CN109481463B - 一种口服富勒烯乳剂、制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种口服富勒烯乳剂、制备方法及应用，其包括由下述重量百分数比组分：富勒烯油10‑50％、乳化剂4‑30％、助乳化剂0.1‑0.2％、去离子水补充，该乳剂安全稳定、生物利用度高。

Description

一种口服富勒烯乳剂、制备方法及应用

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其是涉及一种口服富勒烯乳剂及其制备方法。

背景技术

1985年科学家Kroto、Smalley、Curl等人在研究太空深处的碳元素时发现了C60富勒烯，1996年三人因此而获得诺贝尔化学奖。富勒烯与金刚石、石墨同为碳的同素异形体。C60是由60个碳原子组成的球形分子，由12个五边形和20个六边形组成，每个碳原子和相邻的三个碳原子通过SP²杂化成键，因形似足球而被称为“足球烯”。

具有笼状碳原子团簇结构的系列分子被统称为富勒烯，其是除石墨、金刚石和无定型碳之外碳元素的另一种同素异形体。富勒烯主要包括空心富勒烯、内嵌富勒烯、富勒烯衍生物及杂环富勒烯等。常见的C60、C70、C76、C84等种类。

富勒烯的多个P轨道构成的大π键共轭体系，使得其具有较强的接受电子的能力，因其独特的结构和理化性质，使其具有优异的清除自由基性能，被称为“自由基海绵”，同时还表现出了优异的抗氧化性能。使其在化妆品材料、生物医药等方面得到广泛关注。

通过将C60嵌入表面活性剂中，C60仍可以消除细胞内的活性氧，抑制线粒体的去极化、半胱氨酸蛋白酶的激活、细胞膜上磷脂酰丝氨酸的曝光以及DNA的分裂，C60表现出了保护细胞不被氧化凋亡的作用。C60脂质体复合物通过防御UVA对皮肤结构，细胞核和胶原纤维的破坏以及向人体皮肤组织的渗透来起到抗氧化作用，是维他命C的172倍，能够亲和自由基。

Fathi Moussa教授长期从事C60的性质研究工作，作为将富勒烯溶于橄榄油中的第一人，他们通过对老鼠10-17个月每两周喂一次(每公斤体重喂4毫克富勒烯)，对照组老鼠17-38个月死亡，而试验组寿命则延长至59-66个月，发现富勒烯具有长寿保健功能。期间无论体重，生理表现无一异常，并未发现C60具有毒性和生物遗传性，相反一定量的C60具有清除自由基性能，从而使动物免受过多自由基产生的危害。

现有技术中有将富勒烯C₆₀溶于橄榄油中进行研究的报道，发现其能在不影响生理表现的情况下清除自由基并延长试验老鼠的生命，但是溶于橄榄油的富勒烯C₆₀进入动物体内后，消化和吸收情况不是非常理想，同时，大量的油脂摄入体内后，会对体内肠道菌群产生应用，有些三高病人可能会因为摄入过多油脂而加重病情。因此直接服用油类会影响药物功效的发挥。专利WO2013/025180A1将富勒烯粉末与植物油混合，经过球磨、离心、过滤后，得到富勒烯植物油，以纯的形式或以在水中的乳剂形式给药。当采用纯形式给药则是直接饮用富勒烯植物油的方式来治疗疾病，为达到疗效需要服用大量的植物油，出现上述三高病人的使用，患者依从性比较低。以水形式服用，则包括多种口服方式。而乳剂指两种互不相溶的液体，制成供口服的稳定的水包油型乳液制剂，乳剂分散作用好，有效表面积大，有利于药物的释放、溶解和吸收；乳剂中含有乳化剂，有表面活性作用，可改善胃肠黏膜性能，促进药物吸收；乳剂中的油脂吸收后可促进胆汁分泌，增加血液和淋巴液的流速，有助于药物溶解和吸收；乳剂中的油脂经消化后生成亚油酸和油酸，可以抑制胃肠道的蠕动，延长药物在小肠停留的时间；乳剂中的油脂性物质还可能通过淋巴系统转运吸收。

为了提高富勒烯的生物利用度及安全性，本发明选择了口服富勒烯乳剂还没有被研究过。

发明内容

为了克服上述技术问题，本发明提供一种口服用富勒烯乳液，通过将富勒烯溶于植物油中后，采用高压均质机或微射流将乳化剂、富勒烯油和去离子水均匀分散后，形成乳剂，通过口服方式使用后，能够加快富勒烯的吸收和药效，提高生物利用度，从而达到清除人体内自由基、减轻机体损伤、抗衰老等效果，并且无任何副作用。

本发明的另一目的在于口服富勒烯乳剂的制备方法，得到的口服用富勒烯乳剂具有更高的溶解度。

本发明通过以下技术方案实现：

本发明的一种口服富勒烯乳剂，其特征在于，其包括由下述重量百分数比组分：富勒烯油10-50％、乳化剂4-30％、助乳化剂0.1-0.2％、去离子水补充。

进一步优选，一种口服富勒烯乳剂，其特征在于，其包括由下述重量百分数比组分：富勒烯油18-40％、乳化剂8-20％、助乳化剂0.1-0.2％、去离子水补充。

本发明所述的口服富勒烯乳剂为水包油型富勒烯乳剂，所述乳液滴的粒径50-200nm。更优选50-150nm。

本发明所述的富勒烯油是由重量份比的富勒烯与植物油(0.1-10):(10-40)组成。进一步优选，富勒烯油是由重量份比的富勒烯与植物油(1-5):(15-25)组成。最佳为富勒烯油是由重量份比的富勒烯与植物油1:20组成。

优选地，上述技术方案中，所述的富勒烯为空心富勒烯和/或金属富勒烯。包括但不限于富勒烯C_2n、M@C_2n、M₂@C_2n、MA@C_2n、M₃N@C_2n、M₂C₂@C_2n、M₂S@C_2n、M₂O@C_2n和M_xA_3-xN@C_2n中的任一种，其中，M和A均为金属元素，所述M和A均选自Sc、Y和镧系金属元素中的任意一种；30≤n≤60；0≤x≤3。

进一步优选所述富勒烯选择C₆₀、C₇₀、C₇₆、C₈₂、C₈₄一种或以上的混合物。

所述植物油，包括但不限于为橄榄油、药用大豆油、青刺果油、亚麻籽油、葵花籽油、荷荷巴油、花生油、茶油、茶树油、玫瑰果油、坚果油、鳄梨油、蓖麻油、玉米胚油和玉米油中至少一种。进一步优选大豆油、橄榄油、蓖麻油、茶油。更优选大豆油，大豆油除了对富勒烯溶解度高，同时含有大量不饱和脂肪酸。

本发明所述乳化剂根据富勒烯选用乳化能力强、耐高温、易储存的辅料。优选乳化剂包括但不限于聚氧乙烯蓖麻油、聚甘油油酸酯、油酰聚氧乙烯甘油酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯、月桂酸聚氧乙烯酯、吐温80、大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂中一种或以上。优选乳化剂选择大豆磷脂、聚氧乙烯蓖麻油合用。两种乳化剂复合能够就有更好的稳定性，乳化能力增强。

在测定药辅相溶性的基础上，针对口服制剂的体内吸收特性，选择对富勒烯溶解性最佳的油相、乳化剂进行配伍，保证口服乳剂里药物含量尽量高。

发明人在大量的筛选过程中发现单一使用乳化剂效果不明显，当选用助乳化剂与乳化剂合用不仅能够降低成本、而且乳化能力强、毒性低，更重要的是稳定性增加。所述助乳化剂包括油酸乙酯、丙二醇、丙三醇、乙醇、柠檬酸钠、羧甲基纤维素钠、十二烷基苯磺酸钠、海藻酸钠、聚维酮、硬脂酸、聚乙二醇400、聚乙二醇600、黄原胶。优选助乳化剂为柠檬酸钠，所述柠檬酸钠安全无毒、流动性佳、进入人体后能够快速降解排泄。

进一步优选，大豆磷脂：聚氧乙烯蓖麻油：柠檬酸钠＝(4-5):(4.5-5):(0.2-0.3)时能够制备出稳定的富勒烯乳液。

本发明的富勒烯乳剂水溶性辅料包括香精，防腐剂等。

本发明的富勒烯乳剂可以作为其它药物组合物的原料之一，其用量为0.1-99.9％。

本发明富勒烯乳剂可与药剂上可接受的载体制成药学上可接受的剂型。所述剂型为口服给药途径，包括但不限于胶囊剂、片剂、滴丸剂、颗粒剂、浓缩丸、口服液和合剂中的一种。

对于本发明富勒烯乳剂，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物(例如羟基乙酸淀粉钠)。适宜的润滑剂例如，硬脂酸镁等。适宜的药学上可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠等。

本发明的富勒烯乳液可通过混合、填充、压片等本领域常用的方法制备成固体口服组合物，反复进行混合可使活性物质均匀分布在整体上使用大量填充剂的组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液剂、糖浆剂或酏剂，或者还可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪；溶液剂的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，并在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可溶解在所述载体中。为了提高液体单位剂型的稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

在将本发明的富勒烯乳液制备成药剂时，可选择性地向其中加入一种或多种适合的药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体选自：糖醇，例如甘露醇、山梨醇、木糖醇；氨基酸，例如盐酸半胱氨酸、蛋氨酸、甘氨酸；无机盐，例如一价碱金属的碳酸盐、磷酸盐或其水溶液，氯化钠、氯化钾，焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠，碳酸钙、碳酸氢钙；无机酸，例如盐酸、硫酸、磷酸；有机酸，例如醋酸、维生素C、巯基乙酸；有机酸盐，例如醋酸盐、藻酸盐、乳酸钠、EDTA二钠、EDTA钙钠，硬脂酸盐，例如硬脂酸钙、硬脂酸镁；寡糖、多糖、纤维素及其衍生物，例如麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、蔗糖、乳糖、环糊精(例如β-环糊精)、淀粉；硅衍生物；明胶；聚乙烯吡咯烷酮；甘油；琼脂；表面活性剂(例如吐温80)；聚乙二醇；磷脂类材料；高岭土；滑石粉等。

本发明还公开了注射用富勒烯乳剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备富勒烯油：

(2)制备油相：

(3)制备水相：

(4)水包油型富勒烯乳剂制备：

上述步骤(1)中将富勒烯末与植物油充分混合均匀后，置于球磨机中，超声、搅拌、加热，使富勒烯在植物油中充分溶解，过滤得到富勒烯油。

进一步优选，步骤(1)将富勒烯粉末进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末与植物油进行混合，置于球磨机中500-1000转/分钟，球磨8-20h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到0-60℃，氮气保护，搅拌12-72h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

进一步优选，步骤(1)将富勒烯粉末球磨细化0.05-1μm，与植物油充分混合均匀后，置于球磨机中500-700转/分钟，球磨6-10h，得到富勒烯油混悬液，然后将混悬液加热到0-50℃超声、氮气保护，搅拌加热10-15h，使富勒烯在油脂类辅料中充分溶解，离心、过滤得到富勒烯油。

上述步骤(2)中将乳化剂、助乳化剂、富勒烯油预加热，置于分散机中搅拌均匀得油相。

进一步优选，步骤(2)将乳化剂、助乳化剂、富勒烯油预加热55-70℃，置于分散机以5000-8000rmp的转速搅拌8-15min分散均匀，即得油相。

本发明步骤(3)水相中还可以加入香精、防腐剂等乳剂水性辅料。

本发明所述的步骤(3)，将水溶性辅料、去离子水，预热置于分散机中搅拌均匀得水相。

进一步优选，步骤(3)将水溶性辅料加入去离子水中预热50-60℃，置于分散机3000-7000rmp、8-15min搅拌均匀得水相。

上述步骤(4)将油相缓慢加入到水相中置于分散机中搅拌分散均匀，高压均质，即得水包油型富勒烯乳剂。

进一步优选，步骤(4)在50-60℃下将油相缓慢加入到水相中分散7000-12000rmp、8-15min分散乳化得初乳，待初乳温度自然降至室温后，投入到高压均质机中，在压力50-60Mpa下，均质4-6次直到乳剂粒径为140-150nm或微射流制得乳剂粒径50-100nm,即得精乳。

本发明优选的均质压力及均质次数根据乳剂粒径及稳定性筛选得到的。压力越大，均质次数越多，乳剂粒径越小、越均匀、乳剂越稳定；但均质次数过多，乳剂粒径过小后，乳滴接触面积变大，导致乳滴聚集能力增强，反而降低乳剂的稳定性。本发明均质得到140-150nm乳剂稳定性好，没有发现聚集现象。本发明为了制得更小的粒径乳剂采用微射流技术可以解决粒径小的乳滴聚集的问题，微射流让乳滴处于更稳定的状态。

本发明还提供了口服富勒烯乳剂在制备治疗肿瘤药物中的作用，尤其是在制备治疗骨髓抑制的药物中的应用。

本发明还提供了口服富勒烯乳剂在制备治疗帕金森病药物中的应用。

本发明也提供了该口服富勒烯乳剂具有清除体内自由基抗衰老的作用。

有益效果

为了更好的描述本发明的有益效果，通过下述试验例来阐述

试验例一，富勒烯乳剂中植物油的筛选

方法：将富勒烯粉末与表1中油脂类辅料充分混合均匀后，置于球磨机中，700转/分钟，球磨8h，然后将混合物40℃超声+搅拌加热12h，使富勒烯在油脂类辅料中充分溶解，最后过滤得到富勒烯油.

表1：药辅相溶性筛选

结果：从表1所示植物油在乳剂中只能做油相，植物油对各种富勒烯的溶解度比较好，优选大豆油,橄榄油和茶油。富勒烯与聚氧乙烯蓖麻油、聚甘油油酸酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、丙二醇单辛酸酯等既做为油相又能做乳化剂的油脂，各种富勒烯的溶解均远远小于植物油对富勒烯的溶解度。同样富勒烯与乳化剂或助乳化剂混合，富勒烯不能分散到乳化剂或助乳化剂的油脂中。综上，植物油是富勒烯溶解性最佳的油相、才能在乳剂制备过程中保证口服乳剂里药物含量尽量高。

试验例二乳化剂的筛选实验

(一)方法：富勒烯油20g、聚氧乙烯蓖麻油表2

表2：制备富勒烯乳剂筛选

单位：g补足到100g

从表2可见，聚氧乙烯蓖麻油作为乳化剂，乳化剂使用量较少时，出现油水分层，当增加乳化剂比例后能够成乳，但是稳定性不够，成乳后又出现水乳分层。因此，单独使用聚氧乙烯蓖麻油作为乳化剂，不能够得到稳定富勒烯乳剂，选择添加其他乳化剂配合使用.

(二)方法：复合乳化剂选择

发明人再选择与聚氧乙烯复配的辅料时，发现吐温-80填加时，加入量达到2％时仍然出现油水分离状态，而天然磷脂类乳化剂在较少用量不会出现油水分离状态，并且天然磷脂能够促进药物吸收，普遍用于乳剂制备中。混合乳化剂乳化效果好，磷脂类乳化剂能够提高乳剂的生物利用度。

称取20g富勒烯油、表3辅料添加6g，去离子水74g，分散机7000rmp10min后观察乳液体系状态。由表3、表4得出：大豆磷脂为最优选，具有乳化效果好、促进乳剂吸收、气味佳等优势。实验项目4和6能够得到稳定的乳剂，但乳化剂用量最少情况下为优选选择，所以选用4为制备方法。

表3：磷脂类乳化剂筛选

表4：混合乳化剂配伍筛选

单位：g

试验例三助乳化剂的选择

由于此配方没有使用助乳化剂，乳化剂用量大、成本高，因此在此基础上添加助乳化剂，用以降低乳化剂用量。

助乳化剂一般没有乳化能力或很弱，在制备乳剂过程中起到增加乳剂稳定性的作用，能够提高乳剂粘度、增加乳化膜的强度，从而增加乳剂稳定性，乳剂体系电势在|20|-|40|mv之间，有利于乳剂的稳定，因此选用离子盐型助乳化剂，即柠檬酸钠、海藻酸钠、十二烷基磺酸按、羟甲基纤维素钠。

表5:助乳化剂性质筛选

由表5得出，柠檬酸钠为较优选择。

表6：增加助乳化剂剂柠檬酸钠配伍筛选

单位：g 补足到100g

由表6得到最终制备稳定富勒烯乳液，当大豆磷脂：聚氧乙烯蓖麻油：柠檬酸钠＝4:4.5:0.2或大豆磷脂：聚氧乙烯蓖麻油：柠檬酸钠＝5.5:4:0.3时能够制备出稳定的富勒烯乳液。

试验例四工艺参数的选择

方法：按照实施例1的处方及制备方法，参数如表7-9.

表7：乳化温度的筛选：

Ke值为离心稳定参数，Ke值越小表示乳剂越稳定。由表7可知，乳剂制备温度在70℃时离心稳定参数最小，乳剂稳定性最好。

高压均质机在制备乳剂的过程中起到乳化均质的作用，因此压力不同所制备乳剂粒径不同，影响最终乳剂的稳定性，对均质压力筛选，均质5次后，检测乳剂粒径。

表8高压均质压力筛选

由表8得：均质机压力在60MPa与50MPa下乳剂粒径无明显区别，以低成本原则，均质压力为50MPa。

在相同压力50Mpa下均质，均质次数多少同样影响乳剂粒径的大小，均质次数越多，乳剂粒径越小、越均匀、乳剂越稳定；但均质次数过多，乳剂粒径过小后，乳滴接触面积变大，导致乳滴聚集能力增强，反而降低乳剂的稳定性。

表9：高压均质次数筛选

由表9得：均质次数在4和5次粒径无明显差别，以低成本原则，均质次数选用4次为制备次数。

实验例五富勒烯口服乳剂活体水平的化疗保护功效

动物模型：4-5周ICR小鼠，随机分为4组，每组6只，药物A组：CTX+1mg/ml口服乳剂组，灌胃给药，每次100ul；药物B组：CTX+5mg/ml富勒烯油组，灌胃给药，每次100ul；对照组C：生理盐水(Saline)，环磷酰胺(CTX)实验组D。小鼠皮下接种106个小鼠肝癌细胞(H22细胞)，接种5-7天后，肿瘤直径达到5mm左右时，进行实验。CTX给药量为60mg/kg小鼠体重。于肿瘤接种后第七天开始给药，作为开始实验的第一天，每天一次，连续5天，分别在第四天，第七天，第十天，第十四天和第十七天，从小鼠眼眶取血(20μl)，用血细胞自动分析仪检测血常规，其中和骨髓抑制相关的主要指标为白细胞计数(WBC)，红细胞计数(RBC)，血小板计数(PLT)，血红蛋白测定(HGB)。相应的检测结果如表10所示，

结果：从表10可得知：与空白对照组相比，环磷酰胺(CTX)实验组中的小鼠中与骨髓抑制相关的指标：白细胞，红细胞，血小板，血红蛋白在小鼠体内都有着不同程度的减少，其中以白细胞的减少最为明显；而CTX+富勒烯口服乳剂实验组中的小鼠，由于富勒烯的保护作用，其白细胞，红细胞，血小板，血红蛋白的量相较于环磷酰胺(CTX)实验组都有着很大程度的提高，并且随着时间的延长，相关指标越来越接近于正常小鼠的值。同时对比可知，口服乳剂较口服油剂对骨髓抑制的保护作用效果要更加优越。表明：富勒烯口服乳剂对于化疗药物CTX所导致的小鼠骨髓抑制有更加明显的保护效果。

表10白细胞计数，红细胞计数，血小板计数，血红蛋白测定数据

试验例六本发明富勒烯乳剂清除羟基自由基能力的测试

采用DMPO-OH自旋捕获的方式进行乳剂清除羟基自由基能力的测试。紫外光照射双氧水产生自由基，然后向其中加入富勒烯乳剂，通过对比加入富勒烯乳剂前后羟基自由基ESR信号强弱的变化来判定富勒烯乳剂清除自由基的能力。结果如图1所示，当在测试体系中加入富勒烯乳剂后，体系中的羟基自由基几乎被完全淬灭。

试验例七本发明富勒烯乳剂抗氧化作用

选用血管内皮细胞对富勒烯乳剂进行抗氧化保护功效的评价：首先将血管内人皮细胞与富勒烯乳剂，其中富勒烯终浓度为20umol/L，共同孵育5h，然后离心，弃掉上清液，再向培养皿中加入培养基，然后加入浓度为100umol/L的双氧水，继续孵育12h，然后对细胞进行分析。如图2所示，模型组(双氧水损伤组)和空白对照物中细胞的形态基本一致，表明富勒烯乳剂表现出来对细胞的极好的保护功效。

试验例八本发明口服乳剂粒径测定

将富勒烯乳剂用水稀释100倍，然后用动态光散射分析仪对其粒径进行检测，如图3所示，富勒烯乳剂粒径基本保持在130-180nm之间。

试验例九：口服乳剂在抑制肿瘤方面的功效

使用实施例1的富勒烯乳剂进行试验

动物品系：Balb/c雌鼠，5周，体重在16-20g之间；

肿瘤模型：小鼠肝癌H22瘤株；

实验分组：随机分为药物组A、药物组B和对照组C，每组6只。

给药方式：(1)向药物组A的小鼠施用1mg/ml富勒烯乳剂，口服给药，剂量为200ul/d，连续给药10次；(2)向药物组B的小鼠施用1.2mg/ml富勒烯油组(专利WO2013/025180A1)，口服，200ml/kg/d，连续给药10次；(3)对照组C：生理盐水(Saline)；

口服；给药剂量：

实验方法：皮下接种100μL浓度为5×107/ml的H22肝癌细胞；接种24小时后开始给药，连续给药10次；实验期间每隔一天称量小鼠体重并观察肿瘤生长情况，观察至接种后15天结束实验，取小鼠肿瘤称重及测量体积，计算抑瘤率。

表11通过上述抗癌方法及抑瘤率计算得到如下结果：

由上表11对比可以看出，本发明的富勒烯口服乳剂抑制肿瘤的效率优于富勒烯油产品。

实施例十：富勒烯口服乳剂对帕金森症状的有益功效

Wistar大鼠，体重180-200g。实验分5组，雌雄各半，对照组不造模，其余各组造模两周后灌胃给药，连续给药6周。富勒烯口服乳剂分为高剂量组(0.424mg/ml),中剂量组(0.212mg/ml)，低剂量组(0.106mg/ml)，给药剂量为2ml，采用LPS毁损模型：阿扑吗啡(0.5mg/kg)皮下注射后能很好的模拟帕金森症状的行为学和病理改变。注射5-15分钟后诱导向健侧的旋转行为，对照组大鼠为行为变化。PD组大鼠旋转圈数随造模时间的增加而增加，给药组的大鼠旋转圈数随造模时间的延长而减少，并且高剂量组旋转圈数减少更明显。特别是高剂量组和中计量组的大鼠旋转圈数与PD组同时间相比较，第5,6周旋转天数有显著差异(P＜0.05).由表2中数据可以得出富勒烯注射乳剂对于LPS诱导的老年痴呆症有显著效果

表12大鼠旋转行为变化(转/分钟)

综上所述，本发明具有如下有益效果：

1、发明人发现制备富勒烯乳剂中，富勒烯、植物油、乳化剂无论怎样均质都得不到均匀乳液，而始终呈现混悬状态。当富勒烯事先制成富勒烯油后再与乳化剂均质制备得到的乳液能克服了上述缺陷。经过动态动态光散射分析仪监测本发明的乳剂粒径可达到50-300nm。

2、本发明首次将富勒烯制备成乳剂，选择合适的植物油乳化剂等组分以及合适的工艺参数等，得到的口服富勒烯乳剂生物利用度高，且稳定；制备出口服富勒烯乳剂，降低纯富勒烯油作为制剂形式时的副作用。当为口服液时，富勒烯乳剂较富勒烯油剂的给药量更容易精确定量，油剂会粘附在容器壁上，乳剂不会挂壁。如果为了精确定量而将油剂封入胶囊，病人摄入过多胶囊壳副作用变大。而乳剂可以顺畅的直饮，降低了过多的药物制剂辅料的副作用。

3、富勒烯油+聚氧乙烯蓖麻油是富勒烯口服乳剂里关键的两种成分，尤其是聚氧乙烯蓖麻油，是筛选出来的对富勒烯溶解性最好的一种乳化剂。

4、本发明富勒烯乳剂能清除人体内自由基、减轻机体损伤、抗衰老等效果，并且无任何副作用。

5、本发明还提供了口服富勒烯乳剂在制备治疗肿瘤药物中的作用。尤其是在制备治疗骨髓抑制的药物中的应用。本发明注射乳剂较口服油剂对骨髓抑制的保护作用效果更加优越。

6、本发明制备的口服乳剂在抑制肿瘤，缓解帕金森症状，清除羟基自由基方面性能优异。

7、本发明富勒烯乳剂的分散作用好，有效表面积大，有利于药物的释放、溶解和吸收；乳剂中含有乳化剂，有表面活性作用，可改善胃肠黏膜性能，促进药物吸收；乳剂中的油脂吸收后可促进胆汁分泌，增加血液和淋巴液的流速，有助于药物溶解和吸收；乳剂中的油脂经消化后生成亚油酸和油酸，可以抑制胃肠道的蠕动，延长药物在小肠停留的时间；乳剂中的油脂性物质还可能通过淋巴系统转运吸收。

8、本发明所制备的富勒烯乳剂干燥后，制成固体制剂，如颗粒、胶囊、片剂等剂型，固体制剂有利于储存及运输，携带方便，更有利于患者的方便使用。

9、本发明所制备乳剂选用乳化能力强、成本低的乳化剂，降低生产成本，利于产业化生产。

附图说明

图1是根据本发明的口服富勒烯乳剂清除羟基自由基的能力。

图2是根据本发明的口服富勒烯乳剂保护细胞抗氧化的能力。

图3是根据本发明的口服富勒烯乳剂的粒径DLS数据。

具体实施方式

下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。

除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。

实施例1 C70富勒烯油

将富勒烯粉末C70进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末1g与大豆油20g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨8h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例2 C60富勒烯油

将富勒烯粉末C60进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末5g与大豆油100g进行混合，置于球磨机中700转/分钟，球磨12h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到50℃，氮气保护，搅拌24h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例3 C76富勒烯油

将富勒烯粉末C76进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末0.1与青刺果油10g进行混合，置于球磨机中1000转/分钟，球磨20h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到60℃，氮气保护，搅拌36h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例4 Gd@C82富勒烯油

将富勒烯粉末Gd@C82进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末10g与茶油40g进行混合，置于球磨机中500-1000转/分钟，球磨8-20h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40-60℃，氮气保护，搅拌12-72h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例5 C60富勒烯油

将富勒烯粉末C60进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末3g与橄榄油3g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨80h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例6 C60富勒烯油

将富勒烯粉末C60进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末3g与橄榄油3g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨80h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例7 C76富勒烯油

将富勒烯粉末C76进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末3g与蓖麻油45g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨80h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例8 C60富勒烯油

将富勒烯粉末C60进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末5g与蓖麻油25g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨80h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例9 C70富勒烯油

将富勒烯粉末C70进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末1g与橄榄油15g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨80h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例10 C60富勒烯乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油180g、大豆磷脂160g、添加到800g富勒烯C60油、柠檬酸钠3g预热至60℃，分散机7000rmp、5min搅拌均匀得油相；去离子水补充到4000g，预热至60℃，分散机5000rmp、5min搅拌均匀得水相，在60℃下将油相缓慢加入到水相中分散机9000rmp、10min分散乳化得初乳，待初乳温度自然降至室温后，投入到高压均质机中，50Mpa均质4次，分散机充分分散后，并经过60MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例11富勒烯C70乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油90g、大豆磷脂80g、柠檬酸钠2g，添加到400g富勒烯C70油，预热至60℃，分散机7000rmp、5min搅拌均匀得油相，去离子水补充到2000g，在60℃下将油相缓慢加入到水相中分散机9000rmp、10min分散乳化得初乳，待初乳温度自然降至室温后，投入到高压均质机中，50Mpa均质4次，分后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例12富勒烯Gd@C82乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油4.5g、大豆磷脂5g、柠檬酸钠0.2g，添加到20g富勒烯Gd@C82油相中，去离子水补充到100g，分散机充分分散后，并经过60MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例13：富勒烯C76乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油45g、大豆磷脂40g、柠檬酸钠2g，添加到200g富勒烯C76油相中，去离子水补充到1000g，分散机充分分散后，并经过50MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例14：富勒烯C84乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油45g、大豆磷脂40g、柠檬酸钠2g，添加到200g富勒烯C84油相中，去离子水补充到1000g，分散机充分分散后，并经过60MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例15：富勒烯Gd@C82乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油90g、大豆磷脂80g、柠檬酸钠1.5g，添加到300g富勒烯Gd@C82油相中，去离子水补充到2000g，分散机充分分散后，并经过60MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例16：富勒烯C60乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油50g、氢化大豆磷脂40g、柠檬酸钠2g，添加到150g富勒烯C60油相中，去离子水补充到1000g，分散机充分分散后，并经过50MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例17：富勒烯C70乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油45g、蛋黄卵磷脂40g、柠檬酸钠1g，添加到200g富勒烯C70油相中，去离子水补充到500g，分散机充分分散后，并经过50MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例18：富勒烯C84乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油80g、大豆磷脂70g、十二烷基磺酸钠2g，添加到180g富勒烯C84油相中，去离子水补充到500g，分散机充分分散后，并经过50MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例19：富勒烯C60乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油90g、大豆磷脂80g、海藻酸钠1.5g，添加到180g富勒烯C60油相中，去离子水补充到1000g，分散机充分分散后，并经过60MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例20：富勒烯C70乳剂

称取聚氧乙烯蓖麻油180g、大豆磷脂160g、柠檬酸钠4g，添加到800g富勒烯C70油相中，去离子水补充到4000g，分散机充分分散后，并经过50MPa均质4次，后得到稳定的富勒烯乳液，添加天然防腐剂、香精调配口味，即得。

实施例21：富勒烯软胶囊剂

将明胶：甘油：水＝2:1:2，添加0.4％姜黄素配置成融胶，富勒烯乳剂与融胶进行压丸-定型-洗擦丸-干燥晒丸-捡丸等工艺过程，制成富勒烯软胶囊，因药物装在胶囊壳中与外界隔离，避开了水分、空气、光线的影响、起到保护与稳定作用的作用。

实施例22：富勒烯固体颗粒冲剂

将富勒烯乳剂，添加辅料制粒，选用蔗糖粉：玉米淀粉：磷酸氢钙＝1.3:1.1:1.4，在快速搅拌制粒机中预热5分钟，采用一步制粒喷雾干燥机制粒，得到固体颗粒-装袋。

实施例23：富勒烯片剂

规格5mg

实施例23富勒烯乳剂颗粒50克，淀粉200克，微晶纤维素200克，交联聚维酮50克，乳糖1000克，纯化水1000克，硬脂酸镁20克，制成10000片。

前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (9)

1.一种口服富勒烯乳剂，其特征在于，包括由下述重量百分比组分：

所述乳化剂为大豆磷脂、聚氧乙烯蓖麻油合用；助乳化剂为柠檬酸钠；大豆磷脂、聚氧乙烯蓖麻油、柠檬酸钠的重量比为(4-5):(4.5-5):(0.2-0.3)；所述富勒烯油是将富勒烯粉末进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末与植物油进行混合；其中富勒烯与植物油重量份比为(0.1-10):(10-40)；所述植物油为橄榄油、大豆油、茶油中至少一种。

2.如权利要求1所述的一种口服富勒烯乳剂，其特征在于，包括由下述重量百分数比组分：

3.如权利要求1或2所述的一种口服富勒烯乳剂，其特征在于，所述乳剂中乳液滴的粒径50-200nm。

4.如权利要求3所述的一种口服富勒烯乳剂，其特征在于，所述乳剂中乳液滴的粒径50-150nm。

5.如权利要求1所述的一种口服富勒烯乳剂，其特征在于，所述富勒烯与植物油重量份比为(1-5):(15-25)。

6.如权利要求5所述的一种口服富勒烯乳剂，其特征在于，所述富勒烯与植物油重量份比为1:20。

7.一种权利要求1所述的口服富勒烯乳剂的制备方法，包括如下步骤：

步骤(1)富勒烯油：将富勒烯粉末与植物油充分混合均匀后，置于球磨机中，超声、搅拌、加热，使富勒烯在植物油中充分溶解，过滤得到富勒烯油；

步骤(2)油相制备：将乳化剂、助乳化剂、富勒烯油混合预加热，置于分散机中搅拌均匀得油相；

步骤(3)将水溶性辅料加入到去离子水中混合预热，置于分散机中搅拌均匀得水相；

步骤(4)将油相缓慢加入到水相中置于分散机中搅拌分散均匀，高压均质，即得水包油型富勒烯乳剂。

8.如权利要求7所述的一种口服富勒烯乳剂的制备方法，包括如下步骤：

步骤(1)将富勒烯粉末进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末与植物油进行混合，置于球磨机中500-1000转/分钟，球磨8-20h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到0-60℃，氮气保护，搅拌12-72h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液；

步骤(2)将乳化剂、助乳化剂、富勒烯油预加热55-70℃，置于分散机以5000-8000rmp的转速搅拌8-15min分散均匀，即得油相；

步骤(3)将水溶性辅料加入去离子水中预热50-60℃，置于分散机3000-7000rmp、8-15min搅拌均匀得水相；

步骤(4)在50-60℃下将油相缓慢加入到水相中分散7000-12000rmp、8-15min分散乳化得初乳，待初乳温度自然降至室温后，投入到高压均质机中，在压力50-60MPa下，均质4-6次直到乳剂粒径为140-150nm或微射流制得乳剂粒径50-100nm,即得。

9.如权利要求1所述的一种口服富勒烯乳剂在制备治疗肿瘤、帕金森病、骨髓抑制剂药物中的应用或清除体内自由基抗衰老药物中的作用。

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