CN114414681B - 一种同时测定化妆品中的多种色素的方法 - Google Patents
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Abstract
本申请提供了一种同时测定化妆品中的多种色素的方法，包括步骤：取样；预处理和对预处理后的样品溶液进行测定；其中，所述预处理步骤包括：提取：将待测样品与着色剂提取液混合，所述着色剂提取液为体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜；净化：将混合液在第一指定转速下进行离心处理，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液；所述对预处理后的样品溶液进行测定的步骤包括：检测：使用HPLC‑DAD检测预处理后的样品溶液。本申请可以同时测定化妆品中的多种色素，填补了市场空白，样品前处理简便快速，大大提高检测效率，具有优良的重复性和重现性，极具推广性。
Description
技术领域
本申请涉及化妆品检测技术领域，特别是一种同时测定化妆品中的多种色素的方法。
背景技术
化妆品中的色素主要分为天然色素和人工合成色素这两种，天然色素来自天然物，主要由植物组织中提成；人工合成色素则是用人工化学合成方法所制得的有机色素。天然色素的着色力和耐光性较差，因此在化妆品中受到限制。而合成色素是以煤焦油为原料制成的，通称煤焦色素、苯胺色素，是对人体有害的。危害包括一般毒性、致泻性、致突性(基因突变)和致癌作用。化妆品中的不正当添加的色素有可能会引起皮肤的色素沉着，若化妆品中色素属于焦油衍生物，那么长期使用会使皮肤对光线发生敏感反应，从而导致色素沉着。化妆品引起的色素沉着多数还伴有皮肤潮红、丘疹等炎症现象。
由于近期国产化妆品产业兴起，化妆品色素使用安全问题也随之引起关注。化妆品技术规范2015版中第四章第6节着色剂检验方法，其中6.1规定高效液相法测定染发剂和烫发类化妆品中碱性橙31、碱性黄84、碱性红51、碱性紫14(CI42510)、酸性橙3(CI10385)、酸性紫43(CI60730)、碱性蓝(CI44045)的含量；6.2规定高效液相色谱法测定胭脂、口红、粉底、指甲油、睫毛膏、眼影等修饰类化妆品中CI59040、CI16185、CI16255、CI10316、CI15985、CI16035、CI14700、橙黄I、CI45380、CI15510的含量。但以上检测方法远远不能满足目前化妆品色素使用种类众多的要求。
发明内容
鉴于所述问题，提出了本申请以便提供克服所述问题或者至少部分地解决所述问题的一种同时测定化妆品中的多种色素的方法，包括：
一种同时测定化妆品中的多种色素的方法，所述多种色素为柠檬黄、日落黄、偶氮品红、诱惑红、刚果红、酸性橙87、立索尔红、酸性橙2、颜料红53、分散红15和颜料橙5，其特征在于，包括步骤：取样；预处理和对预处理后的样品溶液进行测定；
其中，所述预处理步骤包括：
提取：将待测样品与着色剂提取液混合，所述着色剂提取液为体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜；
净化：将混合液在第一指定转速下进行离心处理，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液；
所述对预处理后的样品溶液进行测定的步骤包括：
检测：使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液。
进一步地，所述将待测样品与着色剂提取液混合，所述着色剂提取液为体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜的步骤，包括：
将待测样品与体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜混合。
进一步地，所述在第一指定转速下进行离心，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液的步骤，包括：
将混合液在指定转速下进行离心处理，取上清液过紫色滤膜，得到预处理后的样品溶液。
进一步地，所述预处理步骤，还包括：
标准工作液的制备：分别称取多种色素的标准品0.01-0.02g于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到标准储备液；分别将所述标准储备液用甲醇逐级稀释，得到标准工作液。
进一步地，还包括：
绘制标准曲线：使用HPLC-DAD检测所述标准工作液，得到所述标准工作液的浓度和峰面积；以所述峰面积为纵坐标，所述标准工作液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。
进一步地，所述使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液的步骤，包括：
使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液；
依据所述标准曲线检测预处理后的样品溶液中多种色素的含量。
进一步地，所述HPLC-DAD的使用条件包括：
色谱柱：Thermo Hypersil GOLD C18，250×4.6mm，5um；
检测波长：483nm；
柱温：30℃；
进样量：20μL；
运行时间：22min。
进一步地，所述HPLC-DAD的使用条件还包括：
流动相A：20mol/L的乙酸铵；
流动相B：甲醇；
梯度洗脱程序：
起始时，当前流动相由90％流动相A与10％流动相B构成；
到达14min时，当前流动相由5％流动相A与95％流动相B构成；
到达18min时，当前流动相由5％流动相A与95％流动相B构成；
到达18.5min时，当前流动相由90％流动相A与10％流动相B构成；
到达22min时，当前流动相由90％流动相A与10％流动相B构成。
进一步地，所述待测样品与所述着色剂提取液的固液比为0.1g：1-2mL。
进一步地，所述依据所述标准曲线检测预处理后的样品溶液中多种色素的含量的步骤之后，还包括：
当所述HPLC-DAD有检出且检出数值大于200倍检出限时，将所述待测样品与所述着色剂提取液的固液比进行调整，再重新测定所述预处理后的样品溶液。
本申请具有以下优点：
在本申请的实施例中，所述多种色素为柠檬黄、日落黄、偶氮品红、诱惑红、刚果红、酸性橙87、立索尔红、酸性橙2、颜料红53、分散红15和颜料橙5，包括步骤：取样；预处理和对预处理后的样品溶液进行测定；其中，所述预处理步骤包括：提取：将待测样品与着色剂提取液混合，所述着色剂提取液为体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜；净化：将混合液在第一指定转速下进行离心处理，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液；所述对预处理后的样品溶液进行测定的步骤包括：检测：使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液。本申请可以同时测定化妆品中的多种色素，填补了市场空白，样品前处理简便快速，大大提高检测效率，具有优良的重复性和重现性，极具推广性。
附图说明
为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对本申请的描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本申请一实施例提供的一种同时测定化妆品中的多种色素的方法的流程示意图；
图2是本申请一实施例提供的一种同时测定化妆品中的多种色素的方法的流程示意图；
图3a-3e是本申请一实施例提供的一种同时测定化妆品中的多种色素的方法检测的待测样品中多种色素在不同浓度下的色谱图；
图4a-4b是本申请一实施例提供的一种同时测定化妆品中的多种色素的方法检测的待测样品中多种色素的线性示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
另外，在本发明中涉及“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外，各个实施例的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。
参照图1，示出了本申请一实施例提供的一种同时测定化妆品中的多种色素的方法，所述多种色素为柠檬黄、日落黄、偶氮品红、诱惑红、刚果红、酸性橙87、立索尔红、酸性橙2、颜料红53、分散红15和颜料橙5；
所述方法包括：S1取样；S2预处理和S3对预处理后的样品溶液进行测定；
其中，所述S2预处理步骤包括：
S21、提取：将待测样品与着色剂提取液混合，所述着色剂提取液为体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜；
S22、净化：将混合液在第一指定转速下进行离心处理，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液；
所述S3对预处理后的样品溶液进行测定的步骤包括：
S31、检测：使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液。
在本申请的实施例中，所述多种色素为柠檬黄、日落黄、偶氮品红、诱惑红、刚果红、酸性橙87、立索尔红、酸性橙2、颜料红53、分散红15和颜料橙5，包括步骤：取样；预处理和对预处理后的样品溶液进行测定；其中，所述预处理步骤包括：提取：将待测样品与着色剂提取液混合，所述着色剂提取液为体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜；净化：将混合液在第一指定转速下进行离心处理，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液；所述对预处理后的样品溶液进行测定的步骤包括：检测：使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液。本申请可以同时测定化妆品中的多种色素，填补了市场空白，样品前处理简便快速，大大提高检测效率，具有优良的重复性和重现性，极具推广性。
如上述步骤S1所述，取样，一般为从目标物中提取少量目标物质进行检测的重要步骤之一，其具有在不影响目标物的主要性质的前提下，获得目标物进行测试得到各项数据的有效途径之一，被测物提取量需足够进行3-5次测试，取样时对被测物的取样区域选择过程要求具有随机性，不可在选择过程中掺杂主观性选择，在本发明实施例中，取样重量一般为0.1g-0.2g，优选为0.2g。
如上述步骤S2所述，预处理，一般为对目标物的在进行有效工序前的除杂提纯等目的的步骤，在某些特殊实验中预处理步骤还包括改变物质性质等目的，在本发明实施例中，预处理步骤优选为上述步骤S21-S22。
如上述步骤S3所述，对预处理后的样品溶液进行测定，一般为对进行上述步骤S1-S2后的目标物进行指定的实验或检测步骤，一般获得直接数据或间接数据，其中，直接数据即为该数据直接为检测目标数值或结果的数据；间接数据为需通过对应的计算、替换或对比后才得到目标数值或结果的数据，检测结果一般根据检测设备、环境、预处理步骤和辅助品的偏差存在偏差值，其中预处理和辅助品差异在制定检测标准后，可以相应的有效避免其所带来的误差幅度。
如上述步骤S21所述，提取：将待测样品与着色剂提取液混合，所述着色剂提取液为体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜，在实施上述步骤S21的过程中，将待测样品与着色剂提取液混合，得到混合液，上述待测样品和上述着色剂提取液的混合程度达到上述待测样品和上述着色剂提取液需要达到相互充分混合，因此，当上述样品与第一指定量的第一酸剂混合后，进行摇匀震荡处理。其中，上述着色剂提取液一般为1-3mL，在本发明实施例中，优选为2mL。
如上述步骤S22所述，净化：将混合液在第一指定转速下进行离心处理，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液，在实施上述步骤S22的过程中，将上述混合液在指定容器中进行离心处理，混合液高速离心后得到分层的液体，其中上清液为待测的样品溶液，上述指定容器一般为离心管、试管中的任意一种，在本发明实施例中，优选为离心管。取混合液离心处理后提取液的上清液，进行过滤。
参照图2，在本实施例中，在上述的同时测定化妆品中的多种色素的方法中，所述将待测样品与体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜混合的步骤，包括：
S211、将待测样品与体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜混合。
如上述步骤S211所述，将待测样品与体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜混合，其中，上述着色剂提取液为体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜；上述待测样品与上述着色剂提取液的体积比一般为0.1g：1-2mL，在本申请实施例中，优选为0.1g：1mL。
在本实施例中，在上述的同时测定化妆品中的多种色素的方法中，所述在第一指定转速下进行离心，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液的步骤，包括：
S221、将混合液在指定转速下进行离心处理，取上清液过紫色滤膜，得到预处理后的样品溶液。
如上述步骤S221所述，将混合液在指定转速下进行离心处理，取上清液过紫色滤膜，得到预处理后的样品溶液，在实施上述步骤S221的过程中，使用离心管对上述混合液进行离心处理，其中，上述离心的指定转速一般为3000-6000r/min，在本申请实施例中，优选为5000r/min。
需要说明的是，在上述步骤中，根据实际样品量对应调整添加的物质的量，因此不再赘述。
在本实施例中，在上述的同时测定化妆品中的多种色素的方法中，所述预处理步骤，还包括：
S23、标准工作液的制备：分别称取多种色素的标准品0.01-0.02g于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到标准储备液；分别将所述标准储备液用甲醇逐级稀释，得到标准工作液。
如上述步骤S23所述，标准工作液的制备：分别称取多种色素的标准品0.01-0.02g于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到标准储备液；分别将所述标准储备液用甲醇逐级稀释，得到标准工作液，其中，分别称取多种色素的标准品0.01-0.02g于10mL的容量瓶中，用色谱级甲醇定容至刻度线，得到多种色素的标准储备液，分别吸取上述标准储备液0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL于10mL的容量瓶中，用色谱级甲醇定容至刻度线，得到多种色素的标准工作液，其中，称取上述多种色素的标准品的质量一般为0.01-0.02g，在本申请实施例中，优选为0.01g。
在本实施例中，在上述的同时测定化妆品中的多种色素的方法中，还包括：
S24、绘制标准曲线：使用HPLC-DAD检测所述标准工作液，得到所述标准工作液的保留时间和峰面积；以所述峰面积为纵坐标，所述标准工作液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。
如上述步骤S24所述，绘制标准曲线：使用HPLC-DAD检测所述标准工作液，得到所述标准工作液的保留时间和峰面积；以所述峰面积为纵坐标，所述标准工作液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，其中，取上述标准工作液至进样瓶，经过HPLC-DAD检测得到不同浓度的多种色素标准工作液的色谱图，从色谱图中可以得到标准工作液的浓度、标准工作液的峰面积及标准工作液的保留时间，采用外标法，根据保留时间定性，峰面积定量；以峰面积为纵坐标，标准工作液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程。
在本实施例中，在上述的同时测定化妆品中的多种色素的方法中，上述S3对预处理后的样品溶液进行测定的步骤，包括：
S31、检测：使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液。
在本发明一实施例中，可以结合下列描述进一步说明“使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液”的具体过程。
S311、使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液；
S312、依据所述标准曲线检测预处理后的样品溶液中多种色素的含量。
如上述步骤S311所述，使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液，在本实施例中，其中，检测过程中上述HPLC-DAD的使用条件参数在本发明实施例中优选为：
色谱柱：Thermo Hypersil GOLD C18，250×4.6mm，5um；
检测波长：483nm；
柱温：30℃；
进样量：20μL；
运行时间：22min；
流动相A：20mol/L的乙酸铵；
流动相B：甲醇；
梯度洗脱程序：
起始时，当前流动相由90％流动相A与10％流动相B构成；
到达14min时，当前流动相由5％流动相A与95％流动相B构成；
到达18min时，当前流动相由5％流动相A与95％流动相B构成；
到达18.5min时，当前流动相由90％流动相A与10％流动相B构成；
到达22min时，当前流动相由90％流动相A与10％流动相B构成。
如上述步骤S312所述，依据所述标准曲线检测预处理后的样品溶液中多种色素的含量。参照上述标准曲线，若所述多种色素的保留时间与标准工作液的保留时间一致，则确定标准工作液是相应标准工作液对应种类的多种色素；根据所述多种色素的峰面积与上述线性回归方程，确定化妆品中多种色素的含量。
在本实施例中，所述待测样品与所述着色剂提取液的固液比一般为0.1g：1-2mL，在本申请实施例中，优选为0.1g：1mL。
在本实施例中，在上述的同时测定化妆品中的多种色素的方法中，所述依据所述标准曲线检测预处理后的样品溶液中多种色素的含量的步骤之后，还包括：
S32、当所述HPLC-DAD有检出且检出数值大于200倍检出限时，将所述待测样品与所述着色剂提取液的固液比调整为进行调整，再重新测定所述预处理后的样品溶液。
如上述步骤S32所述，当所述HPLC-DAD有检出且检出数值大于200倍检出限时，将所述待测样品与所述着色剂提取液的固液比调整为进行调整，再重新测定所述预处理后的样品溶液，在实施上述步骤S32的过程中，若HPLC-DAD的检出数值大于200倍检出限时，调整上述待测样品与上述着色剂提取液的固液比，以确保提取充分，保证检测的准确性。
在本实施例中，多种色素的标准曲线线性范围如下表所示：
表一：柠檬黄标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.013 | 0.025 | 0.041 | 0.105 | 0.204 |
表一
表二：日落黄标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.621 | 1.159 | 2.313 | 5.623 | 11.36 |
表二
表三：偶氮品红标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.013 | 0.025 | 0.041 | 0.105 | 0.204 |
表三
表四：诱惑红标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.604 | 1.132 | 2.303 | 5.489 | 10.401 |
表四
表五：刚果红标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.801 | 1.485 | 3.054 | 7.499 | 14.46 |
表五
表六：酸性红87标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.477 | 0.878 | 1.78 | 4.329 | 8.862 |
表六
表七：立索尔红标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.52 | 0.98 | 1.899 | 4.809 | 9.973 |
表七
表八：酸性橙2红标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 2.57 | 4.812 | 9.731 | 23.537 | 42.096 |
表八
表九：颜料红53红标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.516 | 0.98 | 1.972 | 4.708 | 9.039 |
表九
表十：分散红15红标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.367 | 0.629 | 1.31 | 3.346 | 6.527 |
表十
表十一：颜料橙5红标准曲线线性范围：
| 标准溶液 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 标准溶液浓度(mg/L) | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 仪器响应值 | 0 | 0.934 | 1.791 | 3.335 | 6.602 | 11.867 |
表十一
本实施例中，所述使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液的步骤中，柠檬黄的目标物质保留时间为5.843min；日落黄的目标物质保留时间为9.443min；偶氮品红的目标物质保留时间为10.117min、诱惑红的目标物质保留时间为10.333min、刚果红的目标物质保留时间为13.247min、酸性橙87的目标物质保留时间为14.220min、立索尔红的目标物质保留时间为14.640min、酸性橙2的目标物质保留时间为15.567min、颜料红53的目标物质保留时间为17.077min、分散红15的目标物质保留时间为17.793min和颜料橙5的目标物质保留时间为18.800min。
图3a-3e为利用本发明实施例的方法检测的多种色素在不同浓度下的色谱图；
其中，图3a是多种色素浓度为0.5mg/L的色谱图；图3b是多种色素浓度为1.0mg/L的色谱图；图3c多种色素浓度为2mg/L的色谱图；图3d是多种色素浓度为5mg/L的色谱图；图3e是多种色素浓度为10mg/L的色谱图。
图4a-4b为利用本发明实施例的方法检测的多种色素的线性示意图。
实施例1：
称取0.2g待测样品，加入2mL着色剂提取液混合，其中所述着色剂提取液为体积比为1：1：1：1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜，将混合液在3000r/min的条件下进行离心处理，取上清液过紫色滤膜，用HPLC-DAD测定上清液；分别称取多种色素的标准品0.01于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到标准储备液；分别将所述标准储备液用甲醇逐级稀释，得到标准工作液，用HPLC-DAD进行检测。
实施例2：
称取0.1g待测样品，加入1mL着色剂提取液混合，其中所述着色剂提取液为体积比为1：1：1：1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜，将混合液在5000r/min的条件下进行离心处理，取上清液过紫色滤膜，用HPLC-DAD测定上清液；分别称取多种色素的标准品0.02于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到标准储备液；分别将所述标准储备液用甲醇逐级稀释，得到标准工作液，用HPLC-DAD进行检测。
实施例3：
称取0.2g待测样品，加入2mL着色剂提取液混合，其中所述着色剂提取液为体积比为1：1：1：1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜，将混合液在6000r/min的条件下进行离心处理，取上清液过紫色滤膜，用HPLC-DAD测定上清液；分别称取多种色素的标准品0.01于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到标准储备液；分别将所述标准储备液用甲醇逐级稀释，得到标准工作液，用HPLC-DAD进行检测。
在一具体实施例中，对本发明实施例提供的方法进行验证性实验。
1.样品描述：眼影；
2.加标过程：
以上述眼影为空白样，分别加入一定量的已知浓度多种色素的混合溶液，形成约20mg/kg浓度。称取眼影0.2g，加入2mL体积比为1:1:1:1的水：甲醇：四氢呋喃：二甲亚砜进行提取，得到混合液，将混合液离心后取上清液过紫色滤膜，得到的预处理后的样品溶液，进行加标回收测试；
3.仪器分析条件：
仪器：HPLC-DAD；
色谱柱：Thermo Hypersil GOLD C18，250×4.6mm，5um；
检测波长：483nm；
柱温：30℃；
进样量：20μL；
运行时间：22min；
流动相A：20mol/L的乙酸铵；
流动相B：甲醇；
梯度洗脱程序：
起始时，当前流动相由90％流动相A与10％流动相B构成；
到达14min时，当前流动相由5％流动相A与95％流动相B构成；
到达18min时，当前流动相由5％流动相A与95％流动相B构成；
到达18.5min时，当前流动相由90％流动相A与10％流动相B构成；
到达22min时，当前流动相由90％流动相A与10％流动相B构成。
4.加标回收数据如表十二所示：
| 待测物 | 回收率％ |
| 柠檬黄 | 92 |
| 日落黄 | 91 |
| 偶氮品红 | 90 |
| 诱惑红 | 95 |
| 刚果红 | 92 |
| 酸性红87 | 93 |
| 立索尔红 | 94 |
| 酸性橙2 | 90 |
| 颜料红53 | 91 |
| 分散红15 | 92 |
| 颜料橙5 | 93 |
表十二
5.检测低限：
对空白样品添加一定量的多种色素，使样品中多种色素最终浓度为5mg/kg，用上述同时测定化妆品中多种色素的方法进行检测，得到各参数检出低限为5mg/kg。
通过上述结果可以看出，本发明方法的回收率在90％-100％的满意范围内，具有良好的重复性和重现性，定量准确，各物质检出限可以达到5mg/kg。
尽管已描述了本申请实施例的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本申请实施例范围的所有变更和修改。
最后，还需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法或者物品不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者终端设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法或者物品中还存在另外的相同要素。
以上对本申请所提供的一种同时测定化妆品中的多种色素的方法，进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本申请的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本申请的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本申请的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本申请的限制。
Claims (6)
1.一种同时测定化妆品中的多种色素的方法，所述多种色素为柠檬黄、日落黄、偶氮品红、诱惑红、刚果红、酸性橙87、立索尔红、酸性橙2、颜料红53、分散红15和颜料橙5，其特征在于，包括步骤：取样；预处理和对预处理后的样品溶液进行测定；
其中，所述预处理步骤包括：
提取：将待测样品与着色剂提取液混合，所述待测样品与所述着色剂提取液的固液比为0.1g：1-2mL，所述着色剂提取液为体积比为1:1:1:1的水、甲醇、四氢呋喃和二甲亚砜；
净化：将混合液在第一指定转速下进行离心处理，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液；
所述对预处理后的样品溶液进行测定的步骤包括：
检测：使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液；
所述HPLC-DAD的使用条件包括：
色谱柱：Thermo Hypersil GOLD C18，250×4.6mm，5μm；
检测波长：483 nm；
柱温：30℃；
进样量：20μL；
运行时间：22 min；
流动相A：20mol/L的乙酸铵；
流动相B：甲醇；
梯度洗脱程序：
起始时，当前流动相由90%流动相A与10%流动相B构成；
到达14min时，当前流动相由5%流动相A与95%流动相B构成；
到达18min时，当前流动相由5%流动相A与95%流动相B构成；
到达18.5min时，当前流动相由90%流动相A与10%流动相B构成；
到达22min时，当前流动相由90%流动相A与10%流动相B构成。
2.根据权利要求1所述的同时测定化妆品中的多种色素的方法，其特征在于，所述在第一指定转速下进行离心处理，取上清液过滤，得到预处理后的样品溶液的步骤，包括：
将混合液在指定转速下进行离心处理，取上清液过紫色滤膜，得到预处理后的样品溶液。
3.根据权利要求1所述的同时测定化妆品中的多种色素的方法，其特征在于，所述预处理步骤，还包括：
标准工作液的制备：分别称取多种色素的标准品0.01-0.02g于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到标准储备液；分别将所述标准储备液用甲醇逐级稀释，得到标准工作液。
4.根据权利要求3所述的同时测定化妆品中的多种色素的方法，其特征在于，还包括：
绘制标准曲线：使用HPLC-DAD检测所述标准工作液，得到所述标准工作液的浓度和峰面积；以所述峰面积为纵坐标，所述标准工作液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。
5.根据权利要求4所述的同时测定化妆品中的多种色素的方法，其特征在于，所述使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液的步骤，包括：
使用HPLC-DAD检测预处理后的样品溶液；
依据所述标准曲线检测预处理后的样品溶液中多种色素的含量。
6.根据权利要求5所述的同时测定化妆品中的多种色素的方法，其特征在于，所述依据所述标准曲线检测预处理后的样品溶液中多种色素的含量的步骤之后，还包括：
当所述HPLC-DAD有检出且检出数值大于200倍检出限时，将所述待测样品与所述着色剂提取液的固液比进行调整，再重新测定所述预处理后的样品溶液。
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