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DEPARTEMENT D’AGRONOMIE
BENCHOUAIA Yasmina
Pour l’obtention du diplôme de
MASTER EN AGRONOMIE
Spécialité: Biotechnologie agro-alimentaire.
Thème
Condition du contrôle de qualité du lait cru sur la recevabilité du lait cru au niveau
du GIPLAIT
–MOSTAGANEM-
Devat le jury
Je tiens à remercier tout d’abord à remercier Dieu le tout puissant et miséricordieux qui
m’a donné, la force et la patience d’accomplir ce Modeste travail.
A mes parents BENCHOUAIA Mohamed et AMAR-CHERIF Faiza, sans votre ADN,
tous ça aurait été impossible.
A tous mes amis avec qui je partage des moments de ma vie au fil du temps, je vous offre
cette magnifique dédicace d’amitié.
A tous mes ennemis, ceux qui m’aime pas, ceux qui parle derrière mon dos, aux
hypocrites.
Et évidement « POUR MOI ».
Remerciements
J’adresse mes plus sincères remerciements à mon encadreur Mr KEDDAM R. pour son
encadrement, ses conseils et son aide précieuse et les membres jury Mr BENMILOUD D. et Mr
BEKADA et sans oublier Mr ABBASSA Hammou.
En second lieu, je tiens à remercier tous les enseignants de département d’agronomie qui,
par leur enseignement, ont contribué à ma formation durant tous mon cursus universitaire.
Je remercie aussi tous les techniciens du laboratoire du site laiterie GIPLAIT
MOSTAGANEM, de m’avoir accueillie et pour leur aide et la confiance qu’ils m’ont accordée.
Merci
Sommair
Introduction générale.
1. Définition du lait............................................................................................................01
2. Conservation du lait historiquement..............................................................................01
3. Composition du lait.......................................................................................................03
3.1 L’eau........................................................................................................................05
3.2 Glucides...................................................................................................................05
3.3 Matière grasse..........................................................................................................05
3.4 Matières azotées totales...........................................................................................07
3.5 Minéraux.................................................................................................................08
3.6 Vitamines.................................................................................................................08
3.7 Enzymes..................................................................................................................08
4 Qualité organoleptique du lait........................................................................................09
4.1 Couleur....................................................................................................................09
4.2 Odeur......................................................................................................................10
4.3 Saveur.....................................................................................................................10
4.4 Viscosité.................................................................................................................10
5. Microbiologie du lait cru...............................................................................................10
5.1 Flore originelle........................................................................................................11
5.2 Flore de contamination...........................................................................................11
5.3 Contamination du lait cru au stade de la production.............................................12
6. Facteurs de variation de la qualité et de la production laitière......................................13
6.1 Facteurs liés à l’animal...........................................................................................13
6.2 Effet de la race.......................................................................................................14
6.3 Facteurs physiologiques.........................................................................................14
Sommair
6.3.1 Effet de l’âge au premier vêlage......................................................................14
6.3.2 Effet du numéro de lactation.............................................................................15
6.3.3effet du stade de lactation...................................................................................16
6.3.4effet de l’état de gestation.................................................................................16
6.4 Facteurs liés à l’environnement..............................................................................16
6.5 Effet de l’alimentation............................................................................................16
6.6 Effet de la saison....................................................................................................17
6.7 Effet du climat........................................................................................................17
7. Hygiène de l’étable..........................................................................................................18
7.1 Hygiène de la vache..................................................................................................18
7.2 Hygiène de la traite...................................................................................................18
7.3 Hygiène et salubrité dans l’industrie laitière..............................................................18
8. Traitement thermique du lait............................................................................................19
8.1 Lait cru......................................................................................................................19
8.2 Lait pasteurisé...........................................................................................................19
8.3 Lait UHT...................................................................................................................19
8.4 Lait stérilisé...............................................................................................................19
8.5 Lait micro-filtré..........................................................................................................19
Partie 02 : Etude Expérimentale:
1. L’objectif du travail.........................................................................................................20
2. Matériels, méthode et milieux de cultures.........................................................................20
2.1 Echantillonnage..........................................................................................................20
2.1.1 Lieu et saison de prélèvement..............................................................................20
2.1.2 Les prélèvements.................................................................................................21
2.1.3 Techniques de prélèvement..................................................................................21
3. Analyses physico-chimiques.............................................................................................21
3.1 Mesure de l’acidité......................................................................................................21
3.2 Mesure de la densité....................................................................................................22
3.3 Mesure de pH.............................................................................................................22
Sommair
3.4 Recherche d’antibiotique............................................................................................22
3.5 Matière grasse.............................................................................................................24
3.6 L’Extrait sec totale......................................................................................................24
4. Analyses microbiologiques................................................................................................25
4.1 Dénombrement des germes aérobies mésophiles totaux..............................................25
4.2 Dénombrement des coliformes..........................................................................25
4.2.1 Dénombrement des coliformes totaux.....................................................25
4.2.2 Dénombrement des coliformes fécaux.....................................................26
4.3 Dénombrement de Staphylococcus aureus..............................................................26
4.4 Dénombrement de Clostridium sulfito-réducteurs.....................................................26
4.5 Dénombrement streptococccus fécaux.....................................................................27
4.6 Dénombrement salmonelles...........................................................................28
Partie 03 : résultats et discussions ;
1. Résultats des analyses physico-chimiques....................................................................29
1.1 Interprétation des résultats physico-chimiques.........................................................29
1.2 Discussion des résultats physico-chimiques..............................................................30
2. Résultats des analyses microbiologiques.........................................................................30
2.1 Interprétation des résultats des analyses microbiologiques............................................32
2.2 Discussion des résultats des analyses microbiologiques.................................................32
Conclusion générale.
Références bibliographiques.
Annexes.
Liste des tableaux
Page
N° Titre
N Titre Page
°
.
Introduction
Le lait est considéré comme un aliment complet et équilibré du fait de sa richesse en
plusieurs éléments nutritifs (protéines, lipides, sels minéraux, lactoses et vitamines).
Le lait cru de bonne qualité ne doit contenir aucune trace de débris et de sédiments; ne
doit pas avoir de flaveur étrangère et de couleurs et d'odeurs anormales; ne doit contenir
qu’un faible nombre de bactéries; doit être exempt de produits chimiques (par exemple,
antibiotiques, détergents) et avoir une composition et une acidité normales. La qualité du lait
cru est le principal facteur qui détermine la qualité des produits laitiers. Les produits laitiers
de bonne qualité ne peuvent être produits qu'à partir de lait cru de bonne qualité.
En Algérie, le lait et des céréales sont les aliments stratégiques dans ce domaine, la
qualité alimentaire de ces denrées et jusqu’à présent mal pris en charge par les pouvoirs
publics.
L’Algérie est l’un des pays les plus grands consommateurs de lait en Afrique avec
une moyenne annuelle de 110 à 115 litres par habitant, créant ainsi une situation de
dépendance vis- à-vis de l’étranger en matière d’approvisionnement en poudre de lait
(KABIR Ahmed.2014). Pour cela, le Ministère de l’Agriculture et du Développement
Rural, considère le développement de la production laitière comme étant prioritaire .Le
problème du lait est en effet un problème national de par son importance économique,
sociale et politique [Chaulet, 1991].
Le lait est l'une des boissons naturelles les plus anciennes, il est connu sous le nom de
«sang blanc» de son importance pour le corps humain.
Le lait est un produit d’une grande valeur alimentaire de par sa richesse en lipides,
protéines, glucides et en éléments biologiques (enzymes, vitamines, minéraux). Outre ses
propriétés nutritives et diététiques. Ils jouent un rôle fondamental dans l’alimentation
humaine et animale.
Le lait constitue également, une matière première que la technologie alimentaire
transforme en aliments dérivés (fromage, yaourt, ... etc.), consommés en quantités
importantes. Il existe différents types de lait comme : le lait cru, lait pasteurisé, lait stérilisé, le
lait obtenu par UHT, le lait concentré. (AINOUCHE Yasmine &BOUSLAH Lynda.2015).
La teneur d’eau du lait est élevée (81 ả 87 ℅), c’est pour cela que ce dernier est facile à
périssable, c’est pour cela qu’il doit être le conservé dans des conditions très stricts. La
présente recherche vise à étudier:
1- La composition physico-chimique du lait cru livré à l’unité GIPLAIT.
2- Etude de la flore microbienne pathogène du lait cru.
3- parties analyses des résultats.
C’est dans ce cadre que le présent travail intitulé : contrôle de qualité biochimique et
microbiologique du lait cru est réalisé au niveau de l’unité GIPLAIT de MOSTAGANEM.
Le présent travail est devisé en 03 parties :
1/ Partie bibliographique se rapportant à :
- L’histoire de conservation du lait.
- La définition du lait.
- Sa composition.
- Qualité organoleptique du lait.
- La microbiologie du lait cru.
Ainsi que les facteurs de variation de la qualité et de la production laitière liés à l’animal,
la race, stade physiologique, l’environnement, l’alimentation, la saison et le climat).
- L’hygiène (l’étable, la vache, la traite, personnel et matériels).
-L’hygiène et salubrité dans l’industrie laitière.
-Traitement thermique du lait (lait cru, lait pasteurisé, lait UHT, lait stérilisé, lait micro-filtré).
2/ Partie expérimentale qui comporte :
- L’objectif du travail.
- Matériels, méthodes et milieux de cultures.
- Méthodes d’analyses physico-chimiques.
- Méthodes d’analyses microbiologiques.
3/ Résultat et discussion.
Conclusion.
Partie 01 :
Etude Bibliographique.
Partie
1. Définition du lait :
Le lait a été défini en 1908, au cours du Congrès International de la Répression des
Fraudes à Genève comme étant : « Le produit intégral de la traite totale et ininterrompue
d’une femelle laitière bien portante, bien nourrie et non surmenée. Le lait doit être recueilli
proprement et ne doit pas contenir de colostrum» (ALAIS ; 1975).
Le Codex Alimentarius en 1999, le définit comme étant la sécrétion mammaire
normale d’animaux de traite obtenue à partir d’une ou plusieurs traites, sans rien y ajouter ou
en soustraire, destiné à la consommation comme lait liquide ou à un traitement ultérieur.
2. Histoire de la conservation du lait :
Aliment universel par excellence, d’une grande richesse nutritionnelle, le lait a fait
l’objet, au fil des siècles, de découvertes fondamentales pour améliorer sa conservation,
permettre son transport et garantir sa qualité. le XIXe et la première moitié du XXe siècle,
marqués par le développement progressif d’une industrie laitière. Sous l’objet « Permettre la
consommation de lait ailleurs qu’à proximité de la ferme ». Au XIXe siècle, le lait commence
à dévoiler ses secrets Dès la fin du XVIIIe siècle, la chimie moderne se développe et la
composition du lait se précise progressivement. À la fin du XIXe siècle, les savants estiment
ainsi qu’il est essentiellement constitué d’eau (près de 90 %) et d’une quinzaine de substances
appelées « matières sèches ou solides », parmi lesquelles sont identifiés le lactose et la
caséine. Mais la liste est encore loin de l’exhaustivité : il faudra attendre les progrès de la
recherche scientifique du XXe siècle pour connaître l’incroyable composition du lait ! Le
grand souci du moment, c’est la conservation : alors que la population urbaine ne cesse
d’augmenter depuis les débuts de la révolution industrielle, comment approvisionner les villes
en lait sain ? On a essayé d’installer élevage laitiers à la périphérie immédiate des métropoles
ou même dans leur centre, mais le lait reste insuffisant et sa qualité laissée à désirer. On a
testé alors plusieurs solutions de conservation, en procédant par exemple à une déshydratation
partielle du lait : c’est la naissance du lait concentré et du lait en poudre. Toutefois, ces
produits ont beau être pratiques. Ils ne peuvent pas remplacer la commercialisation du lait à
l’état cru.
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Partie
3. Composition du lait :
Le lait contient des nutriments essentiels et est une source importante d'énergie
alimentaire, de protéines de haute qualité et de matières grasses. Le lait peut apporter une
contribution significative aux besoins nutritionnels recommandés en calcium, magnésium,
sélénium, riboflavine, vitamine B12 et acide pantothénique. Le lait et les produits laitiers sont
des aliments nutritifs et leur consommation permet de diversifier les régimes à base de
plantes. Le lait d’origine animal peut jouer un rôle important dans l'alimentation des enfants
dans les populations ne bénéficiant que d’un très faible apport en lipides et ayant un accès
limité aux autres aliments d'origine animale. (FAO ; 2017). Le lait contient également des
anticorps, des hormones et peut parfois contenir des résidus d’antibiotiques (Vilain, 2010). Le
lait de vache est un lait caséineux. Les données varient en fonction d’une multiplicité de
facteurs : race animale, alimentation et état de santé de l’animal, période de lactation, ainsi
qu’au cours de la traite. Il reste que la composition exacte d’un échantillon de lait ne peut
s’obtenir que par analyse (Roudaut et Lefrancq, 2005).
3
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Partie
Tableau 03: Bactéries pathogènes dans le lait (Frank et Hassan., 2002; Vignola, 2002).
Catégorie Espèces
Psychrotrophes : Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas
fragi, Pseudomonas putida, Acinetobacter spp, Moraxella
spp, Psychrobacter spp, Flavobacterium maloloris,
Shewanella putrefaciens, Alcaligenes faecalis
Bactéries Coliformes : Escherichia spp, Enterobacter aerogenes,
d’altération Klebsiella pneumoniae, Proteus spp, Serratia marcescens,
4 Citrobacter spp.
Bactéries sporulantes : Bacillus cereus, Bacillus subtilis,
Clostridium tyrobutyricum
Bactéries lactiques : Lactobacillus casei, Lactococcus lactis,
Propionibacterium, Enterococcus faecalis Micrococcus spp.
3.1 Eau :
L’eau est un élément quantitativement plus important, elle représente environ 9/10 (81
ả 87 ℅) du lait.
3.2 Glucide :
Les glucides représentent 4,6% à 5,1% du poids du lait (Vierling, 2008).Ils représentent
près de 1/3 de la valeur énergétique du lait entier, mais ceci est insuffisant pour faire de lui un
aliment équilibré. Il est à noter que le lait est riche en protéines, contient des glucides (Fredot,
2009).Le lactose est le glucide, ou l’hydrate de carbone, constitue l’élément le plus important
du lait puisqu’il représente environ 40% des solides totaux, la proportion des autres glucides
étant toujours très faible (Amiot et al, 2002), il représente dans le lait de vache une teneur qui
varie entre 32-47g/l, (Vierling, 1999).
3.3 Matière grasse :
Les matières grasses sont présentes dans le lait sous forme d’une émulsion de globules
gras. La teneur en matières grasses du lait est appelée taux butyreux (TB). Elles représentent
près de la moitié de sa valeur énergétique, par ailleurs, elles participent aux caractéristiques
gustatives (souhaités ou non) et aux propriétés rhéologiques des produits laitiers (Brulé et al.,
2008).
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Partie
Les matières grasses du lait sont majoritairement présentes sous forme de globules gras
de diamètre compris entre 0,2 et 15μm et qui sont entourées d’une membrane communément
appelée « la membrane du globule gras du lait ». Cette enveloppe protectrice est un
assemblage complexe de protéines, de phospholipides, de glycoprotéines, de lipides neutres,
d’enzymes et d’autres composés mineurs, elle agit comme un émulsifiant naturel permettant
la dispersion de la matière grasse dans le plasma du lait, de ce fait elle contribue au maintien
de l’émulsion (Jeantet et al., 2007).
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Partie
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Partie
3.5 Minéraux :
La fraction minérale est considérée mineure dans la composition du lait. En revanche, elle
est importante tant d’un point de vue structural que nutritionnel et technologique. Le lait et ses
dérivés constituent le principal apport de calcium et de phosphore dans la ration alimentaire.
Les principaux minéraux sont le calcium, le magnésium, le sodium et le potassium pour les
cations phosphate, chlorure et citrate pour les anions (Jeantet al., 2007).
3.6 Vitamines :
Les vitamines sont des substances biologiquement indispensables à la vie puisqu’elles
participent comme cofacteurs dans les réactions enzymatiques et dans les échanges à l’échelle
des membranes cellulaires. L’organisme humain n’est pas capable de les synthétiser.Deux
types de vitamines sont présents dans le lait, en l’occurrence, les vitamines hydrosolubles
(vitamine du groupe B et vitamine C) ; et les vitamines liposolubles (A, D, E et K) (Jeantet et
al., 2008).
3.7 Enzymes :
Les enzymes sont définis comme des substances organiques de nature protidique,
produites par des cellules ou des organismes vivants. Agissant comme catalyseurs dans les
réactions biochimiques. Environ 60 enzymes principales ont été répertoriées dans le lait dont
20 sont des constituants originaux, une grande partie se retrouve dans la membrane des
globules gras mais le lait contient de nombreuses cellules (leucocytes, bactéries) qui élaborent
des enzymes. (Tableau 5) (Vignola, 2002).
8
Partie
Tableau 05 : Caractéristiques des principaux enzymes du lait (Vignola, 2002).
4.1 Couleur :
Le lait est de couleur blanc mat, qui est due en grande partie à la matière grasse, aux
pigments de carotène (la vache transforme le β-carotène en vitamine A qui passe directement
dans le lait) (Fredot, 2005).
Dans le lait les lipides se trouvent sous forme de globules gras et les protéines sous forme
de micelles de caséine (Reumont, 2009).
9
Partie
4.2 Odeur :
L’odeur est caractéristique le lait du fait de la matière grasse qu’il contient fixe des
odeurs animales. Elles sont liées à l’ambiance de la traite, à l’alimentation (les fourrages à
base d’ensilage favorisent la flore butyrique, le lait prend alors une flore odeur), à la
conservation (l’acidification du lait à l’aide de l’acide lactique lui donne une odeur aigrelette)
(Vierling, 2003).
4.3 Saveur :
La saveur du lait normal frais est agréable. Celle du lait acidifié est fraiche et un peu
piquante. Les laits chauffés (pasteurisés, bouillis ou stérilisés) ont un goût légèrement
différent de celui du lait cru. Les laits de rétention et de mammites ont une saveur salée plus
ou moins accentuée. Peut transmettre au lait des saveurs anormales en particulier un goût
amer. La saveur amère peut aussi apparaitre dans le lait par suite de la pullulation de certains
germes d’origine extra-mammaire (Thieulin et Vuillaume, 1967).
4.4 Viscosité :
La viscosité du lait est une propriété complexe qui est particulièrement affectée par les
particules colloïdes émulsifiées et dissoutes. La teneur en graisse et en caséine possède
l’influence la plus importante sur la viscosité du lait. La viscosité est une caractéristique
importante de la qualité du lait, étant donné qu’une relation intime existe entre les propriétés
rhéologiques et la perception de la qualité par le consommateur (Rheotest, 2010).
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Partie
Au cours de leur multiplication dans le lait, elles libèrent des gaz (oxygène, hydrogène,
gaz carbonique, etc.), des substances aromatiques, de l’acide lactique (responsable de
l’acidification en technologie fromagère), diverses substances protéiques. (Institut des
techniques des élevages, 2009).
L’importance et la nature des bactéries contaminants le lait, dépondent, de l’état sanitaire
de l’animal, de la nature des fourrages, mais aussi des conditions hygiéniques observées lors
de la traite, de la collecte, de la manutention et de la température de conservation du lait
(Robinson, 2002).
Un lait est considéré comme peu contaminé s’il renferme quelques centaines à quelques
milliers de germes par millilitre, un lait fortement pollué peut en contenir plusieurs centaines
de milliers à plusieurs millions par ml dans cette microflore contaminant, les bactéries
conditionnent le plus directement la qualité hygiénique ainsi que l’aptitude à la conservation
et à la transformation de la matière première (Institut des technique des élevages, 2009).
5.1 Flore originelle :
Le lait contient peu de microorganismes lorsqu’il est prélevé dans de bonnes conditions à
partir d’un animal sain (moins de 103germes/ml). A sa sortie du pis, il est pratiquement stérile
et est protégé par des substances inhibitrices appelées lacténines à activité limitée dans le
temps (une heure environ après la traite). La flore originelle des produits laitiers se définit
comme l’ensemble des microorganismes retrouvés dans le lait à la sortie du pis les genres
dominants sont essentiellement des mésophiles. Il s’agit de microcoques, mais aussi
streptocoques lactiques et lactobacilles. Ces microorganismes, plus ou moins abondants, sont
en relation étroite avec l’alimentation et n’ont aucun effet significatif sur la qualité du lait et
sur sa production (Guiraud, 2003).
11
Partie
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Partie
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Partie
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Partie
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Partie
6.3.3 Effet du stade de lactation :
Les variations de la production et de la composition chimique du lait sous l’effet du
stade de lactation ont fait l’objet de très nombreux travaux, tous les auteurs notent que les
teneurs en matières grasses et en protéines évoluent de façon inverse avec la quantité de lait
produite, et les teneurs en taux protéique et en taux butyreux sont maximales au cours des
premiers jours de lactation, minimales durant les 2éme ou 3éme mois de lactation, et
s’accroissent ensuite jusqu’à la fin de la lactation. Cette augmentation est due en partie à
l’avancement du stade de gestation, qui diminue la persistance de la production laitière. Pour
les deux taux (Schultz et al., 1990).
6.3.4 Effet de l’état de gestation :
La gestation a un effet marqué sur la baisse de la production laitière, cela est dû à la
production de la progestérone par le placenta. Ou la quantité journalière du lait sécrétée
continue de diminuer avec l’avancement de la gestation, dont l’effet commence à se faire
sentir à environ vingt semaines après la fécondation. Ainsi que la production laitière diminue
rapidement chez la vache gestante, notamment durant les 120 jours qui suivent la fécondation
que chez la vache non fécondée. L’existence d’une influence négative possible de la gestation
sur la production laitière, pousse l’éleveur à retarder volontairement le moment de
l’insémination artificielle, prolongeant ainsi la persistance de la lactation, chez les vaches
traites jusqu’au vêlage (Nebel et McGilliard, 1993).
6.4 Facteurs liés à l’environnement :
L’environnement dans lequel vit un animal est défini comme étant une combinaison de
tous les facteurs qui influencent l’expression d’un caractère donné. Ces facteurs sont liés à la
conduite d’élevage (alimentation, la saison et le climat) (Mounier et al., 2007).
6.5 Effet de l’alimentation :
Les facteurs alimentaires jouent un rôle prédominant. Contrairement à la plupart des
autres facteurs, ils agissent à court terme et peuvent faire varier les taux butyreux et protéique
de manière indépendante .La production ainsi que la composition chimique du lait peuvent
varier selon la nature del’aliment (fourrage ou concentré son mode de distribution), son aspect
physique (grossier ou finement haché), son niveau d’apport en additif alimentaire… etc
(Araba, 2006).
16
Partie
La thermo-tolérance des animaux varie en sens inverse de leur production, les animaux
moins productifs sont les plus résistants à la chaleur. La température idéale pour la production
laitière oscille autour de 10°C. Un animal exposé au froid règle sa thermorésistante en
consommant surtout l’aliment disponible, sinon, il utilise les nutriments gênent de la
production de lait. Effectivement, en épuisant dans ses réserves corporelles, la production
laitière diminue avec l’augmentation de la température tandis que les taux butyreux et
protéiques augmentent (Dubreuil, 2000).
1
Partie
7. Hygiène d’étable :
Le sol nettoyé mécaniquement une fois par jour pour les vaches laitières et une fois tous
les 15 jours pour les autres catégories; les fèces sont vendus à des privés.
7.1 Hygiène de la vache :
Les éleveurs s’intéressent vraiment à l’hygiène de leurs vaches, chaque jour avant la traite
l’ouvrier nettoie les mamelles de la vache avec de l’eau javellisée.
7.2 Hygiène de la traite :
Après la traite chaque jour les ouvriers font un nettoyage des chariots et de tout le matériel
de la traite pour éviter toutes les contaminations pouvant nuire à la traite et assurer une bonne
hygiène du lait.
7.3 Hygiène et salubrité dans l’industrie laitière :
Une usine de transformation de produits laitiers doit avoir des locaux appropriés à la
fabrication de ces produits. L’usine concernée doit non seulement avoir des
installations qui répondent aux exigences hygiéniques, mais se doter d’un
programme documenté qui le confirme, d’une liste de vérifications à effectuer
régulièrement et de mesures à prendre en cas de non-respect de ces exigences.
Ces dernière s’appliquent aussi à l’intérieur de bâtiment : planchers, murs, plafonds,
installations de lavage des mains, bains antiseptiques, escaliers, ascenseurs, fenêtres,
portes intérieures, dispositifs d’éclairage et de ventilation, conteneurs à déchets,
installations sanitaires, installations de nettoyage et d’‟assainissement, dispositifs et
réservoirs pour l’eau, la glace et la vapeur [Broutin, 2002] Tous les locaux doivent
répondre aux exigences de conception, de construction et d’entretien, qui correspondent à
des conditions d’opérations salubres et sécuritaires pour les produits alimentaires
fabriqués et manipulés par l’usine laitière. Il faut également confirmer la potabilité de l‟eau
utilisée en fabrication ou comme ingrédient et conserver des registres de contrôle de cette
eau. [Assanta, 2001].
18
Partie
19
Partie 02 :
Etude Expérimentale.
Partie
1. Objectif du travail:
Le but du présent travail vise à Rechercher les micro-organismes, indicateurs d'un ou de
plusieurs problèmes rencontrés lors du procédé de fabrication ou susceptibles de présenter un
risque pour la santé humaine lors de la mise sur le marché.
- Elle vise aussi faire les analyses physico-chimiques et le test d’antibiotique en vue de
détecter d’éventuelles fraudes du lait réceptionné.
Ces analyses ont consisté la détection et le dénombrement des microorganismes
d’altération (flores mésophiles, Coliformes, levures, moisissures) et les microorganismes
pathogènes(Staphylocoques,Salmonelles,Streptocoques,Clostridiums-sulfito-réducteurs),
rencontrés dans l’industrie laitière.
2. Matériels et méthodes et milieux de cultures :
Les analyses sont effectuées, selon les techniques décrites par :
20
Partie
2.1.2 Les prélèvements :
On a pris 05 échantillons pour les analyses physico-chimiques et 05 autre pour les analyses
microbiologiques .Les prises d’essais sont réalisées le matin après la réception de la quantité
totale du lait a partir du tank de réception, a des moments différents (avec un écart d’environ
15 minutes) pour une meilleure représentativité des échantillons.Il faut préciser que chacun
des échantillons est une unité représentative d’une quantité de lait de mélange (environ 1000 à
2000 litre) destinée à la pasteurisation.
2.1.3 Techniques de prélèvement :
Le prélèvement pour analyses microbiologiques s’effectue à partir du robinet disposé à la
partie inférieure de la cuve, dans un flacon stérile bouché au coton cardé ou avec un bouchon
à vis. Le robinet est flambé au préalable, on procède par un remplissage d’un flacon au 2/3 de
sa capacité. Les prélèvements sont aussitôt refroidis dans un réfrigérateur, jusqu’au moment
de l’analyse avec un délai n’excédant pas plus de 8 heures (Guiraud, 1998).
3. Analyses physico-chimique :
Le contrôle physico-chimique (lait cru de vache) concerne la mesure de la densité, le
pH, l'acidité, la matière grasse et l’extrait sec total.
3.1 Mesure de l'acidité :
L’acidité titrable du lait représente la quantité d’acide lactique libérée par transformation
du lactose en acide lactique en présence des bactéries lactique. On exprime couramment
l’acidité du lait en degrés Dornic (1°D = 0,1 g d’acide lactique par litre de lait) ou en
grammes d’acide lactique par litre du lait.
Mode opératoire : -Introduire dans un bécher10ml de lait à l’aide d’une Pipette graduée
puis ajouter deux gouttes de phénolphtaléine.
-Titrer avec du NaoH en agitant jusqu’à l’obtention d’une couleur
rose claire.
-lire sur la colonne graduée le nombre de ml utilisés, ceci donne
l'acidité du lait en degré Dornic.
21
Partie
3.2-Mesure de la densité :
La densité du lait est une grandeur sans dimension qui désigne le rapport entre la masse
d'un volume donné de lait à 20°C et la masse du même volume d'eau (POINTURIER, 2003).
La mesure de la densité est par l’utilisation d’un thermo-lactodensimètre qui est muni d'une
échelle sur sa partie supérieure indiquant des graduations.
Mode opératoire : -Verser le lait dans l’éprouvette, la remplir complètement.
- On introduit doucement le lactodensimètre.
- Attendre qu’il stabilise dans l’éprouvette.
Ensuite on fait la lecture :
Si la température est de 20 °C, le niveau de flottement correspond à la graduation de la
lecture de densité, dans le cas contraire deux cas se présentent :
- Si la T° lue < 20°C → D = D lue – (0,2×T° lue)
- Si la T° lue > 20°C → D = D lue + (0,2 ×T° lue)
-Si la T° lue =20°C → D =D lue
Dont 0,2 correspondre au coefficient de correction.
3.3-Mesure du pH :
Le pH mesure l’activité chimique des ions H+ contenus dans le produit à l’aide d’un pH
mètre.
3.4-Recherche d’antibiotique :
La recherche des antibiotiques ce fait a l’aide d’un incubateur, en utilisant le Beta Star
Combo qui est un test de détection visuelle rapide pour les Béta-lactames (Amoxicilline,
Ampicilline…) et résidus d’ATB Tétracycline (Oxytetracycline, tétracycline...) dans le lait
cru.
La lecture se fait selon la coloration des bandes en rose :
- présence de la bande : absence des antibiotiques.
- Absence de la bande : présence des antibiotiques correspondant à la bande.
22
Partie
23
Partie
24
Partie
4. Analyses microbiologiques :
Dans le but de vérifier la qualité microbiologique du lait cru, on procède à la recherche
des germes banales ou pathogènes mentionnées dans le journal officiel de la république
algérienne (J.O.R.A, 1998) à savoir : les germes aérobies mésophiles à 30°C ; les Coliformes
totaux ; les Coliformes fécaux ; les Staphylococcus aureus et les Clostridium
sulfito-réducteurs.
4.1 Dénombrement des germes aérobies mésophiles totaux :
La flore mésophile aérobie totale (FMAT), bon indicateur de contamination, est dénombrée
sur gélose PCA incubée à 30°C pendant 72h. Les colonies apparaissent sous forme
lenticulaire et de taille différentes.
Mode opératoire :
• Faire des dilutions 10P-1 , 10P-2,10P-3, 10P-4 , 10P-5.
• Porter 1 ml de chaque dilution dans une boite de pétri vide.
• Ajouter 20 ml de gélose PCA fondue et refroidie à 45°C.
• Faire des mouvements circulaires et de vas et vient.
• Laisser solidifier.
• Incuber à 30°C pendant 72h.
• Faire le dénombrement des boites présentant des microorganismes suivant la norme
(AFNOR ,1980).
4.2 Dénombrement des coliformes :
4.2.1 Coliformes totaux :
Mode opératoire :
• Faire des dilutions 10P-1P,10P-2P,10P-3P,10P-4P,10P-5
• Introduire 1 ml de chaque dilution dans une boite de pétri
• Couler la Gélose VRBL ou bien Désoxycholate ou bien Tergitol
• Incuber à 37°C entre 24 et 48 h.
25
Partie
26
Partie
Mode opératoire
• Faire des dilutions 10P-1,10P-2,10P-3, 10P-4, 10P-5 .
• Chauffer les dilutions à analyser afin de détruire les formes végétatives et d’activer
les spores pendant 10 min à 80°C.
• Refroidir dans un bain d’eau glacée.
• Transférer le milieu VF dans un tube contenant 1 ml de ces dilutions, en évitant au
maximum d’incorporer d'air.
• Ajouter une goutte de l’huile de paraffine pour l’anaérobiose
• Incuber à 37°C pendant 24 et 48 heures.
4.5 Dénombrement de Streptocoques:
Mode opératoire
• Faire des dilutions 10P-1 ,10P-2,10P-3,10P-4,10P-5
• Porter 1 ml de chaque dilution dans une boite de pétri vide .
• Ajouter 20 ml de gélose BEA fondue et refroidie.
• Faire des mouvements circulaires et de vas et vient.
• Laisser solidifier.
• Incuber à 37°C pendant 24 .
• Faire le dénombrement des boites présentant des microorganismes.
27
Partie
28
Partie 03 :
Résultats et Discussions
Partie : Résultats et
1. Résultats des analyses physicochimiques :
- La Température de tous les échantillons de lait cru est supérieure à la norme : 4 C°. Avec
un maximum de 18.3°C et un minimum de 14°C.
- Le pH conforme aux normes (6,54-6,79).
- Selon les résultats obtenus, les valeurs de l’acidité pour les échantillons analysés sont
conformes à la norme. Selon (Aboutayeb, 2005), un lait frais peut avoir comme acidité entre
16 à 18°D et la FAO (2010) rapporte que l’acidité du lait en moyenne de 16 (15-
17°D).
29
Partie : Résultats et
- Selon les résultats obtenus, les valeurs exprimées sont conforme à la norme. La
densité du lait est normalement comprise entre 1028 et 1034, elle doit être supérieure ou égale
à 1028 à 20°C. Celle-ci est liée à la richesse du lait en matière sèche qui est fortement liée à la
fréquence de l’abreuvement. Elle est inversement proportionnelle au taux de matière grasse
(Luquet, 1985).
- Tous les tests d’antibiotiques sont négatifs.
Et enfin pour la matière grasse, La teneur en matière grasse dépend de facteurs tels que
les conditions climatiques, le stade de lactation et l’alimentation. Selon les résultats obtenus,
les valeurs obtenues sont conformes aux normes, ce qui explique que l’alimentation des
bovins est bonne (BELARBI Abdelhakim, 2016).
1.3 Discussion des résultats des analyses physico-chimiques ;
- La température de tous les échantillons analysés de lait dépasse la limite de 4°C indiqué
par le journal officiel de la république algérienne. Ceci peut être expliqué par l’absence dans
les fermes des cuves réfrigérées permettant de conserver le lait frais, viennent s’ajouter à cela
les mauvaises conditions de transport, Ce qui fait que tous les échantillons que nous avons
apportés n’étaient pas dans des conditions favorables.
- De ce fait, c’est la température élevée qui a fait varier l’acidité et le pH. Puisque l’acidité
de la flore du lait est favorisée dégradant ainsi le lactose en acide lactique ( FAO, 2010). Par
conséquent, il y a une augmentation de l’acidité enregistrée.
- Le test d’antibiotiques pour tous les échantillons est négatif. Ce qui permet de conclure
que les vaches laitières n’ont pas subi de traitement d’antibiotique ou bien les éleveurs
respecte le temps d’attente après le traitement.
30
Partie : Résultats et
N° Streptocoques salmonelle
D’échantillon (UFC/ml)
1 Abs Abs
2 Abs Abs
3 Abs Abs
4 Abs Abs
5 Abs Abs
31
Partie : Résultats et
32
Partie : Résultats et
Une charge microbienne nettement inférieure aux normes des GAMT peut s’expliquer
par les bonnes pratiques d’hygiène lors de la traite et la manipulation du lait, ainsi que les
bonnes conditions d’hygiène.
33
Partie : Résultats et
La recherche des coliformes totaux se fait seulement sur le lait pasteurisé (Jora, 1998).
Selon (Larpent, 1990), la présence des coliformes totaux n’est pas obligatoirement une
indication directe de la contamination fécale. Certains coliformes sont en effet présents dans
les résidus humides rencontrés au niveau de l’équipement laitier.
D’après les résultats obtenus, on constate une absence totale des coliformes totaux dans
tout échantillon prélevé, et ceci explique par la maitrise d’hygiène et une bonne pasteurisation
du Lait.
Figure 05: Coliformes totaux à 30°C
Les germes pathogènes tels que Staphylococcus aureus ne sont pas tolérables dans le lait
cru. La norme concernant le Staphylococcus aureus est l’absence du germe dans le Lait cru.
Selon (Dodd et Booth, 2000) Cette bactérie est un pathogène majeur, causant des infections
mammaires. Ces dernières s’accompagnent d’une augmentation de la perméabilité entre le
compartiment sanguin et le lait qui a pour conséquence des modifications de la composition
du lait (Rainard 2006).
Les principales sources de contaminations sont en premier lieu la mamelle. Les infections
mammaires à staphylocoques représentent la principale source de contamination du lait à la
Production, d’autres sources de contamination sont également à considérer tels que la
machine à traire (Thieulon, 2005).
3
Partie : Résultats et
Sur les échantillons analysés, et après les tests qui ont été faite pour confirmer la présence de
Staphylococcus aureus, on a observé une absence de ce germe, ces résultats montrent la
bonne conduite d’hygiène au moment du prélèvement ainsi que la bonne santé de l’animale
(la Mamelle), car l’origine de la contamination est du à la mamelle.
Figure 06 : staphilococcus
Les échantillons indiquent une absence absolue de ces germes, ce qui nous conduit à dire
que ces derniers ont une bonne qualité hygiénique.
Les résultats des analyses de la recherche de Salmonella Sp indiquent leur absence totale
dans les 05 échantillons de lait cru.
L’analyse microbiologique de ce groupe microbien pathogène n’a pas montré de
contamination, ce qui est conforme à la réglementation algérienne. En général, l’isolement des
Salmonelles dans le lait cru est difficile à mettre en évidence (Afif et al, 2008).
La principale source de contamination serait l’excrétion fécale de salmonelles,
dissémination de la bactérie dans l’environnement, puis contamination de la peau des
mamelles et du matériel de traite (Guy, 2006).Donc notre résultat confirme que les animaux
producteurs des laits sont en bonne santé.
35
Conclusion
Ces analyses ont un autre intérêt sur la fabrication des diries du lait qui seront commercialisé
en toute sécurité et ne provoquent pas pathologiques sur les consommateurs.
Le contrôle au quotidien des paramètres d’hygiène, et de toutes les analyses exigées est
considéré comme étant des actions principales contribuant à l’obtention des produits de haute qualité.
Cependant, il y a lieu de porter un grand intérêt au respect des températures de livraisons qui
avoisine 18°C et qui à notre sens peut avoir des effets néfastes sur le développement de certains
microorganismes qui peuvent engendrer des situations néfastes sur la qualité des produits.
Lors des analyses, certains enchantelions ont présenté des densités atteignent 1038, ce qui
n’est pas à notre sens logique. L’unité GIPLAIT doit s’intéresser à ce point pour détecter l’origine des
fraudes (ajout de certains ingrédient tel que la maïzena et autre).
Il est aussi important d’exiger des producteurs à livrer leurs laits à des températures ne
dépassent pas les 06°C.
Références Bibliographiques :
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3ème édition : 107-121-125-167-251(321 pages).
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Dillon JC., Berthier AM., (1997). Le fromage dans l’alimentation. In Eck A., Gillis JC. Le
fromage. Paris : TEC & DOC - Lavoisier, p. 713–724.
Majdi A. (2009) ‘les fromages AOP et IGP.’, in Séminaire sur les fromages AOP et IGP. INT-
Ingénieur agronomie, 88p.
Ramet J. P. (1997). Les agents de la transformation du lait. P.p. 165 – 174. In : ECK A., Gillis
J.C. Le fromage : de la science à l'assurance qualité. Ed. : 3. Techniques et Documentation –
Lavoisier, Paris, 891 p.
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Bretagne, Rapport final, Institut d’élevage. pp :1-13.
TORMO H. (2010) .Diversité des flores microbiennes du lait crus de chèvre et facteurs de
variabilité .
Thèse en vue de l’obtention du doctorat de l'université de Toulouse, 238 pages.
Veisseyre R. (1979). Technologie du lait constitution, récolte, traitement et transformation du
lait. 3éme édition. Edition la maison rustique, Paris.
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CEPL-INRA, paris, 113-119.
Bernnan N.M., Brown R., Goodfellow M., Ward A.C., Beresford T.P., Simpson P.J., FOX
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Evolutionary
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Boyaval P., Deborde C., Corre C., Blanco C. et Begue E, (1999). Le lait, 79 : 59-69.
Debry G, (2001). Lait, nutrition et santé. Techniques et documentation Lavoisier. Paris, 544 p.
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SIBOUKEUR O., (2007) .-Etude du lait camelin collecte localement : caractéristiques physico-
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Liste des sites électroniques :
https://www.tiantiancaipu.com/introduce/food-466.html
http://www.sympatico.ca/actualites/decouvertes/science-techno/evolution-
histoire- production-lait-1.2164882
https://www.produits-laitiers.com/la-saga-du-lait-4-la-maitrise-de-la-qualite-et-de-la-
conservation-une-revolution-1800-1950/
Annexes
Annexe 01 :
T.S.E (Le bouillon Tryptone-sel)
- Mettre en solution 9,5 g de milieu déshydraté (BK014) dans 1 litre d’eau distillée ou
déminéralisée.
- Agiter lentement jusqu’à dissolution complète et répartir en tubes ou en flacons.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes
Gélose Chapman
Selenite f Broth
Le bouillon au sélénite, gélose pour l’enrichissement de salmonelles .
en g/l :
Casein enzymic hydrolysate…..........................................................................................5g/l
Lactose............................................................................................................................4g/ml
Sodium phosphate…......................................................................................................10g/ml
Sodium hydrogen selenite (NaHSeO3)…......................................................................4g/ml
Après la préparation du milieu le pH de ce dernier est ajusté à 7.1 puis le milieu stérilisé à
25C°.
Bouillon Giolitti-Cantoni
On utilise le milieu de culture « bouillon Giolitti-Cantoni » pour la recherche de Staph. aureus
dans les aliments.
Tryptone 10
Extrait de viande..............................................................................................................5g/ml
Extrait de levure...............................................................................................................5g/ml
Glycine….........................................................................................................................1.2g/ml
Mannitol..........................................................................................................................20g/ml
Pyruvate de sodium..........................................................................................................3g/ml
Chlorure de sodium..........................................................................................................5g/ml
Chlorure de lithium….......................................................................................................5g/ml
Polysorbate 80…...............................................................................................................1g/ml
Après la préparation du milieu le pH de ce dernier est ajusté à 6.9 puis le milieu stérilisé à
25C°.
GELOSE HEKTOEN
La gélose Hektoen est un milieu de culture sélectif servant à isoler et à différencier les
Salmonella
GELOSE Baird-Parker (Milieu Baird Parker)
C’est un milieu différentiel modérément sélectif servant à l'isolement et à l'énumération
des
Staphylococcus aureus issus d'échantillons alimentaires, environnementaux et cliniques, ce
dernier contient une base nutritive riche, il contient des accélérateurs de la croissance : le
pyruvate de sodium et le glycocolle.
GELOSE VRBL (Violet Red Bile Lactose Agar)
La gélose lactosée biliée au cristal violet et au rouge neutre (VRBL) est un milieu
sélectif utilisé
pour la recherche et dénombrement des coliformes dans l’eau, le lait, les produits laitiers et les
autres produits alimentaires tels que les viandes et les produits à base de viande.
Milieu V.F : gélose Viande Foie :
Extrait viande foie....................30g
Glucose.......................................2g
Amidon.......................................2g
Gélose........................................12g
Gélose Désoxycholate :
Peptone.....................................10g
Citrate de sodium.......................1g
Lactose......................................10g
Désoxycholate de sodium...........1g
Chlorure de sodium....................5g
Hydrogenophosphate de potassium..........2g
Agar..........................................13g
Annexe 02: