.1Hz, 1H),7.16(d,J＝7.1Hz,1H),3.25–3.17(m,2H),3.08(t,J＝7.4Hz,2H),2.69(t,J＝7.0Hz,2H),1.99–1.88(m,2H),1.79–1.68(m,2H),1.64–1.44(m,6H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物20
步骤1室温下，向一个50mL单口瓶中加入19G(0.28g，0.6mmol)和DMF(6mL)，室温下依次加入20A(0.254g，1.5mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(0.042g，0.06mmol)和Cu2O(0.257g，1.8mmol)，在110℃及N2保护下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液加入20mL水，EA萃取(3×30mL)，收集有机相用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经层析柱(PE/EA＝3/1)分离得黄色油状液体20B(140mg，收率：42％)。MS-ESI:m/z 559.2[M+H]+。
步骤2室温下，向一个50mL单口瓶中加入20B(0.14g，0.25mmol)和THF(10mL)，室温下加入Pd/C(50mg)。H2置换3次后，在25℃下搅拌过夜，LCMS显示原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，THF淋洗(3×20mL)，滤液减压旋干，粗品经层析柱(PE/EA＝5/1)分离得黄色油状液体20C(120mg，收率：85％)。MS-ESI:m/z 563.4[M+H]+。
步骤3室温下，向一个50mL单口瓶中加入20C(0.12g，0.21mmol)，冰浴下缓慢加入TFA(4mL)，在80℃下搅拌15分钟，LCMS显示反应完毕。将反应液减压旋干，反相制备(TFA方法分离体系)得白色固体20(4.2mg，收率：6.3％)。MS-ESI:m/z 313.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.76–7.66(m,2H),7.47(dd,J＝6.9,1.5Hz,1H),3.36–3.32(m,2H),3.15(t,J＝7.5Hz,2H),3.04–2.95(m,2H),2.02–1.92(m,2H),1.90–1.77(m,4H),1.61–1.49(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物21
步骤1将21A(3.3g，20.60mmol，1eq)和21B(7g，22.66mmol，1.1eq)溶于乙腈(30mL)和水(60mL)的混合溶剂中，氩气保护下室温搅拌过夜，LCMS检测剩余部分原料未反应完。直接将反应液打入到反相柱(流动相：水和乙腈)中，在50％乙腈的条件下，过出产物，冻干，得到白色固体21C(2g，收率：27.5％)。MS-ESI:m/z 354.2[M+H]+。
步骤2将10(180mg，0.366mmol，1eq)和21C(130mg，0.366mmol，1eq)加入到DCM(5mL)和DMA(5mL)的混合溶剂中，氩气置换两次，室温下一次性加入EDCI(281mg，1.46mmol，4eq)，氩气置换两次，室温搅拌过夜，LCMS检测原料反应完全。直接送制备，冻干，得到白色固体21(30mg，收率：11.5％)。MS-ESI:m/z 791.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.72(d,J＝2.3Hz,1H),8.48(d,J＝1.9Hz,1H),8.00–7.95(m,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(s,1H),7.33–7.15(m,4H),6.91(s,1H),6.84(s,1H),4.63–4.51(m,4H),4.32(q,J＝7.1Hz,1H),4.19(q,J＝7.1Hz,1H),3.34(t,J＝7.0Hz,2H),3.30–3.10(m,3H),2.77(s,2H),2.15–1.98(m,3H),1.59–1.38(m,6H),1.29(d,J＝7.1Hz,3H),1.24–1.06(m,6H),0.75(brs,3H).
化合物22
步骤1将11(130mg，0.226mmol，1eq)和21C(80mg，0.226mmol，1eq)加入到DCM(5mL)和DMA(5mL)的混合溶剂中，氩气置换两次，室温下一次性加入EDCI(174mg，0.906mmol，4eq)，氩气置换两次，室温搅拌过夜，LCMS检测原料反应完全。直接送制备，冻干，得到白色固体22(13mg，收率：6.6％)。MS-ESI:m/z 873.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.87(s,1H),8.06(d,J＝7.1Hz,1H),7.99(d,J＝7.0Hz,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,2H),7.66–7.55(m,4H),7.42–7.34(m,1H),7.34–7.29(m,1H),7.29–7.17(m,3H),6.99(s,2H),6.92–6.80(m,3H),5.85–5.72(m,1H),4.97(dd,J＝33.8,3.4Hz,1H),4.58(s,2H),4.44–4.19(m,3H),3.67–3.51(m,3H),3.42–3.37(m,2H),3.24–3.17(m,2H),3.03–2.91(m,2H),2.84–2.75(m,2H),2.27–2.02(m,5H),2.01–1.74(m,2H),1.59–1.41(m,7H),1.30(d,J＝7.1Hz,3H),1.24–1.15(m,5H),0.77(brs,3H).
化合物23
步骤1将12(130mg，0.251mmol，1eq)和21C(89mg，0.251mmol，1eq)加入到DCM(5mL)和DMA(5mL)的混合溶剂中，氩气置换两次，室温下一次性加入EDCI(193mg，1.01mmol，4eq)，氩气置换两次，室温搅拌过夜，LCMS检测原料反应完全。直接送制备，冻干，得到白色固体23(15mg，收率：7.3％)。
MS-ESI:m/z 816.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.87(s,1H),8.14–7.94(m,4H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(d,J＝8.6Hz,2H),7.45–7.35(m,1H),7.35–7.29(m,2H),7.29–7.19(m,2H),6.99(s,2H),6.93–6.82(m,3H),5.46(s,2H),4.58(s,2H),4.37(p,J＝6.9Hz,1H),4.25(p,J＝7.1Hz,1H),3.39–3.36(m,2H),3.21(d,J＝7.8Hz,2H),2.80(s,2H),2.10(t,J＝7.4Hz,2H),1.58–1.42(m,6H),1.30(d,J＝7.1Hz,3H),1.25–1.13(m,5H),0.77(s,3H).
化合物24
步骤1将15(100mg，0.212mmol，1eq)做成盐酸盐，然后和21C(75mg，0.212mmol，1eq)加入到DCM(5mL)和DMA(5mL)的混合溶剂中，氩气置换两次，室温下一次性加入EDCI(163mg，0.848mmol，4eq)，氩气置换两次，室温搅拌过夜，LCMS检测反应完全。直接送制备，冻干，得到白色固体24(14mg，收率：8.2％)。
MS-ESI:m/z 807.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),8.79(d,J＝2.3Hz,1H),8.51(d,J＝1.9Hz,1H),8.08(d,J＝7.2Hz,1H),8.04–7.97(m,2H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝8.2Hz,1H),7.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.28(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),7.21(d,J＝8.3Hz,2H),7.07(s,1H),6.99(s,2H),6.87(s,2H),5.40(t,J＝5.8Hz,1H),4.75(s,2H),4.61(d,J＝5.5Hz,2H),4.39–4.29(m,1H),4.27–4.18(m,1H),3.64(t,J＝7.0Hz,2H),2.78(s,2H),2.08(t,J＝7.5Hz,2H),1.71–1.59(m,2H),1.51–1.39(m,4H),1.27(d,J＝7.1Hz,3H),1.21–1.11(m,5H),0.90(t,J＝ 7.4Hz,3H).
化合物25
步骤1室温下，向一个100mL单口瓶中加入14(65mg，0.19mmol)，加入DMF(10mL)溶解后，依次加入DIEA(74mg，0.57mmol)和15A(140mg，0.19mmol)。反应在25℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液直接经反相柱层析纯化(中性方法分离体系)得白色固体25(11mg，收率6.1％)。
MS-ESI:m/z 941.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.61–7.53(m,3H),7.49–7.43(m,1H),7.30(d,J＝8.2Hz,2H),7.21(d,J＝7.1Hz,1H),6.77(s,2H),5.02(s,2H),4.49(dd,J＝9.0,5.1Hz,1H),4.15(d,J＝7.4Hz,1H),3.46(t,J＝7.1Hz,2H),3.24–3.04(m,8H),2.26(t,J＝7.4Hz,2H),2.11–2.00(m,1H),1.97–1.82(m,3H),1.80–1.67(m,3H),1.67–1.44(m,12H),1.34–1.24(m,2H),1.01(t,J＝7.4Hz,3H),0.95(dd,J＝6.8,3.2Hz,6H).
化合物26
步骤1室温下，向一个100mL三口瓶中加入草酰氯(129.5mg，1.02mmol)和DCM (5mL)。将反应液N2保护下降温至-78℃后，缓慢加入DMSO(159.4mg，2.04mmol，in 5mL DCM)；反应液继续在-78℃搅拌15分钟后，再缓慢加入26A(300mg，0.51mmol，in 5mL DCM)。再搅拌15分钟后，缓慢加入Et3N(309.6mg，3.06mmol，in 5mL DCM)。反应在-78℃搅拌15分钟后缓慢恢复至25℃超过30分钟，TLC显示原料反应完全且有新点生成。反应用饱和NH4Cl淬灭，水相用DCM萃取3次，收集有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得黄色油状液体26B(250mg，粗品不计收率)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.73(s,1H),4.16(d,J＝0.8Hz,2H),3.78–3.57(m,38H),2.50(t,J＝6.4Hz,2H),1.47–1.41(m,9H).
步骤2室温下，向一个50mL单口瓶中加入26B(250mg，0.43mmol)，加入DMF(10mL)溶解后，依次加入14(100mg，0.29mmol)和AcOH(0.1mL)。反应在25℃下搅拌2小时后加入Na(OAc)3BH(120mg，0.87mmol)，反应继续搅拌过夜。TLC显示反应完全。反应液减压旋干溶剂后经柱层析纯化(EA/MeOH＝10:1 to 5:1)得到黄色油状液体26C(200mg，收率：75.7％)。MS-ESI:m/z 911.5[M+H]+。
步骤3室温下，向一个50mL单口瓶中加入26C(200mg，0.22mmol)，加入DCM(10mL)溶解后，在冰浴下缓慢加入TFA(2mL)。反应在25℃下搅拌2小时，LCMS显示反应完全。减压旋干溶剂，反相柱层析纯化(TFA/ACN体系)得无色油状液体26D(100mg，收率：54.3％)。MS-ESI:m/z 855.5[M+H]+。
步骤4 25℃下，向一个50mL单口瓶中加入2，3，5，6-四氟苯酚(50mg，0.3mmol)，加入DMF(10mL)溶解后，加入EDCI(57.5mg，0.3mmol)。反应液搅拌5分钟后加入26D(100mg，0.12mmol)。反应在25℃下搅拌1小时，LCMS显示反应完成。反应液直接反相柱层析纯化(TFA/MeCN方法分离体系)得类白色油状液体26(25mg，收率：20.8％)。
MS-ESI:m/z 1003.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.76–7.67(m,2H),7.54–7.48(m,1H),7.47–7.37(m,1H),3.85(t,J＝5.9Hz,2H),3.82–3.75(m,2H),3.70–3.56(m,36H),3.29–3.19(m,4H),3.16–3.07(m,2H),2.98–2.92(m,2H),1.96(p,J＝7.7Hz,2H),1.89–1.74(m,4H),1.71–1.59(m,2H),1.59–1.48(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物27
步骤1室温下，向一个25mL单口瓶中加入16(42mg，0.13mmol)，加入DMF(10mL)溶解后，依次加入DIEA(50mg，0.39mmol)和25A(96mg，0.13mmol)。反应在25℃下搅拌1小时，LCMS显示反应完成。反应液直接经反相柱层析纯化(中性方法反相分离体系)得白色固体27(7.7mg，收率：6.4％)。
MS-ESI:m/z 927.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.58(d,J＝8.3Hz,1H),7.54(d,J＝8.2Hz,2H),7.47(t,J＝7.8Hz,1H),7.26(d,J＝8.2Hz,2H),7.21(d,J＝7.2Hz,1H),6.77(s,2H),5.00(s,2H),4.51(dd,J＝9.1,5.1Hz,1H),4.16(d,J＝7.4Hz,1H),3.46(t,J＝7.2Hz,2H),3.25–3.16(m,5H),3.16–3.05(m,3H),2.27(t,J＝7.4Hz,2H),2.13–2.02(m,1H),1.96–1.84(m,3H),1.81–1.68(m,5H),1.68–1.43(m,9H),1.36–1.21(m,3H),1.05–0.93(m,9H).
化合物28
步骤1室温下，向一个25mL单口瓶中加入17(50mg，0.14mmol)，加入DMF(10mL)溶解后，依次加入DIEA(54mg，0.42mmol)和25A(103mg，0.13mmol)。反应在25℃下搅拌1小时，LCMS显示反应完成。反应液直接经反相柱层析纯化(中性方法反相分离体系)得白色固体28(9.2mg，收率：6.9％)。
MS-ESI:m/z 955.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.62–7.51(m,3H),7.47(t,J＝7.7Hz,1H),7.29(d,J＝8.2Hz,2H),7.21(d,J＝7.3Hz,1H),6.78(s,2H),5.01(s,2H),4.58(s,1H),4.53–4.44(m,1H),4.15(d,J＝7.5Hz,1H),3.50–3.44(m,2H),3.25–3.17(m,3H),3.17–3.05(m,6H),2.26(t,J＝7.5Hz,2H),2.13–2.00(m,1H),2.00–1.81(m,3H),1.81–1.67(m,3H),1.67–1.36(m,15H), 1.36–1.23(m,3H),1.05–0.89(m,9H).
化合物29
步骤1室温下，向一个50mL单口瓶中加入20(34mg，0.063mmol)，加入DMF(6mL)溶解后，依次加入DIEA(20mg，0.157mmol)和25A(46mg，0.063mmol)。反应在25℃下搅拌过夜，LCMS显示反应完成。反应液直接经反相制备(NH4HCO3体系)得白色固体29(27.1mg，收率：27％)。
MS-ESI:m/z 911.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.59–7.51(m,3H),7.49–7.43(m,1H),7.27(d,J＝8.2Hz,2H),7.16(d,J＝7.0Hz,1H),6.77(s,2H),5.00(s,2H),4.51(dd,J＝8.9,4.9Hz,1H),4.16(d,J＝7.5Hz,1H),3.49–3.44(m,2H),3.26–3.15(m,5H),3.15–3.03(m,3H),2.27(t,J＝7.4Hz,2H),2.13–2.02(m,1H),1.97–1.84(m,3H),1.80–1.54(m,11H),1.54–1.44(m,2H),1.35–1.27(m,2H),1.03–0.94(m,9H).
化合物32
步骤1将化合物15F(1.0g，2.11mmol，1eq)加入到1,4-二氧六环(20mL)和水(2mL)的混合溶剂中，加入化合物32A(556mg，2.11mmol，1eq)和无水磷酸钾(1.35g，6.34mmol，3eq)，氩气置换2次后，加入Pd(PPh3)4(100mg)，氩气置换2次，升温至90℃反应2小时。LCMS显示原料反应完全。将反应液倒入100mL水中，乙酸乙酯萃取三次(100mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。减压浓缩后通过柱层析纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得到黄色固体32B(400mg，收率36％)。MS-ESI:m/z 530.2[M+H]+。
步骤2将化合物32B(400mg，0.756mmol，1eq)溶于甲醇(10mL)，加入雷尼镍(0.1g)，氢气置换两次，室温下搅拌3小时。LCMS显示产物峰明显，用硅藻土过滤，滤液直接投下一步反应。MS-ESI:m/z 500.2[M+H]+。
步骤3将上一步得到的反应液，补加THF(10mL)和水(10mL)，加入一水合氢氧化锂(91mg，2.27mmol，3eq)，室温下搅拌3小时。LCMS检测原料反应完全。减压浓缩后，用1N的盐酸调pH至5-6。过滤，将得到的黄色滤饼用HPLC制备，得到白色固体32(21mg，两步收率5.7％)。MS-ESI:m/z 486.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.87–11.32(m,1H),9.87(s,1H),9.26(s,1H),9.20(d,J＝2.2Hz,1H),9.13–9.12(d,J＝1.8Hz,1H),8.55–8.54(t,J＝2.0Hz,1H),7.88–7.86(d,J＝8.2Hz,1H),7.79(s,1H),7.70–7.68(d,J＝8.3Hz,1H),7.22(s,1H),7.01–6.99(d,J＝8.2Hz,2H),6.59–6.57(d,J＝8.1Hz,2H),4.70(s,2H),3.70(s,2H),3.26(s,2H),1.73–1.60(m,2H),0.94–0.91(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物46
步骤1将化合物40A(100mg，0.228mmol，1eq.)和化合物46A(19.87mg，0.228mmol，1eq.)用DMA(3mL)溶解，一次性加入EDCI(174.90g，0.912mmol，4eq.)室温下搅拌过夜。LCMS检测化合物40A反应完全，不处理直接投下一步。MS-ESI:m/z 508.2[M+H]+。
步骤2将上一步未处理的化合物46B溶液中加入雷尼镍(0.5g)，氢气置换两次，通氢气室温下搅拌过夜。LCMS检测原料反应完全，用硅藻土过滤，通过制备HPLC纯化得到黄色固体化合物46(8.2mg，两步收率7.5％)。MS-ESI:m/z 478.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.14(s,1H),7.38(d,J＝6.5Hz,2H),7.17(d,J＝20.9Hz,2H),7.06(s,1H),6.87(d,J＝7.4Hz,2H),6.41(d,J＝7.3Hz,2H),4.59(s,2H),4.28(d,J＝37.6Hz,2H),3.59(dd,J＝23.4,7.9Hz,7H),3.25(d,J＝10.5Hz,1H),2.82(d,J＝14.7Hz,1H),1.88(d,J＝56.6Hz,3H),1.63(d,J＝6.4Hz,2H),0.89(s,3H).
化合物57
步骤1将化合物10(300mg，0.609mmol，1eq)和化合物57A(301mg，0.731mmol，1.2eq)加入到DCM(3mL)和DMA(3mL)的混合溶剂中，氩气置换两次，室温下加入EDCI(468mg，2.44mmol，4eq)，氩气置换两次，室温搅拌过夜。LCMS检测有目标产物生成，直接用制备HPLC纯化，得到白色固体57B(50mg，收率9.7％)。MS-ESI:m/z 849.4[M+H]+。
步骤2将化合物57B(50mg，0.0589mmol，1eq)溶于DCM(3mL)，冰水浴下加入TFA(0.5mL)，室温搅拌2小时。LCMS检测原料反应完全，减压浓缩，制备HPLC纯化，得到白色固体57(17mg，收率37％)。
MS-ESI:m/z 793.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.02(s,1H),10.05–9.75(m,2H),9.09(s,1H),8.86(s,1H),8.60(s,1H),8.32–8.30(t,J＝5.6Hz,1H),8.23–8.21(d,J＝7.8Hz,1H),8.10(s,1H),7.85–7.59(m,5H),7.39–7.17(m,2H),7.13(s,1H),7.00(s,2H),4.65(s,4H),4.43–4.34(dd,J＝13.4,8.1Hz,1H),3.72–3.71(d,J＝5.6Hz,2H),3.63–3.52(m,3H),2.44–2.41(m,3H),2.30–2.22(m,2H),2.06–1.93(m,1H),1.90–1.75(m,1H),1.59–1.54(dd,J＝14.8,7.4Hz,2H),0.90–0.70(m,3H).
化合物58
步骤1将化合物10(500mg，1.02mmol，1eq)和化合物58A(360mg，1.02mmol，1eq)加入到DCM(10mL)和DMA(10mL)的混合溶剂中，氩气置换两次，室温下加入EDCI(779mg，4.06mmol，4eq)，氩气置换两次，室温搅拌过夜。LCMS检测有目标产物生成。直接用制备HPLC纯化，冻干后，用制备HPLC再次纯化，得到白色固体58(8mg，收率1％)。
MS-ESI:m/z 792.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.93(s,1H),10.0–9.74(m,2H),9.02(s,1H),8.83(s,1H),8.59(s,1H),8.31–8.28(t,J＝5.6Hz,1H),8.25–8.23(d,J＝7.7Hz,1H),8.06(s,1H),7.81–7.69(m,3H),7.65–7.63(d,J＝8.6Hz,2H),7.33-7.19(m,3H),7.13(s,1H),6.99(s,2H),6.78(s,1H),4.74–4.57(m,4H),4.37–4.32(dd,J＝13.5,7.8Hz,1H),3.71–3.70(d,J＝5.6Hz,2H), 3.65–3.59(m,2H),3.04(s,2H),2.79–2.78(d,J＝3.8Hz,2H),2.46–2.41(m,2H),2.19–2.10(m,2H),2.01–1.94(m,1H),1.86–1.79(m,1H),1.59–1.54(dd,J＝14.9,7.5Hz,2H),0.87–0.74(m,3H).
化合物59
步骤1将化合物10(400mg，0.813mmol，1eq)和化合物59A(420mg，1.06mmol，1.3eq)加入到DMF(8mL)中，加入DIEA(525.4mg，4.06mmol，5eq)和T3P(1.55g，2.44mmol，3eq，50％)，室温搅拌过夜。LCMS检测有产物生成，直接用制备HPLC纯化，得到白色固体59B(50mg，收率7.4％)。MS-ESI:m/z 835.3[M+H]+。
步骤2将化合物59B(50mg，0.0599mmol，1eq)溶于DCM(3mL)，冰水浴下加入TFA(0.5mL)，室温搅拌2小时。LCMS检测原料反应完全，直接用制备HPLC纯化，得到白色固体59(15mg，收率33％)。
MS-ESI:m/z 779.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.01(s,1H),10.01–9.64(m,2H),9.08(s,1H),8.86(s,1H),8.60(s,1H),8.45–8.26(m,2H),8.09(s,1H),7.88–7.63(m,5H),7.51–7.15(m,3H),7.13(s,1H),7.00(s,2H),4.83–4.51(m,6H),3.76–3.67(dd,J＝15.3,9.8Hz,2H),3.64–3.61(t,J＝7.4Hz,3H),2.80–2.75(dd,J＝16.7,5.9Hz,1H),2.63–2.57(dd,J＝16.7,8.0Hz,1H),2.44–2.42(d,J＝6.5Hz,2H),1.59–1.54(dd,J＝14.7,7.7Hz,2H),0.80(s,3H).
化合物60
步骤1将化合物15(450mg，0.954mmol，1eq)和化合物57A(511mg，1.24mmol，1.3eq)加入到DCM(5mL)和DMA(5mL)的混合溶剂中，氩气置换两次，室温下加入EDCI(732mg，3.82mmol，4eq)，氩气置换两次，室温搅拌过夜。LCMS检测有产物生成，直接用制备HPLC纯化，得到白色固体60A(25mg，收率3％)。MS-ESI:m/z 865.4[M+H]+。
步骤2将化合物60A(25mg，0.0289mmol，1eq)溶于DCM(3mL),冰水浴下加入TFA(0.5mL)，室温(25℃)搅拌2小时。LCMS检测原料反应完全，减压浓缩，用制备HPLC纯化，得到白色固体60(7mg，收率30％)。
MS-ESI:m/z 809.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.91(s,1H),9.92(s,1H),9.83(s,1H),8.93(s,1H),8.87–8.85(d,J＝2.1Hz,1H),8.61–8.59(d,J＝1.7Hz,1H),8.28–8.25(t,J＝5.7Hz,1H),8.19–8.17(d,J＝7.8Hz,1H),8.08(s,1H),7.80–7.76(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.73(s,1H),7.65–7.63(d,J＝8.3Hz,1H),7.57–7.55(d,J＝8.5Hz,2H),7.28–7.15(m,3H),6.97(s,2H),4.81(s,2H),4.65(s,3H),3.72–3.68(dd,J＝14.3,6.4Hz,4H),3.62–3.56(m,2H),2.42–2.38(m,2H),2.30–2.22(m,2H),2.03–1.93(m,1H),1.85–1.75(m,1H),1.74–1.64(m,2H),0.94–0.92(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物61
步骤1将化合物15(250mg，0.53mmol，1eq)和化合物58A(188mg，0.53mmol，1eq)加入到DCM(10mL)和DMA(10mL)的混合溶剂中，氩气置换两次，室温下加入 EDCI(407mg，2.12mmol，4eq)，氩气置换两次，室温搅拌过夜。LCMS检测有产物生成，直接用制备HPLC纯化，得到白色固体61(20mg，收率4.7％)。
MS-ESI:m/z 808.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.24(s,1H),9.96(s,1H),9.87(s,1H),9.25(s,1H),8.92–8.91(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.33–8.31(t,J＝5.6Hz,1H),8.27–8.26(d,J＝7.6Hz,1H),8.18(s,1H),7.82–7.80(d,J＝8.2Hz,1H),7.75(s,1H),7.67–7.65(d,J＝8.2Hz,1H),7.59–7.57(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(s,1H),7.26–7.24(d,J＝8.5Hz,2H),7.21(s,1H),7.00(s,2H),6.81(s,1H),4.83(s,2H),4.69(s,2H),4.36–4.31(m,1H),3.76–3.70(dd,J＝16.3,6.2Hz,5H),3.63(s,1H),3.32(s,2H),2.47–2.40(m,2H),2.24–2.09(m,2H),2.04–1.91(m,1H),1.89–1.79(m,1H),1.73–1.68(dd,J＝14.4,7.2Hz,2H),0.97–0.93(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物62
步骤1将化合物59A(375.5mg，0.945mmol，1eq)加入到DMF(40mL)中，室温下加入NMI(258.6mg，258.6mg，4eq)、TCFH(331.4mg，1.18mmol，1.5eq)，室温下搅拌3分钟，加入化合物15的盐酸盐(400mg，0.787mmol，1eq)，氩气置换一次，室温搅拌过夜。LCMS检测有产物生成，直接用制备HPLC纯化，得到黄色固体62A(1.1g，粗品不计收率)。MS-ESI:m/z 851.4[M+H]+。
步骤2将化合物62A(1.1g，1.29mmol，1eq)溶于DCM(50mL)，冰水浴下加入TFA(10mL)，室温搅拌2小时。LCMS检测原料反应完，0℃下减压浓缩除掉大部分DCM，用制备HPLC纯化，得到浅黄色固体62(240mg，两步收率7.6％)。
MS-ESI:m/z 795.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.32(s,1H),9.88–9.81(d,J＝25.1Hz,2H),9.36(s,1H),8.91(s,1H),8.65(s,1H),8.39–8.36(t,J＝7.2Hz,2H),8.17(s,1H),7.88–7.78(m,1H),7.75(s, 1H),7.68–7.61(dd,J＝19.8,8.4Hz,3H),7.30–7.22(m,3H),7.00(s,2H),4.84(s,2H),4.74–4.68(m,3H),3.76–3.71(dd,J＝12.3,5.0Hz,3H),3.64–3.56(m,2H),3.33(s,2H),2.80–2.74(dd,J＝16.4,5.8Hz,1H),2.63–2.57(dd,J＝16.5,7.8Hz,1H),2.48–2.27(m,2H),1.74–1.68(dd,J＝14.4,7.1Hz,2H),0.97–0.93(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物63
步骤1将化合物21C(162.5mg，0.46mmol，1.2eq)加入到DMF(20ml)中，加入NMI(126mg，1.53mmol，4eq)和TCFH(161.3mg，0.575mmol，1.5eq)，室温下搅拌2分钟，加入粗品化合物32的盐酸盐(200mg，0.383mmol，1eq)，室温搅拌过夜。LCMS检测原料反应完全，生成目标产物，直接用制备HPLC纯化，得到白色固体63(20mg，收率6.4％)。
MS-ESI:m/z 821.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.96(s,1H),9.87–9.85(d,J＝6.7Hz,2H),9.20(d,J＝2.2Hz,1H),9.13(d,J＝1.8Hz,1H),9.02(s,1H),8.55–8.54(t,J＝2.0Hz,1H),8.07–8.05(d,J＝7.2Hz,1H),7.99–7.98(d,J＝6.9Hz,1H),7.88–7.85(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.80(s,1H),7.66–7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.56–7.54(d,J＝8.5Hz,2H),7.24–7.21(d,J＝9.5Hz,3H),6.99(s,2H),4.81(s,2H),4.38–4.31(p,J＝6.9Hz,1H),4.26–4.19(p,J＝7.0Hz,1H),3.74–3.71(t,J＝6.9Hz,2H),3.36–3.33(d,J＝7.1Hz,2H),3.30(s,2H),2.11–2.07(t,J＝7.3Hz,2H),1.76–1.63(m,2H),1.48–1.41(dt,J＝14.6,7.3Hz,4H),1.29–1.27(d,J＝7.1Hz,4H),1.22–1.11(m,5H),0.95–0.92(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物64
步骤1将化合物21C(123.7mg，0.35mmol，1.2eq)加入到DMF(5ml)中，加入NMI(96mg，1.17mmol，4eq)和TCFH(123mg，0.438mmol，1.5eq)，室温下搅拌2分钟，加入化合物46的盐酸盐(150mg，0.292mmol，1eq)，室温搅拌过夜。LCMS检测原料反应完 全，生成目标产物，用制备HPLC纯化，得到白色固体64(110mg，收率43％)。
MS-ESI:m/z 813.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.14(s,1H),9.80–9.88(d,J＝6.1Hz,1H),9.83(s,1H),9.19–9.18(d,J＝6.3Hz,1H),8.07–8.06(d,J＝7.2Hz,1H),8.0–7.98(d,J＝7.0Hz,1H),7.55–7.49(m,5H),7.22–7.20(d,J＝7.2Hz,2H),7.15(d,J＝0.7Hz,1H),6.99(s,2H),4.79(s,2H),4.37–4.18(m,3H),3.72–3.68(t,J＝7.1Hz,2H),3.65–3.56(m,3H),3.39–3.34(dd,J＝14.3,7.3Hz,3H),3.31–3.19(m,3H),2.12–2.08(t,J＝7.4Hz,2H),2.03–1.80(m,2H),1.73–1.62(m,2H),1.51-1.42(dt,J＝14.2,7.1Hz,4H),1.29–1.28(d,J＝7.1Hz,3H),1.22–1.11(m,5H),0.94–0.90(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物65
参考专利WO2020056194A1合成。
化合物66
参考专利WO2020190725A1合成。
实施例2配体-药物偶联物的制备
2.1抗体制备
以下抗体可以按照抗体常规方法进行制备，例如可进行载体构建后，转染真核细胞如HEK293细胞(Life Technologies Cat No.11625019)，纯化表达。
Trastuzumab的序列：
轻链(SEQ ID NO:33)
重链(SEQ ID NO:37)
Pertuzumab抗体序列
轻链(SEQ ID NO:34)
重链(SEQ ID NO:38)
hRS7抗体(Sacituzumab)序列
轻链(SEQ ID NO:35)
重链(SEQ ID NO:39)
抗体Codrituzumab的序列
轻链(SEQ ID NO:36)
重链(SEQ ID NO:40)
实施例2.2配体-药物偶联物的制备
在本申请中pH＝5.0的20mM succinate的缓冲水溶液是将20mM琥珀酸水溶液用NaOH调pH至5.0获得；pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液是将20mM组氨酸水溶液用HOAc调pH至5.5得到。
本申请中ADC的蛋白纯度是通过SEC方法检测，参数如下表示。
本申请中ADC的DAR值是通过LC-MS方法检测的。实验操作如下：在40.0μg ADC样品溶液中加入75.0μL 8.0mol/L盐酸胍(Gdn-HCl)、5.0μL 1.0mol/L Tris-HCl和2.0μL 1mol/L DTT。将该溶液用超纯水稀释至100.0μL，充分混合，在22℃下孵育30分钟。然后使用LC-MS分析药物/抗体比(DAR)。LC参数如下表示。
MS参数如下表示。
制备例ADC-3
在22℃条件下，向抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝6.0的1.65g/L琥珀酸、1.02g/L NaOH、6.30g/L NaCl缓冲液，含2mM EDTA；32mg，10mg/mL，0.220μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.158mL，0.792μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应；
将21(2.3mg，2.860μmol)溶解于0.23mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时。补加21(1.0mg，1.320μmol)的0.10mL DMSO溶液，于22℃振荡反应15小时。补加21(1.0mg，1.320μmol)的0.10mL DMSO溶液，于22℃振荡反应2小时。补加21(0.7mg，0.880μmol)的0.070mL DMSO溶液，于22℃振荡反应1小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-3的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲 水溶液；19.5mg，4.43mg/mL，收率：60.9％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.63
制备例ADC-4
在22℃条件下，向抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝6.0的1.65g/L琥珀酸、1.02g/L NaOH、6.30g/L NaCl缓冲液，含2mM EDTA；21mg，10mg/mL，0.144μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.104mL，0.518μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应；
将22(1.9mg，2.160μmol)溶解于0.19mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-4的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；14mg，5.62mg/mL，收率：66.7％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.74
制备例ADC-5
在22℃条件下，向抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝6.0的1.65g/L琥珀酸、1.02g/L NaOH、6.30g/L NaCl缓冲液，含2mM EDTA；25mg，10mg/mL，0.172μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.124mL，0.619μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应；
将23(2.1mg，2.58μmol)溶解于0.21mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-5的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；20mg，6.76mg/mL，收率：80.0％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.71
制备例ADC-6
在37℃条件下，向抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝7.0的PB缓冲液；20mg，6.25mg/mL，0.137μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.071mL，0.356μmol)，置于水浴振荡器，于37℃振荡反应2小时，停止反应；
将24(0.84mg，1.04μmol)溶解于0.084mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于4℃振荡反应1小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-6的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；18.94mg，4.96mg/mL，收率：94.7％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.48
制备例ADC-7
在22℃条件下，向抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝6.0的1.65g/L琥珀酸、1.02g/L NaOH、6.30g/L NaCl缓冲液，含2mM EDTA；15mg，10mg/mL，0.103μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.062mL，0.309μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应；
将25(1.0mg，1.03μmol)溶解于0.10mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应1小时。补加25(1.0mg，1.03μmol)的0.10mL DMSO溶液，于22℃振荡反应1小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-7的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；14mg，1.33mg/mL，收率：93.3％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.87
制备例ADC-8
将化合物0735(2.0mg，2.03μmol)溶解于0.20mL DMSO中，加入到抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝7.0的0.05M的PB缓冲水溶液；25mg，5mg/mL，0.172μmol)，置于水浴振荡器，于37℃振荡反应2小时，用200mM琥珀酸(pH 2.356，1/8V)淬灭反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.0的20mM的succinate缓冲水溶液)，得到产物ADC-8的水溶液(pH＝5.0的20mM succinate的缓冲水溶液；20.27mg，5.08mg/mL，收率：81.1％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.73
制备例ADC-9
在22℃条件下，向抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝6.0的1.65g/L琥珀酸、1.02g/L NaOH、6.30g/L NaCl缓冲液，含2mM EDTA；27mg，10mg/mL，0.186μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.134mL，0.670μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应；
将27(2.6mg，2.79μmol)溶解于0.26mL DMSO和DMA混合溶液(6：14)中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-9的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；12mg，3.05mg/mL，收率：44.4％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.69
制备例ADC-10
在22℃条件下，向抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝6.0的1.65g/L琥珀酸、1.02g/L NaOH、6.30g/L NaCl缓冲液，含2mM EDTA；30mg，10mg/mL，0.206μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.157mL，0.783μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应；
将28(3.0mg，3.09μmol)溶解于0.30mL DMSO和DMA混合溶液(6：14)中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-10的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；20mg，3.96mg/mL，收率：66.7％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.54.
制备例ADC-12
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；15mg，6.85mg/mL，0.103μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.058mL，0.288μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将21(1.2mg，1.54μmol)溶解于0.12mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于4℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-12的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；13mg，3.92mg/mL，收率：86.7％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.24
制备例ADC-13
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；25mg，6.85mg/mL，0.172μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.096mL，0.482μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将24(2.1mg，2.58μmol)溶解于0.21mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-13的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；20mg，4.80mg/mL，收率：80.0％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.76
制备例ADC-14
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；21.09mg，6.84mg/mL，0.145μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.087mL，0.435μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将25(2.0mg，2.18μmol)溶解于0.20mL DMSO和DMA混合溶液(3.9：16.1)中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于4℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-14的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；15mg，2.34mg/mL，收率：71.1％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.22
制备例ADC-15
将化合物26(1.6mg，1.64μmol)溶解于0.20mL DMSO中，加入到抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.05的50mM PB缓冲液，含2mM EDTA；17mg，4.22mg/mL，0.117 μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.0的20mM的succinate缓冲水溶液)，得到产物ADC-15的水溶液(pH＝5.0的20mM succinate的缓冲水溶液；12.71mg，3.53mg/mL，收率：74.8％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.67
制备例ADC-16
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；25mg，8.34mg/mL，0.172μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.096mL，0.482μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将27(2.4mg，2.58μmol)溶解于0.24mL DMSO和DMA混合溶液(4.7：15.3)中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于4℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-16的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；18.69mg，3.60mg/mL，收率：74.8％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.13
制备例ADC-17
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；18.7mg，6.84mg/mL，0.128μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.077mL，0.384μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将28(1.8mg，1.92μmol)溶解于0.18mL DMSO和DMA混合溶液(4.2：15.8)中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于4℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-17的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；13.69mg，3.47mg/mL，收率：73.2％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.15
制备例ADC-18
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；25mg，8.34mg/mL，0.172μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.089mL，0.447μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将化合物29(9.4mg，10.32μmol)溶解于0.94mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-18的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；19.0mg，3.32mg/mL，收率：76％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.47
制备例ADC-19
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；15mg，8.00mg/mL，0.101μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.067mL，0.333μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将化合物60(2.6mg，3.23μmol)溶解于0.32mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应。将反应液用HiTrap脱盐柱纯化(5mL*3，洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-19的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；10.5mg，1.81mg/mL，收率：70.0％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.28
制备例ADC-20
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；19.1mg，8.00mg/mL，0.129μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.075mL，0.374μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将化合物61(1.6mg，1.94μmol)溶解于0.19mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应。将反应液用HiPrep脱盐柱纯化(53mL，洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-20的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；16.9mg，4.43mg/mL，收率：88.5％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.09
制备例ADC-21
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；12mg，11.5mg/mL，0.081μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.042mL，0.211μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应；
将化合物62(0.45mg，0.567μmol)溶解于0.057mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于4℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用HiTrap脱盐柱纯化(5mL*2，洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-21的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；6.5mg，3.78mg/mL，收率：54.2％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.05。
制备例ADC-22
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；14mg，8.0mg/mL，0.094μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.053mL，0.263μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将化合物63(1.16mg，1.41μmol)溶解于0.14mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于4℃振荡反应2.5小时，停止反应。将反应液用HiTrap脱盐柱纯化(5mL*3，洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-22的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；7.95mg，3.95mg/mL，收率：56.8％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.70。
制备例ADC-23
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；30.5mg，11.0mg/mL，0.206μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.062mL，0.309μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应；
将化合物64(2.5mg，3.09μmol)溶解于0.31mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用脱盐柱纯化(53mL，洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-23的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；22.03mg，6.77mg/mL，收率：72.2％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝2.00。
制备例ADC-24
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；25mg，8.34mg/mL，0.169μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.095mL，0.473μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将化合物57(2.0mg，2.54μmol)溶解于0.20mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于4℃振荡反应2.5小时，停止反应。将反应液用HiTrap脱盐柱纯化(5mL*2，洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-24的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；19mg，5.30mg/mL，收率：76.0％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.03。
制备例ADC-25(对照ADC1)
在22℃条件下，向抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝6.0的1.65g/L琥珀酸、1.02g/L NaOH、6.30g/L NaCl缓冲液，含2mM EDTA；40mg，10mg/mL，0.270μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.432mL，2.160μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应3小时，停止反应；
将化合物65(4.9mg，4.752μmol)溶解于0.49mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Spin脱盐柱纯化(10mL，洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-25的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；33mg，7.54mg/mL，收率：82.5％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝6.35。
制备例ADC-26(对照ADC2)
在22℃条件下，向抗体Codrituzumab的缓冲水溶液(pH＝7.4的Gibco PBS缓冲液；21.09mg，6.85mg/mL，0.142μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(5mM，0.080mL，0.398μmol)，置于水浴振荡器，于22℃振荡反应2小时，停止反应；
将化合物65(2.2mg，2.13μmol)溶解于0.22mL DMSO中，加入到上述溶液中，置于水浴振荡器，于4℃振荡反应2小时，停止反应。将反应液用Spin脱盐柱纯化(10mL，洗脱相：pH＝5.5的20mM的Histidine缓冲水溶液)，得到示例性产物ADC-26的溶液(pH＝5.5的20mM Histidine的缓冲水溶液；15.3mg，2.77mg/mL，收率：72.5％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝4.09。
制备例ADC-27(对照ADC3)
将化合物66(2.7mg，2.74μmol)溶解于0.27mL DMA中，加入到抗体Trastuzumab的缓冲水溶液(pH＝7.0的50mM PB缓冲液；30mg，5mg/mL，0.203μmol)，置于水浴振荡器，于37℃振荡反应2小时，停止反应。加入1/8体积的琥珀酸水溶液(200mM，pH＝2.356)淬灭，将反应液用Spin脱盐柱纯化(洗脱相：pH＝5.0的20mM的succinate缓冲水溶液)，得到产物ADC-27的水溶液(pH＝5.0的20mM succinate的缓冲水溶液；23mg，4.08mg/mL，收率：76.7％)，于4℃储存。
LC-MS检测并计算得DAR值n＝3.45。
实施例3
化合物对hTLR7(人Toll样受体7)和hTLR8(人Toll样受体8)的激动活性
本实施例评价了本申请的化合物对hTLR7(人Toll样受体7)和hTLR8(人Toll样受体8)的激动活性；以及在人PBMC(人外周血单个核细胞)中，评估化合物对人PBMC产生TNF-α和IFN-α的诱导活性。
所有化合物均用DMSO配制成30mM浓储液，保存于4℃中。参考化合物R848，用DMSO配制成5mg/ml浓储液保存于-20℃冰箱中。HEK-Blue hTLR7和HEK-Blue hTLR8细胞株可以购于InvivoGen公司，人PBMC可以购于上海赛笠生物科技有限公司(货号：XFB-HP100B)。
参考化合物R848(CAS No.:144875-48-9)和VTX-2337(CAS No.:926927-61-9)均采购自皓元医药，结构如下示：
其它常用试剂可以商业购买，例如以下来源：
本研究所使用主要仪器为多功能酶标仪Flexstation III(Molecular Device)、Envision(Perkin Elmer)、M2e(Molecular Device)和Echo555(Labcyte)。
化合物对hTLR7和hTLR8的激动活性
化合物稀释：将本申请化合物用DMSO稀释到例如约15mM，参考化合物稀释到后依次加入到细胞板中。将化合物按3倍梯度稀释加入到96孔细胞板中，共10个浓度，每个浓度2复孔。阴性对照孔每孔加入0.2μl DMSO，阳性对照孔每孔加入参考化合物，DMSO终浓度为0.2％。
细胞铺板：在显微镜下观察培养瓶中的HEK Blue hTLR7&8细胞长至80％，弃去培养基，加入10ml检测培养基，吹打成单细胞。用细胞计数仪计数，将细胞稀释到500,000细胞/mL。将100μl细胞种于已经加好化合物的96孔板中，50,000细胞/孔。将化合物和细胞在37℃、5％CO2培养箱共孵育24小时。
化合物活性检测：每孔取20μl细胞上清，加入含有180μl QUANTI-BlueTM试剂的实验板中，37℃孵育1小时之后，用多功能酶标仪Flexstation III检测650nm的吸光度值(OD650)。
细胞活性检测：按照Celltiter-Glo说明书方法操作，化学发光信号(RLU)用多功能酶标仪Flexstation III检测。
化合物活性数据分析：OD650值用GraphPad Prism软件分析，并拟合化合物剂量效应曲线，计算化合物的EC50值。
具体见表1。
结果显示，本申请的化合物对于TLR7和TLR8均具有明显的激活活性，且激活活性优于对照VTX-2337和R848。
化合物在人PBMC中对TNF-α和IFN-α的诱导活性
化合物处理PBMC细胞。将本申请化合物用DMSO稀释到例如约15mM，参考化合物稀释到5mg/ml后依次加入到细胞板中。将化合物3倍梯度稀释加入到细胞板中，共8个浓度，每个浓度双复孔。阴性对照孔每孔加入0.4μl DMSO，阳性对照孔每孔加入0.4μl 5mg/ml的参考化合物。DMSO终浓度为0.2％。将放有冷冻的人PBMC的冻存管放入37℃水浴锅迅速解冻，然后转移到50ml离心管中，逐渐加入预热的RPMI1640培养基并混匀，离心15min，去上清。用培养基重悬细胞后计数，并将细胞悬液用培养液调整到2.5×106细胞/毫升。然后在含有化合物的96孔板中每孔加入200μl稀释后的细胞(500,000细胞/孔)。将细胞板放入37℃,5％CO2培养24h。
TNF-α含量检测：
加样：每孔加入100μl梯度稀释后的Cytokine standard至标准品孔，加入100μl 10倍稀释的待测样品至样本孔，加入1×Dilutionbuffer R 100μl至空白对照孔。加检测抗体：每孔加入Biotinylated antibody工作液50μl。混匀后盖上封板膜，室温孵育3小时，洗板3次，每孔加入Streptavidin-HRP工作液100μl。盖上封板膜，室温孵育20分钟。继续洗板3次。显色：每孔加入TMB液体100μl，室温(18-25℃)避光孵育25分钟。终止反应：迅速加入Stop solution终止反应，每孔加入100μl。读板：终止后10分钟内，用M2e仪器检测波长450nm读值。
IFN-α含量检测：
加样：每孔加入100μl梯度稀释后的Cytokine standard至标准品孔，加入100μl 2倍稀释的待测样品至样本孔，加入1×Dilutionbuffer R 100μl至空白对照孔。混匀后盖上封板膜，室温孵育2小时。洗板4次，加检测抗体：每孔加入Biotinylated antibody工作液100μl。混匀后盖上封板膜，室温孵育1小时。继续洗板4次，加酶：每孔加入Streptavidin-HRP工作液100μl。盖上封板膜，室温孵育30分钟。继续洗板4次，显色：每孔加入TMB液体100μl，室温(18-25℃)避光孵育25分钟。终止反应：迅速加入Stop solution终止反应，每孔加入100μl。读板：终止后10分钟内，用M2e仪器检测波长450nm读值。
细胞活性检测：
按照Celltiter-Glo说明书方法操作，化学发光信号(RLU)用多功能酶标仪Envision检测。
化合物活性数据分析：用GraphPad Prism软件分析，将OD450值转化为TNF-α和IFN-α的含量，并拟合化合物剂量效应曲线，计算化合物的EC50值。
结果见表2。
结果显示，本申请的小分子化合物可以激活PBMC TLR7和TLR8受体，诱导免疫细胞因子TNF-α和/或IFN-α分泌，且激活活性优于对照VTX-2337和R848。
表1
表2
实施例4
抗体-药物偶联物对全血的激动活性检测
本实施例评价了本申请的抗体-药物偶联物对人全血的激动活性。
将本申请的抗体-药物偶联物用PBS稀释到200nM并按3倍梯度稀释后加入到96孔细胞板中，共5个浓度，每个浓度2复孔。阴性对照孔每孔加入0.2％DMSO，阳性对照孔每孔加入100μl 60μM的R848。在96孔板中每孔加入100μl抗凝全血，将细胞板放入37℃，5％CO2培养24h。2000G，4℃离心15分钟，离心后取上清测定TNF-α和IFN-α浓度。
TNF-α浓度检测，使用达科卫TNF-α ELISA试剂盒(货号1117202)进行检测，每孔加入100μl梯度稀释后的Cytokine standard至标准品孔，加入100μl 10倍稀释的待测样品至样本孔，加入1×Dilutionbuffer R 100μl至空白对照孔。每孔加入Biotinylated antibody工作液50μl。混匀后盖上封板膜，室温孵育3小时。洗板3次，扣去孔内液体，每孔加入1×Washing buffer工作液300μl；停留1分钟后弃去孔内液体。重复3次。每孔加入Streptavidin-HRP工作液100μl。盖上封板膜，室温孵育20分钟。洗板3次，每孔加入TMB液体100μl，室温(18-25℃)避光孵育25分钟。迅速每孔加入100μl Stop solution终止反应。终止后10分钟内，用M2e仪器检测波长450nm读值。
IFN-α浓度检测，使用达科卫IFN-α ELISA试剂盒(货号1110012)进行检测，每孔加入100μl梯度稀释后的Cytokine standard至标准品孔，加入100μl 2倍稀释的待测样品至样本孔，加入1×Dilutionbuffer R 100μl至空白对照孔。每孔加入Biotinylated antibody工作液50μl。混匀后盖上封板膜，室温孵育3小时。洗板3次，扣去孔内液体，每孔加入1×Washing buffer工作液300μl；停留1分钟后弃去孔内液体。重复3次。每孔加入Streptavidin-HRP工作液100μl。盖上封板膜，室温孵育20分钟。洗板3次，每孔加入TMB液体100μl，室温(18-25℃)避光孵育25分钟。迅速每孔加入100μl Stop solution终止反应。终止后10分钟内，用M2e仪器检测波长450nm读值。
用GraphPad Prism软件分析，将OD450值转化为TNF-α和IFN-α的含量，并拟合化合物剂量效应曲线，计算化合物的EC50值。
结果见图1(a)和(b)。
结果显示，本申请的抗体-药物偶联物在高浓度条件下对人全血有活性，但在生理血液浓度下不有诱导细胞因子产生，显示本申请抗体-药物偶联物有较好的安全性和较低的系统毒性，且优于对照ADC1。
实施例5
抗体-药物偶联物、肿瘤细胞与人外周血单核细胞(PBMC)共孵育试验
将受试抗体-药物偶联物用PBS缓冲液稀释到400nM并按4倍梯度稀释后加入到96孔细胞板中，共7个浓度，每个浓度2复孔。阴性对照孔每孔加入0.2％DMSO。
将提前培养好的NCI-N87，JIM-1和MDA-MB-231细胞(细胞购自American Type Culture Collection)消化收集得到单细胞悬液，用培养液调整到2×106细胞/毫升。复苏冻存的人PBMC细胞，用完全培养基重悬细胞后计数，并将细胞悬液用培养液调整到2×107细胞/毫升，将肿瘤细胞和PBMC按照1:1体积混合后每孔加入100μl混合后的细胞(500，000细胞/孔)。将细胞板放入37℃，5％CO2培养24h后取上清测定TNF-α和IFN-α浓度，以及树突状细胞(DC)和巨噬细胞的激活情况。
TNF-α浓度检测，使用达科卫TNF-α ELISA试剂盒(货号1117202)进行检测，每孔加入100μl梯度稀释后的Cytokine standard至标准品孔，加入100μl 10倍稀释的待测样品至样本孔，加入1×Dilutionbuffer R 100μl至空白对照孔。每孔加入Biotinylated antibody工作液50μl。混匀后盖上封板膜，室温孵育3小时。洗板3次：扣去孔内液体，每孔加入1×Washing buffer工作液300μl；停留1分钟后弃去孔内液体。重复3次。每孔加入Streptavidin-HRP工作液100μl。盖上封板膜，室温孵育20分钟。洗板3次，每孔加入TMB液体100μl，室温(18-25℃)避光孵育25分钟。迅速每孔加入100μl Stop solution终止反应。终止后10分钟内，用M2e仪器检测波长450nm读值。
IFN-α浓度检测，使用达科卫IFN-α ELISA试剂盒(货号1110012)进行检测，每孔加入100μl梯度稀释后的Cytokine standard至标准品孔，加入100μl 2倍稀释的待测样品至样本孔，加入1×Dilutionbuffer R 100μl至空白对照孔。每孔加入Biotinylated antibody工作液50μl。混匀后盖上封板膜，室温孵育3小时。洗板3次，扣去孔内液体，每孔加入1×Washing buffer工作液300μl；停留1分钟后弃去孔内液体，重复3次。每孔加入Streptavidin-HRP工作液 100μl。盖上封板膜，室温孵育20分钟。洗板3次，每孔加入TMB液体100μl，室温(18-25℃)避光孵育25分钟。迅速每孔加入100μl Stop solution终止反应。终止后10分钟内，用M2e仪器检测波长450nm读值。
树突状细胞和巨噬细胞激活情况检测，采用FACS检测共孵育后PBMC中DC细胞(HLA-DR+CD11c+)、巨噬细胞(CD68+CD11b+)的激活情况。
结果见表3和图2(a)和(b)。
结果显示，本申请的抗体-药物偶联物在肿瘤细胞存在下，可以诱导人PBMC细胞因子，例如免疫细胞因子(如TNF-α和/或IFN-α)表达，并诱导免疫细胞，例如树突状细胞、巨噬细胞活化，且优于对照ADC1。
表3
实施例6
抗体-药物偶联物、肿瘤细胞与人外周血单核细胞(PBMC)共孵育试验
将受试抗体-药物偶联物用PBS缓冲液稀释到100nM-400nM并按4倍梯度稀释后加入到96孔细胞板中，共7个浓度，每个浓度2复孔。阴性对照孔每孔加入0.2％DMSO。将提前培养好的HepG2细胞消化收集得到单细胞悬液，用培养液调整到2×106细胞/毫升。复苏冻存的人PBMC细胞，用完全培养基重悬细胞后计数，并将细胞悬液用培养液调整到2×107细胞/毫升，将肿瘤细胞和PBMC按照1:1体积混合后每孔加入100μl混合后的细胞(500，000细胞/孔)。将细胞板放入37℃，5％CO2培养18h后取上清测定TNF-α和IFN-α浓度，并检测树突状细胞(DC)和巨噬细胞的激活情况。
TNF-α浓度检测，使用达科卫TNF-α ELISA试剂盒(货号1117202)进行检测，每孔加入100μl梯度稀释后的Cytokine standard至标准品孔，加入100μl 10倍稀释的待测样品至样本孔，加入1×Dilutionbuffer R 100μl至空白对照孔。每孔加入Biotinylated antibody工作液50μl。混匀后盖上封板膜，室温孵育3小时。洗板3次：扣去孔内液体，每孔加入1×Washing buffer工作液300μl；停留1分钟后弃去孔内液体。重复3次。每孔加入Streptavidin-HRP工 作液100μl。盖上封板膜，室温孵育20分钟。洗板3次，每孔加入TMB液体100μl，室温(18-25℃)避光孵育25分钟。迅速每孔加入100μl Stop solution终止反应。终止后10分钟内，用M2e仪器检测波长450nm读值。
IFN-α浓度检测，使用达科卫IFN-α ELISA试剂盒(货号1110012)进行检测，每孔加入100μl梯度稀释后的Cytokine standard至标准品孔，加入100μl 2倍稀释的待测样品至样本孔，加入1×Dilutionbuffer R 100μl至空白对照孔。每孔加入Biotinylated antibody工作液50μl。混匀后盖上封板膜，室温孵育3小时。洗板3次，扣去孔内液体，每孔加入1×Washing buffer工作液300μl；停留1分钟后弃去孔内液体，重复3次。每孔加入Streptavidin-HRP工作液100μl。盖上封板膜，室温孵育20分钟。洗板3次，每孔加入TMB液体100μl，室温(18-25℃)避光孵育25分钟。迅速每孔加入100μl Stop solution终止反应。终止后10分钟内，用M2e仪器检测波长450nm读值。
树突状细胞和巨噬细胞激活情况检测，采用FACS检测共孵育后PBMC中DC细胞(HLA-DR+CD11c+)、巨噬细胞(CD68+CD11b+)的激活情况。
结果见图3、4和5。
结果显示，本申请的抗体-药物偶联物在肿瘤细胞存在下，可以诱导人PBMC细胞因子，例如免疫细胞因子(如TNF-α和/或IFN-α)的表达量明显提高。本申请的抗体-药物偶联物可以使得免疫细胞，例如树突状细胞、巨噬细胞活化，使得其活性明显提高。
实施例7
利用hTLR8基因敲入的人源化小鼠建立hGPC3-MC38结肠癌动物模型并检测药物的体内药效
hGPC3-MC38细胞：是通过定点修饰的转基因技术构建的在鼠肠癌细胞MC38表面稳定表达人GPC3蛋白的细胞株；抗人GPC3抗体结合流式细胞术(FACS)检测证实该细胞株上人hGPC3(hGPC3)蛋白高度表达。
hTLR8-C57BL/6小鼠(hTLR8人源化鼠)：购自百奥赛图公司的转入了人TLR8(hTLR8)基因的C57BL/6小鼠，收集野生型C57BL/6和hTLR8人源化C57BL/6鼠的脾细胞，并用种属特异性抗TLR8抗体进行流式细胞术分析，结果显示hTLR8-C57BL/6鼠的DC细胞表面检测到hTLR8，而野生鼠中则检测不到hTLR8的表达，证实了hTLR8基因的敲入及蛋白表达。TLR8激动剂TLR8-506和GS-9688刺激的采集自hTLR8-C57BL/6小鼠的脾细胞，ELISA检 测显示TNFα、IFNγ的分泌增加，证实hTLR8-C57BL/6小鼠中hTLR8的功能(小鼠TLR8没有功能)。
体内药效实验1：
将PBS重悬的hGPC3-MC38细胞以1×106个/0.1mL/只接种于8周龄的雌性hTLR8-C57BL/6小鼠的右前肩胛处皮下，待平均肿瘤体积达到～120mm3时按肿瘤体积挑选分组，每组6-8只；将本申请抗体-药物偶联物用PBS缓冲液稀释至1–5mg/mL，并于分组当天(第0天)开始按照10mg/kg剂量通过静脉注射(i.v)途径给药，给药频率为每5天给药一次，连续给药3次。通过测量肿瘤体积计算抑瘤率。抑瘤率(TGI％)＝100％-(测量当天治疗组肿瘤体积-第0天给药组肿瘤体积)/(测量当天对照组肿瘤体积-第0天对照组肿瘤体积)。当肿瘤发生消退时，抑瘤率＝【1-(治疗组测量当天肿瘤体积÷治疗组第0天肿瘤体积)÷(对照组测量当天肿瘤体积÷照组肿第0天对瘤体积)】÷【1-(对照组第0天肿瘤体积÷对照组测量当天肿瘤体积)】×100％。
结果见表4和图6。
表4
结果显示，本申请抗体-药物偶联物能够在体内有效抑制肿瘤细胞生长，且优于对照ADC2。
体内药效实验2：
将PBS重悬的hGPC3-MC38细胞以1×106个/0.1mL/只接种于8周龄的雌性hTLR8-C57BL/6小鼠的右前肩胛处皮下，待平均肿瘤体积达到～120mm3时按肿瘤体积挑选分组，每组6-8只；将本申请抗体-药物偶联物用PBS缓冲液稀释至1–5mg/mL，并于分组当天(第0天)开始按照静脉注射(10mg/kg)或皮下注射(15mg/kg)途径给药，给药频率为每周一次(QW)，连续给药2次。
结果见表5和图7。
表5
结果显示，本申请抗体-药物偶联物静脉注射和皮下注射均能够在体内有效抑制肿瘤细胞生长。
肿瘤再接种(Tumor rechallenge)实验：
挑选肿瘤完全消退的小鼠和未经药物治疗、未接种过肿瘤的hTLR8人源化小鼠进行rechallenge实验：将PBS重悬的WT MC38细胞以5×105个/0.1mL/只接种于hTLR8人源化小鼠的左前肩胛处皮下，接种当天为Day 0，之后每2天测量肿瘤体积。
结果见图8。
肿瘤再接种实验结果表明，本申请抗体-药物偶联物能够诱导长期的免疫记忆作用，对肿瘤细胞产生长期有效的生长抑制作用。
前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本申请所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保留在所附的权利要求和其等同方案的范围内。
本申请的序列列表(均为氨基酸序列，序列的定义/说明参见本文前述部分)：

Claims (80)

  1. 一种配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(II-2A)所示的结构：
    其中，
    R1为任选取代的氨基；
    X1选自任选取代的-CH2-；
    X3选自任选取代的-CH＝或-N＝；
    R2选自氢和任选取代的C1-C6烷基，当所述R2包含亚甲基单元时，所述R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    W不存在，或W选自任选取代的C1-C6烷基，当所述W包含亚甲基单元时，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    B选自以下组：任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
    Z选自-N(RZ-1)-，其中RZ-1选自H或任选取代的C1-C6的烷基；
    环A选自：任选取代的脂环基、任选取代的脂杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
    RA-1选自氢、卤素、羟基、氨基、任选取代的C1-C6烷基，当所述RA-1包含亚甲基单元时，所述RA-1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    m选自1、2或3；
    通式中波浪线表示通过Z基团上的氮原子，与配体直接连接，或者通过接头单元与配体连接。
  2. 如权利要求1所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(II-2B)所示的结构：
    其中，
    R1为任选取代的氨基；
    X1选自任选取代的-CH2-；
    X3选自任选取代的-CH＝或-N＝；
    R2选自氢和任选取代的C1-C6烷基，当所述R2包含亚甲基单元时，所述R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    W不存在，或W选自任选取代的C1-C6烷基，当所述W包含亚甲基单元时，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    B选自以下组：任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
    Z选自-N(RZ-1)-，其中RZ-1选自H或任选取代的C1-C6的烷基；
    环A选自：任选取代的脂环基、任选取代的脂杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
    RA-1选自氢、卤素、羟基、氨基、任选取代的C1-C6烷基，当所述RA-1包含亚甲基单元时，所述RA-1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    m选自1、2或3；
    通式中波浪线表示通过L基团上的氮原子或碳原子，与配体连接；
    L为接头单元。
  3. 如权利要求1所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物为式(II-2C)所示的结构：
    其中，
    R1为任选取代的氨基；
    X1选自任选取代的-CH2-；
    X3选自任选取代的-CH＝或-N＝；
    R2选自氢和任选取代的C1-C6烷基，当所述R2包含亚甲基单元时，所述R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    W不存在，或W选自任选取代的C1-C6烷基，当所述W包含亚甲基单元时，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    B选自以下组：任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
    Z选自-N(RZ-1)-，其中RZ-1选自H或任选取代的C1-C6的烷基；
    环A选自：任选取代的脂环基、任选取代的脂杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
    RA-1选自氢、卤素、羟基、氨基、任选取代的C1-C6烷基，当所述RA-1包含亚甲基单元时，所述RA-1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    m选自1、2或3；
    L为接头单元；
    n为1到10的整数或小数；
    Pc为配体。
  4. 如权利要求1-3中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述R1为-NH2。
  5. 如权利要求1-3中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述X1选自-CH2-或
  6. 如权利要求1-3中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药 用的盐，其中，所述X3选自-CH＝或-C(CH3)＝。
  7. 如权利要求1-3中任一项所述的化合物或其偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，
    R2选自任选被1、2或3个R2-1取代的C1-C6烷基；R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个R2-2取代，所述R2-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
    其中，R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(R2-3)-替代，R2-3选自：氢或C1-C3的烷基。
  8. 如权利要求7所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，R2-1各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、羟基、氨基、-CN、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CH3或
  9. 如权利要求1-8中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，R2选自 其中，R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-NH-替代。
  10. 如权利要求1-9中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，R2选自：
  11. 如权利要求1-3中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，
    W选自任选被1、2或3个Rw-1取代的C1-C6亚烷基；Rw-1各自独立地选自氢、卤素、 羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个Rw-2取代，所述Rw-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
    其中，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(Rw-3)-替代；Rw-3选自：氢或C1-C3的烷基。
  12. 如权利要求11所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，Rw-1各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、碘、羟基、氨基、-CN、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CH3或
  13. 如权利要求12所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，W选自其中，W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-NH-替代。
  14. 如权利要求13所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，W选自
  15. 如权利要求1-3中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，B选自苯基和吡啶基，所述苯基和吡啶基各自独立地任选被1、2或3个RB-1取代，所述RB-1各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C1-C3的烷氧基。
  16. 如权利要求1-15中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述B选自优选地，所述B选自
  17. 如权利要求1-3中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述A选自：苯基、吡啶基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基。
  18. 如权利要求1-17中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述A选自苯基和吡啶基。
  19. 如权利要求1-3中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，
    RA-1为RA2-1-Lx-；
    Lx选自：-(CH2)t-、-(CH2)tO-、-O(CH2)t-、-(CH2)tN(RL-1)-、-(CH2)tS-、-(CH2)tC(＝O)-、-(CH2)tN(RL-1)C(＝O)-、其中RL-1选自H或C1-C3的烷基，t选自0、1、2或3；
    RA2-1选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6的烷基、脂环基、脂杂环基、芳基和杂芳基，其中所述C1-C6的烷基、脂环基、脂杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被1、2或3个RA2-2取代；RA2-2选自氢、卤素、羟基、氨基、和任选被1、2或3个RA2-3取代的C1-C6的烷基；RA2-3各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基和C1-C3的烷基；
    其中，RA2-1的任意一个亚甲基单元可被以下结构替换：-O-、-S-、-S(＝O)2-、-NH-、-CO-、
    m选自1、2或3。
  20. 如权利要求19所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，Lx为单键或-NHC(＝O)-。
  21. 如权利要求19或20所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，RA2-1各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、或任选被1、2或3个RA2-2 取代的：C1-C6的烷基、 其中，RA2-1的任意一个亚甲基单元可被以下结构替换：-O-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-NH-、-C(O)-、
  22. 如权利要求1-21中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，RA-1选自：氢、氟、氯、溴、碘、羟基、氨基、氰基、巯基、-CH3、-CH(＝O)、-C(＝O)OH、-OCH(＝O)、-SH(＝O)、-SH(＝O)2、-CH2CH3、-CH2OH、-OCH3、-NHCH3、-CH2NH2、-S(＝O)2NH2、-NHSH(＝O)2、-SCH3、-CH2SH、-S(＝O)CH3、-CH2SH(＝O)、-S(＝O)2CH3、-CH2SH(＝O)2、-NHCH(＝O)、-C(＝O)NH2、-CH2CH(＝O)、-CH2NHCH(＝O)、-C(＝O)NHCH3、
  23. 如权利要求1-22中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，RA-1为RA2-1-Lx-，Lx为单键或酰胺键，RA2-1各自独立地选自任选被1、2或3个RA2-2取代的：苯基和吡啶基；RA2-2选自氢、卤素、羟基、氨基和任选被1、2或3个RA2-3取代的C1-C6的烷基；RA2-3各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基；
    优选地，RA-1选自：
    更优选地，RA-1选自：
  24. 如权利要求1-23中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，Z选自-N(RZ-1)-，所述RZ-1选自H或任选被1、2或3个氟、氯、溴、碘、羟基或氨基取代的C1-C6的烷基；优选地，RZ-1选自H、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CH3。
  25. 如权利要求1-24中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述结构单元选自：
    其中，
    R2分别如权利要求7-10中任一项所定义；
    RZ-1如权利要求1或24所定义；
    W分别如权利要求11-14中任一项所定义；
    RA-1分别如权利要求19-23中任一项所定义。
  26. 根据权利要求2-25中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，接头单元L为-Tr-L3-L2-L1c-，
    Tr选自和单键；
    L1c选自
    L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
    L3选自单键或1-4个氨基酸构成的肽残基，所述肽残基为由选自以下组中的氨基酸形成的肽残基：缬氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、瓜氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、丝氨酸。
  27. 根据权利要求26所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
  28. 根据权利要求2-27中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，接头单元L为-L3-L2-L1c-，
    L1c选自
    L2选自 和单键，其中q为1到20的整 数；
    L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
  29. 根据权利要求2-28中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，接头单元L为-L3-L2-L1c-或-Tr-L3-L2-L1c-，所述L3端或Tr端与Z基团的氮原子相连，L1c端与配体相连。
  30. 根据权利要求2-29中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，接头单元L选自：
  31. 根据权利要求1-30中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物如式(II-2C-1)和(II-2C-2)所示：
    其中，
    RZ-1选自H或任选被1、2或3个氟、氯、溴、碘、羟基或氨基取代的C1-C6的烷基；
    X4和X5各自独立地选自-CH＝和-N＝；
    R2选自任选被1、2或3个R2-1取代的C1-C6烷基；R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各 自独立地任选被1、2或3个R2-2取代；R2-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(R2-3)-替代；R2-3选自：氢或C1-C3的烷基；
    W选自任选被1、2或3个Rw-1取代的C1-C6烷基；Rw-1各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个Rw-2取代；Rw-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(Rw-3)-替代；Rw-3选自：氢或C1-C3的烷基；
    RA-1选自RA2-1-Lx-；
    Lx选自单键、C1-C6亚烷基、-O-、-S-、-C(O)-、-NH-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-C(O)-N(C1-C6烷基)-、或-N(C1-C6亚烷基)-C(O)-；
    RA2-1为芳基、杂芳基或杂环基，优选苯基、吡啶基或异苯并呋喃酮基，且RA2-1任选地被一个或多个取代基RA2-2所取代，；
    其中RA2-2各自独立地选自-C1-C6烷基、氨基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C1-C6烷基氨基、-C1-C6烷基-NH(C1-C6烷基)、-C1-C6烷基-N(C1-C6烷基)2、羟基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基或-C(O)NReRf，且其中Re和Rf各自独立地选自H或C1-C6烷基，或者Re和Rf与它们所连接的氮原子共同形成5或6元含氮杂环，例如四氢吡咯基或哌啶基，所述5或6元含氮杂环任选地被一个或多个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氧代、氨基、-NH(C1-C6烷基)或-N(C1-C6烷基)2的取代基所取代；
    L1c选自
    L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
    L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-；
    n为1到10的整数或小数；
    Pc为配体。
  32. 根据权利要求1-31中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物选自以下结构式：
    n为1到10的整数或小数；
    Pc为配体。
  33. 如权利要求3-32中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，n为2到8的整数或小数。
  34. 如权利要求3-33中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，Pc为抗体或其抗原结合片段。
  35. 如权利要求3-34所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述Pc靶向GPC3、Trop2和HER2；优选地，所述抗体选自：Trastuzumab、Pertuzumab、Sacituzumab和Codrituzumab。
  36. 根据权利要求1-35中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物选自以下结构式：
    其中，n为1到10的整数或小数。
  37. 一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述化合 物为式(II-3A)所示的结构：
    其中，
    R1为任选取代的NH2；
    X1选自任选取代的-CH2-；
    X3选自任选取代的-CH＝或-N＝；
    R2选自氢和任选取代的C1-C6烷基；当所述R2包含亚甲基单元时，所述R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    W不存在，或W选自任选取代的C1-C6烷基；当所述W包含亚甲基单元时，所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    B选自以下组：任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
    Z选自-N(RZ-1)-，其中RZ-1选自H或任选取代的C1-C6的烷基；
    环A选自：任选取代的脂环基、任选取代的脂杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
    RA-1选自氢、卤素、羟基、氨基、任选取代的C1-C6烷基，当所述RA-1包含亚甲基单元时，所述RA-1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、或各自独立地被任意结构替代；
    m选自1、2或3；
    Lw为-L3-L2-L1；
    L1选自
    L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
    L3选自选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-半胱瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
  38. 如权利要求37所述化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中，所述化合物如式(II-1B-1)和(II-1B-2)所示：
    其中，
    RZ-1选自H或任选被1、2或3个氟、氯、溴、碘、羟基或氨基取代的C1-C6的烷基；
    X4和X5各自独立地选自-CH＝和-N＝；
    R2选自任选被1、2或3个R2-1取代的C1-C6烷基；R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各 自独立地任选被1、2或3个R2-2取代；R2-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；R2的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(R2-3)-替代；R2-3选自：氢或C1-C3的烷基；
    W选自任选被1、2或3个Rw-1取代的C1-C6烷基；Rw-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基、氨基、C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基，其中所述C1-C6的烷基和C3-C6的环烷基各自独立地任选被1、2或3个Rw-2取代；Rw-2各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；所述W的所述亚甲基单元各自独立地不被替代、被-O-替代、或被-N(Rw-3)-替代；Rw-3选自：氢或C1-C3的烷基；
    RA-1选自RA2-1-Lx-；
    Lx选自单键、C1-C6亚烷基、-O-、-S-、-C(O)-、-NH-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-C(O)-N(C1-C6烷基)-、或-N(C1-C6亚烷基)-C(O)-；
    RA2-1为芳基、杂芳基或杂环基，优选苯基、吡啶基或异苯并呋喃酮基，且RA2-1任选地被一个或多个取代基RA2-2所取代；
    RA2-2各自独立地选自-C1-C6烷基、氨基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C1-C6烷基氨基、-C1-C6烷基-NH(C1-C6烷基)、-C1-C6烷基-N(C1-C6烷基)2、羟基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基或-C(O)NReRf，且其中Re和Rf各自独立地选自H或C1-C6烷基，或者Re和Rf与它们所连接的氮原子共同形成5或6元含氮杂环，例如四氢吡咯基或哌啶基，所述5或6元含氮杂环任选地被一个或多个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氧代、氨基、-NH(C1-C6烷基)或-N(C1-C6烷基)2的取代基所取代；
    Lw选自
  39. 一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其选自：
  40. 一种配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(Ⅲ-2A)所示的结构：
    其中，
    X选自-S-和-O-；
    R1选自任选被一个或多个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；
    其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(R1-2)-、-C(＝O)-和-NHC(＝O)-，R1-2选自：氢或C1-C6的烷基；
    环A选自苯基或杂芳基；
    R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被一个或多个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
    V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3烷基和C3-C6环烷基，所述C1-C3烷基和C1-C3环烷基各自独立地任选被一个或多个RV3取代，所述RV3各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
    其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(RV4)-、-C(＝O)-、-N(RV4)C(＝O)-、RV4选自H，C1-C6的烷基和
    Y选自-N(RY1)-、-O-、-S-、
    RY1选自氢和C1-C6的烷基；
    q选自0、1、2或3；
    p选自1、2、3、4、5、7和8；
    通式中波浪线表示通过Y基团上的氮原子或氧原子，与配体直接连接，或者通过接头单元与配体连接。
  41. 如权利要求40所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(Ⅲ-2B)所示的结构：
    其中，
    X选自-S-和-O-；
    R1选自任选被一个或多个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；
    其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(R1-2)-、-C(＝O)-和-NHC(＝O)-，R1-2选自：氢或C1-C6的烷基；
    环A选自苯基或杂芳基；
    R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被一个或多个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
    V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3烷基和C3-C6环烷基，所述C1-C3烷基和C1-C3环烷基各自独立地任选被一个或多个RV3取代，所述RV3各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
    其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(RV4)-、-C(＝O)-、-N(RV4)C(＝O)-、RV4选自H，C1-C6 的烷基和
    Y选自-N(RY1)-、-O-、-S-、
    RY1选自氢和C1-C6的烷基；
    q选自0、1、2或3；
    p选自1、2、3、4、5、7和8；
    L为接头单元；
    通式中波浪线表示通过L基团上的氮原子或碳原子，与配体连接。
  42. 如权利要求40所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述配体-药物偶联物包含式(Ⅲ-2C)所示的结构：
    其中，
    X选自-S-和-O-；
    R1选自任选被一个或多个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；
    其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(R1-2)-、-C(＝O)-和-NHC(＝O)-，R1-2选自：氢或C1-C6的烷基；
    环A选自苯基或杂芳基；
    R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被一个或多个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
    V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3烷基和C3-C6环烷基，所述C1-C3烷基和C1-C3环烷基各自独立地任选被一个或多个RV3取代，所述RV3各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
    其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(RV4)-、-C(＝O)-、-N(RV4)C(＝O)-、RV4选自H，C1-C6的烷基和
    Y选自-N(RY1)-、-O-、-S-、
    RY1选自氢和C1-C6的烷基；
    q选自0、1、2或3；
    p选自1、2、3、4、5、7和8；
    L为接头单元；
    n为1到10的整数或小数；
    Pc为配体。
  43. 如权利要求40-42中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述R1选自任选被1、2或3个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、-CH3、-CH2CH3和其中R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(CH3)-和-NH-。
  44. 如权利要求40-43中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述R1选自其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(CH3)- 和-NH-。
  45. 如权利要求40-44中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述R1选自
  46. 如权利要求40-42中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被1、2或3个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基。
  47. 如权利要求40-46中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、-CH3、-CH2CH3和-OCH3。
  48. 如权利要求40-42中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述环A选自苯基、吡啶基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基。
  49. 如权利要求40-48中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述环A选自苯基或吡啶基。
  50. 如权利要求40-42中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、-CH3、-CH2CH3和其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-NH-、-CO-、-NHCO-、
  51. 如权利要求40-50中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述V选自 其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-NH-、-CO-、-NHCO-、
  52. 如权利要求40-51中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述V选自
  53. 如权利要求40-42中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述Y选自-NH-、-O-、-S-、
  54. 如权利要求40-53中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述结构单元选自： 优选地，其选自 其中，
    X选自-S-和-O-；
    R1如权利要求40、43-45中任一项所定义；
    R2如权利要求40、46或47所定义；
    V如权利要求40、50-52中任一项所定义；
    Y如权利要求40或53所定义。
  55. 根据权利要求40-42中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，接头单元L为-Tr-L3-L2-L1c-，
    Tr选自 和单键；
    L1c选自
    L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
    L3选自单键或1-4个氨基酸构成的肽残基，所述肽残基为由选自以下组中的氨基酸形成的肽残基：缬氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸。
  56. 根据权利要求55所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的 盐，其中，L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
  57. 根据权利要求40-56中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，接头单元L为-L3-L2-L1c-，
    L1c选自
    L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
    L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
  58. 根据权利要求40-57中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，接头单元L为-L3-L2-L1c-或-Tr-L3-L2-L1c-，所述L3端或Tr端与Z基团的氮原子相连，L1c端与配体相连。
  59. 根据权利要求40-58中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，接头单元L选自：
  60. 根据权利要40-59中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物如式(Ⅲ-2C-1)和(Ⅲ-2C-2)所示：
    其中，
    X选自-S-和-O-；
    R1选自任选被1、2或3个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；其中R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(CH3)-和-NH-；
    R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被1、2或3个R2-1取代；所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基；
    V选自C1-C8亚烷基，优选C1-C6亚烷基，其中所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基中的一个或多个碳原子可以任选地被选自N、O或S的杂原子所替换，并且所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、C1-C6烷基、氧代、羟基、C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基或卤代C1-C6烷氧基；
    Y为-N(RY1)-；
    RY1选自氢和C1-C6的烷基；
    L为-L3-L2-L1c-或-Tr-L3-L2-L1c-；
    Tr选自：
    L1c选自
    L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
    L3选自选自以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、-甘氨酸-谷氨酰胺-、-甘氨酸-天冬氨酸-、-甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-；
    n为1到10的整数或小数；
    Pc为配体。
  61. 根据权利要求40-60中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物选自以下结构式：
    n为1到10的整数或小数；
    Pc为配体。
  62. 如权利要求40-61中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，n为2到8的整数或小数。
  63. 如权利要求40-62中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，Pc为抗体或其抗原结合片段。
  64. 如权利要求63所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物，或其可药用的盐，其中，所述Pc靶向GPC3、Trop2或HER2；优选地，所述抗体选自：Trastuzumab、Pertuzumab、Sacituzumab和Codrituzumab。
  65. 根据权利要求40-64中任一项所述的配体-药物偶联物、其异构体、或其混合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述配体-药物偶联物选自以下结构式：
    n为1到10的整数或小数。
  66. 一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中所述化合物为式(Ⅲ-1B)所示的结构：
    其中，
    X选自-S-和-O-；
    R1选自任选被一个或多个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；
    其中，R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(R1-2)-、-C(＝O)-和-NHC(＝O)-，R1-2选自：氢或C1-C6的烷基；
    环A选自苯基或杂芳基；
    R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被一个或多个R2-1取代，所述R2-1各自独立地选自：氢、 卤素、羟基或氨基；
    V选自-(C(RV1)(RV2))p-，其中RA1和RA2各自独立地选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3烷基和C3-C6环烷基，所述C1-C3烷基和C1-C3环烷基各自独立地任选被一个或多个RV3取代，所述RV3各自独立地选自：氢、卤素、羟基或氨基；
    其中，V的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(RV4)-、-C(＝O)-、-N(RV4)C(＝O)-、RV4选自H，C1-C6的烷基和
    Y选自-N(RY1)-、-O-、-S-、
    RY1选自氢和C1-C6的烷基；
    q选自0、1、2或3；
    p选自1、2、3、4、5、7和8；
    LW为--Tr-L3-L2-L1，
    Tr选自 和单键；
    L1选自
    L2选自 和单键，其中q为1到20的整数；
    L3选自单键或以下肽残基：-缬氨酸-半胱氨酸-、-缬氨酸-瓜氨酸-、-缬氨酸-赖氨酸-、-缬氨酸-丙氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-、甘氨酸-谷氨酰胺、甘氨酸-天冬氨酸-、甘氨酸-天冬酰胺-、-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-、-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-甘氨酸-、-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-、-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-。
  67. 如权利要求66所述化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中，所述化合物如式(Ⅲ-3A-1)和(Ⅲ-3A-2)所示：
    其中，
    X选自-S-和-O-；
    R1选自任选被1、2或3个R1-1取代的C1-C6烷基，R1-1各自独立地选自：氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、C1-C3的烷基和C3-C6的环烷基；其中R1的所述亚甲基单元各自独立地不被替代，或被选自以下基团替换：-O-、-N(CH3)-和-NH-；
    R2选自氢、氯、溴、碘、羟基、氨基、巯基、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基，所述C1-C3烷基和C1-C3烷氧基各自独立地任选被1、2或3个R2-1取代；所述R2-1各自独立地选自：氢、卤素、羟基和氨基；
    V选自C1-C8亚烷基，优选C1-C6亚烷基，其中所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基中的一个或多个碳原子可以任选地被选自N、O或S的杂原子所替换，并且所述C1-C8亚烷基和C1-C6亚烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、C1-C6烷基、氧代、羟基、C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基或卤代C1-C6烷氧基；
    Y为-N(RY1)-；
    RY1选自氢和C1-C6的烷基；
    LW选自
  68. 一种化合物或其偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其选自：
  69. 根据权利要求37所述的化合物，其为式(A-1)化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物，
    其中，
    RA-1选自RA2-1-Lx-；
    Lx选自单键、C1-C6亚烷基、-O-、-S-、-C(O)-、-NH-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-C(O)-N(C1-C6烷基)-、或-N(C1-C6亚烷基)-C(O)-，
    RA2-1为芳基、杂芳基或杂环基，优选苯基、吡啶基或异苯并呋喃酮基，且RA2-1任选地被一个或多个取代基RA2-2所取代，
    其中RA2-2各自独立地选自-C1-C6烷基、氨基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C1-C6烷基氨基、-C1-C6烷基-NH(C1-C6烷基)、-C1-C6烷基-N(C1-C6烷基)2、羟基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基羟基、-C1-C6烷基-C1-C6烷氧基、卤素、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基或-C(O)NReRf，且其中Re和Rf各自独立地选自H或C1-C6烷基，或者Re和Rf与它们所连接的氮原子共同形成5或6元含氮杂环，例如四氢吡咯基或哌啶基，所述5或6元含氮杂环任选地被一个或多个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氧代、氨基、-NH(C1-C6烷基)或-N(C1-C6烷基)2的取代基所取代，
    R2选自-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6亚烷基羟基或卤代C1-C6烷基；
    W选自-C1-C6亚烷基-、-O-C1-C6亚烷基-；
    B为苯基，且B任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基，且
    Z为-NH(RZ-1)，所述RZ-1选自H、-C1-C6烷基或卤代C1-C6烷基；
    L为接头单元，优选L为如权利要求26-30任一项所定义的接头单元，其中的波浪线表示通过L基团上的氮原子或碳原子与配体相连。
  70. 根据权利要求69所述的化合物，其中接头单元L选自：
  71. 一种化合物，其选自以下的化合物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物：
  72. 根据权利要求3所述的配体-药物偶联物，其为式(A-2)的配体-药物偶联物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物，
    其中，RA-1、W、B、Z和R2如权利要求69所定义，L为如权利要求70所定义的接头单元，n为1-10的整数或小数，优选n为2-8的整数或小数，Pc为配体，优选Pc为抗体或其抗原结合片段。
  73. 根据权利要求72所述的配体-药物偶联物，其中Pc为靶向GPC3、Trop2和HER2的抗体或其抗原结合片段；优选地，所述抗体选自：Trastuzumab、Pertuzumab、Sacituzumab和Codrituzumab。
  74. 一种药物组合物，，其包含权利要求1-36或40-65中任一项所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂，或者，其包含权利要求69-73中任一项所述的化合物或配体-药物偶联物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物。
  75. 一种调节免疫系统功能的方法，包括施用权利要求1-36或40-65中任一项所述的配体-药物偶联物，或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐；或者，施用权利要求69-73中任一项所述的化合物或配体-药物偶联物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构 体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物；或者，施用权利要求74所述的药物组合物。
  76. 根据权利要求1-36或40-65中任一项所述的配体-药物偶联物、或其异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐；或权利要求69-73中任一项所述的化合物或配体-药物偶联物、或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、或异构体的混合物，或它们的可药用盐或溶剂化物；或权利要求74所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗疾病和/或症状。
  77. 根据权利要求76所述的用途，所述疾病和/或症状包含与Toll样受体(TLR)信号转导相关的疾病和/或症状。
  78. 根据权利要求76或77所述的用途，所述疾病和/或症状选自以下组：肿瘤、自身免疫性疾病、炎症、败血病、过敏、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、免疫缺陷和病毒引起的感染。
  79. 根据权利要求76-78任一项所述的用途，所述疾病和/或症状选自以下组：黑色素瘤、肺癌、肝癌、基底细胞癌、肾癌、骨髓瘤、胆道癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、直肠癌、头颈癌、腹膜肿瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤、成神经细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌和甲状腺癌。
  80. 根据权利要求76-78任一项所述的用途，所述疾病和/或症状选自以下组病毒引起的感染：登革热病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、寨卡病毒、HIV(人体免疫缺损病毒)、HBV(乙型肝炎病毒)、HCV(丙型肝炎病毒)、HPV(人乳头状瘤病毒)、RSV(呼吸道合胞病毒)、SARS-CoV(严重急性呼吸道综合征冠状病毒)、SARS-CoV-2(严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型)、MERS-CoV(中东呼吸综合征冠状病毒)和流感病毒。
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