CN102083839A - 化合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及二氮杂螺[5.5]十一碳烷衍生物以及相关的化合物，其作为毒蕈碱性受体拮抗剂和β2-受体激动剂用于治疗肺部障碍。
Description
技术领域
本发明涉及螺环酰胺衍生物、其制备方法、含有所述螺环酰胺衍生物的药物组合物、制备所述药物组合物的方法、所述螺环酰胺衍生物在治疗中的用途和用于制备所述螺环酰胺衍生物的中间体。
背景技术
针对多种肺部障碍包括慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘的一线治疗通过使用支气管扩张药来实现。毒蕈碱性受体拮抗剂(抗胆碱能药)为通过降低迷走神经胆碱能水平(即COPD中气道收缩的主要可逆成分)来发挥其效力的支气管扩张药。β-肾上腺素受体激动剂由于其能够功能性地拮抗支气管收缩药对多种介质(包括乙酰胆碱)的应答而也是支气管扩张药。
除改善肺功能外，这些药物也改善呼吸困难(气促)、生活质量和运动耐量且减少恶化。多项临床研究已显示抗胆碱能药和β2-受体激动剂的联合给药比单独组分中的任意一种都有效(van Noord，J.A.，Aumann，J-L.，Janssens，E.，Smeets，J.J.，Verhaert，J.，Disse，B.，Mueller，A.&Cornelissen，P.J.G.，2005。“Comparison of tiotropium once daily，formoterol twice daily and both combined once daily in patients with COPD”，Eur.Respir.J.，vol 26，pp 214-222.)。对毒蕈碱性受体和β2-受体都具有活性(MABAs)的单一分子就效力和副作用分布而言可向COPD患者提供好于其它单一药物的额外益处。而且，具有双重活性的分子就使用难易性和患者依从性(patient compliance)而言也可提供好于单独疗法共给药的益处。与两种不同化合物相比，单一药物也可从制剂的角度而言是有益的，其也在与另一种疗法联用的情况下提供了用于三重作用疗法的潜力。
发明内容
本发明第一个方面提供了式I化合物或其可药用盐：
其中Ar表示β-肾上腺素受体结合基团(β-adrenoceptor binding group)；
L表示包含具有至多15个碳原子的直链或支链烃基链的连接基；
其中所述烃基链中的至多3个碳原子任选被至多4个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、-S(O)0-2R56、-NR57R58、-S(O)2NR59R60、-C(O)NR61R62、-C(O)OR63、-NR64S(O)2R65、-NR66C(O)R67、-NR68C(O)OR69、-NR70C(O)NR71R72、-OR73、C1-6烷基和C3-6环烷基，且其中C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；
其中所述烃基链中的至多5个碳原子可被独立选自以下的基团代替：O、NR45、S、S(O)、S(O)2、C(O)O、OC(O)、NR46C(O)、C(O)NR47、NR48S(O)2、S(O)2NR49、NR50C(O)NR51、NR52S(O)2NR53、OC(O)NR54和NR55C(O)O，条件是所述烃基链中的任意上述基团被至少2个碳原子隔开；和
其中所述烃基链中的至多6个碳原子可形成单环或二环脂族环的部分、单环或二环杂脂族环的部分、单环或二环芳族环的部分或单环或二环杂芳族环的部分，所述环具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，所述环包含至多10个环原子，且其中所述环任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、-S(O)0-2R56、-NR57R58、-S(O)2NR59R60、-C(O)NR61R62、-C(O)OR63、-NR64S(O)2R65、-NR66C(O)R67、-NR68C(O)OR69、-NR70C(O)NR71R72、-OR73、C1-6烷基和C3-6环烷基，且其中C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；和
所述烃基链可包含至多3个各自独立选择的上述环；
其中R56、R65和R69各自独立表示C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；和
R45、R46、R47、R48、R49、R50、R51、R52、R53、R54、R55、R57、R58、R59、R60、R61、R62、R63、R64、R66、R67、R68、R70、R71、R72和R73各自独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；或R57和R58、R59和R60、R61和R62或R71和R72中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成4至8元脂族杂环，其中所述杂环可包含至多3个独立选自N、O和S的杂原子，其中所述环可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；和
其中所述烃基链可额外包含至多3个碳-碳双键；
其中所述烃基链可额外包含至多3个碳-碳叁键；
L1和L2独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基；
L3和L4独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；
另外，L1和/或L3可与连接基L中的烃基链中的碳原子相连形成具有至多6个环原子的脂族环，其中每个环可包含至多3个独立选自N、O和S的杂原子；
R1表示苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环或5至6元杂芳基环，所述环各自具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，其中所述环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21、OR22、C1-7烷基、C3-8环烷基(其中所述C1-7烷基和C3-8环烷基各自可任选被至多6个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21和OR22)、苯环、4至8元杂脂族环和5至6元杂芳基环，所述4至8元杂脂族环和5至6元杂芳基环各自具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，所述苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环或5至6元杂芳基环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、氰基、硝基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；或
R1表示稠合脂族环、稠合杂脂族环、稠合芳族环或稠合杂芳基环，所述环具有至多10个原子且其中至多4个独立选自N、O或S的杂原子，其中所述环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；或
R1还表示C1-6烷基链，其中一个或两个碳原子可被O、S或N代替；和
其中R1可被至多3个C1-3烷基链取代，且两个上述链可相连形成C3-8环烷基，其中所述C1-3烷基和C3-8环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21和OR22；和
其中所述C1-6烷基链还任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21、OR22、苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环和5至6元杂芳基环，所述环各自具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，且其中每个环任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、S(O)0-2R5、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、OR22、C1-7烷基、C3-7环烷基(其中所述C1-7烷基和C3-7环烷基各自可任选被至多6个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21和OR22)、苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环和5至6元杂芳基环，所述环各自具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，所述苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环或5至6元杂芳基环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、S(O)0-2R5、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中C1-6烷基和C3-6环烷基各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；或
所述C1-6烷基链可被稠合脂族环、稠合杂脂族环、稠合芳族环或稠合杂芳基环取代，所述环具有至多10个原子且其中至多4个独立选自N、O或S的杂原子，其中所述环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；
R5、R14和R18独立表示C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；和
R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R15、R16、R17、R19、R20、R21和R22各自独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基或C3-6环烷基可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；或R6和R7、R8和R9、R10和R11或R20和R21中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成4至8元脂族杂环，其中所述杂环可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6环烷基和C1-6烷氧基，其中所述C1-6烷基、C1-6环烷基或C1-6烷氧基可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；
X表示O、S、S(O)o或CR25R26；
m＝0、1、2或3；
n＝1、2、3或4；条件是m+n大于或等于2；
o＝1或2；
W表示CR27R28CR29R30或CR31R32CR33R34CR35R36；
V和Z独立表示键、CR37R38或CR39R40CR41R42，条件是当X表示O、S或S(O)o时，m、V和Z使环中的所有杂原子被至少两个碳原子隔开(例如当V为键时，m不为0，且Z不为键)；
Y表示CO、CONR43、SO2或SO2NR44；
R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R37、R38、R39、R40、R41和R42各自独立表示氢、氟、C1-6烷基或C3-6环烷基；和当它们不表示氢或氟时，R25和R26与它们所相连的碳原子一起、R27和R28与它们所相连的碳原子一起、R29和R30与它们所相连的碳原子一起、R31和R32与它们所相连的碳原子一起、R33和R34与它们所相连的碳原子一起、R35和R36与它们所相连的碳原子一起、R37和R38与它们所相连的碳原子一起、R39和R40与它们所相连的碳原子一起或R41和R42与它们所相连的碳原子一起还可形成3至6元脂族环；和
R43和R44各自独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基。
“β-肾上腺素受体结合基团”是指能够与β-肾上腺素能受体结合的基团；诸如参见综述文章“β-adrenergic receptors in Comprehensive Medicinal Chemistry，1990，B.E.Main，p187(Pergamon Press)”。上述基团也参见例如WO/2005092841、US/20050215542、WO/2005070872、WO/2006023460、WO/2006051373、WO/2006087315和WO/2006032627。
β-肾上腺素受体结合基团的合适实例包括：
M1为S、C(O)、NA5、CA6A7、CH2CH2、CH＝CH、CH2O或OCH2；
M2为S、C(O)、NA5、CA6A7、CH2CH2、CH＝CH、CH2O或OCH2；
A1、A2、A3和A4独立为氢、卤素、三氟甲基、氰基、羧基、羟基、硝基、S(O)2A8、NA9S(O)2A10、C(O)NA11A12、NA13C(O)A14、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C(O)(C1-6烷基)或C(O)OC1-6烷基；
A3也可以是CH2OH、NHCHO、NHS(O)2NA15A16或NHSO2A17；
A5、A6、A7、A9、A11、A12、A13、A14、A15或A16独立为氢或C1-6烷基；
A8、A10和A17独立为C1-6烷基；
更合适地，β肾上腺素能受体结合基团Ar选自：
其中
M1为S、CH＝CH、CH2O或OCH2；
M2为S、CH＝CH、CH2O或OCH2；
A1、A2和A4独立为氢、卤素、C1-6烷基或C1-6烷氧基；
A3也可以是CH2OH、NHCHO、NHS(O)2NA15A16或NHSO2A17；
A15或A16独立选自氢、C1-6烷基或C3-6环烷基；
A17为C1-6烷基或C3-6环烷基；
C1-6烷基的实例包括C1-4烷基和C1-2烷基。
C3-6环烷基的实例包括C3-5环烷基和C3-4环烷基。
C1-6烷氧基的实例包括C1-4烷氧基和C1-2烷氧基。
更合适地，β肾上腺素能受体结合基团Ar选自：
其中A1、A2和A4都为氢，A3为CH2OH或NHCHO，M1为S、CH＝CH或OCH2，且M2为S、CH＝CH或OCH2。
更合适地，β肾上腺素能受体结合基团Ar选自：
合适地，L表示包含具有至多12个碳原子或具有至多10个碳原子或具有至多8个碳原子的直链或支链烃基链的连接基；
其中所述烃基链中的至多两个碳原子任选被至多4个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、-S(O)0-2R56、-NR57R58、-S(O)2NR59R60、-C(O)NR61R62、-C(O)OR63、-NR64S(O)2R65、-NR66C(O)R67、-NR68C(O)OR69、-NR70C(O)NR71R72、-OR73、C1-6烷基和C3-6环烷基，且其中C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；
合适地，所述烃基链中的至多两个碳原子可被独立选自以下的基团代替：O、NR45、S、S(O)、S(O)2、C(O)O、OC(O)、NR46C(O)、C(O)NR47、NR48S(O)2、S(O)2NR49、NR50C(O)NR51和NR52S(O)2NR53；或可被独立选自以下的基团代替：O、S、S(O)、S(O)2、NR46C(O)和C(O)NR47；条件是在每种情况下所述烃基链中的任意上述基团被至少2个碳原子隔开；
合适地，所述烃基链中的至多4个碳原子可形成单环或二环脂族环的部分、单环或二环杂脂族环的部分、单环或二环芳族环的部分或单环或二环杂芳族环的部分，所述环具有至多3个独立选自N、O或S的杂原子，所述环包含至多10个环原子，且其中所述环任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、-S(O)0-2R56、-NR57R58、-S(O)2NR59R60、-C(O)NR61R62、-C(O)OR63、-NR64S(O)2R65、-NR66C(O)R67、-NR68C(O)OR69、-NR70C(O)NR71R72、-OR73、C1-6烷基和C3-6环烷基，且其中C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；
合适地，所述烃基链可包含至多两个或一个各自独立选择的上述环；
合适地，R56、R65和R69各自独立表示C1-4烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-4烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-4烷氧基；和
合适地，R45、R46、R47、R48、R49、R50、R51、R52、R53、R54、R55、R57、R58、R59、R60、R61、R62、R63、R64、R66、R67、R68、R70、R71、R72和R73各自独立表示氢、C1-4烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-4烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-4烷氧基；或R57和R58、R59和R60、R61和R62或R71和R72中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成4至8元脂族杂环，其中所述杂环可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-4烷基和C3-6环烷基，其中所述C1-4烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-4烷氧基；
可作为烃基连接基的部分而存在的环系的合适实例包括：
其中所述杂环基环是未取代的或被1或2个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、C1-4烷基(任选被OR121、NR122R123或NR124C(O)R125取代)、OR126、NR127R128、C(O)NR129R130、NR131C(O)R132、CN、S(O)2R133或S(O)2NR134R135；
R133表示C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；和
R121、R122、R123、R124、R125、R126、R127、R128、R129、R130、R131、R132、R134、R135和R136各自独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；或R122和R123、R127和R128、R129和R130或R134和R135中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成4至8元脂族杂环，其中所述杂环可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素和羟基；
合适地，所述烃基链还可包含至多两个碳-碳双键或一个碳-碳双键。
合适地，所述烃基链还可包含至多两个碳-碳叁键或一个碳-碳叁键。
合适地，L1、L2、L3和L4各自独立表示氢、C1-4烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-4烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素和羟基；另外，L1和/或L3可与连接基L中的烃基链中的碳原子相连形成具有至多6个环原子的脂族环，其中所述环可包含至多两个独立选自N、O和S的杂原子。
当所述烃基链中的4个碳原子形成单环或二环脂族环的部分、单环或二环杂脂族环的部分、单环或二环芳族环的部分或单环或二环杂芳族环的部分且所述环具有至多3个独立选自N、O或S的杂原子时，在脂族环系的情况下所述环可包含至多10、9、8、7、6、5、4或3个各自独立选择的环原子；在芳族环系的情况下其可包含10、9、6或5个各自独立选择的环原子；
R1表示苯环或5至6元杂芳基环，所述环各自具有至多3个独立选自N、O或S的杂原子，或R1表示稠合脂族环、稠合杂脂族环、稠合芳族环或稠合杂芳基环，所述环具有至多10个原子且其中至多3个独立选自N、O或S的杂原子；
其中每个环可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21、OR22、C1-7烷基、C3-8环烷基(其中所述C1-7烷基和C3-8环烷基各自可任选被至多6个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21和OR22)和苯环，所述苯环任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、氰基、硝基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；
R5、R14和R18表示C1-6烷基或C3-6环烷基，所述C1-6烷基或C3-6环烷基任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基或C1-6烷氧基；
R8、R9、R10、R11、R12和R22各自独立表示氢或C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；或R8和R9或R10和R11中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成4至6元脂族杂环，其中所述杂环可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基和C1-6烷基；
X表示O、S或S(O)2。
m＝0、1、2或3；
n＝1、2或3；
W表示CR27R28CR29R30或CR31R32CR33R34CR35R36
V和Z独立表示键、CR37R38或CR39R40CR41R42。
当X表示O、S或S(O)2时，m、V和Z使环中的所有杂原子被至少两个碳原子隔开(例如当V为键时，m不为0，且Z不为键)。
Y表示CO、CONR43或SO2。
R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R37、R38、R39、R40、R41和R42各自独立表示氢、氟、C1-6烷基或C3-6环烷基。
当它们不表示氢或氟时，R27和R28与它们所相连的碳原子一起、R29和R30与它们所相连的碳原子一起、R31和R32与它们所相连的碳原子一起、R33和R34与它们所相连的碳原子一起、R35和R36与它们所相连的碳原子一起、R37和R38与它们所相连的碳原子一起、R39和R40与它们所相连的碳原子一起或R41和R42与它们所相连的碳原子一起可形成3至6元脂族环；和
R43各自独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基。
更合适地：
L表示包含具有至多8个碳原子诸如具有至多7、6、5或4个碳原子的直链或支链烃基链的连接基。上述链的实例包括具有4-7、4-6、4-5、5-7、6-7和5-6个碳原子的那些链。
L表示C4-8烷基链，所述C4-8烷基链任选被至多4(诸如至多3、2或1)个氟或甲基取代；
合适地，所述烃基链中的至多两个碳原子可被独立选自以下的基团代替：O、S、S(O)2、NR46C(O)、C(O)NR47、NR48S(O)2和S(O)2NR49，条件是在每种情况下所述烃基链中的任意上述基团被至少2个碳原子隔开；
合适地，所述烃基链中的至多4个碳原子诸如至多3个或至多2个碳原子可形成单环或二环芳族环的部分或单环或二环杂芳族环的部分，所述环具有至多3个独立选自N、O或S的杂原子，所述环包含至多10个环原子，且其中所述环任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、-S(O)0-2R56、-S(O)2NR59R60、-C(O)NR61R62、-OR73、C1-6烷基和C3-6环烷基，且其中C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；
合适地，所述烃基链可包含1个上述环；
合适地，R56表示C1-4烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-4烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-4烷氧基；和
合适地，R46、R47、R48、R49、R59、R60、R61、R62和R73各自独立表示氢、C1-4烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-4烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-4烷氧基；或R59和R60或R61和R62中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成4至6元脂族杂环，其中所述杂环可任选被至多两个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-4烷基和C3-6环烷基，其中所述C1-4烷基和C3-6环烷基可任选被1个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-4烷氧基；
L1、L2、L3和L4独立表示氢或甲基；
R1表示苯基或5至6元杂芳基环，所述5至6元杂芳基环具有至多3个独立选自N、O或S的杂原子，其中所述环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、C(O)OR12、OR22、C1-7烷基或C3-8环烷基，其中所述C1-7烷基和C3-8环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、羟基或C1-3烷氧基；或
R1表示稠合芳族环或稠合杂芳基环，所述环具有至多10个原子且其中至多3个独立选自N、O或S的杂原子，其中所述环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、C(O)OR12、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、羟基或C1-3烷氧基；R12和R22各自独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基或C3-6环烷基可任选被1个取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基或C1-3烷氧基；
更合适的环取代基包括卤素(例如氟和例如氯)。
更合适地，基团-L-如下所示：
其中环D表示苯环、噻吩环、呋喃环或噻唑环；
R表示至多3个环取代基，所述环取代基各自独立选自H、F、Cl、C1-4烷基和CF3；t＝0或1；G＝O、CR43R44或S；当G＝O或S时，v＝1或2；当G＝C时，v＝0、1或2，且其中基团-L-以任意取向与相邻原子相连。
更合适地，基团-L-选自：
-(苯-1，4-亚基)OCH2-，其中苯基任选被3、2或1个甲基取代；
-(苯-1，4-亚基)OCH2CH2-；
-CH2(苯-1，4-亚基)OCH2-，其中苯基任选被Cl或F(独立选择的)中的3、2或1个取代；
-CH2(苯-1，4-亚基)-；
-CH2(苯-1，4-亚基)CH2-；
-(CH2)7-；
-CH2(苯-1，3-亚基)-，其中所述苯环任选被C1-3烷基、F、Cl和CF3(独立选择的)中的至多3个取代；
-CH2(噻吩-2，5-亚基)CH2-；
-CH2(噻吩-2，5-亚基)-；
-CH2(噻吩-3，5-亚基)-；
-CH2(噻吩-2，4-亚基)-；
-CH2O(苯-1，3-亚基)-；和
-CH2S(苯-1，3-亚基)-。
合适的连接基还包括：
-(萘-1，5-亚基)-；
-C(CH3)2-(苯基-1，3-亚基)-；
-(苯-1，3-亚基)OCH2CH2-
-(苯-1，3-亚基)-；
-C(CH3)2-(CH2)4-；
-C(CH3)2-(CH2)6-；
-CH2(苯-1，3-亚基)OCH2-；和
-CH2S(CH2)5-；
上述连接基各自独立表示本发明独立的方面。
更合适地，基团-L-选自：
-CH2(噻吩-2，5-亚基)-；
-CH2(苯-1，3-亚基)-，其中苯基可被F单取代；
-CH2(噻吩-2，4-亚基)-；和
-CH2(噻吩-3，5-亚基)-；
更合适地，L1、L2、L3和L4＝H。
更合适地，R1选自下述实施例中提供的各个基团中的任意一种。
X表示O或S。
m＝1或2；
n＝1或2；
W表示CR27R28CR29R30或CR31R32CR33R34CR35R36。
V和Z独立表示键或CR37R38。
V和Z使环中的所有杂原子被至少两个碳原子隔开(例如当V为键时，Z为CR37R38)。
Y表示CO、CONR43或SO2；诸如CO或SO2，例如CO。
R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R37和R38各自独立表示氢、氟、C1-3烷基或C3环烷基。
当它们不表示氢或氟时，R27和R28与它们所相连的碳原子一起、R29和R30与它们所相连的碳原子一起、R31和R32与它们所相连的碳原子一起、R33和R34与它们所相连的碳原子一起、R35和R36与它们所相连的碳原子一起或R37和R38与它们所相连的碳原子一起可形成3至6元脂族环。
R43各自独立表示氢或C1-3烷基或C3环烷基。
更合适地，在包含-N-(^)m-C-V-X-W-N(Y-R1)-Z-(C)-(^)n-的二环环系所涵盖的螺环中：
(i)m和n＝2，v＝键，Z＝CH2，X＝O，且W＝CH2CH2
(ii)m和n＝2，v＝键，Z＝CH2，X＝O，且W＝CF2CH2
(iii)m和n＝1，v＝键，Z＝CH2，X＝O，且W＝CH2CH2
(iv)m和n＝2，v＝键，Z＝CH2CH2，X＝O，且W＝CH2CH2
更合适地，所述螺环选自上述(i)和(ii)。
更合适地，R1选自噻吩或噻唑或苯并呋喃，所述噻吩或噻唑或苯并呋喃各自任选被一个或两个取代基取代。一种任选的取代基合适地选自H、Cl、F和C1-3烷基。其它任选的取代基选自甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2、CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基；
本发明示例的每种化合物都表示本发明具体和独立的方面。
本发明合适的化合物包括实施例1、2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、14、15、19、22、23、25、26、27、28、29、36、37、38、40、42、44、45、47、48、52、56、57、58、66、67、70、71、75、76、82、83、84、86、87、88、91、93、99、105、109、111、115、265、266、278和280中的化合物。
本发明合适的化合物包括实施例22、23、36、40、42、44、47、48、57、66、82、83、84、86、87、99、265和266的化合物。
本发明合适的化合物包括实施例40、42、47、48、82、84、99和278的化合物。
应该理解的是，本发明某些化合物可按溶剂化形式(例如水合形式)及非溶剂化形式存在。应该理解的是，本发明涵盖所有上述溶剂化形式。某些式(I)化合物能够以立体异构形式存在。应该理解的是，本发明涵盖式(I)化合物的所有几何异构体和光学异构体及它们的混合物(包括外消旋体)。互变异构体及其混合物也形成本发明一个方面。
合适地，与β-肾上腺素受体结合基团相邻的羟基取代的碳原子的手性中心具有R-立体化学。
也应该理解的是，本发明涵盖任意季碳(更具体为存在于螺环系统中的季碳)被硅原子代替的情况，例如参见“Silicon switches of Marketed Drugs：Mini-reviews in Med.Chem.”，2006，6，1169-1177。
在本说明书上下文中，术语“杂芳族”表示这样的基团或基团的部分，其包含任选取代的具有5至14个环原子(优选为5至10个环原子)的芳族单环或多环有机残基，其中至多4个环原子为不是碳的元素(例如氮、氧或硫)。上述基团的实例包括苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、吲嗪基、异噁唑基、异喹啉基、异噻唑基、噁唑基、噁二唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四唑基、1，3，4-噻二唑基、噻唑基、噻吩基和三唑基。杂芳基可被一个或多个取代基取代。杂芳基可通过任意可用的碳原子或氮原子来与本发明化合物的其余部分相连。
术语“脂族杂环”表示这样的非芳族环，其包含至少1个选自氮、氧和硫的杂原子。本发明4-8元脂族杂环的实例包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、高哌嗪基、高哌啶基和氮杂环丁烷基。
除非另有说明，在本说明书上下文中，烷基基团和残基可以是直链或支链，且包括例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。环烷基是单环的，例如环戊基或环己基。卤素为例如氟、氯或溴。
在本说明书上下文中，当描述基团可任选取代有至多3个取代基时，所述基团可以是未取代或取代的；当取代时，所述基团通常可取代有1、2或3个取代基。通常，羟基不可与这样的碳原子相连，所述碳原子与氮原子、另一个氧原子或硫原子相邻。
本发明还提供了制备上述式(I)化合物或其可药用盐的方法，所述方法包括：
(a)当L1表示氢时，在碱(例如碳酸钾、三乙胺或二异丙基乙基胺)存在下使式(II)化合物或其合适的盐与式(III)化合物或其合适的盐(例如氢溴酸盐、乙酸盐或盐酸盐)反应，接着除去保护基(例如使用氢氟酸-吡啶络合物)，
式(II)化合物如下：
其中LG1表示离去基(例如氯、溴、碘、甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团)，且L、L2、L3、L4、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义，
式(III)化合物如下：
其中Ar如式(I)中定义，且P1为氢或保护基(例如叔丁基二甲基甲硅烷基)；或
(b)当L1表示氢时，在合适的还原剂(例如氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或在合适的钯/碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气)存在下使式(IV)化合物或其合适的盐与式(III)化合物或其合适的盐反应，
式(IV)化合物如下：
其中L、L2、L3、L4、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义；或
(c)在碱(例如当P3为氢时，碱为碳酸钾、三乙胺或二异丙基乙基胺，且当P3为3-硝基苯基磺酰基时，碱为氢化钠或二异丙基氨基锂)存在下使式(V)化合物或其合适的盐与式(VI)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如使用氢氟酸-吡啶络合物、苯硫酚或硫代乙酸)，
式(V)化合物如下：
其中L、L1、L2、L3、L4、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义，且P3表示氢或活化基(例如3-硝基苯基磺酰基)，
式(VI)化合物如下：
其中Ar如式(I)中定义，LG2表示离去基(例如氯、溴、碘、甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团)，且P1如式(III)中定义；或
在碱(例如当P3为氢时，碱为碳酸钾、三乙胺或二异丙基乙基胺，且当P3为3-硝基苯基磺酰基时，碱为氢化钠或二异丙基氨基锂)存在下使式(V)化合物或其合适的盐与式(VII)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如三氟乙酸、苯硫酚或硫代乙酸)，
式(VII)化合物如下：
其中Ar如式(I)中定义；或
在碱(例如当P3为氢时，碱为碳酸钾、三乙胺或二异丙基乙基胺，且当P3为3-硝基苯基磺酰基时，碱为氢化钠或二异丙基氨基锂)存在下使式(V)化合物或其合适的盐与式(VIII)化合物或其合适的盐反应，接着对酮进行还原(例如使用硼氢化钠或硼烷/手性催化剂络合物)，接着除去保护基(例如三氟乙酸、苯硫酚或硫代乙酸)，
式(VIII)化合物如下：
其中Ar如式(I)中定义，且LG2表示离去基(例如氯、溴、碘、甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团)；或
(d)当L3和L4各自表示氢时，在合适的还原剂(例如氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或在合适的钯/碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气)存在下使式(IX)化合物或其合适的盐与式(X)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如用盐酸、三氟乙酸、苯硫酚或硫代乙酸处理)，
式(IX)化合物如下：
其中Ar、L、L1和L2如式(I)中定义，P1如式(III)中定义，且P3表示保护基(例如叔丁基氨基甲酸酯基团或3-硝基苯基磺酰基)，
式(X)化合物如下：
其中R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义；或
(e)当L3和L4中的一个或两个表示氢时，在碱(例如碳酸钾、三乙胺或二异丙基乙基胺)存在下使式(XI)化合物或其合适的盐与式(X)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如三氟乙酸、苯硫酚或硫代乙酸)，
式(XI)化合物如下：
其中Ar、L、L1和L2如式(I)中定义，P1如式(III)中定义，P3表示保护基(例如叔丁基羰基或3-硝基苯基磺酰基)，且LG3表示离去基(例如氯、溴、碘、甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团)；或
(f)当L1和L2各自表示氢时，使式(XII)化合物或其合适的盐与合适的还原剂(例如硼烷-四氢呋喃络合物)反应，接着除去保护基(例如使用氢氟酸-吡啶络合物)，且与式(XIII)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如使用氢氟酸-吡啶络合物、盐酸或三氟乙酸)，
式(XII)化合物如下：
其中Ar、L、L3、L4、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义，P1如式(III)中定义，且P4为合适的氮保护基(例如叔丁基氧基甲酸酯基团)，
式(XIII)化合物如下：
其中R1和Y如式(I)中定义，且LG4表示羟基或离去基(例如卤素或氯)或其合适的盐。
当LG4表示羟基时，所述反应在以下条件下合适地进行：在活化剂[例如羰基二咪唑、1-丙烷膦酸环状酸酐(1-propanephosphonic acid cyclic anhydride，T3P)或O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)]存在下，在有机溶剂(例如N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷)中，任选在碱(例如三乙胺)存在下，在例如范围为0至60℃的温度；
当LG4表示卤素(例如氯)时，所述反应在以下条件下合适地进行：在碱(例如三乙胺、二异丙基乙基胺或吡啶)存在下，在有机溶剂(例如二氯甲烷或四氢呋喃)中，在例如范围为0至25℃的温度；和
任选在(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)后进行一个或多个以下步骤：
将所得化合物转化成本发明另一种化合物；和
形成所述化合物的可药用盐。
在方法(a)、(c)和(e)中，所述反应可在以下条件下合适地进行：在有机溶剂(诸如N，N-二甲基甲酰胺、乙醇、正丁醇或二甲基亚砜)中，在例如范围为50至140℃的温度。
在方法(b)和(d)中，所述反应可在以下条件下合适地进行：在有机溶剂(诸如甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸、N-甲基吡咯烷酮或N，N-二甲基甲酰胺，其含有至多10％w水和乙酸)中。
在方法(f)中，所述反应可在以下条件下合适地进行：在有机溶剂(诸如四氢呋喃)中，在例如范围为0至80℃的温度。
可选择地，式I化合物(在下述方案中如式A、B和C所示)可如下制备：
途径A
制备化合物A的可选择方法
赫克(Heck)反应
制备化合物B的可选择方法
制备化合物B的可选择方法
制备化合物C(其中LG9为Cl或Br)的方法
途径B
途径C
式(II)化合物可如下制备：在有机溶剂(例如四氢呋喃或乙醚)中在例如范围为0至60℃的温度使式(XIV)化合物或其合适的盐与式(XV)化合物反应，接着将所得羟基转化成离去基(例如氯、溴、碘、甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团)，
式(XIV)化合物如下：
其中L、L3、L4、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(II)中定义，
式(XV)化合物如下：
L2-Mt(XV)
其中L2如式(II)中定义，且Mt表示金属(诸如锂或镁或铝或硼)(例如甲基锂、甲基溴化镁、氢化锂铝或硼氢化钠)。
式(IV)化合物可如下制备：在有机溶剂(例如四氢呋喃或乙醚)中在例如范围为-10至60℃的温度使式(XIV)化合物与式(XV)化合物反应，接着所得羟基在有机溶剂(诸如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜)中在例如范围为-78至60℃的温度用合适的氧化剂(例如斯韦恩(Swern)试剂、戴斯-马丁(Dess-Martin)试剂或氯铬酸吡啶鎓)氧化。
式(V)化合物(其中L1表示氢，且L、L2、L3、L4、P3、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(V)中定义)可如下制备：
a)在有机溶剂(例如四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜)中在例如范围为25至85℃的温度使式(II)化合物与叠氮化钠反应，接着所得叠氮基化合物在有机溶剂(例如四氢呋喃和水)中使用合适的还原剂(例如三苯基膦)来还原，最后对所得胺进行保护(例如在碱(诸如吡啶)存在下用3-硝基苯基磺酰氯处理)；或
b)使式(IV)化合物与胺(例如苄基胺、α-甲基苄基胺、4-甲氧基苄基胺或2，4-甲氧基苄基胺)反应，接着所得亚胺在有机溶剂(诸如甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸、N-甲基吡咯烷酮或N，N-二甲基甲酰胺，其含有至多10％w水和乙酸)中使用合适的还原剂(例如氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠)来还原，接着所得苄基保护基在有机溶剂(例如乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、乙腈、水或它们的混合物)中在范围为25至80℃的温度使用合适的试剂(例如氢气和合适的催化剂(钯/碳或氢氧化钯)、2，3-二氯-5，6-二氰基苯并苯醌(DDQ)或硝酸铈铵(CAN))来除去，最后对所得胺进行保护(例如在碱(诸如吡啶)存在下用3-硝基苯基磺酰氯处理)；
式(V)化合物(其中L、L1、L2、L3、L4、P3、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(V)中定义)可如下制备：在胺(例如三乙胺)存在下在有机溶剂(例如叔丁醇、四氢呋喃、二氯甲烷、水或它们的混合物)中在范围为25至100℃的温度使式(XVI)化合物或其合适的盐与试剂诸如二苯基膦酰叠氮(当LG5为羟基时)反应，或在有机溶剂(例如乙醚、叔丁醇、四氢呋喃、水或它们的混合物)中在范围为25至100℃的温度使式(XVI)化合物或其合适的盐与试剂诸如叠氮化钠(当LG5为氯时)反应(Angewandte Chemie，2005，54，5188)，最后对所得胺进行保护(例如在碱(诸如吡啶)存在下用3-硝基苯基磺酰氯处理)，
式(XVI)化合物如下：
其中LG5为离去基(例如羟基或氯)，且L、L1、L2、L3、L4、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(V)中定义。
式(III)、(VI)、(VII)、(VIII)、(XIII)和(XV)化合物是文献中已知的，或可使用已知技术来制备。
式(IX)化合物可如下制备：
a)在碱(例如当P3为氢时，碱为碳酸钾、三乙胺或二异丙基乙基胺，且当P3为3-硝基苯基磺酰基时，碱为氢化钠或二异丙基氨基锂)存在下在有机溶剂(诸如N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、乙醇、正丁醇或二甲基亚砜)中在例如范围为50至140℃的温度使式(XVII)化合物或其合适的盐与式(VI)、(VII)或(VIII)化合物或其合适的盐反应，
式(XVII)化合物如下：
其中P5为氢或保护基(例如叔丁基二甲基甲硅烷基或四氢吡喃基)，且P3、L、L1和L2如式(IX)中定义。当所述反应用式(VIII)化合物进行时，需要涉及对酮进行还原的第二步(例如使用硼氢化钠或硼烷/手性催化剂络合物)。合适地选择性地除去保护基(例如氢氟酸-吡啶络合物、四丁基氟化铵、稀盐酸或Amberlyst-15树脂/甲醇)，且所得醇用合适的氧化剂(氯铬酸吡啶鎓、戴斯-马丁试剂或斯韦恩试剂)氧化成相应醛，得到式(IX)化合物；或
b)在碱(例如当P3为氢时，碱为碳酸钾、三乙胺或二异丙基乙基胺，且当P3为3-硝基苯基磺酰基时，碱为氢化钠或二异丙基氨基锂)存在下在有机溶剂(诸如N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、乙醇、正丁醇或二甲基亚砜)中在例如范围为50至140℃的温度使式(XVIII)化合物或其合适的盐与式(VI)、(VII)或(VIII)化合物或其合适的盐反应，
式(XVIII)化合物如下：
其中P6和P7表示非环状或环状羰基保护基(例如二甲氧基缩醛、二乙氧基缩醛、1，3-二氧杂环戊烷或1，3-二氧杂环己烷)，且L、L1、L2和P3如式(IX)中定义。当与式(VIII)化合物反应时，该反应接着对酮进行还原(例如使用硼氢化钠或硼烷/手性催化剂络合物)。除去保护基(例如稀盐酸或Amberlyst-15树脂/甲醇)，得到式(IX)化合物；或
c)当L1表示氢时，在合适的还原剂(例如氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或在合适的钯/碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气)存在下在有机溶剂(诸如甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸、N-甲基吡咯烷酮或N，N-二甲基甲酰胺，其含有至多10％w水和乙酸)中使式(XIX)化合物或其合适的盐与式(III)化合物或其合适的盐反应，接着合适地选择性地除去保护基(例如氢氟酸-吡啶络合物、四丁基氟化铵、稀盐酸或Amberlyst-15树脂/甲醇)，且所得醇用合适的氧化剂(氯铬酸吡啶鎓、戴斯-马丁试剂或斯韦恩试剂)氧化成相应醛，
式(XIX)化合物如下：
其中P5为氢或保护基(例如叔丁基二甲基甲硅烷基或四氢吡喃基)，且L和L2如式(IX)中定义；或
d)当L1表示氢时，在合适的还原剂(例如氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或在合适的钯/碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气)存在下在有机溶剂(诸如甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸、N-甲基吡咯烷酮或N，N-二甲基甲酰胺，其含有至多10％w水和乙酸)中使式(XX)化合物或其合适的盐与式(III)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如稀盐酸或Amberlyst-15树脂/甲醇)，
式(XX)化合物如下：
其中P6和P7表示非环状或环状羰基保护基(例如二甲氧基缩醛、二乙氧基缩醛、1，3-二氧杂环戊烷或1，3-二氧杂环己烷)，且L和L2如式(IX)中定义。
式(XI)化合物可如下制备：选择合适的反应顺序对上述式(IX)化合物或式(IX)化合物的前体进行转化，例如将醛还原成醇(例如硼氢化钠)，合适地选择性地除去保护基(例如氢氟酸-吡啶络合物、四丁基氟化铵、稀盐酸或Amberlyst-15树脂/甲醇)，且将醇转化成合适的离去基(例如氯、溴、碘、甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团)；或
式(XII)化合物可如下制备：使式(XXI)化合物或其合适的盐与式(III)化合物或其合适的盐反应，
式(XXI)化合物如下：
其中L、L3、L4、P4、m、n、V、W、X和Z如式(XII)中定义，且LG6表示羟基或离去基(例如氯)；
当LG6表示羟基时，所述反应在以下条件下合适地进行：在活化剂[例如羰基二咪唑、1-丙烷膦酸环状酸酐(T3P)或O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)]存在下，在有机溶剂(例如N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷)中，任选在碱(例如三乙胺)存在下，在例如范围为0至60℃的温度；当LG6表示氯时，所述反应在以下条件下合适地进行：在碱(例如三乙胺或二异丙基乙基胺)存在下，在有机溶剂(例如二氯甲烷或四氢呋喃)中，在例如范围为0至25℃的温度。
式(V)、(X)、(XIV)、(XVI)和(XXI)化合物可如下得到：对式(XIII)化合物[其中R1和Y如式(I)中定义，且LG4表示羟基或离去基(例如卤素或氯)]或其合适的盐与通式(XXII)化合物或其合适的盐进行常规偶联反应，
当LG4表示羟基时，所述反应在以下条件下合适地进行：在活化剂[例如羰基二咪唑、1-丙烷膦酸环状酸酐(T3P)或O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)]存在下，在有机溶剂(例如N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷)中，任选在碱(例如三乙胺)存在下，在例如范围为0至60℃的温度，或
当LG4表示卤素(例如氯)时，所述反应在以下条件下合适地进行：在碱(例如三乙胺、二异丙基乙基胺或吡啶)存在下，在有机溶剂(例如二氯甲烷或四氢呋喃)中，在例如范围为0至25℃的温度，
通式(XXII)化合物如下：
其中m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义，和
-对于式(V)化合物，P9表示：
其中L、L1、L2、L3、L4和P3如式(V)中定义；
-对于式(X)化合物，P9表示合适的氮保护基(诸如叔丁氧基羰基)，或
-对于式(XIV)化合物，P9表示：
其中L、L3和L4如式(XIV)中定义，其中P11和P12表示非环状或环状羰基保护基(例如二甲氧基缩醛、二乙氧基缩醛、1，3-二氧杂环戊烷或1，3-二氧杂环己烷)，接着进行合适的脱保护(例如稀盐酸或Amberlyst-15树脂/甲醇)；
-对于式(XVI)化合物，P9表示：
其中L、L1、L2、L3、和L4如式(XVI)中定义，其中P14表示酸保护基(例如甲基、乙基或叔丁基)，接着进行合适的脱保护(例如氢氧化锂、氢氧化钠、三氟乙酸或盐酸)；
-对于式(XXI)化合物，P9表示：
其中L、L3和L4如式(XXI)中定义，其中P14表示酸保护基(例如叔丁基)，接着进行合适的脱保护(例如三氟乙酸或盐酸)；
通式(XXII)化合物(其中V表示键，X表示O，W表示CR27R28CR29R30，Z表示CR37R38，R27、R28、R29、R30、R37和R38各自表示氢，且P9表示合适的氮保护基(诸如叔丁氧基羰基))可由式(XXIII)化合物通过在合适的溶剂(诸如四氢呋喃)中在30-70℃用合适的还原剂(诸如硼烷-THF络合物)处理来制备，
式(XXIII)化合物如下：
其中P9、m和n如式(XXII)化合物中定义，
其中所得硼络合物在60-90℃用合适的胺(诸如N1，N2-二亚甲基胺-1，2-二胺)/甲醇分解。
式(XXIII)化合物可由式(XXIV)化合物通过在合适的溶剂(诸如四氢呋喃)中在50-90℃用合适的碱(诸如叔丁醇钾)处理来制备，
式(XXIV)化合物如下：
其中LG7为合适的离去基(诸如卤素或甲苯磺酸酯基团)，且P9、m和n如式(XXIII)化合物中定义。
式(XXIV)化合物可如下制备：使式(XXV)化合物与式(XXVI)化合物反应，
式(XXV)化合物和式(XXVI)化合物如下：
其中LG8表示羟基或卤素(诸如氯)，且P9、m、n和LG7如式(XXIV)化合物中定义；
对于其中LG8表示羟基的情况，所述反应在以下条件下合适地进行：在活化剂[例如羰基二咪唑、1-丙烷膦酸环状酸酐(T3P)或O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)]存在下，在有机溶剂(例如N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷)中，任选在碱(例如三乙胺)存在下，在例如范围为0至60℃的温度；
对于其中LG8表示氯的情况，所述反应在以下条件下合适地进行：在碱(例如三乙胺或二异丙基乙基胺)存在下，在有机溶剂(例如二氯甲烷或四氢呋喃)中，在例如范围为0至25℃的温度；
式(XXV)化合物可如下制备：在合适的溶剂(诸如甲醇)中在范围为20-60℃的温度使式(XXVII)化合物与氨反应，
式(XXVII)化合物如下：
其中P9、m和n如式(XXV)化合物中定义；
式(XXVII)化合物可如下制备：在合适的碱(诸如氢化钠或叔丁醇钾)存在下在合适的溶剂(诸如二甲基亚砜)中在范围为0-20℃的温度使式(XXVIII)化合物与碘化三甲基氧化锍反应，
式(XXVIII)化合物如下：
其中P9、m和n如式(XXVII)化合物中定义；
上述方法也涉及简单的氧化和还原步骤，这些步骤在文献中公知的标准条件下进行(例如戴斯-马丁氧化、Swern氧化、氯铬酸吡啶鎓氧化或吡啶鎓三氧化硫络合物氧化)。这些步骤可在以下条件下合适地进行：在有机溶剂(诸如二氯甲烷)中，在范围为-78至50℃的温度(Annual Reports on the Progress of Chemistry，Section B：Organic Chemistry，2004，100，51-70)。
通式(XXII)化合物(其中V表示键，X表示O，W表示CR27R28CR29R30，Z表示CR37R38，R27、R28、R29、R30、R37和R38各自表示氢，且P9表示合适的氮保护基)可由式(XXIX)化合物在合适的反应条件下(诸如在强酸中)来制备，
式(XXIX)化合物如下：
通式(XXIX)化合物可如下制备：使式(XXVII)化合物与乙醇胺反应。
通式(XXII)化合物(其中V表示键，X表示O，W表示CR27R28CR29R30，Z表示CR37R38，R27、R28、R29、R30、R37和R38各自表示氢，且P9表示合适的氮保护基)可由式(XXX)化合物[LG11为合适的离去基(诸如卤素、OMs(甲磺酸酯基团)或OTs(甲苯磺酸酯基团)]来制备。
通式(XXX)化合物可由式(XXIX)化合物在合适的条件下来制备。
式(XIV)化合物可由式(XXXI)化合物(其中CH2L5为L，且R200为烷基或取代有二烷基胺基团的烷基)通过在酸性条件(诸如甲酸)下处理来制备。
式(XXXI)化合物可由式(XXXII)化合物通过用式(XXXIII)化合物处理来制备。
式(IV)或(XIV)化合物可由式(XXXII)化合物如下制备：在合适的条件下[诸如在合适的溶剂(诸如含有三氟乙酸的二氯甲烷)中使用戴斯-马丁试剂]对所述醇进行氧化。
式(XXXII)化合物可如下制备：在碱(例如碳酸钾、三乙胺或二异丙基乙基胺)存在下使式(XXXIII)化合物[其中P18为氢或合适的保护基，且LG12表示离去基(例如氯、溴、碘、甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团)]与式(X)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如三氟乙酸、苯硫酚或硫代乙酸)；
式(XXXII)化合物可如下制备：在合适的还原剂(例如氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或在合适的钯/碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气)存在下使式(XXXIV)化合物(其中P18表示氢或合适的保护基)与式(X)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如用盐酸、三氟乙酸、苯硫酚或硫代乙酸处理)；
式(XXXI)化合物可如下制备：在碱(例如碳酸钾、三乙胺或二异丙基乙基胺)存在下使式(XXXV)化合物[其中CH2L5为L，R200为烷基或取代有二烷基胺基团的烷基，且LG13表示离去基(例如氯、溴、碘、甲磺酸酯基团或对甲苯磺酸酯基团)]与式(X)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如三氟乙酸、苯硫酚或硫代乙酸)；
式(XXXI)化合物可如下制备：在合适的还原剂(例如氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或在合适的钯/碳或铂氧化物催化剂存在下的氢气)存在下使式(XXXVI)化合物(其中CH2L5为L，且R200为烷基或取代有二烷基胺基团的烷基)与式(X)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基(例如用盐酸、三氟乙酸、苯硫酚或硫代乙酸处理)；
合适的式(IV)化合物包括这样的化合物，其中m和n＝2，V＝键，Z＝CH2，X＝O，W＝CH2CH2，Y＝CO，且R1为噻唑-4-基，所述噻唑-4-基在噻唑的2位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基，或R1为噻吩-3-基，所述噻吩-3-基在噻吩的5位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基；
(XXXVII)表示R1＝噻唑-4-基和噻吩-3-基：
合适的式(X)化合物和合适的氮被保护的类似物包括这样的化合物，其中m和n＝2，V＝键，Z＝CH2，X＝O，W＝CH2CH2，Y＝CO，且R1为噻唑-4-基，所述噻唑-4-基在噻唑的2位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基，或R1为噻吩-3-基，所述噻吩-3-基在噻吩的5位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基；
R1＝如式(XXXVII)中所示的噻唑-4-基和噻吩-3-基。
合适的式(XIV)化合物包括这样的化合物，其中m和n＝2，V＝键，Z＝CH2，X＝O，W＝CH2CH2，Y＝CO，且R1为噻唑-4-基，所述噻唑-4-基在噻唑的2位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基，或R1为噻吩-3-基，所述噻吩-3-基在噻吩的5位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基；
R1＝如式(XXXVII)中所示的噻唑-4-基和噻吩-3-基。
合适的式(XXXI)化合物包括这样的化合物，其中m和n＝2，V＝键，Z＝CH2，X＝O，W＝CH2CH2，Y＝CO，且R1为噻唑-4-基，所述噻唑-4-基在噻唑的2位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基，或R1为噻吩-3-基，所述噻吩-3-基在噻吩的5位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基；
R1＝如式(XXXVII)中所示的噻唑-4-基和噻吩-3-基。
合适的式(XXXII)化合物包括这样的化合物，其中m和n＝2，V＝键，Z＝CH2，X＝O，W＝CH2CH2，Y＝CO，且R1为噻唑-4-基，所述噻唑-4-基在噻唑的2位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基，或R1为噻吩-3-基，所述噻吩-3-基在噻吩的5位任选被以下基团取代：甲基、乙基、丙基、丁基、CF3、CH2CF3、CH(CH3)2、CH(CH2CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH(CH3)2、C(CH3)3、环丙基、环丁基和环戊基；
R1＝如式(XXXVII)中所示的噻唑-4-基和噻吩-3-基。
式(VI)、(VII)、(VIII)、(XIII)、(XV)、(XVII)、(XVIII)、(XIX)、(XX)、(XXVI)和(XXVIII)化合物可商购得到，是文献中已知的，或可由本领域技术人员通过上述方法中的一种或已知的技术来容易地制备。
其它中间体化合物是新颖的，且表示本发明独立的方面。具体地，本申请描述的多种新颖中间体化合物为能够阻断M3毒蕈碱性受体的化合物。本发明具有毒蕈碱性拮抗剂活性的中间体化合物包括：
(9-(2-(4-(羟基甲基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮；
(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮；
(9-(2-(4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮；
(9-(2-(5-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮；
(9-(4-(2-羟基乙基)苯乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮；
9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮；
(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮；和
它们的可药用盐。
本领域技术人员应该理解的是，在本发明方法中，试剂中的某些官能团(诸如羟基或氨基)可能需要通过保护基来保护。因此，式(I)化合物的制备可能在合适的阶段涉及引入或除去一个或多个保护基。
官能团的保护和脱保护参见‘Protective Groups in Organic Chemistry’，edited by J.W.F.McOmie，Plenum Press(1973)和‘Protective Groups in Organic Synthesis’，3rd edition，T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience(1999)。
式(I)化合物可使用标准操作来转化成另一种式(I)化合物。
式I化合物具有作为药物的活性，特别是双重地作为肾上腺素能β受体激动剂和抗胆碱能药(包括毒蕈碱性受体(M1、M2和M3)拮抗剂特别是M3拮抗剂)的活性。可用式(I)化合物和其可药用盐治疗的疾病和病症包括：
1.呼吸道：气道阻塞性疾病，包括哮喘，包括支气管哮喘、变应性哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘、运动诱发性哮喘、药物诱发性(包括阿司匹林和NSAID诱发的)哮喘和粉尘诱发性哮喘，包括间歇性哮喘和持续性哮喘及各种严重度的哮喘，及其它原因引起的气道高反应性；慢性阻塞性肺病(COPD)；支气管炎，包括传染性支气管炎和嗜酸性支气管炎；肺气肿；支气管扩张；囊性纤维化；结节病；农民肺及相关疾病；超敏感性肺炎；肺纤维化，包括隐原性纤维化肺泡炎、特发性间质性肺炎、抗肿瘤治疗和慢性感染(包括结核病和曲霉病及其它真菌感染)并发的纤维化；肺移植的并发症；肺血管的血管炎和血栓形成疾病及肺动脉高压；镇咳活性，包括治疗与气道炎症和分泌情况相关的慢性咳嗽及医源性咳嗽；急性鼻炎和慢性鼻炎，包括药物性鼻炎及血管运动性鼻炎；常年性(perennial)和季节性变应性鼻炎，包括神经性鼻炎(花粉症)；鼻息肉病；急性病毒感染，包括普通感冒和由呼吸道合胞病毒、流行性感冒、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒引起的感染；或嗜酸性食管炎；
2.骨和关节：与骨关节炎/骨关节病相关或包括骨关节炎/骨关节病的关节炎，包括原发性和继发性关节炎，例如先天性髋关节发育不良；颈和腰脊椎炎及腰背痛和颈部疼痛；骨质疏松；类风湿性关节炎和斯蒂尔病(Still’s disease)；血清阴性脊柱关节病，包括强直性脊柱炎、牛皮癣性关节炎、反应性关节炎和未分化的脊柱关节病；脓毒性关节炎及与其它感染相关的关节病和骨疾病，例如结核病，包括波特病(Potts’disease)和蓬塞综合征(Poncet’s syndrome)；晶体诱发的急性和慢性滑膜炎，包括尿酸盐沉积病、焦磷酸钙沉积病和与钙磷灰石相关的腱、粘液囊和滑膜炎症；贝切特病(Behcet’s disease)；原发性和继发性斯耶格伦综合征(sjogren’s syndrome)；全身性硬化和局限性硬皮病；系统性红斑狼疮、混合性结缔组织病和未分化的结缔组织病；炎性肌病，包括皮肌炎和多肌炎；风湿性多肌痛；幼年型关节炎，包括分布在任何关节的特发性炎性关节炎及相关综合征和风湿热及其全身性并发症；血管炎(vasculitis)，包括巨细胞性动脉炎、高安动脉炎(Takayasu’s arteritis)、丘-施综合征(Churg-Strauss syndrome)、结节性多动脉炎、显微镜性多动脉炎和与病毒感染、超敏反应、冷球蛋白和异蛋白相关的血管炎；腰背痛；家族性地中海热、穆-韦综合征(Muckle-Wells syndrome)、家族性爱尔兰热(Familial Hibernian Fever)和菊池病(Kikuchi disease)；药物诱发性关节痛、腱炎和肌病；
3.由损伤(例如运动损伤)或疾病引起的疼痛和肌肉骨骼疾病的结缔组织再造：关节炎(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、痛风或晶体性关节病)、其它关节疾病(诸如椎间盘变性或颞下颌关节变性)、骨再造疾病(诸如骨质疏松、佩吉特病(Paget’s disease)或骨坏死)、多软骨炎、硬皮病、混合性结缔组织病、脊椎关节病或牙周病(诸如牙周炎)；
4.皮肤：牛皮癣、特应性皮炎、接触性皮炎或其它湿疹性皮肤病及迟发型超敏反应；植物性和光照性皮炎；脂溢性皮炎、疱疹样皮炎、扁平苔癣、萎缩性硬化性苔癣、坏疽性脓皮症、皮肤结节病、盘状红斑狼疮、天疱疮、类天疱疮、大疱性表皮松解、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、中毒性红斑、皮肤嗜酸粒细胞增多、斑秃、男性型脱发、斯威特综合征(Sweet’s syndrome)、韦-克综合征(Weber-Christian syndrome)或多形性红斑；蜂窝组织炎，包括传染性和非传染性蜂窝组织炎；脂膜炎；皮肤淋巴瘤、非黑素瘤皮肤癌和其它发育不良性损伤；或药物诱发的疾病，包括固定性药疹；
5.眼：睑炎；结膜炎，包括常年性变应性结膜炎或春季性变应性结膜炎；虹膜炎；前色素层炎和后色素层炎；脉络膜炎；自身免疫；影响视网膜的变性或炎性疾病；眼炎，包括交感性眼炎；结节病；或感染，包括病毒、真菌和细菌感染；
6.胃肠道：舌炎、龈炎、牙周炎；食管炎，包括返流；嗜酸性胃肠炎、肥大细胞增多、克罗恩病(Crohn’s disease)、结肠炎包括溃疡性结肠炎、直肠炎或肛门瘙痒；或腹部疾病、肠应激综合征和作用可远离肠的食物相关变态反应(例如偏头痛、鼻炎或湿疹)；
7.腹部：肝炎，包括自身免疫性、酒精性和病毒性肝炎；肝纤维化和硬化；胆囊炎；或胰腺炎，包括急性和慢性胰腺炎；
8.生殖泌尿系统：肾炎，包括间质性肾炎和肾小球性肾炎；肾病综合征；膀胱炎，包括急性和慢性(间质性)膀胱炎和杭纳溃疡(Hunner’s ulcer)；急性和慢性尿道炎、前列腺炎、附睾炎、卵巢炎和输卵管炎；女阴阴道炎；佩伦涅病(Peyronie’s disease)；或勃起机能障碍(男性和女性)；
9.同种异体移植物排斥：例如肾脏、心脏、肝脏、肺脏、骨髓、皮肤或角膜移植后或输血后出现的急性和慢性同种异体移植物排斥；或慢性移植物抗宿主病；
10.CNS：阿耳茨海默病(Alzheimer’s disease)和其它痴呆疾病包括CJD和nvCJD；淀粉样变性；多发性硬化和其它脱髓鞘综合征；脑动脉粥样硬化和血管炎；颞动脉炎；重症肌无力；急性和慢性疼痛(急性、间歇性或持续性疼痛(无论是中枢源性还是外周源性))，包括内脏痛、头痛、偏头痛、三叉神经痛、不典型面痛、关节和骨痛、由癌症和肿瘤侵入引起的疼痛或神经性疼痛综合征包括糖尿病性神经病、疱疹后神经病和HIV相关神经病；神经性肉样瘤病；或恶性、感染性或自身免疫性过程的中枢和外周神经系统并发症；
11.其它自身免疫性和变态反应性疾病，包括桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis)、格雷夫斯病(Graves’disease)、阿狄森病(Addison’s disease)、糖尿病、特发性血小板减少性紫癜、嗜酸性筋膜炎、高IgE综合征或抗磷脂综合征；
12.其它具有炎性或免疫性组成的疾病，包括获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、麻风病、塞扎里综合征(Sezary syndrome)和瘤外综合征；
13.心血管：影响冠脉和外周循环的动脉粥样硬化；心包炎；心肌炎；炎性和自身免疫性心肌病，包括心肌结节病；缺血性再灌注损伤；心内膜炎、心瓣炎和主动脉炎，包括传染性(例如梅毒性)的；血管炎；或近端和外周静脉疾病，包括静脉炎和血栓形成(包括深静脉血栓形成)及静脉曲张的并发症；
14.肿瘤：对一般癌症的治疗，包括前列腺、乳腺、肺、卵巢、胰腺、肠和结肠、胃、皮肤和脑肿瘤和影响骨髓(包括白血病)和淋巴增殖系统(诸如如何杰金(Hodgkin’s)和非何杰金淋巴瘤)的恶性肿瘤；包括对转移性疾病和肿瘤复发及瘤外综合征进行预防和治疗；和
15.胃肠道：腹部疾病、直肠炎、嗜酸性胃肠炎、肥大细胞增生、克罗恩病、溃疡性结肠炎、显微镜性结肠炎、不确定性结肠炎、肠应激病、肠应激综合征、非炎性腹泻或作用可远离肠的食物相关变态反应(例如偏头痛、鼻炎或湿疹)。
因此，本发明提供了用于治疗的如上定义的式(I)化合物或其可药用盐。
在另一个方面，本发明提供了如上定义的式(I)化合物或其可药用盐在制备用于治疗的药物中的用途。
在本说明书上下文中，术语“治疗”也包括“预防”，除非有相反的具体说明。术语“治疗的”和“治疗地”应该相应地解释。
预期预防与对以下患者的治疗特别相关，所述患者患有所述疾病或病症的先前发作，或被视为面临所述疾病或病症的增加风险。面临发展成具体疾病或病症风险的患者通常包括具有所述疾病或病症家族史的那些患者或通过遗传学测试或筛选而被确定为特别易于发展成所述疾病或病症的那些患者。
本发明还提供了治疗炎性疾病或病症(包括可逆性阻塞性气道疾病或病症)或降低炎性疾病或病症(包括可逆性阻塞性气道疾病或病症)风险的方法，所述方法包括向有此需要的患者给药治疗有效量的如上定义的式(I)化合物或其可药用盐。
具体地，本发明化合物可用于治疗成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺气肿、支气管炎、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘和鼻炎。
就上述治疗用途而言，给药的剂量当然应该随使用的化合物、给药的模式、期望的治疗和适应的疾病而变化。例如，本发明化合物的每日剂量当吸入给药时可以是每千克体重0.05微克(μg/kg)至每千克体重100微克(μg/kg)。可选择地，如果本发明化合物是口服给药的，则本发明化合物的每日剂量可以是每千克体重0.01微克(μg/kg)至每千克体重100毫克(mg/kg)。
式(I)化合物及其可药用盐可单独使用，但通常可按药物组合物的形式来给药，其中式(I)化合物/盐(活性成分)与可药用辅料、稀释剂或载体是混合的。有关选择和制备合适药物制剂的常规操作参见例如“Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Designs”，M.E.Aulton，Churchill Livingstone，1988。
基于给药模式，所述药物组合物所包含的活性成分可优选为0.05至99％w(重量百分比)，更优选为0.05至80％w，更优选为0.10至70％w，且更优选为0.10至50％w，其中所有重量百分比均基于总组合物。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含如上定义的式(I)化合物或其可药用盐及可药用辅料、稀释剂或载体。
本发明还提供了制备本发明药物组合物的方法，所述方法包括对如上定义的式(I)化合物或其可药用盐与可药用辅料、稀释剂或载体进行混合。
所述药物组合物可通过以下形式来局部给药(例如给药至皮肤或给药至肺和/或气道)：例如乳膏剂、溶液剂、悬浮液、七氟代烷烃(HFA)气雾剂和干粉制剂(例如吸入装置(称为Turbuhaler
)中的制剂)；或通过以下形式来全身给药：例如口服给药的片剂、胶囊剂、糖浆剂、粉剂或颗粒剂；或通过以下形式来肠胃外给药：溶液剂或混悬剂；或通过以下形式来直肠给药：栓剂；或经皮给药。
本发明化合物的干粉制剂和加压HFA气雾剂可通过口吸入或鼻吸入来给药。就吸入而言，期望所述化合物是精细分散的。精细分散的化合物优选具有小于10μm的质量中位直径，且可悬浮在有分散剂辅助的推进剂混合物中，所述分散剂为诸如C8-C20脂肪酸或其盐(例如油酸)、胆汁盐、磷脂、烷基糖、全氟化表面活性剂、聚乙氧基化表面活性剂或其它可药用分散剂。
本发明化合物也可通过干粉吸入器来给药。所述吸入器可以是单剂量吸入器或多剂量吸入器，且可以是由呼吸驱动的干粉吸入器。
一种可能性是对精细分散的本发明化合物与载体物质进行混合，所述载体物质为例如单糖、二糖、多糖、糖醇或其它多元醇。合适的载体为糖，例如乳糖、葡萄糖、棉子糖、松三糖、乳糖醇、麦芽醇、海藻糖、蔗糖、甘露醇和淀粉。可选择地，精细分散的化合物可通过其它物质来包衣。也可将粉末混合物分装到硬明胶胶囊中，其中每个胶囊含有所需剂量的活性化合物。
另一种可能性是将精细分散的粉末加工成球，所述球在吸入过程中破裂。可将该球化的粉末装填到多剂量吸入器(例如称为Turbuhaler
的那种吸入器)的药物贮库中，其中给药单元对所需剂量进行计量，然后所述剂量被患者吸入。带有或不带有载体物质的活性成分用该系统递送至患者。
就口服给药而言，可对本发明化合物与辅料或载体进行混合，然后压制成片剂，所述辅料或载体为例如乳糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇；淀粉，例如土豆淀粉、玉米淀粉或支链淀粉；纤维素衍生物；粘合剂，例如明胶或聚乙烯基吡咯烷酮；和/或润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸钙、聚乙二醇、蜡、石蜡等。如果需要包衣片，则如上所述制备的片芯可用浓的糖溶液包衣，所述浓的糖溶液可含有例如阿拉伯胶、明胶、滑石和二氧化钛。可选择地，片剂可用溶于易挥发有机溶剂中的合适聚合物包衣。
就制备软明胶胶囊剂而言，可对本发明化合物与例如植物油或聚乙二醇进行混合。硬明胶胶囊剂可含有所述化合物的颗粒，其中使用上述片剂赋形剂。也可将本发明化合物的液体或半固体制品装填到硬明胶胶囊中。
口服的液体制剂可呈糖浆剂形式或混悬剂形式，例如含有本发明化合物的溶液剂，其中其余物质为乙醇、水、甘油和丙二醇的混合物和糖。任选地，上述液体制剂可含有着色剂、矫味剂、糖精和/或作为增稠剂的羧甲基纤维素或本领域技术人员已知的其它赋形剂。
具体地，本发明化合物及其盐可用于治疗炎性疾病诸如(但不限于)类风湿性关节炎、骨关节炎、哮喘、变应性鼻炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、牛皮癣和炎性肠病。本发明化合物可与以下药物组合：非甾类抗炎药(以下称为NSAID)，包括非选择性环氧化酶COX-1/COX-2抑制剂(无论是局部应用还是全身应用)(诸如吡罗昔康；双氯芬酸；丙酸类化合物，诸如萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬和布洛芬；芬那酸类化合物，诸如甲芬那酸、吲哚美辛、舒林酸和阿扎丙宗(azapropazone)；吡唑酮类化合物，诸如保泰松；和水杨酸酯(盐)，诸如阿司匹林)；选择性COX-2抑制剂(诸如美洛昔康、塞来考昔、罗非考昔、伐地考昔、鲁马考昔(lumarocoxib)、帕瑞考昔和艾托考昔)；抑制环氧化酶的一氧化氮供体(CINOD)；糖皮质激素(无论是通过局部、口服、肌内或静脉内途径还是通过关节内途径来给药)；甲氨蝶呤；来氟米特；羟氯喹；d-青霉胺；金诺芬或其它肠胃外或口服金制剂；镇痛药；双醋瑞因(diacerein)；关节内治疗剂，诸如透明质酸衍生物；和营养补剂，诸如氨基葡萄糖。
本发明化合物也可与用于治疗上述病症的其它化合物联合给药。
因此，本发明还涉及联合治疗，其中本发明化合物或其可药用盐或包含本发明化合物的药物组合物或制剂与用于治疗上述一种或多种病症的其它治疗剂同时或相继给药，或与用于治疗上述一种或多种病症的其它治疗剂一起呈组合制剂的形式。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：细胞因子或细胞因子功能激动剂或拮抗剂(包括作用于细胞因子信号传导路径的药物诸如SOCS系统调节剂)，包括α-干扰素、β-干扰素和γ-干扰素；I型胰岛素样生长因子(IGF-1)；白介素(IL)，包括IL-1至IL-17和白介素拮抗剂或抑制剂(诸如阿那白滞素)；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)抑制剂，诸如抗TNF单克隆抗体(例如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)和CDP-870)和TNF受体拮抗剂(包括免疫球蛋白分子(诸如依那西普)和低分子量药物(诸如己酮可可碱(pentoxyfylline)))。
另外，本发明涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：靶向于B淋巴细胞的单克隆抗体(诸如CD20(利妥昔单抗(rituximab))、MRA-aIL16R)和靶向于T淋巴细胞的单克隆抗体(CTLA4-Ig、HuMax Il-15)。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：趋化因子受体功能调节剂，诸如CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CCR11(C-C家族)的拮抗剂；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4和CXCR5(C-X-C家族)的拮抗剂；和CX3CR1(C-X3-C家族)的拮抗剂。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：基质金属蛋白酶(MMP)即溶基质蛋白酶(stromelysin)、胶原酶和明胶酶及蛋白聚糖酶(aggrecanase)(尤其是胶原酶-1(MMP-1)、胶原酶-2(MMP-8)、胶原酶-3(MMP-13)、溶基质蛋白酶-1(MMP-3)、溶基质蛋白酶-2(MMP-10)和溶基质蛋白酶-3(MMP-11)及MMP-9和MMP-12)的抑制剂，包括药物，诸如多西环素。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：白三烯生物合成抑制剂、5-脂肪氧化酶(5-LO)抑制剂或5-脂肪氧化酶活化蛋白(FLAP)拮抗剂，诸如齐留通；ABT-761；芬留顿；替泊沙林；Abbott-79175；Abbott-85761；N-(5-取代的)-噻吩-2-烷基磺酰胺；2，6-二叔丁基苯酚腙类化合物；甲氧基四氢吡喃类化合物，诸如Zeneca ZD-2138；化合物SB-210661；吡啶基取代的2-氰基萘类化合物，诸如L-739,010；2-氰基喹啉类化合物，诸如L-746,530；或吲哚或喹啉类化合物，诸如MK-591、MK-886和BAY×1005。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：白三烯(LT)B4、LTC4、LTD4和LTE4的受体拮抗剂，其选自吩噻嗪-3-基类化合物，诸如L-651,392；脒基类化合物，诸如CGS-25019c；苯并噁胺(benzoxalamine)类化合物，诸如昂唑司特；苯甲脒(benzenecarboximidamide)类化合物，诸如BIIL 284/260；和化合物，诸如扎鲁司特、阿鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、维鲁司特(MK-679)、RG-12525、Ro-245913、伊拉司特(CGP 45715A)和BAY×7195。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：磷酸二酯酶(PDE)抑制剂，诸如甲基黄嘌呤(methylxanthanine)类化合物，包括茶碱和氨茶碱；和选择性PDE同工酶抑制剂，包括PDE4抑制剂或同工型PDE4D抑制剂或PDE5抑制剂。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：组胺1型受体拮抗剂，诸如西替利嗪、氯雷他定、地氯雷他定、非索非那定、阿伐斯汀、特非那定、阿司咪唑、氮卓斯汀、左卡巴斯汀、氯苯那敏、异丙嗪、赛克力嗪(cyclizine)或咪唑斯汀；口服、局部或肠胃外给药。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：质子泵抑制剂(诸如奥美拉唑)或胃保护性组胺2型受体拮抗剂。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：组胺4型受体拮抗剂。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：α1/α2肾上腺素受体激动剂、血管收缩药或拟交感神经药，诸如丙己君(propylhexedrine)、苯福林、苯丙醇胺、麻黄碱、伪麻黄碱、盐酸萘甲唑啉、盐酸羟甲唑啉、盐酸四氢唑啉、盐酸木甲唑啉、盐酸曲马唑啉或盐酸乙基去甲肾上腺素。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：色原酮，诸如色甘酸钠或奈多罗米钠。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：糖皮质激素，诸如氟尼缩松、曲安奈德、二丙酸倍氯美松、布地奈德、丙酸氟替卡松、环索奈德或糠酸莫米松。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：对核激素受体(诸如PPARs)进行调节的药物。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：免疫球蛋白(Ig)或Ig制品或对Ig功能进行调节的拮抗剂或抗体，诸如抗IgE(例如奥马珠单抗(omalizumab))。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：另一种全身或局部应用的抗炎药，诸如沙利度胺(thalidomide)或其衍生物、类维生素A(retinoid)、地蒽酚(dithranol)或卡泊三醇(calcipotriol)。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：氨基水杨酸酯(盐)和磺胺吡啶(诸如柳氮磺吡啶、美沙拉嗪、巴柳氮和奥沙拉嗪)的组合；免疫调节药，诸如硫代嘌呤(thiopurine)；和皮质激素，诸如布地奈德。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：抗菌药，诸如青霉素衍生物、四环素、大环内酯、β-内酰胺、氟喹诺酮、甲硝唑、吸入性氨基糖苷；抗病毒药，包括阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、西多福韦、金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、扎那米韦(zanamavir)和奥塞米韦(oseltamavir)；蛋白酶抑制剂，诸如茚地那韦、奈非那韦、利托那韦和沙奎那韦；核苷逆转录酶抑制剂，诸如去羟肌苷、拉米夫定、司他夫定(stavudine)、扎西他宾或齐多夫定；或非核苷逆转录酶抑制剂，诸如奈韦拉平(nevirapine)或依法韦仑(efavirenz)。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：心血管药，诸如钙通道阻断剂、β-肾上腺素受体阻断剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素-2受体拮抗剂；降脂药，诸如他汀类或贝特类；血细胞形态学调节剂，诸如己酮可可碱；和溶栓药或抗凝药，诸如血小板聚集抑制剂。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：CNS药，诸如抗抑郁药(诸如舍曲林)、抗帕金森病药(诸如司来吉兰、左旋多巴、罗匹尼罗、普拉克索、MAOB抑制剂(诸如司来吉兰和雷沙吉兰)、comP抑制剂(诸如托卡朋)、A-2抑制剂、多巴胺再摄取抑制剂、NMDA拮抗剂、烟碱激动剂、多巴胺激动剂或神经元一氧化氮合酶抑制剂)或抗阿尔茨海默病药(诸如多奈哌齐、利凡斯的明、他克林、COX-2抑制剂、丙戊茶碱或美曲磷酯)。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：用于治疗急性或慢性疼痛的药物，诸如在中枢或外周发挥作用的止痛药(例如阿片样物质或其衍生物)、卡马西平、苯妥英、丙戊酸钠、阿米替林、其它抗抑郁药、对乙酰氨基酚或非甾类抗炎药。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：肠胃外或局部应用的(包括吸入的)局麻药，诸如利诺卡因或其衍生物。
本发明化合物或其可药用盐也可与以下物质联用：抗骨质疏松药，包括激素药物(诸如雷洛昔芬(raloxifene))或二膦酸盐(诸如阿伦膦酸盐(alendronate))。
本发明还涉及本发明化合物或其可药用盐与以下物质的组合：(i)类胰蛋白酶(tryptase)抑制剂；(ii)血小板活化因子(PAF)拮抗剂；(iii)白介素转化酶(ICE)抑制剂；(iv)IMPDH抑制剂；(v)粘附分子抑制剂，包括VLA-4拮抗剂；(vi)组织蛋白酶；(vii)激酶抑制剂，诸如酪氨酸激酶(诸如Btk、Itk、Jak3或MAP)抑制剂(例如吉非替尼(gefitinib)或甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate))、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(诸如MAP激酶(诸如p38，JNK，蛋白激酶A、蛋白激酶B、蛋白激酶C或IKK)抑制剂)或细胞周期调节中涉及的激酶(诸如细胞周期蛋白依赖性激酶)的抑制剂；(viii)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶抑制剂；(ix)激肽B1受体或激肽B2受体拮抗剂；(x)抗痛风药，例如秋水仙碱；(xi)黄嘌呤氧化酶抑制剂，例如别嘌醇；(xii)排尿酸药，例如丙磺舒、磺吡酮或苯溴马隆；(xiii)生长激素促分泌剂；(xiv)转化生长因子(TGFβ)；(xv)血小板源性生长因子(PDGF)；(xvi)成纤维细胞生长因子，例如基本的成纤维细胞生长因子(bFGF)；(xvii)粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；(xviii)辣椒素油(capsaicin cream)；(xix)速激肽NK1受体或速激肽NK3受体拮抗剂，诸如NKP-608C、SB-233412(他奈坦(talnetant))或D-4418；(xx)弹性酶抑制剂，诸如UT-77或ZD-0892；(xxi)TNF-α转化酶抑制剂(TACE)；(xxii)诱导性一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂；(xxiii)TH2细胞上表达的化学引诱物受体同源分子(诸如CRTH2拮抗剂)；(xxiv)P38抑制剂；(xxv)对Toll样受体(TLR)功能进行调节的药物；(xxvi)对嘌呤能受体活性进行调节的药物，诸如P2X7；(xxvii)转录因子活化抑制剂，诸如NFkB、API或STATS；或(xxviii)糖皮质激素受体(GR受体)激动剂。
在另一个方面，本发明提供了式(I)化合物与一种或多种药物的组合(例如用于治疗COPD、哮喘或变应性鼻炎)，所述一种或多种药物选自：
●非甾类糖皮质激素受体(GR受体)激动剂；
●PDE4抑制剂，包括同工型PDE4D抑制剂；
●趋化因子受体功能调节剂(诸如CCR1受体拮抗剂)；
●甾类(诸如布地奈德)；和
●p38激酶功能抑制剂。
本发明化合物或其可药用盐也可与用于治疗癌症的现有治疗剂联用，例如合适的药物包括：
(i)医用肿瘤学中使用的抗增殖/抗肿瘤药或其组合，诸如烷化剂(例如顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安或亚硝基脲)；抗代谢剂(例如抗叶酸剂，诸如氟嘧啶样5-氟尿嘧啶或替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、羟基脲、吉西他滨或紫杉醇)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类抗生素，诸如阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素C、更生霉素或光辉霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花属生物碱，诸如长春新碱、长春碱、长春地辛或长春瑞滨；或紫杉烷类化合物，诸如泰素(taxol)或泰索帝(taxotere))；或拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，诸如依托泊苷、替尼泊苷、安沙可林、托泊替康或喜树碱)；
(ii)细胞生长抑制药，诸如抗雌激素药(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬或iodoxyfene)；雌激素受体下调剂(例如氟维司群)；抗雄激素药(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特或乙酸环丙孕酮)；LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林或布舍瑞林)；孕激素(例如乙酸甲地孕酮)；芳构酶(aromatase)抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)或依西美坦)；或5α-还原酶抑制剂(例如非那雄胺)；
(iii)抑制癌细胞侵入的药物(例如金属蛋白酶抑制剂(如马立马司他)或尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂受体功能抑制剂)；
(iv)生长因子功能抑制剂，例如生长因子抗体(例如抗erbb2抗体曲妥单抗或抗erbb1抗体西妥昔单抗[C225])；法尼基转移酶抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂；表皮生长因子家族抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，诸如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，AZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼(erlotinib)，OSI-774)或6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))；血小板源性生长因子家族抑制剂；或肝细胞生长因子家族抑制剂；
(v)抗血管生成药，诸如抑制血管内皮生长因子作用的抗血管生成药(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗、WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856或WO 98/13354中披露的化合物)；或通过另一种机制来发挥作用的化合物(例如利诺胺、整联蛋白αvβ3功能抑制剂或血管生长抑素)；
(vi)血管损伤剂，诸如考布他汀A4或WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434或WO 02/08213中披露的化合物；
(vii)反义治疗中使用的药物，例如指向上述靶标之一的反义治疗药物，诸如ISIS 2503、抗ras反义物；
(viii)以下基因治疗方法中使用的药物：例如置换异常基因(诸如异常的p53或异常的BRCA1或BRCA2)的方法；GDEPT(基因靶向酶前药治疗)方法，诸如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些GDEPT方法；和提高患者化学治疗或放射治疗耐受性的方法，诸如多种药物抵抗基因治疗；或
(ix)以下免疫治疗方法中使用的药物：例如提高患者肿瘤细胞免疫原性的离体和在体方法，诸如用细胞因子(诸如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)进行转染；降低T细胞无反应性的方法；使用经转染的免疫细胞(诸如经细胞因子转染的树突细胞)的方法；使用经细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法；和使用抗个体基因型抗体的方法。
可将上述式(I)化合物转化成其可药用盐，例如酸加成盐，诸如盐酸盐例如二盐酸盐)、氢溴酸盐(例如二氢溴酸盐)、三氟乙酸盐(例如二(三氟乙酸盐))、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、枸橼酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、甲磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
本发明现将通过参考以下实施例来说明，但不限于此，其中使用以下一般方法：
一般方法
在Varian Inova 400MHz或Varian Mercury-VX 300MHz仪器上记录1HNMR谱。氯仿-d的中间峰(δH 7.27ppm)、二甲基亚砜-d6的中间峰(δH2.50ppm)、乙腈-d3的中间峰(δH 1.95ppm)或甲醇-d4的中间峰(δH 3.31ppm)用作内标。柱色谱使用硅胶即Fisher Scientific硅胶60A(粒度35-70微米)、Davisil或预装填的0.040-0.63mm Biotage KP-Sil柱来进行。除非另有说明，原料是可商购得到的。所有溶剂和商购试剂为实验室级，且按原样使用。
以下方法用于LC/MS分析：
仪器为Agilent 1100；柱为Waters Symmetry C18，2.1×50mm；质谱为APCI或多模式(APCl+ESI)；流速为1mL/min；波长为220nm；溶剂A为水+0.1％TFA；溶剂B为乙腈+0.1％TFA；梯度为5-95％/B历时8min。
通过反相制备性HPLC进行的纯化如下实现：以35mL/min的流速使用乙腈/0.2％TFA水溶液梯度或甲醇/0.2％TFA水溶液梯度或乙腈/0.1％甲酸水溶液梯度或甲醇/0.1％甲酸水溶液梯度且使用SunFireTMprep C8 OBDTM5μm30×100mm柱(Waters Corporation)，或以18.5mL/min的流速使用乙腈/0.1％乙酸铵水溶液梯度或甲醇/0.1％乙酸铵水溶液梯度或乙腈/0.1％甲酸水溶液梯度或甲醇/0.1％甲酸水溶液梯度且使用Xbridge
50×19mm柱(Waters Corporation)。
用于实施例101-115和279-285的一般方法
以下方法用于LC/MS分析：
最终化合物使用MS3来分析，且中间体使用MS4来分析。
MS3：仪器为与Hewlett Packard HP1100LC系统相连的Waters Micromass ZQ四极质谱仪。样品注射通过Gilson 215自动进样器来进行。质谱仪具有以阳离子模式和阴离子模式运行的电喷雾源。额外的检测使用Sedex 55蒸发光散射检测器来实现。流速为1ml/min；波长为254nm；溶剂A为水+0.1％甲酸；溶剂B为乙腈+0.1％甲酸；梯度为5-95％B历时20min。
MS4：仪器为与Hewlett Packard 1050LC系统(具有UV二级管阵列检测器和自动进样器)相连的Finnigan AQA单四极质谱仪。质谱仪具有以阳离子模式运行的电喷雾源。额外的检测使用Sedex 65蒸发光散射检测器来实现。流速为1ml/min；波长为254nm；溶剂A为水+0.1％甲酸；溶剂B为乙腈+0.1％甲酸；梯度为5-95％B历时5min。
在3种仪器之一上记录NMR谱：
Varian Unity Inova 400光谱仪，其以400MHz运行用于1H，配备有5mm反向检测三重共振探头用于检测1H、13C和31P，及磁场由9.4特斯拉Oxford仪器超导磁体提供，且Sun Microsystems SunBlade 1000工作站作为主机。
Bruker Avance DRX 400光谱仪，其以400MHz运行用于1H，配备有5mm反向检测三重共振TXI探头用于检测1H、13C和15N，及磁场由9.4特斯拉Oxford仪器超导磁体提供，且在Windows XP下用WIN-NMR软件运行的HP工作站WX5000作为主机。
Bruker Avance DPX 300光谱仪，其以300MHz运行用于1H，配备有标准5mm双频探头用于检测1H和13C，及磁场由7.05特斯拉Bruker超导磁体提供，且在Windows 2000下用Bruker XWIN-NMR软件运行的HP工作站作为主机。
柱色谱使用硅胶即Fluka硅胶60(粒度35-70微米)、预装填的Teledyne Isco，Inc.RediSep
Rf柱或预装填的Isolute Flash Si II SPE柱来进行。所有溶剂和商购试剂为实验室级，且按原样使用。
通过反相制备性HPLC进行的纯化如下实现：以18mL/min的流速使用乙腈/0.1％TFA水溶液梯度或乙腈/0.1％甲酸水溶液梯度且使用Phenomenex Gemini
C18柱(250×21.2mm，5微米)作为固定相。
实施例中使用的缩写或术语具有以下意义：
SCX：强阳离子交换-具有磺酸吸附剂的基于硅胶的固相萃取
HPLC：高效液相色谱
DCM：二氯甲烷
DMF：N，N-二甲基甲酰胺
NMP：1-甲基吡咯烷-2-酮
THF：四氢呋喃
TFA：三氟乙酸
DMSO：二甲基亚砜
aq：含水的
h：小时
min：分钟
g：克
mL：毫升
RT：室温
MP-TsOH65：结合有大孔聚合物的离子交换树脂(由Biotage提供)
HATU：O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
NBS：N-溴琥珀酰亚胺
T3P：丙烷膦酸酸酐
TBAF：四丁基氟化铵
CDI：1，1’-基羰基二咪唑
MTBE：甲基叔丁基醚
MCPBA：间氯过氧苯甲酸
Varian结合洗脱NH2柱：强阴离子交换-具有NH2吸附剂的基于硅胶的固相萃取
1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐购自WuXiPharma Tech。
7-[(1R)-2-氨基-1-羟基-乙基]-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮乙酸盐或HCl盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)为86-94％ee(对映异构体过量)。
(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)为92-96％ee。
针对标题化合物/副标题化合物的命名软件包：
来自CambridgeSoft Corporation的Struct＝Name 9.0.7
实施例1
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)7-(2-氯-乙酰基)-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮
在配备有置顶搅拌器的烧瓶中，将乙醇(1500mL)加至7-乙酰基-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮(150g)(WO 2004/016578)和二氯碘酸苄基三甲基铵(benzyltrimethylammonium dichloroiodate)(374g)的混合物中。将混合物加热至78℃且保持1h，且冷却至室温过夜。将混合物倒入水(2L)中，过滤收集沉淀物，用水洗涤，过滤至几乎无水，且悬浮在乙酸乙酯中。将混合物加热至回流，且在搅拌下冷却至室温。过滤收集固体，用冷乙酸乙酯(200mL)洗涤，然后重新悬浮在乙醚(1L)中。收集固体，再次过滤，用乙醚(200mL)洗涤，且真空干燥，得到副标题化合物。收率为164g。m/z 244(M+H)+(APCI)。
b)7-(2-叠氮基-乙酰基)-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮
将7-(2-氯-乙酰基)-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮(实施例1，步骤a)(331g)溶解在N，N-二甲基甲酰胺(1800mL)中，且在冰浴中搅拌10分钟。历时15分钟逐份加入叠氮化钠(88.3g)。将反应混合物搅拌72小时，然后将反应混合物分成3等份，且每份分别在冰和水(2.5L)中淬灭。滤出固体，用水(1L)洗涤，且重新悬浮在乙腈(1.5L)中。蒸发溶剂，加入另一份乙腈(1L)，且再次蒸发溶剂以干燥产物。加入乙醚(1.5L)，且搅拌混合物以得到均匀悬浮液悬浮液。收集固体，且在35℃真空干燥且保持24小时，得到副标题化合物。收率为285g。m/z 251(M+H)+(APCI)。
c)7-[(1R)-2-叠氮基-1-羟基-乙基]-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮
历时25分钟将(1R，2S)-(+)-顺式-1-氨基-2-茚满醇(149g)逐份加至硼烷-四氢呋喃络合物(浓度为1M的四氢呋喃溶液，2997mL)中且保持温度为20-25℃。将混合物在20℃再搅拌30分钟，冷却至0℃，且逐份加入7-(2-叠氮基-乙酰基)-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮(实施例1，步骤b)(250g)且保持温度为0-5℃。将反应混合物在0℃再搅拌1h，然后用甲醇(350g，442mL)逐滴淬灭(小心沸腾！)。放热使温度达到7℃。蒸发反应混合物，得到褐色泡沫状物，且重新溶解在乙酸乙酯(1.2L)中。加入盐酸水溶液(87mL浓HCl/1.2L水)，且将混合物剧烈搅拌30分钟。分离出水层，且用新鲜乙酸乙酯(2×600mL)洗涤。合并的有机溶液用水(1.2L)洗涤。水层通过硅藻土来过滤，且用乙酸乙酯(600mL)萃取。合并乙酸乙酯溶液，用Na2SO4干燥，过滤，且蒸发。将所得固体悬浮在5％乙醇/二氯甲烷(2L)中，搅拌3h，过滤，且真空干燥，得到副标题化合物。收率为213g。m/z 253(M+H)+(APCI)。
d)7-[(1R)-2-氨基-1-羟基-乙基]-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮乙酸盐
将5％钯/碳87L型糊状物(22g)加至7-[(1R)-2-叠氮基-1-羟基-乙基]-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮(实施例1，步骤c)(225g)的乙醇(3L)溶液中。将反应混合物在氢气(3巴)下搅拌48h。再加入10g催化剂，且再继续氢化5天。对反应混合物进行过滤，将固体(产物+催化剂)悬浮在乙醇(2.5L)中，然后加入乙酸(150mL)，且将所有物质搅拌过夜。再次过滤混合物以除去钯/碳催化剂。将溶液蒸发至干，且与甲苯(2×1L)共沸。将固体在四氢呋喃(1L)中浆化4小时，过滤，且在40℃真空干燥，得到副标题化合物。收率为57g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ6.85(d，1H)，6.69(d，1H)，4.54(dd，1H)，2.78-2.67(m，2H)+5个可交换的质子。
e)4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将1-丙烷膦酸环状酸酐(浓度为1.57M的THF溶液，4.18mL)加至1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXi PharmaTech)(1.92g)、2-甲基噻唑-4-甲酸(0.94g)和三乙胺(5.48mL)的DMF(70mL)溶液中，且将所得混合物搅拌16h。将反应混合物倒入水(500mL)中，且用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机溶液用水(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用乙酸乙酯洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为2.30g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.95(s，1H)，3.80-3.45(m，8H)，3.18-2.96(m，2H)，2.67(s，3H)，1.77-1.62(m，2H)，1.43-1.31(m，11H)。
f)(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮盐酸盐
在0℃将三氟乙酸(10mL)加至4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例1，步骤e)(2.3g)的DCM(50mL)溶液中，且将所得混合物搅拌16h。真空蒸发溶剂。加入甲苯(50mL)，且真空蒸发混合物。将残余物溶解在甲醇(20mL)中，且加载至SCX柱(用甲醇预润湿)。柱用甲醇(250mL)洗涤，且用3M氨/甲醇溶液(150mL)洗脱。真空蒸发洗脱剂，且将残余物溶解在MeCN(100mL)中。加入HCl(浓度为1M的乙醚溶液，10mL)，且真空蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为黄色固体。收率为1.90g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ9.16(s，2H)，7.92(s，1H)，4.25(s，4H)，3.66-3.58(m，2H)，3.12-2.90(m，4H)，2.69(s，3H)，2.01-1.89(m，2H)，1.85-1.73(m，2H)。
g)[4-(2，2-二乙氧基-乙氧基)-苯基]-甲醇
将碳酸铯(39.4g)加至4-羟基甲基-苯酚(10g)和2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(12.73mL)的DMF(200mL)溶液中，且将所得混合物在90℃搅拌16h。将反应混合物倒入水(500mL)中，且用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有机溶液用水(250mL)和盐水(250mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用异己烷至乙醚梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为9.5g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29-7.25(m，2H)，6.93-6.88(m，2H)，4.83(t，J＝5.2Hz，1H)，4.61(s，2H)，4.00(d，J＝5.2Hz，2H)，3.81-3.72(m，2H)，3.68-3.58(m，2H)，1.25(t，J＝7.0Hz，6H)。1个可交换的质子没有观察。
h)2-(4-(羟基甲基)苯氧基)乙醛
将2M HCl(4mL)加至(4-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)甲醇(实施例1，步骤g)(0.9g)的丙酮(20mL)溶液中，且将所得混合物在室温搅拌16h。真空浓缩反应混合物，且所得水溶液用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并的有机溶液用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为洁净胶状物，所述胶状物直接用于下一步。收率为0.50g。
i)(9-(2-(4-(羟基甲基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
将(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮盐酸盐(实施例1，步骤f)(0.38g)加至2-(4-(羟基甲基)苯氧基)乙醛(实施例1，步骤h)(0.17g)在NMP(10mL)和乙酸(0.06mL)中的溶液中。将所得混合物搅拌30min，然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.32g)，将反应混合物温热至室温，且搅拌16h。反应混合物用甲醇(30mL)稀释，且加载至SCX柱(用甲醇预润湿)。柱用甲醇(250mL)洗涤，且用3M氨/甲醇溶液(150mL)洗脱。真空蒸发洗脱剂，且残余物通过柱色谱(用95∶5乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.32g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.86(s，1H)，7.23-7.16(m，2H)，6.85(dt，J＝8.7，1.1Hz，2H)，4.72-4.62(m，1H)，4.44-4.38(m，2H)，4.10-3.99(m，2H)，3.66(d，J＝6.7Hz，4H)，3.61-3.55(m，2H)，2.71-2.64(m，5H)，2.47-2.42(m，4H)，1.76-1.64(m，2H)，1.59-1.45(m，2H)。
j)4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯甲醛
将二氧化锰(0.65g)加至(9-(2-(4-(羟基甲基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(0.32g)(实施例1，步骤i)的DCM(20mL)溶液中，且将所得黑色悬浮液加热回流1h。冷却后，使反应混合物通过硅藻土垫。垫用DCM(2×30mL)洗涤，且真空蒸发合并的滤液和洗涤液，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.25g。m/z 430(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ9.86(s，1H)，7.96(s，1H)，7.88-7.83(m，2H)，7.13(d，J＝8.5Hz，2H)，4.26-4.11(m，2H)，3.77-3.46(m，6H)，2.78-2.65(m，5H)，2.48-2.34(m，4H)，1.76-1.36(m，4H)。
k)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将HCl(浓度为2M的乙醚溶液，0.29mL)加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸盐(实施例1，步骤d)(0.17g)的NMP(1mL)溶液中，且将混合物搅拌10min。将所得溶液加至4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯甲醛(实施例1，步骤j)(0.25g)的NMP(4mL)溶液中，且搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃，且逐份加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.19g)。将所得混合物温热至室温，且搅拌16h。将反应混合物在磷酸缓冲液(pH 7.2)(50mL)和乙酸乙酯(50mL)之间分配。分离各层，且水层用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。水相用碳酸氢钠碱化，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。真空蒸发合并的有机溶液。将残余物重新溶解在乙腈(50mL)中，且用三氟乙酸(1mL)酸化。加入甲苯(50mL)，且真空蒸发混合物。将所得胶状物溶解在乙腈和水的混合物(1∶1，10mL)中，且过滤。经制备性HPLC纯化(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)。合并含有产物的馏分，蒸发，残余物用乙醚研磨，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.35g。m/z 640(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.26(s，1H)，7.91(s，1H)，7.46(d，J＝8.5Hz，2H)，7.03(d，J＝8.5Hz，2H)，6.89(d，J＝8.5Hz，1H)，6.75(d，J＝8.2Hz，1H)，4.93-4.87(m，1H)，4.40-4.35(m，2H)，4.19-4.13(m，2H)，3.76-3.63(m，6H)，3.58-3.51(m，2H)，3.43-3.35(m，2H)，3.30-3.14(m，2H)，3.03-2.96(m，2H)，2.68(s，3H)，2.11-1.99(m，2H)，1.92-1.78(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例2
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
将9-溴壬-1-醇(0.29g)加至(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮盐酸盐(实施例1，步骤f)(0.4g)在三乙胺(0.41mL)和乙腈(10mL)的混合物中的悬浮液中。将所得混合物在50℃搅拌16h。真空蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(30mL)和饱和碳酸氢钠溶液(30mL)之间分配。分离各层，且水层用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(10mL)中，且加载至SCX柱(用甲醇预润湿)。柱用甲醇(10mL)洗涤，且用3M氨/甲醇溶液(100mL)洗脱。真空蒸发洗脱剂，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.32g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.95(s，1H)，4.30(t，J＝5.1Hz，1H)，3.78-3.44(m，8H)，3.42-3.33(m，2H)，2.69(s，3H)，2.35-2.14(m，8H)，1.71-1.57(m，2H)，1.55-1.19(m，12H)。
b)9-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬醛
将DMSO(0.32mL)和三乙胺(0.32mL)加至(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例2，步骤a)(0.32g)的二氯甲烷(5mL)溶液中。将混合物在冰-盐浴中冷却，且加入吡啶三氧化硫(0.36g)。将反应混合物在-10℃搅拌1h，然后温热至室温，且再搅拌3h。反应混合物用DCM(20mL)稀释，然后倒入盐水(20mL)中。分离各层，有机层用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.25g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ9.66(t，J＝1.6Hz，1H)，7.95(s，1H)，3.72-3.46(m，8H)，3.31(s，2H)，2.69(s，3H)，2.44-2.18(m，8H)，1.73-1.14(m，12H)。
c)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.17g)加至9-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬醛(实施例2，步骤b)(0.23g)和乙酸(0.03mL)的甲醇(15mL)溶液中。将所得混合物搅拌10min，且冷却至0℃。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.17g)，且将混合物搅拌16h。真空浓缩反应混合物，且将残余物溶解在水和乙腈的混合物(1∶1，5mL)中。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。残余物用乙醚研磨，且蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.15g。m/z 632(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.42(s，1H)，10.75(s，1H)，9.01(s，1H)，8.72(s，1H)，7.92(s，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，1H)，6.78(d，J＝8.5Hz，1H)，5.02-4.93(m，1H)，3.78-3.56(m，6H)，3.33-3.23(m，1H)，3.07-2.88(m，8H)，2.69(s，3H)，2.07-1.89(m，4H)，1.75-1.62(m，4H)，1.3-1.24(m，10H)+1个质子由于溶剂峰而模糊。
实施例3
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二盐酸盐
a)2-(4-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)乙醇
将碳酸铯(28.3g)加至4-(2-羟基乙基)苯酚(10g)和2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(11.79mL)的DMF(150mL)溶液中。将所得悬浮液在90℃加热16h。将反应混合物倒入水(500mL)中。水相用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机溶液用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用异己烷至1∶1乙酸乙酯∶异己烷梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为10g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.14(d，J＝6.9Hz，2H)，6.88(d，J＝6.9Hz，2H)，4.83(t，J＝5.0Hz，1H)，4.00(d，J＝5.0Hz，2H)，3.87-3.70(m，4H)，3.70-3.56(m，2H)，2.81(t，J＝6.4Hz，2H)，1.25(t，J＝6.9Hz，6H)。OH没有观察。
b)2-(4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙醛
将浓盐酸(5mL)加至2-(4-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)乙醇(实施例3，步骤a)(0.76g)的1，4-二氧杂环己烷(10mL)溶液中，且将所得混合物搅拌1h。反应混合物用水(50mL)稀释，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机溶液用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其直接使用。收率为0.35g。
c)(9-(2-(4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
将(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮盐酸盐(实施例1，步骤f)(0.63g)加至2-(4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙醛(实施例3，步骤b)(0.541g)在NMP(10mL)和乙酸(0.11mL)的混合物中的溶液中。将所得混合物在室温搅拌30min，然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.64g)，将反应混合物温热至室温，且搅拌16h。反应混合物用甲醇(30mL)稀释，且加载至SCX柱(用甲醇预润湿)。柱用甲醇(100mL)洗涤，且用3M氨/甲醇溶液(100mL)洗脱。真空蒸发洗脱剂，且残余物经硅胶色谱(用95∶5乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为褐色油状物。收率为0.74g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.86(s，1H)，7.09(d，J＝8.4Hz，2H)，6.84-6.77(m，2H)，4.24-4.15(m，1H)，4.02(t，J＝6.0Hz，2H)，3.68-3.54(m，8H)，3.00(s，2H)，2.71-2.61(m，5H)，2.51-2.42(m，4H)，1.75-1.65(m，2H)，1.59-1.45(m，2H)。
d)2-(4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯基)乙醛
将三氟乙酸(0.04mL)加至(9-(2-(4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例3，步骤c)(0.22g)的DCM(3mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.31g)，且将所得混合物搅拌5min。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(0.5mL)、碳酸氢钠溶液(0.5mL)和乙醚(5mL)的混合物，且将所得混合物搅拌5min。分离出有机层，且用碳酸氢钠溶液(1mL)和水(1mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物，所述油状物直接使用。收率为0.19g。
e)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二盐酸盐
将(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.10g)加至2-(4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯基)乙醛(实施例3，步骤d)(0.14g)和乙酸(0.02mL)的甲醇(1mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.103g)，将反应混合物搅拌10min，且真空蒸发。将残余物溶解在乙腈和水的混合物(1∶1，5mL)中。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。将残余物溶解在乙腈(5mL)中，且加入HCl/乙醚(1M，2mL)，然后真空蒸发溶剂。残余物用乙醚研磨，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.075g。m/z 654(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ11.50-11.14(m，2H)，9.22(s，1H)，8.87(s，1H)，7.91(s，1H)，7.20(d，J＝8.5Hz，2H)，6.98-6.92(m，3H)，6.78(d，J＝8.5Hz，1H)，5.0-4.96(m，1H)，4.42(t，J＝5.1Hz，2H)，3.83-3.55(m，5H)，3.52-3.43(m，5H)，3.22-3.04(m，4H)，3.01-2.93(m，2H)，2.69(s，3H)，2.11-1.93(m，4H)+2个质子由于溶剂而模糊。
实施例4
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)叔丁基二甲基(2-(噻吩-2-基)乙氧基)甲硅烷
将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(12.66g)逐份加至2-(噻吩-2-基)乙醇(9.0g)和咪唑(5.7g)的DMF(35mL)溶液中。将所得溶液搅拌18h。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用99∶1至96∶4乙酸乙酯∶异己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为16g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.13(d，1H)，6.92(dd，J＝5.0，3.2Hz，1H)，6.83-6.82(m，1H)，3.82(t，J＝6.7Hz，2H)，3.03(t，J＝6.8Hz，2H)，0.97(s，9H)，0.03(s，6H)。
b)5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛
在-78℃将正丁基锂(浓度为2.5M的己烷溶液，30mL)滴加至叔丁基二甲基(2-(噻吩-2-基)乙氧基)甲硅烷(实施例4，步骤a)(16g)的四氢呋喃(250mL)溶液中。将反应混合物温热至0℃，且搅拌1h。然后将反应混合物冷却至-78℃，且历时10min加入DMF(34mL)。将反应混合物温热至室温，且搅拌18h。将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。分离出有机层，用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用93∶7异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为15.4g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.83(s，1H)，7.61(d，J＝3.6Hz，1H)，6.96(d，1H)，3.86(t，J＝6.3Hz，2H)，3.06(td，J＝6.1，0.1Hz，2H)，0.88(t，J＝2.9Hz，9H)，0.02(s，6H)。
c)(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲醇
在0℃将硼氢化钠(1.74g)加至5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛(12.4g)(实施例4，步骤b)的乙醇(120mL)溶液中。在0℃，将所得溶液搅拌1h。将反应混合物在盐水和乙酸乙酯之间分配。分离出有机层，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为12.1g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.82(d，J＝3.6Hz，1H)，6.69(d，J＝3.3Hz，1H)，4.75(d，J＝4.9Hz，2H)，3.81(t，J＝6.7Hz，2H)，2.99(t，J＝6.8Hz，2H)，1.65(t，J＝5.5Hz，1H)，0.89(d，J＝2.8Hz，9H)，0.03(d，J＝3.1Hz，6H)。
d)2-(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)乙腈
在0℃将三苯基膦(13.04g)和四溴化碳(15.71g)一次性加至(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲醇(实施例4，步骤c)(10.94g)的DCM(20mL)溶液中。将所得溶液在室温搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃，且加入四乙基氰化铵(8.96g)。混合物用二氯甲烷(10mL)稀释，且在室温搅拌40min。将反应混合物在二氯甲烷和盐水之间分配。分离出有机层，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用95∶5至94∶6异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为7.6g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.87-6.84(m，1H)，6.70-6.68(m，1H)，3.84(d，J＝0.8Hz，2H)，3.80(t，J＝6.4Hz，2H)，2.97(t，J＝6.5Hz，2H)，0.89(s，9H)，0.03(s，6H)。
e)2-(5-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)乙酸
将2-(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)乙腈(实施例4，步骤d)(3g)的乙醇(30mL)溶液加至搅拌的氢氧化钾(1.20g)的水(30mL)溶液中。将所得混合物在100℃搅拌4小时。真空浓缩反应混合物，且将所得混合物在盐水和乙酸乙酯之间分配。水层用冰冷却，通过滴加浓盐酸来酸化，且用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为黄色固体。收率为1.75g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ12.44(s，1H)，6.72(d，J＝3.3Hz，1H)，6.67(d，J＝3.3Hz，1H)，4.76(s，1H)，3.71(s，2H)，3.61-3.55(m，2H)，2.86(t，J＝6.8Hz，2H)。
f)2-(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)乙醇
历时20分钟将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(6.63g)逐份加至咪唑(2.99g)和2-(5-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)乙酸(3.9g)(实施例4，步骤e)的DMF(50mL)溶液中。将所得溶液搅拌1h。然后加入THF(50mL)，且在冰浴中冷却反应混合物。然后加入碳酸钾(4.05g)的水(50mL)溶液，且将混合物搅拌20min。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配。分离出有机层，用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发溶剂。将残余物溶解在THF(80mL)中，且滴加硼烷-四氢呋喃络合物(浓度为1M的THF溶液，62.8mL)。将所得溶液搅拌2h，且通过滴加甲醇(30mL)来淬灭。然后真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用83∶17异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色液体。收率为4.6g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.69-6.63(m，2H)，3.87-3.75(m，4H)，3.05-2.91(m，4H)，0.89(s，9H)，0.03(s，6H)+可交换的质子。
g)2-(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.38g)加至2-(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)乙醇(实施例4，步骤f)(0.22g)的二氯甲烷(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌30min。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(25mL)的混合物，且将所得混合物搅拌10min。分离出有机层，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物，所述油状物直接使用。收率为0.21g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.70(t，J＝2.2Hz，1H)，6.73(s，2H)，3.83-3.78(m，4H)，2.98(t，J＝6.7Hz，2H)，0.89(s，9H)，0.02(s，6H)。
h)(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐
将1-丙烷膦酸环状酸酐(浓度为1.57M的THF溶液，2.49mL)加至1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXi PharmaTech)(1g)、2-甲基噻唑-4-甲酸(0.56g)和三乙胺(3.26mL)的DMF(30mL)溶液中，且将所得混合物在室温搅拌16小时。将反应混合物在水(500mL)和乙酸乙酯(200mL)之间分配。分离各层，且水层用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。合并的有机溶液用水(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用乙酸乙酯洗脱)纯化。将所得油状物溶解在二氯甲烷(30mL)中，且滴加三氟乙酸(3mL)。然后将其搅拌1小时，且真空浓缩。残余物与甲苯(20mL)共沸2次。所得胶状物用乙醚研磨，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为1.20g。m/z 282(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ8.59-8.18(m，2H)，8.00(s，1H)，3.86-3.49(m，6H)，3.22-2.86(m，4H)，2.69(s，3H)，2.00-1.90(m，2H)，1.74-1.58(m，2H)。
i)(9-(2-(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
将(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.25g)加至2-(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)乙醛(0.2g)(实施例4，步骤g)在NMP(5mL)和乙酸(0.04mL)的混合物中的溶液中。将所得混合物搅拌5min，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.22g)。将混合物搅拌1h，且倒入缓冲液(pH 7.2)(50mL)中。水相用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机层用缓冲液(pH 7.2)(50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用4∶1∶0.05异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.23g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.86(s，1H)，6.62(s，2H)，3.76(t，J＝6.5Hz，2H)，3.70-3.57(m，6H)，3.30(t，J＝7.0Hz，2H)，2.91-2.81(m，4H)，2.68(s，3H)，2.44-2.37(m，4H)，1.74-1.66(m，2H)，1.58-1.49(m，2H)，0.88-0.84(m，9H)，0.01-0.00(m，6H)。
j)(9-(2-(5-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
将浓盐酸(0.5mL)加至(9-(2-(5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例4，步骤i)(0.235g)的甲醇(5mL)溶液中，且将所得溶液搅拌1h。真空蒸发溶剂，残余物与甲苯共沸，且重新溶解在甲醇(～2mL)中。将残余物溶解在甲醇(10mL)中，且加载至SCX柱(用甲醇预润湿)。柱用甲醇(100mL)洗涤，且用1M氨/甲醇溶液(100mL)洗脱。真空蒸发洗脱剂，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.12g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.87(s，1H)，6.64(s，2H)，4.38(t，J＝4.9Hz，1H)，3.70-3.51(m，8H)，2.84(t，J＝6.7Hz，4H)，2.68(s，3H)，2.60-2.52(m，2H)，2.4-2.38(m，4H)，1.76-1.65(m，2H)，1.60-1.49(m，2H)。
k)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.02mL)加至(9-(2-(5-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例4，步骤j)(0.128g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.15g)，且将混合物搅拌10min。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(25mL)的混合物，且将混合物搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物重新溶解在MeOH(1mL)中。加入乙酸(0.04mL)，接着加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.19g)，且将混合物冷却至0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.157g)，且将所得混合物搅拌1h，然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈和水的混合物(1∶1，5mL)中。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，残余物用乙醚研磨，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.04g。m/z 644(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.92(s，1H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.84-6.73(m，3H)，4.89(dd，J＝7.9，5.4Hz，1H)，3.74-3.62(m，6H)，3.44-3.07(m，14H)，2.68(s，3H)，2.11-1.93(m，2H)，1.89-1.72(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例5
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2，2’-(1，4-亚苯基)二乙醇
历时20min将硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的四氢呋喃溶液，80mL)加至搅拌的在冰浴中冷却的2，2’-(1，4-亚苯基)二乙酸(10.20g)的四氢呋喃(100mL)溶液中。16h后，反应混合物用甲醇(40mL)小心淬灭。真空蒸发溶液，且将所得胶状物在乙酸乙酯和饱和氯化铵水溶液之间分配。分离乙酸乙酯溶液，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为8.64g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.18(s，4H)，3.86(t，4H)，2.85(t，4H)+2个可交换的质子。
b)2-{4-[2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-乙基]-苯基}-乙醇
将叔丁基二甲基氯甲硅烷(9.68mL)加至在冰浴中冷却的2，2’-(1，4-亚苯基)二乙醇(实施例5，步骤a)(8.64g)和咪唑(10.21g)的无水DMF(100mL)溶液中。45min后，反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤3次，且真空蒸发。经硅胶色谱(用5∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为6.20g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.21-7.13(m，4H)，3.92-3.76(m，4H)，2.92-2.76(m，4H)，0.89(s，9H)，0.02(s，6H)。
c)2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.38g)加至2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯基)乙醇(实施例5，步骤b)(0.21g)的二氯甲烷(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌30min。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(25mL)的混合物，且将所得混合物搅拌10min。分离有机相，用饱和碳酸氢钠溶液(2×10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物，所述油状物直接使用。收率为0.20g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.74(t，J＝2.4Hz，1H)，7.23(d，J＝8.2Hz，2H)，7.15(d，J＝8.2Hz，2H)，3.82(t，J＝7.1Hz，2H)，3.67(d，J＝2.6Hz，2H)，2.83(t，J＝7.1Hz，2H)，0.88(s，9H)，0.00(s，6H)。
d)(9-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
将(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.26g)加至2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯基)乙醛(实施例5，步骤c)(0.2g)和乙酸(0.04mL)的NMP(5mL)溶液中。将所得混合物搅拌5min，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.23g)。将混合物搅拌1h，倒入缓冲液(pH 7.2)(50mL)中，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机溶液用缓冲液(pH 7.2)(50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用80∶15∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.30g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.90(s，1H)，7.12(s，4H)，3.80(t，J＝6.8Hz，2H)，3.71-3.60(m，6H)，2.77-2.67(m，7H)，2.46-2.41(m，2H)，1.76-1.67(m，2H)，1.61-1.51(m，2H)，0.87(s，9H)，0.02(s，6H)+4个质子由于溶剂峰而模糊。
e)(9-(4-(2-羟基乙基)苯乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
将浓盐酸(0.5mL)加至(9-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例5，步骤d)(0.3g)的甲醇(5mL)溶液中，且将所得溶液搅拌1h。真空蒸发溶剂，残余物与甲苯共沸，且重新溶解在甲醇(～2mL)中。残余物用甲醇(10mL)稀释，且加载至SCX柱(用甲醇预润湿)。柱用甲醇(100mL)洗涤，且用1M氨/甲醇溶液(100mL)洗脱。真空蒸发洗脱剂，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.2g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.86(s，1H)，7.09(s，4H)，4.24(t，J＝5.0Hz，1H)，3.69-3.55(m，8H)，2.68(s，3H)，2.45-2.38(m，4H)，1.74-1.65(m，2H)，1.57-1.48(m，2H)+6个质子由于溶剂峰而模糊。
f)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.04mL)加至(9-(4-(2-羟基乙基)苯乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例5，步骤e)(0.21g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.25g)，且将混合物搅拌10min。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(25mL)的混合物，且将混合物搅拌10min。分离出水层，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物重新溶解在MeOH(1mL)中。加入乙酸(0.04mL)，接着加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.19g)，且将混合物冷却至0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.157g)，且将所得混合物搅拌1h，然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈和水的混合物(1∶1，5mL)中。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，残余物用乙醚研磨，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.17g。m/z638(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.92(s，1H)，7.26-7.18(m，4H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.96-4.87(m，1H)，3.76-2.90(m，20H)，2.68(s，3H)，2.14-1.75(m，4H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例6
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇
在0℃将硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的THF溶液，5.78mL)滴加至2-(3-(溴甲基)苯基)乙酸(1.06g)的THF(10mL)溶液中，且将所得混合物搅拌10min。然后将反应混合物温热至室温，且搅拌过夜。然后加入甲醇(5mL)，且真空浓缩混合物。经硅胶色谱(用异己烷至乙醚梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为1g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.34-7.24(m，3H)，7.22-7.12(m，1H)，4.48(s，2H)，3.87(t，J＝6.5Hz，2H)，2.87(t，J＝6.5Hz，2H)。OH没有观察。
b)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
将2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.11g)加至(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.2g)和三乙胺(0.17mL)的乙腈(5mL)溶液中，且将所得混合物在室温搅拌过夜。真空蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(25mL)和饱和碳酸氢钠溶液(25mL)之间分配。分离出水层，且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用80∶15∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.15g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.85(s，1H)，7.18(t，J＝7.4Hz，1H)，7.12-7.04(m，3H)，4.24(t，J＝5.1Hz，1H)，3.71-3.54(m，8H)，3.42(s，2H)，2.71(t，J＝6.9Hz，2H)，2.68(s，3H)，2.38-2.27(m，4H)，1.74-1.64(m，2H)，1.57-1.47(m，2H)。
c)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.03mL)加至(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例6，步骤b)(0.17g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.21g)，且将混合物搅拌10min。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(25mL)的混合物，且将混合物搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。将残余物重新溶解在甲醇(25mL)中。加入乙酸(0.04mL)，接着加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.16g)，且将混合物在冰浴中冷却至0℃，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.16g)。将所得混合物搅拌1h，且浓缩。将残余物溶解在乙腈和水的混合物(1∶1，5mL)中。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，残余物用乙醚研磨，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.125g。m/z 624(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.90(s，1H)，7.45-7.31(m，4H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.92(dd，J＝7.9，5.1Hz，1H)，4.30(s，2H)，3.74-3.58(m，6H)，3.29-2.97(m，10H)，2.67(s，3H)，2.13-1.95(m，2H)，1.88-1.70(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例7
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.02mL)加至(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例6，步骤b)(0.11g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.14g)，且将混合物搅拌10min。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(25mL)的混合物，且将混合物搅拌10min。分离出水层，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物重新溶解在甲醇(25mL)中。加入乙酸(0.02mL)，接着加入(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO2004106333)(0.09g)，且将混合物在冰浴中冷却至0℃，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.08g)。将所得混合物搅拌1h，且真空浓缩。将残余物在乙酸乙酯(50mL)和缓冲液(pH 7.2)(50mL)之间分配。分离出水层，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至92∶8∶0.8 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且溶解在THF(1mL)中。加入三乙胺三氢氟酸盐(triethylamine trihydrofluoride)(0.05mL)，且将混合物搅拌过夜。真空蒸发溶剂，且将残余物溶解在乙腈和水的混合物(1∶1，5mL)中。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，残余物用乙醚研磨，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.06g。m/z 618(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.16(d，J＝10.0Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.47-7.30(m，4H)，7.13(d，J＝8.2Hz，1H)，6.99(d，J＝8.2Hz，1H)，6.54(d，J＝10.0Hz，1H)，5.35(dd，J＝8.5，4.1Hz，1H)，4.30(s，2H)，3.74-3.57(m，4H)，3.32-2.98(m，12H)，2.67(s，3H)，2.12-1.92(m，2H)，1.87-1.67(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例8
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-(3-溴丙氧基)苯甲醛
将1，3-二溴丙烷(20.0g)加至搅拌的4-羟基苯甲醛(4.0g)和碳酸钾(7.0g)在丙酮(80mL)中的悬浮液中。16h后，将混合物再加热回流2h，冷却，过滤以除去无机物，且真空蒸发溶液。经硅胶色谱纯化，用异己烷洗脱以除去1，3-二溴丙烷，然后用二氯甲烷∶异己烷2∶1洗脱以收集副标题化合物。收率为3.45g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.89(s，1H)，7.84(d，J＝9.2Hz，2H)，7.01(d，J＝9.2Hz，2H)，4.21(t，J＝5.6Hz，2H)，3.62(t，J＝6.0Hz，2H)，2.36(五重峰，J＝6.1Hz，2H)。
b)4-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苯甲醛
在60℃加热(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.244g)、4-(3-溴丙氧基)苯甲醛(实施例8，步骤a)(0.15g)和三乙胺(0.344mL)在MeCN(2mL)中的混合物。16h后，真空蒸发反应混合物。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶三乙胺10∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为油状物。收率为0.24g。m/z 444(M+H)+(APCI)。
c)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将氯化氢(0.4mL浓度为1M的乙醚溶液)加至搅拌的4-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苯甲醛(实施例8，步骤b)(0.15g)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸盐(实施例1，步骤d)(0.15g)的MeOH(15mL)溶液中。5分钟后，加入氰基硼氢化钠(0.05g)。16h后，将溶液浓缩至～2mL，然后在乙酸乙酯和磷酸缓冲液(pH 7.2)(20mL)之间分配。乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在乙腈和水的混合物(1∶1，5mL)中。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，残余物用乙醚研磨，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.045g。m/z 654(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.92(s，1H)，7.42(d，J＝8.7Hz，2H)，6.98(d，J＝8.7Hz，2H)，6.89(d，J＝8.5Hz，1H)，6.75(d，J＝8.2Hz，1H)，4.91-4.84(m，1H)，4.18-4.04(m，4H)，3.78-2.94(m，14H)，2.71(s，3H)，2.19-2.00(m，4H)，1.85-1.66(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例9
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将1-丙烷膦酸环状酸酐(浓度为1.57M的THF溶液，0.64mL)加至1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXi PharmaTech)(0.26g)、5-甲基噻吩-2-甲酸(0.142g)和三乙胺(0.84mL)的DMF(8mL)溶液中，且将所得混合物搅拌16h。将反应混合物倒入水(100mL)中，且用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机溶液用水(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶异己烷1∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.32g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.11(d，J＝3.6Hz，1H)，6.72-6.69(m，1H)，3.78-3.67(m，8H)，3.60-3.51(m，2H)，3.19-3.10(m，2H)，2.51(s，3H)，1.86-1.79(m，2H)，1.45(s，9H)。
b)(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐
4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例9，步骤a)(0.32g)的DCM(3mL)溶液用三氟乙酸(1.0g)处理。2h后，真空蒸发反应混合物，且与甲苯共沸2次，得到副标题化合物，其直接使用。收率为0.32g。
c)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.136g)加至搅拌的(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例9，步骤b)(0.250g)和三乙胺(0.278mL)的MeCN(5mL)溶液中。1h后，浓缩反应混合物，且加载至硅胶柱(用乙酸乙酯∶三乙胺95∶5洗脱)，得到副标题化合物。收率为0.24g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.28-7.24(m，2H)，7.18-7.15(m，1H)，7.11-7.08(m，2H)，6.70-6.67(m，1H)，3.86(t，J＝6.6Hz，2H)，3.77-3.69(m，4H)，3.56(s，2H)，3.48(s，2H)，2.86(t，J＝7.0Hz，2H)，2.55-2.48(m，5H)，2.40-2.32(m，2H)，1.89-1.82(m，2H)，1.70-1.50(水峰下的2H)。1个可交换的质子没有观察。
d)2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
在氮气下将戴斯-马丁高碘剂(0.16g)加至搅拌的(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(0.13g)(实施例9，步骤c)和三氟乙酸(0.036g)的DCM(4mL)溶液中。0.5h后，加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)和饱和碳酸氢钠溶液(5mL)，且反应混合物用乙酸乙酯萃取2次。合并的有机萃取物用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物。收率为0.13g。直接使用。
e)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.179g)加至搅拌的2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例9，步骤d)(0.13g)和乙酸(0.031mL)的MeOH(5mL)溶液中。5分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.114g)。再过15min后，加入乙酸乙酯(30mL)，反应混合物用缓冲液(pH 7)(30mL)洗涤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用92∶7∶1DCM∶MeOH∶‘880’氨水洗脱)纯化，得到甲硅烷基化的中间体。将该中间体溶解在THF(2mL)中，且加入三乙胺三氢氟酸盐(0.062mL)。16h后，真空蒸发反应混合物，加入甲苯(150mL)，且真空蒸发混合物。将残余物溶解在乙腈和水的混合物(1∶1，5mL)中。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，残余物用乙醚研磨，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.05g。m/z617(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ10.55-10.45(m，2H)，9.95-9.84(m，0.2H)，9.68-9.57(m，0.8H)(旋转异构体)，8.97-8.74(m，2H)，8.16(d，J＝9.5Hz，1H)，7.49-7.33(m，4H)，7.29-7.26(m，0.2H)，7.25-7.21(m，0.8H))(旋转异构体)，7.15(d，J＝9.5Hz，1H)，6.99(d，J＝9.5Hz，1H)，6.86-6.81(m，1H)，6.58(d，J＝10.1Hz，1H)，6.27-6.18(m，1H)，5.37-5.30(m，2H)，4.44-4.40(m，0.5H)，4.35-4.29(m，1.5H)，3.73-3.63(m，4H)，3.51-3.46(m，2H)，3.31-2.94(m，8H)，2.46(s，3H)，2.12-2.00(m，2H)，1.70-1.58(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
实施例10
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)甲磺酸2-(3-甲酰基苯氧基)乙基酯
将2-溴乙醇(10.23g)和碳酸钾(11.32g)加至3-羟基苯甲醛(5g)的乙腈(100mL)溶液中，且将所得混合物回流搅拌72h。冷却反应混合物，且在乙酸乙酯和冰冷的稀氢氧化钠水溶液之间分配。分离出有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空除去溶剂。将残余物溶解在DCM(30mL)中，且加入三乙胺(3.44mL)。将溶液冷却至0℃，且用甲磺酰氯(1.89mL)逐滴处理。将反应混合物在0℃搅拌10分钟，然后温热至室温，且搅拌1h。混合物用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用6∶4乙酸乙酯∶异己烷洗脱)纯化。真空蒸发纯的馏分，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为3.50g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.98(d，J＝8.2Hz，1H)，7.53-7.46(m，2H)，7.41-7.39(m，1H)，7.22-7.19(m，1H)，4.62-4.59(m，2H)，4.34-4.30(m，2H)，3.10(s，3H)。
b)3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯甲醛
将甲磺酸2-(3-甲酰基苯氧基)乙基酯(实施例10，步骤a)(0.38g)加至(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.62g)和三乙胺(0.55mL)的乙腈(5mL)溶液中，且将所得混合物在65℃搅拌16h。真空蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(25mL)和饱和碳酸氢钠溶液(25mL)之间分配。分离水相，且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并有机相，用盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.48g。1HNMR(400MHz，D6-DMSO)δ9.97(s，1H)，7.96(s，1H)，7.56-7.40(m，3H)，7.32-7.25(m，1H)，4.14(s，2H)，3.75-3.47(m，6H)，2.80-2.62(m，5H)，2.55-2.37(m，4H)，1.74-1.40(m，4H)。
c)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯甲醛(实施例10，步骤b)(0.24g)加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.15g)和乙酸(0.032mL)在甲醇(2mL)中的混合物中。将混合物搅拌30min，然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.18g)，且将混合物搅拌2h。真空蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(50mL)和磷酸缓冲液(pH7.2)(50mL)之间分配。分离水相，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，残余物用乙醚研磨，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.21g。m/z 640(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.92(s，1H)，7.37(t，J＝7.8Hz，1H)，7.19-7.12(m，2H)，7.05(d，J＝8.2Hz，1H)，6.90(d，J＝8.2Hz，1H)，6.76(d，J＝8.2Hz，1H)，4.92(t，J＝6.5Hz，1H)，4.45-4.31(m，2H)，4.26-4.12(m，2H)，3.76-3.53(m，8H)，3.45-3.36(m，2H)，3.31-3.20(m，2H)，3.06-3.00(m，2H)，2.68(s，3H)，2.1-1.97(m，2H)，1.92-1.80(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例11
5-羟基-8-(1-羟基-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮二(三氟乙酸盐)异构体1
a)1-(2，4-二羟基-3-硝基苯基)乙酮
历时15分钟将2-硝基苯-1，3-二酚(24.5g)逐份加至剧烈搅拌的氯化铝(46.3g)的硝基苯(325mL)溶液中。然后再历时15分钟向混合物中滴加乙酸酐(15.7mL)，然后将混合物在100℃加热5h。将反应混合物冷却至环境温度，且用冰冷的2M盐酸(300mL)小心淬灭。混合物用乙醚(2×500mL)萃取，然后合并的乙醚萃取物用2M氢氧化钠水溶液(2×400mL)萃取。合并的碱性萃取物用乙醚(4×500mL)洗涤，然后用2M盐酸(700mL)酸化至pH 1。滤出所得沉淀物，用水洗涤，且在40℃真空干燥，得到副标题化合物，其为黄色-褐色固体。收率为29.5g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ13.32(s，1H)，12.31(s，1H)，7.98(d，J＝9.2Hz，1H)，6.63(d，J＝28.2Hz，1H)，2.59(s，3H)。
b)1-(4-(苄基氧基)-2-羟基-3-硝基苯基)乙酮
在氮气下将叔丁醇锂(4.06g)加至搅拌的1-(2，4-二羟基-3-硝基苯基)乙酮(实施例11，步骤a)(10g)的DMF(100mL)溶液中，同时保持内部温度低于30℃。在环境温度再搅拌10分钟后，加入苄基溴(6.03mL)，且将混合物再搅拌20h。再加入苄基溴(3mL)，且将混合物搅拌24h。反应混合物用水(300mL)淬灭，加入1M氢氧化钠水溶液(50mL)，且混合物用乙醚(2×300mL)洗涤，过滤通过硅藻土以有助于分离。在冰/水中冷却碱性溶液，用冰冷的2M盐酸(200mL)酸化，滤出所得沉淀物，用水洗涤，且干燥，得到淡褐色固体。固体用乙醇(100mL)浆化1h，滤出固体，用冷乙醇(20mL)洗涤，且在40℃真空干燥，得到副标题化合物，其为淡褐色固体。收率为6.8g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ13.04(s，1H)，8.14(d，J＝9.2Hz，1H)，7.45-7.32(m，5H)，7.01(d，J＝9.2Hz，1H)，5.42(s，2H)，2.64(s，3H)+3个可交换的质子没有观察。
c)1-(3-氨基-4-(苄基氧基)-2-羟基苯基)乙酮
历时15分钟将锌粉(5.5g)逐份加至1-(4-(苄基氧基)-2-羟基-3-硝基苯基)乙酮(实施例11，步骤b)(5.5g)的乙酸(55mL)悬浮液中，同时用冰浴保持内部温度低于40℃。使混合物达到环境温度，且搅拌2h。混合物通过硅藻土来过滤(注意：变热-不要变干)，用乙酸洗涤，且将滤液倒入冰/水(500mL)中。滤出所得沉淀物，用水洗涤，且在40℃真空干燥，得到副标题化合物，其为淡褐色固体。收率为4.8g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.53(m，2H)，7.48-7.33(m，3H)，7.28(d，J＝9.0Hz，1H)，6.72(d，J＝9.0Hz，1H)，5.29(s，2H)，2.59(s，3H)。
d)8-乙酰基-5-(苄基氧基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮
将2-氯乙酰氯(1.8mL)滴加至搅拌的1-(3-氨基-4-(苄基氧基)-2-羟基苯基)乙酮(实施例11，步骤c)(5.2g)和碳酸氢钠(3.74g)在DMF(30mL)中的混合物中，然后搅拌2h。加入碳酸铯(7.90g)，且将混合物在100℃加热20h。将混合物冷却至环境温度，用水(500mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，用水(3×300mL)和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。固体残余物用乙醚处理，过滤，且干燥，得到副标题化合物，其为米色固体。收率为5.7g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ10.33(s，1H)，7.55(m，2H)，7.39(m，2H)，7.34(d，J＝8.8Hz，1H)，7.33(m，1H)，6.89(d，J＝9.2Hz，1H)，5.27(s，2H)，4.67(s，2H)，3.32(s，3H)。
e)5-(苄基氧基)-8-(2-氯乙酰基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮
将二氯碘酸苄基三甲基铵(14.17g)加至搅拌的8-乙酰基-5-(苄基氧基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮(实施例11，步骤d)(5.5g)在二氯甲烷(100mL)、乙酸(33mL)和水(5.5mL)的混合物中的溶液中，且将反应混合物在65℃搅拌20h。将反应混合物冷却至环境温度，用亚硫酸氢钠水溶液(5.78g/100mL)处理，且再搅拌30min。混合物用乙醚(200mL)稀释，过滤收集所得固体，用水和乙醚洗涤，且在40℃真空干燥，得到副标题化合物，其为淡褐色固体。收率为5.6g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ10.41(s，1H)，7.55(m，2H)，7.44(d，J＝9.4Hz，1H)，7.39(m，2H)，7.32(m，1H)，6.95(d，J＝9.4Hz，1H)，5.30(s，2H)，4.96(s，2H)，4.69(s，2H)。
f)8-(2-叠氮基乙酰基)-5-(苄基氧基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮
将叠氮化钠(1.176g)加至5-(苄基氧基)-8-(2-氯乙酰基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮(实施例11，步骤e)(4.8g)的DMF(50mL)悬浮液中，且搅拌2h。将混合物倒在冰/水上，过滤收集所得固体，用水洗涤，且在40℃真空干燥，得到副标题化合物，其为淡褐色固体。收率为4.6g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ10.42(s，1H)，7.55(m，2H)，7.48(m，1H)，7.43-7.29(m，3H)，6.97(m，1H)，5.31(s，2H)，4.69(s，2H)，4.63(s，2H)。
g)8-(2-叠氮基-1-羟基乙基)-5-(苄基氧基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮异构体1
8-(2-叠氮基乙酰基)-5-(苄基氧基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮(实施例11，步骤f)(2g)的乙醇(80mL)悬浮液用硼氢化钠(0.224g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1.5小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗固体用丙酮(20mL)研磨，得到1.6g外消旋的产物。
对外消旋的混合物进行分离：
将外消旋的8-(2-叠氮基-1-羟基乙基)-5-(苄基氧基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮(2.5g)以10mg/mL的浓度溶解在甲醇中，且通过手性HPLC(使用Chiralpak
AS(250×50mm ID，20μm粒度)柱且用乙醇洗脱)来分离。合并含有第一洗脱异构体的馏分，且真空浓缩，得到副标题化合物。收率为0.67g。m/z 339(M-H)-(APCI)。
h)8-(2-氨基-1-羟基乙基)-5-羟基-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮乙酸盐异构体1
在压力为4巴的氢气下将8-(2-叠氮基-1-羟基乙基)-5-(苄基氧基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮异构体1(实施例11，步骤g)(0.67g)在乙醇(30mL)[含有10％钯/碳催化剂(0.210g)]中的混合物剧烈搅拌18小时。滤出催化剂，且减压蒸掉溶剂。将残余物溶解在乙酸(15mL)和乙醇(15mL)中，且在压力为4巴的氢气下将混合物与10％钯/碳催化剂(0.210g)一起搅拌18小时。过滤混合物，加入新鲜10％钯/碳催化剂(0.210g)，且在压力为4巴的氢气下继续搅拌18小时。过滤混合物，加入新鲜10％钯/碳催化剂(0.210g)，且在压力为4巴的氢气下继续搅拌18小时。过滤混合物，且减压除去溶剂。残余物用乙腈(30mL)研磨，得到副标题化合物。收率为0.33g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ6.85(d，1H)，6.50(d，1H)，4.74-4.69(m，1H)，4.52-4.42(m，2H)，2.74-2.50(m，2H)，1.83(s，3H)。6个可交换的质子没有观察。
i)5-羟基-8-(1-羟基-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮二(三氟乙酸盐)异构体1
将(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例6，步骤b)(0.198g)的DCM(7mL)溶液在冰浴中冷却，且用三氟乙酸(0.037mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(303mg)处理。将混合物在20℃搅拌30分钟。再加入戴斯-马丁高碘剂(303mg)，且再继续搅拌30分钟。混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(7mL)和饱和碳酸氢钠溶液(7mL)处理，且将所有物质剧烈搅拌10分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，滴加至8-(2-氨基-1-羟基乙基)-5-羟基-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮乙酸盐异构体1(实施例11，步骤h)(110mg)的甲醇(5mL)溶液(其已冷却至0℃)中，且用乙酸(0.022mL)处理，接着用HCl(浓度为1M的乙醚溶液，0.387mL)处理，然后用氰基硼氢化钠(37mg)处理。将反应混合物在20℃搅拌2小时。将混合物蒸发至体积为3mL，且在乙酸乙酯(30mL)和含水磷酸缓冲液(pH＝7.2)(50mL)之间分配。水层通过加入乙酸来酸化，且通过10g SCX柱。柱用水洗涤，然后用7N氨/甲醇冲洗以洗脱产物。减压蒸发溶剂。将粗产物溶解在甲醇中，用乙酸(0.5mL)处理，且减压除去溶剂。残余物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.059g。m/z 622(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ9.46(s，1H)，7.90(s，1H)，7.46-7.30(m，4H)，6.93-6.89(m，1H)，6.58-6.55(m，1H)，5.13-5.05(m，1H)，4.52(s，2H)，4.28(s，2H)，3.70(s，4H)，3.63(s，2H)，3.29-2.98(m，10H)，2.68(s，3H)，2.09-1.95(m，2H)，1.85-1.70(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例12
(R)-5-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)3-氧代-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将氯乙酰氯(4.88mL)滴加至剧烈在0℃搅拌的碳酸钾(17.43g)/水(78mL)和4-(氨基甲基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(10.4g)/乙酸乙酯(92mL)的混合物中。在0℃保持30分钟后，混合物用乙酸乙酯萃取，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在THF(200mL)中，在氮气下历时3小时滴加至搅拌且加热回流的叔丁醇钾(浓度为1M的叔丁醇溶液，75mL)和THF(250mL)的溶液中。将混合物冷却至室温，且搅拌18小时。减压除去溶剂，将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配，水层用乙酸乙酯重新萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物通过用乙醚(30mL)和异己烷(20mL)的混合物研磨纯化，得到副标题产物。收率为8.20g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.95(s，1H)，3.97(s，2H)，3.72-3.62(m，2H)，3.10(d，2H)，3.05-2.93(m，2H)，1.77-1.69(m，2H)，1.53-1.43(m，2H)，1.40(s，9H)。
b)1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
3-氧代-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例12，步骤a)(8.2g)的THF(100mL)溶液用硼烷-THF络合物(浓度为1M的THF溶液，91mL)逐滴处理，且将所得混合物在55℃加热2小时。加入硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的THF溶液，15.17mL)，且将所得混合物在55℃加热2小时。将混合物冷却至室温，且用甲醇淬灭，然后减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(250mL)中，溶液用N1，N2-二甲基乙-1，2-二胺(10g)处理，且将所得混合物加热回流6小时。再加入N1，N2-二甲基乙-1，2-二胺(3g)，且继续加热回流6小时。将混合物冷却至室温，减压蒸发溶剂，残余物通过快速硅胶色谱(用1％三乙胺和5％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为7.40g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.72(s，2H)，3.68-3.64(m，2H)，3.14(t，J＝20Hz，2H)，2.87-2.81(m，2H)，2.68(s，2H)，1.97-1.88(m，2H)，1.46(s，9H)，1.44-1.36(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
c)4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
在0℃和氮气下历时5分钟将三氟乙酸酐(0.496mL)的DCM(3mL)溶液滴加至搅拌的三乙胺(0.538mL)和1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例12，步骤b)(0.9g)的DCM(20mL)溶液中。在0℃，将所得溶液搅拌30分钟。加入水(20mL)，且将混合物剧烈搅拌10分钟。分离出有机层，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用40％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1g。无需纯化即直接使用。
d)2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮三氟乙酸盐
在20℃将三氟乙酸(15mL)加至搅拌的4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例12，步骤c)(1g)的DCM(15mL)溶液中。将所得溶液在20℃搅拌10分钟。加入甲苯(50mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为1.4g。m/z 253(M+H)+(APCI)。
e)2，2，2-三氟-1-(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮
在20℃历时2分钟将2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.223g)的乙腈(1mL)溶液滴加至搅拌的三乙胺(0.318mL)和2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮三氟乙酸盐(实施例12，步骤d)(0.38g)的乙腈(2mL)溶液中。将所得混合物在20℃搅拌3小时。蒸掉溶剂，且将残余物在二氯甲烷和水之间分配，水层用DCM重新萃取2次，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用6％甲醇和1％三乙胺/二氯甲烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.260g。m/z 387(M+H)+(APCI)。
f)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
在20℃将三氟乙酸(0.052mL)加至2，2，2-三氟-1-(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例12，步骤e)(0.26g)的二氯甲烷(7.0mL)溶液中。混合物用戴斯-马丁高碘剂(0.428g)处理，且在20℃搅拌30分钟。混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(7.0mL)和饱和碳酸氢钠溶液(7.0mL)处理，且将混合物剧烈搅拌10分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(7.0mL)中，且将(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.225g)和乙酸(0.039mL)加至在0℃冷却的混合物中。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.214g)，且将所得混合物在20℃搅拌90分钟。蒸掉大部分甲醇，且将残余物在乙酸乙酯和含水磷酸缓冲液(pH＝7.2)之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用1％浓氨水和10％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.144g。m/z 703(M+H)+(APCI)。
g)(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基(3-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯
在20℃将三乙胺三氢氟酸盐(0.044mL)的甲醇(1mL)溶液加至搅拌的(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例12，步骤f)(0.140g)的THF(4mL)溶液中。将所得溶液在20℃搅拌18小时。反应混合物用三乙胺(0.111mL)处理，接着用一缩二碳酸二叔丁酯(0.048mL)的甲醇(1mL)溶液处理。将混合物在20℃搅拌3小时，然后减压蒸掉溶剂。残余物通过快速硅胶色谱(用1％“880”氨水和10％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.100g。m/z689(M+H)+(APCI)。
h)(R)-3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)苯乙基(2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基(3-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例12，步骤g)(0.100g)的甲醇(5.0mL)溶液用碳酸钾(0.035g)的水(5.0mL)溶液处理，且将所得混合物在20℃搅拌5小时。在氮气气流下蒸掉甲醇，且再加入水(5.0mL)。溶液通过加入乙酸来酸化，然后通过10g C18硅胶柱。柱用水洗涤，然后用甲醇冲洗以洗下产物。减压蒸掉溶剂，得到0.090g乙酸盐。将该固体溶解在甲醇(2mL)中，通过0.700g VARIAN BondElut NH2树脂，且减压蒸掉溶剂，得到副标题化合物。收率为0.074g。m/z593(M+H)+(APCI)。
i)(R)-5-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)苯乙基(2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例12，步骤h)(0.068g)的DMF(2.0mL)溶液用三乙胺(0.048mL)处理，接着用5-乙基噻吩-2-甲酸(0.018g)处理，然后用HATU(0.057g)处理。将混合物在20℃搅拌2小时。加入“880”氨水(4滴)，且继续搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在二氯甲烷(1mL)中，且溶液用三氟乙酸(1mL)处理。将溶液在20℃静置10分钟，加入甲苯(20mL)，减压蒸发溶剂，且残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.039g。m/z 631(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.18(d，J＝10.0Hz，1H)，7.46-7.33(m，4H)，7.23(d，1H)，7.14(d，1H)，7.00(d，1H)，6.84(d，1H)，6.55(d，1H)，5.39-5.33(m，1H)，4.29(s，2H)，3.74-3.63(m，4H)，3.54(s，2H)，3.29(t，2H)，3.21-3.00(m，8H)，2.83(q，2H)，2.10-1.96(m，2H)，1.84-1.69(m，2H)，1.26(td，3H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例13
5-羟基-8-(1-羟基-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮二(三氟乙酸盐)异构体2
a)8-(2-叠氮基-1-羟基乙基)-5-(苄基氧基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮异构体2
异构体2在实施例11步骤g中详述的手性HPLC分离中作为第二洗脱异构体来得到。合并含有第二洗脱异构体的馏分，且真空浓缩，得到副标题化合物。收率为0.72g。m/z 339(M-H)-(APCI)。
b)(S)-8-(2-氨基-1-羟基乙基)-5-羟基-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮乙酸盐异构体2
将8-(2-叠氮基-1-羟基乙基)-5-(苄基氧基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮异构体2(实施例13，步骤a)(0.72g)在乙酸(10mL)和乙醇(10mL)的混合物中的溶液与10％钯/碳催化剂(0.225g)一起在压力为4巴的氢气下剧烈搅拌18小时。过滤混合物，加入新鲜10％钯/碳催化剂(0.225g)，且在压力为4巴的氢气下继续搅拌18小时。过滤混合物，加入新鲜10％钯/碳催化剂(0.225g)，且在压力为4巴的氢气下继续搅拌18小时。过滤混合物，且减压除去溶剂。残余物用乙腈(30mL)研磨，得到副标题化合物。收率为0.28g。m/z 222(M-H)-(APCI)。
c)5-羟基-8-(1-羟基-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮二(三氟乙酸盐)异构体2
将(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例6，步骤b)(0.163g)的DCM(7.0mL)溶液在冰浴中冷却，且用三氟乙酸(0.030mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.246g)处理。将混合物在20℃搅拌30分钟，再用戴斯-马丁高碘剂(0.246g)处理，且在20℃再搅拌30分钟。混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(7.0mL)和饱和碳酸氢钠溶液(7.0mL)处理，且剧烈搅拌10分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2.0mL)中，滴加至8-(2-氨基-1-羟基乙基)-5-羟基-2H-苯并[b][1，4]噁嗪-3(4H)-酮乙酸盐异构体2(实施例13，步骤b)(0.090g)的甲醇(5.0mL)溶液(其已冷却至0℃)中，且用乙酸(0.018mL)处理，接着用HCl(浓度为1M的乙醚溶液，0.32mL)处理，然后用氰基硼氢化钠(0.030g)处理。将混合物在20℃搅拌2小时。将混合物蒸发至体积为3mL，且在乙酸乙酯(30mL)和含水磷酸缓冲液(pH＝7.2)(50mL)之间分配。水层通过加入乙酸来酸化，且通过10g SCX柱。柱用水洗涤，然后用7N氨/甲醇冲洗以洗脱产物。减压蒸发溶剂。将粗产物溶解在甲醇中，用乙酸(0.5mL)处理，且减压除去溶剂。残余物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需产物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.053g。m/z 622(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ9.45(s，1H)，7.90(d，J＝4.6Hz，1H)，7.45-7.31(m，4H)，6.95-6.88(m，1H)，6.60-6.54(m，1H)，5.14-5.07(m，1H)，4.54(s，2H)，4.30(s，2H)，3.70(s，4H)，3.64(s，2H)，3.28-2.98(m，10H)，2.68(s，3H)，2.08-1.97(m，2H)，1.88-1.71(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例14
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-2-基)乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛
在20℃历时20分钟将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(2.82g)逐份加至搅拌的2-(噻吩-2-基)乙醇(2g)和咪唑(1.275g)的DMF(20mL)溶液中。将混合物在20℃搅拌18小时，然后在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。残余物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为1-4％乙酸乙酯/异己烷)纯化。将残余物(2.7g)溶解在THF(50mL)中，将溶液冷却至-78℃，历时10分钟滴加正丁基锂(浓度为2.5M的己烷溶液，5.06mL)，且将所得混合物在0℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至-78℃，且历时5分钟滴加DMF(5.7mL)。将混合物在20℃搅拌3小时。将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配，有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用7％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为2.3g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.83(s，1H)，7.61(d，1H)，6.96(d，1H)，3.86(t，2H)，3.07(t，2H)，0.88(s，9H)，0.02(s，6H)。
b)(9-((5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.25g)和5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛(实施例14，步骤a)(0.171g)的NMP(5mL)[含有乙酸(0.036mL)]溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(0.201g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌18小时。将混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.3g。m/z 536(M+H)+(APCI)。
c)(9-((5-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
(9-((5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例14，步骤b)(0.3g)的THF(5mL)溶液用四丁基氟化铵溶液(浓度为1M的THF溶液，0.672mL)逐滴处理。将混合物在20℃静置30分钟。溶剂使用氮气气流来蒸发，且残余物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为1％三乙胺和2.5％甲醇/二氯甲烷)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.187g。m/z422(M+H)+(APCI)。
d)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(2-(5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-2-基)乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
(9-((5-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例14，步骤c)(0.18g)的二氯甲烷(10mL)溶液在20℃用三氟乙酸(0.033mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.254g)处理，且将混合物在20℃搅拌90分钟。然后混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(10mL)处理，且剧烈搅拌10分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，且加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO2004106333)(0.143g)和乙酸(0.024mL)的甲醇(7mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.136g)。移开冰浴，且将混合物在室温搅拌1小时。蒸掉大部分甲醇，将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用9％甲醇和1％‘880’氨水/二氯甲烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.078g。m/z 738(M+H)+(APCI)。
e)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-2-基)乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(2-(5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-2-基)乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例14，步骤d)(0.078g)在THF(4mL)和甲醇(1mL)的混合物中的溶液用三乙胺三氢氟酸盐(0.022mL)处理，且将混合物在20℃静置18小时。减压蒸发溶剂，且残余物与甲苯共沸。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需产物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.021g。m/z 624(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ10.50(s，2H)，10.15-9.84(m，1H)，8.91(s，1H)，8.80(s，1H)，8.16(d，J＝10.0Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.26-7.12(m，2H)，7.02-6.94(m，2H)，6.58(d，J＝9.7Hz，1H)，6.21(s，1H)，5.36-5.31(m，1H)，4.53(s，2H)，3.83-3.48(m，6H)，3.33-2.93(m，10H)，2.68(s，3H)，2.16-2.04(m，2H)，1.79-1.59(m，2H)。
实施例15
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮三氟乙酸盐
将氯化氢(浓度为2M的乙醚溶液，0.504mL)加至搅拌的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸盐(实施例1，步骤d)(0.222g)和2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例9，步骤d)(0.320g)的甲醇(10mL)溶液中。5min后，加入氰基硼氢化钠(0.100g)，且将反应混合物搅拌过夜。将溶液浓缩至3mL，且在缓冲液(pH 7.2)(80mL)和乙酸乙酯之间分配。将饱和碳酸氢钠溶液加至水层中，然后所述水层用乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯溶液，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发至干。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为25-65％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发至干。加入乙腈，真空蒸发溶液，且重复该操作。加入乙醚，且研磨胶状物，得到标题化合物，其为固体。收率为0.017g。m/z 623(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ11.67(s，1H)，10.25(s，1H)，9.73-9.63(m，1H)，8.99-8.89(m，1H)，8.85-8.76(m，1H)，7.46-7.32(m，3H)，7.30-7.20(m，1H)，6.93(d，J＝8.3Hz，1H)，6.86-6.81(m，1H)，6.77(d，J＝8.3Hz，1H)，6.53-6.45(m，1H)，4.93-4.86(m，1H)，4.45-4.39(m，0.4H)，4.35-4.28(m，1.6H)，3.74-3.60(m，4H)，3.49(s，2H)，3.27-3.14(m，4H)，3.13-2.89(m，6H)，2.46(s，3H)，2.12-2.03(m，2H)，1.70-1.59(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
实施例16
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(4-(溴甲基)苯基)乙醇
在20℃将硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的THF溶液，4.37mL)滴加至2-(4-(溴甲基)苯基)乙酸(1.0g)的THF(20mL)溶液中，且将混合物搅拌1小时。滴加甲醇直到不再冒泡，且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用30％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为白色结晶固体。收率为0.86g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.36-7.32(m，2H)，7.20(d，J＝8.2Hz，2H)，4.68(s，2H)，4.64(t，J＝5.1Hz，1H)，3.64-3.55(m，2H)，2.75-2.67(m，2H)。
b)(9-(4-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
向(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.791g)和三乙胺(0.697mL)的乙腈(10mL)溶液中加入2-(4-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例16，步骤a)，且将所得混合物搅拌过夜。真空蒸发溶剂。将残余物在乙酸乙酯(25mL)和饱和碳酸氢钠溶液(25mL)之间分配。分离水相，且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.76g。m/z 416(M+H)+(APCI)。
c)2-(4-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
在0℃将TFA(0.030mL)加至(9-(4-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例16，步骤b)(0.16g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。加入戴斯-马丁高碘剂(0.245g)，将混合物温热至室温，且搅拌45min。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水洗涤。然后加入AcOH(0.1mL)，混合物用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物，所述油状物直接使用。收率为0.16g。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2-(4-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例16，步骤c)(0.08g)的甲醇(2mL)溶液加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.076g)和乙酸(0.017mL)在甲醇(0.5mL)中的混合物中。将所得混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。然后加入氰基硼氢化钠(0.012g)，将混合物温热至室温，且搅拌2小时。将反应混合物加载至C18柱(Varian 10g)。柱用水(50mL)洗涤，且用甲醇(50mL)洗脱。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.66g。m/z624(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.28(s，1H)，7.90(s，1H)，7.48(d，J＝7.1Hz，2H)，7.34(d，J＝7.3Hz，2H)，6.94(d，J＝8.1Hz，1H)，6.78(d，J＝8.1Hz，1H)，4.99-4.88(m，1H)，4.31(s，2H)，3.76-3.55(m，6H)，3.32-2.91(m，10H)，2.67(s，3H)，2.10-1.67(m，4H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例17
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(4-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2-(4-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例16，步骤c)(0.08g)的甲醇(2mL)溶液加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO02004106333)(0.097g)和乙酸(0.017mL)在甲醇(0.5mL)中的混合物中。将所得混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。然后加入氰基硼氢化钠(0.018g)，将混合物温热至室温，且搅拌2小时。将反应混合物加载至C18柱(Varian 10g)。柱用水(50mL)洗涤，且用甲醇(50mL)洗脱。合并馏分，蒸发，且经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨溶液洗脱)纯化。将残余物溶解在THF(2mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.047mL)，且将混合物搅拌过夜。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.07g。m/z 618(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.18(d，J＝9.7Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.48(d，J＝7.7Hz，2H)，7.34(d，J＝7.9Hz，2H)，7.14(d，J＝8.2Hz，1H)，7.00(d，J＝7.9Hz，1H)，6.54(d，J＝10.0Hz，1H)，5.36(dd，J＝8.6，4.0Hz，1H)，4.31(s，2H)，3.75-3.58(m，6H)，3.33-2.97(m，10H)，2.67(s，3H)，2.11-1.67(m，4H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例18
(R)-7-(2-(2，5-二甲基-4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-羟基-2，5-二甲基苯甲酸
在-78℃将三溴化硼溶液(浓度为1M的DCM溶液，7.21mL)滴加至4-甲氧基-2，5-二甲基苯甲酸(1g)的DCM(5mL)悬浮液中。将反应混合物温热至RT，且搅拌过夜。将反应混合物冷却至-78℃，且加入三溴化硼溶液(浓度为1M的DCM溶液，7.21mL)。将反应混合物温热至RT，且搅拌过夜。将反应混合物小心倒在冰(～50mL)上。所得水溶液用DCM(5×50mL)萃取。合并有机溶液，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为棕色固体。收率为0.75g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ12.19(s，1H)，9.91(s，1H)，7.64(s，1H)，6.65(s，1H)，2.43(s，3H)，2.09(s，3H)。
b)4-羟基-2，5-二甲基苯甲酸甲酯
将乙酰氯(0.107mL)滴加至4-羟基-2，5-二甲基苯甲酸(实施例18，步骤a)(0.249g)的甲醇(15mL)溶液中，且将所得混合物在室温搅拌72h。然后加入乙酰氯(0.107mL)，将反应混合物加热至50℃，且在该温度搅拌过夜。浓缩反应混合物，且残余物经硅胶色谱(用1∶1异己烷∶乙酸乙酯至100％乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.25g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ10.04(s，1H)，7.64(s，1H)，6.67(s，1H)，3.74(s，3H)，2.42(s，3H)，2.09(s，3H)。
c)4-(2，2-二乙氧基乙氧基)-2，5-二甲基苯甲酸甲酯
将2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(0.31mL)加至4-羟基-2，5-二甲基苯甲酸甲酯(实施例18，步骤b)(0.25g)和碳酸铯(0.68g)在DMF(20mL)中的混合物中。将所得混合物在85℃搅拌16h。将反应混合物在水(200mL)和乙酸乙酯(100mL)之间分配。分离水相，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机溶液用水(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用异己烷至10∶1异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.26g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.75(s，1H)，6.64(s，1H)，4.86(t，J＝5.2Hz，1H)，4.04(d，J＝5.4Hz，2H)，3.88-3.58(m，7H)，2.58(s，3H)，2.20(s，3H)，1.25(t，J＝7.0Hz，6H)。
d)(4-(2，2-二乙氧基乙氧基)-2，5-二甲基苯基)甲醇
在0℃将氢化锂铝溶液(浓度为1M的THF溶液，1.17mL)滴加至4-(2，2-二乙氧基乙氧基)-2，5-二甲基苯甲酸甲酯(实施例18，步骤c)(0.231g)的THF(20mL)溶液中。将所得混合物温热至RT，且搅拌1h。小心加入乙醇(0.5mL)，且浓缩反应混合物。将残余物在1M NaOH(50mL)和乙酸乙酯(100mL)之间分配。分离出水层，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.20g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.08(s，1H)，6.66(s，1H)，4.85(t，J＝5.3Hz，1H)，4.60(s，2H)，4.00(d，J＝5.2Hz，2H)，3.84-3.58(m，4H)，2.33(s，3H)，2.20(s，3H)，1.25(t，J＝7.0Hz，6H)。1个可交换的质子没有观察。
e)(9-(2-(4-(羟基甲基)-2，5-二甲基苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
将(4-(2，2-二乙氧基乙氧基)-2，5-二甲基苯基)甲醇(实施例18，步骤d)(0.2g)在乙酸(5mL)和水(5mL)的混合物中的溶液在65℃加热1h，且冷却至RT。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)中，且用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。将残余物重新溶解在甲醇(5mL)中，加入乙酸(5mL)，接着加入(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.35g)。将所得混合物搅拌15min，然后加入氰基硼氢化钠(0.07g)，且将混合物搅拌过夜。蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(50mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)之间分配。分离各层，且水相用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.12g。m/z 460(M+H)+(APCI)。
f)2，5-二甲基-4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯甲醛
将二氧化锰(0.32g)加至(9-(2-(4-(羟基甲基)-2，5-二甲基苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例18，步骤e)(0.17g)的DCM(10mL)溶液中。将所得混合物加热回流4h。反应混合物通过硅藻土来过滤，且滤垫用DCM(2×50mL)洗涤。合并母液和洗涤液，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.17g。m/z 458(M+H)+(APCI)。
g)(R)-7-(2-(2，5-二甲基-4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2，5-二甲基-4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯甲醛(实施例18，步骤f)(0.08g)加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.07g)和乙酸(0.010mL)在甲醇(2mL)中的混合物中。将混合物搅拌30min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.016g)，且将混合物搅拌2h。真空蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(50mL)和磷酸缓冲液(pH7.2)(50mL)之间分配。分离出水层，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至92∶8∶0.8DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.069g。m/z668(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.34-11.14(m，1H)，7.92(s，1H)，7.26(s，1H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.76(d，J＝8.2Hz，1H)，4.94(t，J＝6.5Hz，1H)，4.39-4.31(m，2H)，4.23-4.09(m，2H)，3.78-3.63(m，6H)，3.61-3.55(m，2H)，3.49-3.20(m，4H)，3.13-3.03(m，2H)，2.68(s，3H)，2.33(s，3H)，2.21-2.01(m，5H)，1.94-1.78(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例19
(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-(溴甲基)-5-氟苯基)乙酸
将过氧苯甲酰(0.05g)加至2-(3-氟-5-甲基苯基)乙酸(0.518g)和N-溴琥珀酰亚胺(0.6g)在DCM(10mL)中的混合物中。将反应混合物加热回流1h。加入DCM(10mL)和水(20mL)，且分离有机相。有机层用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物用甲苯研磨，且过滤除去所得白色固体。真空蒸发母液，得到副标题化合物，其为白色固体，所述固体无需进一步纯化即用于下一步。收率为0.38g。
b)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
在0℃将硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，3.85mL)滴加至2-(3-(溴甲基)-5-氟苯基)乙酸(实施例19，步骤a)(0.38g)的THF(10mL)溶液中。将所得混合物温热至RT，且搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃，且滴加甲醇(1mL)直到不再冒泡。真空蒸发溶剂，且将残余物重新溶解在MeCN(10mL)中。然后加入(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.61g)，接着加入三乙胺(0.54mL)，且将所得混合物搅拌70h。然后真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用99∶1∶0.1至94.5∶5∶0.5 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为黄色泡沫状物。收率为0.57g。m/z 434(M+H)+(APCI)。
c)2-(3-氟-5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
在0℃将TFA(0.08mL)加至(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例19，步骤b)(0.46g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.68g)，且将混合物在RT搅拌45min。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)，且将混合物搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水洗涤，用乙酸(0.1mL)酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.4g。m/z 432(M+H)+(APCI)。
d)(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2-(3-氟-5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例19，步骤c)(0.2g)的甲醇(3mL)溶液加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.18g)和乙酸(0.04mL)在甲醇(0.5mL)中的混合物中。将所得混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。然后加入氰基硼氢化钠(0.03g)，将混合物温热至RT，且搅拌2h。真空蒸发溶剂，且经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.018g。m/z 642(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.89(s，1H)，7.26-7.12(m，3H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.94-4.85(m，1H)，4.26-4.13(m，2H)，3.74-3.59(m，6H)，3.35-2.94(m，10H)，2.67(s，3H)，2.06-1.91(m，2H)，1.83-1.68(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例20
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-(2-(4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-(羟基甲基)苯基)乙醇
历时5min将氢化锂铝(浓度为1M的乙醚溶液，5.55mL)滴加至搅拌的在冰浴中冷却的3-(2-羟基乙基)苯甲酸甲酯(1.0g)的四氢呋喃(15mL)溶液中。1h后，反应混合物用甲醇淬灭，且真空蒸发。经硅胶色谱(先后用乙酸乙酯∶异己烷2∶1和乙酸乙酯洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.5g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.31(t，J＝7.7Hz，1H)，7.26-7.20(m，2H)，7.16(d，J＝7.7Hz，1H)，4.67(s，2H)，3.86(t，J＝6.9Hz，2H)，2.87(t，J＝6.9Hz，2H)。2个可交换的质子没有观察。
b)3-(2-羟基乙基)苯甲醛
在室温将二氧化锰(IV)(2.0g)加至搅拌的2-(3-(羟基甲基)苯基)乙醇(实施例20，步骤a)(0.50g)的DCM(10mL)溶液中。6h后，反应混合物通过硅藻土来过滤(用DCM洗脱)。真空蒸发溶液，得到副标题化合物，其为胶状物。直接使用。收率为0.46g。
c)2-(3-(二乙氧基甲基)苯基)乙醇
将氯化铵(0.08g)加至3-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例20，步骤b)(0.45g)和三乙氧基甲烷(0.55g)的EtOH(8mL)溶液中，且将反应混合物在70℃加热3h。冷却后，将反应混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。乙酸乙酯溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.24g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.25(m，3H)，7.22-7.16(m，1H)，5.50-5.47(m，1H)，3.93-3.82(m，2H)，3.71-3.47(m，4H)，2.94-2.86(m，2H)，1.29-1.21(m，6H)。1个可交换的质子没有观察。
d)甲磺酸3-(二乙氧基甲基)苯乙基酯
将甲磺酰氯(0.18g)的二氯甲烷(0.2mL)溶液加至搅拌的在冰浴中冷却的2-(3-(二乙氧基甲基)苯基)乙醇(实施例20，步骤c)(0.23g)和三乙胺(0.429mL)的二氯甲烷(2.5mL)溶液中。1h后，将反应混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。乙酸乙酯层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.28g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.40-7.29(m，3H)，7.19(d，J＝7.4Hz，1H)，5.47(s，1H)，4.42(t，J＝6.9Hz，2H)，3.67-3.48(m，4H)，3.07(t，J＝6.9Hz，2H)，2.86(s，3H)，1.24(t，J＝6.8Hz，6H)。
e)(9-(3-(二乙氧基甲基)苯乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将甲磺酸3-(二乙氧基甲基)苯乙基酯(实施例20，步骤d)(0.30g)的乙腈(1.5mL)溶液加至搅拌的(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例9，步骤b)(0.391g)和三乙胺(0.415mL)的乙腈(1.5mL)溶液中，且将溶液在70℃加热48h。冷却后，真空蒸发溶液，且加载至硅胶柱用于纯化(用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺60∶40∶5洗脱)，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.2g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.30-7.24(m，3H)，7.14(d，J＝7.6Hz，1H)，7.11(d，J＝3.7Hz，1H)，6.69(dd，J＝3.7Hz，1.1Hz，1H)，5.46(s，1H)，3.78-3.71(m，4H)，3.65-3.49(m，6H)，2.82-2.77(m，2H)，2.65-2.57(m，4H)，2.50(s，3H)，2.48-2.39(m，2H)，1.94-1.86(m，2H)，1.67-1.56(m，2H)，1.23(t，J＝7.2Hz，6H)。
f)3-(2-(4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)苯甲醛
将甲酸(2mL)加至搅拌的在冰浴中冷却的(9-(3-(二乙氧基甲基)苯乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例20，步骤e)(0.20g)在四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中的溶液中。10min后，真空蒸发反应混合物，加入甲苯，且真空蒸发反应混合物。将残余物溶解在乙腈中，然后真空蒸发，且重复该操作，得到副标题化合物，其为油状物，所述油状物直接使用。收率为0.16g。m/z 413(M+H)+(APCI)。
g)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-(2-(4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将乙酸(0.033mL)加至搅拌的3-(2-(4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)苯甲醛(实施例20，步骤f)(0.17g)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.15g)的甲醇(10mL)溶液中。2min后，加入氰基硼氢化钠(0.10g)，且将反应混合物在室温搅拌过夜。将甲醇溶液浓缩至～3mL，且用乙酸乙酯稀释。形成胶状沉淀物。滗出乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，且用硫酸钠干燥。将胶状物溶解在少量甲醇中，且加至乙酸乙酯中。过滤乙酸乙酯，且真空蒸发，得到白色固体。将固体溶解在甲醇中，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为15-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有纯产物的馏分，且蒸发至干。用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.11g。m/z 623(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.67(s，1H)，10.23(s，1H)，9.85-9.75和9.61-9.50(m，总计1H)，9.18-8.98(m，2H)，7.45-7.31(m，4H)，7.29-7.24(m，1H)，6.89(d，J＝7.4Hz，1H)，6.86-6.83(m，1H)，6.75(d，J＝7.4Hz，1H)，6.48-6.44(m，1H)，4.93-4.85(m，1H)，4.21-4.14(m，2H)，3.74-3.64(m，4H)，3.53(s，2H)，3.48-3.40(m，2H)，3.36-3.27(m，2H)，3.08-2.92(m，6H)，2.47(s，3H)，2.16-2.08(m，2H)，1.74-1.61(m，2H)。
实施例21
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-((5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-基)甲基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛
在20℃历时20分钟将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(2.82g)逐份加至搅拌的2-(噻吩-2-基)乙醇(2g)和咪唑(1.275g)的DMF(20mL)溶液中。将混合物在20℃搅拌18小时，然后在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。残余物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为1-4％乙酸乙酯/异己烷)纯化。将残余物(2.7g)溶解在THF(50mL)中，将溶液冷却至-78℃，历时10分钟滴加正丁基锂(浓度为2.5M的己烷溶液，5.06mL)，且将所得混合物在0℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至-78℃，且历时5分钟滴加DMF(5.7mL)。将混合物在20℃搅拌3小时。将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配，有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用7％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为2.3g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.83(s，1H)，7.61(d，1H)，6.96(d，1H)，3.86(t，2H)，3.07(t，2H)，0.88(s，9H)，0.02(s，6H)。
b)2-(5-(二乙氧基甲基)噻吩-2-基)乙醇
在氮气下将5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛(实施例21，步骤a)(1.37g)、氯化铵(0.135g)和原甲酸三乙酯(0.928mL)在乙醇(15mL)中的混合物加热回流3小时。减压除去大部分乙醇，且将残留混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。将残余物溶解在THF(20mL)中，且历时1分钟滴加四丁基氟化铵(浓度为1M的THF溶液，5.07mL)。将混合物在室温静置30分钟。减压除去溶剂，且残余物通过快速硅胶色谱(用25％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.940g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ6.85(d，1H)，6.73(d，1H)，5.64(s，1H)，4.79-4.74(m，1H)，3.62-3.43(m，6H)，2.87(t，2H)，1.13(t，6H)。
c)5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-甲醛
2-(5-(二乙氧基甲基)噻吩-2-基)乙醇(实施例21，步骤b)(0.54g)的二氯甲烷(20mL)溶液用三乙胺(0.359mL)处理，且将混合物在冰浴中冷却。然后历时2分钟滴加甲磺酰氯(0.183mL)的二氯甲烷(3mL)溶液，且将反应混合物在0℃搅拌1小时。混合物用水洗涤，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在乙腈(7mL)和DMF(1mL)的混合物中，加入三乙胺(0.654mL)，接着加入(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.5g)，且在70℃加热10小时。将混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在THF(5mL)中，在冰浴中冷却，加入甲酸(4mL)，接着加入水(1mL)。将混合物在0℃静置10分钟。减压除去溶剂，残余物与甲苯共沸2次，且与乙腈共沸2次。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％三乙胺和2％甲醇/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.52g。m/z 420(M+H)+(APCI)。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-((5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-基)甲基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.22g)的甲醇(8mL)溶液用乙酸(0.041mL)处理，接着用5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-甲醛(实施例21，步骤c)(0.3g)的甲醇(2mL)溶液处理。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.067g)处理。然后将混合物在室温搅拌18小时。减压蒸发大部分甲醇，且将残余物在THF(50mL)、盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需产物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.08g。m/z 630(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.92(s，1H)，7.14(d，1H)，6.94-6.88(m，2H)，6.76(d，1H)，4.91-4.85(m，1H)，4.37(s，2H)，3.70(s，4H)，3.66(s，2H)，3.40-3.30(m，4H)，3.26-3.07(m，4H)，3.04-3.02(m，2H)，2.68(s，3H)，2.09-1.99(m，2H)，1.87-1.73(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例22
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将2-异丙基噻唑-4-甲酸(1g)和1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXi PharmaTech)(1.71g)的DMF(30mL)溶液在冰浴中冷却，且用三乙胺(2.442mL)处理，接着用HATU(2.89g)处理。移开冰浴，且将混合物在20℃搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用70％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为2g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.93(s，1H)，3.71-3.63(m，6H)，3.51-3.44(m，2H)，3.35-3.26(m，1H)，3.18-3.10(m，2H)，1.74-1.67(m，2H)，1.49-1.41(m，2H)，1.39(s，9H)，1.34(d，J＝7.6Hz，6H)。
b)(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐
将4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例22，步骤a)(2.3g)在二氯甲烷(40mL)和三氟乙酸(10mL)的混合物中的溶液在20℃静置30分钟。加入甲苯(50mL)，且蒸发溶剂，然后再用甲苯(50mL)重复该操作。残余物用乙醚研磨。然后将胶状物溶解在乙腈中，且蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为1.64g。m/z 310(M+H)+(APCI)。
c)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.85g)和2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.432g)在乙腈(10mL)中的混合物在20℃用三乙胺(0.616mL)处理，然后搅拌2小时。减压蒸发溶剂，将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为1％三乙胺和3％甲醇/二氯甲烷)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.71g。m/z 444(M+H)+(APCI)。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例22，步骤c)(0.3g)的二氯甲烷(10mL)溶液用三氟乙酸(0.052mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.402g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，用乙酸(0.039mL)处理，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，且加至0℃的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.2g)和乙酸(0.039mL)的甲醇(10mL)溶液中。加入氰基硼氢化钠(0.064g)，且将混合物在室温搅拌18小时。减压蒸发大部分甲醇，且将残余物在THF(50mL)、盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需产物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.170g。m/z 652(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.94(s，1H)，7.45-7.31(m，4H)，6.93(d，J＝31.1Hz，1H)，6.77(d，J＝24.6Hz，1H)，4.96-4.87(m，1H)，4.27(s，2H)，3.70(s，4H)，3.65(s，2H)，3.35-2.97(m，11H)，2.08-1.96(m，2H)，1.84-1.67(m，2H)，1.35(d，J＝20.7Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例23
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例22，步骤c)(0.159g)的DCM(10mL)溶液用三氟乙酸(0.028mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.213g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，用乙酸(0.039mL)处理，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，且加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.12g)和乙酸(0.021mL)的甲醇(10mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用三乙酰氧基硼氢化钠(0.114g)处理，然后将混合物在室温搅拌18小时。减压除去甲醇，将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％‘880’氨水和8％甲醇/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.127g。m/z 760(M+H)+(APCI)。
b)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例23，步骤a)(0.127g)的THF(4mL)溶液用三乙胺三氢氟酸盐(0.035mL)的甲醇(1mL)溶液处理，且将所得混合物在20℃静置18小时。减压除去溶剂，且粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.085g。m/z 646(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.16(d，J＝36.5Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.45-7.33(m，4H)，7.13(d，J＝26.1Hz，1H)，6.99(d，J＝24.2Hz，1H)，6.54(d，J＝24.2Hz，1H)，5.38-5.32(m，1H)，4.29(s，2H)，3.70(s，4H)，3.64(s，2H)，3.32-3.24(m，3H)，3.21-3.00(m，8H)，2.08-1.97(m，2H)，1.82-1.68(m，2H)，1.34(d，J＝25.7Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例24
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)乙醇
将碳酸铯(8.84g)加至3-(2-羟基乙基)苯酚(2.5g)和2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(3.74g)的DMF(50mL)溶液中，且将所得混合物在90℃搅拌过夜，然后冷却。将混合物倒入水中，且用乙酸乙酯萃取3次。合并的萃取物用水和盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，且通过快速硅胶色谱(用乙醚/异己烷梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为浅黄色油状物。收率为3.0g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.21-7.16(m，1H)，6.82-6.72(m，3H)，4.80(t，J＝5.3Hz，1H)，3.97(d，J＝5.1Hz，2H)，3.81(t，J＝6.5Hz，2H)，3.78-3.69(m，2H)，3.65-3.56(m，2H)，2.80(t，J＝6.5Hz，2H)，1.21(t，J＝6.9Hz，6H)。1个可交换的质子没有观察。
b)2-(3-(2-羟基乙基)苯氧基)乙醛
将浓盐酸(1.5mL)加至2-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)乙醇(实施例24，步骤a)(0.256g)的1，4-二氧杂环己烷(3mL)溶液中，且将所得混合物在室温搅拌1.5小时。然后溶液用水稀释，且用乙酸乙酯萃取2次。合并的萃取物用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到副标题化合物，其为白色泡沫状物。收率为0.150g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.86(s，1H)，7.28-7.13(m，1H)，6.92-6.66(m，3H)，4.57(s，2H)，3.87(t，J＝6.5Hz，2H)，2.86(t，J＝6.5Hz，2H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(2-(3-(2-羟基乙基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
2-(3-(2-羟基乙基)苯氧基)乙醛(实施例24，步骤b)(0.143g)和(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.314g)的甲醇(10mL)悬浮液用乙酸(0.045mL)处理，且在室温搅拌30分钟。在冰-水中冷却混合物，用三乙酰氧基硼氢化钠(0.254g)处理，且搅拌3天，使用冰浴以终止。所得溶液通过快速硅胶色谱(用1∶15∶84三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱)纯化，得到粗产物(0.243g)。通过快速硅胶色谱(用1∶5∶94三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱)来进行第二次纯化，得到稍有不纯的副标题化合物，其为褐色胶状物。收率为0.122g。m/z 446(M+H)+(APCI)。
d)2-(3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯基)乙醛
在冰-水中冷却(9-(2-(3-(2-羟基乙基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例24，步骤c)(0.152g)的DCM(5mL)溶液，用三氟乙酸(0.039mL)处理，且搅拌5分钟。加入戴斯-马丁高碘剂(0.221g)，从冷却浴中取出混合物，且在室温搅拌25分钟。反应混合物通过加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)来淬灭，且将所得两相混合物搅拌10分钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取2次，且合并的有机萃取物用盐水洗涤。加入乙酸(0.1mL)，然后经酸化的萃取物用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到副标题化合物，其为褐色胶状物。收率为0.118g。m/z 444(M+H)+(APCI)。
e)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.105g)的甲醇(2mL)溶液用乙酸(0.023mL)处理，且搅拌5分钟。然后加入2-(3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯基)乙醛(实施例24，步骤d)(0.117g)的甲醇(3mL)溶液，将所得混合物在室温搅拌1小时，然后在冰-水中冷却，且用三乙酰氧基硼氢化钠(0.085g)处理。将混合物在冰中搅拌1小时，然后再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.086g)。将混合物在冰中搅拌1小时，然后再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.169g)，且将混合物搅拌1小时。再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.506g)，将混合物搅拌过夜，且将其缓慢温热至室温。第二天，在冰-水中再次冷却混合物，用三乙酰氧基硼氢化钠(0.254g)处理，且在冰-水中搅拌45分钟，然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈(3mL)和水(1.5mL)的混合物中，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发2次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤收集所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.011g。m/z654(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ11.68(宽单峰，1H)，10.22(宽单峰，1H)，8.00(s，1H)，7.29(t，J＝7.9Hz，1H)，6.96-6.84(m，4H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，6.48(宽单峰，1H)，4.93-4.85(m，1H)，4.36-4.27(m，2H)，3.83-3.61(m，6H)，3.60-3.51(m，2H)，3.50-3.42(m，2H)，3.24-3.02(m，6H)，3.02-2.84(m，2H)，2.69(s，3H)，2.15-2.06(m，2H)，1.88-1.67(m，2H)。3个可交换的质子没有观察。
实施例25
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(2-(三氟甲基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基(2-(三氟甲基)噻唑-4-基)甲酮三氟乙酸盐
1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXi PharmaTech)(0.594g)和2-(三氟甲基)噻唑-4-甲酸(0.4g)的DMF(10mL)溶液用三乙胺(0.848mL)处理，且冷却至0℃。加入HATU(1.003g)，且将混合物在20℃搅拌2小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用40％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化，得到产物，其为游离碱。将其溶解在二氯甲烷(40mL)中，且用三氟乙酸(10mL)处理，然后将混合物在20℃静置1小时。加入甲苯(60mL)，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为0.740g。m/z 336(M+H)+(APCI)。
b)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(三氟甲基)噻唑-4-基)甲酮
将2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.354g)加至1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基(2-(三氟甲基)噻唑-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例25，步骤a)(0.74g)和三乙胺(0.689mL)的乙腈(15mL)溶液中，且将混合物在20℃搅拌2小时。减压蒸发溶剂，将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％三乙胺和3％甲醇/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.640g。m/z 470(M+H)+(APCI)。
c)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(2-(三氟甲基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(三氟甲基)噻唑-4-基)甲酮(实施例25，步骤b)(0.211g)的二氯甲烷(10mL)溶液用三氟乙酸(0.035mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.266g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，用乙酸(0.026mL)处理，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，且加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.150g)和乙酸(0.026mL)的甲醇(10mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用三乙酰氧基硼氢化钠(0.143g)处理，然后将混合物在室温搅拌18小时。减压除去甲醇，将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％‘880’氨水和8％甲醇/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.11g。m/z786(M+H)+(APCI)。
d)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(2-(三氟甲基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将三乙胺三氢氟酸盐(0.030mL)的甲醇(1mL)溶液加至(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(2-(三氟甲基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例25，步骤c)(0.11g)的THF(4mL)溶液中，且将所得溶液在20℃静置18小时。减压除去溶剂，且粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物(0.075g)。m/z 672(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.78(s，1H)，8.52(s，1H)，8.18(d，J＝49.2Hz，1H)，7.45-7.33(m，4H)，7.14(d，J＝21.8Hz，1H)，7.00(d，J＝19.8Hz，1H)，6.54(d，J＝21.9Hz，1H)，5.39-5.33(m，1H)，4.29(s，2H)，3.75-3.63(m，4H)，3.59(s，2H)，3.28(t，J＝8.1Hz，2H)，3.21-3.00(m，8H)，2.10-1.97(m，2H)，1.84-1.67(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例26
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-(三氟甲基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(三氟甲基)噻唑-4-基)甲酮(实施例25，步骤b)(0.268g)的二氯甲烷(10mL)溶液用三氟乙酸(0.044mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.339g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，用乙酸(0.033mL)处理，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，且加至0℃的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.15g)和乙酸(0.033mL)的甲醇(10mL)溶液中。加入氰基硼氢化钠(0.054g)，且将混合物在室温搅拌18小时。减压蒸发大部分甲醇，且将残余物在THF(50mL)、盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.13g。m/z 678(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，8.74(s，1H)，8.52(s，1H)，7.45-7.31(m，4H)，6.93(d，J＝41.1Hz，1H)，6.77(d，J＝36.9Hz，1H)，4.97-4.87(m，1H)，4.27(s，2H)，3.74-3.69(m，2H)，3.69-3.64(m，2H)，3.59(s，2H)，3.25(t，J＝14.5Hz，2H)，3.19-2.99(m，8H)，2.09-1.97(m，2H)，1.84-1.69(m，2H)。4个可交换的质子没有观察。
实施例27
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)叔丁基二甲基(2-(噻吩-3-基)乙氧基)甲硅烷
将叔丁基氯二甲基甲硅烷(3.88g)加至搅拌的在冰浴中冷却的2-(噻吩-3-基)乙醇(3.00g)和1H-咪唑(4.78g)的DMF(30mL)溶液中。16h后，反应混合物用乙酸乙酯(300mL)稀释，用水(3×150mL)洗涤，且真空蒸发。经硅胶色谱(先后用异己烷和1∶5乙酸乙酯∶异己烷洗脱)纯化，收集副标题化合物，其为油状物。收率为5.2g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.23(dd，J＝2.9，4.9Hz，1H)，7.01-6.99(m，1H)，6.97(dd，J＝1.3，4.9Hz，1H)，3.80(t，J＝6.8Hz，2H)，2.85(t，J＝6.8Hz，2H)，0.88(s，9H)，0.01(s，6H)。
b)4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛与3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛的混合物
将正丁基锂(浓度为1.6M的己烷溶液，7mL)滴加至搅拌的在-78℃冷却的叔丁基二甲基(2-(噻吩-3-基)乙氧基)甲硅烷(实施例27，步骤a)(2.210g)的四氢呋喃(60mL)溶液中。加完后，将反应混合物在冰浴中搅拌1h，然后冷却至-78℃。历时5min滴加N，N-二甲基甲酰胺(9.00g)，且再过10min后，移开冷却浴。1h后，将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配，乙酸乙酯溶液用水洗涤2次，用盐水洗涤1次，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用1∶20乙酸乙酯∶异己烷洗脱)纯化，得到4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛和3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛的4∶1混合物(通过1H NMR来确定)，其为油状物。收率为1.3g。
4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.93(d，J＝1.2Hz，1H)，7.71(d，J＝1.5Hz，1H)，7.52(s，1H)，3.92-3.84(m，2H)，2.91(t，J＝6.5Hz，2H)，0.92(s，9H)，0.04(s，6H)。
3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.08(s，1H)，7.69(d，J＝5.0Hz，1H)，7.09(d，J＝5.0Hz，1H)，3.92-3.84(m，2H)，3.22(t，J＝6.5Hz，2H)，0.89(s，9H)，-0.01(s，6H)。
c)(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例9，步骤b)(0.230g)加至搅拌的4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛和3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛的4∶1混合物(实施例27，步骤b)(0.20g)和AcOH(0.033mL)的N-甲基吡咯烷-2-酮(3mL)溶液中。5min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.35g)。16h后，加入水，且混合物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用水洗涤3次，且真空蒸发。经硅胶色谱(用20∶80∶5乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺洗脱)纯化，分离到两种异构产物，且得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.21g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.09(d，J＝3.8Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.75(s，1H)，6.69(d，J＝3.8Hz，1H)，3.78(t，J＝6.6Hz，2H)，3.76-3.69(m，4H)，3.64(s，2H)，3.56(s，2H)，2.76(t，J＝7.1Hz，2H)，2.62-2.54(m，2H)，2.50(s，3H)，2.41-2.32(m，2H)，1.90-1.82(m，2H)，1.63-1.52(m，2H)，0.88(s，9H)，0.01(s，6H)。
d)(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将四丁基氟化铵(浓度为1M的四氢呋喃溶液，2mL)加至(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例27，步骤c)(0.65g)的四氢呋喃(7mL)溶液中。1h后，真空蒸发溶液。经硅胶色谱(用20∶1乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.45g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.09(d，J＝3.7Hz，1H)，6.92(s，1H)，6.77(s，1H)，6.69(dd，J＝1.0，3.7Hz，1H)，3.83(t，J＝6.4Hz，2H)，3.76-3.70(m，4H)，3.66(s，2H)，3.56(s，2H)，2.82(t，J＝6.4Hz，2H)，2.62-2.55(m，2H)，2.50(s，3H)，2.43-2.33(m，2H)，1.91-1.82(m，2H)，1.65-1.50(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
e)2-(5-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.35g)加至搅拌的(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例27，步骤d)(0.19g)和三氟乙酸(0.052mL)的DCM(5mL)溶液中。1h后，加入乙酸乙酯(30mL)，接着加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)和饱和碳酸氢钠溶液(5mL)的混合物。充分振摇反应混合物，且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。加入乙酸(0.07mL)，溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发(浴温为～30℃)，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.19g。直接使用。
f)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将乙酸(0.039g)加至搅拌的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.17g)和2-(5-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛(实施例27，步骤e)(0.19g)的MeOH(10mL)溶液中。1min后，加入氰基硼氢化钠(0.10g)。3h后，将反应混合物真空浓缩至～2mL，加入THF(20mL)，且溶液用盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(2mL)的混合物洗涤。有机溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将固体溶解在甲醇中，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发至干。加入乙腈，真空蒸发溶液，且重复该操作。加入乙醚，且研磨胶状物，得到标题化合物，其为固体。收率为0.097g。m/z 629(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ11.67(s，1H)，10.23(s，1H)，9.82-9.67(m，1H)，8.93-8.67(m，2H)，7.46(s，1H)，7.25-7.22(m，1H)，7.17(s，1H)，6.93(d，J＝8.8Hz，1H)，6.77(d，J＝8.8Hz，1H)，6.60-6.46(m，1H)，6.51-6.46(m，1H)，4.92-4.86(m，1H)，4.68-4.51(m，2H)，3.74-2.88(m，16H)，2.46(s，3H)，2.15-2.04(m，2H)，1.69-1.56(m，2H)。
实施例28
(R)-5-(2-(3-氟-5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2-(3-氟-5-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例19，步骤c)(0.2g)的甲醇(3mL)溶液加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.23g)和乙酸(0.027mL)在甲醇(3mL)中的混合物中。将所得混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。然后加入氰基硼氢化钠(0.044g)，将混合物温热至RT，且搅拌2h。真空蒸发溶剂，且经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。将残余物溶解在THF(3mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.11mL)，且将混合物搅拌过夜。真空浓缩反应混合物。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.021g。m/z 636(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.15(d，J＝10.0Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.29-7.17(m，3H)，7.13(d，J＝8.2Hz，1H)，6.99(d，J＝8.2Hz，1H)，6.55(d，J＝9.7Hz，1H)，5.37-5.29(m，1H)，4.35-4.19(m，2H)，3.75-3.59(m，6H)，3.34-2.98(m，10H)，2.67(s，3H)，2.06-1.93(m，2H)，1.83-1.69(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例29
(R)-7-(2-(4-氟-3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(4-氟-3-甲基苯基)乙酸
将2-(4-氟-3-甲基苯基)乙腈(1g)和氢氧化钠(0.8g)在甲醇(10mL)和水(3mL)的混合物中混合。然后将所得混合物加热回流过夜。真空浓缩反应混合物，且将残余物溶解在水(25mL)中。水相用乙醚(2×25mL)洗涤，用浓盐酸酸化，且用乙醚(3×25mL)萃取。合并的有机溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为1.1g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ12.31(s，1H)，7.20-6.99(m，3H)，3.52(s，2H)，2.21(s，3H)。
b)(9-(2-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将过氧苯甲酰(0.058g)加至2-(4-氟-3-甲基苯基)乙酸(0.6g)(实施例29，步骤a)和N-溴琥珀酰亚胺(0.7g)在DCM(10mL)中的混合物中。将所得混合物加热回流4h。加入DCM(10mL)和水(20mL)，且分离有机相。有机相用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物重新溶解在THF(10mL)中，且在冰浴中冷却。滴加硼烷-二甲硫醚溶液(浓度为2M的THF溶液，4.46mL)，且将混合物搅拌1h。小心加入甲醇(2mL)，且不再冒泡后，真空蒸发溶剂。将残余物重新溶解在乙腈(10mL)中，且加入(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例9，步骤b)(0.7g)，接着加入三乙胺(1.49mL)。将所得混合物搅拌过夜，然后真空浓缩。经硅胶色谱(用99∶1∶0.1至97∶3∶0.3 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为泡沫状物。收率为0.46g。m/z 433(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.22-7.16(m，2H)，7.14-7.07(m，1H)，6.97(dd，J＝10.0，8.5Hz，1H)，6.80-6.76(m，1H)，3.67-3.57(m，6H)，3.50-3.45(m，4H)，2.70(t，J＝6.8Hz，2H)，2.46(s，3H)，2.41-2.35(m，4H)，1.76-1.67(m，2H)，1.55-1.45(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(R)-7-(2-(4-氟-3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将TFA(0.032mL)加至(9-(2-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例29，步骤b)(0.18g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.27g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(25mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(25mL)萃取。合并的有机溶液用盐水洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.012mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.17g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.039g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.11g。m/z 641(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.47-7.35(m，2H)，7.29-7.17(m，2H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.82-6.75(m，2H)，4.91(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，4.32-4.20(m，2H)，3.74-3.61(m，4H)，3.53(s，2H)，3.28-2.93(m，10H)，2.46(s，3H)，2.05-1.97(m，2H)，1.82-1.74(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例30
(R)-5-(9-(3-(2-(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基氨基)乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯二(三氟乙酸盐)
a)4-(5-(甲氧基羰基)噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXi PharmaTech)(0.6g)和噻吩-2，5-二羧酸(1.7g)的DMF(10mL)溶液用三乙胺(2.75mL)处理，且冷却至0℃。加入HATU(1.013g)，且将混合物在20℃搅拌2小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水[含有乙酸(2mL)]之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。残余物通过快速硅胶色谱(使用1％乙酸/乙酸乙酯作为溶剂)纯化。将该物质溶解在THF(30mL)中，用羰基二咪唑(0.332g)处理，且将混合物在45℃静置1小时。加入甲醇(20mL)，且将反应混合物在50℃加热30分钟。减压除去溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用40％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.45g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.72(d，J＝3.8Hz，1H)，7.40(d，J＝3.8Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.72-3.68(m，2H)，3.63-3.59(m，2H)，3.58-3.51(m，2H)，3.49(s，2H)，3.12-3.04(m，2H)，1.77-1.70(m，2H)，1.46-1.40(m，2H)，1.39(s，9H)。
b)5-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯三氟乙酸盐
将三氟乙酸(10mL)加至4-(5-(甲氧基羰基)噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例30，步骤a)(0.45g)的二氯甲烷(40mL)溶液中，且将所得混合物在20℃静置1小时。加入甲苯(50mL)，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为0.46g。m/z 325(M+H)+(APCI)。
c)5-(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯
5-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯三氟乙酸盐(实施例30，步骤b)(0.46g)和2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.226g)的乙腈(10mL)溶液用三乙胺(0.44mL)处理，且将混合物在20℃搅拌2小时。减压蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％三乙胺和3％甲醇/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.41g。m/z 459(M+H)+(APCI)。
d)(R)-5-(9-(3-(2-(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基氨基)乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯二(三氟乙酸盐)
5-(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯(实施例30，步骤c)(0.262g)的二氯甲烷(10mL)溶液用三氟乙酸(0.044mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.339g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，用乙酸(0.033mL)处理，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，且加至0℃的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.15g)和乙酸(0.033mL)的甲醇(10mL)溶液中。加入氰基硼氢化钠(0.054g)，且将混合物在室温搅拌18小时。减压蒸发大部分甲醇，且将残余物在THF(50mL)、盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.175g。m/z 667(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.72(d，J＝3.8Hz，1H)，7.44-7.33(m，5H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.95-4.89(m，1H)，4.30(s，2H)，3.85(s，3H)，3.74-3.69(m，2H)，3.66-3.61(m，2H)，3.53(s，2H)，3.28-2.98(m，10H)，2.09-1.99(m，2H)，1.77(s，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例31
(R)-5-(9-(3-(2-(2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基)乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯二(三氟乙酸盐)
a)(R)-5-(9-(3-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基)乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯
5-(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯(实施例30，步骤c)(0.137g)的二氯甲烷(10mL)溶液用三氟乙酸(0.023mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.178g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，用乙酸(0.017mL)处理，且减压蒸发溶剂，得到粗中间体醛(0.13g)。将所述醛溶解在甲醇(2mL)中，且加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.10g)和乙酸(0.017mL)的甲醇(10mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用三乙酰氧基硼氢化钠(0.095g)处理，然后将混合物在室温搅拌18小时。减压除去甲醇，将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％‘880’氨水和9％甲醇/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.108g。m/z 775(M+H)+(APCI)。
b)(R)-5-(9-(3-(2-(2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基)乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯二(三氟乙酸盐)
(R)-5-(9-(3-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基)乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基羰基)噻吩-2-甲酸甲酯(实施例31，步骤a)(0.108g)的THF(4mL)溶液用三乙胺三氢氟酸盐(0.029mL)的甲醇(1mL)溶液处理，且将溶液在20℃静置18小时。减压除去溶剂，且粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.055g。m/z 661(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.18(d，J＝9.7Hz，1H)，7.72(d，J＝3.8Hz，1H)，7.45-7.32(m，5H)，7.14(d，J＝8.2Hz，1H)，7.00(d，J＝8.2Hz，1H)，6.54(d，J＝9.7Hz，1H)，5.40-5.34(m，1H)，4.30(s，2H)，3.85(s，3H)，3.75-3.70(m，2H)，3.66-3.61(m，2H)，3.53(s，2H)，3.29(t，J＝8.1Hz，2H)，3.22-3.01(m，8H)，2.10-1.99(m，2H)，1.78(s，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例32
(R)-7-(2-(3，4-二氟-5-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3，4-二氟苯基)乙醇
在0℃将硼烷-二甲硫醚溶液(浓度为2M的THF溶液，18.30mL)小心加至2-(3，4-二氟苯基)乙酸(2.1g)的THF(20mL)溶液中。将所得混合物温热至RT，且搅拌1h。将反应混合物在冰浴中冷却，且滴加甲醇(5mL)。对反应混合物进行搅拌直到不再冒泡，且真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用异己烷至4∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为1.92g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.14-7.00(m，2H)，6.98-6.90(m，1H)，3.85(t，J＝6.4Hz，2H)，2.82(t，J＝6.4Hz，2H)。1个可交换的质子没有观察。
b)2，3-二氟-5-(2-羟基乙基)苯甲醛
在-70℃将2，2，6，6-四甲基哌啶(6.15mL)加至正丁基锂的己烷溶液(1.6M，22.8mL)中。滴加2-(3，4-二氟苯基)乙醇(实施例32，步骤a)(1.92g)的THF(25mL)溶液。加入THF(25mL)，且将混合物在-70℃搅拌6h。然后加入DMF(4.7mL)，且将混合物在-70℃搅拌1h。然后将混合物温热至RT，且搅拌70h。加入HCl水溶液(2M，10mL)，接着加入乙酸乙酯(20mL)，且分离各层。水相用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用4∶1至2∶1异己烷∶乙醚梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为1.9g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.33(s，1H)，7.54-7.47(m，1H)，7.39-7.32(m，1H)，3.92-3.86(m，2H)，2.88(t，J＝6.3Hz，2H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(2，3-二氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例9，步骤b)(0.53g)加至2，3-二氟-5-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例32，步骤b)(0.25g)和乙酸(0.08mL)的甲醇(5mL)溶液中。将反应混合物搅拌30min，且在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.13g)，将混合物温热至RT，且搅拌18h。真空浓缩反应混合物。经硅胶色谱(用99∶1∶0.1至97∶3∶0.3DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.08g。m/z 451(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.18(d，J＝3.6Hz，1H)，7.14-7.06(m，1H)，7.04-6.99(m，1H)，6.80-6.77(m，1H)，4.34-4.29(m，1H)，3.68-3.57(m，6H)，3.53-3.46(m，4H)，2.70(t，J＝6.7Hz，2H)，2.47-2.34(m，7H)，1.77-1.67(m，2H)，1.55-1.45(m，2H)。
d)(R)-7-(2-(3，4-二氟-5-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将TFA(0.013mL)加至(9-(2，3-二氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例32，步骤c)(0.077g)的DCM(2mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.11g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(1mL)、饱和碳酸氢钠溶液(1mL)和乙酸乙酯(5mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(25mL)萃取。合并的有机溶液用盐水洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.005mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.045g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.016g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.052g。m/z659(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.46-7.37(m，1H)，7.28-7.23(m，1H)，7.20(d，J＝3.6Hz，1H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.81-6.74(m，2H)，4.91(dd，J＝8.1，5.0Hz，1H)，4.28-4.19(m，2H)，3.74-3.62(m，4H)，3.53(s，2H)，3.25(t，J＝7.9Hz，2H)，3.15-2.95(m，8H)，2.46(s，3H)，2.01-1.93(m，2H)，1.80-1.67(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例33
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((8-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)1-二苯基甲基氮杂环丁烷-3-酮
将三乙胺(24.7mL)加至1-二苯基甲基氮杂环丁烷-3-醇(5g)的DMSO(25mL)溶液中。滴加吡啶三氧化硫(18g)的DMSO(65mL)溶液，且将混合物在20℃搅拌90分钟。将混合物倒在冰/水上，用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用盐水洗涤3次，然后用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2％三乙胺/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为2.9g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.50-7.46(m，4H)，7.30(t，J＝11.4Hz，4H)，7.24-7.19(m，2H)，4.59(s，1H)，4.00(s，4H)。
b)1-二苯基甲基-3-(三甲基甲硅烷基氧基)氮杂环丁烷-3甲腈
在20℃和氮气下历时15分钟将四丁基氰化铵(0.283g)的二氯甲烷(50mL)溶液滴加至搅拌的1-二苯基甲基氮杂环丁烷-3-酮(实施例33，步骤a)(2.5g)和三甲基甲硅烷基氰化物(2.82mL)的二氯甲烷(50mL)溶液中。将混合物在20℃搅拌1小时。反应混合物用水洗涤，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为3.5g。无需纯化即直接使用。
c)3-(氨基甲基)-1-二苯基甲基氮杂环丁烷-3-醇
1-二苯基甲基-3-(三甲基甲硅烷基氧基)氮杂环丁烷-3甲腈(实施例33，步骤b)(3.5g)的THF(50mL)溶液用硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的THF溶液，20.8mL)处理，且在氮气下将所得混合物在70℃加热1小时。将混合物冷却至室温，且用甲醇(50mL)小心淬灭，接着用乙二胺(2.81mL)处理。将该混合物在20℃搅拌1小时，然后在55℃搅拌1小时。将混合物冷却至室温，且用四丁基氟化铵(浓度为1M的THF溶液，15.6mL)处理，然后在室温搅拌40分钟。减压蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为6至7％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺))纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.95g。m/z 269(M+H)+(APCI)。
d)N-((1-二苯基甲基-3-羟基氮杂环丁烷-3-基)甲基)-2-氯乙酰胺
在0℃历时30分钟将氯乙酰氯(0.846mL)滴加至剧烈搅拌的3-(氨基甲基)-1-二苯基甲基氮杂环丁烷-3-醇(实施例33，步骤c)(2.1g)/乙酸乙酯(100mL)和碳酸钾(3.03g)/水(100mL)的混合物中。将混合物在0℃再搅拌30分钟，然后用乙酸乙酯萃取，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为2.6g。m/z 345(M+H)+(APCI)。
e)2-二苯基甲基-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-酮
在氮气下历时90分钟将N-((1-二苯基甲基-3-羟基氮杂环丁烷-3-基)甲基)-2-氯乙酰胺(实施例33，步骤d)(2.6g)的THF(50mL)溶液滴加至剧烈搅拌的75℃的叔丁醇钾(浓度为1M的叔丁醇溶液，15.08mL)和THF(150mL)的溶液中。加完后，将混合物在75℃搅拌10分钟，然后冷却至室温。减压除去溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为2.05g。m/z 309(M+H)+(APCI)。
f)2-二苯基甲基-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷
将硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的THF溶液，10.7mL)加至2-二苯基甲基-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-酮(实施例33，步骤e)(2g)的无水THF(40mL)溶液中，且将所得溶液在70℃和氮气下搅拌50分钟。将混合物冷却至室温，且用甲醇(40mL)逐滴处理，接着用N1，N2-二甲基乙-1，2-二胺(3.43g)处理。将混合物在70℃加热6小时。减压除去溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％三乙胺和5％甲醇/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.35g。m/z 295(M+H)+(APCI)。
g)(2-二苯基甲基-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
在0℃将HATU(2.267g)一次性加至5-甲基噻吩-2-甲酸(0.652g)、2-二苯基甲基-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷(实施例33，步骤f)(1.35g)和三乙胺(1.917mL)的DMF(20mL)溶液中。移开冷却浴，且将混合物在室温搅拌2小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，然后用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为0.4至5％甲醇/二氯甲烷)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.5g。m/z 419(M+H)+(APCI)。
h)(5-甲基噻吩-2-基)(5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-基)甲酮盐酸盐
在0℃将氯甲酸1-氯乙基酯(0.508mL)滴加至(2-二苯基甲基-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例33，步骤g)(1.5g)的乙腈(30mL)溶液中。然后将混合物在氮气下加热回流1小时。减压除去溶剂，且将残余物溶解在甲醇(50mL)中。将该溶液在氮气下加热回流30分钟。减压除去溶剂，且残余物用乙酸乙酯(40mL)研磨，然后用乙腈(7mL)研磨，得到副标题化合物。收率为0.29g。m/z 253(M+H)+(APCI)。
i)(2-(3-(2-羟基乙基)苄基)-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
在20℃将2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.281g)加至(5-甲基噻吩-2-基)(5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-基)甲酮盐酸盐(实施例33，步骤h)(0.29g)和三乙胺(0.42mL)的乙腈(15mL)溶液中，且将所得混合物在20℃搅拌3小时。减压除去溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用3％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.32g。m/z 387(M+H)+(APCI)。
j)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((8-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(2-(3-(2-羟基乙基)苄基)-5-氧杂-2，8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例33，步骤i)(0.16g)的二氯甲烷(10mL)溶液用三氟乙酸(0.032mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.246g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，用乙酸(0.024mL)处理，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，且加至0℃的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.15g)和乙酸(0.024mL)的甲醇(10mL)溶液中。加入氰基硼氢化钠(0.039g)，且将混合物在室温搅拌18小时。减压蒸发大部分甲醇，且将残余物在THF(50mL)、盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.13g。m/z 595(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.26(s，1H)，7.42-7.29(m，4H)，7.24(d，J＝3.6Hz，1H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.82-6.75(m，2H)，4.95-4.88(m，1H)，4.36(s，2H)，4.09-3.97(m，4H)，3.87(s，2H)，3.73-3.69(m，2H)，3.66-3.62(m，2H)，3.24(t，J＝8.1Hz，2H)，3.15-2.97(m，4H)，2.46(s，3H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例34
(R)-7-(2-(2，6-二氟-3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(2，4-二氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将过氧苯甲酰(0.03g)加至NBS(0.53g)和2-(2，6-二氟-3-甲基苯基)乙酸(0.5g)在DCM(10mL)中的混合物中。将反应混合物加热回流4h。加入DCM(10mL)和水(20mL)，且分离有机相。有机相用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。将残余物重新溶解在THF(10mL)中，且在冰浴中冷却。滴加硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，4mL)，且将混合物搅拌1h。小心滴加甲醇(2mL)，且不再冒泡后，蒸发溶剂。将残余物重新溶解在乙腈(10mL)中，且加入(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例9，步骤b)(0.8g)，接着加入三乙胺(1.12mL)。将所得混合物搅拌过夜，蒸发，且经硅胶色谱(用99∶1∶0.1至97∶3∶0.3DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为洁净泡沫状物。收率为0.37g。m/z 451(M+H)+(APCI)。
b)2-(2，6-二氟-3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
在0℃将TFA(0.05mL)加至(9-(2，4-二氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例34，步骤a)(0.27g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.38g)，且将混合物在RT搅拌45min。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)，且将混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.27g。m/z 449(M+H)+(APCI)。
c)(R)-7-(2-(2，6-二氟-3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2-(2，6-二氟-3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例34，步骤b)(0.135g)的甲醇(3mL)溶液加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.11g)和乙酸(0.015mL)在甲醇(0.5mL)中的混合物中。将所得混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。然后加入氰基硼氢化钠(0.025g)，将混合物温热至RT，且搅拌2h。浓缩反应混合物，且经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.1g。m/z 659(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.64-7.50(m，1H)，7.26-7.12(m，2H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.84-6.69(m，2H)，4.91(dd，J＝8.5，4.9Hz，1H)，4.30(s，2H)，3.77-3.47(m，6H)，3.29-2.99(m，10H)，2.46(s，3H)，2.10-1.90(m，2H)，1.88-1.68(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例35
(R)-5-(2-(2，6-二氟-3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2-(2，6-二氟-3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例34，步骤b)(0.135g)的甲醇(3mL)溶液加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.12g)和乙酸(0.017mL)在甲醇(3mL)中的混合物中。将所得混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。然后加入氰基硼氢化钠(0.028g)，将混合物温热至RT，且搅拌2h。浓缩反应混合物，且残余物经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且将残余物溶解在THF(3mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.074mL)，且将混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物，且残余物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.12g。m/z653(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.18(d，J＝9.7Hz，1H)，7.64-7.51(m，1H)，7.22-7.10(m，3H)，7.00(d，J＝8.2Hz，1H)，6.80(d，J＝3.3Hz，1H)，6.54(d，J＝10.0Hz，1H)，5.36(dd，J＝8.7，4.1Hz，1H)，4.34(s，2H)，3.76-3.46(m，6H)，3.33-3.03(m，10H)，2.46(s，3H)，2.09-1.95(m，2H)，1.87-1.66(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例36
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.50g)加至搅拌的4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛和3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛的4∶1混合物(实施例27，步骤b)(0.40g)和AcOH(0.085mL)的N-甲基吡咯烷-2-酮(6mL)溶液中。5min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.48g)。16h后，加入水，且混合物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用水洗涤3次，且真空蒸发。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺20∶80∶5洗脱)纯化，分离到两种异构产物，且得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.27g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.81(s，1H)，6.86(s，1H)，6.75(s，1H)，3.99-3.91(m，1H)，3.88-3.82(m，1H)，3.81-3.72(m，5H)，3.69-3.58(m，3H)，3.37-3.25(m，1H)，2.76(t，J＝7.1Hz，2H)，2.59-2.44(m，3H)，2.41-2.29(m，1H)，1.89-1.81(m，2H)，1.78-1.67(m，1H)，1.56-1.50(m，1H)1.46-1.34(m，6H)，0.87(s，9H)，0.00(s，6H)。
b)(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将四丁基氟化铵(浓度为1M的四氢呋喃溶液，2mL)加至(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例36，步骤a)(0.27g)的四氢呋喃(4mL)溶液中。1h后，真空蒸发溶液。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶三乙胺20∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.18g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.81(s，1H)，6.91(s，1H)，6.77(s，1H)，4.00-3.90(m，1H)，3.87-3.80(m，3H)，3.79-3.72(m，3H)，3.71-3.60(m，3H)，3.36-3.25(m，1H)，2.82(t，J＝6.6Hz，3H)，2.61-2.42(m，3H)，2.42-2.30(m，1H)，1.90-1.82(m，2H)，1.78-1.67(m，1H)，1.67-1.58(m，1H)，1.44-1.36(m，6H)。
c)2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.25g)加至搅拌的(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例36，步骤b)(0.17g)和三氟乙酸(0.07mL)的DCM(5mL)溶液中。1h后，加入乙酸乙酯(30mL)，接着加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)和饱和碳酸氢钠溶液(5mL)的混合物。充分振摇反应混合物，且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。加入乙酸(0.07mL)，溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发(浴温为～30℃)，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.19g。直接使用。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将乙酸(0.037mL)加至搅拌的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.170g)和2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛(实施例36，步骤c)(0.170g)的甲醇(8mL)溶液中。1min后，加入氰基硼氢化钠(0.08g)。3h后，将反应混合物真空浓缩至～2mL，加入THF(20mL)，且溶液用盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(2mL)的混合物洗涤。有机溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将固体溶解在甲醇中，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有纯产物的馏分，且蒸发至干。用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.026g。m/z 658(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ11.67(s，1H)，10.24(s，1H)，10.09-9.78(m，1H)，8.91-8.68(m，2H)，8.03(s，1H)，7.46(s，1H)，7.17(s，1H)，6.93(d，J＝8.9Hz，1H)，6.77(d，J＝8.9Hz，1H)，6.51-6.46(m，1H)，4.93-4.85(m，1H)，4.67-4.51(m，2H)，3.85-2.88(m，17H)，2.14-2.05(m，2H)，1.82-1.58(m，2H)，1.34(d，J＝6.8Hz，6H)。
实施例37
(R)-5-(2-(3-((2，2-二氟-4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-((2-溴-2，2-二氟乙酰氨基)甲基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-(氨基甲基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.702g)的DMF(20mL)溶液在20℃用2-溴-2，2-二氟乙酸乙酯(1.5g)处理，且将混合物在20℃和氮气下搅拌90分钟。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为2.5g。m/z 385/387(M-H)-(APCI)。
b)2，2-二氟-3-氧代-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
在70℃和氮气下历时15分钟将4-((2-溴-2，2-二氟乙酰氨基)甲基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例37，步骤a)(3.2g)的THF(40mL)溶液滴加至搅拌的叔丁醇钾(浓度为1M的叔丁醇溶液，16.53mL)和THF(60mL)的溶液中。加完后，将混合物再加热10分钟，然后冷却至室温。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用30％异己烷/乙酸乙酯)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.55g。m/z 305(M-H)-(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.98(s，1H)，3.74(d，J＝13.3Hz，2H)，3.43(d，J＝2.8Hz，2H)，3.05(s，2H)，1.81-1.73(m，2H)，1.70-1.61(m，2H)，1.40(s，9H)。
c)2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的THF溶液，2.69mL)滴加至2，2-二氟-3-氧代-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例37，步骤b)(0.55g)的THF(15mL)溶液中。将反应混合物在55℃和氮气下加热25分钟，然后冷却至室温。混合物通过小心滴加甲醇(5mL)来淬灭。然后加入N1，N2-二甲基乙-1，2-二胺(0.633g)，且将混合物在70℃加热40分钟。减压除去溶剂，且残余物通过快速硅胶色谱(使用4％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.32g。直接使用。
d)2，2-二氟-4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将HATU(0.541g)一次性加至在0℃搅拌的2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例37，步骤c)(0.32g)、5-甲基噻吩-2-甲酸(0.171g)和三乙胺(0.458mL)的DMF(20mL)溶液中。然后将混合物在20℃搅拌7小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为0.5至5％甲醇/二氯甲烷)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.4g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.29(d，J＝3.6Hz，1H)，6.84(dd，J＝3.6，1.0Hz，1H)，4.08(t，J＝8.8Hz，2H)，3.79(s，2H)，3.65-3.58(m，2H)，3.21-3.11(m，2H)，1.81-1.73(m，2H)，1.66-1.56(m，2H)，1.39(s，9H)+3H(甲基)没有观察(在溶剂下)。
e)(2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮三氟乙酸盐
在20℃将三氟乙酸(5mL)加至2，2-二氟-4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例37，步骤d)(0.4g)的二氯甲烷(20mL)溶液中。将溶液在20℃静置25分钟。加入甲苯(40mL)，且减压除去溶剂。将残余物与乙腈一起蒸发2次。所得胶状物用乙醚研磨，得到副标题化合物。收率为0.39g。m/z 317(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.53(s，2H)，7.31(d，J＝3.8Hz，1H)，6.88-6.85(m，1H)，4.14(t，J＝8.8Hz，2H)，3.84(s，2H)，3.27-3.21(m，2H)，3.13-3.04(m，2H)，2.05-1.98(m，2H)，1.91-1.81(m，2H)。甲基质子没有观察(在溶剂下)。
f)(2，2-二氟-9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.095g)加至(2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例37，步骤e)(0.19g)和三乙胺(0.185mL)的乙腈(10mL)溶液中，且将反应混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂，将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2.5％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.188g。m/z 451(M+H)+(APCI)。
g)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((2，2-二氟-4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
(2，2-二氟-9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例37，步骤f)(0.188g)的二氯甲烷(10mL)溶液用三氟乙酸(0.032mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.248g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，用乙酸(0.024mL)处理，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，且加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.14g)和乙酸(0.024mL)的甲醇(10mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，用三乙酰氧基硼氢化钠(0.133g)处理，且在室温搅拌18小时。减压除去甲醇，将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％‘880’氨水和8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.114g。m/z 767(M+H)+(APCI)。
h)(R)-5-(2-(3-((2，2-二氟-4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将三乙胺三氢氟酸盐(0.03mL)的甲醇(1mL)溶液加至(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((2，2-二氟-4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例37，步骤g)(0.114g)的THF(4mL)溶液中，且将所得溶液在20℃静置18小时。减压除去溶剂，且粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.080g。m/z 653(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.16(d，J＝9.7Hz，1H)，7.46-7.26(m，5H)，7.14(d，J＝8.2Hz，1H)，6.99(d，J＝8.2Hz，1H)，6.86-6.83(m，1H)，6.57-6.52(m，1H)，5.37-5.31(m，1H)，4.25(s，2H)，4.13(t，J＝8.8Hz，2H)，3.82(s，2H)，3.30-2.99(m，10H)，2.10-1.88(m，4H)。6个可交换的质子没有观察。甲基质子没有观察(在溶剂下)。
实施例38
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯氧基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)甲醇
将碳酸铯(7.87g)加至3-(羟基甲基)苯酚(2.5g)和2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(3.97g)的DMF(40mL)溶液中，且将所得混合物在90℃加热18小时。将混合物冷却至室温，且在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用30％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.9g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.21(t，J＝7.9Hz，1H)，6.91-6.86(m，2H)，6.82-6.78(m，1H)，5.14(t，J＝5.9Hz，1H)，4.79(t，J＝5.1Hz，1H)，4.46(d，J＝5.9Hz，2H)，3.93(d，J＝5.1Hz，2H)，3.71-3.63(m，2H)，3.61-3.52(m，2H)，1.14(t，J＝7.0Hz，6H)。
b)(9-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将甲磺酰氯(0.1mL)滴加至在0℃搅拌的(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)甲醇(实施例38，步骤a)(0.307g)和三乙胺(0.178mL)的二氯甲烷(30mL)溶液中。将所得混合物在20℃搅拌1小时。混合物用水洗涤，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在乙腈(30mL)中，且用三乙胺(1mL)处理，接着用(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例9，步骤b)(0.42g)处理。将混合物在20℃搅拌2小时。减压除去溶剂，将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用3％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.45g。m/z 503(M+H)+(APCI)。
c)2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯氧基)乙醛
将(9-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例38，步骤b)(0.45g)在乙酸(25mL)和水(25mL)的混合物中的溶液在65℃和氮气下加热16小时。减压除去大部分溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和过量的饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，加入乙酸(0.051mL)，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为0.38g。直接使用。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯氧基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将氰基硼氢化钠(0.084g)加至搅拌的20℃的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.303g)、2-(3-((4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯氧基)乙醛(实施例38，步骤c)(0.38g)和乙酸(0.051mL)的甲醇(12mL)溶液中。将反应混合物在20℃搅拌5小时。将反应混合物减压蒸发至体积为3mL，然后在乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)之间分配。水层用饱和碳酸氢钠溶液(3mL)处理。然后含水混合物用固体氯化钠处理，得到饱和溶液，所述饱和溶液用THF(20mL)萃取。THF层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.1g。m/z 639(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.28(s，1H)，7.43-7.36(m，1H)，7.21(s，1H)，7.14(s，2H)，7.07(d，J＝8.5Hz，1H)，6.95(d，J＝8.2Hz，1H)，6.82-6.76(m，2H)，5.00-4.91(m，1H)，4.36-4.28(m，4H)，3.73-3.69(m，2H)，3.68-3.63(m，2H)，3.54(s，2H)，3.45(s，2H)，3.25-3.04(m，6H)，2.46(s，3H)，2.09-1.98(m，2H)，1.87-1.72(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例39
7-((1R)-2-(2-氟-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-溴苯基)-2-氟乙酸乙酯
在氮气气氛下将2-(3-溴苯基)乙酸乙酯(1.00g)和叔丁基二甲基氯甲硅烷(0.749g)的THF(4mL)溶液冷却至-78℃，且用历时10分钟滴加的二(三甲基甲硅烷基)氨基锂(浓度为1M的THF溶液，4.6mL)处理。将溶液在-78℃搅拌5分钟，然后从冷却浴中取出，且历时30分钟温热至室温。真空浓缩溶液，将残余物悬浮在异己烷中，且过滤以除去所沉淀的氯化锂。真空浓缩滤液，得到油状物(1.49g)，将所述油状物溶解在乙腈(2mL)中，且在室温滴加至搅拌的SelectfluorTM氟化剂(1.93g)的乙腈(17mL)悬浮液中，用乙腈(3×1mL)完成加入。将所得混合物搅拌1.5小时，然后浓缩到硅胶上，且通过快速硅胶色谱(用10％乙醚/异己烷洗脱)纯化，得到污染有原料的副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.884g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.63(s，1H)，7.53(d，J＝7.9Hz，1H)，7.28(t，J＝8.0Hz，2H)，5.73(d，J＝47.7Hz，1H)，4.33-4.19(m，2H)，1.28(t，J＝7.1Hz，3H)。
b)2-(3-溴苯基)-2-氟乙醇
历时7分钟将氢化锂铝(浓度为1M的THF溶液，13.0mL)逐份加至在冰-水中预冷却的2-(3-溴苯基)-2-氟乙酸乙酯(实施例39，步骤a)(2.94g)的THF(35mL)溶液中。将所得混合物在冰-水中搅拌30分钟，然后通过小心加入甲醇(5mL)(历时30分钟逐份加入)来淬灭。将混合物倒入2M HCl水溶液中，且用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，且通过快速硅胶色谱(用25％乙醚/异己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为1.39g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.53-7.46(m，2H)，7.30-7.24(m，2H)，5.53(ddd，J＝48.2，7.2，3.3Hz，1H)，3.97-3.77(m，2H)，1.95(dd，J＝8.2，5.1Hz，1H)。
c)(2-(3-溴苯基)-2-氟乙氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷
将2-(3-溴苯基)-2-氟乙醇(实施例39，步骤b)(1.38g)和咪唑(1.29g)的DMF(14mL)溶液在冰-水中冷却，用叔丁基二甲基氯甲硅烷(1.049g)处理，然后从冷却浴中取出，且在室温搅拌过夜。将溶液倒入水中，且用乙醚萃取2次。合并的有机萃取物用水洗涤2次，用盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥，且通过快速硅胶色谱(用10％二氯甲烷/异己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为1.94g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.51-7.49(m，1H)，7.46(dt，J＝7.0，2.0Hz，1H)，7.28-7.21(m，2H)，5.43(ddd，J＝47.5，6.5，3.8Hz，1H)，3.95-3.76(m，2H)，0.88(s，9H)，0.03(d，J＝4.6Hz，6H)。
d)3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-氟乙基)苯甲醛
在氮气气氛下将(2-(3-溴苯基)-2-氟乙氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷(实施例39，步骤c)(1.8g)的THF(36mL)溶液冷却至-78℃，且用历时5分钟滴加的丁基锂(浓度为1.8M的己烷溶液，3.3mL)处理。将溶液在-78℃搅拌30分钟，用N，N-二甲基甲酰胺(0.63mL)处理，在-78℃再搅拌30分钟，然后从冷却浴中取出，且历时140分钟温热至室温。溶液通过加入10％氯化铵水溶液来淬灭，且所得混合物用乙醚萃取2次。合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，且通过快速硅胶色谱(用50％二氯甲烷/异己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为1.26g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.04(s，1H)，7.88-7.84(m，2H)，7.63(d，J＝7.4Hz，1H)，7.56(t，J＝7.4Hz，1H)，5.55(ddd，J＝47.3，6.2，4.0Hz，1H)，4.00-3.83(m，2H)，0.87(s，9H)，0.02(d，J＝3.9Hz，6H)。
e)(9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-氟乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-氟乙基)苯甲醛(实施例39，步骤d)(0.329g)的MeOH(4mL)溶液用乙酸(0.055mL)处理，接着用(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.408g)处理，且在室温搅拌5分钟。将溶液在冰-水浴中冷却，用三乙酰氧基硼氢化钠(0.309g)处理，在冰-水中搅拌135分钟，然后从冷却浴中取出，且在室温再搅拌65分钟。将溶液在冰-水中冷却下来，再用三乙酰氧基硼氢化钠(0.310g)处理，且在冰-水中搅拌75分钟。再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.312g)，且将混合物搅拌70分钟。再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.619g)，且将混合物搅拌过夜，使冷却浴缓慢失效。第二天，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.307g)，且将混合物搅拌70分钟。再加入乙酸(0.055mL)，且将混合物搅拌80分钟。将混合物温热至40℃，且在该温度搅拌25分钟，然后将其真空浓缩到快速硅胶上。残余物通过快速硅胶色谱(用5％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为粘性白色固体。收率为0.344g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.93(s，1H)，7.57-7.11(m，4H)，5.64-5.43(m，1H)，4.00-3.81(m，2H)，3.77-3.55(m，6H)，3.31(七重峰，J＝6.8Hz，1H)，3.13-2.88(m，2H)，2.57-2.35(m，4H)，2.16-1.94(m，2H)，1.74-1.54(m，2H)，1.36(d，J＝6.7Hz，6H)，0.84(s，9H)，0.01(s，6H)。
f)(9-(3-(1-氟-2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
(9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-氟乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例39，步骤e)(0.33g)的THF(5mL)溶液用四丁基氟化铵(浓度为1M的THF溶液，0.69mL)处理，且在室温搅拌50分钟。再加入四丁基氟化铵(浓度为1M的THF溶液，0.69mL)，且将混合物再搅拌80分钟。然后将溶液浓缩到快速硅胶上，且残余物通过快速硅胶色谱(用7.5％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色泡沫状物。收率为0.221g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.91(d，J＝1.5Hz，1H)，7.36-7.19(m，4H)，5.45(ddd，J＝48.5，6.6，3.7Hz，1H)，4.86-4.76(m，1H)，3.80-3.58(m，9H)，3.58-3.44(m，1H)，3.31(七重峰，J＝6.8Hz，1H)，2.46-2.28(m，4H)，1.79-1.67(m，2H)，1.66-1.50(m，2H)，1.36(d，J＝6.9Hz，6H)。
g)2-氟-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
将(9-(3-(1-氟-2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例39，步骤f)(0.213g)的DCM(5mL)溶液在冰-水中冷却，用三氟乙酸(0.053mL)处理，且搅拌5分钟。加入戴斯-马丁高碘剂(0.296g)，从冷却浴中取出混合物，且在室温搅拌20分钟。再加入戴斯-马丁高碘剂(0.295g)，且将混合物在室温再搅拌30分钟。然后反应混合物通过加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)来淬灭，且将所得两相混合物搅拌10分钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取2次，且合并的有机萃取物用盐水洗涤。加入乙酸(0.1mL)，然后经酸化的萃取物用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到粗副标题产物，其为灰白色泡沫状物。收率为0.240g。m/z 460(M+H)+(APCI)。
h)7-((1R)-2-(2-氟-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1步骤d)(0.182g)的甲醇(3mL)溶液用乙酸(0.039mL)处理，且搅拌5分钟。然后加入2-氟-2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例39，步骤g)(0.239g)的甲醇(4mL)溶液，且将所得混合物在室温搅拌5分钟，然后在冰-水中冷却，且用三乙酰氧基硼氢化钠(0.146g)处理。将混合物在冰中搅拌25分钟，然后再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.444g)。然后将混合物搅拌过周末，且将其缓慢温热至室温。下周一真空浓缩混合物。将残余物溶解在甲醇(3mL)和水(1.5mL)的混合物中，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为15-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发3次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤分离所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题产物，其为白色固体(0.03g)。m/z670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.94(s，1H)，7.60-7.45(m，4H)，6.93(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，6.77(d，J＝7.9Hz，1H)，5.97(dt，J＝49.2，9.7Hz，1H)，4.99-4.89(m，1H)，4.36-4.17(m，2H)，3.75-3.62(m，6H)，3.60-2.90(m，9H)，2.08-1.92(m，2H)，1.81-1.64(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例40
(R)-7-(2-(4-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-氟-5-(2-羟基乙基)苯甲醛
在-78℃将2，2，6，6-四甲基哌啶(3.0g)滴加至搅拌的正丁基锂(浓度为1.6M的己烷溶液，13mL)的无水四氢呋喃(12mL)溶液中。10min后，滴加2-(4-氟苯基)乙醇(1.00g)。将反应混合物在-78℃搅拌5h，然后历时5min滴加无水DMF(3.18mL)。移开冷却浴，且将反应混合物温热至室温过夜。加入乙酸乙酯和HCl水溶液(2M)，且分离溶液。乙酸乙酯层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶异己烷1∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为油状物。收率为0.43g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.35(s，1H)，7.73(dd，J＝6.4和2.0Hz，1H)，7.52-7.46(m，1H)，7.12(dd，J＝10.0和8.4Hz，1H)，3.88(t，J＝6.5Hz，2H)，2.90(t，J＝6.5Hz，2H)。1个可交换的质子没有观察。
b)(9-(2-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.339g)加至搅拌的2-氟-5-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例40，步骤a)(0.135g)、(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.339g)和乙酸(0.046mL)的NMP(7mL)溶液中。16h后，再加入2-氟-5-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例40，步骤a)(0.135g)，接着加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.339g)。2h后，反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，且用饱和碳酸氢钠溶液(30mL)洗涤。水层用乙酸乙酯萃取。真空蒸发合并的乙酸乙酯溶液。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶三乙胺10∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物，所述胶状物含有NMP。NMP如下除去：将胶状物加载至10g SCX柱，首先用甲醇洗脱，然后用20％‘880’氨水/甲醇洗脱，收集副标题化合物。将溶液蒸发至干，且将所得胶状物加载至硅胶柱，用乙酸乙酯∶三乙胺10∶1洗脱，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.31g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.90(s，1H)，7.19(d，J＝7.3Hz，1H)，7.13-7.07(m，1H)，6.97(t，J＝9.3Hz，1H)，4.28-4.24(m，1H)，3.71-3.55(m，6H)，3.46(s，2H)，3.35-3.26(m，1H)，3.00(s，2H)，2.70(t，J＝6.7Hz，2H)，2.45-2.26(m，4H)，1.74-1.65(m，2H)，1.59-1.49(m，2H)，1.36(d，J＝7.0Hz，6H)。
c)2-(4-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.284g)加至搅拌的(9-(2-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例40，步骤b)(0.21g)和三氟乙酸(0.046mL)的DCM(5mL)溶液中。1h后，加入乙酸乙酯(30mL)，接着加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)和饱和碳酸氢钠溶液(5mL)的混合物。充分振摇反应混合物，且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。加入乙酸(0.07mL)，溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发(浴温为～30℃)，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.2g。直接使用。m/z 460(M+H)+(APCI)。
d)(R)-7-(2-(4-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将乙酸(0.037mL)加至搅拌的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.17g)和2-(4-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例40，步骤c)(0.20g)的甲醇(8mL)溶液中。1min后，加入氰基硼氢化钠(0.10g)。3h后，将反应混合物真空浓缩至～2mL，加入THF(20mL)，且溶液用盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(2mL)的混合物洗涤。水层用乙酸乙酯萃取。合并THF溶液和乙酸乙酯溶液，且真空蒸发。将胶状物溶解在甲醇中，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有纯产物的馏分，且蒸发至干。用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.126g。m/z 670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.33-11.22(m，1H)，7.94(s，1H)，7.46-7.36(m，2H)，7.25(t，J＝9.0Hz，1H)，6.93(d，J＝8.4Hz，1H)，6.77(d，J＝8.4Hz，1H)，4.93-4.88(m，1H)，4.30-4.20(m，2H)，3.70(s，4H)，3.66(s，2H)，3.35-2.93(m，11H)，2.05-1.95(m，2H)，1.83-1.67(m，2H)，1.35(d，J＝7.0Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例41
(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-(溴甲基)-5-氟苯基)乙酸
将过氧苯甲酰(0.5g)加至搅拌的2-(3-氟-5-甲基苯基)乙酸(5.19g)和NBS(6.04g)在二氯甲烷(100mL)中的混合物中。将所得混合物加热回流5小时。将反应混合物冷却至室温，然后用水洗涤2次，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％乙酸和17％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为4.3g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.22-7.17(m，2H)，7.09-7.05(m，1H)，4.68(s，2H)，3.61(s，2H)。1个可交换的质子没有观察。
b)2-(3-(溴甲基)-5-氟苯基)乙醇
在0℃历时10分钟将硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的THF溶液，17.4mL)滴加至2-(3-(溴甲基)-5-氟苯基)乙酸(实施例41，步骤a)(4.3g)的THF(60mL)溶液中。将混合物在0℃搅拌10分钟，然后在20℃搅拌1小时。反应混合物通过滴加甲醇来淬灭，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用30％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为3.7g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.15(s，1H)，7.14-7.09(m，1H)，7.05-6.99(m，1H)，4.66(s，2H)，3.61(t，J＝6.8Hz，2H)，2.72(t，J＝6.7Hz，2H)。1个可交换的质子没有观察。
c)2，2，2-三氟-1-(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮
2-(3-(溴甲基)-5-氟苯基)乙醇(实施例41，步骤b)(3.6g)和2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮三氟乙酸盐(实施例12，步骤d)(5.66g)的乙腈(80mL)溶液用三乙胺(5.38mL)处理，且将混合物在20℃搅拌20小时。减压蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2.5％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为4.9g。m/z 405(M+H)+(APCI)。
d)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-苯基噻唑-4-基)甲酮
将2，2，2-三氟-1-(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例41，步骤c)(0.21g)的甲醇(3mL)溶液加至氨(35％水溶液，15mL)中，且将反应混合物在20℃搅拌1小时。将混合物减压蒸发至干，且残余物与乙腈共沸3次。将残余物溶解在DMF(7mL)中，且用2-苯基噻唑-4-甲酸(0.117g)处理，接着用三乙胺(0.29mL)处理，然后用HATU(0.257g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.27g。m/z 496(M+H)+(APCI)。
e)(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-苯基噻唑-4-基)甲酮(实施例41，步骤d)(0.25g)的二氯甲烷(20mL)溶液用三氟乙酸(0.039mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.278g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.029mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.199g)和乙酸(0.029mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.063g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.19g。m/z 704(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.28(s，1H)，8.14(s，1H)，7.96-7.91(m，2H)，7.54-7.49(m，3H)，7.28-7.18(m，3H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.94-4.87(m，1H)，4.28(s，2H)，3.83-3.66(m，6H)，3.26(t，J＝7.9Hz，2H)，3.21-2.99(m，8H)，2.10-2.00(m，2H)，1.84-1.69(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例42
(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将2，2，2-三氟-1-(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例41，步骤d)(0.21g)的甲醇(3mL)溶液加至氨(35％水溶液，15mL)中，且将反应混合物在20℃搅拌1小时。将混合物减压蒸发至干，且残余物与乙腈共沸3次。将残余物溶解在DMF(7mL)中，用2-异丙基噻唑-4-甲酸(0.098g)处理，接着用三乙胺(0.290mL)处理，然后用HATU(0.257g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.25g。m/z 462(M+H)+(APCI)。
b)(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例42，步骤a)(0.23g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.038mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.275g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.029mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.196g)和乙酸(0.029mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.063g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.15g。m/z 670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.94(s，1H)，7.28-7.16(m，3H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.94-4.88(m，1H)，4.27(s，2H)，3.70(s，4H)，3.66(s，2H)，3.32-3.23(m，3H)，3.17-2.99(m，8H)，2.07-1.96(m，2H)，1.81-1.69(m，2H)，1.35(d，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例43
(R)-7-(2-(2-(5-((4-(2-叔丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)1-(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)-2，2，2-三氟乙酮
将2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮三氟乙酸盐(实施例12，步骤d)(1.084g)加至搅拌的4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛和3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛的4∶1混合物(实施例27，步骤b)(1.0g)和AcOH(0.16mL)的N-甲基吡咯烷-2-酮(15mL)溶液中。5min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.57g)。16h后，加入水，且混合物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用水洗涤3次，且真空蒸发。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺1∶20∶1洗脱)纯化，分离到两种异构产物，且得到副标题化合物，其为油状物。收率为1.04g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.87(s，1H)，6.75(d，J＝3.7Hz，1H)，3.79-3.72(m，4H)，3.65(s，3H)，3.59-3.55(m，1H)，3.52(s，1H)，3.37(s，1H)，2.76(t，J＝6.9Hz，2H)，2.68-2.61(m，1H)，2.57-2.50(m，1H)，2.46-2.38(m，1H)，2.31(t，J＝11.5Hz，1H)，1.89-1.75(m，2H)，1.68-1.52(m，2H)，0.87(s，9H)，0.00(s，6H)。
b)9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳
将‘880’氨水(1.5mL)加至搅拌的1-(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)-2，2，2-三氟乙酮(实施例43，步骤a)(1.0g)的甲醇(5mL)溶液中。16h后，将反应混合物蒸发至干。加入乙腈，将溶液真空蒸发至干，且重复该操作3次，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.78g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.94(s，1H)，6.87(s，1H)，3.91-3.85(m，2H)，3.78(t，J＝7.1Hz，2H)，3.72-3.68(m，2H)，2.93-2.82(m，4H)，2.80-2.73(m，4H)，2.62-2.53(m，2H)，2.11-2.01(m，2H)，1.76-1.64(m，2H)，0.87(s，9H)，0.00(s，6H)+1个可交换的质子没有观察。
c)(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-叔丁基噻唑-4-基)甲酮
将HATU(0.306g)加至搅拌的2-叔丁基噻唑-4-甲酸(0.16g)、9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳(实施例43，步骤b)(0.300g)和三乙胺(0.41mL)的DMF(3mL)溶液中。1h后，将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层用水和盐水洗涤2次，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺12∶90∶10洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.3g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.82(s，1H)，6.85(s，1H)，6.74(s，1H)，4.01-3.92(m，1H)，3.92-3.84(m，1H)，3.82-3.71(m，7H)，3.69-3.58(m，3H)，2.79-2.71(m，2H)，2.60-2.28(m，4H)，1.93-1.79(m，2H)，1.44(s，9H)，0.87(s，9H)，-0.01(s，6H)。
d)(2-叔丁基噻唑-4-基)(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将TBAF(1.5mL浓度为1M的THF溶液)加至搅拌的(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-叔丁基噻唑-4-基)甲酮(实施例43，步骤c)(0.300g)的THF(3mL)溶液中。1h后，将反应混合物蒸发成胶状物。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶三乙胺20∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.22g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.00(s，1H)，7.01(s，1H)，6.84-6.73(m，1H)，4.59(t，J＝5.3Hz，1H)，3.77-3.48(m，10H)，2.64(t，J＝7.0Hz，2H)，2.54-2.16(m，4H)，1.74-1.63(m，2H)，1.58-1.43(m，2H)，1.41(s，9H)。
e)2-(5-((4-(2-叔丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.316g)加至搅拌的(2-叔丁基噻唑-4-基)(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例43，步骤d)(0.23g)和TFA(0.05mL)的DCM(5mL)溶液中。40min后，反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(30mL)处理。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，加入乙酸(0.08mL)，然后溶液用硫酸钠干燥，过滤，然后真空蒸发，得到副标题化合物。收率为0.23g。直接使用。m/z 462(M+H)+(APCI)。
f)(R)-7-(2-(2-(5-((4-(2-叔丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将乙酸(0.039mL)加至搅拌的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.180g)和2-(5-((4-(2-叔丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛(实施例43，步骤e)(0.230g)的MeOH(8mL)溶液中。1min后，加入氰基硼氢化钠(0.125g)。3h后，对反应混合物进行过滤，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有纯产物的馏分，且蒸发至干。用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.14g。m/z 672(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ11.67(s，1H)，10.24(s，1H)，8.91-8.71(m，2H)，8.04(s，1H)，7.46(s，1H)，7.18(s，1H)，6.93(d，J＝8.4Hz，1H)，6.77(d，J＝8.4Hz，1H)，6.54-6.44(m，1H)，4.93-4.86(m，1H)，4.68-4.51(m，2H)，3.82-3.47(m，8H)，3.32-3.15(m，4H)，3.12-2.87(m，5H)，2.15-2.07(m，2H)，1.83-1.54(m，2H)，1.39(s，9H)。
实施例44
(R)-5-(2-(3-((2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
在20℃将HATU(1.184g)加至2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例37，步骤c)(0.7g)、2-异丙基噻唑-4-甲酸(0.41g)和三乙胺(1mL)的DMF(12mL)溶液中，且将所得混合物搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用30％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.78g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.11(s，1H)，4.29-4.20(m，2H)，4.03-3.98(m，2H)，3.58-3.51(m，2H)，3.37-3.30(m，1H)，3.26-3.17(m，2H)，1.81-1.74(m，2H)，1.66-1.57(m，2H)，1.40(s，9H)，1.35(d，6H)。
b)(2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮三氟乙酸盐
2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例44，步骤a)(0.78g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(5mL)处理，且将反应混合物在20℃静置30分钟。加入甲苯(40mL)，且减压蒸发溶剂。残余物与乙腈共沸2次，得到副标题化合物。收率为0.8g。m/z 346(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.57(s，2H)，8.16(s，1H)，4.39-4.22(m，2H)，4.04(s，2H)，3.39-3.28(m，1H)，3.27-3.19(m，2H)，3.16-3.04(m，2H)，2.07-1.97(m，2H)，1.93-1.80(m，2H)，1.37(d，6H)。
c)(2，2-二氟-9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.21g)加至(2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例44，步骤b)(0.40g)和三乙胺(0.37mL)在乙腈(15mL)中的混合物中。将反应混合物在20℃搅拌2小时。减压蒸发溶剂，将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2.5％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.40g。m/z 480(M+H)+(APCI)。
d)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
(2，2-二氟-9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例44，步骤c)(0.38g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.061mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.437g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.045mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.345g)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物冷却至0℃，且一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.252g)。将反应混合物在20℃搅拌3小时。减压除去溶剂，将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用10％甲醇/二氯甲烷(含有1％“880”氨水)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.32g。m/z 796(M+H)+(APCI)。
e)(R)-5-(2-(3-((2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将三乙胺三氢氟酸盐(0.082mL)的甲醇(2mL)溶液加至(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例44，步骤d)(0.32g)的THF(8mL)溶液中，且将反应混合物在20℃静置18小时。减压除去溶剂，且粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.21g。m/z 682(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.18-8.11(m，2H)，7.44-7.31(m，4H)，7.14(d，J＝8.2Hz，1H)，6.99(d，J＝7.9Hz，1H)，6.55(d，J＝10.0Hz，1H)，5.37-5.31(m，1H)，4.31(s，2H)，4.23(s，2H)，4.01(s，2H)，3.40-2.98(m，11H)，2.08-1.99(m，2H)，1.98-1.88(m，2H)，1.36(d，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例45
(R)-7-(2-(2，6-二氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(2，6-二氟苯基)乙醇
在0℃将硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，26mL)小心加至2-(2，6-二氟苯基)乙酸(3g)的THF(50mL)溶液中。然后将反应混合物温热至RT，且搅拌3h。将反应混合物在冰浴中冷却，且用甲醇(10mL)小心淬灭。蒸发溶剂，且残余物经硅胶色谱(用9∶1至4∶1异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为2.2g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20-7.13(m，1H)，6.94-6.82(m，2H)，3.85(t，J＝6.8Hz，2H)，2.97(t，J＝6.7Hz，2H)。1个可交换的质子没有观察。
b)2，4-二氟-3-(2-羟基乙基)苯甲醛
在-70℃将2，2，6，6-四甲基哌啶(5mL)加至丁基锂(浓度为1.6M的己烷溶液，19mL)的THF(25mL)溶液中。滴加2-(2，6-二氟苯基)乙醇(实施例45，步骤a)(1.6g)的THF(25mL)溶液，且将所得混合物搅拌2h。然后加入DMF(3.9mL)，且将混合物在-70℃搅拌1h。然后将混合物温热至RT，且搅拌70h。反应混合物用HCl溶液(2M，50mL)淬灭，用乙酸乙酯(100mL)稀释，且分离各层。水相用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用4∶1至2∶1异己烷∶乙醚梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发。将所得油状物溶解在乙酸乙酯(50mL)中，用HCl溶液(2M，30mL)和盐水(30mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为1.1g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.28(s，1H)，7.84-7.74(m，1H)，7.05-6.95(m，1H)，3.89(t，J＝6.6Hz，2H)，3.01(t，J＝6.6Hz，2H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(2，4-二氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将2，4-二氟-3-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例45，步骤b)(0.35g)加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.67g)和乙酸(0.09mL)的N-甲基吡咯烷-2-酮(1mL)溶液中。将所得混合物搅拌1h，然后通过历时5min滴加三乙酰氧基硼氢化钠(0.335g)来淬灭。将所得混合物搅拌过夜，用乙腈(20mL)稀释，且加载至SCX柱(10gVarian，用乙腈(50mL)预润湿)。柱用乙腈(50mL)洗涤，且用10％‘880’氨水/乙腈溶液(50mL)洗脱。蒸发洗脱剂，与甲苯共沸，且经硅胶色谱(用77.5∶17.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.74g。m/z 480(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ8.00(s，1H)，7.32-7.16(m，1H)，7.00(t，J＝8.7Hz，1H)，4.80(t，J＝5.5Hz，1H)，3.78-3.38(m，11H)，2.77(t，J＝7.0Hz，2H)，2.46-2.26(m，4H)，1.76-1.40(m，4H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。
d)2-(2，6-二氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
在0℃将TFA(0.11mL)加至(9-(2，4-二氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例45，步骤c)(0.7g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.93g)，且将混合物在RT搅拌45min。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)，且将混合物搅拌10min。分离出水层，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用几滴乙酸酸化，混合物用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.64g。m/z 478(M+H)+(APCI)。
e)(R)-7-(2-(2，6-二氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2-(2，6-二氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例45，步骤d)(0.323g)的甲醇(3mL)溶液加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.23g)和乙酸(0.034mL)在甲醇(2mL)中的混合物中。将所得混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。加入氰基硼氢化钠(0.057g)，将混合物温热至RT，且搅拌2h。蒸发溶剂，且残余物经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.21g。m/z 688(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.94(s，1H)，7.62-7.53(m，1H)，7.23-7.14(m，1H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.92(dd，J＝8.1，4.7Hz，1H)，4.31(s，2H)，3.75-3.61(m，6H)，3.34-3.02(m，11H)，2.10-1.95(m，2H)，1.86-1.71(m，2H)，1.34(d，J＝6.7Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例46
(R)-5-(2-(2，6-二氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2-(2，6-二氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例45，步骤d)(0.29g)的甲醇(3mL)溶液加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.20g)和乙酸(0.034mL)在甲醇(3mL)中的混合物中。将所得混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。然后加入氰基硼氢化钠(0.057g)，将混合物温热至RT，且搅拌2h。蒸发溶剂，且残余物经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发。将残余物溶解在THF(3mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.29mL)，且将混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物，且残余物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.23g。m/z 682(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.19(d，J＝10.0Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.65-7.51(m，1H)，7.24-7.10(m，2H)，7.01(d，J＝7.9Hz，1H)，6.53(d，J＝10.0Hz，1H)，5.37(dd，J＝8.6，4.0Hz，1H)，4.34(s，2H)，3.75-3.59(m，6H)，3.34-3.03(m，11H)，2.11-1.95(m，2H)，1.88-1.72(m，2H)，1.34(d，J＝6.9Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例47
(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(5-(溴甲基)-2-氟苯基)乙醇
将过氧苯甲酰(0.14g)加至NBS(1.53g)和2-(2-氟-5-甲基苯基)乙酸(1.45g)的DCM(50mL)溶液中，且将所得混合物加热回流12h。蒸发溶剂，且将白色固体在乙酸乙酯(100mL)和10％氯化钠溶液(50mL)之间分配。分离各层，有机相用10％氯化钠溶液(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。将所得白色固体重新溶解在四氢呋喃(25mL)中，且在冰浴中冷却。小心加入硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，13mL)，然后将混合物温热至RT，且搅拌2h。将反应混合物在冰浴中冷却，且用甲醇小心淬灭。不再冒泡后，蒸发溶剂，且残余物经硅胶色谱(用9∶1至4∶1乙酸乙酯∶异己烷梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为1.35g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.32-7.21(m，2H)，7.04-6.97(m，1H)，4.46(s，2H)，3.87(t，J＝6.5Hz，2H)，2.93-2.87(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
b)(9-(4-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将2-(5-(溴甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例47，步骤a)(0.16g)加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.3g)和三乙胺(0.3mL)的乙腈(10mL)溶液中。将所得混合物搅拌过夜，用乙腈(20mL)稀释，且加载至SCX柱(10g Varian，用乙腈(50mL)预润湿)。柱用乙腈(50mL)洗涤，且用10％‘880’氨水/乙腈溶液(50mL)洗脱。蒸发洗脱剂，与甲苯共沸，且经硅胶色谱(用77.5∶17.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.22g。m/z 462(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.91(s，1H)，7.22-7.14(m，1H)，7.14-7.06(m，1H)，7.00(dd，J＝10.0，8.3Hz，1H)，4.40(t，J＝5.3Hz，1H)，3.72-3.52(m，8H)，3.43-3.23(m，3H)，2.74(t，J＝7.0Hz，2H)，2.42-2.23(m，4H)，1.75-1.65(m，2H)，1.59-1.47(m，2H)，1.36(d，J＝6.9Hz，6H)。
c)(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.033mL)加至(9-(4-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例47，步骤b)(0.2g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.28g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(1mL)、饱和碳酸氢钠溶液(1mL)和乙酸乙酯(5mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(5mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(5mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，然后加入乙酸(0.025mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.17g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.04g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.14g。m/z670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.94(s，1H)，7.52-7.42(m，2H)，7.25(t，J＝9.2Hz，1H)，6.94(d，J＝8.2Hz，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.93(dd，J＝7.9，4.6Hz，1H)，4.29(s，2H)，3.80-3.58(m，6H)，3.34-2.95(m，11H)，2.11-1.95(m，2H)，1.87-1.64(m，2H)，1.34(d，J＝6.7Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例47A
(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮
a)2-(5-(溴甲基)-2-氟苯基)乙醇
将过氧苯甲酰(1g)加至NBS(10.6g)和2-(2-氟-5-甲基苯基)乙酸(10g)的DCM(250mL)溶液中，且将所得混合物加热回流12h。蒸发溶剂，且将白色固体在乙酸乙酯(250mL)和10％氯化钠溶液(500mL)之间分配。分离各层，有机相用10％氯化钠溶液(500mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。将所得白色固体重新溶解在四氢呋喃(150mL)中，且在冰浴中冷却。小心加入硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，89mL)，然后将混合物温热至RT，且搅拌过夜。将反应混合物在冰浴中冷却，且用甲醇小心淬灭。不再冒泡后，蒸发溶剂，且残余物用异己烷和乙醚的4∶1混合物研磨。经硅胶色谱(用9∶1至4∶1乙酸乙酯∶异己烷梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为6.5g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.32-7.21(m，2H)，7.04-6.97(m，1H)，4.46(s，2H)，3.87(t，J＝6.5Hz，2H)，2.93-2.87(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
b)(9-(4-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将2-(5-(溴甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例47A，步骤a)(5.2g)加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(9.4g)和碳酸钾(6.8g)的乙醇(75mL)悬浮液中。将所得混合物搅拌过夜，且过滤。滤饼用乙醇(50mL)洗涤，且蒸发合并的滤液和洗涤液。将残余物在水(100mL)和乙酸乙酯(250mL)之间分配，分离各层，有机层用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为7.9g。m/z 462(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.91(s，1H)，7.22-7.14(m，1H)，7.14-7.06(m，1H)，7.00(dd，J＝10.0，8.3Hz，1H)，4.40(t，J＝5.3Hz，1H)，3.72-3.52(m，8H)，3.43-3.23(m，3H)，2.74(t，J＝7.0Hz，2H)，2.42-2.23(m，4H)，1.75-1.65(m，2H)，1.59-1.47(m，2H)，1.36(d，J＝6.9Hz，6H)。
c)(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮
在0℃将三氟乙酸(1.32mL)加至(9-(4-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例47A，步骤b)(7.9g)的DCM(200mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(12.3g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(100mL)、饱和碳酸氢钠溶液(100mL)和乙酸乙酯(500mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(100mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(100mL)洗涤，用乙酸(2mL)酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(140mL)中，然后加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(4.5g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(1.6g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，且在盐水和饱和碳酸氢钠溶液的混合物(10∶1，100mL)和THF(100mL)之间分配。分离各层，有机层用硫酸钠干燥，过滤，蒸发，且残余物与乙腈共沸。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到标题化合物，其为白色固体。收率为4.1g。m/z 670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.94(s，1H)，7.52-7.42(m，2H)，7.25(t，J＝9.2Hz，1H)，6.94(d，J＝8.2Hz，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.93(dd，J＝7.9，4.6Hz，1H)，4.29(s，2H)，3.80-3.58(m，6H)，3.34-2.95(m，11H)，2.11-1.95(m，2H)，1.87-1.64(m，2H)，1.34(d，J＝6.7Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例47B
(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(1S)-(+)-10-樟脑磺酸盐
将1S-(+)-樟脑磺酸(41mg)加至(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮(实施例47A)(59mg)的乙醇(5mL)溶液中，且将所得澄清溶液蒸发至干，得到(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二樟脑磺酸盐，其为无定形白色固体。收率为0.1g。
将异丙醇(1mL)加至(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二樟脑磺酸盐(20mg)中，且将所得澄清溶液搅拌2天。形成白色固体，且将悬浮液再搅拌5天。固体通过离心过滤来分离，且在高真空下干燥，得到(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二樟脑磺酸盐，其为白色结晶固体。收率为5mg。
在50℃对(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮(4.3g，6.42mmol)(实施例47A)、(1S)-(+)-10-樟脑磺酸(2.98g，12.84mmol)和异丙醇(300mL)的混合物进行加热直到形成澄清溶液，种晶，冷却至RT，且搅拌4天。固体通过过滤来分离，用异丙醇(100mL)和乙醚(2×200mL)洗涤，且抽吸干燥，得到标题化合物，其为白色结晶固体。收率为5.1g。
标题化合物的对映异构体过量高于实施例47A中得到的化合物。(实施例47A＝86％ee，标题化合物＞96％ee)
分析性手性方法：Chiralcel OJ-H 4.6×250mm，80∶20异己烷∶乙醇+0.1％乙二胺，1ml/min，35℃，225+或-10nm，历时30min。
R对映异构体的保留时间＝15.91min。
S对映异构体的保留时间＝22.85min。
1H NMR(300MHz，DMSO，90℃)δ11.42(s，1H)，9.95(s，1H)，8.89(s，2H)，7.95(s，1H)，7.61-7.54(m，1H)，7.53-7.46(m，1H)，7.27(t，J＝9.2Hz，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.97-4.90(m，1H)，4.30(s，2H)，3.74-3.59(m，6H)，3.35-3.02(m，9H)，2.93(d，J＝14.6Hz，2H)，2.76-2.61(m，2H)，2.44(d，J＝14.6Hz，2H)，2.29-2.23(m，2H)，2.22-2.16(m，2H)，2.13-2.00(m，2H)，1.96-1.68(m，6H)，1.34(d，J＝6.9Hz，6H)，1.32-1.20(m，4H)，1.06(s，6H)，0.76(s，6H)。2个可交换的质子没有观察。
二(1S)-(+)-10-樟脑磺酸盐变化形式(modification)A的XRPD图示于图1中。
变化形式A的一些特征峰
实施例47C
(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮富马酸盐变化形式A
将(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮(13mg)(实施例47D，步骤a)和富马酸(2mg)的甲醇(0.75mL)溶液在RT搅拌7天。所得白色固体通过过滤来分离，且在高真空下干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为5mg。m/z 670(M+H)+(APCI)。
富马酸盐变化形式A的XRPD图示于图2中。
富马酸盐变化形式A的一些特征峰
实施例47D
(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮单富马酸盐变化形式B
a)(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮
将(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(1S)-(+)-10-樟脑磺酸盐(实施例47B)(4.1g)在新蒸馏的2-甲基-THF(100mL)和饱和碳酸氢钠溶液(100mL)之间分配。分离各层，有机层用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。所得玻璃状固体用乙醚研磨2次，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为2.6g。
b)(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮单富马酸盐变化形式B
在50℃将(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮(2.4g)溶解在乙醇(240mL)中。加入富马酸(0.416g)，且将混合物加热回流直到形成澄清溶液。将所得溶液冷却至60℃，且用形式A(实施例47C)(50mg)种晶。将所得混合物在50℃搅拌过夜，然后历时3小时冷却至RT。所得白色固体通过过滤来分离，用乙醇(50mL)和乙醚(2×200mL)洗涤，且抽吸干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为2.3g。m/z 670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ7.89(s，1H)，7.19-7.09(m，2H)，7.01(dd，J＝9.9，8.3Hz，1H)，6.86(d，J＝8.2Hz，1H)，6.69(d，J＝8.5Hz，1H)，6.59(d，J＝1.0Hz，2H)，4.65-4.59(m，1H)，3.73-3.56(m，6H)，3.41(s，2H)，3.30(七重峰，J＝3.3Hz，1H)，2.90-2.71(m，6H)，2.42-2.26(m，4H)，1.75-1.64(m，2H)，1.59-1.48(m，2H)，1.35(dd，J＝6.8，1.2Hz，6H)+6个可交换的质子没有观察。
富马酸盐变化形式B的XRPD图示于图3中。
富马酸盐变化形式B的一些特征峰
XRPD-PANalytical CubiX PRO
XRPD数据用PANalytical CubiX PRO机器收集，其中配置为θ-2θ，扫描范围为2°至40°2θ，及暴露为100秒/0.02°增量。X射线通过铜制的长的小焦点X射线管来产生，其以45kV和40mA操作。铜X射线的波长为
数据在零背景容器上收集，将～2mg化合物置于所述容器上。容器由单晶硅制造，所述单晶硅沿非衍射平面被切割，然后在光学平面精制机上抛光。X射线在该平面上的入射通过布拉格(Bragg)消光来抵销。
实施例47E
(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮
a)4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(限定试剂(limiting reagent))和2-异丙基噻唑-4-甲酸(1.1摩尔当量)的混合物悬浮在2-MeTHF(2-甲基四氢呋喃)(10倍体积)中，且冷却至10-15℃。在10-15℃逐份加入三乙胺(7.2摩尔当量)。将稠悬浮液冷却至5-10℃，且在5-10℃历时0.5小时滴加T3P(1.3摩尔当量浓度为1.57M的THF溶液)。将反应混合物温热至环境温度(35min)，且搅拌2.5小时。混合物用水(10倍体积，5℃放热)稀释，且将混合物剧烈搅拌；分离出水层(pH10)，且用2-MeTHF(2×2倍体积)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(2倍体积)和水(2×2倍体积)洗涤。蒸发有机相，且与MeCN(2×2倍体积)共沸，得到褐色胶状物，将所述胶状物在35℃真空干燥24小时。收率：理论值的89％。1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.03(s，1H)，3.76-3.44(m，8H)，3.37-3.25(m，3H)，3.16-3.00(m，2H)，1.76-1.66(m，2H)，1.39(s，9H)，1.33(d，J＝6.9Hz，6H)。
b)(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐
在10-15℃向4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(限定试剂)(步骤a)的DCM(5倍体积)溶液中逐份加入三氟乙酸(13.4摩尔当量)。将溶液温热至环境温度，且搅拌16小时。蒸发溶剂，且将残余物溶解在乙醚(10倍体积)中。将溶液在冰中冷却，且刮擦，实现沉淀；将浆液在0-10℃搅拌0.5小时，然后冷过滤。滤饼用乙醚(5倍体积)洗涤，且在35℃真空干燥，得到米色粉末。收率：理论值的91％。1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.70-8.37(m，2H)，8.05(s，1H)，3.82-3.52(m，6H)，3.42-3.25(m，1H)，3.19-3.07(m，2H)，3.05-2.90(m，2H)，2.02-1.91(m，2H)，1.74-1.54(m，2H)，1.35(d，J＝6.7Hz，6H)。
c)4-溴-1-氟-2-(2-甲氧基乙烯基)苯(顺式和反式异构体的混合物)
在-3℃(+或-2℃)历时30分钟将叔丁醇钾(1.2摩尔当量)逐份加至搅拌的(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(1.3摩尔当量)的THF(2.5倍体积)悬浮液中。出现深红色。历时0.5小时将温度变至18℃，且将反应混合物再搅拌1.5小时。然后历时90分钟加入5-溴-2-氟苯甲醛(限定试剂)的THF(5倍体积)溶液，从而使反应混合物的温度不超过24℃。然后将反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液(10倍体积)中，且用t-BME(叔丁基甲基醚)(2×2.5倍体积)萃取。合并的萃取物用盐水(3×2倍体积)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，且真空蒸发。油性残余物用异己烷(8×0.5倍体积)萃取。过滤合并的异己烷萃取物，然后用冰乙酸(2倍体积)和50％冰乙酸/水(2倍体积)洗涤。干燥(Na2SO4)且过滤后，溶剂用旋转蒸发器除去，得到浅橙色油状物。收率为理论值的90％。
顺式-异构体：1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ8.07(d，J＝9.4Hz，1H)，7.41-7.39(m，1H)，7.13(q，J＝1.8Hz，1H)，6.54(d，J＝7.1Hz，1H)，5.31(d，J＝7.1Hz，1H)，3.83(s，3H)。
反式-异构体：1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.73-7.68(m，1H)，7.44(d，J＝12.9Hz，1H)，7.41-7.39(m，1H)，7.18-7.09(m，1H)，5.79(d，J＝12.9Hz，1H)，3.67(s，3H)。
d)4-氟-3-(2-甲氧基乙烯基)苯甲醛
将4-溴-1-氟-2-(2-甲氧基乙烯基)苯(限定试剂)(步骤c)溶解在2-甲基四氢呋喃(5倍体积)中，且将溶液冷却至-10℃。滴加异丙基氯化镁(0.37摩尔当量浓度为2M的THF溶液)，历时约30分钟将温度保持在-7℃(+或-2℃)，接着加入丁基锂(0.74摩尔当量浓度为1.5M的己烷溶液)，历时约1小时控制温度在-6℃(+或-2℃)。搅拌45分钟，然后在-5℃加至4-甲酰基吗啉(2摩尔当量)的2-甲基四氢呋喃(7倍体积)溶液中。该加入历时约90分钟。然后将反应混合物搅拌1小时，在此期间内部温度升至5℃。将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液(10倍体积)中，且用t-BME(2×3倍体积)萃取。合并的萃取物用饱和氯化铵水溶液洗涤(直到洗涤液的pH为约6)(2×3倍体积)，用水(5倍体积)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，且蒸发，得到可流动的橙色油状物。
油状物经硅胶色谱(使用5％乙酸乙酯/异己烷作为洗脱剂)纯化。收率为理论值的80％。
反式-异构体：1H NMR(400MHz，CDCL3)δ9.93(s，1H)，7.83(d，J＝9.5Hz，1H)，7.66-7.61(m，1H)，7.25(d，J＝13.1Hz，1H)，7.17(d，J＝10.3Hz，1H)，5.87(d，J＝13.1Hz，1H)，3.74(s，3H)。
顺式-异构体：1H NMR(400MHz，CDCL3)δ9.95(s，1H)，8.57(d，J＝9.5Hz，1H)，7.70-7.66(m，1H)，7.12(d，J＝11.5Hz，1H)，6.34(d，J＝7.2Hz，1H)，5.48(d，J＝6.9Hz，1H)，3.86(s，3H)。
e)(9-(4-氟-3-(2-甲氧基乙烯基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十-碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
向4-氟-3-(2-甲氧基乙烯基)苯甲醛(限定试剂)(步骤d)和(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(1.05摩尔当量)(步骤b)的2-甲基四氢呋喃(25倍体积)悬浮液中一次性加入三乙胺(1.73摩尔当量)(4℃放热)。将混合物搅拌0.5小时；然后一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.5摩尔当量)(无放热)，且将所得溶液搅拌16小时。
加入饱和NaHCO3水溶液(25倍体积)，且将混合物剧烈搅拌。分离有机相，且水层(pH8)用2-MeTHF(100mL)萃取；合并的有机层用水(2×50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，且蒸发，得到深色油状物。收率：理论值的78％。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)(顺式和反式异构体的混合物)：δ7.97(s，1H)，7.86-7.79(m，0.5H)，7.34-7.20(m，1H)，7.07-6.98(m，2H)，6.41(d，J＝7.1Hz，0.5H)，5.82(d，J＝12.9Hz，0.5H)，5.32(d，J＝6.9Hz，0.5H)，3.77(s，0.5H)，3.66(s，2.5H)，3.42-3.19(m，7H)，2.41-2.26(m，4H)，1.76-1.63(m，3H)，1.59-1.45(m，3H)，1.35(d，J＝6.7Hz，6H)。
f)(R)-7-(2-(2-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮
(9-(4-氟-3-(2-甲氧基乙烯基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(限定试剂)(步骤e)的THF(5倍体积)溶液用水(2.5倍体积)处理，接着用浓盐酸(6摩尔当量)处理。将溶液在55-60℃加热1.5小时；将溶液冷却至环境温度，且用水(2.5倍体积)稀释。THF通过蒸发来除去，且将含水残余物加至搅拌的碳酸氢钠(7摩尔当量)、水(5倍体积)和DCM(10倍体积)的混合物中。
分离出有机层，且水层(pH8)用DCM(5倍体积)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(5倍体积)和水(2×5倍体积)洗涤，干燥(硫酸钠)，且过滤。滤液用MeOH(10倍体积)稀释，且在35℃/405毫巴蒸发DCM。醛的甲醇溶液用乙酸(2摩尔当量)处理，且一次性加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(1摩尔当量)中；将混合物冷却至0-5℃，且搅拌5min，得到溶液。向其中一次性加入氰基硼氢化钠(1.5摩尔当量)，将混合物在5℃搅拌0.5小时，然后温热至环境温度，且搅拌0.5小时。蒸发溶剂，且将残余物在2-MeTHF(10倍体积)和饱和NaHCO3溶液(5倍体积)之间分配；有机层用20％盐水溶液(5倍体积)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，且蒸发。得到黄色泡沫状物，将所述泡沫状物在乙酸乙酯(13倍体积)中浆化，过滤收集所得固体，且真空干燥。得到浅黄色固体，所述固体通过硅胶(粗反应混合物重量的20倍)(洗脱剂为DCM/10-15％MeOH/1-1.5％氨)纯化。收率：理论值的29％。m/z 670(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.99(s，1H)，7.23-7.02(m，3H)，6.84(d，J＝8.3Hz，1H)，6.69(d，J＝8.3Hz，1H)，4.58(q，J＝4.1Hz，1H)，3.75-3.24(宽多重峰，10H)，2.80-2.59(m，6H)，2.41-2.11(m，7H)，1.76-1.41(m，4H)，1.34(d，J＝6.9Hz，6H)。
实施例48
(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-氟-3-(2-羟基乙基)苯甲醛
在-70℃将2，2，6，6-四甲基哌啶(10.8mL)加至丁基锂(浓度为1.6M的己烷溶液，40.1mL)的THF(40mL)溶液中。滴加2-(2-氟苯基)乙醇(3g)的THF(40mL)溶液，且将所得混合物在-70℃搅拌6h。然后加入DMF(8.29mL)，且将混合物在-70℃搅拌1h。然后将混合物温热至RT，且搅拌70h。反应混合物用HCl溶液(2M，50mL)淬灭，用乙酸乙酯(100mL)稀释，且分离各层。水相用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机溶液用HCl溶液(2M，50mL)和盐水(20mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用4∶1至2∶1异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为1.2g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.37(s，1H)，7.80-7.71(m，1H)，7.54(td，J＝7.4，1.9Hz，1H)，7.22(t，J＝7.6Hz，1H)，3.96-3.87(m，2H)，2.99(td，J＝6.5，1.2Hz，2H)，1.53(t，J＝5.6Hz，1H)。
b)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将2-氟-3-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例48，步骤a)(0.19g)加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.32g)和乙酸(0.043mL)的N-甲基吡咯烷-2-酮(5mL)溶液中。将所得混合物搅拌1h，然后历时5min逐份加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.24g)。将所得混合物搅拌过夜，用乙腈(20mL)稀释，且加载至SCX柱(10g Varian，用乙腈(50mL)预润湿)。柱用乙腈(50mL)洗涤，且用10％‘880’氨水/乙腈溶液(50mL)洗脱。蒸发洗脱剂，与甲苯共沸，且经硅胶色谱(用77.5∶17.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.33g。m/z462(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.91(s，1H)，7.23-7.13(m，2H)，7.03(t，J＝7.5Hz，1H)，4.40(t，J＝5.3Hz，1H)，3.72-3.56(m，9H)，3.48(s，2H)，2.75(t，J＝6.9Hz，2H)，2.46-2.26(m，4H)，1.75-1.63(m，2H)，1.59-1.46(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。
c)(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将TFA(0.044mL)加至(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例48，步骤b)(0.3g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.37g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(5mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(2mL)中，然后加入乙酸(0.033mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.28g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.054g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.14g。m/z670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.94(s，1H)，7.51(t，J＝6.9Hz，1H)，7.44(t，J＝7.0Hz，1H)，7.25(t，J＝7.7Hz，1H)，6.94(d，J＝8.2Hz，1H)，6.78(d，J＝8.5Hz，1H)，4.93(dd，J＝8.3，4.7Hz，1H)，4.34(s，2H)，3.77-3.60(m，6H)，3.36-3.04(m，11H)，2.09-1.97(m，2H)，1.87-1.72(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例49
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基)甲酮
将HATU(0.333g)加至搅拌的2-甲基苯并[d]噻唑-5-甲酸(0.17g)、9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳(实施例43，步骤b)(0.3g)和三乙胺(0.407mL)的DMF(3mL)溶液中。1h后，将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层用水洗涤2次，用盐水洗涤1次，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺2∶8∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.36g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.06(d，J＝8.3Hz，1H)，7.38(d，J＝8.3Hz，1H)，7.87(s，1H)，6.96(s，1H)，6.78(s，1H)，3.77(t，J＝6.7Hz，2H)，3.68-3.63(m，2H)，3.58(s，2H)，3.53-3.46(m，2H)，3.42-3.36(m，2H)，2.82(s，3H)，2.70(t，J＝6.8Hz，2H)，2.42-2.31(m，4H)，1.81-1.72(m，2H)，1.52-1.41(m，2H)，0.86(s，9H)，0.00(s，6H)。
b)(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基)甲酮
将TBAF(浓度为1M的THF溶液，1.5mL)加至搅拌的(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基)甲酮(实施例49，步骤a)(0.36g)的THF(2mL)溶液中。1h后，将反应混合物蒸发成胶状物。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶三乙胺20∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.2g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.05(d，J＝7.5Hz，1H)，7.37(d，J＝7.5Hz，1H)，7.86(s，1H)，6.94(s，1H)，6.76(s，1H)，4.30-4.23(m，1H)，3.68-3.54(m，6H)，3.54-3.44(m，2H)，3.43-3.33(m，2H)，2.81(s，3H)，2.71-2.62(m，2H)，2.47-2.29(m，4H)，1.81-1.71(m，2H)，1.55-1.40(m，2H)。
c)2-(5-((4-(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.27g)加至搅拌的(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基)甲酮(实施例49，步骤b)(0.20g)和三氟乙酸(0.033mL)的DCM(5mL)溶液中。40min后，反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(30mL)处理。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，加入乙酸(0.08mL)，然后溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。收率为0.2g。直接用于下一步。m/z 470(M+H)+(APCI)。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将乙酸(0.037mL)加至搅拌的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.168g)和2-(5-((4-(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛(实施例49，步骤c)(0.200g)的MeOH(8mL)溶液中。1min后，加入氰基硼氢化钠(0.107g)。3h后，对反应混合物进行过滤，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有纯产物的馏分，且蒸发至干。用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.15g。m/z 680(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.29(s，1H)，8.07(d，J＝8.2Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.42-7.37(m，2H)，7.15(s，1H)，6.93(d，J＝8.7Hz，1H)，6.77(d，J＝8.7Hz，1H)，4.94-4.86(m，1H)，4.50-4.41(m，2H)，3.73-3.63(m，2H)，3.58-3.33(m，4H)，3.29-2.90(m，10H)，2.81(s，3H)，2.16-2.00(m，2H)，1.78-1.62(m，2H)。4个可交换的质子没有观察。
实施例50
(R)-7-(2-(3-((4-(2-叔丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(2-叔丁基噻唑-4-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将2，2，2-三氟-1-(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例41，步骤d)(0.21g)的甲醇(3mL)溶液加至氨(35％水溶液，15mL)中，且将反应混合物在20℃搅拌1小时。将混合物减压蒸发至干，且残余物与乙腈共沸3次。将残余物溶解在DMF(7mL)中，用2-叔丁基噻唑-4-甲酸(0.096g)处理，接着用三乙胺(0.290mL)处理，然后用HATU(0.257g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.22g。m/z 476(M+H)+(APCI)。
b)(R)-7-(2-(3-((4-(2-叔丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(2-叔丁基噻唑-4-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例50，步骤a)(0.22g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.036mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.255g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.026mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.182g)和乙酸(0.026mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.058g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.135g。m/z 684(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.95(s，1H)，7.27-7.16(m，3H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.94-4.88(m，1H)，4.21(s，2H)，3.71(s，4H)，3.66(s，2H)，3.26(t，J＝7.9Hz，2H)，3.15-2.98(m，8H)，2.06-1.95(m，2H)，1.79-1.67(m，2H)，1.41(s，9H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例51
(R)-5-(2-(2-(5-((2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例44，步骤b)(0.40g)加至搅拌的4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛和3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-甲醛的4∶1混合物(实施例27，步骤b)(0.36g)和AcOH(0.05mL)的N-甲基吡咯烷-2-酮(5mL)溶液中。5min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.28g)。16h后，加入水，且混合物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用水洗涤3次，且真空蒸发。经硅胶色谱(用20∶80∶5乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺洗脱)纯化，分离到两种异构产物，且得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.24g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.11(s，1H)，7.00(s，1H)，6.82(s，1H)，4.28-4.16(m，2H)，4.05-3.95(m，2H)，3.78(t，J＝6.6Hz，2H)，3.64(s，2H)，3.40-3.31(m，1H)，2.71(t，J＝6.6Hz，2H)，1.85-1.77(m，2H)，1.74-1.64(m，2H)，1.39(d，J＝6.8Hz，6H)，0.86(s，9H)，0.86(s，6H)，4个质子在溶剂峰下。
b)(2，2-二氟-9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将TBAF(浓度为1M的THF溶液，1.5mL)加至搅拌的(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-2，2-二氟-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例51，步骤a)(0.30g)的THF(3mL)溶液中。1h后，将反应混合物真空蒸发成胶状物。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶三乙胺20∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.2g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.19(s，1H)，7.02(s，1H)，6.81(s，1H)，4.60(t，J＝5.3Hz，1H)，4.54-4.39(m，1H)，4.20-3.98(m，3H)，3.88-3.75(m，1H)，3.66-3.53(m，5H)，2.65(t，J＝7.0Hz，3H)，1.81-1.73(m，2H)，1.72-1.60(m，2H)，1.36(d，J＝6.4Hz，6H)。2个质子由于溶剂峰而模糊。
c)2-(5-((2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.20g)加至搅拌的(2，2-二氟-9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例51，步骤b)(0.15g)和三氟乙酸(0.031mL)的DCM(4mL)溶液中。40min后，反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(30mL)处理。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，加入乙酸(0.08mL)，然后溶剂用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。收率为0.19g。直接使用。m/z 484(M+H)+(APCI)。
d)(R)-5-(2-(2-(5-((2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.156g)加至搅拌的2-(5-((2，2-二氟-4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛(实施例51，步骤c)(0.15g)和乙酸(0.027mL)的甲醇(8mL)溶液中。5分钟后，加入氰基硼氢化钠(0.078g)。3h后，将反应混合物真空蒸发至～3mL，且在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠之间分配。乙酸乙酯溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将所得胶状物溶解在THF(2mL)中，且加入三乙胺三氢氟酸盐(0.064g)。16h后，加入甲苯，且真空蒸发溶液。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发至干，与MeCN共沸，然后用乙醚研磨，得到标题化合物，其为固体。收率为0.14g。m/z 688(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ10.52-10.47(m，2H)，8.85-8.70(m，2H)，8.22(s，1H)，8.15(d，J＝9.6Hz，1H)，7.49-7.43(m，1H)，7.21-7.12(m，1H)，7.15(d，J＝6.9Hz，1H)，6.99(d，J＝8.1Hz，1H)，6.58(d，J＝10.6Hz，1H)，6.24-6.17(m，1H)，5.33(d，J＝8.9Hz，1H)，4.66-4.51(m，2H)，3.44-2.91(m，10H)，2.15-2.03(m，2H)，1.95-1.77(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。6个质子由于溶剂峰而模糊。
实施例52
(R)-7-(2-(3-氯-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-(溴甲基)-5-氯苯基)乙酸
将过氧苯甲酰(0.112g)加至2-(3-氯-5-甲基苯基)乙酸(0.752g)和N-溴琥珀酰亚胺(0.801g)的DCM(15mL)悬浮液中，且将所得混合物在50℃和氮气下加热过夜。真空浓缩混合物以除去二氯甲烷，且将残余物溶解在乙酸乙酯(10mL)中。将溶液在85℃和氮气下加热4小时，然后冷却。溶液用水洗涤3次，用盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥，且通过快速硅胶色谱(用1∶20∶79乙酸∶乙酸乙酯∶异己烷洗脱)纯化，得到粗副标题化合物，其为浅黄色固体。收率为0.735g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.33-7.31(m，1H)，7.24-7.22(m，1H)，7.21-7.18(m，1H)，4.41(s，2H)，3.64(s，2H)。1个可交换的质子没有观察。
b)2-(3-(溴甲基)-5-氯苯基)乙醇
在室温历时5分钟将硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，2.8mL)逐份加至2-(3-(溴甲基)-5-氯苯基)乙酸(实施例52，步骤a)(0.73g)的无水THF(10mL)溶液中。将所得冒泡溶液搅拌1小时，然后在冰-水中冷却，且通过历时5分钟滴加甲醇(3mL)来淬灭。将溶液在室温再搅拌20分钟，然后真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱(用25％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化，得到粗副标题化合物，其为白色固体。收率为0.46g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29-7.24(m，1H)，7.19-7.13(m，2H)，4.41(s，2H)，3.87(t，J＝6.5Hz，2H)，2.84(t，J＝6.4Hz，2H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(3-氯-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将三乙胺(0.18mL)加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.217g)和2-(3-(溴甲基)-5-氯苯基)乙醇(实施例52，步骤b)(0.160g)的乙腈(5mL)悬浮液中，且将所得溶液在室温搅拌过夜。然后溶液通过快速硅胶色谱(用1∶5∶94三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱)纯化，得到胶状物。将胶状物溶解在二氯甲烷中，溶液用水洗涤3次，用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到副标题化合物，其为浅黄色泡沫状物。收率为0.254g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.90(s，1H)，7.21-6.92(m，3H)，4.31(t，J＝5.3Hz，1H)，3.79-3.49(m，8H)，3.42(s，2H)，3.31(七重峰，J＝6.8Hz，1H)，2.71(t，J＝6.7Hz，2H)，2.43-2.22(m，4H)，1.77-1.65(m，2H)，1.60-1.48(m，2H)，1.36(d，J＝6.9Hz，6H)。
d)2-(3-氯-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
将(9-(3-氯-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例52，步骤c)(0.242g)的DCM(5mL)溶液在冰-水中冷却，用三氟乙酸(0.059mL)处理，且搅拌5分钟。加入戴斯-马丁高碘剂(0.323g)，然后从冷却浴中取出混合物，且在室温搅拌30分钟。溶液用饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)稀释，且将所得混合物剧烈搅拌10分钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机相用盐水洗涤，用乙酸(0.1mL)酸化，用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到粗副标题化合物，其为黄色泡沫状物。收率为0.297g。m/z476(M+H)+(APCI)。
e)(R)-7-(2-(3-氯-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.220g)的甲醇(3mL)溶液用乙酸(0.047mL)处理，且搅拌5分钟。然后加入2-(3-氯-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例52，步骤d)(0.296g)的甲醇(4mL)溶液，将所得混合物在室温搅拌5分钟，然后在冰-水中冷却，且用三乙酰氧基硼氢化钠(0.181g)处理。将混合物在冰-水中搅拌10分钟，然后在室温搅拌45分钟，然后在冰-水中冷却，且再用三乙酰氧基硼氢化钠(0.533g)处理。然后将混合物搅拌过夜，且将其缓慢温热至室温。第二天上午，真空浓缩混合物。将残余物溶解在甲醇(1.5mL)、乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合物中，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发3次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤分离所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.092g。m/z 686(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.94(s，1H)，7.50-7.44(m，1H)，7.44-7.37(m，1H)，7.34-7.26(m，1H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.90(dd，J＝7.9，5.4Hz，1H)，4.26-4.08(m，2H)，3.77-3.59(m，6H)，3.35-3.21(m，3H)，3.16-2.91(m，8H)，2.06-1.90(m，2H)，1.81-1.63(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例53
(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-异丙基噻唑-2-甲酸乙酯
历时15分钟将1-溴-3-甲基丁-2-酮(3.72g)的乙醇(15mL)溶液滴加至回流的2-氨基-2-硫代乙酸乙酯(3g)的乙醇(120mL)溶液中。将混合物加热回流2小时，然后冷却至室温。减压蒸发溶剂至体积为30mL，将该溶液加至冰/水(200mL)中，且混合物通过滴加‘880’浓氨水来中和。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用20％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为2.2g。m/z 200(M+H)+(APCI)。
b)4-异丙基噻唑-2-甲酸
4-异丙基噻唑-2-甲酸乙酯(实施例53，步骤a)(2.2g)在甲醇(10mL)和THF(20mL)的混合物中的溶液用氢氧化锂(0.264g)的水(20mL)溶液处理。将反应混合物在20℃搅拌24小时。减压除去有机溶剂，且将残留含水混合物在乙酸乙酯和水之间分配。水层用2M盐酸酸化，用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物用环己烷研磨，得到副标题化合物。收率为0.93g。m/z 170(M-H)-(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.67(s，1H)，3.16-3.05(m，1H)，1.26(d，6H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(4-异丙基噻唑-2-基)甲酮
将2，2，2-三氟-1-(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例41，步骤d)(0.21g)的甲醇(3mL)溶液加至氨(35％水溶液，15mL)中，且将反应混合物在20℃搅拌1小时。将混合物减压蒸发至干，且残余物与乙腈共沸3次。将残余物溶解在DMF(7mL)中，用4-异丙基噻唑-2-甲酸(实施例53，步骤b)(0.089g)处理，接着用三乙胺(0.290mL)处理，然后用HATU(0.257g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.325g。m/z 462(M+H)+(APCI)。
d)(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(4-异丙基噻唑-2-基)甲酮(实施例53，步骤c)(0.23g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.038mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.275g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.029mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.196g)和乙酸(0.029mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.063g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.140g。m/z 670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.51(s，1H)，7.28-7.16(m，3H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.95-4.88(m，1H)，4.26(s，2H)，4.19-3.82(m，4H)，3.80-3.74(m，2H)，3.27(t，J＝7.9Hz，2H)，3.19-2.98(m，9H)，2.09-1.98(m，2H)，1.85-1.73(m，2H)，1.27(d，J＝7.1Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例54
(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(5-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)5-异丙基噻唑-2-甲酸乙酯
将溴(0.162mL)在DCM(1.2mL)和二氧杂环己烷(0.3mL)的混合物中的溶液缓慢滴加至在0℃冷却的3-甲基丁醛(0.272g)在DCM(1.6mL)和二氧杂环己烷(0.4mL)的混合物中的溶液中。将混合物在5℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至0℃，且在氮气气流下除去溶剂。残余物仍在0℃用2-氨基-2-硫代乙酸乙酯(0.42g)逐滴处理。在氮气下历时15分钟将所得混合物由0℃加热至70℃。然后将混合物在冰浴中冷却，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液处理，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用30％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.105g。m/z 200(M+H)+(APCI)。
b)5-异丙基噻唑-2-甲酸
5-异丙基噻唑-2-甲酸乙酯(实施例54，步骤a)(0.105g)的甲醇(5mL)溶液用氢氧化锂(0.025g)的水(3mL)溶液处理，且将所得混合物在20℃剧烈搅拌2小时。减压蒸掉甲醇，且残留水溶液用盐水(10mL)稀释。水层用乙醚洗涤，然后在冰浴中冷却，且通过滴加浓盐酸水溶液来酸化。混合物用乙酸乙酯萃取2次。合并的乙酸乙酯层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.048g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.84(s，1H)，3.34-3.26(m，1H)，1.31(d，J＝6.9Hz，6H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻唑-2-基)甲酮
将2，2，2-三氟-1-(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例41，步骤d)(0.113g)的甲醇(3mL)溶液加至氨(35％水溶液，15mL)中，且将反应混合物在20℃搅拌1小时。将混合物减压蒸发至干，且残余物与乙腈共沸3次。将残余物溶解在DMF(7mL)中，用5-异丙基噻唑-2-甲酸(实施例54，步骤b)(0.048g)处理，接着用三乙胺(0.156mL)处理，然后用HATU(0.139g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2.5％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为104mg。m/z 462(M+H)+(APCI)。
d)(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(5-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻唑-2-基)甲酮(实施例54，步骤c)(0.104g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.017mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.124g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.013mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.089g)和乙酸(0.013mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.028g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.045mg。m/z 670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.67(s，1H)，7.28-7.16(m，3H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.94-4.89(m，1H)，4.26(s，2H)，4.11-3.79(m，4H)，3.78-3.73(m，2H)，3.31-3.24(m，2H)，3.18-2.99(m，9H)，2.06-1.97(m，2H)，1.85-1.74(m，2H)，1.31(d，J＝7.0Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例55
(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-异丙基噻唑-5-甲酸乙酯
将2-甲基硫代丙酰胺(2-methylpropanethioamide)(3.3g)和2-氯-3-氧代丙酸乙酯(4.82g)在丙酮(50mL)中的混合物在氮气下加热回流3小时。将混合物冷却至室温，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用12％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.6g。m/z 200(M+H)+(APCI)。
b)2-异丙基噻唑-5-甲酸
2-异丙基噻唑-5-甲酸乙酯(实施例55，步骤a)(0.33g)的甲醇(6mL)溶液用氢氧化锂(0.079g)的水(3mL)溶液处理，且将所得混合物在20℃搅拌2小时。减压蒸掉甲醇，且将残余物在乙醚和盐水之间分配。水层通过滴加稀盐酸来酸化，且混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.185g。m/z 172(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ13.38(s，1H)，8.22(s，1H)，3.35-3.26(m，1H)，1.34(d，J＝6.8Hz，6H)。
c)2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯基)乙醇
将‘880’氨溶液(5mL)加至2，2，2-三氟-1-(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例41，步骤d)(2.2g)的甲醇(25mL)溶液中。将所得混合物搅拌90min，且蒸发溶剂。残余物与乙腈共沸3次，且浓缩，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为1.96g。m/z309(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ6.97(s，1H)，6.94(s，1H)，6.91(s，1H)，3.65-3.56(m，4H)，3.49-3.39(m，2H)，2.85-2.78(m，2H)，2.76-2.68(m，4H)，2.48-2.39(m，2H)，2.32-2.21(m，2H)，1.89-1.77(m，2H)，1.58-1.44(m，2H)。2个可交换的质子没有观察。
d)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-5-基)甲酮
2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯基)乙醇(实施例55，步骤c)(0.153g)的DMF(7mL)溶液用三乙胺(0.208mL)处理，接着用2-异丙基噻唑-5-甲酸(实施例55，步骤b)(.085g)处理。将混合物冷却至0℃，且加入HATU(0.245g)。将反应混合物在20℃搅拌2小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2.5％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.130g。m/z 462(M+H)+(APCI)。
e)(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-5-基)甲酮(实施例55，步骤d)(0.13g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.022mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.155g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.016mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.111g)和乙酸(0.016mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.035g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.1g。m/z 670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.92(s，1H)，7.30-7.18(m，3H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.95-4.89(m，1H)，4.30(s，2H)，3.75-3.70(m，2H)，3.68-3.63(m，2H)，3.54(s，2H)，3.33-3.24(m，3H)，3.22-3.00(m，8H)，2.07-1.98(m，2H)，1.84-1.72(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例56
(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-丁酰氨基-3-巯基丙酸乙酯
将三乙胺(4.5mL)加至2-氨基-3-巯基丙酸乙酯盐酸盐(5g)的DCM(50mL)悬浮液中。将所得混合物在冰/盐浴中冷却，且滴加丁酰氯(3.3mL)。将所得混合物温热至RT，且搅拌过夜。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，且分离各层。水相用DCM(2×100mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。所得白色固体经硅胶色谱(用4∶1至1∶1异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为3g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.21(d，J＝7.7Hz，1H)，4.43-4.37(m，1H)，4.13-4.06(m，2H)，2.88-2.80(m，1H)，2.78-2.69(m，1H)，2.12(t，J＝7.2Hz，2H)，1.60-1.47(m，2H)，1.22-1.14(m，3H)，0.90-0.81(m，3H)。1个可交换的质子没有观察。m/z 218(M-H)-(APCI)。
b)2-丙基噻唑-4-甲酸乙酯
将HCl溶液(浓度为4M的1，4-二氧杂环己烷溶液，20mL)加至2-丁酰氨基-3-巯基丙酸乙酯(实施例56，步骤a)(3g)的乙醇(20mL)溶液中，且将所得混合物搅拌过夜。蒸发溶剂，且残余物与甲苯共沸2次。将残余物重新溶解在乙腈(50mL)中，加入二氧化锰(11.9g)，且将混合物加热回流过夜。反应混合物通过硅藻土垫来过滤。滤垫用MeCN(3×100mL)洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液，且残余物经硅胶色谱(用9∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.24g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(s，1H)，4.42(q，J＝7.1Hz，2H)，3.04(t，J＝7.7Hz，2H)，1.89-1.77(m，2H)，1.40(t，J＝7.0Hz，3H)，1.02(t，J＝7.4Hz，3H)。
c)2-丙基噻唑-4-甲酸
将氢氧化锂一水合物(0.2g)加至2-丙基噻唑-4-甲酸乙酯(实施例56，步骤b)(0.24g)在THF(4mL)和水(1mL)的混合物中的溶液中。将所得悬浮液在RT搅拌过夜。反应混合物用HCl水溶液(2M，3mL)酸化，且蒸发。将残余物在盐水(5mL)和乙酸乙酯(20mL)之间分配。分离各层，且水相用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.17g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ12.91(s，1H)，8.31(s，1H)，2.96(t，J＝7.4Hz，2H)，1.79-1.68(m，2H)，0.95(t，J＝7.4Hz，3H)。
d)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-丙基噻唑-4-基)甲酮
将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.25g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯基)乙醇(实施例55，步骤c)(0.16g)、2-丙基噻唑-4-甲酸(实施例56，步骤c)(0.09g)和三乙胺(0.29mL)的DMF(7mL)溶液中，且将所得黄色溶液搅拌30min。将混合物在乙酸乙酯(100mL)和盐水(100mL)之间分配。分离有机相，用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发溶剂。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且蒸发混合物，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.14g。m/z 462(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.89(s，1H)，6.95(s，1H)，6.89(s，1H)，6.86(s，1H)，4.31(t，J＝4.7Hz，1H)，3.69-3.59(m，8H)，3.44(s，2H)，2.98(t，J＝7.2Hz，2H)，2.72(t，J＝6.8Hz，2H)，2.43-2.28(m，4H)，1.82-1.66(m，4H)，1.59-1.50(m，2H)，0.97(t，J＝7.3Hz，3H)。
e)(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(2-丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将TFA(0.023mL)加至(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例56，步骤d)(0.14g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.19g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.017mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.12g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.029g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.077g。m/z670(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.93(s，1H)，7.29-7.15(m，3H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.95-4.88(m，1H)，4.28-4.21(m，2H)，3.73-3.61(m，6H)，3.27(t，J＝7.9Hz，2H)，3.16-2.93(m，10H)，2.05-1.95(m，2H)，1.83-1.70(m，4H)，0.96(t，J＝7.3Hz，3H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例57
(R)-7-(2-(3-((4-(2-环丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(环丙烷甲酰氨基)-3-巯基丙酸乙酯
在0℃将环丙烷甲酰氯(3.1mL)加至三乙胺(4.68mL)和2-氨基-3-巯基丙酸乙酯盐酸盐(5.2g)的DCM(200mL)悬浮液中。将所得混合物温热至RT，且搅拌过夜。反应混合物用乙醇淬灭，且蒸发溶剂。将残余物悬浮在乙酸乙酯(200mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液(2×150mL)、HCl水溶液(2M，2×150mL)和盐水(150mL)洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。所得白色固体经硅胶色谱(用4∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为5g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ8.51(d，J＝7.7Hz，1H)，4.44(td，J＝7.5，5.3Hz，1H)，4.17-4.05(m，2H)，2.91-2.67(m，2H)，2.53-2.52(m，1H)，1.78-1.60(m，1H)，1.19(t，J＝6.8Hz，3H)，0.71-0.66(m，4H)。
b)2-环丙基噻唑-4-甲酸乙酯
将2-(环丙烷甲酰氨基)-3-巯基丙酸乙酯(实施例57，步骤a)(5g)和甲苯磺酸(tosic acid)(0.875g)的甲苯(100mL)溶液在迪安-斯托克(Dean and Stark)条件下加热回流过夜。冷却反应混合物，甲苯溶液用饱和碳酸氢钠溶液(3×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。将所得褐色胶状物重新溶解在乙腈(100mL)中。加入二氧化锰(40g)，且将混合物加热回流过夜。反应混合物通过硅藻土来过滤，且滤垫用MeCN(3×100mL)洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液，且残余物经硅胶色谱(用9∶1至4∶1异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.15g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.94(s，1H)，4.40(q，J＝7.1Hz，2H)，2.45-2.37(m，1H)，1.39(t，J＝7.2Hz，3H)，1.20-1.04(m，4H)。
c)2-环丙基噻唑-4-甲酸
将氢氧化锂一水合物(0.13g)加至2-环丙基噻唑-4-甲酸乙酯(实施例57，步骤b)(0.15g)在THF(8mL)和水(2mL)的混合物中的溶液中，且将所得混合物搅拌过夜。反应混合物用HCl水溶液(2M，3mL)酸化，且蒸发溶剂。将残余物在盐水(20mL)和乙酸乙酯(30mL)之间分配。分离各层，且水相用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为灰白色固体。收率为0.12g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ12.88(s，1H)，8.19(s，1H)，2.48-2.37(m，1H)，1.18-1.09(m，2H)，1.01-0.94(m，2H)。
d)(2-环丙基噻唑-4-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.34g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯基)乙醇(实施例55，步骤c)(0.21g)、2-环丙基噻唑-4-甲酸(实施例57，步骤c)(0.12g)和三乙胺(0.38mL)的DMF(7mL)溶液中，且将所得黄色溶液搅拌30min。将混合物在乙酸乙酯和盐水(100mL)之间分配，有机层用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发溶剂。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.15g。m/z 460(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.79(s，1H)，6.96(s，1H)，6.90(s，1H)，6.86(s，1H)，4.35(s，1H)，3.67-3.56(m，8H)，3.44(s，2H)，2.72(t，J＝6.7Hz，2H)，2.46-2.30(m，5H)，1.75-1.66(m，2H)，1.58-1.47(m，2H)，1.17-1.10(m，2H)，1.01-0.94(m，2H)。
e)(R)-7-(2-(3-((4-(2-环丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.025mL)加至(2-环丙基噻唑-4-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例57，步骤d)(0.15g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.21g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.019mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.13g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.031g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.085g。m/z668(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.81(s，1H)，7.28-7.16(m，3H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.97-4.86(m，1H)，4.26(s，2H)，3.72-3.58(m，6H)，3.31-2.99(m，10H)，2.06-1.92(m，2H)，1.82-1.68(m，2H)，1.19-0.90(m，4H)。1个质子由于DMSO而模糊，且6个可交换的质子没有观察。
实施例58
(R)-7-(2-(3-((4-(2-环丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(环丁烷甲酰氨基)-3-巯基丙酸乙酯
将三乙胺(15mL)加至环丁烷甲酸(2.57mL)和2-氨基-3-巯基丙酸乙酯盐酸盐(5g)的DMF(40mL)悬浮液中。将所得混合物在冰浴中冷却，且滴加T3P溶液(浓度为1.57M的THF溶液，20.6mL)。将所得混合物温热至RT，且搅拌过夜。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，且分离各层。水相用DCM(2×100mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。所得白色固体经硅胶色谱(用4∶1至1∶1异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为3.20g。m/z 230(M-H)-(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.05(d，J＝7.9Hz，1H)，4.41-4.32(m，1H)，4.14-4.05(m，2H)，2.89-2.68(m，2H)，2.21-1.70(m，7H)，1.18(t，J＝7.1Hz，3H)。1个可交换的质子没有观察。
b)2-环丁基噻唑-4-甲酸乙酯
将HCl溶液(浓度为4M的1，4-二氧杂环己烷溶液，3.46mL)加至2-(环丁烷甲酰氨基)-3-巯基丙酸乙酯(实施例58，步骤a)(3.2g)的乙醇(20mL)溶液中，且将所得混合物搅拌过夜。蒸发溶剂，且残余物与甲苯共沸2次。将残余物重新溶解在乙腈(50mL)中，加入二氧化锰(12g)，且将混合物加热回流过夜。反应混合物通过硅藻土垫来过滤，然后所述硅藻土垫用MeCN(3×100mL)洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液，且残余物经硅胶色谱(用9∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.48g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.06(s，1H)，4.42(q，J＝7.1Hz，2H)，4.00-3.89(m，1H)，2.56-2.45(m，2H)，2.41-2.29(m，2H)，2.16-1.90(m，2H)，1.40(t，J＝7.0Hz，3H)。
c)2-环丁基噻唑-4-甲酸
将氢氧化锂一水合物(0.38g)加至2-环丁基噻唑-4-甲酸乙酯(实施例58，步骤b)(0.48g)在THF(8mL)和水(2mL)的混合物中的溶液中。将所得悬浮液在RT搅拌过夜。反应混合物用HCl水溶液(2M，5mL)酸化，且蒸发至干。将残余物在盐水(5mL)和乙酸乙酯(20mL)之间分配。分离各层，且水相用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.38g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ12.91(s，1H)，8.32(s，1H)，3.94-3.83(m，1H)，2.46-2.35(m，2H)，2.32-2.21(m，2H)，2.09-1.97(m，1H)，1.94-1.81(m，1H)。
d)(2-环丁基噻唑-4-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.32g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯基)乙醇(实施例55，步骤c)(0.2g)、2-环丁基噻唑-4-甲酸(实施例58，步骤c)(0.12g)和三乙胺(0.36mL)的DMF(7mL)溶液中，且将所得黄色溶液搅拌30min。将混合物在乙酸乙酯和盐水(100mL)之间分配，且分离各层。有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发溶剂。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.18g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.91(s，1H)，6.95(s，1H)，6.89(s，1H)，6.86(s，1H)，4.36-4.25(m，1H)，3.87(q，J＝8.3Hz，1H)，3.70-3.57(m，8H)，3.43(s，2H)，2.72(t，J＝6.7Hz，2H)，2.46-2.26(m，8H)，2.11-1.91(m，2H)，1.76-1.66(m，2H)，1.60-1.51(m，2H)。
e)(R)-7-(2-(3-((4-(2-环丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将TFA(0.026mL)加至(2-环丁基噻唑-4-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例58，步骤d)(0.16g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.22g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.019mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.13g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.032g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.12g。m/z682(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.26(s，1H)，7.94(s，1H)，7.30-7.17(m，3H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.99-4.89(m，1H)，4.35-4.25(m，2H)，3.93-3.81(m，1H)，3.75-3.62(m，6H)，3.32-2.99(m，10H)，2.47-2.39(m，2H)，2.31-2.20(m，2H)，2.10-1.72(m，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例59
(R)-7-(2-(3-((4-(2-环戊基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(环戊烷甲酰氨基)-3-巯基丙酸乙酯
将CDI(8.5g)加至环戊烷甲酸(5.2mL)的DMF(40mL)溶液中。将所得混合物搅拌1h，且在冰浴中冷却。加入2-氨基-3-巯基丙酸乙酯盐酸盐(8.88g)，接着加入三乙胺(10mL)。将所得混合物温热至RT，且搅拌过夜。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，且分离各层。水层用DCM(2×100mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。所得固体经硅胶色谱(用4∶1至1∶1异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为7.7g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.15(d，J＝7.7Hz，1H)，4.41-4.34(m，1H)，4.14-4.05(m，2H)，2.89-2.61(m，3H)，1.81-1.45(m，9H)，1.18(t，J＝7.0Hz，3H)。
b)2-环戊基-4，5-二氢噻唑-4-甲酸乙酯
将甲苯磺酸一水合物(0.78g)加至2-(环戊烷甲酰氨基)-3-巯基丙酸乙酯(实施例59，步骤a)(5g)的甲苯(40mL)溶液中。将所得混合物在迪安-斯托克条件下加热回流6h。冷却反应混合物，然后甲苯溶液用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)洗涤，且蒸发溶剂。残余物与甲苯共沸。所得白色固体经硅胶色谱(用9∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为3.2g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.08-4.99(m，1H)，4.26(q，J＝7.2Hz，2H)，3.56-3.44(m，2H)，3.08-2.99(m，1H)，2.03-1.93(m，2H)，1.83-1.70(m，4H)，1.64-1.59(m，2H)，1.31(t，J＝7.2Hz，3H)。
c)2-环戊基噻唑-4-甲酸乙酯
将二氧化锰(24g)加至2-环戊基-4，5-二氢噻唑-4-甲酸乙酯(实施例59，步骤b)(3.2g)的乙腈(100mL)溶液中，且将所得混合物加热回流过夜。冷却反应混合物，且通过硅藻土垫来过滤。滤垫用乙腈(2×100mL)洗涤，且蒸发合并的滤液和洗涤液。残余物经硅胶色谱(用9∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且重新溶解在乙醇(20mL)中。加入钯/碳(5％，0.66g)的水(0.5mL)浆液，且将所得悬浮液在压力为5巴的氢气气氛下搅拌2h。混合物通过硅藻土垫来过滤，所述硅藻土垫用乙醇(3×50mL)洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.9g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04(s，1H)，4.41(q，J＝7.2Hz，2H)，3.60-3.48(m，1H)，2.29-2.18(m，2H)，1.89-1.67(m，6H)，1.40(t，J＝7.0Hz，3H)。
d)2-环戊基噻唑-4-甲酸
将氢氧化锂一水合物(0.67g)加至2-环戊基噻唑-4-甲酸乙酯(实施例59，步骤c)(0.9g)在THF(40mL)和水(10mL)的混合物中的溶液中。将所得混合物搅拌过夜。反应混合物用HCl水溶液(2M，10mL)酸化，且蒸发溶剂。将残余物在盐水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)之间分配，且分离各层。水相用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为浅黄色固体。收率为0.77g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ12.89(s，1H)，8.30(s，1H)，3.51-3.41(m，1H)，2.17-2.07(m，2H)，1.82-1.59(m，6H)。
e)(2-环戊基噻唑-4-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.33g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯基)乙醇(实施例55，步骤c)(0.21g)、2-环戊基噻唑-4-甲酸(实施例59，步骤d)(0.13g)和三乙胺(0.38mL)的DMF(7mL)溶液中，且将所得黄色溶液搅拌30min。将混合物在乙酸乙酯和盐水(100mL)之间分配，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发溶剂。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.19g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.89(s，1H)，6.95(s，1H)，6.88(s，1H)，6.86(s，1H)，4.30(t，J＝5.1Hz，1H)，3.69-3.61(m，8H)，3.43(s，2H)，2.76-2.69(m，3H)，2.42-2.28(m，4H)，2.18-2.06(m，2H)，1.86-1.64(m，8H)，1.60-1.49(m，2H)。
f)(R)-7-(2-(3-((4-(2-环戊基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.028mL)加至(2-环戊基噻唑-4-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例59，步骤e)(0.18g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.23g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.021mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.14g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.034g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.7g。m/z696(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.92(s，1H)，7.28-7.15(m，3H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.97-4.86(m，1H)，4.30-4.20(m，2H)，3.74-3.58(m，6H)，3.52-3.42(m，1H)，3.27(t，J＝7.9Hz，2H)，3.19-2.96(m，8H)，2.18-1.93(m，4H)，1.84-1.59(m，8H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例60
(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(4-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(4-甲基噻吩-2-基)甲酮
将2，2，2-三氟-1-(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例41，步骤d)(0.17g)的甲醇(3mL)溶液加至氨(35％水溶液，15mL)中，且将反应混合物在20℃搅拌1小时。将混合物减压蒸发至干，且残余物与乙腈共沸3次。将残余物溶解在DMF(6mL)中，且用4-甲基噻吩-2-甲酸(0.060g)处理，接着用三乙胺(0.176mL)处理，然后用HATU(0.208g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌1小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2.5％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.120g。m/z 433(M+H)+(APCI)。
b)(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(4-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(4-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例60，步骤a)(0.120g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.021ml)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.153g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.016ml)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.109g)和乙酸(0.016ml)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.035g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.075g。m/z 641(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.30-7.17(m，5H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.94-4.89(m，1H)，4.27(s，2H)，3.73-3.69(m，2H)，3.67-3.63(m，2H)，3.54(s，2H)，3.27(t，J＝7.9Hz，2H)，3.19-2.99(m，8H)，2.22(s，3H)，2.05-1.97(m，2H)，1.82-1.71(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例61
(R)-7-(2-(4-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)5-(羧基甲基)-2-氯苯甲酸
将氢氧化钾(0.969g)的水(10mL)溶液加至2-氯-5-(氰基甲基)苯甲酸(1.25g)的乙醇(10mL)溶液中，且将所得混合物加热回流2.25小时，然后冷却。真空浓缩混合物以除去乙醇，然后用水稀释，且用乙酸乙酯洗涤2次。弃去有机相，同时水相用浓盐酸酸化至pH 1，且用乙酸乙酯萃取2次。合并的萃取物用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到副标题化合物，其为褐色胶状物。收率为1.38g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ12.93(宽单峰，2H)，7.69(d，J＝2.1Hz，1H)，7.48(d，J＝8.3Hz，1H)，7.42(dd，J＝8.3，2.2Hz，1H)，3.66(s，2H)。
b)2-(4-氯-3-(羟基甲基)苯基)乙醇
在室温历时5分钟将硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，6.50mL)逐份加至5-(羧基甲基)-2-氯苯甲酸(实施例61，步骤a)(1.37g)的无水THF(20mL)溶液中。将所得冒泡溶液在室温搅拌1.5小时，然后加热至回流且保持1小时。冷却的混合物通过历时5分钟滴加甲醇(5mL)来淬灭。将溶液在室温搅拌2小时，然后通过快速硅胶色谱(用5％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.933g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36(d，J＝2.1Hz，1H)，7.30(d，J＝7.9Hz，1H)，7.11(dd，J＝8.1，2.2Hz，1H)，4.77(s，2H)，3.87(t，J＝6.5Hz，2H)，2.86(t，J＝6.5Hz，2H)。2个可交换的质子没有观察。
c)2-氯-5-(2-羟基乙基)苯甲醛
将二氧化锰(IV)(1.00g)加至2-(4-氯-3-(羟基甲基)苯基)乙醇(实施例61，步骤b)(0.200g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得悬浮液在室温搅拌过夜。然后混合物通过硅藻土来过滤，且残余物用DCM充分洗涤。真空浓缩滤液和洗涤液，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.197g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.47(s，1H)，7.80(d，J＝2.1Hz，1H)，7.42(d，J＝2.1Hz，1H)，7.41(s，1H)，3.89(宽三重峰，J＝5.9Hz，2H)，2.90(t，J＝6.4Hz，2H)，1.42(宽单峰，1H)。
d)(9-(2-氯-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.294g)的NMP(2mL)溶液用乙酸(0.039mL)处理，且搅拌5分钟。然后加入2-氯-5-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例61，步骤c)(0.189g)的NMP(3mL)溶液，将所得溶液搅拌1小时，然后用三乙酰氧基硼氢化钠(0.217g)处理。将混合物在室温搅拌过夜，然后倒入饱和碳酸氢钠中，且用乙酸乙酯萃取2次。合并的萃取物用水洗涤3次，用盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥，且通过快速硅胶色谱(用1∶2∶97三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色胶状物。收率为0.238g。1HNMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.91(s，1H)，7.29(d，J＝1.8Hz，1H)，7.25(d，J＝8.2Hz，1H)，7.09(dd，J＝8.2，2.1Hz，1H)，4.29(t，J＝5.1Hz，1H)，3.70-3.59(m，8H)，3.51(s，2H)，3.32(七重峰，J＝6.9Hz，1H)，2.71(t，J＝6.8Hz，2H)，2.45-2.29(m，4H)，1.75-1.66(m，2H)，1.60-1.51(m，2H)，1.36(d，J＝6.7Hz，6H)。
e)2-(4-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
将(9-(2-氯-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例61，步骤d)(0.230g)的DCM(5mL)溶液在冰-水中冷却，用三氟乙酸(0.074mL)处理，且搅拌5分钟。加入戴斯-马丁高碘剂(0.313g)，然后从冷却浴中取出混合物，且在室温搅拌40分钟。溶液用饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)稀释，且将所得混合物剧烈搅拌10分钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机相用盐水洗涤，用乙酸(0.1mL)酸化，用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到粗副标题化合物，其为黄色泡沫状物。收率为0.274g。m/z476(M+H)+(APCI)。
f)(R)-7-(2-(4-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.225g)的甲醇(3mL)溶液用乙酸(0.029mL)处理，且搅拌5分钟。然后加入2-(4-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例61，步骤e)(0.274g)的甲醇(4mL)溶液，将所得混合物在室温搅拌5分钟，然后在冰-水中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.051g)处理。移开冷却浴，且将混合物在室温搅拌140分钟，然后再用氰基硼氢化钠(0.055g)处理。然后将混合物搅拌过夜。第二天上午，真空浓缩混合物。将残余物溶解在甲醇(1.5mL)、乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合物中，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发3次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤收集所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.062g。m/z 686(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.93(s，1H)，7.52-7.43(m，2H)，7.35-7.26(m，1H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.89(dd，J＝7.8，5.5Hz，1H)，3.76-3.60(m，6H)，3.36-3.16(m，3H)，3.15-2.83(m，8H)，2.02-1.84(m，2H)，1.80-1.63(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。1个亚甲基(2个质子)是非常宽的，且6个可交换的质子没有观察。
实施例62
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-((5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)萘-1-基)甲基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-((5-(溴甲基)萘-1-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将三乙胺(0.185mL)加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.225g)的乙腈(5mL)悬浮液中，得到无色溶液，将所述溶液在室温搅拌过夜，然后真空浓缩。将残余物溶解在NMP(5mL)中，且再用三乙胺(0.111mL)处理。同时，将1，5-二(溴甲基)萘(0.500g)在乙腈(5mL)和NMP(5mL)中的悬浮液在室温搅拌过夜，然后真空浓缩以除去乙腈，得到溶液。然后历时35分钟滴加上述胺溶液，再用NMP(1mL)完成加入。将所得溶液搅拌75分钟，然后倒入水中，且用乙醚萃取3次。合并的萃取物用水洗涤3次，用盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥，且通过快速硅胶色谱(用三乙胺∶二氯甲烷∶乙酸乙酯(1∶49∶50)洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色泡沫状物。收率为0.132g。m/z542/544(M+H)+(APCI)。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-((5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)萘-1-基)甲基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将三乙胺(0.16mL)加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.188g)的甲醇(5mL)溶液中，得到悬浮液，真空浓缩所述悬浮液，且重新溶解在NMP(4mL)中。再加入三乙胺(0.16mL)，且历时30分钟滴加(9-((5-(溴甲基)萘-1-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例62，步骤a)(0.126g)的NMP(3mL)溶液，再用NMP(1mL)完成加入。将所得溶液在室温搅拌过夜。然后过滤溶液，用三氟乙酸(0.27mL)酸化，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，与乙腈共蒸发1次，且与甲醇共蒸发2次。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤分离所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为浅黄色固体。收率为0.056g。m/z 688(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.42(d，J＝8.2Hz，1H)，8.31(宽二重峰，J＝8.4Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.87-7.61(m，4H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.76(d，J＝8.2Hz，1H)，5.00-4.94(m，1H)，4.75(dd，J＝23.6，14.1Hz，2H)，3.80-3.56(m，6H)，3.45-2.99(m，9H)，2.08-1.87(m，2H)，1.81-1.58(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例63
(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(5-甲基噻吩-2-基磺酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-氟-5-((4-(5-甲基噻吩-2-基磺酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醇
将5-甲基噻吩-2-磺酰氯(0.15g)的DCM(3mL)溶液滴加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯基)乙醇(实施例55，步骤c)(0.21g)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.14mL)的DCM(20mL)溶液中。将所得混合物搅拌1h，且蒸发溶剂。将残余物在乙酸乙酯(50mL)和饱和碳酸氢钠溶液(50mL)之间分配。分离各层，且水层用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.21g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.46(d，J＝3.6Hz，1H)，7.02(dd，J＝3.6，1.0Hz，1H)，6.97(s，1H)，6.94(s，1H)，6.91(s，1H)，4.64(t，J＝5.1Hz，1H)，3.73-3.67(m，2H)，3.63-3.57(m，2H)，3.44(s，2H)，2.88-2.83(m，2H)，2.74-2.69(m，4H)，2.53(s，3H)，2.44-2.35(m，2H)，2.31-2.22(m，2H)，1.80-1.72(m，2H)，1.60-1.51(m，2H)。
b)(R)-7-(2-(3-氟-5-((4-(5-甲基噻吩-2-基磺酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将TFA(0.033mL)加至2-(3-氟-5-((4-(5-甲基噻吩-2-基磺酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醇(实施例63，步骤a)(0.2g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.27g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.024mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.17g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.04g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.7g。m/z677(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.43(d，J＝3.7Hz，1H)，7.30-7.16(m，3H)，7.00-6.96(m，1H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.78(d，J＝8.3Hz，1H)，4.92(dd，J＝7.9，5.4Hz，1H)，4.29(s，2H)，3.79-3.71(m，2H)，3.32-3.23(m，2H)，3.17-2.93(m，10H)，2.85(s，2H)，2.53(s，3H)，2.13-2.02(m，2H)，1.90-1.74(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例64
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯氧基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将甲磺酰氯(0.110mL)滴加至在0℃搅拌的(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)甲醇(实施例38，步骤a)(0.307g)和三乙胺(0.196mL)的DCM(30mL)溶液中。将所得混合物在20℃搅拌1小时。混合物用水洗涤，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在乙腈(30mL)中，且用三乙胺(1mL)处理，接着用(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.400g)处理。将混合物在20℃搅拌2小时。减压除去溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2.5％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.360g。m/z 532(M+H)+(APCI)。
b)2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯氧基)乙醛
(9-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例64，步骤a)(0.36g)的乙酸(20mL)溶液用水(20mL)处理，然后在氮气下将反应混合物在65℃加热18小时。减压蒸发溶剂，且残余物与甲苯共沸，得到副标题化合物。收率为0.31g。直接使用。
c)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯氧基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯氧基)乙醛(实施例64，步骤b)(0.31g)的甲醇(10mL)溶液用(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.267g)处理，接着用乙酸(0.039mL)处理，且将混合物在冰浴中冷却。加入氰基硼氢化钠(0.085g)，且将混合物在室温搅拌4小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.2g。m/z 668(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.94(s，1H)，7.39(t，J＝8.0Hz，1H)，7.16-7.13(m，2H)，7.09-7.05(m，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.98-4.93(m，1H)，4.36-4.28(m，4H)，3.70(s，4H)，3.65(s，2H)，3.47-3.42(m，2H)，3.34-3.26(m，1H)，3.23-3.05(m，6H)，2.09-1.98(m，2H)，1.84-1.71(m，2H)，1.35(d，J＝7.1Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例65
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基硫基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基硫基)苯甲酸
将(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷(1.48mL)滴加至3-巯基苯甲酸(1.07g)和碳酸钾(1.91g)的DMF(15mL)悬浮液中。将所得悬浮液搅拌2h。反应混合物通过滴加HCl水溶液(2M，10mL)来小心酸化，且倒入水(100mL)中。所得水层用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为2.8g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ13.11(s，1H)，7.89(t，J＝1.7Hz，1H)，7.79-7.74(m，1H)，7.66-7.61(m，1H)，7.47(t，J＝7.7Hz，1H)，3.82(t，J＝6.4Hz，2H)，3.19(t，J＝6.4Hz，2H)，0.87(s，9H)，0.05(s，6H)。
b)2-(3-(羟基甲基)苯基硫基)乙醇
将硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的THF溶液，17.3mL)滴加至冰冷的3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基硫基)苯甲酸(实施例65，步骤a)(2.16g)的THF(50mL)溶液中。将反应混合物温热至RT，然后加热回流2h。将反应混合物在冰浴中冷却，且滴加HCl水溶液(2M，50mL)。将所得混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物至其原体积的一半，且所得水层用DCM(3×100mL)萃取。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用4∶1异己烷∶乙酸乙酯至100％乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.77g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.29-7.23(m，2H)，7.21-7.17(m，1H)，7.13-7.09(m，1H)，5.20(t，J＝5.8Hz，1H)，4.92(t，J＝5.6Hz，1H)，4.47(d，J＝5.9Hz，2H)，3.59-3.53(m，2H)，3.02(t，J＝6.9Hz，2H)。
c)3-(2-羟基乙基硫基)苯甲醛
将二氧化锰(1.36g)加至2-(3-(羟基甲基)苯基硫基)乙醇(实施例65，步骤b)(0.29g)的DCM(10mL)溶液中。将所得混合物加热回流4h，冷却，且通过硅藻土来过滤。滤垫用DCM(3×20mL)洗涤。合并滤液和洗涤液，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.2g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ9.99(s，1H)，7.84(s，1H)，7.71-7.64(m，2H)，7.54(t，J＝7.7Hz，1H)，4.99(t，J＝5.6Hz，1H)，3.64-3.57(m，2H)，3.13(t，J＝6.7Hz，2H)。
d)(9-(3-(2-羟基乙基硫基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将3-(2-羟基乙基硫基)苯甲醛(实施例65，步骤c)(0.16g)加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.25g)和乙酸(0.046mL)的N-甲基吡咯烷-2-酮(5mL)溶液中，将所得混合物搅拌1h，且在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.26g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。将反应混合物倒入碳酸氢钠溶液(20mL)和水(80mL)的混合物中。水相用乙醚(3×100mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。粗产物经硅胶色谱(用95∶5乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.22g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.94-7.83(m，1H)，7.28-7.18(m，3H)，7.12-7.05(m，1H)，4.61-4.53(m，1H)，3.70-3.54(m，8H)，3.47-3.39(m，2H)，3.37-3.27(m，1H)，3.06-2.96(m，2H)，2.42-2.25(m，4H)，1.75-1.65(m，2H)，1.59-1.50(m，2H)，1.41-1.32(m，6H)。
e)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基硫基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.033mL)加至(9-(3-(2-羟基乙基硫基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例65，步骤d)(0.22g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.29g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.026mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.15g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.044g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.54g。m/z684(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.94(s，1H)，7.54-7.34(m，4H)，6.91(d，J＝8.2Hz，1H)，6.76(d，J＝8.2Hz，1H)，4.88(dd，J＝8.7，4.6Hz，1H)，4.24(s，2H)，3.74-3.61(m，6H)，3.38-2.95(m，11H)，2.08-1.94(m，2H)，1.82-1.68(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例66
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将HATU(0.924g)一次性加至在0℃搅拌的4-异丙基噻唑-2-甲酸(0.32g)、1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例12，步骤b)(0.547g)和三乙胺(0.781mL)的DMF(12mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌2小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用30％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.54g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.50(s，1H)，3.77-3.72(m，2H)，3.52-3.45(m，2H)，3.21-3.13(m，2H)，3.12-3.04(m，1H)，3.00(s，4H)，1.74-1.67(m，2H)，1.52-1.43(m，2H)，1.39(s，9H)，1.26(d，J＝6.8Hz，6H)。
b)(4-异丙基噻唑-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例66，步骤a)(0.54g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(5mL)处理，且将反应混合物在20℃静置20分钟。加入甲苯(40mL)，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次，得到副标题化合物。收率为0.56g。m/z 310(M+H)+(APCI)。
c)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(4-异丙基噻唑-2-基)甲酮
(4-异丙基噻唑-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例66，步骤b)(0.28g)和2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.171g)的乙腈(20mL)溶液用三乙胺(0.276mL)处理，且将反应混合物在20℃搅拌2小时。减压蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2.5％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化，得到副标题化合物。收率为0.25g。m/z 444(M+H)+(APCI)。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(4-异丙基噻唑-2-基)甲酮(实施例66，步骤c)(0.25g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.043mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.311g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.032mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.222g)和乙酸(0.032mL)的甲醇(20mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.071g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需产物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.18g。m/z 652(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.35(s，1H)，7.53(s，1H)，7.43-7.32(m，4H)，6.93(d，J＝8.3Hz，1H)，6.78(d，J＝8.5Hz，1H)，4.97-4.89(m，1H)，4.29(s，2H)，3.76(s，2H)，4.17-3.30(m，4H)，3.28-3.15(m，4H)，3.14-2.98(m，7H)，2.10-1.97(m，2H)，1.87-1.70(m，2H)，1.26(d，J＝7.1Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例67
(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-(2，2，2-三氟乙基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)3，3，3-三氟丙酰胺
在0℃，3，3，3-三氟丙酸(4g)的乙醚(150mL)的溶液用五氯化磷(6.06g)一次性处理。将混合物在氮气下加热回流2.5小时。将反应混合物冷却至室温。再加入乙醚(100mL)，且将混合物在冰浴中冷却。将氨气鼓泡通过搅拌的混合物且保持30分钟。减压除去溶剂，且将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配。水层用乙酸乙酯重新萃取2次，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为3.9g。直接使用。
b)3，3，3-三氟硫代丙酰胺
将五硫化二磷(1.603g)一次性加至3，3，3-三氟丙酰胺(实施例67，步骤a)(3.9g)的MTBE(150mL)溶液中。将反应混合物在20℃搅拌20小时。过滤混合物，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为4g。产物直接用于下一步。
c)2-(2，2，2-三氟乙基)噻唑-4-甲酸乙酯
将3，3，3-三氟硫代丙酰胺(实施例67，步骤b)(4g)和3-溴-2-氧代丙酸乙酯(5.45g)的THF(120mL)溶液加热回流2小时。减压除去溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用17％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.9g。m/z240(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.23(s，1H)，4.45(q，J＝7.1Hz，2H)，3.94(q，J＝10.2Hz，2H)，1.42(t，J＝7.0Hz，3H)。
d)2-(2，2，2-三氟乙基)噻唑-4-甲酸
在氮气下将2-(2，2，2-三氟乙基)噻唑-4-甲酸乙酯(实施例67，步骤c)(0.3g)在浓盐酸(7mL)和水(7mL)中的混合物在80℃加热5小时。在氮气气流下蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(40mL)和盐水(3mL)之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.23g。m/z 210(M-H)-(APCI)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.36(s，1H)，3.95(q，J＝10.0Hz，2H)。1个可交换的质子没有观察。
e)2，2，2-三氟-1-(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮
将2-氟-3-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例48，步骤a)(1.05g)加至2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮三氟乙酸盐(实施例12，步骤d)(2.08g)和乙酸(0.33mL)的N-甲基吡咯烷-2-酮(10mL)溶液中。将所得混合物搅拌15min，然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.81g)，且将混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和水(100mL)的混合物中。水层用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机层用水(50mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用4∶1异己烷∶乙酸乙酯+5％三乙胺至乙酸乙酯+5％三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为1.9g。直接使用。
f)2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-2-氟苯基)乙醇
将‘880’氨水溶液(5mL)加至2，2，2-三氟-1-(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例67，步骤e)(1.9g)的甲醇(25mL)溶液中。将所得混合物搅拌90min，且蒸发溶剂。残余物经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到胶状物，其在静置时固化。白色固体用异己烷研磨，且用硫酸钠干燥，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为1g。m/z309(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.24-7.15(m，2H)，7.06(t，J＝7.6Hz，1H)，4.69(t，J＝5.3Hz，1H)，3.64-3.54(m，2H)，3.53-3.43(m，4H)，2.74(t，J＝7.0Hz，2H)，2.60(t，J＝4.9Hz，2H)，2.45-2.35(m，2H)，2.34-2.24(m，2H)，1.83-1.74(m，2H)，1.47-1.36(m，2H)。2个质子由于溶剂峰而模糊，且1个可交换的质子没有观察。
g)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(2，2，2-三氟乙基)噻唑-4-基)甲酮
将HATU(0.181g)一次性加至在0℃搅拌的2-(2，2，2-三氟乙基)噻唑-4-甲酸(实施例67，步骤d)(0.077g)、2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例67，步骤f)(0.113g)和三乙胺(0.153mL)的DMF(5mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌2小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.180g。m/z 502(M+H)+(APCI)。
h)(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-(2，2，2-三氟乙基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(2，2，2-三氟乙基)噻唑-4-基)甲酮(实施例67，步骤g)(0.18g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.028mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.198g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.021mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.141g)和乙酸(0.021mL)的甲醇(15.0mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.045g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.091g。m/z 710(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.15(s，1H)，7.52-7.40(m，2H)，7.25(t，J＝7.6Hz，1H)，6.94(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.94-4.89(m，1H)，4.29(s，2H)，4.20(q，J＝11.0Hz，2H)，3.74-3.61(m，6H)，3.28-3.02(m，10H)，2.06-1.96(m，2H)，1.85-1.72(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例68
(R)-7-(2-(3-((4-(苯并[b]噻吩-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)苯并[b]噻吩-5-基(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将HATU(0.181g)一次性加至在0℃搅拌的苯并[b]噻吩-5-甲酸(0.065g)、2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例67，步骤f)(0.113g)和三乙胺(0.153mL)的DMF(5mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌2小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.160g。m/z 469(M+H)+(APCI)。
b)(R)-7-(2-(3-((4-(苯并[b]噻吩-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
苯并[b]噻吩-5-基(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例68，步骤a)(0.160g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.026mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.188g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.02mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.135g)和乙酸(0.02mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.043mg)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.116g。m/z 677(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.28(s，1H)，8.04(d，J＝8.2Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.80(d，J＝5.4Hz，1H)，7.52-7.42(m，3H)，7.38-7.35(m，1H)，7.25(t，J＝7.7Hz，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，1H)，6.78(t，J＝4.1Hz，1H)，4.95-4.90(m，1H)，4.35(s，2H)，3.69(t，J＝5.0Hz，2H)，3.53-3.44(m，4H)，3.28-3.19(m，4H)，3.16-3.04(m，6H)，2.11-2.03(m，2H)，1.80-1.68(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例69
(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基-5-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-异丙基-5-甲基噻唑-4-甲酸甲酯
将3-溴-2-氧代丁酸甲酯(4.6g)和2-甲基硫代丙酰胺(2.5g)在THF(100mL)中的混合物加热回流18小时。减压蒸发溶剂。将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。残余物通过快速硅胶色谱(使用17％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.7g。m/z 200(M+H)+(APCI)。
b)2-异丙基-5-甲基噻唑-4-甲酸
将氢氧化锂一水合物(0.2g)的水(3mL)溶液加至2-异丙基-5-甲基噻唑-4-甲酸甲酯(实施例69，步骤a)(0.5g)的甲醇(7mL)溶液中，且将反应混合物在20℃搅拌3小时。减压除去甲醇，且残留水溶液用乙酸乙酯洗涤。水层通过滴加浓HCl水溶液来酸化，且该混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。所得胶状物在静置时结晶。用异己烷(4mL)和乙醚(1mL)的混合物研磨，得到副标题化合物。收率为0.160g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.29-3.18(m，1H)，2.78(s，3H)，1.38(d，J＝7.1Hz，6H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基-5-甲基噻唑-4-基)甲酮
将HATU(0.175g)一次性加至在0℃搅拌的2-异丙基-5-甲基噻唑-4-甲酸(实施例69，步骤b)(0.066mg)、2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例67，步骤f)(0.109g)和三乙胺(0.148mL)的DMF(5mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌2小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.155mg。m/z 476(M+H)+(APCI)。
d)(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基-5-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基-5-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例69，步骤c)(0.155g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.025mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.180g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.019mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.128g)和乙酸(0.019mL)的甲醇(15.00mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(41mg)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.12g。m/z 684(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.28(s，1H)，7.50-7.39(m，2H)，7.28-7.22(m，1H)，6.93(d，J＝24.1Hz，1H)，6.77(d，J＝26.1Hz，1H)，4.93-4.88(m，1H)，4.26(s，2H)，3.67(s，2H)，3.58-3.43(m，4H)，3.26-3.00(m，11H)，2.43(s，3H)，2.03-1.94(m，2H)，1.81-1.65(m，2H)，1.30(d，J＝6.8Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例70
(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-3-基)甲酮
将HATU(0.183g)一次性加至在0℃搅拌的5-异丙基噻吩-3-甲酸(0.063g)、2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例67，步骤f)(0.114g)和三乙胺(0.155mL)的DMF(5mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌2小时。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2.5％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.100g。m/z 461(M+H)+(APCI)。
b)(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-3-基)甲酮(实施例70，步骤a)(0.100g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.017mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.120g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.012mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.086g)和乙酸(0.012mL)的甲醇(15.00mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.027g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.052mg。m/z 669(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.51-7.46(m，2H)，7.43(t，J＝7.5Hz，1H)，7.25(t，J＝7.7Hz，1H)，6.95-6.89(m，2H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.95-4.90(m，1H)，4.30(s，2H)，3.69-3.65(m，2H)，3.55-3.51(m，2H)，3.45(s，2H)，3.24(t，J＝8.1Hz，2H)，3.20-3.03(m，9H)，2.05-1.97(m，2H)，1.79-1.69(m，2H)，1.28(d，J＝6.8Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例71
(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-(戊-3-基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-乙基丁酰胺
将2-乙基丁酰氯(5g)小心滴加至冰冷的35％氨水(50mL)中，且将所得悬浮液搅拌1h。反应混合物用DCM(3×100mL)萃取。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为3.4g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.23(s，1H)，6.71(s，1H)，1.98-1.88(m，1H)，1.50-1.27(m，4H)，0.81(t，J＝7.4Hz，6H)。
b)2-乙基硫代丁酰胺
将五硫化二磷(1.54g)加至2-乙基丁酰胺(实施例71，步骤a)(3.4g)的MTBE(300mL)溶液中，且将所得混合物搅拌3h。反应混合物通过硅藻土来过滤，且滤垫用MTBE(100mL)洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为3.8g。直接使用。
c)2-(戊-3-基)噻唑-4-甲酸乙酯
将3-溴-2-氧代丙酸乙酯(2.5mL)滴加至2-乙基硫代丁酰胺(实施例71，步骤b)(3.8g)的乙醇(100mL)溶液中，且将所得混合物加热回流过夜。蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(100mL)和饱和碳酸氢钠溶液(100mL)之间分配。分离各层，且水相用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用20∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为2.8g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.42(s，1H)，4.29(q，J＝7.1Hz，2H)，2.99-2.89(m，1H)，1.82-1.58(m，4H)，1.30(t，J＝7.0Hz，3H)，0.81(t，J＝7.4Hz，6H)。
d)2-(戊-3-基)噻唑-4-甲酸
将氢氧化锂一水合物(2.07g)加至2-(戊-3-基)噻唑-4-甲酸乙酯(实施例71，步骤c)(2.8g)在THF(80mL)和水(20mL)的混合物中的溶液中。将所得混合物搅拌过夜。反应混合物用浓盐酸(6mL)酸化，且蒸发挥发物。所得含水混合物用氯化钠饱和，且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为2.3g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ12.91(s，1H)，8.34(s，1H)，2.98-2.86(m，1H)，1.84-1.56(m，4H)，0.81(t，J＝7.3Hz，6H)。
e)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(戊-3-基)噻唑-4-基)甲酮
在0℃将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.2g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例67，步骤f)(0.13g)、2-(戊-3-基)噻唑-4-甲酸(实施例71，步骤d)(0.081g)和三乙胺(0.23mL)的DMF(7mL)溶液中。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌2h。将混合物在乙酸乙酯和盐水(100mL)之间分配，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，然后蒸发。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.25g。m/z 490(M+H)+(APCI)。1HNMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.93(s，1H)，7.22-7.14(m，2H)，7.03(t，J＝7.6Hz，1H)，4.39-4.32(m，1H)，3.69-3.58(m，6H)，3.52-3.46(m，2H)，2.97-2.90(m，1H)，2.75(t，J＝7.3Hz，2H)，2.70(s，2H)，2.46-2.29(m，4H)，1.82-1.66(m，6H)，1.58-1.47(m，2H)，0.85(t，J＝7.3Hz，6H)。
f)(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-(戊-3-基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.031mL)加至(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(戊-3-基)噻唑-4-基)甲酮(实施例71，步骤e)(0.2g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.25g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.023mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.13g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.038g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.17g。m/z 698(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.26(s，1H)，8.01-7.83(m，1H)，7.56-7.38(m，2H)，7.30-7.19(m，1H)，7.01-6.89(m，1H)，6.83-6.71(m，1H)，4.99-4.88(m，1H)，4.38-4.23(m，2H)，3.78-3.57(m，6H)，3.33-2.86(m，11H)，2.10-1.97(m，2H)，1.87-1.61(m，6H)，0.91-0.76(m，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例72
(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)3-甲基丁酰胺
将3-甲基丁酰氯(10mL)小心滴加至冰冷的35％氨水(50mL)中，且将所得悬浮液搅拌1h。反应混合物用DCM(3×100mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为5.6g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ7.20(s，1H)，6.67(s，1H)，1.99-1.88(m，3H)，0.87(d，J＝6.4Hz，6H)。
b)3-甲基硫代丁酰胺
将五硫化二磷(2.9g)加至3-甲基丁酰胺(实施例72，步骤a)(5.6g)的MTBE(300mL)悬浮液中，且将所得混合物搅拌3h。反应混合物通过硅藻土来过滤，且滤垫用MTBE(100mL)洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为5.6g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ9.32(s，1H)，9.10(s，1H)，2.33(d，J＝7.3Hz，2H)，2.22-2.07(m，1H)，0.88(d，J＝6.4Hz，6H)。
c)2-异丁基噻唑-4-甲酸乙酯
向3-甲基硫代丁酰胺(实施例72，步骤b)(5.6g)的乙醇(100mL)溶液中加入3-溴-2-氧代丙酸乙酯(6.7mL)。将所得混合物在RT搅拌过夜，然后加热回流5h。蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(250mL)和饱和碳酸氢钠溶液(100mL)之间分配。分离各层，有机相用盐水(100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用20∶1至10∶1异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为5.2g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.39(s，1H)，4.29(q，J＝7.1Hz，2H)，2.88(d，J＝7.2Hz，2H)，2.10-1.97(m，1H)，1.30(t，J＝7.2Hz，3H)，0.93(d，J＝6.7Hz，6H)。
d)2-异丁基噻唑-4-甲酸
将氢氧化锂一水合物(4.1g)加至2-异丁基噻唑-4-甲酸乙酯(实施例72，步骤c)(5.2g)在THF(80mL)和水(20mL)的混合物中的溶液中。将所得混合物搅拌过夜。反应混合物用浓盐酸(10mL)小心酸化，且蒸发挥发物。将所得含水混合物倒入盐水(50mL)中，且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为3.8g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ12.90(s，1H)，8.32(s，1H)，2.87(d，J＝7.1Hz，2H)，2.11-1.96(m，1H)，0.94(d，J＝6.7Hz，6H)。
e)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丁基噻唑-4-基)甲酮
在0℃将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.2g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例67，步骤f)(0.13g)、2-异丁基噻唑-4-甲酸(实施例72，步骤d)(0.08g)和三乙胺(0.23mL)的DMF(7mL)溶液中，将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌2h。将混合物在乙酸乙酯和盐水(100mL)之间分配，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，然后蒸发。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.24g。m/z 476(M+H)+(APCI)。1HNMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.90(s，1H)，7.22-7.14(m，2H)，7.03(t，J＝7.4Hz，1H)，4.35(t，J＝4.7Hz，1H)，3.68-3.57(m，6H)，3.52-3.42(m，2H)，2.89(d，J＝6.9Hz，2H)，2.76(t，J＝7.5Hz，2H)，2.70(s，2H)，2.45-2.28(m，4H)，2.12-2.03(m，1H)，1.74-1.65(m，2H)，1.57-1.48(m，2H)，0.96(d，J＝6.7Hz，6H)。
f)(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.031mL)加至(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丁基噻唑-4-基)甲酮(实施例72，步骤e)(0.19g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.25g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.023mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.13g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.038g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.10g。m/z 684(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.39-11.19(m，1H)，7.94(s，1H)，7.53-7.40(m，2H)，7.25(t，J＝7.7Hz，1H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.92(dd，J＝8.5，4.9Hz，1H)，4.33-4.26(m，2H)，3.72-3.59(m，6H)，3.28-3.01(m，10H)，2.88(d，J＝6.9Hz，2H)，2.11-1.95(m，3H)，1.84-1.69(m，2H)，0.95(d，J＝6.7Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例73
(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(5-异丙基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-2-基)甲酮
在0℃将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.2g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例67，步骤f)(0.13g)、5-异丙基噻吩-2-甲酸(0.07g)和三乙胺(0.23mL)的DMF(7mL)溶液中。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌2h。将混合物在乙酸乙酯(100mL)和盐水(100mL)之间分配，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发溶剂。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.23g。m/z 461(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.22-7.15(m，3H)，7.03(t，J＝7.4Hz，1H)，6.83(d，J＝3.6Hz，1H)，4.35(t，J＝5.0Hz，1H)，3.69-3.58(m，6H)，3.49(s，2H)，3.21-3.13(m，1H)，2.76(t，J＝8.4Hz，2H)，2.70(s，2H)，2.42-2.36(m，4H)，1.75-1.68(m，2H)，1.56-1.46(m，2H)，1.29(d，J＝6.7Hz，6H)。
b)(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(5-异丙基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.031mL)加至(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-2-基)甲酮(实施例73，步骤a)(0.18g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.25g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.023mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.13g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.025g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.12g。m/z 669(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.26(s，1H)，7.54-7.40(m，2H)，7.28-7.21(m，2H)，6.94(d，J＝8.5Hz，1H)，6.84(dd，J＝3.6，0.8Hz，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.93(dd，J＝8.5，4.9Hz，1H)，4.34(s，2H)，3.73-3.64(m，4H)，3.54(s，2H)，3.29-3.03(m，11H)，2.07-1.98(m，2H)，1.85-1.73(m，2H)，1.29(d，J＝6.9Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例74
(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(4-异丙基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)1-(4-异丙基噻吩-2-基)乙酮
将1-(噻吩-2-基)乙酮(5.4mL)加至冰冷的氯化铝(33g)的无水氯仿(100mL)悬浮液中。然后历时5min滴加2-溴丙烷(5.2mL)。将反应混合物温热至RT，且搅拌过夜。将深色悬浮液小心倒在冰上，且将混合物搅拌10min。分离各层，且水相用DCM(100mL)萃取。合并的有机层用氢氧化钠溶液(2M，200mL)和水(200mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用2％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为浅黄色油状物。收率为5.4g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.58(d，J＝1.3Hz，1H)，3.01-2.92(m，1H)，2.55(s，3H)，1.27(d，J＝6.9Hz，6H)。1个噻吩质子由于CDCl3信号～7.26而模糊。
b)4-异丙基噻吩-2-甲酸
在60℃将1-(4-异丙基噻吩-2-基)乙酮(实施例74，步骤a)(1g)的1，4-二氧杂环己烷(10mL)溶液小心加至氢氧化钠(1.19g)在次氯酸钠水溶液(8％，50mL)中的溶液中。将所得混合物加热至75℃，且搅拌1h。冷却反应混合物，且水相用DCM(50mL)洗涤。水相用亚硫酸氢钠水溶液(10％，20mL)处理，且用浓盐酸小心酸化。所得混合物用DCM(3×50mL)萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到黄色油状物。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-95％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且在高真空下干燥，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.5g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ12.95(s，1H)，7.65(d，J＝1.5Hz，1H)，7.51-7.49(m，1H)，2.94(七重峰，J＝6.9Hz，1H)，1.20(d，J＝6.9Hz，6H)。
c)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(4-异丙基噻吩-2-基)甲酮
在0℃将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.2g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例67，步骤f)(0.13g)、4-异丙基噻吩-2-甲酸(实施例74，步骤b)(0.07g)和三乙胺(0.23mL)的DMF(7mL)溶液中。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌2h。将混合物在乙酸乙酯(100mL)和盐水(100mL)之间分配，有机层用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.23g。m/z 461(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.30-7.14(m，4H)，7.05-7.00(m，1H)，4.35(s，1H)，3.68-3.58(m，6H)，3.51-3.47(m，2H)，2.98-2.92(m，1H)，2.75(t，J＝7.3Hz，2H)，2.70(s，2H)，2.41-2.34(m，4H)，1.75-1.68(m，2H)，1.56-1.47(m，2H)，1.21(d，J＝6.9Hz，6H)。
d)(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(4-异丙基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.031mL)加至(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(4-异丙基噻吩-2-基)甲酮(实施例74，步骤c)(0.18g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.25g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.023mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.13g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.025g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.13g。m/z 669(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.26(s，1H)，7.53-7.47(m，1H)，7.47-7.41(m，1H)，7.31(s，1H)，7.29(s，1H)，7.25(t，J＝7.6Hz，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.93(dd，J＝8.3，4.7Hz，1H)，4.35-4.31(m，2H)，3.73-3.62(m，4H)，3.54(s，2H)，3.26-3.03(m，10H)，2.94(七重峰，J＝7Hz，1H)，2.08-1.98(m，2H)，1.85-1.71(m，2H)，1.21(d，J＝6.9Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例75
(R)-7-(2-(2-氯-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)3-(羧基甲基)-4-氯苯甲酸
将氢氧化钾(1.549g)的水(15mL)溶液加至4-氯-3-(氰基甲基)苯甲酸(2.07g)的乙醇(15mL)悬浮液中，且将所得溶液加热回流4小时，然后冷却。真空浓缩混合物以除去乙醇，然后用水稀释，且用乙酸乙酯洗涤2次。弃去有机相，同时水相用浓盐酸酸化至pH 1，且用乙酸乙酯萃取2次。合并的萃取物用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到副标题化合物，其为浅褐色固体。收率为2.06g。m/z 214(M+)(EI)。
b)2-(2-氯-5-(羟基甲基)苯基)乙醇
在室温历时3分钟将硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，12.0mL)逐份加至3-(羧基甲基)-4-氯苯甲酸(实施例75，步骤a)(2.06g)的无水THF(30mL)悬浮液中。将所得冒泡稠悬浮液在室温搅拌1小时，然后加热至回流且保持1小时。冷却的混合物通过历时2分钟滴加甲醇(10mL)来淬灭。将溶液在室温搅拌30分钟，然后浓缩到硅胶上，且通过快速硅胶色谱(用5％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.983g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.35(d，J＝8.2Hz，1H)，7.28(d，J＝2.1Hz，1H)，7.18(dd，J＝8.2，2.1Hz，1H)，4.65(s，2H)，3.89(t，J＝6.7Hz，2H)，3.02(t，J＝6.5Hz，2H)。2个可交换的质子没有观察。
c)4-氯-3-(2-羟基乙基)苯甲醛
将二氧化锰(IV)(1.00g)加至2-(2-氯-5-(羟基甲基)苯基)乙醇(实施例75，步骤b)(0.205g)的DCM(10mL)溶液中，且将所得悬浮液在室温搅拌过夜。然后混合物通过硅藻土来过滤，且滤垫用DCM充分洗涤。真空浓缩滤液和洗涤液，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.159g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.97(s，1H)，7.81(d，J＝2.0，1H)，7.70(dd，J＝2.0，8.2，1H)，7.53(t，J＝6.7，1H)，3.94(dd，J＝6.4，11.6，2H)，3.10(t，J＝6.6，2H)，1.46(t，J＝5.2，1H)。
d)(9-(4-氯-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.178g)的NMP(2mL)溶液用乙酸(0.032mL)处理，且搅拌5分钟。然后加入4-氯-3-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例75，步骤c)(0.154g)的NMP(3mL)溶液，将所得溶液搅拌1小时，然后用三乙酰氧基硼氢化钠(0.181g)处理，且在室温搅拌过夜。再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.404g)，且将混合物再搅拌6小时，然后倒入饱和碳酸氢钠中，且用乙酸乙酯萃取2次。合并的萃取物用水洗涤3次，用盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥，且通过快速硅胶色谱(用1∶2∶97三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色胶状物。收率为0.157g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.90(s，1H)，7.29(d，J＝8.2Hz，1H)，7.24(d，J＝1.4Hz，1H)，7.11(dd，J＝8.2，1.8Hz，1H)，4.37(t，J＝5.3Hz，1H)，3.73-3.56(m，8H)，3.41(s，2H)，3.35-3.28(m，1H)，2.85(t，J＝6.9Hz，2H)，2.41-2.10(m，4H)，1.75-1.62(m，2H)，1.60-1.46(m，2H)，1.36(d，J＝6.7Hz，6H)。
e)2-(2-氯-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
将(9-(4-氯-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例75，步骤d)(0.152g)的DCM(5mL)溶液在冰-水中冷却，用三氟乙酸(0.049mL)处理，且搅拌5分钟。加入戴斯-马丁高碘剂(0.205g)，然后从冷却浴中取出混合物，且在室温搅拌30分钟。溶液用饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)稀释，且将所得混合物剧烈搅拌10分钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机相用盐水洗涤，用乙酸(0.1mL)酸化，用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到粗副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.197g。m/z476(M+H)+(APCI)。
f)(R)-7-(2-(2-氯-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.145g)的甲醇(2mL)溶液用乙酸(0.024mL)处理，且搅拌5分钟。然后加入2-(2-氯-5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例75，步骤e)(0.197g)的甲醇(3mL)溶液，将所得混合物在室温搅拌5分钟，然后在冰-水中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.039g)处理。移开冷却浴，且将混合物在室温搅拌140分钟，然后再用氰基硼氢化钠(0.040g)处理。然后将混合物搅拌过夜。第二天上午，混合物用1滴水淬灭，过滤溶液，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为15-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发3次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤收集所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.077g。m/z 686/688(M+H)+(APCI)。1HNMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.94(s，1H)，7.53(d，J＝8.2Hz，1H)，7.48-7.39(m，2H)，6.94(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.91(dd，J＝8.5，4.9Hz，1H)，4.22(s，2H)，3.75-3.60(m，6H)，3.52-2.96(m，11H)，2.09-1.90(m，2H)，1.83-1.62(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例76
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(4-异丙基噻唑-2-基)甲酮(实施例66，步骤c)(0.195g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.034ml)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.242g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.025ml)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(191mg)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物冷却至0℃，且一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.140g)。将反应混合物在20℃搅拌3小时。减压除去溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用9％甲醇/二氯甲烷(含有1％‘880’氨水)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.133g。m/z760(M+H)+(APCI)。
b)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将三乙胺三氢氟酸盐(0.034mL)的甲醇(1mL)溶液加至(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(4-异丙基噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例76，步骤a)(0.133g)的THF(4mL)溶液中，且将反应混合物在20℃静置18小时。减压除去溶剂，且粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.090g。m/z 646(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.17(d，J＝10.0Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.44-7.33(m，4H)，7.14(d，J＝8.2Hz，1H)，7.00(d，J＝8.2Hz，1H)，6.54(d，J＝10.0Hz，1H)，5.38-5.33(m，1H)，4.28(s，2H)，3.78-3.74(m，2H)，4.13-3.47(m，4H)，3.28(t，J＝8.2Hz，2H)，3.21-3.00(m，9H)，2.09-1.99(m，2H)，1.84-1.72(m，2H)，1.26(d，J＝6.8Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例77
(R)-5-(2-(2，3-二氟-4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(2，3-二氟-4-羟基苯基)乙酸
在-78℃将三溴化硼溶液(浓度为1M的DCM溶液，13.4mL)滴加至2-(2，3-二氟-4-甲氧基苯基)乙酸(1.18g)的DCM(5mL)悬浮液中。将反应混合物温热至RT，且搅拌过夜。将反应混合物冷却至-78℃，且加入三溴化硼溶液(浓度为1M的DCM溶液，13.4mL)。将反应混合物温热至RT，且搅拌1h。将反应混合物倒在冰上。所得水溶液用DCM(5×50mL)萃取。然后水相用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机溶液，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为棕色固体。收率为1.09g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ12.43(s，1H)，10.24(s，1H)，6.91(td，J＝8.3，2.1Hz，1H)，6.72(td，J＝8.3，1.8Hz，1H)，3.54(s，2H)。
b)2，3-二氟-4-(2-羟基乙基)苯酚
在0℃将硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，14.4mL)滴加至2-(2，3-二氟-4-羟基苯基)乙酸(实施例77，步骤a)(1.08g)的四氢呋喃(25mL)溶液中，将所得混合物温热至RT，且搅拌过夜。反应混合物用甲醇淬灭，且当不再冒泡时，蒸发溶剂。残余物经硅胶色谱(用4∶1异己烷∶乙酸乙酯至乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.95g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ10.08(s，1H)，6.87(td，J＝8.3，2.2Hz，1H)，6.69(td，J＝8.4，1.9Hz，1H)，4.68(t，J＝5.3Hz，1H)，3.58-3.49(m，2H)，2.66(t，J＝7.0Hz，2H)。
c)2-(4-(2，2-二乙氧基乙氧基)-2，3-二氟苯基)乙醇
将碳酸铯(0.99g)加至2，3-二氟-4-(2-羟基乙基)苯酚(实施例77，步骤b)(0.44g)和2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(0.4mL)的DMF(10mL)溶液中。将所得悬浮液在90℃加热18h。冷却反应混合物，且倒入水(100mL)中。含水混合物用乙醚(3×100mL)萃取。合并的有机溶液用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。粗物质经硅胶色谱(用异己烷至1∶1乙酸乙酯∶异己烷梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.49g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.06-6.93(m，2H)，4.81(t，J＝5.1Hz，1H)，4.70(t，J＝5.3Hz，1H)，4.02(d，J＝5.4Hz，2H)，3.73-3.62(m，2H)，3.61-3.50(m，4H)，2.71(t，J＝6.9Hz，2H)，1.13(t，J＝7.0Hz，6H)。
d)2-(2，3-二氟-4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙醛
将浓盐酸(5mL)加至2-(4-(2，2-二乙氧基乙氧基)-2，3-二氟苯基)乙醇(实施例77，步骤c)(0.49g)的1，4-二氧杂环己烷(10mL)溶液中，且将所得混合物搅拌1h。混合物用水(50mL)小心稀释，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其直接使用。收率为0.31g。
e)(9-(2-(2，3-二氟-4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.5g)加至2-(2，3-二氟-4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙醛(实施例77，步骤d)(0.31g)在N-甲基吡咯烷-2-酮(10mL)和乙酸(0.07mL)中的溶液中。将所得混合物搅拌30min，然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.38g)，将反应混合物温热至RT，且搅拌过夜。将反应混合物在乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)之间分配。水相用饱和碳酸氢钠溶液碱化，且分离各层。水相用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机溶液用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至5％三乙胺/乙酸乙酯洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.41g。m/z 510(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.93(s，1H)，7.06-6.85(m，2H)，4.58-4.36(m，1H)，4.13(t，J＝5.7Hz，2H)，3.73-3.51(m，8H)，3.36-3.23(m，1H)，2.76-2.63(m，4H)，1.76-1.45(m，4H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)+4个质子由于DMSO峰而模糊。
f)(R)-5-(2-(2，3-二氟-4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.03mL)加至(9-(2-(2，3-二氟-4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例77，步骤e)(0.18g)的DCM(5mL)溶液中。将反应混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.225g)。将混合物温热至RT，且搅拌1h。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)，且将混合物剧烈搅拌5min。分离各层，且水层用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。将残余物重新溶解在甲醇(5mL)中，加入乙酸(0.02mL)和(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO2004106333)(0.12g)，将混合物搅拌5min，且在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.033g)，将反应混合物温热至RT，且搅拌过夜。浓缩反应混合物，且经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发。将残余物溶解在THF(5mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.17mL)，且将混合物搅拌过夜。蒸发溶剂，且残余物与甲苯共沸2次。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.11g。m/z 712(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.18(d，J＝9.7Hz，1H)，7.96(s，1H)，7.18-6.96(m，4H)，6.54(d，J＝10.0Hz，1H)，5.36(dd，J＝8.7，4.1Hz，1H)，4.50-4.42(m，2H)，3.76-3.65(m，6H)，3.62-3.54(m，2H)，3.44-2.98(m，11H)，2.12-2.01(m，2H)，1.90-1.75(m，2H)，1.35(d，J＝6.7Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例78
(R)-7-(2-(3-((4-(2-丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)叔丁基(2-氟苯乙氧基)二甲基甲硅烷
将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(6.45g)加至搅拌的在冰浴中冷却的2-(2-氟苯基)乙醇(5.00g)和1H-咪唑(7.29g)的无水DMF(30mL)溶液中。45min后，反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤3次，且真空蒸发。将所得胶状物溶解在异己烷中，且加载至硅胶柱(先后用异己烷和1∶3乙酸乙酯∶异己烷洗脱)，收集产物，其为油状物。收率为9.0g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.28-7.18(m，2H)，7.13-7.00(m，2H)，3.84(t，J＝6.8Hz，2H)，2.89(t，J＝7.2Hz，2H)，0.89(s，9H)，0.008(s，6H)。
b)3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苯甲醛
历时5分钟将叔丁基(2-氟苯乙氧基)二甲基甲硅烷(实施例78，步骤a)(5.00g)加至搅拌的冷却至-78℃的仲丁基锂(浓度为1.4M的环己烷溶液，14.0mL)和N1-(2-(二甲基氨基)乙基)-N1，N2，N2-三甲基乙-1，2-二胺(4.10mL)的THF(25mL)溶液中。2h后，加入N，N-二甲基甲酰胺(10.06g)，将反应混合物在-78℃搅拌1h，然后移开冷却浴。再过0.5h后，反应混合物用水淬灭。加入乙酸乙酯(300mL)，反应混合物用水(3×150mL)、2M HCl(2×50mL)、水(2×50mL)和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为油状物。收率为5.3g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.40(s，1H)，7.76(dt，J＝2.0和6.8Hz，1H)，7.54(dt，J＝1.6和7.2Hz，1H)，7.21(t，J＝7.2Hz，1H)，3.88(t，J＝5.2Hz，2H)，2.95(dt，J＝1.2和6.4Hz，2H)，0.88(s，9H)，0.008(s，6H)。
c)1-(9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)-2，2，2-三氟乙酮
将3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苯甲醛(实施例78，步骤b)(2.159g)加至搅拌的2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮三氟乙酸盐(实施例12，步骤d)(2.80g)和乙酸(0.438mL)的NMP(25mL)溶液中。5分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.24g)。16h后，加入水，且将混合物在水(250mL)和乙酸乙酯(250mL)之间分配。乙酸乙酯溶液用水(3×250mL)和盐水洗涤，然后蒸发至干。经硅胶色谱(用20∶1∶1异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为2.5g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.27-7.20(m，1H)，7.20-7.13(m，1H)，7.08-7.01(m，1H)，3.84(t，J＝7.2Hz，3H)，3.80-3.77(m，2H)，3.71-3.67(m，1H)，3.64-3.58(m，3H)，3.56(s，1H)，3.41(s，1H)，2.90(q，J＝6.4Hz，2H)，2.69-2.62(m，1H)，2.52-2.44(m，1H)，2.43-2.35(m，1H)，1.92-1.80(m，2H)，1.72-1.60(m，2H)，0.89(s，9H)，0.00(s，6H)。
d)9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳
将‘880’氨水(3.0mL)加至搅拌的1-(9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)-2，2，2-三氟乙酮(实施例78，步骤c)(2.5g)的MeOH(10mL)溶液中。1h后，将反应混合物蒸发至干。加入乙腈，将溶液真空蒸发至干，且将该操作重复3次，得到副标题化合物，其为油状物。收率为2.07g。直接使用。m/z 423(M+H)+(APCI)。
e)硫代戊酰胺
将五硫化二磷(5.56g)加至搅拌的戊酰胺(10.0g)的甲基叔丁基醚(300mL)悬浮液中。16h后，混合物通过硅藻土来过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为11.4g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ9.35-9.23(宽单峰，1H)，9.15-9.05(宽单峰，1H)，2.52-2.42(m，2H)，1.68-1.55(m，2H)，1.35-1.22(m，2H)，0.87(t，J＝7.6Hz，3H)。
f)2-丁基噻唑-4-甲酸乙酯
将3-溴-2-氧代丙酸乙酯(6.76mL)极小心加至搅拌的硫代戊酰胺(实施例78，步骤e)(6.30g)的乙醇(100mL)溶液中。然后将溶液加热回流16h。冷却后，反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用1∶6乙酸乙酯∶异己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为6.5g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(s，1H)，4.42(q，J＝7.1Hz，2H)，3.02-3.05(m，2H)，1.85-1.75(m，2H)，1.50-1.38(m，5H)，0.95(t，J＝7.1Hz，3H)。
g)2-丁基噻唑-4-甲酸
将氢氧化锂(5.00g)加至搅拌的2-丁基噻唑-4-甲酸乙酯(实施例78，步骤f)(6.50g)在THF(80mL)和水(20mL)中的混合物中。16h后，加入浓盐酸(10mL)，且将溶液浓缩至～40mL。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配。水层用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为灰白色固体。收率为4.6g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.18(s，1H)，3.11-3.03(m，2H)，1.88-1.78(m，2H)，1.52-1.38(m，2H)，0.97(t，J＝7.2Hz，3H)。1个可交换的质子没有观察。
h)(9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-丁基噻唑-4-基)甲酮
将2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基)-1，1，3，3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V)(0.378g)加至搅拌的2-丁基噻唑-4-甲酸(实施例78，步骤g)(0.193g)、9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳(实施例78，步骤d)(0.4g)和三乙胺(0.383g)的DMF(4mL)溶液中。1h后，将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层用水和盐水洗涤2次，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用7∶1∶0.5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.35g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.94(s，1H)，7.30-7.16(m，2H)，7.13-7.05(m，1H)，3.88-3.80(m，2H)，3.74-3.62(m，6H)，3.55-3.49(m，2H)，3.09-3.00(m，水峰下的2H)，2.87-2.79(m，2H)，2.49-2.32(m，4H)，1.84-1.68(m，4H)，1.62-1.51(m，2H)，1.50-1.39(m，2H)，0.97(t，J＝7.9Hz，3H)，0.87(s，9H)，0.00(s，6H)。
i)(2-丁基噻唑-4-基)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将TBAF(浓度为1M的THF溶液，2.0mL)加至(9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-丁基噻唑-4-基)甲酮(实施例78，步骤h)(0.350g)的THF(4mL)溶液中。0.5h后，浓缩溶液。经硅胶色谱(用10∶1乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.24g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.88(s，1H)，7.22-7.13(m，2H)，7.03(t，J＝7.6Hz，1H)，4.35(t，J＝5.2Hz，1H)，3.68-3.56(m，12H)，3.48(s，2H)，3.00(t，J＝7.5Hz，2H)，2.75(t，J＝7.5Hz，2H)，2.44-2.28(m，4H)，1.78-1.65(m，2H)，1.45-1.33(m，2H)，0.91(t，J＝7.5Hz，3H)。
j)2-(3-((4-(2-丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.278g)加至搅拌的(2-丁基噻唑-4-基)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例78，步骤i)(0.240g)和三氟乙酸(0.058mL)的DCM(5mL)溶液中。1h后，加入乙酸乙酯(30mL)，接着加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)和饱和碳酸氢钠溶液(5mL)的混合物。充分振摇反应混合物，且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。加入乙酸(0.08mL)，溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发(浴温为～30℃)，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.24g。直接使用。m/z 474(M+H)+(APCI)。
k)(R)-7-(2-(3-((4-(2-丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将乙酸(0.044mL)加至搅拌的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.200g)和2-(3-((4-(2-丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯基)乙醛(实施例78，步骤j)(0.240g)的MeOH(10mL)溶液中。1min后，加入氰基硼氢化钠(0.064g)。1.5h后，对反应混合物进行过滤，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有纯产物的馏分，且真空蒸发。加入乙腈(200mL)，且将溶液真空蒸发成胶状物。将该操作重复2次。加入乙醚，收集标题化合物，其为固体。收率为0.15g。m/z 684(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.28(宽单峰，1H)，7.92(s，1H)，7.52-7.37(m，2H)，7.25(t，J＝8.4Hz，1H)，6.93(d，J＝8.3Hz，1H)，6.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.94-4.87(m，1H)，4.30(s，2H)，3.70(宽单峰，6H)，3.63(s，2H)，3.28-2.92(m，10H)，2.06-1.94(m，2H)，1.82-1.66(m，4H)，1.43-1.31(m，2H)，0.90(t，J＝7.6Hz，3H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例79
(R)-7-(2-(3-((4-(苯并[b]噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)苯并[b]噻吩-2-基(9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基)-1，1，3，3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V)(0.378g)加至搅拌的苯并[b]噻吩-2-甲酸(0.186g)、9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳(实施例78，步骤d)(0.40g)和三乙胺(0.383g)的DMF(4mL)溶液中。1h后，将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层用水洗涤2次，用盐水洗涤1次，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用7∶1∶0.5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.38g。1HNMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.14-8.08(m，1H)，8.05-7.99(m，1H)，7.82(s，1H)，7.57-7.51(m，2H)，7.33-7.23(m，2H)，7.14(t，J＝8.1Hz，1H)，3.86(t，J＝7.3Hz，2H)，3.81-3.72(m，4H)，3.63(s，2H)，3.56(s，2H)，3.38(s，2H)，2.86(t，J＝7.4Hz，2H)，2.46-2.34(m，2H)，1.89-1.81(m，2H)，1.66-1.52(m，2H)，0.88(s，9H)，0.00(s，6H)。
b)苯并[b]噻吩-2-基(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将TBAF(浓度为1M的THF溶液，2mL)加至苯并[b]噻吩-2-基(9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例79，步骤a)(0.370g)的THF(4mL)溶液中。0.5h后，浓缩溶液。经硅胶色谱(用10∶1乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.26g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.99-7.95(m，1H)，7.93-7.88(m，1H)，7.67(s，1H)，7.46-7.39(m，2H)，7.17(q，J＝7.5Hz，2H)，7.01(t，J＝8.0Hz，1H)，4.39-4.33(m，1H)，3.72-3.57(m，4H)，3.54(s，2H)，3.48(s，2H)，2.99(s，2H)，2.75(t，J＝7.6Hz，2H)，2.46-2.32(m，4H)，1.80-1.71(m，2H)，1.58-1.48(m，2H)。
c)2-(3-((4-(苯并[b]噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.282g)加至搅拌的苯并[b]噻吩-2-基(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例79，步骤b)(0.240g)和三氟乙酸(0.059mL)的DCM(5mL)溶液中。1h后，加入乙酸乙酯(30mL)，接着加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)和饱和碳酸氢钠溶液(5mL)的混合物。充分振摇反应混合物，且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。加入乙酸(0.08mL)，然后溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发(浴温为～30℃)，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.24g。直接使用。m/z 467(M+H)+(APCI)。
d)(R)-7-(2-(3-((4-(苯并[b]噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将乙酸(0.044mL)加至搅拌的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.203g)和2-(3-((4-(苯并[b]噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯基)乙醛(实施例79，步骤c)(0.240g)的MeOH(10mL)溶液中。1min后，加入氰基硼氢化钠(0.081g)。1.5h后，对反应混合物进行过滤，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有纯产物的馏分，且真空蒸发。加入乙腈(200mL)，且将溶液真空蒸发成胶状物。将该操作重复2次。加入乙醚，收集标题化合物，其为固体。收率为0.19g。m/z 677(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.28(s，1H)，8.00-7.95(m，1H)，7.92-7.88(m，1H)，7.69(s，1H)，7.50-7.38(m，4H)，7.25(t，J＝7.5Hz，1H)，6.94(d，J＝8.4Hz，1H)，6.77(d，J＝8.4Hz，1H)，4.90(dd，J＝4.2和8.56Hz，1H)，4.35-4.19(m，2H)，3.76-3.68(m，4H)，3.59(s，2H)，3.27-2.99(m，10H)，2.09-1.99(m，2H)，1.82-1.70(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例80
(R)-7-(2-(2-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-氯-3-(氰基甲基)苯甲酸
3-(溴甲基)-2-氯苯甲酸(6.39g)的DMF(75mL)溶液用氰化钾(3.34g)的水(25mL)溶液处理，且将所得溶液在室温搅拌过夜。混合物用水稀释，且用乙酸乙酯萃取2次。弃去有机相，同时水相用浓盐酸(25mL)小心酸化，且通过氮气气流将所释放的任意HCN排到漂洗溶液中。搅拌2小时后，水相用乙酸乙酯再萃取2次。合并的有机相用水洗涤3次，用盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到粗副标题化合物，其为浅褐色固体。收率为4.12g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.73(dd，J＝7.7，1.5Hz，1H)，7.69(dd，J＝7.8，1.7Hz，1H)，7.48(t，J＝7.7Hz，1H)，4.16(s，2H)+1个可交换的质子没有观察。
b)3-(羧基甲基)-2-氯苯甲酸
将氢氧化钾(2.976g)的水(30mL)溶液加至2-氯-3-(氰基甲基)苯甲酸(实施例80，步骤a)(4.12g)的乙醇(30mL)悬浮液中，且将所得溶液加热回流2小时，然后冷却过夜。真空浓缩混合物以除去乙醇，然后用水稀释，且用乙酸乙酯洗涤2次。弃去有机相，同时水相用浓盐酸酸化至pH 1，且用乙酸乙酯萃取3次。合并的萃取物用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到粗副标题化合物，其为黄色固体。收率为4.11g。直接使用。
c)2-(2-氯-3-(羟基甲基)苯基)乙醇
在室温历时5分钟将硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，20mL)逐份加至3-(羧基甲基)-2-氯苯甲酸(实施例80，步骤b)(4.11g)的无水THF(100mL)悬浮液中。将所得冒泡悬浮液在室温搅拌30分钟，然后加热至回流且保持60分钟，且冷却至室温过夜。混合物通过历时15分钟滴加甲醇(15mL)来淬灭。混合物再用甲醇稀释，得到溶液，然后真空浓缩所述溶液，得到浆状物。浆状物通过快速硅胶色谱(用2％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到粗副标题化合物，其为白色固体。收率为1.44g。m/z 186(M+)(EI)。
d)2-氯-3-(2-羟基乙基)苯甲醛
将二氧化锰(IV)(1.599g)加至2-(2-氯-3-(羟基甲基)苯基)乙醇(实施例80，步骤c)(0.342g)的DCM(20mL)溶液中，且将所得悬浮液在室温搅拌过夜。然后将混合物浓缩到硅胶上，且通过快速硅胶色谱(用25％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色结晶固体。收率为0.223g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.54(d，J＝0.8Hz，1H)，7.83(dd，J＝7.7，1.5Hz，1H)，7.55(dd，J＝7.7，1.8Hz，1H)，7.35(t，J＝7.6Hz，1H)，3.94(dd，J＝11.0，6.4Hz，2H)，3.11(t，J＝6.6Hz，2H)，1.46(t，J＝4.9Hz，1H)。
e)(9-(2-氯-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.325g)的NMP(3mL)溶液用乙酸(0.067mL)处理，且搅拌5分钟。然后加入2-氯-3-(2-羟基乙基)苯甲醛(实施例80，步骤d)(0.217g)的NMP(4mL)溶液，将所得溶液搅拌1小时，然后用三乙酰氧基硼氢化钠(1.025g)处理。将混合物在室温搅拌过夜，然后倒入饱和碳酸氢钠中，且用乙酸乙酯萃取2次。合并的萃取物用水洗涤3次，用盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥，且通过快速硅胶色谱(用1∶2∶97三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色胶状物。收率为0.411g。1HNMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.91(d，J＝1.3Hz，1H)，7.30(d，J＝7.2Hz，1H)，7.24-7.16(m，2H)，4.36(t，J＝5.1Hz，1H)，3.73-3.59(m，8H)，3.55(s，2H)，3.32(七重峰，J＝6.8Hz，1H)，2.89(t，J＝7.0Hz，2H)，2.46-2.40(m，1H)，2.40-2.28(m，1H)，2.17(t，J＝8.1Hz，1H)，1.91(五重峰，J＝7.5Hz，1H)，1.77-1.65(m，2H)，1.62-1.50(m，2H)，1.36(d，J＝6.5Hz，6H)。
f)2-(2-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
将(9-(2-氯-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例80，步骤e)(0.386g)的DCM(5mL)溶液在冰-水中冷却，用三氟乙酸(0.125mL)处理，且搅拌5分钟。加入戴斯-马丁高碘剂(0.519g)，然后从冷却浴中取出混合物，且在室温搅拌35分钟。溶液用饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(5mL)稀释，且将所得混合物剧烈搅拌10分钟。然后混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机相用盐水洗涤，用乙酸(0.1mL)酸化，用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩，得到粗副标题化合物，其为浅黄色胶状物。收率为0.494g。m/z476(M+H)+(APCI)。
g)(R)-7-(2-(2-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.181g)的甲醇(2mL)溶液用乙酸(0.030mL)处理，且搅拌10分钟。然后加入2-(2-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例80，步骤f)(0.247g)的甲醇(3mL)溶液，将所得混合物在室温搅拌10分钟，然后在冰-水中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.102g)处理。移开冷却浴，且将混合物在室温搅拌过夜。第二天，再加入氰基硼氢化钠(0.099g)，且将混合物再搅拌4小时。溶液通过加入1滴水来淬灭，过滤，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发3次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤收集所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.053g。m/z 686/688(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ11.68(s，1H)，10.23(s，1H)，8.91(宽二重峰，J＝26.7Hz，2H)，8.03(s，1H)，7.68-7.56(m，1H)，7.54-7.40(m，2H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，6.56-6.43(m，1H)，4.91(宽二重峰，J＝8.5Hz，1H)，4.57-4.43(m，2H)，3.90-3.42(m，6H)，3.38-3.25(m，4H)，3.24-3.02(m，7H)，2.08(宽二重峰，J＝13.3Hz，2H)，1.92-1.54(m，2H)，1.34(d，J＝6.7Hz，6H)。1个可交换的质子没有观察。
实施例81
(R)-5-(2-(2-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(2-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.261g)的甲醇(2mL)溶液用乙酸(0.030mL)处理，且搅拌10分钟。然后加入2-(2-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例80，步骤f)(0.247g)的甲醇(3mL)溶液，将所得混合物在室温搅拌10分钟，然后在冰-水中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.102g)处理。移开冷却浴，且将混合物在室温搅拌过夜。再加入氰基硼氢化钠(0.101g)，且将混合物搅拌过第二夜。然后将溶液真空浓缩到快速硅胶上，且所得粉末通过快速硅胶色谱(用1∶3∶96至1∶5∶94三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.130g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.40(d，J＝9.7Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.48(dd，J＝7.3，2.1Hz，1H[)，7.38-7.30(m，2H)，7.17(d，J＝8.2Hz，1H)，7.09(d，J＝8.2Hz，1H)，6.65(d，J＝9.7Hz，1H)，5.26(dd，J＝7.6，5.0Hz，1H)，3.91-3.78(m，6H)，3.72(s，2H)，3.55-3.46(m，1H)，3.10-3.03(m，1H)，2.99(s，4H)，2.93-2.86(m，1H)，2.68-2.47(m，4H)，1.94-1.84(m，2H)，1.80-1.68(m，2H)，1.55(d，J＝7.0Hz，6H)，0.99(s，9H)，0.18(d，J＝4.6Hz，6H)。3个可交换的质子没有观察。
b)(R)-5-(2-(2-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(2-氯-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例81，步骤a)(0.124g)和三乙胺三氢氟酸盐(0.051mL)的THF(5mL)溶液在室温搅拌过夜，然后真空浓缩。将残余物溶解在甲醇(4mL)中，过滤所得溶液，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发3次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤收集所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为白色粉末。收率为0.076g。m/z 680/682(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.17(d，J＝10.0Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.55(d，J＝7.2Hz，1H)，7.47-7.34(m，2H)，7.14(d，J＝8.2Hz，1H)，6.99(d，J＝8.2Hz，1H)，6.55(d，J＝10.0Hz，1H)，5.34(dd，J＝9.1，4.0Hz，1H)，4.33-4.09(宽多重峰，2H)，3.77-3.60(m，6H)，3.44-2.87(m，11H)，2.02-1.87(m，2H)，1.81-1.65(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例82
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)苯基)乙醇
将‘880’氨溶液(5mL)加至2，2，2-三氟-1-(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例12，步骤e)(2.02g)的甲醇(25mL)溶液中。将所得混合物搅拌90min，且蒸发溶剂。残余物经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为1.44g。m/z291(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.18(t，J＝7.4Hz，1H)，7.13-7.02(m，3H)，4.34(s，1H)，3.61(t，J＝6.9Hz，2H)，3.51-3.45(m，2H)，3.41(s，2H)，2.71(t，J＝6.9Hz，2H)，2.62(t，J＝4.9Hz，2H)，2.52(s，2H)，2.42-2.23(m，4H)，1.82-1.72(m，2H)，1.53-1.38(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
b)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-3-基)甲酮
在0℃将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.55g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)苯基)乙醇(实施例82，步骤a)(0.32g)、5-异丙基噻吩-3-甲酸(0.19g)和三乙胺(0.61mL)的DMF(7mL)溶液中。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌2h。将混合物在乙酸乙酯(100mL)和盐水(100mL)之间分配，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发溶剂。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.4g。m/z 443(M+H)+(APCI)。
c)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.035mL)加至(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-3-基)甲酮(实施例82，步骤b)(0.2g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.29g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.026mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.14g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.043g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.07g。m/z 651(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.50-7.32(m，5H)，6.96-6.88(m，2H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.98-4.88(m，1H)，4.28(s，2H)，3.72-3.63(m，2H)，3.59-3.34(m，4H)，3.29-2.97(m，11H)，2.11-1.93(m，2H)，1.86-1.68(m，2H)，1.28(d，J＝6.7Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例83
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将TFA(0.04mL)加至(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-3-基)甲酮(实施例82，步骤b)(0.2g)的DCM(5mL)溶液中。将反应混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.29g)。将混合物温热至RT，且搅拌1h。加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)，且将混合物剧烈搅拌5min。分离各层，且水层用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。将残余物重新溶解在甲醇(5mL)中，加入乙酸(0.03mL)和(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.15g)，然后将混合物搅拌5min，且在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.043g)，将反应混合物温热至RT，且搅拌过夜。浓缩反应混合物，且经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发。将残余物溶解在THF(5mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.22mL)，且将混合物搅拌过夜。蒸发溶剂，且残余物与甲苯共沸2次。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.06g。m/z 645(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.17(d，J＝9.7Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.45-7.33(m，4H)，7.14(d，J＝8.2Hz，1H)，7.00(d，J＝8.2Hz，1H)，6.90(s，1H)，6.54(d，J＝10.0Hz，1H)，5.36(dd，J＝8.5，4.1Hz，1H)，4.29(s，2H)，3.72-3.63(m，2H)，3.57-3.38(m，4H)，3.28(t，J＝8.1Hz，2H)，3.22-2.98(m，9H)，2.10-1.95(m，2H)，1.81-1.62(m，2H)，1.28(d，J＝6.7Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例84
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-异丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丁基噻唑-4-基)甲酮
在0℃将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.34g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)苯基)乙醇(实施例82，步骤a)(0.2g)、2-异丁基噻唑-4-甲酸(0.13g)和三乙胺(0.38mL)的DMF(7mL)溶液中。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌2h。将混合物在乙酸乙酯(100mL)和盐水(100mL)之间分配，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发溶剂。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.2g。m/z 458(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.99(s，1H)，7.26-7.03(m，4H)，4.60(t，J＝5.3Hz，1H)，3.72-3.50(m，8H)，3.46-3.34(m，2H)，2.94-2.84(m，2H)，2.71(t，J＝7.1Hz，2H)，2.43-2.01(m，5H)，1.74-1.37(m，4H)，1.01-0.90(m，6H)。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-异丁基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.032mL)加至(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丁基噻唑-4-基)甲酮(实施例84，步骤a)(0.19g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.26g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.024mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.11g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.04g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.1g。m/z 666(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.93(s，1H)，7.44-7.33(m，4H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.92(dd，J＝7.9，5.1Hz，1H)，4.34-4.21(m，2H)，3.73-3.60(m，6H)，3.28-2.96(m，10H)，2.88(d，J＝6.9Hz，2H)，2.11-1.95(m，3H)，1.84-1.64(m，2H)，0.95(d，J＝6.7Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例85
(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(6-异丙基吡啶-2-甲酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-异丙基吡啶
在-70℃历时20min将丁基锂溶液(浓度为1.6M的己烷溶液，50mL)滴加至2-乙基吡啶(9.34mL)的四氢呋喃(50mL)溶液中。将混合物搅拌2h，然后历时15min滴加甲基碘(5mL)。将所得橙色浆液温热至RT，且搅拌过夜。蒸发溶剂，且残余物用乙醚(100mL)稀释。有机层用水(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为9.1g。m/z 122(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.56-8.52(m，1H)，7.60(td，J＝7.7，2.1Hz，1H)，7.19-7.15(m，1H)，7.09(ddd，J＝7.4，4.9，1.2Hz，1H)，3.06(七重峰，J＝6.9Hz，1H)，1.31(d，J＝6.9Hz，6H)。
b)2-异丙基吡啶-1-氧化物
将MCPBA(22.0g)加至2-异丙基吡啶(实施例85，步骤a)(9.1g)的DCM(250mL)溶液中，且将所得混合物搅拌3h。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(4×100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用乙酸乙酯至10％甲醇/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为3.9g。m/z 138(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMS0)δ8.23(dd，J＝6.2，1.5Hz，1H)，7.41(dd，J＝7.7，2.3Hz，1H)，7.35-7.24(m，2H)，3.56(七重峰，J＝7Hz，1H)，1.20(d，J＝7Hz，6H)。
c)6-异丙基吡啶-2-甲腈
将三甲基甲硅烷基氰化物(1.53mL)加至2-异丙基吡啶-1-氧化物(实施例85，步骤b)(1.3g)的DCM(40mL)溶液中，且将所得混合物搅拌5min。加入二乙基氨基甲酰氯(1.2mL)，且将混合物搅拌3天。加入碳酸钾水溶液(10％，40mL)，且将混合物搅拌10min。分离各层，且水相用DCM(2×40mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(40mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用3∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为1.23g。m/z 147(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.74(t，J＝7.8Hz，1H)，7.51(dd，J＝7.6，0.9Hz，1H)，7.39(dd，J＝8.1，0.9Hz，1H)，3.11(七重峰，J＝6.7Hz，1H)，1.31(d，J＝6.7Hz，6H)。
d)6-异丙基吡啶-2-甲酸
将浓盐酸(15mL)加至6-异丙基吡啶-2-甲腈(实施例85，步骤c)(1.23g)的甲醇(30mL)溶液中。将所得混合物加热回流17h，且冷却至RT。将混合物小心倒入氢氧化钠溶液(10M，50mL)中，且在RT搅拌过夜。浓缩反应混合物，且使用2M HCl溶液将pH调整至5。含水混合物用氯仿(3×100mL)萃取。合并有机溶液，用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.94g。m/z 166(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.89-7.81(m，2H)，7.48(dd，J＝7.2，1.3Hz，1H)，3.05(七重峰，J＝6.9Hz，1H)，1.22(d，J＝6.9Hz，6H)。1个可交换的质子没有观察。
e)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(6-异丙基吡啶-2-基)甲酮
在0℃将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.20g)加至9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳(实施例78，步骤d)(0.17g)、6-异丙基吡啶-2-甲酸(实施例85，步骤d)(0.07g)和三乙胺(0.22mL)的DMF(7mL)溶液中。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌2h。将混合物在乙酸乙酯(100mL)和盐水(100mL)之间分配。分离有机相，用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发溶剂。将残余物溶解在THF(10mL)中，且加入TBAF的THF溶液(1M，0.8mL)。将所得混合物搅拌2h，且蒸发溶剂。经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(50mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.2g。m/z 456(M+H)+(APCI)。
f)(R)-7-(2-(2-氟-3-((4-(6-异丙基吡啶-2-甲酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将TFA(0.034mL)加至(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(6-异丙基吡啶-2-基)甲酮(实施例85，步骤e)(0.2g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.28g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.025mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.12g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.04g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.057g。m/z 664(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.81(t，J＝7.7Hz，1H)，7.54-7.21(m，5H)，6.94(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.97-4.82(m，1H)，4.40-4.25(m，2H)，3.77-3.47(m，6H)，3.29-2.99(m，11H)，2.11-1.62(m，4H)，1.24(d，J＝6.9Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例86
(R)-7-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(5-乙基噻吩-3-基)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将HATU(0.209g)加至搅拌的5-乙基噻吩-3-甲酸(0.086g)、2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)苯基)乙醇(实施例82，步骤a)(0.160g)和三乙胺(0.3mL)的DMF(2mL)溶液中。1h后，反应混合物用乙酸乙酯(25mL)稀释，且用盐水(2×25mL)洗涤。真空蒸发乙酸乙酯层。经硅胶色谱(用10∶1乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.18g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.52(s，1H)，7.20(t，J＝7.4Hz，1H)，7.13-7.05(m，3H)，6.90(s，1H)，4.60(t，J＝5.3Hz，1H)，3.64-3.55(m，4H)，3.53-3.46(m，2H)，3.31(s，4H)，2.81(q，J＝7.3Hz，2H)，2.74-2.66(m，2H)，2.37-2.23(m，4H)，1.75-1.65(m，2H)，1.56-1.35(m，2H)，1.24(t，J＝7.7Hz，3H)。
b)2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
将戴斯-马丁高碘剂(0.232g)加至搅拌的(5-乙基噻吩-3-基)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例86，步骤a)(0.180g)和三氟乙酸(0.042mL)的DCM(5mL)溶液中。1h后，加入乙酸乙酯(30mL)，接着加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)和饱和碳酸氢钠溶液(5mL)的混合物。充分振摇反应混合物，且分离。乙酸乙酯溶液用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。加入乙酸(0.08mL)，溶液用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发(浴温为～30℃)，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.17g。直接使用。m/z 427(M+H)+(APCI)。
c)(R)-7-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将乙酸(0.036mL)加至搅拌的(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.166g)和2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例86，步骤b)(0.180g)的甲醇(8mL)溶液中。1min后，加入氰基硼氢化钠(0.080g)。1.5h后，对反应混合物进行过滤，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有纯产物的馏分，且真空蒸发。加入乙腈(200mL)，且真空蒸发溶液，得到胶状物。将该操作重复2次。加入乙醚，收集标题化合物，其为白色固体。收率为0.13g。m/z 637(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.37(s，1H)，7.51-7.30(m，5H)，6.93(d，J＝8.1Hz，1H)，6.77(d，J＝8.1Hz，1H)，6.91-6.86(m，1H)，4.94-4.86(m，1H)，4.29(s，2H)，3.71-3.31(m，8H)，3.29-2.93(m，8H)，2.81(q，J＝7.9Hz，2H)，2.15-1.91(m，2H)，1.75-1.51(m，2H)，1.25(t，J＝7.6Hz，3H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例87
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)硫代丁酰胺
将五硫化二磷(3g)加至丁酰胺(5g)的MTBE(300mL)悬浮液中，且将所得混合物搅拌3h。反应混合物通过硅藻土来过滤，且滤垫用MTBE(100mL)洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为5.2g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ9.32(s，1H)，9.12(s，1H)，2.43(t，J＝7.4Hz，2H)，1.72-1.59(m，2H)，0.86(t，J＝7.4Hz，3H)。
b)2-丙基噻唑-4-甲酸乙酯
将3-溴-2-氧代丙酸乙酯(6.32mL)加至硫代丁酰胺(实施例87，步骤a)(5.2g)的乙醇(100mL)溶液中，且将所得混合物加热回流过夜。蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯(100mL)和饱和碳酸氢钠溶液(100mL)之间分配。分离各层，且水相用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用10∶1异己烷∶乙酸乙酯洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为5.24g。m/z 200(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(s，1H)，4.42(q，J＝7.2Hz，2H)，3.04(t，J＝7.7Hz，2H)，1.89-1.78(m，2H)，1.40(t，J＝7.2Hz，3H)，1.02(t，J＝7.2Hz，3H)。
c)2-丙基噻唑-4-甲酸
将氢氧化锂一水合物(4.4g)加至2-丙基噻唑-4-甲酸乙酯(实施例87，步骤b)(5.24g)在THF(80mL)和水(20mL)的混合物中的溶液中。将所得混合物搅拌过夜。反应混合物用浓盐酸酸化，且蒸发挥发物。所得含水混合物用氯化钠饱和，且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机溶液用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为2.5g。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)δ12.91(s，1H)，8.31(s，1H)，2.97(t，J＝7.5Hz，2H)，1.81-1.67(m，2H)，0.95(t，J＝7.3Hz，3H)。
d)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-丙基噻唑-4-基)甲酮
在0℃将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.24g)加至2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)苯基)乙醇(实施例82，步骤a)(0.14g)、2-丙基噻唑-4-甲酸(实施例87，步骤c)(0.084g)和三乙胺(0.27mL)的DMF(7mL)溶液中。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌2h。将混合物在乙酸乙酯(100mL)和盐水(100mL)之间分配，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发溶剂。所得胶状物经硅胶色谱(用47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，加入甲苯(200mL)，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物，其为洁净胶状物。收率为0.14g。m/z 444(M+H)+(APCI)。1HNMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.91(s，1H)，7.18(t，J＝7.4Hz，1H)，7.12-7.04(m，3H)，4.37-4.30(m，1H)，3.69-3.57(m，8H)，3.41(s，2H)，2.98(t，J＝7.3Hz，2H)，2.71(t，J＝7.1Hz，2H)，2.40-2.23(m，4H)，1.82-1.64(m，4H)，1.59-1.46(m，2H)，0.97(t，J＝7.4Hz，3H)。
e)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将TFA(0.023mL)加至(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例87，步骤d)(0.13g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.19g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.017mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.077g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.028g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.09g。m/z652(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.29(s，1H)，7.96-7.92(m，1H)，7.46-7.32(m，4H)，6.98-6.92(m，1H)，6.81-6.75(m，1H)，4.98-4.90(m，1H)，4.34-4.27(m，2H)，3.76-3.62(m，6H)，3.30-2.94(m，12H)，2.08-1.98(m，2H)，1.85-1.70(m，4H)，1.01-0.92(m，3H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例88
(R)-7-(2-(3-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)丙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)3-(2-氟苯基)丙-1-醇
将硼烷-二甲硫醚络合物溶液(浓度为2M的THF溶液，27.6mL)滴加至3-(2-氟苯基)丙酸(3.09g)的四氢呋喃(25mL)溶液中，将所得混合物温热至RT，且搅拌过夜。反应混合物用甲醇淬灭，且当不再冒泡时，蒸发。经硅胶色谱(用4∶1至1∶1异己烷∶乙酸乙酯梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为2.72g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.24-7.13(m，2H)，7.09-6.97(m，2H)，3.67(t，J＝6.3Hz，2H)，2.74(t，J＝7.6Hz，2H)，1.95-1.83(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
b)叔丁基(3-(2-氟苯基)丙氧基)二甲基甲硅烷
将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(3.19g)加至在冰浴中冷却的咪唑(3.6g)和3-(2-氟苯基)丙-1-醇(实施例88，步骤a)(2.72g)的无水DMF(30mL)溶液中。45min后，反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(3×100mL)洗涤，且蒸发。所得胶状物经硅胶色谱(用异己烷洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为4.4g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.23-7.09(m，2H)，7.09-6.94(m，2H)，3.64(t，J＝6.3Hz，2H)，2.75-2.66(m，2H)，1.89-1.76(m，2H)，0.91(s，9H)，0.05(s，6H)。
c)3-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)丙基)-2-氟苯甲醛
在-78℃历时5min将叔丁基(3-(2-氟苯基)丙氧基)二甲基甲硅烷(实施例88，步骤b)(4.4g)滴加至仲丁基锂(浓度为1.4M的环己烷溶液，11.7mL)和1，1，4，7，7-五甲基二亚乙基三胺(3.4mL)的THF(25mL)溶液中。将所得混合物搅拌2h，然后小心加入DMF(6.4mL)，将所得混合物温热至RT，且搅拌过夜。反应混合物用水(100mL)淬灭，然后加入乙酸乙酯(250mL)。分离各相，且有机相用水(2×100mL)、2M HCl溶液(2×50mL)和盐水(100mL)洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用异己烷至10％乙醚/异己烷梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为1g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.38(s，1H)，7.73-7.67(m，1H)，7.48(td，J＝7.4，1.8Hz，1H)，7.18(t，J＝7.7Hz，1H)，3.66(t，J＝6.0Hz，2H)，2.82-2.75(m，2H)，1.90-1.80(m，2H)，0.91(s，9H)，0.06(s，6H)。
d)(9-(2-氟-3-(3-羟基丙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将3-(3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)丙基)-2-氟苯甲醛(实施例88，步骤c)(0.15g)加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.19g)和乙酸(0.03mL)的N-甲基吡咯烷-2-酮(10mL)溶液中。将所得混合物搅拌15min，然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.16g)，且将混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和水(100mL)的混合物中。水层用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机层用水(50mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。将残余物重新溶解在THF(10mL)中，且加入TBAF溶液(浓度为1M的THF溶液，1.52mL)。将所得混合物搅拌2h，且蒸发溶剂。残余物通过柱色谱(用4∶1异己烷∶乙酸乙酯+5％三乙胺至乙酸乙酯+5％三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.22g。m/z 476(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.99(s，1H)，7.24-7.12(m，2H)，7.08-7.01(m，1H)，4.48(t，J＝5.1Hz，1H)，3.74-3.38(m，10H)，2.62(t，J＝7.7Hz，2H)，2.46-2.13(m，4H)，1.74-1.44(m，6H)，1.35(d，J＝6.4Hz，6H)。1个质子由于水峰而模糊。
e)(R)-7-(2-(3-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)丙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
在0℃将三氟乙酸(0.032mL)加至(9-(2-氟-3-(3-羟基丙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例88，步骤d)(0.2g)的DCM(5mL)溶液中。将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.27g)。将所得黄色溶液温热至RT，且搅拌1h。然后加入饱和硫代硫酸钠溶液(5mL)、饱和碳酸氢钠溶液(5mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物，且将所得混合物剧烈搅拌10min。分离水相，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用几滴乙酸酸化，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入乙酸(0.024mL)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.11g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.040g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.14g。m/z 684(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.25(s，1H)，7.98-7.89(m，1H)，7.52-7.35(m，2H)，7.28-7.16(m，1H)，6.98-6.86(m，1H)，6.82-6.70(m，1H)，4.96-4.84(m，1H)，4.39-4.24(m，2H)，3.77-3.58(m，6H)，3.34-2.94(m，9H)，2.80-2.66(m，2H)，2.10-1.70(m，6H)，1.41-1.27(m，6H)和5个可交换的质子没有观察。
实施例89
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((10-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-3-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-(氰基甲基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
1-氧杂-6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-甲酸叔丁酯(2g)的DMF(20mL)溶液用氰化钾(0.672g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌4天。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用60％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.18g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.95-3.85(m，2H)，3.19-3.10(m，2H)，2.54(s，2H)，1.86(s，1H)，1.76-1.61(m，4H)，1.46(s，9H)。
b)4-(2-氨基乙基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-(氰基甲基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例89，步骤a)(1.4g)在乙醇(20mL)和乙酸(20mL)的混合物中的溶液在二氧化铂(IV)(0.25g)存在下用压力为4大气压的氢气氢化4小时。滤出催化剂，且减压除去溶剂。将残余物在稀NaOH水溶液和乙酸乙酯之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为1.1g。直接使用。
c)4-(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
历时10分钟将氯乙酰氯(0.483mL)滴加至在0℃剧烈搅拌的4-(2-氨基乙基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例89，步骤b)(1.1g)的乙酸乙酯(25mL)溶液和碳酸钾(1.77g)的水(20mL)溶液的混合物中。然后将混合物在0℃搅拌45分钟，然后用乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用乙酸乙酯洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.9g。m/z 319(M-H)-(APCI)。
d)9-氧代-7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-3-甲酸叔丁酯
历时6小时将4-(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例89，步骤c)(0.3g)的无水THF(18mL)溶液滴加至回流的叔丁醇钾(浓度为1M的叔丁醇溶液，3mL)和无水THF(60mL)的混合物中。加完后，将混合物再加热回流15分钟，然后冷却至室温。将混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。用乙醚研磨，得到副标题化合物。收率为0.117g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.67(s，1H)，4.01(s，2H)，3.57(d，J＝13.1Hz，2H)，3.11(dd，J＝9.6，4.2Hz，2H)，3.05-2.95(m，2H)，1.85-1.76(m，4H)，1.38(s，9H)，1.37-1.32(m，2H)。
e)7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-3-甲酸叔丁酯
将硼烷-二甲硫醚络合物(浓度为2M的THF溶液，2.88mL)加至9-氧代-7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-3-甲酸叔丁酯(实施例89，步骤d)(0.41g)的无水THF(40mL)溶液中，然后将反应混合物在70℃和氮气下加热30分钟。将混合物冷却至室温，且用甲醇淬灭。减压除去溶剂，且将残余物溶解在甲醇(100mL)中。加入N1，N2-二甲基乙-1，2-二胺(1.0g)，且将混合物在氮气下加热回流16h。再加入N1，N2-二甲基乙-1，2-二胺(1.0g)，且继续回流16h。减压蒸发溶剂，且残余物与甲苯共沸。粗产物通过快速硅胶色谱(使用6％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.176g。m/z 271(M+H)+(APCI)。
f)10-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-3-甲酸叔丁酯
将HATU(0.322g)一次性加至0℃的7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-3-甲酸叔丁酯(实施例89，步骤e)(0.176g)、2-甲基噻唑-4-甲酸(0.093g)和三乙胺(0.36mL)的DMF(10mL)溶液中。然后将混合物在20℃搅拌1小时。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用乙酸乙酯洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为210mg。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.78(s，1H)，3.69(s，4H)，3.65-3.62(m，2H)，3.59-3.53(m，2H)，3.11-3.03(m，2H)，2.66(s，3H)，1.85-1.81(m，2H)，1.74-1.67(m，2H)，1.39(s，9H)，1.38-1.33(m，2H)。
g)(2-甲基噻唑-4-基)(7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-10-基)甲酮三氟乙酸盐
10-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-3-甲酸叔丁酯(实施例89，步骤f)(0.21g)的DCM(10mL)溶液用三氟乙酸(10mL)处理，且将溶液在20℃静置25分钟。加入甲苯(40mL)，且减压蒸发溶剂。残余物与乙腈共沸，得到副标题化合物。收率为0.21g。m/z 296(M+H)+(APCI)。
h)(3-(3-(2-羟基乙基)苄基)-7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-10-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
(2-甲基噻唑-4-基)(7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-10-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例89，步骤g)(0.21g)的乙腈(15mL)溶液用三乙胺(0.214mL)处理，接着用2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(实施例6，步骤a)(0.121g)处理。将反应混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂，且将残余物在DCM和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。水层用DCM重新萃取2次，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用6％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.21g。m/z 430(M+H)+(APCI)。
i)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((10-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-3-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(3-(3-(2-羟基乙基)苄基)-7-氧杂-3，10-二氮杂螺[5.6]十二烷-10-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例89，步骤h)(0.21g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.038mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.311g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.028mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.193g)和乙酸(0.028mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.061g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.145g。m/z 638(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.79(s，1H)，7.44-7.32(m，4H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.94-4.89(m，1H)，4.28(s，2H)，3.71(s，4H)，3.68-3.64(m，2H)，3.25(t，J＝8.1Hz，2H)，3.20-2.99(m，8H)，2.66(s，3H)，2.04-1.95(m，2H)，1.91-1.83(m，2H)，1.78-1.67(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例90
(R)-7-(2-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(2-氟苯基)乙酸甲酯
2-(2-氟苯基)乙酸(9.6g)的甲醇(200mL)溶液用三甲基甲硅烷基氯(10mL)处理，且将混合物加热回流2小时。减压除去溶剂，将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为9.7g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29-7.23(m，2H)，7.13-7.03(m，2H)，3.71(s，3H)，3.68(s，2H)。
b)2-(2-氟苯基)-2-甲基丙酸甲酯
在0℃向碘甲烷(3.2mL)的无水DMF(80mL)溶液中加入氢化钠(浓度为60％的悬浮液，2g)，接着加入2-(2-氟苯基)乙酸甲酯(实施例90，步骤a)(2.75g)。将混合物缓慢温热至室温，然后在室温搅拌5小时。反应混合物通过小心加入饱和氯化铵水溶液(120mL)来淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取3次，合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用8％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为2.6g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.46-7.40(m，1H)，7.35-7.29(m，1H)，7.22-7.11(m，2H)，3.58(s，3H)，1.48(s，6H)。
c)2-(2-氟苯基)-2-甲基丙酸
将氢氧化钠(1g)的水(50mL)溶液加至2-(2-氟苯基)-2-甲基丙酸甲酯(实施例90，步骤b)(2.6g)在甲醇(50mL)和THF(50mL)中的溶液中。将反应混合物在40℃加热40小时。减压除去有机层，且残留水溶液用乙酸乙酯洗涤。冷却水层，且通过加入浓HCl来酸化。混合物用乙酸乙酯萃取，有机层用盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为1.5g。m/z 181(M-H)-(APCI)。
d)2-(2-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇
将硼烷-二甲硫醚(浓度为2M的THF溶液，12.35mL)滴加至2-(2-氟苯基)-2-甲基丙酸(实施例90，步骤c)(1.5g)的THF(30mL)溶液中。将反应混合物在20℃搅拌8小时。混合物通过小心加入甲醇来淬灭直到不再放出气体。减压除去溶剂，且残余物与甲苯共沸。粗产物通过快速硅胶色谱(使用30％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.3g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36-7.31(m，1H)，7.25-7.19(m，1H)，7.13-7.08(m，1H)，7.04-6.99(m，1H)，3.79(dd，J＝6.4，1.0Hz，2H)，1.39(d，J＝1.0Hz，6H)。1个可交换的质子没有观察。
e)叔丁基(2-(2-氟苯基)-2-甲基丙氧基)二甲基甲硅烷
在20℃将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.4g)逐份加至搅拌的2-(2-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(实施例90，步骤d)(1.3g)和咪唑(0.631g)的DMF(7mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为100％异己烷至1％乙醚/异己烷)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为1.4g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.34-7.29(m，1H)，7.20-7.14(m，1H)，7.08-7.03(m，1H)，7.00-6.94(m，1H)，3.71(s，2H)，1.35(s，6H)，0.80(s，9H)，-0.06(s，6H)。
f)3-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙-2-基)-2-氟苯甲醛
在氮气下将仲丁基锂(浓度为1.4M的环己烷溶液，3.54mL)加至无水四氢呋喃(10mL)中，且将溶液冷却至-78℃。缓慢滴加N1-(2-(二甲基氨基)乙基)-N1，N2，N2-三甲基乙-1，2-二胺(0.859g)。然后历时5分钟滴加叔丁基(2-(2-氟苯基)-2-甲基丙氧基)二甲基甲硅烷(实施例90，步骤e)(1.4g)的无水四氢呋喃(3mL)溶液。将反应混合物在-78℃搅拌2小时。历时5分钟滴加DMF(2.69mL)，且将混合物在-78℃搅拌1小时，接着在室温搅拌45分钟。反应混合物通过加入水来淬灭。加入乙酸乙酯(200mL)，且有机层用水洗涤3次，接着用2M HCl洗涤2次，用水洗涤2次，然后用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为1至5％乙酸乙酯/异己烷)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.98g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.39(s，1H)，7.75-7.70(m，1H)，7.63-7.58(m，1H)，7.19(t，J＝7.8Hz，1H)，3.74(s，2H)，1.39(d，J＝1.3Hz，6H)，0.79(s，9H)，-0.05(s，6H)。
g)(9-(2-氟-3-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.502g)加至在0℃搅拌的(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.668g)、3-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丙-2-基)-2-氟苯甲醛(实施例90，步骤f)(0.49g)和乙酸(0.090mL)的NMP(20mL)溶液中。然后将反应混合物在20℃搅拌18小时。将混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将所得胶状物溶解在THF(20mL)中，且用四丁基氟化铵(浓度为1M的THF溶液，3.16mL)处理。将溶液在20℃静置8小时。减压蒸发溶剂，且粗产物通过快速硅胶色谱(洗脱梯度为0至1％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺))纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.63g。m/z 490(M+H)+(APCI)。
h)(R)-7-(2-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-(2-氟-3-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例90，步骤g)(0.21g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.033mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.273g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.025mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.169g)和乙酸(0.025mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.054g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.125g。m/z 698(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.25(s，1H)，7.93(s，1H)，7.56-7.46(m，2H)，7.31-7.25(m，1H)，6.89(d，J＝8.5Hz，1H)，6.75(d，J＝8.5Hz，1H)，4.97-4.91(m，1H)，4.31(s，2H)，3.70(s，4H)，3.65(s，2H)，3.50-3.37(m，2H)，3.33-3.26(m，1H)，3.23-3.15(m，2H)，3.12-3.02(m，4H)，2.06-1.97(m，2H)，1.83-1.72(m，2H)，1.50(s，6H)，1.34(d，J＝6.8Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例91
(R)-7-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(5-乙基噻吩-3-基)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将HATU(0.316g)一次性加至0℃的9-(3-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳(实施例78，步骤d)(0.271g)、5-乙基噻吩-3-甲酸(0.1g)和三乙胺(0.36mL)的DMF(10mL)溶液中。然后将混合物在20℃搅拌1小时。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在THF(20mL)中，且用四丁基氟化铵(浓度为1M的THF溶液，1.921mL)处理。将反应混合物在20℃静置18小时，然后减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.12g。m/z 447(M+H)+(APCI)。
b)(R)-7-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(5-乙基噻吩-3-基)(9-(2-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例91，步骤a)(0.12g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.021mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.171g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.015mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.106g)和乙酸(0.015mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.034g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.095g。m/z 655(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.52-7.41(m，3H)，7.25(t，J＝7.7Hz，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，1H)，6.89(s，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.95-4.89(m，1H)，4.30(s，2H)，3.67(t，J＝5.0Hz，2H)，3.53(t，J＝5.0Hz，2H)，3.45(s，2H)，3.24(t，J＝7.9Hz，2H)，3.18-3.03(m，8H)，2.81(q，J＝7.5Hz，2H)，2.05-1.97(m，2H)，1.79-1.68(m，2H)，1.25(t，J＝7.6Hz，3H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例92
(R)-5-(2-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
(9-(2-氟-3-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例90，步骤g)(0.21g)的DCM(20mL)溶液用三氟乙酸(0.033mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.236g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.025ml)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.186g)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物冷却至0℃，且一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.136g)。将反应混合物在20℃搅拌3小时。减压除去溶剂，将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用9％甲醇/二氯甲烷(含有1％‘880’氨水)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.28g。m/z 806(M+H)+(APCI)。
b)(R)-5-(2-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将三乙胺三氢氟酸盐(0.074mL)的甲醇(2mL)溶液加至(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(2-(2-氟-3-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例92，步骤a)(0.28g)的THF(8mL)溶液中，且将反应混合物在20℃静置18小时。减压除去溶剂，且粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.175g。m/z 692(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.14(d，J＝10.0Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.57-7.50(m，2H)，7.29(t，J＝7.8Hz，1H)，7.08(d，J＝8.2Hz，1H)，6.98(d，J＝8.2Hz，1H)，6.52(d，J＝10.0Hz，1H)，5.40-5.34(m，1H)，4.34(s，2H)，3.69(s，4H)，3.65(s，2H)，3.56-3.43(m，2H)，3.33-3.18(m，3H)，3.15-3.06(m，4H)，2.06-1.98(m，2H)，1.83-1.72(m，2H)，1.52(s，6H)，1.34(d，J＝7.8Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例93
(R)-7-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(5-乙基噻吩-3-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将HATU(0.449g)一次性加至0℃的2-(3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯基)乙醇(实施例55，步骤c)(0.28g)、5-乙基噻吩-3-甲酸(0.142g)和三乙胺(0.506mL)的DMF(10mL)溶液中。然后将混合物在20℃搅拌1小时。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.21g。m/z 447(M+H)+(APCI)。
b)(R)-7-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-5-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(5-乙基噻吩-3-基)(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例93，步骤a)(0.21g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.036mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.299g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.027mL)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.185g)和乙酸(0.027mL)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.059g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.115g。m/z 655(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.26(s，1H)，7.47(s，1H)，7.28-7.17(m，3H)，6.93(d，J＝8.7Hz，1H)，6.89(s，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.95-4.90(m，1H)，4.28(s，2H)，3.67(t，J＝5.0Hz，2H)，3.53(t，J＝4.9Hz，2H)，3.45(s，2H)，3.27(t，J＝7.9Hz，2H)，3.19-3.00(m，8H)，2.81(q，J＝7.6Hz，2H)，2.07-1.99(m，2H)，1.80-1.68(m，2H)，1.25(t，J＝7.4Hz，3H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例94
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将3-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯甲醛(实施例10，步骤b)(0.24g)加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.187g)和乙酸(0.032mL)在甲醇(2mL)中的混合物中。将混合物搅拌30min，然后在冰浴中冷却。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.178g)，将混合物搅拌2h，且真空浓缩。将残余物在乙酸乙酯(50mL)和缓冲液(pH 7.2)(50mL)之间分配。分离出水层，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至92∶8∶0.8 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且溶解在四氢呋喃(5mL)中。加入三乙胺三氢氟酸盐(0.091mL)，且将混合物搅拌过夜。真空蒸发溶剂，且将残余物溶解在乙腈和水的混合物(1∶1，5mL)中。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.15g。m/z 634(M+H)+(APCI)。1H NMR(300MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.09(d，J＝10.0Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.37(t，J＝7.8Hz，1H)，7.20-6.94(m，5H)，6.50(d，J＝10.0Hz，1H)，5.37(dd，J＝8.2，4.5Hz，1H)，4.37(t，J＝5.0Hz，2H)，4.30-4.16(m，2H)，3.76-3.62(m，6H)，3.61-3.54(m，2H)，3.46-3.35(m，2H)，3.31-3.17(m，2H)，3.11-3.01(m，2H)，2.68(s，3H)，2.11-1.98(m，2H)，1.94-1.78(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例95
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苄基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)甲磺酸3-(3-甲酰基苯氧基)丙基酯
将3-溴-1-丙醇(3.94mL)和碳酸钾(6.22g)加至3-羟基苯甲醛(5g)的乙腈(100mL)溶液中。将所得混合物在氮气下回流搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温，且在乙酸乙酯和冰冷的稀氢氧化钠水溶液之间分配。有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。将残余物溶解在DCM(30mL)中，且用三乙胺(5.7mL)处理。将溶液冷却至0℃，且用甲磺酰氯(3.2mL)逐滴处理。将反应混合物在0℃搅拌10分钟，然后在室温搅拌1小时。混合物用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用33％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为5.20g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.98(s，1H)，7.50-7.43(m，2H)，7.40-7.39(m，1H)，7.20-7.16(m，1H)，4.46(t，J＝6.2Hz，2H)，4.17(t，J＝5.9Hz，2H)，3.01(s，3H)，2.30-2.23(m，2H)。
b)3-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苯甲醛
将甲磺酸3-(3-甲酰基苯氧基)丙基酯(实施例95，步骤a)(0.209g)、(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.32g)和三乙胺(0.282mL)的乙腈(10mL)溶液在65℃加热18小时。减压蒸掉溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2％甲醇和1％三乙胺/二氯甲烷)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.157g。m/z 444(M+H)+(APCI)。
c)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苄基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.113g)一次性加至在0℃搅拌的3-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苯甲醛(实施例95，步骤b)(0.157g)、(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.118g)和乙酸(0.020mL)的甲醇(7mL)溶液中。将所得混合物在20℃搅拌2小时。减压蒸发大部分甲醇，且将残余物在乙酸乙酯和含水磷酸缓冲液(pH＝7.2)之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用8％甲醇和1％‘880’氨水/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.160g。m/z 762(M+H)+(APCI)。
d)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苄基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-(3-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙氧基)苄基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例95，步骤c)(0.160g)的THF(2mL)溶液用三乙胺三氢氟酸盐(0.041mL)处理，且将所得混合物在20℃搅拌18小时。蒸掉溶剂，且粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-35％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.081mg。m/z 648(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ10.75-10.43(m，2H)，10.00-9.74(m，1H)，9.30(s，1H)，9.10(s，1H)，8.07(d，J＝9.7Hz，1H)，8.01(s，1H)，7.36(t，J＝7.9Hz，1H)，7.16-7.09(m，3H)，7.01-6.94(m，2H)，6.54(d，J＝9.7Hz，1H)，5.35(d，J＝9.5Hz，1H)，4.21(s，2H)，4.07-4.00(m，2H)，3.83-3.16(m，10H)，3.08-2.90(m，4H)，2.70(s，3H)，2.18-2.04(m，4H)，1.83-1.66(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
实施例96
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苄基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯甲醛
将(2-甲基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例4，步骤h)(0.408g)、3-(溴甲基)苯甲醛(0.205g)和三乙胺(0.36mL)的乙腈(10mL)溶液在室温搅拌过夜。真空浓缩溶液，且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠之间分配。有机相用水洗涤2次，用盐水洗涤1次，然后用无水硫酸镁干燥，且通过快速硅胶色谱(用5％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.325g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ10.01(s，1H)，7.85(d，J＝0.8Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.76(d，J＝7.4Hz，1H)，7.61(d，J＝7.4Hz，1H)，7.52(t，J＝7.4Hz，1H)，3.71-3.46(m，8H)，2.68(s，3H)，2.44-2.29(m，4H)，1.78-1.65(m，2H)，1.61-1.46(m，2H)。
b)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苄基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
将3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯甲醛(实施例96，步骤a)(0.303g)、(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.330g)和乙酸(0.043mL)的甲醇(5mL)溶液在室温搅拌30分钟，然后在氮气下在冰-水浴中冷却，且用三乙酰氧基硼氢化钠(0.243g)一次性处理。将混合物在冰-水中搅拌2小时，然后真空浓缩。将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，分离各相，且水相用乙酸乙酯再萃取2次。将所有不溶性胶状残余物溶解在甲醇中。合并的乙酸乙酯相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，且与甲醇溶液合并。所有物质通过快速硅胶色谱(用1∶7∶92三乙胺∶甲醇∶二氯甲烷洗脱)纯化，得到稍有不纯的副标题产物，其为黄色泡沫状物。收率为0.324g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.35(d，J＝10.0Hz，1H)，8.01(s，1H)，7.40-7.30(m，2H)，7.30-7.23(m，2H)，7.17(d，J＝8.2Hz，1H)，7.08(d，J＝8.2Hz，1H)，6.59(d，J＝10.0Hz，1H)，5.30(dd，J＝7.3，4.7Hz，1H)，3.91-3.70(m，8H)，3.57(s，2H)，3.02(dd，J＝12.3，7.4Hz，1H)，2.91-2.77(m，4H)，2.56-2.43(m，4H)，1.90-1.80(m，2H)，1.74-1.62(m，2H)，0.99(s，9H)，0.19(s，3H)，0.00(s，3H)。3个可交换的质子没有观察。
c)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苄基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苄基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例96，步骤b)(0.320g)和三乙胺三氢氟酸盐(0.15mL)的THF(5mL)溶液在室温搅拌过夜，然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈(3ml)和水(1ml)的混合物中，且所得溶液经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发3次，得到白色泡沫状物。泡沫状物用乙醚研磨，得到固体，过滤分离所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为白色粉末。收率为0.264g。m/z 604(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.08(d，J＝9.7Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.65-7.49(m，4H)，7.10(d，J＝7.9Hz，1H)，6.97(d，J＝8.2Hz，1H)，6.52(d，J＝10.0Hz，1H)，5.35(dd，J＝8.6，4.2Hz，1H)，4.35-4.21(m，4H)，3.74-3.57(m，6H)，3.23-2.98(m，6H)，2.67(s，3H)，2.06-1.91(m，2H)，1.85-1.65(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例97
(R)-5-(2-(2，5-二甲基-4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将2，5-二甲基-4-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯甲醛(实施例18，步骤f)(0.08g)加至(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO2004106333)(0.088g)和乙酸(0.010mL)在甲醇(2mL)中的混合物中。将混合物搅拌30min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.016g)，且将混合物搅拌2h。真空除去溶剂，且残余物经硅胶色谱(用95∶5∶0.5至92∶8∶0.8 DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。将残余物重新溶解在四氢呋喃(5mL)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.028mL)，且将混合物搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.07g。m/z662(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.12(d，J＝10.0Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.27(s，1H)，7.12(d，J＝8.2Hz，1H)，6.99(d，J＝8.2Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.51(d，J＝9.7Hz，1H)，5.38(dd，J＝8.2，4.6Hz，1H)，4.35(t，J＝4.9Hz，2H)，4.25-4.13(m，2H)，3.76-3.64(m，6H)，3.61-3.53(m，2H)，3.46-3.36(m，2H)，3.33-3.20(m，2H)，3.19-3.10(m，2H)，2.68(s，3H)，2.33(s，3H)，2.15(s，3H)，2.12-2.01(m，2H)，1.95-1.79(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例98
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-((5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-基)甲基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-((5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-基)甲基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-甲醛(实施例21，步骤c)(0.188g)和(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(WO 2004106333)(0.150g)的甲醇(10mL)溶液用乙酸(0.026mL)处理，接着用三乙酰氧基硼氢化钠(0.143g)处理。将混合物在20℃搅拌18小时。再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.143g)，且在20℃继续搅拌2小时。再加入三乙酰氧基硼氢化钠(143mg)，且继续搅拌2小时。减压除去甲醇，且将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％浓氨水和8％甲醇/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.122g。m/z 738(M+H)+(APCI)。
b)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-((5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-基)甲基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-((5-(2-(4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙基)噻吩-2-基)甲基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例98，步骤a)(0.122g)的THF(4mL)溶液用三乙胺三氢氟酸盐(0.035mL)的甲醇(1mL)溶液处理，且将所得混合物在20℃静置18小时。减压除去溶剂，且粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.085g。m/z 624(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ8.10(d，J＝31.8Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.15(d，J＝12.5Hz，1H)，7.10(d，J＝15.7Hz，1H)，6.98(d，J＝22.6Hz，1H)，6.92(d，J＝11.2Hz，1H)，6.53(d，J＝30.4Hz，1H)，5.37-5.31(m，1H)，4.41(dd，J＝17.7，14.4Hz，2H)，3.71(s，4H)，3.66(s，2H)，3.42-3.33(m，4H)，3.27-3.06(m，6H)，2.68(s，3H)，2.10-1.98(m，2H)，1.88-1.75(m，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例99
(R)-7-(2-(5-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(5-乙基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐
将HATU(1.15g)一次性加至0℃的1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXi PharmaTech)(0.682g)、5-乙基噻吩-3-甲酸(0.364g)和三乙胺(1.3mL)的DMF(10mL)溶液中。然后将混合物在20℃搅拌1小时。将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用50％乙酸乙酯/异己烷)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到经‘BOC(叔丁氧羰基)’保护的中间体。加入DCM(10mL)，接着加入三氟乙酸(10mL)，且将所得溶液在20℃静置25分钟。加入甲苯(30mL)，且减压蒸发溶剂。残余物与乙腈共沸2次，得到副标题化合物。收率为0.950g。m/z 295(M+H)+(APCI)。
b)(5-乙基噻吩-3-基)(9-(4-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将2-(5-(溴甲基)-2-氟苯基)乙醇(实施例47，步骤a)(0.171g)加至(5-乙基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例99，步骤a)(0.3g)和三乙胺(0.410ml)的乙腈(15mL)溶液中，且将混合物在20℃搅拌2小时。减压蒸发溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用1％三乙胺和2％甲醇/二氯甲烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.2g。m/z 447(M+H)+(APCI)。
c)(R)-7-(2-(5-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(5-乙基噻吩-3-基)(9-(4-氟-3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例99，步骤b)(0.2g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.035m1)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.285g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.026ml)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.176g)和乙酸(0.026ml)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.056g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.14g。(M+H)+655(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.49-7.44(m，3H)，7.29-7.23(m，1H)，6.94(d，J＝7.2Hz，1H)，6.89(s，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.94-4.89(m，1H)，4.26(s，2H)，3.67(t，J＝5.0Hz，2H)，3.53(t，J＝5.0Hz，2H)，3.45(s，2H)，3.24(t，J＝8.1Hz，2H)，3.18-3.02(m，8H)，2.81(q，J＝7.5Hz，2H)，2.07-1.98(m，2H)，1.79-1.67(m，2H)，1.25(t，J＝7.4Hz，3H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例100
(R)-7-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-4-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)叔丁基(4-氟苯乙氧基)二甲基甲硅烷
在20℃将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(0.903g)逐份加至搅拌的2-(4-氟苯基)乙醇(0.7g)和咪唑(0.408g)的DMF(20mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.99g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.18-7.13(m，2H)，6.99-6.93(m，2H)，3.77(t，J＝6.9Hz，2H)，2.78(t，J＝6.8Hz，2H)，0.86(s，9H)，-0.03(s，6H)。
b)5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苯甲醛
在氮气下将仲丁基锂(浓度为1.4M的环己烷溶液，2.78ml)加至无水四氢呋喃(10mL)中，且将溶液冷却至-78℃。缓慢滴加N1-(2-(二甲基氨基)乙基)-N1，N2，N2-三甲基乙-1，2-二胺(0.674g)。然后历时5分钟滴加叔丁基(4-氟苯乙氧基)二甲基甲硅烷(实施例100，步骤a)(0.99g)的无水四氢呋喃(3mL)溶液。将反应混合物在-78℃搅拌2小时。历时5分钟滴加DMF(2.1ml)，且将混合物在-78℃搅拌1小时，接着在室温搅拌45分钟。反应混合物通过加入水来淬灭。加入乙酸乙酯(200mL)，且有机层用水洗涤3次，接着用2M HCl洗涤2次，然后用水洗涤2次。有机溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发。粗产物通过快速硅胶色谱(使用2％乙酸乙酯/异己烷作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.5g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.36(s，1H)，7.72-7.69(m，1H)，7.48-7.43(m，1H)，7.11-7.06(m，1H)，3.80(t，J＝6.5Hz，2H)，2.83(t，J＝6.4Hz，2H)，0.85(s，9H)，0.04(s，6H)。
c)(5-乙基噻吩-3-基)(9-(2-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.225g)加至在0℃搅拌的(5-乙基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例99，步骤a)(0.289g)、5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氟苯甲醛(实施例100，步骤b)(0.2g)和乙酸(0.041ml)的NMP(20mL)溶液中。然后将反应混合物在20℃搅拌18小时。再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.150g)，且继续搅拌4小时。将混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配，有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。将所得胶状物溶解在THF(20mL)中，且用TBAF(浓度为1M的THF溶液，1.4ml)处理。将溶液在20℃静置8小时。减压蒸发溶剂，且粗产物通过快速硅胶色谱(使用2％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)作为溶剂)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。
收率为0.18g。m/z 447(M+H)+(APCI)。
d)(R)-7-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-4-氟苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(5-乙基噻吩-3-基)(9-(2-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例100，步骤c)(0.18g)的DCM(15mL)溶液用三氟乙酸(0.031ml)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.256g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯萃取2次，合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，且过滤。将乙酸(0.023ml)加至该溶液中，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.159g)和乙酸(0.023ml)的甲醇(15mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.051g)处理。移开冷却浴，且将混合物在20℃搅拌3小时。减压蒸发溶剂至体积为3mL，且加入THF(20mL)。混合物用饱和盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(1mL)的混合物洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。残余物与乙腈共沸2次。粗产物经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。将含有所需化合物的馏分蒸发至干，得到标题化合物。收率为0.14g。m/z 655(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.48-7.43(m，2H)，7.42-7.37(m，1H)，7.25(t，J＝9.1Hz，1H)，6.93(d，J＝8.1Hz，1H)，6.89(s，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.94-4.88(m，1H)，4.27(s，2H)，3.67(t，J＝5.0Hz，2H)，3.53(t，J＝5.0Hz，2H)，3.45(s，2H)，3.23(t，J＝8.2Hz，2H)，3.18-2.97(m，8H)，2.81(q，J＝7.8Hz，2H)，2.04-1.98(m，2H)，1.79-1.69(m，2H)，1.25(t，J＝7.6Hz，3H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例101
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(6-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)己基硫基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)6-(2，2-二甲氧基乙基硫基)己-1-醇
在0℃向6-巯基-己-1-醇(2.5mL)的MeCN(30mL)溶液中加入氢化钠(浓度为60％的矿物油悬浮液，0.81g)。将混合物在0℃搅拌1h，然后加入2-溴-1，1-二甲氧基-乙烷(2.4mL)。将所得混合物在RT搅拌20h，然后通过加入饱和碳酸氢钠溶液来淬灭。混合物用乙酸乙酯(×3)萃取，然后合并的有机层先后用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用25％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色液体。收率为1.85g。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ4.49(t，J＝5.5Hz，1H)，3.64(t，J＝6.6Hz，2H)，3.37(s，6H)，2.69(d，J＝5.5Hz，2H)，2.59(t，J＝7.4Hz，2H)，1.66-1.52(m，4H)，1.46-1.32(m，4H)。1个可交换的质子没有观察。
b)2-(6-溴己基硫基)乙醛
在0℃和N2下向6-(2，2-二甲氧基乙基硫基)己-1-醇(实施例101，步骤a)(1.85g)的DCM(75mL)溶液中加入四溴化碳(3.31g)，接着逐份加入三苯基膦(2.62g)。将所得混合物在RT搅拌1.25h，然后真空浓缩。经硅胶色谱(用0-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色液体。收率为1.31g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.47(t，J＝3.5Hz，1H)，3.43-3.36(m，2H)，3.18(d，J＝3.5Hz，2H)，2.44(t，J＝7.3Hz，2H)，1.91-1.81(m，2H)，1.64-1.53(m，2H)，1.49-1.36(m，4H)。
c)(R)-2-(6-溴己基硫基)乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃和N2下向2-(6-溴己基硫基)乙醛(实施例101，步骤b)(1.2g)的DMF(20mL)(含有乙酸(0.287mL)和
分子筛)溶液中加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(1.45g)。将所得混合物在0℃搅拌1h，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.6g)，且将混合物在RT搅拌2h。加入一缩二碳酸二叔丁酯(1.1g)，且继续搅拌20h。反应混合物通过加入饱和碳酸氢钠溶液(40mL)来淬灭，然后溶液用乙酸乙酯(×3)萃取。合并的有机溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用0-100％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.56g。1H NMR(300MHz，D4-MeOH)δ6.89(dd，J＝18.6，8.3Hz，1H)，6.72(d，J＝8.2Hz，1H)，4.87(s，1H)，3.59-3.39(m，4H)，3.33-3.29(m，2H)，2.64-2.41(m，4H)，1.89-1.80(m，2H)，1.66-1.32(m，15H)。3个可交换的质子没有观察。
d)4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
在0℃历时20min将三氟乙酸酐(2.2mL)的DCM(14mL)溶液滴加至1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXi PharmaTech)(4.7g)和三乙胺(4.9mL)的DCM(90mL)溶液中。将混合物在0℃搅拌45min，然后在RT搅拌2h。加入水(90mL)，且将混合物剧烈搅拌10min。分离各层，且水层用DCM(50mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用40-50％EtOAc/石油醚(40-60℃)洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为2.73g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.86(d，J＝13.3Hz，1H)，3.77(t，J＝4.9Hz，2H)，3.74-3.64(m，2H)，3.61(t，J＝4.8Hz，1H)，3.52(s，1H)，3.23-3.15(m，1H)，3.07(t，J＝11.4Hz，1H)，1.85(d，J＝13.8Hz，1H)，1.77(d，J＝13.9Hz，1H)，1.52-1.37(m，12H)。
e)2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮三氟乙酸盐
将三氟乙酸(66mL)加至4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例101，步骤d)(4.33g)的DCM(66mL)溶液中，且将所得混合物在RT搅拌20min。加入甲苯(50mL)，且真空蒸发混合物(×3)，得到副标题化合物。收率为5.52g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(宽单峰，2H)，3.77(d，J＝5.1Hz，2H)，3.72(d，J＝5.3Hz，1H)，3.65(d，J＝5.0Hz，1H)，3.58(s，1H)，3.48(s，1H)，3.33(s，2H)，3.24(s，2H)，2.08(t，J＝14.6Hz，2H)，1.93-1.75(m，2H)。
f)(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(2-(6-(4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)己基硫基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将(R)-2-(6-溴己基硫基)乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例101，步骤c)(0.55g)与2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂-螺[5.5]十一碳-4-基)-乙酮三氟乙酸盐(实施例101，步骤e)(0.25g)和三乙胺(0.26mL)在乙腈(20mL)中合并，且在80℃加热48h。真空蒸发挥发物。经硅胶色谱(用10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.10g和0.074g(纯度较低)。m/z 721(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ6.81(s，1H)，6.69(d，J＝8.21Hz，1H)，3.80-3.74(m，2H)，3.65(s，2H)，3.58-3.54(m，1H)，3.52-3.47(m，1H)，3.11-2.94(m，4H)，2.51-2.41(m，6H)，2.05-1.95(m，2H)，1.80-1.59(m，8H)，1.50(s，9H)，1.46-1.25(m，6H)。1个质子由于溶剂峰而模糊，且3个可交换的质子没有观察。
g)(R)-2-(6-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)己基硫基)乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
向搅拌的(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(2-(6-(4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)己基硫基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例101，步骤f)(0.18g)的甲醇(10mL)溶液中加入碳酸钾(0.06g)的水(10mL)溶液。将混合物在RT搅拌17h，然后在氮气气流下除去甲醇。溶液用盐水稀释，用乙酸乙酯(×3)萃取，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在甲醇中，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为褐色玻璃状物。收率为0.15g。m/z 625(M+H)+。1H NMR(300MHz，D4-MeOH)δ6.94-6.82(m，1H)，6.73(d，J＝2.0Hz，1H)，3.66-3.59(m，2H)，3.51-3.40(m，2H)，2.80-2.69(m，4H)，2.66-2.62(m，2H)，2.55-2.40(m，8H)，2.04-1.94(m，2H)，1.62-1.56(m，8H)，1.55-1.21(m，13H)。1个质子由于溶剂峰而模糊，且4个可交换的质子没有观察。
h)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(6-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)己基硫基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
向(R)-2-(6-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)己基硫基)乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例101，步骤g)(0.093g)的DMF(3mL)溶液中加入三乙胺(0.062mL)和2-异丙基-噻唑-4-甲酸(0.025g)，接着加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.079g)。将所得混合物在RT搅拌4h，然后加入4滴‘880’氨水，且将混合物搅拌15min。将盐水和乙酸乙酯加至溶液中，且分离各相，然后有机相用乙酸乙酯(×2)萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将残余物溶解在DCM(2mL)中，然后加入三氟乙酸(1mL)。将溶液在RT静置40min，然后加入甲苯(20mL)，且真空浓缩混合物。再加入一定量甲苯，且再次浓缩混合物，然后物质与乙腈共沸。经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为10-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为无色固体。收率为0.016g。m/z 678(M+H)+。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，80℃)δ8.18(s，1H)，7.91(d，J＝0.7Hz，1H)，6.90(d，J＝8.3Hz，1H)，6.72(d，J＝8.3Hz，1H)，4.64-4.58(m，1H)，3.72-3.62(m，2H)，3.62-3.58(m，6H)，3.38-3.28(m，1H)，2.84-2.74(m，6H)，2.62-2.58(m，2H)，2.47-2.31(m，6H)，1.78-1.69(m，2H)，1.60-1.50(m，4H)，1.45-1.41(m，2H)，1.38(d，J＝6.6Hz，6H)，1.32-1.26(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例102
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(7-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2，2-二甲基庚基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)7-溴-2，2-二甲基庚酸乙酯
在0℃向二异丙基胺(5.82mL)的THF(30mL)溶液中加入正丁基锂(浓度为2.5M的己烷溶液，16.4mL)，且将混合物在该温度搅拌30min，然后冷却至-78℃。滴加异丁酸乙酯(5mL)，且将所得混合物在-78℃搅拌1h，然后加入1，5-二溴戊烷(5.61mL)。将反应混合物在-78℃搅拌1h，然后在RT搅拌2.5h，然后倒入饱和氯化铵溶液中。溶液用乙酸乙酯(×2)萃取，然后合并的有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用0-25％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色液体。收率为4.45g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.08(q，J＝7.1Hz，2H)，3.41-3.33(m，2H)，1.91-1.77(m，2H)，1.61-1.44(m，2H)，1.52-1.24(m，2H)，1.21(t，J＝7.1Hz，5H)，1.12(s，6H)。
b)7-溴-2，2-二甲基庚-1-醇
在0℃和N2下向7-溴-2，2-二甲基庚酸乙酯(实施例102，步骤a)(1.5g)的无水乙醚(50mL)溶液中滴加二异丁基氢化铝(浓度为1M的甲苯溶液，12.5mL)。将反应混合物在0℃搅拌1h，然后通过加入饱和酒石酸钾钠(150mL)来淬灭。将混合物搅拌1h，然后用乙酸乙酯(×3)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用0-25％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色液体。收率为1.16g。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ3.41(t，J＝6.8Hz，2H)，3.32(d，J＝5.8Hz，2H)，1.93-1.82(m，2H)，1.47-1.37(m，2H)，1.35-1.20(m，4H)，0.91-0.81(m，6H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(7-羟基-6，6-二甲基庚基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.5g)溶解在甲醇中，且加载至SCX柱(用甲醇预润湿)。柱用甲醇洗涤，且用2M氨/甲醇溶液洗脱。真空蒸发洗脱剂，得到物质，其为游离碱(0.29g)。向该物质中加入7-溴-2，2-二甲基庚-1-醇(实施例102，步骤b)(0.26g)的乙腈(10mL)溶液，然后加入三乙胺(0.27mL)，且将所得混合物在60℃加热17h。真空蒸发挥发物，且粗产物经硅胶色谱(先后用0％甲醇/DCM、5％甲醇/DCM和10％甲醇/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色胶状物。收率为0.29g。m/z 452(M+H)+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87(s，1H)，4.01-3.95(m，2H)，3.80-3.62(m，2H)，3.49(s，1H)，3.34-3.28(m，2H)，3.16-3.09(m，1H)，2.98-2.75(m，3H)，2.42-2.20(m，2H)，2.09(宽多重峰，2H)，1.95-1.82(m，2H)，1.47-1.40(m，8H)，1.34-1.21(m，8H)，0.85(s，6H)。1个可交换的质子没有观察。
d)7-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2，2-二甲基庚醛
在0℃和氩气下将三氟乙酸(0.048mL)加至(9-(7-羟基-6，6-二甲基庚基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例102，步骤c)(0.28g)的DCM(15mL)溶液中，且将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.39g)。将反应混合物在RT搅拌1h，然后通过加入饱和亚硫酸氢钠溶液(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(10mL)来淬灭，然后加入乙酸乙酯，且将混合物搅拌5min。分离各层，且水溶液用乙酸乙酯(×2)萃取。合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将乙酸(0.053mL)加至有机相中，然后所述有机相用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到粗副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.33g。m/z 450(M+H)+。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.43(s，1H)，7.86(s，1H)，4.02-3.86(m，3H)，3.82-3.67(m，4H)，3.36-3.26(m，2H)，3.24-2.97(m，2H)，2.85-2.66(m，4H)，2.03(d，J＝8.4Hz，2H)，1.79-1.60(s，2H)，1.48-1.35(m，8H)，1.34-1.19(m，4H)，1.06(s，6H)。
e)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(7-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2，2-二甲基庚基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将乙酸(0.053mL)加至7-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2，2-二甲基庚醛(实施例102，步骤d)(0.33g)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.25g)及
分子筛在无水甲醇(10mL)中的混合物中。将混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.13g)，且将所得混合物在RT搅拌16.5h。过滤溶液，然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈和水的混合物中，且经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为10-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.1g。m/z 660(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.50(s，1H)，7.89(s，1H)，6.93(d，J＝8.3Hz，1H)，6.71(d，J＝8.3Hz，1H)，4.93(dd，J＝9.5，4.1Hz，1H)，3.92-3.56(m，6H)，3.37-3.26(m，1H)，3.10-2.66(m，10H)，2.11-1.96(m，2H)，1.84-1.57(m，4H)，1.38(d，J＝6.9Hz，6H)，1.29(s，6H)，0.96(s，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例103
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2，2-二甲基壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)9-溴-2，2-二甲基壬酸乙酯
在0℃向二异丙基胺(5.82mL)的THF(30mL)溶液中加入正丁基锂(浓度为2.5M的己烷溶液，16.4mL)，且将混合物在该温度搅拌30min，然后冷却至-78℃。滴加异丁酸乙酯(5mL)，且将所得混合物在-78℃搅拌1h，然后加入1，7-二溴庚烷(6.4mL)。将反应混合物在-78℃搅拌1h，然后在RT搅拌2h，然后倒入饱和氯化铵溶液中。溶液用乙酸乙酯(×2)萃取，然后合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用0-10％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色液体。收率为1.27g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.11(q，J＝7.1Hz，2H)，3.43-3.37(m，2H)，1.91-1.80(m，2H)，1.56-1.36(m，4H)，1.39-1.21(m，9H)，1.15(s，6H)。
b)9-溴-2，2-二甲基壬-1-醇
在0℃和N2下向9-溴-2，2-二甲基壬酸乙酯(实施例103，步骤a)(1.27g)的无水乙醚(40mL)溶液中滴加二异丁基氢化铝(浓度为1M的甲苯溶液，9.5mL)。将反应混合物在0℃搅拌1.25h，然后通过加入饱和酒石酸钾钠溶液(150mL)来淬灭。将混合物搅拌15min，然后用乙酸乙酯(×3)萃取，然后合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用0-25％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色液体。收率为0.56g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.41(t，J＝6.9Hz，2H)，3.31(d，J＝5.2Hz，2H)，1.91-1.79(m，2H)，1.47-1.39(m，2H)，1.34-1.21(m，8H)，0.86(s，6H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(9-羟基-8，8-二甲基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.5g)溶解在甲醇中，且加载至SCX柱(用甲醇预润湿)。柱用甲醇洗涤，且用2M氨/甲醇溶液洗脱。真空蒸发洗脱剂，得到物质，其为游离碱(0.26g)。向该物质中加入9-溴-2，2-二甲基壬-1-醇(实施例103，步骤b)(0.25g)在乙腈(10mL)和三乙胺(0.23mL)中的溶液，且将所得混合物在60℃加热15h。真空蒸发挥发物，且粗产物经硅胶色谱(用0-10％甲醇/DCM洗脱)纯化，得到不纯的副标题化合物，其为无色胶状物，所述胶状物重新经硅胶色谱(用0-10％甲醇/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为灰白色固体。收率为0.37g。m/z 480(M+H)+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87(s，1H)，4.08-3.91(m，1H)，3.80-3.75(m，3H)，3.45-3.32(m，2H)，3.35-3.30(m，2H)，3.06-2.84(m，3H)，2.48-2.31(m，2H)，2.17-2.03(m，2H)，1.96-1.83(m，2H)，1.66-1.51(m，4H)，1.43(d，J＝6.9Hz，6H)，1.39-1.31(m，4H)，1.30-1.16(m，6H)，0.86(s，6H)。1个可交换的质子没有观察。
d)9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2，2-二甲基壬醛
在0℃和氩气下将三氟乙酸(0.059mL)加至(9-(9-羟基-8，8-二甲基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例103，步骤c)(0.37g)的DCM(20mL)溶液中，且将混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.49g)。将反应混合物在RT搅拌1.25h，然后通过加入饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)和饱和碳酸氢钠溶液(20mL)来淬灭，然后加入乙酸乙酯，且将混合物搅拌5min。分离各相，且水层用乙酸乙酯(×2)萃取。合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将乙酸(0.066mL)加至有机相中，然后所述有机相用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到粗副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.40g。m/z 478(M+H)+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.46-9.41(s，1H)，7.87(s，1H)，4.05-3.89(m，3H)，3.82-3.67(m，5H)，3.36-3.26(m，3H)，2.87-2.79(m，4H)，2.09-2.02(m，2H)，1.77-1.65(m，2H)，1.47-1.36(m，10H)，1.32-1.13(m，6H)，1.03(s，6H)。
e)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2，2-二甲基壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将乙酸(0.066mL)加至9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2，2-二甲基壬醛(实施例103，步骤d)(0.4g)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.3g)及
分子筛在无水甲醇(10mL)中的混合物中。将混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.16g)，且将所得混合物在RT搅拌16.5h。过滤溶液，然后真空浓缩。将残余物溶解在乙腈和水的混合物中，且经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为10-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.10g。m/z 688(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.51(s，1H)，7.88(s，1H)，6.92(d，J＝8.3Hz，1H)，6.70(d，J＝8.3Hz，1H)，4.93-4.88(m，1H)，3.92-3.53(m，6H)，3.32-3.25(m，1H)，3.11-2.52(m，10H)，1.98(s，2H)，1.82-1.48(宽多重峰，3H)，1.37(d，J＝6.9Hz，6H)，1.38-1.31(m，5H)，1.30-1.22(m，6H)，0.91(s，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例104
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(5-甲基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)4-(5-甲基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.91g)加至1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXiPharmaTech)(0.5g)、5-甲基-噻吩-3-甲酸(0.243g)和三乙胺(0.95mL)的DMF(10mL)溶液中，且将所得混合物搅拌16h。将反应混合物倒入盐水(40mL)中，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机溶液用水(150mL)和盐水(150mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用0-10％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.34g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.23(s，1H)，6.81(s，1H)，3.72(s，6H)，3.46(s，3H)，3.15(s，3H)，2.49(d，J＝1.1Hz，3H)，1.82(宽二重峰，J＝13.5Hz，2H)，1.45(s，9H)。
b)(5-甲基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将三氟乙酸(2.5mL)加至4-(5-甲基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例104，步骤a)(0.34g)的DCM(10mL)溶液中，将所得混合物搅拌45分钟，且静置过夜。真空蒸发溶剂。加入甲苯(3×25mL)，且真空蒸发混合物。将残余物溶解在甲醇(20mL)中，且加载至SCX柱(用甲醇预润湿)。柱用甲醇(40mL)洗涤，且用2M氨/甲醇溶液(20mL)洗脱。真空蒸发洗脱剂，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.25g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.50(s，1H)，6.88(s，1H)，3.67-3.57(m，2H)，3.49(s，2H)，3.38(s，4H)，2.68(s，2H)，2.45(d，J＝1.1Hz，3H)，1.57(s，2H)，1.37(s，2H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(5-甲基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
将三乙胺(0.25mL)加至(5-甲基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例104，步骤b)(0.195g)的乙腈(2.5mL)溶液中。将该溶液加至甲磺酸(R)-2-(4-((叔丁氧基羰基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基)甲基)苯氧基)乙基酯(实施例108，步骤c)(0.5g)的乙腈(2.5mL)溶液中。将所得混合物在80℃加热48小时。真空蒸发反应混合物。经硅胶色谱(用0-10％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为霜状固体。收率为0.33g。1H NMR(300MHz，D4-MeOH)δ7.42(s，1H)，7.07(d，J＝6.7Hz，2H)，6.85(d，J＝13.0Hz，4H)，6.70(d，J＝8.2Hz，1H)，4.28(s，1H)，4.12(s，2H)，3.71(s，2H)，3.66-3.48(m，5H)，3.38-3.29(m，5H)，2.90(s，2H)，2.80-2.55(m，4H)，2.48(s，3H)，1.94-1.89(m，1H)，1.44(s，4H)，1.37(s，6H)。3个可交换的质子没有观察。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(5-甲基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将三氟乙酸(1.2mL)加至(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(5-甲基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(实施例104，步骤c)(0.33g)的DCM(5mL)溶液中，且将所得混合物搅拌10分钟。加入甲苯(20mL)，且真空蒸发混合物。残余物与甲苯(3×20mL)共沸。经制备性HPLC(PhenomenexGemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.12g。m/z 639(M+H)+。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.13(s，1H)，7.45(s，1H)，7.22(d，J＝8.34Hz，2H)，6.88-6.78(m，4H)，6.66(d，J＝8.27Hz，1H)，4.65(m，1H)，4.09-4.00(m，2H)，3.85-3.77(m，3H)，3.67-3.60(m，4H)，3.56-3.47(m，2H)，2.81-2.63(m，5H)，2.49-2.36(m，5H)，1.77-1.67(m，2H)，1.59-1.37(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例105
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(5-甲基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-3-基)甲酮
将9-溴-壬-1-醇(0.335g)的乙腈(3mL)溶液加至(5-甲基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例104，步骤b)(0.28g)和三乙胺(0.278mL)的乙腈(7mL)溶液中。将所得混合物在60℃搅拌过夜。真空蒸发反应混合物，将残余物吸收到DCM(30mL)中，用盐水(2×15mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用0-10％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.3g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ7.54(s，1H)，6.91(s，1H)，4.32(t，J＝5.1Hz，1H)，3.66(s，2H)，3.52(s，2H)，3.41-3.33(m，3H)，2.95(s，4H)，2.45(d，J＝1.1Hz，3H)，2.02(s，3H)，1.64(s，4H)，1.40(t，J＝6.8Hz，2H)，1.26(s，11H)。1个可交换的质子没有观察。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(5-甲基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
在0℃和氩气下将三氟乙酸(0.055mL)加至(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-3-基)甲酮(实施例105，步骤a)(0.3g)的DCM(15mL)溶液中。将所得混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.45g)。将混合物在室温搅拌1h，然后通过加入饱和硫代硫酸钠溶液(14mL)和饱和碳酸氢钠溶液(14mL)来淬灭，然后加入乙酸乙酯(30mL)，且将混合物搅拌5min。分离各层，且水层用乙酸乙酯(2×40mL)萃取。将乙酸(0.159mL)加至合并的有机层中，所述有机层用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水甲醇(15mL)中。加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.28g)，接着加入乙酸(0.061mL)和
分子筛。在室温搅拌5min后，将反应混合物冷却至0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.15g)，且将混合物在室温搅拌18h。对反应混合物进行过滤，且真空蒸发溶剂。残余物经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.07g。m/z 631(M+H)+。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.24(s，1H)，7.45(s，1H)，6.85-6.80(m，2H)，6.67(d，J＝8.3Hz，1H)，4.67(t，J＝6.5Hz，1H)，3.63-3.21(m，6H)，2.75(d，J＝6.5Hz，2H)，2.63(t，J＝7.3Hz，2H)，2.40(d，J＝1.1Hz，3H)，2.38-2.16(m，6H)，1.70-1.61(m，2H)，1.47-1.29(m，6H)，1.19(s，10H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例106
(R)-7-(2-(4-(2-(4-(苯并[d]噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)4-(苯并[d]噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(1.45g)加至1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXiPharmaTech)(0.8g)、1，3-苯并噻唑-2-甲酸(0.588g)和三乙胺(1.51mL)的DMF(15mL)溶液中，且将所得混合物搅拌16h。真空减少DMF的体积，且将反应混合物在水(30mL)和乙酸乙酯(30mL)之间分配。有机层用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用0-10％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.83g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.23-8.09(m，2H)，7.63-7.52(m，2H)，4.34(s，1H)，4.20(s，1H)，3.78(s，2H)，3.71(s，1H)，3.64-3.51(m，3H)，3.08(s，2H)，1.76(d，J＝13.7Hz，2H)，1.55-1.34(m，11H)。
b)苯并[d]噻唑-2-基(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将三氟乙酸(5mL)加至4-(苯并[d]噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例106，步骤a)(0.83g)的DCM(15mL)溶液中，且将所得混合物搅拌25分钟。真空蒸发溶剂。将残余物溶解在DCM∶甲醇(1∶1)(5mL)中，且加载至SCX柱(用DCM∶甲醇(1∶1)预润湿)。柱用甲醇(60mL)洗涤，且用2M氨/甲醇溶液(40mL)洗脱。真空蒸发洗脱剂，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.57g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.18-8.13(m，1H)，8.10-8.07(m，1H)，7.60-7.50(m，2H)，4.25(t，J＝4.8Hz，1H)，4.17(s，1H)，4.04(s，1H)，3.70(s，2H)，3.65(d，J＝5.5Hz，1H)，3.56(s，1H)，2.73-2.46(m，4H)，1.62-1.54(m，2H)，1.50-1.36(m，2H)。
c)(R)-4-(2-(4-(苯并[d]噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将三乙胺(0.25mL)加至苯并[d]噻唑-2-基(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例106，步骤b)(0.22g)的乙腈(2.5mL)溶液中。将该溶液加至甲磺酸(R)-2-(4-((叔丁氧基羰基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基)甲基)苯氧基)乙基酯(实施例108，步骤c)(0.5g)的乙腈(2.5mL)溶液中。将所得混合物在80℃加热48小时。真空蒸发反应混合物。经硅胶色谱(用0-10％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为霜状泡沫状物。收率为0.34g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ11.49(s，1H)，9.93(s，1H)，8.21(d，J＝7.5Hz，1H)，8.14(d，J＝7.7Hz，1H)，7.64-7.56(m，2H)，7.07(s，2H)，6.93-6.79(m，2H)，6.78-6.67(m，2H)，5.68(s，1H)，4.73(s，1H)，4.35-4.22(m，3H)，4.07(s，4H)，3.76(s，2H)，3.70(s，1H)，3.62(s，1H)，3.17(s，6H)，2.67(s，2H)，1.77(s，1H)，1.62(s，1H)，1.35(s，3H)，1.27(s，6H)。1个可交换的质子没有观察。
d)(R)-7-(2-(4-(2-(4-(苯并[d]噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将三氟乙酸(1.25mL)加至(R)-4-(2-(4-(苯并[d]噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例106，步骤c)(0.33g)的DCM(4mL)溶液中，且将所得混合物搅拌10分钟。加入甲苯(20mL)，且真空蒸发混合物。残余物与甲苯(3×20mL)共沸。经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.096g。m/z 676(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.44(s，1H)；8.09-8.00(m，2H)；7.58-7.48(m，2H)；7.37(t，J＝6.6Hz，2H)；7.00(t，J＝9.4Hz，2H)；6.91(d，J＝8.3Hz，1H)；6.71(d，J＝8.3Hz，1H)；4.93-4.88(m，1H)；4.43-3.38(m，1H)；4.37-4.34(s，1H)；
4.27-4.20(m，2H)；4.14(s，2H)；3.87-3.82(m，2H)；3.81-3.76(m，1H)；3.71(s，1H)；3.20-3.11(m，2H)；3.12-3.01(m，4H)；2.96-2.82(m，2H)；2.10-2.01(m，2H)；1.88-1.76(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例107
(R)-7-(2-(9-(4-(苯并[d]噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)苯并[d]噻唑-2-基(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将9-溴-壬-1-醇(0.335g)的乙腈(3mL)溶液加至苯并[d]噻唑-2-基(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例106，步骤b)(0.34g)和三乙胺(0.278mL)的乙腈(7mL)溶液中。将所得混合物在60℃搅拌过夜。真空蒸发反应混合物，将残余物吸收到DCM(30mL)中，用盐水(2×15mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用0-10％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.34g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.22(d，J＝7.7Hz，1H)，8.14(d，J＝7.9Hz，1H)，7.65-7.56(m，2H)，4.37(s，1H)，4.31(t，J＝5.1Hz，1H)，4.27(s，1H)，3.80(s，2H)，3.72(s，1H)，3.63(s，1H)，3.41-3.33(m，2H)，2.99(s，4H)，2.10(s，2H)，1.86(s，2H)，1.64(s，2H)，1.40(s，3H)，1.27(s，11H)。
b)(R)-7-(2-(9-(4-(苯并[d]噻唑-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
在0℃和氩气下将三氟乙酸(0.056mL)加至苯并[d]噻唑-2-基(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例107，步骤a)(0.33g)的DCM(15mL)溶液中。将所得混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.46g)。将混合物在室温搅拌1h。加入饱和硫代硫酸钠溶液(14mL)、饱和碳酸氢钠溶液(14mL)和EtOAc(30mL)，且将混合物搅拌5min。分离各层，且水层用EtOAc(2×40mL)萃取。将乙酸(0.159mL)加至合并的有机层中，所述有机层用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水MeOH(15mL)中。加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.28g)，接着加入乙酸(0.062mL)和
分子筛。在室温搅拌5min后，将反应混合物冷却至0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.15g)，且将混合物在室温搅拌18h。对反应混合物进行过滤，且真空蒸发溶剂。残余物经制备性HPLC(Phenomenex Gemini，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.14g。m/z 668(M+H)+。
1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ8.23(s，1H)，8.17-8.14(m，1H)，8.09(d，J＝7.9Hz，1H)，7.60-7.49(m，2H)，6.84(d，J＝8.3Hz，1H)，6.68(d，J＝8.29Hz，1H)，4.74-4.64(m，1H)，4.29-4.24(m，1H)，4.20(s，1H)，3.72-3.62(m，3H)，3.56(s，1H)，2.79(d，J＝5.5Hz，2H)，2.69-2.62(m，2H)，2.42-2.13(m，6H)，1.74-1.64(m，2H)，1.63-1.30(m，6H)，1.19(d，J＝9.6Hz，10H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例108
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)4-(2-羟基乙氧基)苯甲醛
将2-溴乙醇(5.8mL)和碳酸钾(11.3g)先后加至4-羟基苯甲醛(5.0g)的MeCN(100mL)溶液中。将所得混合物在氩气下搅拌且加热回流3天。将反应混合物冷却至RT，且在EtOAc(100mL)和1M NaOH水溶液(100mL)之间分配。有机层用盐水(100mL)洗涤。合并水层，且用EtOAc(50mL)萃取。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为6.4g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.90(s，1H)，7.87-7.81(m，2H)，7.06-6.98(m，2H)，4.18(dd，J＝5.0，4.0Hz，2H)，4.04-3.97(m，2H)，2.18-1.96(m，1H)。
b)甲磺酸2-(4-甲酰基苯氧基)乙基酯
在0℃和氩气下历时5min将甲磺酰氯(3.3mL)滴加至4-(2-羟基乙氧基)苯甲醛(实施例108，步骤a)(6.4g)和三乙胺(6.4mL)的DCM(30mL)溶液中。将所得混合物在0℃搅拌10min，然后在RT搅拌1h。反应混合物用盐水(2×30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用40-50％EtOAc/石油醚(40-60℃)洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为粘性黄色油状物。收率为8.87g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.92-9.87(m，1H)，7.89-7.81(m，2H)，7.05-6.98(m，2H)，4.62-4.58(m，2H)，4.36-4.32(m，2H)，3.10(s，3H)。
c)甲磺酸(R)-2-(4-((叔丁氧基羰基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基)甲基)苯氧基)乙基酯
在
分子筛存在下将甲磺酸2-(4-甲酰基苯氧基)乙基酯(实施例108，步骤b)(1.7g)、(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(2.0g)和乙酸(0.44mL)在无水DMF(40mL)中的混合物在RT搅拌15min。将反应混合物冷却至0℃，且分4份以2min间隔加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.2g)。将所得混合物在RT搅拌1h。将一缩二碳酸二叔丁酯(1.8g)加至反应混合物中，将所述反应混合物搅拌2h。加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)和EtOAc(100mL)，且将混合物搅拌5min。分离各层，且水层用EtOAc(×4)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用0-80％EtOAc/石油醚(40-60℃)洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为2.25g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.05(d，J＝7.6Hz，2H)，6.80(d，J＝8.0Hz，3H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H)，4.81(宽单峰，1H)，4.54(t，J＝4.3Hz，2H)，4.34-4.26(m，1H)，4.24-4.08(m，3H)，3.57-3.42(m，1H)，3.33-3.23(m，1H)，3.07(s，3H)，1.49(s，9H)。3个可交换的质子没有观察。
d)(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
在RT和氩气下将甲磺酸(R)-2-(4-((叔丁氧基羰基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基)甲基)苯氧基)乙基酯(实施例108，步骤c)(0.295g)的MeCN(1.1mL)溶液滴加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.150g)和三乙胺(0.11mL)的MeCN(1.1mL)溶液中。将所得混合物在60℃和氩气下搅拌34h。冷却至RT后，真空除去溶剂。将残余物吸收在DCM中，用盐水(×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。黄色固体经硅胶色谱(用0-5％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为绿色固体。收率为0.135g。m/z 768(M+H)+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.86(s，1H)，6.83(宽单峰，2H)，6.71-6.46(m，4H)，4.78(宽单峰，1H)，4.46-2.51(m，19H)，1.90(宽单峰，4H)，1.53(s，9H)，1.39(s，3H)，1.29(s，3H)。3个可交换的质子没有观察。
e)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将三氟乙酸(0.7mL)加至(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(实施例108，步骤d)(0.122g)的DCM(1.5mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌10min。加入甲苯(15mL)，且真空蒸发反应混合物。残余物与MeCN共沸2次。粘性黄色残余物通过HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.052g。m/z 668(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.47(s，1H)，7.87(s，1H)，7.36(d，J＝8.19Hz，2H)，6.98(s，2H)，6.91(d，J＝8.36Hz，1H)，6.71(d，J＝8.30Hz，1H)，4.90(dd，J＝9.4，4.1Hz，1H)，4.18(s，2H)，4.11(s，2H)，3.75(s，5H)，3.63(s，1H)，3.40(m，1H)，3.19-2.80(m，8H)，1.95(s，2H)，1.75(s，1H)，1.65(s，1H)，1.38(d，J＝6.9Hz，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例109
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将9-溴-壬-1-醇(0.316g)的MeCN(3mL)溶液加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(0.40g)和三乙胺(0.395mL)的MeCN(7mL)溶液中。将所得混合物在60℃和氩气下搅拌16h。冷却至RT后，真空除去溶剂。将残余物吸收在DCM中，用盐水(×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。橙色固体经硅胶色谱(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为灰白色固体。收率为0.325g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87(s，1H)，3.97(s，2H)，3.76(s，3H)，3.63(t，J＝6.6Hz，2H)，3.36(s，3H)，2.92(s，4H)，2.25(s，2H)，2.14-2.03(m，2H)，1.84(s，2H)，1.63(s，2H)，1.60-1.50(m，2H)，1.42(d，J＝6.8Hz，6H)，1.42-1.21(m，10H)。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
在0℃将三氟乙酸(0.027mL)加至(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例109，步骤a)(0.16g)的DCM(6.3mL)溶液中。将所得混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.225g)。将混合物在RT搅拌45min。加入饱和硫代硫酸钠溶液(6mL)、饱和碳酸氢钠溶液(6mL)和EtOAc(36mL)，且将混合物搅拌5min。分离各层，且水层用EtOAc(2×40mL)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(40mL)洗涤，用乙酸(0.067mL)处理，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将粘性橙色油状物溶解在无水MeOH(6.6mL)中，且加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.138g)，接着加入乙酸(0.03mL)和
分子筛。在RT搅拌5min后，将反应混合物冷却至0℃，且加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.075g)。将混合物在RT搅拌1h，然后加入另一份三乙酰氧基硼氢化钠(0.075g)，且将混合物在RT再搅拌16h。对反应混合物进行过滤，且真空蒸发溶剂。残余物通过HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.060g。m/z 660(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.52(s，1H)，7.86(s，1H)，6.94(d，J＝8.4Hz，1H)，6.52(d，J＝8.3Hz，1H)，4.98-4.89(m，1H)，3.90-3.58(m，6H)，3.37-3.25(m，1H)，3.15-3.02(m，3H)，3.01-2.93(m，3H)，2.91-2.65(m，4H)，2.10-1.96(m，2H)，1.83-1.54(m，6H)，1.41-1.28(m，16H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例110
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
在RT和氩气下将甲磺酸(R)-2-(4-((叔丁氧基羰基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基)甲基)苯氧基)乙基酯(实施例108，步骤c)(0.426g)的MeCN(2mL)溶液滴加至(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例9，步骤b)(0.154g)和三乙胺(0.15mL)的MeCN(5mL)溶液中。将所得混合物在60℃和氩气下搅拌16h，然后在80℃再搅拌3h。冷却至RT后，真空除去溶剂。将残余物吸收在DCM中，用盐水和水(×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。褐色固体经硅胶色谱(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色固体。收率为0.246g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.11(d，J＝3.6Hz，1H)，6.89(s，2H)，6.70-6.59(m，4H)，6.51(d，J＝8.2Hz，1H)，4.76(s，1H)，4.20-4.10(m，4H)，3.74(s，4H)，3.59-3.44(m，4H)，2.93-2.77(m，4H)，2.61(s，2H)，2.47(s，3H)，1.93-1.84(m，2H)，1.74-1.60(m，2H)，1.52(s，9H)。3个可交换的质子没有观察。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将三氟乙酸(0.75mL)加至甲磺酸(R)-2-(4-((叔丁氧基羰基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基)甲基)苯氧基)乙基酯(实施例110，步骤a)(0.243g)的DCM(3mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌10min。加入甲苯(30mL)，且真空蒸发反应混合物(×3)。残余物通过HPLC(Phenomenex Gemini，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.65g。m/z 639(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.44(s，1H)，7.40-7.35(m，2H)，7.19(d，J＝3.7Hz，1H)，7.02-6.97(m，2H)，6.92(d，J＝8.36Hz，1H)，6.78-6..76(m，1H)，6.71(d，J＝8.30Hz，1H)，4.93-4.88(m，1H)，4.21(t，J＝5.17Hz，2H)，4.13(s，2H)，3.76-3.70(m，4H)，3.61(s，2H)，3.11-3.07(m，2H)，3.07-3.01(m，2H)，3.03-2.91(m，2H)，2.88-2.76(m，2H)，2.47(d，J＝1.0Hz，3H)，2.02-1.93(m，2H)，1.74-1.61(m，2H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例111
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮
将9-溴-壬-1-醇(0.314g)的MeCN(3mL)溶液加至(5-甲基噻吩-2-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例9，步骤b)(0.263g)和三乙胺(0.261mL)的MeCN(7mL)溶液中。将所得混合物在60℃和氩气下搅拌16h。冷却至RT后，真空除去溶剂。将残余物吸收在DCM中，用盐水(×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。白色固体经硅胶色谱(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.352g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.10(d，J＝3.6Hz，1H)，6.71(dd，J＝3.6，1.2Hz，1H)，3.73(s，4H)，3.66-3.60(m，4H)，3.22(s，2H)，2.84(s，3H)，2.50(d，J＝1.0Hz，3H)，2.15(s，1H)，2.11-1.97(m，2H)，1.83(s，2H)，1.61-1.50(m，3H)，1.32(s，11H)。1个可交换的质子没有观察。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(5-甲基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
在0℃将三氟乙酸(0.064mL)加至(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-甲基噻吩-2-基)甲酮(实施例111，步骤a)(0.350g)的DCM(15mL)溶液中。将所得混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.527g)。将混合物在RT搅拌1h。加入饱和硫代硫酸钠溶液(14mL)、饱和碳酸氢钠溶液(14mL)和EtOAc(30mL)，且将混合物搅拌5min。分离各层，且水层用EtOAc(2×40mL)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(40mL)洗涤，用乙酸(0.159mL)处理，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水MeOH(15.6mL)中，且加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.327g)，接着加入乙酸(0.071mL)和
分子筛。在RT搅拌5min后，将反应混合物冷却至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.176g)，且将混合物在RT搅拌1h。加入另一份三乙酰氧基硼氢化钠(0.075g)，且将混合物在RT搅拌17h。对反应混合物进行过滤，且真空蒸发溶剂。残余物通过HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.127g。m/z 631(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.49(s，1H)，7.20(d，J＝3.7Hz，1H)，6.95(d，J＝8.3Hz，1H)，6.79-6.76(m，1H)，6.73(d，J＝8.3Hz，1H)，4.97-4.91(m，1H)，3.76-3.72(m，4H)，3.62(s，2H)，3.20-3.04(m，4H)，3.03-2.93(m，3H)，2.95-2.84(m，3H)，2.47(d，J＝1.0Hz，3H)，2.11-2.01(m，2H)，1.80-1.62(m，6H)，1.40-1.31(m，10H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例112
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXiPharmaTech)(0.60g)的DMF(11mL)溶液用三乙胺(1.1mL)处理，接着用2-苯基-1，3-噻唑-4-甲酸(0.421g)处理，然后用O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(1.09g)处理。将所得混合物在RT搅拌7h。真空除去DMF。将残余物吸收在EtOAc(50mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液(2×30mL)、水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。褐色油状物经硅胶色谱(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为褐色固体。收率为0.857g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.00(s，1H)，7.92(s，2H)，7.47(d，J＝4.1Hz，3H)，4.13-3.96(m，2H)，3.83(s，3H)，3.73(s，2H)，3.29-3.13(m，2H)，1.94-1.83(m，2H)，1.62-1.51(m，3H)，1.45(s，9H)。
b)(2-苯基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将三氟乙酸(3.8mL)加至4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例112，步骤a)(0.85mg)的DCM(15.2mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌1h。加入甲苯(30mL)，且真空蒸发混合物。将黄色残余物溶解在MeOH中，且加载至SCX柱(用MeOH预润湿)。柱用MeOH洗涤，且用2M氨/MeOH洗脱。真空蒸发洗脱剂，得到副标题化合物，其为褐色油状物。收率为0.629g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(s，1H)，7.95-7.90(m，2H)，7.49-7.44(m，3H)，4.07(宽单峰，1H)，3.99(宽单峰，1H)，3.88-3.79(m，3H)，3.70(宽单峰，1H)，3.02-2.81(m，3H)，2.80-2.69(m，1H)，1.83(d，J＝13.7Hz，2H)，1.70-1.44(m，2H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
在RT和氩气下将甲磺酸(R)-2-(4-((叔丁氧基羰基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基)甲基)苯氧基)乙基酯(实施例108，步骤c)(0.619g)的MeCN(3mL)溶液滴加至(2-苯基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例112，步骤b)(0.274g)和三乙胺(0.22mL)的MeCN(7.3mL)溶液中。将所得混合物在80℃和氩气下搅拌16h。冷却至RT后，真空除去溶剂。将残余物吸收在DCM中，用盐水和水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用0-70％EtOAc/石油醚(40-60℃)洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色固体。收率为0.42g。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.04-7.95(m，1H)，7.94-7.79(m，2H)，7.50-7.41(m，2H)，7.40-7.28(m，1H)，7.02-6.81(m，2H)，6.70-6.37(m，3H)，4.84-4.70(m，1H)，4.25-3.92(m，6H)，3.87-3.75(m，3H)，3.74-3.58(m，2H)，3.57-3.36(m，2H)，2.99-2.77(m，3H)，2.76-2.43(m，3H)，2.01-1.86(m，2H)，1.84-1.58(m，2H)，1.52(s，9H)。3个可交换的质子没有观察。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将三氟乙酸(1.2mL)加至(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(实施例112，步骤c)(0.415g)的DCM(4.7mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌15min。加入甲苯(40mL)，且真空蒸发反应混合物(×2)。残余物通过HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.176g。m/z 702(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.07(s，1H)，7.94(宽单峰，2H)，7.51-7.39(m，5H)，7.06(宽单峰，2H)，6.93(d，J＝8.4Hz，1H)，6.71(d，J＝8.4Hz，1H)，4.92-4.88(m，1H)，4.38(宽单峰，2H)，4.24-4.14(m，2H)，4.03-3.49(m，10H)，3.38-3.28(m，2H)，3.08-3.00(m，2H)，2.33-2.22(m，2H)，1.87(宽单峰，2H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例113
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-苯基噻唑-4-基)甲酮
将9-溴-壬-1-醇(0.346g)的MeCN(3mL)溶液加至(2-苯基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例112，步骤b)(0.355g)和三乙胺(0.288mL)的MeCN(7mL)溶液中。将所得混合物在60℃和氩气下搅拌17h。冷却至RT后，真空除去溶剂。将残余物吸收在DCM中，用盐水(×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。黄色油状物经硅胶色谱(用0-7％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.378g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.02(s，1H)，8.00-7.87(m，2H)，7.57(s，1H)，7.49-7.42(m，2H)，4.16-4.08(m，2H)，3.81(s，4H)，3.72(宽单峰，1H)，3.63(t，J＝6.6Hz，2H)，3.33-2.64(m，6H)，2.25-2.04(m，3H)，1.79(s，3H)，1.61-1.50(m，3H)，1.39-1.25(m，9H)。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-苯基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
在0℃将三氟乙酸(0.059mL)加至(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-苯基噻唑-4-基)甲酮(实施例113，步骤a)(0.373g)的DCM(14mL)溶液中。将所得混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.489g)。将混合物在RT搅拌1h。加入饱和硫代硫酸钠溶液(14mL)、饱和碳酸氢钠溶液(14mL)和EtOAc(30mL)，且将混合物搅拌5min。分离各层，且水层用EtOAc(2×30mL)萃取。合并的有机层用乙酸(0.148mL)处理，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水MeOH(15mL)中，且加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(0.303g)，接着加入乙酸(0.066mL)和
分子筛。在RT搅拌5min后，将反应混合物冷却至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.163g)，且将混合物在RT搅拌18h。对反应混合物进行过滤，且真空蒸发溶剂。残余物通过HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.118g。m/z 694(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.31(s，1H)，7.97(宽单峰，1H)，7.99-7.91(m，2H)，7.51-7.44(m，3H)，6.95(d，J＝8.4Hz，1H)，6.72(d，J＝8.4Hz，1H)，4.97-4.89(m，1H)，3.99-3.86(m，2H)，3.85-3.63(m，4H)，3.14-3.01(m，2H)，3.00-2.91(m，3H)，2.90-2.56(m，4H)，2.12-1.97(m，2H)，1.85-1.47(m，6H)，1.43-1.22(m，10H)。1个质子由于溶剂而模糊，且5个可交换的质子没有观察。
实施例114
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯
1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯盐酸盐(WuXiPharmaTech)(0.694g)的DMF(13mL)溶液用三乙胺(1.3mL)处理，接着用2-异丙基噻唑-5-甲酸(实施例55，步骤b)(0.406g)处理，然后用O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(1.26g)处理。将所得混合物在RT搅拌16h。真空除去DMF。将残余物吸收在EtOAc(40mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液(2×40mL)、水(40mL)和盐水(40mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。粘性橙色油状物经硅胶色谱(用0-7％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为粘性橙色油状物。收率为0.765g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.80(s，1H)，3.75(d，J＝3.2Hz，6H)，3.55(d，J＝4.3Hz，2H)，3.36-3.28(m，1H)，3.15(s，2H)，1.89-1.78(m，2H)，1.58(s，2H)，1.45(s，9H)，1.42(d，J＝6.9Hz，6H)。
b)(2-异丙基噻唑-5-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
将三氟乙酸(3.9mL)加至4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-甲酸叔丁酯(实施例113，步骤a)(0.765g)的DCM(14.8mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌1h。加入甲苯(30mL)，且真空蒸发混合物。将黄色残余物溶解在MeOH中，且加载至SCX柱(用MeOH预润湿)。柱用MeOH洗涤，且用2M氨/MeOH洗脱。真空蒸发洗脱剂，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.552g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.81(s，1H)，3.79-3.71(m，4H)，3.64-3.44(m，2H)，3.36-3.26(m，1H)，2.96-2.87(m，2H)，2.85-2.73(m，2H)，1.86-1.75(m，2H)，1.59(s，2H)，1.42(d，J＝6.9Hz，6H)。1个可交换的质子没有观察。
c)(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
在RT和氩气下将甲磺酸(R)-2-(4-((叔丁氧基羰基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基)甲基)苯氧基)乙基酯(实施例108，步骤c)(0.575g)的MeCN(3mL)溶液滴加至(2-异丙基噻唑-5-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例114，步骤b)(0.229g)和三乙胺(0.21mL)的MeCN(7.3mL)溶液中。将所得混合物在80℃和氩气下搅拌16h。冷却至RT后，真空除去溶剂。将残余物吸收在DCM(25mL)中，用盐水(20mL)和水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用0-8％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色固体。收率为0.395g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.69(s，1H)，7.01-6.83(s，2H)，6.70-6.62(m，3H)，6.57-6.47(m，1H)，4.79(s，1H)，4.25-4.06(m，3H)，3.77-3.63(m，4H)，3.57-3.39(m，4H)，3.34-3.26(m，2H)，2.90(s，4H)，2.61(s，2H)，1.95-1.85(m，2H)，1.63(s，2H)，1.51(s，9H)，1.45-1.37(m，6H)。3个可交换的质子没有观察。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将三氟乙酸(1.2mL)加至(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(实施例114，步骤c)(0.39g)的DCM(4.7mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌15min。加入甲苯(30mL)，且真空蒸发反应混合物(×3)。残余物通过HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％三氟乙酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.201g。m/z 668(M+H)+。1HNMR(400MHz，D4-MeOH)δ7.91(s，1H)，7.42(d，J＝8.6Hz，2H)，7.06(d，J＝8.6Hz，2H)，6.93(d，J＝8.3Hz，1H)，6.71(d，J＝8.3Hz，1H)，4.91-4.88(m，1H)，4.38(t，J＝4.9Hz，2H)，4.24-4.15(m，2H)，3.82-3.71(m，5H)，3.66-3.57(m，4H)，3.56-3.48(m，2H)，3.38-3.25(m，1H)，3.08-3.00(m，2H)，2.29-2.17(m，2H)，2.12-1.93(宽单峰，1H)，1.88-1.73(m，2H)，1.38(d，J＝6.7Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例115
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-5-基)甲酮
将9-溴-壬-1-醇(0.446g)的MeCN(3.9mL)溶液加至(2-异丙基噻唑-5-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例114，步骤b)(0.395g)和三乙胺(0.36mL)的MeCN(8.6mL)溶液中。将所得混合物在60℃和氩气下搅拌16h。冷却至RT后，真空除去溶剂。将残余物吸收在DCM(25mL)中，用盐水(20mL)和水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.329g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.81(s，1H)，3.74(s，4H)，3.63(t，J＝6.6Hz，2H)，3.59(s，2H)，3.36-3.26(m，1H)，3.10-2.49(m，5H)，2.03-1.91(m，3H)，1.68(s，2H)，1.61-1.50(m，3H)，1.43(d，J＝6.9Hz，6H)，1.36-1.29(m，11H)。1个可交换的质子没有观察。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
在0℃和氩气下将三氟乙酸(0.055mL)加至(9-(9-羟基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-5-基)甲酮(实施例115，步骤a)(0.325g)的DCM(13mL)溶液中。将所得混合物搅拌5min，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.458g)。将混合物在RT搅拌1.5h。加入饱和硫代硫酸钠溶液(14mL)、饱和碳酸氢钠溶液(14mL)和EtOAc(28mL)，且将混合物搅拌10min。分离各层，且水层用EtOAc(2×20mL)萃取。合并的有机层用乙酸(0.16mL)处理，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将黄色油状物溶解在无水MeOH(15mL)中，且加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.284g)，接着加入乙酸(0.062mL)和
分子筛。在RT搅拌5min后，将反应混合物冷却至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.153g)，且将混合物在RT搅拌16h。对反应混合物进行过滤，且真空蒸发溶剂。残余物通过HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.090mg。m/z 660(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ8.50(s，1H)，7.90(s，1H)，6.95(d，J＝8.5Hz，1H)，6.73(d，J＝8.5Hz，1H)，4.96-4.90(m，1H)，3.79-3.68(m，4H)，3.64-3.55(m，2H)，3.38-3.26(m，1H)，3.11-3.05(m，2H)，3.04-2.92(m，4H)，2.86-2.69(m，4H)，2.07-2.04(m，2H)，1.76-1.55(m，6H)，1.39-1.36(m，7H)，1.36-1.31(m，9H)。5个可交换的质子没有观察。
pEC50和内在活性。将内在活性表达为在每项实验中相对于就福莫特罗(formoterol)而确定的最大活性的分数。
实施例116-182
a)(R)-3-氟-5-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
2，2，2-三氟-1-(9-(3-氟-5-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(实施例41，步骤c)(0.8g)的二氯甲烷(50mL)溶液在20℃用三氟乙酸(0.152mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(1.091g)处理，且将所得混合物在20℃搅拌40分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和乙酸乙酯(30mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯(×2)萃取，合并的有机层用碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。将残余物溶解在甲醇(3mL)中，且加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮HCl(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.780g)的甲醇(20mL)(含有乙酸(0.113mL))溶液中。该混合物用氰基硼氢化钠(0.186g)处理，且在20℃搅拌2小时。加入三乙胺(0.69mL)，接着加入一缩二碳酸二叔丁酯(0.689mL)，且在20℃继续搅拌2小时。减压除去溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂。粗产物经硅胶色谱(用10％甲醇/二氯甲烷(含有1％浓氨水)洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.7g。m/z 713.3(M+H)+。
b)(R)-3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将(R)-3-氟-5-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例116-182，步骤a)(0.7g)在35％氨水溶液(15mL)中的溶液在20℃静置40分钟。减压蒸发反应混合物至其原体积的一半。加入水(10mL)，且使该溶液通过10g C18硅胶柱(所述硅胶柱已用水预润湿)。柱用水(20mL)冲洗。然后柱用甲醇(50mL)冲洗以洗下产物。减压蒸发溶剂，且残余物与乙腈(×2)共沸，得到副标题化合物。收率为0.580g。m/z 617(M+H)+。
c)并行合成-制备实施例116-182
将(R)-3-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)-5-氟苯乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例116-182，步骤b)(496mg)和三乙胺(244mg)的NMP(2.4mL)溶液分成总体积为30μL的等分液。向每份等分液中加入合适的酸(0.01mmol)的NMP(80μL)溶液，接着加入HATU(4.9mg)的NMP(30μL)溶液。将反应混合物在室温静置18小时。加入乙腈(800μL)，且使溶液通过‘Tosic-65’树脂(350mg)。树脂用乙腈(800μL)洗涤，收集合并的洗涤液，且再次通过‘Tosic-65’树脂。然后树脂用乙腈(3mL)洗涤。使氨的甲醇溶液(2.5mL浓度为3.5M的溶液)通过树脂，且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。将残余物溶解在甲酸(250μL)中，且将混合物在室温静置18小时。加入乙腈(600μL)，且使溶液通过‘Tosic-65’树脂(350mg)。树脂用乙腈(800μL)洗涤，收集合并的洗涤液，且再次通过‘Tosic-65’树脂。然后树脂用乙腈(3mL)洗涤。使氨的甲醇溶液(2.5mL浓度为3.5M的溶液)通过树脂，且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。将DMSO(200μL)加至残余物中，且使所得溶液通过‘Sunfire’制备性C18柱(19×50mm)，使用乙腈+0.1％TFA水溶液的集中梯度洗脱(focus gradient elution)用于纯化。蒸发含有产物的馏分，得到标题化合物。
分析性HPLC条件：SunFireTM C18 2.5μm 4.6×30mm柱(Waters Corporation)，MeCN/0.1％TFA水溶液，梯度为5-95％MeCN。
| 时间(min) | ％水溶液 | ％MeCN | 流速(ml/min) |
| 0.3 | 95 | 5 | 2.5 |
| 2.7 | 5 | 95 | 2.5 |
| 2.8 | 5 | 95 | 2.5 |
| 2.9 | 95 | 5 | 2.5 |
实施例183-222
a)9-溴壬醛
在RT和氩气下将N-乙基二异丙基胺(23mL)和DMSO(9.7mL)加至9-溴-壬-1-醇(10.0g)的无水DCM(230mL)溶液中。将混合物冷却至-15℃，且分4份以5min间隔加入三氧化硫-吡啶络合物(21.4g)。加完后，将混合物搅拌15min，然后加入水(200mL)，且分离各层。有机层用1M硫酸氢钠水溶液(4×250mL)、饱和碳酸钾水溶液(250mL)和盐水(2×200mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为橙色油状物。收率为9.02g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ9.77(t，J＝1.8Hz，1H)，3.40(t，J＝6.8Hz，2H)，2.42(td，J＝7.3，1.8Hz，2H)，1.89-1.80(m，2H)，1.66-1.57(m，2H)，1.58-1.26(m，8H)。
b)(R)-9-溴壬基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将9-溴壬醛(实施例183-222，步骤a)(3.48g)、(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(4.54g)和乙酸(0.99mL)的无水DMF(91mL)溶液在RT搅拌30min。将反应混合物冷却至0℃，且分4份以2min间隔加入三乙酰氧基硼氢化钠(5.00g)。将所得混合物在0℃搅拌5min，然后在RT搅拌1h。将一缩二碳酸二叔丁酯(4.12g)加至反应混合物中，将所述反应混合物搅拌1.5h，然后冷却至0℃，且用饱和碳酸氢钠水溶液(220mL)淬灭。加入乙酸乙酯(200mL)，且将混合物剧烈搅拌15min。分离各层，且水层用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用0-70％EtOAc/石油醚(40/60℃)洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为1.68g。m/z 532(M+H)+。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.02-6.90(m，1H)；6.78(d，J＝8.4Hz，1H)，4.92-4.87(m，1H)，3.63-3.27(m，5H)，3.20-3.04(m，1H)，1.89-1.79(m，2H)，1.71-1.17(m，21H)+3个可交换的质子没有观察。
c)(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(9-(4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基)氨基甲酸叔丁酯
将(R)-9-溴壬基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例183-222，步骤b)(1.68g)的MeCN(8mL)溶液滴加至2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮三氟乙酸盐(实施例12，步骤d)(1.18g)和三乙胺(0.81mL)的MeCN(8mL)溶液中。将所得混合物在80℃搅拌18h。将反应混合物冷却至RT，且真空除去溶剂。将褐色残余物吸收在DCM中，有机层用水(×2)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。褐色泡沫状物经硅胶色谱(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为500mg。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.95(s，1H)，6.80(dd，J＝8.3，4.0Hz，1H)，4.93(s，1H)，3.79-3.26(m，10H)，3.03-2.64(m，6H)，2.10-1.98(m，4H)，1.78-1.70(m，2H)，1.48(s，9H)，1.36-0.96(m，12H)+3个可交换的质子没有观察。
d)(R)-9-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将碳酸钾(165mg)的水(24mL)溶液加至(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(9-(4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基)氨基甲酸叔丁酯(实施例183-222，步骤c)(495mg)的MeOH(24mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌4h。甲醇如下除去：在氮气气流下蒸发，保持反应混合物在30℃。加入水(20mL)和盐水(80mL)，且混合物用EtOAc(5×60mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。褐色固体残余物经硅胶色谱(用0-20％(2M NH3/MeOH)/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色固体。收率为323mg。m/z 607(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ6.80-6.68(m，1H)，6.65(d，J＝8.2Hz，1H)，5.58(宽单峰，1H)，4.69-4.56(m，1H)，3.44(t，J＝3.9Hz，2H)，3.20-3.11(m，2H)，3.05-2.94(m，2H)，2.57(t，J＝5.2Hz，2H)，2.50-2.46(m，2H)，2.40-2.31(m，2H)，2.25-2.13(m，4H)，1.77-1.68(m，2H)，1.45-1.02(m，25H)+3个可交换的质子没有观察。
e)并行合成-制备实施例183-222
将(R)-9-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)壬基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例183-222，步骤d)(292mg)和三乙胺(0.20mL)的NMP(1.14mL)溶液分成总体积为30μL的等分液。向每份等分液中加入合适的酸(0.01mmol)的NMP(80μL)溶液，接着加入HATU(4.0mg)的NMP(30μL)溶液。将反应混合物在室温静置过夜。加入乙腈(800μL)，且使溶液通过‘Tosic-65’树脂(350mg)。树脂用乙腈(800μL)洗涤，收集合并的洗涤液，且再次通过‘Tosic-65’树脂。然后树脂用乙腈(3mL)洗涤。使氨(浓度为3.5M的甲醇溶液，2.4mL)通过树脂，且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。将残余物溶解在甲酸(250μL)中，且将混合物在室温静置过夜。加入乙腈(600μL)，且使溶液通过‘Tosic-65’树脂(350mg)。树脂用乙腈(800μL)洗涤，收集合并的洗涤液，且再次通过‘Tosic-65’树脂。然后树脂用乙腈(3mL)洗涤。使氨(浓度为3.5M的甲醇溶液，2.4mL)通过树脂，且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。将DMSO(360μL)加至残余物中，且使所得溶液通过‘Sunfire’制备性C18柱(19×50mm)，使用乙腈+0.1％TFA水溶液的集中梯度洗脱用于纯化。蒸发含有产物的馏分，得到标题化合物。
*分析性HPLC条件：SunFireTMC18 2.5μm 4.6×30mm柱(WatersCorporation)，MeCN/0.1％TFA水溶液，梯度为5-95％MeCN。
| 时间(min) | ％水溶液 | ％MeCN | 流速(ml/min) |
| 0.3 | 95 | 5 | 2.5 |
| 2.7 | 5 | 95 | 2.5 |
| 2.8 | 5 | 95 | 2.5 |
| 2.9 | 95 | 5 | 2.5 |
实施例223-263
a)(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
在RT和氩气下将甲磺酸(R)-2-(4-((叔丁氧基羰基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基)甲基)苯氧基)乙基酯(实施例108，步骤c)(2.20g)的MeCN(8.5mL)溶液滴加至2，2，2-三氟-1-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮三氟乙酸盐(实施例12，步骤d)(1.18g)和三乙胺(0.81mL)的MeCN(8.5mL)溶液中。将所得混合物在60℃和氩气下搅拌25h。冷却至RT后，真空除去溶剂。将褐色残余物吸收在DCM(35mL)中，用水(2×35mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。黄色固体经硅胶色谱(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色固体。收率为729mg。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.88-6.50(m，6H)，4.86-4.64(宽单峰，1H)，4.34-4.15(宽单峰，3H)，4.11-3.87(m，2H)，3.70-3.01(m，11H)，2.95-2.73(宽单峰，2H)，2.04-1.81(m，2H)，1.56-1.37(m，11H)+3个可交换的质子没有观察。
b)(R)-4-(2-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将碳酸钾(240mg)的水(35mL)溶液加至(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(4-(2-(4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(实施例223-263，步骤a)(725mg)的MeOH(35mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌5h。甲醇如下除去：在氮气气流下蒸发，保持反应混合物在25℃。加入水(20mL)和盐水(30mL)，且混合物用乙酸乙酯(7×30mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用0-20％(2M NH3/MeOH)/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为385mg。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)：δ7.06-6.97(m，2H)，6.83(d，J＝8.6Hz，2H)，6.78-6.62(m，2H)，5.64(s，1H)，4.68(宽单峰，1H)，4.24(s，2H)，3.98(t，J＝5.6Hz，2H)，3.50(t，2H)，3.24-3.02(m，2H)，2.68-2.60(m，4H)，2.57(s，2H)，2.52-2.47(m，2H)，2.32(td，J＝11.9，3.0Hz，2H)，1.76(d，J＝13.0Hz，2H)，1.43(td，J＝10.8，3.7Hz，2H)，1.31(s，3H)，1.22(s，6H)+3个可交换的质子没有观察。
c)并行合成-制备实施例223-263
将(R)-4-(2-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苄基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例223-263，步骤b)(297mg)和三乙胺(0.20mL)的NMP(1.24mL)溶液分成总体积为30μL的等分液。向每份等分液中加入合适的酸(0.01mmol)的NMP(80μL)溶液，接着加入HATU(4.0mg)的NMP(30μL)溶液。将反应混合物在RT静置过夜。加入乙腈(800μL)，且使溶液通过‘Tosic-65’树脂(350mg)。树脂用乙腈(800μL)洗涤，收集合并的洗涤液，且再次通过‘Tosic-65’树脂。然后树脂用乙腈(3mL)洗涤。使氨(浓度为3.5M的甲醇溶液，2.4mL)通过树脂，且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。将残余物溶解在甲酸(250μL)中，且将混合物在室温静置过夜。加入乙腈(600μL)，且使溶液通过‘Tosic-65’树脂(350mg)。树脂用乙腈(800μL)洗涤，收集合并的洗涤液，且再次通过‘Tosic-65’树脂。然后树脂用乙腈(3mL)洗涤。使氨(浓度为3.5M的甲醇溶液，2.4mL)通过树脂，且在氮气气流下蒸发所得洗涤液。将DMSO(360μL)加至残余物中，且使所得溶液通过‘Sunfire’制备性C18柱(19×50mm)，使用乙腈+0.1％TFA水溶液的集中梯度洗脱用于纯化。蒸发含有产物的馏分，得到标题化合物。
*分析性HPLC条件：SunFireTMC18 2.5μm 4.6×30mm柱(Waters Corporation)，MeCN/0.1％TFA水溶液，梯度为5-95％MeCN。
| 时间(min) | ％水溶液 | ％MeCN | 流速(ml/min) |
| 0.3 | 95 | 5 | 2.5 |
| 2.7 | 5 | 95 | 2.5 |
| 2.8 | 5 | 95 | 2.5 |
| 2.9 | 95 | 5 | 2.5 |
1个可交换的H没有观察。
实施例264
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2，2，2-三氟-1-(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮
将TBAF(浓度为1M的THF溶液，2.96mL)加至搅拌的1-(9-((4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)-2，2，2-三氟乙酮(实施例43，步骤a)(1.500g，2.96mmol)的THF(5mL)溶液中。1h后，将溶液蒸发成胶状物。经硅胶色谱(用乙酸乙酯∶三乙胺10∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.25g。m/z 393(M+H)+(APCI+)。
b)2-(5-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛
副标题化合物使用与实施例43步骤(e)中所述相似的方法来制备，其中使用2，2，2-三氟-1-(9-((4-(2-羟基乙基)噻吩-2-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)乙酮(0.15g)(实施例264，步骤a)。收率为0.15g。m/z391(M+H)+(APCI+)。
c)(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(2-(5-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮HCl(1.020g)(WO 2007027134，实施例1，步骤d)加至搅拌的2-(5-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙醛(实施例264，步骤b)(0.9g)和乙酸(0.198mL)的MeOH(20mL)溶液中。2min后，加入氰基硼氢化钠(0.290g)。2h后，先后加入三乙胺(1.1mL)和BOC酸酐(一缩二碳酸二叔丁酯)(0.845g)。1h后，再加入BOC酸酐(0.4g)和三乙胺(0.5mL)。2h后，将溶液浓缩至～5mL，然后在乙酸乙酯和饱和盐水之间分配。乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。经硅胶色谱(用甲醇∶二氯甲烷∶880氨10∶90∶1洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.32g。m/z 701(M+H)+(APCI+)。
d)(R)-2-(5-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)噻吩-3-基)乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将35％氨水(5mL)加至(R)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基(2-(5-((4-(2，2，2-三氟乙酰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例264，步骤c)(0.2g)中。40min后，在20℃将溶液浓缩至～1mL，将浆液加至C18(10g)柱中，用水(20mL)洗涤，然后用甲醇洗脱产物。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。将所得固体溶解在乙腈中，且真空蒸发。收率为0.11g。m/z 605(M+H)+(APCI+)。
e)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(5-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-3-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
将HATU(0.075g)加至搅拌的(R)-2-(5-(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基甲基)噻吩-3-基)乙基(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(实施例264，步骤d)(0.1g)、5-异丙基噻吩-3-甲酸(0.028g)和三乙胺(0.092mL)的DMF(2mL)溶液中。1h后，将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层用水(×2)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。将所得胶状物溶解在甲酸(2mL)中。16h后，真空蒸发溶液。加入乙腈，且真空蒸发混合物(×2)。加入甲苯，且真空蒸发混合物。将混合物溶解在甲醇中，过滤，且经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有纯产物的馏分，且真空蒸发。加入乙腈(200mL)，且将溶液真空蒸发成胶状物。将该操作重复2次。加入乙醚，收集标题化合物，其为固体。收率为0.05g。m/z 657(M+H)+(多模式+)。1HNMR(400MHz，DMSO，90℃)δ11.29(s，1H)，7.49(s，1H)，7.41(s，1H)，7.16(s，1H)，6.96-6.88(m，2H)，6.76(d，J＝10.5Hz，1H)，4.94-4.86(m，1H)，4.47(s，2H)，3.71-3.62(m，2H)，3.57-3.48(m，2H)，3.48-3.40(m，2H)，3.31-2.91(m，11H)，2.11-1.95(m，2H)，1.80-1.63(m，2H)，1.28(d，J＝6.6Hz，6H)+5个可交换的质子没有观察。
实施例265
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-(戊-3-基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(戊-3-基)噻唑-4-基)甲酮
副标题化合物使用与实施例82步骤(b)中所述相似的方法来制备，其中使用2-(戊-3-基)噻唑-4-甲酸(0.12g)(实施例71，步骤d)。收率为0.18g。1HNMR(400MHz，DMSO，90℃)δ7.92(s，1H)，7.18(t，J＝7.6Hz，1H)，7.11-7.04(m，3H)，4.24(dd，J＝5.3，3.5Hz，1H)，3.72-3.57(m，8H)，3.41(s，2H)，2.71(t，J＝6.9Hz，2H)，2.41-2.24(m，4H)，1.82-1.66(m，4H)，1.59-1.47(m，2H)，0.86(t，J＝7.3Hz，6H)+3H由于水峰而模糊。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(2-(戊-3-基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例82步骤(c)中所述相似的方法来制备，其中使用(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(戊-3-基)噻唑-4-基)甲酮(0.18g)(实施例265，步骤a)。将粗醛溶解在DCM而不是甲醇中。收率为0.09g。m/z 680(M+H)+(多模式+)。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ11.36(s，1H)，7.98(s，1H)，7.44-7.32(m，4H)，6.93(d，J＝8.3Hz，1H)，6.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.94-4.86(m，1H)，4.34-4.24(m，2H)，3.75-2.88(m，17H)，2.13-1.96(m，2H)，1.79-1.59(m，6H)，0.83(t，J＝7.3Hz，6H)+5个可交换的质子没有观察。
实施例266
(R)-7-(2-(3-((4-(苯并呋喃-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)苯并呋喃-5-基(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
副标题化合物使用与实施例82步骤(b)中所述相似的方法来制备，其中使用苯并呋喃-5-甲酸(0.1g)。收率为0.16g。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ7.99(d，J＝2.1Hz，1H)，7.67(s，1H)，7.60(d，J＝7.7Hz，1H)，7.31(dd，J＝8.6，1.7Hz，1H)，7.16(t，J＝7.6Hz，1H)，7.10-7.02(m，3H)，6.97(t，J＝1.2Hz，1H)，4.24(t，J＝5.3Hz，1H)，3.68-3.58(m，4H)，3.52-3.34(m，6H)，2.70(t，J＝6.9Hz，2H)，2.38-2.27(m，4H)，1.81-1.68(m，2H)，1.55-1.42(m，2H)。
b)(R)-7-(2-(3-((4-(苯并呋喃-5-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例82步骤(c)中所述相似的方法来制备，其中使用苯并呋喃-5-基(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(0.15g)(实施例266，步骤a)。将粗醛溶解在DCM而不是甲醇中。收率为0.07g。m/z 643(M+H)+(多模式+)。1H NMR(300MHz，DMSO，90℃)δ11.38(s，1H)，8.02(d，J＝2.1Hz，1H)，7.71(s，1H)，7.63(d，J＝8.5Hz，1H)，7.47-7.31(m，5H)，6.99-6.90(m，2H)，6.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.95-4.86(m，1H)，4.33-4.25(m，2H)，3.72-2.94(m，16H)，2.14-1.98(m，2H)，1.77-1.53(m，2H)+5个可交换的质子没有观察。
实施例267
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(5-丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-丙基噻吩-3-基)甲酮
副标题化合物使用与实施例82步骤(b)中所述相似的方法来制备，其中使用5-丙基噻吩-3-甲酸(0.1g)。收率为0.15g。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ7.44(d，J＝1.3Hz，1H)，7.18(t，J＝7.4Hz，1H)，7.11-7.04(m，3H)，6.87(d，J＝1.3Hz，1H)，4.24(t，J＝5.1Hz，1H)，3.67-3.59(m，4H)，3.51-3.47(m，2H)，3.40(s，4H)，2.77(dd，J＝14.7，0.9Hz，2H)，2.71(t，J＝7.0Hz，2H)，2.40-2.25(m，4H)，1.74-1.59(m，4H)，1.55-1.45(m，2H)，0.94(t，J＝7.3Hz，3H)。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(5-丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例82步骤(c)中所述相似的方法来制备，其中使用(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-丙基噻吩-3-基)甲酮(0.15g)(实施例267，步骤a)。将粗醛溶解在DCM而不是甲醇中。收率为0.9g。m/z 651(M+H)+(多模式+)。1H NMR(300MHz，DMSO，90℃)δ11.38(s，1H)，7.51-7.32(m，5H)，6.96-6.87(m，2H)，6.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.94-4.87(m，1H)，4.35-4.25(m，2H)，3.63-2.93(m，16H)，2.76(t，J＝7.3Hz，2H)，2.14-1.98(m，2H)，1.72-1.56(m，4H)，0.93(t，J＝7.3Hz，3H)+5个可交换的质子没有观察。
实施例268
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(5-异丙基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-2-基)甲酮
副标题化合物使用与实施例82步骤(b)中所述相似的方法来制备，其中使用5-异丙基噻吩-2-甲酸(0.1g)。收率为0.18g。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ7.23-7.15(m，2H)，7.13-7.04(m，3H)，6.84(d，J＝3.6Hz，1H)，4.24(t，J＝4.7Hz，1H)，3.69-3.58(m，6H)，3.50(s，2H)，3.41(s，2H)，3.17(七重峰，J＝6.8Hz，1H)，2.71(t，J＝6.9Hz，2H)，2.39-2.30(m，4H)，1.75-1.67(m，2H)，1.56-1.47(m，2H)，1.29(d，J＝6.7Hz，6H)。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(3-((4-(5-异丙基噻吩-2-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例82步骤(c)中所述相似的方法来制备，其中使用(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-2-基)甲酮(0.18g)(实施例268，步骤a)。将粗醛溶解在DCM而不是甲醇中。收率为0.09g。m/z 651(M+H)+(多模式+)。1H NMR(300MHz，DMSO，90℃)δ11.37(s，1H)，7.45-7.33(m，4H)，7.24(d，J＝3.1Hz，1H)，6.93(d，J＝8.1Hz，1H)，6.85(d，J＝3.7Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.96-4.86(m，1H)，4.36-4.26(m，2H)，3.75-3.63(m，4H)，3.56-3.48(m，2H)，3.36-2.94(m，11H)，2.13-1.96(m，2H)，1.81-1.62(m，2H)，1.28(d，J＝6.9Hz，6H)+5个可交换的质子没有观察。
实施例269
(R)-7-(2-(2，3-二氟-4-(2-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)乙氧基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例82步骤(c)中所述相似的方法来制备，其中使用(9-(2-(2，3-二氟-4-(2-羟基乙基)苯氧基)乙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(0.22g)(实施例77，步骤e)。将粗醛溶解在DCM而不是甲醇中。收率为0.13g。m/z 718(M+H)+(多模式+)。1H NMR(300MHz，DMSO，90℃)δ11.36(s，1H)，7.98(d，J＝0.8Hz，1H)，7.15-7.00(m，2H)，6.93(d，J＝8.3Hz，1H)，6.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.93-4.86(m，1H)，4.46-4.38(m，2H)，3.74-2.94(m，19H)，2.15-1.97(m，2H)，1.87-1.69(m，2H)，1.35(d，J＝6.7Hz，6H)+5个可交换的质子没有观察。
实施例270
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(5-(溴甲基)-2-(三氟甲基)苯基)乙醇
将过氧苯甲酰(0.085g)加至2-(5-甲基-2-(三氟甲基)苯基)乙酸(1.12g)和N-溴琥珀酰亚胺(1.101g)的氯苯(18mL)悬浮液中，且将所得混合物在100℃和氮气下加热80分钟，然后冷却。所得混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤3次，用盐水洗涤1次，然后干燥(MgSO4)，过滤，且真空浓缩，得到黄色油状物。将油状物溶解在四氢呋喃(11mL)中，且历时2分钟用2M硼烷-二甲硫醚络合物的THF(5.1mL)溶液逐份处理。将所得混合物在室温搅拌过夜，然后在冰-水中冷却，且通过加入甲醇来淬灭。从冷却浴中取出冒泡混合物，在室温搅拌70分钟，然后真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱(用15％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化，得到粗产物，其为黄色油状物。收率为0.919g。
b)(9-(3-(2-羟基乙基)-4-(三氟甲基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
副标题化合物使用与实施例6步骤(b)中所述相似的方法来制备，其中使用2-(5-(溴甲基)-2-(三氟甲基)苯基)乙醇(0.38g)(实施例270步骤a)的乙腈溶液，历时30分钟将所述溶液滴加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮三氟乙酸盐(实施例22步骤b)中。经硅胶色谱(用5％三乙胺/乙酸乙酯洗脱)纯化。收率为0.32g。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ7.90(s，1H)，7.56(d，J＝8.2Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.29(d，J＝7.9Hz，1H)，4.44(t，J＝5.3Hz，1H)，3.71-3.56(m，6H)，3.50(s，2H)，3.31(七重峰，J＝6.9Hz，1H)，2.90(t，J＝6.9Hz，2H)，2.57-2.25(m，4H)，1.81-1.66(m，4H)，1.62-1.49(m，2H)，1.36(d，J＝6.9Hz，6H)。
c)2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-(三氟甲基)苯基)乙醛
副标题化合物使用与实施例16步骤c)中所述相似的方法来制备。其中使用(9-(3-(2-羟基乙基)-4-(三氟甲基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(0.32g)(实施例270，步骤b)。加入戴斯-马丁高碘剂后，将混合物搅拌90min。收率为0.38g。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例18步骤g)中所述相似的方法来制备，其中使用2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-(三氟甲基)苯基)乙醛(0.3g)(实施例270，步骤c)的甲醇(3mL)溶液。加入氰基硼氢化钠后，将混合物在室温搅拌3.75小时。将溶液浓缩至体积为～3mL，用THF稀释，且用盐水和饱和碳酸氢钠水溶液的混合物洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩。残余物与乙腈共蒸发2次，然后溶解在乙腈∶水(1∶1)中，过滤，且经制备性HPLC(Sunfire，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，真空浓缩，且与乙腈共蒸发3次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤分离所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到产物，其为白色固体。收率为0.115g。m/z 720(M+H)+(APCI+)。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ7.93(s，1H)，7.77(d，J＝8.2Hz，1H)，7.61-7.53(m，2H)，6.94(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，4.91(dd，J＝8.6，4.7Hz，1H)，4.27-4.08(m，2H)，3.76-3.59(m，6H)，3.48-2.85(m，11H)，2.03-1.88(m，2H)，1.78-1.63(m，2H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例271
(R)-7-(2-(3-((2，2-二甲基-4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)1-苄基-4-((2-甲基烯丙基氨基)甲基)哌啶-4-醇
将6-苄基-1-氧杂-6-氮杂螺[2.5]辛烷(2g)、2-甲基丙-2-烯-1-胺HCl(2g)和许尼希碱(Hunig’s Base)(3.44mL)在乙醇(30mL)中的混合物在70℃加热18小时。将混合物冷却至室温，且减压蒸发溶剂。将残余物在DCM和盐水之间分配，水层用新鲜DCM重新萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为2.70g。m/z 275(M+H)+(APCI+)。
b)9-苄基-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-甲酸叔丁酯
将浓硫酸(12ml)加至1-苄基-4-((2-甲基烯丙基氨基)甲基)哌啶-4-醇(实施例271，步骤a)(2.2g)中，且将混合物在室温静置2小时。反应混合物用冰/水(100mL)处理，接着用固体碳酸氢钠逐份处理直到混合物为碱性。加入乙腈(50mL)，接着加入BOC酸酐(1.925g)，且将反应混合物在室温搅拌18小时。反应混合物用乙酸乙酯(×2)萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用1％甲醇/二氯甲烷至1％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.8g。m/z 375(M+H)+(APCI+)。
c)2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-甲酸叔丁酯
9-苄基-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-甲酸叔丁酯(实施例271，步骤b)(0.8g)的乙醇(50mL)溶液和10％钯/碳(0.5g)的混合物用甲酸铵(0.8g)处理，且将反应混合物加热回流30分钟。将混合物冷却至室温，且通过硅藻土来过滤。蒸发溶剂，且残余物与乙腈(×2)共沸，得到副标题化合物。收率为0.55g。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ3.25(s，2H)，3.19(s，2H)，2.84-2.76(m，2H)，2.59-2.50(m，2H)，1.51-1.42(m，4H)，1.41(s，9H)，1.13(s，6H)。1个可交换的质子没有观察。
d)9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-甲酸叔丁酯
历时1小时将2-(3-(溴甲基)苯基)乙醇(0.416g)逐份加至2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-甲酸叔丁酯(实施例271，步骤c)(0.55g)和三乙胺(0.809mL)的乙腈(20mL)溶液中。将混合物在20℃搅拌2小时。减压蒸发溶剂，将残余物在饱和碳酸氢钠溶液和DCM之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用2％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)洗脱)纯化，得到副标题化合物。收率为0.78g。1HNMR(400MHz，DMSO，90℃)δ7.21-7.04(m，4H)，4.24(t，J＝5.5Hz，1H)，3.66-3.59(m，2H)，3.43(s，2H)，3.25(s，2H)，3.19(s，2H)，3.00(s，2H)，2.71(t，J＝7.0Hz，2H)，2.32-2.24(m，2H)，1.64-1.50(m，4H)，1.40(s，9H)，1.13(s，6H)。
e)2-(3-((2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醇
将三氟乙酸(5mL)加至9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-甲酸叔丁酯(实施例271，步骤d)(0.78g)的DCM(20mL)溶液中，且将反应混合物在20℃静置30分钟。加入甲苯(40mL)，减压蒸发溶剂，且残余物与乙腈(×2)共沸。将残余物溶解在水(30mL)中，用乙酸乙酯洗涤，水层通过加入固体碳酸钠来碱化，且在20℃搅拌30分钟。然后含水混合物用DCM(×6)萃取，合并的DCM层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.4g。m/z 319(M+H)+(APCI+)。
f)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮
副标题化合物使用与实施例22步骤(a)中所述相似的方法来制备，其中使用2-(3-((2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醇(0.2g)(实施例271，步骤e)和2-甲基噻唑-4-甲酸(0.09g)。将反应混合物搅拌18h，且用于色谱的洗脱溶剂为2％甲醇/二氯甲烷(含有1％三乙胺)。收率为0.16g。m/z 444.1(M+H)+(APCI+)。
g)(R)-7-(2-(3-((2，2-二甲基-4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例22步骤(d)中所述相似的方法来制备，其中使用(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(0.15g)(实施例271，步骤f)。加入氰基硼氢化钠后，将混合物搅拌3h，且加入2-甲基四氢呋喃而不是THF。收率为0.12g。m/z 652(M+H)+(多模式+)。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ11.27(s，1H)，7.93(s，1H)，7.43-7.32(m，4H)，6.93(d，J＝8.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.94-4.89(m，1H)，4.29(s，2H)，3.68(s，2H)，3.62(s，2H)，3.28-3.10(m，8H)，3.06-2.97(m，2H)，2.67(s，3H)，1.95-1.73(m，4H)，1.19(s，6H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例272
(R)-5-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)(5-乙基噻吩-3-基)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
副标题化合物使用与实施例271步骤(f)中所述相似的方法来制备，其中使用2-(3-((2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醇(0.2g)(实施例271，步骤e)和5-乙基噻吩-3-甲酸。收率为0.22g。m/z457.1(M+H)+(APCI+)。
b)(R)-5-(2-(3-((4-(5-乙基噻吩-3-基羰基)-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)-1-羟基乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例23中所述相似的方法来制备，其中使用(5-乙基噻吩-3-基)(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-2，2-二甲基-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(0.22g)(实施例272，步骤a)。在步骤a)中加入三乙酰氧基硼氢化钠后，将混合物搅拌3h。收率为0.085g。m/z 659(M+H)+(多模式+)。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.16(d，J＝10.0Hz，1H)，7.48(d，J＝1.5Hz，1H)，7.44-7.29(m，4H)，7.13(d，J＝8.2Hz，1H)，6.99(d，J＝8.2Hz，1H)，6.91(d，J＝1.0Hz，1H)，6.55(d，J＝10.0Hz，1H)，5.37-5.32(m，1H)，4.24(s，2H)，3.52-3.40(m，4H)，3.28(t，J＝8.3Hz，2H)，3.20-2.99(m，8H)，2.81(q，J＝7.4Hz，2H)，1.93-1.65(m，4H)，1.25(t，J＝7.4Hz，3H)，1.18(s，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例273
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
(R)-5-(2-氨基-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(0.15g)(WO 2004106333)的甲醇(2mL)溶液用乙酸(0.021mL)处理，且搅拌10分钟。然后加入2-(5-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)-2-(三氟甲基)苯基)乙醛(实施例270，步骤c)(0.190g)的甲醇(3mL)溶液，将所得混合物在室温搅拌10分钟，然后在冰-水中冷却，且用氰基硼氢化钠(0.038g)处理。移开冷却浴，且将混合物在室温搅拌2.75小时。将溶液浓缩至体积为～3mL，用THF(20mL)稀释，且用盐水(10mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(1mL)的混合物洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥，且真空浓缩。残余物与乙腈共蒸发2次，部分溶解在THF(10mL)中，用三乙胺三氢氟酸盐(0.12mL)处理，且在室温搅拌过夜。真空浓缩混合物，将残余物溶解在乙腈∶水(3∶2，10mL)中，过滤，且经制备性HPLC(Sunfire，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发3次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤收集所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.133g。m/z 714(M+H)+(APCI+)。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.17(d，J＝10.0Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.77(d，J＝8.2Hz，1H)，7.62-7.53(m，2H)，7.14(d，J＝8.2Hz，1H)，7.00(d，J＝8.2Hz，1H)，6.55(d，J＝10.0Hz，1H)，5.34(dd，J＝9.1，4.0Hz，1H)，4.29-4.10(m，2H)，3.76-3.59(m，6H)，3.49-2.87(m，11H)，2.05-1.87(m，2H)，1.80-1.62(m，2H)，1.34(d，J＝6.9Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例274
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(2-(戊-3-基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)2-(3-((4-(2-(戊-3-基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛
副标题化合物使用与实施例16步骤c)中所述相似的方法来制备，其中使用(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-(戊-3-基)噻唑-4-基)甲酮(0.16g)(实施例265，步骤a)。收率为0.24g。m/z470(M+H)+(APCI+)。
b)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(3-((4-(2-(戊-3-基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例273中所述相似的方法来制备，其中使用2-(3-((4-(2-(戊-3-基)噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)乙醛(实施例274，步骤a)。收率为0.097g。m/z 674(M+H)+(APCI+)。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.15(d，J＝10.0Hz，1H)，7.95(s，1H)，7.47-7.28(m，4H)，7.13(d，J＝8.2Hz，1H)，6.99(d，J＝7.9Hz，1H)，6.55(d，J＝9.7Hz，1H)，5.39-5.28(m，1H)，4.33-4.11(m，2H)，3.79-3.56(m，6H)，3.50-2.84(m，11H)，2.11-1.90(m，2H)，1.83-1.58(m，6H)，0.84(t，J＝7.3Hz，6H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例275
(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(1-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)3-(2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)苯甲酸
副标题化合物使用与实施例53步骤b)中所述相似的方法来制备，其中使用3-(2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)苯甲酸甲酯。将反应混合物在20℃搅拌18小时，然后在40℃搅拌10小时。将混合物在水和乙醚之间分配，且无需进行最后研磨。m/z 292(M-H)+(APCI+)。
b)1-(3-(羟基甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯
副标题化合物使用与实施例16步骤a)中所述相似的方法来制备，其中使用3-(2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)苯甲酸(2.68g)。在加入期间将反应混合物在冰浴中冷却，然后在20℃搅拌2小时。收率为2.5g。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.23-7.13(m，2H)，7.06(s，1H)，6.98(d，J＝7.4Hz，1H)，6.23(s，1H)，5.09(t，J＝5.6Hz，1H)，4.45(d，J＝5.6Hz，2H)，2.89(s，2H)，1.42(s，9H)，1.14(s，6H)。
c)(3-(2-氨基-2-甲基丙基)苯基)甲醇
将三氟乙酸(5mL)加至1-(3-(羟基甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(实施例275，步骤b)(0.7g)的DCM(20mL)溶液中，且将所得溶液在20℃静置30分钟。加入甲苯(40mL)，且减压蒸发溶剂。将残余物在DCM和1M氢氧化钠水溶液之间分配，且水层用DCM(×2)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为0.440g。m/z180(M+H)+(APCI+)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.23(t，J＝8.0Hz，1H)，7.19-7.12(m，2H)，7.04(d，J＝8.6Hz，1H)，4.47(s，2H)，2.58(s，2H)，0.99(s，6H)。3个可交换的质子没有观察。
d)(R)-8-(苄基氧基)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-(羟基甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮
将(R)-8-(苄基氧基)-5-(2-溴-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)喹啉-2(1H)-酮(0.518g)、(3-(2-氨基-2-甲基丙基)苯基)甲醇(0.19g)(实施例275，步骤c)、碘化钠(0.159g)和许尼希碱(0.555mL)在乙腈(3mL)中的混合物在氮气下加热回流2天。再加入(3-(2-氨基-2-甲基丙基)苯基)甲醇(0.19g)和许尼希碱(0.185mL)，且继续加热回流1天。将反应混合物冷却至室温，在乙酸乙酯和盐水之间分配，有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱(用3％甲醇和1％三乙胺/二氯甲烷洗脱)纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.44g。m/z 587(M+H)+(APCI+)。
e)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-(羟基甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
将(R)-8-(苄基氧基)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-(羟基甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮(实施例275，步骤d)(0.44g)和钯/碳(10％)(80mg)在乙醇(30mL)中的混合物在压力为5巴的氢气下剧烈搅拌3小时。滤出催化剂，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.37g。m/z 497(M+H)+(APCI+)。
f)碳酸叔丁酯·(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-(羟基甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-8-基酯
将(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-(羟基甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例275，步骤e)(0.37g)、BOC酸酐(0.163g)和三乙胺(0.208mL)的乙醇(20mL)溶液在室温静置18小时。减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为0.44g。m/z 597(M+H)+(APCI+)。
g)碳酸叔丁酯·(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-甲酰基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-8-基酯
将二氧化锰(0.6g)加至碳酸叔丁酯·(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-(羟基甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-8-基酯(实施例275，步骤f)(0.44g)的二氯甲烷(30mL)溶液中，且将混合物在20℃剧烈搅拌3小时。反应混合物通过硅藻土来过滤，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为0.42g。m/z 595(M+H)+(APCI+)。
h)(R)-3-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基)-2-甲基丙基)苯甲醛
碳酸叔丁酯·(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-甲酰基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-8-基酯(实施例275，步骤g)(0.42g)的甲醇(15mL)溶液用氨(35％水溶液)(2mL)处理。将反应混合物在20℃静置3小时。在氮气气流下除去溶剂，且将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。水层用乙酸乙酯萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压蒸发溶剂，得到副标题化合物。收率为0.34g。m/z 495(M+H)+(APCI+)。
i)(5-异丙基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮
副标题化合物使用与实施例22步骤a)和b)中所述相似的方法来制备，其中使用5-异丙基噻吩-3-甲酸。在步骤b)中，残余物不通过色谱纯化。粗产物与乙腈(×2)共沸。将残余物在DCM和1M氢氧化钠水溶液之间分配，水层用DCM(×3)萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且减压除去溶剂，得到副标题化合物。收率为0.4g。m/z 309(M+H)+(APCI+)。
j)(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
副标题化合物使用与实施例14步骤b)中所述相似的方法来制备，其中使用(R)-3-(2-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基)-2-甲基丙基)苯甲醛(0.32g)(实施例275，步骤h)和(5-异丙基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(0.21g)(实施例275，步骤i)。粗产物通过快速硅胶色谱(8％甲醇/二氯甲烷(含有1％880氨水))纯化。将纯的馏分蒸发至干，得到副标题化合物。收率为0.31g。m/z 787(M+H)+(APCI+)。
k)(R)-8-羟基-5-(1-羟基-2-(1-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
标题化合物使用与实施例23步骤b)中所述相似的方法来制备，其中使用(R)-5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(1-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(0.31g)(实施例275，步骤j)。收率为0.18g。m/z673(M+H)+(多模式+)。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ9.98(s，1H)，8.14(d，J＝10.0Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.44-7.40(m，2H)，7.36-7.30(m，2H)，7.20(d，J＝8.2Hz，1H)，7.01(d，J＝8.2Hz，1H)，6.89(s，1H)，6.58(d，J＝9.7Hz，1H)，5.37-5.31(m，1H)，4.26(s，2H)，3.68-3.63(m，2H)，3.55-3.51(m，2H)，3.21-2.98(m，11H)，2.01(s，2H)，1.69(s，2H)，1.31-1.24(m，12H)+5个可交换的质子没有观察。
实施例276
8-羟基-5-((R)-1-羟基-2-((R)-1-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)丙-2-基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)1-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)苯基)丙-2-酮
将(3-溴苄基氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷(16.72g)、乙酸异丙烯基酯(9.2mL)、三正丁基甲醇锡(24mL)、二乙酸钯(II)(0.625g)和三(邻甲苯基)膦(1.70g)在无水甲苯(65mL)中的混合物在100℃加热回流5小时，然后冷却过夜。混合物用乙酸乙酯(130mL)和4M氟化钾水溶液(80mL)稀释，且剧烈搅拌20分钟。加入硅藻土，然后悬浮液通过硅藻土来过滤，残余物用乙酸乙酯充分洗涤。合并的滤液和洗涤液用无水硫酸镁干燥，真空浓缩，且通过快速硅胶色谱(用异己烷、10％二氯甲烷/异己烷和20％乙醚/异己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为13.71g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.30(t，J＝7.6Hz，1H)，7.23(d，J＝7.7Hz，1H)，7.16(s，1H)，7.09(d，J＝7.4Hz，1H)，4.73(s，2H)，3.68(s，2H)，2.14(s，3H)，0.94(s，9H)，0.10(s，6H)。
b)(3-((R)-2-((R)-1-苯基乙基氨基)丙基)苯基)甲醇盐酸盐
1-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)苯基)丙-2-酮(实施例276，步骤a)(6.85g)的二氯甲烷(240mL)溶液用乙酸(1.27mL)、(R)-(+)-1-苯基乙基胺(2.83mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(7.09g)处理，且将所得悬浮液在室温搅拌过夜。混合物通过历时5分钟滴加饱和碳酸氢钠水溶液(120mL)来淬灭。将两相混合物剧烈搅拌1.75小时，然后分离。水相再用二氯甲烷萃取，干燥(MgSO4)合并的有机相，过滤，且浓缩，得到油状物。油状物通过快速硅胶色谱(用10％乙醇/异己烷洗脱)纯化，得到甲硅烷基化的醇，其为黄色油状物(7.21g)。将油状物溶解在HCl/甲醇溶液(1M，20mL)中，在室温保持25分钟，然后真空浓缩。所得胶状物用甲醇/乙醚研磨，得到结晶浆液，将所述结晶浆液搅拌30分钟。过滤除去固体，用乙醚充分洗涤，且从甲醇/乙醚中重结晶3次，得到副标题化合物，其为白色晶体。收率为1.9g。m/z 270(M+H)+(APCI+)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.84(宽单峰，1H)，9.21(宽单峰，1H)，7.69(d，J＝6.9Hz，2H)，7.53-7.40(m，3H)，7.23(t，J＝7.6Hz，1H)，7.16(d，J＝7.7Hz，1H)，6.98(s，1H)，6.88(d，J＝7.4Hz，1H)，5.16(t，J＝5.6Hz，1H)，4.69-4.55(m，1H)，4.43(d，J＝5.4Hz，2H)，3.42-3.30(m，1H)，3.04-2.91(m，1H)，2.61-2.47(m，1H)，1.63(d，J＝6.7Hz，3H)，1.10(d，J＝6.7Hz，3H)。
c)(R)-(3-(2-氨基丙基)苯基)甲醇
将(3-((R)-2-((R)-1-苯基乙基氨基)丙基)苯基)甲醇盐酸盐(实施例276，步骤b)(1.92g)、20％氢氧化钯/碳(0.757g)和甲酸铵(2.28g)在乙醇(30mL)中的混合物在75℃搅拌1.5小时，然后冷却。悬浮液通过硅藻土来过滤，残余物用乙醇充分洗涤。真空浓缩合并的滤液和洗涤液，得到浅黄色胶状物，其为所需产物和去羟基类似物的混合物。收率为1.54g。直接使用。
d)(R)-1-(3-(羟基甲基)苯基)丙-2-基氨基甲酸叔丁酯
历时20分钟将一缩二碳酸二叔丁酯(2.034g)的THF(5mL)溶液滴加至不纯的(R)-(3-(2-氨基丙基)苯基)甲醇(实施例276，步骤c)(1.54g)在THF(10mL)和水(10mL)中的溶液中。将所得混合物在室温搅拌过周末，然后加入三乙胺(3.90mL)。历时30分钟再滴加一缩二碳酸二叔丁酯(2.013g)的THF(5mL)溶液。将所得混合物在室温搅拌过夜，然后真空浓缩以除去THF。所得含油水相用乙酸乙酯萃取2次，干燥(MgSO4)合并的萃取物，过滤，且真空浓缩到快速硅胶上。残余物通过快速硅胶色谱(用35％乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为白色固体。收率为0.9g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29(t，J＝7.6Hz，1H)，7.25-7.17(m，2H)，7.11(d，J＝7.4Hz，1H)，4.68(s，2H)，4.37(宽单峰，1H)，3.91(宽单峰，1H)，2.85(dd，J＝12.7，5.0Hz，1H)，2.66(dd，J＝13.3，7.4Hz，1H)，1.42(s，9H)，1.09(d，J＝6.7Hz，3H)。1个可交换的质子没有观察。
e)8-(苄基氧基)-5-((R)-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-((R)-1-(3-(羟基甲基)苯基)丙-2-基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮
(R)-1-(3-(羟基甲基)苯基)丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(实施例276，步骤d)(0.78g)的二氯甲烷(20mL)溶液用三氟乙酸(5mL)处理，且在室温搅拌40分钟。加入甲苯，且真空浓缩溶液。将残余物在1M NaOH水溶液和DCM之间分配，且分离各相。水相用DCM再萃取2次，然后干燥(MgSO4)合并的有机萃取物，且真空浓缩，得到(R)-(3-(2-氨基丙基)苯基)甲醇，其为无色油状物，所述油状物当静置时缓慢结晶成白色固体(0.442g)。在氮气下将(R)-(3-(2-氨基丙基)苯基)甲醇(0.223g)、(R)-8-(苄基氧基)-5-(2-溴-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)喹啉-2(1H)-酮(0.72g)、碘化钠(0.219g)和许尼希碱(0.77mL)在乙腈(3mL)中的混合物加热回流过夜。再加入(R)-(3-(2-氨基丙基)苯基)甲醇(0.219g)、许尼希碱(0.51mL)和乙腈(2mL)，且将混合物加热回流过第二夜。冷却的反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤2次，用盐水洗涤1次，然后干燥(MgSO4)，且真空浓缩到快速硅胶上。所得粉末通过快速硅胶色谱(用5％三乙胺/乙酸乙酯洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为浅黄色泡沫状物。收率为0.525g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.37(宽单峰，1H)，8.46(d，J＝9.7Hz，1H)，7.69-7.56(m，5H)，7.39-7.22(m，4H)，7.17(d，J＝8.2Hz，1H)，7.12(d，J＝6.7Hz，1H)，6.82(d，J＝10.0Hz，1H)，5.37(d，J＝2.1Hz，2H)，5.26(dd，J＝7.4，5.6Hz，1H)，4.82(s，2H)，3.24(dd，J＝11.4，7.6Hz，1H)，3.05(q，J＝6.5Hz，1H)，2.93(dd，J＝11.4，5.5Hz，1H)，2.84(dd，J＝13.6，7.0Hz，1H)，2.74(dd，J＝13.2，6.8Hz，1H)，1.25(d，J＝6.2Hz，3H)，1.04(s，9H)，0.24(s，3H)，0.00(s，3H)。2个可交换的质子没有观察。
f)5-((R)-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-((R)-1-(3-(羟基甲基)苯基)丙-2-基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮
将8-(苄基氧基)-5-((R)-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-((R)-1-(3-(羟基甲基)苯基)丙-2-基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮(实施例276，步骤e)(0.52g)和10％钯/碳催化剂(0.102g)在乙醇(36mL)中的混合物在室温和压力为5巴的氢气下氢化1.5小时，然后在室温和压力为1巴的氢气下氢化过夜。混合物通过硅藻土来过滤，催化剂用乙醇充分洗涤，且真空浓缩合并的滤液和洗涤液，得到副标题化合物。收率为0.42g。物质直接用于下一步。m/z 483(M+H)+(APCI+)。
g)(R)-2-(8-(叔丁氧基羰基氧基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基((R)-1-(3-(羟基甲基)苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将5-((R)-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-((R)-1-(3-(羟基甲基)苯基)丙-2-基氨基)乙基)-8-羟基喹啉-2(1H)-酮(实施例276，步骤f)(0.42g)溶解在乙醇(25mL)中，用三乙胺(0.26mL)和一缩二碳酸二叔丁酯(0.201g)处理，且在室温搅拌1.5小时。再加入一缩二碳酸二叔丁酯(0.203g)和三乙胺(0.13mL)，且将混合物在室温搅拌过夜，然后将其真空浓缩，得到副标题化合物。收率为0.609g。物质直接用于下一步。m/z 683(M+H)+(APCI+)。
h)(R)-2-(8-(叔丁氧基羰基氧基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基((R)-1-(3-甲酰基苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将(R)-2-(8-(叔丁氧基羰基氧基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基((R)-1-(3-(羟基甲基)苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例276，步骤g)(0.609g)溶解在二氯甲烷(30mL)中，用二氧化锰(IV)(0.791g)处理，且将所得悬浮液在室温搅拌过周末。再加入二氧化锰(IV)(0.801g)，且将悬浮液再搅拌4小时。混合物通过硅藻土来过滤，残余物用DCM充分洗涤，且真空浓缩合并的滤液和洗涤液，得到副标题化合物。收率为0.521g。物质直接用于下一步。m/z 681(M+H)+(APCI+)。
i)(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基((R)-1-(3-甲酰基苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将(R)-2-(8-(叔丁氧基羰基氧基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基((R)-1-(3-甲酰基苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例276，步骤h)(0.521g)悬浮在甲醇(20mL)中，且用‘880’氨水(2.5mL)处理，得到悬浮液，将所述悬浮液在室温搅拌3小时。混合物通过用氮气气流吹扫来浓缩，将残余物在乙酸乙酯、水和盐水之间分配，且分离各相。水相用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，且真空浓缩，得到副标题化合物。收率为0.476g。物质直接用于下一步。m/z 581(M+H)+(APCI+)。
j)(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基((R)-1-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基((R)-1-(3-甲酰基苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例276，步骤i)(0.476g)用(5-异丙基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例275，步骤i)(0.296g)、N-甲基吡咯烷-2-酮(20mL)、乙酸(0.052mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.294g)处理，且将混合物在室温搅拌过夜。将溶液倒入饱和碳酸氢钠溶液和水的混合物中，且用乙醚萃取3次。合并的萃取物用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，且真空浓缩，然后通过快速硅胶色谱(用1∶5∶94NEt3∶MeOH∶DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物。收率为0.471g。m/z 874(M+H)+(APCI+)。
k)8-羟基-5-((R)-1-羟基-2-((R)-1-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)丙-2-基氨基)乙基)喹啉-2(1H)-酮二(三氟乙酸盐)
将(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(8-羟基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基((R)-1-(3-((4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例276，步骤j)(0.465g)的甲酸(25mL)溶液在室温搅拌4小时，然后用甲苯稀释，且真空浓缩。将残余物溶解在水和乙腈(11mL)的混合物中，过滤，且经制备性HPLC(Sunfire，梯度为5-50％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。真空浓缩含有产物的馏分，且与乙腈共蒸发3次，得到无色残余物。残余物用乙醚研磨，得到固体，过滤收集所述固体，用乙醚洗涤，且在室温真空干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.234g。m/z 659(M+H)+(APCI+)。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ8.20-8.13(m，1H)，7.48(d，J＝1.0Hz，1H)，7.46-7.31(m，4H)，7.20-7.13(m，1H)，7.00(d，J＝8.2Hz，1H)，6.90(s，1H)，6.56(d，J＝9.7Hz，1H)，5.37(t，J＝6.4Hz，1H)，4.29(s，2H)，3.70-3.62(m，2H)，3.62-3.50(m，3H)，3.49-3.36(m，2H)，3.30-2.98(m，8H)，2.81-2.71(m，1H)，2.12-1.93(m，2H)，1.81-1.60(m，2H)，1.28(d，J＝6.7Hz，6H)，1.20-1.13(m，3H)。6个可交换的质子没有观察。
实施例277
(R)-N-环己基-N-(2-(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基氨基)乙基)-3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)丙酰胺二(三氟乙酸盐)
a)3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)丙酸叔丁酯
将Triton-B(0.094mL)加至(9-(3-(2-羟基乙基)苄基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-甲基噻唑-4-基)甲酮(实施例6，步骤b)(1.72g)的甲苯(30mL)溶液中。真空浓缩混合物，且冷却至0℃。历时1分钟加入丙烯酸叔丁酯(0.671mL)，且将混合物在室温搅拌20小时。反应混合物用DCM(50mL)稀释，有机层用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物。物质直接用于下一步。
b)3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)丙酸
将3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)丙酸叔丁酯(实施例277，步骤a)溶解在DCM(10mL)中，且加入TFA(2mL)。将所得混合物搅拌2h，然后蒸发。残余物与甲苯共沸，且重新溶解在MeCN(10mL)中。将其加载至SCX柱(50g，Varian)(用MeCN预润湿)。柱用MeCN(100mL)洗涤，且用880氨水/MeCN(1∶4，100mL)洗脱。蒸发洗脱剂，得到副标题化合物。物质直接用于下一步。
c)N-环己基-N-(2，2-二甲氧基乙基)-3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)丙酰胺
将3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)丙酸(实施例277，步骤b)溶解在DMF(10mL)中，且加入N-(2，2-二甲氧基乙基)环己胺(WO 2008075025)(0.93g)、三乙胺(2.88mL)和T3P(3.95mL)。将反应混合物搅拌过夜，且在水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)之间分配。分离各层，且水层用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物通过快速硅胶柱色谱(用47.5∶47.5∶5乙酸乙酯∶异己烷∶三乙胺至95∶5乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.9g。1H NMR(400MHz，DMSO，90℃)δ7.85(s，1H)，7.26-7.05(m，4H)，4.46-4.37(m，1H)，3.68-3.55(m，11H)，3.43(s，2H)，3.33-3.22(m，8H)，2.77(t，J＝6.9Hz，2H)，2.68(s，3H)，2.56(t，J＝6.7Hz，2H)，2.38-2.32(m，4H)，1.78-1.65(m，4H)，1.63-1.42(m，6H)，1.33-1.19(m，2H)，1.15-1.00(m，2H)。
d)N-环己基-3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)-N-(2-氧代乙基)丙酰胺
将甲苯磺酸(1384mg)加至N-环己基-N-(2，2-二甲氧基乙基)-3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)丙酰胺(实施例277，步骤c)(683mg)的DCM(10mL)溶液中，且将所得混合物在环境温度搅拌4h。小心加入碳酸氢钠溶液(饱和的，10mL)，且对混合物进行搅拌直到不再冒泡(10min)。反应混合物用DCM(50mL)稀释，且分离出水层。有机层用饱和碳酸氢钠溶液(2×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物。m/z 611(M+H)+(APCI+)。
e)(R)-N-环己基-N-(2-(2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噻唑-7-基)乙基氨基)乙基)-3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)丙酰胺二(三氟乙酸盐)
将N-环己基-3-(3-((4-(2-甲基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)苯乙氧基)-N-(2-氧代乙基)丙酰胺(实施例277，步骤d)(0.122g)的甲醇(3mL)溶液加至(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮HCl(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.079g)和乙酸(0.011mL)的混合物中。将所得混合物搅拌5min，然后冷却至0℃。然后加入氰基硼氢化钠(0.019g)，将混合物温热至环境温度，且搅拌2h。蒸发溶剂，且残余物通过快速硅胶柱色谱(用95∶5∶0.5至89∶10∶1 DCM∶MeOH∶880氨水洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且通过HPLC(Sunfire，梯度为5-40％乙腈/0.2％TFA水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，蒸发，且用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.085g。m/z 821(M+H)+(多模式+)。1HNMR(400MHz，DMSO，90℃)δ11.26(s，1H)，7.90(s，1H)，7.41-7.28(m，4H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，4.89(dd，J＝8.7，4.1Hz，1H)，4.29(s，2H)，3.74-3.43(m，13H)，3.29-2.98(m，8H)，2.83(t，J＝6.7Hz，2H)，2.71-2.56(m，5H)，1.98-1.01(m，14H)。5个可交换的质子没有观察。
实施例278
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(4-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-2-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
a)叔丁基(2-(5-氯噻吩-2-基)乙氧基)二甲基甲硅烷
将N-氯琥珀酰亚胺(0.83g)逐份加至叔丁基二甲基(2-(噻吩-2-基)乙氧基)甲硅烷(1.5g)(实施例4步骤a)的氯仿(50mL)溶液中，且加热至回流且保持3天。黄色溶液用DCM(100mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。残余物经硅胶色谱(用异己烷洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为1g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.69(d，J＝3.5Hz，1H)，6.57-6.54(m，1H)，3.75(t，J＝6.5Hz，2H)，2.89(t，J＝6.4Hz，2H)，0.87(s，9H)，0.01(s，6H)。
b)5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氯噻吩-3-甲醛
在-78℃历时5min将叔丁基(2-(5-氯噻吩-2-基)乙氧基)二甲基甲硅烷(0.8g)(实施例278，步骤a)滴加至搅拌的丁基锂(浓度为2.5M的己烷溶液，1.7mL)和2，2，6，6-四甲基哌啶(0.73mL)的THF(25mL)溶液中。将所得混合物搅拌2小时，且加入DMF(0.67mL)。将混合物再搅拌1小时，且温热至RT。将反应混合物小心倒入HCl溶液(0.5M，200mL)中，且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机溶液用水(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且真空蒸发。所得油状物经硅胶色谱(用异己烷至5％乙醚/异己烷梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.8g。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.98(s，1H)，7.06-7.04(m，1H)，3.79(t，J＝6.0Hz，2H)，2.95-2.85(m，2H)，0.90(s，9H)，0.05(s，6H)。
c)5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-3-甲醛
将5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-氯噻吩-3-甲醛(0.8g)(实施例278，步骤b)在乙醇(50mL)和三乙胺(0.91mL)的混合物(含有10％钯/碳催化剂(0.28g))中的溶液在压力为4巴的氢气下剧烈搅拌18小时。混合物通过硅藻土来过滤，且滤垫用乙醇(50mL)洗涤。蒸发合并的滤液和洗涤液，且与甲苯(20mL)共沸，得到黄色油状物。将油状物溶解在DCM(100mL)中，加入二氧化锰(2.3g)，且将所得悬浮液回流过夜。混合物通过硅藻土来过滤，且滤垫用DCM(50mL)洗涤。真空蒸发合并的滤液和洗涤液，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为0.6g。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.80(s，1H)，7.93-7.90(m，1H)，3.80(t，J＝6.2Hz，2H)，2.99(t，J＝5.9Hz，2H)，0.88(s，9H)，0.01(s，6H)+1H由于溶剂峰而模糊。
d)(9-((5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-3-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-3-甲醛(0.6g)(实施例278，步骤c)加至(2-异丙基噻唑-4-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(0.94g)(实施例22，步骤b)在N-甲基吡咯烷-2-酮(5mL)和乙酸(0.13mL)的混合物中的溶液中，且搅拌30min。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.71g)，且将混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入水(100mL)中，使用饱和碳酸氢钠溶液将pH调整至8，且所得水溶液用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机溶液用水(3×100mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用77.5∶17.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺至47.5∶47.5∶5异己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为澄清油状物。收率为0.8g。564(M+H)+(APCI)。1HNMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.91(s，1H)，6.97(s，1H)，6.77(s，1H)，3.79(t，J＝6.3Hz，2H)，3.69-3.55(m，4H)，3.41-3.27(m，3H)，2.92(td，J＝6.3，0.8Hz，2H)，2.42-2.23(m，6H)，1.75-1.64(m，2H)，1.59-1.47(m，2H)，1.37(d，J＝6.9Hz，6H)，0.89(s，9H)，0(s，6H)。
e)(9-((5-(2-羟基乙基)噻吩-3-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将四丁基氟化铵(浓度为1M的四氢呋喃溶液，2.1mL)加至(9-((5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)噻吩-3-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例278，步骤d)(0.80g)的四氢呋喃(10mL)溶液中。2h后，真空蒸发溶液，且将残余物在饱和碳酸氢钠溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)之间分配。分离各层，且水相用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机溶液用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。残余物经硅胶色谱(用20∶1乙酸乙酯∶三乙胺洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发，得到副标题化合物，其为胶状物。收率为0.61g。450(M+H)+(APCI)。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，90℃)δ7.90(s，1H)，6.94(s，1H)，6.74(s，1H)，4.41(t，J＝5.1Hz，1H)，3.72-3.55(m，4H)，3.41-3.24(m，3H)，3.00(s，2H)，2.88(t，J＝6.7Hz，2H)，2.43-2.26(m，6H)，1.75-1.30(m，10H)。
f)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(2-(4-((4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)甲基)噻吩-2-基)乙基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮二(三氟乙酸盐)
(9-((5-(2-羟基乙基)噻吩-3-基)甲基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(0.35g)(实施例278，步骤e)的二氯甲烷(10mL)溶液用三氟乙酸(0.06mL)处理，接着用戴斯-马丁高碘剂(0.56g)处理，且将所得混合物在RT搅拌1小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)处理，且剧烈搅拌5分钟。混合物用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。合并的有机溶液用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，用乙酸(0.09mL)处理，且减压蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇(5mL)中，然后加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.15g)，且将混合物搅拌5min，然后在冰浴中冷却。然后加入氰基硼氢化钠(0.07g)，将混合物温热至RT，且搅拌过夜。真空蒸发溶剂。经硅胶色谱(用94.5∶5∶0.5至89∶10∶1DCM∶甲醇∶‘880’氨水梯度洗脱)纯化。合并含有产物的馏分，且真空蒸发。经制备性HPLC(SunfireTM，梯度为10-30％乙腈/0.2％TFA水溶液)来进一步纯化。合并含有产物的馏分，真空蒸发，与乙腈共沸，且残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.10g。m/z 658(M+H)+(多模式)。1H NMR(500MHz，D6-DMSO)δ11.68(s，1H)，10.42-10.01(m，2H)，9.06(s，1H)，8.86(s，1H)，8.04(s，1H)，7.59(s，1H)，7.03(s，1H)，6.92(d，J＝8.4Hz，1H)，6.79(d，J＝8.3Hz，1H)，6.52(s，1H)，4.94-4.86(m，1H)，4.42-4.23(m，2H)，3.82-3.48(m，6H)，3.34-2.91(m，11H)，2.14-2.02(m，2H)，1.83-1.59(m，2H)，1.33(d，J＝6.8Hz，6H)。
实施例279
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-3，3-二甲基壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)8-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2，2-二甲基辛酸乙酯
在0℃至5℃历时15分钟将正丁基锂(32.8mL)加至二异丙基胺(浓度为1M的甲苯溶液，11.64mL)的THF(60mL)溶液中，且将该混合物搅拌30分钟。将反应混合物冷却至-78℃，然后历时15分钟滴加异丁酸乙酯(10mL)。将混合物在-78℃搅拌1小时，然后滴加(6-溴己基氧基)-叔丁基二甲基甲硅烷(23mL)，且将反应混合物在-78℃再搅拌60分钟。移开冷却浴，将混合物在室温搅拌过夜，然后倒在饱和氯化铵水溶液(300mL)上，且用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。合并的有机层用水(250mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发，得到粗产物。经硅胶色谱(用0-40％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为浅琥珀色液体。收率为20g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.11(q，J＝7.1Hz，2H)；3.59(t，J＝6.6Hz，2H)；1.54-1.45(m，4H)；1.35-1.18(m，9H)；1.15(s，6H)；0.89(s，9H)；0.05-0.03(m，6H)。
b)8-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2，2-二甲基辛-1-醇
在氮气下将8-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2，2-二甲基辛酸乙酯(实施例279，步骤a)(20g)的无水乙醚(300mL)溶液在冰浴中冷却至0℃，然后滴加二异丁基氢化铝(浓度为1M的甲苯溶液，133mL)。将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后用饱和酒石酸钾钠溶液(罗谢尔盐(Rochelle’s salt)，400mL)淬灭，且搅拌过夜。混合物用乙酸乙酯(3×300mL)萃取，然后合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用0-20％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色液体。收率为10.11g。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ3.60(t，J＝6.6Hz，2H)；3.31(s，2H)；1.56-1.46(m，2H)；1.38-1.18(m，8H)；0.89(s，9H)；0.86(s，6H)；0.06-0.03(m，6H)+1个可交换的质子没有观察。
c)(E)-叔丁基(9-甲氧基-7，7-二甲基壬-8-烯基氧基)二甲基甲硅烷和(Z)-叔丁基(9-甲氧基-7，7-二甲基壬-8-烯基氧基)二甲基甲硅烷的混合物
在-70℃将草酰氯(5.9mL)加至二甲基亚砜(4.98mL)的无水二氯甲烷(60mL)溶液中，且将混合物搅拌1小时。滴加8-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2，2-二甲基辛-1-醇(实施例279，步骤b)(10.11g)的二氯甲烷(20mL)溶液，且将混合物搅拌1小时。然后加入三乙胺(19.4mL)，且继续搅拌1小时。移开冷却浴，且将混合物温热至室温，此时加入DCM(15mL)。滴加1N HCl以溶解存在于反应混合物中的盐，且分离各层。水层用DCM(2×250mL)萃取，然后合并的有机层用饱和碳酸钠水溶液(250mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且真空浓缩，得到橙色液体。残余物通过短的硅胶塞(使用乙醚作为洗脱剂)来过滤，得到8-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-2，2-二甲基-辛醛，其为黄色液体，所述液体无需进一步纯化即使用。
将叔丁醇钾(15.3g)和(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(48g)的无水THF(350mL)溶液冷却至0℃，且搅拌30分钟。将8-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-2，2-二甲基-辛醛(10.03g)溶解在无水THF(150mL)中，且加至反应混合物中，然后将所述反应混合物在0℃搅拌1小时。将混合物温热至室温，且搅拌30分钟，然后加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)，接着用乙醚(3×300mL)萃取。合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发，得到粗产物。
加入环己烷(300mL)，且将混合物搅拌5分钟。滗出溶剂，且重复该操作。蒸发环己烷层，得到其中存在一些白色固体的黄色液体。过滤除去固体，然后滤液经硅胶色谱(用0-40％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。进一步纯化如下进行：将物质(3.2g)溶解在丙酮(50mL)中，用碘化钠(3.05g)处理，接着用Merrifield树脂(6.4g)处理，且将混合物搅拌过周末。过滤树脂，且用丙酮(100mL)、DCM(50mL)和甲醇(50mL)洗涤。蒸发滤液，吸收到DCM(200mL)中，用水(2×60mL)洗涤，有机层用硫酸镁干燥，且减压蒸发，得到副标题产物，其为浅黄色液体，且为顺式/反式异构体的混合物。收率为2.6g。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ6.16(d，J＝12.9Hz，0.6H)；5.69(d，J＝7.0Hz，0.4H)；4.73(d，J＝12.9Hz，0.6H)；4.09(d，J＝7.0Hz，0.4H)；3.61-3.56(m，2H)；3.53-3.47(m，3H)；1.56-1.45(m，2H)；1.38-1.16(m，8H)；1.05(d，J＝10.1Hz，3H)；0.97(s，3H)；0.92-0.86(m，9H)；0.06-0.02(m，6H)。
d)(E)-9-甲氧基-7，7-二甲基壬-8-烯-1-醇和(Z)-9-甲氧基-7，7-二甲基壬-8-烯-1-醇的混合物
将(E)-叔丁基(9-甲氧基-7，7-二甲基壬-8-烯基氧基)二甲基甲硅烷(实施例279，步骤c)(2.57g)溶解在四氢呋喃(60mL)中，加入四丁基氟化铵(16.4mL)，且将反应混合物在室温搅拌4小时。反应混合物用水(50mL)淬灭，且用乙醚(3×100mL)萃取。有机层用硫酸镁干燥，过滤，且真空浓缩，得到副标题化合物，其为浅黄色液体，且为顺式/反式异构体的混合物，所述副标题化合物无需进一步纯化即使用。收率为1.2g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.16(d，J＝12.9Hz，0.5H)；5.70(d，J＝7.0Hz，0.5H)；4.74(d，J＝12.9Hz，0.5H)；4.11(d，J＝7.0Hz，0.5H)；3.68-3.61(m，2H)；3.52(s，1.5H)；3.49(s，1.5H)；1.62-1.51(m，2H)；1.40-1.21(m，8H)；1.07(s，3H)；0.98(s，3H)+1个可交换的质子没有观察。
e)甲磺酸7，7-二甲基-9-氧代壬基酯
将(E)-9-甲氧基-7，7-二甲基壬-8-烯-1-醇和(Z)-9-甲氧基-7，7-二甲基壬-8-烯-1-醇的混合物(实施例279，步骤d)(1.6g)溶解在二氯甲烷(15mL)中，且加入三乙胺(1.33mL)，然后在氩气下将混合物在冰浴中冷却至0℃。历时5分钟滴加甲磺酰氯(0.68mL)，且将反应混合物在0℃搅拌15分钟，然后在室温搅拌1小时。反应混合物用盐水(2×30mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且真空蒸发，得到粗产物。经硅胶色谱(用0-100％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为1.2g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ9.85-9.81(m，1H)；4.25-4.18(m，2H)；3.00(s，3H)；2.25(m，2H)；1.80-1.69(m，2H)；1.47-1.37(m，2H)，1.31(s，6H)；1.05-1.01(m，6H)。
f)9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-3，3-二甲基壬醛
(9-(7-羟基-6，6-二甲基庚基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(2-异丙基-噻唑-4-基)-(1-氧杂-4，9-二氮杂-螺[5.5]十一碳-4-基)-甲酮(0.262g)(如实施例102步骤c)中那样由三氟乙酸盐来制备)溶解在乙腈(4mL)中，且加入三乙胺(0.22mL)。然后将该溶液加至甲磺酸7，7-二甲基-9-氧代壬基酯(实施例279，步骤e)(0.291g)的乙腈(4mL)溶液中，且将所得混合物在80℃加热过夜。真空除去溶剂。经硅胶色谱(用0-10％甲醇/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.361g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ9.80-9.77(m，1H)；7.81(s，1H)；4.12-3.80(m，2H)；3.73(s，3H)；3.68-3.58(m，1H)；3.34-3.22(m，1H)；2.90-2.33(m，6H)；2.21(d，J＝3.17Hz，2H)；1.99-1.65(m，6H)；1.63-1.47(m，2H)；1.37(d，J＝6.9Hz，6H)；1.31-1.20(m，6H)；1.00(s，6H)。
g)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-3，3-二甲基壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将乙酸(0.035mL)加至搅拌的9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-3，3-二甲基壬醛(实施例279，步骤f)(195mg)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(161mg)的甲醇(10mL)溶液中，1分钟后，加入氰基硼氢化钠(51mg)，且将反应混合物在室温搅拌1.5h。浓缩混合物，然后在盐水和饱和碳酸氢钠溶液的混合物(10∶1，12mL)和THF(12mL)之间分配。分离各层，且有机相用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。所得物质经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.038g。m/z 688(M+H)+。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，80℃)：δ8.12(s，1.6H)；7.89(s，1H)；6.88(d，J＝8.3Hz，1H)；6.70(d，J＝8.3Hz，1H)；4.59(t，J＝6.2Hz，1H)；3.64(d，J＝9.5Hz，6H)；2.75(d，J＝6.7Hz，2H)；2.61-2.53(m，2H)；2.40-2.21(m，6H)；1.72-1.63(m，2H)；1.58-1.47(m，2H)；1.43-1.30(m，10H)；1.29-1.09(m，8H)；0.82(s，6H)+1个信号由于溶剂而模糊且4个可交换的质子没有观察。
实施例280
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(10-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)癸-2-基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)10-溴癸-2-醇
向9-溴-壬醇(1.7g)的DCM(100mL)溶液中加入二异丙基乙基胺(3.91mL)，然后加入DMSO(1.62mL)，且将混合物冷却至-14℃，然后逐份加入三氧化硫-吡啶络合物(3.64g)。将混合物搅拌30分钟，然后静置过夜。加入水，且分离各相。有机层用1M硫酸氢钠(×3)、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。分离有机相，且使用疏水釉料(hydrophobic frit)来干燥，然后蒸发，得到醛，其为黄色液体(2.32g)。
在0℃向醛(750mg)的无水乙醚(20mL)溶液中滴加甲基锂(浓度为1.6M的乙醚溶液，2.1mL)。45分钟后，将混合物在搅拌下倒在2M硫酸上，且分离各相。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用0-30％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到标题化合物，其为稻草色液体。收率为0.286g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.83-3.75(m，1H)；3.41(t，J＝6.9Hz，2H)；1.90-1.80(m，2H)；1.50-1.37(m，6H)；1.36-1.26(s，6H)；1.19(d，J＝6.2Hz，3H)+1个可交换的质子没有观察。
b)(9-(9-羟基癸基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(2-异丙基-噻唑-4-基)-(1-氧杂-4，9-二氮杂-螺[5.5]十一碳-4-基)-甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(500mg)加载至经甲醇润湿的SCX-2柱，用甲醇洗涤，然后使用2N氨/甲醇来洗脱，且蒸发，得到游离碱(276mg)。将该物质与10-溴癸-2-醇(实施例280，步骤a，280mg)和三乙胺(0.247mL)的乙腈(10mL)溶液混合，且在60℃加热18h。蒸发除去溶剂，且粗物质经硅胶色谱(用0-20％甲醇/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物。收率为0.298g。1HNMR(400MHz，D6-DMSO)：δ8.99(s，1H)；8.00(s，1H)；4.23(d，J＝4.7Hz，1H)；3.78-3.44(m，8H)；3.11-2.77(m，4H)；2.08-1.92(m，2H)；1.76-1.48(m，4H)；1.30(d，J＝6.9Hz，7H)；1.26-1.16(m，12H)；0.98(d，J＝6.1Hz，3H)。
c)10-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)癸-2-酮
在0℃和氮气下向(9-(9-羟基癸基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例280，步骤b)(287mg)的DCM(10mL)溶液中加入三氟乙酸(0.048mL)。将混合物搅拌5分钟，然后加入戴斯-马丁高碘剂(392mg)。将反应混合物在室温搅拌5小时，然后在0℃再加入一定量戴斯-马丁高碘剂(392mg)，然后在室温搅拌1.75h。加入饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和乙酸乙酯，且对混合物进行搅拌，然后分离各相。水层用乙酸乙酯(×2)萃取，且合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。加入乙酸(0.053mL)，然后有机层用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到标题化合物，其为黄色胶状物。收率为0.338g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.85(s，1H)；4.07-3.72(m，5H)；3.36-3.21(m，2H)；2.96-2.82(m，3H)；2.47-2.37(m，4H)；2.12(s，3H)；2.11-2.02(m，2H)；1.85-1.75(m，2H)；1.62-1.49(m，3H)；1.46-1.36(m，7H)；1.35-1.20(m，9H)。
d)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(10-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)癸-2-基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
在室温和氮气下将乙酸(0.053mL)加至10-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)癸-2-酮(实施例280，步骤c)(335mg)和(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(243mg)在无水甲醇(含有
分子筛)中的混合物中，且搅拌5分钟。将混合物冷却至0℃，且加入三乙酰氧基硼氢化钠(131mg)。对反应混合物进行搅拌，且温热至室温过夜。过滤混合物，且蒸发。经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为10-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.032g。m/z 674(M+H)+。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，80℃)：δ8.15(s，2H)；7.88(s，1H)；6.87(d，J＝8.3Hz，1H)；6.69(d，J＝8.3Hz，1H)；4.57-4.50(m，1H)；3.71-3.58(m，8H)；3.36-3.25(m，2H)；2.79-2.59(m，3H)；2.40-2.31(m，2H)；2.32-2.22(m，4H)；1.73-1.63(m，2H)；1.59-1.48(m，2H)；1.44-1.32(m，8H)；1.31-1.16(s，10H)；0.99-0.93(m，2H)+4个可交换的质子没有观察。
实施例281
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(3-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙基硫基)丁基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)4-(2-(1，3-二氧杂环戊烷-2-基)乙基硫基)丁-1-醇
在氩气下将4-巯基丁醇(4.936g)的无水乙腈溶液冷却至0℃，且逐份加入氢化钠(浓度为60％的矿物油溶液，2.044g)。将混合物在0℃搅拌1小时，然后加入2-(2-溴乙基)-1，3-二氧杂环戊烷(9.26g)，将所得灰色悬浮液温热至室温，且搅拌过夜。反应混合物通过加入饱和碳酸氢钠水溶液(150mL)来淬灭，然后用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。合并有机层，用盐水(150mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且干燥，得到粗产物。经硅胶色谱(用0-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为黄色油状物。收率为7.3g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.98-4.93(m，1H)；4.01-3.93(m，2H)；3.89-3.83(m，2H)；3.69-3.63(m，2H)；2.65-2.58(m，2H)；2.59-2.53(m，2H)；1.98-1.91(m，2H)；1.73-1.62(m，4H)+1个可交换的质子没有观察。
b)(9-(3-(4-羟基丁基硫基)丙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将4-(2-(1，3-二氧杂环戊烷-2-基)乙基硫基)丁-1-醇(实施例281，步骤a)(500mg)溶解在80％甲酸水溶液(6mL)中，且将反应混合物在室温搅拌过周末。混合物用水(10mL)稀释，用乙醚(3×10mL)萃取，然后有机层用盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到3-(4-羟基-丁基硫基)-丙醛，其为油状物。将其溶解在无水甲醇中，且加入(2-异丙基-噻唑-4-基)-(1-氧杂-4，9-二氮杂-螺[5.5]十一碳-4-基)-甲酮三氟乙酸盐(实施例22，步骤b)(606mg)和
分子筛。加入乙酸(0.2mL)，将混合物在氩气下搅拌5分钟，然后冷却至0℃，且加入乙酰氧基硼氢化钠(633mg)。移开冷却浴，且将反应混合物在室温搅拌过夜。过滤混合物，然后直接加载至SCX-2柱，且用甲醇洗涤，然后产物用2N氨/甲醇洗脱。经硅胶色谱(用10％甲醇/DCM洗脱)来进一步纯化，得到副标题化合物，其为浅绿色油状物。收率为0.37g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.85(s，1H)；4.02-3.87(m，2H)；3.80-3.73(m，3H)；3.69-3.63(m，3H)；3.39-3.23(m，5H)；2.86-2.74(m，2H)；2.67-2.59(m，2H)；2.58-2.50(m，5H)；1.96-1.81(m，4H)；1.74-1.63(m，4H)；1.41(d，J＝6.9Hz，6H)。
c)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(4-(3-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙基硫基)丁基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将草酰氯(0.068mL)溶解在无水DCM(2mL)中，且将溶液冷却至-78℃。滴加DMSO(0.12mL)的DCM(0.03mL)溶液，且对混合物进行搅拌。15分钟后，滴加(9-(3-(4-羟基丁基硫基)丙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例281，步骤b)(290mg)的DCM(1mL)溶液，且继续搅拌15分钟，然后滴加三乙胺(0.44mL)。移开冷却浴，且将反应混合物温热至室温。1小时后，将反应混合物倒在饱和氯化铵水溶液(3mL)上，且加入DCM(3mL)。分离各层，且水相用DCM(2×5mL)萃取。合并有机层，用盐水(5mL)洗涤，用硫酸钠干燥，且蒸发，得到粗醛。
将所述醛(195mg)与(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(170mg)一起在无水甲醇(8mL)中搅拌，且加入
分子筛和乙酸(0.07mL)。搅拌5分钟后，将反应混合物冷却至0℃，且加入三乙酰氧基硼氢化钠(200mg)。移开冷却浴，且将反应混合物在室温搅拌过周末。过滤混合物，且蒸发。经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.006g。m/z 664(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)：δ8.48(s，1.8H)；7.88(s，1H)；6.95(d，J＝8.3Hz，1H)；6.73(d，J＝8.3Hz，1H)；4.97-4.90(m，1H)；3.89-3.56(m，6H)；3.38-3.24(m，1H)；3.13-3.04(m，2H)；3.04-2.96(m，2H)；2.97-2.61(m，6H)；2.60-2.49(m，4H)；2.04-1.91(m，2H)；1.91-1.70(m，5H)；1.70-1.57(m，3H)；1.38(d，J＝6.9Hz，6H)+4个可交换的质子没有观察。
实施例282
4-羟基-7-((1R)-1-羟基-2-(4-(3-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)丙基亚磺酰基)丁基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
在氩气下将三氟乙酸(0.06mL)加至(9-(3-(4-羟基丁基硫基)丙基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例281，步骤b)(360mg)的无水DCM(14mL)溶液中。将溶液冷却至0℃，且搅拌5分钟，然后加入戴斯-马丁高碘剂(502mg)。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后通过加入饱和硫代硫酸钠(14mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(14mL)来淬灭。加入乙酸乙酯(30mL)，且将混合物搅拌5分钟，然后分离各相。水层用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将乙酸(0.053mL)加至合并的有机层中，然后所述合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到醛，其为油状物。将其与(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(311mg)一起溶解在无水甲醇(15mL)中，且加入
分子筛和乙酸(0.07mL)。搅拌5分钟后，将反应混合物冷却至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(200mg)，且在室温继续搅拌过夜。过滤混合物，且蒸发。经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.018g。m/z 680(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)：δ8.40(s，2H)；7.88(s，1H)；6.96(d，J＝8.3Hz，1H)；6.73(d，J＝8.3Hz，1H)；4.98-4.92(m，1H)；3.90-3.56(m，6H)；3.36-3.24(m，1H)；3.19-3.03(m，4H)；3.04-2.67(m，10H)；2.15-1.95(m，4H)；1.93-1.56(m，6H)；1.38(d，J＝6.9Hz，6H)+4个可交换的质子没有观察。
实施例283
4-羟基-7-((1R)-1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2-甲基壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)9-溴-2-甲基壬-1-醇
在0℃和氩气下向二异丙基胺(5.42mL)的无水THF(30mL)溶液中缓慢加入2.5M正丁基锂(15.5mL)，保持温度低于10℃。在0℃，将溶液搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。滴加丙酸乙酯(4.01mL)，且将溶液在-78℃搅拌1小时。加入1，7-二溴庚烷(6.63mL)，且在-78℃继续搅拌1小时，然后移开冷却浴，且将反应混合物在室温搅拌过夜。将饱和氯化铵水溶液(30mL)加至反应混合物中，接着加入乙酸乙酯(30mL)。分离各层，且水相用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，且蒸发。经硅胶色谱(用1-5％乙酸乙酯/石油醚(40-60℃)洗脱)纯化，得到9-溴-2-甲基壬酸乙酯，其无需进一步纯化即使用。
将该物质(0.84g)溶解在无水乙醚(27mL)中，且在氩气下冷却至0℃。滴加二异丁基氢化铝(浓度为1M的甲苯溶液，6.7mL)，且将反应混合物在0℃搅拌1小时15分钟。反应混合物通过加入饱和酒石酸钾钠水溶液来淬灭，且将所得混合物搅拌15分钟。加入乙酸乙酯(60mL)和水(20mL)，且分离各相。水层用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，然后合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用0至10％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.23g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.51(dd，J＝10.5，5.8Hz，1H)；3.46-3.38(m，3H)；1.90-1.80(m，2H)；1.66-1.55(m，2H)；1.47-1.22(m，9H)；0.92(d，J＝6.7Hz，3H)+1个可交换的质子没有观察。
b)(9-(9-羟基-8-甲基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(2-异丙基-噻唑-4-基)-(1-氧杂-4，9-二氮杂-螺[5.5]十一碳-4-基)-甲酮二(三氟乙酸盐)(实施例22，步骤b)(500mg)加载至经甲醇润湿的SCX-2柱，用甲醇洗涤，然后使用2N氨/甲醇来洗脱，且蒸发，得到游离碱(279mg)。将其与9-溴-2-甲基壬-1-醇(实施例283，步骤a)(220mg)一起溶解在乙腈(10mL)中，且加入三乙胺(0.223mL)。将反应混合物加热至60℃过夜，然后浓缩。经硅胶色谱(用0至10％甲醇/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为浅褐色固体。收率为0.38g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.87(s，1H)；4.06-3.90(m，2H)；3.83-3.71(s，4H)；3.52-3.37(m，4H)；3.05-2.85(m，4H)；2.48-2.32(m，2H)；2.15-2.05(m，2H)；1.97-1.84(m，2H)；1.66-1.50(m，4H)；1.48-1.39(m，6H)；1.38-1.21(m，8H)；0.91(d，J＝6.7Hz，3H)+1个可交换的质子没有观察。
c)(9-(9-溴-8-甲基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(9-(9-羟基-8-甲基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例283，步骤b)(100mg)、四溴化碳(143mg)和咪唑(30mg)溶解在DCM(5mL)中。将溶液冷却至0℃，且滴加三苯基膦(85mg)的DCM(1mL)溶液。将反应混合物在该温度搅拌1小时，然后在室温搅拌2小时。再加入一定量四溴化碳(150mg)，将混合物冷却至0℃，且滴加三苯基膦(114mg)的DCM(1mL)溶液。在室温搅拌1小时，然后加入水，且分离各相。蒸发有机相，且产物经硅胶色谱(用0-10％甲醇/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为橙色胶状物。收率为0.088g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.87(s，1H)；4.03-3.91(m，2H)；3.81-3.70(m，4H)；3.43-3.313(m，4H)；3.06-2.86(m，4H)；2.49-2.34(m，2H)；2.15-2.05(m，2H)；1.98-1.86(m，2H)；1.57-1.50(m，2H)；1.47-1.39(m，6H)；1.37-1.19(m，10H)；1.00(d，J＝6.6Hz，3H)。
d)4-羟基-7-((1R)-1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-2-甲基壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO2007027134，实施例1，步骤d)(263mg)溶解在甲醇(10mL)中，加入甲醇钠(54mg)，且将混合物搅拌25分钟。过滤收集固体，用甲醇洗涤，且风干，得到游离碱(150mg)。将一些该物质(61mg)溶解在DMF(3.5mL)中，且与(9-(9-溴-8-甲基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例283，步骤c)(71mg)和二异丙基乙基胺(0.023mL)混合。将反应混合物加热至50℃过夜，然后冷却，且在乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)之间分配。有机层用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。经制备性HPLC(PhenomenexGemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.002g。m/z 674(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)：δ8.51(s，1H)；7.87(s，1H)；6.92(d，J＝8.3Hz，1H)；6.70(d，J＝8.3Hz，1H)；3.85-3.55(s，6H)；2.92-2.80(m，2H)；2.76-2.34(m，8H)；1.97-1.82(m，2H)；1.77-1.44(m，5H)；1.37(d，J＝6.9Hz，6H)；1.36-1.17(m，9H)；1.17-1.04(m，1H)；0.92(dd，J＝6.6，3.2Hz，3H)+2个信号由于溶剂而模糊且4个可交换的质子没有观察。
实施例284
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(7-(4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)庚基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)(9-(7-羟基庚基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-3-基)甲酮
将7-溴-1-庚醇(380mg)的乙腈(3.9mL)溶液加至(5-异丙基噻吩-3-基)(1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)甲酮(实施例275，步骤i)(400mg)和三乙胺(0.361mL)的乙腈(8.6mL)溶液中。将所得混合物在60℃搅拌16小时。真空除去溶剂，将残余物吸收在DCM(25mL)中，用盐水(25mL)和水(20mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用0至10％甲醇/DCM洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为浅褐色固体。收率为0.305g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.26(s，1H)；6.84(s，1H)；3.74-3.67(m，4H)；3.63(t，J＝6.4Hz，2H)；3.57-3.48(m，2H)；3.35-3.10(m，2H)；2.99-2.70(m，3H)；2.28-1.98(m，4H)；1.92-1.74(m，2H)；1.67-1.47(m，4H)；1.41-1.34(m，5H)；1.34(d，J＝6.9Hz，6H)；1.28-1.23(m，1H)+1个可交换的质子没有观察。
b)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(7-(4-(5-异丙基噻吩-3-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)庚基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
将三氟乙酸(0.054mL)加至(9-(7-羟基庚基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(5-异丙基噻吩-3-基)甲酮(实施例284，步骤a)(295mg)的DCM(7.5mL)溶液中。将混合物搅拌5分钟，然后加入戴斯-马丁高碘剂(503mg)，且继续搅拌1小时50分钟。反应混合物通过加入饱和硫代硫酸钠溶液(4mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(4mL)来淬灭。加入乙酸乙酯(25mL)，且将混合物剧烈搅拌5分钟，然后分离各相。水层用乙酸乙酯(5mL)萃取。合并有机层，用盐水(5mL)洗涤，然后加入乙酸(0.080mL)，溶液用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发，得到醛，其为油状物(504mg)。将其溶解在无水甲醇(5mL)中，然后加入(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(202mg)，且将混合物搅拌5分钟。将反应混合物冷却至0℃，加入氰基硼氢化钠(66mg)，且在0℃继续搅拌2小时，然后在室温搅拌过夜。真空浓缩混合物，且在盐水和饱和碳酸氢钠溶液的混合物(10∶1，6mL)和THF(6mL)之间分配。分离各层，有机相用硫酸钠干燥，过滤，蒸发，且残余物与乙腈共沸。经制备性HPLC(Phenomenex Gemini，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.037g。m/z 631(M+H)+。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)：δ8.49(s，2H)；7.45(s，1H)；6.95(d，J＝8.3Hz，1H)；6.91(s，1H)；6.73(d，J＝8.3Hz，1H)；4.93(dd，J＝9.1，4.5Hz，1H)；3.79-3.47(m，6H)；3.20-3.04(m，3H)；3.01-2.94(m，3H)；2.92-2.70(m，4H)；2.08-1.97(m，2H)；1.75-1.56(m，6H)；1.43-1.33(m，6H)；1.30(d，J＝6.9Hz，6H)+1个信号由于溶剂而模糊且4个可交换的质子没有观察。
实施例285
(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-4，4-二甲基壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
a)2-(5-溴戊基氧基)四氢-2H-吡喃
向5-溴戊醇(10g)的DCM(150mL)溶液中加入对甲苯磺酸吡啶鎓(1.5g)，接着加入3，4-二氢-2H-吡喃(8.1mL)，且将反应混合物在室温和氮气下搅拌21小时。溶液用乙醚稀释，然后用稀盐水(1∶1盐水∶水，140mL)洗涤，然后有机层用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用0至50％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色液体。收率为14.14g。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ4.59-4.56(m，1H)；3.91-3.82(m，1H)；3.79-3.71(m，1H)；3.57-3.47(m，1H)；3.44-3.36(m，3H)；1.94-1.76(m，3H)；1.76-1.66(m，1H)；1.65-1.46(m，8H)。
b)2，2-二甲基-7-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)庚酸乙酯
二异丙基胺(1.78mL)的无水THF(10mL)溶液在0℃和氮气下用正丁基锂(浓度为2.5M的己烷溶液，5.09mL)逐滴处理，得到浅黄色溶液，将所述浅黄色溶液在0℃搅拌30分钟，然后冷却至-78℃，且用异丁酸乙酯(1.55mL)逐滴处理。将溶液在-78℃搅拌45分钟，然后滴加2-(5-溴戊基氧基)四氢-2H-吡喃(实施例285，步骤a)(3.20g)的无水THF(1mL)溶液。将反应混合物在-78℃搅拌10分钟，然后温热至室温过夜。将反应混合物冷却至0℃，然后用饱和氯化铵水溶液(3mL)处理，且用乙酸乙酯萃取。水相用乙酸乙酯(×2)萃取，合并的有机相用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用0-5％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色液体。收率为2.22g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.59-4.55(m，1H)；4.11(q，J＝7.1Hz，2H)；3.90-3.82(m，1H)；3.72(dt，J＝9.6，6.8Hz，1H)；3.53-3.45(m，1H)；3.37(dt，J＝9.6，6.6Hz，1H)；1.88-1.77(m，1H)；1.75-1.67(m，1H)；1.64-1.48(m，8H)；1.40-1.30(m，2H)；1.29-1.20(m，5H)；1.15(s，6H)。
c)2，2-二甲基-7-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)庚-1-醇
2，2-二甲基-7-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)庚酸乙酯(实施例285，步骤b)(2.22g)的无水乙醚(22mL)溶液在0℃和氮气下历时5分钟用二异丁基氢化铝(浓度为1M的甲苯溶液，17.1mL)逐滴处理。在0℃保持1小时后，反应混合物用酒石酸钾钠水溶液小心处理，用乙醚稀释，且将所得混合物剧烈搅拌1.5小时。分离各相，且水相用乙醚(×2)萃取。合并的有机相用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用0至50％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为1.83g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.58-4.55(m，1H)；3.91-3.83(m，1H)；3.77-3.69(m，1H)；3.53-3.46(m，1H)；3.39(dt，J＝9.6，6.6Hz，1H)；3.31(d，J＝4.1Hz，2H)；1.90-1.78(m，1H)；1.76-1.64(m，1H)；1.64-1.48(m，4H)；1.40-1.20(m，8H)；0.86(s，6H)+1个可交换的质子没有观察。
d)(E)-4，4-二甲基-9-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)壬-2-烯酸乙酯
草酰氯(0.78mL)的无水DCM(20mL)溶液在-78℃用DMSO(1.26mL)的DCM(0.3mL)溶液逐滴处理。15分钟后，滴加2，2-二甲基-7-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)庚-1-醇(实施例285，步骤c)(1.73g)的DCM(10mL)溶液，且继续搅拌15分钟，然后滴加三乙胺(4.93mL)。移开冷却浴，且将反应混合物温热至室温。1小时后，反应混合物用饱和氯化铵水溶液处理，且分离各层。水相用DCM(×2)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发，得到粗醛。将其吸收在DCM中，用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发，得到醛，其为无色油状物，所述油状物直接使用。
二乙基膦酰基乙酸乙酯(triethyl phosphonoacetate)(1.62mL)的乙腈(8mL)溶液用氯化锂(0.43g)处理，然后冷却至0℃，且滴加三乙胺(1.23mL)的乙腈(2.5mL)溶液。将反应混合物在0℃搅拌15分钟，然后加入2，2-二甲基-7-(四氢-吡喃-2-基氧基)-庚醛(1.65g)的乙腈(6mL)溶液。将所得混合物温热至室温，且搅拌3小时，然后用饱和氯化铵水溶液、乙醚和水处理。分离各层，水相用乙醚(×2)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发，得到粗产物。经硅胶色谱(用0至40％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.89g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.91(d，J＝15.9Hz，1H)；5.71(dd，J＝15.9，1.9Hz，1H)；4.59-4.55(m，1H)；4.19(q，J＝7.1Hz，2H)；3.90-3.82(m，1H)；3.76-3.68(m，1H)；3.53-3.46(m，1H)；3.40-3.33(m，1H)；1.89-1.77(m，1H)；1.76-1.66(m，1H)；1.64-1.48(m，6H)；1.39-1.19(m，9H)；1.05-1.03(m，6H)。
e)4，4-二甲基-9-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)壬酸乙酯
(E)-4，4-二甲基-9-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)壬-2-烯酸乙酯(实施例285，步骤d)(0.89g)的IMS(含有甲醇的工业酒精(industrail methylated spirits))(10mL)溶液在氮气下用钯/碳(药匙末梢(spatula tip))处理，然后烧瓶用氢气(×3)冲刷，然后在氢气气氛下搅拌过夜。再加入一份钯/碳，且再氢化24小时。催化剂通过用硅藻土过滤来除去，且蒸发滤液，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.86g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.59-4.56(m，1H)；4.12(q，J＝7.1Hz，2H)；3.90-3.83(m，1H)；3.75-3.68(m，1H)；3.53-3.46(m，1H)；3.41-3.34(m，1H)；2.26-2.19(m，2H)；1.88-1.79(m，2H)；1.76-1.66(m，2H)；1.66-1.43(m，6H)；1.40-1.14(m，9H)；0.84(s，6H)。
f)9-羟基-4，4-二甲基壬酸乙酯
向4，4-二甲基-9-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)壬酸乙酯(实施例285，步骤e)(0.86g)的甲醇(10mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(52mg)，且将反应混合物在室温搅拌2小时。混合物用乙酸乙酯和水稀释，且分离各相。水层用乙酸乙酯(×2)萃取，合并的有机相用10％枸橼酸、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发。经硅胶色谱(用0-50％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.44g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.12(q，J＝7.1Hz，2H)；3.67-3.61(t，J＝6.4Hz，2H)；2.28-2.20(m，2H)；1.61-1.50(m，4H)；1.49-1.37(m，1H)；1.38-1.22(m，7H)；1.21-1.12(m，2H)；0.85(s，6H)。
g)9-溴-4，4-二甲基壬酸乙酯
9-羟基-4，4-二甲基壬酸乙酯(实施例285，步骤f)(0.44g)的DCM(19mL)溶液在0℃用四溴化碳(0.76g)处理，接着用三苯基膦(0.60g)处理，且将反应混合物在室温搅拌过夜。再加入一定量四溴化碳(0.76g)和一定量三苯基膦(0.60g)，且继续搅拌3小时。蒸发除去溶剂，然后混合物用环己烷研磨，且过滤除去所得固体。固体用环己烷洗涤，将滤液浓缩至约15mL，且静置过夜。过滤除去从溶液中析出的固体，用环己烷洗涤，且蒸发滤液，得到副标题化合物，其为浅褐色油状物。收率为0.56g。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ4.12(q，J＝7.1Hz，2H)；3.41(t，J＝6.8Hz，2H)；2.28-2.20(m，2H)；1.93-1.80(m，2H)；1.59-1.49(m，2H)；1.46-1.34(m，2H)；1.32-1.21(m，5H)；1.22-1.13(m，2H)；0.85(s，6H)。
h)9-溴-4，4-二甲基壬-1-醇
9-溴-4，4-二甲基壬酸乙酯(实施例285，步骤g)(0.56g)的无水乙醚(19mL)溶液在0℃和氮气下用二异丁基氢化铝(浓度为1M的甲苯溶液，4.20mL)处理，且将反应混合物在0℃搅拌1小时15分钟。反应混合物用酒石酸钾钠水溶液小心处理，且搅拌1小时。分离各相，水层用乙醚(×2)萃取，然后合并的有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发，得到副标题化合物，其为无色油状物。收率为0.42g。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.62(t，J＝6.7Hz，2H)；3.41(t，J＝6.9Hz，2H)；1.91-1.82(m，2H)；1.55-1.45(m，2H)；1.46-1.35(m，2H)；1.30-1.15(m，6H)；0.85(s，6H)+1个可交换的质子没有观察。
i)(9-(9-羟基-6，6-二甲基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮
将(2-异丙基-噻唑-4-基)-(1-氧杂-4，9-二氮杂-螺[5.5]十一碳-4-基)-甲酮二(三氟乙酸盐)(实施例22，步骤b)(0.40g)加载至经甲醇润湿的SCX-2柱，用甲醇洗涤，然后使用2N氨/甲醇来洗脱，且蒸发，得到游离碱(227mg)。该物质用9-溴-4，4-二甲基壬-1-醇(实施例285，步骤h)(0.11g)的乙腈(8.8mL)溶液处理，接着用三乙胺(0.20mL)处理。将混合物在60℃加热21h，然后蒸发除去溶剂。经硅胶色谱(用75％乙酸乙酯/环己烷(含有5％三乙胺)至100％乙酸乙酯+5％三乙胺洗脱)纯化，得到副标题化合物，其为无色胶状物。收率为0.295g。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)：δ8.00(s，1H)；4.35-4.30(m，1H)；3.76-3.45(m，6H)；3.37-3.28(m，1H)；2.41-2.03(m，6H)；1.72-1.58(m，2H)；1.57-1.44(m，2H)；1.43-1.28(m，10H)；1.27-1.05(m，9H)；0.81(s，6H)+1个可交换的质子没有观察。
j)(R)-4-羟基-7-(1-羟基-2-(9-(4-(2-异丙基噻唑-4-基羰基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-9-基)-4，4-二甲基壬基氨基)乙基)苯并[d]噻唑-2(3H)-酮甲酸盐
(9-(9-羟基-6，6-二甲基壬基)-1-氧杂-4，9-二氮杂螺[5.5]十一碳-4-基)(2-异丙基噻唑-4-基)甲酮(实施例285，步骤i)(0.255g)的DCM(5.3mL)溶液在0℃和氮气下用三氟乙酸(0.04mL)处理，且搅拌5分钟，然后加入戴斯-马丁高碘剂(0.339g)。将溶液在室温搅拌1小时，然后再加入一定量戴斯-马丁高碘剂(0.113g)，且继续搅拌30分钟。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液和饱和碳酸氢钠水溶液(1∶1)处理，用DCM稀释，且搅拌10分钟。加入乙酸乙酯，且分离各相。水层用乙酸乙酯(×2)萃取。合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用硫酸镁干燥，然后加入乙酸(0.046mL)，且蒸发溶液，得到醛(0.362g)。将其悬浮在无水甲醇(9mL)中，用(R)-7-(2-氨基-1-羟基乙基)-4-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮盐酸盐(WO 2007027134，实施例1，步骤d)(0.210g)、
分子筛和乙酸(0.046mL)处理，且将混合物搅拌5分钟。将反应混合物冷却至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(113mg)，且在室温继续搅拌24小时。过滤混合物，然后真空浓缩。经硅胶色谱(用5、6、7、8、9、10和12％(10％氨水/甲醇溶液)/DCM洗脱)纯化，接着经制备性HPLC(Phenomenex Gemini
，梯度为5-40％乙腈/0.1％甲酸水溶液)纯化。合并含有产物的馏分，且冷冻干燥，得到标题化合物，其为白色固体。收率为0.024g。m/z 688(M+H)+。1H NMR(400MHz，D6-DMSO，80℃)：δ8.26-8.13(m，1H)；7.89(s，1H)；6.87(d，J＝8.3Hz，1H)；6.69(d，J＝8.3Hz，1H)；4.61-4.53(m，1H)；3.69-3.63(m，6H)；3.37-3.24(m，1H)；2.76-2.66(m，2H)；2.59-2.50(m，2H)；2.40-2.31(m，2H)；2.31-2.20(m，4H)；1.72-1.63(m，2H)；1.58-1.47(m，2H)；1.44-1.29(m，10H)；1.29-1.09(m，8H)；0.80(s，6H)+4个可交换的质子没有观察。
本发明化合物的药物活性可使用本领域已知的测定来测试，诸如：
针对由肾上腺素能β2介导的cAMP产生的测定
制备细胞
在225cm2烧瓶培养箱(37℃和5％CO2)中使H292细胞在RPMI培养基(含有10％(v/v)FBS(胎牛血清)和2mM L-谷氨酰胺)中生长。
实验方法
附着的H292细胞如下从组织培养烧瓶中取出：用AccutaseTM细胞剥离溶液处理15分钟。将烧瓶在加湿培养箱(37℃和5％CO2)中孵育15分钟。将剥离的细胞以0.1×106个细胞/mL重新悬浮在RPMI培养基(含有10％(v/v)FBS和2mM L-谷氨酰胺)中。将10000个细胞/100μL加至用组织培养基处理的96孔板的每个孔中，且将细胞在加湿培养箱(37℃和5％CO2)中孵育过夜。除去培养基，细胞用100μL测定缓冲液洗涤2次，且用50μL测定缓冲液(含有10mM HEPES(pH 7.4)和5mM葡萄糖的HBSS溶液)代替。将细胞在室温保持20分钟，然后加入25μL咯利普兰(rolipram)(浓度为1.2mM的在含有2.4％(v/v)二甲基亚砜的测定缓冲液中制备的溶液)。将细胞与咯利普兰一起孵育10分钟，然后加入测试化合物，且将细胞在室温孵育60分钟。咯利普兰在测定中的最终浓度为300μM，且媒介物的最终浓度为1％(v/v)二甲基亚砜。反应混合物如下终止：除去上清液，用100μL测定缓冲液洗涤1次，且用50μL溶胞缓冲液代替。将细胞单层在-80℃冷冻30分钟(或过夜)。
AlphaScreen
TM
cAMP检测
cAMP(环磷腺苷)在细胞溶胞物中的浓度使用AlphaScreenTM方法学来确定。将冷冻的细胞板在板振荡器上解冻20分钟，然后将10μL细胞溶胞物转移到96孔白色板中。将40μL与生物素化的cAMP一起预孵育的混合的AlphaScreenTM检测珠子加至每个孔中，且将板在室温避光孵育3小时。AlphaScreenTM信号使用EnVision分光光度计(Perkin-Elmer Inc.)以制造商推荐的设置来测量。cAMP浓度如下确定：参考在同一实验中使用标准cAMP浓度来确定的校正曲线。构建针对激动剂的浓度响应曲线，且将数据拟合成4参数逻辑方程以确定pEC50和内在活性。将内在活性表达为在每项实验中相对于就福莫特罗而确定的最大活性的分数。
毒蕈碱性受体3结合测定
化合物与M3受体结合的亲和力(pIC50)以闪烁迫近测定(scintillation proximity assay，SPA)方式通过[3H]N-甲基东莨菪碱(NMS)与CHO-K1(中国仓鼠卵巢)细胞膜的竞争结合来确定，所述细胞膜表达人毒蕈碱性乙酰胆碱M3受体(M3-ACh)。
SPA珠子用膜预涂覆，然后以2mg珠子/孔与本发明化合物的系列稀释液、[3H]NMS(0.1nM即四分之一Kd(实验确定的解离常数))和测定缓冲液(含有5mM MgCl2的20mM HEPES(pH 7.4))一起孵育。测定在最终体积为200μL且存在1％(v/v)二甲基亚砜(DMSO)的情况下进行。[3H]NMS的总结合在不存在竞争化合物的情况下确定，且[3H]NMS的非特异性结合在存在1μM阿托品的情况下确定。将板在室温孵育16小时，然后在Wallac MicrobetaTM上使用归一化3H方案来读取。确定pIC50，将所述pIC50定义为使特异性[3H]NMS结合减少50％的化合物摩尔浓度的负对数。
本发明化合物在上述测定中测试，且得到以下结果：
| 实施例编号 | β2pEC50(内在活性) | M3 pIC50 |
| 1 | 7.2(0.8) | 8.5 |
| 2 | 7.9(0.8) | 9.5 |
| 3 | 8.1(1.0) | 9 |
| 4 | 7.8(0.9) | 8.9 |
| 5 | 7.1(0.9) | 8.6 |
| 6 | 8.4(0.9) | 9.5 |
| 7 | 8.2(0.8) | 9.3 |
| 8 | 7.4(1.0) | 8.4 |
| 9 | 8.3(0.9) | 8.7 |
| 实施例编号 | β2pEC50 | β2内在活性 | M3 pIC50 |
| 10 | 6.5 | 0.9 | 8.3 |
| 11 | 8.8 | 0.8 | 10 |
| 12 | 8 | 1 | 9 |
| 13 | 7.4 | 0.8 | 10.1 |
| 14 | 8.3 | 0.9 | 8.2 |
| 15 | 8.6 | 0.9 | 8.9 |
| 16 | 7.8 | 0.9 | 8.1 |
| 17 | 7.3 | 0.5 | 7.3 |
| 18 | 7.2 | 1 | 8.6 |
| 19 | 8.5 | 0.9 | 8.8 |
| 20 | 6.7 | 0.8 | 7.5 |
| 21 | 6.7 | 0.5 | 9 |
| 22 | 8 | 0.9 | 9.9 |
| 23 | 7.8 | 0.9 | 9.6 |
| 24 | 8.3 | 1 | 7.6 |
| 25 | 7.8 | 0.8 | 9 |
| 26 | 7.9 | 0.8 | 9.2 |
| 27 | 8.9 | 1 | 8.6 |
| 28 | 8 | 1 | 8.6 |
| 29 | 8.8 | 1 | 8.4 |
| 30 | 8.6 | 0.9 | 7.8 |
| 31 | 8.3 | 0.9 | 7.2 |
| 32 | 8.5 | 1.1 | 7.4 |
| 33 | 8.2 | 1 | 7.9 |
| 34 | 8.5 | 1 | 7.7 |
| 35 | 7.9 | 1 | 7.6 |
| 36 | 8.2 | 1 | 9.3 |
| 37 | 8.5 | 0.9 | 8.5 |
| 38 | 7.7 | 0.8 | 8.6 |
| 39 | 7 | 0.9 | 9.5 |
| 40 | 7.9 | 1.1 | 9.4 |
| 41 | 8.2 | 1.1 | 6.9 |
| 42 | 8.1 | 1 | 9.2 |
| 43 | 8.3 | 0.8 | 7.4 |
| 44 | 8.6 | 1 | 8.5 |
| 45 | 8 | 0.8 | 8.3 |
| 46 | 7.1 | 1 | 8.2 |
| 47 | 7.8 | 0.9 | 9.3 |
| 48 | 8.3 | 0.9 | 9.1 |
| 49 | 8.1 | 0.9 | 7.4 |
| 50 | 8.1 | 0.9 | 7.4 |
| 51 | 8.5 | 0.9 | 7.8 |
| 52 | 8.3 | 0.9 | 8.1 |
| 53 | 8 | 1 | 7.9 |
| 54 | 8.2 | 0.9 | 6.7 |
| 55 | 8.2 | 1 | 7.2 |
| 56 | 8.1 | 1 | 8.6 |
| 57 | 8.2 | 1.1 | 9.1 |
| 58 | 8 | 0.9 | 8.2 |
| 59 | 7.8 | 1 | 8.1 |
| 60 | 8.3 | 1 | 8.4 |
| 61 | 7.2 | 0.9 | 8.3 |
| 62 | 6.6 | 0.9 | 6.6 |
| 63 | 8.3 | 1 | ＜6 |
| 64 | 7.3 | 0.9 | 9.7 |
| 65 | 7 | 0.9 | 9.2 |
| 66 | 7.8 | 0.9 | 9.1 |
| 67 | 7.8 | 0.9 | 8.5 |
| 68 | 8.2 | 0.8 | 7.6 |
| 69 | 7.8 | 0.9 | 7.7 |
| 70 | 8.1 | 0.8 | 8.5 |
| 71 | 7.7 | 0.8 | 8.3 |
| 72 | 8.1 | 0.8 | 8 |
| 73 | 8.1 | 0.9 | 8.1 |
| 74 | 7.9 | 0.9 | 7.7 |
| 75 | 7.6 | 0.8 | 8.7 |
| 76 | 7.5 | 0.9 | 8.7 |
| 77 | 7.1 | 1 | 8.6 |
| 78 | 7.8 | 0.9 | 8 |
| 79 | 8.2 | 0.9 | 6.9 |
| 80 | 8.2 | 0.8 | 8.3 |
| 81 | 8.1 | 0.7 | 8.2 |
| 82 | 8.4 | 0.9 | 9.4 |
| 83 | 7.9 | 0.8 | 9.3 |
| 84 | 8.3 | 0.9 | 9.1 |
| 85 | 8.1 | 0.8 | 7.3 |
| 86 | 8.6 | 0.8 | 9.8 |
| 87 | 8.5 | 0.9 | 9.3 |
| 88 | 7.9 | 1 | 8.7 |
| 89 | 8.8 | 1 | 7.5 |
| 90 | 6.7 | 0.9 | 7.1 |
| 91 | 8.9 | 0.7 | 8.7 |
| 92 | 6.1 | 0.9 | 6.9 |
| 93 | 8.6 | 0.8 | 8.6 |
| 94 | 5.9 | 0.7 | 7.9 |
| 95 | NV* | NV* | 8.8 |
| 96 | NV* | NV* | 9.6 |
| 97 | ＜5.5 | 1.5 | 8.2 |
| 98 | 5.7 | 0.4 | 8.9 |
| 99 | 8.1 | 0.8 | 8.8 |
| 100 | 8.3 | 0.9 | 8.8 |
| 101 | 6.8 | 1 | 9.5 |
| 102 | 6.7 | 0.9 | 9 |
| 103 | 6.6 | 1 | 9 |
| 104 | 7.1 | 0.9 | 8.5 |
| 105 | 7.8 | 0.8 | 9.9 |
| 106 | 7 | 0.8 | 6.7 |
| 107 | 7.4 | 0.9 | 8.2 |
| 108 | 6.9 | 0.9 | 8.4 |
| 109 | 8.1 | 0.9 | 9.7 |
| 110 | 7.2 | 0.8 | 7.7 |
| 111 | 7.5 | 0.8 | 9.1 |
| 112 | 6.9 | 0.9 | 6.3 |
| 113 | 7.7 | 0.8 | 7.7 |
| 114 | 7.2 | 0.9 | 6.5 |
| 115 | 8.2 | 0.8 | 8.1 |
| 118 | 8.2 | 1 | 7.7 |
| 124 | 8.4 | 0.9 | 7.9 |
| 130 | 7.9 | 1 | 7.1 |
| 141 | 8.2 | 0.9 | 7.6 |
| 149 | 8.1 | 0.9 | 7.6 |
| 173 | 8.6 | 0.8 | 8.1 |
| 178 | 8.3 | 0.8 | 7.5 |
| 190 | 7.9 | 0.9 | 8.7 |
| 198 | 7.9 | 0.8 | 8.5 |
| 201 | 7.5 | 0.9 | 8.2 |
| 202 | 7.7 | 0.9 | 8.1 |
| 209 | 7.6 | 0.9 | 8.7 |
| 210 | 7.8 | 0.8 | 8.1 |
| 213 | 7.9 | 0.8 | 9.1 |
| 217 | 7.4 | 0.9 | 9.2 |
| 218 | 7.6 | 0.9 | 9.4 |
| 219 | 7.3 | 0.8 | 9 |
| 220 | 7.6 | 0.8 | 9.2 |
| 221 | 7.5 | 0.9 | 8.9 |
| 259 | 6.7 | 0.9 | 8.3 |
| 264 | 7.7 | 1 | 8.1 |
| 265 | 7.9 | 1 | 9.1 |
| 266 | 8.1 | 0.7 | 9.5 |
| 267 | 8 | 0.9 | 8.8 |
| 268 | 8 | 1 | 8.8 |
| 269 | 7.5 | 1.1 | 8.2 |
| 270 | 6.6 | 0.7 | 7.1 |
| 271 | 8.2 | 1 | 当浓度为1μM时抑制30％ |
| 272 | 8 | 1 | 6.1 |
| 273 | 6.4 | 0.5 | 7.1 |
| 274 | 7.6 | 1.0 | 8.6 |
| 275 | 7.3 | 1 | 8.8 |
| 276 | 7.4 | 1 | 8.7 |
| 277 | 7.5 | 0.9 | 10 |
| 278 | 8.4 | 1.0 | 9.4 |
| 279 | 6.5 | 0.9 | 8.1 |
| 280 | 8.3 | 1.2 | 9.1 |
| 281 | 7.5 | 0.8 | 8.8 |
| 282 | 7.3 | 1 | 7.7 |
| 283 | 7.1 | 1.1 | 8.9 |
| 284 | 7.9 | 0.9 | 8.7 |
| 285 | 7.8 | 1 | 8.4 |
NV*＝当测试化合物高达最大浓度即3.2μM时仍无活性。
以下实验操作用于测量实施例116-263的化合物当浓度为1μM时对β2的作用百分数(％)。
由肾上腺素能β
2
介导的cAMP产生
制备细胞
在225cm2烧瓶培养箱(37℃和5％CO2)中使H292细胞在RPMI培养基(含有10％(v/v)FBS(胎牛血清)和2mM L-谷氨酰胺)中生长。
实验方法
化合物如下准备：首先稀释到DMSO中，得到1mM储备浓集物。接着以1∶10对储备浓集物进行稀释(10μl储备化合物+90μl DMSO)，得到浓度为0.1mM的化合物。
化合物加入板如下准备：进一步以1∶25稀释在含有4％二甲基亚砜的测定缓冲液(含有10mM HEPES(pH 7.4)和5mM葡萄糖的HBSS溶液)中。化合物在测定中的最终浓度为1μM。
附着的H292细胞如下从组织培养烧瓶中取出：用AccutaseTM细胞剥离溶液处理15分钟。将烧瓶在加湿培养箱(37℃和5％CO2)中孵育15分钟。将剥离的细胞以0.1×106个细胞/mL重新悬浮在RPMI培养基(含有10％(v/v)FBS和2mM L-谷氨酰胺)中。将10000个细胞/100μL加至用组织培养基处理的96孔板的每个孔中，且将细胞在加湿培养箱(37℃和5％CO2)中孵育过夜。除去培养基，细胞用100μL测定缓冲液洗涤2次，且用50μL测定缓冲液(含有10mM HEPES(pH 7.4)和5mM葡萄糖的HBSS溶液)代替。将细胞在室温保持20分钟，然后加入25μL咯利普兰(浓度为1.2mM的在测定缓冲液中制备的溶液)。将细胞与咯利普兰一起孵育10分钟，然后加入25μl测试化合物，且将细胞在室温孵育60分钟。咯利普兰在测定中的最终浓度为300μM，且媒介物的最终浓度为1％(v/v)二甲基亚砜。反应混合物如下终止：除去上清液，用100μL测定缓冲液洗涤1次，且用50μL溶胞缓冲液代替。将细胞单层在-80℃冷冻30分钟(或过夜)。
Alpha Screen
TM
cAMP检测
cAMP(环磷腺苷)在细胞溶胞物中的浓度使用AlphaScreenTM方法学来确定。将冷冻的细胞板在板振荡器上解冻20分钟，然后将10μL细胞溶胞物转移到96孔白色板中。将40μL混合的AlphaScreenTM检测珠子(含有等体积的供体珠子(与生物素化的cAMP一起避光预孵育30分钟)和受体珠子)加至每个孔中，且将板在室温避光孵育3小时。AlphaScreenTM信号使用EnVision分光光度计(Perkin-Elmer Inc.)以制造商推荐的设置来测量。所产生的cAMP浓度/孔参考在同一实验中确定的cAMP标准曲线来计算，且表达为相对于由1E-07M福莫特罗产生的最大响应的百分数。
以下实验操作用于确定实施例116-263的化合物当浓度为1μM时对M3的抑制百分数(％)。
毒蕈碱性受体3结合测定
化合物对M3受体的活性(对特异性结合的抑制百分数(％))以闪烁迫近测定(SPA)方式通过[3H]N-甲基东莨菪碱(NMS)与CHO-K1(中国仓鼠卵巢)细胞膜的竞争结合来确定，所述细胞膜表达人毒蕈碱性乙酰胆碱M3受体(M3-ACh)。
SPA珠子用膜预涂覆，然后以2mg珠子/孔与1μM本发明化合物、[3H]NMS(0.1nM即四分之一Kd(实验确定的解离常数))和测定缓冲液(含有5mM MgCl2的20mM HEPES(pH 7.4))一起孵育。测定在最终体积为200μL且存在1％(v/v)二甲基亚砜(DMSO)的情况下进行。[3H]NMS的总结合在不存在竞争化合物的情况下确定，且[3H]NMS的非特异性结合在存在1μM阿托品的情况下确定。将板在室温孵育16小时，然后在Wallac MicrobetaTM上使用归一化3H方案来读取。确定化合物当浓度为1μM时的活性，将所述活性定义为对特异性[3H]NMS结合的抑制百分数(％)。
| 137 | 13 | 112 |
| 138 | 27 | 92 |
| 139 | 34 | 101 |
| 140 | 76 | 109 |
| 141 | 91 | 105 |
| 142 | -3 | 100 |
| 143 | 2 | 108 |
| 144 | 35 | 101 |
| 145 | 7 | 53 |
| 146 | 41 | 96 |
| 147 | 66 | 102 |
| 148 | 4 | 104 |
| 149 | 92 | 113 |
| 150 | 91 | 100 |
| 151 | 71 | 98 |
| 152 | 13 | 110 |
| 153 | 67 | 98 |
| 154 | 28 | 102 |
| 155 | 4 | 101 |
| 156 | 3 | 106 |
| 157 | 13 | 102 |
| 158 | 72 | 95 |
| 159 | 3 | 90 |
| 160 | 5 | 91 |
| 161 | 42 | 87 |
| 162 | 8 | 91 |
| 163 | 25 | 95 |
| 164 | 35 | 99 |
| 165 | 11 | 89 |
| 166 | 69 | 95 |
| 167 | 8 | 100 |
| 168 | 29 | 95 |
| 169 | -2 | 92 |
| 170 | 42 | 102 |
| 171 | 11 | 86 |
| 172 | 19 | 98 |
| 173 | 99 | 93 |
| 174 | 41 | 89 |
| 175 | 3 | 94 |
| 176 | 16 | 87 |
| 177 | 1 | 78 |
| 178 | 89 | 94 |
| 179 | 66 | 95 |
| 180 | 51 | 92 |
| 181 | 10 | 86 |
| 182 | 16 | 88 |
| 183 | 97 | 91 |
| 184 | 96 | 89 |
| 185 | 95 | 81 |
| 186 | 95 | 86 |
| 187 | 84 | 92 |
| 188 | 96 | 93 |
| 189 | 96 | 93 |
| 190 | 99 | 77 |
| 191 | 94 | 82 |
| 192 | 96 | 88 |
| 193 | 99 | 91 |
| 194 | 85 | 92 |
| 195 | 88 | 86 |
| 196 | 95 | 89 |
| 197 | 97 | 78 |
| 198 | 99 | 82 |
| 199 | 91 | 91 |
| 200 | 70 | 92 |
| 201 | 98 | 105 |
| 202 | 99 | 98 |
| 203 | 94 | 99 |
| 204 | 97 | 101 |
| 205 | 91 | 85 |
| 206 | 95 | 95 |
| 207 | 94 | 101 |
| 208 | 88 | 98 |
| 209 | 99 | 84 |
| 210 | 95 | 92 |
| 211 | 68 | 91 |
| 212 | 88 | 93 |
| 213 | 99 | 87 |
| 214 | 91 | 82 |
| 215 | 94 | 89 |
| 216 | 90 | 88 |
| 217 | 100 | 103 |
| 218 | 100 | 95 |
| 219 | 99 | 92 |
| 220 | 100 | 109 |
| 221 | 99 | 93 |
| 222 | 91 | 87 |
| 223 | 56 | 87 |
| 224 | 70 | 89 |
| 225 | 60 | 74 |
| 226 | 53 | 76 |
| 227 | 48 | 80 |
| 228 | 22 | 67 |
| 229 | 67 | 83 |
| 230 | 31 | 70 |
| 231 | 91 | 53 |
| 232 | 56 | 83 |
| 233 | 51 | 82 |
| 234 | 80 | 78 |
| 235 | 29 | 97 |
| 236 | 30 | 73 |
| 237 | 46 | 62 |
| 238 | 57 | 73 |
| 239 | 90 | 76 |
| 240 | 34 | 92 |
| 241 | 11 | 85 |
| 242 | 83 | 43 |
| 243 | 78 | 84 |
| 244 | 48 | 60 |
| 245 | 51 | 76 |
| 246 | 38 | 72 |
| 247 | 60 | 75 |
| 248 | 44 | 70 |
| 249 | 31 | 76 |
| 250 | 91 | 77 |
| 251 | 51 | 68 |
| 252 | 10 | 88 |
| 253 | 35 | 73 |
| 254 | 92 | 71 |
| 255 | 32 | 66 |
| 256 | 38 | 76 |
| 257 | 36 | 56 |
| 258 | 96 | 55 |
| 259 | 99 | 68 |
| 260 | 93 | 56 |
| 261 | 90 | 70 |
| 262 | 82 | 69 |
| 263 | 37 | 74 |
附图说明
图1：二(1S)-(+)-10-樟脑磺酸盐变化形式A-实施例47B的X射线粉末衍射图。
图2：富马酸盐变化形式A-实施例47C的X射线粉末衍射图。
图3：富马酸盐变化形式B-实施例47D的X射线粉末衍射图。
Claims (13)
1.式I化合物或其可药用盐：
其中Ar表示β-肾上腺素受体结合基团；
L表示包含具有至多15个碳原子的直链或支链烃基链的连接基；
其中所述烃基链中的至多3个碳原子任选被至多4个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、-S(O)0-2R56、-NR57R58、-S(O)2NR59R60、-C(O)NR61R62、-C(O)OR63、-NR64S(O)2R65、-NR66C(O)R67、-NR68C(O)OR69、-NR70C(O)NR71R72、-OR73、C1-6烷基和C3-6环烷基，且其中C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；
其中所述烃基链中的至多5个碳原子可被独立选自以下的基团代替：O、NR45、S、S(O)、S(O)2、C(O)O、OC(O)、NR46C(O)、C(O)NR47、NR48S(O)2、S(O)2NR49、NR50C(O)NR51、NR52S(O)2NR53、OC(O)NR54和NR55C(O)O，条件是所述烃基链中的任意上述基团被至少2个碳原子隔开；和
其中所述烃基链中的至多6个碳原子可形成单环或二环脂族环的部分、单环或二环杂脂族环的部分、单环或二环芳族环的部分或单环或二环杂芳族环的部分，所述环具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，所述环包含至多10个环原子，且其中所述环任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、-S(O)0-2R56、-NR57R58、-S(O)2NR59R60、-C(O)NR61R62、-C(O)OR63、-NR64S(O)2R65、-NR66C(O)R67、-NR68C(O)OR69、-NR70C(O)NR71R72、-OR73、C1-6烷基和C3-6环烷基，且其中C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；和
所述烃基链可包含至多3个各自独立选择的上述环；
其中R56、R65和R69各自独立表示C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；和
R45、R46、R47、R48、R49、R50、R51、R52、R53、R54、R55、R57、R58、R59、R60、R61、R62、R63、R64、R66、R67、R68、R70、R71、R72和R73各自独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；或R57和R58、R59和R60、R61和R62或R71和R72中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成4至8元脂族杂环，其中所述杂环可包含至多3个独立选自N、O和S的杂原子，其中所述环可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；和
其中所述烃基链可额外包含至多3个碳-碳双键；
其中所述烃基链可额外包含至多3个碳-碳叁键；
L1和L2独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基；
L3和L4独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基和C1-6烷氧基；
另外，L1和/或L3可与连接基L中的烃基链中的碳原子相连形成具有至多6个环原子的脂族环，其中每个环可包含至多3个独立选自N、O和S的杂原子；
R1表示苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环或5至6元杂芳基环，所述环各自具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，其中所述环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21、OR22、C1-7烷基、C3-8环烷基(其中所述C1-7烷基和C3-8环烷基各自可任选被至多6个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21和OR22)、苯环、4至8元杂脂族环和5至6元杂芳基环，所述4至8元杂脂族环和5至6元杂芳基环各自具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，所述苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环或5至6元杂芳基环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、氰基、硝基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；或
R1表示稠合脂族环、稠合杂脂族环、稠合芳族环或稠合杂芳基环，所述环具有至多10个原子且其中至多4个独立选自N、O或S的杂原子，其中所述环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；或
R1还表示C1-6烷基链，其中一个或两个碳原子可被O、S或N代替；和
其中R1可被至多3个C1-3烷基链取代，且两个上述链可相连形成C3-8环烷基，其中所述C1-3烷基和C3-8环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21和OR22；和
其中所述C1-6烷基链还任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21、OR22、苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环和5至6元杂芳基环，所述环各自具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，且其中每个环任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、S(O)0-2R5、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、OR22、C1-7烷基、C3-7环烷基(其中所述C1-7烷基和C3-7环烷基各自可任选被至多6个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21和OR22)、苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环和5至6元杂芳基环，所述环各自具有至多4个独立选自N、O或S的杂原子，所述苯环、4至8元杂脂族环、3至8元脂族环或5至6元杂芳基环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、S(O)0-2R5、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中C1-6烷基和C3-6环烷基各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；或
所述C1-6烷基链可被稠合脂族环、稠合杂脂族环、稠合芳族环或稠合杂芳基环取代，所述环具有至多10个原子且其中至多4个独立选自N、O或S的杂原子，其中所述环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、氰基、硝基、SH、S(O)0-2R5、NR6R7、S(O)2NR8R9、C(O)NR10R11、C(O)OR12、NR13S(O)2R14、NR15C(O)R16、NR17C(O)OR18、NR19C(O)NR20R21、OR22、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被至多3个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；
R5、R14和R18独立表示C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6环烷基可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；和
R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R15、R16、R17、R19、R20、R21和R22各自独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基或C3-6环烷基可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；或R6和R7、R8和R9、R10和R11或R20和R21中的任意一对与它们所相连的氮原子一起可形成4至8元脂族杂环，其中所述杂环可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6环烷基和C1-6烷氧基，其中所述C1-6烷基、C1-6环烷基或C1-6烷氧基可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、C1-6烷氧基、NH2、NH(C1-6烷基)和N(C1-6烷基)2；
X表示O、S、S(O)o或CR25R26；
m＝0、1、2或3；
n＝1、2、3或4；条件是m+n大于或等于2；
o＝1或2；
W表示CR27R28CR29R30或CR31R32CR33R34CR35R36；
V和Z独立表示键、CR37R38或CR39R40CR41R42，条件是当X表示O、S或S(O)o时，m、V和Z使环中的所有杂原子被至少两个碳原子隔开(例如当V为键时，m不为0，且Z不为键)；
Y表示CO、CONR43、SO2或SO2NR44；
R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R37、R38、R39、R40、R41和R42各自独立表示氢、氟、C1-6烷基或C3-6环烷基；和当它们不表示氢或氟时，R25和R26与它们所相连的碳原子一起、R27和R28与它们所相连的碳原子一起、R29和R30与它们所相连的碳原子一起、R31和R32与它们所相连的碳原子一起、R33和R34与它们所相连的碳原子一起、R35和R36与它们所相连的碳原子一起、R37和R38与它们所相连的碳原子一起、R39和R40与它们所相连的碳原子一起或R41和R42与它们所相连的碳原子一起还可形成3至6元脂族环；和
R43和R44各自独立表示氢、C1-6烷基或C3-6环烷基。
2.权利要求1的式I化合物或其可药用盐，其中Ar选自以下任意一种：
其中
M1为S、C(O)、NH、CH2、CH2CH2、CH＝CH、CH2O或OCH2；
M2为S、C(O)、NH、CH2、CH2CH2、CH＝CH、CH2O或OCH2；
A3也可以是CH2OH、NHCHO、NHS(O)2NA15A16或NHSO2A17；
A15或A16独立为氢或C1-6烷基；和
A17为C1-6烷基。
3.权利要求1的式I化合物或其可药用盐，其中L表示包含具有至多10个碳原子的烃基链的连接基。
4.权利要求1的式I化合物或其可药用盐，其中W表示CR27R28CR29R30或CR31R32CR33R34CR35R36；
V和Z独立表示键、CR37R38或CR39R40CR41R42，条件是当X表示O、S或S(O)o时，m、V和Z使环中的所有杂原子被至少两个碳原子隔开；
m＝0、1、2或3；
o＝1或2；和
R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R37、R38、R39、R40、R41和R42各自独立表示氢、甲基或氟。
5.权利要求1的式I化合物或其可药用盐，其中Y表示CO、CONR43、SO2或SO2NR44；和R43和R44各自独立表示氢或甲基。
6.权利要求1的式I化合物或其可药用盐，其中R1表示C1-6烷基、C3-8环烷基、苯基、5至6元杂芳基环、具有至多10个原子且其中至多3个独立选自N、O或S的杂原子的稠合芳族环或具有至多10个原子且其中至多3个独立选自N、O或S的杂原子的稠合杂芳基环，其中所述环各自可任选被至多3个取代基取代，所述取代基如权利要求1中就R1所述。
7.制备权利要求1的式(I)化合物或其可药用盐的方法，所述方法包括：
(a)当L1表示氢时，在碱存在下使式(II)化合物或其盐与式(III)化合物或其盐反应，接着除去保护基，
式(II)化合物如下：
其中LG1表示离去基，且L、L2、L3、L4、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义，
式(III)化合物如下：
其中Ar如式(I)中定义，且P1为氢或保护基；或
(b)当L1表示氢时，在还原剂存在下使式(IV)化合物或其盐与式(III)化合物或其盐反应，
式(IV)化合物如下：
其中L、L2、L3、L4、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义；或
(c)在碱存在下使式(V)化合物或其盐与式(VI)化合物或其盐反应，接着除去保护基，
式(V)化合物如下：
其中L、L1、L2、L3、L4、R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义，且P3表示氢或活化基，
式(VI)化合物如下：
其中Ar如式(I)中定义，LG2表示离去基，且P1如式(III)中定义；或
在碱存在下使式(V)化合物或其盐与式(VII)化合物或其合适的盐反应，接着除去保护基，
式(VII)化合物如下：
其中Ar如式(I)中定义；或
在碱存在下使式(V)化合物与式(VIII)化合物或其合适的盐反应，接着对酮进行还原，然后除去保护基，
式(VIII)化合物如下：
其中Ar如式(I)中定义，且LG2表示离去基；或
(d)当L3和L4各自表示氢时，在还原剂存在下使式(IX)化合物或其合适的盐与式(X)化合物或其盐反应，接着除去保护基，
式(IX)化合物如下：
其中Ar、L、L1和L2如式(I)中定义，P1如式(III)中定义，且P3表示保护基，
式(X)化合物如下：
其中R1、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义；或
(e)当L3和L4中的一个或两个表示氢时，在碱存在下使式(XI)化合物或其盐与式(X)化合物或其盐反应，接着除去保护基，
式(XI)化合物如下：
其中Ar、L、L1和L2如式(I)中定义，P1如式(III)中定义，P3表示保护基，且LG3表示离去基；或
(f)当L1和L2各自表示氢时，使式(XII)化合物或其盐与还原剂反应，接着除去保护基，且与式(XIII)化合物或其盐反应，接着除去保护基，
式(XII)化合物如下：
其中Ar、L、L3、L4、m、n、V、W、X、Y和Z如式(I)中定义，P1如式(III)中定义，且P4为氮保护基，
式(XIII)化合物如下：
其中R1和Y如式(I)中定义，且LG4表示羟基或离去基；和
任选在(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)后进行一个或多个以下步骤：
将所得化合物转化成本发明另一种化合物；和
形成所述化合物的可药用盐。
8.一种药物组合物，其包含权利要求1的式(I)化合物或其可药用盐及可药用辅料、稀释剂或载体。
9.制备权利要求8的药物组合物的方法，所述方法包括对权利要求1的式(I)化合物与可药用辅料、稀释剂或载体进行混合。
10.权利要求1的式(I)化合物或其可药用盐，其用于治疗。
11.权利要求1的式(I)化合物在制备用于治疗呼吸系统疾病或病症的药物中的用途。
12.一种药物产品，其包含第一活性成分和第二活性成分的组合，所述第一活性成分为权利要求1的式(I)化合物或其可药用盐，且所述第二活性成分选自：
PDE4抑制剂；
趋化因子受体功能调节剂；
p38激酶功能抑制剂；
糖皮质激素；和
非甾类糖皮质激素受体拮抗剂。
13.治疗炎性疾病或病症或降低炎性疾病或病症风险的方法，所述方法包括向有此需要的患者给药治疗有效量的权利要求1的式(I)化合物或其可药用盐。
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