CN116056691A - 使用每日低剂量的类视黄醇化合物治疗视觉障碍的方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了治疗患有视觉障碍的受试者的方法，所述方法包括每天向所述受试者施用约0.1mg至20mg剂量的类视黄醇化合物。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物是9‑顺式‑视黄醇乙酸酯。

Description

使用每日低剂量的类视黄醇化合物治疗视觉障碍的方法

相关申请的交叉引用

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不适用

背景技术

一些类型的遗传性视网膜缺陷扰乱或干扰了11-顺式-视黄醛的产生、转化和/或再生，所述11-顺式-视黄醛是类视黄醇或视觉循环中的关键维生素A衍生物。11-顺式-视黄醛是一种内源性类视黄醇，所述内源性类视黄醇在视网膜色素上皮(RPE)中产生并且由RPE通过全反式视黄醇(衍生自饮食的维生素A)的异构化和氧化产生。11-顺式-视黄醛起到发色团的作用，并且与视蛋白共价且可逆结合以形成视紫红质。当可见光子被11-顺式-视黄醛捕获时，视力启动，从而异构化为全反式视黄醛并与视蛋白解离。为了维持视力，需要使全反式视黄醛循环回到11-顺式-视黄醛，这通过涉及类视黄醇或视觉循环中的多种酶和蛋白质的一系列复杂的生化反应(醛还原为全反式视黄醇；醇的酯化；同时进行反式到顺式的异构化和水解为11-顺式-视黄醇；以及氧化为11-顺式-视黄醛)发生。

内源性类视黄醇缺乏症(如由编码视觉循环中使用的酶和蛋白质的基因中的突变引起的缺乏症或由衰老过程引起的缺乏症)损害11-顺式-视黄醛的合成或再生，其结果是由于无法转导视觉所需的光信号，所述合成或再生的结果由于11-顺式-视黄醛的短缺或耗尽而使视觉功能逐步丧失，并且最终导致失明。

LRAT和RPE65都是对视觉循环关键的基因。LRAT基因编码酶卵磷脂:视黄醇酰基转移酶(LRAT)，并且RPE65基因编码视网膜色素上皮蛋白65(RPE65)。酶LRAT负责在视觉循环中使11-反式-视黄醇酯化，而RPE65同时将11-反式-视黄醇酯水解为醇并使其异构化，因此所得产物为11-顺式-视黄醇。然后氧化步骤产生11-顺式-视黄醛。因此，LRAT和RPE65这两种酶中的每一种均负责11-顺式-视黄醛再生的关键步骤。

在表型上，LRAT或RPE65中的突变被诊断为莱伯氏先天性黑蒙症(Lebercongenital amaurosis，LCA)的亚型或视网膜色素变性(Retinitis pigmentosa，RP)的亚型。LCA是遗传性儿童失明的一种原因，所述遗传性儿童失明从出生或出生后不久影响儿童。患有LCA的患者缺乏产生足够量的11-顺式-视黄醛的能力，并且因此经受出生时视力严重下降、眼球震颤、瞳孔反应差和视网膜电图(ERG)严重减弱。LRAT或RPE65基因中的突变也与常染色体隐性遗传视网膜色素变性(autosomal recessive retinitis pigmentosa，arRP)相关，所述arRP是遗传性视网膜色素变性(RP)的一种，所述RP的特征在于视杆和视锥光感受器退化。患有arRP的患者可能在童年或中年失去视力。典型的视力丧失模式包括青春期的暗适应困难和夜盲症以及青年时期的中周视野丧失。arRP通常自身表现为原发性视杆退化和继发性视锥退化，并且因此被描述为视杆-视锥营养不良，其中视杆比视锥受更大的影响。这种光感受器细胞参与的顺序解释了为什么arRP患者最初表现出夜盲，并且只有在晚年才会在昼夜条件下出现视力障碍(Hamel C.,《罕见病孤儿药杂志(OrphanetJournal of Rare Diseases)》L·40(2006))。arRP是对在生命的头十年内具有良好的中央视力的光感受器退化患者的诊断，即使arRP发病也可能在中年开始或中年后更晚发生(“晚发性arRP”)。随着疾病的进展，患者失去远周边视力，最终发展为管状视力，并且最后在60岁时失去中央视力。

白点状视网膜变性是视网膜色素变性的另一种形式，它表现出视杆中缺乏11-顺式-视黄醛。由于缺乏11-顺式视黄醛，衰老也导致夜视下降和对比敏感度丧失。过量的未结合视蛋白被认为会随机刺激视觉转导系统。这可能会在系统中产生噪音，并且因此需要更多的光线和更大的对比度才能看清楚。

先天性静止性夜盲症(Congenital Stationary Night Blindness，CSNB)和白点状眼底是一组表现为夜盲症的疾病，但并未像RP一样存在进行性视力丧失。一些形式的CSNB是由于11-顺式-视黄醛的再循环延迟而引起的。直到最近，白点状眼底被认为是CSNB的特殊情况，其中视网膜外观异常，视网膜上出现数百个小白点。最近的研究表明，白点状眼底也是一种进行性疾病，即使比视网膜色素变性慢得多。白点状眼底是由导致11-顺式-视黄醛循环延迟的基因缺陷引起的。

内源性类视黄醇缺乏症也可能与衰老过程相关，即使在编码视觉循环中使用的酶和蛋白质的基因没有遗传性基因突变的情况下也是如此。由于缺乏11-顺式-视黄醛，年龄相关性视觉障碍包括例如夜视丧失、夜盲症和对比敏感。这与以下发现一致，即与人类衰老相关的光暴露后视杆介导的暗适应的显著减慢与视紫红质的延迟再生有关(Jackson,G.R.等人,《视觉研究杂志(J.Vision Research)》39,3975-3982(1999))。另外，过量的未结合视蛋白(由于11-顺式-视黄醛短缺)被认为会随机刺激视觉转导系统。这可能会在系统中产生噪声，并且因此需要更多的光线和/或更大的对比度才能看得清楚。

动物模型已表明，除非眼睛被遮住，否则类视黄醇化合物(即高度光敏的化合物)在几小时内就会被视网膜发出的光异构化或“漂白”。这些研究是在用合成类视黄醇治疗期间和治疗之后直到评估期将动物置于黑暗中进行的，以使合成类视黄醇的光异构化/漂白最小化。Batten ML等人“莱伯氏先天性黑蒙症的盲鼠模型中的视觉功能的药理学和rAAV基因疗法挽救(Pharmacological and rAAV Gene Therapy Rescue of Visual Functionsin a Blind Mouse Model of Leber Congenital Amaurosis)”《PLo-S医学(PLo-SMedicine)》2005；2:333；Margaron,P.,Castaner,L.和Narfstrom,K.“莱伯氏先天性黑蒙症的犬模型中的玻璃体内顺式类视黄醇替代疗法的评估(Evaluation of Intravitrealcis-Retinoid Replacement Therapy in a Canine Model Of Leber′s CongenitalAmaurosis)”,《眼科研究与视力学(Invest Ophthalmol Vis Sci)》2009；50:E-摘要6280；Gearhart PM,Gearhart C,Thompson DA,Petersen-Jones SM.“在Rpe65突变狗中通过玻璃体内施用9-顺式-视黄醛改善视觉功能(Improvement of visual performance withintravitreal administration of 9-cis-retinal in Rpe65-mutant dogs)”，《眼科学档案(Arch Ophthalmol)》2010；128(11):1442-8。

频繁施用任何类视黄醇以补偿漂白效果表明类视黄醇类化合物的众所周知的毒性。参见Teelmann,K“类视黄醇：迄今为止的毒性和致畸性(Retinoids:Toxicity andTeratogenicity to Date)”,《药理学与治疗学(Pharmac.Ther.)》,第40卷,第29-43页(1989)；Gerber,LE等人“类视黄醇施用期间脂质代谢的变化(Changes in LipidMetabolism During Retinoid Administration)”《美国皮肤病学会杂志(J.Amer.Acad.Derm.)》,第6卷,第664-74页(1982)；Allen LH“评估妇女和幼儿体内维生素A毒性的可能性(Estimating the Potential for Vit AToxicity in Women and YoungChildren)”《营养学杂志(J.Nutr.)》,第132卷,第2907-19页(2002)；Silverman,AK“维生素A过多综合征：类视黄醇副作用的范例(Hypervitaminosis ASyndrome:AParadigm ofRetinoid Side Effects)”,《美国皮肤病学会杂志》,第16卷,第1027-39页(1987)；Zech LA等人“口服异维甲酸治疗后血浆胆固醇和甘油三酯水平的变化(Changes in PlasmaCholesterol and Triglyceride Levels After Treatment with Oral Isotretinoin)”《皮肤病学档案(Arch.Dermatol.)》,第119卷,第987-93页(1983)。长期施用类视黄醇引起的毒性可能引起脂质代谢变化、肝脏损伤、恶心、呕吐、视力模糊、骨骼损伤、干扰骨骼发育以及其它严重不良效应。

在治疗因类视黄醇缺乏症导致的视力丧失或损害(一种需要终身治疗的慢性病状)的情况下，这些毒性作用可能非常重要，并且需要深思熟虑。此外，负面副作用在年轻患者中尤其令人担忧，所述年轻患者对与其身体发育相关的副作用的易感性已被充分记录。

响应于漂白而重复施用的需求和重复施用的不良严重副作用的组合给使用合成类视黄醇治疗由类视黄醇缺乏症引起的视力丧失带来了问题。早期的研究评估了类视黄醇用于治疗这些病症的有效性，并且得出结论，类视黄醇和类似化合物根本不是治疗类视黄醇缺乏病症的良好临床候选物。参见Fan J.等人“光防止外源性11-顺式-视黄醛在发色团缺陷型小鼠中维持视锥光感受器(Light Prevents Exogenous 11-cis Retinal fromMaintaining Cone Photoreceptors in Chromophore-deficient Mice)”,《眼科研究与视力学》2011年1月12日,10-6437。

先前的工作为了弥补类视黄醇化合物施用的已知负作用，开发了给药方案，其包括施用类视黄醇化合物的规定期间，随后是所需的药物假期或“休息期”(未进行药物施用的时间)(参见WO2011/13208和WO2013/134867)。值得注意的是，考虑到当施用更高剂量时类视黄醇化合物产生的负面副作用，这些给药方案中的每个给药方案都明确避免延长每天给药。

尽管不断努力开发用于治疗视觉障碍的类视黄醇化合物，但没有一种化合物获得FDA或任何其它监管机构的批准。因此，仍然需要开发类视黄醇化合物的给药方案，所述方案能够适当地平衡改善视觉功能的需要，同时避免或最小化副作用，以提供适当的益处，同时降低患者的风险。

本公开解决了此需求并且也提供了相关的优点。

发明内容

在一些方面，本文提供了治疗患有视觉障碍的受试者的方法，所述方法包括每天向所述受试者施用约0.1mg至20mg剂量的类视黄醇化合物。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物是9-顺式-视黄醇乙酸酯。

在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的总日剂量为约1mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的总日剂量为约2mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物每天施用一次。

在一些方面，本文提供了治疗患有视觉障碍的受试者的方法，所述方法包括每天向所述受试者施用一次有效量的视黄酯，其中所述有效量的视黄酯维持至少2nM的对应视黄醇的谷循环血浓度。

在另外的方面，本文提供了具有约0.10mg至20mg的9-顺式-视黄醇乙酸酯的单一单位剂量和试剂盒。

对于本领域技术人员而言，本发明的其它目标、特征和优点将根据以下详细描述和附图而变得显而易见。

附图说明

图1提供了类视黄醇循环的示意图。

图2绘制了口服施用9-顺式-视黄醇乙酸酯的血液中9-顺式-视黄醇循环水平的人体药代动力学(PK)数据，这些数据来自已完成的临床试验。

图3示意性地展示了用于描述观察到的临床数据的2室PK模型。

图4示出了在给药后700小时内循环血液中9-顺式-视黄醇水平的群体PK模型中观察到的和预测的9-顺式-视黄醇循环血浓度。

图5绘制了每天接受低剂量的9-顺式-视黄醇乙酸酯的人类患者体内预测的9-顺式-视黄醇循环血浓度。

具体实施方式

I.综述

本公开部分地基于令人惊讶的发现，在无休息期的情况下，每天低剂量的类视黄醇化合物或其衍生物可以用于有效改善患有由视觉循环的受损部分引起的视觉障碍的受试者的视觉功能。有利地，这种每天给药方案不仅提供了视觉功能的有效改善，还使与类视黄醇施用相关的众所周知的药物不良反应最小化。

具体地，在本公开之前，人们普遍认为，每天给药无疑将使类视黄醇化合物和其代谢物累积，从而导致不适当且增加的不良药物事件的发生率、严重程度和延长。认识到这些问题，本领域先前的临床工作集中于给药方案，所述给药方案包括药物假期休息期，在所述药物假期休息期中未施用治疗活性化合物。

出乎意料地，本发明的发明人已经发现，按照每天给药方案施用少量类视黄醇化合物可以实现谷稳态药物浓度，所述谷稳态药物浓度可以在视力方面提供临床改善，同时也最小化、减少或消除与类视黄醇化合物的施用相关的不期望的副作用。

II.定义

术语“视觉障碍”泛指眼睛的光感受器、组织或结构中的病症。视觉障碍包括但不限于视网膜退化、视网膜营养不良、光感受器功能丧失、光感受器细胞死亡以及结构或功能异常或缺乏。本公开的视觉障碍的特征通常在于受试者的功能性视力(包括例如日常生活所需的活动)受损或低于正常水平(包括完全丧失)；或者受试者的视觉功能(包括例如视敏度差、视网膜敏感度低或缺乏、视野狭窄或不可检测等)受损或低于正常水平。

术语“内源性类视黄醇缺乏症”是指与在同一物种的受试者的健康眼睛中发现的水平相比，内源性类视黄醇的较低水平延长。在一些情况下，受试者的健康眼睛可能经历短暂的11-顺式-视黄醛短缺，这导致短暂的失明，随后视力恢复，而在患有内源性类视黄醇缺乏症的受试者中，所述受试者缺乏可靠或快速地再生内源性水平的11-顺式-视黄醛的能力，这导致长时间和/或明显的11-顺式视黄醛缺乏。

术语“9-顺式-视黄醇乙酸酯”是指(2E,4E,6Z,8E)-3,7-二甲基-9-(2,6,6-三甲基环己-1-烯-1-基)壬-2,4,6,8-四烯-1-基乙酸酯(IUPAC名称)，其具有以下化学结构：

III.实施例的详细描述

A.治疗方法

本文提供了治疗患有视觉障碍的受试者的方法，所述方法包括每天向所述受试者施用约0.1mg至20mg剂量的类视黄醇化合物。

所述类视黄醇化合物的每日剂量通常较低并且不超过20mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约0.1mg至20mg、0.25mg至10mg、0.5mg至5mg或0.75mg至2.5mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约0.1mg至20mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约0.25mg至10mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为0.5mg至5mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为0.75mg至2.5mg。

在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约0.1mg、0.25mg、0.5mg、0.75mg、1.0mg、1.25mg、1.5mg、1.75mg、2.0mg、2.25mg、2.5mg、2.75mg、3.0mg、3.25mg、3.5mg、3.75mg、3.0mg、3.25mg、3.5mg、3.75mg、4.0mg、4.25mg、4.5mg、4.75mg或5mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的总日剂量为约0.5mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约1mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约1.5mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的总剂量为约2mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的总剂量为约2.5mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的总剂量为约3mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约3.5mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约4mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约4.5mg。在一些实施例中，所述类视黄醇化合物的每日剂量为约5mg。

在一些实施例中，本公开一种治疗患有视觉障碍的受试者的方法，所述方法包括每天向所述受试者施用约0.1mg至20mg剂量的9-顺式-视黄醇乙酸酯。在一些实施例中，所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约1mg。

通常，每日剂量以单一剂量施用。然而，也考虑了采用每日两次、三次或四次施用的给药。

在一些方面，本文也提供了治疗患有视觉障碍的受试者的方法，所述方法包括每天向所述受试者施用一次有效量的视黄酯，其中所述有效量的视黄酯维持至少2nM的对应视黄醇的谷循环血浓度。

在施用对应的视黄醇和其它代谢物之后，视黄醇酯很容易脱酯化(代谢)。例如，9-顺式-视黄醇乙酸酯通过脱酯化代谢以形成9-顺式-视黄醇。本文所描述的视黄酯经受类似的反应以形成对应的视黄醇。如上文所描述的，本公开的发明人令人惊讶地发现，每天施用少量视黄酯可以实现并维持对应视黄醇(可以并入视觉循环中的生物活性化合物)的临床相关的谷循环血浓度，所述谷循环血浓度改善了视力并最小化、减少或消除与施用类视黄醇化合物相关的不期望的副作用。

在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持至少1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM或更多的对应视黄醇的谷循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持至少2nM的对应视黄醇的谷循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持至少3nM的对应视黄醇的谷循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持至少4nM的对应视黄醇的谷循环血浓度。

在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持2nM至20nM的对应视黄醇的循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持2nM至15nM的对应视黄醇的循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持2nM至10nM的对应视黄醇的循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持2nM至8nM的对应视黄醇的循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持2.5nM至15nM的对应视黄醇的循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持2.5nM至10nM的对应视黄醇的循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持2.5nM至8nM的对应视黄醇的循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持3nM至15nM的对应视黄醇的循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持3nM至10nM的对应视黄醇的循环血浓度。在一些实施例中，所述有效量的视黄酯维持3nM至8nM的对应视黄醇的循环血浓度。

在一些实施例中，每天给药一次视黄酯前体之后观察到的视黄醇的C_max不超过10nM、11nM、12nM、13nM、14nM、15nM、16nM、17nM、18nM、19nM、20nM、21nM或22nM。在一些实施例中，每天给药一次视黄酯前体之后观察到的视黄醇的C_max不超过10nM。在一些实施例中，每天给药一次视黄酯前体之后观察到的视黄醇的C_max不超过15nM。在一些实施例中，每天给药一次视黄酯前体之后观察到的视黄醇的C_max不超过20nM。

在一些实施例中，本文提供了治疗患有视觉障碍的受试者的方法，所述方法包括每天向所述受试者施用一次有效量的9-顺式-视黄醇乙酸酯，其中所述有效量的9-顺式-视黄醇乙酸酯维持至少2nM的9-顺式-视黄醇的谷循环浓度。

本文所描述的类视黄醇化合物的每日低剂量可以令人惊讶地维持较长时间段，而无需中断施用(即药物假期)。例如，在一些实施例中，本文所描述的每日施用可以持续14天、21天、28天、35天、42天、49天、56天、63天、70天、77天、84天、91天、98天、105天、112天、119天、126天、133天、140天、147天、154天、161天、168天、175天、182天、189天、196天、203天、210天、217天、224天、231天、238天、245天、252天、259天、266天、273天、280天、287天、294天、301天、308天、315天、322天、329天、336天、343天、350天、357天、364天或更多天，而无需假期。在一些实施例中，本文所描述的每日施用可以持续15天、30天、45天、60天、75天、90天、105天、120天、135天、160天、175天、190天、205天、220天、235天、250天、265天、280天、295天、310天、325天、330天、335天、360天或更多天，而无需假期。在一些实施例中，本文所描述的每日施用可以持续1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年或更多年，而无需假期。

在上文所描述的方法的一些实施例中，所述类视黄醇化合物是口服施用的。

B.类视黄醇化合物

本公开提供了恢复或稳定受试者视觉系统中的光感受器功能的方法。可以施用合成视黄醛衍生物以恢复或稳定光感受器功能和/或改善类视黄醇水平缺乏的影响。例如，通过提供可以作为11-顺式-类视黄醇替代物和/或视蛋白激动剂的类视黄醇化合物，可以恢复或稳定光感受器功能。类视黄醇化合物还可以改善类视黄醇缺乏症对受试者视觉系统的影响。类视黄醇化合物可以预防性或治疗性地施用于受试者。

本公开的类视黄醇化合物包括天然存在的和合成的化合物，其具有维生素A(视黄醇)的一般结构以及在生物活性方面具有与视黄醇类似的该结构的变型。在一些实施例中，本公开的类视黄醇化合物是酯化的前药(视黄酯)，如9-顺式-视黄酯或11-顺式-视黄酯。在一些实施例中，9-顺式-视黄酯是9-顺式-视黄醇乙酸酯、9-顺式-视黄醇丙酸酯、9-顺式-视黄醇丁酸酯、9-顺式-视黄醇戊酸酯、9-顺式-视黄醇棕榈酸酯、9-顺式-视黄醇硬脂酸脂、9-顺式-视黄醇油酸酯等。在一些实施例中，11-顺式-视黄酯是11-顺式-视黄醇乙酸酯、11-顺式-视黄醇丙酸酯、11-顺式-视黄醇丁酸酯、11-顺式-视黄醇戊酸酯、11-顺式-视黄醇棕榈酸酯、11-顺式-视黄醇硬脂酸脂、11-顺式-视黄醇油酸酯等。

在一些实施例中，所述类视黄醇化合物是9-顺式-视黄醇乙酸酯。

在一些实施例中，所述类视黄醇化合物是9-顺式-视黄醇丙酸酯。

在一些实施例中，所述类视黄醇化合物是11-顺式-视黄醇乙酸酯。

在一些实施例中，所述类视黄醇化合物是11-顺式-视黄醇丙酸酯。

C.视觉障碍

本公开的治疗方案和方法用于治疗和改善视觉障碍。在一些实施例中，所述视觉障碍是内源性类视黄醇缺乏症。通常，所述内源性类视黄醇缺乏症导致视觉功能丧失。

内源性类视黄醇缺乏症可以由视觉循环中的一种或多种缺陷引起，所述缺陷包括酶促缺乏以及光感受器与视网膜色素上皮细胞(RPE)之间的转运过程受损。图1示意性地示出了脊椎动物(优选地人)的视觉循环(或类视黄醇周期)，所述视觉循环在RPE与光感受器的外段之间运作。11-顺式-视黄醛通过一系列酶促反应以及进出RPE的转运过程再生，之后所述11-顺式-视黄醛与视蛋白结合以在光感受器中形成视紫红质。然后，视紫红质被光激活以形成变视紫红质，所述变视紫红质激活光转导级联，同时所结合的顺式类视黄醇被异构化为全反式视黄醛(von Lintig,J.等人,《生物化学科学趋势(Trends Biochem Sci)》2月24日(2010))。

已经鉴定出超过十二个编码视网膜蛋白的基因中的突变，所述基因参与视觉循环中的若干个生物化学通路。例如，编码卵磷脂:类视黄醇乙酰转移酶(LRAT基因)和视网膜色素上皮蛋白65kDa(RPE65基因)的基因中的突变扰乱了类视黄醇循环，从而导致11-顺式-视黄醛缺乏、游离视蛋白过量、类视黄醇废物(例如，退化)产物和/或全反式视黄醛再循环中的中间体过量等。

可以根据例如美国公开专利申请第2005/0159662号(其公开内容以全文引用的方式并入本文中)中公开的方法来确定受试者眼睛中的内源性类视黄醇水平和此类水平的缺乏。确定脊椎动物眼睛中的内源性类视黄醇水平和此类类视黄醇缺乏的其它方法包括例如通过高压液相色谱(HPLC)分析来自受试者的血液样品中的类视黄醇。例如，可以从受试者获得血液样品，并且可以通过正相高压液相色谱(HPLC)(例如，使用HP 1100HPLC和Beckman，Ultrasphere-Si，4.6mm x 250mm柱，使用10％乙酸乙酯/90％己烷，流速为1.4毫升/分钟)分离和分析样品中的类视黄醇类型和水平。例如，可以通过使用二极管阵列检测器和HP Chemstation A.03.03软件在325nm处进行检测来检测类视黄醇。例如，可以通过将样品中的类视黄醇的分布与来自对照受试者(例如，正常受试者)的样品进行比较来确定类视黄醇的缺乏。

各种条件可能使受试者易患或患上内源性类视黄醇缺乏症。例如，具有RPE65基因突变或LRAT基因突变的受试者在遗传上易患内源性类视黄醇缺乏症和视觉障碍，所述内源性类视黄醇缺乏症和视觉障碍最终导致视力完全丧失和严重的视网膜营养不良。具体地，在LCA患者和arRP患者中都发现了RPE65和LRAT基因突变。即使在视觉循环中没有任何遗传缺陷的情况下，老年受试者仍可能患上内源性类视黄醇缺乏症。

下文进一步讨论了本公开的示例性视觉障碍。

i.莱伯氏先天性黑蒙症(LCA)

一种与内源性类视黄醇缺乏症相关的视觉障碍是莱伯氏先天性黑蒙症(LCA)。LCA是具有早发性视力丧失和视网膜营养不良的遗传性儿童疾病。据报道，患有常染色体隐性遗传视网膜色素变性(arRP)或莱伯氏先天性黑蒙症的患者的RPE65基因中的突变分别产生0.5％和6％的LCA病例(den Hollander,A.I.等人,《视网膜与眼科研究进展(Prog Ret EyeRes)》27:391-419,(2008)和den Hollander,A.I.等人,《美国国家科学院院刊(Proc NatlAcad Sci U S A)》95:3088-93(1998))。这些形式的特征在于11-顺式-视黄醛显著缺乏、与视杆和视锥视蛋白结合以形成视觉色素(视紫红质和视锥色素)的视觉发色团(Redmond,T.M.等人,《自然遗传学(Nat Gen)》20:344-51(1998)和Batten,M.L.等人,《生物化学杂志(J Biol Chem)》279:10422-32(2004))。11-顺式-视黄醛的慢性缺乏最终导致光感受器退化(Travis,G.H.等人,《药理学和毒理学年度评论(Annu Rev Pharmacol Toxicol)》47:469-512(2007))。视觉功能丧失与视网膜退化之间的间隔为视力恢复创造了机会。

在由于RPE65基因突变而患有LCA的受试者中，视黄酯在视网膜色素上皮(RPE)中积聚(Thompson,D.A.等人,《自然遗传学》28:123-4(2001)和Gu S.M.等人,《自然遗传学》17:194-7(1997))，这最终导致视网膜退化。

由于LRAT基因突变而患有LCA的受试者无法产生酯，并且随后分泌任何过量的类视黄醇，这与早发性严重的视网膜营养不良和视网膜退化相关(Morimura H等人《美国国家科学院院刊》95:3088-93(1998))。

ii.视网膜色素变性和夜盲症(Night Blindness/Nyctalopia)

另一与内源性类视黄醇缺乏症相关的视觉障碍是由例如视网膜色素变性(RP)或先天性静止性夜盲症(CSNB)引起的夜盲症。

RP是由许多不同基因的缺陷引起的病状。迄今为止，已鉴定出19种已知的和17种非特征性的基因突变，从而产生疾病的巨大异质性(Phelan,J.K.等人,《分子视觉(MolVis.)》6:116-124(2000))。RP的发病年龄以及疾病的严重程度取决于遗传方式。RP可能由常染色体显性、常染色体隐性或X连锁特性遗传。在所有RP病例中，有20％的病例会出现常染色体隐性遗传RP(arRP)。近年来，已经在患有arRP的患者中发现了LRAT和RPE65基因中的突变。这些特异性突变与视觉循环的类视黄醇代谢缺陷有关，并且可能导致光感受器退化(Morimura,H.等人,《美国国家科学院院刊》95(6):3088-3093(1998))。

如本文所述，由RPE65基因编码的蛋白质与视黄醇结合蛋白和11-顺式-视黄醇脱氢酶具有生化关联性，并且对于11-顺式-视黄醛的产生是必需的(Gollapalli,D.R.等人,《生物化学(Biochemistry)》42(19):5809-5818(2003)和Redmond,T.M.等人,《自然遗传学》20(4):344-351(1998))。临床前和临床信息表明，RPE65蛋白功能的丧失阻碍了维生素A酯化为膜脂后的类视黄醇加工，并且导致视力丧失。

典型RP的早期的特征在于夜盲症和中周视野丧失，反映出原发性视杆损伤。随着疾病的进展，患者会失去远周边和中央视力，最终导致失明。主要的临床发现包括视网膜中的骨针状色素和减弱/异常的视网膜电图(ERG)反应。据推测，RPE65产物的缺失将导致光感受器的大量早期退化，而氨基酸的取代将导致退化的速度较慢(Marlhens,F.等人,《欧洲人类遗传学杂志(Eur J Hum Genet.)》6(5):527-531(1998))。

CSNB和白点状眼底是一组表现为夜盲症的疾病，但并未像在RP中一样存在进行性视力丧失。一些形式的CSNB是由于11-顺式-视黄醛的再循环延迟而引起的。直到最近，白点状眼底被认为是CSNB的特殊情况，其中视网膜外观异常，视网膜上出现数百个小白点。最近的研究表明，白点状眼底也是一种进行性疾病，即使比RP慢得多。白点状眼底是由导致11-顺式-视黄醛循环延迟的基因缺陷引起的。

iii.年龄相关性视觉障碍

另一与内源性类视黄醇缺乏症相关的病状是视网膜光感受器功能的年龄相关性降低。如本文所讨论的，已经认识到维生素A对视觉发色团(即11-顺式-视黄醛)的不充分的可用性和/或加工可能对脊椎动物视紫红质再生和视觉转导产生不利影响(McBee,J.K.等人,《视网膜与眼科研究进展》20,469-529(2001)；Lamb,T.D.等人,《视网膜与眼科研究进展》23,307-380(2004)；以及Travis,G.H.等人,《药理学和毒理学年度评论》(2006))。在衰老过程中，由于饮食不足或肠道吸收不足，缺乏维生素A的人和小鼠在光暴露后的视紫红质再生更加延迟(Lamb,T.D.等人,《视网膜与眼科研究进展杂志(J.Prog Retin Eye Res)》23,307-380(2004))。此外，用维生素A和其衍生物治疗可能对衰老和视网膜疾病(如Sorbsby眼底营养不良和视网膜色素变性)具有有益作用(Jacobson,S.G.等人,《自然遗传学》11,27-32(1995)；以及Berson,E.L.等人,《眼科学档案》111,761-772(1993))。

年龄相关性视觉障碍包括光暴露后视杆介导的暗适应减慢、夜视(夜盲)降低和/或对比敏感度降低。年龄相关性视觉障碍也可以包括湿式或干式的年龄相关性黄斑变性(AMD)。

AMD是一种与眼球后部相关的特殊视觉障碍，并且是老年人失明的主要原因。AMD导致黄斑(即视网膜中央的小圆形区域)受损。因为黄斑是使人能够辨别小细节并且阅读或驾驶的区域，所以所述黄斑的恶化可能会导致视敏度下降，甚至失明。患有AMD的人们的中央视力恶化，但通常仍保持周边视力。在AMD中，当疾病晚期的并发症导致视网膜下的新血管生长或视网膜萎缩时，视力丧失就会发生。

iv.受试者群体

尽管任何患有与内源性类视黄醇缺乏症(如本文所定义)相关的视觉障碍的受试者可以通过本发明的治疗方案和方法进行治疗，但存在生理机会窗口，其中所述治疗方案或方法在恢复受试者的视觉功能方面最有效。优选地，本发明的治疗方案在受试者中最有效的机会窗口被定义为视觉功能丧失与视网膜退化(特别是关于光感受器细胞退化)之间的间隔。某些年龄组中的受试者可以特别地受益于本发明的治疗方案。更具体地，视网膜/光感受器退化程度较轻的受试者往往对本发明的治疗方案有更好或更快的反应，和/或在需要后续给药期之前可能有更长的休息期。

例如，在某些实施例中，由于LCA或RP而丧失视觉功能的年轻受试者可能保留较高百分比的休眠光感受器。此类休眠光感受器能够对本发明的治疗方案作出响应。特别地，在治疗受试者的由遗传性儿童失明(如LCA)或早发性RP(如arRP)引起的视觉功能丧失时，年轻受试者可能期望视觉功能得到更大的恢复，因为所述年轻受试者的视网膜退化不太严重。因此，在本发明的一个实施例中，所述受试者是人青少年，即，在治疗方案开始时小于15岁。在本发明的其它实施例中，当开始所述治疗方案时，所述受试者为小于1岁、小于18个月、小于24个月或小于36个月的人新生儿或人婴儿。在其它实施例中，当开始所述治疗方案时，所述受试者为5岁或以上的人。在另外的实施例中，当开始所述治疗方案时，所述人受试者为10岁或以上。

在一些情况下，RP可能在二十年或甚至更晚的时间出现在人受试者身上。人arRP诊断的平均年龄为约36岁(Tsujikawa M.等人,《眼科学档案》126(3)337-340(2008))。因此，在其它实施例中，当开始所述治疗方案时，所述人受试者为15岁或以上。在更具体的实施例中，当开始所述治疗方案时，所述人受试者为20岁或以上、30岁或以上、40岁或以上、50岁或以上、60岁或以上或70岁或以上。

在另外的实施例中，所述人受试者是患有年龄相关性视网膜病症的老年受试者。如本文所使用的，当开始所述治疗方案时，老年人受试者通常为至少45岁、或至少50岁、或至少60岁或至少65岁。

优选地，对于这些受试者中的任何一个，本发明的治疗方案和方法应在确定如本文所定义的视觉障碍的诊断后立即开始，使得视网膜(特别是光感受器)的任何退化尚未达到本发明的治疗方案在治疗或改善受试者的视觉障碍方面无效的程度。

D.单位剂型和试剂盒

本文所描述的方法使用每天低剂量来治疗各种视觉障碍。每日施用最好通过口服施用类视黄醇化合物来实现，特别是9-顺式-视黄醇乙酸酯。因此，本文提供了9-顺式-视黄醇乙酸酯的单一单位剂型和试剂盒。

所述剂型可以呈适于口服施用的任何形式，包括但不限于胶囊或封装在小瓶、注射器、安瓿、经食品和药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)或其它监管机构批准的其它容器封闭系统内的液体，所述形式可以提供包括9-顺式-视黄醇乙酸酯的一种或多种单位剂量。所述试剂盒可以包括具有大约1周、2周、3周或4周供应的单位每日剂量或更多。

在一些实施例中，本公开提供了包括0.1mg至20mg的9-顺式-视黄醇乙酸酯的单一单位剂量胶囊。

在一些实施例中，9-顺式-视黄醇乙酸酯的量为约0.25mg至10mg。在一些实施例中，9-顺式-视黄醇乙酸酯的量为约0.5mg至5mg。在一些实施例中，9-顺式-视黄醇乙酸酯的量为约0.75mg至2.5mg。在一些实施例中，9-顺式-视黄醇乙酸酯的量为约0.5mg。在一些实施例中，9-顺式-视黄醇乙酸酯的量为约1mg。在一些实施例中，9-顺式-视黄醇乙酸酯的量为约2mg。

在一些实施例中，9-顺式-视黄醇乙酸酯的单一单位剂型是胶囊。

在一些实施例中，9-顺式-视黄醇乙酸酯的单一单位剂型是封装在小瓶、注射器或安瓿内的液体。

在一些实施例中，所述单一单位剂型呈大小为#000、#00、#0、#1、#2、#3、#4或#5的胶囊。在一些实施例中，所述单一单位剂型呈大小为#000的胶囊。在一些实施例中，所述单一单位剂型呈大小为#00的胶囊。在一些实施例中，所述单一单位剂型呈大小为#0的胶囊。在一些实施例中，所述单一单位剂型呈大小为#1的胶囊。在一些实施例中，所述单一单位剂型呈大小为#2的胶囊。在一些实施例中，所述单一单位剂型呈大小为#3的胶囊。在一些实施例中，所述单一单位剂型呈大小为#4的胶囊。在一些实施例中，所述单一单位剂型呈大小为#5的胶囊。

本文所描述的9-顺式-视黄醇乙酸酯或其它类视黄醇化合物的单一单位剂型可以在任选地进一步包括抗氧化剂的液体递送媒剂中调配。在一些实施例中，液体递送媒剂是油。在一些实施例中，液体递送媒剂是大豆油。在一些实施例中，大豆油是U.S.P.级大豆油。在一些实施例中，抗氧化剂是丁基羟基茴香醚(BHA)。抗氧化剂的浓度可以包括0.05％、0.1％、0.15％、0.2％或其它合适的量。

本公开还涵盖了包括本公开的剂型的试剂盒。

在一些方面，本公开提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括9-顺式-视黄醇乙酸酯。本文所描述的试剂盒中的一些试剂盒包括标签，所述标签描述了如本文所描述的施用9-顺式-视黄醇乙酸酯的方法。本文所描述的试剂盒中的一些试剂盒包括标签和另外的说明，所述标签和另外的说明描述了通过每天向受试者施用约0.1mg至20mg剂量的9-顺式-视黄醇乙酸酯或本文所描述的子实施例来治疗莱伯氏先天性黑蒙症(LCA)的方法。在一些实施例中，本文所描述的试剂盒包括标签和另外的说明，所述标签和另外的说明描述了通过每天向受试者施用约0.1mg至20mg剂量的9-顺式-视黄醇乙酸酯或本文所描述的子实施例来治疗视网膜色素变性(RP)的方法。在一些实施例中，本文所描述的试剂盒包括标签，所述标签描述了通过每天向受试者施用约0.1mg至20mg剂量的9-顺式-视黄醇乙酸酯或本文所描述的子实施例来治疗内源性类视黄醇缺乏症的方法。在一些实施例中，本文所描述的试剂盒包括标签，所述标签描述了通过每天向受试者施用约0.1mg至20mg剂量的9-顺式-视黄醇乙酸酯或本文所描述的子实施例来治疗年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法。

本发明的单位剂型可以储存在瓶子、罐子、小瓶、安瓿、管、泡罩包装或由食品和药物管理局(FDA)或其它监管机构批准的其它容器封闭系统中，其可以提供本文所描述的一种或多种单位剂量。包装或分配器还可以附有与容器相关的通知，所述通知呈由管控药品制造、使用或销售的政府机构规定的形式，所述通知表示经所述机构批准。在某些方面，所述试剂盒可以包括如本文所描述的制剂或组合物、包括所述制剂或包括所述制剂的一个或多个剂量单位形式的容器封闭系统以及描述如本文所描述的使用方法的通知或说明书。

E.治疗效果评估

可以使用本领域已知的各种技术来确定接受所描述的治疗的患者的治疗效果。这些技术包括WO2011/132084和WO2013/134867中描述的技术，所述文献的内容出于所有目的通过引用并入本文。这些技术还包括但不限于在各种亮度水平下的视觉导航挑战(VNC)测试、视野(VF)评估、低亮度低对比度(LLLC)、最佳矫正视敏度(BCVA)、高亮度高对比度(HLHC)、BCVA、光学相干断层扫描(OCT)和包括低亮度(LL)问卷的患者报告结局(PRO)生活质量(QoL)问卷。这些技术经过验证并建立了视觉功能评估。本领域技术人员理解如何执行和评估上文引用的评估结果。

例如，VNC测试是所执行的视觉评估，所述视觉评估使受试者在各种亮度水平下完成预设的具有障碍物和导航界线(例如，转弯箭头)的路线。VNC测试来自Ora公司(Ora,Inc.)。VNC测试将以类似方式进行裁决和评估，将具有以下结果：将进行类似的评估，并且将以类似方式被US FDA和其它监管机构视为对功能性视力的度量。以下表1中示出了示例性被测亮度水平

表1：勒克司亮度水平

亮度水平(勒克司)

0.35

1

3

8

22

63

178

500

在一些实施例中，使用本文所描述的方法施用9-顺式-视黄醇乙酸酯使受试者的VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前受试者的基线评分有所改善。在一些实施例中，所述受试者的所述VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线VNC评分提高了至少1个亮度水平。例如，在一些实施例中，受试者能够在8勒克斯亮度水平下完成VNC路线，其中在治疗之前，所述受试者只能在22勒克斯亮度水平下完成VNC路线。在一些实施例中，所述受试者的所述VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线VNC评分提高了至少2个亮度水平。在一些实施例中，所述受试者的所述VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线VNC评分提高了至少3个亮度水平。在一些实施例中，所述受试者的所述VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线VNC评分提高了至少4个亮度水平。应当理解，VNC测试可以在开始治疗之后的任何时间进行(例如，在开始治疗之后的1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25或更多周之后)。在一些实施例中，在治疗6周之后进行VNC测试。在一些实施例中，在治疗12周之后进行VNC测试。

能够以比治疗前记录的亮度水平更低的亮度水平(“改善”)成功完成VNC路线意味着能够在较低的照明水平(亮度)下工作。换言之，受试者现在可以在较暗的环境中进行视觉活动，如通过导航被设计成测量此能力的路线的能力所证明的。2个亮度水平的改善表明，这种改善的导航(“移动性”)发生在比治疗前达到的照明水平低一个对数单位(10X)的照明水平上。

在一些实施例中，患者报告结局(PRO)生活质量视觉功能问卷是基于Owsley等人《眼科研究与视力学》2006 47(2):528-35开发的问卷。如参考报告所描述的，响应量表为五分制，如果问题与特定主题无关，带有附加的“不适用”选项。问题要求受试者按照难度等级或频率等级评估并报告他们的答案(例如，在明亮的阳光下有困难吗？：(1)完全没有困难；(2)有点困难；(3)有一些困难；(4)有很多困难；(5)在这些条件下完全失明；(5)由于视力原因停止了这项活动；是否因夜间视力或光线不足而依赖他人帮助？：(1)从未；(2)很少；(3)有时；(4)大多数；(5)在这些条件下完全失明；(5)由于视力原因停止了这项活动)。问卷分为六个子量表：驾驶、极端照明、移动性、情绪困扰、一般昏暗照明和周边视力。

在一些实施例中，相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前受试者的基线评分，本文所提供的方法改善、稳定或延迟恶化PRO QoL问卷的至少一个子量表。在一些实施例中，施用9-顺式-视黄醇乙酸酯使PRO QoL问卷的至少一个子量表评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线评分有所改善。例如，在一些实施例中，施用9-顺式-视黄醇乙酸酯使一个或多个子量表(例如，驾驶子量表、极端照明子量表、移动性子量表、情绪困扰子量表、一般昏暗照明子量表或周边视力子量表)相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前受试者的基线评分有所改善。

IV.实例

提供以下实例以说明但不限制所要求保护的本发明。

实例1：9-顺式-视黄醇乙酸酯的药代动力学建模

9-顺式-视黄醇乙酸酯是9-顺式-视黄醇的乙酸酯。如9-顺式-视黄醇乙酸酯这样的乙酸酯通常寿命短，因为其在生理pH下很容易水解，或者在血液和身体的其它部位中被酯酶水解。口服给药后对来自人体血液样品的9-顺式-视黄醇乙酸酯的水平的评估表明，9-顺式-视黄醇乙酸酯的寿命极短，并且迅速水解为9-顺式-视黄醇。

对从临床研究中的正常志愿者和患有视觉障碍的患者中采集的血液样品PK数据的评估表明，观察到若干种包括极性和非极性部分的代谢物。对这些PK数据的进一步的评估表明，极性和非极性代谢物包括9-顺式-视黄醇以及脂肪酸酯、9-顺式-视黄醇亚油酸酯、9-顺式-视黄醇油酸酯、9-顺式-视黄醇硬脂酸酯和9-顺式-视黄醇棕榈酸酯。通过PK分析，确定所有脂肪酸酯均与9-顺式-视黄醇表现出明显的平衡。因此，进一步的讨论集中于9-顺式-视黄醇。

图2中整理的是示出独立于所施用的初始剂量的9-顺式-视黄醇的介于4小时与7小时之间的C_max的人PK数据。在约24小时内达到稳定的低水平9-顺式-视黄醇。令人惊讶地是，分析表明，稳定的低水平9-顺式-视黄醇在初始给药停止后持续很长一段时间，并且与所施用的初始剂量无关。在单次给药之后约24小时至至少700小时，观察到循环的9-顺式-视黄醇处于类似水平。

根据观察到的PK数据分析，建立了9-顺式-视黄醇水平的群体PK模型。基于观察到的临床数据，构建了2室PK模型(图3)。9-顺式-视黄醇的此动力学模型包括再循环特征，所述再循环特征在长时间段内维持9-顺式-视黄醇水平。此模型的两个特征包括9-顺式-视黄醇从血液中的明显浓度依赖性清除率以及在低浓度下的明显零或接近零清除率。这解释了9-顺式-视黄醇的长期再循环水平，所述长期再循环水平在所施用的最后一个剂量后100小时、300小时和700小时的样品中都能看到。

图3右下角的清除率-浓度模型图示出了在低于某一浓度(约4nmol/mL至8nmol/mL(1ng/mL至2ng/mL))时清除率如何为零，从而产生活性9-顺式-视黄醇的持续再循环，所述持续再循环有可能成为视觉循环的一部分。

图4示出了使用上述模型从群体PK模型中观察到的和预测的给药后700小时循环9-顺式-视黄醇水平的数据。这些临床观察和数据令人惊讶地表明，身体保留9-顺式-视黄醇用于视觉循环，就像它是11-顺式-视黄醇一样。血液中的清除率迅速超过约8nM，但在低于所述水平时很快降至零或接近零。稳态水平(给药后约24小时)为4.57nM(10mg/m²剂量，83个样品)、8.32nM(40mg/m²剂量，149个样品)和7.46nM(5mg/m²至60mg/m²，629个样品)。

根据这一令人惊讶的发现并且使用所构建的群体PK模型，绘制了可视化人受试者中的每天给药少量9-顺式-视黄醇乙酸酯(1mg)的图(图5)。

基于意外发现9-顺式-视黄醇在低循环血浓度下的清除率非常低并且随着时间推移维持严格的血浓度，设计了2/3期试验。此试验在实例2中进一步详细说明。

实例2：使用每天口服给药少量视黄酯治疗视觉障碍的2期试验

研究目的

评估9-顺式-视黄醇乙酸酯口服溶液在患有IRD的患者中的安全性、疗效和药代动力学，所述患者在表型上被诊断为患有由RPE65或LRAT基因突变引起的莱伯氏先天性黑蒙症(LCA)或视网膜色素变性(RP)。

研究设计

这是一项多中心、随机化、安慰剂对照、双盲研究，每个治疗组大约15名6岁及以上的患有IRD的受试者，所述受试者在表型上被诊断为患有由RPE65或LRAT中的病理性常染色体隐性突变引起的LCA或RP。受试者每天接受0mg的9-顺式-视黄醇乙酸酯(安慰剂对照组)或每天施用一次1mg的9-顺式-视黄醇乙酸酯。这项研究将在直到第12周访视时进行双盲。在整个研究过程中，受试者将按照其指定的给药方案进行治疗。

受试者将在接受研究治疗(第-42天至第1天)之前的筛选期(6周)内经受筛选评估，所述评估包括：(1)视觉导航挑战(VNC)路线，以确定受试者可以使用双眼共同完成并通过所述路线的亮度水平；(2)每只眼睛的视野(VF)评估；(3)每只眼睛的最佳矫正视敏度测试；(4)光学相干断层扫描(OCT)测试；以及(5)如果受试者未进行基因分型并且无法从认证实验室获得文件，那么需要进行基因分型。

随机化后，每4周对受试者进行疗效评估。安全性将在整个试验期间通过所有访视进行评估。主要疗效分析将在所有可用受试者完成其第12周访视之后进行。

将主要通过在不同亮度水平下的VNC测试来评估疗效。其它关键测量将包括VF、低亮度低对比度(LLLC)最佳矫正视敏度(BCVA)、高亮度高对比度(HLHC)BCVA、光学相干断层扫描(OCT)和包括低亮度(LL)问卷的患者报告结局(PRO)生活质量(QoL)问卷。安全性将通过生命体征、心电图(ECG)、体格检查、临床实验室测试、骨密度测量、手X光和身高测量进行系统评估，以评估骨发育、不良事件(AE)和伴随用药。将通过HLHC BCVA、生物显微镜检查、IOP、眼底检查和摄影、OCT以及所有治疗突发(TE)AE和严重AE(SAE)的评估来评估眼睛安全性。

纳入标准

以下是本研究的纳入标准：

●6岁或以上。

●具有由眼科遗传学家或眼科医生在表型上诊断为LCA或RP并且由RPE65或LRAT中的病理性双等位基因常染色体隐性突变引起的IRD的诊断，如通过完全认可认证的中央基因分型实验室确定的。

●至少一只被指定为研究眼睛的眼睛在3勒克斯或以上的水平下通过VNC路线测试，但在低于所述亮度水平的水平下不合格。在VNC路线中，两只眼睛将单独评估，并且两只眼睛一起(双眼)评估。如果受试者双眼在3勒克斯或以上无法通过VNC路线，但至少一只眼睛的视敏度为20/800或更好，那么可以将所述受试者纳入。

●未接受过基因疗法、假体视网膜芯片的手术植入或视网膜下注射。

●如果之前作为临床研究的一部分施用过ZA，自最后一次施用ZA以来至少>3年。

●根据SD-OCT的记录，具有至少100微米的明确且可识别的视网膜。

●研究治疗之前的妊娠测试和避孕：有生育潜能的妇女不得怀孕或哺乳。月经正常的女性受试者在筛查时必须进行阴性妊娠测试(即在第-1天之前≥19天灵敏度≥25mIU/mL的血清妊娠测试以及在第-1天灵敏度≥50mIU/mL的尿液妊娠测试)。月经不调、闭经或正在采取排除撤退性出血的避孕措施的女性受试者必须在筛查时和开始使用2种批准的避孕方法治疗后1个月使用上文所描述的参数进行阴性妊娠测试，并且必须在随机分组前至少1个月实施2种适当的节育方法或完全禁欲持续至少2个月。适当的节育方法包括：(1)使用口服避孕药、植入式或注射式避孕药或宫内节育器，并且使用另外的屏障方法(使用杀精凝胶的隔膜、或使用杀精剂的避孕套或使用杀精剂的宫颈帽)；(2)双屏障法(使用杀精凝胶的隔膜和使用杀精剂的避孕套)；(3)伴侣输精管结扎术后3个月或更长时间；以及(4)完全禁欲。被认为是绝经后或已经经受输卵管结扎的女性的最后一次月经期应超过1年，或卵泡刺激激素水平在绝经期范围内。

●研究期间的妊娠测试和避孕：

○有生育潜能的妇女必须愿意接受避孕咨询。

○如果受试者是女性且年龄<18岁，法定监护人必须同意避孕。

○有生育潜能的妇女必须在研究的治疗期实践2种适当的节育方法(如上文所描述的)或完全禁欲，并且在完成最后一个剂量的研究药物后持续3个月。

○男性受试者必须(1)没有性活动，或(2)同意完全戒除性交，或(3)输精管切除术后有不孕记录，或(4)在性交期间、研究治疗阶段期间以及完成最后一个剂量的研究药物后3个月内使用带杀精剂的屏障法(避孕套)。

●签署ICF的受试者或监护人了解研究程序并且同意通过书面知情同意书参与研究。

●愿意并能够遵守方案。

●愿意在大约3个月内，即在筛查/随机化(访视1/2)、第4周(访视3)和第12周(主要结果；访视5)时，3次遵守移动性测试的行程安排；这只适用于那些在无法进行移动性测试的地点的受试者。总共5次所需访视中的3次访视需要此类行程。所有其它评估将在受试者参与研究的地点进行。

●受试者同意在其研究时间段内从初始给药起12周内不接受基因疗法。

2期研究变量

主要疗效：

●疗效的主要终点将是在第12周使用视觉导航挑战(VNC)路线通过移动性测试确定的功能性视力的度量。疗效的主要终点将是治疗组之间从随机化(基线-第一剂量前的最后一次测量)到第12周成功导航所需的亮度水平的平均变化的比较。将对指定研究眼睛进行VNC主要结果的导航测量。

次要疗效：

这些评估是针对单独眼睛进行的，即，受试者的每只眼睛将分别进行测试。

1.第4周和第24周的VNC评估

2.视野(VF)评估

3.低亮度低对比度(LLLC)最佳矫正视敏度(BCVA)(糖尿病视网膜病变早期治疗研究[ETDRS]；在4米或1米处读取的字母)

4.高亮度高对比度(HLHC)BCVA(在4米或1米处读取的ETDRS字母)

上述第4周的所有评估(VNC和VF)以及还有第8周的评估(如果适用的话)

探索性疗效：

评估可以是双眼的或者对每只眼睛常规进行。

1.低亮度(LL)患者报告结局(PRO)：在第12周在受试者水平下进行，并不是通过眼睛进行。

2.EQ-5D-5L分类结果和视觉模拟量表在受试者水平下在随机化和第12周时进行。

3.光谱优势光学相干断层扫描(SD-OCT)，包括在筛选和第12周时评估光感受器层、外/内段和RPE的厚度。

将使用这些时间点中的每个时间点的描述性统计数据总结每个群组的结果。将对每个活性组与对照组进行比较，并且还将使用从随机分组至第12周的所有数据点进行比较。将详细说明适当的统计混合效应模型，包括如何处理这些多个时间点的缺失数据。

2期研究程序和评估：

可以由受试者或护理者或家庭保健从业者在受试者家中进行给药。

在整个研究过程中，将评估受试者的安全性和疗效。将通过移动性测试(可能需要行程)、VF测量、HLHC BCVA、LLLC BCVA、OCT和PRO评估疗效。将通过生命体征、ECG、体格检查、临床实验室测试、HLHC BCVA、OCT、生物显微镜检查、IOP、眼底检查和摄影、骨密度测量、手X光和身高测量来评估安全性，以评估骨发育、TEAE和伴随用药。每4周访视的安全性评估将包括：

1.生命体征(心率、血压、呼吸速率、体温、BMI)

2.体格检查

3.ECG(根据需要重复)

4.临床实验室测试(12小时禁食血清化学和脂质组、血液学、骨

化学、甲状腺功能测试、血清视黄醇、尿液分析和有生育潜能的妇女的妊娠测试)

5.生物显微镜检查

6.IOP

7.眼底检查

8.身高和体重

10.治疗突发AE

11.治疗突发SAE

12.伴随用药

研究者将在整个研究过程中审查临床安全性实验室(化学，包括血液学、脂质组、肝酶功能和尿液分析)。如果在疗法过程中发现以下异常，受试者将停止施用其指定的治疗：

●任何疑似与治疗有关的SAE

●空腹ALT或AST>实验室正常范围上限的2.5倍，而无胆汁淤积迹象(例如，ALP大于或等于2X ULN)。如果注意到这一点，根据研究者的临床判断，将在4周内(下次访视)或更早重复测试，并且停止计划给药持续4周。如果恢复给药证实了异常发现，那么将在4周或更多周内不再给药，并且重复实验室测试。

●空腹甘油三酯，重复测量后持续值>临床实验室值正常范围上限的2.5倍。如果注意到这一点，根据研究者的判断，将在4周内(下次访视)或更早重复测试，并且停止当前给药持续4周。如果重复给药证实了异常发现，那么将在4周或更多周内不再给药，并且重复实验室测试。

●研究者与申办方全球医疗监察协商后确定的其它潜在剂量限制性体征或症状

●如果存在如上所述的任何临床显著安全性问题，研究者将咨询申办方全球医疗监察或指定人员，以确认安全性问题是否妨碍正在进行的治疗，或者表明是否应跳过4周的疗法。如果确认有安全原因受试者不继续接受疗法，那么受试者应返回进行所有定期访视，并且在异常恢复到规定的截止范围以下并与全球医疗监察协商后才考虑进一步给药。

为了确保患者每月使用9-顺式-视黄醇乙酸酯的疗法过程的安全性，如果出现以下情况，研究者将与全球医疗监察协商使受试者完全退出研究治疗(即受试者不再接受任何研究治疗)：

●出现了新的健康状况，其疑似需要照顾或服用方案禁止的药物

●受试者具有不可接受的AE，由PI与全球医疗监察协商判断

●受试者具有以下临床实验室结果中的任何一项：

○在重复测试时，空腹ALT或AST>实验室正常范围上限的3倍，但未对跳过给药疗程作出响应(即，在停止疗法4周以上的时间内，仍保持>实验室正常水平上限的3倍)。

○在重复测试时，空腹甘油三酯>实验室正常范围上限的3倍，但未对跳过给药疗程作出响应(即，在停止疗法4周以上的时间内，仍保持>实验室正常水平上限的3倍)。

○出现符合CTC 2级标准的甲状腺异常(有症状且需要医疗干预)，并且在4周内未对治疗作出响应(由研究者自行决定)

○阳性妊娠测试

●受试者对研究治疗有临床显著的超敏反应，如由研究者与全球医疗监察协商判断

●受试者表现出维生素A过多症的临床显著体征，具体地当出现表明假性脑瘤(颅内压升高)的症状时

●QTcB间隔延长，使得：

○当根据重复ECG求取所获得的测量结果的平均值时，延长>500毫秒，或者

○根据研究者的判断，以其它方式标记的延长可能表明受试者的安全性存在问题

●根据研究者的临床判断，这符合受试者的最佳利益

出于上述原因退出治疗将与申办方全球医疗监察协商进行审查。仍应将受试者带回进行所有访视并且进行评估

●将按照计划收集PK分析的血液样品

尽管为了清楚理解起见，已经通过图解和实例的方式对前述发明进行了一些详细的描述，但本领域技术人员将理解，可以在所附权利要求的范围内实施某些改变和修改。另外，本文提供的每个参考文献均以全文引用的方式并入本文中，其程度与每个参考文献单独通过引用并入的程度相同。如果本申请与本文所提供的参考文献之间存在冲突，则应以本申请为准。

Claims (44)

1.一种治疗患有视觉障碍的受试者的方法，所述方法包括每天向所述受试者施用约0.1mg至20mg剂量的9-顺式-视黄醇乙酸酯。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约0.5mg至10mg。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约0.5mg至5mg。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约0.5mg。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约1mg。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约1.5mg。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约2mg。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约3mg。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约4mg。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述9-顺式-视黄醇乙酸酯的剂量为约5mg。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中每天施用一次9-顺式-视黄醇乙酸酯。

12.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中每天施用两次9-顺式-视黄醇乙酸酯。

13.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中施用所述9-顺式-视黄醇乙酸酯持续至少30天的时间段。

14.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中施用所述9-顺式-视黄醇乙酸酯持续至少60天的时间段。

15.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中施用所述9-顺式-视黄醇乙酸酯持续至少90天的时间段。

16.一种治疗患有视觉障碍的受试者的方法，所述方法包括每天向所述受试者施用一次有效量的9-顺式-视黄醇乙酸酯，其中

所述有效量的9-顺式-视黄醇乙酸酯维持至少2nM的9-顺式-视黄醇的谷循环血浓度。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述有效量的9-顺式-视黄醇乙酸酯维持至少3nM的9-顺式-视黄醇的谷循环血浓度。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述有效量的9-顺式-视黄醇乙酸酯维持至少4nM的9-顺式-视黄醇的谷循环血浓度。

19.根据权利要求16所述的方法，其中所述有效量的9-顺式-视黄醇乙酸酯维持2nM至20nM的9-顺式-视黄醇的循环血浓度。

20.根据权利要求16所述的方法，其中所述有效量的9-顺式-视黄醇乙酸酯维持3nM至10nM的9-顺式-视黄醇的循环血浓度。

21.根据权利要求16所述的方法，其中在每天给药一次9-顺式-视黄醇乙酸酯之后观察到的9-顺式-视黄醇的C_max不超过20nM。

22.根据权利要求16所述的方法，其中在每天给药一次9-顺式-视黄醇乙酸酯之后观察到的9-顺式-视黄醇的C_max不超过15nM。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述受试者具有LRAT基因中的突变。

24.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述受试者具有RPE65基因中的突变。

25.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述视觉障碍是内源性类视黄醇缺乏症。

26.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述视觉障碍选自由以下组成的组：莱伯氏先天性黑蒙症(LCA)、视网膜色素变性(RP)、常染色体隐性遗传视网膜色素变性(arRP)、年龄相关性视黄醇功能障碍、夜盲症、白点状视网膜变性、先天性静止性夜盲症(CSNB)、白点状眼底、年龄相关性黄斑变性(AMD)和斯塔加特病。

27.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述视觉障碍与光暴露后视杆介导的暗适应、夜视障碍、对比敏感度障碍、视野障碍或视敏度障碍相关。

28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中9-顺式-视黄醇乙酸酯的施用改善了所述受试者的视觉功能，如通过选自由以下组成的组的评估方法所确定的：视觉导航挑战(VNC)测试、视野(VF)评估、低亮度低对比度(LLLC)最佳矫正视敏度(BCVA)测试、高亮度高对比度(HLHC)BCVA测试、光学相干断层扫描(OCT)测试和患者报告结局(PRO)生活质量(QoL)问卷以及低亮度(LL)问卷。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述评估方法是VNC测试，所述VNC测试提供VNC评分，并且

施用9-顺式-视黄醇乙酸酯使受试者的所述VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线评分有所改善。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述受试者的所述VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线VNC评分提高了至少1个亮度水平。

31.根据权利要求29所述的方法，其中所述受试者的所述VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线VNC评分提高了至少2个亮度水平。

32.根据权利要求29所述的方法，其中所述受试者的所述VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线VNC评分提高了至少3个亮度水平。

33.根据权利要求29所述的方法，其中所述受试者的所述VNC评分相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线VNC评分提高了至少4个亮度水平。

34.根据权利要求28所述的方法，其中所述评估方法是PRO QoL问卷，并且

施用9-顺式-视黄醇乙酸酯使所述PRO QoL问卷的至少一个子量表相对于施用9-顺式-视黄醇乙酸酯之前所述受试者的基线评分有所改善。

35.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中口服施用9-顺式-视黄醇乙酸酯。

36.根据权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。

37.根据权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述受试者是成人。

38.根据权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述受试者是未成年人。

39.一种单一单位剂量，其包括约0.10mg至20mg的9-顺式-视黄醇乙酸酯。

40.根据权利要求39所述的单一单位剂型，其中单一单位剂型包括约1mg的9-顺式-视黄醇乙酸酯。

41.根据权利要求39至40中任一项所述的单一单位剂量，其中所述单一单位剂型是胶囊。

42.根据权利要求39至40中任一项所述的单一单位剂量，其中所述单一单位剂型是封装在小瓶、注射器或安瓿内的液体。

43.一种试剂盒，其包括一个或多个根据权利要求39至42中任一项所述的单位剂量。

44.根据权利要求43所述的试剂盒，其进一步包括具有每天施用9-顺式-视黄醇乙酸酯的说明的标签。

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