CN102221526A

CN102221526A - 用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂及其使用方法

Info

Publication number: CN102221526A
Application number: CN 201110054955
Authority: CN
Inventors: 叶欣
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2011-03-09
Filing date: 2011-03-09
Publication date: 2011-10-19

Abstract

本发明公开了用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂，包括：作为检测试剂生化试剂的甲苯胺蓝，作为检测试剂辅助试剂的醋酸，所述甲苯胺蓝溶液的浓度为0.2～2％，所述醋酸溶液的浓度为0.01～5％。本发明还公开了用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂的使用方法，其特征在于：首先用醋酸漱口1-2分钟，再用甲苯胺蓝与醋酸混合溶液漱口1-2分钟，最后用醋酸漱口1-2分钟，所述的甲苯胺蓝与醋酸混合溶液的配比为：1∶0.5-1。

Description

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂及其使用方法

技术领域

本发明涉及生物化学领域，具体涉及应用在临床上的用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂及其使用方法。

背景技术

口腔内膜的病变有很多种，其中，口腔癌是病变比较严重的一种重要口腔内膜病变，也是常见的恶性肿瘤之一。在中国，口腔癌占全身恶性肿瘤发病率的1.5％～5.6％，口腔癌的5年生存率仅在50％左右。而早期的口腔癌是能够治愈的，进展期则愈后很差，因此，早期诊断是提高患者生存率和生存质量的关键。目前在医学界，口腔内膜的病变机理至今仍未完全明确，尤其是从正常细胞到癌细胞的发展过程。人们也在一直致力于研究探索基因的异常改变用于高危人群筛查、早期诊断的可能性。在口腔内组织细胞还没有变成癌细胞之前，但有了病变的征兆，并且以后有可能发展成为癌细胞的可能，我们称之为口腔早期高风险病变。口腔的早期高风险病变，典型的如白斑(oral leukoplakia，OLK)，有不同程度的癌变危险性。组织学上，上皮异常增生的存在及其程度是现今估测早期高风险病变的黄金标准。但是，对于没有上皮异常增生或轻度异常增生的病变，组织学就不能提供很好的预测，因为这类病变中仅有少数才能发展成口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)。最新研究表明，丧失特异的染色体区域即杂合性缺失(loss of heterozygosity，LOH)，这其中包括已知或假定的肿瘤抑制基因(tumor suppressor genes，TSGs)，是早期高风险病变随后进一步发展的早期预兆。现在大多数LOH的研究都采用微卫星分析(microsatelliteanalysis)，因为它具有较高的敏感性，即使是保存多年的石蜡切片也能快速检测。另外，在微卫星分析中，每个反应只需5ng DNA，因此即使是小样本也能检测。

目前用于口腔内高风险前期病变检测的有两大类：第一大类为：创伤性技术，即使用切片涂片的组织病理的方法，需要从病变处选取细胞组织样品，在显微镜下观察病变情况，容易漏检，也有很多人为判断的因素，诊断效果比较差，只能用于中、后期的病变的诊断。第二大类为：非创伤性技术，主要包括脱落细胞检查法、传统的甲苯胺蓝染色法和血卟啉衍生物检测法，脱落细胞检查法，1951年Montgonony开始使用的一种方法，使用脱落的细胞来做口腔内的检测，但是该方法的假阳性非常高，后面就不太使用了。传统的甲苯胺蓝染色法，这个方法最早在1964年由Nelbel Shedel开始报道使用。主要是根据病变细胞和甲苯胺蓝的染色的深浅的相关性来检测的。包括国际上曾经使用的Oratest(奥泰口腔癌检测系统)就是使用该技术。但是后来由于其假阳性太高，没有被美国的FDA批准。该方法对口腔内癌变的诊断的准确性比较高，操作也比较简单，但是假阳性太高，不能很好的应用。上个世纪80年代，也曾经有过使用血卟啉衍生物来对于口腔内病变进行检测的方法，但是由于对于设备的要求比较高，而且影响因素多，假阴性高，后来逐渐就不再进行了。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种能够在临床上快速的筛选出口腔内膜细胞早期病变的组合试剂及其使用方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案实现：

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂，包括：作为检测试剂生化试剂的甲苯胺蓝，作为检测试剂辅助试剂的醋酸，所述甲苯胺蓝溶液的浓度为0.2～2％，所述醋酸溶液的浓度为0.01～5％。

所述的甲苯胺蓝溶液的浓度为0.5～1％，优选为1％。

所述的醋酸溶液的浓度为0.1-5％，优选为1-1.5％。

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂的使用方法，其特征在于：首先用醋酸漱口1-2分钟，再用甲苯胺蓝与醋酸混合溶液漱口1-2分钟，最后用醋酸漱口1-2分钟。

按浓度比计，所述的甲苯胺蓝与醋酸混合溶液的配比为：1∶0.5-1，优选为：1∶0.5。

本发明的所述的高风险病变是指根据分子生物学基础研究的口腔内细胞癌变的机制，口腔内膜细胞处在某些染色体缺失的特定的阶段。在这个阶段细胞组织内部会有大量的DNA的合成以及很多基因的表达(是为了给细胞的大量复制和分裂做准备)，也就是说，这个阶段是细胞处在向癌变发展的方向上变化，而甲苯胺蓝在这个阶段下，能够和这些大量表达的DNA结合在细胞组织的层面，肉眼就能看到变现出来的结果。因此本发明的所述的组合试剂较之传统的活检，切片等检验口腔内病变的方法，检测快速且准确。另外，传统的检测口腔内病变的方法一般只能检测到癌变后期，而本方法能检测到在口腔内膜细胞某些染色体缺失的阶段。

本发明采用的使用方法相比较于传统的甲苯胺蓝染色的方法，本方法的改进在于：(1)通过在使用甲苯胺蓝之前增加一个醋酸洗漱的过程，来清洁口腔内部的检测环境降低了假阳性；(2)通过在甲苯胺蓝试剂内增加醋酸的成分，使得提高了细胞组织和试剂的反应背景，降低了假阳性；(3)通过在使用甲苯胺蓝以后增加醋酸试剂的洗漱过程降低了假阳性。这样，通过试剂的改善，以及检测流程的改善，本发明将大大降低了传统的甲苯胺蓝染色法来检测口腔内病变的很高的假阳性。

具体实施方式

实施例1

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂，包括：作为检测试剂生化试剂的甲苯胺蓝，作为检测试剂辅助试剂的醋酸，所述甲苯胺蓝溶液的浓度为0.2，所述醋酸溶液的浓度为0.01％。

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂的使用方法，其特征在于：首先用醋酸漱口1分钟，再用甲苯胺蓝与醋酸混合溶液漱口2分钟，最后用醋酸漱口2分钟，按浓度比计，所述的甲苯胺蓝与醋酸混合溶液的配比为：1∶0.5，观察患者口腔内膜的颜色变化，是否有明显的染色或着色。

结果判断及统计分析：对照正常口腔内膜组织细胞和病变组织细胞的分析结果做出判定：如没有明显的染色或着色，即为正常口腔内膜组织细胞。如有明显的染色或着色，即为有病变的口腔内膜组织细胞。

实施例2

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂，其特征在于，包括：作为检测试剂生化试剂的甲苯胺蓝，作为检测试剂辅助试剂的醋酸，所述甲苯胺蓝溶液的浓度为0.5％，所述醋酸溶液的浓度为0.1％。

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂的使用方法，首先用醋酸漱口2分钟，再用甲苯胺蓝与醋酸混合溶液漱口2分钟，最后用醋酸漱口2分钟，按浓度比计，所述的甲苯胺蓝与醋酸混合溶液的配比为：1∶0.8，观察患者口腔内膜的颜色变化，是否有明显的染色或着色。

实施例3

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂，包括：作为检测试剂生化试剂的甲苯胺蓝，作为检测试剂辅助试剂的醋酸，所述甲苯胺蓝溶液的浓度为1％，所述醋酸溶液的浓度为1％。

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂的使用方法，首先用醋酸漱口1分钟，再用甲苯胺蓝与醋酸混合溶液漱口1分钟，最后用醋酸漱口1分钟。按浓度比计，所述的甲苯胺蓝与醋酸混合溶液的配比为：1∶0.5，观察患者口腔内膜的颜色变化，是否有明显的染色或着色。

实施例4

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂，包括：作为检测试剂生化试剂的甲苯胺蓝，作为检测试剂辅助试剂的醋酸，所述甲苯胺蓝溶液的浓度为0.1％，所述醋酸溶液的浓度为1.5％。

用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂的使用方法，首先用醋酸漱口2分钟，再用甲苯胺蓝与醋酸混合溶液漱口2分钟，最后用醋酸漱口2分钟。按浓度比计，所述的甲苯胺蓝与醋酸混合溶液的配比为：1∶0.5，观察患者口腔内膜的颜色变化，是否有明显的染色或着色。

Claims

1.用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂，其特征在于，包括：作为检测试剂生化试剂的甲苯胺蓝，作为检测试剂辅助试剂的醋酸，所述甲苯胺蓝溶液的浓度为0.2～2％，所述醋酸溶液的浓度为0.01～5％。

2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于：所述的甲苯胺蓝溶液的浓度为0.5～1％。

3.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于：所述的甲苯胺蓝溶液的浓度优选为1％。

4.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于：所述的醋酸溶液的浓度为0.1-5％。

5.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于：所述的醋酸溶液的浓度优选为1-1.5％。

6.用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂的使用方法，其特征在于：首先用醋酸漱口1-2分钟，再用甲苯胺蓝与醋酸混合溶液漱口1-2分钟，最后用醋酸漱口1-2分钟。

7.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于：按浓度比计，所述的甲苯胺蓝与醋酸混合溶液的配比为：1∶0.5-1。

8.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于：按浓度比计，所述的甲苯胺蓝与醋酸混合溶液的配比优选为：1∶0.5。