UNIVERSITE MOHAMMED V
Ecole normale supérieure de RABAT
Filière : Master enseignement chimie, valorisation
des ressources naturelle végétales et minérales
Compte rendu du TP :
Les Glucides
Elaboré le 08 Janvier 2025 par :
Oussama CHYOULI
Yassine ELKHERRAZI
Zakaria SBIRA
Sous la subordination de :
Année Universitaire : 2024-2025
Mme.ALAOUI
I. Identification des glucides par le biais de leurs réactions physico-
chimiques
1. Test de Molish :
Le test de Molisch est un test chimique général permettant de détecter la présence
de glucides dans une solution. Il repose sur la déshydratation des sucres par l'acide
sulfurique concentré, ce qui entraîne la formation de composés furfuriques ou
hydroxyméthylfurfuriques. Ces derniers réagissent avec le réactif de Molisch (une
solution d'α-naphtol dans de l'éthanol) pour donner une coloration violette
caractéristique à l'interface des deux liquides.
Ce test est qualitatif et sensible, permettant d’identifier les monosaccharides,
disaccharides et polysaccharides, bien que les sucres complexes puissent
nécessiter une hydrolyse préalable pour révéler leur présence.
α-naphtol
Tous les oses Anneau violet
HCl à chaud
• Le mode opératoire :
*Préparer des tubes à essai ,dans chaque tube mettez 2 ml respectivement de
(glucose,fructose,saccharose,eau distillée)
*Ajoutez à chaque tube 2 à 3 gouttes de réactif de Molish
*Agitez les trubes
*Coulez doucement le long de la paroi de chaque tube 2 ml de l’acide sulfurique
concentré
• Observation :
Après l'ajout du réactif de Molisch, une coloration violette est apparue dans les
tubes A, B, C et E, indiquant la présence de glucides dans ces solutions. En
revanche, l'absence de cette coloration dans le tube D révèle que cette solution ne
contient pas de glucides.
2. Réaction de Seliwanoff :
La réaction de Seliwanoff est un test chimique spécifique permettant de
différencier les oses en fonction de leur structure. Elle repose sur la déshydratation
des cétoses en milieu acide, suivie de leur condensation avec le réactif de Seliwanoff,
qui contient du résorcinol. En présence de cétoses, une coloration rouge apparaît
rapidement, tandis que les aldoses réagissent plus lentement et donnent une
coloration plus faible ou absente. Ce test est principalement utilisé pour distinguer
les cétoses, comme le fructose, des aldoses, comme le glucose.
Resorcinol
Les cétoses Coloration rouge
HCl à chaud
• Le mode opératoire :
*Préparer les tubes à essai
*Ajoutez à chaque tube 2 ml de réactif de selivanoff
*Ajoutez à chaque tube 1 ml d’HCl
*Chauffez les tubes pendant 5 min au bain de marie bouillant et laissez refroidir
• Observation :
Après avoir éliminé le tube D, qui ne contenait pas de sucre, nous avons soumis
les tubes A, B, C et E au test de Seliwanoff. Suite à l'ajout du réactif, une coloration
rouge est apparue dans les tubes B et E, indiquant la présence de cétoses, connues
pour réagir rapidement avec ce test. Cette réaction suggère que les composés
présents dans ces solutions appartiennent probablement à cette catégorie de sucres.
En revanche, aucune coloration rouge n'a été observée dans les tubes A et C, ce qui
laisse supposer l'absence de cétoses dans ces solutions. Il est donc probable qu'elles
contiennent des aldoses ou d'autres types de sucres ne réagissant pas
significativement avec le réactif de Seliwanoff.
3. Réaction de Bial :
La réaction de Bial est un test chimique spécifique permettant d'identifier la
présence de pentoses dans une solution. Elle repose sur la déshydratation des
pentoses en milieu acide, produisant du furfural, qui réagit ensuite avec l'orcinol en
présence de chlorure ferrique pour former un complexe coloré vert-bleu. Ce test est
utilisé pour distinguer les pentoses, comme le ribose et l'arabinose, des hexoses, qui
ne donnent pas cette réaction caractéristique.
Orcinol
Les pentoses Coloration verte
HCl à chaud
• Le mode opératoire :
*Préparer les tubes à essai
*Ajouter le réactif de Bial
*Ajouter les solutions
*Chauffer les tubes
• Observation :
Lors de notre expérience, nous avons soumis les tubes A, B, C et E au test de
Bial. Après l'ajout du réactif, seul le tube A a développé une coloration verte,
indiquant la présence de pentoses dans cette solution. Cette réaction
confirme que le composé présent dans le tube A appartient à cette catégorie
de sucres.
En revanche, aucune coloration verte n'a été observée dans les tubes B, C
et E, suggérant l'absence de pentoses dans ces solutions. Ces tubes
pourraient contenir d'autres types de sucres qui ne réagissent pas de manière
significative avec le réactif de Bial.
Ainsi, l'apparition de la coloration verte dans le tube A permet d'affirmer que
ce tube contient un pentose.
4. Conclusion :
Les tests réalisés ont permis d'identifier la nature des glucides présents dans
les différentes solutions. Le test de Molisch a confirmé la présence de glucides
dans les tubes A, B, C et E, tandis que le tube D n'en contenait pas. Le test de
Seliwanoff a révélé que les tubes B et E contenaient des cétoses,
contrairement aux tubes A et C, qui pourraient contenir des aldoses. Enfin, le
test de Bial a montré que seul le tube A contenait un pentose, tandis que les
autres solutions ne réagissaient pas avec ce réactif. Ces résultats ont ainsi
permis de différencier les types de sucres présents dans chaque tube.
II. Dosage des sucres réducteurs et sucres libres préparés à partir de la
pomme de terre par spectrophotométrie
1. Principe :
En milieu acide, les glucides sont hydrolysés en oses simples, qui se
transforment en furfuraux. Ces derniers réagissent avec des composés
phénoliques pour former des produits colorés absorbant à 450-500 nm. Les
sucres réducteurs sont quantifiés par une réaction d’oxydo-réduction avec
l’acide 3,5-dinitrosalicylique (DNS), où le glucose réduit le DNS en un composé
rouge-orangé mesuré à 546 nm.
2. Matériel et réactif :
-Bain -marie
- Spectrophotomètre UV-visible
- Tubes à essais
- Centrifugeuse
- Plaques chauffantes
-NaOH 2N
-150 g de tartrate double de Na et K
3. Préparation des sucres de la pomme de terre :
-Extraction : Broyage de 5 g de pomme de terre dans 25 ml d’eau distillée.
-Centrifugation : Récupération du surnageant (extrait brut des sucres solubles).
-Hydrolyse : Chauffage de 2 ml d’extrait brut avec 1 ml de H₂SO₄ 0,2N à 100°C
pendant 15 min (obtention de l’hydrolysat).
-Dosage : Quantification des sucres réducteurs par comparaison avec une gamme
étalon de glucose (4 mg/ml).
Gamme étalon Extrait brut Hydrolysat
Tubes 0 1 2 3 4 5 6 7 8
Glucose 0 0.1 0.2 0.4 0.6
Eau distillée 3 2.9 2.8 2.6 2.4 1 1 1 1
Réactif DNS 1 1 1 1 1 1
Incubation bain 5 min à 100 ℃
marie bouillant
Refroidissement 4 min à 4 ℃
Absorbance à 0.0863 0.6627 1.5867 2.4259 3.1418 0.8541 3.2223
540 nm
Concentration 0 0.13 0.26 0.53 0.8
du glucose
• Le mode opératoire :
L'équation de la
droite :
A=3.8882⋅C+0.2260
𝐴−0.2260
On utiliser les absorbances des échantillons : 𝐶= 3.8882
Concentrations obtenues :
• Extrait brut : C=0.162 mg/Ml
• Hydrolysat : C=0.771 mg/mL
Remarque :
Le problème de la courbe non droite pourrait être dû à des erreurs d'absorption liées à la
dilution incorrecte des échantillons ou à des interférences dans les mesures
d'absorbance. Cela affecte la précision de la droite d'étalonnage.
• Résultats :
L'hydrolyse augmente la concentration des sucres en brisant les liaisons des
sucres complexes en unités plus simples, rendant ces dernières détectables
par l'analyse. Ce processus révèle des sucres qui étaient initialement liés
sous une forme non mesurable, ce qui explique l’augmentation de
l’absorbance. La différence entre l’échantillon brut et l’hydrolysat confirme
l’efficacité de cette transformation.
4. Conclusion :
La méthode DNS a prouvé son efficacité et sa fiabilité pour mesurer la
concentration des sucres réducteurs dans divers échantillons. En exploitant
la réaction d'oxydo-réduction entre les sucres réducteurs et le réactif DNS,
puis en mesurant l'absorbance à 540 nm, nous avons obtenu des valeurs
précises de la concentration en sucres. L'élaboration d'une courbe de
calibration a permis de relier l'intensité de la couleur formée à la
concentration en sucres réducteurs. Cette technique est donc
particulièrement utile dans les analyses biochimiques pour évaluer la
quantité de sucres réducteurs dans des extraits, des hydrolysats ou d'autres
échantillons similaires.
