ANÁLISIS DE
TRANSAMINASAS
TRANSAMINASA
Son S
intracelular
es localizados en diversos tejidos del
n a
organismo
a t a l i z
que c
REACCIONE siendo la más
específica de lesión
S
DE hepática la GPT
TRANSAMINACIÓ
Producción de energía
Conversión de Las transaminasas participan en el ciclo Metabolismo del
aminoácidos del ácido cítrico (ciclo de Krebs) y en nitrógeno
la cadena de transporte de electrones, lo
Las transaminasas catalizan la transferencia que ayuda en la generación de energía Las transaminasas están involucradas
de grupos amino entre aminoácidos, lo que en forma de ATP. en la eliminación del exceso de
permite la interconversión de diferentes nitrógeno del cuerpo a través de la
aminoácidos. Esto es esencial para la conversión de aminoácidos en
síntesis y degradación de proteínas. compuestos que pueden ser excretados
por los riñones.
FUNCIONES
Función Diagnóstico
hepática médico
La ALT (alanina aminotransferasa) y la Las mediciones de las concentraciones
AST (aspartato aminotransferasa) son
Seguimiento de enfermedades cardíacas de ALT y AST en sangre se utilizan
especialmente importantes en la evaluación como herramientas de diagnóstico para
de la función hepática. Un aumento en los evaluar la salud del hígado y el
niveles de ALT y AST en el torrente Las transaminasas también son útiles en la evaluación corazón, así como para detectar ciertas
sanguíneo puede indicar daño hepático, de la función cardíaca, ya que la AST se encuentra en enfermedades.
como el causado por hepatitis, cirrosis u los músculos del corazón. Los aumentos en los
otras enfermedades del hígado. niveles de AST pueden ser un indicador de daño
cardíaco, como el causado por un ataque al corazón.
IMPORTANCI Metabolismo de aminoácidos Producción de energía
A Las transaminasas son esenciales para
Las transaminasas desempeñan un
el metabolismo de los aminoácidos, ya
papel clave en el ciclo del ácido cítrico
que facilitan la transferencia de grupos
(ciclo de Krebs) y la cadena de
amino entre ellos. Esto permite la
transporte de electrones, que son parte
síntesis y degradación de proteínas, así
del proceso de generación de energía
como la conversión de aminoácidos en
en forma de ATP. Esto es fundamental
otros compuestos necesarios para el
para el funcionamiento celular y la
funcionamiento del organismo.
vitalidad del organismo.
Diagnóstico de enfermedades Monitorización de tratamientos Evaluación de la función hepática
Las concentraciones de alanina
Las mediciones de las transaminasas En el contexto médico, los niveles aminotransferasa (ALT) y aspartato
en sangre son útiles para de transaminasas también se aminotransferasa (AST) en sangre son
diagnosticar una variedad de utilizan para monitorear la indicadores importantes de la salud del
trastornos médicos, como hígado. Aumentos en los niveles de
respuesta de los pacientes a ALT y AST pueden señalar daño
enfermedades hepáticas, cardíacas y tratamientos específicos, como hepático, lo que es útil en el
musculares. Pueden proporcionar diagnóstico y seguimiento de
terapias farmacológicas o
pistas valiosas para los médicos y enfermedades del hígado, como
cambios en la dieta, en afecciones
ayudar en la toma de decisiones hepatitis, cirrosis y otros trastornos
clínicas.
como la hepatitis. hepáticos.
FACTORES QUE PUEDEN INFLUENCIAR EN LOS NIVELES DE
TRANSAMINASAS
ESTEATOSIS
HEPATITIS
VIRALES DIABETES
SOBREPESO CAUSAS NO
HEPÁTICAS
ALTERACIONES COLESTERO
GENTÉTICAS L
ALCOHOL
Requisitos para ser optimizado por la iFCC
MÉTODO
1 EXACTIYUD Y PRECISIÓN
Prueba de espectrofotometría UV- vis
• Se obtiene el valor de absorbancia
por medio de ondas especificas.
• Este valor está relacionado con la
concentración del compuesto
medido, en este caso alanina
2 ESTANDARIZACIÓN Y CALIBRACIÓN
transferasa.
La federación internacional de química clínica y
medicina de laboratorio (IFCC)
IFFC mantiene los estándares de los 3 CONTROL DE CALIDAD
laboratorios por medio de directrices.
La cantidad de NADH reducido esta
relacionada con la cantidad del piruvato.
La cantidad de piruvato producido es
PRINCIPIOS relacionado con la activad de la enzima
ALAT/GPT
Enzima catalizadora • Cetoácido
• Aceptor del grupo
Reacción principal amino
• Aminoácido
• Donante de
nitrógeno
• Cetoácido • Producto requerido para la
• Aceptor del grupo Enzima catalizadora siguiente reacción
amino • Medidor de la cantidad de
ALAT/GPT
Reacción secundaria
• La reducción del NADH
permite ver la actividad
• Por medio del hidrogeno enzimática ALAT/GPT
• EL piruvato se convierte en cargado.
lactato. • El NADH se reduce a
• El piruvato obtiene un ion de NAD.
hidrogeno
REACTIVOS
REACTIVO 1 REACTIVO 2
COMPONENTES CANTIDADES COMPONENTES CANTIDADES
• TRIS: Tampón que mantiene el pH 137.5 mmol/l • 2-Oxoglutarato: Compuesto para la <100 mmol/l
constante. reacción con la enzima ALAT/GPT
• L-Alanina: Compuesto clave para la <1 mmol/L • NADH: Coenzima que ayuda a indicar la 1.09 mmol/L
reacción química. cantidad del piruvato
• LDH (ácido deshidrogenasa).- Enzima <5kU/L
catalizadora
Recientemente se ha incorporado el piridoxal 5-fosfato, recomendado
por la IFCC. Tiene la función de estabilizar la actividad transaminasa y
evitar valores falsos en muestras con poco P-5-P endógeno.
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
DEL REACTIVO
Los reactivos son estables hasta el final del mes indicado de
expiración, si se almacena entre 2-8 °C, protegidos de la luz y
evitando la contaminación, no deben ser congelados
ADVERTENCIA Y PRECAUCIONES
Los reactivos contienen azida de sodio como preservante. No
tragar. Evitar contacto con la piel.
Tomar las precauciones necesarias.
Consecuencias de la ingesta o contacto con la azida de
sodio:
• Toxicidad aguda
• Efectos neurológicos
• Hipotensión
• Daño a órganos
MANIPULACION DE DESECHOS
Residuos peligrosos
Desechos biologicos
Desechos punzocortantes Residuos generales
PREPARACIÓN DEL REACTIVO MATERIALES
(Requeridos pero no suministrados)
SUSTRATO
TIPO DE MUESTRA
MUESTRA
Monoreactivo
4 partes de R1 1 parte de R1
• Gel separador de suero
• Activador de coagulación
Estabilidad:
4 semanas 2 - 8 ºC
5 semanas 15 - 25 ºC
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
MUESTRA 100 microlitros
Longitud de onda: 340 nm
Paso óptico: 1 cm MONOREACTIVO 1000 microlitros
Temperatura: 37 ºC
Medición: Contra el aire Mezclar y hacer lectura de la absorción luego de 1 minuto.
Continuar luego de 1, 2 y 3 minutos
MUESTRA 100 microlitros
VALORES OBTENIDOS
REACTIVO 1 1000 microlitros
m : MINUTO
abs : ABSORBANCIA
Mezclar, incubar 5 minutos y añadir...
• 1 m: 1,369 abs
REACTIVO 2 250 microlitros • 2 m: 1,362 abs
• 3 m: 1,356 abs
Mezclar y hacer lectura de la absorción luego de 1 minuto. • 4 m: 1,350 abs
Continuar luego de 1, 2 y 3 minutos
CÁLCULO X . FACTOR
X =( 0- 1) + ( 1- 2) + ( 2- 3) 0,006333... x 1742
3
= 11, 032666 U/L
X = (1,369 - 1,362) + (1,362 - 1,356) + (1,356 - 1,350 )
3
X = 0,007 + 0,006 + 0,006
3
X = 0,019
3
X = 0,006333 mg/dl
SENSIBILIDAD/LÍMITE DE
ESPECIFICIDAD/INTERFERENCIA
DETECCIÓN
• La especificidad es la capacidad de un método para • Medida de la capacidad de un método para
evaluar inequívocamente al analito en presencia de los distinguir entre dos muestras; se expresa como
componentes que pueden estar presentes. el cambio de la señal por cambio de unidad de la
• La interferencia es el grado en que un método se ve cantidad de analito.
afectado por otros componentes de la muestra
• El límite mas bajo de detección es 4 U/L.
• No se observó ninguna interferencia con el ácido
ascórbico(vitamina C) hasta 30 mg/dl, bilirrubina hasta
40 mg/dl, hemoglobina hasta 400 mg/dl y lipemia hasta
2000mg/dl de trigliceridos.
U/L= Unidades por litro
PRECISIÓN
La precisión mide el grado de concordancia entre una serie de resultados obtenidos en la misma prueba
En la serie n=20 Valor medio DE (U/L) CV%
Muestra 1 22,2 1,38 6,22
Muestra 2 44,8 1,17 2,62
Muestra 3 101 1,02 1,00
De un día a otro n=20 Valor medio DE (U/L) CV%
Muestra 1 22,8 0.70 3.08
Muestra 2 42,6 0.68 1.60
Muestra 3 99,3 0.92 0.92
n=tamaño muestral
RANGO DE REFERENCIA
Estos valores se deben usar tan solo a modo de orientación. Se recomienda que cada laboratorio
establezca, en la población atendida, su propia banda de valores de referencia.
<31 <41
U/L U/L
