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CN107980096A - 低密度不混溶化合物在用于检测样本中分析物的装置中的用途 - Google Patents

低密度不混溶化合物在用于检测样本中分析物的装置中的用途 Download PDF

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CN107980096A CN201680029183.7A CN201680029183A CN107980096A CN 107980096 A CN107980096 A CN 107980096A CN 201680029183 A CN201680029183 A CN 201680029183A CN 107980096 A CN107980096 A CN 107980096A
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Abstract

本公开涉及一种用于检测样本中分析物、特别是用于检测抗原/抗体反应的装置，其中所述装置包括由低密度不混溶化合物组成的层。本公开还涉及一种用于在装置中检测样本中分析物、特别是用于检测抗原/抗体反应的方法，所述装置包括由低密度不混溶化合物所组成的层。本公开还涉及这种低密度不混溶化合物的用途。

Description

低密度不混溶化合物在用于检测样本中分析物的装置中的 用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2015年5月19日提交的欧洲专利申请EP15305748.4的优先权，其整体通过引用结合于此。
技术领域
本公开涉及一种用于检测样本中分析物的装置，其中所述装置包括由低密度不混溶化合物组成的层。本公开还涉及一种使用包括由低密度不混溶化合物组成的层的装置，用于检测样本中分析物的方法。本公开还涉及这种低密度不混溶化合物的用途。
背景技术
柱凝集试验(“CAT”或“凝胶卡”或“试剂卡”)是免疫血液学领域最常用的方式之一。凝胶卡由多个微管组成。该血型测定和血液筛查系统以分离基质的筛分作用为基础。试验通常在微柱中进行，在离心过程中，红细胞团被困在分离基质中(在抗原与抗体之间发生反应的情况)，禾凝集细胞在微柱底部形成团块(在没有反应的情况下)。
凝胶卡使用和判读方便，配合分析仪手动和自动使用时，能够提供可靠的结果。然而，凝胶卡的储存(一般在室温下)会引起上清液正常蒸发。这样会缩短凝胶卡的保质期。蒸发的材料凝结在凝胶卡盖的下侧。蒸发进一步导致性能不良和缺少稳定性。此外，异常运输条件(热应力、过度摇晃......)可能会加快劣化。另外，对于一些试验，例如间接抗球蛋白试验，样本和加入到凝胶卡反应室内的其他试剂(在本文中又称为反应介质)优选地与凝胶(在本文中又称为分离基质)和具有抗人球蛋白的上清液在物理上分离，以实现最佳性能，避免抗人球蛋白与样本之间出现“中和”现象，从而使反应减弱或产生假阴性反应。以下简称凝胶和上清液为反应介质。完成反应室与反应介质之间物理分离的方法之一是保持反应介质与加入到反应室中的试剂之间的气隙。如果凝胶与反应介质之间没有气隙，可能会导致性能下降(Bobryk S.(2011年)。在间接抗球蛋白试验中，移液的变化可能会减少对手动凝胶试验中抗体的检测(《临床实验室科学》，161-166)。
发明内容
研究人员意外地发现，在用于检测样本中分析物、特别是用于检测抗原/抗体反应的装置(例如凝胶卡)中加入一层低密度不混溶化合物可以解决上述问题(参见示例)。另外，这种化合物也有利于试剂和/或待测样本在该装置内的手工或自动分布，增加了样本处理量，减少了污染，使试剂被包裹在凝胶卡内部。这种低密度不混溶化合物的其它优势将予以进一步讨论。
公开了一种用于检测样本中分析物的装置，特别是一种用于检测分析物/配体反应的装置，其中所述装置包括：
能够接收待测样本的反应室；以及
包括试剂的反应介质，所述试剂包括分离基质；
在所述装置内，所述反应室位于所述反应介质上方；
所述反应室和/或所述反应介质任选地包括试剂，所述试剂包括分析物配体；以及
所述装置还包括由低密度不混溶化合物组成的层，其将所述反应室与所述反应介质分隔开。
还公开了一种用于检测样本中分析物的方法，其中：
提供装置，其中所述装置包括：
能够接收待测样本的反应室；以及
包括试剂的反应介质，所述试剂包括分离基质；
在所述装置内，所述反应室位于所述反应介质上方；
所述反应室和/或所述反应介质任选地包括试剂，所述试剂含有分析物配体；以及
所述装置还包括由低密度不混溶化合物组成的层，其将所述反应室与所述反应介质分隔开；
将所述待测样本和任选的包括分析物配体的试剂分配到所述装置的所述反应室内；以及
随后，对所述样本或所述样本和所述分析物配体的混合物在所述反应介质中进行重力沉降和/或离心沉降：
其中，至少在步骤a)和/或步骤b)中提供包括分析物配体的试剂，以及
其中，如果形成了分析物/配体络合物，所述混合物位于所述分离基质之上或内部，在不存在此络合物的情况下，所述混合物位于所述分离基质下方，整个反应在所述装置内进行。
在一个实施例中，一种用于检测样本中分析物的装置包括用于接收待测样本的反应室；分离基质；以及由低密度不混溶化合物组成的层，其将所述反应室与所述分离基质分隔开，其中在所述装置内，所述反应室位于所述分离基质上方。在一些实施例中，所述分离基质和/或所述反应室包括分析物配体。在某些实施例中，所述分析物配体为抗体、抗体片段或抗原。
在一些实施例中，所述低密度不混溶化合物的密度低于所述分离基质的密度。在一些实施例中，所述低密度不混溶化合物的密度小于1和/或具有疏水性。在一些实施例中，所述低密度不混溶化合物选自如下物质，或为包括如下物质中一种或多种的组合物：合成油、有机油、矿物油、石蜡油、石蜡如液体石蜡、非极性溶剂、脂肪酸例如硬脂酸、烷烃混合物和纯烷烃如癸烷、十一烷、十二烷、十三烷、十四烷、十五烷、十六烷、十七烷、十八烷、十九烷、二十烷或二十一烷。在某些实施例中，所述低密度不混溶化合物包括矿物油。在一些实施例中，所述低密度不混溶化合物包括十九烷、十八烷或其组合。在一些实施例中，所述低密度不混溶化合物还包括癸烷。在一些实施例中，所述低密度不混溶化合物在室温下为液体或固体。在某些实施例中，如果所述低密度不混溶化合物为固体，则此固体化合物被进一步热液化或化学液化。
在一些实施例中，在所述装置内，所述低密度不混溶化合物将所述分离基质与所述反应室分隔开。在一些实施例中，所述装置在所述分离基质与所述低密度不混溶化合物之间不包括气隙。在某些实施例中，所述反应室包括试剂，所述试剂包括分析物配体，所述反应室还包括由低密度不混溶化合物组成的层，其位于所述试剂的顶部并将所述试剂或所述反应室内存在的任何试剂与空气分隔开。在一些实施例中，所述低密度不混溶化合物包裹试剂和/或样本。
在一个实施例中，一种用于检测样本中分析物的方法包括(a)提供装置，所述装置包括反应室，其被设置为接收待测样本；分离基质；以及由低密度不混溶化合物组成的层，其将所述反应室与所述分离基质分隔开，其中在所述装置内，所述反应室位于所述分离基质上方；(b)将所述待测样本分配到所述装置的所述反应室内；(c)利对所述装置进行重力沉降和/或离心沉降，其中至少在步骤(a)和/或步骤(b)中提供包括分析物配体的试剂，其中如果形成了分析物-配体络合物，所述混合物位于所述分离基质之上或内部，在不存在所述络合物的情况下，所述混合物位于所述分离基质的下方，整个反应在所述装置内进行。
在一个实施例中，一种用于检测样本中分析物的试剂盒包括装置，所述装置包括反应室，其被设置为接收待测样本；分离基质；以及由低密度不混溶化合物组成的层，其将所述反应室与所述分离基质分隔开，其中，在所述装置内，所述反应室位于所述分离基质上方。在一些实施例中，所述试剂盒还包括在所述分离基质和/或所述反应室中的分析物配体。在一些实施例中，所述试剂盒还包括用于执行样检测样本中分析物的方法的说明。
附图说明
图1示出了根据一个实施例的具有低密度不混溶化合物层的装置。
图2示出了根据另一个实施例的具有低密度不混溶化合物层的装置。所述低密度不混溶化合物层包裹试剂和/或样本。
图3示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物的生物相容性试验结果。
图4示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物(“L-DIC”)的蒸发试验结果。
图5示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物的气隙对比中和鲁棒性试验结果。
图6示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物的凝胶与上清液完整性试验结果。
图7示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物的反应性增强试验结果(A指抗ABO1试剂，DVI指抗RH1部分VI(DVI)类试剂，两者均用于血型测定实施例)。
图8示出了低密度不混溶化合物易分配性试验用卡的制备。
图9示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物的分配促进作用试验结果。
图10和11示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物的“热相关模块化盖板”试验结果。
图12：示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物制成的“模块化盖板”，该盖板能够在保持温度不变的情况下改变状态。
图13：示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物的“化学相关模块化盖板”试验结果(DAT中部分烷烃)(QC指质量控制)。
图14：示出了根据一个实施例的低密度不混溶化合物的“化学相关模块化盖板”试验结果(部分烷烃反定型)。
图15：示出了本文公开的低密度不混溶化合物对ID-HbS卡的影响试验结果。
图16：示出了本文公开的低密度不混溶化合物对ID-PaGIA IgA缺乏测试的影响试验结果。
图17：示出了本文公开的低密度不混溶化合物对ID-PaGIA抗IgA抗体测试的影响试验结果。
图18：示出了本文公开的低密度不混溶化合物对ID-PaGIA梅毒测试的影响试验结果。
具体实施方式
公开了一种用于检测样本中分析物的装置。当该装置是凝胶卡时，本文公开的低密度不混溶化合物102将反应室104与微管凝胶卡的反应介质106分隔开。在凝胶卡的微管100内，微管100一般至少包含2个相：凝胶108和上清液110(两者均包括反应介质106)。在特定实施例中，主要目的是利用本文公开的低密度不混溶化合物102组成的层，将微管100内的反应介质106与反应室104分隔开，防止上清液蒸发，从而增加保质期。参见图1。
在一个实施例中，装置100包括反应室104，其被设置为接收待测样本；分离基质108；以及由低密度不混溶化合物所组成的层102，其将反应室104与分离基质108分隔开，
其中，在装置100内，反应室104位于分离基质108上方。
在一些实施例中，包括低密度不混溶化合物102的所述公开的装置100具有下列一个或多个好处：
防止反应介质106的试剂蒸发，尤其是凝胶卡微管100内上清液110的蒸发；和/或
防止反应室104和/或反应介质106的试剂(例如，抗体或抗原)的中和和/或消耗，可能产生假阴性或不正确的结果；和/或
对试验用样本(例如，红血球、抗体)和试剂(例如，抗体)不产生相互作用/干扰；和/或
提高阳性反应的反应性，而不改变特异性；和/或
有利于所述试剂和所述待测样本向装置100内分布，特别是使试剂(如果反应室104内存在的话)和所述待测样本能够被分配到反应室104内的任何地方；和/或
在分析过程之前，将反应介质106的试剂限制在反应介质106内，特别是限制在反应介质106的底部(可能是装置100的底部)，防止其在冲击或反转的情况下蔓延到反应室104内；和/或
在分析过程中，使所述试剂(如果反应室104内存在的话)和所述待测样本从反应室104穿过反应介质106(其可能位于装置100的底部)；和/或
在分析过程之后，将所有试剂和所述待测样本限制在反应介质106内。
还提供了一种用于检测样本中分析物的方法如一种用于检测分析物/配体反应的方法，特别是一种用于检测样本中抗原和/或抗体的方法，其中：
a)提供装置100，其包括(i)能够接收待测样本的反应室104，以及(ii)包括试剂的反应介质106，所述试剂包括分离基质108，其中，在装置100内，反应室104位于反应介质106上方，其中，任选地，反应室104和/或反应介质106包括试剂，所述试剂包括分析物配体，
b)将所述待测试样本和任选的包括分析物配体的试剂分配到反应室104内；以及
c)随后，对所述样本或所述样本和所述分析物配体的混合物在反应介质106中进行重力沉降；
其中，如果形成了分析物/配体络合物，所述混合物位于分离基质108之上或内部，在不存在该络合物的情况下，所述混合物位于分离基质108下方，整个反应在装置100内进行，
并且其中，在所述装置内，由低密度不混溶化合物102组成的层将所述反应室与所述反应介质分隔开。
可选地，在所提供方法中，在步骤c)中，随后，对所述样本或所述样本和所述分析物配体的混合物在反应介质106中进行离心沉。
又可选地，在所提供方法中，在步骤c)中，随后，对所述样本或所述样本和所述分析物配体的混合物在反应介质106中进行离心沉降和重力沉降(例如，按任意顺序依次进行)。
因此，在本文所述的方法中，含有分析物配体的试剂至少在步骤a)和/或步骤b)中提供。
在特定实施例中，在步骤a)中，反应室104和/或反应介质106包括试剂，所述试剂包括分析物配体。在这一实施例中，在步骤b)中，含有分析物配体的附加试剂可被或不被分配到反应室104中。
在另一个特定实施例中，步骤a)中提供的装置100的反应室104和反应介质106均不包括包括分析物配体的试剂，在步骤b)中，在装置100内提供所述试剂。
当在步骤b)中将包括分析物配体的试剂分配到反应室104内时，样本的分配可以在包括分析物配体的试剂的分配之前、之后或同时进行。
在特定实施例中，“同时进行”是指在步骤b)中，待测样本与包括分析物配体的试剂混合，然后，由此产生的混合物(反应介质112)被分配到装置104的反应室104内。参见图2。
在特定实施例中，所提供的方法包括以下步骤：
a)提供装置100，其包括(i)包括试剂的反应室104，所述试剂包括分析物配体，以及(ii)包括试剂的反应介质106，所述试剂包括分离基质108，其中反应室104位于反应介质106上方，其中，由低密度不混溶化合物102组成的层将反应室104与反应介质106分隔开；
b)使待测样本与装置100的反应室104内的试剂接触；以及
c)随后，对样本和分析物配体的混合物在反应介质106中进行重力沉降；
其中，如果形成了分析物/配体络合物，所述混合物位于分离基质108之上或内部，在不存在该络合物的情况下，所述混合物位于分离基质108下方，整个反应在装置100内进行
可选地，在上面提供的方法中，在步骤c)中，随后，对所述样本或所述样本和分析物配体的混合物在反应介质106中进行重力沉降。
又可选地，在上面提供的方法中，在步骤c)中，随后，对所述样本或所述样本和分析物配体的混合物在反应介质106中进行离心沉降和重力沉降(例如，按任意顺序依次进行)。
“a)提供装置”，在本文中是指所公开方法使用所述装置执行。
在特定实施例中，将包括分离基质108的试剂加入到装置100的反应介质106中，以在步骤a)中“提供”所述装置。
可选地，或累积地，在特定实施例中，将包括分析物配体的试剂加入到反应室104和/或反应介质106中，以在步骤a)中“提供”所述装置。
又可选地，或累积地，在特定实施例中，将低密度不混溶化合物102加入到装置100中，以在步骤a)中“提供”所述装置。
在一个实施例中，一种用于检测样本中分析物的方法包括：
(a)提供装置100，装置100包括反应室104，其设置为接收待测样本；分离基质108；以及由低密度不混溶化合物102组成的层，其将反应室104与分离基质108分隔开，其中，在装置100内，反应室104位于分离基质108上方；
(b)将所述待测样本分配到装置100的反应室104内；以及
(c)对装置100进行重力沉降或离心沉降，其中至少在步骤(a)和/或步骤(b)中提供包括分析物配体的试剂，并且其中，如果形成了分析物/配体络合物，所述混合物位于分离基质108之上或内部，在不存在该络合物的情况下，所述混合物位于分离基质108下方，整个反应在装置100内进行
在特定实施例中，本文所述的装置、方法或用途，通过使装置内的分析物/配体络合物(例如抗原/抗体复合物)在光学上可见，来实现检测样本中的分析物(例如抗体或抗原)。
“光学上”是指通过光密度检测或图像判读。
特别地，本文公开的方法用于：
防止反应介质106的试剂蒸发，尤其是凝胶卡微管100内的上清液110的蒸发；和/或
防止反应室104和/或反应介质106的试剂(例如，抗体或抗原)的中和和/或消耗，可能产生假阴性或不正确的结果；和/或对试验用样本(例如，红血球、抗体)和试剂(例如，抗体)不产生相互作用/干扰；和/或
提高阳性反应的反应性，而不改变特异性；和/或
有利于试剂(如果反应室104内存在的话)和所述待测样本向装置100内分布，特别是使所述试剂和所述待测样本能够被分配到在反应室104内的任何地方；和/或
在分析过程之前，将反应介质106的试剂限制在反应介质106内，特别是限制在反应介质106的底部(可能是装置100的底部)，并防止其在冲击或反转的情况下蔓延到反应室104内；和/或
在分析过程中，使所述试剂(如果反应室104内存在的话)和所述待测样本从反应室104穿过反应介质106(可能位于装置100的底部)；和/或
在分析过程之后，将所有试剂和所述待测样本限制在反应介质106中。
还公开了一种由低密度不混溶化合物102所组成的层在用于检测样本中分析物、特别是用于检测分析物/配体反应(例如抗原/抗体反应)的装置100中的用途，其中所述装置100包括：
能够接收待测样本(可能包括例如抗体或抗原)的反应室104；以及
包括试剂的反应介质106，所述试剂包括分离基质108；
其中，在装置100内，反应室104位于反应介质106上方，并且其中反应室104和/或反应介质106任选地包括试剂，所述试剂包括分析物配体；
用于：
防止反应介质106的试剂蒸发，尤其是凝胶卡微管100内上清液110的蒸发；和/或
防止反应室104和/或反应介质106的试剂(例如，抗体或抗原)的中和和/或消耗，可能产生假阴性或不正确的结果；和/或
对试验用样本(例如，红血球、抗体)和试剂(例如，抗体)不产生相互作用/干扰；和/或
提高阳性反应的反应性，而不改变特异性；和/或
有利于所述试剂和所述待测样本向所述装置内分布，特别是使所述试剂(如果反应室104内存在的话)和所述待测样本能够被分配到反应室104内的任何地方；和/或
在分析过程之前，将反应介质106的试剂限制在反应介质106内，特别是限制在反应介质106的底部(可能是装置100的底部)，并防止其在冲击或反转的情况下蔓延到反应室104内；和/或
在分析过程中，使所述试剂(如果反应室104内存在的话)和所述待测样本从反应室104穿过反应介质106(可能位于装置100的底部)；和/或
在分析过程之后，将所有试剂和所述待测样本限制在反应介质106中。
“用于检测”分析物或分析物/配体反应的“装置”(或“试剂盒”)，在本文中指分别适用于检测分析物或分析物/配体反应的装置(或试剂盒)。在特定实施例中，“用于检测”分析物或分析物/配体反应的“装置”(或“试剂盒”)，在本文中是指分别用于检测分析物或分析物/配体反应的装置(或试剂盒)。
特别地，本文公开的装置适用于本文公开的方法。
“一种”(例如“一种分析物”或“一种分析物配体”)，在本文中指至少一种，即，一种或多种(例如，分别为一种或多种分析物或一种或多种分析物配体)。
“多种”，在本文中指二种、三种、四种、五种或五种以上。
“检测分析物/配体反应”，在本文中是指检测分析物/配体络合物的形成，例如使用本文公开的方法。
在图2所示的特定实施例中，在本文公开的装置、方法或用途中，反应室104包括试剂(也被称为反应介质112)，所述试剂含有分析物配体，并还包括本文公开的由低密度不混溶化合物102组成的层，其位于所述试剂的顶部并将所述试剂或反应室104内存在的任何试剂与空气分隔开。因此，在这一实施例中，本文公开的装置100包含至少两层低密度不混溶化合物102，其中一层将反应室104与反应介质106分隔开，一层将反应室104内存在的含有分析物配体的试剂(或反应室104内存在的任何试剂)与空气分隔开(或隔离)。所述至少两层可具有相同或不同的组成。在一个实施例中，本文公开的低密度不混溶化合物102包裹反应室104内的试剂。
低密度不混溶化合物102是指一种不与反应室104和反应介质106内存在的化合物或化合物的混合物混合(并且特别是完全或基本不溶于，或无法与之形成均相溶液)的化合物。因此，它作为单独化合物留存在装置100内，使反应室104与反应介质106(例如，分离基质或凝胶108)分隔开，和/或使反应室104内存在的包括分析物配体的试剂(或反应室104内的任何试剂)与空气分隔开(隔离)。特别地，本文公开的装置100、方法或用途中的所述低密度不混溶化合物102的密度低于反应室104的密度，并且低于反应介质106的密度。
在图1所示的特定实施例中，在本文公开的装置100、方法或用途中，将反应介质106与反应室104分隔开的低密度不混溶化合物102还将反应介质106与空气分隔开(或隔离)。
“密度低于反应室的密度”是指本文公开的装置100、方法或用途中的低密度不混溶化合物102的密度低于反应室104的总密度，即所述反应室104(如果其包括任何试剂)中所有可能含有分析物配体(例如抗原和/或抗体)的试剂的密度以及可包括分析物(例如抗体和/或抗原)的待测样本的密度之总和。
在反应室104内，试剂和样本的混合物被称为反应介质112(参见图2和示例6)。
在一个实施例中，低密度不混溶化合物102包裹反应介质112(例如，所述试剂和/或所述样本)。
“密度低于反应介质的密度”指本文公开的装置100、方法或用途中的低密度不混溶化合物102的密度低于反应介质106的总密度，即所述反应介质106的所有试剂的密度(包括分离基质108的密度)，连同反应介质106内存在的、含有分析物配体的试剂的密度(如有)以及反应介质106(例如抗体和/或抗原)内存在的任何附加化合物的密度之和。
在一个实施例中，装置100、方法或用途如本文所公开，所述低密度不混溶化合物102的密度低于反应室104的密度，并且低于反应介质106的密度。
在特定实施例中，“不混溶”在本文中指在水性或极性溶剂(例如，水)中不混溶，特别是完全或基本上不溶于所述溶剂。在一些实施例中，本文公开的装置、方法或用途中的低密度不混溶化合物102具有疏水性。在特定实施例中，本文公开的低密度不混溶化合物102的密度小于1，更特别地，小于0.9、0.8或0.7。特别地，该密度包含在0.7和0.9之间，更特别地，包含在0.76和0.88之间。
物质的密度指所述物质的体积质量与水的体积质量之比，所述质量在相同的压力和温度条件下测量。本领域技术人员对这个参数非常熟悉。
在一个实施例中，所公开的装置、方法或用途中的所述低密度不混溶化合物102的密度小于1。
在一个实施例中，本文公开的低密度不混溶化合物102不是空气，因而，所公开装置、方法或用途中的低密度不混溶化合物102不是空气。
又特别地，本文公开的低密度不混溶化合物102可以是油或烷烃基化合物。其可选自以下物质：合成油、有机油、矿物油、石蜡油、石蜡如液体石蜡、非极性溶剂、脂肪酸例如硬脂酸、烷烃混合物和纯烷烃如癸烷、十一烷、十二烷、十三烷、十四烷、十五烷、十六烷、十七烷、十八烷、十九烷、二十烷或二十一烷。
在特定实施例中，本文公开的低密度不混溶化合物102为组合物(或低密度不混溶组合物)形式，例如溶液。所述组合物成可包括一种或多种油或烷烃基化合物或其混合物。例如，所述组合物可包括如下物质中一种或多种化合物：合成油、有机油、矿物油、石蜡油、石蜡如液体石蜡、非极性溶剂、脂肪酸例如硬脂酸、烷烃混合物和纯烷烃如癸烷、十一烷、十二烷、十三烷、十四烷、十五烷、十六烷、十七烷、十八烷、十九烷、二十烷或二十一烷。
在特定实施例中，所述低密度不混溶组合物还包括选自金属离子、磷酸盐和增粘剂(例如聚乙二醇；PEG)的一种或多种组分。
在特定实施例中，低密度不混溶化合物102为组合物形式，包括或由凝胶态烃组成。
“有机油”指动物或植物油如例如花生油、菜籽油或蓖麻油。
“合成油”指由任何人造(合成)化学化合物组成的油。合成油的例子可以是硅油。
矿物油可以定义为烃类混合物，本质上是在自然界中从石油中提取的石蜡烃和环烷烃，例如C15和C40之间的烷烃混合物。矿物油的例子可以是环烷油或石蜡油。
非极性溶剂油的例子可以是环癸烷。
烷烃为饱和烃，仅由通过单键连接的碳原子和氢原子(CnH2n+2)组成。烷烃是非极性分子，不形成氢键，因此不溶于极性溶剂，例如水。
本文所公开烷烃的示例在下面表1中进一步描述。
表1
在一个实施例中，所公开的装置、方法或用途中的所述低密度不混溶化合物102选自如下物质，或为包括如下物质中一种或多种的组合物：合成油、芳香油、有机油、环烷油、矿物油、石蜡油、石蜡如液体石蜡、非极性溶剂、烷烃混合物和纯烷烃如癸烷、十一烷、十二烷、十三烷、十四烷、十五烷、十六烷、十七烷、十八烷、十九烷、二十烷或二十一烷)。
又特别地，低密度不混溶化合物102在室温下可以为固体或液体。本领域技术人员能够确定“室温”所涵盖的范围。在特定实施例中，它指的是18和25℃之间包含的温度。
在一个实施例中，所公开的装置、方法或用途中的低密度不混溶化合物102在室温(例如18和25℃之间)下为液体。
例如，它可以由烷烃的混合物制成，其中烷烃在C15和C40之间(C指烷烃中的碳原子数)，或由C15到C17的纯烷烃制成。
例如，它也可以由纯烷烃制成，其中烷烃在C15和C40、C15到C20、C16到C20、C17到C20或C18到C19之间。
例如，它也可以由烷烃的混合物制成，其中烷烃在C15到C20、C16到C20、C17到C20或C18到C19之间。
例如，它也可以由C15和C40之间的密度在0.82和0.88之间的烷烃混合物制成，例如，C15到C20、C16到C20、C17到C20或C18到C19之间的密度在0.82和0.88之间的烷烃混合物，。
在一个实施例中，所公开的装置、方法或用途中的低密度不混溶化合物102在室温(例如18和25℃之间)下为固体。
例如，它也可以由C数高于18的纯烷烃制成。
在室温(例如18和25℃之间)下，对于固体低密度不混溶化合物102，所述固体化合物可以进一步被热液化、化学液化或物理液化。
因此，在一个实施例中，所公开装置、方法或用途中的固体化合物可以进一步被热液化、化学液化或物理液化。
例如，所述固体化合物可以被物理液化，例如，通过超声波。
例如，所述固体化合物可以被热液化，例如，通过在待进行的试验过程中，当所述装置在37℃下培养时提高温度。在这个示例中，在反应过程中，化合物暂时变成液体，但是当反应完成时，所述装置被放回室温当中时，化合物又变成了固体。
十八烷(C18H38)和十九烷(C19H40)可作为示例引用。
所述固体化合物还可以被化学液化，例如，通过在试验临进行之前，加入另一化合物，使所述固体化合物的熔化温度降至室温以下，致使该固体化合物例如在室温下(特别是在18和25℃之间)液化。
烷烃的熔化温度与C数相关。通过将熔化温度不同的不同纯烷烃混合，可以将熔化温度精确设定在+/-1℃，以便获得室温下固体低密度不混溶化合物，该化合物在37℃下培养之后变成液体。
例如，将癸烷(C10H22)(熔化温度＝-30℃)加入到十八烷(熔化温度＝29℃)中，使混合物十八烷/癸烷的熔化温度降至室温以下，致使烷烃层液化。
所以，热熔化可以考虑用于例如涉及培养的应用如间接抗球蛋白试验或抗体筛检，化学融化可以考虑用于在室温下进行的应用如直接抗球蛋白试验、分组、表型分型等。
例如，其他应用和优势是对培养的控制以及对装置储存温度的控制。事实上，通过将本文公开的固体低密度不混溶化合物102的外观从固态变为液态，可以控制培养的进行并控制温度。可选地，对于必须在例如2-8℃下储存的装置，在反应已经进行之后，固体低密度不混溶化合物从固态到液态的变化表明，试剂已经达到室温。
本文公开的低密度不混溶化合物102的量足以覆盖反应介质，从而将反应介质与反应室完全分隔开。因此，该量是可根据具体装置而变化。例如，它可以在150和200μL之间。它也可以至少为3μL，优选5到50μL，特别是当装置为凝胶卡时。
如前所述，所公开的装置包括反应室102和反应介质106。在特定实施例中，“反应室104位于反应介质106上方”在本文中指反应室104位于装置100的顶部，反应介质106位于装置100的底部。
反应室104能够接收待测样本，并可包括或接收试剂，所述试剂包括分析物配体。待测样本优选为生物样本，其可使用任何适当的缓冲剂和/或稀释剂进行稀释。
例如，所述样本可包括或由生物流体，特别是血(例如全血)、血液衍生物(例如血浆或血清)或尿液、脑脊液、唾液或细胞(例如红细胞)或其混合物组成。
在特定实施例中，待测样本包括或由全血、血清、血浆和/或红细胞(也称为红血球)组成。
样本中的待检测分析物可以是任何类型的化合物、天然物质、重组体或合成物。例如，它可以是蛋白质(例如天然蛋白质，其片段或重组蛋白质)、肽(例如，合成肽)、糖蛋白、糖、脂质、细胞、细胞器、病毒或核酸。
样本中的待检测分析物可以是例如细菌、真菌、酵母菌或寄生虫。
样本中的待检测分析物可以例如选自抗原、抗体、半抗原、激素、激素受体、酶类及其片段。
在特定实施例中，待检测分析物不是核酸。
在特定实施例中，待检测分析物是或包括抗体和/或抗原。
在特定实施例中，本文所述的装置、方法和用途用于检测抗体-抗原反应。
在特定实施例中，待检测分析物(例如抗体和/或抗原)可以结合在样本中的载体上，特别是结合在细胞上，例如红细胞。
“分析物配体”(或“配体”)在本文中指能够结合在待检测分析物(例如抗原的和/或抗体)上的任何化合物。
在特定实施例中，所述分析物配体特异性地结合在待检测分析物上。
在本文中，“抗原”是指自然、重组或合成抗原。例如，所述抗原可以是蛋白质(例如天然蛋白质，其片段或重组蛋白质)、肽(例如，合成肽)、糖蛋白、糖或脂质，或其片段。
“抗体”在本文中是指单克隆抗体或多克隆抗体，或其片段。
在特定实施例中，所述抗体专门针对(即，特异性地结合在)所述样本中的待检测分析物。
在特定实施例中，所述抗体针对且特别专门针对(即，特异性地结合在)血型抗原，例如ABO血型抗原。
在特定实施例中，分析物配体或分析物配体之一是作为抗原和/或抗体使用的免疫球蛋白或模拟表位。
在特定实施例中，如本文所述，所使用的分析物配体不是核酸。
在特定实施例中，如本文所述，所使用的一种或多种分析物配体(例如抗体和/或抗原)结合在载体上(如本文所述)，特别是结合在细胞上，例如红细胞。
可能(例如)位于装置底部的反应介质106包括试剂。
所述试剂包括分离基质108。在特定实施例中，反应介质106进一步包括试剂，所述试剂含有分析物配体。
在特定实施例中，所述反应介质106还包括附加化合物，例如一种或多种抗体(特别是抗人抗体，例加，抗人球蛋白(AHG))和/或抗原。在一个实施例中，所公开的装置、方法或用途的反应介质106包括试剂，所述试剂包括分离基质108和一种或多种抗体和/或抗原。
本领域技术人员对用于检测分析物/配体反应特别是抗原/抗体反应的装置(不合本文公开的低密度不混溶化合物102)非常熟悉，这些装置可以在市面上购买到。
这种装置在专利US5460940、US5512432或EP0305337中进行了描述，其内容通过引用结合于此。
在一个实施例中，被分析物配体结合的载体被着色或标记，例如利用颜色、同位素、荧光或酶。
例如，载体可有细胞如红细胞、白细胞，或血小板或生物粒子如细胞衍生囊泡、细胞微粒、病毒样颗粒或脂质体或合成颗粒如乳胶或金色微球。
本文所述的分离基质108(因此，反应介质106)可以是具有筛分作用的任何基质，在本文公开的引力和/或离心力的作用下，样本或样本和分析物配体的混合物将(i)被保留在分离基质108之上或内部(如果形成了分析物/配体络合物)或(ii)在分离基质108之下沉积(在不存在络合物的情况下)。
分离基质108优选采用惰性基质，进一步优选采用惰性颗粒基质。“惰性”是指，基质不得与待检测分析物或分析物配体发生任何非特异性反应。
可以使用市面上可以购买到的用于液体或气相色谱分析或凝胶卡的惰性多孔颗粒。也可考虑采用多孔玻璃或硅胶。通过简单的初步实验，本领域技术人员可以确定颗粒是否可以作为本文公开的分离基质108使用。
如本文所述，分离基质108可以是浆液或悬液，或由颗粒组成的网状物，或任何固体网状物，例如纤维素。例如，装置100的分离基质108可以是丙烯酰胺聚合物，或葡聚糖或玻璃微粒(例如玻璃微球)。
作为分析物配体(例如检测抗原)使用的抗体可以针对碳水化合物、来自血细胞的蛋白(例如血型抗原)、病毒、细菌、真菌、酵母菌、寄生虫。
作为分析物配体(例如检测抗体)使用的抗原可以是体液的组分，例如血液、血清或血浆，例如血型抗原，特别是ABO血型抗原，或其片段，或来源于它的重组蛋白。
又特别地，在所述方法的一个实施例中，当样本和试剂添加到装置100中时，在反应室104内，覆盖反应介质106(例如，分离基质108)的低密度不混溶化合物102使得不需要在低密度不混溶化合物102、试剂和样本之间保持气隙。
在一个实施例中，本发明公开的装置100在反应室104和反应介质106之间没有气隙，特别是在公开的方法中使用装置100时。更特别地，装置100在低密度不混溶化合物102与反应介质106之间没有气隙，特别是在公开的方法中使用装置100时。
在一个实施例中，所公开的装置、方法或用途的装置100在反应室104和反应介质106之间没有气隙。
在特定实施例中，所公开的装置、方法或用途的装置100在低密度不混溶化合物102和反应介质106之间没有气隙。
相比于现有技术的装置，它具有独特的优势，其中所述气隙在技术上难以实现，从而提高了本文所公开装置的鲁棒性。
如前所述，用于检测样本中分析物的装置，特别是用于检测分析物/配体反应的装置是本领域技术人员所熟知的。例如，免疫分析仪，如包含微管的微板如96、392或1536孔微板；柱凝集技术装置例如凝胶卡特别是凝胶血型卡；或颗粒凝胶免疫测定仪(例如，PaGIA或ID-PaGIA)试验装置。
在一个实施例中，因此，所公开的装置是免疫分析仪，如包含微管的微板如96、392或1536孔微板；柱凝集技术装置例如凝胶卡特别是凝胶血型卡；或ID-PaGIA试验装置。
因此，在特定实施例中，本文公开的低密度不混溶化合物102的用途可以优化诊断或免疫诊断装置(包括免疫血液学分析装置)，特别是凝胶卡。
此外，在涉及抗人球蛋白的试验中，低密度不混溶化合物102可以防止出现“中和现象”。
在本文中，中和现象是指试剂与抗人球蛋白的相互作用，导致假阴性结果或不正确的结果(参见示例3)。
低密度不混溶化合物102还有利于微管内小容量(例如10到100μL)的手动/自动分配(参见示例6)。尤其是，低密度不混溶化合物102使试剂和待测样本在反应室104内的任何位置进行分配，或甚至在低密度不混溶化合物102内的任何位置，大大简化了分配操作。
此外，在室温下(例如，1825℃)，当本文公开的低密度不混溶化合物102为固体形式时，所述化合物在微管中形成了管帽。在试验开始时，通过使装置达到化合物的熔点，使化合物液化，使加入到微管100(例如红血球样本)中的样本在试验中与微管100中的凝胶接触。反应结束后(特别是在离心之后)，该化合物可以重新固化，以固定用于试验的凝胶卡(试验后，当所使用的凝胶卡必须保存且不得丢弃的情况下，这种做法十分有用)。例如，低密度不混溶化合物102可以通过位于平台处的加热区完成熔化，以进行离心。
可选地，该固体化合物可以在不升高温度的情况下液化，例如采用两种不混溶密度弱的化合物：第一种化合物在室温下为固体，具有熔点(例如30-34℃左右)，并作为微管内的管塞，第二种化合物在室温下为液体，具有熔点，这样当它被倒入第一种化合物时会发生液化。
因此，在分析过程之前，本文公开的低密度不混溶化合物102通过将试剂限制在微管内(反应介质106)内来固定凝胶卡的运输，从而防止试剂从微管100退到反应室104。
最后，在分析过程之后，低密度不混溶化合物102通过将试剂或样本限制在反应室104内固定凝胶卡，防止使用者接触到污染物。
在一个实施例中，本发明公开的装置为所述凝胶卡，其特征在于所述凝胶卡的一个或多个微管100包括本文公开的由低密度不混溶化合物102组成的层，在所述微管内，该层位于反应介质106上方(即凝胶108和上清液110上方)。所述装置100可用于实现本文公开的方法。
不同类型的分析物/配体反应可以通过本文公开的装置100检测到。例如，它可以是免疫血液学分析物/配体反应，特别是免疫血液学抗原/抗体反应，尤其是使用抗人球蛋白的试验，例如直接抗球蛋白试验或间接抗球蛋白试验，或ABO正反定型等试验。本领域普通技术人员非常熟悉所有这些示例。
在一个实施例中，因此，分析物/配体反应，特别是抗原/抗体反应为免疫血液学抗原/抗体反应，尤其是使用抗人球蛋白的试验，或ABO正反定型等试验。
除了前面提到的本文公开的低密度不混溶化合物102的所有优点以外，发明人进一步表明，所述化合物提高了分析物和配体之间的反应性，特别是抗原和抗体之间的反应性。参见示例5。
综上所述，根据本发明所述的低密度不混溶化合物102可以：
防止蒸发、干胶：增加了保质期，增加了打开/穿刺后的稳定性：改进了仪器的“逐孔”管理，减少了密封限制，降低了成本，降低了铝箔坚固度，实现了针穿刺，便于手动打开，推迟了读数。；
相对于气隙增加了鲁棒性：通过删除气隙检查步骤，增加了处理量；
反应性增强：性能改进；
防止运输劣化：特别是降低打开/穿刺时的污染风险；
将试剂和样本封闭在反应介质106内；处理后将装置100固定，封装试剂(预先分配的试剂)；
根据装置：有利于分配：减少分配约束：提高分配速度，以增加处理量，控制分配容积。
在一个实施例中，它进一步提供了一种用于检测样本中分析物、特别是用于检测分析物/配体反应(尤其是抗原/抗体反应)的试剂盒，所述试剂盒包括本文公开的装置以及可选择地包括一份药品说明书。
在另一个实施例中，试剂盒提供用于检测样本中分析物，特别是用于检测分析物/配体反应，包括：
装置100，包括能够接收待测样本的反应室104，和包括试剂的反应介质106，所述试剂包括分离基质108，其中，在装置100内，反应室104位于反应介质106上方，其中，任选地，反应室104和/或反应介质106包括试剂，所述试剂含有分析物配体，如本文所述；
如本文所述的低密度不混溶化合物102，；
任选地，含有分析物配体的试剂；以及
任选地，抗体和/或抗原。
在再一个实施例中，试剂盒用于检测样本中分析物，特别是用于检测分析物/配体反应，所述试剂盒包括：
装置100，其包括反应介质106和反应室104，如本文所述，在装置100内，反应室104位于反应介质106上方，其中，任选地，反应室104和/或反应介质106包括试剂，所述试剂含有分析物配体，如本文所述；
试剂包括分离基质108；
如本文所述的低密度不混溶化合物102，；
任选地，含有分析物配体的试剂；以及
任选地，抗体和/或抗原。
本文公开的试剂盒可用于实现本文公开的方法。
所公开的装置、方法、用途和试剂盒将通过以下示例进一步说明。
示例
示例1：
生物相容性试验
本实验的目的是显示本文公开的低密度不混溶化合物102与生物组分(红细胞、抗体、缓冲剂......)在间接抗球蛋白试验中的相容性。
方法
在间接抗球蛋白试验中，在冷冻R1r细胞池(用ID稀释剂2在1％下稀释)的抗IgG卡上，对两个样本(阳性为弱单克隆抗体抗RH4，阴性为血清或血浆，无抗RBC抗体)进行试验：
-无油：Ctrl(＝对照管)；
-含5μL油(白色矿物油；CAS#8042-47-5)；
-含10μL油(白色矿物油；CAS#8042-47-5)。
结果
结果如图3所示。
在含矿物油的微管中，与阳性和阴性样本的控制微管相比，既没有观察到反应性的差异，也没有观察到溶血。由于其互不混溶的特性，矿物油与上清液(例如，含抗体的试剂)、红细胞(例如，红细胞膜的磷脂双层)和样本(它们都包含水基成份)并禾发生相互作用。因此，与对照管相比，禾观察到矿物油和试剂或样本之间有任何明显的相互作用。
示例2：
蒸发试验
本实验的目的是表明，本文公开的低密度不混溶化合物102能够防止上清液蒸发和干胶。
方法
3μl、4μl、5μL和10μL油(白色矿物油；CAS#8042-47-5)加入到抗IgG卡的微管中。这张卡在56℃下打开储存。使用以下表2描述的等级，与对照孔(无油)进行对比，目测估计上清液的损失。
表2
观察到的效应 等级
无上清液蒸发，无干胶 -
上清液部分蒸发，无干胶 +
上清液完全蒸发，无干胶 ++
上清液完全蒸发，凝胶局部干燥 +++
上清液完全蒸发，凝胶完全干燥 ++++
结果
结果如图4所示。
卡在56℃下启封存储4小时后，在对照孔中，上清液完全蒸发，凝胶完全干燥。利用本文公开的3、4、5和10μL低密度不混溶化合物，禾观察到上清液蒸发或干胶。通过防止上清液蒸发，本文公开的低密度不混溶化合物可以用于增加卡的实时稳定性，以及仪器上的机载稳定性。通过防止蒸发，本文公开的低密度不混溶化合物避免了冷凝，减少了打开/穿刺时由于上清液滴落在卡的铝箔上和/或红细胞通过冷凝液滴溶血造成的污染风险。使用本文公开的低密度不混溶化合物102可以减少凝胶卡制造过程中对装置密封的工业限制。由于L-DIC 102可以防止蒸发，用于密封装置的铝箔厚度可以减少，将铝箔附着在装置上所需的涂胶量可以减少。
示例3：
气隙的中和鲁棒性试验
本实验的目的是表明，本文公开的低密度不混溶化合物102能够增加有关间接抗球蛋白试验气隙的鲁棒性。
方法
根据该产品的使用适应症，针对R1r细胞，在间接抗球蛋白试验中，在ID卡LISS/COOMBS(抗IgG/C3d)上，对弱抗RH4进行试验：
-无油(对照管)和含5μL油(白色矿物油；CAS#8042-47-5)；以及
-有和无气隙。
结果
结果如图5所示。
在没有气隙的情况下，在37℃下孵育的过程中，弱抗RH4被抗人球蛋白消耗，引起阴性反应，而非2+反应(对照管)。根据预期，在没有气隙但含5μL油的情况下，弱抗RH4抗体的反应性仍然是2+。通过将反应介质与AHG隔离，在孵育过程中，油阻止了AHG对抗体(试剂)的消耗。另外，油增加了凝胶顶部的反应性。
在间接抗球蛋白试验中，通过使气隙具有可选择性，本文公开的低密度不混溶化合物102增加了鲁棒性。L-DIC的使用也允许反向分配(在红细胞之前，将血浆分配到反应室中)。在没有L-DIC的情况下，在红细胞之前，将血浆分配到反应室中时，AHG中和通常较大。
示例4：
凝胶/上清液的完整性试验
本实验的目的是表明，本文公开的低密度不混溶化合物102能够增加有关运输的鲁棒性。
方法
向含凝胶和上清液的凝胶卡中注入固体或液体的本文公开的低密度不混溶化合物102(分别为5μL十八烷(CAS#：593-45-3)和5μL白色矿物油(CAS#8042-47-5))，并与对照孔(不加入本文公开的低密度不混溶化合物)进行对比。
用手摇晃所产生的凝胶卡，以模拟运输条件(直至对照孔完全去结构化为止)。
之后，凝胶卡在ID离心机(关商伯瑞股份(Bio-Rad Laboratories))中进行离心处理，并在视觉上研究凝胶卡的重组能力。
结果
结果如图6所示。
在用手摇晃以模拟运输条件之后，对照管微管并没有在离心后正确重组(存在气泡，凝胶仍然在微管顶部，......)，而在摇晃之后，含有本文公开的固体或液体低密度不混溶化合物的凝胶的去结构化程度降低，因此，离心后可以正确重组凝胶，使装置重新适合使用。
因此，结果表明，根据本文公开的低密度不混溶化合物102减轻了凝胶卡的劣化，增加了关于运输的鲁棒性。
示例5：
无特异性退化的反应性增强
本实验的目的是表明，本文公开的低密度不混溶化合物102能够提高反应性，而不降低A型弱供血者和O型供血者样本在ABD性能上的特异性。
方法
“伯瑞达亚克隆病患ABD血型确认卡”ID卡根据以下协议进行了修改：
-“REF”：微管1、2和3中未加入油。
-“油”：微管4、5和6中加入5μL油(白色矿物油；CAS#8042-47-5)。
-在按表3所述继续进行操作之前，在ID离心机(Bio-Rad实验室)中，对凝胶卡进行离心处理。
表3
A B D A B D
REF REF REF +5μL油 +5μL油 +5μL油
在以下这些凝胶卡上，对12个A型弱样本和20个EDTA供血者组O样本进行了试验：
-在500μl的ID稀释剂2(5％悬液)中，稀释25μL的袋装RBC；
-在每个微管中，分配12.5μL 5％RBC悬液；
-在85g下离心10分钟(ID离心机)；以及
-判读并记录反应结果。
结果
结果如图7所示。
对弱A型样本的反应性，禾观察到含油和无油有任何明显(p＝0.181)差异。因此，这层油对抗A反应性没有任何影响。然而，据观察，加入油层的抗D孔具有较强的系统反应性。油层轻度升高，但显著(p＝0.000)增加了DVI+反应性。
此外，油对试验的特异性没有影响(O组EDTA供血者样本没有观察到非特异性反应，n＝20)。
示例6：
促进分配
目的是表明，本文公开的低密度不混溶化合物102能够促进试剂和样本吸移到反应室104内。
方法
凝胶卡的生产
ID卡LISS/COOMBS卡根据以下协议打开和修改：
-微管1和2：禾加入油(对照管)；
-微管3和4：加入5μL油(白色矿物油；CAS#8042-47-5)；以及
-微管5和6：加入50μL油。
然后，凝胶卡在ID离心机(Bio-Rad实验室)中进行离心处理(参见图8)。
阳性(弱抗RH4，给定2+反应)和阴性(来自AB组的血清或血浆，无抗RBC抗体)样本在这些凝胶卡上进行如下试验：
-50μL 1％RBC悬液；
-25μL阳性或阴性样本；
-在37℃下孵育15分钟；
-在85g下离心10分钟；以及
-判读反应。
结果
50μL 1％RBC悬液和25μL样本(“反应介质”)被夹带在微管圆柱部分上方的油(50μL)中。油使反应介质106保持球形构造，即使在移动凝胶卡和/或孵育过程中，这种构型也能保持稳定。
结果如图9所示。
根据经验，发现50μL液体低密度不混溶化合物102能够促进反应室内的低量分配。如果没有低密度不混溶化合物102，低量的反应介质112将粘住分配头。分配器的操作人员通常触摸反应介质112液滴，以便于将液滴加入反应室104中。当采用自动化分配器时，为了防止小液滴附着在分配头上，需要提高分配速度，并使支撑离子化(例如离子喷射到支撑面上)，以中和支撑面上的排斥电荷，释放液滴。在这一示例中，低密度不混溶化合物102将分配的反应介质112封闭在低密度不混溶化合物102内的球形构造中，因此，反应介质112没有附着在分配装置上。此性质有利于约10μL的低量自动化分配，无需支撑物离子化或使用低速分配。
采用本文公开的固体低密度不混溶化合物，反应介质112(试剂、缓冲剂和细胞)被封装在微管100内，以制造“预分配”凝胶卡，并且在运输和/或孵育过程中，凝胶卡仍然保持稳定。
示例7：
具有本文公开的低密度不混溶化合物的热相关模块化盖板
目的是证明本文公开的低密度不混溶化合物102能够作为“模块化盖板”(例如，覆盖凝胶卡微管的层)，它可以根据温度变化，从液态变为固态，或从固态变为液态。
方法
ID卡LISS/COOMBS根据以下协议开启并修改：
卡1：-微管1和2：不加油(对照管)
-微管3和4：5μL白色矿物油(CAS#8042-47-5)；
-微管5和6：5μL十八烷(CAS#593-45-3)。
卡2：-微管1和2：5μL十九烷(CAS#629-92-5)。
十八烷和十九烷经过预孵育和预加热，得到了液体形式。
然后，凝胶卡在ID离心机(Bio-Rad实验室)中进行离心处理。
在这些凝胶卡上，对阳性(弱抗RH4，给定2+反应)和阴性(来自AB组的血清或血浆，无抗RBC抗体)样本进行以下试验：
-50μL 1％RBC悬液；
-25μL阳性或阴性样本；
-在37℃下孵育15分钟；
-在85g下离心10分钟；以及
-判读反应。
结果
结果如图10何11所示。
按照预期，阴性对照管与5μL白色矿物油、5μL十八烷和5μL十九烷发生反应。
按照预期，弱抗RH4与5μL白色矿物油、5μL十八烷和5μL十九烷发生反应(尽管后面两种物质经过了预孵育)。
论证了实现可根据温度改变状态的“模块化盖板”的可行性。十八烷和十九烷用于微管密封。IAT在37℃下孵育过程中，这些组分变成液体，使红血球离心。
示例8：
具有本文公开的低密度不混溶化合物的化学相关模块化盖板
目的是证明本文公开的低密度不混溶化合物102在没有任何温度变化的情况下改变状态的能力，因此表明低密度不混溶化合物102能够用于室温化验，例如直接抗球蛋白试验和表型分型。
方法
十八烷(CAS#593-45-3)的熔化温度是：26-29℃，癸烷(CAS#124-18-5)的熔化温度是-30℃。
向ID卡LISS/COOMBS中注入5μL十八烷，然后向卡内加入5μL癸烷，每分钟读卡一次(参见图10)。
癸烷(Tm＝-30℃)加入到十八烷(Tm＝29℃)中之后，降低了室温下混合物十八烷/癸烷的熔化温度，因此使烷烃层发生液化。
固态十八烷层在大约4分钟内液化。
结果
DAT中的烷烃试验
在直接抗球蛋白试验中，在ID卡LISS/COOMBS上，根据产品的使用适应症，对3个质量控制样本(DAT阴性，IgG致敏和C3致敏RBC)进行试验：
-“Ref”：无烷烃的孔；
-“5μL octa”：微管内5μL十八烷；
-“5μL octa+5μL deca”：微管内5μL十八烷+5μL癸烷。
对癸烷分配和样本分配之间的不同室温孵育持续时间进行试验：
-5分钟；
-10分钟。
结果如图13所示。
经过5和10分钟的室温下孵育，结果显示，5μL十八烷+5μL癸烷相当于参考管。
反定型中的烷烃试验
根据产品的使用适应症，在反定型中，采用A1、B和O型红细胞，在ID卡氯化钠、酶和冷凝集素上，对2个EDTA供血者的样本(AB组和O组)进行试验：
-“Ref”：无烷烃的孔；
-“5μL octa”：微管内5μL十八烷；
-“5μL octa+5μL deca”：微管内5μL十八烷+5μL癸烷；
反定型法所必需的10分钟室温孵育用于使十八烷层熔化。
结果如图14所示。
结果显示，5μL十八烷+5μL癸烷相当于参考管。
因此，癸烷(Tm＝-30℃)加入到十八烷(Tm＝29℃)中之后，降低了低于室温的混合物十八烷/癸烷的熔化温度，因此使烷烃层发生液化。
示例9：
本文公开的低密度不混溶化合物对ID-HbS(S血红蛋白)卡的影响
目的是评估本文公开的低密度不混溶化合物102对ID-HbS卡的影响(商品化试验)。
材料
试剂(参见下面表4)
表4
试剂名称 批次
白色矿物油 CAS#8042-47-5
ID卡“ID-HbS”镰状细胞 试验50610.10.01
ID-HbS冻干还原剂 04170.57.11
Dia cell I“镰状细胞”巴西 16113HBS8
Dia cell II“镰状细胞”巴西 16123HBS8
ID稀释剂2 05761.50.20
血液样本(参见下面表5)
表5
编号 条形码 编号 条形码
1 206378502 6 206381101
2 206379303 7 3014161602
3 206379402 8 206376202
4 3014086502 9 206380502
5 206375003 10 3014162401
仪器(参见下面表6)
表6
仪器 序列号
ID-Reader Saxo Bio-Rad 3042号
徕卡显微镜 Bio-Rad 4223号
方法
卡的制备：
通过加入5μL矿物油(Sigma M8410)，准备ID卡“ID-HbS”镰状细胞试验：使用艾本德手动连续分液器(Multipette Eppendorf)进行油的分配，之后，30分钟内使用凝胶卡，试验前不进行离心。
凝胶卡试验(ID卡“ID-HbS”镰状细胞试验)：
10个EDTA患者和2个镰状细胞阳性样本在以下凝胶卡上进行试验：
-ID卡“ID-HbS”镰状细胞试验无油(“参考管”)
-ID卡“ID-HbS”镰状细胞试验含5μL油(“油”)
-向冻干还原剂中加入10mL去离子水，制备工作溶液，然后轻轻搅拌，直到粉末溶解(制备后2小时内使用工作溶液)。
-对于每个样本：将200μL工作溶液移转到玻璃管中，立即加入10μL袋装RBC，并轻轻混合：颜色由红色变为“深红色”。；
-凝胶管在室温下孵育2-10分钟
-使细胞轻轻重新悬浮，并将20μL溶液移转到微管中
-在85g(ID离心机)下离心10分钟
-判读并记录反应结果(Saxo离心读卡仪)
结果
结果如图15所示。
加入油的凝胶卡得到了阳性结果，看上去略好于没有加入油的凝胶卡。含油时，反应记为4-，无油时，反应记为3+，两种情况都采用双种群。
两张卡的阴性结果相似(含油或无油)
油并不是导致假阳性结果的原因。
示例10：
本文公开的低密度不混溶化合物在PaGIA试验中的影响
目的是评价在PaGIA中加入本文公开的低密度不混溶化合物102是否对ID-PaGIAIgA缺乏、抗IgA抗体和梅毒试验的性能(敏感性和特异性)有影响。
材料：
白色矿物油：CAS#8042-47-5
抗IgA试验：
ID-PaGIA抗IgAAb试验试剂盒-参考管020601V(458601701批次)(包括阳性和阴性对照管)
阳性抗IgA样本：Berlin 054稀释1/1-1/128
阳性抗IgA样本：SRKBern 7702稀释1/1-1/16
阴性抗IgA样本：SRK 06.11.149991-9996号
IgA缺乏试验
ID-PaGIAIgA缺乏试验试剂盒参考管020701V(45940.14.01批次)(包括阳性和阴性对照管)
阳性IgA缺乏样本：编号2922-4279-TRINA-3632
阴性IgA缺乏样本：SRKBern来自18.12.2014251-256号
人IgA：Jackson 009-000-011114820批次4.7mg/mL
梅毒试验
ID-PaGIA梅毒抗体试验试剂盒参考管020401V(45640901批次)(包括阳性和阴性对照管)
阳性梅毒样本：Vitlalla 124644稀释1/1-1/2048
阴性抗IgA样本：SRK 06.11.149991-9996号
方法：
将矿物油放入凝胶卡中：
在每个微管内，分配5μL矿物油，油位高于对应卡中的凝胶。加油后60分钟内进行凝胶卡试验。
试验方法：
根据使用说明，按该方法执行：
在凝胶卡中，对10μL样本和50μL微球进行分配
室温下孵育5分钟
85g下完成10分钟离心
在Banjo读卡仪(2.18版本)和LOG-AK 01.00.12版本Saxo 2读卡仪上读取凝胶卡
试验同时在标准卡(无油)和加5μL矿物油的卡上进行。
结果
抗IgA试验
结果如图16所示。
IgA缺乏试验
结果如图17所示。
梅毒试验
结果如图18所示。
对于所有三个被测PaGIA试验(即ID-PaGIA抗IgA、ID-PaGIA IgA缺乏和ID-PaGIA梅毒)，在凝胶上清液上方加入5μL本文公开的低密度不混溶化合物102并没有改变试验的性能。强阳性反应(纯样本)略有提高，但不影响滴定量。此外，本文公开的低密度不混溶化合物102的存在并不影响特异性。

Claims (52)

1.一种用于检测样本中分析物、特别是抗原和/或抗体的装置，其中，所述装置包括：
-能够接收待测样本的反应室；以及
-包括试剂的反应介质，所述试剂包括分离基质；
在所述装置内，所述反应室位于所述反应介质上方；
所述反应室和/或所述反应介质任选地包括试剂，所述试剂包括分析物配体；以及
所述装置还包括由低密度不混溶化合物组成的层，其将所述反应室与所述反应介质分隔开。
2.一种用于检测样本中分析物、特别是抗原和/或抗体的方法，其中：
a)提供根据权利要求1所述的装置；
b)将所述待测样本和任选的包括分析物配体的试剂分配到所述装置的所述反应室内；以及
c)随后，对所述样本或所述样本和所述分析物配体的混合物在所述反应介质中进行重力沉降和/或离心沉降；
其中，至少在步骤a)和/或步骤b)中提供包括分析物配体的试剂，以及
其中，如果形成了分析物/配体络合物，所述混合物位于所述分离基质之上或内部，在不存在此络合物的情况下，所述混合物位于所述分离基质下方，整个反应在所述装置内进行。
3.根据权利要求2所述的方法，用于：
-防止所述反应介质的试剂蒸发，尤其是凝胶卡微管内的上清液的蒸发；和/或
-防止所述反应室和/或所述反应介质的试剂的中和和/或消耗；和/或
-提高阳性反应的反应性，而不改变特异性；和/或
-有利于所述试剂和所述待测样本向所述装置内分布，特别是使所述试剂(如果反应室内存在的话)和所述待测样本能够被分配到所述反应室内的任何地方；和/或
-在分析过程之前，将所述反应介质的试剂限制在所述反应介质内，特别是限制在所述反应介质的底部，并防止其在冲击或反转的情况下蔓延到所述反应室内；和/或
-在分析过程中，使所述试剂(如果反应室内存在的话)和所述待测样本从所述反应室穿过所述反应介质；和/或在分析过程之后，将所有试剂和所述待测样本限制在所述反应介质中。
4.一种由低密度不混溶化合物组成的层在用于检测样本中分析物的装置中的用途，其中，所述装置包括：
-能够接收待测样本的反应室；以及
-包括试剂的反应介质，所述试剂包括分离基质；
其中，在所述装置内，所述反应室位于所述反应介质上方，并且其中，所述反应室和/或所述反应介质任选地包括试剂，所述试剂包括分析物配体；
-用于防止所述反应介质的试剂蒸发，尤其是凝胶卡微管内上清液的蒸发；和/或
-防止所述反应室和/或所述反应介质的试剂的中和和/或消耗；和/或
-提高阳性反应的反应性，而不改变特异性；和/或
-有利于所述试剂和所述待测样本向所述装置内分布，特别是使所述试剂(如果反应室内存在的话)和所述待测样本能够被分配到反应室内的任何地方；和/或
-在分析过程之前，将所述反应介质的试剂限制在所述反应介质内，特别是限制在所述反应介质的底部，并防止其在冲击或反转的情况下蔓延到所述反应室内；和/或
-在分析过程中，使所述试剂(如果反应室内存在的话)和所述待测样本从所述反应室穿过所述反应介质；和/或
-在分析过程之后，将所有试剂和所述待测样本限制在所述反应介质中。
5.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物的密度低于所述反应室的密度，并且低于所述反应介质的密度。
6.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述反应介质包括试剂，所述试剂包括分离基质以及一种或多种抗体和/或抗原。
7.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述反应室包括试剂，所述试剂包括分析物配体，所述反应室还包括由低密度不混溶化合物组成的层，其位于所述试剂的顶部并将所述试剂或所述反应室内存在的任何试剂与空气分隔开。
8.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物将所述装置内的反应介质与反应室分隔开，并将所述反应介质与空气分隔开。
9.根据权利要求7或8所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物包裹所述试剂和/或样本。
10.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物的密度小于1和/或具有疏水性。
11.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物不是空气。
12.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物选自如下物质，或为包括如下物质中一种或多种的组合物：合成油、有机油、矿物油、石蜡油、石蜡如液体石蜡、非极性溶剂、脂肪酸例如硬脂酸、烷烃混合物和纯烷烃如癸烷、十一烷、十二烷、十三烷、十四烷、十五烷、十六烷、十七烷、十八烷、十九烷、二十烷或二十一烷。
13.根据权利要求12所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物包括矿物油。
14.根据权利要求12所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物包括十九烷、十八烷或其组合。
15.根据权利要求14所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物还包括癸烷。
16.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述低密度不混溶化合物在室温(例如在18和25℃之间)下为液体或固体。
17.根据权利要求16所述的装置、方法或用途，其中，如果所述化合物为固体，则此固体化合物被进一步热液化或化学液化。
18.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述装置在所述反应室与所述反应介质之间不包括任何气隙，特别是在所述低密度不混溶化合物与所述反应介质之间没有气隙。
19.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，所述用于检测样本中分析物的装置为免疫分析仪，如包含微管的微板如96、392或1536孔微板，柱凝集技术装置特别是凝胶血型卡，或ID-PaGIA试验装置。
20.根据前述权利要求中任一项所述的装置、方法或用途，其中，在所述装置中检测到的分析物/配体反应为免疫血液学分析物/配体反应，特别是使用抗人体球蛋白的试验。
21.一种用于检测样本中分析物的装置，所述装置包括：
反应室，其被设置为接收待测样本；
分离基质；以及
由低密度不混溶化合物组成的层，其将所述反应室与所述分离基质分隔开，
其中，在所述装置内，所述反应室位于所述分离基质上方。
22.根据权利要求21所述的装置，其中，所述分离基质和/或所述反应室包括分析物配体。
23.根据权利要求22所述的装置，其中，所述分析物配体为抗体、抗体片段或抗原。
24.根据权利要求21-23中任一项所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物的密度低于所述分离基质的密度。
25.根据权利要求21-24中任一项所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物的密度小于1，和/或具有疏水性。
26.根据权利要求21-25中任一项所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物选自如下物质，或为包括如下物质中一种或多种化合物的组合物：合成油、有机油、矿物油、石蜡油、石蜡如液体石蜡、非极性溶剂、脂肪酸例如硬脂酸、烷烃混合物和纯烷烃如癸烷、十一烷、十二烷、十三烷、十四烷、十五烷、十六烷、十七烷、十八烷、十九烷、二十烷或二十一烷。
27.根据权利要求21-25中任一项所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物包括矿物油。
28.根据权利要求21-25中任一项所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物包括十九烷、十八烷或其组合。
29.根据权利要求28所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物还包括癸烷。
30.根据权利要求21-29中任一项所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物在室温下为液体或固体。
31.根据权利要求30所述的装置，其中，如果所述低密度不混溶化合物为固体，则此固体化合物被进一步热液化或化学液化。
32.根据权利要求21-31中任一项所述的装置，其中，所述装置在所述分离基质与所述低密度不混溶化合物之间不包括气隙。
33.根据权利要求21-31中任一项所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物将所述装置内的分离基质与反应室分隔开。
34.根据权利要求21-31中任一项所述的装置，其中，所述反应室包括试剂，所述试剂包括分析物配体，所述反应室还包括由低密度不混溶化合物组成的层，其位于所述试剂的顶部并将所述试剂或所述反应室内存在的任何试剂与空气分隔开。
35.根据权利要求20-31中任一项所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物包裹试剂和/或所述样本。
36.一种用于检测样本中分析物的方法，所述方法包括：
a.提供根据权利要求21所述的装置；
b.将所述待测样本分配到所述装置的反应室内；以及
c.对所述装置进行重力沉降和/或离心沉降，
其中，至少在步骤a)和/或步骤b)中提供包括分析物配体的试剂，
其中，如果形成了分析物-配体络合物，所述混合物位于所述分离基质之上或内部，在不存在此络合物的情况下，所述混合物位于所述分离基质的下方，整个反应在所述装置内进行。
37.根据权利要求36所述的方法，其中，所述低密度不混溶化合物的密度低于所述分离基质的密度。
38.根据权利要求36或37所述的方法，其中，所述低密度不混溶化合物的密度小于1，和/或具有疏水性。
39.根据权利要求36-38中任一项所述的方法，其中，所述低密度不混溶化合物选自如下物质，或为包括如下物质中一种或多种化合物的组合物：合成油、有机油、矿物油、石蜡油、石蜡如液体石蜡、非极性溶剂、脂肪酸例如硬脂酸、烷烃混合物和纯烷烃如癸烷、十一烷、十二烷、十三烷、十四烷、十五烷、十六烷、十七烷、十八烷、十九烷、二十烷或二十一烷。
40.根据权利要求36-38中任一项所述的方法，其中，所述低密度不混溶化合物包括矿物油。
41.根据权利要求36-38中任一项所述的方法，其中，所述低密度不混溶化合物包括十九烷、十八烷或其组合。
42.根据权利要求41所述的方法，其中，所述低密度不混溶化合物还包括癸烷。
43.根据权利要求36-42中任一项所述的方法，其中，所述低密度不混溶化合物在室温下为液体或固体。
44.根据权利要求43所述的方法，其中，如果所述低密度不混溶化合物为固体，则此固体化合物被进一步热液化或化学液化。
45.根据权利要求36-44中任一项所述的装置，其中，所述装置在所述分离基质与所述低密度不混溶化合物之间不包括气隙。
46.根据权利要求36-44中任一项所述的装置，其中，所述低密度不混溶化合物将所述装置内的分离基质与反应室分隔开。
47.根据权利要求36-44中任一项所述的装置，其中，所述反应室包括试剂，所述试剂包括分析物配体，所述反应室还包括由低密度不混溶化合物组成的层，其位于所述试剂的顶部并将所述试剂或所述反应室内存在的任何试剂与空气分隔开。
48.根据权利要求36-44中任一项所述的方法，其中，所述低密度不混溶化合物包裹试剂和/或所述样本。
49.根据权利要求36或47所述的方法，其中，所述分析物配体为抗体、抗体片段或抗原。
50.一种用于检测样本中分析物的试剂盒，所述试剂盒包括：
装置，所述装置包括：
反应室，其被设置为接收待测样本；
分离基质；以及
由低密度不混溶化合物组成的层，其将所述反应室与所述分离基质分隔开，
其中，在所述装置内，所述反应室位于所述分离基质上方。
51.根据权利要求50所述的试剂盒，还包括在所述分离基质和/或所述反应室中的分析物配体。
52.根据权利要求50或51所述的试剂盒，还包括用于执行检测样本中分析物的方法的说明。
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