REPUBLIQUE ALGERIENNE POPULAIRE ET DEMOCRATIQUE

UNIVERSITE A. MIRA DE BEJAIA -Compus TARGA Ouzemmour-

FACULTE DE SCIENCES ET TECHNOLOGIES
DEPARTEMENT GENIE DES PROCEDES
SPECIALITE : GENIE ALIMENTAIRE

02/03/2021 TP N° :02
CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE
MINCE ET SUR COLONNE.

REALISE PAR :
 TAGMOUNI SARA
 AISSOU SAMRA
 SABI SALAH
 OUDJEDOUB NESRINE

SOUS GROUPE : 02

ANNEE UNIVERSITAIRE : 2020/2021

RESPONSABLE DES TP(S) : MME. BOUARICHE & MME. BELHADJ

Introduction générale :

La chromatographie sur couche mince (CCM, en anglais TLC pour Thin layer
chromatography) est une technique de chromatographie planaire1 dont la phase mobile est
liquide. Elle est couramment utilisée pour séparer des composants dans un but d'analyse
(CCM analytique) ou de purification (CCM préparative).
Elle comprend :

 Une phase stationnaire : une couche mince de matériel adsorbant (usuellement du

gel de silice, de l'oxyde d'aluminium ou de la cellulose).
 Une phase liquide, dite phase mobile ou éluant : un solvant ou un mélange de
solvants qui va entraîner les composés à se séparer le long de la phase stationnaire.

But du TP :
Séparation des colorants alimentaires et purification des mélanges par méthode de
chromatographie sur couche mince (gel de silice et cellulose) et la méthode de la
chromatographie sur colonne.

Principe de l’analyse :
Les divers constituants sont entrainés d’une différentielle par la phase mobile « éluant » le
long de la phase stationnaire.
L’éluant est un solvant pur ou mélange de solvants qui entraine les espèces à analyser par
capillarité, alors que la phase fixe (matériau de la plaque : cellulose ou gel de silice) les
retient. Les corps purs migrent plus ou moins vite, ce qui permet leur séparation.

La chromatographie est par but :

 De vérifier qu’une substance est pure

 D’analyser un mélange
 De reconnaitre les constituants d’un mélange par comparaison du Rf
Matériel et méthodes :

1. Extraction des colorants :

Introduire l’échantillon dans un petit bécher et ajouter un minimum d’eau distillé afin de
dissoudre les colorants. Veuillez à ce que la solution obtenue soit assez concentrée.
2. Préparation de la cuve :

 Préparer le mélange de solvants (mélange de solution de chlorure de sodium à 40g/L

et l’alcool) qui constituera l’éluant, puis en verser dans la cuve à chromatographie
(ou bécher) afin d’obtenir une hauteur de liquide d’environ 1 cm.
 Boucher la cuve afin d’éviter l’évaporation de solvants.

3. Préparation de la plaque

 Attention ! Si la plaque utilisée est une plaque de silice, elle est très fragile. Eviter de
la toucher avec les doigts
 Tracer au crayon, à environ 1.5 cm du bord inferieur de la plaque, un trait qui
constitue la ligne de dépôt.
 Placer sur cette ligne des marques, régulièrement espacées, dont le nombre est égal
à celui des échantillons à déposer.

4. Dépôt des échantillons :

 On dispose de colorants alimentaires de différentes couleurs. On désire savoir si ces
espèces sont pures ou constituent des mélanges homogènes.
 A l’aide d’une pointe fine, déposer les échantillons sur leurs marques respectives. La
tache de dépôt ne doit pas dépasser 3 mm, et il faut changer de pique pour chaque
échantillon.

5. Elution :
 Introduire la plaque verticalement dans la cuve : la ligne de dépôt doit être au-dessus
de niveau du solvant. Boucher la cuve.
 Le solvant contenu dans la cuve monte le long de la plaque : c’est l’étape d’élution.
Attendre que l’éluant arrive à environ 1 cm du haut de la plaque, puis retirer la
plaque et repérer par un trait la hauteur maximale atteinte par l’éluant (c’est la ligne
de front). Sécher la plaque.
 Repérer au crayon la position du front de l’éluant.
 Image : plaque de cellulose +colorants alimentaires

Résultats et discussions :

 Le cas de la plaque de silice :

 Le mélange :
H = 8.5 cm ; h(rouge)= 6.6 cm ; h(bleu) = 4.8 cm

 Corps pur
Colorant bleu hB = 4.8 cm
Colorant rouge hR = 6.7 cm
 Calcul de Rf :

 Corps purs :
.
Rf = hb/H  Rf =  Rf (Bleu) = 0.56
.
.
Rf = hR/ H  Rf = .
 Rf (Rouge) = 0.817

 Mélange :
.
Rf (Bleu)= hB/H  Rf (Bleu) = .
 Rf (bleu) = 0.56
.
Rf (rouge) = hr/H  Rf(rouge) = .
 Rf (rouge) = 0.817

 Le cas de la plaque de cellulose :

H= 6 cm
Corps purs :
h (Bleu) = 5.8
h (Rouge) = 3.4

Mélange :
h (Bleu) = 5.9
h (Rouge) = 3.4

Calcul de Rf :
Corps purs :
.
Rf (bleu) =  Rf (bleu) =0.966
.
Rf (rouge)= Rf (rouge) =0.566
Mélange :
.
Rf (Bleu) =  Rf (Bleu) = 0.983
.
Rf (Rouge) =  Rf (Rouge) =0.566

Observation :
Rf (bleu mélange) = Rf (bleu pur) ainsi ; Rf (rouge mélange) = Rf (rouge pur)
Discussion :
D’après les résultats obtenus nous remarquons que les résultats sont presque les mêmes,
malgré l’écart minime entre les constituants purs et les constituants de notre mélange
préparé. Donc Rf de chaque corps pur et celui du mélange qui lui correspond sont égaux cela
implique que les constituants du mélange sont les même avec les corps purs.
Nous remarquons aussi que le bleu a plus d’affinité avec la cellulose que la silice, pour
cette raison il migrait vite avec la migration du éluant.

Partie 2 : Chromatographie sur colonne

Que ce qu’une chromatographie sur colonne ?

Cette chromatographie est basée sur le même principe que la CCM, sauf que la silice est
placée dans une colonne et non sur une plaque.
Le but est toutefois différent :
La chromatographie sur colonne sert à séparer des produits, soit à purifier un produit de
réaction. C’est la méthode standard de purification dans un laboratoire de chimie organique.
C’est une méthode préparative, elle permet de purifier 50 mg à environ 20 g en laboratoire,
et jusqu’à 1 kg en industrie.

Les types de la chromatographie sur colonne :

Deux types de chromatographie existent :
• Chromatographie par gravité : elle utilise des particules de silice de
70 à 200 micromètres et le solvant s’écoule au goutte-à-goutte. Cette technique est désuète
car elle demande une plus grande quantité de silice et de solvant.
• Chromatographie éclair (“flash”) : elle utilise des particules de silice de 35 à 70
micromètres et le solvant s’écoule sous pression d’air comprimé.
Colonne préparée récemment ancienne colonne (environ un an)

Comparaison entre la colonne et la couche mince :

La colonne est une méthode très efficace pour analyser les constituants existants dans un
aliment mais d’autre part elle est très lente pour observer les résultats, d’autre part la
couche mince est aussi très efficace pour analyser beaucoup d’aliments et constituants qui
existent dans un aliment mais contrairement à la colonne elle est plus rapide pour obtenir
les résultats d’analyses surtout dans les secteurs très sensibles comme le domaine de
nourriture et alimentaires.

Que ce que nous observons lorsque nous utilisons un chromatogramme ?

Le chromatogramme prend généralement la forme d'un graphique qui traduit la variation
d’un paramètre relié à la concentration du soluté en sortie de colonne, en fonction du temps
(ou du volume) d’élution.
 Conclusion :

Ce tp nous a aidé à découvrir deux nouvelles méthodes d’analyses des constituants dans
les laboratoires et même dans les industries agro-alimentaires, afin de confirmer la bonne
qualité des aliments (Contrôle de qualité) destinés aux consommateurs. Aussi elles sont deux
méthodes très efficaces pour la séparation des constituants organiques par rapport à leurs
affinités avec l’éluant et leur polarité.
Ces méthodes sont très faciles à réaliser et qui nous mène à des résultats fiables si nous
avons bien choisi notre éluant car il joue un rôle très important dans notre analyse.
La chromatographie sur colonne est basée sur le même principe que la chromatographie
sur couche mince, sauf que la silice ne se trouve pas sur une plaque mais dans une colonne.