République Algérienne Démocratique et
Populaire
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique
Ecole Nationale Supérieure de Biotechnologie
Module : Physiologie végétale
TP 02 :
Les pigments chlorophylliens
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2021/2022
Introduction
Les organismes chlorophylliens sont autotrophes pour le carbone
La lumière Photosynthèse
Comment l’absorption de lumière est-elle rendue possible?
Feuille Cellule Chloroplaste Thylakoïde Pigments:
Chlorophylle a
Chlorophylle b
Caroténoïde
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≠longueur d’onde
≠couleur
Objectif
1) Extraction, dosage et séparation des pigments chlorophylliens
2) Comparaison des pigments foliaires
Qualité: Chromatographie
Quantité: 2 méthodes
VS
Feuilles vertes Feuilles chlorosées
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SPAD mètre Spectrophotomètre
Analyse qualitatif Analyse quantitatif
Chromatographie Chlorophylle mètre (SPAD) Spectrophotomètre
Comparer la nature Méthode rapide non Déterminer les
des pigments destructive qui donne teneurs en pigments
présents après une indice relative des feuilles à partir
séparation par avec la densité et des spectres
chromatographie de teneur en d’absorption
partage sur papier chlorophylle en se
basant sur
l'absorbance ou la
réflectance de
certaines longueurs
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d'onde de la lumière
• L’étalonnage de l’appareil se fait en fermant la
pince vide sur elle-même. Puis, trois prises de
mesure sont effectuées sur la feuille (sommet,
milieu, base) la moyenne des mesures apparait sur
l’écran.
• L’estimation du contenu en chlorophylle est
importante car elle est directement liée aux
capacités photosynthétiques de la plante.
• Les mesures rapides, faites à l’aide de cet appareil
ont l’avantage de ne pas être destructives. Il s’agit
d’un radiomètre manuel qui mesure l’absorbance
optique à deux longueurs différentes.
• Une mesure dans le rouge afin de déterminer la
teneur foliaire en chlorophylle et une mesure dans
l’infrarouge qui donne des indicateurs sur la
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structure de la feuille (absorptivité et épaisseur des
tissus foliaires).
Domaines d’Application
La teneur en chlorophylle fournit des informations utiles sur le potentiel
photosynthétique et la production primaire
Plusieurs maladies et de nombreux facteurs de stress entraînent des
changements dans la pigmentation, donc la quantité de pigments donne
une idée sur l’état sanitaire des plantes et permet de comparer entre 2
variétés sous stress
Puisque la majeure partie de l'azote foliaire est intégrée dans la
chlorophylle, en la mesurant, vous mesurez de façon indirecte la quantité
d’azote dans la plante. Ceci permet une programmation plus efficace
d’applications d’engrais.
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Protocole expérimentale
Estimation de teneur en chlorophylle par chlorophyllomètre
Extraction des pigments
Séparation des pigments par chromatographie sur papier
Dosage des pigments totaux par spectrophotométrie
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Travail a faire
Q1 - Calculer le Rf = Rayon frontal (distance parcourue par le pigment « d » /distance parcourue
par le solvant « D ») et identifier chaque pigment en utilisant les indications fournies.
Q2 - Dessiner le chromatogramme sur votre feuille de TP.
Q3 - Utiliser les formules ci-dessous pour calculer les concentrations en pigments :
coefficients de McKinney (1941) et les équations d'Arnon (1949).
Q4- Exprimer les résultats en mg de pigments/g de matière fraîche et conclure.
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Q5- Comparer les résultats des deux feuilles chlorosées et vertes (pour toutes les méthodes)
