Contrôles bactériologiques des

productions pharmaceutiques
en milieu hospitalier

Dominique Blanc
Division autonome de médecine préventive hospitalière
Centre Hospitalier Universitaire Vaudois

CHUV/DAMPH/Cours/DB/Ctrl_bac_productions_pharm.ppt

Création d’un nouveau médicament

Quelle qualité est requise?
Ph. Eur. 5.1.4. Qualité microbiologique des préparations pharmaceutiques

Comment atteindre cette qualité?

• Contrôle des matières premières
• BPF
• Etude du conditionnement, procédé de fabrication, etc.

Comment conserver cette qualité?

Ph. Eur. 5.1.3. Efficacité de la conservation antimicrobienne

Fabrication d’un médicament

Contrôle de la qualité après fabrication

Ph. Eur. 2.6.1. Essai de stérilité

Ph. Eur. 2.6.12. Contrôle microbiologique des produits non stériles
(dénombrement des germes aérobies viables totaux)
Ph. Eur. 2.6.13. Contrôle microbiologique des produits non stériles
(recherche de microorganismes spécifiés)

Remarque: depuis 1998, la Pharmacopée helvétique se réfère à la Ph. Eur. pour ce domaine

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 Qualité microbiologique:
5.1.4.: Chapitre d’information et de conseil: pas une partie
opposable de la Pharmacopée

Catégorie 1
Préparations obligatoirement stériles et autres
préparations étiquetées stériles:

- essai de stérilité (2.6.1)

Qualité microbiologique: Catégorie 2

Préparations pour application locale ou pour administration

dans les voies respiratoires, à l’exception des préparations
obligatoirement stériles, et dispositifs transdermiques.
Bactéries aérobies viables <102*
Champignons
Entérobactéries <10*
Pseudo. aeruginosa 0*
Staph. aureus 0*
*: germes/ml ou g ou dispositif

Qualité microbiologique: Catégorie 3A

Préparations pour administration par voie orale ou

rectale:
Bactéries aérobies viables <103*
Champignons <102*
E. coli 0*
*: germes/ml ou g ou dispositif

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 Qualité microbiologique: Catégorie 3B
Préparations pour administration orale contenant des matières
premières d’origine naturelles, lorsqu’un pré-traitement antimicrobien
est impossible et que les matières premières peuvent avoir une
contamination >103 germes/g ou ml :
Bactéries aérobies viables <104*
Champignons <102*
Entérobactéries <102*
Salmonelles 0**
Staph. aureus 0*
E. coli 0*
*: germes/ml ou g ou dispositif
**: germes / 10 ml ou g

Qualité microbiologique: Catégorie 4A

Préparations à base de plantes exclusivement

composés d’une ou plusieurs drogues végétales
(entières, en fragments ou en poudre) et dont l’emploi
fait intervenir de l’eau bouillante:
Bactéries aérobies viables <107*
Champignons <105*
E. coli <102*
*: germes/ml ou g ou dispositif

Qualité microbiologique: Catégorie 4B

Préparations à base de plantes exclusivement
composés d’une ou plusieurs drogues végétales
(entières, en fragments ou en poudre) et dont l’emploi
ne fait pas intervenir de l’eau bouillante:
Bactéries aérobies viables <105*
Champignons <104*
Entérobactéries <102*
E. coli 0*
Salmonelles 0**
*: germes/ml ou g ou dispositif
**: germes / 10 ml ou g

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 Essai de stérilité
= validation du processus de stérilisation ou des
procédés de fabrications aseptiques!

N’assure pas qu’un produit est stérile ou a été

stérilisé, mais qu’aucun germes n’a pu être
décelé! La méthode de détection doit donc être
sensible.

Essai de stérilité: conditions de réalisation

Équivalentes à celles requises pour la fabrication aseptiques

de produits:
• Flux laminaire de classe A dans une salle propre de
classe B
• BPF
• Prélèvements adéquates dans la zone de travail
• Contrôles appropriés

Buts:
- éviter des contaminations durant la procédure
- utiliser une méthode capable de mettre en évidence des
microorganismes (y. c. inhibition des anti-microbiens)

Filtration sur membrane

Utilisée chaque fois que la nature du produit le permet

(prép. aqueuses, filtrables, alcooliques ou huileuses, etc.)
Filtres: porosité < 45 µm
Matériels et techniques: doit permettre un travail dans
des conditions aseptiques

Système ouvert Système fermé

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 Filtration sur membrane

Solutions aqueuses
Poudres: dissolution dans un solvant approprié
Huiles et solutions huileuses:
- faibles viscosité: filtration sans dilution préalable
- forte viscosité: diluer dans un diluant stérile (ex:
myristate d’isopropyle)
Pommades et crèmes: diluer au 1/100 avec myristate
d’isopropyle, chauffer si nécessaire

Ensemencement direct du milieu

de culture

Le volume de produit utilisé ne doit pas dépasser 10%

du volume du milieu de culture
Liquides huileux: milieu additionné de 10 g/litre de
polysorbate 80
Pommades et crèmes: diluant + agent émulsionnant
stérile approprié (dilution 1/10), émulsionner, transférer
dans un milieu sans agent émulsionnant.
Attention: inhibition des anti-microbiens

Milieux de culture et incubation

recommandés

Thioglycolate liquide (bactérie aérobies et

anaérobies)
incubation 30-35°C, 14 jours

Hydrolysat de caséine et de soja (bactéries

aérobies et champignons)
incubation 20-25°C, 14 jours

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 Contrôles de qualité

Test de stérilité des milieux: incuber des

échantillons des milieux pendant 14 jours

Test de croissance: innoculer le milieux avec une

quantité < 100 cfu de différents germes (Tableau 2.6.1.-1)

Test de validation de la méthode

Doit se faire :
- lorsque l’essai de stérilité doit être appliqué à un
nouveau produit
- chaque fois qu’une modification est apportée aux
conditions expérimentales de l’essai
Principe:
Innoculer le produit avec une quantité < 100 cfu des
différents germes (Tableau 2.6.1.-1) et faire le test.
Une croissance doit être observée dans les 3-5
jours maximum, suivant le germe.

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 Observation et interprétation des résultats

Lecture à plusieurs reprises au cours de l’incubation et à la

fin: détecter des signes macroscopiques de prolifération
microbienne.

Pas de signes de croissance observé:

¾ le produit examiné satisfait à l’essai
Croissance microbienne observée:
¾ le produit examiné ne satisfait pas à l’essai
¾ identification des germes à l’espèce
sauf si…

Observation et interprétation des résultats

Croissance microbienne observée:

sauf si… on démontre que l’essai n’est pas valable pour
des raisons indépendantes du produit:
• anomalie dans les équipements
• anomalie dans la procédure
• croissance dans les témoins négatifs
• espèce(s) microbiennes(s) imputables(s) aux
matériels/techniques de l’essai (typage moléculaire)
¾ Refaire l’essai!!!

Niveau d’assurance de l’essai de stérilité

Est fonction de l’homogénéité des conditions de

fabrication du lot et du plan d’échantillonnage
adopté!
(Tableau 2.6.1-3 et –3)

Un lot est un ensemble de récipients fermés pour

lesquels les risques de contamination sont
identiques (conditions de préparation et de
stérilisation homogènes).

7
 Indications sur l’application de l’essai de stérilité

Le fabriquant doit s’assurer de la stérilité de ces produits, mais il n’est

pas exigé qu’ils fasse ce contrôle microbiologique s’il a des
assurances suffisantes du bon fonctionnement de la stérilisation:
Stérilisation terminale:
Preuves physiques >>> essai de stérilité
si:
• biologiquement démontré (test de survie 5.1.5.)
• enregistrement en continu de la température aux point les plus
froids de l’autoclave
¾ libération paramétrique

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 Contrôle de la contamination microbienne dans des
produits non obligatoirement stériles (2.6.12-13)

Dénombrement des germes aérobies viables totaux:

Échantillon à traité: 10 g ou 10 ml
Selon nature du produit: diluer, dissoudre, émulsionner
Technique: Filtration sur membrane, poser le filtre sur une gélose
nutritive

Recherche de micro-organismes spécifiés

Quantité de l'échantillon: fonction de la limite admise.
Technique: fonction du micro-organisme recherché (milieux sélectifs).

Directives de l'OICM concernant la fabrication de médicaments

prêts à l'emploi dans les pharmacies d'hôpitaux
du 13 mai 1982):

26. Prélèvement et contrôle des échantillons

4 Le contrôle des échantillon doit être pratiqué selon la pharmacopée

suisse, ou étrangères reconnues.

5 Pour les produits finis, les échantillons doivent en particulier être

contrôlés comme suit:

a) les médicaments à usage parentéral et autres produits stériles
en fonction de leur identité, leur teneur, leur stérilité ...
On peut renoncer à l'examen de stérilité lorsqu'un produit a été stérilisé
par chauffage à la vapeur, dans son récipient final, pendant 3 min. A
135°C ou pendant 20 min. A 120°C, et pour autant qu'il soit possible de
consigner ce traitement dans le procès-verbal d'un enregistreur de
température portant sur plusieurs points de mesure...
b) les médicaments à usage oral, rectal ou applicables sur des
muqueuse: l'identité des principes actifs...
c) autres médicaments: examen organoleptique

Analyses microbiologiques pour la

Pharmacie du CHUV: 2000
Catégories Nombre
1 filtrable 672
1 non filtrable 70
2 filtrable 68
2 non filtrable 13
3 non filtrable 2
Total 825
Non conformes 1er contrôle: 12 (1.5%)
Non conforme 2ème contrôle 0

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 Analyses microbiologiques sous la
responsabilité de la pharmacie d’hôpital

• Eau pour la préparation des dialysats:

<100 cfu/ml
• Eau pour préparations injectables en vrac:
<10 cfu/ 100 ml
• Eau purifiée (aqua purificata):
<100 cfu/ml

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